NO326508B1 - Krystaller som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor- 2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-1H-pyrrol-3-karboksamid, fremgangsmater for fremstilling av disse og preparater derav - Google Patents

Description

Oppfinnelsens område

Den herværende oppfinnelsen vedrører krystaller og preparater derav, der krystallene inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- lH-pyrrol-3-karboksamid. Den herværende oppfinnelsen vedrører også fremgangsmåter for fremstilling av slike krystaller.

Bakgrunn

PKer er enzymer som katalyserer fosforyleringen av hydroksygrupper på tyrosin-, serin- og treoninresidier på proteiner. Konsekvensene av denne øyensynlig enkle aktiviteten er overveldende: cellevekst, differensiering og formering ved celledeling, d.v.s., at så å si alle aspekter ved cellers liv på en eller annen måte er avhengig av PK-aktivitet. Videre har unormal PK-aktivitet blitt satt i sammenheng med en rekke forstyrrelser fra relativt ikke-livstruende sykdommer som psoriasis til ekstremt ondartede sykdommer som glioblastom (hjernekreft). PKene kan hensiktsmessig bli delt i to klasser, proteintyrosinkinasene (PTKene) og serintreoninkinasene (STKene).

Ett av de viktigste aspektene ved PTK-aktivitet er deres involvering med vekstfaktorreseptorer. Vekstfaktorreseptorer er celleoverflateproteiner. Når de er bundet til en vekstfaktorligand blir vekstfaktorreseptorer konverterte til en aktiv form som påvirker proteiner på den indre overflaten av en cellemembran. Dette fører til fosfory-lering av tyrosinresidier på reseptoren og av andre proteiner, og det fører til dannelsen av komplekser inne i cellen med en mengde cytoplasmiske signalmolekyler, som i sin tur påvirker utallige cellulære responser slik som celledeling, celledifferensiering, cellevekst, uttrykking av metabolske effekter i det ekstracellulære mikromiljøet o.s.v.

Små molekyler som virker som PK-hemmere har blitt identifisert og inkluderer for eksempel 3-pyrrol-substituerte 2-indolinonforbindelser som beskrevet i PCT No. WO 01/60814 (Tang et al.). 3-pyrrol-substituerte 2-indolinonforbindelser inkluderer for eksempel N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid som beskrevet i PCT No. WO 01/60814 (Tang et al.). Denne publikasjonen beskriver derimot ikke noe om fremstillingen av, eller egenskaper ved, spesifikke krystallinske former av salter av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid. Det eksisterer et behov for krystallinske former av slike materialer som har overlegne kjemiske og/eller fysiske egenskaper som er nyttige i applikasjoner med tilførsel av legemidler.

Oppsummering av oppfinnelsen

I ett aspekt tilveiebringer den herværende oppfinnelsen en vannfri krystall som er kjennetegnet ved at den omfatter et eplesyresalt av en forbindelse som har strukturen:

der krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendifrfaksjonsmønster.

Forbindelsen med strukturen vist ovenfor er også kjent som N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid. Eplesyresaltet kan være et salt av D-eplesyre, D,L-eplesyre, L-eplesyre eller kombinasjoner derav. Eplesyresaltet er helst et salt av L-eplesyre. Krystallen har helst karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta, og bedre ved omtrent 13,2, 19,4, 24,2 og 25,5 grader to-teta, og aller helst som fremsatt i tabell 1 for krystallform I, i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster. Helst har krystallen et smeltepunkt på minst omtrent 190 °C og aller helst på omtrent 195 °C. Preparater som inneholder krystallene som er beskrevet her blir også tilveiebrakt. Preparatene inneholder helst en terapeutisk effektiv mengde av krystallene. Eventuelt inneholder preparatene en eksipiens, helst en farmasøytisk akseptabel eksipiens.

I et annet aspekt tilveiebringer den herværende oppfinnelsen fremgangsmåter for fremstilling av en vannfri krystall som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dielylamino)e1yl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, der den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendifrfaksjonsmønster, kjennetegnet ved at den omfatter å : kombinere eplesyre, N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid og et løsningsmiddel, og

indusere krystallisering av saltet ved krystalliseringsbetingelser som omfatter én eller flere faktorer omfattende: en forskjell mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen på maksimalt omtrent 100 °C, en nedkjølingshastighet på maksimalt omtrent 50 °C per time, et supermetningsforhold på maksimalt omtrent 10, ingen fellingsmidler og/eller kombinasjoner derav.

Eplesyren er helst L-eplesyre. Løsningsmiddelet inneholder helst ett eller flere løsningsmidler inkludert for eksempel acetonitril, metanol, etanol, isopropanol, toluen, n-butanol, tetrahydrofuran, N,N-dimetylformamid, aceton, vann og kombinasjoner derav.

I et annet aspekt tilveiebringer den herværende oppfinnelsen en fremgangsmåte for fremstilling av en vannfri krystall som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, der den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster. Fremgangsmåten er kjennetegnet ved at den omfatter å bringe en krystall som består av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid i kontakt med et løsningsmiddel, i hvilket løsningsmiddel krystallen har en løselighet på minst 0,1 % etter vekt ved en temperatur på omtrent 15°C til omtrent 30°C, og der krystallen som bringes i kontakt med løsningsmiddelet har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 3,0 og 27,7 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster.

Løsningsmiddelet inneholder helst ett eller flere løsningsmidler, inkludert, for eksempel, acetonitril, etanol, metanol og kombinasjoner derav. Ved at krystallen bringes i kontakt med løsningsmiddelet dannes helst en tungtflytende blanding, og den tungtflytende blandingen blir helst omrørt og/eller varmet opp. Eventuelt kan den vannfrie krystallen bli fjernet fra den tungtflytende blandingen. Eplesyren er helst L-eplesyre.

Den vannfrie krystallform I er fordelaktig i forhold til krystallform II i mange applikasjoner fordi egenskapene som krystallform I tilveiebringer helst inkluderer for eksempel større termodynamisk stabilitet, høyere krystallinitet og lavere hygroskopisitet enn de respektive egenskapene til krystallform II tilveiebringer.

Utallige faktorer påvirker krystalliseringsbetingelser, og de er velkjente for fagfolk på området. Slike faktorer inkluderer for eksempel: saltets konsentrasjon i

krystalliseringsløsningen, forskjellen, hvis noen, mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen, nedkjølingshastigheten, hvis noen, fordampningshastigheten til løsningsmiddelet, hvis noen, kimtilsetting, supermettingsforhold og tilstedeværelse av et fellingsmiddel. Ved hjelp av beskrivelsen som tilveiebringes her kan en fagperson på området, uten å foreta unødvendig eksperimentering, velge og/eller justere én eller flere passende faktorer slik at nevnte fagpersonen kan komme frem til krystalliseringsbetingelser som tilveiebringer krystallform I og/eller krystallform II.

Sluttlig angår oppfinnelsen et preparat som er kjennetegnet ved at det omfatter krystaller som består av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, der krystallene har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj onsmønster.

Definisjoner:

Som benyttet her refererer "supermettingsforhold" til forholdet mellom konsentrasjonen av materialet i løsning og konsentrasjonen av materialet i en mettet løsning ved krystalliseringstemperaturen.

Som benyttet her refererer "kimtilsetting" til teknikken der en "kim"-krystall tilsettes til krystalliseringsløsningen for å fremme dannelsen av krystaller. Helst er sammensetningen av kimkrystallen den samme som sammensetningen av krystallene som blir dannet.

Som benyttet her betyr "fellingsmiddel" et middel som pleier å indusere krystallisering når det tilsettes i en krystalliseringsløsning. Nyttige fellingsmidler inkluderer for eksempel ikke-løsningsmidler for saltet og løsningene inkludert overskudd av motioner. Som benyttet her er et ikke-løsningsmiddel et løsningsmiddel i hvilket saltet helst har en løselighet på maksimalt 1 vekt %, bedre er maksimalt 0,1 vekt % og aller best er maksimalt 0,01 vekt %.

Som benyttet her betyr "vannfri krystall" en krystall der vann ikke er spesifikt bundet. Vannfrie krystaller inneholder helst ikke vesentlige mengder med vann. Vanninn-holdet kan bli bestemt ved hjelp av fremgangsmåter som er kjent på fagområdet, inkludert for eksempel Karl-Fischer-titreringer. En vannfri krystall inneholder helst maksimalt omtrent 2 vekt % vann, bedre er maksimalt omtrent 0,5 vekt % vann og aller best er maksimalt omtrent 0,2 vekt % vann.

Som benyttet her betyr "krystallinsk" et materiale som har en ordnet, vidtrekkende molekylær struktur. Graden av krystallinitet av en krystallform kan bli bestemt ved hjelp av mange teknikker, inkludert for eksempel pulverrøntgendiffraksj on, fuktighetssorpsjon, differensialskanningskalorimetri, løsningskalorimetri og oppløsnings-egenskaper.

Som benyttet her betyr "mer krystallinsk" at et materiale har en høyere grad av krystallinitet enn materialet det blir sammenlignet med. Materialer med høyere grader av krystallinitet har generelt svært ordnede, vidtrekkende molekylære strukturer med færre feil i krystallstrukturen enn materialer med lavere grader av krystallinitet. Den høyere graden av krystallinitet kan bli bedømt relativt til den andre formen ved hjelp av teknikker som for eksempel inkluderer skarpere refleksjoner i pulverrøntgendiffraksjonsmønsteret, lavere fuktighetssorpsjon for tilsvarende store partikler ved en spesifikk relativ fuktighet, lavere varme ved løsning, høyere varme ved fusjon, langsommere oppløsningshastighet og kombinasjoner derav.

Som benyttet her betyr "mindre krystallinsk" at et materiale har en lavere grad av krystallinitet enn materialet som det sammenlignes med. Materialer med lavere grader av krystallinitet har generelt mindre vidtrekkende orden og flere defekter i krystallstrukturen enn materialer med høyere grader av krystallinitet. Den lavere graden av krystallinitet kan bli bedømt relativt til den andre formen ved hjelp av teknikker som for eksempel inkluderer bredere og/eller færre refleksjoner i pulverrøntgendiffraksjonsmønsteret, høyere fuktighetssorpsjon for partikler av tilsvarende størrelse ved en spesifikk relativ fuktighet, høyere varme ved løsning, lavere varme ved fusjon, raskere oppløsningshastighet og kombinasjoner derav.

Som referert til i den herværende søknaden betyr "stabil" i samlede legemiddel-stabilitetstester at minst omtrent 97 vekt %, helst minst omtrent 98 vekt % og aller helst minst omtrent 99 vekt % av det samlede legemiddelet forblir uforandret etter å ha blitt lagret ved de presiserte forhold i en presisert tidsperiode.

Kort beskrivelse av figurene

Figur 1 er en illustrering av pulverrøntgendiffraksj ons- (PXRD) dataene for krystallform I av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimety 1-1 H-pyrrol-3-karboksamid. Mønsteret er særegent i forhold til andre krystallformer av saltet og den frie basen, og er mer krystallinsk enn krystallform II (for eksempel Figur 2). Figur 2 er en illustrering av pulverrøntgendiffraksj ons- (PXRD) dataene for krystallform II av L-eplesyresaltet avN-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-1 H-pyrrol-3-karboksamid. Mønsteret er særegent i forhold til andre krystallformer av saltet og den frie basen, og er mindre krystallinsk enn krystallform I som understreket av den bredere refleksjonen i pulverrønt-gendiffraksj onsmønsteret (for eksempel Figur 1). Figur 3 er en illustrering av dynamisk fuktighetssorpsjonsgravimetri- (DMSG) sorpsjonsisoterm for fuktighetssorpsjonsprofiler for krystallform I og krystallform II av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid. Den mer krystallinske polymorfe krystallform I har lav hygroskopisitet og absorberer mindre enn 0,5 % vann over området med 0-90 % relativ fuktighet. Den mindre krystallinske polymorfe krystallform II er svært hygroskopisk og absorberer over 15 % vann over området med 0-90 % relativ fuktighet. Figur 4 er en illustrering av differensialskanningskalorimetri- (DSC) data som viser DSC-profiler for krystallform I og krystallform II av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- -

lH-pyrrol-3-karboksamid. Eksoterme overganger er vist i retningen oppover, krystallform I smelter ved en høyere temperatur (omtrent 196 °C) med en høyere smelteentalpi (omtrent 141 J/g) enn krystallform II, som smelter ved omtrent 181 °C med en smelteentalpi på omtrent 105 J/g. Dette tyder på at de to krystallformene er monotropiske, selv om degradering forekommer etter at krystallene smelter. Monotropisitet er bekreftet ved at krystallform II omdannes til krystallform I i en tungtflytende blanding med romtemperatur som beskrevet heri.

Detaljert beskrivelse av foretrukne utførelsesformer

N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid er en 3-pyrrolsubstituert 2-indolinforbindelse som har følgende struktur: N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid kan bli fremstilt som den frie basen ved hjelp av standard syntetiske fremgangsmåter inkludert for eksempel de som er beskrevet i PCT No. WO 01/60814 (Tang et al.). Selv om den frie basen kan bli krystallisert som små partikler er det ønskelig å for eksempel ha krystaller med større partikkelstørrelse for å lette filtrering i storskala operasjoner. For å oppnå dette ble det fremstilt salter av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid for å evaluere de resulterende egenskapene relatert til prosesseringen av saltet og fremstillingen av orale farmasøytiske preparater derav.

Krystallinske former av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, inkludert den frie basen og saltene derav (for eksempel sykloheksylsulfamsyre-, maleinsyre-, bromsyre-, mandelsyre-, vinsyre-, fumarsyre-, askorbinsyre-, fosforsyre-, saltsyre-, p-toluensulfonsyre-, sitronsyre- og eplesyresalter) ble screenet for egenskaper relatert til prosesseringen av saltet og fremstillingen av orale farmasøytiske preparater derfra, inkludert for eksempel krystallinitet (for eksempel krystallinsk eller amorft, grad av krystallinitet, vannfrie eller hydrerte krystaller), toksisitet, hygroskopisitet, stabilitet og morfologi. Basert på screeningen ovenfor ble et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-y liden)metyl]-2,4-dimetyl-1 H-pyrrol-3-karboksamid bestemt å tilveiebringe den beste balansen mellom ønskede egenskaper. Etter ytterligere undersøkelser ble det funnet at et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid krystalliserte i flere forskjellige krystallformer.

Den herværende oppfinnelsen tilveiebringer fremgangsmåter for fremstilling av krystallformer som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid og identifiseringen av disse krystallformene. Fremstillingen av vannfrie krystaller som inneholder et eplesyresalt er beskrevet her. Den vannfrie krystallform I har overlegne egenskaper i mange applikasjoner.

Krystallform I:

I en utførelsesform har et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid blitt fremstilt som vannfrie krystaller (for eksempel krystallform I). Den vannfrie krystallformen I er termodynamisk mer stabil enn andre krystallformer (for eksempel krystallform II). I en fremgangsmåte kan krystallform I bli fremstilt ved for eksempel å indusere krystallisering av et eplesyresalt ved krystallform I-krystalliseringsbetingelser fra en supermettet løsning.

Som benyttet her refererer "krystallform I-krystalliseringsbetingelser" til krystalliseringsbetingelser som tilveiebringer den termodynamiske krystallformen (for eksempel krystallform I). Slike betingelser blir vanligvis kalt "langsomme" krystalliseringsbetingelser. En fagperson på området kan velge én eller flere faktorer, for eksempel inkludert: en forskjell mellom utgangstemperaturene og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen som helst er maksimalt omtrent 100 °C, bedre er maksimalt omtrent 50 °C og enda bedre er maksimalt omtrent 25 °C og aller best er omtrent 0 °C, en nedkjølingshastighet som helst er på maksimalt omtrent 50 °C per time, bedre er maksimalt omtrent 20 °C per time, enda bedre er maksimalt omtrent 2 °C per time og aller best er omtrent 0 °C, ingen kimtilsetting, et supermettingsforhold på helst maksimalt omtrent 10, bedre er maksimalt omtrent 5 og aller helst maksimalt omtrent 1,5, ingen fellingsmiddel og/eller kombinasjoner derav for å tilveiebringe krystallform I-krystalliserings-forhold.

Hensiktsmessige løsningsmidler for fremstilling av krystalliseringsløsningen inkluderer for eksempel acetonitril, metanol, etanol, isopropanol, toluen, n-butanol, tetrahydrofuran, N,N-dimetylformamid, aceton, vann og kombinasjoner derav.

I en annen fremgangsmåte kan krystallform I bli fremstilt for eksempel ved å tilveiebringe en tungtflytende blanding av krystallform II i løsningsmidler i hvilke krystallform II har en vesentlig løselighet. Som benyttet her betyr "vesentlig løselighet" at en krystall helst er løselig i løsningsmiddelet i konsentrasjoner på minst omtrent 0,1 vekt %, bedre er minst omtrent 1 vekt % og aller best minst omtrent 10 vekt %, ved omtrent romtemperatur (for eksempel omtrent 15 °C til omtrent 30 °C). Krystallen kan eventuelt bli løst i løsningsmiddelet i den anviste konsentrasjonen ved romtemperatur.

Slike løsningsmidler inkluderer for eksempel acetonitril, etanol, metanol og kombinasjoner derav.

Krystallform II:

I en annen utførelsesform har et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid blitt fremstilt i en annen krystallform (for eksempel krystallform II). Krystallform II er nyttig som for eksempel som et intermediært stoff i fremstilingen av den vannfrie krystallform I.

Krystallform II kan for eksempel bli fremstilt ved å indusere krystallisering av et eplesyresalt ved krystallform II-krystalliseringsbetingelser fra en supermettet løsning.

Som benyttet her refererer "krystallform II-krystalliseringsbetingelser" til krystalliseringsbetingelser som tilveiebringer en krystallform som er forskjellig fra den termodynamiske formen. Slike betingelser blir vanligvis kalt "raske" krystalliseringsbetingelser. En fagperson på området kan velge én eller flere faktorer, for eksempel inkludert: en forskjell mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen på helst minst omtrent 25 °C, bedre er minst omtrent 50 °C og best er minst omtrent 100 °C, en avkjølingshastighet på helst minst omtrent 25 °C per time, bedre er minst omtrent 100 °C per time og best er minst omtrent 300 °C per time, kimtilsetting, et supermettingsforhold på helst minst omtrent 2, bedre er minst omtrent 5 og beste er minst omtrent 10, tilstedeværelse av fellingsmiddel og/eller kombinasjoner derav for å tilveiebringe krystallform II-krystalliseringsbetingelser.

Hensiktsmessige løsningsmidler for krystalliseringsløsningen inkluderer for eksempel metanol, vann, tetrahydrofuran/vann-blandinger og kombinasjoner derav.

Pulverrøntgendiffraksion ( PXRD^ :

Krystallinske organiske forbindelser består av et stort antall atomer som er arrangert i en periodisk oppstilling i det tredimensjonale rom. Den strukturelle periodisiteten manifesterer vanligvis klare fysiske egenskaper slik som skarpe, eksplisitte spektralegenskaper med de fleste spektroskopiske prober (for eksempel røntgen-diffraksjon, infrarød- og fastfase-NMR). Røntgendiffraksjon (XRD) er anerkjent for å være en av de mest sensitive fremgangsmåtene for å bestemme krystalliniteten til faste stoffer. Krystaller gir eksplisitte diffraksjonsmaksima som oppstår ved spesifikke vinkler i overensstemmelse med de innbyrdes mellomrommene i krystallens gitterverk, som forutsatt av Braggs lov. I motsetning til dette innehar ikke amorfe stoffer vidtrekkende orden. De beholder ofte et tilleggsvolum mellom molekyler slik som i flytende form. Amorfe faste stoffer viser normalt et egenskapløst XRD-mønster med brede, diffuse haloer på grunn av mangelen på vidtrekkende orden med repeterte krystallgitter.

Pulverrøntgendiffraksj on har vært rapportert benyttet for å karakterisere ulike krystallformer av organiske forbindelser (for eksempel forbindelser som er nyttige i farmasøytiske preparater). Se for eksempel U.S. patentskrift Nr. 5,504,216 (Holohan et al.), 5,721,359 (Dunn et al.), 5,910,588 (Wangnick et al.), 6,066,647 (Douglas et al.), 6,225,474 (Matsumoto et al.), 6,239,141 (Allen et al.), 6,251,355 (Murata et al.), 6,288,057 (Harkness), 6,316,672 (Stowell et al.), 6,329,364 (Groleau) og U.S.^patent-søknad Nr. 2001/0003752 (Talley et al.), 2002/0038021 (Barton et al.) og 2002/0045746 (Barton et al.).

Krystallinske stoffer er foretrukket i mange farmasøytiske applikasjoner. Krystallinske former er generelt termodynamisk mer stabile enn amorfe former av det samme stoffet. Denne termodynamiske stabiliteten gir seg helst uttrykk i den lavere løseligheten og den forbedrede fysiske stabiliteten til krystallformen. Den regulære pakkingen av molekylene i det krystallinske faste stoffet hindrer fordelaktig at kjemiske urenheter inkorporeres. Dermed har krystallinske stoffer generelt høyere kjemisk renhet enn deres amorfe former har. Pakkingen av det krystallinske faste stoffet begrenser generelt molekylet til veldefinerte gitterposisjoner og reduserer den molekylære mobiliteten som er forutsetningen for kjemiske reaksjoner. Dermed er krystallinske faste stoffer, med svært få nevneverdige unntak, kjemisk mer stabile enn amorfe faste stoffer med samme molekylære sammensetting. Helst innehar de krystallinske formene av eplesyresalter av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, som er beskrevet i den herværende søknaden, én eller flere av de fordelaktige kjemiske og/eller fysiske egenskapene som er beskrevet her.

De krystallinske formene av eplesyresalter av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- lH-pyrrol-3-karboksamid som er beskrevet i den herværende søknaden har helst distinkte pulver-røntgendiffraksj onsprofiler. For eksempel kan de vannfrie krystallene, inkludert et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamidet, foretrukket bli skjelnet fra den andre krystallformen, som inneholder et eplesyresalt som er beskrevet her, ved tilstede-værelsen av karakteristiske diffraksjonstopper. Karakteristiske diffraksjonstopper, slik som uttrykket benyttes her, er topper som er valgt fra de mest intensive toppene i det observerte diffraksj onsmønsteret. Helst er de karakteristiske toppene valgt blant omtrent 20 av de mest intense toppene, bedre er blant de omtrent 10 mest intense toppene og aller helst blant de omtrent 5 mest intense toppene i diffraksj onsmønsteret.

Figurene 1 og 2 viser henholdsvis røntgendiffraksj onsmønsteret for krystallform I og II av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid. Tabell 1 inneholderen oppramsing av de mest intensive toppene fra hvert PXRD-mønster mellom 2 og 35 grader to-teta. Den frie basen, krystallform I og krystallform II kan alle lett bli skjelnet fra hverandre ved hjelp av deres unike PXRD-mønstre.

Helst har en vannfri krystall som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)elyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid (for eksempel krystallform I) karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta, bedre er ved omtrent 13,2, 19,4, 24,2 og 25,5 grader to-teta og har aller helst de karakteristiske diffraksjonstoppene som er anbrakt i tabell 1 for krystallform I.

Helst har krystallform II av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 3,0 og 27,7 grader to-teta, bedre er ved omtrent 3,0,12,1, 14,5 og 27,7 grader to-teta og aller helst de karakteristiske diffraksjonstoppene som er anbrakt i tabell 1 for krystallform II.

Renhet og stabilitet i fast fase:

Renheten av krystallform I av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid ble vurdert ved hjelp av høytrykk-væskekromatografi (HPLC). Resultatene viste mer enn omtrent 98 areal % renhet med mindre enn omtrent 2 areal % påviste urenheter (tabell 2).

En fastfase-stabilitetsundersøkelse av krystallform I av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-254-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid ble også utført (tabell 2). Fire ukers data etter utsettelse for 60 °C/ omkringliggende relativ fuktighet, 60 °C/75 % relativ fuktighet og 80 "C/omkring-liggende relativ fuktighet viste ingen signifikant degradering. Pulverrøntgendiffraksj on på to-ukers prøver tydet heller ikke på forandringer i krystallform.

Fuktighetssorpsj onsdata:

Fuktighetssorpsjonsdataene ved 25 °C for krystallform I og II av L-eplesyresaltet avN-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fl^ dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamidet er vist i Figur 3. Den mer krystallinske polymorfe krystallform I har lav hygroskopisitet og absorberer mindre enn 0,5 % vann over området med 0-90 % relativ fuktighet. Den mindre krystallinske polymorfe krystallform II er svært hygroskopisk og absorberer over 15 % vann over området med 0-90 % relativ fuktighet.

Termiske data:

Differensialskanningskalorimetridataene er vist i Figur 4. Den vannfrie krystallform I av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid smelter ved omtrent 196 °C, mens krystallform II smelter ved omtrent 181 °C. De observerte hendelsene etter den første smeltingen tyder på at det sannsynligvis er en viss nedbrytning forbundet med smaltingen. Derfor var det vanskelig å måle en nøyaktig fusjonsvarme.

TGA-dataene for krystallform I (ikke vist her) viste ikke noe signifikant vekttap opp til smeltepunktet, noe som tyder på fravær av løsningsmiddel og /eller fråvær av vann i krystallene.

Administrering og farmasøytiske preparater:

Krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen kan bli administrert som krystaller til en human pasient eller kan bli administrert i farmasøytiske preparater der de krystallen er blandet med passende bærere eller eksipienser. Teknikker til utforming og administrering av legemidler kan bli funnet i "Remington's Pharmacological Sciences" Mack Publishing Co., Easton, PA., siste utgave.

Som benyttet her refererer "administrere" eller "administrering" til overføringen av en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav til en organisme i den hensikt å forhindre eller behandle en PK-relatert forstyrrelse.

Hensiktsmessige administreringsmåter kan inkludere, uten å være begrenset til, oral, rektal, transmukosal eller intestinal administrering eller intramuskulære, subkutane, intramedullære, intratekale, direkte intraventrikkulære, intravenøse, intravitreale, intra-peritonale, intranasale eller intraokulære injeksjoner. De foretrukne administrerings-måtene er orale og parenterale.

Alternativt kan man administrere krystallen ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav på en lokal måte istedenfor systemisk, for eksempel ved injeksjon av krystallen ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav direkte inn i en fast tumor, ofte med en depotformulering eller med en formulering med opprettholdt frigivelse.

Videre kan man administrere legemiddelet i et system med målrettet levering av legemiddel, for eksempel i et liposom som har tumorspesifikke antistoffer på overflaten. Liposomene vil være målrettet mot og bli selektivt bli tatt opp av tumoren.

Farmasøytiske preparater ifølge den herværende oppfinnelsen kan bli fremstilt med fremgangsmåter som er velkjente på fagområdet, for eksempel ved hjelp av konvensjonell blandings-, oppløsnings-, granulerings-, dragéfremstillings-, finmalings-, emulgerings-, innkapslings-, innfangings- eller lyofiliseringsfremgangsmåter.

Farmasøytiske preparater til benyttelse i overensstemmelse med den herværende oppfinnelsen kan bli formulert på en konvensjonell måte ved å benytte én eller flere fysiologisk akseptable bærere inkludert eksipienser og tilsetningsstoffer som fremmer prosessering av krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen til å bli preparater som kan bli benyttet farmasøytisk. Egnet formulering er avhengig av administreringsveien som blir valgt.

For injeksjon kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farma-søytisk akseptabelt preparat derav bli formulert i vandige løsninger, helst i fysiologisk kompatible buffere slik som Hanks løsning, Ringers løsning eller fysiologisk saltvanns-buffer. Til transmukosal administrering blir gjennomtrengningsfremmende stoffer, som er hensiktsmessige i forhold til barrieren som skal passeres, benyttet i formuleringen. Slike gjennomtrengningsstoffer er generelt velkjente på fagområdet.

Til oral administrering kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav bli formulert ved å kombinere en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen med farmasøytisk akseptable bærere som er velkjente på fagområdet. Slike bærere gjør krystallene ifølge den herværende oppfinnelsen i stand til å bli formulert som tabletter, piller, sugetabletter, dragéer, kapsler, væsker, geler, siruper, vellinger, suspensjoner og liknende, for oralt inntak av en pasient. Farmasøytiske preparater til oral anvendelse kan bli fremstilt ved å benytte en fast eksipiens, eventuelt male opp den resulterende blandingen og behandle blandingen av partikler etter at andre passende tilsetningsstoffer hvis ønskelig er tilsatt, for å oppnå tabletter eller dragékjerner. Nyttige eksipienser er spesielt fyllstoffer slik som ulike sukker, inkludert laktose, sukrose, mannitol eller sorbitol, cellulosepreparater slik som for eksempel maisstivelse, hvete-stivelse, risstivelse og potetstivelse og andre stoffer slik som gelatin, tragantgummi, metylcellulose, hydroksypropylmetylcellulose, natriumkarboksymetylcellulose og/eller polyvinylpyrrolidon (PVP). Hvis det er ønskelig kan oppløsende midler bli tilsatt, slik som kryssbundet polivinylpyrrolidon, agar eller alginat. Et salt slik som natriumalginat kan også bli benyttet.

Dragékjerner blir tilveiebrakt med et hensiktsmessig overtrekk. Til dette formålet kan konsentrerte sukkerløsninger bli benyttet og disse kan eventuelt også inneholde arabisk gummi, talkum, polyvinylpyrrolidon, karbopolgel, polyetylenglykol og/eller titandioksid, lakkløsninger og passende organiske løsningsmidler eller løsningsmiddel-blandinger. Fargestoffer eller pigmenter kan bli tilsatt til tablettene eller dragéover-trekkene for identifisering eller for å karakterisere ulike kombinasjoner av aktive doser.

Farmasøytiske preparater som kan bli benyttet oralt inkluderer trykktilpassede kapsler lagd av gelatin i tillegg til myke, forseglede kapsler lagd av gelatin og et plastiseirngsmiddel slik som glyserol eller sorbitol. De trykktilpassede kapslene kan inneholde den aktive ingrediensen i blanding med et fyllstoff slik som laktose, et bindingsmiddel slik som stivelse og/eller et smøremiddel slik som talkum eller magnesiumstearat og eventuelt stabiliserende midler. I myke kapsler kan krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen være løst eller suspendert i passende væsker slik som feitoljer, flytende parafin eller flytende polyetylenglykoler. Stabiliserende midler kan også bli tilsatt til disse formuleringene.

Kapslene kan bli pakket i flasker med brunt glass eller i plastflasker for å beskytte krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen eller farmasøytiske preparater derav mot lys. Beholderne som inneholder den aktive kapselformuleringen må bli lagret ved kontrollert romtemperatur (for eksempel ved omtrent 15 °C til omtrent 30 °C).

For administrering ved inhalering blir en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav hensiktsmessig levert i form av en aerosol-spray som gjør bruk av en trykkbeholder eller i en nebulise og en passende drivgass, for eksempel diklordifluormetan, triklorfluormetan, diklortetrafluoretan eller karbondioksid, uten å være begrenset til disse. I tilfellet med en aerosol under trykk kan doseringsenheten bli kontrollert ved å tilveiebringe en ventil som leverer en utmålt mengde. Kapsler og innsatser av for eksempel gelatin til anvendelse i en inhalator eller insuflator kan bli formulert slik at de inneholder en pulverblanding av en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav, og en passende pulverbase slik som laktose eller stivelse.

En krystall ifølge den herværende oppfinnelsen, eller et farmasøytisk preparat derav, kan også bli formulert til parenteral administrering for eksempel med bolus-injeksjon eller kontinuerlig infusjon. Formuleringer til injeksjon kan bli fremlagt i enhetsdoseringsform for eksempel i ampuller eller i flerdosebeholdere med et tilsatt konserveringsmiddel. Preparatene kan ha former som suspensjoner, løsninger eller emulsjoner i oljebaserte eller vandige bærere og kan inneholde utformingsstoffer som suspenderende, stabiliserende og/eller dispergerende midler.

Farmasøytiske preparater til parenteral administrering inkluderer vandige løsninger av en vannløselig form av en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller farmasøytisk preparat derav. I tillegg kan suspensjoner av krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen eller farmasøytiske preparater derav bli fremstilt i en lipofil bærer. Passende lipofilé bærere inkluderer fettoljer slik som sesamolje, syntetiske fettsyreestere slik som etyloleat og triglyserider eller materialer slik som liposomer. Vandige injeksjonssuspensjoner kan inneholde stoffer som øker viskositeten til suspensjonen slik som natriumkarboksymetylcellulose, sorbitol eller dekstran. Eventuelt kan suspensjonen også inneholde passende stabiliserende midler og/eller midler som øker løseligheten av krystallene ifølge den herværende oppfinnelsen eller farmasøytiske preparater derav for å gjøre det mulig å fremstille sterkt konsentrerte løsninger.

Alternativt kan den aktive ingrediensen foreligge i pulverform for sammensetning med en passende bærer. For eksempel sterilt, pyrogenfritt vann, før bruk.

En krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav kan også bli formulert til rektale preparater slik som stikkpiller eller retensjons-klystér ved å for eksempel benytte konvensjonelle stikkpillebasestoffer som kakaosmør eller andre glyserider.

I tillegg til formuleringene som er beskrevet ovenfor kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav også bli formulert som depotpreparater. Slike lengevirkende formuleringer kan bli administrert med implantering (for eksempel subkutant eller intramuskulært) eller med en intramuskulær injeksjon. En krystall ifølge den herværende oppfinnelsen, eller et farmasøytisk preparat derav, kan bli formulert for denne administreringsmåten med passende polymere eller hydrofobe stoffer (for eksempel i en emulsjon med en farmasøytisk akseptabel olje) med ionebytterresiner eller som et sparsomt løselig derivat.

I tillegg kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav, bli levert ved å benytte et system med opprettholdt frigivelse slik som semipermeable matriser av faste hydrofobe polymerer som inneholder det terapeutiske middelet. Ulike materialer med opprettholdt frigivelse har blitt beskrevet og er velkjente for fagfolk på området. Kapsler med opprettholdt frigivelse kan avhengig av deres kjemiske egenskaper frigi et salt eller et farmasøytisk preparat derav fra noen få uker og opp til over 100 dager. Avhengig av de kjemiske egenskapene og den biologiske stabiliteten av det terapeutiske middelet kan ytterligere strategier for å stabilisere proteiner bli benyttet.

De farmasøytiske preparatene ifølge denne oppfinnelsen kan også inkludere passende faste bærere eller gelfasebærere eller eksipienser. Eksempler på slike bærere eller eksipienser inkluderer, men er ikke begrenset til, kalsiumkarbonat, kalsiumfosfat, ulike sukker, stivelser, cellulosederivater, gelatin og polymerer slik som polyetylenglykoler.

Farmasøytiske preparater som er passende til anvendelse ifølge den herværende oppfinnelsen inkluderer preparater som omfatter en mengde av de aktive ingrediensene som er tilstrekkelig til å oppnå det ønskede formålet, for eksempel moduleringen av PK-aktiviteten eller behandlingen eller motvirkningen av en PK-relatert forstyrrelse.

Mer spesifikt betyr en terapeutisk effektiv mengde en mengde av krystaller ifølge den herværende oppfinnelsen, eller farmasøytiske preparater derav, som er effektiv i forhold til å motvirke, lindre eller bedre symptomer på sykdom eller forlenge overlevelsen til individet som blir behandlet.

Bestemmelse av en terapeutisk effektiv mengde ligger godt innenfor kunnskapene til de som er fagfolk på området, spesielt i lys av den detaljerte beskrivelsen som er tilveiebrakt her.

For enhver av krystallene ifølge den herværende oppfinnelsen, eller farma-søytiske preparater derav, benyttet i fremgangsmåtene ifølge oppfinnelsen kan den terapeutisk effektive mengden eller dosen i utgangspunktet bli beregnet fra celle-kulturanalyser. Deretter kan doseringen bli formulert for anvendelse i dyremodeller for å oppnå et sirkulerende konsentrasjonsområde som inkluderer IC50-verdien slik den er bestemt i cellekultur (d.v.s. konsentrasjonen av krystallene ifølge den herværende oppfinnelsen eller farmasøytiske preparater derav som medfører hemming av halvparten av PK-aktiviteten). Slik informasjon kan dermed bli benyttet for å mer nøyaktig bestemme nyttige doser hos mennesker.

Toksisitet og terapeutisk effektivitet av en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav kan bli bestemt ved hjelp av standard farmasøytiske prosedyrer i cellekulturer eller i eksperimentelle dyr, for eksempel ved å bestemme IC5o-verdien og LD50-verdien (der begge disse verdiene er diskutert andre steder i denne beskrivelsen) for en gjeldende krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav. Dataene som er fremskaffet fra disse cellekultur-analysene og dyrestudiene kan bli benyttet i formuleringen av et doseringsområde til bruk hos mennesker. Doseringen kan variere avhengig av doseringsformen som benyttes og på hvilken måte administreringen utføres. Den eksakte formuleringen, administreringsmåten og doseringen kan bli valgt av den individuelle legen på båkgrunn av pasientens tilstand.

(Se for eksempel Fingl et al., 1975 i "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Kapittel 1, s.l).

Doseringsmengde og doseringsintervall kan bli justert individuelt for å tilveiebringe nivåer av den aktive ingrediensen som er tilstrekkelig for å opprettholde de kinasemodulerende effektene. Disse plasmanivåene er referert til som minste effektive konsentrasjoner (MEC). MEC vil variere for hver krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav, men kan bli estimert fra in vitro- data, for eksempel kan konsentrasjonen som er nødvendig for å oppnå 50-90 % hemming av en kinase bli fastsatt ved å benytte analysene som er beskrevet her. Doseringer som er nødvendige for å oppnå MEC vil være avhengig av individuelle karakteristika og administrasjonsmåte. HPLC-analyser eller bioanalyser kan bli benyttet for å bestemme plasmakonsentrasj oner.

Doseringsintervaller kan også bli bestemt ved å benytte MEC-verdi. En krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav bør bli administrert ved å benytte et regime som opprettholder plasmanivåer over MEC i 10-90 % av tiden, helst i 30-90 % av tiden og aller helst i 50-90 % av tiden.

I tilfeller med lokal administrering eller selektivt opptak er det ikke sikkert at den effektive lokale konsentrasjonen av legemiddelet er relatert til plasmakonsentrasjoner og andre prosedyrer som er kjent på fagområdet som kan bli benyttet for å bestemme den korrekte doseringsmengden og det korrekte doseringsintervallet.

Mengden av et preparat som blir administrert vil selvfølgelig være avhengig av individet som blir behandlet, alvorligheten av lidelsen, måte administreringen blir utført på, vurderingen til den behandlende legen o.s.v.

Preparatene kan, hvis det er ønskelig, bli fremlagt i en pakke eller i en dispen-serinnretning, slik som et FDA-godkjent sett, som kan inneholde én eller flere enhets-doseringsformer som inneholder den aktive ingrediensen. Pakken kan for eksempel inkludere metall- eller plastikkfolie, slik som en bobleplastpakke. Pakken eller dispen-serinnretningen kan være tilgjengelig sammen med instruksjoner som veileder administrering. Pakken eller dispenseren kan også foreligge sammen med en skrivelse som følger beholderen i en utforming som er bestemt av et myndighetskontor som regulerer fremstillingen, anvendelsen eller forhandlingen av farmasøytiske preparater, der skrivelsen tilkjennegjør myndighetskontorets godkjenning av foreliggende preparatform eller administrering til mennesker eller dyr. En slik skrivelse kan for eksempel være utformet etter retningslinjer godkjent av U.S. Food and Drug Administration for foreskrevne legemidler eller for et godkjent vedlagt produkt. Preparater som inneholder en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen formulert i en kompatibel farmasøytisk bærer kan også bli fremstilt, plassert i en hensiktsmessig beholder og merket for behandling av en spesifisert tilstand. Passende tilstander som er spesifisert på merkingen kan inkludere behandling av en tumor, hemming av angiogenese, behandling av fibrose, diabetes og liknende.

Det er også et aspekt at en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav kan bli kombinert med andre kjemoterapeutiske midler for behandlingen av sykdommene og forstyrrelsene som er diskutert ovenfor. For eksempel kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav bli kombinert med alkylerende midler slik som fluoruracil (5-FU) alene eller i videre kombinasjon med leukovorin, eller andre alkylerende midler slik som, uten å være begrenset til disse, andre pyrimidinanaloger slik som UFT, kapecitabin, gemcitabin og cytarabin, alkylsulfonatene, for eksempel busulfan (benyttet i behandlingen av kronisk granulocyttleukemi), improsulfan ogpiposulfan (1,4-dihydrakryloylpiperazindime-tanesulfonat), aziridiner, for eksempel benzodepa, carboquone, meturedepa og uredepa, etyleniminer og metylmelaminer, for eksempel altretamin, trietylenmelamin, trietylenfosforamid, trietylentiofosforamid og trimetylolmelamin og nitrogensennepene, for eksempel klorambucil (benyttet i behandlingen av kronisk lymfocyttleukemi, primær makroglobulinemi og non-Hodgkins lymfom), syklofosfamid (benyttet i behandlingen av Hodgkins sykdom, multippelt myelom, neuroblastom, brystkreft, ovariekreft, lungekreft, Wilms tumor og rhabdomysarkom), estramustin, ifosfamid, novembrichin, prednimustin og uracilsennep (benyttet i behandlingen av primær trombocytose, non-Hodgkins lymfom, Hodgkins sykdom og ovariekreft) og triaziner, for eksempel dacarbazin (benyttet i behandlingen av bløtvevsarkom).

En krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav kan også bli benyttet i kombinasjon med andre antimetabolittkjemoterapeutiske midler slik som, uten å være begrenset til disse, folsyreanaloger, for eksempel metotreksat (benyttet i behandlingen av akutt lymfocyttleukemi, koriokarsinom, "mycosis-fungiodes-brystkreft", hode- og nakkekreft og osteogent sarkom) og pteropterin, og purinanalogene slik som merkaptopurin og tioguanin som kommer til nytte i behandlingen av akutte granulocyttleukemier, akutte lymfocyttleukemier og kroniske granulocyttleukemier.

Det er ansett at en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farma-søytisk preparat derav også kan bli benyttet i kombinasjon med naturproduktbaserte kjemoterapeutiske midler slik som, uten å være begrenset til disse, vinca-alkaloidene, for eksempel vinblastin (benyttet i behandlingen av brystkreft og testikkelkreft), vincristin og vindesin, epipodofylotoksinene, for eksempel etopsid og teniposid, der begge disse er nyttige i behandlingen av testikkelkreft og Kaposis sarkom, de antibiotikakjemotera-peutiske midlene, for eksempel daunorubicin, doxorubicin, epirubicin, mitomycin (benyttet for å behandle mage-, livmorhals-, tykktarms-, bryst-, blære- og bukspytt-kjertelkreft), dactinomycin, temozolomid, pliamycin, bleomycin (benyttet i behandlingen av hudkreft, spiserørs- og urinveiskreft) og enzymatiske kjemoterapeutiske midlene slik som L-asparaginase.

I tillegg til det som er beskrevet ovenfor kan en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav også bli benyttet i kombinasjon med platinakoordineringskompleksene (cisplatin o.s.v.), substituert urea slik som hydroksy-urea, metylhydrazinderivater, for eksempel procarbazin, adrenokortikoundertrykkere, for eksempel mitotan, aminoglutetimid, og hormoner og hormonantagonister slik som adrenokortikosteroidene (for eksempel prednison), progestiner (for eksempel hydroksy-progesteronkaproat), østrogener (for eksempel dietylstilbesterol), antiøstrogener slik som tamoksifen, androgener, for eksempel testosteronpropionat, og aromatasehemmere slik som anastrozol.

Endelig er det også ansett at kombinasjonen av en krystall ifølge den herværende oppfinnelsen eller et farmasøytisk preparat derav vil være effektivt i kombinasjon med mitoksantron eller paclitaxel i behandlingen av faste tumorer eller leukemier slik som, uten å være begrenset til, akutt myelogen (ikke-lymfocyttisk) leukemi.

Den herværende oppfinnelsen er illustrert ved hjelp av de følgende eksemplene. Det er meningen at de spesielle eksemplene, materialene, mengdene og fremgangsmåtene skal tolkes bredt i overensstemmelse med omfanget og intensjonen ifølge oppfinnelsen, slik som det her legges frem.

Eksempler

Røntgendiffraksjons- (XRD) mønstre ble målt på et Scintag-X2-difrraktometer (Thermo ARL, Ecublens, Sveits) utstyrt med et teta-teta-goniometer. Smeltepunkter ble bestemt ved å benytte et 2920-differensialskanningskalorimeter (TA Instruments, New Castle, DE) med standard krympede skåler og en oppvarmingshastighet på 10 °C/min. Hygroskopisitet ble vurdert ved hjelp av dynamisk fuktighetssorpsjonsgravimetri (DMSG) ved å benytte en Controlled-Atmosphere-Microbalance (Pharmacia Corp., Kalamazoo, MI). Alle kjemikalier som er benyttet er tilgjengelige fra Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI, hvis ikke annet er presisert, av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- lH-pyrrol-3-karboksamid ble fremstilt som den frie basen med en fremgangsmåte som tilsvarer den som er beskrevet i eksempel 80 i PCT Nr. WO 01/60814 (Tang et al.).

Fremgangsmåter:

Pulverrøntgendiffraksj on ( XRD).

Pulverrøntgendiffraksj on ble utført ved å benytte et Scintag-X2-avansert-diffraksjonssystem som drives av Scintag-DMS/NT 1.30a og Microsoft Windows NT 4.0 programvare. Systemet benytter en kobberrøntgenkilde opprettholdt ved 45 kV og 40 MA for å tilveiebringe CuK(ai-emisjon på 1,5406 Å) og en fastfase Peltier-avkjølt detektor. Strålens blenderåpning ble kontrollert ved å benytte rørdivergens og antispredningsspalter på 2 og 4 mm og detektorantispredningsspalter og mottaksspalter med bredde på 0,5 og 0,2 mm. Data ble samlet fra 2 til 35 <0> to-teta ved å benytte en trinnskanning på

0,03 7punkt med en telletid på et sekund per trinn. Runde, toppfyllings-, rustfrie prøve-skåler med 12 mm i diameter innsatser ble benyttet til eksperimentene. Det ble tatt prøver av legemiddel som det forelå og plassert på prøvebrettet uten videre behandling. Noen spesifikke prøver ble også håndmalt i med støter i en morter før de ble analysert. Data-analysering ble fullført ved å benytte Origin 6.0 (Microcal Software, Northampton, MA).

Dynamisk fuktighetssorpsjonsgravimetri ( DMSG).

DMSG-isotermer ble samlet på den variable temperaturkontrollerte atmosfære-mikrobalansen. Prøver på omtrent 10 mg ble benyttet i balansen. Prøver ble analysert som de forelå. Fuktigheten ble trinnvis variert mellom 0 og 90 % relativ fuktighet (RF) i 3 % RF-tririn. Massen ble deretter målt hvert 2. minutt. RF ble forandret til den neste verdien når prøvens masse var stabil innenfor 0,5 mikrogram i 480 sekunder. Et Visual-Basic-program ble benyttet for å kontrollere datasamlingen og for å eksportere informasjonen til et Excel-ark.

Termisk analyse.

Differensiellskanningskalorimetri- (DSC) data ble innsamlet ved å presse sammen pulverprøven på aluminium-DSC-skål. Prøver ble analysert slik de forelå og størrelsene på dem var omtrent 1 mg. Temperaturer ble typisk skannet til 320 °C med en skanningshastighet på 10 °C per minutt. DSC ble utført med et TA Instruments 2920-kalorimeter. Dataanalyseringsprogramvaren som ble benyttet var Universal Analysis V 1.

1 OB fra TA.

Termogravimetriske analyse- (TGA) data ble innsamlet med en TGA-2950 fra TA Instruments. Prøver ble balansert i TGA ved 25 °C med et duggpunkt på 20 °C i 30 minutter før temperaturprogrammet startet. Temperatursprang var på 10 °C/minutt, men ble skannet under TA sine tilhørende høyoppløsningsbetingelser. Denne teknikken senker skanningshastigheten når en overgang forekommer og forbedrer instrumentets evne til å løse uavhengige vekttapshendelser.

Eksempel 1

Fremstilling av den vannfrie krystallform I av L- eplesyresaltet av N-[ 2-( dietylamino) etyl]- 5-[( 5- fluor- l, 2- dihydro- 2- oeto- 3H- indol- 3- yliden) metyl]^^ lH- pyrrol- 3- karboksamid.

Fremstilling A: N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid (130 mg, 0,326 mMol) ble tilsatt til 20 mL metanol og blandingen ble rørt. L-eplesyre (47,2 mg, 0.352 mMol) ble tilsatt, noe som fører til rask oppløsning av alle de faste stoffene. Metanolen ble fjernet under redusert trykk for å danne et dårlig krystallinsk oransje fast stoff. Acetonitril (5 mL) ble tilsatt og blandingen ble rørt og varmet opp i omtrent 10 minutter. Røringen ble opprettholdt mens blandingen ble avkjølt til romtemperatur. Krystallene ble filtrert og tørket, noe som førte til 149 mg av fast (86 % utbytte) krystallform I.

Fremstilling B: N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid kan bli renset ved å foreta en vask med vann med pH 11 før dannelsen av L-eplesyresaltet. En løsning av den frie basen i en blanding av 80:20 n-butanol:vann (v:v) ble laget ferdig ved 80 °C. Etter nedkjøling til 20 °C og røring i 1 time ble tydelig krystallisering observert. En prøve ble analysert med PXRD og funnet å være krystallform I. Filtrering, tørking og sammenmaling av krystallene førte til et utbytte på 99 %.

Eksempel 2

Fremstilling av krystallform Hav L- eplesyresaltet av N-[ 2-( dietylamino) etyl]- 5-[( 5- fluor- l, 2- dihydro- 2- okso- 3H- indol- 3- yliden) metyl]- 2, 4- dimetyl- lH- pyrrol- 3-karboksamid.

Krystaller av krystallform II av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- lH-pyrrol-3-karboksamid (25 mg) ble tilsatt til tetrahydrofuran (2 mL) etterfulgt av tilsetting av vann (250 mikroliter). Blandingen ble varmet opp for å løse opp krystallene. Løsningsmiddelet ble tillatt å fordampe over natt noe som førte til at krystaller av krystallform II ble dannet.

Eksempel 3

Fremstilling av den vannfrie krystallform I av L- eplesyresaltet av N-[ 2-( dietylamino) etyl]- 5-[( 5- fluor- l, 2- dihydro- 2- okso- 3H- indol- 3- yliden) metyl]- 2A- d^ lH- pyrrol- 3- karboksamidfra krystallform II.

Acetonitril (omtrent 5 mL) ble tilsatt til krystallform II (150 mg). Blandingen ble rørt og varmet opp i omtrent 10 minutter. Røring ble opprettholdt mens blandingen ble avkjølte seg til romtemperatur. Krystallene ble filtrert og tørket og dette resulterte i krystaller av krystallform I.

Eksempel 4

Løselighet av krystallform I av L- eplesyresaltet av N-[ 2-( dietylamino) etyl]- 5-[( 5-fluor- l, 2- dihydro- 2- okso- 3H- indol- 3- yliden) metyl]- 2, 4- dimetyl- lH- pyrrol- 3-karboksamid.

Løseligheten til krystallform I av L-eplesyresaltet av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl- lH-pyrrol-3-karboksamid ble bestemt å være 5 mg/mL i vann ved 25 °C. Dette tyder på at løseligheten ikke burde være en begrensende faktor når det gjelder stoffets biotilgjengelighet.

Den detaljerte beskrivelsen og eksemplene ovenfor har blitt kun blitt fremsatt for å klargjøre forståelsen. Ingen unødvendige begrensninger skal tolkes ut fra dette. Denne oppfinnelsen er ikke begrenset til de detaljene som er vist og beskrevet fordi variasjoner som er åpenbare for fagfolk på området vil være inkludert i oppfinnelsen slik den er definert av kravene.

Claims (23)

1. Vannfri krystall, karakterisert ved at den omfatter et eplesyresalt av en forbindelse som har strukturen: der krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj onsmønster.

2. Krystall ifølge krav 1, karakterisert ved at eplesyren er L-eplesyre.

3. Krystall ifølge krav 1, karakterisert ved at den har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2, 19,4, 24,2 og 25,5 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster.

4. Krystall ifølge krav 3, karakterisert ved at den har karakteristiske diffraksjonstopper i et røntgen-diffraksjonsmønster ved omtrent 11,4,11,9, 13,2,15,9, 16,8, 17,2, 19,4, 20,3,21,3,21,7, 22,1,22,9,24,2, 25,5, 26,1, 27,0, 27,6, 32,3, 32,9 og 34,4 grader to-teta.

5. Fremgangsmåte for å fremstille vannfri krystall som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH^pyrrol-3-karboksamid, der den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksjons-mønster, karakterisert ved at den omfatter å : kombinere eplesyre, N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid og et løsningsmiddel, og indusere krystallisering av saltet ved krystalliseringsbetingelser som omfatter én eller flere faktorer omfattende: en forskjell mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen på maksimalt omtrent 100 °C, en nedkjølingshastighet på maksimalt omtrent 50 °C per time, et supermetningsforhold på maksimalt omtrent 10, ingen fellingsmidler og/eller kombinasjoner derav.

6. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at eplesyren er L-eplesyre.

7. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at nevnte ene eller flere faktorer omfatter: en forskjell mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen på maksimalt omtrent 50 °C, en nedkjølingshastighet på maksimalt omtrent 20 °C per time, et supermetningsforhold på maksimalt omtrent 5 og/eller kombinasjoner derav.

8. Fremgangsmåte ifølge krav 7, karakterisert ved at nevnte ene eller flere faktorer omfatter: en forskjell mellom utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen på maksimalt omtrent 25 °C, en nedkjølingshastighet på maksimalt omtrent 2 °C per time, et supermetningsforhold på maksimalt omtrent 1,5 og/eller kombinasjoner derav.

9. Fremgangsmåte ifølge krav 8, karakterisert ved at utgangs- og sluttemperaturene i krystalliseringsløsningen er de samme.

10. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at løsningsmiddelet er valgt fra gruppen som består av acetonitril, metanol, etanol, isopropanol, toluen, n-butanol, tetrahydrofuran, N,N-dimetylformamid, aceton, vann og kombinasjoner derav.

11. Fremgangsmåte ifølge krav 5, karakterisert ved at den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2,19,4,24,2 og 25,5 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksjons-mønster.

12. Fremgangsmåte ifølge krav 11, karakterisert ved at den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster røntgendiffraksjonsmønster ved omtrent 11,4, 11,9, 13,2, 15,9, 16,8, 17,2, 19,4, 20,3, 21,3, 21,7, 22,1, 22,9, 24,2, 25,5, 26,1, 27,0, 27,6, 32,3, 32,9 og 34,4 grader to-teta.

13. Fremgangsmåte for fremstilling av en vannfri krystall som inneholder et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, der den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj onsmønster, karakterisert ved at den omfatter å bringe en krystall som består av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-1,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid i kontakt med et løsningsmiddel, i hvilket løsningsmiddel krystallen har en løselighet på minst 0,1 % etter vekt ved en temperatur på omtrent 15°C til omtrent 30°C, og der krystallen som bringes i kontakt med løsningsmiddelet har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 3,0 og 27,7 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj onsmønster.

14. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at krystallen som bringes i kontakt har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 3,0, 12,1, 14,5 og 27,7 grader to-teta i et pulverrøntgen-diffraksj onsmønster.

15. Fremgangsmåte ifølge krav 14, karakterisert ved at krystallen som bringes i kontakt har karakteristiske diffraksjonstopper i et pulverrøntgendiffraksjonsmønster ved omtrent 3,0, 5,9, 7,6,9,3, 12,1, 14,5, 17,5, 19,5, 23,4, 24,8 og 27,7 grader to-teta.

16. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at løsningsmiddelet er valgt fra gruppen som består av acetonitril, etanol, metanol og kombinasjoner derav.

17. Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at sammenbringingen av krystallen med løsningsmiddelet fører til dannelse av en tyktflytende blanding.

18. Fremgangsmåte ifølge krav 17, karakterisert ved at den videre omfatter røring av den tyktflytende blandingen.

19. Fremgangsmåte ifølge krav 17, karakterisert ved at den videre omfatter å varme opp den tyktflytende blandingen.

20. Fremgangsmåte ifølge krav 17, karakterisert ved at den videre omfatter å fjerne den vannfrie krystallen fra den tyktflytende blandingen.

21. " Fremgangsmåte ifølge krav 13, karakterisert ved at den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2, 19,4,24,2 og 25,5 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj ons-mønster.

22. Fremgangsmåte ifølge krav 21, karakterisert ved at den vannfrie krystallen har karakteristiske diffraksjonstopper i et pulverrøntgendifrfaksj onsmønster røntgendiffraksj onsmønster ved omtrent 11,4, 11,9, 13,2, 15,9, 16,8, 17,2, 19,4, 20,3, 21,3,21,7, 22,1,22,9, 24,2, 25,5, 26,1,27,0, 27,6, 32,3, 32,9 og 34,4 grader to-teta.

23. Preparat, karakterisert ved at det omfatter krystaller som består av et eplesyresalt av N-[2-(dietylamino)etyl]-5-[(5-fluor-l,2-dihydro-2-okso-3H-indol-3-yliden)metyl]-2,4-dimetyl-lH-pyrrol-3-karboksamid, der krystallene har karakteristiske diffraksjonstopper ved omtrent 13,2 og 24,2 grader to-teta i et pulverrøntgendiffraksj onsmønster.