CS208164B2

CS208164B2 - Method of making the d-2-halogene-6-methyl-8-kyan/carboxamido/methylergolines

Info

Publication number: CS208164B2
Application number: CS735239A
Authority: CS
Inventors: James A Clemens; Edmund C Kornfeld; Nicholas J Bach
Original assignee: Lilly Co Eli
Priority date: 1972-07-21
Filing date: 1973-07-20
Publication date: 1981-08-31
Also published as: IL42730A; PH11229A; ES446789A1; SU645581A3; AT331425B; IL42730A0; CH581135A5; SE410459B; SE7611466L; DK140986C; BG21410A3; YU194573A; AR206772A1; DE2335750C3; CH578563A5; RO71305A; IE37936L; CA1006159A; ATA643473A; CH578564A5

Description

Vynález pop/suje způsob výroby nových 0-2-Ьа1о£еп-6-теЫ1у1-8-куап(кагЬсха1т1dojmethylergolinů obecného vzorce I

ve kterém

R zmámená skupinu —CHz—CN nebo —CH₂—C—NHz ,

O

X v případě, že R znamená skupinu —CHa—CN, představuje atom chloru, btromu nebo jodu, a v případě, že R znamená skupinu —CH2—C—NH_Ž ,

II o

představuje X atoim bromu, a jejich solí s farmaceuticky upotřebitelnými kyselinami, vyznačující se tím, že se D-B-metihyl-e-kyanmeťhylergolin nebo D-6-methyl-8-karboxamidomethylergolin podrobí příslušné halogenaci a získaný produkt se popřípadě převede na žádanou sůl.

Sloučeniny shora uvedeného- obecného vzorce I, ve kterém X znamená příslušný atom halogenu, se připravují působením Nbromisuikcinimidu, N-chlorsukcintoidu nebo· .příslušného jiného vhodného· halogenačního činidla s kladně nabitým halogenem na D-6-m.etliyl-84kyanmethylergolin nebo D-8-methyl-8-k;aobO'xamidoimethyleirgolin, připravený postupem, který popsali Seimonský a spol. v Coll. Czech. Chem. Coimmum., 33, 577 (1968).

Prefix „D“ v náizvu sloučenin shora uvedené struktury znamená, že steoeochemie derivátu ergolinu je totožná se strukturou D-lysergové kyseliny, což je forma vyskytující se v přírodě.

Solemi ergolinu shora uvedeného obecného vzorce I mohou být soli připravené působením jak organických, tak anorganických farmaceuticky upotřebitelných kyselin. Mezi tyto soli náležejí sulfáty, jako· sulfáty, pyiro^fsulfáty a bisulfáty, sulfity, ja|ko sulfity a bisulfity, nitráty, fosfáty, jako fosfáty, monohydrogenfosfáty, dihydrogeinfosfáty, motaf-osfáty a -pyrofosfáty, halogenidy, jako· chloridy, bromidy, jodídy a fluoridy, soli s alifatickými karboxylovými kyselinami obsahujícími 1 až 10 atomů uhlíku, jako aicetáty, propionáty, dekanoáty, kapryláty, akryláty, fo-rmiáty, isobutyráty, kapronáty, heptanoáty a proploláty, soli s alifatickými dikarboxylovými kyselinami s 2 až 10 atomy uhlíku, jako - oxaláty, maloináty, suikcináty, suberáty, sebakáty, fumaráty, maleáty, butin-l,4-dioáty a hexi'n-l,6-dioá.ty, dále benzoáty, jako· benzoáty, chlorbenzoáty, methylbenzoáty, dinitr.obeinzoáty, hydroxybeinzoáty a methoxybenzoáty, ftaláty, jako· ftaláty a - tereftaláty, arylsulfonáty, jako toluensulfonáty, benzenisulfonáty, naftalejimullonáty, p-chlorbenzensulfonáty a xylensulfonáty, citráty, soli s a-hydroxyalkanovými kyselinami s 2 až 5 atomy uhlíku, jako soli s kyselinou mléčnou, /-hydroxymáselnou a glykolovou, soli s a-hy^d^^irnxyalkandiovými kyselinami se 4 až 6 atomy uhlíku, jako soli s kyselinou jablečnou a vinnou, a alkylsulfonáty s 1 až 3 atomy uhlíku, jako methansulfonáty a piropansulfonáty.

