NO317948B1 - Antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable v6 i CD44-genet, hybridom cellelinje, rekombinant antistoffmolekyl, anvendelse for diagnose utenfor legemet, for farmasoytisk anvendelse og for fremstilling av et middel for diagnose in vivo - Google Patents
Antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable v6 i CD44-genet, hybridom cellelinje, rekombinant antistoffmolekyl, anvendelse for diagnose utenfor legemet, for farmasoytisk anvendelse og for fremstilling av et middel for diagnose in vivo Download PDFInfo
- Publication number
- NO317948B1 NO317948B1 NO19965239A NO965239A NO317948B1 NO 317948 B1 NO317948 B1 NO 317948B1 NO 19965239 A NO19965239 A NO 19965239A NO 965239 A NO965239 A NO 965239A NO 317948 B1 NO317948 B1 NO 317948B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- antibody
- antibody molecule
- antibodies
- vff
- molecule
- Prior art date
Links
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 101150017002 CD44 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 title claims description 15
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 title claims description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 title claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 title 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 title 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 20
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 claims description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 claims description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 3
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 2
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 2
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 claims 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 claims 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 claims 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 27
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 23
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 18
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 18
- 108010058905 CD44v6 antigen Proteins 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 12
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 7
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 5
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 5
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 4
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 4
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 3
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 3
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 3
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102000048851 human CD44 Human genes 0.000 description 3
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000242677 Schistosoma japonicum Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000683 nonmetastatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 206010052747 Adenocarcinoma pancreas Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004732 colorectal carcinogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 1
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010069264 keratinocyte CD44 Proteins 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- CJWXCNXHAIFFMH-AVZHFPDBSA-N n-[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3r,4s,5r)-2-acetamido-4,5,6-trihydroxy-1-oxohexan-3-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-methyloxan-4-yl]acetamide Chemical compound C[C@H]1O[C@@H](O[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO)[C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@@H]1O CJWXCNXHAIFFMH-AVZHFPDBSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 201000002094 pancreatic adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 1
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000011158 quantitative evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000163 radioactive labelling Methods 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70585—CD44
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2884—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD44
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
- C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
- C12N5/16—Animal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable v6 i CD44-genet, hybridom cellelinje,
rekombinant antistoffmolekyl, anvendelse for diagnose utenfor legemet, for farmasøytisk anvendelse og for fremstilling av et middel for diagnose in vivo.
Det ble nylig vist at ekspresjon av varianter av overflate-glykoproteinet CD44 er nødvendig og tilstrekkelig for å utløse såkalte spontane metastatiske virkninger både i en ikke-metastaserende pankreasadenokarsinom-cellelinje hos rotte og i en ikke-metastaserende fibrosarkom-cellelinje hos rotte (Guntert et al., 1991). Mens den minste CD44 isoform, standardformen CD44s (eller CD44std), eksprimeres ubikvitært i en rekke forskjellige vev, derunder epitelceller, eksprimeres bestemte spleisevarianter av CD44 (CD44v, CD44var) bare på en undergruppe av epitelceller. CD44-variantene dannes ved alternativ spleising, slik at sekvensene fra 10 ekson (vl-vlO) skjæres fullstendig ut i CD44s, men kan forekomme i de større variantene i forskjellige kombinasjoner (Screaton et al., 1992; Tolg et al., 1993; Hofmann et al., 1991). Variantene atskiller seg ved at forskjellige aminosyresekvenser innsettes på et bestemt sted i den ekstracellulære del av proteinet.
Slike varianter kan påvises i forskjellige tumorceller hos mennesker og i tumorvev hos mennesker. Således ble nylig ekspresjonen av CD44-variantene undersøkt i løpet av den kolorektale karsinogenese (Heider et al., 1993a). Ekspresjonen av CD44-variantene mangler i normalt tykktarmsepitel hos mennesker, og bare en svak ekspresjon er påviselig i de formerende celler av krypter. I senere stadium av tumorforløpet, f.eks. i adeno-karsinomer, eksprimerer alle maligne avart varianter av CD44. Vevsekspresjon av variant CD44 på et høyt nivå kunne også påvises i aggresive non-Hodgin-lymfomer (Koopman et
al. 1993).
Antistoffet Var3.1 mot CD44v6 beskrives i The Journal of Cell Biology, Bd. 122, No. 2, July 1993, M. Salmi et al. Det beskrives videre epitoper innenfor aminosyresekvensen som kodes av ekson v6-varianten av CD44 genet.
International Journal of Cancer, Bd. Supplement 8,1994 GENF, Schweiz,
D. Jackson et al. beskriver også antistoffer mot CD44 ekson v6. Det beskrives videre antistoffer med forbedret biologisk aktivitet i forhold til kjente antistoffer. De siterte antistoffene 2F10 og 8G5 er ikke tilstrekkelig underbygget idet verken epitopen eller fremgangsmåten for fremstilling av de nevnte antistoffene med samme spesifisitet er beskrevet.
Ekson v6 synes å spille en spesiell rolle ved den metastatiske utbredelse (Rudy et al. 1993). I dyremodell kunne antistoffer mot v6-spesifikke epitoper forhindre at metastase-ende celler slår seg ned, og vekst av metastaser (Seiter et al. 1993). I tykktarmskarsinomer korrelerer v6 ekspresjon med tumorprogresjon (Wielenga et al., 1993). I magekarsinomer er v6-ekspresjonen en viktig diagnostisk markør ved differensieringen mellom tumorer av intestinale og slike av diffus type (Heider et al., 1993b). V6-ekspresjonen ble målt i begge de sistnevnte arbeider ved hjelp av antistoffer mot v6 spesifikke epitoper.
Monoklonale antistoffer mot epitoper som kodes for av ekson v6 er tidligere kjent (Hofmann et al., 1991, Wielenga et al., 1993). På grunn av den høye potensielle nytte som slike antistoffer kan ha i diagnose og terapi, består et stort behov for antistoffer med forbedrede egenskaper.
Oppgaven for den foreliggende oppfinnelse var å tilveiebringe et antistoff som har signifikant bedre egenskaper i forhold til de kjente v6-spesifikke antistoffer.
Denne oppgaven kunne løses med den foreliggende oppfinnelse. Foreliggende oppfinnelse vedrører følgelig antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable ekson v6 i CD44-genet, kjennetegnet ved at det er antistoffet VFF-18 som dannes av hybridomcellelinjen med deponerings-nummer DSM ACC2174.
Oppfinnelsen vedrører videre en hybridomacellelinje som utskiller disse antistoffer, og som er deponert under deponeringsnumer DSM ACC2174 hos DSM-Deutsche Sammlung fur Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Tyskland.
Det er videre beskrevet ifølge foreliggende oppfinnelse rekombinant antistoffmolekyl, kjennetegnet ved at det har idiotypen til et antistoff ifølge krav 1.
I det følgende forstås under begrepet antistoffer eller antistoffmolekyler ikke bare fullstendige immunoglobuliner, men også ekvivalente substanser med hensyn til bindingsspesifitet og -affinitet såsom de beskrevne antistoflf-derivater og rekombinanate antistoffmolekyler.
