CN1152925A - 抗cd44v6单克隆抗体 - Google Patents

抗cd44v6单克隆抗体 Download PDF

Info

Publication number
CN1152925A
CN1152925A CN95194169A CN95194169A CN1152925A CN 1152925 A CN1152925 A CN 1152925A CN 95194169 A CN95194169 A CN 95194169A CN 95194169 A CN95194169 A CN 95194169A CN 1152925 A CN1152925 A CN 1152925A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
antibody molecule
molecule
vff
recombinant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN95194169A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1125083C (zh
Inventor
冈瑟·R·阿道夫
埃里克·帕特泽尔特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Karl Srur Research Center
Boehringer Ingelheim International GmbH
Original Assignee
Karl Srur Research Center
Boehringer Ingelheim International GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE19944431297 external-priority patent/DE4431297A1/de
Application filed by Karl Srur Research Center, Boehringer Ingelheim International GmbH filed Critical Karl Srur Research Center
Publication of CN1152925A publication Critical patent/CN1152925A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1125083C publication Critical patent/CN1125083C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70585—CD44
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2884—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD44
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种对由CD44基因外显子v6变体编码的抗原表位具有抗表位活性的抗体。该抗体的特征优于现有技术中的抗体，并适合于治疗和诊断上的应用。

Description

抗CD 44v6单克隆抗体
本发明涉及能抗由CD44基因变体外显子v6编码的抗原表位的单克隆抗体、由其衍生的抗体分子、以及这种抗体和抗体分子在诊断和治疗方面的应用。
近来已发现，无论是大鼠未转移胰腺癌细胞系还是大鼠未转移纤维肉瘤细胞系，为引发所谓自发转移行为，必须对表面糖蛋白CD44变体进行充分表达(Gunthert等，1991)。最小的CD44同型的标准形式的CD44s(或CD44std)，普遍在包括上皮细胞的不同组织中表达，而一些CD44剪切变体(CD44v，CD44var)只在亚上皮细胞中表达。由可变剪切而产生CD44变体的方法是使CD44s中10个外显子(v1～v10)序列完全剪切掉，但能以不同组合出现在较大变体中(Screaton等，1992；Tolg等，1993；Hofmann等，1991)。这些变体的不同之处在于，不同氨基酸序列被***蛋白质细胞外部分的某些位点。这样的变体可在各种人肿瘤细胞以及人肿瘤组织中检测到。因此，近来已详细研究了发生结肠直肠癌情况下CD44变体的表达(Heider等，1993a)。CD44变体不在正常人结肠上皮中表达，只在腺管增殖细胞中可检测到微弱的表达。在肿瘤如腺癌的发展后期，所有恶性肿瘤都表达CD44变体。在攻击性非Hodgkin淋巴组织瘤中也已发现高水平的变体CD44组织表达(Koopman等，1993)。尤其在转移扩散的情况下，外显子v6似乎起着特殊作用(Rudy等，1993)。在动物模型中，抗v6特异性表位的抗体能防止转移细胞的滞留和转移病灶的生长(Seiter等，1993)。在结肠癌中，v6表达与肿瘤发展相互关联(wielenga等，1993)。在胃癌中，v6表达是区分肠道类型肿瘤与扩散类型肿瘤的重要诊断标志(Heider等，1993b)。在后两篇论文中，v6表达用抗v6特异性抗原表位抗体来测定。
现有技术中已知抗外显子v6所编码表位的单克隆抗体(Hofmann等，1991；Wielenga等，1993)。由于这样的抗体在诊断和治疗中会有高潜力的应用性，因此非常需要特性改进的抗体。
本发明的目的是提供一种与已知v6特异性抗体相比特性好得多的抗体。
本发明可实现这一目的。本发明涉及一种名称为VFF-18的抗体。本发明还涉及分泌这种抗体的杂交瘤细胞系，而且该杂交瘤细胞系已保藏在德国微生物与细胞培养物保藏股份有限公司(DSM-Deutsche Sammlung furMikro organismen und Zellkulturen GmbH)，其地址为Mascheroder Weg 1b，D-38124 Braunschweig)，保藏登记号为DSM ACC2174。
下文中所用术语“抗体”或“抗体分子”不仅仅指完全的免疫球蛋白，也指与结合特异性和亲和性有关的等同物质，以及抗体衍生物和重组抗体分子。
本发明的抗体VFF-18按实施例1中的方法来制备。该抗体还可用所保藏的杂交瘤细胞系获得。制备本发明抗体衍生物，或者从抗体序列分析开始和/或使用杂交瘤细胞系来生产该抗体，制备具有相同个体基因型的重组抗体分子，也即在抗原结合位点区(互补决定区，CDR)具有与抗体VFF-18相同氨基酸序列的抗体分子，这些都属普通专业人员的技术范围内。因此，这样的衍生物以及重组抗体分子显然也包括在本发明中。
举例来说，Fab或F(ab′)2片段或其它片段可从VFF-18抗体的完全免疫球蛋白中产生(Kreitman等，1993)。例如，在诊断过程中，可将VFF-18抗体分子、其片段或者具有相同个体基因型的重组抗体分子连接到放射性同位素如131I，111In，99mTc或放射性化合物[Larson等，1991；Thomas等，1989；Srivastava，1988]、酶如过氧化物酶或碱性磷酸酶(Catty et Raykundalia，1989)、荧光染料(Johnson，1989)、或生物素分子(Guesdon等，1979)。在治疗应用中，可将VFF-18或VFF-18衍生的抗体分子与毒素(Vitetta等，1991；Vitettaet Thorpe，1991；Kreitman等，1993；Theuer等，1993)、细胞静止因子(Schrappe等，1992)、前药(Wang等，1992，Senter等，1989)或放射性物质连接。该抗体还可与细胞因子或免疫调节多肽，例如肿瘤坏死因子或白介素-2连接。
另外，在对抗体VFF-18的氨基酸序列进行分析后和/或使用能产生这种抗体的杂交瘤细胞系，特别是通过分析这些细胞中所含的基因信息之后，专业人员还能生产与VFF-18具相同个体基因型的重组抗体分子。实现这些目的的方法构成本领域技术的一部分。这样的重组抗体，譬如可以是人源化抗体(Shin等，1989；Güssow et Seemann，1991)、双特异抗体(Weiner等，1993；Goodwin，1989)、单链抗体(scFv，Johnson et Bird，1991)、完全或片段免疫球蛋白(Coloma等，1992；Nesbit等，1992；Barbas等，1992)，或者经链改组所生成的抗体(Winter等，1994)。人源化抗体可以通过例如CDR嫁接来制备(EP-0239400)。构架区也可加以修饰(EP-0519596)。目前，对于抗体的人源化，可以使用如PCR方法(参考例如EP 0368684；EP 0438310；WO 9207075)或计算机模拟方法(例如参考WO 9222653)。也可制备融合蛋白，例如单链抗体/毒素融合蛋白(Chaudhary等，1990；Friedman等，1993)。因此这种抗体分子同样也包括在本发明内。