L ysergoivou · a isolysergovon kyse lino u jsou 8-karboxy-6-methyl-A⁹-eřgoliny. Mezi amidy lysergové kyseliny, z nichž četné se vyznačují cennými a jedinečnými farmalkologickými vlastnostmi, náleží v přírodě se •vyskytující alkaloidy · zvyšující stahy dělužní svaloviny, jako ergokornitn, erg-okryp-tin, ergonovin, ergekiristin, ergosin, ergotamin apod., a syntetické analogy těchto- přírodních alkaloidů, jako -methergin, jakož i syntetická halucinogenní látka — diethyaaimid lysergové kyseliny . (LSD). Amidy 6-methyl-S-kahboxyergollnu, označované genericky jako · dihydronájnelové alkaloidy, mají nižší účinnost na zesílení stahů děložní sivaioviny a -rovněž nižší toxicitu než samotné námelové · alkaloidy. Ergotamin, což je A9-ergolin, byl používán při léčbě migrény a v poslední -době bylo zjištěno, že jak ergokornin, tak 2-brom.-a-e’rgoik_Iryptin působí jako· inhibitory proláklinu a tvorby nádorů vyvolaných u krys dimethylbenzanthracenem. [ viz Nagasana a Meites, Proč. Soc. Exptl. Bicí. Med. 135, 469 (1970) a Heuison a spol., Europ. . J. Canc-er, 353 (1970)].

D^-^-i^<^t!^^^]^-^-^-^l^^^í^i^i^(^1^ihyle.rgolin připravili nejprve Semonsky a spolupracovníci [viz Coll. Czach. Chem. Comlmuin., 33, 577 (1968)] a -použití této -látky k prevenci březosti u krys publikovala tatáž skupina pracovníků v Nátuře, 221, 666 (1969). Předpokládá se, že tato- sloučenina brání sekreci luteotropmho’ hormonu hypofýzy a gonadotropinů hypofýzy. Bylo rovněž popsáno·, že zmíněná sloučenina inhibuje sekreci prolaktinu [viz Šeda a -spol., J. Reprod. Fert., 24, 263 (1971) a Mantle a Finn, ibid., 441] Semonsky a spol. popsali [viz Coll. Czech. 'Chem. Comrnun., 36, 2200 (1971)] přípravu

D46лnethytl-8eгgotlnylaceta_lm·]du, což je sloučenina, o- níž je uváděno, že u k‘ryis vykazuje antifertilitní a antilaktační účinky. Účinek těchto sloučenin na nádorová onemocnění není znám.

Vynález ilustrují následující příklady provedení, jimiž se -však rozsah vynálezu v žádném směru - neomezuje.

Příklad 1

Příprava D-2-chlor-6-methyl-8-kyainmethylergolinu

400 mg N--ohlorlukcini^ιmcdu se -rozpustí ve 30 ml dioxanu a -roztok se při - teplotě cca 60 °C přikape k míchané suspenzi 535 mg D-6-meehytl8-kkanmčthytergtliclU ve 25 ml dioxanu. Po skončeném přidávání se reakční -směs v dusíkové atmosféře zahřívá cca 4,5 - hodiny na teplotu 60 až 65 °C, pak se ochladí, zředí se -vodou, -přidá se k ní pevný kyselý uhličitan sodný a výsledná směs se extrahuje -chloroformem. Chloroformová vrstva se oddělí, - vysuší se a chloroform se odpaří ve vakuu. ChrOmaitogiram surového zbytku na tenké vrstvě obsahuje dvě skvrny. Zbytek se proto rozpustí v chloroformu a chrornatografuje se na. sloupci lClikagelu. Každá z frakcí vymytých chloroformem· se kontroluje chromatografn na tenké vrstvě. Podle této kontrolní chromatografie obsahují frakce 7 až 12 největší množství nové složky (žádný výchozí materiál). Frakce -obsahující podle chromatografie na tenké vrstvě relativně velké množství této- nové složky, se spojí a chloroform se odpaří. Zbytek poskytne po přeikrystalování z etheru 165 mg D^-chlor-O-methyl^-kyán,methslerg·olшu -o teplotě tání 270 až 273 QC.

Shora popsaným postupem se bromací D- 6 -methy 1 - 8 -k y anm-e- th y1 er go linu N - br omsukciirmidem získá D-2-brfιm-6-ιmethyr-8tající -za rozkladu při 244 až 247 °C (krystalizace z ethanolu).

Analýza:

•vypočtenou:

59,31 % -C, 5,27 % H, 12,21 θ/ο N, 23,21 0/₀ Bir, nalezeno:

59,33 % C, 5,37 % H, 11,96 % N, 23,39 0/₀ Br.

Shora popsaným- postupem se reakcí D-6-methyl-S-kyanmethylergolinu s N-jodsukciinimidem získá D-ž-jod-O-methyl^-kyanmethsltrgf-in, tající po· překrystalování z etheru za rozkladu při 211 až 213 ^CC.

Analýza:

vypočteno:

52,19 % C, 4,64 0/₀ H, 10,74 0/₀ N, 32,44 % I, .natono:

51,90 % C, 4,51 o/o h, 10,58 % N, 32,17 0/₀ I.

Příklad 2

Příprava D-2-broim-6-methyl-8-i^-arboxamidotmettiylergolinu

V dusíkové atmosféře se při teplotě 65 až 70 °C připraví roztok 240 mg D-6-imettiyl-8kairboxamidomethylergolinu ve 25 ml dioxanu a k něimu se přikape roztok 180 mg Nbromsukcinimidu ve 20 ml dioxanu. Výsledná směs se cicá ·0,5 hodiny zahřívá za míchání na shora uvedenou teplotu a pak se vylije do· nasyceného vodného· roztoku kyseliny vinné. Výsledná směs se extrahuje chloroformem a chloroformová vrstva se odloží. Vodná vrstva se zfiltruje a pak se zalkalizjue zředěným roztokem hydroxidu amonného. ' D-2-brc‘m-6-methyl-8-karb<xxaimidoii^^e^íl^i^l^i^frgolin, vzniklý při shora uvedené reakci, je v zásaditém vodném· roztoku nerozpustný a vyloučí se. Vyloučená sloučenina se rozpustí v chloroformu, chloroformová vrstva se oddělí a vysuší se. Odpařením. rozpouštědla ve vakuu se získá D-2-brom-6-me thyl-8-kar bo x a mi d ome ihyler golin, který po· krystalizaci z etheru taje za rozkladu při 238 až 241 °C.

P ř í k 1 a d 3

Příprava výchozího materiálu

Připraví se suspenze 10 g D-6--methyl-8-ihydroxymethylergolrnu ve 20Ό ml pyridinu a k této suspenzi se pozvolna přidá roztok 6,0 ml methansulfonylchloridu ve · 200 ml pyridinu. Výsledná směs se v dusíkové atmosféře 0,5 hoid-ny míchá při teplotě místnosti, načež se vylije do 2,5 1 nasyceného vodného rozteku kyselého· uhličitanu sodného. Zásaditá vodná vrstva se zředí vodou na objem 6 litrů a nechá se stát při teplotě místnosti, přičemž vykrystaiuje D-6-methyl-S-mesyloxyrne-thylergolin, vzniklý při shora uvedené reakci. K vysrážení většího· množství žádaného produktu se roztok ochladí na zhruba 0 °C, pevný produkt se odfiltruje a filtrační koláč se přeikrystaluje z ethanolu. Další podíl D-6-methy--8-ιmesyl•oxymeehylergolinu se získá extrakcí filtrátu ethyiacetátem, oddělením ethylacetátové vrstvy a odpařením ethylacetátu ve vakuu. Přeikrystalováním shora připraveného D-6-me'thyl-S-mesy 1 ох у m e 1 hy i ergolinu z ethanolu se získá produkt tající za rozkladu při 192 až 194 °C.

Analýza: « vypočteno:

61,05 % C, 6,63 % Η, 8,38 o/₀ N, 9,59 % S, nalezeno:

60,8'5 % C, 6,46 % H, 8,45 % N, 9,30 0/0 S.

12,5 g D-6-me'thyl-8-mesyloxý;methyleirgoliinu připraveného shora uvedeným postupem se ·v dusíkové atmosféře 45 minut zahřívá s 12 g kyanidu sodného v přítomnosti 3'5'0 -ml dimethylsulfoxidu na teplotu 100 až 105 °C. Reakční směs se vylije do 2 litrů nasyceného vodného roztoku chloridu sodného a výsledná směs se zfiltruje. Takto získaný pevný materiál se rozmíchá v teplé vodě a znovu se odfiltruje, čímž se získá

8,4 g D-6-methyl-8-kya‘nmethyl·ergolinu.

Soli sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu s farmaceuticky upotřebitelnými kyselinami je možno· připravit rozpuštěním určitého množství ergollnové báze v etheru a přidáním ekvivalentního množství farmaceuticky upotřebitelné kyseliny, rovněž rozpuštěného v etheru. Takto připravené soli jsou obvykle nerozpustné v etheru a lze je izolovat filtrací a vyčistit překrystalováním. Alternativně je možno postupovat talk, že se ergolinová báze rozpustí v ethanolu a ik roztoku se přidá -rovněž ethainolioiký roztok ekvivalentního množství farmaceuticky upotřebitelné kyseliny. V tomto· reaikčním systému jsou soli rozpustné a izolují se odpařením· rozpouštědla ve vakuu. Odparek, pokud není krystalický, lze snadno· krystalovat z ethanolu nebo· jiných vhodných rozpouštědel.

Příprava solí

Připraví se roztok 560 mg D-2-ⁱbⁱrom-6-methyl-8-kyanmethylergolinu v cca 40 ml tetrahydrofuranu a k tomuto roztoku ergolinové báze se za míchání přidá asi 10 ml roztoku připraveného rozpuštěním · 1 g kyseliny maleinové v 50 ml tetrahydrofuranu. Přidá se cca 200 ml etheru a vyloučená sraženina se odfiltruje. Takto připravený D-2-broιm-6-methyl-8-kyanmethytergolinhydrogenmaleát · taje za rozkladu · při 207 až 209 °C.

Shora uvedeným· postupem se připraví rovněž D^-chlor-e-.meehyl-e-kyainmethylergolin-hydrogenmaleát, tající za rozkladu při 204 až 206 °C.

Analogickým postupem jako· · výše se 320 mg D-2-chlor-6-methyl-8-kyanmethylergolinu rozpustí v 15 ml tetrahydrofuranu a k tomuto roztoku se po kapkách přidává roztok methansulfonové kyseliny v tetrahydrofuranu, a to tak · dlouho, až přidání další kapky nevyvolá vznik žádné další sraženiny. Tetrahydrofuranová siměis se zředí etherem a výsledná směs se zfiltruje, čímž se získá sůl D-2-chlor-6-methyl-8-kyanimethyleirgoliinu s kyselinou methansulfonovou, tající po· krystalizaci ze směsi ethanolu a etheru za rozkladu při 295 ^ClC.

Analýza:

vypočteno:

54,61 % C, 5,60 % H, 10,61 0/0 N, 8,95 % Cl,

8,10 % S, nalezeno:

54,43 '% C, 5,79 °/o H, 10,86 o/₀ N, 9,22 % Cl, 8,18 % S.

Analogickým postupem· výše se 220 mg D- 2 -chlor - 6 - melhyl - 8 -kyanmethyle rgo·linu rozpustí v 15 -ml tetrahydrcfuranu a k rozteku se přidá zbytek nasyceného roztoku 'd-vinné kyseliny v tetnahydirofuranu. Vyloučí se . želatinová _ sraženina, která pozvolna - zkrystaluje. Směs se zředí etherem a zfiltruje se, čímž se získá -sůl D-2-chlor-6- me thyl-8 -ky anmethylergolinu s kysel inou vinnou, tající po překrystalování ze směsi ethanolu a etheru při 247 až 249 °C.

Analýza:

vypočteno:

60,88 % C, 5,65 % H, 11,21 0/₀ N, 9,46 % Cl, nalezeno:

60,66 % C, 5,41 % H, 11,41 % N, 9,49 0/₀ Cl.

Sloučeniny podle vynálezu jsou užitečné jako inhibitory gonadotropinu. Jako· takové tyto látky inhibují laktaci a jsou specifickými inhibitory prolaktinu. Popisované slou - čeniny jsou užitečné - při léčbě nepatřičné laktace, jako je poporodní laktace a galaktoirrhe-a. Kromě toho je možno sloučeniny podle vynálezu používat к léčbě adenokarcinomů závislých na prolaktinu - a nádorů hypofýzy produkujících -proláklin, jakož i k léčbě následujících chorob: Forbes-Albrightova syndromu, - ChianFr ommelova syndromu, gynekomastie, a to- jak vlastní, tak i gynekomastie vyskytnuvší se jako důsledek -podávání estrogenních steroldů při hypertrofii prostaty, fibrocystických - chorob prsu (benigní uzlíky), k profylakiicikéimu ošetření rakoviny prsu, jakož i -k léčbě nadměrného bujení prsu v důsledku podávání psychotropních léčiv, například thoraizinu.

Při používání sloučenin -podle vynálezu k inhibici prolaktinu se 2,8-disubs.tituovaný 6--methyleTgolln shora uvedeného obecného vzorce i nebo j.eho· .sůl -s farmaceuticky upotřebitelnou kyselinou suspenduje- v -kukuřičném. oleji a -pa^ť^i^l^^/rálně se injikuje nebo se podává perorálně samicím savců v množství pohybujícím se od 0,01 do 10 mg/ /kg tělesné hmotnsti savce denně. Výhodným způsobem; podání je aplikace orální. Pokud se používá -parenterálního podání, děje se tak -s výhodou subkutánními injekcemi, i když stejně účinné jisou i ostatní způsoby pairenterální aplikace, jako- podání intraperitoneální, intramuskulární nebo intravenózní. Jak je v daném·- oboru -dobře známo, je třeba -pro tyto· -další způsoby -parenteirálm aplikace použít jinou nosnou - látku než kukuřičný olej. K intravenóznlmu ' podání - nebo -k podání intramuskulárnímu se obvykle používá rozpustná fami^^^í^í^i^d^ťcky upotřebitelná sůl D-6-m'ethyl-8-ⁱkyanrmetbylergolinu. K orální aplikaci je možno sloučeninu obecného vzorce I nebo její sůl rovněž mísit se standardními farmaceutickými nosnými a -pomocnými látkami a směsí plnit zasouvací želatinové kapsle nebo z ní lisovat tablety.

Inhibici sekrece prolaktinu sloučeninami podle vynálezu dokládá - následující - pokus:

Skupinám krysích samic s -poporodní laktací se od čtvrtého do· -osmého dne po vrhu podává testovaná sloučenina (den -vrhu se počítá jako· nultý den). Kontrolní skupina zvířat dostává pouze -0,2 ml kukuřičného oleje denně, další -skupiny pak dostávají D-2-brom-6-methyl-8-kyannn©thyleirgolm nebo· odpovídající chlorderlvát, v různých dávkách. Na začátku -pokuisu se počet vrhnutých mláďat zredukuje - vždy na šest a zaznamená se celková hmotnost každého vrhu. Jak mláďata, tak -kojící samice se čtvrtého, šestého a -osmého dne zváží. Osmý den se kojící samice od mláďat odeberou a okamžitě se deika^pitují. Krev se shromáždí a v získaném séru -se radioimuinologlciky zjistí obsah prolaktinu.

Výsledky toh^o^-tíD· testu jsou shrnuty do následující tabulky 1. V prvinfm sloupci této· tabulky je uvedena testovaná sloučenina - a její dávka, v druhém· sloupci počet krys v ošetřené skupině, ve třetím- sloupci průměrná změna hmotnosti zredukovaného vrhu ve čtvrtém- sloupci průměrná změna tělesné hmotnosti kojící samice a v -pátém sloupci průměrná hladina prolaktinu v séru osmého dne pokusu.

TABULKA 1
Ošetření (čtvrtý až osmy den po vrhu)	Pcčel к ys	Průměrná změna hmotncsti redukovaného vrhu (čtvrtý až oismý den)	Průměrná změna tělesné hmotnosti kojící samice	Průměrná hladina prolaktinu v séru kojících samic (osmý den)
kontrola kukuřičný olej	30	+ 43,8 ± 1,9 g	+ 11,3 ± 3,2 g	60,6 ± 4,8 ng/ml
(0,2 ml/deu) 2 - b r o.m - 6 - me thyl e r go4m-8^-aceitonitiril	11	+ 24,9 ± 4,2 g‘)	+ 18,5 ± 5,1 g^NZ)	11,9 ± 1,9 ng/ml”
(0,6 mg/den) 2-broim-6-methylerg:olin-8/j-acetonitril	10	+ 14,8 ± 2,0 g‘)	+ 3,9 ± 4,0 g^NZ]	12,4 ± 1,3 ng/ml”‘
(1,0 mg/den) 2-chlor-6-methylergolin-8/3-acetonitril	11	+ 5,5 ± 2,6 g*)	+ 0,9 ± 4,7 g^NZ)	11,8 ± 1,0 ng/ml”

(0,6 mg/den)

Legenda:

* významná změna oproti kontrolnímu pokusu (Ρ 0,001) ^NZ) nejvýzináminá změna ^a) hodnota vypočtena ze stanovení u 5 zvířat

Jak vyplývá z výše uvedené tabulky, obě sloučeniny, spadající do rozsalhu obecného vzorce I, značně snižují hladinu prolaktinu, a tedy i sekreci prolaktinu u kojících krysích samic.

Účinnost sloučenin podle vynálezu co do potlačování růstu adenokarcinomů u samic savců dokládá následující pokus, při němž byly píro ilustrativní účely jako příklady samic savců náchylných к adenokarciinomu použity pouze krysy. Pokus se provádí následujícím způsobem:

Jednorázovým orálním podáním 7,12-dimethyibenzainthracenu v dávce 20 mg se u. krys vyvolá nádor mléčné žlázy. V týdenních intervalech se pak mléčné žlázy ošetřených zvířat palpačně zkoůmají к zjištění výskytu nádorů. Krysy se к pokusu vybírají tehdy, mají-li alespoň jeden měřitelný nádor o průměru cca 0,5 cm. Pokusná zvířata s výskytem, nádorů se rozdělí do skupin po pěti exemplářích a denně se jim podává v různých dávkách D-2-halogen-6-methyl-8-kyanm-ethyleirgoli.n suspendovaný v kukuřičném oleji. Jedna skupina kontrolních krys dostává pouze kukuřičný olej.

Výsledky tohoto pokusu jsou shrnuty do následující tabulky 2. V prvním sloupci této tabulky jsou uvedeny názvy testovaných sloučenin, v druhém sloupci jejich dávky, ve třetím sloupci způsob podání, ve čtvrtém sloupci průměr původního nádoru, v pátém sloupci průměr nádoru po dvanáctidenním ošetřování a v šestém sloupci změna v procentech.

TABULKA 2

Testovaná sloučenina	Dávka mg/kg	Způsob podání* ]	Průměr původ- Průměr nádoru	Změna v %
ního nádoru v mm	рз 12 dnech ošetření v mm
D-2-brom-6-methyl-8-kyanme-	5	SC	6,7	2,8	— 58
thylergolin	7	SC	7,7	5,6	— 27
	5	PO ·	7,1	3,1	— 56
	10	PO	7,7	4,5	-- 42
kontrola (0,2 ml kukuřičného oleje)	—	PO	7,0	8,9	+ 27
D-2-chlor-6-methyl-8-ikyanme-	5	SC	7,5	5,3	— 29
tihylergolin	7	SC	6,3	4,8	— 24
	5	PO	7,1	4,5	— 37
	10	PO	7,2	.4,5	— 38

Legenda: *] SC = subkutánní podání, PO = orální podání

Jak vyplývá z výše popsaného pokusu, působí sloučeniny podle vynálezu významnou regresi nádorů mléčné žlázy, a to jak po suibkutánním, tak po orálním podání.

Sloučeniny podle vynálezu mají značme nižší toxicitu ve srovnání s těmi slíoučeininaimi známými z dosavadního stavu techniky, v nichž je poloha 2 nesubstituovaná. Tak například z testu akutní toxicity na myších vyplývá, že D-2-halogen-6<nethyl-8-ikyainmethy 1 (nebo 8-ikarboxamidbmethyl)ergoliiny mají hodnotu LDso okolo* 1000 mg/ /kg. Naipiroti tomu hodnota LD50 D-6-miethyl-8-ikyanmethylergolinu pro myši činí cca 100 mg/ikg. Jako inhibitory proláklinu jsou však 2-halogensubstituované sloučeniny podle vynálezu stejně účinné jako nesubstituované D-6-methyl-8-kyanimethyl(inebo 8-karboxamiidotnethyl Jergoliny známé z dosavadního stavu techniky.

Účininoist sloučenin podle vynálezu jako inhibitorů sekrece proláklinu dále dokládá následující pokus:

К pokusu se používají dospělé samice krys (kmen Spraque-Dawley) o hmotnosti okolo 200 g. Všechny krysy se uchovávají v klimatizované komoře s řízeným osvětlením (osvětlení od 6.00 do 2>0.0i0 hodin] a krmí se laboratorní potravou a vodou ad libituím.

V každém pokusu se krysy usmrtí deikapitací a podíl séra o objetou 150 μΐ se podrobí analýze na obsah prolaktiinu. 18 ho din před aplikací derivátu ergolinu se každé krysí samici intraperitoneální injekcí podá 2,0 mg reserpinu ve vodné suspenzi. Podání reserpinu má za účel udržet rovnoměrně zvýšenou hladinu prolaktinu. Testované deriváty se rozpustí v 10o/₀ ethanolu v koncentraci 10 ^g/ml a podávají se intrapeiritoneální injekcí ve standardní dávce 50 ^ug/ /ml. Každá sloučenina se podá skupině 10 krys, přičemž kontrolní skupina 10 intaktních krys dostane pouze ekvivalentní množství 10% ethanolu.

Za jednu hodinu po ošetření se všechny krysy usmrtí dekapitací, jejich sérum se shromáždí a shora uvedeným způsobem se analyzuje na obsah prolaktinu. Dosažené výsledky se statisticky vyhodnotí za použití Studentova „ť‘-testu к zjištění statistické významnosti „p“.

Rozdíl mezi hladinou prolaktinu u ošetřených krys a hladinou prolaktinu u kontrolních krys, dělený hladinou prolaktinu u kontrolních krys, představuje inhibici sekrece prolaktinu v procentech, příslušející testovaé sloučenině podle vynálezu.

Dosažené výsledky jsou shrnuty do ,následující tabulky 3. V prvním sloupci této tabulky je uveden název testované sloučeniny, v druhém sloupci použitá koncentrace testované sloučeniny, ve třetím, sloupci inhibice prolaktinu v procentech a ve čtvrtém sloupci statistická výz-namin-olst.

TABULKA 3

Sloučenina Koncentrace Inhibice prolaktinu Statistická v % významnost ethanol (kontrola) — 0 0,0

D-2-chlor-6-mjethyl-8-karboxamidomethylergoliin 10 ^ug/ml 60 0,0001

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

Způsob výroby D-2-halogein-6-methyl-8-kyan(karboxamido)(methylergolinů obecné-

ho vzorce I, R 1 i 1 ,N-CH₃ HN— by (1)

ve kterém

R představuje skupinu —CH2¹—CN nebo —CH2—C—N№ II o

X v případě, že R znamená skupinu —CH21—CŇ, představuje atom chloru, bromu nebo jodu, a v případě, že R znamená skupinu —CH2—C—NH2 , II o představuje X atom bromu, a jejich solí s farmaceuticky upotřebitelnými kyselinami, vyznačující se tíím, že se

D-6-imethyl-8-kyanmethylergolin nebo D-6-methyl-8-karboxamidomethylergolin podrobí příslušné halogenaci a získaný produkt se popřípadě převede na žádanou sůl.