CZ2004196A3

CZ2004196A3 - Krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-2-oxo-3H-indol-3-yliden) methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrol 3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, způsob jejich výroby a kompozice na jejich bázi

Info

Publication number: CZ2004196A3
Application number: CZ2004196A
Authority: CZ
Inventors: Michael Hawley; Thomas J. Fleck; Stephen P. Prescott; Mark T. Maloney
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Company
Priority date: 2001-08-15
Filing date: 2002-08-13
Publication date: 2005-01-12
Also published as: RS53251B; PT3168218T; EP2332934A1; TR201900509T4; GEP20063777B; CA2455050A1; CN1543462A; IS7147A; MA27058A1; AR036261A1; SI3168218T1; CN100439360C; EA006445B9; ZA200400706B; EA200400183A1; HK1066542A1; HK1088008A1; EP1419151A1; CA2455050C; CY1121552T1

Description

Oblast techniky

Vynález se týká krystalů obsahujících sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou a kompozic na bázi těchto krystalů. Vynález se dále týká způsobů výroby takových krystalů.

Dosavadní stav techniky

PK jsou enzymy, které katalyzují fosforylaci hydroxyskupin na tyrosinových, serinových a threoninových zbytcích proteinů. Důsledky této zdánlivě jednoduché aktivity jsou omračující: růst, diferenciace a proliferace buněk, tzn. že ve skutečnosti všechny aspekty života buňky tak či onak závisejí na aktivitě PK. Abnormální aktivita PK byla kromě toho dána do souvislosti s řadou poruch, od chorob, které relativně neohrožují život, jako je psoriasis, až po extrémně zhoubné choroby, jako je glioblastom (rakovina mozku). PK lze účelně rozdělit na dvě třídy, proteinový tyrosin kinasy (PTK) a serin-threonin kinasy (STK).

Jedním z nejdůležitějších aspektů aktivity PTK je jejich podíl na receptorech růstových faktorů. Receptory růstových faktorů jsou proteiny buněčného povrchu. V případě, že se k nim naváže jako ligand růstový faktor, tyto receptory přecházejí na aktivní formu, což interaguje s proteiny na vnitřním povrchu buněčné membrány. To vede k fosforylaci tyrosinových zbytků receptoru a jiných proteinů a • ·

vnitrobuněčné tvorbě komplexů s různými cytoplasmatickými signálními molekulami, které dále ovlivňují řadu buněčných odpovědí, jako je buněčné dělení (proliferace), buněčná diferenciace, buněčný růst, exprese metabolických účinků na extracelulární mikroprostředí atd.

Byly identifikovány malé molekuly, které působí jako inhibitory PK a jako jejich příklad je možno uvést 3-pyrrolsubstituované 2-indolinové sloučeniny, jak jsou popsány v PCT mezinárodní přihlášce zveřejněné jako WO 01/60814 (Tang et al.). Jako 3-pyrrolsubstituovanou 2-indolinovou sloučeninu je například možno uvést N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-l(5-fluor1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol- 3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lHpyrrol-3-karboxamid, jak je popsán v PCT mezinárodní přihlášce WO 01/60814 (Tang et al.). 0 přípravě a charakteru konkrétních krystalických forem N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu se však tato přihláška nezmiňuje. Existuje tedy potřeba nalézt krystalické formy takových látek, které by vykazovaly lepší chemické a/nebo fyzikální vlastnosti, které by byly užitečné v rámci aplikací při 'dodávce léčiv.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je krystal, který obsahuje sůl „ sloučeniny vzorce

O

F

NH s kyselinou jablečnou.

ti

Sloučenina výše uvedeného vzorce je také známa jako N-I2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid. Solí s kyselinou jablečnou může být sůl s kyselinou D-jablečnou; D,L-jablečnou; L-jablečnou; nebo jejich směs. Přednostně je solí s kyselinou jablečnou sůl s kyselinou L-jablečnou. Krystal je přednostně bezvodý. Krystal přednostně vykazuje v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 13,2 a 24,2 stupně dva-théta, výhodněji při asi 13,2,

19,4, '24,2 a 25,5 stupně dva-théta, a nejvýhodněji píky uvedené v tabulce 1 pro krystalickou formu I. V přednostním provedení krystal obsahuje nejvýše asi 2 % hmotnostní vody, výhodněji nejvýše asi 0,5 % hotnostního vody, a nejvýhodněji nejvýše asi 0,2 % hmotnotního vody. Krystal má přednostně teplotu tání alespoň asi 190°C, výhodněji alespoň asi 195°C. Předmětem vynálezu jsou také kompozice, které obsahují krystaly podle vynálezu. V přednostní provedení kompozice obsahují terapeuticky účinné množství krystalů. Kompozice popřípadě obsahuje excipient, přednostně farmaceuticky vhodný excipient.

Předmětem vynálezu je také krystal, který obsahuje sůl N- [2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, přičemž krystal má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva-théta, výhodněji při asi 3,0, 12,1, 14,5 a 27,7 stupně dva-théta, nejvýhodněji píky uvedené v tabulce 1 pro krystalickou formu II. Krystal typicky při vystavení 80% relativní vlhkosti absorbuje alespoň asi 5 % hmotnostních vody a jeho teplota tání je nejvýše asi 185°C. Předmětem vynálezu jsou také kompozice, které obsahují krystaly podle vynálezu. V přednostní provedení kompozice • · · · · 4 4·· · 44 4 4 44 44444

4 ΐ» · 4 · · ·

444 44 444 444 44 4 obsahují terapeuticky účinné množství krystalů. Kompozice popřípadě obsahuje excipient, přednostně farmaceuticky vhodný excipient.

Předmětem vynálezu jsou dále způsoby výroby bezvodého krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou (například krystalickou formu I). V jednom provedení se při tomto způsobu: smísí kyselina jablečná, N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol-3-karboxamid a rozpouštědlo; a vyvolá krystalizace soli za podmínek krystalizace (například za podmínek krystalizace formy I), které zahrnují jeden nebo více faktorů, jako je: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku nejvýše asi 100°C; rychlost chlazení nejvýše o asi 50°C za hodinu; žádné zaočkování; poměr přesycenosti nejvýše asi 10; žádné srážedlo; a/nebo jejich kombinaci.

V přednostním provedení je kyselinou jablečnou kyselina Ljablečná. V přednostním provedení rozpouštědlo obsahuje jedno nebo více rozpouštědel, jako je například acetonitril, methánól, eťhanol, isopropylalkohol, toluen, n-butanol, tetrahydrofuran, N,N-dimethylformamid, aceton, voda a jejich směsi.

V dalším provedení je předmětem vynálezu způsob výroby bezvodého krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou (například krystalickou formu I), při němž se: krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl] -2,4-dimethyl-1H-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou uvede do styku s rozpouštědlem, v němž je krystal uváděný do styku v podstatě

rozpustný, přičemž krystal uváděný do styku (například krystalická forma II) má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dvathéta. V přednostním provedení rozpuštědlo obsahuje jedno nebo více rozpouštědel, jako je například acetonitril, ethanol, methanol a jejich směsi. V přednostním provedení krystal, který je uváděn do styku, utvoří s rozpouštědlem suspenzi a tato suspenze se přednostně míchá a/nebo zahřívá. Bezvodý krystal je popřípadě možno ze suspenze izolovat.

Předmětem vynálezu je také způsob výroby krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4 -dimethyl-ΙΗ-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou (například krystalickou formu II). Při tomto způsobu se: smísí kyselina jablečná,

N-[2-(diethylamino)ethyl]-5- [ (5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid a rozpouštědlo; a vyvolá krystalizace soli za podmínek krystalizace (například za podmínek krystalizace krystalické formy II), které zahrnují jeden nebo více faktorů, jako je: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku alespoň asi '25°C; rychlost chlazení alespoň asi 25°C za hodinu; zaočkování; poměr přesycenosti alespoň 2; přítomnost srážedla; a/nebo jejich kombinaci. V přednostním provedení je kyselinou jablečnou kyselina L-jablečná. V přednostním provedení rozpouštědlo obsahuje jedno nebo více rozpouštědel, jako je například methanol, voda, směs tetrahydrofuranu a vody, a jejich směsi. Krystal v práškovém rentgenovém difraktogramu přednostně vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva-théta.

Bezvodá^krystalická forma I je ve srovnání s krystalickou formou II P?3 řadě aplikací výhodná, jelikož se mezi vlastnosti, které krystalická forma I nabízí, řadí vyšší

• ·»	• 4 ··	β
	• 4	• ·	4	*	•
• · ·	4	4	9	4	• ·
'· · · ·	9	•	• «	9	• 9 · 9
• · ·	4	4	4	9	•
• 9« · ·	«'•4	···			•

termodynamická stabilita, vyšší krystaličnost a nižší hygroskopičnost vzhledem k těmto vlastnostem u formy II.

Podmínky krystalizace ovlivňuje řada faktorů, které jsou odborníkům v tomto oboru známé. Jako příklady takových faktorů lze uvést: koncentraci soli v krystalizačním roztoku; rozdíl, pokud existuje, mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku; rychlost chlazení, pokud se chlazeni provádí; rychlost vypařováni rozpouštědla, pokud se používá; zaočkování; poměr přesycení; a přítomnost srážedla. Na základě tohoto popisu, jako vodítka, je odborník v tomto oboru bez přílišného experimentování schopen zvolit a nastavit jeden nebo více z takových faktorů tak, aby dosáhl podmínek krystalizace, za kterých se získá krystalická forma I a/nebo krystalická forma II.

Definice

Pod pojmem poměr přesycenosti se rozumí poměr koncentrace látky v roztoku ke koncentraci látky v nasyceném roztoku při teplotě krystalizace.

Pod pojmem zaočkování se rozumí postup, při němž se ke krystalizačnímu roztoku za účelem podpoření tvorby krystalů přidává očkovací krystal. V přednostním provedení je složení očkovacího krystalu stejné jako složení krystalů, které vznikáj í.

Pod pojmem srážedlo se rozumí látka, která, přidána ke krystalizačnímu roztoku, má sklon vyvolat krystalizaci. Jako užitečná srážedla je možno uvést například nerozpouštědla soli a roztoků obsahující nadbytečné protionty. V tomto textu se pod pojmem nerozpouštědlo rozumí rozpouštědlo, v němž je rozpustnost soli přednostně nejvýše asi 1 % hmotn., výhodněji • « · « · * 9 9' 9 • · · · · · · * Λ » at Ά Λ Λ Λ * Λ * nejvýše asi 0,1 % hmotn., a nejvýhodněji nejvýše asi 0,01 % hmotn.

Pod pojmem bezvodý krystal se rozumí krystal, k němuž není specificky vázána voda. V přednostním provedení bezvodé krystaly neobsahují podstatná množství vody. Obsah vody je možno stanovit způsoby, které jsou v tomto oboru známy, například Karl-Fisherovou titrací. Bezvodý krystal přednostně obsahuje nejvýše asi 2 % hmotn. vody, výhodněji nejvýše asi 0,5 % hmotn. vody, a nejvýhodněji nejvýše asi 0,2 % hmotn. vody.

Přívlastkem krystalická se označuje látka, která má uspořádanou dalekodosahovou molekulární strukturu. Stupeň krystaličnosti krystalické formy je možno stanovit pomocí řady postupů, například pomocí práškové rentgenové difrakce, sorpce vlhkosti, diferenciální skanovací kalorimetrie, rozpouštěcí kalorimetrie a pomocí disolučních vlastností.

Pod pojmem krystaličtější se rozumí, že látka má vyšší stupeň krystaličnosti než látka, se kterou je srovnávána. Lábkys Vyšším'stupněm 'krýšťáTičnosti obvykle maj i uspořádanější dalekodosahovou molekulární strukturu s menším počtem poruch ve struktuře krystalu než látky s nižšími stupni krystaličnosti. Vyšší stupeň krystaličnosti vzhledem k jiným formám je možno hodnotit na základě takových vlastností, jako jsou například ostřejší reflexe v rentgenovém difraktogramu, nižší sorpce vlhkosti u částic podobné velikosti při dané relativní vlhkosti, nižší rozpouštěcí teplo, vyšší tavné teplo, nižší rychlost rozpouštění a jejich kombinace.

Přívlastkem méně krystalická se označuje látka, která má nižší stupeň krystaličnosti než látka, se kterou je srovnávána. Látky s nižším stupněm krystaličnosti obvykle mají ♦

nižší dalekodosahové uspořádání a více poruch v krystalické struktuře než látky s vyššími stupni krystalinity. Nižší stupeň krystalinity lze vzhledem k jiné formě hodnotit na základě takových vlastností, jako jsou například širší a/nebo méně početné reflexe v práškovém rentgenovém difraktogramu, vyšší sorpce vlhkosti u částic podobné velikosti při dané relativní vlhkosti, vyšší rozpouštěcí teplo, nižší tavné teplo, vyšší rychlost rozpouštění a jejich kombinace.

Pod pojmem stabilní se při zkouškách stability nerozplněných léčiv rozumí, že po skladování za daných podmínek po danou dobu zůstává nezměněno alespoň asi 97 % hmotn., přednostně alespoň asi 98 % hmotn., a výhodněji alespoň asi 99 % hmotn. nerozplněného léčiva.

Přehled obr, na výkresech

Na obr. 1 jsou graficky znázorněna data práškové rentgenové difrakce (PXRD) krystalické formy I soli kyseliny L- jablečné s N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidem. Tento difraktogram se odlišuje od jiných krystalických forem soli a volné báze a odpovídá látce, která je krystaličtější než krystalická forma II (například obr. 2).

Na obr. 2 jsou graficky znázorněna data práškové rentgenové difrakce (PXRD) krystalické formy II soli kyseliny L-jablečné s N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-ΟΧΟ-3Η-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol-3-karboxamidem. Tento difraktogram se odlišuje od jiných krystalických forem soli a volné báze a odpovídá látce, která je méně krystalická než krystalická forma I, jak je zřejmé z širších reflexi v práškovém rentgenovém difraktogramu (například obr. 1).

Na obr. 3 jsou znázorněny sorpční isotermy stanovené gravimetricky při dynamické zkoušce sorpce vlhkosti vyjadřující profily sorpce vlhkosti krystalické formy I a krystalické formy II soli N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou. Krystaličtější polymorf, krystalická forma I, je méně hygroskopický: absorbuje méně než 0,5 % vody při relativní vlhkosti v rozmezí od 0 do 90 %. Méně krystalický polymorf, krystalická forma II, je velmi hygroskopický: absorbuje více než 15 % vody při relativní vlhkosti v rozmezí do 0 do 90 %.

Na obr. 4 jsou graficky znázorněna data diferenciální skanovací kalorimetrie (DSC) vyjadřující DSC profily krystalické formy I a krystalické formy II soli N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou. Exotermické přechody jsou uváděny vzestupně. Krystalická forma I taje při vyšší teplotě (asi

196°C) s vyšší entalpií tání _(_asi 141 J/g) než krystalická___________ forma II, která taje při asi 181°C s entalpií tání asi 105 J/g. To napovídá, že tyto dvě krystalické formy jsou monotropní, ačkoliv po roztáni krystalu dochází k degradaci. Monotropismus potvrzuje přechod krystalické formy II na krystalickou formu I v suspenzi o teplotě místnosti, jak je popsáno v tomto textu.

Následuje podrobnější popis přednostních provedení.

N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid je 3-pyrrolsubstituovanou 2-indolinovou sloučeninou vzorce

N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo- 3H-indol- 3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol- 3-karboxamid ve formě volné báze možno připravovat standardními syntetickými způsoby, jako jsou například způsoby popsané v PCT mezinárodní patentové přihlášce zveřejněné jako WO 01/60814 (Tang et al.). Přestože volnou bázi je možno vykrystalovat ve formě malých částic, při výrobě ve velkém měřítku je žádoucí například dosáhnout větší částicové velikosti krystalů, a tak usnadnit filtraci. Za tímto účelem byly připraveny soli N-[2(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3 yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu a byly hodnoceny jejich výsledné vlastnosti týkající se zpracování soli a přípravy perorálních farmaceutických kompozic.

Krystalické formy N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-1Hpyrrol-3-karboxamidu, včetně volné báze a solí (například solí s kyselinou cyklámovou, kyselinou maleinovou, kyselinou bromovodíkovou, kyselinou mandlovou, kyselinou vinnou, kyselinou fumarovou, kyselinou askorbovou, kyselinou fosforečnou, kyselinou chlorovodíkovou, kyselinou p-toluensulfonovou, kyselinou citrónovou a kyselinou jablečnou) byly podrobeny hodnocení z hlediska vlastností souvisejících se zpracováním soli a přípravou perorální farmaceutické kompozice na její bázi, jako je například krystaličnost (například zda je látka krystalická nebo amorfní, stupeň krystaličnosti, zda jsou krystaly bezvodé nebo hydratované), toxicity, hygroskopičnosti, stability a morfologie. Na základě tohoto hodnocení byla jako látka, která vykazuje nej lepší rovnováhu požadovaných vlastností, určena sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou. Při další studii se zjistilo, že sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5 - fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl -ΙΗ-pyrrol- 3-karboxamidu s kyselinou jablečnou krystaluje v několika krystalických formách.

Předmětem vynálezu jsou způsoby výroby krystalických forem obsahujících sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro -2-oxo-3H-indol- 3-y1iden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou a identifikace těchto krystalických forem. Dále je popsána příprava bezvodých krystalů obsahujících sůl s kyselinou jablečnou podle vynálezu. V řadě aplikací má lepší vlastnosti bezvodá krystalická forma I.

Krystalická forma I

V jednom provedení se sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou připraví ve formě bezvodých krystalů (například krystalická forma I). Bezvodá krystalická forma I je termodynamicky stabilnější než jiné krystalické formy (například krystalická forma II). Při jednom způsobu je krystalickou formu I možno připravovat například tak, že se vyvolá krystalizace soli s kyselinou jablečnou z přesyceného roztoku za podmínek krystalizace krystalické formy I.

Pod pojmem podmínky krystalizace krystalické formy I se rozumí krystalizační podmínky, při nichž se získá termodynamická krystalická forma (například krystalická forma I). Takové podmínky jsou obvykle označovány jako podmínky pomalé krystalizace. Odborník v tomto oboru je schopen podmínky krystalizace krystalické formy I vytvořit volbou jednoho či více faktorů, jako je například rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku nejvýše asi 100°C, výhodněji nejvýše asi 50°C, ještě výhodněji nejvýše asi 25°C, a nejvýhodněji asi 0°C; rychlost chlazení nejvýše asi 50°C za hodinu, výhodněji nejvýše asi 25°C za hodinu, ještě výhodněji nejvýše asi 2°C za hodinu, a nejvýhodněji asi 0°C za hodinu; žádné zaočkování; poměr přesycenosti nejvýše asi 10, výhodněji nejvýše asi 5, a nejvýhodněji nejvýše asi 1,5; žádné srážedlo; a/nebo jejich kombinaci.

Jako rozpouštědla užitečná pří přípravě krystalizačního roztoku je možno například uvést acetonitril, methanol, ethanol, isopropylalkohol, toluen, n-butanol, tetrahydrofuran, N,N-dimethylformamid, aceton, vodu a jejich směsi.

Jiným způsobem je krystalickou formu I možno připravovat například tak, že se získá suspenze krystalické formy II v rozpouštědlech, v nichž je krystalická forma II v podstatě rozpustná. Pod pojmem v podstatně rozpustná se rozumí, že krystal je přednostně v rozpouštědle při teplotě místnosti (například při asi 15 až asi 30°C) rozpustný v koncentracích alespoň asi 0,1 % hmotn., výhodněji alespoň asi 1 % hmotn., a nejvýhodněji alespoň asi 10 % hmotn. Krystal je popřípadě možno v uvedené koncentraci při teplotě místnosti v uvedeném rozpouštědle rozpustit.

Jako rozpouštědla je možno uvést například acetonitril, ethanol, methanol a jejich směsi.

Krystalická forma II

V jiném provedení se sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou připraví v další krystalické formě (například krystalické formě II). Krystalická forma II je užitečná například jako meziprodukt při přípravě bezvodé krystalické formy I.

Krystalickou formu II je možno připravovat například tak, že se vyvolá krystalizace soli s kyselinou jablečnou z přesyceného roztoku za podmínek krystalizace krystalické formy

II.

Pod pojmem podmínky krystalizace krystalické formy II se rozumí krystalizační podmínky, za nichž se získá krystalická forma odlišná od termodynamické formy. Takové podmínky jsou obvykle označovány jako podmínky rychlé krystalizace.

Odborník v tomto oboru je schopen podmínek krystalizace krystalické formy II dosáhnout volbou jednoho či více faktorů, jako je například rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku přednostně alespoň asi 25°C, výhodněji alespoň asi 50°C, a nejvýhodněji alespoň asi 100°C; rychlost chlazení přednostně alespoň asi 25°C za hodinu, výhodněji alespoň asi 100°C, a nejvýhodněji alespoň asi 300°C;

zaočkování; poměr přesycenosti přednostně alespoň asi 2, výhodněji alespoň asi 5, a nejvýhodněji alespoň asi 10; přítomnost srážedla; a/nebo jejich kombinace.

Jako rozpouštědla užitečná při přípravě krystalizačního roztoku je například možno uvést methanol, vodu, směsi tetrahydrofuranu a vody a jejich směsi.

	• 4	•	4	44	4
[·«	♦ 4	4 4	44	4 '4	4
4	4 4		4	4 4	‘4	4
4	♦ 4 4	•	4	• 4 4	4	4 4 4
•	4 4		4	4 4		4'
4 4 4	4 4	;4 4 4	··«	4 4		4

Prášková rentgenová difrakce (PXRD)

Krystalické organické sloučeniny tvoří velký počet atomů, které jsou uspořádány s trojrozměrnou periodicitou. Strukturální periodicita normálně vykazuje příznačné fyzikální vlastnosti, jako jsou výrazné, jednoznačné znaky spektra u většiny spektroskopických zkušebních metod (jako je například rentgenová difrakce, infračervená NMR, NMR v pevné fázi) . Za jednu z nej citlivějších metod stanovení krystaličnosti pevných látek je považována rentgenová difrakce (XRD). Krystaly poskytují jednoznačná difrakční maxima, která vznikají na specifických úhlech odpovídajících mezirovinným vzdálenostem krystalové mřížky, jak jsou vypočteny pomocí Braggovy rovnice. Oproti tomu amorfní látky toto dlouhodosahové uspořádání nevykazují. Často obsahují další objem mezi molekulami, jak je tomu u kapalného skupenství. Amorfní pevné látky vzhledem k absenci dlouhodosahového uspořádání periodické krystalické mřížky normálně vykazují XRD difraktogramy bez zvláštních znaků se širokými difúzními halo.

Práškové rentgenové difrakce se doloženě používá při charakterizaci různých krystalických forem organických sloučenin (například sloučenin užitečných ve farmaceutických kompozicích). Viz například US patent č. 5 504 216 (Holohan et al.), 5 721 359 (Dunn et al.), 5 910 588 (Wangnick et al.), 6 066 647 (Douglas et al.), 6 225 474 (Matsumoto et al.), 6 239 141 (Allen et al.), 6 251 355 (Murata et al. ) , 6 288 057 (Harkness), 6 316 672 (Stowell et al.), 6 329 364 (Truleau) a US patentové přihlášky č. 2001/0003752 (Talley et al.), 2002/0038021 (Bartoň et al) a 2002/0045746 (Bartoň et al.).

Krystalickým látkám se dává přednost v řadě farmaceutických aplikací. Krystalické formy jsou obvykle termodynamicky stabilnější než amorfní formy téže látky. Tato termodynamická stabilita se přednostně odráží v nižší rozpustnosti a lepši fyzikální stabilitě krystalické formy. Pravidelné uspořádání molekul v krystalické pevné látce přednostně znemožňuje zabudování chemických nečistot. Krystalické látky tudíž obvykle vykazují vyšší chemickou čistotu než jejich amorfní protějšky. Uspořádáni v krystalické pevné látce obvykle obvykle molekuly udržuje v dobře definovaných polohách v krystalické mřížce a snižuje pohyblivost molekul, která je nezbytným předpokladem chemických reakci. Krystalické pevné látky, až na několik evidentních výjimek, jsou chemicky stabilnější než amorfní pevné látky o stejném molekulárním složení. Krystalické formy soli N- [2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou popsané v tomto textu přednostně vykazují jednu nebo více z uvedených výhodných chemických a/nebo fyzikálních vlastností.

Krystalické formy soli N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5- fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou popsané v tomto textu přednostně vykazují charakteristické práškové rentgenové difrakční profily. Například bezvodé krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l, 2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol3-karboxamidu s kyselinou jablečnou je přednostně možno odlišit od jiných krystalických forem obsahujících sůl s kyselinou jablečnou popsanou v tomto textu na základě přítomnosti charakteristických difrakčních píků. Charakteristickými difrakčními píky jsou v tomto textu píky zvolené z nej intenzivnějších píků pozorovaných v difraktogramu. Přednostně jsou charakteristické píky zvoleny z asi 20 nejintenzivnějších píků, výhodněji z asi 10 nejintenzivnějších píků, a nejvýhodně ji z asi 5 nej intenzivnějších píků v difraktogramu.

• 9

Na obr. 1 a obr. 2 jsou znázorněny práškové rentgenové difraktogramy krystalické formy I (obr. 1) a formy II (obr. 2) soli N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou. V tabulce 1 je uveden seznam nej intenzivnějších píků pro každý PXR difraktogram v rozmezí 2 až 35 stupňů dva théta. Volná báze, krystalická forma I a krystalická forma II jsou snadno rozlišitelné na základě jedinečných PXR difraktogramů.

V přednostním provedení bezvodý krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou (například krystalická forma I) vykazuje charakteristické difrakčni píky při asi 13,2 a 24,2 stupně dva théta, výhodněji při asi 13,2, 19,4, 24,2 a 25,5 stupně dva théta, - a nejvýhodněji vykazuje charakteristické difrakčni píky uvedené v tabulce 1 pro krystalickou formu I.

V přednostním provedení krystalická forma II soli N-[2- __ -(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou -vykazuje charakteristické difrakčni píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva théta, výhodněji při asi 3,0, 12,1, 14,5 a 27,7 stupně dva théta, a nejvýhodněji vykazuje charakteristické difrakčni píky uvedené v tabulce 1 pro krystalickou formu II.

• 9 '9 ;· <9 9

9999

Krystalická forma I	Krystalická forma II
Dva théta [°]	Relativní intenzita	Dva théta [°]	Relativní intenzita
11,39	7	3,02	100
11,90	7	5,93	12
13,16	82	7,61	18
15,92	27	9,26	7
16,79	25	12,08	32
17,18	24	14,54	42
19,40	76	17,54	19
20,30	20	19,46	28
21,26	³¹	23,36	54
21,68	28	24,77	28
22,13	48	27,71	80
22,91	21
24,17	100
25,46	79
26,06	23
26,96	26
27,56	28
32,27	13
32,93	17
34,43	23

Čistota a stabilita v pevném skupenství

Čistota krystalické formy I soli N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-iH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou

jablečnou se vyhodnocuje vysokotlakou kapalinovou chromatografií (HPLC). Výsledky ukazují více než asi 98% (plocha) čistotu a méně než asi 2 % (plocha) detekovaných nečistot (tabulka 2) .

Také byly provedeny stabilitní studie krystalické formy I soli N-[2-(diethylamino)-ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo3H-indol-3-yliden)-methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3karboxamidu s kyselinou L-jablečnou v pevném skupenství (viz tabulka 2). Čtyřtýdenní data po stárnutí při 60°C/relativní vlhkosti okolí, 60°C/75% relativní vlhkosti a 80°C/relativní vlhkosti okolí neukazují významnou degradaci. Prášková rentgenová difrakce dvoutýdenních vzorků také nesvědčí o změně v krystalické formě.

Tabulka 2

Stabilita krystalické formy I na základě HPLC analýzy

Stav	Čistota	Nečistoty celkem
	[% (plocha)]	[% (plocha)]
Výchozí	99,7	1,5
2 týdny při 60°C/RV okolí	98,2	1,1
2 týdny při 60°C/75% RV	98,2	1,2
2 týdny při 80°C/RV okolí	99,5	1,2
4 týdny při 60°C/RV okolí	100,4	1,2
4 týdny při 60°C/75% RV	100,1	2,2
4 týdny při 80°C/RV okolí	98,0	3,1

RV = relativní vlhkost

Údaje o sorpci vlhkosti

Údaje o sorpci vlhkosti krystalické formy I a II soli N[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H19

-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou při 25°C jsou znázorněna na obr. 3. Krystaličtější polymorf, krystalická forma I, je méně hygroskopický - při relativní vlhkosti 0 až 90 % absorbuje méně než 0,5 % vody. Méně krystalický polymorf, krystalická forma II, je velmi hygroskopický - při relativní vlhkosti 0 až 90 % absorbuje více než 15 % vody.

Termická data

Data diferenciální skanovací kalorimetrie jsou znázorněna na obr. 4. Bezvodá krystalická forma soli N-[2 -(diethylamino)ethyl]-5-((5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou taje při asi 196°C, zatímco krystalická forma II taje při asi 181°C. Jevy pozorované po zahájení tání naznačují, že pravděpodobně dochází k určitému rozkladu, který souvisí s táním. Přesné tavné teplo tedy nebylo možno přímo změřit.

Data TGA krystalické formy I (nejsou znázorněna) neukazují významný úbytek hmotnosti až do teploty tání, což svědčí o nepřítomnosti zbytkového rozpouštědla a/nebo vody zadržené v krystalech.

Podávání a farmaceutické kompozice

Krystaly podle vynálezu je možno podávat humánním pacientům jako takové nebo je lze podávat ve farmaceutických kompozicích, v nichž jsou tyto krystaly smíseny s vhodnými nosiči nebo excipienty. Způsoby formulace a podávání léčiv jsou popsány například v Remington's Pharmacological Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, USA, poslední vydání.

* <

• · · • ···

Pod pojmem podávání se rozumí dodávka krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi organismu za účelem prevence nebo léčeni poruchy související s PK.

Jako neomezující příklady podávání lze uvést podávání perorální, rektální, transmukusální nebo intestinální nebo intramuskulární, subkutánní, intramedulární, intrathékální, přímé intraventrikulární, intravenosní, intravitreální, intraperitoneální, intranasální nebo intraokulární injekční podávání. Přednost se dává podávání perorálnímu a parenterálnímu.

Alternativně je krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi možno podávat lokálně, a nikoliv systemicky, například injekcí krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi do solidního nádoru, často ve formě depotu nebo formulace s dlouhodobým uvolňováním.

Léčivo je možno také podávat pomocí systému pro cílenou dodávku, například ve formě liposomů potažených specifickou protilátkou proti nádoru. Liposomy budou cílené a budou vychytávány selektivně nádorem.

Farmaceutické kompozice podle vynálezu lze připravovat způsoby, které jsou dobře známé, například obvyklými postupy míšení, rozpouštění, granulace, dražování, rozmělňování, emulgace, zapouzdřování, zachycování nebo lyofilizace.

Farmaceutické kompozice pro použití podle tohoto vynálezu lze formulovat obvyklým způsobem za použití jednoho nebo více fyziologicky vhodných nosičů, včetně excipientů a pomocných látek, které usnadňují zpracování krystalů podle vynálezu na ···· · · ♦ · ♦ ···· ··· · · ··« ··· ·· ··· ·*· ·· · přípravky s farmaceutickým využitím. Konkrétní formulace závisí na zvoleném způsobu podávání.

V případě injekcí je krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi možno zpracovávat na vodné roztoky, přednostně ve fyziologicky kompatibilních pufrech, jako jsou Hanksův roztok, Ringerův roztok nebo fyziologické solné pufry. Při formulaci transmukosálnich přípravků se používá smáčedel, která jsou vhodná vzhledem k bariéře, kterou mají proniknout. Taková smáčedla jsou obecně známá.

Krystaly podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jejich bázi je za účelem perorálního podávání možno formulovat za použití dobře známých farmaceuticky vhodných nosičů. Takové nosiče umožňují krystaly podle vynálezu formulovat do podoby tablet, pilulí, pastilek, dražé, tobolek, kapalin, gelů, sirupů, suspenzí apod. určených pro perorální podání pacientovi. Farmaceutické přípravky pro perorální podávání je možno připravovat za použití tuhého excipientu tak, že se vzniklá směs popřípadě rozdrobní a v případě potřeby po přidání jiných vhodných pomocných látek zpracovává na granule, čímž se získají tablety nebo jádra dražé. Jako užitečné excipienty je zejména možno uvést plniva, jako cukry, jako laktosu, sacharosu, mannitol nebo sorbitol, celulosové přípravky, jako například kukuřičný škrob, pšeničný škrob, rýžový škrob a bramborový škrob a jiné látky, jako želatinu, tragant, methylcelulosu, hydroxypropylmethylcelulosu, sodnou sůl karboxymethylcelulosy a/nebo polyvinylpyrrolidon (PVP). Pokud je to žádoucí, lze přidat rozvolňovadla, jako zesífovaný polyvinylpyrrolidon, agar nebo kyselinu alginovou. Také lze použít soli, jako je alginát sodný.

Jádra dražé se opatřují vhodnými obaly. Pro tento účel lze použít koncentrovaných cukerných roztoků, které popřípadě

ΦΦ φ Φ φ Φ φ Φ φ φ Φ ··· φφ φφ φ

• · φφ φφφ • φ φφφφ • φ · φ φφφφφ • φ φφφ φφφ φφφ ·· φ obsahují arabskou gumu, mastek, polyvinylpyrrolidon, gel

Carbopol, polyethylenglykol a/nebo oxid titaničitý, lakové roztoky a vhodná organická rozpouštědla nebo rozpouštědlové směsi. K obalům tablet nebo dražé lze přidat barviva nebo pigmenty, které slouží k identifikaci nebo charakterizaci různých kombinací účinných dávek.

Jako farmaceutické kompozice, které lze podávat perorálně, je možno uvést dvoudílné zasouvací želatinové tobolky a měkké uzavřené želatinové tobolky, které obsahují změkčovadla, jako glycerol nebo sorbitol. Dvoudílné zasouvací tobolky mohou účinnou přísadu obsahovat ve směsi s plnivem, jako laktosou, pojivém, jako škrobem a/nebo lubrikantem, jako mastkem nebo stearanem hořečnatým, a popřípadě stabilizátory. V měkkých tobolkách jsou krystaly přítomny ve formě roztoků nebo suspenzí ve vhodných kapalinách, jako mastných olejích, kapalném parafinu nebo kapalných polyethylenglykolech. Také do těchto formulaci lze přidávat stabilizátory.

Tobolky mohou být ^baleny do hnědých skleněných nebo plastových lahviček, které krystaly podle jvynálezu nebo ____________________ farmaceutické kompozice na jejich bází chrání před světlem. Nádobky obsahující účinnou tobolkovou formulaci musí být skladovány při řízené teplotě (například asi 15 až asi 30°C).

Při inhalačním podávání se krystal podle vynálezu nebo farmaceutická kompozice na jeho bázi účelně dodává ve formě aerosolového spreje uvolňovaného z tlakovky nebo rozmlžovače, které obsahují vhodný hnací plyn. Jako neomezující příklady vhodných hnacích plynů je možno uvést dichlordifluormethan, trichlorfluormethan, dichlortetrafluormethan nebo oxid uhličitý. V případě tlakovaných aerosolů lze dávkovači jednotku regulovat ventilem uvolňujícím odměřené množství. Také lze připravovat tobolky a patrony, například želatinové, • · « · ·

kterých se používá v inhalátorech nebo insuflátorech a které obsahují směs krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi s vhodným práškovým základem, jako je laktosa nebo škrob.

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi lze také formulovat pro parenterální podávání, například pomocí injekčního bolu nebo kontinuální infuse. Injekční formulace mohou být přítomny v jednotkových dávkovačích formách, například ampulích nebo nádobách obsahujících větší počet dávek s přidanými konzervačními činidly. Kompozice mohou mít formu suspenzí, roztoků nebo emulzí v olejovitých nebo vodných vehikulech a mohou obsahovat formulační přísady, jako suspenzní, stabilizační a/nebo disperzní činidla.

Farmaceutické kompozice k parenterálnímu podávání obsahují vodné roztoky vodorozpustné formy krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi. Kromě toho je možno připravovat suspenze krystalů podle vynálezu nebo kompozic na jejich bázi v lipofilních vehikulech. Jako vhodná lipofilní vehikula lze uvést mastné oleje, jako sezamový olej, syntetické estery mastných kyselin, jako ethyloleát a triglyceridy, nebo látky, jako jsou liposomy. Vodné injekční suspenze mohou obsahovat látky, které zvyšují viskozitu suspenze, jako je sodná sůl karboxymethylcelulosy, sorbitol nebo dextran.

Suspenze také popřípadě může obsahovat vhodná stabilizátory a/nebo jiná činidla, která zvyšují rozpustnost krystalů podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jejich bázi, a tak umožňují přípravu vysoce koncentrovaných roztoků.

Účinná přísada také může být ve formě prášku určeného pro přípravu přípravku před aplikací za použití vhodného vehikula, například sterilní apyrogenní vody.

• · · «9

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi lze také formulovat na rektální kompozice, jako čípky nebo retenční nálevy. Při tom se používá obvyklých čípkových základů, jako jsou kakaové máslo nebo jiné triglyceridy.

Kromě více popsaných formulací, lze krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi také formulovat jako depotní přípravky. Takové dlouhodobě působící formulace je možno podávat implantací (například subkutánní nebo intramuskulární) nebo pomocí intramuskulárních injekcí.

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi lze za tímto účelem formulovat pomocí vhodných polymerních nebo hydrofobních látek (například v podobě emulze ve farmakologicky vhodném oleji), ionexových pryskyřic nebo jako špatně rozpustný derivát.

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi je dále možno dodávat pomocí systému s dlouhodobým uvolňováním, jako jsou semipermeabilní matrice z_.pevných_________________________ hydrofobních polymerů obsahující terapeutické činidlo. Jsou zavedené různé látky s dlouhodobým uvolňováním a odborníkům v tomto oboru jsou dobře známé. Tobolky s dlouhodobým uvolňováním mohou, v závislosti na své chemické povaze, uvolňovat sůl nebo farmaceutickou kompozici na její bázi po dobu několika týdnů až více než 100 dní. V závislosti na chemické povaze a biologické stabilitě terapeutického činidla lze využít dalších stragegií stabilizace proteinů.

Farmaceutické kompozice také mohou obsahovat vhodné pevné nebo gelové nosiče nebo excipienty. Jako neomezující příklady takových nosičů nebo excipientů lze uvést uhličitan vápenatý,

e	· ·	♦	• · ·	•
« 9	•	•	•	•	«	9
• ·	• *		«	• ·	•	9
• ·	•	4	•	«	9
e 9 ·	• ·	• · ·	• · ·	• ·

fosforečnan vápenatý, různé cukry, škroby, deriváty celulosy, želatinu a polymerní látky, jako polyethylenglykoly.

Jako farmaceutické kompozice vhodné pro použití v rámci tohoto vynálezu je možno uvést kompozice, které obsahuji účinné přísady v množství, které je dostatečné pro dosažení zamýšleného účelu, například modulace aktivity PK nebo léčení nebo prevence poruchy související s PK.

Konkrétněji terapeuticky účinné množství znamená množství krystalů podle vynálezu nebo farmaceutických kompozic na jejich bázi, které je účinné při prevenci, potlačování nebo zmírňování symptomů choroby nebo prodlužování doby přežití léčeného subjektu.

Stanovení terapeuticky účinného množství, zejména ve světle tohoto popisu, je v rozsahu odborné rutiny.

Terapeuticky účinné množství či dávku kteréhokoliv krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi lze nejprve odhadnout ze stanovení^v buněčných kulturáchPoté je možno formulovat dávku pro použití na zvířecích modelech tak, aby se dosáhlo cirkulující koncentrace v rozmezí, které zahrnuje IC_SOz jak byla stanovená v buněčné kultuře (tj . koncentraci krystalů podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jejich bázi, při níž se dosahuje poloviny maximální inhibice aktivity PK). Takových informací lze pak využít k přesnému stanovení užitečných dávek u člověka.

Toxicitu a terapeutickou efektivnost krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi lze stanovit standardními farmaceutickými postupy v buněčných kulturách nebo na pokusných zvířatech, například tak, že se stanoví IC₅₀ a LD₅₀ (obě hodnoty jsou diskutovány) daného

• · ·	• «	e-9	9
• «	•	•	•	•	4	•
• 9	• ·	•		• 4	•	•
v ·	•	•	•	•	4
• 44	• ·	···	4··	• 9

krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi. Údaje získané z těchto stanovení na buněčných kulturách a zvířatech se použijí při formulaci rozmezí dávek pro člověka. Dávka může kolísat v závislosti na použité aplikační formě a způsobu podávání. Konkrétní formulaci, způsob podávání a dávku může volit ošetřující lékař s ohledem na stav pacienta. (Viz například Fingl et al., 1975, The Pharmacological Basis of Therapeutics, kap. 1, str. 1.)

Interval a výši dávek lze individálně přizpůsobit tak, aby se dosáhlo koncentrace aktivní látky v plasmě, která je dostatečná z hlediska udržení modulačních účinků na kinasu.

Tyto koncentrace v plasmě se označují jako minimální účinná koncentrace (MEC). MEC se u každého krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi liší, ale lze ji odhadnout na základě dat získaných in vitro. Například je za použití popsaných stanovení možno zjistit koncentraci potřebnou pro dosažení 50 až 90% inhibice kinasy. Dávky potřebné pro dosažení MEC budou kolísat v závislosti na individuálních charakteristikách a způsobu podávání. Koncentrace v plasmě lze stanovit pomocí HPLC stanovení nebo biologických stanovení.

Na základě hodnoty MEC lze také stanovit intervaly dávek. Krystal podle vynálezu nebo farmaceutická sůl na jeho bázi by se měly podávat v režimu, který zajistí udržení koncentrace v plasmě, která je vyšší než MEC, po 10 až 90 % času, přednostně 30 až 90 % času, a nejvýhodněji 50 až 90 % času.

Při lokálním podávání nebo selektivním vychytávání účinná místní koncentrace nemusí souviset s koncentrací v plasmě. V těchto případech je správné dávkové množství a interval podávání možno stanovit jinými způsoby, které jsou v tomto oboru známé.

-$L^!li

Množství podávané kompozice bude samozřejmě záviset na léčeném subjektu, závažnosti postižení, způsobu podávání, úsudku předepisujícího lékaře apod.

V případě potřeby kompozice mohou být přítomny v balení nebo dávkovacím zařízení, jako je kit schválený US FDA, které mohou obsahovat jednu nebo více jednotkových dávkovačích forem obsahujících účinnou přísadu. Balení například může obsahovat kovovou nebo plastovou folii, jak je tomu v případě blistrového balení. Balení nebo dávkovači zařízení mohou být doprovázeny instrukcemi a také písemnou informací (která je spojena s obalem ve formě předepsané státní institucí regulujícím výrobu, použití nebo distribuci léčiv), která reflektuje souhlas této instituce s formou kompozice nebo její aplikací v humánní nebo veterinární medicíně. Takové sdělení například může být na etiketě schválené US FDA pro preskripční léčiva nebo schválené vložené informaci. Kompozice obsahující krystal podle vynálezu formulované za použití kompatibilního nosiče je možno umístit do vhodné obalu s informací o léčbě a indikacích. Jako indikované stavy je například možno uvést léčení nádoroxrých onemocnění, inhibici antiogeneze, léčení fibrosy, diabetes apod.---------------------------------------------

Další aspekt tohoto vynálezu představují kombinace krystalu podle vynálezu nebo farmaceutické kompozice na jeho bázi s jinými chemoterapeutickými činidly k léčení chorob a poruch uvedených výše. Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi je například možno kombinovat s alkylačními činidly, jako je fluoruracil (5-FU) samotný nebo v další kombinaci s leukovorinem; nebo jinými alkylačními činidly, jejichž neomezujícími příklady jsou jiná pyrimidinová analoga, jako UFT, kapecitabin, gamcitabin a cytarabin, alkylsulfonáty, jako je například busulfan (používaný při léčení chronické granulocytové leukemie), improsulfan, a i

piposulfan; aziridiny, jhko je například benzodepa, karbochon,

meturedepa a uredepa; ethyleniminy a methylmelaminy, jako je například altretamin, triethylenmelamin, triethylenfosforamid, triethylenthiofosforamid a methylolmelamin; a analoga dusíkatého yperitu, jako je například chlorambucil (používaný při léčení chronická lymfocytární leukémie, primární makroglobulinémie a non-Hodgkinského lymfomu), cyklofosfamid (používaný při léčení Hodgkinovy choroby, mnohačetného myelomu, neuroblastomu, rakoviny prsu, rakoviny vaječníků, rakoviny plic, Wilmova nádoru a rhabdomyosarkomu), estramustin, ifosfamid, novembrichin, prednimustin a uramustin (používaný při léčení primární thrombocytosy, non-Hodgkinských lymfomů, Hodgkinovy choroby a rakoviny vaječníků) a triaziny, jako je například dakarbazin (používaný při léčení sarkomů měkkých tkání).

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi je také možno používat v kombinaci s jinými antimetabolickými chemoterapeutickými činidly, jejichž neomezujícími příklady jsou analoga kyselina listové, například metotrexat (používaný při léčení akutní lymfocytární leukémie, choriokarcinomu, mykosis fungoides, rakoviny prsu, hlavy a krku a ©s-teogenn-ích-^_sarkomůj’'a~pterbp'ter'iň; a purinová analoga, jako je merkaptopurin a thioguanin, které nacházejí použití při léčení akutní granulocytární, akutní lymfocytární a chronické granulocytární leukemie.

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi také lze používat v kombinaci s chemoterapeutiky na bázi přírodních produktů, jejichž neomezujícími příklady jsou alkaloidy brčálu, jako je například vinblastin (používaný při léčení rakoviny plic a varlat), vinkristin a vindesin; epipodofylotoxiny, jako je například etoposid a teniposid, které se používají při léčení rakoviny varlat a Kaposiho sarkomu; antibiotická chemoterapeutika, jako je například daunorubicin, doxorubicin, epirubicin,imitomycin (používaný při léčení •· · 4 · · 4 « • 44 44 444 444 44 4 rakoviny žaludku, čípku, tračníku, prsu, žlučníku a slinivky), daktinomycin, temozolomíd, pliamycin, bleomycin (používaný při léčení rakoviny kůže, jícnu a urogenitálního traktu); a enzymatická chemoterapeutika, jako je L-asparaginasa.

Kromě toho je krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi také možno používat v kombinací s komplexními sloučeninami platiny (cisplatinou atd.), substituovanými močovinami, jako je hydroxymočovina; methylhydrazinovými deriváty, jako je například prokarbazin; adrenokortiálními supresivy, jako je například mitotan, aminoglutethimid; a hormony a antagonisty hormonů, jako jsou adrenokortikoidy (například prednison), progestiny (například hydroxyprogesteron kaproát); estrogeny (například diethylstilbesterol),· antiestrogeny, jako je tamoxifen; androgeny, jako je testosteron propionát; a inhibitory aromatasy, jako je anastrozol.

Krystal podle vynálezu nebo farmaceutickou kompozici na jeho bázi také mohou být účinné v kombinaci s mitoxántronem nebo paklitaxelem při léčení solidních rakovinných nádorů nebo leukémií, jejichž neomezujícím příkladem je akutní myelogenní (nelymfocytová) leukémie.-----------------------------------------------------------------------------------------Vynález je blíže objasněn v následujících příkladech provedení. Tyto příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Rentgenové difraktogramy (XRD) byly stanoveny za použití difraktometru Scintag X2 (Thermo ARL, Ecublens, Švýcarsko) vybaveného goniometrem théta-théta. Teploty tání byly stanoveny za použití diferenciálního skanovacího kalorimetru TA Instruments 2920 (TA Instruments, New Castle, DE, USA) se standardními miskami s obrubou při rychlosti zahřívání 10°C/min. Hygroskopicita byla hodnocena gravimetricky při *

dynamické zkoušce sorpce vlhkosti (DMSG) za použiti mikroanalytických vah s řízenou atmosférou (Pharmacia Corp., Kalamazoo, MI, USA). Všechny chemikálie pocházejí od firmy Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, USA, pokud není uvedeno jinak. N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid se připraví podobným způsobem, jaký je popsán v příkladu 80 PCT mezinárodní přihlášky WO 01/60814 (Tang et al.) .

Postupy

Prášková rentgenová difrakce (XRD)

Prášková rentgenová difrakce se provádí za použití Systému Scintag X2 Advanced Diffraction System se software Scintag DMS/TN 1.30a a Microsoft Windows NT 4.0. Tento využívá Cu zdroje záření udržovaného při 45kV a 40 MA, čímž se získá CuKc/i emise o vlnové délce 0,15406 nm, a pevný detektor chlazený Peltierem. Plocha průřezu svazku se reguluje pomocí výchýlení trubice a protirozptylovými štěrbinami 2 a 4 mm a výstupní a prctirozptylovou štěrbinou detektoru o šířce 0,5 a 0,2 mm.

Data se shromažďují v rozmezí 2 až 35° dva-théta za použití snímacího kroku 0,03°/bod s 1 s/časový krok. Při pokusech se používá kulatých misek Scintag z nerezové oceli s horním vkládáním vzorku s vložkami o průměru 12 mm. Nerozplněné léčivo se navzorkuje v takovém stavu, v jakém je, a bez jakékoliv přípravy umístí do misky pro vzorek. U některých speciálních vzorků se léčivo před pokusem také ručně rozdrobní za použití misky a tloučku. Data se analyzují za použití programu Origin 6.0 (Microcal Software, Norhamptom, MA, USA).

Gravimetrie při dynamické zkoušce sorpce vlhkosti (DMSG)

DMSG isotermy se získají za použití mikroanalytických vah s řízenou atmosférou a proměnnou teplotou. Použije se asi 10 ·· · · mg vzorků, které se nechají ve stavu, v jakém byly dodány. Vlhkost se postupně po 3 % nastavuje na 0 až 90 % relativní vlhkosti (RV). Hmotnost se stanovuje každé dvě minuty. RV se mění na následující hodnotu, když je hmotnost vzorku stabilní, tj. v rámci 0,5 gg během 480 sekund. Soubor dat se kontroluje v programu Visual Basic a informace se exportují do tabulkového procesoru Excel.

Termická analýza

Data z diferenciální skanovací kalorimetrie (DSC) se získají tak, že se napráškovaný vzorek obrubováním uzavře v hliníkové DSC misce. Vzorků se používá ve stavu, v jakém byly dodány a jejich velikost je asi 1 mg. Teploty se typicky snímají do 320°C rychlostí 10°C/min. Používá se kalorimetru TA Instruments 2920. Analýza dat se provede v programu TA Universal Analysis VI. 1 OB.

Data z termogravimetrické analýzy (TGA) se získají za použití TA přístroje TGA 2950. Vzorky se ekvilibrují při 25°C s rosným bodem 20°C po dobu 30 minut a poté se spustí teplotní program. Teplotní změna je 10°C/min, ale snímání se provádí za

-------podmínek-- vysokého—r o z±i-šení- -TA-.—Ten to-po stup- zpomal uje—--------- rychlost snímání v případě, že dojde k přechodu, což zlepšuje schopnost zařízení rozlišit nezávislé jevy spojené s hmotnostním úbytkem.

Příklad 1

Příprava bezvodé krystalické formy I soli N-[2 -(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou

L-j ablečnou e e • · · · · • · · · ··· • · * ·

Způsob A

N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l, 2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid (130 mg, 0,326 mmol) se přidá ke 20 ml methanolu. Výsledná směs se míchá a přidá se k ní kyselina L-jablečná (47,2 mg, 0,352 mmol). Dojde k rychlému rozpuštění všech pevných látek. Methanol se odstraní za sníženého tlaku a získá se málo krystalická .oranžová pevná látka. K této látce se přidá acetonitril (5 ml) a výsledná suspenze se asi 10 minut za míchání zahřívá a poté za míchání nechá zchladnout na teplotu místnosti. Krystaly se odfiltrují a 'vysuší. Získá se 149 mg pevné látky (86% výtěžek), krystalické formy I.

Způsob B

N-[2-(Diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid je možno před přípravou soli s kyselinou L-jablečnou přečistit promytím vodným roztokem o pH = 11. Při 80°C se připraví roztok volné báze ve směsi n-butanolu a vody v poměru 80 : 20 (objemově). Směs se ochladí na 20°C a 1 hodinu míchá, přičemž do'j'dé-“k “výřažné krysitalizaclT Vždrek^_'sě“ analýzu je PXRĎ ,’~prT níž se zjistí, že byla získána krystalická forma I. Po odfiltrování, vysušení a rozdrobnění krystalů se dosáhne 99% výtěžku.

Příklad 2

Příprava krystalické formy II soli N-[2-(diethylamino)ethyl]- 5 -[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl] -2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou

Krystaly krystalické formy I soli N-[2-(diethylamino)ethyl] -5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou (25 mg) se přidají do tetrahydrofuranu (2 ml). Ke

vzniklé směsi se poté přidá voda (250 μΐ). Výsledná směs se zahřívá, dokud se krystaly nerozpustí. Rozpouštědlo se přes noc odpaří. Získají se krystaly krystalické formy II.

Příklad 3

Příprava bezvodé krystalické formy I soli N-[2 -(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou

L-jablečnou z krystalické formy II

Ke krystalické formě II (150 mg) se přidá acetonitril (asi ml). Výsledná suspenze se asi 10 minut míchá a poté za míchání nechá zchladnout na teplotu místnosti. Krystaly se odfiltrují a vysuší. Získají se krystaly krystalické formy I.

Příklad 4

Rozpustnost krystalické formy I soli N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou

L-jablečnou ___ Rozpustnost—k-ry-s-fe-a-li-cké-formysol“i^— N^r[T- /diethylamino) ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou při 25°C ve vodě byla stanovena 5 mg/ml. To svědčí o tom, že rozpustnost by neměla představovat omezující faktor biologické dostupnosti této látky.

Všechny citace publikací jsou uváděny náhradou za přenesení jejich obsahu do tohoto textu.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

01-124-04-Ma

1. Bezvodý krystal obsahuj ící sůl sloučeniny vzorce s kyselinou jablečnou.
2. Krystal podle nároku 1, kde kyselinou jablečnou je kyselina L-jablečná.
3. Bezvodý krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou.

___________4_.__ Krystal--obsa-h-u-j-í-e-í—thyTátrfiňol^ethyl ] - 5 - Γ (5 fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2 a,24,2 stupně dva théta.

5. Krystal podle nároku 4, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2, 19,4, 24,2 a 25,5 stupně dva théta.

6. Krystal podle nároku 5, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky, jak jsou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu I.

7. Krystal podle nároku 4, 2 % hmotnostní vody.

8. Krystal podle nároku 7, % hmotnostního vody.

9. Krystal podle nároku 8, % hmotnostního vody.

který dále obsahuje nejvýše asi který obsahuje nejvýše asi 0,5 který obsahuje nejvýše asi 0,2

10. Krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, který má teplotu tání alespoň asi 190°C.

11. Krystal podle nároku 10, který má teplotu tání alespoň asi 195°C.

12. Krystal podle nároku 10, který dále obsahuje nejvýše asi 2 % hmotnostní vody.

13. Krystal podle nároku 12, který obsahuje nejvýše asi 0,5 % hmotnostního vody.

14. Krystal podle nároku 13 ,_který obsahuj e__nej_výš.e_-asi----------------0,2 % hmotnostního vody.

15. Krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi při asi 3,0 a 27,7 stupně dva théta.

16. Krystal podle nároku 15, který v práškovém rengtenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 3,0, 12,1, 14,5 a 27,7 stupně dva théta.

ec » » · · • · ·· · · · • · ·

17. Krystal podle nároku 16, který v práškovém rengtenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky, jak jsou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu II.

18. Krystal podle nároku 15, který po expozici 80% relativní vlhkosti absorbuje alespoň asi 5 % hmotnostních vody.

19. Krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5[ (5-fluor-l, 2-dihydro-2-oxo-3H-i-ndol-3-yliden)methyl] -2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, který má teplotu tání nejvýše asi 185°C.

20. Krystal podle nároku 19, který při expozici 80% relativní vlhkosti absorbuje alespoň asi 5 % hmotnostních vody.

21. Způsob výroby výroby bezvodého krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-((5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, vyznačující se tím, že zahrnuje stupně, v nichž se smísí kyselina jablečná, N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl -lH-pyrrol- 3 -karboxamid a rozpouštědlo; a vyvolá krystalizace soli za podmínek krystalizace, které zahrnují jeden nebo více faktorů zahrnujících: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku nejvýše asi 100°C; rychlost chlazení nejvýše o asi 50°C za hodinu; žádné zaočkování; poměr přesycenosti nejvýše asi 10; žádné srážedlo; a/nebo jejich kombinaci.

♦ · · «''9 9

9 ·* · ·

22. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že kyselinou jablečnou je kyselina L-jablečná.

23. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že jeden nebo více faktorů zahrnuje: rozdíl mezí výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku nejvýše asi 50°C; rychlost chlazení nejvýše o asi 20°C za hodinu; poměr přesycenosti nejvýše asi 5; a/nebo jejich kombinaci.

24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že jeden nebo více faktorů zahrnuje: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku nejvýše asi 25°C; rychlost chlazení nejvýše o asi 2°C za hodinu; poměr přesycenosti nejvýše asi 1,5; a/nebo jejich kombinaci.

25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že výchozí teplota a konečná teplota krystalizačního roztoků jsou stejné.

26. Způsob podle nároku 21, vyznačující se tím, že rozpouštědlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z acetonitrilu, methanolu, ethanolu, isopropylalkoholu, toluenu, h-bue'áho'lu7'^-tetrahydrofuranu, N,N-dimethylformamidu, acetonu, vody a jejich směsí.

27. Způsob podle nároku 21, vyznačující setím, že bezvodý krystal v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2 a 24,2 stupně dva théta.

28. Krystal podle nároku 27, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2, 19,4, 24,2 a 25,5 stupně dva théta.

9 9 • 9 9 9 • · · ** · · • · ·

9 9·

29. Krystal podle nároku 28, který v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky, jak jsou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu I.

30. Způsob výroby výroby bezvodého krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-di-hydro-2-oxo-3Hindol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-ΙΗ-pyrrol--3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, vyznačující se tím, že zahrnuje stupně, v nichž se krystal obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou uvede do styku s rozpouštědlem, v němž je krystal uváděný do styku v podstatě rozpustný, přičemž krystal uváděný do styku má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva-théta.

31. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že krystal uváděný do styku má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0, 12,1, 14,5 a 27,7 stupně dva théta.

32. Způsob podle nároku 31, vyznačující se tím, že krystal uváděný do styku má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky jak jsou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu II.

33. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že rozpouštědlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z acetonítrilu, ethanolu, methanolu a jejich směsí.

34. Způsob podle nároku 30, vyznačující se tím, že krystal uváděny do styku s rozpouštědlem tvoří suspenzi.

··'·' · * ··· · 9 ··· ···

35 . Způsob podle nároku 34, vyznačuj ící se tím, že dále zahrnuj e míchání suspenze. 36. Způsob podle nároku 34, vyznačuj ící se tím, že dále zahrnuj e zahřívání suspenze. 37. Způsob podle nároku 34, vyznačuj ící se tím, že dále zahrnuje izolaci bezvodého krystalu ze suspenze. 38 . Způsob podle nároku 30, vyznačuj ící se tím, že bezvodý

krystal v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2 a 24,2 stupně dva théta.

39. Způsob podle nároku 38, vyznačující se tím, že bezvodý krystal v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje charakteristické difrakční píky při asi 13,2, 19,4, 24,2 a 25,5 stupně dva théta.

40. Způsob podle nároku 39, vyznačující se tím, že bezvodý krystal v práškovém rentgenovém difraktogramu vykazuje chara_kte.ri.S-tioké-di-f-ra-kG-n-í-p-í-ky7—ja-k- j sou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu I.

41. Způsob výroby krystalu, který obsahuje sůl N-[2-(diethylamino) ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, vyznačující se tím, že zahrnuje stupně, v nichž se smísí kyselina jablečná; N-(2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol-3-karboxamid a rozpouštědlo; a »· « 9 vyvolá krystalizace soli za podmínek krystalizace, které zahrnují jeden nebo více faktorů zahrnujících: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku alespoň asi 25°C; rychlost chlazení o alespoň asi 25°C za hodinu; zaočkování; poměr přesycenosti alespoň asi 2; přítomnost srážedla; a/nebo jejich kombinaci.

42. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že kyselinou jablečnou je kyselina L-jablečná.

43. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že jeden nebo více faktorů zahrnuje: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku alespoň asi 50°C; rychlost chlazení o alespoň asi 100°C za hodinu; poměr přesycenosti alespoň asi 5; a/nebo jejich kombinaci.

44. Způsob podle nároku 43, vyznačující se tím, že jeden nebo více faktorů zahrnuje: rozdíl mezi výchozí a konečnou teplotou krystalizačního roztoku alespoň asi 100°C; rychlost chlazení o alespoň asi 300°C za hodinu; poměr přesycenosti alespoň asi 10; a/nebo jejich kombinaci.

45. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že rozpouštědlo je zvoleno ze souboru sestávajícího z methanolu, vody, směsi tetrahydrofuranu a vody, a jejich směsí.

46. Způsob podle nároku 41, vyznačující se tím, že krystal má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva théta.

47. Způsob podle nároku 46, vyznačující se tím, že krystal má v práškovém rentgenovém difraktogramu charakteristické difrakční píky při asi 3,0, 12,1, 14,5 a 27,7 stupně dva théta.

··

48. Způsob podle nároku 37, vyznačující se tím, že krystal má v práškovém rentgenovém difraktogramů charakteristické difrakčni píky jak jsou uvedeny v tabulce 1 pro krystalickou formu II.

49. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje bezvodé krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-1H-pyrrol-3-karboxamidu s kyselinou L-jablečnou.

50. Kompozice podle nároku 49, vyznačující se tím, že dále obsahuje excipient.

51. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-OXO-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, které v práškovém rentgenovém difraktogramů vykazují charakteristické difrakčni píky při asi 13,2 a 24,2 s_tupně_dya théta_.__________________________________________..

52. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, jejichž teplota tání je alespoň asi 190°C.

53. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2 -oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, které v práškovém rentgenovém difraktogramů vykazují charakteristické difrakčni píky při asi 3,0 a 27,7 stupně dva théta.

54. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje krystaly obsahující sůl N-[2-(diethylamino)ethyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-oxo-3H-indol-3-yliden)methyl]-2,4-dimethyl-lH-pyrrol3-karboxamidu s kyselinou jablečnou, jejichž teplota tání je nejvýše asi 185°C.
4.0 OH- 74 b

Intenzita (impulzy)