Antistoffet VFF-18 ifølge oppfinnelsen ble fremstilt ved en fremgangsmåte ifølge eksempel 1. Antistoffet kan videre oppnås fra den deponerte hybridomcellelinje. Det ligger innenfor en gjennomsnittsfagmanns kunnskaper å fremstille derivater av antistoffet ifølge oppfinnelsen ut fra en sekvensanalyse av dette antistoff og/eller under anvendelse av hybridom-cellelinjen, som produserer dette antistsoff, å fremstille rekombinante antistoffmolekyler med den samme idiotop, dvs. antistoffmolekyler som har den samme aminosyre-sekvens i området til antigenbindingssetet (complementarity-determining regions, CDR) som antistoffet VFF-18. Slike derivater og rekombinante antistoffer er derfor uttrykkelig omfattet av oppfinnelsen.
Fra det fullstendige immunoglobulin VFF-18 antistoff kan f.eks. Fab- eller F(ab')2-fragmenter eller andre fragmenter fremstilles (Kxeitman et al., 1993). For diagnostiske metoder kan VFF-18-antistoffmolekyler, fragmenter derav eller rekombinante antistoffmolekyler med den samme idiotop, f.eks. knyttes til radioaktive isotoper såsom 1311,111 In, "Tc eller radioaktive forbindelser (Larson et al., 1991; Thomas et al., 1989; Srivastava, 1988) , enzymer såsom peroksidase eller alkalisk fosfatase (Catty et Raykundalia, 1989), med fluorescensfargestoffer (Johnson, 1989) eller biotinmolekyler (Guesdon et al., 1979). For terapeutiske anvendelser kan VFF-18 eller VFF-18-avledede antistoffmolekyler knyttes til toksiner (Vitetta et al., 1991; Vitetta et Thorpe, 1991; Kreitman et al., 1993; Theuer et al., 1993), zytostatika (Schrappe et al., 1992), prodrugs (Wang et al., 1992; Senter et al., 1989) eller radioaktive substanser. Antistoffet kan videre knyttes til et cytokin eller et annet immunomodulatorisk polypeptid, f.eks. til tumornekrosefaktor eller Interleukin-2.
Fagmannen er videre istand til, etter analyse av aminosyresekvensen til antistoffet VFF-18 og/eller under anvendelse av hybridoma-cellelinjen som produserer dette antistoffet, spesielt den deri foreliggende genetisk informasjon, å fremstille rekombinante antistoffmolekyler med den samme idiotype som VFF-18. Tilsvarende fremgangsmåter er kjent teknikk. Slike rekombinante antistoffmolekyler kan f.eks. være humaniserte antistoffer (Shin et al., 1989; Gtissow et Seemann, 1991), bispesifikke antistoffer (Weiner et al., 1993; Goodwin, 1989), single-chain-antistoffer (scFv, Johnson et Bird, 1991), fullstendige eller fragmentariske immunoglobuliner (Coloma et al., 1992; Nesbit et al., 1992; Barbas et al., 1992), eller antistoffer fremstilt ved chain shuffling (Winter et al, 1994). Humaniserte antistoffer kan f.eks. fremstilles ved CDR-poding (EP 0239400). Også rammeverk-regioner kan modifiseres (EP 0519596). For humanisering av antistoffer kan idag metoder såsom PCR (se f.eks. EP 0368684; EP 0438310; WO 9207075) eller computer-modellering ( se f.eks. WO 9222653) anvendes. Det kan også fremstilles fusjonsproteiner, f.eks. single-chain-antistoffer/toksin-fusjonsproteiner (Chaudhary et al., 1990; Friedman et al., 1993). Slike antistoffmolekyler er derfor likeledes en del av oppfinnelsen.
Det ligger i området til gjennomsnittfagmannens kunnskaper å bestemme den nøyaktige epitop av VFF-18, og med disse kjennskaper å fremstille ekvivalente antistoffer med den samme bindingsspesifitet. Dette kan f.eks. gjøres ved peptidbindingsstudier som i Eksempel 2, såsom ved variasjon av peptidet Hul. Slike antistoffer er derfor likeledes en del av oppfinnelsen.
Et videre aspekt av oppfinnelsen er anvendelsen av VFF-18 eller VFF-18-avledede eller ekvivalente antistoffmolekyler i diagnose utenfor legemet til et menneske eller dyr.
Diagnostiske fremgangsmåter kan være i og for seg kjente fremgangsmåter under anvendelse av antistoffmolekylene ifølge oppfinnelsen, f.eks. enzymkoblede immuno-målinger (ELISA, Catty et Raykundalia, 1989), radioimmunoassays (Catty et Murphy, 1989), immunhistokjemiske fremgangsmåter (Heider et al., 1993b) eller Western blots. Slike fremgangsmåter kan hensiktsmessig utføres med vevsprøver eller kroppsvæsker som er tatt ut fra kroppen, f.eks. biopsier. Undersøkelsene kan gjøres kvalitativt, semi-kvantitativt eller kvantitativt. Antistoffet eller antistoffmolekylene kan derunder anvendes som f.eks. beskrevet i den kjente teknikk for andre v6-spesifikke antistoffer (WO9500851), hvorunder de fordelaktige egenskaper hos antistoffet ifølge oppfinnelsen eller antistoffmolekylene ifølge oppfinnelsen betyr en signifikant forbedring av slike fremgangsmåter.
Foreliggende oppfinnelse vedrører videre antistoff eller antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 1 eller 3-12, for farmasøytisk anvendelse.
Det er videre beskrevet anvendelse av et antistoff eller antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 1 eller 3-11, for fremstilling av et middel for diagnose in vivo.
De overlegne egenskapene til VFF-18 i forhold til andre anti-CD44v6-antistoffer viser eksemplene 2 til 4.