鉴别VFF-18的确切抗原表位，及利用这一知识来制备具相同结合特异性的等价抗体，也属本领域普通专业人员的技能范围之内的事。准确的抗原表位可以通过实施例2中肽结合试验来鉴别，例如通过改变肽Hul的序列。因此，这样的抗体同样也在本发明的范围内。
本发明的另一方面是VFF-18或VFF-18衍生的或等价的抗体分子在诊断和治疗中的应用。
诊断方法可以是本身已知的方法，其中使用本发明抗体分子，例如酶联免疫测定法(ELISA Catty及Raykundalia，1989)、放射免疫测定法(Catty及Murphy，1989)，免疫组织化学法(Heider等，1993b)，或western氏印渍法。较为适宜的是这些方法可以用从机体采得的组织样品或例如从活组织中采得的液体来进行。进行这些试验可以是定性的，半定量的或定量的。本发明中，所述抗体或抗体分子可以如现有技术中对其它v6特异抗体所说明的那样来使用(WO 9500851)，而且本发明抗体或抗体分子的优越性质意味着这些方法大有改进。
除体外诊断外，本发明抗体分子也适于体内诊断，特别是肿瘤诊断。如果该抗体分子携载可检测标记，则可为诊断目的，例如体内给肿瘤成象，或者譬如为放射辅助治疗目的(放射指导的外科手术)而检测该标记。举例来说，对于为进行免疫闪烁照相而使用与放射同位素结合的抗体，有许多可供专业人员实施本发明的方法(Siccardi等，1989；Keenan等，1987；Perkins和Pimm，1992；Colcher等，1987；Thopson等，1984)。
治疗应用可以例如类似于使用抗体1.1 ASML(Seiter等，1993)的方法来进行。应用时抗体分子可以全身或局部施药，例如经静脉(药团或长时间输注)、腹膜内、肌内或皮下注射或输注。也可以灌流单个器官或肢体。缀合或未缀合抗体(完全免疫球蛋白、片段、重组嵌合分子、等等)的给药方法属现有技术(Mulshine等，1991；Larson等，1991；Vitetta及Thorpe，1991；Vitetta等，1991；Broitz等，1992；Press等，1989；Weiner等，  1989；Chatal等，1989；Sears等，1982)。
实施例2至4证明了VFF-18的性质比其它抗CD44v6抗体优越。
附图说明
图1：GST-CD44(v3-v10)融合蛋白的示意图。GST＝日本血吸虫(Schistosoma japonicum)的谷胱甘肽-S-转移酶。v3-v10＝角质形成细胞CD44的变体***片段。箭头标明凝血酶切割位点。
图2：人和鼠CD44基因外显子v6的序列对照。抗体1.1 ASML(抗鼠CD44v6)或VFF-18(抗人CD44v6)分别与之结合的肽Ral和Hul的序列用粗体字母标出，使之醒目。全同的氨基酸以星号标出。
图3：CD44v6特异性抗体与合成肽的结合。抗体与肽的结合用ELISA测定，测定时将肽固定，然后同抗体溶液一起温育。经合适的冲洗步骤后，以过氧化物酶缀合的抗鼠IgG抗体来测定所结合的抗体。(A)：在第一次实验中，证明了大鼠特异性CD44v6抗体1.1 ASML结合在肽Ral(KWFEN EWQGKNPPT)上。(B)：在另一次实验中，合成了由CD44v6序列衍生的RAL同源肽。不同的抗人CD44v6杂交瘤上清液与此种肽Hul(QWFGN RWHEG YRQT)结合。此实验表明，VFF-18与肽结合得比其它常用抗体好得多。(C)：为进行定量评定起见，以不同浓度的纯化抗体重复进行了此实验。该实验也证明，VFF-18具有比其它抗体更高的结合亲和性。
图4：放射标记抗体与肿瘤细胞的结合。三种抗体VFF-7(抗v6)、VFF-8(抗v5)，和VFF-18(抗v6)用N-琥珀酰亚胺基[2，3-3H]丙酸酯进行放射标记，并用于不同肿瘤细胞系的结合测定。测定时，使用下列细胞系：CHO-CD44var：在细胞表面表达人变体CD44(外显子v3-v10)的重组仓鼠细胞系(中国仓鼠卵巢)；HCT-116、CX-1、HT-29、CaCo、COLO205：人结肠癌细胞系；A431：人鳞状细胞癌细胞系。表明了抗体与不同细胞系有着特异性结合。v6特异抗体VFF-7和VFF-18对重组体细胞系的结合具有相同的数量级，而抗体对不同肿瘤细胞系显示了非常不同的结合行为。在一些情况下，只可见VFF-18的结合和VFF-8的较小程度结合(HT-29，CaCo，COLO205)，而在其它细胞系的情况下，VFF-18的结合比VFF-7好得多。
图5：测定正常人血清中含外显子v6的可溶性CD44变体。将3种v6特异抗体VFF-4、VFF-7、和VFF-18在夹心ELISA中用作包被抗体。在所有三种情况下，均使用过氧化物酶连接的CD44std特异抗体(BU-52，std＝标准)作为检测抗体。在这些试验((A)及(B))中，显示出两种不同正常人血清在不同稀释度时的信号。在这两种情况下，用VFF-18观察到比用另两种抗体强得多的信号。
图6：含v6的CD44变体的血清水平。用两种不同ELISAs测定6名健康供者血清中可溶解CD44var的含量。在一次试验中使用VFF-7作为包被抗体，而在另一次试验中使用VFF-18作为包被抗体；两种抗体均识别外显子v6。在两种情况下，将CHO细胞中产生的重组可溶性CD44变体(外显子v3-v10)作为对照制剂。在平均情况下，VFF-18 ELISA显示出比VFF-7 ELISA高3.5倍的值。这意味着，VFF-18比VFF-7能更好地识别血清中出现的可溶性CD44var。
                      实施例实施例1：单克隆抗体VFF-18的制备pGEX融合蛋白的克隆
将CD44v的HPKII型(Hofmann等，1991)整个可变区经聚合酶链反应(PCR)由人角质形成细胞CDNA加以放大。正如Hofmann等所述，LCLC97可变区的(5′-CAGGCTGGGAGCCAAATGAAGAAAATG-3′，位置25-52，和5′-TGATAAGGAACGATTGACATTAGAGTTGGA-3′，位置1013-984，这两个PCR引物包含EeoRI识别位点用来将PCR产物直接克隆到载体pGEX-2T中(Smith等，1988)。所得结构(pGEX CD44v HPKIL，v3-v10)编码了大约70千道尔顿的融合蛋白，由日本血吸虫(Schistosomaiaponicum的谷胱甘肽-S-转移酶和人CD44外显子v3-v10组成(图1；Heider等，1993a)。融合蛋白在大肠杆菌(E.coli)中表达，然后在谷胱甘肽琼脂糖上进行亲和层析纯化(Smith等，1988)。免疫和筛选
根据下面方法，用亲和纯化后的融合蛋白对雌性Balb/C小鼠腹膜内免疫接种：
1.免疫接种：佛氏完全佐剂中90μg融合蛋白
2.和3.免疫接种：佛氏不完全佐剂中50μg融合蛋白。
诸免疫接种各隔四星期进行。最后一次接种后14天，动物另外在三天连续时间内用溶于磷酸盐缓冲盐水(PBS)中的10μg融合蛋白免疫接种。继后一天，用聚乙二醇4000使具有高抗体效价的动物脾细胞与P3.X63-Ag8.653鼠骨髓瘤细胞融合。继而在微量滴定平板上在HAT培养基中选择杂交瘤细胞(Khler及Milstein，1975；Keamey等，1979)。
用ELISA分别进行血清中抗体效价的测定和杂交瘤上清液的筛选。在该试验中，首先用融合蛋白(GST-CD44v3-10)或只用谷胱甘肽S-转移酶涂覆微量滴定平板。然后，用血清样品或杂交瘤上清液的系列稀释物进行温育，用抗鼠免疫球蛋白过氧化物酶偶联的抗体来检证特异性抗体。弃除只与谷胱甘肽-S-转移酶反应的杂交瘤。然后用结构域特异性融合蛋白(外显子v3，外显子v5+v6，外显子v6+v7，外显子v8-v10)鉴定保留的抗体(Koopman等，1993)，然后在人皮肤切片上测试这些抗体免疫组织的化学反应性。然后通过与合成肽Hul(QWFGN RWHEG YRQT)的结合来鉴别抗体VFF-18。Hul序列是人CD44外显子v6的一个片段。实施例2：CD44v6特异抗体与合成肽的结合
应用ELISA测定CD44v6特异抗体与合成肽的结合。溶液：包被缓冲液：0.05M碳酸钠，pH9.6测定缓冲液：PBS(磷酸盐缓冲盐水)
        0.5％BSA(牛血清白蛋白)
        0.05％Tween 20底物溶液：Kierkegaard&Perry Laboratories公司，Gaithersburg MD，USA；
      TMB过氧化物酶底物：过氧化物酶溶液B(H2O2)1∶1。
在4℃下，将肽(50μg/ml，溶于包被缓冲液中)在购自Bio Products公司的NUNC Maxisorp免疫平板(1.1ASML)或Acti A平板上(VFF抗体)固定过夜。在Acti A平板情况下，肽与平板共价结合。接着，用PBS/0.05％Tween20冲洗平板，平板表面空出来的吸附位点用测定缓冲液封阻(室温，1小时)，然后再次用PBS/0.05％Tween 20冲洗。经封阻后，用溶于20mM碳酸氢钠(pH9.0)的10mM硼氢化钠还原Acti A平板(室温下摇荡1小时)，再用PBS/0.05％Tween 20冲洗三次。然后，将溶于浓度在0.02和10.0μg/ml之间的测定缓冲液中的杂交瘤上清液或抗体溶液加到小孔中并在滴定板振荡器中室温温育2小时。随后，用PBS/0.05％Tween 20冲洗平板三次。然后，加入以合适稀释度溶于测定缓冲液的辣根过氧化物酶缀合抗鼠IgG抗体100μI/孔。在滴定板振荡器上室温温育2小时后，用PBS/0.05％Tween 20冲洗三次，并以底物溶液染色。10-15分钟后，用2M硫酸停止发育，用光度计在450nm(参考690nm)测定吸收值。
在第一次实验中测定了鼠CD44v6特异性抗体1.1 ASML对肽Ral(KWFEN EWQGK NPPT)的结合(表1，图3(A))。
  1.1 ASMLμg/ml     吸收
    10.005.002.501.250.630.310.160.080.040.02     1.6521.7021.6581.5951.5021.2110.9710.6860.4580.270
表1
在另一组实验中，合成了与Ral(同源、从人CD44v6序列衍生的肽(Hul，QWFGN RWH EG YRQT)。使不同抗人CD44v6抗体与Hul结合。该试验表明，与所用的其它抗体相比，VFF-18与这种肽的结合亲和性高得出乎预料(表2，图3(B))。
   抗体     吸收
  VFF-2VFF-4VFF-7VFF-18     0.0671.3330.1992.384
表2
此外，为进行定量评价，还以不同浓度使纯化的抗人CD44v6抗体与肽Hul结合。这里也可以看到，与其它抗体相比，VFF-18显然具有更好的结合亲和性(表3，图3(C))。
  μg/ml抗体     VFF-4     VFF-7    VFF-18
 10.0003.3331.1110.3700.1230.0410.0140.0050.002     1.2251.4040.8530.3360.1630.0860.0480.0360.021     0.2470.2260.0940.0540.0280.0250.0210.0310.021     2.3202.5502.4832.4261.3540.6150.2660.0950.061
表3实施例3：放射标记CD44v6特异性抗体与肿瘤细胞系的结合抗体的放射标记
将1mCi N-琥珀酰亚胺基-[2，3-3H]丙酸酯([3H]-NSP，Amersham，1mCi/ml)在硅氧烷化样品细管中，在0℃喷水抽真空下蒸发几乎至干。加入15μg抗体(1mg/ml，溶于PBS，pH7.4)，并在4℃温育48小时。接着过量的[3H]-NSP通过与PBS中的30μl 1M甘氨酸在室温下反应20分钟而猝灭。用Sephadex G-25-M柱(柱容积15ml)并以PBS/0.5％BSA为洗脱缓冲液，将标记的抗体与[3H]-甘氨酸分离。[3H]-标记的抗体出现在外水体积中。在检测鼠免疫球蛋白用的ELISA中测定抗体的量，并计算特异活性。放射标记抗体与肿瘤细胞的结合
用N-琥珀酰亚胺基-[2，3-3H]丙酸酯对3种抗体VFF-7(抗v6)、VFF-8(抗v5)和VFF-18(抗v6)进行放射性标记，并用于对不同肿瘤细胞系的结合检测中。检测时，使用了下面的细胞系：CHO-CD44var：在细胞表面表达人变体CD44(外显子v3-v10)的重组仓鼠细胞系(中国仓鼠卵巢)；HCT-116，CX-1，HT-29，CaCo，COLO 205：人结肠癌细胞系；A431：人鳞状细胞癌细胞系。
细胞在12孔的组织培养平板上接种，在CO2温育箱中在37℃保温过夜，接着用PBS冲洗一次，并用乙醇固定(室温下1分钟)。然后，用培养基(RPMI 1640/10％牛胎血清)冲洗一次并与放射性抗体(250000dpm/井，培养基中)结合。在培养平板振荡器中室温温育25小时后，将平板用PBS/0.5％BSA冲洗三次，细胞用0.1MNaOH/1％Triton X-100增溶，并以闪烁计数器测定放射性。在过量100倍的未标记抗体存在下测定非特异性结合。结合以单位化的细胞数(400000个细胞)为准计。测定抗体的特异活性后，以fmol表示被结合抗体的量。
表4和图4示出抗体对不同细胞系的特异性结合。v6特异性抗体VFF-7和VFF-18与重组细胞系CHO-CD44var的结合数值大致相同，但这些抗体对于不同肿瘤细胞系显示出极其不同的结合行为。在一些情况下，只可见VFF-18结合，和较小程度的VFF-8结(HT-29，CaCo，COLO205)，而在其它细胞系的情况下，VFF-18结合显然比VFF-7更好。
细胞系     VFF-7fmol     VFF-8fmol     VFF-18fmol
CHO CD44varHCT-116CX-lHT-29CaCoCOLO205A431    33.501.440.190.000.030.008.19    68.4211.082.202.602.810.3242.32    46.5220.229.4826.0712.572.8838.73
表4实施例4：测定血清中可溶性CD44v6用的ELISA溶液：包被缓冲液：0.05M碳酸钠，pH9.6测定缓冲液：PBS(磷酸盐缓冲盐水)
        0.5％BSA(牛血清白蛋白)
        0.05％Tween 20样品稀释剂：Bender MedSystems公司，维也纳(Vienna)，奥地利(Austria)底物溶液：Kierkegaard & Perry Laboratories公司，Gaithersburg MD，美国；
      TMB过氧化物酶底物：过氧化物酶溶液B(H2O2)1∶1。用5μg/ml CD44v6特异性抗体包被微量滴定平板(Nunc-Immuno plateMaxiSorp F 96)(4℃下保温过夜)。然后，用PBS/0.05％Tween 20冲洗平板，平板表面上空的吸附位点用测定缓冲液封阻(室温，1小时)，再冲洗平板一次。用样品稀释剂将血清样品至少以1∶5的比例预稀释，再在平板中用样品稀释剂逐次以1∶2的比例进行稀释。紧接着，在测定缓冲液中以合宜的稀释度(1∶3000-1∶10000)加入50μl/孔辣根过氧化物酶缀合的抗CD44std抗体(克隆BU-52，The Binding Site，Birmingham)。在振荡器上室温温育3小时后，用PBS/0.05％Tween 20冲洗三次，并用底物溶液染色。10至15分钟后，用2M硫酸停止发育，用光度计在450nm(参考690nm)处测定吸收值。
为定量测定，与血清样品平行制备了可溶性CD44标准样品溶于测定缓冲液的系列稀释样品。此制剂在表达可溶性Cd44v3-v10的重组仓鼠细胞(CHO)上清液中纯化。CD44v3-v10是一种含有外显子v3至v10编码肽序列的人CD44变体。
表5和图5表明正常人血清中含有外显子v6的可溶性CD44变体。三种v6特异性抗体VFF-4、VFF-7和VFF-18分别用作夹心ELISA中的包被抗体。在所有三种情况下，均以过氧化物缀合的CD44std特异性抗体(BU-52，std＝标准)作检证抗体。在这些测试中，显现出两种不同正常人血清在不同稀释度时的信号。在(A)和(B)的两种情况下，可观察到VFF-18的信号比其它两种抗体强得多。
   稀释度     VFF-4     VFF-7     VFF-18
    1∶51∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶640     0.4060.3780.2960.2070.1090.0500.0260.012     0.4170.2890.1790.0720.0620.0300.0080.007     3.1433.0552.6301.7781.0840.5940.3180.159
表5A血清1
  稀释度   VFF-4   VFF-7   VFF-18
  1∶51∶101∶201∶401∶801∶1601∶3201∶640   1.6901.7561.5641.2130.6990.3360.1380.054   1.2801.1850.8570.4680.2080.0610.0140.018   3.2903.3213.1633.0502.5371.6660.9880.546
表5B血清2
表6和图6显示了含v6的CD44变体血清水平。用两种不同的ELISA测定了6个健康供者血清中可溶性CD44var的含量。在一次试验中，用VFF-7-作包被抗体，而在另一次试验中用VFF-18作包被抗体；两种抗体均能识别外显子v6。在两种情况下，都用CHO细胞中生产的重组可溶性CD44变体(外显子v3-v10)作为对照制剂。VFF-18-ELISA显示出平均比VFF-7-ELISA高3.5倍的数值。这意味着，与重组体蛋白质相比，VFF-18比VFF-7能更好地识别血清中产生的可溶性CD44var。
  供者     VFF-7ng/ml     VFF-18ng/ml   VFF-18/VFF-7
    123456     18.232.122.427.726.895.4     75.985.587.691.698.3332       4.172.663.913.313.673.48
 平均值SDCV％       3.530.5214.9％
表6
                         参考文献Barbas C F，Bjorling E，Chioi F，Dunlop N，Cababa D，Jones T M，Zebedee S L，Persson M AA，Nara P L，Norrby E，Burton D R.“重组的人Fab片段体外中和人的1型免疫缺陷病毒”Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：9339-9343(1992)。Breitz H B，Weiden P L，Vanderheyden J-L，Appelbaum J W，Bjorn M J，Fer MF，Wolf S B，Ratcliff B A，Seiler C A，Foisie D C，Fisher D R，Schroff R W，Fritzberg AR，Abrams P G.铼-186标记的单克隆抗体用于进行放射免疫治疗的临床实验：I期试验结果。J.Nucl.Med.33：1099-1112(1992)。Catty，D.，Raykundalia，C.ELISA和相关免疫测。In：Catty，D(Hrsg).AntibodiesVol.II.IRL Press 0xford(1989)，97-152，ppl05-109。Catty，D.，Murphy，G.应用放射标记的免疫测定。In：Catty，D(Hrsg).AntibodiesVol.II.IRL Press Oxford(1989)，pp77-96。Chatal J-F，Saccavini J-C，Gestin J-F，Thedrez P，Cutet C，Kremer M，Guerreau D，Nolibe D，Fumoleau P，Guillard Y. 为治疗卵巢癌对患者腹膜内注射的铟111标记的OC 125单克隆抗体生物分布。Cancer Res.49：3087-3094(1989)。Chaudhary V K，Batra J K，Galdo M G，Willingham M C，Fitzgerald D J，Pastan I.将大肠杆菌中功能可变区的抗体基因克隆为单链免疫毒素的快速方法。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87：1066(1990)。Colcher D，Esteban J，Carrasquillo J A，Sugarbaker P，Reynolds J C，Bryant G，Larson S M，Schlom J.单克隆抗体(B 72.3)在癌症患者腔内和静脉内给药的互补作用。Cancer Res.47：4218-4224(1987)。Coloma M J，Hastings A，Wims LA，Morrison S L.用聚合酶链反应产生的可变区表达抗体分子的新运载体。J.Immunol.Methods 152：89-104(1992)。Friedmann P N，McAndrew S J，Gawlak S L，Chace D，Trail P A，Brown JP，Siegall C B.BR96 sFv-PF40，选择性杀死癌细胞的有效单链免疫毒素Cancer Res.53：334-339(1993)。Goodwin D A.关于用抗肝素嵌合的抗体来对人肿瘤进行标靶特异单克隆抗体问题的新探索。J.Nucl.Med.Biol.16：645(1989)。Gunthert，U.，Hofmann，M.，Rudy，W.，Reber，S.，Zoller，M.，HauBmann，I.，Matzku，S.，Wenzel，A.，Ponta，H.，和Herrlich，P，糖蛋白CD44的新变体使大鼠癌细胞转移成为可能。Cell 65：13-24(1991)。Guesdon，J.I.，Ternynck，T.，Avrameas，S.J.Histochem.Cytochem.27：1131(1979)。Gussow D，Seemann G.单克隆抗体的人源化作用。Methods Enzymol.203：99-121(1991)：Heider，K.-H.，Hofmann，M.，Horst，E.，van den Berg，F，Ponta，H.，Herrlich，P，和Pals，S.T.大鼠转移相关的CD44变体的人同系物在结肠直肠癌和腺瘤性息肉中被表达。J.Cell Biol.120：227-233(1993a)。Heider，K-H.，Dammrich，J.，Skroch-Angel，P，Muller-Hermelink，H-K.，Vollmers，H-P，Herrlich，P，和Ponta，H.CD44剪切变体在肠和扩散型人胃癌和正常胃粘膜中的分化表达。Cancer Res.53：4197-4203(1993b)。Hofmann，M.，Rudy，W.，Zoller，M.，Tolg，C.，Ponta，H.，Herrlich P，和Gunthert，U.大鼠体内CD44剪切变体具有新陈代射行为：同源序列在人肿瘤细胞系中表达。Cancer Res.51：5292-5297(1991)。Johnson，G.D.免疫荧光。In：Catty，D(Hrsg).Antibodies Vol.II.IRL PressOxford(1989)，179-200，ppl80-189。Johnson S，Bird R E.单克隆抗体单链衍生物的构建和其在大肠杆菌中的产生。Methods Enzymol.203：88-98(1991)。Kearney，J.F.，Radbruch A.，Liesegang B.，Rajewski K.新的小鼠骨髓瘤细胞系丧失了免疫球蛋白表达但可构建分泌抗体的杂交细胞系。J.Immunol.123：1548(1979)。Keenan A M，Weinstein J N，Carrasquillo J A，Bunn P A，Reynolds J C，Foon K Aet al.免疫淋巴闪烁法和皮肤T细胞淋巴瘤患者对111In-标记的T101单克隆抗体的剂量依赖性。Cancer Res.47：6093-6099(1987)。Kohler，G.，Milstein，C.预先测定的特异性分泌抗体及融合细胞的连续培养。Nature 265：495(1975)Koopman，G.，Heider，K.-H.，Horts，E.，Adolf，G.R.，van den Berg，F，Ponta，H.，Herrlich，P，Pals，S.T.活化的人淋巴细胞和凝集、Non-Hodgkin’s淋巴瘤表达大鼠转移相关CD44变体的同系物。J.Exp.Med.177：897-904(1993)。Kreitman R J Hansen H J，Jones A L，FitzGerald D JP，Goldenberg D M，Pastan I.含有抗体LL2或LL2-Fab’的以假单孢菌外毒素为基础的免疫毒素诱导小鼠中皮下人B-细胞淋巴瘤的退化。Cancer Res.53：819-825(1993)。Larson S M，Cheung N-K V，Leibel S A.放射同位素缀合物。In：DeVita V T，Hell-man S，Rosenberg S A(Eds.).癌症的生物治疗。J.B.Lippincott Comp.，Phila-delphia，496-511(1991)。Mulshine J L，Magnani J L，Linnoila R I：单克隆抗体在治疗固体癌中的应用。In：DeVita V T，Hellman S，Rosenberg S A(Eds.).癌症的生物治疗。J.B.Lippincott Comp.，Philadelphia，pp563-588(1991)。Nesbit M，Fu Z F， McDonald-Smith J，Steplewski Z，Curtis P J.从杆状病毒表达***生产一种能识别人结肠直肠癌细胞的功能单克隆抗体。J.Immunol.Methods 151：201-208(1992)。Perkins A C，Pimm M V.癌免疫和免疫治疗中γ闪烁照相法的作用。Eur.J.Nucl.Med.19：1054-1063(1992)。Press O W，Eary J F，Badger C C，Martin P J，Appelbaum F R，Levy R，Miller R，Brown S，Nelp W B，Krohn K A，Fisher D，DeSantes K，Porter B，Kidd P，ThomasE D，Bemstein I D.用放射标记的MB-1(抗-CD37)抗体治疗顽固的Non-Hodgkin’s淋巴癌。J.Clin.Oncol.7：1027-1038(1989).Rudy，W，Hofnann，M.，Schwartz-Albiez，R.，Zoller，M.，Heider，K.-H.，Ponta，H.，Herr-lich，P.在转移性的大鼠肿瘤细胞系中表达的两种主要CD44蛋白是由不同剪切变体衍生的：每种蛋白各自足以具有转移行为。Cancer Res.53：1262-1268(1993).Schrappe M，Bumol T F，Apelgren L D，Briggs S L，Koppel GA，Markowitz D D，Mueller B M，Reisfeld R A.4-去乙酰基长春灭瘟碱-3-羧基酰肼和单克隆抗体化学免疫缀合物对于人神经胶质瘤异种移植的长期生长的抑制。9.2.27.Cancer Res.52：3838-3844(1992).Screaton，G.R.，Bell，M.V，Jackson，D.G.，Comelis，F.B.，Gerth，U.，和Bell，J.I.编码淋巴细胞返巢受体CD44的DNA基因组结构显露出至少12种可变剪切外显子。Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.89：12160-12164(1992)。Sears H F，Mattis J，Herlyn D，Hayry P，Atkinson B，Ernst C，Steplewski Z，Koprowski H.单克隆抗体在治疗胃肠癌中的I期临床试验。Lancet1982(1)：762-765(1982).Seiter，S.，Arch，R.，Reber，S.，Komitowski，D.，Hofmann，M.，Ponta，H：，Herrlich，P，Matzku，S.，Zoller，M.使用抗变体CD44防止肿瘤转移。J.Exp.Med.177：443-455(1993)。Senter P D，Schreiber G J，Hirschberg D L，Ashe SA，Hellstrom K E，Hellstrom I.用单克隆抗体-碱性磷酸酶缀合物增强磷酸化丝裂霉素C和鬼臼乙叉甙衍生物的体外和体内抗肿瘤活性。Cancer Res.49：5789-5792(1989)。Shin S-U，Morrison S L.嵌合抗体分子的生产和性质。Methods Enzymol.178：459-475(1989)。Smith，D.B.，Johnson，K.S.在大肠杆菌中表达的与谷胱甘肽S-转移酶融合物多肽的一步纯化法。Gene 67：31-40(1988)。Srivastava S C(Hrsg).用于成像和治疗的放射标记单克隆抗体。Life SciencesSeries A 152，Plenum New York(1988)。Tolg，C.，Hofmann，M.，Herrlich，P，和Ponta，H.自10个变体外显子进行剪切选择建立的CD44变异性。Nucleic Acids.Res.21：1225-1229(1993)。Theuer C P，Kreitman R J，FitzGerald D J，Pastan I.用不需要活性的蛋白酶解的假单孢菌外毒素A的重组体形式生成免疫毒素。Cancer Res.53：340-347(1993).Thompson C H，Stacker S A，Salehi N，Lichtenstein M，Leyden M J，Andrews J T.肺癌***转移的免疫闪烁照相法检测。Lancet 1984(2)：1245-1247(1984).Thomas G D，Kydes PW，Bradwell A R.肿瘤抗体的免疫检测和抗体标记的方法.In：Catty D(Ed.).Antibodies.IRL Press Oxford，(1989)，pp223-244.Vitetta E S，Thorpe P E.Immunotoxins.In：DeVita V T，Hellman S，Rosenberg SA(Eds.).癌症的生物治疗。JB.Lippincott Comp.，Philadelphia，482-495(1991)Vitetta E S，Stone M，Amlot P，Fay J，May R，Till M，Newman J，Clark P，CollinsR，Cunningham D，Ghetie V，Uhr J W，Thorpe P E.对B细胞淋巴瘤患者的I期免疫毒素试验。Cancer Res.51：4052-4058(1991).Wang S-M，Chern J-W，Yeh M-Y，Ng J C，Tung E，Roffler S R.癌症治疗中抗体定向酶缀合物对葡糖苷酸前药的特异性活化。Cancer Res.52：4484-4491(1992).Weiner L M，O’Dwyer J，Kitson J，Comis R L，Frankel A E，Bauer R J，Kopnrad MS，Groves E S.抗肺癌单克隆抗体260F9重组体的蓖麻毒蛋白A链免疫缀合物的I期评价。Cancer Res.53：4754-4756(1993).Winter，G.，Griffith，A.D.，Hawkins，R.E.，Hoogenboom，H.R.用噬菌体展示技术来制备抗体。Ann.Rev. Immunol.12，433-455(1994).国际格式INTERNATIONAL FORM
                                    BUDAPEST TREATY ON THE INTERNATIONAL
                                    RECOGNITION OF THE DEPOSUIT OF[专利程序上的关于微生物保藏的国际承认的 MICROORGANISMS FOR THE PURPOSES OF布达佩斯条约]                           PATENT PROCEDURE以下遵照国际保藏单位的规则10.2发行      VIABILITY STATEMENT
                                    issued pursuant toRole 10.2 by the INTERNATIONAL存活证明                                DEPOSITORY AUTHORITY identified on the following
                                    page
姓名Boehringer Ingelheim lnt.GmbH(贝林格尔.英格海姆国际有限公司)申请人
地址 Postfach 200
     55216 Ingelheim am Rhein(D-55216德国莱茵河畔英格尔海姆市
     第200号邮政信箱)
Figure A9519416900211
国际格式INTERNATIONAL FORM
                                       BUDAPEST TREATY ON THE INTERNBATIONAL
                                       RECOGNITION OF THE DEPOSUIT OF[专利程序上的关于微生物保藏的国际承认的    MICROORGANISMS FOR THE PURPOSES OF布达佩斯条约                               PATENT PROCEDURE以下遵照国际保藏单位的规则7.1发行          VIABILITY STATEMENT
                                       issued pursuant toRole 7.1 by the INTERNATIONAL保藏证明                                   DEPOSITORY AUTHORITY identified on the bottom of
                                       this page.
姓名 Boehringe Ingelheim Int.GmbH(贝林格尔，英格海姆国际有限公司)寄存人
地址 Postfach  200
     55216 Ingelheim am Rhein(D-55216德国莱茵河畔英格尔海姆市
     第200号邮政信箱)
Figure A9519416900221

Claims (17)

1、抗CD44基因可变外显子v6编码的氨基酸序列中抗原表位的抗体，其特征在于，该抗体是由保藏号为DSMACC 2174的杂交瘤细胞系产生的抗体VFF-18。
2、保藏号为DSM ACC 2174的杂交瘤细胞系。
3、抗体分子，可由权利要求1的一种抗体经化学修饰或酶修饰获得。
4、权利要求3的抗体分子，其特征在于，该抗体分子是权利要求1所述抗体的片段。
5、权利要求4的抗体分子，其特征在于，该抗体分子是Fab片段或F(ab′)2片段。
6、权利要求3的抗体分子，其特征在于，所述抗体与另外一个分子联接。
7、权利要求6的抗体分子，其特征在于，所述另一分子是肽。
8、权利要求3至5中任一项所述的抗体分子，其特征在于，该抗体分子与一种放射性同位素联接。
9、权利要求1抗体的个体基因型的重组抗体分子。
10、权利要求9的重组抗体分子，其特征在于，该重组抗体分子是嵌合的、人源化的、或单链的抗体分子，或者是经链改组产生的抗体分子。
11、权利要求9或10的重组抗体分子，其特征在于，该重组抗体分子与另外一个分子联接，或与一个放射性同位素联接。
12、认识与权利要求1的抗体相同抗原表位的抗体分子。
13、权利要求1或3至12中任一项的抗体或抗体分子在人体外或动物体外诊断方法中的应用。
14、权利要求13的应用，其特征在于，所述方法是一种酶联免疫测定法或一种放射免疫测定法。
15、权利要求13的应用，其特征在于，所述方法是免疫组织化学方法。
16、权利要求1或3至12中任一项的药用抗体或抗体分子。
17、权利要求1或3至11中任一项的抗体或抗体分子在制备体内诊断试剂方面的应用。
CN95194169A 1994-06-08 1995-06-02 抗CD44v6单克隆抗体 Expired - Fee Related CN1125083C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DEP4419913.9 1994-06-08
DE4419913 1994-06-08
DEP4431297.0 1994-09-02
DE19944431297 DE4431297A1 (de) 1994-09-02 1994-09-02 Monoklonaler Antikörper gegen CD44v6

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1152925A true CN1152925A (zh) 1997-06-25
CN1125083C CN1125083C (zh) 2003-10-22

Family

ID=25937246

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN95194169A Expired - Fee Related CN1125083C (zh) 1994-06-08 1995-06-02 抗CD44v6单克隆抗体

Country Status (28)

Country Link
US (1) US5916561A (zh)
EP (1) EP0765343B1 (zh)
JP (2) JP3387929B2 (zh)
KR (2) KR100379217B1 (zh)
CN (1) CN1125083C (zh)
AT (1) ATE197592T1 (zh)
BG (1) BG64181B1 (zh)
BR (1) BR9507964A (zh)
CA (1) CA2192370A1 (zh)
CO (1) CO4410258A1 (zh)
CZ (1) CZ291274B6 (zh)
DE (1) DE59508864D1 (zh)
DK (1) DK0765343T3 (zh)
ES (1) ES2151603T3 (zh)
FI (1) FI964845A (zh)
GR (1) GR3035388T3 (zh)
HK (1) HK1011697A1 (zh)
HU (1) HU220168B (zh)
NO (1) NO317948B1 (zh)
NZ (1) NZ288224A (zh)
PL (1) PL190897B1 (zh)
PT (1) PT765343E (zh)
RO (1) RO118753B1 (zh)
RU (1) RU2204606C2 (zh)
SI (1) SI0765343T1 (zh)
SK (1) SK282649B6 (zh)
UA (1) UA58482C2 (zh)
WO (1) WO1995033771A1 (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102337298A (zh) * 2011-08-19 2012-02-01 黄开红 一种输送siRNA的免疫纳米载体及其制备方法和应用
CN102597001A (zh) * 2009-08-19 2012-07-18 默克专利有限公司 在ffpe材料中用于检测整联蛋白复合体的抗体
CN103197067A (zh) * 2006-02-28 2013-07-10 阿里乌斯研究公司 显示cd44表面表达的细胞的细胞毒性介导
CN103204934A (zh) * 2007-05-30 2013-07-17 霍夫曼-拉罗奇有限公司 介导癌细胞细胞毒性的嵌合和人源化抗cd44抗体
CN109593125A (zh) * 2018-12-12 2019-04-09 深圳市龙华区人民医院 基于***癌干细胞标志物cd44的抗原表位多肽cd44-p1及其应用
WO2019161528A1 (en) * 2018-02-22 2019-08-29 Abmart Shanghai Co., Ltd. Therapeutic antibody and uses thereof

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
UY24389A1 (es) * 1995-12-06 2001-10-25 Karlsruhe Forschzent Composición farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de epitelio plano
AU1672097A (en) 1996-02-15 1997-09-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Monoclonal antibody that recognizes antigens present on the surface of endothelial cell of tumor vessel
DE19648209A1 (de) * 1996-11-21 1998-05-28 Boehringer Ingelheim Int Verfahren zur Tumorzelldepletion CD34-positiver Zellen
DE19708713C2 (de) * 1997-03-04 2002-11-28 Boehringer Ingelheim Int Verwendung von anti-CD44 Antikörpern enthaltenden Präparationen zur Behandlung bestimmter Tumore und zur Unterdrückung von Immunreaktionen
EP1460132A1 (en) * 1998-06-08 2004-09-22 Fuso Pharmaceutical Industries Ltd. Antibodies with specific immunoreactivity to thyroid carcinoma cells
WO2000002922A1 (fr) * 1998-07-10 2000-01-20 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Anticorps specifique des domaines intracellulaires de la thyrosinephosphatase
US8048416B2 (en) 1999-10-08 2011-11-01 Hoffmann-La Roche Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44
US7189397B2 (en) * 1999-10-08 2007-03-13 Arius Research Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44
US20090004103A1 (en) * 1999-10-08 2009-01-01 Young David S F Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44
US20080124327A1 (en) * 1999-10-08 2008-05-29 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44
US20050100542A1 (en) * 1999-10-08 2005-05-12 Young David S. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD44
US6972324B2 (en) 2001-05-18 2005-12-06 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Antibodies specific for CD44v6
CA2443437A1 (en) * 2001-05-18 2002-11-28 Boehringer Ingelheim International Gmbh Antibodies specific for cd44v6
US20030103985A1 (en) * 2001-05-18 2003-06-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates
WO2003018044A1 (en) * 2001-08-24 2003-03-06 Stroemblad Staffan New drug
US20040126379A1 (en) * 2002-08-21 2004-07-01 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
WO2004024750A2 (en) * 2002-09-13 2004-03-25 Dyax Corporation Cd44-binding ligands
US20040120949A1 (en) * 2002-11-08 2004-06-24 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for treating cancer using cytotoxic CD44 antibody immunoconjugates and radiotherapy
US20060140963A1 (en) * 2003-04-14 2006-06-29 Arius Research, Inc. Cytotoxicity mediation of cells evidencing surface expression of CD59
EP1806365A1 (en) 2006-01-05 2007-07-11 Boehringer Ingelheim International GmbH Antibody molecules specific for fibroblast activation protein and immunoconjugates containing them
EP2266593A1 (en) 2009-06-24 2010-12-29 Karlsruher Institut für Technologie Use of CD44v6 in the treatment of ophthalmic diseases
DK2886126T3 (en) 2013-12-23 2017-09-18 Exchange Imaging Tech Gmbh Nanoparticle conjugated to CD44-binding peptides

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2149635A1 (en) * 1992-11-20 1994-06-09 David Tarin Peptide corresponding to cd44 exon 6, antibodies specific for said peptide and use of these antibodies for diagnosis of tumors
ES2110764T3 (es) * 1993-06-18 1998-02-16 Biotie Therapies Oy Composiciones y metodos de diagnostico empleando anticuerpos monoclonales contra la cd44v6.
WO1995000851A1 (de) * 1993-06-22 1995-01-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Verfahren zur diagnose und analyse von tumoren

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103197067A (zh) * 2006-02-28 2013-07-10 阿里乌斯研究公司 显示cd44表面表达的细胞的细胞毒性介导
CN103204934A (zh) * 2007-05-30 2013-07-17 霍夫曼-拉罗奇有限公司 介导癌细胞细胞毒性的嵌合和人源化抗cd44抗体
CN102597001A (zh) * 2009-08-19 2012-07-18 默克专利有限公司 在ffpe材料中用于检测整联蛋白复合体的抗体
CN102597001B (zh) * 2009-08-19 2014-07-30 默克专利有限公司 在ffpe材料中用于检测整联蛋白复合体的抗体
CN102337298A (zh) * 2011-08-19 2012-02-01 黄开红 一种输送siRNA的免疫纳米载体及其制备方法和应用
CN102337298B (zh) * 2011-08-19 2013-11-06 黄开红 一种输送siRNA的免疫纳米载体及其制备方法和应用
WO2019161528A1 (en) * 2018-02-22 2019-08-29 Abmart Shanghai Co., Ltd. Therapeutic antibody and uses thereof
CN109593125A (zh) * 2018-12-12 2019-04-09 深圳市龙华区人民医院 基于***癌干细胞标志物cd44的抗原表位多肽cd44-p1及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
NO965239L (no) 1996-12-06
PL190897B1 (pl) 2006-02-28
HU9603387D0 (en) 1997-01-28
HU220168B (hu) 2001-11-28
BG101024A (en) 1997-09-30
FI964845A0 (fi) 1996-12-04
PL317536A1 (en) 1997-04-14
UA58482C2 (uk) 2003-08-15
JPH10501797A (ja) 1998-02-17
RU2204606C2 (ru) 2003-05-20
CA2192370A1 (en) 1995-12-14
JP3387929B2 (ja) 2003-03-17
CZ359196A3 (en) 1997-11-12
CO4410258A1 (es) 1997-01-09
DK0765343T3 (da) 2000-12-27
SI0765343T1 (en) 2001-02-28
NZ288224A (en) 1999-04-29
ATE197592T1 (de) 2000-12-15
NO965239D0 (no) 1996-12-06
KR970703368A (ko) 1997-07-03
JP2003034700A (ja) 2003-02-07
HK1011697A1 (en) 1999-07-16
EP0765343B1 (de) 2000-11-15
DE59508864D1 (de) 2000-12-21
AU701885B2 (en) 1999-02-11
BR9507964A (pt) 1997-09-02
CZ291274B6 (cs) 2003-01-15
SK282649B6 (sk) 2002-10-08
EP0765343A1 (de) 1997-04-02
SK154896A3 (en) 1997-08-06
CN1125083C (zh) 2003-10-22
BG64181B1 (bg) 2004-03-31
NO317948B1 (no) 2005-01-10
WO1995033771A1 (de) 1995-12-14
PT765343E (pt) 2001-02-28
AU2737095A (en) 1996-01-04
US5916561A (en) 1999-06-29
GR3035388T3 (en) 2001-05-31
RO118753B1 (ro) 2003-10-30
KR100379217B1 (ko) 2003-06-11
FI964845A (fi) 1996-12-04
HUT76260A (en) 1997-07-28
ES2151603T3 (es) 2001-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1125083C (zh) 抗CD44v6单克隆抗体
TWI356062B (en) Therapeutic peptides and method
CN101495516A (zh) Cd-33特异性的单链免疫毒素及其使用方法
CN103242444A (zh) 调节SIRPα-CD47相互作用以增加造血干细胞植入和用于此的化合物
CN108795880A (zh) 产生人胸苷激酶1（tk1）特异性单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株及其应用
US6372441B1 (en) Method for diagnosis and therapy of Hodgkin's lymphomas
AU598573B2 (en) A cDNA coding for carcinoembryonic antigen
AU726704B2 (en) Method of diagnosing and treating epithelioma
US20080038248A1 (en) Proteins Ligands For Nkg2d And Ul16 Receptors And Uses Thereof
CA2168988A1 (en) Polypeptides coded by exon v5 of the cd44 gene as targets for immunotherapy and immunoscintigraphy of tumours
CN115109164A (zh) 靶向epcam和cd3的双特异性抗体
MXPA96006108A (es) Anticuerpos monoclonales contra cd44v6
DE4431297A1 (de) Monoklonaler Antikörper gegen CD44v6
DE19545472A1 (de) Verfahren zur Diagnose und Therapie von Plattenepithelkarzinomen
CN106699892B (zh) 肺鳞癌中dnah5融合基因及其用途
Luzio et al. Use of Polyclonal and Monoclonal Antibodies in Studying Complement Component C9 as a Trans-Membrane Protein
MXPA99005544A (es) Molecula de anticuerpo y su empleo para la diagnosis y terapia de linfomas de hodgkin

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee