ES2305082T3 - Uso de inhibidores de il-18 para el tratamiento y/o la prevencion de la aterosclerosis. - Google Patents
Uso de inhibidores de il-18 para el tratamiento y/o la prevencion de la aterosclerosis. Download PDFInfo
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Abstract
Uso de un inhibidor de IL-18 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la prevención de la aterosclerosis, en donde el inhibidor de IL-18 se selecciona entre el grupo consistente en anticuerpos contra IL-18, anticuerpos contra cualquier subunidad del receptor de IL-18 y la proteína que se une a IL-18 (IL-18BP), una muteína de IL-18BP que comprende sustituciones conservadoras de aminoácidos, una proteína de fusión de IL-18BP y regiones de la cadena pesada de la inmunoglobulina, o la IL-18BP PEGilada, en donde la muteína, la proteína fusionada o la IL-18 BP PEGilada conservan la actividad biológica de unirse a IL-18.
Description
Uso de inhibidores de IL-18 para
el tratamiento y/o la prevención de la aterosclerosis.
La presente invención pertenece al campo de las
enfermedades vasculares. Más específicamente, la invención se
refiere al uso de inhibidores de IL-18 para el
tratamiento y/o la prevención de la aterosclerosis.
\vskip1.000000\baselineskip
La aterosclerosis es la enfermedad vascular más
común y más importante, aunque muchas otras enfermedades vasculares
están reconocidas. La aterosclerosis afecta principalmente a las
arterias de tamaño grande y mediano y sus lesiones comprenden las
estrías grasas, la placa fibrolítica y lesiones complicadas. La
aterosclerosis es una enfermedad inflamatoria crónica de la pared
arterial que se caracteriza por la acumulación progresiva de
lípidos, tales como el colesterol, de células, tales como
macrófagos, linfocitos T o células del músculo liso, y de una
matriz extracelular (1). Acumulaciones de mayor tamaño se denominan
ateromas o placas, las cuales contienen frecuentemente calcio. El
tejido graso puede erosionar la pared de la arteria, disminuir la
elasticidad de la arteria y dificultar el caudal sanguíneo.
Eventualmente, los coágulos pueden formar depósitos alrededor de la
placa, dificultando adicionalmente el caudal sanguíneo, lo que puede
conducir a una oclusión total del vaso sanguíneo. Generalmente, la
aterosclerosis se asocia con niveles incrementados de colesterol
LDL, fibrinógeno Lp(a) y el factor VII, así como con niveles
reducidos de colesterol HDL. Los factores de riesgo incluyen una
edad avanzada, el sexo masculino, fumar, diabetes, obesidad, un
nivel alto de colesterol en sangre, una dieta elevada en grasas y
el tener un historial personal o familiar de enfermedad cardíaca.
Es la causa principal de isquemia de un órgano como, por ejemplo,
infarto de
miocardio.
miocardio.
El ateroma es la lesión más común en las
arterias, que se puede complicar adicionalmente por tromboembolia.
Las placas ateromatosas estrechan frecuentemente el lumen de las
arterias, causando isquemia y a veces producen la atrofia de
tejidos en la zona hipoperfundida. Las consecuencias graves incluyen
el síntoma de angina debido a isquemia miocárdica, el fallo
cardíaco debido a isquemia o a sucesos no isquémicos, y la
hipertensión debida al estrechamiento de la arteria renal y la
hipoperfusión de un riñón que responde fisiológicamente,
incrementando la secreción de
renina.
renina.
Algunas veces se hace referencia a la
aterosclerosis y a la arteriosclerosis como dos estados patológicos
diferentes, y en este caso, la aterosclerosis se define como la que
implica endurecimiento (esclerosis) o pérdida de elasticidad de las
arterias, debido específicamente al ateroma, mientras que la
arteriosclerosis es un endurecimiento o pérdida de elasticidad de
las arterias debido a cualquier causa.
Las complicaciones o las consecuencias de la
aterosclerosis incluyen la enfermedad de la arteria coronaria
(aterosclerosis de las arterias coronarias), falta de riego
sanguíneo debido a la obstrucción (isquemia/angina), MI agudo
(infarto de miocardio, ataque de corazón), ataque isquémico
transitorio (TIA) o ictus, y lesión de los vasos sanguíneos, de los
músculos o de los órganos corporales.
Los aneurismas, dilataciones anormales de los
vasos sanguíneos, que son permanentes, también son consecuencias
comunes de la aterosclerosis. Los aneurismas aórticos abdominales y
ateroscleróticos, se desarrollan generalmente en pacientes de edad
avanzada. Se pueden romper en el espacio retroperitoneal. En los
aneurismas ateroscleróticos, se observa generalmente una pérdida
pronunciada del tejido elástico y fibrosis de la capa media, debido
principalmente a la isquemia del músculo de la media aórtica,
seguido de la liberación de enzimas de macrófagos que provocan la
fragmentación de las fibras elásticas.
Las medicaciones recomendadas para el
tratamiento o la prevención de la aterosclerosis incluyen la
reducción de las grasas/colesterol en la sangre. En particular, la
terapia que disminuye el colesterol LDL se emplea de forma
generalizada. Hasta la fecha, las estatinas que son inhibidores
específicos de la reductasa de HMG CoA, son las que se emplean de
forma más generalizada. Además, los agentes que disminuyen las
grasas comprenden medicaciones, tales como colestiramina,
colestipol, ácido nicotínico, gemfibrozil, probucol, lovastatina y
otros.
Otro acercamiento es para reducir el riesgo de
formación de trombos sobre lesiones ateromatosas establecidas. La
aspirina, que parece ser un inhibidor específico del tromboxano A2,
es mediadora de la agregación plaquetaria, o los anticoagulantes se
pueden utilizar para reducir el riesgo de formación de coágulos.
La "angioplastia de globo" percutánea
emplea un catéter con un globo en la punta para allanar la placa e
incrementar el flujo sanguíneo más allá de la oclusión. La técnica
es similar a la empleada para abrir las arterias del corazón, pero
se puede aplicar a muchas otras arterias en el cuerpo. Las estenosis
de la arteria coronaria se derivan con segmentos de vena safena
cosidos en la aorta proximal o diseccionando la arteria torácica
interna de la pared del pecho y realizando una anastomosis en su
extremo distal con una arteria en la superficie anterior del
corazón.
corazón.
\newpage
La extirpación quirúrgica de depósitos
(endarterectomía) se puede recomendar en algunos casos (ejemplo:
endarterectomía de la carótida).
Sin embargo, la recomendación principal sigue
siendo tratar o controlar los factores de riesgo, tales como llevar
una dieta baja en grasas, baja en colesterol y baja en sal y seguir
las recomendaciones de los profesionales sanitarios para el
tratamiento y el control de la hipertensión, la diabetes y otras
enfermedades, la reducción del peso corporal y dejar de fumar, así
como practicar un deporte de forma regular para mejorar el estado
físico del corazón y de la circulación.
El proceso inflamatorio está implicado en todas
las diferentes etapas de la aterosclerosis (1). La activación
endotelial, a través de diversos factores que incluyen el
cizallamiento leve, las lipoproteínas modificadas y las citocinas
pro-inflamatorias, se cree que es la primera etapa
en la aterosclerosis y está bajo control inflamatorio (1). Muchos
estudios recientes han mostrado que interacciones entre las células
vasculares e inflamatorias son cruciales en la aterogénesis (1).
Particularmente, la inhibición de las rutas
pro-inflamatorias definidas reducían el desarrollo
de la aterosclerosis (1).
La inflamación también tiene un papel principal
en la rotura de la placa aterosclerótica y en la trombosis
(2-5), y por tanto influye en la aparición de
síndromes isquémicos agudos y en su mortalidad relacionada (6). Es
más, manifestaciones clínicas graves de la aterosclerosis, que
incluyen infartos cardíacos, cerebrales y de cualquier otro órgano
afectado por la aterosclerosis, se deben principalmente a la
oclusión del lumen del vaso con un trombo, formado por el contacto
con una placa aterosclerótica rota (3, 4). Estudios patológicos han
mostrado que las placas vulnerables o inestables, es decir, las
placas propensas a la ruptura o que se han roto, difieren mucho en
la composición celular y de la matriz, cuando se comparan con placas
estables que no son propensas a la ruptura (7). Las placas
vulnerables son ricas en células inflamatorias (macrófagos y
linfocitos T), contienen un núcleo lipídico trombogénico y se
caracterizan por un fino casquete fibroso con una pérdida
sustancial de matriz extracelular
(7).
(7).
La disminución de la síntesis de colágeno,
mediada por la citocina proinflamatoria IFNy, y el incremento de la
actividad de las metaloproteinasas que degradan la matriz obtenida a
partir de macrófagos, son responsables de la reducción del casquete
fibroso y de la fragilidad (7). La ruptura del casquete fibroso
frágil expone el núcleo lipídico altamente trombogénico a la sangre
circulante y da como resultado la formación de trombos oclusivos
(1, 7). Por tanto, la densidad de las células inflamatorias en una
lesión aterosclerótica dada, se considera que es un indicador
adecuado de su inestabilidad.
El pronóstico clínico de un paciente con
aterosclerosis depende sólo en parte del tamaño de las lesiones (19,
20). Actualmente se admite en general que la calidad (composición
de la placa), más que el tamaño de la lesión podría ser un factor
de pronóstico mejor incluso que la aparición de sucesos isquémicos.
Es más, manifestaciones clínicas graves de la aterosclerosis,
(infartos cardíacos, cerebrales), se deben principalmente a la
oclusión del lumen del vaso con un trombo formado en el lugar de
contacto con una placa aterosclerótica rota (19). Estudios
patológicos han mostrado que las placas vulnerables o inestables que
están predispuestas a la ruptura o que están rotas, son ricas en
células inflamatorias y muestran una pérdida sustancial de células
del músculo liso y de contenido en colágeno (20, 21). Además, tales
placas muestran un aumento significativo en muerte por apoptosis
celular, lo que conduce a la formación de un núcleo lipídico
altamente trombogénico (13, 22).
Las citocinas pro-inflamatorias
están implicadas en la inflamación. La citocina interleucina 18
(IL-18), se describió inicialmente como un factor
inductor del interferón-\gamma
(IFN-\gamma) (8). Es una señal temprana en el
desarrollo de las respuestas de los linfocitos T coadyuvantes de
tipo 1 (Th1). La IL-18 actúa junto con
IL-12, IL-2, antígenos, mitógenos y
posiblemente otros factores, para inducir la producción de
IFN-\gamma. La IL-18 también
potencia la producción de GM-CSF y de
IL-2, aumenta la proliferación de linfocitos T
inducidos con anti-CD3 e incrementa la destrucción
mediada con Fas, de los linfocitos citolíticos. La
IL-18 madura se produce a partir de su precursor
mediante la enzima conversora de IL-1\beta (ICE,
caspasa-1). El receptor de IL-18
consiste en al menos dos componentes que cooperan en la unión al
ligando. Los sitios de unión de alta y de baja afinidad hacia
IL-18, se encontraron en linfocitos T estimulados
con IL-12 de múrido (9), lo que sugería un complejo
de receptor con múltiples cadenas. Hasta la fecha, se han
identificado dos subunidades del receptor, ambas pertenecientes a
la familia del receptor de IL-1 (10). La
transducción de la señal de IL-18 implica la
activación de NF-\kappaB (11).
Se ha aislado recientemente una proteína soluble
a partir de la orina humana que tiene alta afinidad hacia
IL-18, y se ha clonado el ADNc humano y de ratón,
así como el gen humano (12; documento de patente WO 99/09063). La
proteína se ha denominado proteína de unión a IL-18
(IL-18BP).
La IL18BP no es el dominio extracelular de uno
de los receptores conocidos de IL-18, sino una
proteína secretada que circula de forma natural. Pertenece a una
familia nueva de proteínas secretadas que incluye adicionalmente
algunas proteínas codificadas por el Poxvirus (12). La
IL-18BP se expresa constitutivamente en el bazo
(12). La IL-18BP de la orina así como la
recombinante se unen específicamente a IL-18 con
alta afinidad y modulan la afinidad biológica de
IL-18.
El gen de IL-18BP se ha
localizado en el cromosoma 11q13 humano, y no se ha encontrado
ningún exón que codifique un dominio transmembranal en una
secuencia genómica de 8,3 kb.
Se han encontrado cuatro variantes por corte y
empalme o isoformas de IL-18BP en humanos y se han
denominado IL18BP a, b, c y d, y todas ellas comparten el mismo
extremo N-terminal y difieren en el extremo
C-terminal
(12).
(12).
Cuatro isoformas humanas y dos de ratón de
IL-18BP, que eran el resultado del corte y empalme
del ARNm, se han encontrado en diversas genotecas de ADNc y se han
expresado, purificado y determinado para unirse y neutralizar las
actividades biológicas de IL-18 (23). La isoforma a
de la IL-18BP humana (IL-18BPa)
mostraba la mayor afinidad hacia IL-18 con una tasa
de asociación rápida, una tasa de disociación lenta y una constante
de disociación (K(d)) de 399 pM. La IL-18BPc
comparte el dominio Ig de IL-18BPa, excepto para los
29 aminoácidos C-terminales; la K(d) de
IL-18BPc es 10 veces menor (2,94 nM). Sin embargo,
la IL-18BPa y la IL-18BPc
neutralizan la IL-18 en >95% con un exceso molar
de dos. Las isoformas IL-18BPb y
IL-18BPd carecen de un dominio Ig completo y no
tienen la capacidad de unirse o de neutralizar la
IL-18. Las isoformas IL-18BPc y
IL-18BPd de múrido que poseen el dominio Ig
idéntico, también neutralizan en >95% la IL-18 de
múrido, con un exceso molar de dos. Sin embargo, la
IL-18BPd de múrido, que comparte un motivo común del
extremo C-terminal con la IL-18BPa
humana, también neutraliza la IL-18 humana. Modelos
moleculares identificaron un sito de unión extenso y mixto
electrostático e hidrófobo en el dominio Ig de
IL-18BP, que podía ser la causa de su unión con alta
afinidad al ligando
(23).
(23).
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se basa en el descubrimiento de que
un inhibidor de IL-18 tenía un efecto beneficioso
pronunciado sobre el desarrollo de las placas, la evolución de las
placas y la estabilidad de las placas en un modelo de
aterosclerosis en múrido. El inhibidor de IL-18 no
sólo evitaba la formación de la lesión en la aorta torácica, sino
que también inducía un cambio hacia un fenotipo de placa estable en
placas ateroscleróticas ya establecidas.
Por tanto, la invención se refiere al uso de un
inhibidor de IL-18 tal y como se define en las
reivindicaciones, para la fabricación de un medicamento para la
prevención y/o el tratamiento de la aterosclerosis. La invención se
refiere adicionalmente a métodos de tratamiento para un acercamiento
terapéutico génico para tratar y/o prevenir la aterosclerosis.
\vskip1.000000\baselineskip
La Figura 1 muestra un histograma que describe
el porcentaje de supervivencia de las células endoteliales de la
vena umbilical humana, después de incubarlas sólo con lipoproteínas
oxidadas, o incubándolas con una combinación de lipoproteínas
oxidadas y un anticuerpo de IL-18 o
IL-18BP, respectivamente.
La Figura 2 muestra una transferencia de tipo
Western realizada sobre extractos proteicos de arterias
ateroscleróticas, en comparación con arterias testigos. En la
transferencia de tipo Western, se emplearon anticuerpos dirigidos
contra IL-18BP (hIL18BP), la subunidad \alpha del
receptor de IL-18 (hIL18R\alpha),
IL-18 (hIL18) y Caspasa-1
(Caspasa-1 p10).
La Figura 3 muestra un gel de agarosa teñido con
bromuro de etidio que muestra el resultado de un análisis con
RT-PCR para el ARNm de IL-18 y de
IL-18BP en células de la placa aterosclerótica.
Figura 4. Resultados representativos de la
RT-PCR para IL-18BP y
IL-18 en placas ateroscleróticas en comparación con
la expresión en actina h\alpha (testigo) en placas sintomáticas y
asintomáticas.
La Figura 5 muestra el mapa del vector de
expresión empleado para la electrotransferencia intramuscular en
ratones.
La Figura 6 muestra un histograma que describe
el área que se tiñe porque contiene lípidos en las arterias
ateroscleróticas. Análisis cuantitativo con imágenes asistido por
ordenador de la deposición de lípidos. Los datos representan
valores de la media con s. e. m. (n = 19 para el plásmido vacío, n =
14 para el plásmido con IL-18BP). Los asteriscos
por cuadruplicado indican una P < 0,0001.
La Figura 7 muestra un histograma que describe
el área de la lesión del seno aórtico después del tratamiento con
IL-18BP, comparado con el testigo (plásmido vacío).
Análisis cuantitativo con imágenes asistido con ordenador del área
de la lesión. Los datos representan valores de la media con s. e. m.
(n = 19 para el plásmido vacío, n = 14 para el plásmido con
IL-18BP). Los asteriscos dobles indican una P <
0,01.
La Figura 8 muestra el efecto del tratamiento
con IL-18BP sobre el contenido en células
inflamatorias en la lesión. El análisis cuantitativo de imágenes
asistido por ordenador se empleó para determinar el porcentaje de
áreas positivas para macrófagos (barras negras) y el número de
linfocitos T infiltrantes por mm^{2} (barras grises) en lesiones
del seno aórtico de ratones testigos (n = 12 para la tinción de
macrófagos, n = 15 para la tinción de linfocitos T) o de ratones
tratados con IL-18BP (n = 13 para macrófagos, n = 12
para linfocitos T). Los datos representan los valores medios con s.
e. m. Los asteriscos por triplicado indican una P < 0,005; y los
asteriscos por cuadruplicado indican una
P < 0,0001.
P < 0,0001.
La Figura 9 muestra el efecto del tratamiento
con IL-18BP sobre las células del músculo liso y el
contenido en colágeno de la lesión. El análisis cuantitativo de
imágenes asistido por ordenador, se empleó para determinar el
porcentaje de áreas positivas para células del músculo liso (barras
negras) y la acumulación de colágeno (barras grises) en lesiones
del seno aórtico de ratones testigos (n = 6 para células del músculo
liso, n = 11 para el colágeno) y de ratones tratados con
IL-18BP (n = 6 para células del músculo liso, n = 13
para el colágeno). Los datos representan valores de la media con s.
e. m. Los asteriscos aislados indican una P < 0,05; y los
asteriscos por duplicado indican una P < 0,01.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención se basa en el descubrimiento de
niveles incrementados de IL-18 circulante en
pacientes con síndromes coronarios agudos y una producción
incrementada de IL-18 en las placas ateroscleróticas
inestables de la carótida, responsables del ictus. Además de ésto,
se ha observado que la electrotransferencia in vivo de ADN de
un plásmido de expresión que codifica IL-18BP,
evita el desarrollo de estrías grasas en la aorta torácica y
ralentiza la evolución de las placas ateroscleróticas avanzadas en
el seno aórtico, en un modelo de aterosclerosis en múridos bien
establecido. Más importante, la transfección con el plásmido de
IL-18BP induce cambios profundos en la composición
de la placa (disminución del número de macrófagos, linfocitos T,
muerte celular y del contenido en lípidos e incremento del
contenido en células del músculo liso y colágeno), lo que conduce a
un fenotipo de placa estable. Estos resultados muestran por primera
vez una función importante de los inhibidores de
IL-18 en la reducción del desarrollo/evolución de
la placa y en la potenciación de la estabilidad en la placa.
La invención se refiere, por tanto, al uso de un
inhibidor de IL-18, tal y como se define en las
reivindicaciones, para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o la prevención de la aterosclerosis.
El término "prevención" en el contexto de
esta invención, se refiere no sólo a una prevención completa de un
cierto efecto, sino también a cualquier prevención, atenuación,
reducción, disminución o decrecimiento parcial o sustancial del
efecto antes o justo al comienzo de la enfermedad.
El término "tratamiento" en el contexto de
esta invención se refiere a cualquier efecto beneficioso sobre la
evolución de la enfermedad que incluye la atenuación, la reducción,
la disminución o el decrecimiento del desarrollo patológico una vez
iniciada la enfermedad.
La expresión "inhibidor de
IL-18" en el contexto de esta invención se
refiere a cualquier molécula que module la producción y/o la acción
de IL-18, de modo que la producción y/o la acción de
IL-18 se atenúe, se reduzca, o se evite o se
bloquee parcial, sustancial o completamente.
Un inhibidor de la producción puede ser
cualquier molécula que afecte negativamente a la síntesis, el
procesamiento o a la maduración de IL-18. Los
inhibidores considerados de acuerdo con la invención pueden ser, por
ejemplo, supresores de la expresión génica de la interleucina
IL-18, ARNm complementarios que reduzcan o eviten la
transcripción del ARNm de IL-18 o que conduzcan a
la degradación del ARNm, proteínas que impidan el plegamiento
correcto, o que eviten parcial o sustancialmente la maduración o la
secreción de IL-18, proteasas que degraden la
IL-18 una vez que se ha sintetizado, y similares. Un
inhibidor de la producción podría ser un inhibidor de la
Caspasa-1 o un inhibidor de ICE, por ejemplo, que
evite la maduración de IL-18.
Un inhibidor de la acción de
IL-18 puede ser, por ejemplo, un antagonista de
IL-18. Los antagonistas se pueden unir o pueden
secuestrar la molécula de IL-18 misma, con una
afinidad suficiente y una especificidad para neutralizar parcial o
sustancialmente la IL-18 o el(los)
sitio(s) de unión de IL-18 responsables de la
unión de IL-18 a sus ligandos (como, p. ej., a sus
receptores). Un antagonista también puede inhibir la ruta de
señalización de IL-18, activada en las células
después de la unión a IL-18/receptor.
Los inhibidores de la acción de
IL-18 también pueden ser receptores solubles de
IL-18 o moléculas que mimetizan los receptores, o
agentes que bloquean los receptores de IL-18, tales
como anticuerpos monoclonales, por ejemplo, o cualquier otro agente
o molécula que evite la unión de IL-18 a sus dianas,
disminuyendo o evitando de este modo el desencadenamiento de las
reacciones intra o extracelulares mediadas por
IL-18.
La aterosclerosis también se denomina
arteriosclerosis o endurecimiento de las arterias. En el contexto de
la presente invención, el término aterosclerosis incluye todas las
enfermedades o estados de enfermedad de las arterias descritos
generalmente como aterosclerosis, en los que un material graso se
deposita en la pared de los vasos, dando eventualmente como
resultado un estrechamiento del flujo sanguíneo y una deficiencia
del mismo, así como la ruptura y/o la erosión con formación de
trombos.
De acuerdo con la presente invención, la
aterosclerosis comprende la esclerosis o pérdida de elasticidad de
las arterias debido al ateroma (aterosclerosis) y debido a cualquier
otra causa (arteriosclerosis). Los estados patológicos de la
aterosclerosis, así como las complicaciones o las consecuencias de
la aterosclerosis, que se incluyen en el término
"aterosclerosis" tal y como se emplea en esta memoria, se han
descrito detalladamente en los "antecedentes de la invención"
más arriba.
La evolución de la aterosclerosis incluye la
formación de placas ateroscleróticas y su desarrollo en formas más
y más inestables. La invención se refiere también, por tanto, al uso
de un inhibidor de IL-18 para la fabricación de un
medicamento para reducir o evitar la evolución de la
aterosclerosis.
La oclusión de los vasos con un trombo formado
sobre una placa aterosclerótica es el acontecimiento decisivo en
los infartos de corazón y cerebrales, que están entre las
consecuencias más perjudiciales de la aterosclerosis. Por tanto, la
invención también se refiere al uso de un inhibidor de
IL-18 para la fabricación de un medicamento para el
tratamiento y/o la prevención de la trombosis de una placa
aterosclerótica.
La estabilidad de la placa influye sobre la
evolución de una placa aterosclerótica a una placa perjudicial o
vulnerable, que es propensa a iniciar la trombosis. Por tanto, la
invención se refiere adicionalmente al uso de un inhibidor de
IL-18 para la fabricación de un medicamento para
evitar y/o tratar la inestabilidad de una placa
ateroscleróti-
ca.
ca.
Una placa inestable es propensa a la rotura y la
rotura de una placa puede conducir a una trombosis. La invención se
refiere por tanto adicionalmente al uso de un inhibidor de
IL-18 para la fabricación de un medicamento para
evitar la erosión o la rotura de una placa aterosclerótica.
La inestabilidad de la placa y la trombosis
pueden ser debidas, p. ej., a la muerte celular por apoptosis, lo
que confiere una alta actividad procoagulante y puede ser un suceso
clave que conduzca a la trombosis de las placas ateroscleróticas
erosionadas o rotas, así como a sucesos embólicos (13, 14). Se ha
mostrado que las lipoproteínas oxidadas (oxLDL) inducen la
apoptosis de macrófagos y de células endoteliales en cultivo (15).
Tal y como se muestra en los ejemplos siguientes, se ha descubierto
ahora que un inhibidor de IL-18 es capaz de reducir
en gran medida la muerte celular inducida por las oxLDL.
De acuerdo con la presente invención, se ha
encontrado, sorprendentemente, que los niveles de
IL-18 en sangre de pacientes con fallo cardíaco
estaban significativamente más elevados, en los pacientes que
padecían sucesos recurrentes, tales como por ejemplo, muerte,
isquemia recurrente, revascularización, evolución de la
aterosclerosis o rehospitalización por el fallo cardíaco, cuando se
comparaban con los pacientes que no volvían al hospital. Este
incremento en los niveles de IL-18 era especialmente
pronunciado en los pacientes que murieron posteriormente, cuando se
compararon con los pacientes que sobrevivieron. Se observaron
niveles elevados de IL-18 en la circulación
sanguínea en pacientes con isquemia, así como en pacientes sin
isquemia.
En una realización preferida de la invención, el
inhibidor de IL-18 se selecciona entre el grupo
consistente en anticuerpos contra IL-18,
anticuerpos contra cualquiera de las subunidades del receptor de
IL-18 y en proteínas que se unen a
IL-18, muteínas de IL-18BP que
comprenden sustituciones conservadoras de aminoácidos, proteínas
fusionadas de IL-18BP y regiones de las cadenas
pesadas de las inmunoglobulinas, derivados funcionales que
comprenden IL-18BP PEGiladas, en donde la muteína,
la proteína fusionada o el derivado funcional conservan la
actividad biológica para unirse a IL-18.
Tal y como se emplea en esta memoria, el término
"muteínas" se refiere a los análogos de una
IL-18BP en la que uno o varios de los residuos de
aminoácidos de una IL-18BP natural se sustituyen por
diferentes residuos de aminoácidos seleccionados entre las que se
denominan sustituciones "conservadoras". Las sustituciones
conservadoras de aminoácidos de los polipéptidos o las proteínas de
IL-18BP o de IL-18BPs víricas,
pueden incluir aminoácidos sinónimos dentro de un grupo que tiene
propiedades fisicoquímicas suficientemente similares para que la
sustitución entre los miembros del grupo conserven la función
biológica de la molécula (16). Está claro que las inserciones y las
deleciones de aminoácidos también se pueden realizar en las
secuencias definidas anteriormente sin alterar su función,
particularmente si las inserciones o las deleciones sólo implican
unos pocos aminoácidos, p. ej., menos de treinta, y preferentemente
menos de diez, y no eliminan o desplazan los aminoácidos que son
decisivos para una conformación funcional, p. ej., los residuos de
cisteína. Las proteínas y las muteínas producidas mediante tales
deleciones y/o inserciones entran en el ámbito de la presente
invención.
Preferentemente, los grupos de aminoácidos
sinónimos son los definidos en la Tabla I. Más preferentemente, los
grupos de aminoácidos sinónimos son los definidos en la Tabla II; y
lo más preferible, los grupos de aminoácidos sinónimos son los
definidos en la Tabla III.
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Los ejemplos de producción de sustituciones de
aminoácidos en proteínas que se pueden utilizar para obtener
muteínas de polipéptidos o de proteínas de IL-18BP,
para emplear en la presente invención, incluyen cualquier etapa de
un método conocido, tales como los presentados en los documentos de
patentes de EE.UU. 4.959.314, 4.588.585 y 4.737.462, de Mark y col;
5.116.943 de Koths y col., 4.965.195 de Namen y col; 4.879.111 de
Chong y col; y 5.017.691 de Lee y col; y las proteínas sustituidas
con lisina, presentadas en el documento de patente de EE.UU. nº
4.904.584 (Shaw y col).
La expresión "proteína fusionada" se
refiere a un polipéptido que comprende una IL-18BP
fusionada con otra proteína, que tiene, p. ej., un tiempo de
permanencia extendido en los fluidos corporales. Una
IL-18BP se puede fusionar por tanto con una
inmunoglobulina o con un fragmento de la misma.
"Derivados funcionales" tal y como se
emplea en esta memoria, incluye los derivados de
IL-18BP que incluyen cadenas laterales de
polietilenglicol, las cuales pueden enmascarar los sitios
antigénicos y extender el tiempo de permanencia de una
IL-18BP en los fluidos corporales.
En otra realización preferida de la invención,
el inhibidor de IL-18 es un anticuerpo de
IL-18. Los anticuerpos
anti-IL-18 pueden ser policlonales o
monoclonales, quiméricos, humanizados o incluso totalmente humanos.
Los anticuerpos recombinantes y sus fragmentos se caracterizan por
su alta afinidad en la unión a IL-18 in vivo
y su baja toxicidad. Los anticuerpos que se pueden utilizar en la
invención se caracterizan por su capacidad para tratar pacientes
durante un periodo de tiempo suficiente para obtener una regresión o
un alivio bueno a excelente del estado patógeno o de cualquier
síntoma o grupo de síntomas relacionados con un estado patógeno, y
una baja
toxicidad.
toxicidad.
La neutralización de los anticuerpos se consigue
fácilmente en animales tales como conejos, cabras o ratones
mediante inmunización con IL-18. Los ratones
inmunizados son particularmente útiles para proporcionar fuentes de
linfocitos B para la fabricación de hibridomas, que a su vez se
cultivan para producir grandes cantidades de anticuerpos
monoclonales anti-IL-18.
Los anticuerpos quiméricos son moléculas de
inmunoglobulina caracterizadas por dos o más segmentos o porciones
obtenidos a partir de diferentes especies animales. Generalmente, la
región variable del anticuerpo quimérico se obtiene a partir de un
anticuerpo de mamífero no humano, tal como un anticuerpo monoclonal
de múrido y la región constante de la inmunoglobulina se obtiene a
partir de una molécula de inmunoglobulina humana. Preferentemente,
ambas regiones y la combinación tienen una inmunogenicidad baja,
cuando se determina de forma rutinaria (24). Los anticuerpos
humanizados son moléculas de inmunoglobulina creadas por técnicas de
ingeniería genética en donde las regiones constantes del múrido se
sustituyen por homólogos humanos que conservan las regiones de
unión al antígeno del múrido. El anticuerpo quimérico
ratón-humano resultante, tiene preferentemente una
inmunogenicidad reducida y unas farmacocinéticas mejoradas en
humanos (25).
Por tanto, en una realización preferida
adicionalmente, un anticuerpo de IL-18 es un
anticuerpo de IL-18 humanizado. Ejemplos preferidos
de anticuerpos anti- IL-18 humanizados, se describen
en el documento de solicitud de patente europea EP 0 974 600, por
ejemplo.
En aún otra realización preferida, el anticuerpo
de IL-18 es totalmente humano. La tecnología para
producir anticuerpos humanos se describe detalladamente, p. ej., en
los documentos de patentes WO00/76310, W099/53049, US 6.162.963 o
AU 5336100. Los anticuerpos totalmente humanos son preferentemente
anticuerpos recombinantes, producidos en animales transgénicos, p.
ej., xenoratones que comprenden todos o parte de los loci
funcionales de la Ig humana.
En una realización muy preferida de la presente
invención, el inhibidor de IL-18 es una
IL-18BP, una muteína de IL-18BP que
comprende sustituciones conservadoras de aminoácidos, proteína
fusionada de IL-18BP y regiones de la cadena pesada
de inmunogloblina, derivados funcionales que comprenden
IL-18BP PEGiladas. Estas muteínas, proteínas
fusionadas o derivados funcionales conservan la actividad biológica
de IL-18BP, es decir, la unión a
IL-18 y tienen preferentemente al menos
esencialmente una actividad similar a IL-18BP.
Idealmente, tales proteínas tienen una actividad biológica que está
incluso incrementada al compararla con la de IL-18BP
sin modificar.
Las secuencias de IL-18BP y sus
variantes por corte y empalme/isoformas, se pueden tomar a partir
del documento de patente W099/09063 o a partir de (12), así como a
partir de (23).
Los derivados funcionales de
IL-18BP se conjugan con polímeros para mejorar las
propiedades de la proteína, tales como la estabilidad, la
semi-vida, la biodisponibilidad, la tolerancia en el
cuerpo humano o la inmunogenicidad. Para conseguir este objetivo,
la IL-18BP se liga a polietilenglicol (PEG). La
PEGilación se puede realizar por métodos conocidos, descritos en el
documento de patente WO 92/13095, por ejemplo.
Por tanto, en una realización preferida de la
presente invención, la IL-18BP está PEGilada.
La invención se refiere también a una proteína
fusionada que comprende la proteína que se liga a
IL-18, la cual es una parte fusionada de una
inmunoglobulina. Una persona experta en la técnica entenderá que la
proteína de fusión resultante mantiene la actividad biológica de
IL-18BP, en particular la unión a
IL-18. La fusión puede ser directa o a través de un
péptido corto enlazador, que puede tener una longitud tan corta como
1 a 3 residuos de aminoácidos o más larga, por ejemplo, 13 residuos
de aminoácidos de longitud. Dicho enlazador puede ser un tripéptido
con la secuencia E-F-M
(Glu-Phe-Met), por ejemplo, o una
secuencia enlazadora de 13 aminoácidos que comprende
Glu-Phe-Gly-Ala-Gly-Leu-Val-Leu-Gly-Gly-Gln-Phe-Met
introducidos entre la secuencia de IL-18BP y la
secuencia de la inmunoglobulina. La proteína de fusión resultante
tiene unas propiedades mejoradas, tales como un tiempo de
permanencia más largo en los fluidos corporales
(semi-vida), una actividad específica incrementada,
un nivel de expresión incrementado o se facilita la purificación de
la proteína de fusión.
La IL-18BP se fusiona con
regiones de cadenas pesadas, tales como por ejemplo, los dominios
CH2 y CH3 de la IgG1 humana. La generación de proteínas de fusión
específicas que comprenden IL-18BP y una porción de
una inmunoglobulina, se describe en el Ejemplo 11 del documento de
patente WO 99/09063, por ejemplo. Otras isoformas de moléculas de
Ig también son adecuadas para la generación de proteínas de fusión,
de acuerdo con la presente invención, tales como las isoformas
IgG_{2} o IgG_{4}, u otras clases de Ig, tales como IgM o IgA,
por ejemplo. Las proteínas de fusión pueden ser monoméricas o
multiméricas, hetero u homomultiméricas.
Los interferones se conocen principalmente por
sus efectos inhibidores sobre la replicación vírica y la
proliferación celular. El interferón-\gamma, por
ejemplo, tiene un papel importante favoreciendo las respuestas
inmune e inflamatoria. Del interferón \beta
(IFN-\beta, un interferón del tipo I), se dice que
tiene un papel anti-inflamatorio.
La invención también se refiere al uso de una
combinación de un inhibidor de IL-18 y un
interferón, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento
de la aterosclerosis.
Los interferones también se pueden conjugar con
polímeros para mejorar la estabilidad de las proteínas. Un
conjugado entre el interferón \beta y el poliol polietilenglicol
(PEG) está descrito, por ejemplo, en el documento de patente
WO99/55377.
En otra realización preferida de la invención,
el interferón es el interferón-\beta
(IFN-\beta), y más preferentemente el
IFN-\beta 1a.
El inhibidor de la producción y/o la acción de
IL-18 se emplea preferentemente de forma simultánea,
secuencial o por separado con el interferón.
En aún otra realización de la invención, un
inhibidor de IL-18 se emplea junto con un
antagonista de TNF. Los antagonistas de TNF ejercen su actividad de
distintos modos. En primer lugar, los antagonistas se pueden unir o
secuestrar una molécula de TNF misma, con la suficiente afinidad y
especificidad para neutralizar parcial o sustancialmente el epítopo
de TNF o los epítopos responsables de la unión al receptor de TNF
(denominados de aquí en adelante "antagonistas
secuestrantes"). Un antagonista secuestrante puede ser, por
ejemplo, un anticuerpo dirigido contra
TNF.
TNF.
Alternativamente, los antagonistas de TNF pueden
inhibir la ruta de señalización de TNF, activada por el receptor de
la superficie celular después de la unión a TNF (denominados de aquí
en adelante "antagonistas de la señalización"). Ambos grupos
de antagonistas son útiles, tanto de forma aislada como juntos, en
combinación con un inhibidor de IL-18, en la
terapia de la aterosclerosis.
Los antagonistas de TNF se identifican
fácilmente y se evalúan mediante escrutinio rutinario por el efecto
de la actividad del TNF natural sobre líneas celulares susceptibles
in vitro, por ejemplo, linfocitos B humanos, en los que el
TNF produce la proliferación y la secreción de inmunoglobulina. El
ensayo contiene la formulación de TNF en diluciones variadas del
antagonista candidato, p. ej., desde 0,1 hasta 100 veces la cantidad
molar de TNF empleada en el ensayo y los testigos que no tienen TNF
o sólo tienen el antagonista (26).
Los antagonistas secuestrantes son los
antagonistas de TNF preferidos para emplear según la presente
invención. Entre los antagonistas secuestrantes, los polipéptidos
que se unen a TNF con alta afinidad y que poseen menor
inmunogenicidad son los preferidos. Las moléculas solubles del
receptor de TNF y los anticuerpos que neutralizan TNF, se prefieren
particularmente. Por ejemplo, TNF-RI y
TNF-RII solubles son útiles en la presente
invención. Las formas truncadas de estos receptores que comprenden
los dominios extracelulares de los receptores o porciones
funcionales de los mismos, son antagonistas particularmente
preferidos de acuerdo con la presente invención. Los receptores
truncados solubles de TNF de tipo I y de tipo II se describen, por
ejemplo, en el documento de patente
EP914431.
EP914431.
Las formas truncadas de los receptores de TNF
son solubles y se han detectado en orina y en suero como proteínas
inhibidoras de la ligación de TNF de 30 kDa y 40 kDa, las cuales se
denominan TBPI y TBPII, respectivamente (27). Se prefiere el uso
simultáneo, secuencial o por separado del inhibidor de
IL-18 con el antagonista de TNF y/o un interferón,
de acuerdo con la invención.
De acuerdo con la invención, TBPI y TBPII son
los antagonistas preferidos de TNF para emplear junto con un
inhibidor de IL-18. Los derivados, los fragmentos,
las regiones y las porciones biológicamente activas de las
moléculas del receptor, que se parecen funcionalmente a las
moléculas del receptor, también se pueden utilizar en la presente
invención. Dicho equivalente o derivado biológicamente activo de la
molécula receptora, se refiere a la porción del polipéptido o de la
secuencia que codifica la molécula del receptor que tiene el
suficiente tamaño y es capaz de unirse a TNF con una afinidad tal,
que se inhiba o se bloquee la interacción con el receptor de TNF
unido a la
membrana.
membrana.
En una realización preferida adicional,
TNF-RI (TBPI) soluble y humano es el antagonista de
TNF para emplear de acuerdo con la invención. Las moléculas
solubles naturales y recombinantes del receptor de TNF y los métodos
para su producción, están descritos en los documentos de patentes
europeas EP 308 378, EP 398 327 y EP 433 900.
El inhibidor de IL-18 se puede
emplear simultánea, secuencial o separadamente con el inhibidor de
TNF. De forma ventajosa, se emplea una combinación de un anticuerpo
o un antisuero de IL-18 y un receptor soluble de
TNF, que tenga actividad inhibidora de TNF.
En otra realización preferida de la invención,
el medicamento comprende adicionalmente un inhibidor de la COX,
preferentemente un inhibidor de la COX-2. Los
inhibidores de la COX son conocidos en la técnica. Los inhibidores
específicos de la COX-2 se describen, por ejemplo,
en el documento de patente WO 01/00229.
Los inhibidores de tromboxano, en particular el
tromboxano A2, se emplean en la actualidad de forma extensa en el
tratamiento de la aterosclerosis. Por tanto, en una realización
adicional preferida de la invención, el medicamento comprende
adicionalmente un inhibidor de tromboxano y en particular un
inhibidor de tromboxano A2, para el uso simultáneo, secuencial o
por separado.
La aspirina se prefiere especialmente para el
uso junto con el inhibidor de IL-18, de acuerdo con
la invención.
Una de las causas de la aterosclerosis parece
ser una alta concentración de lípidos en sangre. Por consiguiente,
en una realización preferida adicional, el medicamento comprende
además un agente hipolipemiante para el uso simultáneo, secuencial
o por separado. Cualquier agente hipolipemiante conocido en la
técnica se puede emplear de acuerdo con la invención, tales como
los agentes hipolipemiantes adicionales que comprenden medicaciones
tales como colestiramina, colestipol, ácido nicotínico, gemfibrozil,
probucol y otros. Se prefieren especialmente los inhibidores de la
HMG CoA-reductasa y preferentemente las denominadas
estatinas. En la técnica se conocen muchas estatinas, tales como
simvastatina o lovastatina.
Para evitar y/o tratar la aterosclerosis aún
mejor, una realización preferida de la invención se refiere al uso
de un inhibidor de IL-18 junto con una dieta baja en
grasas y/o baja en colesterol y/o baja en sal.
En una realización preferida de la presente
invención, el inhibidor de IL-18 se emplea en una
cantidad desde aproximadamente 0,0001 a 10 mg/kg de peso corporal,
o de aproximadamente 0,01 a 5 mg/kg de peso corporal o de
aproximadamente 0,1 a 3 mg/kg de peso corporal o de aproximadamente
1 a 2 mg/kg de peso corporal. En aún otra realización preferida, el
inhibidor de IL-18 se emplea en una cantidad desde
aproximadamente 0,1 a 1000 \mug/kg de peso corporal o desde 1 a
100 \mug/kg de peso corporal o desde aproximadamente 10 a 50
\mug/kg de peso
corporal.
corporal.
La invención se refiere adicionalmente al uso de
un vector de expresión que comprende la secuencia codificadora de
un inhibidor de IL-18, tal y como se define en las
reivindicaciones, en la preparación de un medicamento para la
prevención y/o el tratamiento de la aterosclerosis. Un acercamiento
de terapia génica se emplea por tanto para tratar y/o evitar la
enfermedad. De forma ventajosa, la expresión del inhibidor de
IL-18 se realizará posteriormente in situ,
bloqueando la IL-18 de forma eficaz directamente en
el(los) tejido(s) o células afectadas por la
enfermedad.
enfermedad.
Tal y como se explica con detalle en los
ejemplos siguientes, se ha observado que una expresión eficaz de
IL-18BP se podía observar en un modelo de múrido de
la enfermedad, después de la electrotransferencia de un vector de
expresión que comprendía la secuencia codificadora de
IL-18BP.
Por tanto, en una realización preferida, el
vector de expresión se administra por electrotransferencia,
preferentemente por vía intramuscular.
El uso de un vector para inducir y/o potenciar
la producción endógena de un inhibidor de IL-18, tal
y como se define en las reivindicaciones, en una célula normalmente
silenciosa para la expresión del inhibidor de
IL-18, o que expresa cantidades del inhibidor que no
son suficientes, también se contempla de acuerdo con la invención.
El vector puede comprender secuencias reguladoras funcionales en las
células deseadas para expresar el inhibidor o
IL-18. Tales secuencias reguladoras pueden ser, por
ejemplo, promotores o potenciadores. La secuencia reguladora se
puede introducir a continuación en el locus adecuado del genoma,
mediante recombinación homóloga, ligando funcionalmente de este
modo la secuencia reguladora con el gen, cuya expresión es necesario
que se induzca o se potencie. La tecnología se denomina
generalmente "activación génica endógena" (EGA), y se
describe, p. ej., en el documento de patente WO 91/09955.
Un experto en la técnica entenderá que también
es posible clausurar la expresión de IL-18 empleando
la misma técnica, es decir, introduciendo un elemento regulador
negativo como, p. ej., un elemento silenciador en el locus del gen
de IL-18, produciendo de este modo una reducción o
evitando la expresión de IL-18. Un experto en la
técnica entenderá que dicha reducción u omisión de la expresión de
IL-18, tiene el mismo efecto que el uso de un
inhibidor de IL-18 para evitar y/o tratar la
enfermedad.
La invención se refiere adicionalmente al uso de
una célula que se ha modificado genéticamente para producir un
inhibidor de IL-18, tal y como se define en las
reivindicaciones, para fabricar un medicamento para tratar y/o
evitar la aterosclerosis.
Los inhibidores de IL-18BP, tal
y como se definen en las reivindicaciones, se pueden formular como
composiciones farmacéuticas, particularmente útiles para evitar y/o
tratar la aterosclerosis, que comprenden una cantidad
terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la IL-18
y una cantidad terapéuticamente eficaz de un interferón. Como
inhibidor de IL-18, la composición puede comprender
un inhibidor según las reivindicaciones.
La IL-18BP y las muteínas de
IL-18BP que comprenden sustituciones conservadoras
de aminoácidos, proteínas fusionadas de IL-18BP y
regiones de cadenas pesadas de inmunoglobulinas o derivados
funcionales que comprenden IL-18BP PEGilada, en
donde la muteína, la proteína fusionada o el derivado funcional
conservan la actividad biológica de unirse a IL-18,
son los ingredientes activos preferidos de las composiciones
farmacéuticas.
El interferón comprendido en la composición
farmacéutica es preferentemente IFN-\beta.
En aún otra realización preferida, la
composición farmacéutica comprende cantidades terapéuticamente
eficaces de un inhibidor de IL-18 según las
reivindicaciones, opcionalmente un interferón, y un antagonista de
TNF. Los antagonistas de TNF pueden ser anticuerpos que neutralizan
la actividad de TNF o fragmentos solubles y truncados del receptor
de TNF, también denominados TBPI y TPBII. La composición
farmacéutica de acuerdo con la invención puede comprender
adicionalmente uno o varios inhibidores de la COX, preferentemente
los inhibidores de la COX-2. La composición
farmacéutica de acuerdo con la invención puede comprender
adicionalmente un inhibidor de tromboxano, tal como la aspirina,
y/o un agente hipolipemiante, tal como una estatina.
La definición de "farmacéuticamente
aceptable" significa que incluye cualquier vehículo que no
interfiera con la eficacia de la actividad biológica del
ingrediente activo y que no sea tóxico para el hospedador al que se
administra. Por ejemplo, para la administración por vía parenteral,
la(s) proteína(s) activa(s) se puede formular
en forma de dosificación unitaria para la inyección en vehículos,
tales como solución salina, solución de dextrosa, seroalbúmina y
solución de Ringer.
Los ingredientes activos de la composición
farmacéutica de acuerdo con la invención, se pueden administrar a
un individuo en una variedad de formas. Las vías de administración
incluyen la vía intradérmica, transdérmica (p. ej., en
formulaciones de liberación lenta), intramuscular, intraperitoneal,
intravenosa, subcutánea, oral, epidural, tópica e intranasal. Se
puede utilizar cualquier otra vía de administración que sea
terapéuticamente eficaz, por ejemplo, la absorción a través de
tejidos epiteliales o endoteliales o mediante terapia génica, en
donde una molécula de ADN que codifica el agente activo se
administra al paciente (p. ej., a través de un vector) que provoca
que el agente activo se exprese y se secrete in vivo. Además,
la(s) proteína(s) de acuerdo con la invención se
puede administrar junto con otros componentes de agentes
biológicamente activos, tales como tensioactivos, excipientes,
portadores, diluyentes y vehículos farmacéuticamente aceptables.
Para la administración por vía parenteral (p.
ej., intravenosa, subcutánea, intramuscular), la(s)
proteína(s) activa(s) se puede(n) formular
como una solución, una suspensión, una emulsión o un polvo
liofilizado junto con un vehículo parenteral farmacéuticamente
aceptable (p. ej., agua, solución salina, solución de dextrosa) y
los aditivos que mantienen la isotonicidad (p. ej., manitol) o la
estabilidad química (p. ej., agentes conservantes y tampones). La
formulación se esteriliza mediante técnicas empleadas de forma
común.
La biodisponibilidad de la(s)
proteína(s) activa(s) de acuerdo con la invención,
también se puede mejorar empleando procedimientos de conjugación
que incrementen la semi-vida de la molécula en el
cuerpo humano, por ejemplo, ligando la molécula a polietilenglicol,
tal y como se describe en el documento de solicitud de patente PCT
WO 92/13095.
\newpage
Las cantidades terapéuticamente eficaces de
la(s) proteína(s) activa(s) serán una función
de varias variables que incluyen el tipo de antagonista, la
afinidad del antagonista hacia IL-18, cualquier
actividad citotóxica residual mostrada por los antagonistas, la vía
de administración, el estado clínico del paciente (que incluye el
deseo de mantener un nivel que no sea tóxico de la actividad
endógena de IL-18).
Una "cantidad terapéuticamente eficaz" es
la que cuando se administra, el inhibidor de IL-18
produce una inhibición de la actividad biológica de
IL-18. La dosificación administrada, en forma de
dosis única o múltiple, a un individuo, variará dependiendo de una
variedad de factores, que incluyen las propiedades farmacocinéticas
del inhibidor de IL-18, la vía de administración, el
estado del paciente y las características (sexo, edad, peso
corporal, salud, altura), el grado de extensión de los síntomas,
tratamientos simultáneos, frecuencia del tratamiento y el efecto
deseado. El ajuste y la manipulación de los intervalos establecidos
de dosificación entran dentro de las capacidades de los expertos en
la técnica, así como los métodos in vitro e in vivo
para determinar la inhibición de IL-18 en un
individuo.
individuo.
De acuerdo con la invención, el inhibidor de
IL-18 se emplea en una cantidad desde
aproximadamente 0,0001 a 10 mg/kg o aproximadamente 0,01 a 5 mg/kg
de peso corporal, o aproximadamente 0,01 a 5 mg/kg de peso corporal
o aproximadamente 0,1 a 3 mg/kg de peso corporal o aproximadamente 1
a 2 mg/kg de peso corporal. Las cantidades adicionales preferidas
de inhibidores de IL-18 son cantidades desde
aproximadamente 0,1 a 1000 \mug/kg de peso corporal o desde
aproximadamente 1 a 100 \mug/kg de peso corporal o desde
aproximadamente 10 a 50 \mug/kg de peso corporal.
La vía de administración que se prefiere de
acuerdo con la invención es la administración por vía subcutánea.
La administración por vía intramuscular se prefiere adicionalmente,
de acuerdo con la invención.
En otras realizaciones preferidas, el inhibidor
de IL-18 se administra diariamente o cada dos
días.
Las dosis diarias se proporcionan generalmente
en dosis divididas o en una forma de liberación sostenida, eficaz
para obtener los resultados deseados. La segunda administración o
las posteriores se pueden realizar con una dosificación que sea la
misma, menor o superior a la dosis inicial o la dosis previa
administrada al individuo. Una segunda administración o una
posterior se puede administrar durante el comienzo de la enfermedad
o antes de la
misma.
misma.
De acuerdo con la invención, el inhibidor de
IL-18 se puede administrar de forma profiláctica o
terapéutica a un individuo antes de otros regímenes o agentes
terapéuticos, simultánea o secuencialmente a los mismos (p. ej.,
regímenes múltiples de fármacos), en una cantidad terapéuticamente
eficaz. Los agentes activos que se administran simultáneamente con
otros agentes terapéuticos, se pueden administrar en las mismas
composiciones o en diferentes composiciones.
La invención se refiere adicionalmente al uso de
IL-18 como un marcador para el diagnóstico de la
evolución de la aterosclerosis.
Habiendo descrito ahora la invención, ésta se
entenderá más fácilmente haciendo referencia a los siguientes
ejemplos que se proporcionan a modo de ilustración y no pretenden
limitar la presente invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Se extirparon cuarenta y una placas
ateroscleróticas humanas de 36 pacientes que padecían
endarterectomía de la carótida. Para los testigos se obtuvieron 2
carótidas y 3 arterias torácicas internas, exentas de aterosclerosis
(2 con un engrosamiento fibromuscular mínimo), en la autopsia o
durante la cirugía de derivación coronaria. Se sumergieron
rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80ºC. Las
placas que se habían utilizado para la extracción de proteínas y de
ARN, se lavaron rápidamente, se sumergieron en nitrógeno líquido
antes de almacenarlas a -80ºC. Para los estudios
inmunohistoquímicos, las placas se colocaron durante 2 horas en
paraformaldehído al 4% de nuevo aporte, a continuación se
transfirieron a una solución de sacarosa-PBS al
30%, antes de congelarlas instantáneamente en un medio de
procesamiento de tejidos a una temperatura óptima para el corte
(Compuesto O. C. T., Miles Inc, Diagnostics Division) con nitrógeno
líquido y se almacenaron a -80ºC para seccionar con el criostato.
Algunas secciones de 8 a 10 \mum, se obtuvieron a partir de cada
espécimen para el análisis histológico y los estudios
inmunohistoquímicos.
inmunohistoquímicos.
\vskip1.000000\baselineskip
Para estudiar la relación potencial entre la
expresión de IL-18/IL-18BP y las
señales de inestabilidad de la placa, recogimos de forma
prospectiva y a ciegas, datos clínicos de 23 pacientes consecutivos
(de los 36) que padecían el proceso de endarterectomía, entre mayo
y agosto del 2000. La presencia o ausencia de una úlcera dentro de
la placa en el examen macroscópico, era una información sistemática,
otorgada por el cirujano que había realizado la endarterectomía.
Esto nos permitía clasificar las placas como ulceradas o no
ulceradas. Además, los pacientes se clasificaron según los síntomas
clínicos en dos grupos separados. Los pacientes que presentaban
síntomas clínicos de ataque isquémico cerebral relacionado con una
estenosis de la carótida, se clasificaron como sintomáticos. La
endarterectomía se realizó de 2-66 días (17,6 \pm
5,3 días) después del comienzo de los síntomas clínicos en estos
pacientes. Los pacientes que no habían experimentado nunca síntomas
de isquemia cerebral en la zona de la arteria carótida, se
clasificaron como asintomáticos. La estenosis asintomática de la
carótida se detectó basándose en exámenes clínicos sistemáticos de
pacientes con enfermedad coronaria o periférica y su gravedad se
determinó empleando ecografía Doppler repetida con un médico
ecografista de experiencia reconocida. Aunque los pacientes
asintomáticos nunca habían tenido un episodio isquémico en la zona
de la estenosis de la carótida, la endarterectomía carótida se ha
observado que es beneficiosa en estos pacientes, tal y como han
observado los investigadores con el estudio de la aterosclerosis
asintomática de carótida (del inglés, "Asymptomatic Carotid
aterosclerosis Study (ACAS)")
(28).
(28).
\vskip1.000000\baselineskip
Las proteínas se extrajeron a partir de 12
placas ateroscleróticas y de 5 arterias normales testigos. Las
muestras congeladas se pulverizaron bajo nitrógeno líquido. Los
polvos se resuspendieron en tampón de lisis helado
[Tris-HCl 20 mmol/L, pH 7,5, EGTA 5 mmol/L, NaCl 150
mmol/L, glicerofosfato 20 mmol/L, NaF 10 mmol/L, ortovanadato
sódico 1 mmol/L, 1% de Triton X-100, 0,1% de Tween
20,1 \mug/mL de aprotinina, PMSF 1 mmol/L,
N-tosil-L-fenilalanina
clorometil cetona (TPCK) 0,5 mmol/L,
N(a)-p-tosil-L-lisina
clorometil cetona (TLCK) 0,5 mmol/L], con una proporción de 0,3
mL/10 mg de peso en húmedo. Los extractos se incubaron sobre hielo
durante 15 minutos y se centrifugaron a continuación (12000 g, 15
minutos, 4ºC). Las fracciones de material sobrenadante, solubles en
el detergente se retuvieron y las concentraciones de proteínas en
las muestras se igualaron empleando un ensayo con proteínas de
Bio-Rad.
Para realizar los ensayos de transferencia de
tipo Western para IL-18 y IL-18R,
los extractos proteicos se hirvieron durante 5 minutos y se
cargaron en un gel de SDS-poliacrilamida al 7,5% o
al 15%. Para IL-18BP, la rhlL-18
purificada a partir de E. coli (Serono Pharmaceutical
Research Institute, Ginebra) se acopló a Affligel 15 (Biorad) con 1
mg/ml de resina, según el protocolo del fabricante. El extracto
proteico (60 \mug) se incubó durante una noche a 4ºC en un
rodillo con 20 \mul de resina, ajustado para 500 \mul de Tween
con 0,05% de PBS. Para retirar cualquier unión no específica, la
resina se centrifugó y se lavó con Tris 10 mM pH 8, NaCl 140 mM,
0,5% de Triton-X-100 (Fluka), 0,5%
de desoxicolato, a continuación con Tris 50 mM, pH 8, NaCl 200 mM,
0,05% de TX100, 0,05% de P40 nonidet (Fluka), CHAPS 2 mM
(Boehringer, Mannheim), seguido de un último lavado con Tris 50 mM,
pH 8. A continuación, se centrifugó la resina, se resuspendió en
tampón de la muestra bajo condiciones reducidas, se hirvió durante
5 minutos y finalmente se cargó sobre un gel de
SDS-poliacrilamida NuPAGE al 10%
(Invitrogen).
(Invitrogen).
Las muestras se transfirieron por electroforesis
desde los geles de poliacrilamida a nitrocelulosa. Las membranas de
nitrocelulosa se saturaron durante 2 horas a temperatura ambiente en
TBST [Tris-HCl 50 mmol/L (pH 7,5), NaCl 250 mmol/L
y 0,1% de solución salina con Tween] que contenía 5% de leche en
polvo desnatada. Las membranas se incubaron a continuación con
IL-18 de cabra anti-humana y
anticuerpos policlonales de IL-18R (cadena \alpha)
(1 \mug/ml) (R & D Systems), anticuerpo monoclonal de
IL-18BP de ratón anti-humano (Mab
657.27 a 5 \mug/ml) (Corbaz y col., manuscrito presentado 2000),
anticuerpo policlonal de conejo
anti-caspasa-1 humana (1 \mug/ml)
(A-19, Santa Cruz). La especificidad del Mab 657.27
se analizó sobre una membrana desnuda mediante competición,
empleando un exceso molar de 200 x de
rhlL-18BP-6his (purificado a partir
de células de ovario de hámster chino, Serono Pharmaceutical
Research Institute), coincubada con el Mab 657.27 a 5 \mug/ml
durante 1 h. Después de la incubación con los anticuerpos
correspondientes conjugados con HRP, se emplearon sustratos
quimioluminiscentes (ECL, Western blotting; Amersham Corp) para
revelar los bandas positivas según las instrucciones del fabricante,
y las bandas se visualizaron después de exponerlas a una película
de Hyperfilm ECL (Amersham
Corp).
Corp).
\vskip1.000000\baselineskip
Secciones congeladas de 6 placas
ateroscleróticas se incubaron con 1:10 suero de caballo normal o
1:10 suero de cabra normal, durante 30 minutos a temperatura
ambiente, se lavaron una vez en PBS, a continuación se incubaron
con un anticuerpo monoclonal primario de ratón contra CD68, para la
identificación de los macrófagos (DAKO-CD68, KP1),
o un anticuerpo monoclonal de ratón primario contra la actina
\alpha del músculo liso humano (1A4, DAKO) para identificar las
células del músculo liso. Para identificar la IL-18
y el receptor de IL-18 en las placas
ateroscleróticas, se emplearon anticuerpos policlonales específicos
de cabra (R & D Systems) en una dilución de 5 \mug/mL. La
IL-18BP se detectó empleando un anticuerpo
monoclonal específico dirigido contra la isoforma a de
IL-18BP humana recombinante (H20) (Corbaz y col.,
manuscrito presentado 2000). Después de lavar en PBS, los
portaobjetos se incubaron con los siguientes anticuerpos secundarios
biotinilados: una IgG de caballo anti-ratón
biotinilada (Vector Laboratories, Inc) con una dilución de 1:200
para detectar las cepas con anticuerpos contra CD68, actina
\alpha del músculo liso y IL-18 BP, y una IgG de
caballo anti-cabra biotinilada (Vector) con una
dilución de 1:200 para detectar anticuerpos
anti-IL-18 y
anti-receptor de IL-18. Las
inmunotinciones se visualizaron empleando sistemas de visualización
con HRP avidina-biotina (equipo de reactivos ABC de
Vectastain, Vector PK-6100). Para los testigos
negativos, se tiñeron secciones adyacentes con anticuerpos
irrelevantes emparejados por el isotipo, en lugar de los
anticuerpos
primarios.
primarios.
\vskip1.000000\baselineskip
El ARN total se extrajo a partir de 29 placas
ateroscleróticas en una solución de tiocianato de ácido guanidínico
y se extrajo con fenol y cloroformo según el método de Chomczynski y
Sacchi (29). El ARN purificado se disolvió en agua y la
concentración se midió por la absorbancia a 260 nm. La integridad
del ARN se determinó por electroforesis en geles de agarosa al 1%.
El ADNc se sintetizó a partir de 1 \mug del ARN total, empleando
el sistema de transcripción inversa de Promega, según el protocolo
del fabricante.
\vskip1.000000\baselineskip
Las reacciones de la PCR
semi-cuantitativa se realizaron en un volumen total
de 50 \mul en presencia de 1 U de ADN polimerasa AmpliTaq (Perkin
Elmer, Roche, U. S. A), dNTPs 2,5 mM (Amersham, U. S. A), y 50
pmoles de cebadores directos e inversos para la PCR.
Las reacciones se incubaron en un termociclador
de efecto Peltier PTC-200 (MJ Research, U. S. A) con
las siguientes condiciones: desnaturalización 1 min a 94ºC,
reasociación durante 1 min a 55ºC y extensión durante 1 min a 72ºC.
Para asegurar la comparación de la cantidad de los productos de la
PCR durante la fase lineal de la reacción de la PCR, la
IL-18BP, la IL-18 y la actina
\beta se analizaron después de 25, 28 y 31 ciclos. Se determinó
el número óptimo de ciclos para la IL-18BP, la
IL-18 y la actina \beta antes de la saturación de
las bandas (31, 28 y 25, respectivamente). Los cebadores de la PCR
se diseñaron basándose en las secuencias publicadas (AF110799,
D49950, X00351) del modo siguiente: IL-18, inverso
5'-GCGTCACTACACTCAGCTAA-3'; directo
5'-GCCTAGAGGTATGGCTGTAA-3'; IL18BP,
directo 5'-ACCTGTCTACCTGGAGTGAA-3';
inverso 5'-GCACGAAGATAGGAAGTCTG-3';
actina \beta, inverso 5'-
GGAGGAGCAATGATCTTGATCTTC-3'; directo
5'-GCTCACCATGGATGATGATATCGC-3'. Para
excluir la amplificación de un ADN genómico potencial que
contaminara las muestras, las reacciones de la PCR se realizaron en
ausencia del molde de ADNc. Los productos de la PCR (10 \mul) se
analizaron sobre geles de agarosa al 1%, sometidos a electroforesis
en tampón 1 x TAE. El tamaño de los productos de la PCR se verificó
comparando con una escala de 1 kb (Gibco) después de la tinción de
los geles. La cuantificación relativa de las bandas teñidas con
bromuro de etidio, se realizó bajo luz UV, empleando el programa
analítico de Kodak Digital Sciences y se reportó como la proporción
de gen diana (hlL-18BP, hIL-18) con
el gen constitutivo (actina h\beta).
Los cebadores para la PCR en tiempo real con
SYBR Green para IL-18, IL-18BP y
GAPDH (testigo constitutivo) se diseñaron empleando el programa
Express para cebadores de PE Biosystems, de acuerdo con las
secuencias publicadas (AF110799, D49950, NM 002046) del modo
siguiente: IL-18, inverso
5'-CAGCCGCTTTAGCAGCCA-3'; directo
5'-CAAGGAATTGTCTCCCAGTGC-3'; IL18BP,
inverso 5'-AACCAGGCTTGAGCGTTCC-3';
directo
5'-TCCCATGTCTCTGCTCATTTAGTC-3';
GAPDH, inverso 5'- GATGGGATTTCCATTGATGACA-3';
directo 5'-CCACCCATGGCAAATTCC-3';
intrón-GAPDH, inverso
5'-CCTAGTCCCAGGGCTTTGATT-3';
directo 5'- CTGTGCTCCCACTCCTGATTTC-3'. La
especificidad y la concentración óptima del cebador se sometieron a
ensayo. Una contaminación potencial del ADN genómico se excluyó
realizando las reacciones de la PCR con cebadores específicos del
intrón-GAPDH. La ausencia de una amplificación no
específica se confirmó analizando los productos de la PCR con una
electroforesis en gel de agarosa al 3,5%. La PCR en tiempo real con
SYBR Green se realizó con 5 \mul/pocillo de productos de la RT
(0,5 ng de ARN total), 25 \mul/pocillo de mezcla original para
PCR SYBR Green (PE Biosystem, CA, EE.UU.) con la
uracil-N-glicosilasa (UNG) de
AmpErase (0,5 unidades/pocillo) y 20 \mul de cebadores (300 nM).
La PCR se realizó a 50ºC durante 2 min (para la incubación de la UNG
de AmpErase, eliminar cualquier uracilo incorporado en el ADNc),
95ºC durante 10 min (para la activación de AmpliTaq Gold) y a
continuación operar durante 40 ciclos a 95ºC durante 15 seg, 60ºC
durante 1 min en el sistema de detección ABI PRISM 7700. Las
muestras de ADNc transcritas de forma inversa se amplificaron de
este modo y se determinaron sus valores Ct (umbral del ciclo).
Todos los valores Ct se normalizaron para el gen constitutivo de
GAPDH. Se observó una banda de ADN aislada y específica para
IL-18, IL-18BP y GAPDH empleando un
análisis de electroforesis en
gel.
gel.
El principio de la detección en tiempo real
empleando la "mezcla original para PCR con SYBR Green" se basa
en la detección directa del producto de la PCR, midiendo el
incremento en la fluorescencia causado por la unión del colorante
SYBR Green al ADN bicatenario.
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos se expresan como la media + SEM. Los
niveles de IL-18 se compararon entre grupos,
empleando el ensayo de Mann-Whitney. Un valor de p
de 0,05 se consideró estadísticamente significativo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
1
Las células endoteliales cultivadas de la vena
umbilical humana (HUVECs) se expusieron durante 16 horas a oxLDL en
presencia o en ausencia de la proteína que se une a
IL-18 o de anticuerpo
anti-IL-18. Tal y como se muestra
en la Fig.1, 83% de las HUVECs murieron después de la exposición a
oxLDL. La coincubación con IL-18BP o con anticuerpo
anti-IL-18, rescató casi todas las
células de la destrucción. No se observó ninguna muerte empleando
IL-18BP. El 89% de las células sobrevivieron
empleando el anticuerpo
anti-IL-18.
Este experimento muestra claramente que el
efecto protector de dos inhibidores diferentes de
IL-18 contra la muerte celular, debida a la
apoptosis en la placa esclerótica.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
Se realizaron ensayos de transferencia de tipo
Western sobre extractos proteicos procedentes de 12 arterias
carótidas ateroscleróticas y 5 testigos normales. La proteína
IL-18, incluyendo la forma activa, se expresaba
fuertemente en todas las placas ateroscleróticas, mientras que en
las arterias normales no se detectó expresión o se detectó muy poca
(Fig. 2). Las pistas 1 a 4 contienen muestras de placas
ateroscleróticas, las pistas 5 a 7 de arterias normales. De forma
interesante, la detección de la forma activa de
IL-18 parecía estar correlacionada con la expresión
de la forma activa de la caspasa-1, la cual está
implicada en el procesamiento de IL-18 (Fig. 2 fila
siguiente). La expresión significativa de la proteína del receptor
de IL-18 (la cadena \alpha) también se detectó en
todas las placas ateroscleróticas, en comparación con un nivel de
expresión muy bajo en las arterias normales (Fig. 2 segunda fila).
Además, una mayoría de las placas ateroscleróticas expresaban
IL-18BP, aunque el nivel de expresión era
heterogéneo (Fig. 2 primera
fila).
fila).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
Para determinar la localización celular de
IL-18 y de IL-18BP, se realizaron
estudios inmunohistoquímicos sobre 6 placas ateroscleróticas de la
carótida. Tal y como se observa en la Figura 2, la
IL-18 se expresaba principalmente en los
macrófagos, siendo estas células probablemente la fuente principal
de IL-18 en la placa (datos no mostrados). Estas
áreas también eran ricas en linfocitos positivos para CD3. Sin
embargo, los linfocitos T no parecían estar directamente implicados
en la producción de IL-18. La IL-18
también se expresaba en algunas células del músculo liso de la capa
íntima y ocasionalmente en células endoteliales. Por el contrario,
se detectó una expresión significativa de IL-18BP
en células endoteliales de microvasos de la placa y en los de la
superficie luminal, aunque la expresión no se encontró en todos los
vasos. También se detectó una expresión de IL-18BP
relativamente baja y más heterogénea en algunas áreas ricas en
macrófagos, principalmente extracelulares.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
4
Para determinar si se expresaba el ARNm humano
de IL-18 y de IL-18BP en las placas
ateroscleróticas humanas de la carótida, se realizó una
RT-PCR semi-cuantitativa en seis
placas ateroscleróticas (Fig. 3). El ARNm de IL-18
y de IL-18BP se detectó en todas las placas
ateroscleróticas aunque la cantidad de ARNm para
IL-18 y IL-18BP era heterogénea.
Por tanto, Para cuantificar con precisión los niveles de expresión
del ARNm de IL-18 y de IL-18BP, se
analizaron adicionalmente 23 placas ateroscleróticas con el método
de la PCR en tiempo real con SYBR Green (Fig. 4). Las placas se
caracterizaron con un examen clínico y patológico, como placas
sintomáticas (inestables) o asintomáticas (estables), que contenían
una úlcera macroscópica o no. Las características clínicas de los
pacientes se resumen en la Tabla 4. El porcentaje de reducción del
diámetro de la carótida (60%-95%) y los factores de riesgo, que
incluyen la edad, diabetes, hipercolesterolemia, hipertensión y
fumar cigarrillos, no difirieron entre los dos
grupos.
grupos.
La cantidad de IL-18 se encontró
que estaba incrementada en las placas ateroscleróticas sintomáticas
comparada con la de las placas asintomáticas (2,03 \pm 0,5 frente
a 0,67 \pm 0,17, respectivamente) (Fig. 4A). El análisis
estadístico mostró que este incremento en la producción de
IL-18 observado en las placas sintomáticas, era
altamente significativo (p < 0,0074), mientras que la cantidad
incrementada de IL-18BP, observada en las placas
sintomáticas frente a las asintomáticas no lo era (4,64 \pm 0,98
frente a 2,5 \pm 0,92, respectivamente) (Fig. 4B). Con otras
palabras, aunque los dos grupos sintomáticos y asintomáticos
mostraban una correlación positiva entre el ARNm de
IL-18 y de IL-18BP, las pendientes
eran significativamente diferentes entre los dos grupos (grupo
sintomático: pendiente 1,16 [0,19-2,14], r^{2} =
0,36 frente al grupo asintomático: pendiente 4,79
[2,39-7,20], r^{2} = 0,76; p < 0,05). Por lo
tanto, parece que el incremento relativo de la expresión de
IL-18BP en el grupo sintomático no es suficiente
para compensar el incremento de la expresión de
IL-18. Además, ya que la presencia de ulceración se
considera una característica de la inestabilidad en las placas, el
análisis estadístico se realizó adicionalmente sobre placas con o
sin úlceras dentro de las placas y éste mostró un aumento
significativo de IL-18 en las placas que presentaban
úlceras (p < 0,018) (Fig. 4C).
Estos datos muestran que el incremento de la
expresión de IL-18 observado en las placas
ateroscleróticas, se correlaciona con la inestabilidad de la
placa.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Las muestras de plasma se obtuvieron a partir de
pacientes con síndromes coronarios isquémicos agudos (angina
inestable e infarto de miocardio), menos de 7 días después del
inicio de los síntomas. La angina inestable se definió como la
asociación de un dolor típico en el pecho con cambios isquémicos en
el electrocardiograma o la presencia de una enfermedad coronaria.
El infarto de miocardio se diagnosticó basándose en los cambios
isquémicos típicos en el electrocardiograma, asociado con
incrementos significativos de las enzimas miocárdicas (fosfoquinasa
de creatina y troponina 1) en la corriente sanguínea. Los pacientes
no isquémicos se reclutaron en el mismo departamento de cardiología
y estaban totalmente exentos de señales isquémicas. Los niveles en
plasma de IL-18 humana se determinaron empleando un
equipo de reactivos disponible comercialmente (MBL, Japón).
\vskip1.000000\baselineskip
Catorce ratones machos C57BL/6 apoE KO, de 14
semanas de edad, recibieron 3 inyecciones, en intervalos de 3
semanas, con el plásmido de expresión de IL-18BP,
pcDNA3-IL18BP. Los ratones testigos (n = 19) fueron
inyectados con el plásmido testigo vacío. El ADNc de la isoforma d
de IL-18BP de múrido, se aisló de la forma ya
descrita (número complementario Q9ZOM9) (23), se subclonó en los
sitios EcoRI/NotI del vector de expresión de células de mamífero
pcDNA3, bajo el control del promotor de citomegalovirus
(Invitrogen). La estructura artificial, denominada 334.yh, se
muestra en la Fig. 5. El plásmido testigo era una estructura
artificial similar, desprovista de ADNc terapéutico. El plásmido de
expresión de IL-18BP o testigo (60 \mug), se
inyectó en los músculos de la tibia y craneales de un ratón
anestesiado, tal y como se ha descrito previamente (13). Brevemente,
se suministraron impulsos eléctricos transcutáneos (8 impulsos
eléctricos de onda cuadrada de 200 V/cm, 20 mseg de duración a 2
Hz) a través de un electropulsador PS-15
(Genetronics, Francia) empleando dos electrodos de placa de acero
inoxidable, situados 4,2 a 5,3 mm de distancia, en cada lado de la
pierna.
\vskip1.000000\baselineskip
Las placas se revistieron durante una noche con
anticuerpo policlonal de conejo purificado por afinidad
r-mlL-18BPd (5 \mug/pocillo). El
mlL-18BP soluble se detectó empleando un anticuerpo
policlonal de conejo biotinilado (0,3 \mug/ml) obtenido contra
r-mlL-18BP de E. coli
(Peprotec), seguido de peroxidasa de extravidina (1/1000) (Sigma).
El anticuerpo policlonal de captura de conejo se sometió a ensayo
con una transferencia de tipo Western, para confirmar la
especificidad de mIL-18BP. El
mIL-18BPd recombinante producido por células HEK
293, se utilizó como patrón. La sensibilidad del ELISA era de 5
ng/ml.
\vskip1.000000\baselineskip
Las secciones para criostato (8 \mum) se
obtuvieron a partir del seno de la aorta y se emplearon para
detectar la deposición de lípidos empleando el colorante Oil red,
la detección de colágeno empleando Sirius red y para el análisis
inmunohistoquímico, tal y como se ha descrito previamente (13). Las
secciones se tiñeron con anticuerpos primarios específicos:
macrófagos anti-ratón, el clon MOMA2 (BioSource),
fosfatasa alcalina conjugada con anti-actina
\alpha para las células del músculo liso y
anti-CD3 para los linfocitos T (Dako), tal y como
se ha descrito previamente (13). La detección de la muerte celular
se realizó empleando la técnica de TUNEL (13). Se hizo un recuento
microscópico a ciegas de las células positivas para CD3. Las placas
ateroscleróticas en el seno aórtico y las áreas que se teñían de
forma positiva para los macrófagos, las células del músculo liso,
el colágeno o el TUNEL, se midieron empleando cuantificación de las
imágenes asistida por ordenador (NS15000, Microvision), tal y como
se ha descrito previamente (13). La tinción con inmunoglobulinas no
inmunes, emparejadas por el isotipo, determinó la especificidad de
la inmunotinción. La especificidad del TUNEL se determinó por
omisión de la enzima desoxinucleotidil-transferasa
terminal. Las aortas torácicas, que se extendían desde la arteria
subclavia izquierda hasta las arterias renales, se fijaron con
formalina tamponada al 10% y se tiñeron para observar la deposición
de lípidos con Oil red. A continuación se abrieron longitudinalmente
y se calculó el porcentaje de deposición lipídica empleando la
cuantificación de imágenes asistida por ordenador (NS15000,
Microvision).
\vskip1.000000\baselineskip
En el presente estudio, se sometió a ensayo la
hipótesis de si la regulación de
IL-18/IL-18BP tiene un papel
decisivo en la aterogénesis y en la estabilidad de la placa. Se
midieron los niveles en plasma de IL-18 en
pacientes con síndromes coronarios agudos (30 hombres, 18 mujeres,
edad media 66,2 \pm 1,8 años de edad, de los cuales 14 tenían
angina inestable y 34 tenían infarto de miocardio) y de pacientes
testigos no isquémicos, reclutados en el mismo departamento de
cardiología (10 hombres, 3 mujeres, edad media 60,0 \pm 5,2 años
de edad). Los niveles en plasma de IL-18 estaban
significativamente elevados en los pacientes con enfermedad
coronaria aguda, comparados con los de testigos (146,9 \pm 17,1
frente a 73,0 \pm 12,2 pg/ml, respectivamente, p < 0,05), en
contraposición con los niveles circulantes de
IL-18BP que estaban ligeramente incrementados (20,1
\pm 2,7 frente a 7,5 \pm 2,5 ng/ml, respectivamente, p = 0,06).
Además, los niveles de IL-18 correlacionados con la
gravedad de la enfermedad con los niveles más elevados, se
observaron en los pacientes con disfunción cardíaca isquémica grave
y señales clínicas de edema pulmonar (224,03 \pm 39,1 pg/ml, p
< 0,001 comparados con los testigos). Estos resultados obtenidos
a partir de pacientes con enfermedad coronaria aguda, junto con las
observaciones anteriores, en donde IL-18 está
elevada en las placas ateroscleróticas procedentes de pacientes con
ictus [Mallat, 2001], sugieren un papel potencialmente importante de
la regulación de IL-18/IL-18BP en
el proceso aterosclerótico.
Para ello sometimos a ensayo esta hipótesis,
empleando ratones inactivados (KO) apoE que desarrollaban
espontáneamente lesiones ateroscleróticas similares a las humanas.
Catorce ratones machos de 14 semanas de edad recibieron un
suplemento de IL-18BP a través de
electrotransferencia intramuscular in vivo, de un ADN
plasmídico de expresión, que codificaba IL-18BPd
de múrido, mientras que 19 testigos emparejados por la edad
recibieron el plásmido vacío. La electrotransferencia se repitió
cada 3 semanas y los ratones se sacrificaron a las 23 semanas de
edad, después de 9 semanas de tratamiento. Los niveles en plasma de
IL-18BP de múrido, eran inferiores a los límites de
detección (5 ng/ml) en ratones KO apoE a los que se había inyectado
el plásmido vacío. Sin embargo, una sola inyección de plásmido
IL-18BP daba como resultado niveles elevados de
IL-18BP en la sangre, alcanzando un máximo, dos
días después de la inyección (323,5 \pm 100,9 ng/ml) y 127,4 \pm
35,4 ng/ml medido después de dos semanas. Después de 9 semanas de
tratamiento con IL-18BP o con el plásmido vacío, el
colesterol total (489,4 \pm 34,6 frente a 480,8 \pm 36,3 mg/dl,
respectivamente) y los niveles en suero de lipoproteína de alta
densidad (52,3 \pm 9,4 frente a 48,8 \pm 5,1 mg/dl,
respectivamente) no eran diferentes entre los dos grupos. Un
incremento modesto pero significativo del peso del animal se observó
en el grupo tratado con IL-18BP, comparado con el
grupo testigo (31,8 \pm 0,9 frente a 28,6 \pm 0,8 g,
respectivamente, p < 0,05).
El resultado de una suplementación con
IL-18BP en la aterosclerosis, se examinó en 2
lugares diferentes: la aorta torácica descendente y el seno
aórtico. La aorta torácica se escogió para determinar el papel de
IL-18BP en el desarrollo de estrías grasas
(aterogénesis), puesto que las lesiones ateroscleróticas torácicas
casi no estaban presentes a la edad de 14 semanas (datos no
mostrados) cuando se inició la transfección de
IL-18BP. El seno aórtico, en el que las lesiones
ateroscleróticas están ya presentes a las 14 semanas de edad (datos
no mostrados), se examinó en busca de una evolución avanzada de la
placa y la composición, un determinante importante de la
estabilidad de la placa. El tratamiento con IL-18BP
de ratones apoE KO, afectaba significativamente al desarrollo y a
la evolución de la lesión aterosclerótica. El examen de la aorta
torácica mostraba una reducción marcada del depósito de lípidos en
los ratones tratados con el plásmido de IL-18BP,
comparando con el plásmido vacío (Fig. 6). El análisis cuantitativo
de imágenes asistido por ordenador, mostraba un 69% de reducción de
la extensión de las lesiones ateroscleróticas (p < 0,0001) (Fig.
6), apuntando a un papel permisivo decisivo de la
IL-18 en la aterogénesis. Además, el tratamiento con
el plásmido IL-18BP durante sólo 9 semanas,
limitaba significativamente la evolución de placas ateroscleróticas
avanzadas en el seno aórtico (24% de reducción del tamaño de la
placa, p = 0,01) comparando con el tratamiento con el plásmido vacío
(Fig. 7).
Más importante, la composición de las lesiones
avanzadas, un factor determinante principal de la inestabilidad de
la placa, estaba muy afectada por el tratamiento con
IL-18BP. Las lesiones ateroscleróticas de ratones
tratados con el plásmido de IL-18BP, mostraban una
reducción muy significativa del 50% en infiltración de macrófagos
(p < 0,0001) (Fig. 8), contenían 67% menos linfocitos T (p <
0,005) (Fig. 8), y mostraban un incremento doble en la acumulación
de células del músculo liso (p < 0,05) (Fig. 9). Además, estos
cambios importantes en la composición celular de la lesión se
asociaron con un incremento significativo del 85% del contenido en
colágeno (p < 0,0005), tal y como se determinó con la tinción con
Sirius red, y una disminución en el contenido total de lípidos.
Por tanto, el tratamiento con
IL-18BP atenuaba significativamente el proceso
inflamatorio en las lesiones ateroscleróticas e inducía un proceso
de curación característico de las placas ateroscleróticas estables.
Adicionalmente, la marcada reducción del componente inflamatorio de
las lesiones en ratones tratados con IL-18BP, se
asoció con una reducción sustancial de los casos de muerte celular
en las placas (2,9 \pm 0,9% en ratones tratados con
IL-18BP frente a 10,5 \pm 3,6% en los testigos, p
< 0,05), limitando de este modo la expansión y la
trombogenicidad del núcleo lipídico acelular [Mallat, 1999].
\vskip1.000000\baselineskip
Empleando un modelo de ratón que esté
adecuadamente validado para la aterosclerosis similar a la humana,
los resultados descritos anteriormente establecen claramente un
papel insospechado y crucial de la regulación de
IL-18 y de IL-18BP en el desarrollo,
evolución y estabilidad de las placas ateroscleróticas. Mientras que
se evita la formación temprana de una lesión en la aorta torácica,
una inhibición de la actividad de IL-18 mediante
IL-18BP adicional, también afectaba profundamente a
la composición de la lesión avanzada en el seno aórtico, induciendo
un cambio hacia un fenotipo de placa estable.
El pronóstico clínico de un paciente con
aterosclerosis depende sólo en parte del tamaño de las lesiones.
Actualmente se admite en general que las características
(composición de la placa), más que el tamaño de la lesión podría
ser un factor de pronóstico mejor incluso que la aparición de
sucesos isquémicos. Es más, manifestaciones clínicas graves de
aterosclerosis, (infartos cardíacos y cerebrales), se deben
principalmente a la oclusión del lumen del vaso con un trombo
formado por el contacto con una placa aterosclerótica rota (19).
Estudios patológicos han mostrado que las placas vulnerables o
inestables que son propensas a la ruptura o que están rotas, son
ricas en células inflamatorias y muestran una pérdida sustancial de
células del músculo liso y de contenido en colágeno (20, 21).
Además, tales placas muestran un aumento significativo en muerte
celular por apoptosis, lo que conduce a la formación de un núcleo
lipídico altamente trombogénico (13, 22). Es digno de mención que
todas estas señales de una inestabilidad incrementada de la placa,
estaban marcadamente atenuadas en ratones tratados con
IL-18BP, indicando que la señalización de
IL-18 es un determinante principal de la
inestabilidad de la placa.
La importancia de los resultados obtenidos en
ratones apoE KO para la enfermedad en humanos se refuerza con
nuestros descubrimientos de niveles circulantes incrementados de
IL-18, en pacientes con síndromes coronarios agudos
y que una producción incrementada de IL-18 en las
placas ateroscleróticas inestables en la carótida, son responsables
de ictus. Estos descubrimientos, en conjunto, identifican a los
inhibidores de la actividad de IL-18 como unas
nuevas herramientas terapéuticas importantes para evitar y tratar el
desarrollo de placas ateroscleróticas y para limitar las
complicaciones en las placas.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Los niveles de IL-18 se midieron
en el suero sanguíneo de pacientes mediante ELISA con un anticuerpo
específico de IL-18.
Se sometieron a ensayo todos juntos, 56
pacientes isquémicos o no isquémicos, con o sin fallo cardíaco.
En los pacientes que murieron más tarde, los
niveles de IL-18 eran 216,0 \pm 41,5 pg/ml frente
a 112,2 \pm 12,2 pg/ml en los pacientes sin resultados mortales
(p = 0,0018).
En los pacientes con cualquier suceso
recurrente, tal como la muerte, la isquemia recurrente, la
revascularización, la evolución de la aterosclerosis o la
rehospitalización por fallo cardíaco, se midieron los siguientes
niveles de IL-18: 165,8 \pm 23,8 frente a 107,7
\pm 14,6 en pacientes sin ningún suceso recurrente (p = 0,03).
Estos resultados muestran que los niveles de
IL-18 están significativamente elevados en los
pacientes que tienen un pronóstico clínico malo, tal como sucesos
recurrentes o incluso la muerte.
En las muestras de sangre de 16 pacientes no
isquémicos, con o sin fallo cardíaco, se midieron los niveles de
IL-18. En los pacientes que murieron más tarde, los
niveles eran 199,0 \pm 34,8 pg/ml frente a 95,3 \pm 20,4 pg/ml
en los pacientes que sobrevivieron (p = 0,09).
Pacientes con cualquier suceso recurrente: 146,6
\pm 34,4 pg/ml de IL-18 frente a 95,4 \pm 23,9
pg/ml en pacientes sin suceso recurrente (p = 0,03). Aunque las
diferencias en los niveles de IL-18 no eran
estadísticamente significativos, debido al bajo número de
pacientes, se pudo observar una tendencia clara hacia niveles
elevados de IL-18.
En los pacientes isquémicos, los niveles de
IL-18 eran 214,2 \pm 45,9 pg/ml en los pacientes
que murieron frente a 118,4 \pm 12,8 pg/ml en los que
sobrevivieron (p = 0,007).
162,8\pm 24,7 pg/ml de IL-18
se midió en los pacientes que habían tenido cualquier suceso
recurrente, frente a 116,2 \pm 16,0 en los que no tenían ningún
suceso recurrente.
\vskip1.000000\baselineskip
1. Ross R.
Atherosclerosis-an inflammatory disease. N Engl J
Med 1999; 340:115-126.
2. van der Wal A C, Becker A E,
van der Loos C M, Das P K. Site of intimal rupture or
erosion of thrombosed coronary atherosclerotic plaques is
characterized by an inflammatory process irrespective of the
dominant plaque morphology. Circulation 1994;
89:36-44.
3. Fuster V, Badimon L,
Badimon J J, Chesebro J H. The pathogenesis of
coronary artery disease and the acute coronary syndromes (1). N
Engl J Med 1992; 326:242-250.
4. Fuster V, Badimon L,
Badimon J J, Chesebro J H. The pathogenesis of
coronary artery disease and the acute coronary syndromes (2). N
Engl J Med 1992; 326:310-318.
5. Lee R T, Libby P. The unstable
atheroma. Arterioscler Thromb Vasc Biol 1997;
17:1859-1867.
6. Ridker P M, Cushman M,
Stampfer M J, Tracy R P, Hennekens C H.
Inflammation, aspirin, and the risk of cardiovascular disease in
apparently healthy men. N Engl J Med 1997;
336:973-979.
7. Libby P. Molecular bases of the acute
coronary syndromes. Circulation 1995;
91:2844-2850.
8. Nakamura, K, Okamura, H,
Nagata, K y Tamura, T. (1989). Infect.
Immun. 57, 590-595.
9. Yoshimoto T, Takeda, K,
Tanaka, T, Ohkusu, K, Kashiwamura, S,
Okamura, H, Akira, S y Nakanishi, K
(1998). J. Immunol. 161,
3400-3407.
10. Parnet, P, Garka, K E,
Bonnert, T P, Dower, S K, y Sims, J E.
(1996). J. Biol. Chem. 271,
3967-3970.
11. DiDonato, J A, Hayakawa, M,
Rothwarf, D M, Zandi, E y Karin, M.
(1997). Nature 388, 16514-16517.
12. Novick, D, Kim,
S-H, Fantuzzi, G, Reznikov, L,
Dinarello, C y Rubinstein, M (1999).
Immunity 10, 127-136.
\newpage
13. Mallat Z, Hugel B, Ohan
J, Lesèche G, Freyssinet J M, Tedgui A. Shed
membrane microparticles with procoagulant potential in human
atherosclerotic plaques. A role for apoptosis in plaque
thrombogenicity. Circulation 1999;
99:348-353.
14. Tricot O, Mallat Z,
Heymes C, Belmin J, Lesèche G, Tedgui A.
Relation Between Endothelial Cell Apoptosis and Blood Flow
Direction in Human Atherosclerotic Plaque. Circulation
2000; en prensa.
15. Dimmeler S, Haendeler J,
Galle J, Zeiher A M. Oxidized
low-density lipoprotein induces apoptosis of human
endothelial cells by activation of CPP32-like
proteases. A mechanistic clue to the "response to injury"
hypothesis. Circulation 1997;
95:1760-3.
16. Grantham, Science, Vol. 185,
pp. 862-864 (1974).
17. Dimmeler S, Haendeler J,
Galle J, Zeiher A M. Oxidized
low-density lipoprotein induces apoptosis of human
endothelial cells by activation of CPP32-like
proteases. A mechanistic clue to the "response to injury"
hypothesis. Circulation 1997;
95:1760-3.
18. Mir L M, Bureau M F,
Gehl J, Rangara R, Rouy D, Caillaud J M,
Dellere P, Branellec D, Schwartz B,
Scherman D. High efficiency gene transfer into skeletal
muscle mediated by electric pulses. Proc Natl Acad Sci USA
1999; 96:4262-7.
19. Lee, R. T. & Libby, P. The
unstable atheroma. Arterioscler Thromb Vasc Biol 17,
1859-1867 (1997).
20. Davies, M. J. The composition of
coronary-artery plaques [editorial; coment]. N
Engl J Med 336, 1312-1314 (1997).
21. Virmani, R., Kolodgie, F. D.,
Burke, A. P., Farb, A. & Schwartz, S. M.
Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological
classification scheme for atherosclerotic lesions. Arterioscler
Thromb Vasc Biol 20, 1262-1275.
(2000).
22. Kolodgie, F. D. y col. Localization
of apoptotic macrophages at the site of plaque rupture in sudden
coronary death [En proceso de citación]. Am J Pathol 157,
1259-1268 (2000).
23. Kim, S. H. y col. Structural
requirements of six naturally occurring isoforms of the
IL-18 binding protein to inhibit
IL-18. Proc Natl Acad Sci U S A 97,
1190-1195 (2000).
24. Elliott, M. J., Maini, R. N.,
Feldmann, M., Long-Fox, A.,
Charles, P., Bijl, H., y Woody, J. N.,
1994, Lancet 344, 1125-1127.
25. Knight D M, Trinh H, Le
J, Siegel S, Shealy D, McDonough M,
Scallon B, Moore M A, Vilcek J, Daddona
P, y col. Construction and initial characterization of a
mouse-human chimeric anti-TNF
antibody. Mol Immunol 1993 Nov 30: 16
1443-53
26. Tucci, A., James, H.,
Chicheportiche, R., Bonnefoy, J. Y., Dayer, J.
M., y Zubler, R. H., 1992, J. Immunol. 148,
2778-2784.
27. Engelmann, H., D. Novick, y D.
Wallach. 1990. Two tumor necrosis
factor-binding proteins purified from human urine.
Evidence for immunological cross-reactivity with
cell surface tumor necrosis factor receptors. J. Biol. Chem.
265:1531-1536.
28. Moore W S, Barnett H J,
Beebe H G, y col. Guidelines for carotid endarterectomy. A
multidisciplinary consensus statement from the Ad Hoc Committee,
American Heart Association. Circulation 1995;
91:566-79.
29. Chomczynski P, Sacchi N.
Single-step method of RNA isolation by acid
guanidium
thiocyanate-phenol-chloroform
extraction. Anal Biochem 1987;
162:156-9.
<110> Applied Research Systems ARS
Holding N.V.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> Uso de inhibidores de
IL-18 para el tratamiento y/o la prevención de la
aterosclerosis
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 443 WO
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<140> PCT/EP01/04843
\vskip0.400000\baselineskip
<141>
2001-04-30
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> EP 00109606.4
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2000-05-05
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn versión 3.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador inverso de
IL-18
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcgtcactac actcagctaa
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador directo de
IL-18
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcctagaggt atggctgtaa
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador directo de
IL-18BP
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipacctgtctac ctggagtgaa
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador inverso de
IL-18BP
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(20)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgcacgaagat aggaagtctg
\hfill20
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador inverso de la actina
beta
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(24)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipggaggagcaa tgatcttgat cttc
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador directo de la actina
beta
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(24)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgctcaccatg gatgatgata tcgc
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador inverso 2 de
IL-18
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(18)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcagccgcttt agcagcca
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> cebador directo 2 de
IL-18
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(21)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcaaggaattg tctcccagtg c
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 19
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador inverso 2 de
IL-18BP
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(19)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipaaccaggctt gagcgttcc
\hfill19
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 24
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador directo 2 de
IL-18BP
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(24)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskiptcccatgtct ctgctcattt agtc
\hfill24
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador inverso de GAPDH
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(22)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipgatgggattt ccattgatga ca
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 18
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador directo de GAPDH
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(18)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipccacccatgg caaattcc
\hfill18
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 21
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador inverso del intrón de
GAPDH
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(21)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipcctagtccca gggctttgat t
\hfill21
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Homo sapiens
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> Cebador directo del intrón de
GAPDH
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(22)
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
\hskip-.1em\dddseqskipctgtgctccc actcctgatt tc
\hfill22
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (35)
1. Uso de un inhibidor de IL-18
para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la
prevención de la aterosclerosis, en donde el inhibidor de
IL-18 se selecciona entre el grupo consistente en
anticuerpos contra IL-18, anticuerpos contra
cualquier subunidad del receptor de IL-18 y la
proteína que se une a IL-18
(IL-18BP), una muteína de IL-18BP
que comprende sustituciones conservadoras de aminoácidos, una
proteína de fusión de IL-18BP y regiones de la
cadena pesada de la inmunoglobulina, o la IL-18BP
PEGilada, en donde la muteína, la proteína fusionada o la
IL-18 BP PEGilada conservan la actividad biológica
de unirse a IL-18.
2. Uso según la reivindicación 1, en donde el
medicamento es para el tratamiento y/o la prevención de la trombosis
de una placa aterosclerótica.
3. Uso según la reivindicación 1 o 2, en donde
el medicamento es para el tratamiento y/o la prevención de la
úlcera de la placa aterosclerótica.
4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en donde el medicamento es para el tratamiento y/o la
prevención de la desestabilización de la placa aterosclerótica.
5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
precedentes, en donde el medicamento es para la prevención y/o el
tratamiento de síndromes isquémicos debidos a la desestabilización
de la placa.
6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en donde el medicamento es para el tratamiento y/o la
prevención de la rotura de la placa aterosclerótica.
7. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el inhibidor de
IL-18 es un anticuerpo dirigido contra la
IL-18.
8. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo es un
anticuerpo humanizado.
9. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el anticuerpo es un
anticuerpo humano.
10. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 6, en donde el inhibidor de
IL-18 es IL-18BP, una muteína de
IL-18BP que comprende sustituciones conservadoras de
aminoácidos, una proteína de fusión de IL-18BP y
las regiones de la cadena pesada de la inmunoglobulina, o la
IL-18BP PEGilada, en donde la muteína, la proteína
fusionada o la IL-18BP PEGilada conservan la
actividad biológica de unirse a IL-18.
11. El uso según la reivindicación 10, en donde
la inmunoglobulina es la proteína fusionada de isotipo IgG1 o
IgG2.
12. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el medicamento comprende
adicionalmente un interferón para uso simultáneo, secuencial o por
separado.
13. El uso según la reivindicación 12, en donde
el interferón es el interferón-\beta.
14. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el medicamento comprende
adicionalmente un antagonista del Factor de Necrosis Tumoral (TNF)
para uso simultáneo, secuencial o por separado.
15. El uso según la reivindicación 14, en donde
el antagonista de TNF es TBPI y/o TBPII.
16. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el medicamento comprende
adicionalmente un inhibidor de COX para uso simultáneo, secuencial
o por separado.
17. El uso según la reivindicación 16, en donde
el inhibidor de COX es un inhibidor de COX-2.
18. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el medicamento comprende
adicionalmente un inhibidor de tromboxano para uso simultáneo,
secuencial o por separado.
19. El uso según la reivindicación 18, en donde
el inhibidor de tromboxano es la aspirina.
20. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el medicamento comprende
adicionalmente un agente hipolipemiante para uso simultáneo,
secuencial o por separado.
21. El uso según la reivindicación 20, en donde
el agente hipolipemiante es un inhibidor de HMG CoA.
22. El uso según la reivindicación 21, en donde
el inhibidor de HMG CoA es una estatina.
23. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en donde el medicamento se emplea junto con una dieta
baja en grasas y/o baja en colesterol y/o baja en sal.
24. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el inhibidor de la
IL-18 se debe emplear en una cantidad desde
aproximadamente 0,0001 a 10 mg/kg de peso corporal, o desde
aproximadamente 0,01 a 5 mg/kg de peso corporal o desde
aproximadamente 0,1 a 3 mg/kg de peso corporal o desde
aproximadamente 1 a 2 mg/kg de peso corporal.
25. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el inhibidor de
IL-18 se debe utilizar en una cantidad desde
aproximadamente 0,1 a 1000 \mug/kg de peso corporal o desde 1 a
100 \mug/kg de peso corporal o desde aproximadamente 10 a 50
\mug/kg de peso corporal.
26. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el inhibidor de
IL-18 se debe administrar por vía subcutánea.
27. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el inhibidor de
IL-18 se debe administrar por vía
intramuscular.
28. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones precedentes, en donde el inhibidor de
IL-18 se debe la administrar diariamente.
29. El uso según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, en donde el inhibidor de
IL-18 se debe administrar cada dos días.
30. Uso de un vector de expresión que comprende
la secuencia codificadora de un inhibidor de IL-18
para la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la
prevención de la aterosclerosis, en donde el inhibidor de
IL-18 se selecciona entre el grupo consistente en
los anticuerpos contra IL-18, anticuerpos contra
cualquiera de las subunidades del receptor de IL-18
y una IL-18BP, una muteína de
IL-18BP que comprende sustituciones conservadoras
de aminoácidos, una proteína fusionada de IL-18BP y
regiones de la cadena pesada de la inmunoglobulina, o
IL-18BP PEGilada, en donde la muteína, la proteína
fusionada o la IL-18BP PEGilada conservan la
actividad biológica de unirse a IL-18.
31. Uso según la reivindicación 30, en donde el
vector de expresión se administra por electrotransferencia.
32. Uso según la reivindicación 30 o 31, en
donde el vector de expresión se administra sistémicamente.
33. Uso según cualquiera de las reivindicaciones
anteriores, en donde el vector de expresión se administra
intramuscularmente.
34. Uso de una célula que se ha modificado
genéticamente para producir un inhibidor de IL-18 en
la fabricación de un medicamento para el tratamiento y/o la
prevención de la aterosclerosis, en donde el inhibidor de
IL-18 se selecciona entre el grupo consistente en
anticuerpos contra IL-18, anticuerpos contra
cualquiera de las subunidades del receptor de IL-18
y IL-18BP, una muteína de IL-18BP
que comprende sustituciones conservadoras de aminoácidos, una
proteína fusionada de IL-18BP y regiones de la
cadena pesada de la inmunoglobulina, o IL-18BP
PEGilada, en donde la muteína, la proteína fusionada o la
IL-18BP PEGilada conservan la actividad biológica
de unión a IL-18.
35. Uso de IL-18 como un
marcador de diagnóstico de la evolución de la aterosclerosis.
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