Figurer
Figur 1: Skjematisk visning av GST-CD44(v3-vlO)-fusjonsproteinet. GST=glutation-S-transferase fra Schistosoma japonicum. V3-vl0 = variantinnsetting av Keratinozytt-CD44. Pilen markerer et trombin-spaltningssete. Figur 2: Sekvenssammenligning av ekson v6 av CD44-genet mellom menneske og rotte. Sekvensene til peptidene Ral og Hul hvortil antistoffene 1.1ASML (anti-rotte-CD44v6) og VFF-18 (anti-human CD44v6) binder er fremhevet med fet skrift. Identiske aminosyrer er kjennetegnet ved en stjerne. Figur 3: Binding av CD44v6-spesifikke antistoffer til syntetiske peptider. Bindingen av antistoffene til peptidene ble bestemt i en ELISA ved hvilken peptidene ble immobilisert og deretter inkubert med antistoflføsninger. Etter tilsvarende vasketrinn, ble bundede antistoffer med peroksydase-konjugert anti-mus-IgG-antistoff påvist. (A): I det første eksperiment ble bindingen av det for rotte-CD44v6 spesifikke antistoff 1.1ASML til peptidet Ral (KWFEN EWQGK NPPT) påvist. (B): I et ytterligere forsøk ble et homologt peptid til Ral fra den humane CD44v6 sekvens syntetisert. Forskjellige anti-human-CD44v6-hybridom-supernatanter ble bundet til dette peptid Hul (QWFGN RWHEG YRQT). Derunder viser det seg at VFF-18 binder vesentlig bedre til peptidet enn de øvrige anvendte antistoffer. (C): For en kvantitativ evaluering ble dette eksperimentet gjentatt med forskjellige konsentrasjoner av rensede antistoffer. Også her viser det seg at VFF-18 har en høyere bindingsaffinitet enn de andre antistoffer. Figur 4: Binding av radioaktivt markerte antistoffer til tumorceller. De tre antistoffer VFF-7 (anti v6), VFF-8 (anti-v5) og VFF-18 (anti-v6) ble radioaktivt merket med N-succinimyl[2,3-<3>H] propionat og anvendt for bindingstester på forskjellige tumorcellelinjer. Følgende cellelinjer ble derunder anvendt: CHO-CD44var: rekombinante hamster-cellelinjer (Chinese Hamster Ovary), den humane variant CD44 (Eksons v3-vl0) eksprimert på overflaten; HCT-116, CX-1, HT-29, CaCo, COLO 205: humane tykktarm-karsinomlinjer; A431: human plateepitelkarsinomlinje. Den spesifikke binding av antistoffer på de forskjellige cellelinjer er vist. Mens bindingen av v6-spesifikke antistoffer VFF-7 og VFF-18 til den rekombinante cellelinje CHO-CD44 ligger i den samme størrelsesorden, viser antistoffene på tumorcellelinjene helt forskjellige bindingsforhold. I noen tilfeller observerer man bare for VFF-18 og i mindre omfang VFF-8-binding (HT-29, CaCo, COLO 205), ved de andre cellelinjer binder VFF-18 vesentlig bedre enn VFF-7. Figur 5: Påvisning av løselige CD44-varianter som inneholder eksonet v6 i humant normalserum. I en Sandwich-ELISA ble de tre v6 spesifikke antistoffer VFF-4, VFF-7, henholdsvis VFF-18 anvendt som besjiktingsantistoff. I alle tre tilfeller anvendtes som påvisningsantistoff et CD44std-spesifikt antistoff (BU-52, std = standard) konjugert med peroksidase. Signalet av to forskjellige humane normalsera ved forskjellige fortynninger er vist i disse testene ((A) og (B)). I begge tilfeller observeres med VFF-18 et vesentlig sterkere signal enn med de to andre antistoffene. Figur 6: Serumverdier for CD44-varianter som inneholder v6. Med to forskjellige ELISA'er bestemtes innholdet av løselig CD44-var i sera fra 6 friske givere. I en test ble anvendt VFF-7, i den andre VFF-18 som besiktingsantistoff; begge antistoffer gjenkjenner eksonet v6. Som sammenligningspreparat tjente i begge tilfeller en rekombinant løselig CD44-variant (Ekson v3-vl0) fremstilt i CHO-celler. VFF-18-ELISA'en viser i gjennom-
snitt 3,5 ganger høyere verdier enn for VFF-7-ELISA. Dette betyr at løselige CD44var som forekommer i serum gjenkjennes av VFF-18 bedre enn av VFF-7.
Eksempler
Eksempel 1: Fremstilling av det monoklonale antistoff VFF-18
Kloning av pGEX-fusjonsproteiner
Hele variantregionen av HPKII-typen av CD44v (Hofmann et al, 1991) ble amplifisert fra menneskers keratinozytt-cDNA med polymerase-kjedereaksjon (PCR). De to PCR-primere 5'-CAGGCTGGGAGCCAAATGAAGAAAATG-3', posisjoner 25-52, og 5' -TG AT AAGG AACG ATTG AC ATT AG AGTTGGA-3', posisjoner 1013 - 984 av LCLC97-variantregionen, som beskrives av Hofmann et al., inneholdt et EcoRI-gjen-kjennelsessete, som ble benyttet til å klone PCR-produktet direkte i vektoren pGEX-2T (Smith et al., 1988). Det resulterende konstruksjonsprodukt (pGEX CD44v HPKII, v3-vlO) koder for et fusjonsprotein på tilnærmet 70 kD bestående av glutation-S-transferase fra Schistosoma japonicum og eksons v3-vl0 fra humant CD44 (Fig. 1; Heider et al., 1993a). Fusjonsproteinet ble uttrykt i E. Coli og deretter affinitetsrenset over glutation-agarose (Smith et al., 1988).
Immunisering og screening
Balb/c-hunnmus ble immunisert intraperitonealt med affinitetsrenset fusjonsprotein etter det følgende skjema:
1. Immunisering: 90 jag fusjonsprotein i komplett Freund's adjuvans
2. og 3. Immunisering: 50 u.g fusjonsprotein ufullstendig Freund's adjuvans
Immuniseringene fant sted med 4 ukers mellomrom. 14 dager etter den siste imuni-sering ble dyrene immunisert igjen på 3 påfølgende dager med hver gang 10 ug fusjonsprotein i PBS. På den påfølgende dag ble miltcellene til et dyr med høyt antistoffinnhold fusjonert med P3.X63-Ag8.653-musemyelomceller ved hjelp av polyetylenglykol 4000. Hybridomcellene ble så seleksjonen i mikrotiterplater i HAT-medium (Kohler et Milstein, 1975;Kearneyetal., 1979).
Bestemmelsen av antistoffinnholdet i serum henholdsvis screeningen av hybridom-supernatantene, ble utført ved hjelp av en ELISA. Ved denne testen ble først mikrotiterplater besjiktet med fusjonsprotein (GST-CD44v3-10) eller bare med glutation-S-transferase. Deretter ble det inkubert med seriefortynninger av serumprøver henholdsvis hybridomsupernatanter, og de spesifikke antistoffer med peroksidasekonjugerte antistoffer påvist mot muse-immunoglobulin. Hybridomer som bare reagerte med glutation-S-transferase ble kastet. De gjenværende antistoffer ble først karakterisert i en ELISA med områdespesifikke fusjonsproteiner (Ekson v3, ekson v5 + v6, ekson v6 + v7, ekson v8-vlO) (Koopman et al., 1993). Deres immunhistokjemiske reaktivitet ble testet på menneskehudsnitt. Antistoffet VFF-18 ble så identifisert gjennom binding til det syntetiske peptid Hul (QWFGN RWHEG YRQT). Sekvensen av Hul er et fragment av det humane CD44-eksons v6.
Eksempel 2: Binding av CD44v6-spesifikr antistoff til syntetiske peptider
Bindingen av CD44-spesifikt antistoff til syntetiske peptider ble bestemt i en ELISA. Løsningner:
Besjiktingsbuffer: 0,05 M natriumkarbonat pH 9,6
Målebuffer: PBS (fosfatbuffret saltvann
0,5% BSA (storfeserumalbumin)
0,05% Tween 20
Substratløsning: Fa. Kierkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD,
USA; TMB perioksidase-substrat: peroksidase-løsning B (H2O2) 1:1.
Peptidene (50 ug/ml i besjiktingsbuffer) ble immobilisert påNUNC Maxisorp immunoplater (1.1ASML) eller Acti-A-plater fra Fabrik Bio Products (VFF-antistoffer) ved 4°C natten over. Ved Acti-A-platene binder peptidet kovalent til platen. Så ble det vasket med PBS/0,05% Tween, frie adsorbsjonsseter på overflaten blokkert med målebuffer (1 time ved romtemperatur) og igjen vasket 1 gang med PBS/0,05% Tween 20. Acti-A-plater ble redusert etter blokkeringen med 10 mmol natriumborhydrid i 20 mmol natriumhydrogenkarbonat, pH 9,0 (rystet 1 time ved romtemperatur), og så vasket 3 ganger med PBS/0,05% Tween 20. Så ble hybridom-supernatanter henholdsvis antistoffløsninger i målebuffer brakt til konsentrasjoner mellom 0,02 og 10,0 ug/ml i glass og inkubert 2 timer ved romtemperatur i en plateryster. Så fulgte tre vasketrinn nmed PBS/0,05% Tween 20. Så ble 100 jxl/glass med pepperrotperoksidase-konjugert antimus-IgG-antistoff tilsatt til målebufferen i en egnet fortynning. Etter 2 timers inkubasjon ved romtemperatur på platerysteren, ble det vasket 3 ganger med PBS/0,05% Tween 20 og farget med substrat-løsning. Etter 10-15 timers utvikling, ble det stoppet med 20 M svovelsyre og absorpsjonen ved 450nm (referanse 690 nm) målt på fotometer.
I et første eksperiment ble bindingen av det for rotte-CD44v6 spesifikke antistoff 1.1ASML til peptidet Ral (KWFEN EWQGK NPPT) påvist. (Tabell 1, Figur 3 (A)):
I et videre forsøk syntetisertes et peptid homologt med Ral fra den humane CD44v6 sekvens (Hul, QWFGN RWHEG YRQT). Forskjellige anti-human-CD44v6-antistoffer ble bundet til Hul. Derunder viser det seg at VFF-18 har en betydelig høyere bindingsaffinitet enn alle andre anvendte antistoffer (Tabell 2, Figur 3(B)).
For kvantitativ eluering ble dessuten rensede anti-human-CDd44v6-antistoffer bundet i forskjellige konsentrasjoner til peptidet Hul. Også her viser det seg den tydelig bedre bindingsaffinitet sammenlignet med de andre antistoffer (Tabell 3, Figur 3 (C)).
Eksempel 3: Binding av radioaktivt markert CD44v6-spesiflkt antistoff til
tumorcellelinjer
Radioaktiv markering av antistoff.
1 mCi N-succinimidyl-[2,3-<3>H]-propionat ([<3>H]-NSP, Amersham 1 mCi/ml) ble inndampet i et silikonisert prøverør ved 0°C på vannstrålevakuum nesten til tørrhet. 15 jag antistoff (1 mg/ml i PBS, pH 7,4) ble tilsatt og inkubert 48 timer ved 4°C. Så ble overskudd [<3>H]-NSP oppfanget ved reaksjon med 30ul IM glysin i PBS (20 min. ved romtemperatur). Separasjonen av det merkede antistoff av [<3>H]-glysin fant sted over en
Sephadex-G-25-M-søyle (søylevolum 15 ml), hvorunder det som eluentbuffer ble anvendt PBS/0,5% BSA. Det [<3>H]-merkede antistoff foreligger i eksklusjonsvolumet. Mengden av antistoff ble bestemt i en ELISA for påvisning av museimmunoglobulin, og den spesifikke aktiviteten utregnet.
Binding av radioaktivt merkede antistoffer til turmoceller.
De tre antistoffer VFF-7 (anti-v6), VFF-8 (anti-v5) og VFF-18 (anti-v6) ble radioaktivt merket med N-suksinimidyl-[2,3-<3>]propionat og anvendt for bindingstesten til forskjellige tumorcellelinjer. Følgende cellelinjer ble derunder anvendt: CHO-CD44var: rekombinant hamstercellelinje (Chinese Hamster Ovary), den humane variant CD44 (eksons v3-vl0) uttrykt på overflaten; HCT-116, CX-1, HT-29, CaCo, COLO 205: humane tykktarmkarsinomlinje; A431: human plateepitelkarsinom-linje.
Cellene ble oppstartet i 12-hulls vevskulturplater, inkubert natten over ved 37°C i CCVvekstskap, deretter vasket en gang med PBS og fiksert med etanol (1 min, ved romtemperatur). Så ble det vasket en gang med dyrkningsmedium (RPMI 1640/10% kalve-fosterserum), og det radioaktive antistoff (250 000 dpm/glass i dyrkningsmedium) bundet. Etter en inkubering på 25 timer ved romtemperatur på plateryster, ble det vasket 3 ganger med PBS/0,5% BSA, cellene solubilisert med 0,1M NaOH/1% Triton X-100, og radio-aktiviteten målt i scintillasjonsteller. Uspesifikk binding ble bestemt i nærvær av et 100 gangers overskudd umerket antistoff. Bindingen ble beregnet i forhold til et enhetlig celletall (400.000 celler). Etter bestemmelsen av den spesifikke aktiviteten til antistoffene, kan den bundne antistoffrnengde uttrykkes i fmol.
Tabell 4 og figur 4 viser den spesifikke binding av antistoffer til de forskjellige cellelinjer. Mens bindingen av det v6-spesifikke antistoff VFF-7 og VFF-18 er tilnærmet lik til den rekombinante cellelinje CHO-CD44var, viser antistoffene til rumorcellelinjene meget forskjellige bindingsforhold. I noen tilfeller observerer man bare VFF-18- og i liten grad VFF-8-binding (HT-29, CaCo, COLO 205), ved de andre cellelinjer binder VFF-18 vesentlig bedre enn VFF-7.
Eksempel 4: ELISA for bestemmelse av løselig CD44v6 i serum Løsninger:
Besjiktningsbuffer: 0,05 M natriumkarbonat pH 9,6
Målebuffer: PBS (fosfatbufret saltvann)
0,05% BSA (storfeserumalbumin)
0,05% Tween 20
Prøvefortynnings-
middel: Fa. Bender MedSystems, Wien, Østerrike
Substratløsning: Fa. Kierkegaard & Perry Laboratories,
Gaithersburg MD, USA; TMB Peroksidasesubstrat:
Peroksidase-løsning B (H2O2) 1:1.
Mikrotiterplater (Nunc-Immunoplate MaxiSorp F96) ble besjiktet med 5 u.g/ml av et av de CD44v6-spesifikke antistoffer (inkubasjon ved 4°C natten over), deretter ble det vasket med PBS/0,05% Tween, frie absorbsjonsseter på plateoverflatene blokkert med målebuffer (1 time v/romtemperatur), og igjen vasket en gang med PBS/0,05% Tween 20. Serumprøvene ble så igjen forfortynnet minst 1:5 i prøvefortynningsmiddel og videre-fortynnet i serielle 1:2 fortynninger i platen i prøvefortynningsmiddel. Så tilsattes 50 ul/ glass med pepperrotperoksydasekonjugert anti-CD44std antistoff (Klon BU-52, The Binding Site, Birmingham) i en egnet fortynning (1:3000 - 1:10 000) i målebuffer. Etter 3 timers inkubasjon ved romtemperatur på plateryster, ble det vasket 3 ganger med PBS/0,05% Tween 20 og farget med substratløsning. Etter 10-15 minutter utvikling, ble det avbrutt med 2M svovelsyre, og absorbsjonen ved 450 nm (referanse 690 nm) målt på fotometer.
For kvantifisering, ble en seriell fortynning i målebuffer av et løselig CD44-standardpreparat lagt på parallelt med serumprøvene. Dette preparatet ble renset fra en supernatant av rekombinante hamsterceller (CHO) som uttrykker løselig CD44v3-vl0. Ved CD44v3-vl 0 dreier det seg om en human CD44-variant som inneholder peptid-sekvensene som kodes for av eksonene v3 til v 10.
Tabell 5 og figur 5 viser påvisningen av løselige CD44-varianter som inneholder eksonet v6 i humant normalserum. I en sandwich-ELISA ble de tre v6-spesifikke antistoffer VFF-4, VFF-7 henholdsvis VFF-18 anvendt som beskjiktingsantistoffer. I alle tre tilfeller anvendtes som påvisningsantistoff et CD44-std-spesifikt antistoff (BU-52, std = standard) konjugert med peroksidase. Signalet fra 2 forskjellige human-antisera er vist ved forskjellige fortynninger i denne testen. I begge tilfeller ((A) og (B)) observeres med VFF-18 et vesentlig sterkere signal enn med de to andre antistoffene.
Tabell 6 og figur 6 viser serumverdier fra v6-holdige CD44 varianter. Med to forskjellige ELISA'er bestemtes innholdet av løselig CD44var i sera fra 6 sunne givere. I en test ble VFF-7, i en annen VFF-18 anvendt som besiktningsantistoff; begge antistoffer gjenkjenner ekson v6. Som sammenligningspreparat tjente i begge tilfeller en i CHO-celle fremstilt rekombinant løselig CD44-variant (Ekson v3-vl 0). VFF-18-ELISA viser i gjennomsnitt 3,5 ganger høyere verdier enn VFF-7-ELISA. Dette betyr at det i serum forekommende løselige CD44var gjenkjennes bedre sammenlignet med rekombinant protein av VFF-18 enn av VFF-7.
Litteratur
Barbas C F, Bjorling E, Chiodi F, Dunlop N, Cababa D, Jones T M, Zebedee S L, Persson M A A, Nara P L, Norrby E, Burton D R. Recombinant human Fab fragments neutralize human type 1 hnmunodeficiency virus in vitro. Proe. Nati. Acad Sei. U. SJL. 89: 9339-9343
(1992). 1 Brritz H B, Weiden P L, Vanderheyden J-L, Appelbaum J W, Bjom M J, Fer M F, Wolf S ; B, RatdiffB A, Seiler C A, Foisie D C, Fisher D R, SchroffR W, Fritzberg A R, Abrams P G. Clinical experience with rhenium-] 86-labeled monoclonal antibodies for radioim-munotherapy. resultø of phase I trials. J. Nucl. Med. 33:1099-1112 (1992).
Catty, D., Raykundalia, C. ELISA and related immunoassays. In: Catty, D (Hrsg). Antibodies Vol. II. IRL Press Oxford (1989), 97-152, s. S. 105-109.
Catty, D., Murphy, G. Immunoassays using radiolabels. In: Catty, D (Hrsg). Antibodies Vol. II. IRL Press Oxford (1989), 77-96.
Chatal J-F, Saccavini J-C, Gestin J-F, Thédrez P, Curtet C, Kremer M, Guerreau D, Nolibé D, Fumoleau P, Guillard Y. Biodistribution of indium-lll-labeled OC 125 monoclonal antibody intrapeirtoneally injected into patients operated on for ovarian carcinomas. Cancer Res. 49: 3087-3094 (1989).
Chaudhary V K, Batra J K, Galdo M G, WiUingham M C, Fitzgerald D J, Pastan I. A rapid method of doning functional variable-region antibody genes in Escherichia coli as single-chain immunotoxins. Proe Nati. Acad Sei. U. SA. 87: 1066 (1990).
Colcher D, Esteban J, Carrasquillo J A, Sugarbaker P, Reynolds J C, Bryant G, Larson S M, Schlom J. Complementation of intracavitary and intravenous administration of a monoclonal antibody (B72.3) in patients with carcinoma. Cancer Res. 47:4218-4224 (1987).
Coloma M J, Hastings A, Wims L A, Morrison S L. Novel vectors for the expression of antibody molecules using variable regions generated by polymerase chain reaction. J. Immunol. Methods 152: 89-104 (1992).
Friedmann P N, McAndrew S J, Gawlak S L, Chace D, Trail P A, Brown J P, Siegall C B. BR96 sFv-PE40, a potent single-chain immunotoxin that selectively kills carcinoma cells. Cancer Res. 53:334-339 (1993).
Goodwin D A. A new appoach to the problem of targeting spedfic monoclonal antibodies to human tumors using anti-hapten chimeric antibodies. J. NucL Med Biol 16:645 (1989).
Gunthert, U., Hofmann, M., Rudy, W., Reber, S„ Zoller, M., HauBmann, I., Matzku, S., WenzeL A., Ponta, R, and Herrlich, P. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells. Cell 65:13-24 (1991).
Guesdon, J. I., Ternynck, T., Avrameas, S. J. Histochem. Cytochem. 27:1131 (1979).
Gussow D, Seemann G. Humanization of monoclonal antibodies. Methods EnzymoL 203: 99-121 (1991): Heider, K.-H., Hofmann, M., Horst, E., van den Berg, F.t Ponta, R, Herriich, P.f and Pals, S.T. A human homologue of the rat metastasis-associated variant of CD44 is expressed in colorectal carcinomas and adenomatous poryps. J. Cell Biol 120:227-233 (1993a). Heider, K-H., Dammrich, J., Skroch-Angel, P., Miiller-Hermelink, H-K., VoUmers, H-P., Herrlich, P., and Ponta, H. Differential expression of CD44 splice variants in intestinal- and diffuse-type human gastne carcinomas and normal gastne mucosa. Cancer Res. 53: 4197-4203 (1993b).
Hofmann, M, Rudy, W., Z6ller, M, Tolg, C, Ponta, H., Herrlich P„ and Gunthert, U. CD44 splice variants confer metastatic behavior in rats: homologous sequences are expressed in human tumor cell lines. Cancer Res. 51: 5292-5297 (1991).
Johnson, G. D. Immunofluorescence. ln: Catty, D (Hrsg). Antibodies Vol IL IRL Press Oxford (1989), 179-200, s. S. 180-189.
Johnson S, Bird R E. Construction of single-chain derivatives of monoclonal antibodies and lheir production in Escherichia coli. Methods Enzymol 203:88-98 (1991).
Keamey, J.F., Radbruch A., Liesegang B., Rajewski K. A new mouse myeloma cell line that has lost imunoglobulin expression but permits construction of anr/body-secreting hybrid cell lines. J. Immunol. 123: 1548 (1979).
Keenan A M, Weinstein J N, Carrasquillo J A, Bunn P A, Reynolds J C, Foon KA et al Irnmunolymphoscintigraphy and the dose dependence of <ni>In-labeled T101 monoclonal antibody in patients with cutaneous T-cell lymphoma. Cancer Res. 47:6093-6099 (1987).
KShler, G., Milstem, C. Contmous cutture of fused cells secreting antibody of predefined specifity. Nature 265:495 (1975)
Koopman, G., Heider, K.-H., Horts, E., Adolf, G. R., van den Berg, F., Ponta, R, Herrlich, P., Pals, S. T. Activated human lymphocytes and aggressive Non-Hodgktn's lymphornas express a homologue of the rat metastasis-associated variant of CD44. J. Exp. Med. 177: 897-904 (1993).
Kreitman R J Hansen H J, Jones A L, FitzGerald D J P, Goldenberg D M, Pastan L Pseu-domonas exotoxin-based immunotoxins containing the antibody LL2 or LL2-Fab' induce regression of subcutaneous human B-cell lymphoma in mice. Cancer Res. 53: 819-825
(1993).
Larson S M, Cheung N-K V, Leibel S A. Radioisotope Conjugates. In: DeVha V T, Hellman S, Rosenberg S A (Hrsg.). Biologic therapy of cancer. J. B. Lippincott Comp., Philadelphia, 496-511 (1991).
Mulshine J L, Magnani J L, Linnoila R 1: Applications of monoclonal antibodies in the treatment of solid tumors. In: DeVita V T, Hellman S, Rosenberg S A (Hrsg.). Biologic therapy of cancer. J. B. Lippincott Comp., Philadelphia, 563-588 (1991).
Nesbit M, Fu Z F, McDonald-Smith J, Steplewski Z, Curtis P J. Productipn of a functional monoclonal antibody recognizing human colorectal carcinoma cells from a baculovirus expression system. J. Immunol. Methods 151:201-208 (1992).
Perkins A C, Pimm MV.A role for gamma scintigraphy in cancer immunology and immun-otherapy. Eur. J. Nuci Med 19: 1054-1063 (1992).
Press O W, Eary J F, Badger C C, Martin P J, Appelbaum F R, Levy R, Miller R, Brown S, Nelp W B, Krohn K A, Fisher D, DeSantes K, Porter B, Kidd P, Thomas E D, Bernstein I D. Treatment of refractory Non-HodgkhVs lymphoma with radiolabeled MB-1 (anti-C037) antibody. J. Clin. OncoL 7: 1027-1038 (1989).
Rudy, W., Hofmann, M., Schwartz-Albiez, R., Zoller, M., Heider, K.-H., Ponta, H., Herrlich, P. The two major CD44 proteins expressed on a metastatic rat tumor cell line are de-rived from different splice variants: Each one individually suffices to confer metastatic be- . haviour. Cancer Res. 53: 1262-1268 (1993).
Schrappe M, Bumol T F, Apelgren L D, Briggs S L, Koppel G A, Markowitz D D, Mueller B M, Réisfeld R A. Long-term growth suppression of human glioma xenografts by chemo-immunoconjugates of 4-desacetylvmblastme-3-can)0xvhydra2ide and monoclonal antibody 9.2.27. Cancer Res. 52:3838-3844 (1992).
Screaton, GIL, Bell, M.V., Jackson, D.G., Comelis, F.B., Gerth, U, and Bell, J. I. Geno-mic structure of DNA encoding the lymphocyte homing receptor CD44 reveals at least 12 altemativcly spliced exons. Proe. Nati Acad Sd. USjL 89:12160-12164 (1992).
Sears H F, Mattis J, Herlyn D, HSyry P, Atldnson B, Ernst C, Steplewski Z, Koprowski H. Phase-I dinical trial of monoclonal antibody in treatment of gastrotntesdnal tumours. Lancet 1982 ( 1) : 762-765 (1982).
Sener, S., Arch, R., Reber, S., Komitowsld, D., Hofrnann, M., Ponta, H:, Herrlich, P., Matzku, S., Zoller, M. Prevention of tumor metastasis formation by anti-variant CD44. / Exp. Med 177:443-455 (1993).
Senter P D, Schreiber G J, Hirschberg D L, Ashe S A, Hellstrom K E, Hellstrom I. En-hancement of the in vitro and in vi vo antitumor activities of phosphorylated mitomycin C and etoposide derivatives by monoclonal antibody-alkaline phosphatase cohjugates. Cancer Res. 49: 5789-5792 (1989).
Shin S-U, Morrison S L. Production and properties of chimeric antibody molecules. Methods Enzymol. 178: 459-476 (1989).
Siccardi A G, Buraggi G L, Callegaro L, Colella A C, DeFilippi P G et al Imniunoscinti-graphy of adenocarcinomas by means of radiolabeled F(ab<*>)2 fragments of an anti-carcino-embryonic antigen monoclonal antibody: a multicenter study. Cancer Res. 49: 3095-3103
(1989).
Smith, D.B., Johnson, K.S. Single-step purification of polypetides expressed in Escherichia colt as fusions with glutathione S-transferase. Gene 67:31- 40 (1988).
Srivastava S C (Hrsg). Radiolabeled monoclonal antibodies for imaging and therapy. Life Sciences Series A 152, Plenum New York (1988).
T6lg, C, Hofmann, M., Herrlich, P., and Ponta, H. Splicing choice from ten variant exona establishes CD44 variability. Nucleic Acids. Res. 21: 1225-1229 (1993).
Theuer C P, Kreitman R J, FitzGerald D J, Pastan I. Immunotoxins made with a recombinant form of psevdomonas exotoxin A that do not require proteolysis for actrvity. Cancer Res. 53: 340-347 (1993).
Thomas G D, Dykes P W, BradweU A R. Antibodies for tumour immunodetection and methods for antibody radiolabeling. ln: Catty D (Hrsg.). Antibodies. IRL Press Oxford, 223-244 (1989), 223-244.
Thompson C H, Stacker S A, Salehi N, Lichtenstein M, Leyden M J, Andrews J T. Immu-nosdntigraphy for detection of lymph node metastases from breast cancer. Lancet 1984 ( 2) : 1245-1247 (1984).
Vitetta E S, Thorpe P E. Immunotoxins. In: DeVha V T, Hellman S, Rosenberg S A (Hrsg.). Biologic therapy of cancer.). B. Lippincott Comp., Philadelphia, 482-495 (1991)
Vitetta E S, Stone M, Amlot P, Fay J, May R, Till M, Newman J, Clark P, Collins R, Cun-ningham D, Ghetie V, Uhr J W, Thorpe P E. Phase I immunotoxin trial in patients with B-cell lymphoma. Cancer Res. 51: 4052-4058 (1991).
Wang S-M, Chern J-W, Yeh M-Y, Ng J C, Tung E, Roffler S R. Specific actrvation of glucuronide prodrugs by antibody-targeted enzyme conjugates for cancer therapy. Cancer Æm. 52: 4484-4491 (1992).
Weiner L M, OTJwyer J, Kitson J, Comis R L, Franke! A E, Bauer R J, Kopnrad M S, Groves E S. Phase I evaluation of an anti-breast carcinoma monoclonal antibody 260F9-recombinant ricin A chain immunoconjugate. Cancer Res. 49: 4062-4067 (1989).
Wielenga, V. J. M., Heider, K.-H., Offerhaus, G. J. A., Adolf, G. R., van den Berg, F. M., Ponta, H., Herrlich, P., Pals, S.T. Expression of CD44 variant proteins in human colorectal cancer is related to tumor progression. Cancer Res. 53:4754-4756 (1993).
Winter, G., Griffith, A. D., Hawkins, R. E., Hoogenboom, H. R. Making antibodies by phage display technology. Ann. Rev. Jmmunol. J2,433-455 (1994).
Claims (17)
1. Antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable ekson v6 i CD44-genet, karakterisert ved at det er antistoffet VFF-18 som dannes av hybridomcellelinjen med deponeringsnnummer DSM ACC2174.
2. Hybridom-cellelinje, karakterisert ved at det har deponeringsnummer DSM ACC2174.
3. Antistoffmolekyl, karakterisert ved at det kan oppnås ved kjemisk eller enzymatisk modifikasjon av et antistoff ifølge krav 1.
4. Antistoffmolekyl ifølge krav 3, karakterisert ved at det er et fragment av et antistoff ifølge krav 1.
5. Antistoffmolekyl ifølge krav 4, karakterisert ved at det er et Fab- eller et F(ab'>2-fragment.
6. Antistoffmolekyl ifølge krav 3, karakterisert ved at antistoffet er knyttet sammen med et annet molekyl, hvor det andre molekylet er valgt fra gruppen av radioaktive isotoper, radioaktive forbindelser, enzymer, peroksydase, alkalisk fosfatase, fluorescent farvestoffer, biotinmolekyler, toksiner, cytostatika, cytokiner eller immunmodulatoriske polypeptider, tumomekrosefaktor eller interleukin-2.
7. Antistoffmolekyl ifølge krav 6, karakterisert ved at det andre molekyl er et polypeptid.
8. Antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 3-5, karakterisert ved at det er sammenknyttet med en radioaktiv isotop.
9. Rekombinant antistoffmolekyl, karakterisert ved at det har idiotypen til et antistoff ifølge krav 1.
10. Rekombinant antistoffmolekyl ifølge krav 9, karakterisert ved at det er et chimært, humanisert, enkeltkjedet (single chain)- eller ved «change shuffling» frembrakt antistoffmolekyl.
11. Rekombinant antistoffmolekyl ifølge krav 9, karakterisert ved at det er knyttet til et annet molekyl, hvor det andre molekylet er valgt fra gruppen av radioaktive isotoper, radioaktive forbindelser, enzymer, peroksydase, alkalisk fosfatase, fluorescent farvestoffer, biotinmolekyler, toksiner, cytostatika, cytokiner eller immunmodulatoriske polypeptider, turnornekrosefaktor eller interleukin-2, eller til en radioaktiv isotop.
12. Antistoffmolekyl, karakterisert ved at det gjenkjenner samme epitop som antistoffet ifølge krav 1.
13. Anvendelse av et antistoff eller antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 1 eller 3-12 for diagnose utenfor legemet til et menneske eller dyr.
14. Anvendelse ifølge krav 13, karakterisert ved at fremgangsmåten er en enzymkoblet immunologisk måling eller en radiologisk immunologisk måling.
15. Anvendelse ifølge krav 13, karakterisert ved at fremgangsmåten er en immunhistokjemisk fremgangsmåte.
16. Antistoff eller antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 1 eller 3-12, for farmasøytisk anvendelse.
17. Anvendelse av et antistoff eller antistoffmolekyl ifølge ett av kravene 1 eller 3-11, for fremstillling av et middel for diagnose in vivo.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4419913 | 1994-06-08 | ||
| DE19944431297 DE4431297A1 (de) | 1994-09-02 | 1994-09-02 | Monoklonaler Antikörper gegen CD44v6 |
| PCT/EP1995/002126 WO1995033771A1 (de) | 1994-06-08 | 1995-06-02 | MONOKLONALER ANTIKÖRPER GEGEN CD44v6 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO965239L NO965239L (no) | 1996-12-06 |
| NO965239D0 NO965239D0 (no) | 1996-12-06 |
| NO317948B1 true NO317948B1 (no) | 2005-01-10 |
Family
ID=25937246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO19965239A NO317948B1 (no) | 1994-06-08 | 1996-12-06 | Antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable v6 i CD44-genet, hybridom cellelinje, rekombinant antistoffmolekyl, anvendelse for diagnose utenfor legemet, for farmasoytisk anvendelse og for fremstilling av et middel for diagnose in vivo |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5916561A (no) |
| EP (1) | EP0765343B1 (no) |
| JP (2) | JP3387929B2 (no) |
| KR (2) | KR100379217B1 (no) |
| CN (1) | CN1125083C (no) |
| AT (1) | ATE197592T1 (no) |
| BG (1) | BG64181B1 (no) |
| BR (1) | BR9507964A (no) |
| CA (1) | CA2192370A1 (no) |
| CO (1) | CO4410258A1 (no) |
| CZ (1) | CZ291274B6 (no) |
| DE (1) | DE59508864D1 (no) |
| DK (1) | DK0765343T3 (no) |
| ES (1) | ES2151603T3 (no) |
| FI (1) | FI964845A (no) |
| GR (1) | GR3035388T3 (no) |
| HK (1) | HK1011697A1 (no) |
| HU (1) | HU220168B (no) |
| NO (1) | NO317948B1 (no) |
| NZ (1) | NZ288224A (no) |
| PL (1) | PL190897B1 (no) |
| PT (1) | PT765343E (no) |
| RO (1) | RO118753B1 (no) |
| RU (1) | RU2204606C2 (no) |
| SI (1) | SI0765343T1 (no) |
| SK (1) | SK282649B6 (no) |
| UA (1) | UA58482C2 (no) |
| WO (1) | WO1995033771A1 (no) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UY24389A1 (es) * | 1995-12-06 | 2001-10-25 | Karlsruhe Forschzent | Composición farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de epitelio plano |
| AU1672097A (en) | 1996-02-15 | 1997-09-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Monoclonal antibody that recognizes antigens present on the surface of endothelial cell of tumor vessel |
| DE19648209A1 (de) * | 1996-11-21 | 1998-05-28 | Boehringer Ingelheim Int | Verfahren zur Tumorzelldepletion CD34-positiver Zellen |
| DE19708713C2 (de) * | 1997-03-04 | 2002-11-28 | Boehringer Ingelheim Int | Verwendung von anti-CD44 Antikörpern enthaltenden Präparationen zur Behandlung bestimmter Tumore und zur Unterdrückung von Immunreaktionen |
| EP1460132A1 (en) * | 1998-06-08 | 2004-09-22 | Fuso Pharmaceutical Industries Ltd. | Antibodies with specific immunoreactivity to thyroid carcinoma cells |
| WO2000002922A1 (fr) * | 1998-07-10 | 2000-01-20 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | Anticorps specifique des domaines intracellulaires de la thyrosinephosphatase |
| US8048416B2 (en) | 1999-10-08 | 2011-11-01 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US8071072B2 (en) * | 1999-10-08 | 2011-12-06 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US7189397B2 (en) * | 1999-10-08 | 2007-03-13 | Arius Research Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US20090004103A1 (en) * | 1999-10-08 | 2009-01-01 | Young David S F | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US20080124327A1 (en) * | 1999-10-08 | 2008-05-29 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US7947496B2 (en) * | 1999-10-08 | 2011-05-24 | Hoffmann-La Roche Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US20050100542A1 (en) * | 1999-10-08 | 2005-05-12 | Young David S. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44 |
| US6972324B2 (en) | 2001-05-18 | 2005-12-06 | Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies specific for CD44v6 |
| CA2443437A1 (en) * | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Antibodies specific for cd44v6 |
| US20030103985A1 (en) * | 2001-05-18 | 2003-06-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates |
| WO2003018044A1 (en) * | 2001-08-24 | 2003-03-06 | Stroemblad Staffan | New drug |
| US20040126379A1 (en) * | 2002-08-21 | 2004-07-01 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| WO2004024750A2 (en) * | 2002-09-13 | 2004-03-25 | Dyax Corporation | Cd44-binding ligands |
| US20040120949A1 (en) * | 2002-11-08 | 2004-06-24 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and radiotherapy |
| US20060140963A1 (en) * | 2003-04-14 | 2006-06-29 | Arius Research, Inc. | Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59 |
| EP1806365A1 (en) | 2006-01-05 | 2007-07-11 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Antibody molecules specific for fibroblast activation protein and immunoconjugates containing them |
| EP2266593A1 (en) | 2009-06-24 | 2010-12-29 | Karlsruher Institut für Technologie | Use of CD44v6 in the treatment of ophthalmic diseases |
| WO2011020529A2 (en) * | 2009-08-19 | 2011-02-24 | Merck Patent Gmbh | Antibodies for the detection of integrin complexes in ffpe material |
| CN102337298B (zh) * | 2011-08-19 | 2013-11-06 | 黄开红 | 一种输送siRNA的免疫纳米载体及其制备方法和应用 |
| DK2886126T3 (en) | 2013-12-23 | 2017-09-18 | Exchange Imaging Tech Gmbh | Nanoparticle conjugated to CD44-binding peptides |
| KR20210004961A (ko) * | 2018-02-22 | 2021-01-13 | 아브마트 상하이 컴퍼니, 엘티디. | 치료 항체 및 그의 용도 |
| CN109593125A (zh) * | 2018-12-12 | 2019-04-09 | 深圳市龙华区人民医院 | 基于***癌干细胞标志物cd44的抗原表位多肽cd44-p1及其应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2149635A1 (en) * | 1992-11-20 | 1994-06-09 | David Tarin | Peptide corresponding to cd44 exon 6, antibodies specific for said peptide and use of these antibodies for diagnosis of tumors |
| ES2110764T3 (es) * | 1993-06-18 | 1998-02-16 | Biotie Therapies Oy | Composiciones y metodos de diagnostico empleando anticuerpos monoclonales contra la cd44v6. |
| WO1995000851A1 (de) * | 1993-06-22 | 1995-01-05 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Verfahren zur diagnose und analyse von tumoren |
-
1995
- 1995-02-06 UA UA97010045A patent/UA58482C2/uk unknown
- 1995-06-02 US US08/750,359 patent/US5916561A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-02 WO PCT/EP1995/002126 patent/WO1995033771A1/de active IP Right Grant
- 1995-06-02 DE DE59508864T patent/DE59508864D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-02 CA CA002192370A patent/CA2192370A1/en not_active Abandoned
- 1995-06-02 JP JP50035496A patent/JP3387929B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-02 CZ CZ19963591A patent/CZ291274B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 PT PT95922496T patent/PT765343E/pt unknown
- 1995-06-02 RU RU97100179/13A patent/RU2204606C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 AT AT95922496T patent/ATE197592T1/de active
- 1995-06-02 BR BR9507964A patent/BR9507964A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 CN CN95194169A patent/CN1125083C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-06-02 EP EP95922496A patent/EP0765343B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-02 ES ES95922496T patent/ES2151603T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-02 SI SI9530457T patent/SI0765343T1/xx unknown
- 1995-06-02 NZ NZ288224A patent/NZ288224A/en unknown
- 1995-06-02 DK DK95922496T patent/DK0765343T3/da active
- 1995-06-02 KR KR1019960706939A patent/KR100379217B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 PL PL317536A patent/PL190897B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 HU HU9603387A patent/HU220168B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-06-02 RO RO96-02287A patent/RO118753B1/ro unknown
- 1995-06-02 SK SK1548-96A patent/SK282649B6/sk unknown
- 1995-06-07 CO CO95024702A patent/CO4410258A1/es unknown
-
1996
- 1996-12-03 BG BG101024A patent/BG64181B1/bg unknown
- 1996-12-04 FI FI964845A patent/FI964845A/fi not_active IP Right Cessation
- 1996-12-05 KR KR1019967006939A patent/KR970703368A/ko unknown
- 1996-12-06 NO NO19965239A patent/NO317948B1/no not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-12-07 HK HK98112912A patent/HK1011697A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-02-07 GR GR20010400215T patent/GR3035388T3/el not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-06-19 JP JP2002178280A patent/JP2003034700A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO317948B1 (no) | Antistoff mot en epitop innenfor aminosyresekvensen som kodes for av det variable v6 i CD44-genet, hybridom cellelinje, rekombinant antistoffmolekyl, anvendelse for diagnose utenfor legemet, for farmasoytisk anvendelse og for fremstilling av et middel for diagnose in vivo | |
| KR102506364B1 (ko) | 암 진단에 유용한 클라우딘 18.2에 대한 항체 | |
| NO321548B1 (no) | Monoklonalt antistoff som binder seg til GA733-1-antigen, hybridom, konjugat, humant/muse-rekombinant antistoff, nukleinsyremolekyl, plasmid, vertsvektorsystem samt fremgangsmate for fremstilling av et protein. | |
| US6372441B1 (en) | Method for diagnosis and therapy of Hodgkin's lymphomas | |
| AU726704B2 (en) | Method of diagnosing and treating epithelioma | |
| US20080038248A1 (en) | Proteins Ligands For Nkg2d And Ul16 Receptors And Uses Thereof | |
| CA2168988A1 (en) | Polypeptides coded by exon v5 of the cd44 gene as targets for immunotherapy and immunoscintigraphy of tumours | |
| MXPA96006108A (es) | Anticuerpos monoclonales contra cd44v6 | |
| DE19545472A1 (de) | Verfahren zur Diagnose und Therapie von Plattenepithelkarzinomen | |
| DE4431297A1 (de) | Monoklonaler Antikörper gegen CD44v6 | |
| MXPA99005544A (es) | Molecula de anticuerpo y su empleo para la diagnosis y terapia de linfomas de hodgkin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |