BR112019018915A2

BR112019018915A2 - imunotolerância direcionada

Info

Publication number: BR112019018915A2
Application number: BR112019018915A
Authority: BR
Inventors: Crane Alan; L Viney Joanne; Benson Micah; Higginson-Scott Nathan
Original assignee: Pandion Therapeutics Inc
Priority date: 2017-03-15
Filing date: 2018-03-15
Publication date: 2020-04-14
Also published as: CA3056630A1; US20180265584A1; US20220002409A1; AU2018234810A1; CN110520436A; KR20190129077A; IL268867A; JP2020513855A; EP3596108A4; WO2018170288A1; US10961310B2; AU2018234810B2; JP7165717B2; EP3596108A1

Abstract

métodos e compostos para conferir privilégio imunológico local ou sítio-específico.

Description

IMUNOTOLERÂNCIA DIRECIONADA

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS [0001] Este pedido reivindica a prioridade ao Pedido Provisório U.S. N° 62/471,509, depositado em 15 de março de 2017, que está incorporado neste documento a titulo de referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO [0002] As modalidades fornecidas neste documento referem-se, por exemplo, a métodos e composições para privilégios imunológicos locais ou direcionados.

FUNDAMENTOS [0003] Os exemplos de respostas imunes indesejadas, por exemplo, como na rejeição de tecido transplantado ou em distúrbios autoimunes, constituem um grande problema de saúde para milhões de pessoas em todo o mundo. Resultados a longo prazo para o transplante de órgãos são frequentemente caracterizados por rejeição crônica e eventual falha do órgão transplantado. Mais de vinte distúrbios autoimunes são conhecidos, afetando essencialmente todos os órgãos do corpo e afetando mais de cinquenta milhões de pessoas apenas na América do Norte. Os medicamentos imunossupressores amplamente ativos utilizados para combater a resposta imune patogênica em ambos os cenários têm sérios efeitos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 19/267

2/248 colaterais .

SUMÁRIO [0004] São divulgados neste documento métodos e compostos terapêuticos que fornecem privilégio imunológico sitio-especifico. Modalidades divulgadas neste documento são incorporadas a titulo de referência nesta seção.

[0005] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende um composto multi-especifico manipulado, por exemplo, uma molécula bi-específica manipulada, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecí fico manipulada, compreendendo:

1) uma porção de alvejamento específica selecionada a partir de:

a) uma porção de alvejamento específica do doador que, por exemplo, se liga preferencialmente a um alvo doador (preferencialmente em comparação com a ligação a um antígeno receptor), e é útil para fornecer privilégio imunológico sitio-especifico para um tecido transplantado, por exemplo, um órgão, de um doador; ou

b) uma porção de alvejamento específica do tecido que, por exemplo, se liga preferencialmente a um tecido alvo do sujeito (preferencialmente em comparação com tecido não alvo do sujeito), e é útil para fornecer privilégio imunológico sitio-especifico para um tecido do sujeito submetido a ataque

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 20/267

3/248 imune indesejado, por exemplo, em um distúrbio autoimune); e

2) uma fração de ligação/modulação efetora selecionada a partir de:

(a) uma fração de ligação/modulação de molécula inibidora de célula imune (referida neste documento como uma fração de ligação/modulação de ICIM);

(b) uma fração de ligação/modulação de célula imune imunossupressora (referida neste documento como uma fração de ligação/modulação de IIC); ou (c) uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, fornecendo, na proximidade do alvo, uma substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo (referida aqui como uma fração de ligação/modulação de SM).

[0006] Uma fração de ligação/modulação efetora pode ser classificada em mais de uma das classes a, b e c. Por exemplo, como mostrado abaixo, uma molécula de ligação CTLA4 é classificada em ambas as categorias a e b.

[0007] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM. Em algumas modalidades, uma molécula de ligação/modulação de ICIM se liga e agoniza uma molécula

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 21/267

4/248 inibidora, por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico, ou inibe de outro modo ou reduz a atividade de uma célula imune, por exemplo, uma célula T citotóxica, uma célula B, célula NK ou uma célula mielóide, por exemplo, um neutrófilo ou macrófago.

[0008] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende um composto multi-especifico manipulado, por exemplo, uma molécula bi-especifica manipulada, por exemplo, uma molécula de anticorpo biespecifico manipulada, compreendendo:

1) uma porção de alvejamento específica, por exemplo, uma porção de alvejamento específica do doador (que se liga a um alvo doador e é útil para fornecer privilégio imunológico sítio-específico para um tecido transplantado, por exemplo, um órgão, de um doador) ou uma porção de alvejamento específica do tecido (que liga um alvo de tecido do sujeito e é útil para fornecer privilégio imunológico sítio-específico para um tecido do sujeito sofrendo ataque imune indesejado, por exemplo, em um distúrbio autoimune); e

2) uma fração de ligação/modulação efetora compreendendo uma fração de ligação/modulação de ICIM que se liga a uma molécula efetora em uma célula imune, por exemplo, um receptor inibitório, por exemplo, PD-1, em que, por

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 22/267

5/248 ligação da porção de alvejamento especifica ao seu alvo e ligação da fração de ligação/modulação de ICIM a uma molécula efetora na célula imune, uma atividade de células imunes, por exemplo, a capacidade da célula imune de montar um ataque imunológico, é regulada negativamente, por exemplo, através de um sinal inibitório dependente do agrupamento de moléculas efetoras na célula imune. Em algumas modalidades, o composto multi-especifico manipulado compreende frações de ligação adicionais, de modo que se liga a mais de duas moléculas específicas, tais como, mas não limitadas a, 3 ou 4.

[0009] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM e tem uma ou ambas das seguintes propriedades: (a) o nível de regulação negativa de uma célula imune é maior quando o composto terapêutico está ligado ao seu alvo do que quando o composto terapêutico não está ligado ao seu alvo; e (b) o composto terapêutico, quando conectado com um receptor inibitório da superfície celular, por exemplo, PD1, em uma célula imune, não inibe ou não inibe substancialmente a capacidade do receptor inibitório da superfície celular de se ligar a um ligante endógeno.

[0010] Em algumas modalidades, o nível de regulação negativa de uma célula imune é maior quando o composto terapêutico está ligado ao seu alvo do que quando o composto

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 23/267

6/248 terapêutico não está ligado ao seu alvo. Em modalidades, o nível de regulação negativa por composto terapêutico ligado ao alvo é igual ou superior a 1,5 vezes, 2 vezes, 4 vezes, 8 vezes ou 10 vezes superior ao que é visto quando não está ligado à seu alvo. Em modalidades, o composto terapêutico não regula ou não regula negativamente de forma significativa células imunes quando não está ligado ao alvo. Assim, o agonismo indiscriminado ou indesejado de um receptor inibitório, por exemplo, PD-1, é minimizado ou eliminado. Por exemplo, quando o composto terapêutico está ligado a uma célula imune, mas não ligado à fração alvejada, a conexão de uma molécula inibidora do checkpoint imunológico ao composto terapêutico não resulta em regulação negativa ou não resulta em regulação negativa substancial, por exemplo, o receptor inibitório na célula imune a qual o composto terapêutico está ligado, não está agrupado ou não está suficientemente agrupado para resultar em um sinal inibitório suficiente para diminuir a regulação ou inibição substancial da célula imune.

[0011] Em modalidades, o composto terapêutico, quando conectado com um receptor inibitório da superfície celular, por exemplo, PD-1, em uma célula imune, não inibe ou não inibe substancialmente a capacidade do receptor inibitório da superfície celular de se ligar a um ligante

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 24/267

7/248 endógeno. Em algumas modalidades, o composto terapêutico pode se ligar ao sitio de ligação de PD-L1/2 na PD-1. Assim, o antagonismo indiscriminado ou indesejado de um receptor inibitório, por exemplo, PD-1, é minimizado ou eliminado. Em modalidades, a ligação do composto terapêutico a um receptor inibitório, por exemplo, PD-1, em uma célula imune não impede, ou não impede substancialmente, a capacidade do receptor inibitório de ligar um ligante natural, por exemplo, PD-L1. Em modalidades, a ligação do composto terapêutico a um receptor inibitório, por exemplo PD-1, em uma imune reduz a ligação de um ligante natural, por exemplo, PD-L1, em menos de 50, 40, 30, 20, 10 ou 5% do que é visto na ausência de composto terapêutico.

[0012] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM e, quando administrado a um sujeito em uma dose terapeuticamente eficaz, não resulta em níveis inaceitáveis de supressão imunitária sistêmica, como seria possível se ocorresse o agonismo indiscriminante do receptor inibitório em todas as células imunes de um tipo, por exemplo, todas as células T, ou níveis inaceitáveis de ativação imune sistêmica, como seria possível se o composto terapêutico antagonizasse a interação do receptor inibitório com seu ligante natural.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 25/267

8/248 [0013] Embora não desejando estar limitado pela teoria, acredita-se que, após administração a um sujeito, um composto terapêutico compreendendo uma fração de ligação/modulação de ICIM pode existir em qualquer um de quatro estados: i) não ligado e em solução livre; ii) ligado apenas a um receptor inibitório expresso na superfície de uma célula imune, por exemplo, uma célula T, através da fração de ligação/modulação de ICIM; iii) ligado apenas à superfície do transplante alvo ou tecido do sujeito através da porção de alvejamento; e iv) ligado a ambas superfícies do transplante alvo e tecido do sujeito através da porção de alvejamento e a um receptor inibitório expresso por uma célula imune, por exemplo, uma célula T, através da fração de ligação/modulação de ICIM. Quando o composto terapêutico está ligado apenas ao transplante alvo ou tecido do sujeito (iii) através da porção de alvejamento, ele não tem efeito, ou não tem efeito substancial, no tecido ou transplante alvo. Quando o composto terapêutico é ligado ao tecido ou transplante alvo através da porção de alvejamento e ligado a um receptor inibitório expresso por uma célula imune, por exemplo, uma célula T, através da fração de ligação/modulação de ICIM (iv), cria-se privilégio imunológico no órgão ou tecido alvo. Embora não desejando estar limitado pela teoria, acredita-se que isso seja alcançado pelo tecido alvo do

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 26/267

9/248 doador ou transplantado multimerizando as moléculas de composto terapêutico em sua superfície, por exemplo, imobilizando uma pluralidade de moléculas de composto terapêutico a uma alta densidade e valência. A multimerização das moléculas de composto terapêutico permite que as frações de ligação/modulação de ICIM dos compostos terapêuticos promovam o agrupamento de receptores inibitórios expressos na superfície da célula imune, por exemplo, uma célula T patogênica, e transmissão de um sinal inibitório funcionando para silenciar ou regular negativamente a célula imune. Por exemplo, no caso de células T, pode ser utilizado um composto terapêutico compreendendo uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo uma molécula de PD-L1 ou um anti-PD-1 Ab. A ligação de uma pluralidade de moléculas de composto terapêutico ao alvo resulta na multimerização das moléculas do composto terapêutico, que por sua vez, em virtude da molécula PD-L1, ou uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional, leva ao agrupamento de PD -1 na célula T. Se esse agrupamento ocorre no contexto de apresentação de antígeno pelo MHC alvo, ao receptor de células T na célula T, um sinal negativo é gerado e a célula T será inativada. Em modalidades, a fração de ligação/modulação de ICIM, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional, liga a molécula efetora, mas não inibe, ou não inibe substancialmente, a

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 27/267

10/248 interação da molécula efetora com seu(s) ligante(s) nativo(s).

[0014] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de IIC, que liga e recruta uma célula imunossupressora imunológica, por exemplo, um Treg, por exemplo, um Treg Foxp3+CD25+, à proximidade do tecido alvo.

[0015] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM, que modula, por exemplo, liga e inibe, sequestra, degrada ou neutraliza de outra forma uma substância, por exemplo, uma molécula solúvel que modula uma resposta imune, por exemplo, ATP ou AMP.

[0016] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento que é específica para um alvo em uma célula imune. Em algumas modalidades, o alvo é como descrito neste documento. Em algumas modalidades, o alvo é MAdCAM. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento é um anticorpo que se liga a MAdCAM.

[0017] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento específica do doador e fornece privilégio imunológico sítio-específico para tecido transplantado do doador implantado em um sujeito. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 28/267

11/248 uma porção de alvejamento específica do tecido e fornece um privilégio imunológico sítio-específico para um tecido de um sujeito, por exemplo, um tecido afetado com uma resposta imune indesejada em um distúrbio autoimune.

[0018] A porção de alvejamento é específica para o tecido do sujeito ou transplantado do doador a ser protegido do sistema imunológico. Em algumas modalidades, a fração de ligação da molécula efetora compreende um domínio de ligação gerado do início, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação efetora compreende a sequência de aminoácidos derivada do ligante natural que reconhece um receptor inibitório expresso na superfície de uma célula imune, por exemplo, uma célula T.

[0019] Em algumas modalidades, o composto terapêutico silencia as células imunes, por exemplo, células T, próximas do tecido de doador ou transplantado a ser protegido mas não silencia as células imunes, por exemplo, células T, não proximais ao alvo, uma vez que o composto terapêutico requer a presença do tecido alvo de doador ou transplantado para funcionar. Isto em contraste com quando o composto terapêutico se liga apenas ao receptor inibitório expresso pela célula imune, por exemplo, célula T, caso em que não há consequência funcional.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 29/267

12/248 [0020] Os métodos e compostos terapêuticos descritos neste documento são baseados, pelo menos em parte, no fornecimento de privilégio imunológico sitio-especifico. Os compostos terapêuticos e o método de uso dos mesmos descritos neste documento permitem a minimização, por exemplo, a redução ou eliminação, de administração sistêmica não sitioespecífica de agentes terapêuticos imunossupressores em contextos clínicos, por exemplo, onde a reversão e supressão de uma resposta imune são desejadas, como em tecido ou doenças autoimunes, por exemplo, órgão, transplante. Embora sejam capazes de ter uma resposta clinicamente significativa quando a fisiopatologia subjacente conduzida por um sistema imunológico aberrante é afetada, os imunossupressores de ação ampla têm o efeito indesejável de reduzir a função sistêmica do sistema imunológico do paciente. Como o papel de um sistema imunológico funcionando normalmente é combater a constante enxurrada de organismos patogênicos e oportunistas existentes no ambiente circundante e constantemente expurgar indivíduos saudáveis de células cancerosas, os pacientes submetidos à imunossupressão crônica correm um risco maior de desenvolver infecções e câncer. Os métodos e compostos terapêuticos descritos neste documento fornecem terapias que seletivamente direcionam e atenuam, reduzem ou extinguem apenas a resposta

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 30/267

13/248 imunopatológica no sítio da patologia, enquanto possuem uma inibição mínima da função do sistema imunológico sistêmico normal em outro local.

[0021] Em algumas modalidades, um composto terapêutico é fornecido como fornecido neste documento. Em algumas modalidades, o composto compreende i) uma porção de alvejamento específica selecionada a partir de: a) uma porção de alvejamento específica do doador que, por exemplo, se liga preferencialmente a um alvo de doador; ou b) uma porção de alvejamento específica do tecido que, por exemplo, se liga preferencialmente ao tecido alvo de um sujeito; e ii) uma fração de ligação/modulação efetora selecionada a partir de: (a) uma fração de ligação/modulação de molécula inibitória de célula imune (fração de ligação/modulação de ICIM); (b) uma fração de ligação/modulação de célula imune imunossupressiva (fração de ligação/modulação de IIC) ; ou (c) uma fração efetora de ligação/modulação que, como parte de um composto terapêutico, promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, ao fornecer nas proximidades do alvo, uma substância que inibe ou minimiza o ataque ao alvo pelo sistema imunológico (fração de ligação/modulação de SM).

[0022] Em algumas modalidades, a fração efetora de ligação/modulação compreende uma fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 31/267

14/248 de ICIM. Em algumas modalidades, a fração efetora de ligação/modulação compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo uma molécula de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico. Em algumas modalidades, a molécula de contra-ligante da molécula inibidora imunológica compreende uma molécula PD-L1. Em algumas modalidades, a ICIM é em que a molécula de contra-ligante da molécula inibidora imunológica que se conecta a uma molécula inibidora cognata do checkpoint imunológico selecionada dentre PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4. Em algumas modalidades, o ICIM é um anticorpo. Em algumas modalidades, o ICIM compreende um anticorpo que se liga a PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de ICIM compreende uma molécula de anticorpo funcional para uma molécula inibidora da superfície celular.

[0023] Em algumas modalidades, a molécula inibidora da superfície celular é uma molécula inibidora do checkpoint imunológico. Em algumas modalidades, a molécula inibidora do checkpoint imunológico é selecionada a partir de PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB2, CTLA-4 ou selecionada a partir da Tabela 1.

[0024] Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 32/267

15/248 ligação/modulação de IIC.

[0025] Em algumas modalidades, o composto possui a fórmula do terminal N para o terminal C:

RI---Região do Ligante Peptidico A—R2 ou R3—Região do

Ligante Peptidico B—R4, em que Rl, R2, R3 e R4, cada um independentemente compreende uma fração de ligação/modulação efetora , por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC ou uma fração de ligação/modulação de SM; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente; desde que uma fração de ligação/modulação efetora e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.

[0026] Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de doenças ou condições autoimunes, os métodos compreendendo a administração de um ou mais dos compostos terapêuticos fornecidos neste documento.

[0027] Em algumas modalidades, são fornecidos neste documento métodos de tratamento de doenças ou condições descritos neste documento, os métodos compreendendo a administração de um ou mais compostos terapêuticos fornecidos neste documento.

[0028] Em algumas modalidades, são fornecidos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 33/267

16/248 métodos de tratamento de um sujeito com doença inflamatória intestinal, os métodos compreendendo a administração de um composto terapêutico fornecido neste documento ao sujeito para tratar a doença inflamatória intestinal. Em algumas modalidades, o sujeito tem doença de Crohn e/ou colite ulcerativa.

[0029] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de um sujeito com hepatite auto-imune, os métodos compreendendo a administração de um composto terapêutico como fornecido neste documento ao sujeito para tratar a hepatite auto-imune.

[0030] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de colangite esclerosante primária, os métodos compreendendo a administração de um composto terapêutico como fornecido neste documento ao sujeito para tratar a colangite esclerosante primária.

[0031] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de diabetes Tipo 1, os métodos compreendendo a administração de um composto terapêutico tal como fornecido neste documento ao sujeito para tratar a diabetes Tipo 1.

[0032] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento para um sujeito transplantado, os métodos compreendendo administrar uma quantidade

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 34/267

17/248 terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico como fornecido neste documento ao sujeito, tratando portanto um sujeito transplantado (receptor).

[0033] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de GVHD em um sujeito que transplantou um tecido de doador, os métodos compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico como fornecido neste documento ao sujeito.

[0034] Em algumas modalidades, são fornecidos métodos de tratamento de um sujeito com, ou em risco de, ou em risco elevado de possuir, um distúrbio autoimune, os métodos compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico como fornecido neste documento, tratando portanto o sujeito.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS [0035] FIG. 1 uma representação de um composto terapêutico bi-especifico em um formato scFv-Fc em sequência (150kDa) contendo um domínio scFv de alvejamento e um domínio efetor consistindo de um scFv ou uma sequência correspondente ao ligante endógeno.

[0036] FIG. 2 é uma representação de uma célula T ligada a compostos terapêuticos divulgados neste documento. No estado 1, o domínio efetor de um bi-especifico se liga a receptores inibitórios de células T enquanto na circulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 35/267

18/248 sistêmica, sem que ocorra agonismo ou antagonismo do receptor. No estado 2, o domínio de alvejamento bi-específico se liga ao órgão alvo levando a multimerização bi-específica na superfície do órgão alvo. Durante o reconhecimento das células T do órgão alvo, os domínios efetores multimerizados se ligam, agrupam e sinalizam através de moléculas inibidoras de células T.

[0037] FIG. 1 representa modalidades não limitantes dos compostos terapêuticos fornecidos neste documento.

[0038]	FIG. 2 representa uma	ilustração	não
limitante documento	de como um composto terapêutico fornecido pode funcionar.	neste
[0039	]	FIG. 3 representa uma	ilustração	não
limitante documento.	dos	compostos terapêuticos	fornecidos	neste
[0040	]	FIG. 3A representa uma	ilustração	não
limitante documento.	dos	compostos terapêuticos	fornecidos	neste
[0041	]	FIG. 4 representa uma	ilustração	não
limitante documento.	dos	compostos terapêuticos	fornecidos	neste
[0042	]	FIG. 5 representa uma	ilustração	não
limitante	dos	compostos terapêuticos	fornecidos	neste

documento.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 36/267

19/248

[0043]		FIG. 6 representa uma	ilustração	não
limitante	dos	compostos terapêuticos	fornecidos	neste
documento. [0044] limitante	dos	FIG. 7 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0045] limitante	dos	FIG. 8 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0046] limitante	dos	FIG. 9 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0047] limitante	dos	FIG. 10 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0048] limitante	dos	FIG. 11 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0049] limitante	dos	FIG. 12 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste
documento. [0050] limitante	dos	FIG. 13 representa uma compostos terapêuticos	ilustração fornecidos	não neste

documento .

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 37/267

20/248

[0051]	FIG. 14	representa uma	ilustração	não
limitante	dos compostos	terapêuticos	fornecidos	neste
documento. [0052]	FIG. 15	representa uma	ilustração	não
limitante	dos compostos	terapêuticos	fornecidos	neste
documento. [0053]	FIG. 16	representa uma	ilustração	não
limitante	dos compostos	terapêuticos	fornecidos	neste
documento. [0054]	FIG. 17	representa uma	ilustração	não
limitante	dos compostos	terapêuticos	fornecidos	neste
documento. [0055]	FIG. 18	representa uma	ilustração	não
limitante	dos compostos	terapêuticos	fornecidos	neste

documento .

DESCRIÇÃO DETALHADA [0056] Conforme utilizado neste documento e salvo indicação contrária, o termo cerca de pretende significar ± 5% do valor que modifica. Assim, cerca de 100 significa 95 a 105.

[0057] Conforme usado neste documento e nas reivindicações anexas, as formas singulares um, uma, e o, a incluem o plural, a menos que o contexto indique claramente o contrário.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 38/267

21/248 [0058] Conforme usado neste documento, o termo cerca de significa que o valor numérico está aproximado e pequenas variações não afetariam significativamente a prática das modalidades divulgadas. Onde uma limitação numérica for usada, a menos que indicado o contrário pelo contexto, cerca de significa que o valor numérico pode variar em ±10% e permanecer dentro do âmbito das modalidades divulgadas.

[0059] Conforme usado neste documento, o termo animal inclui, mas não está limitado a, vertebrados humanos e não-humanos, tais como animais selvagens, domésticos e de fazenda.

[0060] Conforme utilizado neste documento, o termo por em contato significa reunir dois elementos em um sistema in vitro ou em um sistema in vivo. Por exemplo, por em contato um composto terapêutico com um indivíduo ou paciente ou célula inclui a administração do composto a um indivíduo ou paciente, tal como um humano, bem como, por exemplo, a introdução de um composto em uma amostra contendo uma preparação celular ou purificada contendo alvo.

[0061] Conforme usado neste documento, os termos compreendendo (e qualquer forma de compreendendo, tal como compreender, compreende e compreendido), tendo (e qualquer forma de tendo, tal como ter e tem), incluindo

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 39/267

22/248 (e qualquer forma de incluindo, tal como incluir e inclui) ou contendo (e qualquer forma de contendo, tal como contém e contêm) são inclusivos e não limitados e não excluem elementos não relatados ou etapas de métodos adicionais. Qualquer composição ou método que relate o termo compreendendo também deve ser entendido para também descrever essas composições como consistindo, consistindo de ou consistindo essencialmente dos componentes ou elementos relatados.

[0062] Conforme usado neste documento, o termo indivíduo, sujeito ou paciente, usados de forma indistinta, significa qualquer animal, incluindo mamíferos, tais como camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, suínos, gado, ovelhas, cavalos ou primatas, tais como humanos.

[0063] Conforme usado neste documento, o termo inibir refere-se a um resultado, sintoma ou atividade sendo reduzido em comparação com a atividade ou resultado na ausência do composto que está inibindo o resultado, sintoma ou atividade. Em algumas modalidades, o resultado, sintoma ou atividade é inibido em cerca de, ou, pelo menos, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% ou 99%. Um resultado, sintoma ou atividade também pode ser inibido se for completamente eliminado ou extinto.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 40/267

23/248 [0064] Conforme usado neste documento, a frase em necessidade de significa que o sujeito foi identificado como tendo necessidade do método ou tratamento especifico. Em algumas modalidades, a identificação pode ser por quaisquer meios diagnósticos. Em qualquer um dos métodos e tratamentos descritos neste documento, o sujeito pode estar necessitado dele. Em algumas modalidades, o sujeito está em um ambiente ou irá para um ambiente no qual uma doença, distúrbio ou condição especifica prevalece.

[0065] Conforme usado neste documento, a frase número inteiro de X a Y significa qualquer número inteiro que inclua os pontos finais. Por exemplo, a frase número inteiro de X a Y significa 1, 2, 3, 4 ou 5.

[0066] Conforme usado neste documento, o termo mamífero significa um roedor (isto é, um camundongo, um rato ou um porquinho-da-índia), um macaco, um gato, um cão, uma vaca, um cavalo, um porco ou um humano. Em algumas modalidades, o mamífero é um humano.

[0067] Conforme usada neste documento, a frase oftalmicamente aceitável significa não ter efeito prejudicial persistente no olho tratado ou no seu funcionamento, ou na saúde geral do sujeito que está sendo tratado. No entanto, será reconhecido que efeitos transitórios, como irritação menor ou sensação de ardência,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 41/267

24/248 são comuns à administração oftálmica tópica de drogas e a existência de tais efeitos transitórios não é inconsistente com a composição, formulação ou ingrediente (por exemplo, excipiente) em questão ser oftalmicamente aceitável como definido neste documento. Em algumas modalidades, as composições farmacêuticas podem ser oftalmicamente aceitáveis ou adequadas para administração oftálmica.

[0068] Ligação especifica ou liga-se especificamente a ou é especifica para um antigeno, alvo ou um epítopo particular significa uma ligação que é mensuravelmente diferente de uma interação não especifica. A ligação especifica pode ser medida, por exemplo, por meio da determinação da ligação de uma molécula em comparação com a ligação de uma molécula de controle, a qual geralmente é uma molécula de estrutura semelhante que não tem atividade de ligação. Por exemplo, a ligação especifica pode ser determinada por competição com uma molécula de controle que é semelhante ao alvo.

[0069] A ligação especifica para um antigeno, alvo ou um epítopo particular pode ser exibido, por exemplo, por um anticorpo com um Kd para um antigeno ou epítopo de pelo menos cerca de 10~^4M, pelo menos cerca de 10~^5M, pelo menos cerca de 10~^6M, pelo menos cerca de 10~^7M, pelo menos cerca de 10~^8M, pelo menos cerca de 10~^9M, alternativamente pelo menos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 42/267

25/248 cerca de 10~^10M, pelo menos cerca de 10~^11M, pelo menos cerca de 10 ~^12M, _ou maior, onde K d refere-se a uma taxa de dissociação de uma interação anticorpo-antigeno particular. Tipicamente, um anticorpo que se liga especificamente a um antigeno ou alvo terá um Kd que é de, ou pelo menos, 2, 4, 5, 10, 20, 50, 100, 500, 1000, 5,000, 10,000, ou mais vezes superior para uma molécula de controle em relação ao antigeno ou epitopo.

[0070] Em algumas modalidades, a ligação específica para um antigeno, alvo ou epitopo em particular pode ser exibida, por exemplo, por um anticorpo com um Ka ou K_a para um alvo, antigeno ou epitopo de pelo menos 2, 4, 5, 20, 50, 100, 500, 1000, 5.000, 10.000 ou mais vezes maior para o alvo, antigeno ou epitopo em relação a um controle, em que Ka ou K_a se refere a uma taxa de associação de uma interação anticorpo-antigeno em particular.

[0071] Conforme fornecido neste documento, os compostos e composições terapêuticos podem ser utilizados em métodos de tratamento, como fornecido neste documento. Conforme usado neste documento, os termos tratar, tratado ou tratando significam tratamentos terapêuticos e medidas profiláticas, em que o objetivo é desacelerar (diminuir) uma condição fisiológica indesejada, distúrbio ou doença, ou obter resultados clínicos benéficos ou desejados.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 43/267

26/248

Para os fins destas modalidades, resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, alívio dos sintomas; diminuição da extensão da condição, distúrbio ou doença; estabilização (isto é, não piora) do estado da condição, distúrbio ou doença; retardo no início ou desaceleração da progressão da condição, distúrbio ou doença; melhora do estado da condição, distúrbio ou doença ou remissão (tanto parcial quanto total), tanto detectável ou indetectável; uma melhora de pelo menos um parâmetro físico mensurável, não necessariamente perceptível pelo paciente; ou potencialização ou melhora da condição, distúrbio ou doença. 0 tratamento inclui desencadear uma resposta clinicamente significativa sem níveis excessivos de efeitos colaterais. Tratamento também inclui o prolongamento da sobrevida, em comparação à sobrevida esperada se não receber tratamento. Assim, tratamento da dor ou tratar a dor significa uma atividade que alivia ou melhora qualquer um dos fenômenos primários ou sintomas secundários associados à dor ou a outra condição descrita neste documento.

[0072] São fornecidos neste documento compostos terapêuticos, por exemplo, moléculas de proteínas terapêuticas, por exemplo, proteínas de fusão, incluindo uma porção de alvejamento e uma fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 44/267

27/248 efetora, tipicamente como domínios separados. São também fornecidos métodos de utilização e produção dos compostos terapêuticos. A porção de alvejamento serve para localizar o composto terapêutico e, assim, a fração de ligação/modulação efetora, a um sítio no qual o privilégio imunológico é desejado. A fração de ligação/modulação efetora compreende um ou mais a partir de: (a) uma fração de ligação/modulação da molécula inibidora de célula imune (fração de ligação/modulação de ICIM); (b) uma fração de ligação/modulação de células imunes imunossupressoras (uma fração de ligação/modulação de IIC) ; ou (c) uma fração de ligação/modulação de molécula solúvel (uma fração de ligação/modulação de SM). Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende:(a) e (b); (a) e (c); (b) e (c) ; ou (a) , (b) e (c) .

[0073] A presente divulgação fornece, por exemplo, moléculas que podem atuar como agonistas de PD-1. Sem estar ligado a nenhuma teoria em particular, o agonismo de PD-1 inibe a ativação/sinalização de células T e pode ser realizado por diferentes mecanismos. Por exemplo, a ligação cruzada pode levar ao agonismo, agonistas funcionais de PD1 ligados a partículas foram descritos (Akkaya. Ph.D. Tese: Modulation of the PD-1 pathway by inhibitory antibody superagonists. Christ Church College, Oxford, UK, 2012), que

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 45/267

28/248 é incorporada neste documento a título de referência. A ligação cruzada de PD-1 com dois mAbs que se ligam a epítopos não sobrepostos induz a sinalização de PD-1 (Davis, US 2011/0171220), que é incorporado neste documento a título de referência. Outro exemplo é ilustrado pelo uso de um antisoro anti-PD-1 de cabra (por exemplo, AF1086, R&D Systems), que é incorporado neste documento a título de referência, que atua como agonista quando solúvel (Said et al. , 2010, Nat Med) que é incorporado neste documento a título de referência. Exemplos não limitantes de agonistas de PD-1 que podem ser utilizados nas presentes modalidades incluem, mas não estão limitados a, clone 19 de UCB ou clone 10, PD1AB1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4 e PD1AB-5, PD1AB-6 (Anaptys/Celgene), PD1-17, PD1-28, PD1-33 e PD1-35 (Collins et al, US 2008/0311117 Al Antibodys against PD-1 and uses therefor, que é incorporado a título de referência), ou podem ser um anti-PD-l/anti-CD3 (Ono) monovalente, bi-específico, e semelhantes. Em algumas modalidades, os anticorpos agonistas de PD-1 podem ser anticorpos que bloqueiam a ligação de PD-L1 a PD-1. Em algumas modalidades, os anticorpos agonistas de PD-1 podem ser anticorpos que não bloqueiam a ligação de PD-L1 a PD-1.

[0074] O agonismo de PD-1 pode ser medido por qualquer método, como os métodos descritos nos exemplos. Por

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 46/267

29/248 exemplo, podem ser construídas células que expressam, incluindo expressam estavelmente , construtos que incluem um polipeptídeo PD-1 humano fundido com um doador de enzima da b-galactosidase e 2) um polipeptídeo SHP-2 fundido com um aceitador de enzima da b-galactosidase. Sem estar vinculado a nenhuma teoria, quando o PD-1 é ativado, o SHP2 é recrutado para o PD-1. 0 aceitador de enzima e doador de enzima formam uma enzima b-galactosidase totalmente ativa que pode ser testada. Contudo, o ensaio não mostre diretamente o agonismo da PD-1, mas mostra a ativação da sinalização de PD-1. 0 agonismo de PD-1 pode também ser medido através da medição da inibição da ativação de células T porque, sem estar vinculado a nenhuma teoria, o agonismo de PD-1 inibe a ativação de células T induzida por anti-CD3. Por exemplo, o agonismo de PD-1 pode ser medido por pré-

ativação de	células	T com	PHA (para células	T humanas	) ou
ConA (para	células	T de	camundongo), de	modo que	elas
expressem PD	-1. As	células	podem então ser	reativadas	com

anti-CD3 na presença de anti-PD-1 (ou PD-L1) para o ensaio de agonismo de PD-1. Células T que recebem um sinal agonista de PD-1 na presença de anti-CD3 mostrarão ativação diminuída, em relação à estimulação de anti-CD3 sozinha. A ativação pode ser lida pela proliferação ou produção de citocinas (IL-2, IFNg, IL-17) ou outros marcadores, como o marcador de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 47/267

30/248 ativação CD69. Assim, o agonismo de PD-1 pode ser medido por produção de citocinas ou proliferação celular. Outros métodos também podem ser usados para medir o agonismo de PD1.

[0075] PD-1 é um membro da superfamília Ig expresso em células T ativadas e outras células imunes. Os ligantes naturais para PD-1 parecem ser PD-L1 e PD-L2. Sem estar vinculado a nenhuma teoria em particular, quando PD-L1 ou PD-L2 se ligam a PD-1 em uma célula T ativada, uma cascata de sinalização inibitória é iniciada, resultando na atenuação da função da célula T efetora ativada. Assim, bloquear a interação entre PD-1 em uma célula T e PD-L1/2 em outra célula (por exemplo, célula tumoral) com um antagonista de PD-1 é conhecido como inibição do checkpoint e libera as células T da inibição. Em contraste, os anticorpos agonistas de PD-1 podem se ligar a PD-1 e enviar um sinal inibitório e atenuar a função de uma célula T. Assim, os anticorpos agonistas de PD-1 podem ser incorporados em várias modalidades descritas neste documento como uma fração de ligação/modulação da molécula efetora, que pode realizar imunomodulação localizada especifica de tecido quando pareada com uma porção de alvejamento.

[0076] A fração de ligação/modulação de molécula efetora pode fornecer um ambiente ou sinal imunossupressor

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 48/267

31/248 de diversas maneiras. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM que se liga diretamente e (sob as condições apropriadas como descritas neste documento) ativa um receptor inibitório expresso por células imunes responsáveis por conduzir a patologia da doença. Em outra modalidade, a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação da IIC e se liga e acumula células imunes imunossupressoras. Em algumas modalidades, as células imunossupressoras acumuladas promovem privilégios imunológicos. Em outra modalidade, a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de SM que manipula o microambiente circundante para torná-lo menos admissível para a função das células imunes, por exemplo, células imunes que conduzem a patologia da doença. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de SM esgota uma entidade que promove ataque ou ativação imune.

[0077] A porção de alvejamento e a fração de ligação/modulação efetora são fisicamente fixadas, covalente ou não covalentemente, diretamente ou através de uma entidade de ligante peptídico, ligada uma à outra, por exemplo, como um membro de uma mesma molécula de proteína em uma molécula de proteína terapêutica. Em algumas modalidades, as frações

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 49/267

32/248 efetoras e de alvejamento são fornecidas em uma molécula de proteína terapêutica, por exemplo, uma proteína de fusão, tipicamente como domínios separados. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento, a fração de ligação/modulação efetora ou ambas, compreendem cada uma molécula de anticorpo de domínio único, por exemplo, uma molécula de anticorpo camelídeo VHH ou domínio VH solúvel de humanos. Também pode conter uma variável de fragmento de cadeia única (scFv) ou um domínio Fab. Em algumas modalidades, a molécula de proteína terapêutica, ou um ácido nucleico, por exemplo, um mRNA ou DNA, que codifica a molécula de proteína terapêutica, pode ser administrada a um sujeito. Em algumas modalidades, as frações de ligação/modulação de moléculas de alvejamento e efetoras estão ligadas a uma terceira entidade, por exemplo, um transportador, por exemplo, um transportador polimérico, um dendrímero ou uma partícula, por exemplo, uma nanopartícuia. Os compostos terapêuticos podem ser usados para regular negativamente uma resposta imune a ou em um tecido em um alvo ou sítio selecionado, enquanto não possui ou possui uma função imunossupressora substancialmente menor sistemicamente. 0 alvo ou sítio pode compreender tecido do doador ou tecido autólogo.

[0078] São fornecidos neste documento métodos para fornecer privilégio imunológico sítio-específico para um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 50/267

33/248 tecido de doador transplantado, por exemplo, um aloenxerto tecidual, por exemplo, um tecido descrito neste documento, por exemplo, um aloenxerto hepático, um aloenxerto renal, aloenxerto cardíaco, aloenxerto pancreático, aloenxerto do timo ou tecido do timo, aloenxerto dérmico ou um aloenxerto pulmonar, com compostos terapêuticos divulgados neste documento. Em modalidades, o tratamento minimiza a rejeição de, minimiza o dano mediado pela célula efetora imune a, prolonga a aceitação ou prolonga a vida funcional do, tecido transplantado de doador.

[0079] Também são fornecidos neste documento métodos de inibição de doença do enxerto contra hospedeiro (GVHD) ao minimizar-se a capacidade de células imunes do doador, por exemplo, células T do doador, para mediar ataques imunológicos ao tecido do receptor com os compostos terapêuticos divulgados neste documento.

[0080] Também são fornecidos neste documento métodos de tratamento, por exemplo, tratamento terapêutico ou tratamento profilático (ou prevenção), de um distúrbio autoimune ou resposta em um sujeito através da administração de um composto terapêutico divulgado neste documento, por exemplo, para proporcionar modulação específica do sítio ou tecido do sistema imunológico. Em algumas modalidades, o método fornece tolerância a, minimização da rejeição a,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 51/267

34/248 minimização do dano mediado por células imunes efetoras ou prolongamento de uma função do, tecido do sujeito. Em algumas modalidades, o composto terapêutico inclui uma porção de alvejamento que tem como alvo, por exemplo, alvos específicos, o tecido sob ou em risco de ataque autoimune. Os tecidos exemplificativos não limitantes incluem, mas não

se limitam sinoviócitos	ao pâncreas, mielina, e miócitos.	glândulas	salivares,
[0081]	Conforme usado neste	documento,	os termos
tratar, tratado ou tratando em	relação a	tratamentos

terapêuticos em que o objetivo é desacelerar (diminuir) uma condição fisiológica indesejada, distúrbio ou doença, ou obter resultados clínicos benéficos ou desejados. Por exemplo, resultados clínicos benéficos ou desejados incluem, mas não estão limitados a, alívio dos sintomas; diminuição da extensão da condição, distúrbio ou doença; estado estabilizado (isto é, não piora) da condição, distúrbio ou doença; retardo do início ou demora da progressão da condição, distúrbio ou doença; melhora do estado da condição, distúrbio ou doença ou remissão (tanto parcial quanto total), tanto detectável ou indetectável; uma melhora de pelo menos um parâmetro físico mensurável, não necessariamente perceptível pelo paciente; ou potencialização ou melhora da condição, distúrbio ou doença. 0 tratamento inclui

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 52/267

35/248 desencadear uma resposta clinicamente significativa sem níveis excessivos de efeitos colaterais. Tratamento também inclui o prolongamento da sobrevida, em comparação à sobrevida esperada se não receber tratamento. Assim, tratamento de uma doença/distúrbio autoimune significa uma atividade gue alivia ou melhora qualquer um dos fenômenos primários ou sintomas secundários associados com a doença/distúrbio autoimune ou outra condição descrita neste documento. As várias doenças ou condições são fornecidas neste documento. 0 tratamento terapêutico também pode ser administrado profilaticamente para prevenir ou reduzir a doença ou condição antes do início dos sintomas.

[0082] Em algumas modalidades, a administração do composto terapêutico começa após o distúrbio ser aparente. Em algumas modalidades, a administração do composto terapêutico começa antes do início dos sintomas ou no início dos sintomas do distúrbio. Em algumas modalidades, a administração do composto terapêutico começa antes do início dos sintomas ou no início dos sintomas do distúrbio, por exemplo, em um sujeito com distúrbio, um sujeito de alto risco, um sujeito com biomarcador de risco ou presença do distúrbio, um sujeito com histórico familiar do distúrbio ou outro indicador de risco ou presença assintomática do distúrbio. Por exemplo, em algumas modalidades, é tratado um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 53/267

36/248 sujeito com danos na célula de ilhota, mas que ainda não é diabético.

[0083] Embora não pretendendo estar limitado pela teoria, acredita-se que a porção de alvejamento funciona para ligar e acumular a terapêutica a um alvo expresso seletivamente no sítio anatômico onde é desejado o privilégio imunológico. Em algumas modalidades, por exemplo, no contexto de transplante de tecido de doador, a fração alvo se liga a um alvo, por exemplo, um produto alélico, presente no tecido de doador, mas não no receptor. Para o tratamento de distúrbios auto-imunes, a porção de alvejamento liga-se a um alvo preferencialmente expresso no sítio anatômico onde é desejado o privilégio imunológico, por exemplo, no pâncreas. Para o tratamento de GVHD, a porção de alvejamento dirige-se ao tecido hospedeiro e protege o hospedeiro contra o ataque de células imunes efetoras transplantadas derivadas de tecido transplantado.

[0084] Mais uma vez, embora não pretendendo estar limitado pela teoria, acredita-se que a fração de ligação/modulação efetora serve para administrar um sinal imunossupressor ou criar de outro modo um ambiente imunológico privilegiado.

[0085] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 54/267

37/248 mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa versada na técnica às quais essas modalidades pertencem. Embora métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos neste documento possam ser usados na prática ou nos testes das presentes modalidades, os métodos e materiais adequados são descritos abaixo. Todas as publicações, pedidos de patentes, patentes e outras referências mencionadas neste documento estão incorporadas a título de referência em suas totalidades. Além disso, os materiais, métodos e exemplos são apenas ilustrativos e não pretendem ser limitantes. Títulos, subtítulos ou elementos numerados ou com letras, por exemplo, (a), (b), (i) etc., são apresentados apenas para facilitar a leitura. 0 uso de títulos ou elementos numerados ou com letras neste documento não requer que as etapas ou elementos sejam executados em ordem alfabética ou que as etapas ou elementos sejam necessariamente discretos um do outro. Outras características, objetos e vantagens das modalidadas estarão evidentes a partir da descrição e figuras, e a partir das reivindicações.

DEFINIÇÕES ADICIONAIS [0086] A menos que definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos usados neste documento têm o mesmo significado como comumente compreendido por uma pessoa

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 55/267

38/248 versada na técnica à qual as modalidades pertencem. Ao descrever e reivindicar as presentes modalidades, a seguinte terminologia e a terminologia referenciada de outro modo ao longo do presente pedido serão utilizadas de acordo com a forma como é definida, onde é fornecida uma definição.

[0087] Também deve ser entendido que a terminologia usada neste documento é com a finalidade de descrever modalidades particulares somente, e não pretende ser limitante.

[0088] A molécula de anticorpo, tal como o termo é utilizado neste documento, refere-se a um polipeptideo, por exemplo, uma cadeia de imunoglobulina ou seu fragmento desta, compreendendo pelo menos uma sequência de domínio variável de imunoglobulina funcional. Uma molécula de anticorpo engloba anticorpos (por exemplo, anticorpos completos) e fragmentos de anticorpos. Em algumas modalidades, uma molécula de anticorpo compreende uma ligação ao antigeno ou fragmento funcional de um anticorpo completo ou uma cadeia de imunoglobulina completa. Por exemplo, um anticorpo completo é uma molécula de imunoglobulina (Ig) (por exemplo, um anticorpo IgG) que ocorre naturalmente ou é formada por processos recombinatórios normais de fragmentos de genes de imunoglobulina. Em modalidades, uma molécula de anticorpo refere-se a uma fração imunologicamente ativa de ligação ao

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 56/267

39/248 antigeno de uma molécula de imunoglobulina, tal como um fragmento de anticorpo. Um fragmento de anticorpo, por exemplo, fragmento funcional, compreende uma fração de um anticorpo, por exemplo, Fab, Fab', F(ab')2, F(ab)2, fragmento variável (Fv), anticorpo de domínio (dAb) ou fragmento variável de cadeia única (scFv). Um fragmento de anticorpo funcional se liga ao mesmo antígeno como aquele reconhecido pelo anticorpo intacto (por exemplo, anticorpo completo). Os termos fragmento de anticorpo ou fragmento funcional também incluem fragmentos isolados que consistem nas regiões variáveis, como os fragmentos Fv que consistem nas regiões variáveis das cadeias pesada e leve ou moléculas de polipeptídeo recombinante de cadeia única nas quais regiões variáveis leves e pesadas são conectadas por um ligante peptídico (proteínas scFv). Em algumas modalidades, um fragmento de anticorpo não inclui porções de anticorpos sem atividade de ligação ao antígeno, como fragmentos Fc ou resíduos de aminoácidos únicos. Moléculas de anticorpo exemplificativas incluem anticorpos completos e fragmentos de anticorpo, por exemplo, dAb (anticorpo de domínio), fragmentos de cadeia única, Fab, Fab' e F(ab')2 e fragmentos variáveis de cadeia única (scFvs).

[0089] O termo molécula de anticorpo também abrange fragmentos inteiros ou de ligação ao antígeno de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 57/267

40/248 anticorpos de domínio ou domínio único, que também podem ser chamados de sdAb ou VHH. Os anticorpos de domínio compreendem Vh ou Vl que podem atuar como fragmentos de anticorpos independentes. Adicionalmente, os anticorpos de domínio incluem anticorpos apenas de cadeia pesada (HCAbs). Os anticorpos de domínio também incluem um domínio CH2 de uma IgG como suporte de base no qual as alças CDR são enxertadas. Também pode ser geralmente definido como um polipeptídeo ou proteína compreendendo uma sequência de aminoácidos que é composta por quatro regiões framework interrompidas por três regiões determinantes de complementaridade. Isto é representado como FR1-CDR1-FR2CDR2-FR3-CDR3-FR4. Os sdAbs podem ser produzidos em camelídeos tais como lhamas, mas também podem ser gerados sinteticamente usando técnicas que são bem conhecidas na técnica. A numeração dos resíduos de aminoácidos de um sdAb ou polipeptídeo está de acordo com a numeração geral para os domínios VH dada por Rabat et al. (Sequence of proteins of immunological interest, US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publicação N° 91, que está incorporada neste documento a título de referência) . De acordo com essa numeração, FR1 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 1-30, CDR1 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 31-36, FR2 de um sdAb

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 58/267

41/248 compreende os aminoácidos nas posições 36-49, CDR2 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 5065, FR3 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 66-94, CDR3 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 95-102 e FR4 de um sdAb compreende os resíduos de aminoácidos nas posições 103-113. Os anticorpos de domínio também são descritos nos documentos W02004041862 e WO2016065323, cada um dos quais é incorporado neste documento a título de referência. Os anticorpos do domínio podem ser uma porção de alvejamento como descrito neste documento.

[0090] As moléculas de anticorpo podem ser monoespecíficas (por exemplo, monovalente ou bivalente), biespecíficas (por exemplo, bivalente, trivalente, tetravalente, pentavalente ou hexavalente), triespecíficas (por exemplo, trivalente, tetravalente, pentavalente, hexavalente) ou com ordens mais altas de especificidade (por exemplo, tetraspecíficas) e/ou de ordens mais altas de valência para além da hexavalência. Uma molécula de anticorpo pode compreender um fragmento funcional de uma região variável da cadeia leve e um fragmento funcional de uma região variável da cadeia pesada, ou as cadeias pesada e leve podem ser fundidas em um único polipeptídeo.

[0091] Exemplos de formatos para compostos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 59/267

42/248 terapêuticos multiespecíficos, por exemplo, moléculas de anticorpo biespecificas são mostradas nos seguintes exemplos não limitantes. Embora ilustradas com moléculas de anticorpo, elas podem ser usadas como plataformas para moléculas terapêuticas que incluem outras frações nãoanticorpos como frações de ligação especifica ou efetoras. Em algumas modalidades, esses exemplos não limitantes são baseados em formatos Fc simétricos ou assimétricos.

[0092] Por exemplo, as figuras ilustram a abordagem de homodimeros simétricos não limitantes e variados. Em algumas modalidades, a interface de dimerização centra-se ao redor dos domínios CH2-CH3 de IgGl humanas, os quais dimerizam através de uma interface de contato que abrange tanto CH2/CH2 como CH3/CH3. Os anticorpos biespecificos resultantes mostrados têm uma valência total composta por quatro unidades de ligação com duas unidades de ligação idênticas no terminal N de cada lado do dímero e duas unidades idênticas no terminal C de cada lado do dímero. Em cada caso, as unidades de ligação no terminal N do homodímero são diferentes daquelas no terminal C do homodímero. A utilização deste tipo de bivalência para um receptor inibitório de células T em qualquer um dos terminais da molécula e a bivalência para um antígeno de ligação de tecidos podem ser alcançadas em cada extremidade da molécula.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 60/267

43/248 [0093] Por exemplo, na FIG. 3, uma modalidade não limitante é ilustrada. O terminal N do homodímero contém dois domínios Fab idênticos constituídos por duas cadeias leves idênticas, que são polipeptídeos separados, interligadas com os domínios VH-CH1 n-terminais de cada cadeia pesada através da interação VH/VL e a interação Ckapa ou Clambda com CHI. A ligação dissulfureto nativa entre o Ckapa ou Clambda com CHI está presente fornecendo uma âncora covalente entre as cadeias leve e pesada. No terminal c deste projeto, existem duas unidades scFv idênticas, nas quais (neste exemplo) o terminal c do domínio CH3 do Fc é seguido por um ligante hidrofílico flexível tipicamente composto de (mas não limitado a) resíduos de serina, glicina, alanina e/ou treonina, que são seguidos pelo domínio VH de cada unidade scFv, que é seguida por um ligante rico em glicina/serina, seguido por um domínio VL. Estes domínios VH e VL em tandem associam-se para formar uma variável de fragmento de cadeia única (scFv) anexada no terminal c do Fc. Essas duas unidades existem no terminal c desta molécula devido à natureza homodimérica centrada no Fc. A ordem de domínio dos scFvs pode ser configurada para ser do terminal N a C do -VH-ligante peptídico-VL ou -VL- ligante peptídicoVH.

[0094] Um exemplo não limitante de uma molécula com

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 61/267

44/248 diferentes regiões de ligação em diferentes extremidades é onde uma extremidade é um agonista de PD-1 e o anticorpo que fornece especificidade de alvo é um anticorpo anti-MAdCAM1. Isto pode ser ilustrado como mostrado, por exemplo, na FIG. 3A, que ilustra as moléculas em diferentes orientações.

[0095] Em algumas modalidades, o anticorpo MAdCAM é um anticorpo bloqueador ou não bloqueador, como descrito em outro local deste documento. Sem estar vinculado a qualquer teoria, a MAdCAM demonstrou interagir com a cabeça da integrina «4β7 expressa em linfócitos através de múltiplos resíduos dentro de seus dois domínios I-estabelecidos de superfamília Ig e a base estrutural em nível atômico para essa interação foi descrita (Viney JL et ai. (1996) . J Immunol. 157, 2488-2497; Yu Y et ai (2013) . J Biol Chem. 288, 6284-6294; Yu Y et ai (2012). J Cell Biol. 196, 131146, cada um dos quais é incorporado a título de referência em sua totalidade). Foi demonstrado em grandes detalhes estruturais, mecanicistas e funcionais em ambos os sistemas moleculares humanos (Chen J et ai (2003) . Nat Struct Biol. 10, 995-1001; de Chateau M et al. (2001) . Biochemistry. 40, 13972-13979) e de camundongo (Day ES et al (2002) . Cell Commun Adhes. 9, 205-219; Hoshino H et al (2011) . J Histochem Cytochem. 59, 572-583) que qualquer interação de MAdCAM com α4β7 é dependente de três sítios de ligação dicátion

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 62/267

45/248 presentes no domínio integrina beta 7 subunidade tipo I e que estes sítios de ligação de metal podem se coordenar com Ca2+, Mn2+, e Mg2+. Utilizando ensaios de aderência celular, citometria de fluxo e/ou ensaios de câmara de fluxo na presença de altos níveis de Ca2+ com ou sem Mg2+ ou Mn2+, a interação MAdCAM/a4p7 mostrou ser de menor afinidade funcional e permite adesão contínua de linfócitos, enquanto que em baixo Ca2+ mas alto Mg2+ ou Mn2+ que ativa a integrina, a interação MAdCAM/a4p7 é de maior afinidade funcional e media a adesão firme de linfócitos (Chen J et al (2003) . Nat Struct Biol. 10, 995-1001). Vários grupos demonstraram que vários ensaios de interação/aderência baseados em célula:célula, célula:preparação de membrana e/ou célula:proteína podem ser utilizados, com FACS, contagens baseadas na câmara de fluxo celular ou leituras baseadas em IHC para monitorar o impacto de anticorpos anti-MAdCAM ou anti-a4p7 sobre a interação de MAdCAM com α4β7, permitindo identificar anticorpos bloqueadores ou não-bloqueadores (Nakache, M et al (1989)). Nature. 337, 179-181; Streeter, PR et al. (1988) . Nature. 331.41-46; Yang Y et al (1995) . Scand J. Immunol. 42.235-247; Leung E et al (2004) . Cell Immunol Biol. 82.400-409; Pullen N et al (2009). BJ Pharmacol. 157.281-293; Soler D et al (2009) . J Pharmacol Exp Ther. 330.864-875; Qi J et al (2012) . J Biol

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 63/267

46/248

Chem.287.15749-15759) .

[0096] Isso foi exemplificado na configuração do sistema de camundongo com a identificação de anticorpos MAdCAM anti-camundongo, como MECA-89 (não bloqueador) e MECA-367 (bloqueador)) Nakache, M et al (1989) . Nature. 337, 179-181; Streeter, PR et al. (1988) . Nature. 331.41-46; Yang Y et al (1995) . Scand J. Immunol. 42.235-247) . Em um sistema humano, foram identificados anticorpos que bloqueiam a interação da MAdCAM humana com α4β7 de humanos, como MAdCAM PF-00547659 anti-humano (Pullen N et al (2009) . BJ Pharmacol.157.281-293) e α4β7 vedolizumabe anti-humano (Soler D et al (2009) . J Pharmacol Exp Ther. 330.864-875), bem como anticorpos que não bloqueiam a interação, como o clone 17F5 do MAdCAM anti-humano (Soler D et al (2009). J Pharmacol Exp Ther. 330.864-875) e clone J19 α4β7 anti-humano (Qi J et al (2012). J Biol Chem. 287. 15749-15759). Assim, o anticorpo pode estar bloqueando ou não com base no efeito desejado. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo MAdCAM não bloqueador. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo MAdCAM bloqueador. Um exemplo não limitante de demonstrar se um anticorpo está bloqueando ou não pode ser encontrado no Exemplo 6, mas qualquer método pode ser usado. Cada uma das referências descritas neste documento é incorporada a titulo de referência em sua totalidade.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 64/267

47/248 [0097] Em outro exemplo, conforme representado na FIG. 4, o terminal N do homodimero contém dois domínios Fab idênticos compreendidos por duas cadeias leves idênticas, que são polipeptídeos separados, interligadas com os domínios VH-CH1 n-terminais de cada cadeia pesada através da interação VH/VL e a interação Ckappa ou Clambda com CHI. A ligação dissulfureto nativa entre o Ckappa ou Clambda com CHI está presente fornecendo uma âncora covalente entre as cadeias leve e pesada. No terminal c deste projeto estão duas unidades VH idênticas (embora frações não anticorpo possam também ser substituídas aqui ou em qualquer um dos quatro pontos terminais de ligação/fusão) onde (neste exemplo) o terminal c do domínio CH3 do Fc, é seguido por um ligante peptídico hidrofílico flexível tipicamente compreendido de (mas não limitado a) resíduos de serina, glicina, alanina e/ou treonina, o qual é seguido por um domínio VH solúvel baseado na família da linhagem germinativa VH3 independente. Essas duas unidades existem no terminal c desta molécula devido à natureza homodimérica centrada no Fc.

[0098] Em outro exemplo não limitante, como retratado na FIG. 5, o terminal N do homodimero contêm dois domínios Fab idênticos que compreendem duas cadeias leves idênticas, que, diferente da FIG. 3 e da FIG. 4, são

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 65/267

48/248 fisicamente unidas à cadeia pesada no terminal N através de um ligante peptídico entre o terminal c de Ckappa ou Clambda e o terminal N de VH. 0 ligante peptídico pode ter 36-80 aminoácidos de comprimento e ser compreendido de resíduos de serina, glicina, alanina e treonina. As cadeias leves nterminais fisicamente unidas interagem com os domínios VHCH1 n-terminais de cada cadeia pesada através da interação VH/VL e interação Ckappa ou Clambda com CHI. A ligação dissulfeto nativa entre o Ckappa ou Clambda com CHI está presente fornecendo estabilidade adicional entre as cadeias leve e pesada. No terminal C deste projeto estão duas unidades Fab idênticas onde (neste exemplo) o terminal C do domínio CH3 do Fc é seguido por um ligante peptídico flexível hidrofílico tipicamente compreendido de (mas não limitado a) resíduos de serina, glicina, alanina e/ou treonina, que é seguido por um domínio CHI, seguido por um domínio VH no terminal c. A cadeia leve que é projetada para parear com os domínios CH1/VH do terminal c é expressa como um polipeptídeo separado, diferente da cadeia leve do terminal N que é unida aos domínios VH/CH1 do terminal n conforme descrito. As cadeias leves do terminal C formam uma interface entre VH/VL e Ckapa ou Clambda com CHI. O dissulfeto nativo ancora essa cadeia leve à cadeia pesada. Novamente, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos quatro pontos de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 66/267

49/248 ligação/fusão pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0099] Os anticorpos biespecíficos também podem ser assimétricos, como mostrado nos seguintes exemplos não limitantes. Exemplos não limitantes são também representados na FIG. 6, FIG. 7 e FIG. 8, que ilustram uma abordagem assimétrica/heterodimérica. Mais uma vez, em qualquer destes formatos, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos quatro pontos de ligação/fusão pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo. Em algumas modalidades, a interface de dimerização centra-se ao redor dos domínios CH2-CH3 de IgGl humanas, as quais dimerizam através de uma interface de contato que abrange tanto CH2/CH2 como CH3/CH3. No entanto, para alcançar a heterodimerização em vez da homodimerização de cada cadeia pesada, introduzem-se mutações em cada domínio CH3. As mutações heterodimerizantes incluem a mutação T366W (kabat) num domínio CH3 e mutações T366S, L368A e Y407V (kabat) no outro domínio CH3. A interface heterodimerizante pode ser estabilizada ainda mais com ligações dissulfeto de novo por meio de mutação de resíduos nativos em resíduos de cisteína como S354 e Y349 em lados opostos da interface

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 67/267

50/248

CH3/CH3. Os anticorpos biespecificos resultantes mostrados possuem uma valência total compreendida de quatro unidades de ligação. Com essa abordagem, a molécula geral pode ser projetada para ter biespecificidade em apenas um terminal e monoespecificidade no outro terminal (triespecificidade geral) ou biespecificidade em qualquer terminal com uma especificidade molecular geral de 2 ou 4. Nos exemplos ilustrativos abaixo, o terminal C compreende dois domínios de ligação idênticos que poderíam, por exemplo, fornecer monoespecificidade bivalente para um alvo de fixação de tecido. No terminal N de todos os três exemplos ilustrativos, ambos os domínios de ligação compreendem diferentes elementos de reconhecimento/parátopos e que poderíam alcançar o reconhecimento de dois epítopos diferentes no mesmo alvo da fração efetora, ou poderíam reconhecer por exemplos um receptor inibidor de célula T e CD3. Em algumas modalidades, as frações de ligação do terminal N podem ser trocadas com outros formatos de polipeptídeo simples, tais como configurações de anticorpo de domínio VHH ou VH, scFv em sequência, Fab de cadeia simples, scFv , por exemplo. Outros tipos de elementos de reconhecimento podem também ser utilizados, tais como peptídeos lineares ou cíclicos.

[0100] Um exemplo de uma molécula assimétrica é representado na FIG. 6. Referindo-se à FIG. 6, o terminal N

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 68/267

51/248 da molécula é compreendido de uma primeira cadeia leve pareada com uma primeira cadeia pesada através de interações VH/VL e Ckappa ou Clambda/CHl e uma cadeia covalente compreendida pela ligação dissulfeto de cadeia pesada/leve nativa. No lado oposto desta molécula heterodimérica no terminal N existe uma segunda cadeia leve e uma segunda cadeia pesada que estão fisicamente unidas através de um ligante peptidico entre o terminal c de Ckappa ou Clambda e o terminal N do VH. 0 ligante peptidico pode ter 36-80 aminoácidos de comprimento e ser compreendido por resíduos de serina, glicina, alanina e treonina. As cadeias leves nterminais fisicamente unidas interagem com os domínios VHCH1 n-terminais de cada cadeia pesada através da interação VH/VL e interação Ckappa ou Clambda com CHI. A ligação dissulfeto nativa entre o Ckappa ou Clambda com CHI está presente fornecendo estabilidade adicional entre as cadeias leve e pesada. No terminal c da molécula existem dois domínios VH solúveis idênticos da família da linhagem germinativa VH3 unidos através de um ligante peptidico baseado no terminal n de glicina/serina/alanina/treonina ao terminal c do domínio CH3 da cadeia pesada 1 e da cadeia pesada 2.

[0101] Em algumas modalidades, uma molécula assimétrica pode ser ilustrada como representada na FIG. 7.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 69/267

52/248

Por exemplo, o terminal N da molécula é compreendido de dois domínios diferentes de VH solúveis baseados na linhagem germinativa de VH3 ligados à região de dobradiça da IgGl humana através de um ligante peptídico à base de glicina/serina/alanina/treonina. 0 domínio VH conectado à primeira cadeia pesada é diferente do domínio VH conectado à segunda cadeia pesada. No terminal c de cada cadeia pesada existe um domínio VH solúvel adicional baseado na linhagem germinativa de VH3, que é idêntico em cada uma das duas cadeias pesadas. A cadeia pesada heterodimeriza através das mutações do tipo knobs-into-holes descritas anteriormente presentes na interface CH3 do módulo Fc.

[0102] Em algumas modalidades, uma molécula assimétrica pode ser como ilustrada na FIG. 8. Este exemplo é semelhante à molécula mostrada na FIG. 7, exceto que as duas unidades Fab do terminal N são configuradas de maneira que a cadeia leve 1 e a cadeia leve 2 estejam fisicamente unidas à cadeia pesada 1 e à cadeia pesada 2 através de um ligante peptídico entre o terminal c de Ckappa ou Clambda e o terminal N de cada VH respectivo. O ligante peptídico em cada caso pode ter 36-80 aminoácidos de comprimento e ser compreendido de resíduos de serina, glicina, alanina e treonina. As cadeias leves n-terminais fisicamente unidas interagem com os domínios VH-CH1 n-terminais de cada cadeia

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 70/267

53/248 pesada através da interação VH/VL e interação Ckappa ou Clambda com CHI. A ligação dissulfeto nativa entre o Ckappa ou Clambda com CHI está presente fornecendo estabilidade adicional entre as cadeias leve e pesada.

[0103] Moléculas biespecificas também podem ter um formato misto. Isto é ilustrado, por exemplo, na FIG. 9, FIG. 10 e FIG. 11.

[0104] Por exemplo, como ilustrado na FIG. 9, ilustra uma abordagem baseada no homodimero Fc (ver FIGS. 3, 4 e 5) , combinada com a seleção do formato da fração da FIG. 7, em que a valência molecular total é quatro, mas a especificidade é restrita a duas especificidades. O terminal N é compreendido de dois domínios idênticos VH solúveis baseados na linhagem germinativa VH3 e o terminal C é constituído por dois domínios idênticos VH solúveis baseados na linhagem germinativa VH3 de especificidade diferente aos domínios Nterminais. Portanto, cada especificidade tem uma valência de dois. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos quatro pontos de ligação/fusão pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0105] A FIG. 10 ilustra outro exemplo. Neste exemplo, a molécula é compreendida de quatro domínios VH

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 71/267

54/248 solúveis baseados na linhagem germinativa de VH3. Os dois primeiros domínios têm a mesma especificidade (por exemplo, um receptor inibitório), o terceiro domínio do terminal N pode ter especificidade para um antígeno tecidual e o quarto domínio do terminal N pode ter especificidade para a albumina sérica humana (HSA), garantindo assim a meia-vida prolongada da molécula na ausência de um domínio Ig Fc. Existem três ligantes peptídicos ricos em glicina, serina, alanina e/ou treonina entre os domínios 1 e 2, os domínios 2 e 3 e os domínios 3 e 4. Este formato pode ser configurado com até tetraespecificidade, mas monovalente em cada caso, ou para ter biespecificidade com bivalência em cada caso. A ordem dos domínios pode ser alterada. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0106] A FIG. 11 ilustra ainda outra abordagem. Este exemplo é semelhante às FIGS. 3 e 4, na medida em que é um homodímero Fc baseado em duas unidades Fab idênticas (monoespecificidade bivalente) no terminal N da molécula. Este exemplo difere em que o terminal C de cada cadeia pesada é anexado com um scFv em sequência. Assim, em cada caso, o terminal C do domínio CH3 do Fc está ligado através de um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 72/267

55/248 ligante peptidico à base de glicina/serina/alanina/treonina ao terminal N de um primeiro domínio VH, que está ligado através do terminal C por um ligante peptídico rico em glicina/serina de 12-15 aminoácidos ao terminal N de um primeiro domínio VL, que ligado através de um ligante peptídico baseado em glicina/serina/alanina/treonina de 2535 aminoácidos no terminal C ao terminal N de um segundo domínio VH, que está ligado através do terminal C com um ligante peptídico baseado em glicina/serina de 12-15 aminoácidos ao terminal N de um segundo domínio VL. Nesta molécula baseada no homodímero de Fc existem, portanto, dois scFv em série idênticos no terminal C da molécula, oferecendo por exemplo tetravalência para um único antígeno de tecido ou bivalência para duas moléculas diferentes. Este formato também pode ser adaptado com um núcleo de heterodímeros Fc permitindo dois scFvs em sequência diferentes no terminal c do Fc, permitindo a tetraespecificidade monovalente no terminal C enquanto mantém a monoespecificidade bivalente no terminal N ou a biespecificidade monovalente no terminal N através da utilização de uma configuração de Fab de cadeia única como nas FIGS. 5, 6, e 7. Essa molécula pode, portanto, ser configurada para ter 2, 3, 4, 5 ou 6 especificidades. A ordem de domínio dos scFvs nas unidades de scFv em sequência pode ser configurada para ser do terminal N a C tanto VH

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 73/267

56/248 ligante peptidico-VL ou VL-ligante peptidico-VH. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos quatro pontos de ligação/fusão pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0107] Anticorpos bi-específicos também podem ser construídos para ter, por exemplo, PK sistêmica menor e, ao mesmo tempo, possuir mais penetração no tecido. Estes tipos de anticorpos podem ser baseados, por exemplo, em um formato de anticorpo de domínio humano baseado em VH3. Estes são ilustrados, por exemplo, nas FIGS. 12, 13 e 14. As FIGS. 12, 13 e 14 cada compreendia um módulo de domínio VH solúvel baseado na família da linhagem germinativa de VH3. Cada domínio é de aproximadamente 12,5 kDa, permitindo um pequeno MW geral, que, sem estar vinculado a nenhuma teoria específica, deve ser benéfico para a melhor penetração do tecido. Nestes exemplos, nenhum dos domínios VH reconhece alvos que se estendem à meia-vida, como FcRn ou HSA. Como ilustrado na FIG. 12, a molécula é compreendida de dois domínios VH unidos a um ligante peptídico à base de glicina/serina hidrofílica flexível entre o terminal C do primeiro domínio e o terminal N do segundo domínio. Neste exemplo, um domínio pode reconhecer um receptor co

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 74/267

57/248 estimulador de células Teo segundo pode reconhecer um antígeno de fixação de tecido. Como ilustrado na FIG. 13, a molécula é composta de três domínios VH com ligações terminais N-C de ligantes peptídicos à base de glicina/serina hidrofílica. A molécula pode ser configurada para ser triespecífica, mas monovalente para cada alvo. Pode ser biespecífico com bivalência para um alvo e monovalência para outro. Como ilustrado na FIG. 14, a molécula é compreendida por quatro domínios VH com ligantes peptídicos ricos em glicina/serina no terminal N-C entre cada domínio. Esta molécula pode ser configurada para ser tetraespecífica, triespecífica ou biespecífica com valências antigênicas variáveis em cada caso. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0108] Outras modalidades de anticorpos biespecíficos são ilustradas nas FIGs.15 e 16. As FIGs.15 e 16 compreendem o núcleo naturalmente heterodimerizador da interface IgG CHl/Ckappa humana, incluindo a ligação dissulfeto do terminal C pesado/leve que ancora covalentemente a interação. Este formato não contém um Fc ou nenhuma fração para prolongar a meia-vida. Como ilustrado na

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 75/267

58/248

FIG. 15, a molécula, no terminal N do domínio kappa constante, é anexada com o fragmento scFV consistindo de um domínio VH do terminal N, ligado ao seu terminal C ao terminal N de um domínio VL através de um ligante peptídico baseado em glicina/serina de 12-15 aminoácidos, que é ligado pelo seu terminal C ao terminal N do domínio kappa constante através da sequência nativa curva de VL-Ckappa. 0 domínio CHI é anexado ao terminal N com um fragmento scFv que consiste em um domínio VL do terminal N ligado ao seu terminal c através de um ligante peptídico de glicina/serina de 12 a 15 aminoácidos ao terminal N de um domínio VH, que está ligado no seu terminal c ao terminal N dos domínios CHI através da sequência natural curva de VH-CH1. Como ilustrado na FIG. 16, a molécula tem a mesma configuração do terminal N do Exemplo 13. No entanto, os terminais C dos domínios constantes kapa e CHI são anexados a módulos scFv que podem estar na configuração VH-VL ou VL-VH e podem ser específicos para o mesmo antígeno ou específicos para dois antígenos diferentes. Os ligantes peptídicos de inter-domínios VH/VL podem ter 12-15 aminoácidos de comprimento e consistir em resíduos de glicina/serina. As subunidades de ligação ao scFv podem ser trocadas por domínios VH solúveis, ou elementos de reconhecimento de peptídeo, ou mesmo elementos de scFv em sequência. Essa abordagem também pode ser

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 76/267

59/248 configurada para usar domínios lambda variáveis e/ou constantes. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos pontos de ligação/fusão pode ser substituída por uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0109] A FIG. 17 ilustra outra modalidade. A FIG. 17 representa um formato scFv em sequência que consiste em um primeiro domínio VL do terminal N vinculado no seu terminal C ao terminal N de um primeiro domínio VH com um ligante peptídico rico em glicina/serina de 12-15 aminoácidos, seguido no primeiro terminal c de VH por um ligante peptídico baseado em glicina/serina/alanina/treonina de 25 a 30 aminoácidos no terminal N de um segundo domínio VL. O segundo domínio VL está ligado no terminal C ao terminal N de um segundo domínio VH por um ligante peptídico de glicina/serina de 12-15 aminoácidos. Cada scFv reconhece um antigeno alvo diferente, como uma molécula de célula T co-estimuladora e um alvo de fixação de tecidos. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0110] A FIG. 18 ilustra outra modalidade. A FIG. 18

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 77/267

60/248 é uma fusão de F(ab')2 scFv. Isto consiste em dois componentes Fab idênticos unidos através de duas ligações dissulfeto no terminal c da região de dobradiça do IgGl humana nativa do domínio CHI IgG humano. Os domínios CH2 e CH3 IgGl humano estão ausentes. No terminal c das cadeias pesadas 1 e 2 estão dois fragmentos scFv idênticos ligados por meio de um ligante peptídico rico em glicina/serina/alanina/treonia ao terminal c da região de dobradiça hulgGl. Na configuração mostrada, o VH é um terminal N em cada unidade scFv e ligada através de um ligante peptídico rico em glicina/serina de 12-15 aminoácidos ao terminal N de um domínio VL. Uma configuração alternativa seria N-term-VL-Ligante-VH-C-term. Neste projeto, a construção é biespecífica com bivalência para atingir o alvo. Novamente, neste formato, qualquer uma das frações de anticorpo em qualquer dos quatro pontos de ligação/fusão pode ser substituída com uma fração não anticorpo, por exemplo, uma fração de ligação/modulação efetora que não compreende uma molécula de anticorpo.

[0111] A molécula CD39, como esse termo é utilizado neste documento, refere-se a um polipeptídeo com sequência CD39 suficiente que, como parte de um composto terapêutico, fosfo-hidrolisa ATP a AMP. Em algumas modalidades, uma molécula de CD39 fosfo-hidroliza ATP para AMP equivalente a,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 78/267

61/248 ou pelo menos, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 95% da taxa de um CD39 de ocorrência natural, por exemplo, o CD39 do qual a molécula CD39 foi derivada. Em algumas modalidades, uma molécula de CD39 tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência ou identidade de sequência substancial, a uma CD39 de ocorrência natural.

[0112] Qualquer isoforma funcional pode ser usada (com CD39 ou outras proteínas discutidas neste documento). Exemplos de sequêcias de CD39 incluem o número de acesso do Genbank NP_001767.3 ou uma forma madura da seguinte sequêcia: MEDTKESNVKTFCSKNILAILGFSSIIAVIALLAVGLTQNKALPENVKYGIVLDAGSSH TSLYIYKWPAEKENDTGWHQVEECRVKGPGISKFVQKVNEIGIYLTDCMERAREVIPR SQHQETPVYLGATAGMRLLRMESEELADRVLDWERSLSNYPFDFQGARIITGQEEGAY GWITINYLLGKFSQKTRWFSIVPYETNNQETFGALDLGGASTQVTFVPQNQTIESPDNA LQFRLYGKDYNVYTHSFLCYGKDQALWQKLAKDIQVASNEILRDPCFHPGYKKWNVSD LYKTPCTKRFEMTLPFQQFEIQGIGNYQQCHQSILELFNTSYCPYSQCAFNGIFLPPLQ GDFGAFSAFYFVMKFLNLTSEKVSQEKVTEMMKKFCAQPWEEIKTSYAGVKEKYLSEYC FSGTYILSLLLQGYHFTADSWEHIHFIGKIQGSDAGWTLGYMLNLTNMIPAEQPLSTPL SHSTYVFLMVLFSLVLFTVAIIGLLIFHKPSYFWKDMV (SEQ ID NO:1).

[0113] Em algumas modalidades, uma molécula de CD39 compreende uma forma solúvel cataliticamente ativa de CD39 encontrada em circulação no soro humano ou murino, ver, por exemplo, Metabolism of circulating ADP in the bloodstream is mediated via integrated actions of soluble adenylate kinasePetição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 79/267

62/248 and NTPDasel/CD39 activities, Yegutkin et al. FASEB J. Setembro de 2012; 26(9):3875-83. Um fragmento de CD39 recombinante solúvel é também descrito em Inhibition of platelet function by recombinant soluble ecto-ADPase/CD39, Gayle, et al., J Clin Invest., I^o de maio de 1998; 101(9): 1851-1859.

[0114] A molécula CD73, como esse termo é utilizado neste documento, refere-se a um polipeptideo com sequência CD73 suficiente que, como parte de um composto terapêutico, desfosforila o AMP extracelular em adenosina. Em algumas modalidades, uma molécula de CD73 desfosforila AMP extracelular em adenosina equivalente a, ou pelo menos, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 95% da taxa de um CD73 de ocorrência natural, por exemplo, o CD73 a partir do qual a molécula CD73 foi derivada. Em algumas modalidades, uma molécula de CD73 tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência ou identidade de sequência substancial, a uma CD73 de ocorrência natural. Sequências de CD73 exemplares incluem GenBank AAH65937.1 5'-nucleotidase, ecto (CD73) [Homo sapiens] ou uma forma madura a partir da seguinte sequência, MCPRAARAPATLLLALGAVLWPAAGAWELTILHTNDVHSRLEQTSEDSSKCVNASRCMG GVARLFTKVQQIRRAEPNVLLLDAGDQYQGTIWFTVYKGAEVAHFMNALRYDAMALGNH EFDNGVEGLIEPLLKEAKFPILSANIKAKGPLASQISGLYLPYKVLPVGDEWGIVGYT

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 80/267

63/248

SKETPFLSNPGTNLVFEDEITALQPEVDKLKTLNVNKIIALGHSGFEMDKLIAQKVRGV DVWGGHSNTFLYTGNPPSKEVPAGKYPFIVTSDDGRKVPWQAYAFGKYLGYLKIEFD ERGNVISSHGNPILLNSSIPEDPSIKADINKWRIKLDNYSTQELGKTIVYLDGSSQSCR FRECNMGNLICDAMINNNLRHADE T FWNHVSMCILNGGGIRS PIDERNNGTITWENLAA VLPFGGTFDLVQLKGSTLKKAFEHSVHRYGQSTGEFLQVGGIHWYDLSRKPGDRWKL DVLCTKCRVPSYDPLKMDEVYKVILPNFLANGGDGFQMIKDELLRHDSGDQDINWSTY ISKMKVIYPAVEGRIKFSTGSHCHGSFSLIFLSLWAVIFVLYQ (SEQ ID NO :2) .

[0115] Em algumas modalidades, uma molécula CD73 compreende uma forma solúvel de CD73 que pode ser eliminada da membrana das células endoteliais por divagem proteolitica ou hidrólise da âncora GPI por tensão de cisalhamento, ver, por exemplo, Referência:Yegutkin G, Bodin P, Burnstock G. Effect of shear stress on the release of soluble ecto-enzymes ATPase and 5'-nucleotidase along with endogenous ATP from vascular endothelial cells. Br J. Pharmacol 2000; 129:921-6. Para a função CD73, ver Colgan et al., Physiological roles for ecto-5'-nucleotidase (CD73), Purinergic Signalling, junho de 2006, 2:351.

[0116] O aglutinante da molécula de superfície celular, como esse termo é usado aqui, refere-se a uma molécula, tipicamente um polipeptídeo, que se liga, por exemplo, especificamente a uma molécula de superfície celular em uma célula, por exemplo, uma célula imune imunossupressora, por exemplo, uma Treg. Em algumas

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 81/267

64/248 modalidades, o aglutinante da superfície celular possui sequência suficiente de um ligante de ocorrência natural da molécula da superfície celular, para que possa ligar especificamente a molécula da superfície celular (um ligante da molécula da superfície celular). Em algumas modalidades, a ligação da superfície celular é uma molécula de anticorpo que se liga, por exemplo, se liga especificamente à molécula da superfície celular.

[0117] Porção de alvejamento específica do doador, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma fração, por exemplo, uma molécula de anticorpo, que como componente de um composto terapêutico, localiza o composto terapêutico preferencialmente em um tecido doador implantado, em oposição ao tecido de um receptor. Como componente de um composto terapêutico, a porção de alvejamento específica do doador fornece um privilégio imunológico sítio-específico para um tecido transplantado, por exemplo, um órgão, de um doador.

[0118] Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do doador se liga ao produto, por exemplo, um produto polipeptídico, de um alelo presente em um locus, cujo alelo não está presente no locus no sujeito (receptor) . Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do doador se liga a um epítopo no

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 82/267

65/248 produto, cujo epitopo não está presente no sujeito (receptor).

[0119] Em algumas modalidades, uma fração alvo específica do doador, como componente de um composto terapêutico, se liga preferencialmente a um alvo ou antígeno doador, por exemplo, possui uma afinidade de ligação ao alvo doador que é maior para o antígeno ou tecido doador, por exemplo, pelo menos 2, 4, 5, 10, 50, 100, 500, 1.000, 5.000 ou 10.000 vezes maior do que sua afinidade para o antígeno do sujeito ou tecido. Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do doador tem uma afinidade de ligação para um produto de um alelo de um locus presente no tecido do doador (mas não presente no sujeito) pelo menos 2, 4, 5, 10, 50, 100, 500, 1.000, 5.000 ou 10.000 vezes maior que sua afinidade pelo produto do alelo do locus presente no sujeito (cujo alelo não está presente no tecido do doador) . A afinidade de um composto terapêutico cuja fração específica dadora é um componente, pode ser medida em uma suspensão celular, por exemplo, a afinidade para células suspensas possuindo o alelo é comparada com a sua afinidade para células suspensas não possuindo o alelo. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação para as células alélicas do doador é inferior a 10 nM. Em algumas modalidades, a

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 83/267

66/248 afinidade de ligação para as células alélicas do doador é inferior a 100 pM, 50 pM ou 10 pM.

[0120] Em algumas modalidades, a especificidade para um produto de um alelo doador é suficiente que quando a porção de alvejamento especifica do doador é acoplada a um efetor de regulação negativa imune: i) ataques imunológicos do tecido implantado, por exemplo, como medido por resposta inflamatória histológica, células T efetoras infiltrantes, ou função de órgão, no ambiente clinico - por exemplo, creatinina para o rim, é substancialmente reduzida, por exemplo, comparado ao que seria visto em um implante semelhante, mas na falta de porção de alvejamento especifica do doador é acoplado a um efetor de regulação negativa imune; e/ou ii) a função imune no receptor, fora ou longe do tecido implantado, é substancialmente mantida. Em algumas modalidades, um ou mais dos seguintes é visto:nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a contagem de linfócitos no sangue periférico não é substancialmente afetada, por exemplo, o nível de células T está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, o nível de células B está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, e/ou o nível de células granulócitos (PMNs) está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, ou o nível de monócitos está dentro 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal; a níveis

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 84/267

67/248 terapêuticos do composto terapêutico, a função proliferativa ex vivo de PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) contra antigenos não causadores de doenças relevantes é substancialmente normal ou está dentro de 70, 80 ou 90% do normal; nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a incidência ou risco de risco de infecções oportunistas e cânceres associados à imunossupressão não aumentou substancialmente acima do normal; ou nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a incidência ou risco de risco de infecções oportunistas e cânceres associados à imunossupressão é substancialmente menor do que seria visto com o padrão de cuidado ou com a imunossupressão não direcionada. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento específica do doador compreende uma molécula de anticorpo, um polipeptídeo de ligação específica ao alvo ou uma molécula de ligação ao ligante alvo.

[0121] Efetor, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma entidade, por exemplo, uma célula ou molécula, por exemplo, uma molécula solúvel ou de superfície celular, que medeia uma resposta imune.

[0122] Molécula de ligação do ligante efetor, como utilizada neste documento, refere-se a um polipeptídeo que tem sequência suficiente de um contra-ligante de ocorrência

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 85/267

68/248 natural de um efetor, que pode ligar o efetor com especificidade suficiente para servir como molécula de ligação/modulação efetora. Em algumas modalidades, ela se liga ao efetor com pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 95% da afinidade do contra-ligante de ocorrência natural. Em algumas modalidades, tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência, ou identidade de sequência substancial, com um contra-ligante de ocorrência natural para o efetor.

[0123] O polipeptideo de ligação especifica ao efetor, como utilizado neste documento, refere-se a um polipeptideo que pode se ligar com especificidade suficiente para servir como uma fração de ligação/modulação efetora. Em algumas modalidades, um polipeptideo de ligação especifica compreende uma molécula de ligação de ligante efetora.

[0124] Risco elevado, como utilizado neste documento, refere-se ao risco de um distúrbio em um sujeito, em que o sujeito possui um ou mais antecedentes médicos do distúrbio ou um sintoma do distúrbio, um biomarcador associado ao distúrbio ou um sintoma do distúrbio, ou histórico familiar do distúrbio ou sintoma do distúrbio.

[0125] Molécula de anticorpo funcional para uma molécula inibidora do checkpoint imunológico ou efetora, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 86/267

69/248 molécula de anticorpo que, quando presente como a fração de ligação/modulação de ICIM de um composto terapêutico multimerizado, pode se ligar e agonizar a molécula inibidora de checkpoint imunológico ou efetora. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo da molécula inibidora de checkpoint imunológico ou anti-efetora, quando se liga como um monômero (ou se liga quando o composto terapêutico não está multimerizado) à molécula inibidora de checkpoint imunológico ou efetora, não antagoniza, substancialmente antagoniza, previne a ligação ou a ligação substancial de um contra ligante endógeno da molécula da molécula inibidora de checkpoint imunológico à molécula inibidora de checkpoint imunológico. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo da molécula ainibidora do checkpoint imunológico ou antiefetora quando se liga como monômero (ou se liga quando o composto terapêutico não está multimerizado), à molécula inibidora do checkpoint imunológico, não agoniza ou agoniza substancialmente, a molécula inibitória ou efetora.

[0126] A fração de ligação/modulação de ICIM, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, liga e agoniza uma molécula inibidora da superfície celular, por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico, por exemplo, PD -1, ou liga ou modula

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 87/267

70/248 a sinalização celular, por exemplo, liga a FCRL, por exemplo, FCRL1-6, ou liga e antagoniza uma molécula que promove a função imunológica.

[0127] A fração de ligação/modulação de IIC, como o termo é utilizado neste documento, refere-se a uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, se liga a uma célula imune imunossupressora. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de IIC aumenta o número ou a concentração de uma célula imune imunossupressora no sitio de ligação.

[0128] Uma molécula de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico, como esse termo é usado neste documento, refere-se a um polipeptideo com sequência de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico suficiente, por exemplo, no caso de uma molécula de PD-L1, sequência suficiente de PD-L1, que quando presente como uma fração de ligação/modulação de ICIM de um composto terapêutico multimerizado, pode ligar e agonizar sua molécula cognata inibidora do checkpoint imunológico, por exemplo, novamente no caso de uma molécula de PD-L1, PD-1.

[0129] Em algumas modalidades, a molécula de ligante de molécula inibidora do checkpoint imunológico, por exemplo, uma molécula PD-L1, quando se liga como um monômero (ou se liga quando o composto terapêutico não está

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 88/267

71/248 multimerizado) , ao seu ligante cognato, por exemplo, PD-1, não antagoniza ou substancialmente antagoniza, ou impede a ligação, ou impede a ligação substancial, de um ligante de molécula inibidora de checkpoint imunológico endógeno com a molécula inibidora de checkpoint imunológico. Por exemplo, no caso de uma molécula PD-L1, a molécula PD-L1 não antagoniza a ligação de PD-L1 endógeno a PD-1.

[0130] Em algumas modalidades, o ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico, quando se liga como monômero, à sua molécula cognata inibidora do checkpoint imunológico não agoniza ou agoniza substancialmente a molécula inibidora do checkpoint imunológico. A título de exemplo, por exemplo, uma molécula PD-L1 quando se liga a PD-1, não agoniza ou agoniza substancialmente PD-1.

[0131] Em algumas modalidades, uma molécula de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência, ou identidade de sequência substancial, com um ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico que ocorre naturalmente.

[0132] As moléculas exemplares de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico incluem: uma molécula de PD-L1, que se liga à molécula inibidora do checkpoint imunológico PD-1, e nas modalidades tem pelo menos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 89/267

72/248

60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência, ou identidade de sequência substancial, com uma PD-L1 de ocorrência natural, por exemplo, a molécula de PD-L1 compreendendo a sequência de

MRIFAVFIFMTYWHLLNAFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEM EDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISY GGADYKRITVKVNAPYNKINQRILWDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSG KTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPN ERTHLVILGAILLCLGVALTFIFRLRKGRMMDVKKCGIQDTNSKKQSDTHLEET (SEQ ID NO:3), ou um fragmento ativo do mesmo; em algumas modalidades, o fragmento ativo compreende os resíduos 19 a 290 da sequência PD-L1; uma molécula HLA-G, que se liga a qualquer uma das moléculas inibidoras do checkpoint imunológico KIR2DL4, LILRB1 e LILRB2, e nas modalidades tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência ou identidade de sequência substancial, com um HLA-G de ocorrência natural. Sequências exemplares de HLA-G incluem, por exemplo, uma forma madura encontrada na sequência em GenBank P17693.1 RecName:Full=antígeno de histocompatibilidade HLA classe I, cadeia alfa G; AltName:Full=antígeno HLA G; AltName:Full=antígeno G MHC de classe I; Bandeiras:Precursor, ou na sequência MVVMAPRTLFLLLSGALTLTETWAGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVR

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 90/267

73/248

FDSDSACPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHT LQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVA EQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAE IILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLM LRWKQSSLPTIPIMGIVA (SEQ ID NO :4) .

[0133] A molécula contra-ligante da molécula inibidora, como esse termo é usado neste documento, referese a um polipeptídeo que possui sequência contra-ligante da molécula inibidora suficiente, de modo que, quando presente como a fração de ligação/modulação de ICIM de um composto terapêutico multimerizado, pode se ligar e agonizar uma molécula inibidora cognata. Em algumas modalidades, a molécula do contra-ligante da molécula inibidora, quando se liga como um monômero (ou se liga quando o composto terapêutico não está multimerizado), à molécula inibidora, não antagoniza, antagoniza substancialmente, impede a ligação ou impede a ligação substancial de um contra-ligante endógeno da molécula inibidora à molécula inibidora. Em algumas modalidades, a molécula do contra-ligante da molécula inibidora quando se liga como um monômero (ou se liga quando o composto terapêutico não é multimerizado), à molécula inibidora, não agoniza ou agoniza substancialmente a molécula inibidora.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 91/267

74/248 [0134] Identidade de sequência, identidade percentual e termos relacionados, como esses termos são usados neste documento, referem-se ao parentesco de duas sequências, por exemplo, duas sequências de ácidos nucleicos ou duas sequências de aminoácidos ou de polipeptídeos. No contexto de uma sequência de aminoácidos, o termo substancialmente idêntico é utilizado neste documento para se referir a um primeiro aminoácido que contém um número suficiente ou mínimo de resíduos de aminoácidos que são i) idênticos a, ou ii) substituições conservativas de resíduos de aminoácidos alinhados em uma segunda sequência de aminoácidos, de tal modo que a primeira e segunda sequências de aminoácidos podem ter um domínio estrutural comum e/ou atividade funcional comum. Por exemplo, sequências de aminoácidos que contêm um domínio estrutural comum com pelo menos cerca de 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para uma sequência de referência, por exemplo, uma sequência fornecida neste documento.

[0135] No contexto da sequência nucleotídica, o termo substancialmente idêntico é utilizado neste documento para se referir a uma primeira sequência de ácido nucleico que contém um número suficiente ou mínimo de nucleotídeos que são idênticos aos nucleotídeos alinhados em

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 92/267

75/248 uma segunda sequência de ácido nucleico tal que a primeira e segunda sequências nucleotidicas codificam um polipeptideo possuindo atividade funcional comum, ou codificam um domínio polipeptídico estrutural comum ou uma atividade polipeptídica funcional comum. Por exemplo, sequências nucleotidicas com pelo menos cerca de 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com uma sequência de referência, por exemplo, um sequência fornecida neste documento.

[0136] O termo variante funcional refere-se a polipeptídeos que possuem uma sequência de aminoácidos substancialmente idêntica à sequência de ocorrência natural, ou são codificados por uma sequência nucleotídica substancialmente idêntica e são capazes de ter uma ou mais atividades da sequência de ocorrência natural.

[0137] Cálculos de homologia ou identidade de sequência entre sequências (os termos são aqui usados indistintamente) são realizados como se segue.

[0138] Para determinar a percentagem de identidade de duas sequências de aminoácidos, ou de duas sequências de ácido nucleico, as sequências estão alinhadas para fins de comparação ótima (por exemplo, podem ser introduzidos intervalos em uma ou em ambas de uma primeira e uma segunda sequência de aminoácido ou ácido nucleico para alinhamento

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 93/267

76/248 ótimo e sequências não homólogas podem ser desconsideradas para fins de comparação). Em uma modalidade preferencial, o comprimento de uma sequência de referência alinhada para fins de comparação é de pelo menos 30%, preferencialmente pelo menos 40%, mais preferencialmente pelo menos 50%, 60% e ainda mais preferencialmente pelo menos 70%, 80%, 90%, 100% do comprimento da sequência de referência. Os resíduos de aminoácido ou nucleotídeos nas posições de aminoácido ou posições de nucleotídeo correspondentes são então comparados. Quando uma posição na primeira sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo como a posição correspondente na segunda sequência, então as moléculas são idênticas nessa posição (como usado neste documento a identidade de aminoácido ou ácido nucleico é equivalente à homologia do aminoácido ou ácido nucleico).

[0139] A identidade percentual entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências, levando em consideração o número de lacunas, e o comprimento de cada lacuna, que necessitam ser introduzidos para o alinhamento ideal das duas sequências.

[0140] A comparação de sequências e determinação da identidade percentual entre as duas sequências pode ser alcançada utilizando um algoritmo matemático. Em uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 94/267

77/248 modalidade preferida, a percentagem de identidade entre duas sequências de aminoácidos é determinada utilizando o algoritmo de Needleman e Wunsch ((1970) J. Mol. Biol. 48: 444-453) que foi incorporado no programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http://www.gcg.com), usando uma matriz Blossum 62 ou uma matriz PAM250, e uma lacuna de peso de 16, 14, 12, 10, 8, 6 ou 4 e um comprimento de peso de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Em ainda outra modalidade preferencial, a identidade percentual entre duas sequências de nucleotídeos é determinada usando o programa GAP no pacote de software GCG (disponível em http://www.gcg.com), usando uma matriz de NWSgapdna.CMP e uma lacuna de peso de 40, 50, 60, 70 ou 80 e um comprimento de peso de 1, 2, 3, 4, 5 ou 6. Um conjunto de parâmetros particularmente preferidos (e o que deve ser usado a menos que especificado de outra forma) é uma matriz de pontuação Blossum 62 com uma penalidade de lacuna de 12, uma penalidade de extensão de lacuna de 4 e uma penalidade de lacuna de deslocamento de quadro de 5.

[0141] A identidade percentual entre duas sequências de aminoácidos ou nucleotídeos pode ser determinada usando o algoritmo de E.Meyers e W.Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17), que foi incorporado no programa ALIGN (versão 2.0) usando uma tabela de resíduo de peso PAM120, uma penalidade de comprimento de lacuna de 12 e uma penalidade de lacuna de 4.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 95/267

78/248 [0142] As sequências de ácido nucleico e proteínas descritas neste documento podem ser usadas como uma sequência de consulta para realizar uma pesquisa em bancos de dados públicos para, por exemplo, identificar outros membros da família ou sequências relacionadas. Tais pesquisas podem ser executadas usando os programas NBLAST e XBLAST (versão 2.0) de Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10. As pesquisas de nucleotídeos BLAST podem ser realizadas com o programa NBLAST, pontuação = 100, comprimento de palavra = 12 para obter sequências nucleotídicas homólogas a, por exemplo, qualquer sequência de ácido nucleico fornecida neste documento. As buscas de proteína BLAST podem ser realizadas com o programa XBLAST, pontuação = 50, comprimento da palavra = 3 para obter as sequências de aminoácido homólogas às moléculas de proteína fornecidas neste documento. Para obter os alinhamentos em lacunas para fins de comparação, o Gapped BLAST pode ser utilizado conforme descrito em Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Res.25:3389-3402 . Ao utilizar os programas BLAST e Gapped BLAST, os parâmetros padrões dos respectivos programas (por exemplo, XBLAST e NBLAST) podem ser usados. Ver http://www.ncbi.nlm.nih.gov.

[0143] Como usado neste documento, o termo hibridiza sob condições de rigor baixo, rigor médio, rigor

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 96/267

79/248 alto ou rigor muito alto descreve condições para hibridização e lavagem. A orientação para a realização de reações de hibridização pode ser encontrada em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6, que é incorporado a título de referência. Os métodos aquosos e não-aquosos são descritos nessa referência e ambos podem ser usados. Condições específicas de hibridização referidas neste documento são as seguintes: 1)condições de hibridização de baixo rigor em 6X citrato de sódio/cloreto de sódio (SSC) a cerca de 45°C, seguido de duas lavagens em 0,2X SSC, 0,1% SDS, a pelo menos 50°C (a temperatura das lavagens pode ser aumentada para 55°C, para condições de baixo rigor); 2) condições de hibridização de rigor médio em 6X SSC a cerca de 45°C, seguido de uma ou mais lavagens em 0,2X SSC, 0,1% SDS a 60°C; 3) condições de hibridização de alto rigor em 6X SSC em cerca de 45°C, seguido de uma ou mais lavagens em 0,2X SSC, 0,1% SDS a 65°C; e preferencialmente 4) condições de hibridação de rigor muito alto são fosfato de sódio 0,5 M, 7% SDS a 65°C, seguido de uma ou mais lavagens em 0,2X SSC, 1% SDS a 65°C. Condições de rigor muito alto (4) são as condições preferenciais e aquelas que devem ser usadas a menos que especificado o contrário.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 97/267

80/248 [0144] Entende-se que as moléculas e compostos das presentes modalidades podem ter substituições de aminoácidos conservadores ou não essenciais adicionais, que não têm um efeito substancial em suas funções.

[0145] O termo aminoácido destina-se a abranger todas as moléculas, sejam naturais ou sintéticas, que incluem tanto uma funcionalidade amino como uma funcionalidade ácida e capazes ser incluídas em um polímero de aminoácidos que ocorrem naturalmente. Exemplos de aminoácidos incluem aminoácidos que ocorrem naturalmente; análogos, derivativos e congêneres dos mesmos; análogos de aminoácidos possuindo cadeias laterais variantes; e todos os estereoisômeros de qualquer um dos itens anteriores. Como utilizado neste documento, o termo aminoácido inclui os isômeros ópticos D e L e os peptidomiméticos.

[0146] Uma substituição conservadora de aminoácido é aquela na qual o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido com uma cadeia lateral semelhante. Famílias de resíduos de aminoácidos com cadeias laterais semelhantes foram definidas na técnica. Tais famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico) , cadeias laterais polares não carregadas (por exemplo,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 98/267

81/248 glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteina), cadeias laterais apoiares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramifiçadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Molécula CD39, uma molécula CD73, um aglutinante da molécula de superfície celular, fração direcionadora específica de doador, molécula efetora de ligação do ligante, fração de ligação/modulação de ICIM, fração de ligação/modulação de IIC, uma molécula do ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico, molécula do contra ligante da molécula inibidora, fração de ligação/modulação de SM.

[0147] A fração de ligação/modulação de SM, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, fornecendo na proximidade do alvo, um substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de SM compreende, ou se liga a, uma molécula que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 99/267

82/248 fração de ligação/modulação de SM que liga e acumula uma substância solúvel, por exemplo, uma substância endógena ou exógena tendo função imunossupressora. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM que liga e inibe, sequestra, degrada ou neutraliza de outra forma uma substância, por exemplo, uma substância solúvel, substância solúvel tipicamente e endógena, que promove ataque imunológico. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM que compreende uma substância imunossupressora, por exemplo, um fragmento de proteína que é imunossupressor. A título de exemplo, uma fração de ligação de molécula efetora que se liga, ou compreende, uma substância, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73, que esgota um componente, que promove a função da célula imune efetora, por exemplo, ATP ou AMP.

[0148] A porção de alvejamento específica, como esse termo é usado neste documento, refere-se à porção de alvejamento específica do doador ou uma porção de alvejamento específica do tecido.

[0149] O sujeito, como esse termo é usado neste documento, refere-se a um sujeito mamífero, por exemplo, um sujeito humano. Em algumas modalidades, o sujeito é um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 100/267

83/248 mamífero não humano, por exemplo, um cavalo, cão, gato, vaca, cabra ou porco.

[0150] A molécula de ligação do ligante ao alvo, como utilizado neste documento, refere-se a um polipeptideo que tem sequência suficiente de um contra-ligante de ocorrência natural de um ligante alvo que pode ligar o ligante alvo em um tecido alvo (por exemplo, tecido do doador ou tecido alvo do sujeito) com especificidade suficiente que pode servir como uma porção de alvejamento específica. Em algumas modalidades, ela se liga ao tecido alvo ou cédulas com pelo menos 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ou 95% da afinidade do contra-ligante de ocorrência natural. Em algumas modalidades, tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência ou identidade de sequência substancial, com um contra-ligante de ocorrência natural para o ligante alvo.

[0151] Sítio alvo, como esse termo é usado neste documento, refere-se a um sítio que contém a entidade, por exemplo, epítopo, ligado por uma porção de alvejamento. Em algumas modalidades, o sítio alvo é o sítio no qual o privilégio imunológico é estabelecido.

[0152] A porção de alvejamento específica do tecido, como esse termo é usado neste documento, refere-se a uma fração, por exemplo, uma molécula de anticorpo, que como

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 101/267

84/248 componente de uma molécula terapêutica, localiza a molécula terapêutica preferencialmente em um tecido alvo, ao invés de outro tecido de um sujeito. Como um componente de um composto terapêutico, a porção de alvejamento específica do tecido fornece privilégio imunológico sitio-especifico para um tecido alvo, por exemplo, um órgão ou tecido que sofre ou corre risco de ataque autoimune. Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do tecido se liga a um produto, por exemplo, um produto de polipeptídeo, que não está presente fora do tecido alvo ou está presente em níveis suficientemente baixos que, em concentrações terapêuticas da molécula terapêutica, níveis inaceitáveis de supressão imunológica estão ausentes ou substancialmente ausentes. Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do tecido se liga a um epítopo, cujo epítopo não está presente fora, ou não está substancialmente presente fora, do sítio alvo.

[0153] Em algumas modalidades, uma porção de alvejamento específica do tecido, como componente de um composto terapêutico, preferencialmente se liga a um tecido alvo ou antígeno do tecido alvo, por exemplo, com uma afinidade de ligação para o tecido alvo ou antígeno que é maior para o tecido ou antígeno alvo, por exemplo, pelo menos 2, 4, 5, 10, 50, 100, 500, 1.000, 5.000 ou 10.000 vezes maior

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 102/267

85/248 do que a sua afinidade para o tecido não alvo ou antigeno presente fora do tecido alvo. A afinidade de um composto terapêutico do qual a fração específica do tecido é um componente, pode ser medida em uma suspensão celular, por exemplo, a afinidade para células suspensas possuindo o antigeno alvo é comparada com a sua afinidade para células suspensas não possuindo o antigeno alvo. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação para as células portadoras de antigeno alvo está abaixo de lOnM.

[0154] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação para as células portadoras de antigeno alvo é inferior a 100 pM, 50 pM ou 10 pM. Em algumas modalidades, a especificidade para um antigeno alvo é suficiente, que quando a porção de alvejamento específica do tecido é acoplada a um efetor de regulação negativa imune: i) ataques imunológicos do tecido alvo, por exemplo, como medido por resposta inflamatória histológica, células T efetoras infiltrantes, ou função de órgão, no ambiente clínico - por exemplo, creatinina para o rim, é substancialmente reduzida, por exemplo, comparado ao que seria visto de outra forma em um implante semelhante, mas na falta de porção de alvejamento específica do tecido é acoplado a um efetor de regulação negativa imune; e/ou ii) a função imune no receptor, fora ou longe do tecido alvo, é substancialmente mantida.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 103/267

86/248 [0155] Em algumas modalidades, um ou mais dos seguintes é visto: nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a contagem de linfócitos no sangue periférico não é substancialmente afetada, por exemplo, o nível de células T está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, o nível de células B está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, e/ou o nível de células granulócitos (PMNs) está dentro de 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal, ou o nível de monócitos está dentro 25, 50, 75, 85, 90 ou 95% do normal; a níveis terapêuticos do composto terapêutico, a função proliferativa ex vivo de PBMCs (células mononucleares do sangue periférico) contra antígenos não causadores de doenças relevantes é substancialmente normal ou está dentro de 70, 80 ou 90% do normal; nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a incidência ou risco de risco de infecções oportunistas e cânceres associados à imunossupressão não aumenta substancialmente acima do normal; ou nos níveis terapêuticos do composto terapêutico, a incidência ou risco de risco de infecções oportunistas e cânceres associados à imunossupressão é substancialmente menor do que seria visto com o tratamento padrão de imunossupressão ou com a imunossupressão não direcionada. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento específica do tecido compreende uma molécula de anticorpo. Em algumas

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 104/267

87/248 modalidades, a porção de alvejamento específica do doador compreende uma molécula de anticorpo, um polipeptídeo de ligação específica ao alvo ou uma molécula de ligação ao ligante alvo. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento específica do tecido liga-se a um produto, ou a um sítio em um produto, que está presente ou expresso exclusivamente, ou substancialmente exclusivamente, no tecido alvo.

Frações de ligação/modulação de ICIM: Frações de Ligação/Modulação Efetoras que Ligam Receptores Inibidores [0156] Os métodos e compostos descritos neste documento fornecem um composto terapêutico com uma fração de ligação/modulação efetora compreendendo uma fração de ligação/modulação de ICIM, que se liga diretamente e ativa um receptor inibidor na superfície de uma célula imune, por exemplo, para reduzir ou eliminar, ou substancialmente eliminar, a capacidade da célula imune de mediar o ataque imune. O acoplamento da fração de ligação/modulação do ICIM a uma entidade de alvejamento promove a regulação negativa local ou sítio-específica da resposta da célula imune, por exemplo, confinada substancialmente aos locais que possuem sítios de ligação para a porção de alvejamento. Assim, a função imunológica sistêmica normal é substancialmente mantida. Em algumas modalidades, uma fração de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 105/267

88/248 ligação/modulação de ICIM compreende uma molécula do contraligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico, por exemplo, um ligante natural ou fragmento de um ligante natural (por exemplo, PD-L1 ou HLA-G) da molécula inibidora do checkpoint imunológico. Em algumas modalidades, uma fração de ligação/modulação de ICIM compreende uma molécula de anticorpo funcional, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional compreendendo um domínio de ligação ao scFv, que conecta a molécula inibidora do checkpoint imunológico.

[0157] Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de ICIM, compreendendo, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional ou molécula de ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico, se liga ao receptor inibidor, mas não impede a ligação de um ligante natural do receptor inibidor ao receptor inibidor. Nas modalidades, é utilizado um formato em que uma porção de alvejamento é acoplada, por exemplo, fundida a uma fração de ligação/modulação de ICIM, compreendendo, por exemplo, um domínio scFv, e configurada de modo que após a ligação de um receptor inibidor enquanto em solução (por exemplo, em sangue ou linfa) (e presumivelmente em um formato monomérico), a molécula terapêutica: i) falha em agonizar ou falha em agonizar substancialmente (por exemplo, agoniza em menos de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 106/267

89/248

30, 20, 15, 10 ou 5% do nível observado com uma molécula agonizante completa) o receptor inibidor na célula imune; e/ou ii) falha em antagonizar, ou falha em antagonizar substancialmente (por exemplo, antagoniza a menos de 30, 20, 15, 10 ou 5% do nível observado com uma molécula antagonista completa) o receptor inibidor na célula imune. Uma molécula candidata pode ser avaliada por sua capacidade de agonizar ou não agonizar pela sua capacidade de aumentar ou diminuir a resposta imune em um ensaio baseado em células in vitro, em que o alvo não é expresso, por exemplo, usando um ensaio baseado em MLR (reação mista de linfócitos).

[0158] Em algumas modalidades, as frações de ligação/modulação de ICIM candidatas podem reduzir, eliminar completamente ou substancialmente a imunossupressão sistêmica e a ativação imune sistêmica. Em algumas modalidades, o domínio de alvejamento do composto terapêutico, quando ligado ao alvo, servirá para agrupar ou multimerizar o composto terapêutico na superfície do tecido que deseja proteção imunológica. Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de ICIM, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo um domínio scFv, requer um estado agrupado ou multimérico para poder entregar um sinal agonístico e imunossupressor, ou níveis substanciais de tal sinal, à células imunes locais. Este

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 107/267

90/248 tipo de terapêutica pode, por exemplo, fornecer uma supressão imunológica local enquanto deixa o sistema imunológico sistêmico imperturbável ou substancialmente imperturbável. Ou seja, a supressão imunológica é localizada onde é necessária a supressão, em vez de ser sistêmica e não localizada em uma área ou tipo de tecido especifico.

[0159] Em algumas modalidades, após a ligação ao alvo, por exemplo, um tipo de órgão, tecido ou célula alvo, o composto terapêutico reveste o alvo, por exemplo, tipo de órgão, tecido ou célula alvo. Quando os linfócitos circulantes tentam se conectar e destruir o alvo, este terapêutico fornecerá um sinal falho apenas em, ou em maior grau, no sitio de acumulação de composto terapêutico.

[0160] Um composto terapêutico candidato pode ser avaliado quanto à capacidade de se ligar, por exemplo, ligarse especificamente ao seu alvo, por exemplo, por ELISA, um ensaio baseado em células ou ressonância plasmônica de superfície. Essa propriedade geralmente deve ser maximizada, pois ela medeia a sítio-especificidade e a natureza local do privilégio imunológico. Um composto terapêutico candidato pode ser avaliado quanto à capacidade de regular negativamente uma célula imune quando ligada ao alvo, por exemplo, por um ensaio de atividade baseado em células. Essa

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 108/267

91/248 propriedade geralmente deve ser maximizada, pois ela medeia a sitio-especificidade e a natureza local do privilégio imunológico. 0 nível de regulação negativa efetuada por um composto terapêutico candidato na forma monomérica (ou não ligada) pode ser avaliada, por exemplo, por, por exemplo, por um ensaio de atividade baseado em células. Essa propriedade geralmente deve ser minimizada, pois pode mediar a regulação indesejada sistêmica do sistema imunológico. 0 nível de antagonismo de uma molécula inibidora da superfície celular, por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico, efetuada por um candidato a composto terapêutico na forma monomérica (ou não ligada) pode ser avaliada, por exemplo, por, por exemplo, por um ensaio de atividade baseado em células. Essa propriedade geralmente deve ser minimizada, pois pode mediar a ativação sistêmica indesejada do sistema imunológico. Geralmente, as propriedades devem ser selecionadas e equilibradas para produzir um privilégio imunológico sitio-especifico suficientemente robusto, sem níveis inaceitáveis de agonismo ou antagonismo não sitio-especifico da molécula inibidora do checkpoint imunológico.

Moléculas Inibidoras Exemplares do Checkpoint Imunológico

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 109/267

92/248 [0161] Moléculas inibidoras exemplares (por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico) (junto com seus contra-ligantes) podem ser encontradas na Tabela 1. Esta tabela lista moléculas às quais frações de ligação de ICIM exemplares podem se ligar.

Tabela 1: Moléculas inibidoras da superfície celular, por exemplo, moléculas inibidoras do checkpoint imunológico (coluna A) , contra-ligantes (coluna B) e tipos de células afetadas (coluna C).
A	B	C
PD-1	PD-L1, PD-L2	Células T, células B
Fosfatase Alcalina
B7-H3	Desconhecido	Células T
B7-H4	Neuropilina 1, neuropilina 2, Plexin4A	Células T
BTLA	HVEM	Células T, células B
CTLA-4	CD80, CD86	Células T
IDO1	Triptofano	Linfócitos
TDO2	Triptofano	Linfócitos
KIR2DL1, KIR2DL2/3,	HLA MHC classe I	Células NK

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 110/267

93/248

KIR3DL1, KIR3DL2
LAG 3	HLA MHC classe II	Células T
TIM-3	Galectina-9	Células T
VISTA	Desconhecido	Células T, Células mielóides
TIGIT	CD155	Células T
KIR2DL4	HLA-G	Células ΝΚ
LILRB1	HLA-G	Células Τ, células ΝΚ, células Β, monócitos, células dendriticas
LILRB2	HLA-G	Monócitos, células dendriticas, neutrófilos, algumas células tumorais
NKG2A	glicoproteinas MHC não clássicas classe I	Células T, células NK
FCRL1-6	FCRL1 - 2 desconhecidos FCRL4 = IgA FCRL5 = IgG FCRL 6 = MHC Classe II	Células B
	BUTIROFILINAS,	Modulação de células imunes

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 111/267

94/248

por exemplo, BTN1A1, BTN2A2, BTNL2, BTNL1, BTNL8

A via PD-L1/PD-1 [0162] A proteína da morte celular programada 1, (frequentemente referida como PD-1) é um receptor da superfície celular que pertence à superfamília da imunoglobulina. PD-1 é expresso em células T e outros tipos de células, incluindo, mas não limitado a, células B, células mielóides, células dendríticas, monócitos, células T reguladoras, células T INK. PD-1 se liga a dois ligantes, PD-L1 e PD-L2, e é uma molécula inibidora do checkpoint imunológico. A conexão com um ligante cognato, PD-L1 ou PDL2, no contexto da conexão de MCH carregado de antígeno com o receptor de células T em uma célula T, minimiza ou impede a ativação e a função das células T. O efeito inibitório da PD-1 pode incluir tanto a promoção da apoptose (morte celular programada) em células T específicas do antígeno nos linfonodos quanto a redução da apoptose nas células T reguladoras (células T supressoras).

[0163] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 112/267

95/248

ICIM que agoniza a inibição de PD-1. Uma fração de ligação/modulação de ICIM pode incluir uma molécula do contra ligante da molécula inibidora, por exemplo, compreendendo um fragmento de um ligante de PD-1 (por exemplo, um fragmento de PD-L1 ou PD-L2) ou outra fração, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional, compreendendo, por exemplo, um domínio scFv que se liga a PD-1.

[0164] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento que se liga preferencialmente a um antígeno doador não presente em, presente em níveis substancialmente mais baixos no sujeito, por exemplo, um antígeno doador da Tabela 2, e está localizado ao tecido de enxerto doador em um sujeito. Em algumas modalidades, ele não se liga, ou não se liga substancialmente, a outros tecidos. Em algumas modalidades, um composto terapêutico pode incluir uma porção de alvejamento que é específica para HLA-A2 e se liga especificamente ao tecido aloenxertado do doador, mas não se liga, ou não se liga substancialmente, aos tecidos do hospedeiro. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM, por exemplo, uma molécula do contra-ligante da molécula inibidora, por exemplo, compreendendo um fragmento de um ligante de PD-1 (por exemplo, um fragmento de PD-L1 ou PD

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 113/267

96/248

L2) ou outra fração, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional, compreendendo, por exemplo, um domínio scFv que se liga a PD-1, de modo que o composto terapêutico, por exemplo, quando ligado ao alvo, ative PD-1. 0 composto terapêutico tem como alvo um aloenxerto e fornece um privilégio imunológico local ao aloenxerto.

[0165] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento que se liga preferencialmente a um antigeno da Tabela 3 e está localizada ao alvo em um sujeito, por exemplo, um sujeito com um distúrbio autoimune, por exemplo, um distúrbio autoimune da Tabela 3. Em algumas modalidades, ele não se liga, ou não se liga substancialmente, a outros tecidos. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM, por exemplo, uma molécula do contra-ligante da molécula inibidora, por exemplo, compreendendo um fragmento de um ligante de PD-1 (por exemplo, um fragmento de PD-L1 ou PD-L2) ou outra fração, por exemplo, uma molécula de anticorpo funcional, compreendendo, por exemplo, um domínio scFv que se liga a PD-1, de modo que o composto terapêutico, por exemplo, quando ligado ao alvo, ative PD-1. O composto terapêutico tem como

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 114/267

97/248 alvo um tecido sujeito a ataque autoimune e fornece um privilégio imunológico local ao tecido.

[0166] PD-L1 e PDL2, ou polipeptideos derivados, podem fornecer frações de ligação de ICIM candidatas. No entanto, na forma de monômero, por exemplo, quando o composto terapêutico está circulando no sangue ou na linfa, essa molécula podería ter um efeito indesejado de antagonizar a via PD-L1/PD-1 e pode agonizar apenas a via PD-1 quando agrupada ou multimerizada na superfície de um alvo, por exemplo, um órgão alvo. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo uma molécula de anticorpo funcional, por exemplo, um domínio scFv, que é inerte ou substancialmente inerte à via PD-1 em uma forma solúvel mas que agoniza e conduz um sinal inibitório quando multimerizado (pela porção de alvejamento) na superfície de um tecido.

O HLA-G:Via KIR2DL4/LILRB1/LILRB2 [0167] KIR2DL4, LILRB1 e LILRB2 são moléculas inibidoras encontradas em células T, células NK e células mieloides. O HLA-G é um contra-ligante para cada um.

[0168] O KIR2DL4 também é conhecido como CD158D, G9P, KIR-103AS, KIR103, KIR103AS, KIR, KIR-2DL4, receptor semelhante a imunoglobulina de células assassinas e dois

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 115/267

98/248 domínios de Ig e cauda citoplasmática longa 4. 0 LILRB1 também é conhecido como LILRB1, CD85J, ILT-2, ILT2, LIR-1, LIR1, MIR-7, MIR7, PIR-B, PIRB, receptor semelhante à imunoglobulina de leucócito Bl. LILRB2 também é conhecido como CD85D, ILT-4, LIR-2, LIR2, MIR-10, MIR10 e ILT4.

[0169] Um composto terapêutico compreendendo uma molécula HLA-G pode ser usado para fornecer sinais inibitórios a uma célula imune compreendendo qualquer um de KIR2DL4, LILRB1 e LILRB2, por exemplo, com moléculas de compostos terapêuticos multimerizadas compreendendo uma molécula HLA-G e assim fornecer privilégio imunológico sítio-específico.

[0170] Um composto terapêutico compreendendo uma molécula de anticorpo agonístico anti-KIR2DL4, anti-LILRBl ou anti-LILRB2 pode ser usado para fornecer sinais inibitórios a uma célula imune compreendendo qualquer um de KIR2DL4, LILRB1 e LILRB2.

[0171] O HLA-G apenas fornece um sinal inibitório quando multimerizado, por exemplo, quando expresso na superfície de uma célula ou quando conjugado com a superfície de uma esfera. Nas modalidades, é fornecido um composto terapêutico compreendendo uma molécula HLA-G cujo composto terapêutico não multimeriza em solução (ou não multimeriza

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 116/267

99/248 o suficiente para resultar em níveis significativos de agonização da molécula inibidora). 0 uso de moléculas de HLA-G que minimizam a multimerização em solução minimizará a agonização sistêmica das células imunes e a supressão imune indesejada.

[0172] Embora não pretendendo estar vinculado à teoria, acredita-se que o HLA-G não seja eficaz na regulação negativa, a menos que seja multimerizado, que a ligação do composto terapêutico ao alvo, através da porção de alvejamento, multimerize a entidade de ligação de ICIM e que a entidade de ligação de ICIM multimerizada, se liga e agrupa moléculas inibidoras na superfície de uma célula imune, mediando assim um sinal negativo que regula negativamente a célula imune. Assim, células imunes infiltradas que tentam danificar o tecido alvo, incluindo células que apresentam antígeno e outras células mielóides, células NK e células T, são reguladas negativamente.

[0173] Embora as moléculas de HLA-G minimizem o antagonismo quando desejável na forma monomérica, a redundância de LILRB1 e LILRB2 minimizará o impacto no sistêmico, mesmo com algum antagonismo monomérico.

[0174] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM que compreende uma molécula de HLA-G, por exemplo, uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 117/267

100/248 isoforma livre de B2M (por exemplo, HLA-G5), ver Carosella et al., Advances in Immunology, 2015, 127:33. Em um formato livre de B2M, o HLA-G liga-se preferencialmente ao LILRB2.

[0175] Sequências adequadas para a construção de moléculas HLA-G incluem o GenBank P17693.1 RecName:Full = antígeno de histocompatibilidade HLA classe I, cadeia alfa G; AltName:Full=antigeno HLA G; AltName:Full=antigeno G MHC de classe I; Bandeiras: Precursor, ou MWMAPRTLFLLLSGALTLTETWAGSHSMRYFSAAVSRPGRGEPRFIAMGYVDDTQFVR FDSDSACPRMEPRAPWVEQEGPEYWEEETRNTKAHAQTDRMNLQTLRGYYNQSEASSHT LQWMIGCDLGSDGRLLRGYEQYAYDGKDYLALNEDLRSWTAADTAAQISKRKCEAANVA EQRRAYLEGTCVEWLHRYLENGKEMLQRADPPKTHVTHHPVFDYEATLRCWALGFYPAE IILTWQRDGEDQTQDVELVETRPAGDGTFQKWAAVWPSGEEQRYTCHVQHEGLPEPLM LRWKQSSLPTIPIMGIVAGLWLAAWTGAAVAAVLWRKKSSD (SEQ ID NO: 5) . Uma molécula candidata HLA-G pode ser testada quanto à adequação para uso em métodos e compostos, por exemplo, por métodos análogos aos descritos em Synthetic HLA-G proteins for therapeutic use in transplantation, LeMaoult et ai., 2013 The FASEB Journal 27:3643.

[0176] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento que se liga preferencialmente a um antígeno doador não presente em, presente em níveis substancialmente mais baixos no sujeito, por exemplo, um antígeno doador da Tabela 2, e está

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 118/267

101/248 localizado para tecido de enxerto do doador em um sujeito. Em algumas modalidades, ele não se liga, ou não se liga substancialmente, a outros tecidos. Em algumas modalidades, um composto terapêutico pode incluir uma porção de alvejamento que é específica para HLA-A2 e se liga especificamente a um aloenxerto doador, mas não se liga a tecidos do hospedeiro e é combinado com uma fração de ligação/modulação de ICIM que compreende uma molécula HLA-G que se liga KIR2DL4, LILRB1 ou LILRB2, tal que o composto terapêutico, por exemplo, quando ligado ao alvo, ativa KIR2DL4, LILRB1 ou LILRB2. O composto terapêutico tem como alvo um aloenxerto e fornece um privilégio imunológico local ao aloenxerto.

[0177] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento que se liga preferencialmente a um antígeno específico do tecido, por exemplo, um antígeno da Tabela 3 e está localizada para o local do alvo em um sujeito, por exemplo, um sujeito com um distúrbio autoimune, por exemplo, um distúrbio autoimune da Tabela 3. Em algumas modalidades, ele não se liga, ou não se liga substancialmente, a outros tecidos. Em modalidades, o composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM que compreende uma molécula de HLA-G que se liga a KIR2DL4, LILRB1 ou LILRB2, de modo que

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 119/267

102/248 o composto terapêutico, por exemplo, quando ligado ao alvo, ativa KIR2DL4, LILRB1 ou LILRB2. O composto terapêutico tem como alvo um tecido sujeito a ataque autoimune e fornece um privilégio imunológico local ao tecido.

[0178] É provável que seja possível manipular uma proteína de fusão HLA-G-B2M estável e solúvel que também possa se ligar ao LILRB1. Por exemplo, a estrutura cristalina de HLA-G foi determinada usando monômeros HLA-G/B2M (Clements et al. 2005 PNAS 102: 3360) .

Familia FCRL [0179] FCRL1-6 geralmente inibe a ativação ou função de células B. Estas glicoproteínas transmembranares do tipo 1 são compostas por diferentes combinações de 5 tipos de domínios do tipo imunoglobulina, com cada proteína consistindo de 3 a 9 domínios e nenhum tipo de domínio individual conservado em todas as proteínas da FCRL. Em geral, a expressão da FCRL é restrita aos linfócitos, com a expressão primária em linfócitos B. Geralmente, as FCRLs funcionam para reprimir a ativação das células B.

[0180] Uma fração de ligação/modulação de ICIM pode compreender uma molécula de anticorpo anti-BCMA agonística. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma molécula de anticorpo anti-FCRL e uma molécula de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 120/267

103/248 anticorpo anti-receptora de células B (BCR). Embora não pretendendo estar vinculado à teoria, acredita-se que um composto terapêutico compreendendo moléculas de anticorpo de ambas as especificidades trará o FCRL para estreita proximidade com o BCR e inibirá a sinalização de BCR.

BUTIROFILINAS E MOLÉCULAS SEMELHANTES À BUTIROFILINA [0181] A fração de ligação/modulação efetora pode compreender um agonista ou antagonista de uma butirofilina. Em algumas modalidades, uma fração de ligação/modulação efetora é uma molécula de BTN1A1 agonistica ou funcional, molécula de BTN2A2, molécula de BTNL2 ou molécula de BTNL1.

[0182] Uma molécula de BTNXi funcional (onde Xi =

1A1, 2A2,	L2 ou Ll) ,	como	esse termo é	utilizado neste
documento,	refere-se	a um	polipeptídeo	com sequência
suficiente	de BTNXi	que,	como parte	de um composto
terapêutico	, inibe as	células	T. Em algumas	modalidades, uma
molécula de	BTNXi tem	pelo menos 60, 70, 8	0, 90, 95, 99 ou

100% de identidade de sequência ou identidade de sequência substancial, com uma butirofilina de ocorrência natural ou molécula do tipo butirofilina.

[0183] Em algumas modalidades, uma fração de ligação/modulação efetora é uma molécula BTNL8 antagonista.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 121/267

104/248 [0184] Uma molécula BTNL8 antagonista, como o termo é utilizado neste documento, refere-se a um polipeptideo com sequências de BTNL8 suficientes que, como parte de um composto terapêutico, ela inibe a ativação, proliferação, ou secreção de citosina pela célula T em repouso. Em algumas modalidades, uma molécula de BTNL8 tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência, ou identidade de sequência substancial, com uma butirofilina de ocorrência natural.

Frações de ligação/modulação de IIC: Frações de Ligação/Modulação Efetoras que Recrutam Células T Imunossupressoras [0185] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de IIC, que se liga, ativa ou retém células imunossupressoras, por exemplo, células T imunossupressoras, no sitio mediado pela porção de alvejamento, fornecendo privilégio imunológico sitio-especifico. A fração de ligação/modulação de IIC, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de IIC compreendendo uma molécula de anticorpo, compreendendo, por exemplo, um domínio de ligação scFv, se liga a tipos de células imunossupressores, por exemplo, Tregs, por exemplo,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 122/267

105/248

Foxp3+CD25+Tregs. A tolerância de órgão, tecido ou tipo de célula específico está associada a um aumento esmagador de Tregs proximais e a infiltração no órgão alvo; em modalidades, os métodos e compostos descritos neste documento sinteticamente recriam e imitam este estado fisiológico. Após o acúmulo de Tregs, é criado um microambiente imunossupressor que serve para proteger o órgão de interesse do sistema imunológico.

Aglutinantes GARP como Treg e molécula de alvejamento TGFB [0186] O GARP é um receptor de proteínas de membrana para TGF-beta latente expresso na superfície de Tregs ativados (Tran et al. 2009 PNAS 106:13445 e Wang et al. 2009 PNAS 106:13439). Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma entidade de ligação de IIC que se liga a uma ou ambas as células que expressam GARP e GARP solúveis, como Tregs humanos ativados, e uma porção de alvejamento que tem como alvo o composto terapêutico no tecido alvo de interesse. As frações de ligação/modulação de IIC que compreendem um aglutinante GARP incluem, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de IIC que compreende uma molécula de anticorpo anti-GARP, por exemplo, um domínio scFv anti-GARP. Embora não pretendendo estar limitado pela

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 123/267

106/248 teoria, acredita-se que o composto terapêutico que compreende um algutinante de GARP efetue o acúmulo de Tregs que expressam GARP no sitio alvejado pela porção de alvejamento do composto terapêutico, por exemplo, um transplante ou sítio de lesão do órgão. Novamente, embora não pretendendo estar vinculado pela teoria, acredita-se que um composto terapêutico que compreende os efeitos de um aglutinante de GARP também possa efetuar o acúmulo de GARP solúvel no sítio da lesão do órgão, o que servirá para ligar e ativar o TGFB1, uma citocina imunossupressora, de maneira local (Fridrich et al. 2016 PLoS One ll:e0153290; doi : 10.1371/journal .pone . 0153290 e Hahn et al. 2013 Blood 15:1182). Assim, uma fração de ligação/modulação efetora que compreende um aglutinante de GARP pode atuar como uma fração de ligação/modulação de IIC ou uma fração de ligação/modulação de SM.

CTLA4 como uma molécula de alvejamento de Treg e de silenciamento de célula T efetora [0187] Em algumas modalidades, uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, compreende uma molécula de anticorpo, por exemplo, um domínio scFv, que se liga a CTLA4 expresso na superfície de Tregs. A molécula

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 124/267

107/248 terapêutica acumula ou retém CTLA4+ Tregs no sítio alvo, com a imunossupressão local como conseqüência.

[0188] Embora expresso mais altamente em Tregs, o CTLA4 também é expresso em células T ativadas. Um composto terapêutico compreendendo uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, um anticorpo anti-CTLA4 ou um anticorpo anti-CTLA4 funcional, pode regular negativamente a célula T que expressa CTLA4. Assim, em um composto terapêutico compreendendo uma fração de ligação/modulação efetiva que se liga a CTLA4, a fração efetora também pode atuar como uma fração de ligação/modulação de ICIM.

[0189] Em algumas modalidades, o aglutinante antiCTLA4 não é antagonista ou agonista quando em formato monomérico e, é agonista apenas quando agrupado ou multimerizado após a ligação ao alvo.

[0190] Embora não pretendendo estar limitado pela teoria, acredita-se que a ligação do composto terapêutico, através da porção de alvejamento, ao alvo, efetue a multimerização do composto terapêutico. No caso de células T ativadas e de memória, o CTLA4 ligado pela fração de ligação/modulação efetora do composto terapêutico é agrupado e um sinal inibitório pela conexão de CTLA4 expresso por células T ativadas e de memória.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 125/267

108/248 [0191] Em algumas modalidades, o aglutinante antiCTLA4 não é antagonista ou agonista quando em formato monomérico, e é agonista apenas quando agrupado ou multimerizado após a ligação ao alvo.

Aglutinantes GITR [0192] GITR (CD357) é um marcador de superfície celular presente em Tregs. O bloqueio da interação GITRGITRL mantém a função Treg. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma entidade de ligação de IIC que se liga a células Treg que expressam GITR e uma porção de alvejamento que tem como alvo o composto terapêutico ao tecido alvo de interesse.

[0193] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma molécula de anticorpo anti-GITR, por exemplo, molécula de anticorpo anti-GITR que inibe a ligação de GITR a GITRL.

[0194] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma molécula de anticorpo anti-GITR, molécula de anticorpo anti-GITR que inibe a ligação de GITR a GITRL, e o agonista de PD-1 ou outro efetor descrito neste documento.

[0195] Embora não deseje estar limitado pela teoria, acredita-se que o composto terapêutico que compreende um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 126/267

109/248 ligante de GITR efetue o acúmulo de Tregs que expressam GITR no sítio alvejado pela porção de alvejamento do composto terapêutico, por exemplo, um transplante ou sítio de lesão de órgão.

Butirofilinas/MOLÉCULAS SEMELHANTES A BUTIRROFILINA [0196] A fração de ligação/modulação efetora pode compreender uma molécula de BTNL2 agonista. Embora não desejando estar limitado pela teoria, acredita-se que as moléculas BNL2 agonistas induzem as células Treg.

[0197] Uma molécula agonista de BTNL2, como o termo usado neste documento, refere-se a um polipeptídeo com sequência BTNL2 suficiente que, como parte de um composto terapêutico, induz células Treg. Em algumas modalidades, uma molécula de BTNL2 tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de identidade de sequência, ou identidade de sequência substancial, com uma butirofilina de ocorrência natural.

[0198] Em algumas modalidades, uma fração de ligação/modulação efetora uma molécula BTNL8 antagonista.

Compostos Terapêuticos Compreendendo uma Fração De Ligação/Modulação de SM: Manipulação do Microambiente Local [0199] Um composto terapêutico pode compreender uma fração de ligação/modulação efetora que promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, pelo

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 127/267

110/248 fornecimento na proximidade do alvo uma substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo, referido neste documento como uma fração de ligação/modulação de SM.

[0200] Em algumas modalidades, a fração de ligação/modulação de SM compreende uma molécula que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo (referido neste documento como uma fração de ligação/modulação de SM). Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM que liga e acumula uma substância solúvel, por exemplo, uma substância endógena ou exógena tendo função imunossupressora. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73 ou molécula de fosfatase alcalina, que se liga, inibe, sequestradores, degrada ou neutraliza uma substância solúvel, normalmente e substância solúvel endógena, por exemplo, ATP no caso de uma molécula CD39 ou molécula de fosfatase alcalina, ou AMP no caso de uma molécula CD73, que promove ataque imunológico. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma fração de ligação/modulação de SM que compreende uma substância imunossupressora, por exemplo, um fragmento de proteína que é imunossupressor.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 128/267

111/248

Tecido de Doador [0201] Os compostos terapêuticos e métodos descritos neste documento podem ser usados em conjunção com um transplante de tecido doador em um sujeito e pode minimizar a rejeição de, minimizar o dano mediado pela célula efetora imunológica a, prolongar a aceitação de, ou prolongar a vida funcional de, tecido de transplante doador. O tecido pode ser tecido de xenoenxerto ou aloenxerto. O tecido transplantado pode compreender todo ou parte de um órgão, por exemplo, um fígado, rim, coração, pâncreas, timo, pele ou pulmão. Em modalidades, os compostos terapêuticos descritos neste documento reduzem ou eliminam a necessidade de supressão imunológica sistêmica. Os compostos e métodos terapêuticos descritos neste documento também podem ser usados para tratar a GVHD. Em algumas modalidades, as células hospedeiras são revestidas com um composto terapêutico que compreende, como uma fração de ligação/modulação efetora, uma molécula de PD-L1.

[0202] A Tabela 2 fornece moléculas alvo para indicações de transplante. Uma molécula alvo é o alvo ao qual uma porção de alvejamento se liga. Como discutido em outra parte neste documento, em algumas modalidades, uma porção de alvejamento é selecionada que liga um produto de um alelo presente no tecido doador e que não é expresso pelo

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 129/267

112/248 sujeito (recipiente) ou expresso em um nível diferente (por exemplo, reduzido ou substancialmente reduzido).

Tabela 2: Moléculas Alvo para Indicações de Transplante
Indicação	Tipo de órgão/célula	Alvo
Tecido de transplante de aloenxerto, por exemplo, transplante de órgão sólido de aloenxerto, GvHD	Todos	HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DP, HLA-DQ ou HLA-DR
Transplante	Rim	Antígenos expressos no rim onde as células imunológicas se infiltram, por exemplo, incluindo mas não limitado à região intersticial tubular, por exemplo, Uromodulina, SLC22A2, SLC22A6, FXYD4, SLC5A10, SLC6A13, AQP6, SLC13A3, TMEM72, BSND, NPR3 e o

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 130/267

113/248

epitélio tubular proximal e distai , como OAT1, OCT2

Distúrbios Autoimunes [0203] Os compostos e métodos terapêuticos descritos neste documento podem ser usados para tratar um sujeito com ou em risco de ter uma resposta autoimune indesejada, por exemplo, uma resposta autoimune em diabetes tipo 1, esclerose múltipla, cardiomiosite, vitiligo, alopecia, doença inflamatória intestinal (IBD, por exemplo, doença de Crohn ou colite ulcerosa), síndrome de Sjogren, esclerose glomerular segmentada focal (FSGS), esclerodermia/esclerose sistêmica (SSc) ou artrite reumatoide. Em algumas modalidades, o tratamento minimiza a rejeição de, minimiza a lesão mediada pelas células efetoras imunológicas, prolonga a sobrevivência do tecido do sujeito submetendo-se a, ou em risco de, ataque autoimune. A Tabela 3 fornece moléculas alvo para várias indicações autoimunes e tipos de órgãos/células . Uma molécula alvo é o alvo ao qual uma porção de alvejamento se liga.

Tabela 3: Moléculas alvo para indicações autoimunes
Indicação	Tipo de órgão/célula	Molécula Alvo
Diabetes tipo 1 e	Pâncreas/ilhotas	SEZ6L2, LRP11,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 131/267

114/248

Transplante	pancreáticas, células beta	DISP2, SLC30A8, FXYD2 TSPAN7 TMEM27 (referência Hald et al. 2012 Diabetelogia 55: 154); FXYD2; GPR119; HEPACAM2
Esclerose Múltipla	CNS/bainha de mielina de oligodendrócitos	MOG, PLP, MBP
Cardiomiosite, artrite reumatoide	Cardiomiócitos, monócitos, macrófagos, células mieloides	SIRPA (CD172a)
Doença inflamatória intestinal (oolite ulcerosa, doença de Crohn) ou GVHD; Doença celíaca	Intestino	MAdCAM
Hepatite autoimune (AIH); Colangite Esclerosante Primária (PSC);	fígado	MAdCAM

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 132/267

115/248

Esclerose Biliar Primária; (PBC); transplante
Esclerose glomerular segmentada focal (FSGS) e outras doenças que podem afetar os rins, por exemplo, nefrite por lúpus, esclerodermia sistêmica, nefropatia glomerular membranosa (MGN); Nefropatia membranosa (MN); Doença de Mudança Mínima (DCM); Nefropatia de IgA; Vasculite associada ao ANCA (AAV)	Rim, podócitos, túbulos, células epiteliais	COL1A1, Caderina 2, VCAM-1, Thyl, Podocin, KIM1 (Hodgin et al., Am J Pathol 177: 1675 2010); PLA2R; OAT1; OCT2; K-caderina 6

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 133/267

116/248

Sindrome de Sjogren	Glândulas salivares, células epiteliais, rim	FCGR3B, HLAB, KIM1 (Hu et al. Arth e Rheum 56: 3588 2007)
Esclerodermia, esclerose sistêmica (SSc)	pele, rim, pulmão, fibroblastos, tecido conj untivo	Colágeno I, III, VI, VII, fibronectina (Wang et al. Arth e Rheum 54: 2271 2006)
vitiligo	Pele, epiderme, células de Langerhans, queratinócitos, melanócitos	COL17A1, CD1A, CD207, desmogleina 1-4, queratina 1
Alopecia areata	Pele, foliculo piloso/bulbo capilar, derme	CD133 (Yang e Cotsarelis, J Dermatol Sei 57:2 2010)

[0204] Outros exemplos de doenças autoimunes e doenças que podem ser tratadas com os compostos descritos neste documento incluem, mas não estão limitadas a, Miocardite, sindrome de enfarto do Pós-miocárdio, sindrome de Pospericardiotomia, endocardite bacteriana subaguda, nefrite antimembrana basal glomerular, cistite intersticial,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 134/267

117/248 nefrite Lúpica, glomerulonefropatia membranosa, Doença Renal Crônica (CKD), Hepatite autoimune, Cirrose biliar primária, Colangite esclerosante primária, Sindrome antissintetase, alopecia areata, angioedema autoimune, dermatite autoimune progesterona, urticária autoimune, penfigoide bolhoso, penfigoide cicatricial, dermatite herpetiforme, lúpus discoide eritematoso, epidermólise bolhosa adguirida, eritema nodoso, penfigoide gestacional, hidradenite supurativa, líquen plano, líquen escleroso, doença linear da iga (lad), morféia, pênfigo vulgar, pitiriase liquenoide e varioliforme aguda, doença muchahabermann, psoriase, esclerodermia sistêmica, vitiligo, doença de Addison, Sindrome poliendócrina autoimune (APS) do tipo 1, Sindrome poliendócrina autoimune (APS) do tipo 2, Sindrome poliendócrina autoimune (APS) do tipo 3, Pancreatite autoimune (AIP), Diabetes mellitus do tipo 1, Tireoidite autoimune, Tiroidite de Ord, Doença de Graves, Ooforite autoimune, Endometriose, Orquite autoimune, sindrome de Sjogren, Enteropatia Autoimune, Doença celiaca, Doença de Crohn, Colite Microscópica, Colite Ulcerativa, Trombocitopenia, Adipose dolorosa, Doença de Still do adulto, Espondilite Anquilosante, Sindrome CREST, Lúpus induzido por drogas, Artrite relacionada à entesite, Fasciíte eosinofílica, Sindrome de Felty, Doença relacionada

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 135/267

118/248 a IgG4, Juvenil Artrite, Doença de Lyme (Crônica), Doença mista do tecido conjuntivo (MCTD), Reumatismo palindrômico, Sindrome de Parry Romberg, sindrome de Parsonage-Turner, artrite psoriática, artrite reativa, policondrite recorrente, fibrose retroperitoneal, febre reumática, artrite reumatoide, sarcoidose, sindrome de Schnitzler, Lúpus Eritematoso Sistêmico (SLE), Doença do tecido conjuntivo indiferenciada (UCTD), Dermatomiosite, Fibromialgia, Miosite do corpo de inclusão, Miosite, Miastenia gravis, Neuromiotonia, Degeneração cerebelar paraneoplásica, Polimiosite, Encefalomielite disseminada aguda (ADEM), Neuropatia axonal motora aguda, Encefalite do Receptor Anti-N-Metil-D-Aspartato (anti-NMDA), Esclerose concêntrica Balo, Encefalite de Bickerstaff, Polineuropatia desmielinizante inflamatória crônica, Sindrome de GuillainBarre, Encefalopatia de Hashimoto, Doenças inflamatórias idiopáticas desmielinizantes, Sindrome miastênica de Lambert-Eaton, Esclerose múltipla, sindrome de Oshtoran, distúrbio neuropsiquiátrico autoimune pediátrico associado a Streptococcus (PANDAS), neuropatia inflamatória progressiva, sindrome das pernas inquietas, Sindrome da pessoa rígida, coréia de Sydenham, mielite transversa, retinopatia autoimune, uveíte autoimune, sindrome de Cogan, oftalmopatia de Graves, Uveíte intermediária, Conjuntivite

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 136/267

119/248 lenhosa, úlcera de Mooren, Neuromielite óptica, sindrome de Opsoclonus myoclonus, neurite óptica, esclerite, sindrome de Susac, oftalmia simpática, sindrome de Tolosa-Hunt, doença da orelha interna autoimune (AIED), doença de Ménière, doença de Behcet, Granulomatose eosinofilica com poliangiite (EGPA) , Arterite de células gigantes, granulmatose com poliangiite (GPA) , vasculite IgA (IgAV), doença de Kawasaki, vasculite leucocitoclástica, vasculite lúpica, vasculite reumatoide, poliangiite microscópica (MPA) , poliarterite nodosa (PAN), polimialgia reumática, vasculite, imunodeficiência primária e semelhantes.

[0205] Outros exemplos de distúrbios e doenças autoimunes potenciais, bem como comorbidades autoimunes que podem ser tratadas com os compostos descritos neste documento incluem, mas não se limitam a, Sindrome de fadiga crônica, Sindrome de dor regional complexa, esofagite eosinofilica, Gastirte, Doença pulmonar intersticial, sindrome POEMS, fenômeno de Raynaud, Imunodeficiência primária, Pioderma gangrenoso, Agamaglobulinemia, Aniloidose, Esclerose lateral amiotrófica, Nefrite da membrana basal anti-tubular, Alergia atópica, Dermatite atópica, Neuropatia periférica autoimune, Sindrome de Blau, Doença de Castleman, Doença de Chagas, Doença pulmonar obstrutiva crônica, Osteomielite crônica

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 137/267

120/248 multifocal recorrente, Deficiência do componente 2 do complemento, Dermatite de contato, Sindrome de Cushing, Angiite leucocitoclástica cutânea, Doença de Degos, Eczema, Gastroenterite eosinof1lica, Pneumonia eosinof1lica, Eritroblastose fetal, Fibrodisplasia ossificante progressiva, Penfigoide gastrointestinal, Hipogamaglobulinemia, miocardite de células gigantes idiopática, fibrose pulmonar idiopática, nefropatia por IgA, lipoproteinas imunorreguladoras, sindrome IPEX, Conjuntivite lenhosa, sindrome de Majeed, narcolepsia, encefalite de Rasmussen, esquizofrenia, doença sérica, espondiloatropatia, sindrome de Sweet, arterite de Takayasu e semelhantes.

[0206] Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não compreende pênfigo vulgar, pênfigo. Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não compreende o pênfigo foliáceo. Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não compreende penfigoide bolhoso. Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não compreende a Doença de Goodpasture. Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não inclui psoriase. Em algumas modalidades, o distúrbio autoimune não compreende um distúrbio de pele. Em algumas modalidades, o distúrbio não compreende um distúrbio neoplásico, por exemplo, câncer.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 138/267

121/248

Compostos Terapêuticos [0207] Um composto terapêutico compreende uma porção de alvejamento específica associada funcionalmente com uma fração de ligação/modulação efetora. Em algumas modalidades, a porção de alvejamento específica e a fração de ligação/modulação efetora são ligadas uma à outra por uma ligação covalente ou não covalente, por exemplo, uma ligação covalente ou não covalente que se liga diretamente uma às outra. Em outras modalidades, uma porção de alvejamento específica e uma fração de ligação/modulação efetora estão ligadas, por exemplo, covalentemente ou não covalentemente, através de uma porção de ligante peptídico. Por exemplo, no caso de um polipeptídeo de fusão, uma sequência polipeptídica compreendendo a fração alvo específica e uma sequência polipeptídica pode ser diretamente ligada uma à outra ou ligada através de uma ou mais sequências de ligantes. Em algumas modalidades, a fração ligante compreende um polipeptídeo. Os ligantes não estão, no entanto, limitados a polipeptídeos. Em algumas modalidades, uma fração de ligante peptídico compreende outras cadeias principais, por exemplo, um polímero não peptídico, por exemplo, um polímero de PEG. Em algumas modalidades, uma fração de ligante peptídico pode compreender uma partícula, por exemplo, uma nanopartícuia, por exemplo, uma nanopartícuia polimérica. Em

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 139/267

122/248 algumas modalidades, uma fração de ligante peptidico pode compreender uma molécula ramificada ou um dendrímero. No entanto, em modalidades em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM (que liga um efetor como PD-1), estruturas que resultam em agrupamento na ausência de ligação alvo devem ser evitadas, pois podem causar agrupamento na ausência de ligação alvo.

Portanto,	nas modalidades,	o	composto	terapêutico tem	uma
estrutura,	por exemplo,	as	cópias	de um ICIM	são
suficientemente limitadas,	de	modo que o agrupamento	na

ausência de ligação alvo seja minimizada ou substancialmente eliminada, ou eliminada, ou seja suficientemente minimizada para que a supressão imunológica sistêmica substancial não ocorra.

[0208] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende um polipeptídeo compreendendo uma porção de alvejamento específica conjugada covalentemente ou não covalentemente a uma fração de ligação/modulação efetora. Em algumas modalidades, uma molécula terapêutica compreende uma proteína de fusão que compreende uma porção de alvejamento específica fundida, por exemplo, diretamente ou através de uma fração de ligação compreendendo um ou mais resíduos de aminoácidos, a uma fração de ligação/modulação efetora. Em algumas modalidades, uma molécula terapêutica

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 140/267

123/248 compreende um polipeptídeo compreendendo uma porção de alvejamento específica ligada por uma ligação não covalente ou uma ligação covalente, por exemplo, uma ligação covalente que não seja uma ligação peptídica, por exemplo, uma ligação de sulfidrila, a uma fração de ligação/modulação efetora.

[0209] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende polipeptídeo, por exemplo, um polipeptídeo de fusão, compreendendo:

l.a) uma porção de alvejamento específica compreendendo um polipeptídeo de ligação específico ao alvo;

l.b) uma porção de alvejamento específica compreendendo uma molécula de ligação ao ligante alvo;

l.c) uma porção de alvejamento específica compreendendo uma molécula de anticorpo;

l.d) uma porção de alvejamento específica compreendendo uma molécula de anticorpo de cadeia simples, por exemplo, um domínio scFv; ou

l.e) uma porção de alvejamento específica compreendendo uma primeira da região variável de cadeia leve ou pesada de uma molécula de anticorpo, e em que a outra região variável é covalentemente ou não covalentemente associada com a primeira;

e

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 141/267

124/248

2.a) uma fração de	ligação/modulação efetora
compreendendo um polipeptideo	de ligação específico efetor;
2.b) uma fração de	ligação/modulação efetora
compreendendo uma molécula de	ligação de ligante efetora;
2.c) uma fração de	ligação/modulação efetora
compreendendo uma molécula de	anticorpo;
2.d) uma fração de	ligação/modulação efetora
compreendendo uma molécula de	anticorpo de cadeia única, por
exemplo, um domínio scFv; ou 2.e) uma fração de	ligação/modulação efetora
compreendendo uma primeira da	região variável de cadeia leve
ou pesada de uma molécula de	anticorpo, e em que a outra

região variável está covalentemente ou não covalentemente

associada à	primeira.
[0210]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.a e	2 . a.
[0211]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.a e	2 .b.
[0212]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.a e	2 . c.
[0213]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.a e	2 .d.
[0214]	Em algumas	modalidades,	um	composto

terapêutico compreende l.a e 2.e.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 142/267

125/248

[0215]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.b e	2 . a.
[0216]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.b e	2 .b.
[0217]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.b e	2 . c.
[0218]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.b e	2 .d.
[0219]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.b e	2 . e.
[0220]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.c e	2 . a.
[0221]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.c e	2 .b.
[0222]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.c e	2 . c.
[0223]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.c e	2 .d.
[0224]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.c e	2 . e.
[0225]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.d e	2 . a.
[0226]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.d e	2 .b.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 143/267

126/248

[0227]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.d e	2 . c.
[0228]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.d e	2 .d.
[0229]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.d e	2 . e.
[0230]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.e e	2 . a.
[0231]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.e e	2 .b.
[0232]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.e e	2 . c.
[0233]	Em algumas	modalidades,	um	composto
terapêutico	compreende l.e e	2 .d.
[0234]	Em algumas	modalidades,	um	composto

terapêutico compreende l.e e 2.e.

[0235] Os compostos terapêuticos divulgados neste documento podem, por exemplo, compreender uma pluralidade de frações de ligação/modulação efetora e de alvejamento especificas. Qualquer ligante peptidico ou plataforma adequada pode ser usada para apresentar a pluralidade de frações. O ligante peptidico é tipicamente acoplado ou fundido a uma ou mais frações de ligação/modulação e de alvejamento.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 144/267

127/248 [0236] Em algumas modalidades, dois (ou mais) ligantes peptidicos associam-se, covalentemente ou não covalentemente, por exemplo, para formar um composto terapêutico hetero ou homodimérico. Por exemplo, o ligante peptidico pode compreender uma região Fc e duas regiões Fc se associam uma à outra. Em algumas modalidades de um composto terapêutico compreendendo duas regiões de ligantes, as regiões de ligantes podem autoassociar-se, por exemplo, como duas regiões Fc idênticas. Em algumas modalidades de um composto terapêutico compreendendo duas regiões de ligantes, as regiões de ligantes não são capazes de, ou não são capazes de substancial, autoassociação, por exemplo, as duas regiões Fc podem ser membros de um par de knob e hole.

[0237] As configurações exemplares não limitantes de compostos terapêuticos compreendem o seguinte (por exemplo, na ordem dos terminais N para C):

RI --- Região do Ligante Peptidico A-R2

R3---Região do Ligante Peptidico B---R4, em que,

Rl, R2, R3 e R4 compreendem, independentemente, uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC ou uma fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 145/267

128/248 de SM; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente;

A região do Ligante Peptídico A e Ligante Peptídico B compreendem frações que podem associar-se uma com a outra, por exemplo, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem cada um deles uma fração Fc desde que estejam presentes uma fração de ligação/modulação efetora e uma porção de alvejamento específica.

[0238] Em algumas modalidades:

RI compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM; ou está ausente;

R2 compreende uma porção de alvejamento específica, ou está ausente;

R3 compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM, ou está ausente;

R4 compreende uma porção de alvejamento específica, ou está ausente;

A Região do Ligante Peptídico A e Ligante Peptídico B compreendem frações que podem associar-se uma com a outra, por exemplo, o Ligante peptídico A e Ligante peptídico B compreendem, cada um deles, a uma fração Fc, desde que um de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 146/267

129/248

RI ou R3 esteja presente e um de R2 ou R4 esteja presente.

[0239] Em algumas modalidades:

RI compreende uma porção de alvejamento específica, ou está ausente;

R2 compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM, ou está ausente;

R3 compreende uma porção de alvejamento específica, ou está ausente;

R4 compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM, ou está ausente;

A Região do Ligante Peptídico A e Ligante Peptídico B compreendem frações que podem associar-se uma com a outra, por exemplo, o Ligante peptídico A e Ligante peptídico B compreendem, cada um deles, uma fração Fc, desde que um de RI ou R3 esteja presente e um de R2 ou R4 esteja presente.

[0240] Exemplos não limitantes incluem, mas não estão limitados a:

RI

Região do

R2

R3

Região do

R4

Outro

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 147/267

130/248

	Ligante Peptídi co A			Ligante Peptídi co B
HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptídico de Autopareame nto
HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptídico de Não Autopareame nto


HCVR e LCVR (ou ausent e)	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR (ou ausent e)	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptídico de Autopareame nto Um de RI ou R3 está

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 148/267

131/248

						ausente.
HCVR e LCVR (ou ausent e)	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR (ou ausent e)	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptidico de Não Autopareame nto Um de Rl ou R3 está ausente.

HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv (ou ausent e)	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv (ou ausent e)	Regiões de Ligante Peptidico de Autopareame nto Um de R2 ou R4 está ausente.

HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv (ou	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv (ou	Regiões de Ligante

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 149/267

132/248

		ausent e)			ausent e)	Peptidico de Não Autopareame nto Um de R2 ou R4 está ausente.

HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptidico de Autopareame nto RI e R3 são iguais
HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptidico de Não Autopareame nto RI e R3 são diferentes

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 150/267

133/248

HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptídico de Autopareame nto R2 e R4 são iguais
HCVR e LCVR	Região Fc	f cFv	HCVR e LCVR	Região Fc	scFv	Regiões de Ligante Peptídico de Não Autopareame nto R2 e R4 são diferentes
HCVR e LCVR: refere-se a uma fração compreendendo uma porção de ligação ao antigeno de uma região variável de cadeia pesada e leve, tipicamente com a cadeia pesada fundida à região do Ligante peptídico. Autopareamento: em que uma região do ligante peptídico pode parear com ela mesma, por exemplo, uma região Fc que pode parear uma cópia de si mesma. Não Autopareamento: em que uma Região do Ligante peptídico não parea consigo mesma, ou não parea substancialmente consigo

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 151/267

134/248 mesma, por exemplo, uma região Fc não parea ou não parea significativamente consigo mesma, por exemplo, em que a Região do Ligante peptidico A e Região do Ligante peptidico B são membros de um par de knob e hole.

[0241] Em algumas modalidades:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem cada um independentemente: uma fração de modulação de ligação efetora que ativa um receptor inibidor em uma célula imune, por exemplo, uma célula T ou uma célula B, por exemplo, uma molécula PD-L1 ou uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1); uma porção de alvejamento específica; ou está ausente;

desde que uma fração de ligação efetora e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.

[0242] Em algumas modalidades, o Ligante peptidico A e o Ligante peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0243] Em algumas modalidades:

Rl e R3 compreendem independentemente uma porção de modulação de ligação efetora que ativa um receptor inibidor em uma célula imune, por exemplo, uma célula T ou uma célula B, por exemplo, uma molécula PD-L1 ou uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1); e

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 152/267

135/248

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno do tecido.

[0244] Em algumas modalidades, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0245] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem independentemente uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1); e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno de tecido.

[0246] Em algumas modalidades, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0247] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, um anticorpo de antígeno antitecido; e

R2 e R4 compreendem independentemente uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1), por exemplo, uma molécula de scFv.

[0248] Em algumas modalidades, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 153/267

136/248 frações Fc de autopareamento).

[0249] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem independentemente uma molécula PDL1 (um agonista de PD-1); e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno do tecido; e [0250] Em algumas modalidades, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0251] Em algumas modalidades:

R2 e R4 compreendem independentemente uma molécula de PD-L1 (um agonista de PD-1).

[0252] Em algumas modalidades, o Ligante peptídico A e o Ligante peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0253] Em algumas modalidades:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem cada um independentemente: uma fração de ligação/modulação de SM que modula, por exemplo, liga e inibe, sequestra, degrada ou, de outro modo, neutraliza uma substância, por exemplo, uma molécula solúvel

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 154/267

137/248 que modula uma resposta imune, por exemplo, ATP ou AMP, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente;

desde que uma fração de ligação/modulação de SM e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.

[0254] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0255] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem independentemente uma fração de ligação/modulação de SM que modula, por exemplo, liga e inibe, sequestra, degrada ou, de outro modo, neutraliza uma substância, por exemplo, uma molécula solúvel que modula uma resposta imune, por exemplo, ATP ou AMP, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73; e

[0256] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0257] Em algumas modalidades:

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 155/267

138/248

RI e R3 compreendem independentemente uma molécula CD39 ou uma molécula CD73; e

[0258] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0259] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem cada um uma molécula CD39; e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno de tecido; e [0260] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0261] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem cada um uma molécula CD73; e

[0262] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 156/267

139/248 e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0263] Em algumas modalidades:

Um de RI e R3 compreende uma molécula CD39 e o outro compreende uma molécula CD73; e

[0264] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0265] Em algumas modalidades:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem cada um independentemente: uma molécula HLA-G; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente;

desde que uma molécula HLA-G e uma fração de direcionamento específica estejam presentes.

[0266] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0267] Em algumas modalidades:

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 157/267

140/248

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula HLG-A; e

[0268] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0269] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-LILRBl agonista; e

[0270] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0271] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-KIR2DL4 agonista; e

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 158/267

141/248 [0272] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0273] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-LILRB2 agonista; e

[0274] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0275] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-NKG2A agonista; e

[0276] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 159/267

142/248 [0277] Em algumas modalidades:

um de RI e R3 compreende uma primeira fração escolhida dentre, e a outra compreende uma fração diferente escolhida dentre: uma molécula de anticorpo antagonista anti-LILRBl, uma molécula de anticorpo agonista anti-KR2DL4 e uma molécula de anticorpo agonista anti-NKG2A; e

[0278] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0279] Em algumas modalidades:

um de RI e R3 compreende uma molécula de anticorpo antiLILRBl antagonista e o outro compreende uma molécula de anticorpo agonista anti-KR2DL4; e

[0280] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 160/267

143/248 [0281] Em algumas modalidades:

um de Rl e R3 compreende uma molécula de anticorpo antiLILRB1 antagonista e o outro compreende uma molécula de anticorpo anti-NKG2A agonista; e

[0282] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0283] Em algumas modalidades:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem, cada um, independentemente: uma fração moduladora de ligação efetora que ativa um receptor inibidor em uma célula B, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo agonista anti-FCRL; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente; desde que uma fração de ligação efetora e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.

[0284] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 161/267

144/248 [0285] Em modalidade, a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista, direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

[0286] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem, cada uma, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista; e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antigeno de tecido.

[0287] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0288] Em modalidade, a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

[0289] Em algumas modalidades:

RI e R3 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de anticorpo contra um antigeno de tecido; e

R2 e R4 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo agonista

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 162/267

145/248 anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de scFv.

[0290] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0291] Em modalidade, a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

[0292] Em algumas modalidades:

Um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma molécula de anticorpo anti-BCR, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonista anti-BCR, um compreende uma molécula de anticorpo anti-FCRL, e um compreende uma porção de alvejamento específica.

[0293] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0294] Em algumas modalidades, a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

[0295] Em algumas modalidades:

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 163/267

146/248

Um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma molécula de anticorpo biespecifico compreendendo uma molécula de anticorpo anti-BCR, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonista anti-BCR e uma molécula de anticorpo anti-FCRL, e um compreende uma porção de alvejamento específica;

[0296] Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

[0297] Em modalidade, a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

[0298] Em algumas modalidades:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem, cada um, independentemente:

i) uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, uma fração de ligação/modulação de ICSM, ou uma fração de ligação/modulação de SM, que minimiza ou inibe a atividade, expansão ou função de células T (uma fração de ligação/modulação efetora de células T);

ii) uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, uma fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 164/267

147/248 de ICSM ou uma fração de ligação/modulação de SM que minimiza ou inibe a atividade, expansão ou função de células B (uma fração de ligação/modulação efetora de células B);

iii) uma porção de alvejamento específica; ou iv) está ausente;

desde que, uma fração de ligação/modulação efetora de células T, uma fração de ligação/modulação efetora de células B e uma porção de alvejamento específico estejam presentes.

[0299] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento).

[0300] Em algumas modalidades, um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD-1 agonista e um compreende uma molécula HLA-G.

[0301] Em algumas modalidades, um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma fração de ligação/modulação de SM, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73. Em algumas modalidades, um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma entidade que liga, ativa ou mantém, uma célula imune reguladora, por exemplo, uma célula Treg ou uma célula Breg.

[0302] Em algumas modalidades, um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD-1 agonista, ou um compreende uma molécula HLA-G. Em algumas modalidades, um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD-1 agonista, um

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 165/267

148/248 compreende uma molécula HLA-G e um compreende molécula CD39 ou uma molécula CD73.

Regiões do Ligante Peptidico [0303] Conforme discutido em outra parte neste documento, as frações de ligação/modulação efetoras e porções de alvejamento específicas podem estar ligadas por regiões de ligante peptidico. Qualquer região do ligante peptidico descrita neste documento pode ser usada como um ligante peptidico. Por exemplo, as Regiões de ligante peptidico A e B podem compreender regiões Fc. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma Região do Ligante Peptidico que pode se autoassociar. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma Região do Ligante Peptidico que tem uma fração que minimiza a autoassociação e, tipicamente, a Região do Ligante Peptidico A e a Região do Ligante Peptidico B são heterodímeros. Os ligantes peptídicos também incluem ligantes peptídicos de glicina/serina. Em algumas modalidades, o ligante peptidico pode compreender uma ou mais repetições de GGGGS (SEQ ID NO: 6) . Em algumas modalidades, o ligante peptidico compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 repetições. Em algumas modalidades, o ligante peptidico compreende GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7). Em algumas modalidades, o ligante peptidico compreende GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8). Estes ligantes

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 166/267

149/248 peptídicos podem ser usados em qualquer dos compostos terapêuticos ou composições fornecidos neste documento.

[0304] Em algumas modalidades, os compostos terapêuticos compreendem, em que o composto terapêutico é um polipeptídeo. Em algumas modalidades, o polipetídeo compreende no terminal N um anticorpo compreendido por F(ab')2 em uma cadeia principal de IgGl Fc fundida com scFvs no terminal C da cadeia principal de IgG Fc. Em algumas modalidades, a cadeia principal de IgG Fc é uma cadeia principal de IgGl Fc. Em algumas modalidades, a cadeia principal de IgGl é substituída por uma cadeia principal de IgG4, cadeia principal de IgG2 ou outra cadeia principal de IgG semelhante. As cadeias principais de IgG descritas neste parágrafo podem ser usadas ao longo deste pedido em que uma região Fc é referida como parte do composto terapêutico. Portanto, em algumas modalidades, o anticorpo compreendido de F(ab')2 em uma cadeia principal de IgGl Fc pode ser um anticorpo anti-MAdCAM ou um anticorpo anti-PD-1 em uma IgGl Fc ou qualquer outra porção de alvejamento ou fração de ligação/modulação efetora fornecida neste documento. Em algumas modalidades, os segmentos de scFV fundidos com o terminal C podem ser um anticorpo anti-PD-1, se a região do terminal N for um anticorpo anti-MAdCAM ou anticorpo antiMAdCAM, se a região do terminal N for um anticorpo anti-PD

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 167/267

150/248

1. Neste exemplo não limitante, o terminal N pode ser a porção de alvejamento, tal como qualquer um dos fornecidos neste documento, e o terminal C pode ser a fração de ligação/modulação efetora, tal como qualquer um dos fornecidos neste documento. Alternativamente, em algumas modalidades, o terminal N pode ser a fração de ligação/modulação efetora, tal como qualquer um dos fornecidos neste documento, e o terminal C pode ser a porção de alvejamento, tal como qualquer uma das fornecidas neste documento.

[0305] Em algumas modalidades, o terminal N pode ser a porção de alvejamento, tal como qualquer uma das fornecidas neste documento, e o terminal C pode ser a fração de ligação/modulação efetora, tal como qualquer uma das fornecidas neste documento.

[0306] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende dois polipeptideos que homodimerizam. Em algumas modalidades, o terminal N do polipeptideo compreende uma fração de ligação/modulação efetora que é fundida com um domínio Fc de IgGl humano (por exemplo, domínios CH2 e/ou CH3). Em algumas modalidades, o terminal C do domínio Fc é outro ligante peptídico que é fundido à porção de alvejamento. Portanto, em algumas modalidades, a molécula podería ser representada usando a fórmula de Rl

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 168/267

151/248

Ligante Peptídico A- Região Fc - Ligante Peptídico B-R2, em que RI pode ser uma fração de ligação/modulação efetora, R2 é uma porção de alvejamento, Ligante Peptídico A e Ligante Peptídico B são independentemente ligantes peptídicos conforme fornecidos neste documento. Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico 1 e o Ligante Peptídico 2 são diferentes.

[0307] Em algumas modalidades, a molécula podería ser representada usando a fórmula de Rl- Ligante Peptídico A-Região Fc-Ligante Peptídico B-R2, em que Rl pode ser uma porção de alvejamento, R2 é uma fração de ligação/modulação efetora, Ligante Peptídico A e Ligante Peptídico B são independentemente ligantes peptídicos conforme fornecido neste documento. Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B são diferentes. Os ligantes peptídicos podem ser escolhidos dentre exemplos não limitativos fornecidos neste documento. Em algumas modalidades, Rl e R2 são independentemente selecionados dentre F(ab')2 e domínios de anticorpo scFV. Em algumas modalidades, Rl e R2 são domínios de anticorpo diferentes. Em algumas modalidades, o scFV está na orientação do domínio VL-VH.

[0308] Em algumas modalidades, o composto terapêutico é um anticorpo biespecífico. Em algumas modalidades, os anticorpos biespecíficos são compreendidos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 169/267

152/248 de quatro cadeias polipeptidicas compreendendo o seguinte:

Cadeia 1: nt-VHl-CHl-CH2-CH3-Ligante Peptídico A-scFv [VL2-Ligante Peptídico B-VH2]-ct

Cadeia 2: nt-VHl-CHl-CH2-CH3-Ligante Peptídico A-scFv [VL2-Ligante Peptídico B-VH2]-ct

Cadeia 3: nt-VLl-CL-ct

Cadeia 4: nt-VLl-CL-ct, em que as cadeias 1 e 2 são idênticas uma à outra e as cadeias 3 e 4 são idênticas uma à outra, em que a cadeia 1 forma um homodímero com a cadeia 2; e as cadeias 3 e 4 associam-se à cadeia 1 e à cadeia 2. Ou seja, quando cada cadeia leve se associa a cada cadeia pesada, o VL1 se associa ao VH1 e CL se associa a CHI para formar duas unidades de Fab funcionais. Sem estar vinculado a nenhuma teoria específica, cada unidade de scFv é intrinsecamente funcional, pois VL2 e VH2 estão covalentemente ligados em conjunto com um ligante peptídico conforme fornecido neste documento (por exemplo, GGGGSG (SEQ ID NO:6), GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO :9), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8) ou GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7). As sequências do Ligante Peptídico A e do Ligante Peptídico B, que são independentes uma da outra, podem ser iguais ou diferentes e como outra forma descrita ao longo do presente pedido. Portanto, em algumas modalidades, o Ligante

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 170/267

153/248

Peptidico A compreende GGGGS (SEQ ID NO:6) GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8) ou GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:9). Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico B compreende GGGGS (SEQ ID NO:6) GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7) , GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8) ou GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:9). O scFv pode ser disposto na orientação NT-VH2-VL2-CT ou NT-VL2-VH2-CT. NT ou nt representa o terminal N e CT ou ct representa o terminal C da proteína. CHI, CH2 e CH3 são os domínios da região IgG Fc e CL representa cadeia Leve Constante, que pode ser cadeias leves da família kappa ou lambda. As outras definições representam o modo como são normalmente usadas na técnica.

[0309] Em algumas modalidades, os domínios VH1 e VL1 são derivados da molécula efetora e os domínios VH2 e VL2 são derivados da porção de alvejamento. Em algumas modalidades, os domínios VH1 e VL1 são derivados de uma porção de alvejamento e os domínios VH2 e VL2 são derivados de uma fração de ligação/modulação efetora.

[0310] Em algumas modalidades, os domínios VH1 e VL1 são derivados de um anticorpo anti-PD-1, e os domínios VH2 e VL2 são derivados de um anticorpo anti-MAdCAM. Em algumas modalidades, os domínios VH1 e VL1 são derivados de um anticorpo anti-MAdCAM e os domínios VH2 e VL2 são derivados de um anticorpo anti-PD-1.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 171/267

154/248 [0311] Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 repetições de GGGGS (SEQ ID NO:6) . Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico B compreende 1, 2, 3, 4 ou 5 repetições de GGGGS. Para evitar dúvidas, as sequências do Ligante Peptidico A e do Ligante Peptidico B, usadas ao longo deste pedido, são independentes umas das outras. Portanto, em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B podem ser iguais ou diferentes. Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A compreende GGGGS (SEQ ID NO:6) GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8), ou GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:9). Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico B compreende GGGGS (SEQ ID NO:6) GGGGSGGGGS (SEQ ID NO:7), GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:8) ou GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO:9).

[0312] Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma cadeia leve e uma cadeia pesada. Em algumas modalidades, a cadeia leve e pesada começa no terminal N com o domínio VH de uma porção de alvejamento seguida pelo domínio CHI de uma IgGl humana, que é fundida a uma região Fc (por exemplo, CH2-CH3) da IgGl humana. Em algumas modalidades, no terminal C da região Fc é fundido a um ligante peptidico conforme fornecido neste documento, tal como, mas não limitado a, GGGGS (SEQ ID NO: 6), GGGGSGGGGS

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 172/267

155/248 (SEQ ID N0:7) ou GGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 8) . 0 ligante peptidico pode então ser fundido a uma fração de ligação/modulação efetora, tal como qualquer uma das frações efetoras fornecidas neste documento. Os polipeptideos podem homodimerizar porque, através da homodimerização de cadeia pesada, que resulta em um composto terapêutico com duas frações efetoras, como dois anticorpos anti-PD-1. Nesta orientação, a porção de alvejamento é um formato de IgG, há dois braços de Fab que cada um reconhece parceiro de ligação da porção de alvejamento, por exemplo, MAdCAM sendo ligado pela porção de alvejamento anti-MAdCAM.

[0313] Em algumas modalidades, se o composto terapêutico compreender uma porção Fc, o domínio Fc (porção) sofrerá mutações para tornar a região Fc sem efeito, que é incapaz de se ligar a FcRs. As mutações que tornam as regiões Fc sem efeito são conhecidas. Em algumas modalidades, as mutações na região Fc, que é de acordo com o sistema de numeração conhecido, são selecionadas do grupo consistindo de:K322A, L235A, L236A, G237A, L235F, L236E, N297, P331S ou qualquer combinação destes. Em algumas modalidades, as mutações Fc compreendem uma mutação em L235 e/ou L236 e/ou G237. Em algumas modalidades, as mutações Fc compreendem mutações L235A e/ou L236A, que podem ser referidas. Em algumas modalidades, as mutações Fc compreendem mutações

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 173/267

156/248

L235A, L236A e G237A.

[0314] São divulgados neste documento polipeptídeos da Região do Ligante Peptidico, peptideos terapêuticos e ácidos nucleicos que codificam os polipeptídeos (por exemplo, compostos terapêuticos), vetores compreendendo as sequências de ácidos nucleicos e células compreendendo os ácidos nucleicos ou vetores.

[0315] Os compostos terapêuticos podem compreender uma pluralidade de porções de alvejamento específicas. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma pluralidade de uma porção de alvejamento específica, uma pluralidade de cópias de uma porção de alvejamento específica do doador ou uma pluralidade de porções de alvejamento específicas do tecido. Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma primeira e uma segunda porção de alvejamento específica de doador, por exemplo, uma primeira porção de alvejamento específica de doador para um primeiro alvo doador e uma segunda porção de alvejamento específica de doador para um segundo doador alvo, por exemplo, em que o primeiro e segundo alvo são encontrados no mesmo tecido de doador. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende, por exemplo, uma primeira porção de alvejamento específica para um alvo específico de tecido e uma segunda porção de alvejamento específica para um segundo alvo, por

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 174/267

157/248 exemplo, em que o primeiro e segundo alvo são encontrados no mesmo tecido alvo ou tecido alvo diferente.

[0316] Em algumas modalidades, um composto terapêutico compreende uma pluralidade de frações de ligação/modulação efetoras compreendendo, cada uma, uma fração de ligação/modulação de ICIM, o número de frações de ligação/modulação de ICIM é suficientemente baixo que o agrupamento do ligante de fração de ligação/modulação de ICIM em células imunes (na ausência de ligação ao alvo) é minimizado, por exemplo, para evitar a agonização sistêmica de células imunes na ausência de ligação do composto terapêutico ao alvo.

Polipeptideos Derivados de Referência, por exemplo, Polipeptideos Humanos.

[0317] Em algumas modalidades, um componente de uma molécula terapêutica é derivado ou baseado em uma molécula de referência, por exemplo, no caso de uma molécula terapêutica para uso em humanos, a partir de um polipeptídeo humano de ocorrência natural. Por exemplo, em algumas modalidades, a totalidade ou parte de uma molécula CD39, uma molécula CD73, um aglutinante de molécula de superfície celular, uma porção de alvejamento específica de doador, uma molécula de ligação efetora de ligante, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 175/267

158/248 de IIC, uma molécula de ligante de molécula inibidora de checkpoint imunológico, uma molécula do contra-ligante da molécula inibidora, uma fração de ligação/modulação de SM, uma porção de alvejamento específica, uma molécula de ligação de ligante alvo ou uma porção de alvejamento específica de tecido, pode ser baseada em ou derivada de um polipeptídeo humano de ocorrência natural. Por exemplo, uma molécula de PD-L1 pode ser baseada ou derivada de uma sequência de PDL1 humana.

[0318] Em algumas modalidades, um componente do composto terapêutico, por exemplo, uma molécula PD-L1:

a)	compreende	toda	ou uma	porção de,	por	exemplo,	uma
porção ativa de polipeptídeo humano	uma r	forma	de ocorrência	natural	do
b)	compreende	todo	ou uma	porção de,	por	exemplo,	uma
porção	ativa de, um	polipeptídeo humano tendo	uma sequência

que aparece em um banco de dados, por exemplo, banco de dados GenBank, em 11 de janeiro de 2017, uma forma de ocorrência natural do polipeptídeo humano que não está associada com um estado de doença;

c) compreende um polipeptídeo humano tendo uma sequência que difere em não mais de 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20 ou 30 resíduos de aminoácidos de uma sequência de a) ou b);

d) compreende um polipeptídeo humano tendo uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 176/267

159/248 sequência que difere em não mais do que 1, 2, 3, 4, 5 10, 20 ou 30% de seus resíduos de aminoácidos de uma sequência de a) ou b);

e) compreende um polipeptideo humano tendo uma sequência que não difere substancialmente de uma sequência de a) ou b); ou

f) compreende um polipeptideo humano tendo uma sequência de c), d) ou e) que não difere substancialmente em uma atividade biológica, por exemplo, capacidade de potencializar ou inibir uma resposta imune, de um polipeptideo humano tendo a sequência de a) ou b).

[0319] Em algumas modalidades, compostos terapêuticos podem compreender uma pluralidade de frações de ligação/modulação efetoras. Por exemplo, um composto terapêutico pode compreender dois ou mais dos seguintes selecionados de:

(a) uma fração de ligação/modulação de ICIM; (b) uma fração de ligação/modulação de IIC; ou (c) uma fração de ligação/modulação de SM. Em algumas modalidades, por exemplo, um composto terapêutico pode compreender uma pluralidade, por exemplo, duas frações de ligação/modulação de ICIM (em que são iguais ou diferentes); a título de exemplo, duas que ativam ou agonizam PD-1; uma pluralidade, por exemplo, duas frações de ligação/modulação de IIC; (em

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 177/267

160/248 que são iguais ou diferentes); ou uma pluralidade, por exemplo, duas frações de ligação/modulação de SM (em que são iguais ou diferentes). Em algumas modalidades, o composto terapêutico pode compreender uma fração de ligação/modulação de ICIM e uma fração de ligação/modulação de IIC; uma fração de ligação/modulação de ICIM e uma fração de ligação/modulação de SM; uma fração de ligação/modulação de IIC e uma fração de ligação/modulação de SM. Em algumas modalidades, o composto terapêutico compreende uma pluralidade de porções de alvejamento. Em algumas modalidades, as porções de alvejamento podem ser iguais ou diferentes.

Composições Farmacêuticas e Kits [0320] Em outro aspecto, as modalidades presentes fornecem composições, por exemplo, composições farmaceuticamente aceitáveis, que incluem um composto terapêutico descrito neste documento, formulado em conjunto com um veiculo farmaceuticamente aceitável. Conforme usado neste documento, veiculo farmaceuticamente aceitável inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, agentes isotônicos e retardantes de absorção e semelhantes que são fisiologicamente compatíveis.

[0321] O veículo pode ser adequado para administração intravenosa, intramuscular, subcutânea,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 178/267

161/248 parenteral, retal, local, oftálmica, tópica, espinal ou epidérmica (por exemplo, por injeção ou infusão). Conforme usado neste documento, o termo veiculo significa um diluente, adjuvante ou excipiente com o qual um composto é administrado. Em algumas modalidades, veículos farmacêuticos podem também ser líquidos, tais como água e óleos, incluindo aqueles de origem de petróleo, animal, vegetal ou sintética, tal como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo e semelhantes. Os veículos farmacêuticos podem também ser solução salina, goma arábica, gelatina, pasta de amido, talco, queratina, silica coloidal, ureia e semelhantes. Além disso, agentes auxiliares, estabilizantes, espessantes, lubrificantes e corantes podem ser usados. Os veículos podem ser usados em composições farmacêuticas compreendendo os compostos terapêuticos fornecidos neste documento.

[0322] As composições e compostos das modalidades fornecidas neste documento podem estar em uma variedade de formas. Essas incluem, por exemplo, formas de dosagem liquidas, semissólidas e sólidas, como soluções liquidas (por exemplo, soluções injetáveis e infusiveis), dispersões ou suspensões, lipossomas e supositórios. A forma preferencial depende do modo de administração e da aplicação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 179/267

162/248 terapêutica pretendida. Composições típicas estão na forma de soluções injetáveis ou infusíveis. Em algumas modalidades, o modo de administração é parenteral (por exemplo, intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal, intramuscular). Em algumas modalidades, a molécula terapêutica é administrada por infusão intravenosa ou injeção. Em outra modalidade, a molécula terapêutica é administrada por injeção intramuscular ou subcutânea. Em outra modalidade, a molécula terapêutica é administrada localmente, por exemplo, por injeção, ou aplicação tópica, a um sítio alvo. As frases administração parentérica e administrados por via parenteral, tal como aqui utilizado, significa modos de administração diferentes da administração entérica e tópica, usualmente por injecção, e inclui, sem limitação, injeção intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intra-orbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, injeção intraespinal, injeção epidural e intraesternal e infusão.

[0323] As composições terapêuticas tipicamente devem ser estéreis e estáveis sob as condições de fabricação e armazenamento. A composição pode ser formulada como uma solução, microemulsão, dispersão, lipossoma ou outra

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 180/267

163/248 estrutura encomendada adequada para uma concentração alta de molécula terapêutica. As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas pela incorporação do composto ativo (isto é, molécula terapêutica) na quantidade necessária em um solvente apropriado com um ou uma combinação dos ingredientes enumerados acima, conforme necessário, seguido pela esterilização do filtrado. Em geral, as dispersões são preparadas ao incorporar o composto ativo em um excipiente estéril que contém um meio de dispersão básico e os outros ingredientes necessários daqueles enumerados acima. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferenciais são secagem a vácuo e liofilização que produz um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado a partir de uma solução filtrada previamente esterilizada deste. A fluidez apropriada de uma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de um revestimento como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessário no caso da dispersão e pelo uso de surfactantes. A absorção prolongada de composições injetáveis pode ser provocada pela inclusão, na composição, de um agente que retarde a absorção, por exemplo, sais de monoestearato e gelatina.

[0324] Tal como será apreciado por aqueles versados na técnica, a via e/ou modo de administração variarão

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 181/267

164/248 dependendo dos resultados desejados. Em certas modalidades, o composto ativo pode ser preparado com um veículo que irá proteger o composto contra a liberação rápida, como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes, adesivos transdérmicos e sistemas de distribuição microencapsulados. Polímeros biodegradáveis e biocompatíveis podem ser usados, tais como acetato de etileno vinila, polianidridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Muitos métodos para a preparação de tais formulações são patenteados ou geralmente conhecidos pelos versados na técnica. Ver, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J. R. Robinson, ed. , Marcel Dekker, Inc. , Nova Iorque, 1978.

[0325] Em certas modalidades, um composto terapêutico pode ser administrado oralmente, por exemplo, com um diluente inerte ou um veículo comestível assimilável. O composto (e outros ingredientes, se desejado) também pode ser incluído em uma cápsula de gelatina de casca dura ou macia, comprimido em comprimidos, ou incorporado diretamente à dieta do sujeito. Para a administração terapêutica oral, os compostos podem ser incorporados com excipientes e usados sob a forma de comprimidos ingeríveis, comprimidos bucais, pastilhas, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, bolachas e semelhantes. Para administrar um composto por outra via

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 182/267

165/248 que não administração parenteral, pode ser necessário revestir o composto com, ou co-administrar o composto com, um material para evitar sua inativação. As composições terapêuticas podem também ser administradas com dispositivos médicos conhecidos na técnica.

[0326] Regimes de dosagem são ajustados para fornecer a resposta desejada ideal (por exemplo, uma resposta terapêutica) . Por exemplo, um bolo único pode ser administrado, várias doses divididas podem ser administradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmente reduzida ou aumentada, conforme indicado pelas exigências da situação terapêutica. É especialmente vantajoso formular composições parenterais em forma de unidade de dosagem para facilitar a administração e a uniformidade da dosagem. Forma da unidade de dosagem como usada neste documento refere-se a unidades discretas fisicamente adequadas como doses unitárias para os sujeitos a serem tratados; cada unidade contém uma quantidade pré-determinada de composto ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado em associação com o veiculo farmacêutico necessário. O relatório descritivo para as formas de unidade de dosagem são ditadas por e diretamente dependente de (a) as características únicas do composto ativo e o efeito terapêutico específico a ser alcançado, e (b) as limitações

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 183/267

166/248 inerentes na técnica para a composição de tal composto ativo para o tratamento da sensibilidade nos indivíduos.

[0327] Uma faixa exemplificativa, não limitativa, para uma quantidade terapeuticamente ou profilaticamente eficaz de um composto terapêutico é de 0,1-30 mg/kg, mais preferencialmente 1-25 mg/kg. As dosagens e regimes terapêuticos do composto terapêutico podem ser determinados por um versado na técnica. Em certas modalidades, o composto terapêutico é administrado por injeção (por exemplo, por via subcutânea ou intravenosa) em uma dose de cerca de 1 a 40 mg/kg, por exemplo, 1 a 30 mg/kg, por exemplo, cerca de 5 a 25 mg/kg, cerca de 10 a 20 mg/kg, cerca de 1 a 5 mg/kg, 1 a 10 mg/kg, 5 a 15 mg/kg, 10 a 20 mg/kg, 15 a 25 mg/kg, ou cerca de 3 mg/kg. O esquema de dosagem pode variar de, por exemplo, uma vez por semana para uma vez a cada 2, 3 ou 4 semanas. Em uma modalidade, o composto terapêutico é administrado a uma dose de cerca de 10 a 20 mg/kg a cada duas semanas. O composto terapêutico pode ser administrado por infusão intravenosa a uma taxa superior a 20 mg/min, por exemplo, 20-40 mg/min e tipicamente superior ou igual a 40 mg/min para alcançar uma dose de cerca de 35 a 440 mg/m2, tipicamente cerca de 70 a 310 mg/m2, e mais tipicamente, cerca de 110 a 130 mg/m2. Nas modalidades, a taxa de infusão de cerca de 110 a 130 mg/m2 alcança um nível de cerca de 3

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 184/267

167/248 mg/kg. Em outras modalidades, o composto terapêutico pode ser administrado por infusão intravenosa a uma taxa inferior a 10 mg/min, por exemplo, menor ou igual a 5 mg/min para alcançar uma dose de cerca de 1 a 100 mg/m2, por exemplo, cerca de 5 a 50 mg/m2, cerca de 7 a 25 mg/m2, ou cerca de 10 mg/m2. Em algumas modalidades, o composto terapêutico é infundido durante um período de cerca de 30 min. Deve-se notar que os valores de dosagem podem variar de acordo com o tipo e a gravidade da condição a ser aliviada. Deve ser adicionalmente entendido que para qualquer sujeito particular, os regimes de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo de acordo com a necessidade individual e o julgamento profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições, e que os intervalos de dosagem apresentados neste documento são apenas exemplificativos e não se destinam a limitar o escopo ou prática da composição reivindicada.

[0328] As composições farmacêuticas podem incluir uma quantidade terapeuticamente eficaz ou uma quantidade profilaticamente eficaz de uma molécula terapêutica. Uma quantidade terapeuticamente eficaz se refere a uma quantidade eficaz, em doses e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado terapêutico desejado. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma molécula

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 185/267

168/248 terapêutica pode variar de acordo com fatores, tais como o estado de doença, idade, sexo e peso do indivíduo e a capacidade do composto terapêuticos em provocar uma resposta desejada no indivíduo. Uma quantidade terapeuticamente eficaz também é uma na qual quaisquer efeitos tóxicos ou prejudiciais de uma molécula terapêutica t são compensados pelos efeitos terapeuticamente benéficos. Uma dosagem terapeuticamente eficaz inibe preferencialmente um parâmetro mensurável, por exemplo, ataque imunológico pelo menos cerca de 20%, mais preferencialmente por pelo menos cerca de 40%, ainda mais preferencialmente por pelo menos cerca de 60% e ainda mais preferencialmente por pelo menos cerca de 80% em relação a sujeitos não tratados. A capacidade de um composto de inibir um parâmetro mensurável, por exemplo, ataque imunológico, pode ser avaliada em um sistema de modelo animal preditivo de eficácia na rejeição de transplantes ou distúrbios autoimunes. Alternativamente, esta propriedade de uma composição pode ser avaliada examinando a capacidade do composto de inibir, tal inibição in vitro por ensaios conhecidos pelos versados na técnica.

[0329] Uma quantidade profilaticamente eficaz refere-se a uma quantidade eficaz, em doses e por períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Normalmente, uma vez que uma dose profilática é

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 186/267

169/248 usada em sujeitos antes da ou em uma fase inicial da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.

[0330] Também dentro do escopo das modalidades está um kit compreendendo um composto terapêutico descrito neste documento. O kit pode incluir um ou mais outros elementos incluindo: instruções de uso; outros reagentes, por exemplo, um marcador, um agente terapêutico ou um agente útil para quelação, ou outra forma de acoplamento, de uma molécula terapêutica para um marcador ou outro agente terapêutico ou uma composição radioprotetora; dispositivos ou outros materiais para preparar a molécula terapêutica para administração; veículos farmaceuticamente aceitáveis; e dispositivos, ou outros materiais para a administração a um suj eito.

[0331] Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas neste documento também incluem, mas não estão limitadas a:

1. Composto terapêutico compreendendo:

i) uma porção de alvejamento específica selecionada de: a) uma porção de alvejamento específica do doador que, por exemplo, se liga, preferencialmente, a um alvo doador; ou

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 187/267

170/248

b) uma porção de alvejamento específica do tecido que, por exemplo, se liga, preferencialmente, ao tecido alvo de um sujeito; e ii) uma fração de ligação/modulação efetora selecionada de:

(a) uma fração de ligação/modulação da molécula inibidora de célula imune (fração de ligação/modulação de ICIM);

(b) uma fração de ligação/modulação de célula imune imunossupressora (fração de ligação/modulação de IIC); ou (c) uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, fornecendo, na proximidade do alvo, uma substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo (fração de ligação/modulação de SM).

2. O composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora diretamente se liga e ativa um receptor inibidor.

3. O composto terapêutico da modalidade 2, em que a fração de ligação/modulação efetora é uma molécula inibidora do checkpoint imunológico.

4. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-3, em que a fração de ligação/modulação efetora

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 188/267

171/248 é expressa por uma célula imune.

5. 0 composto terapêutico da modalidade 4, em que a célula imune contribui para uma resposta imune indesejada.

6. 0 composto terapêutico da modalidade 4 ou 5, em que a célula imune causa uma patologia da doença.

7. 0 composto terapêuticoda modalidade 1, em que a capacidade da molécula terapêutica para agonizar a molécula à qual ligação/modulação efetora se liga é maior, por exemplo, 2, 5, 10, 100, 500 ou 1000 vezes maior, quando o composto terapêutico está ligado a um alvo por meio da porção de alvejamento do que quando o composto terapêutico não está ligado ao alvo por meio da porção de alvejamento.

8. O composto terapêutico das modalidades 1-7, em que quando se liga como um monômero (ou ligando quando o composto terapêutico não é multimerizado), a seu ligante cognato, por exemplo, uma molécula inibidora de checkpoint imunológico, não agoniza ou agoniza substancialmente, o ligante cognato.

9. O composto terapêutico das modalidades 1-8, em que, em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico, existe uma agonização sistêmica significativa da molécula à qual a fração de ligação/modulação efetora se liga.

10. O composto terapêutico das modalidades 1-9, em que, em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico, a agonização da molécula à qual a fração de ligação/modulação

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 189/267

172/248 efetora se liga ocorre substancialmente apenas em um sítio alvo ao qual a porção de alvejamento se liga.

11. 0 composto terapêutico das modalidades 1-9, em que a ligação do composto terapêutico ao seu ligante cognato, por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico, não inibe, ou não inibe substancialmente, a ligação de um contra-ligante endógeno ao ligante cognato, por exemplo, uma molécula inibidora do checkpoint imunológico.

12. 0 composto terapêutico das modalidades 1-11, em que a ligação da fração de ligação/modulação efetora ao seu ligante cognato, inibe a ligação de um contra-ligante endógeno ao ligante cognato da fração de ligação/modulação efetora em menos de 60, 50, 40, 30, 20, 10 ou 5%.

14. O composto terapêutico das modalidades 1-11, em que a ligação da fração de ligação/modulação efetora ao ligante cognato, resulta substancialmente em nenhum antagonismo do ligante cognato da molécula de ligação/modulação efetora.

15. O composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM.

16. O composto terapêutico da modalidade 15, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo uma molécula de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 190/267

173/248 ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico.

17. 0 composto terapêutico da modalidade 16, em que a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora compreende uma molécula PD-L1.

18. 0 composto terapêutico da modalidade 15, em que a

ICIM é onde a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora se engata uma molécula inibidora do checkpoint imunológico selecionada de PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4.

19. 0 composto terapêutico da modalidade 18, em que o ICIM é um anticorpo.

20. O composto terapêutico da modalidade 18, em que o ICIM compreende um anticorpo que se liga a PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4.

21. O composto terapêutico da modalidade 20, em que o anticorpo é um anticorpo que se liga a PD-1.

22. O composto terapêutico da modalidade 20, em que o anticorpo é um anticorpo que se liga a PD-1 e é um agonista de PD-1.

23. O composto terapêutico da modalidade 20, em que o anticorpo é um anticorpo que se liga a PD-1 e é um agonista de PD-1 quando fixado em um sitio de ligação.

24. O composto terapêutico da modalidade 16, em que a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 191/267

174/248 compreende uma molécula de HLA-G.

25. 0 composto terapêutico da modalidade 15, em que a ICIM é onde a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora se engata a uma molécula inibidora do checkpoint imunológico selecionada de PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4.

26. 0 composto terapêutico da modalidade 15, em que a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora se engata a uma molécula cognata inibidora do checkpoint imunológico selecionada da Tabela 1.

27. 0 composto terapêutico da modalidade 15, em que quando se liga como um monômero, à sua molécula inibidora cognata do checkpoint imunológico, não agoniza ou agoniza substancialmente a molécula inibidora do checkpoint imunológico.

28. 0 composto terapêutico da modalidade 15, em que o contra-ligante da molécula imune inibidora tem pelo menos 60, 70, 80, 90, 95, 99 ou 100% de homologia com um ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico de ocorrência natural.

29. O composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de ICIM, que compreende uma molécula de anticorpo funcional para uma molécula inibidora de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 192/267

175/248 superfície celular.

30. O composto terapêutico da modalidade 1, em que a molécula inibidora de superfície celular é uma molécula inibidora do checkpoint imunológico.

31. O composto da modalidade 30, em que a_molécula inibidora do checkpoint imunológico é selecionada de PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB2, CTLA-4 ou selecionada da Tabela 1.

32. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-31, em que o nível de supressão imunológica sistêmica em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico é menor que aquela a dada pelo padrão de atendimento com um imunossupressor sistêmico (se relevante), ou é menor do que aquela dada por uma quantidade equimolar de molécula de ligação/modulação efetora livre (não como um componente de um composto terapêutico).

33. O composto terapêutico das modalidades 1-32, em que o nível de ativação imunológica sistêmica, por exemplo, em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico, é inferior àquele dado por uma quantidade equimolar de molécula de ligação/modulação efetora livre (não como um componente de um composto terapêutico).

34. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-33, compreendendo adicionalmente uma segunda fração de ligação/modulação efetora.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 193/267

176/248

35. o composto terapêutico da modalidade 34, em que a segunda fração de ligação/modulação efetora se liga a um alvo diferente do que a fração de ligação/modulação efetora.

36. 0 composto terapêutico das modalidades 34 ou 35, em que a segunda fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de IIC.

composto terapêutico das modalidades 34 ou 35, em que a segunda fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de SM.

37. 0 composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de IIC.

38. 0 composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de IIC que aumenta, recruta ou acumula uma célula imune imunossupressora no sitio alvo.

39. 0 composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende um aglutinante molecular de superfície celular que se liga ou especificamente se liga a uma molécula de superfície celular em uma célula imune imunossupressora.

40. O composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma molécula do ligante da molécula de superfície celular que se liga ou

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 194/267

177/248 especificamente se liga a uma molécula de superfície celular em uma célula imune imunossupressora.

41. 0 composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma molécula de anticorpo que se liga a uma molécula de superfície celular em uma célula imune imunossupressora.

42. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 38-41, em que a célula imune imunossupressora compreende uma célula T reguladora, tal como uma célula reguladora Foxp3+CD25+T.

43. 0 composto terapêutico das modalidades 1-42, em que a fração de ligação/modulação efetora se liga a GARP e, por exemplo, compreende uma molécula de anticorpo que se liga a GARP em células imunossupressoras que expressam GARP, por exemplo, Tregs.

44. 0 composto terapêutico da modalidade 1, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende uma fração de ligação/modulação de SM.

45. 0 composto terapêutico da modalidade 44, em que a fração de ligação/modulação de SM promove um microambiente local imunossupressor.

46. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44 e 45, em que a fração de ligação da molécula efetora aumenta a disponibilidade, por exemplo, aumentando

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 195/267

178/248 a concentração ou quantidade local, de uma substância que inibe a função da célula imune, por exemplo, uma substância que inibe a ativação de um célula imune ou a função de uma célula imune ativada.

47. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-46, em que a fração de ligação da molécula efetora se liga e acumula uma substância solúvel, por exemplo, uma substância endógena ou exógena, tendo função imunossupressora.

48. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-47, em que a fração de ligação da molécula efetora diminui a disponibilidade, por exemplo, diminuindo a concentração ou quantidade local, ou sequestro de uma substância que promove a função da célula imune, por exemplo, uma substância que promove a ativação de um célula imune ou a função de uma célula imune ativada.

49. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-48, em que a fração de ligação/modulação de SM promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, fornecendo na proximidade do alvo, uma substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo.

50. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-49, em que a fração de ligação/modulação de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 196/267

179/248

SM compreende uma molécula que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imunológico do alvo.

51. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-50, em que a fração de ligação/modulação de SM liga-se e/ou acumula uma substância solúvel, por exemplo, uma substância endógena ou exógena com função imunossupressora.

52. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-51, em que a fração de ligação/modulação de SM se liga e/ou inibe, sequestra, degrada ou neutraliza de outro modo uma substância, por exemplo, uma substância solúvel, tipicamente e substância solúvel endógena, que promove o ataque imunológico.

53. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-52, em que a fração de ligação da molécula efetora diminui a disponibilidade de ATP ou AMP.

54. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-53, em que a fração de ligação/modulação de SM se liga, ou compreende, uma substância, por exemplo, CD39 ou CD73, que esgota um componente que promove a função da célula efetora imune, por exemplo, ATP ou AMP.

55. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação/modulação de SM compreende uma molécula CD39.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 197/267

180/248

56. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação/modulação de SM compreende uma molécula CD73.

57. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação/modulação de SM compreende uma molécula anti-CD39.

58. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação/modulação de SM compreende uma molécula de anticorpo anti-CD73.

59. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação da molécula efetora compreende uma substância imunossupressora, por exemplo, um fragmento de uma proteína imunossupressora.

60. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 44-54, em que a fração de ligação/modulação de SM compreende molécula de fosfatase alcalina.

61. O composto terapêutico de modalidade 1, em que o composto tem a fórmula do terminal N até o terminal C:

Rl---Região do Ligante Peptidico A—R2 ou R3—Região do

Ligante Peptidico B—R4, em que,

Rl, R2, R3 e R4, cada um independentemente compreende uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 198/267

181/248 ligação/modulação de IIC ou uma fração de ligação/modulação de SM; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente; desde que uma fração de ligação/modulação efetora e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.

62. 0 composto terapêutico de modalidade 61, em que cada uma da Região do Ligante Peptídico A e da Região do Ligante Peptídico B compreende uma região Fc.

63. 0 composto terapêutico de modalidade 61, em que um de RI e R2 é anticorpo anti-PD-1 e um de RI e R2 é um anticorpo anti-MAdCAM.

64 .	0 composto	terapêutico	de modalidade 61, em	que um
de RI é MAdCAM.	anticorpo	anti-PD-1 e	um R2 é um anticorpo	anti-
65.	0 composto	terapêutico	de modalidade 61, em	que um
de RI é PD-1.	anticorpo anti-MAdCAM e	um R2 é um anticorpo	anti-
66.	0 composto	terapêutico	de modalidade 61, em	que um
de R3 e	R4 é anti	corpo anti-PD-1 e um de R3 e R4	é um

anticorpo anti-MAdCAM.

67. 0 composto	terapêutico	de	modalidade	61, em que um
de R3 é anticorpo MAdCAM.	anti-PD-1 e	um	R4 é um anticorpo anti-
68. 0 composto	terapêutico	de	modalidade	61, em que um

de R3 é anticorpo anti-MAdCAM e um R4 é um anticorpo antiPetição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 199/267

182/248

PD-1 .

69. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 61-68, em que o ligante peptídico está ausente.

70. O composto terapêutico de qualquer das modalidades 61-68, em que o ligante peptídico é uma região Fc.

71. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 61-68, em que o ligante peptídico é um ligante peptídico de glicina/serina, como 1, 2, 3, 4 ou 5 repetições de GGGGS (SEQ ID NO:6).

72. O composto terapêutico de qualquer das modalidades 61-68, em que o ligante peptídico compreende uma região Fc e um ligante peptídico de glicina/serina, como 1, 2, 3, 4 ou 5 repetições de GGGGS (SEQ ID NO:6).

73. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 61-72, em que o anticorpo PD-1 é um agonista PD1.

74. O composto terapêutico de modalidade 61, em que:

RI e R3 compreendem, independentemente, uma molécula do anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1); e R2 e R4 compreendem, independentemente, porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno de tecido.

75. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 73 e 74, em que:

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 200/267

183/248

RI e R3 compreendem, independentemente, porções de alvejamento especificas, por exemplo, um anticorpo antiantigeno tecidual; e R2 e R4 compreendem, independentemente, uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1) .

76. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 73 e 74, em que:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem cada um independentemente: uma fração de ligação/modulação de SM que modula, por exemplo, liga e inibe, sequestra, degrada ou, de outro modo, neutraliza uma substância, por exemplo, uma molécula solúvel que modula uma resposta imune, por exemplo, ATP ou AMP, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73; uma porção de alvejamento especifica; ou está ausente;

desde que uma fração de ligação/modulação de SM e uma porção de alvejamento especifica estejam presentes.

77. 0 composto terapêutico de modalidade 61, em que:

Rl e R3 compreendem independentemente uma molécula CD39 ou uma molécula CD73; e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento especificas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno do tecido.

78. 0 composto terapêutico de modalidade 77, em que:

Rl e R3 compreende, cada um, uma molécula CD39; e

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 201/267

184/248

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento especificas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antigeno do tecido.

79. 0 composto terapêutico de modalidades 61 ou 77, em que:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula CD73; e

80. O composto terapêutico de modalidade 61, em que:

81. O composto terapêutico de modalidade 61, em que:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem cada um independentemente: uma molécula HLA-G; uma porção de alvejamento especifica; ou está ausente;

desde que uma molécula HLA-G e uma porção de alvejamento especifica estejam presentes.

82. O composto terapêutico de modalidades 61 ou 81, em que:

Rl e R3 compreendem, cada um, uma molécula HLG-A; e

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 202/267

185/248

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antigeno do tecido.

Em algumas modalidades, o Ligante Peptidico A e o Ligante Peptidico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

83. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81 e 82, em que:

Rl e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-LILRBl agonista; e

84. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81 e 82, em que:

Rl e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-KIR2DL4 agonista; e

R2 e R4 compreendem independentemente porções de alvejamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 203/267

186/248 contra um antígeno do tecido.

Em algumas modalidades, o Ligante Peptídico A e o Ligante Peptídico B compreendem frações Fc (por exemplo, frações Fc de autopareamento ou frações Fc que não se autopaream ou não se autopaream substancialmente).

85. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

86. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

RI e R3 compreendem, cada um, uma molécula de anticorpo anti-NKG2A agonista; e

87. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

um de RI e R3 compreende uma primeira fração escolhida de, e a outra compreende uma fração diferente escolhida de: uma molécula de anticorpo antagonista anti-LILRBl, uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 204/267

187/248 molécula de anticorpo agonista anti-KR2DL4 e uma molécula de anticorpo agonista anti-NKG2A; e

88. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

um de RI e R3 compreende uma molécula de anticorpo antiLILRB1 antagonista e o outro compreende uma molécula de anticorpo agonista anti-KR2DL4; e

89. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

um de RI e R3 compreende uma molécula de anticorpo antiLILRB1 antagonista e o outro compreende uma molécula de anticorpo anti-NKG2A agonista; e

90. O composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma molécula de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 205/267

188/248 anticorpo anti-BCR, por exemplo, uma molécula de anticorpo antagonista anti-BCR, um compreende uma molécula de anticorpo anti FCRL e um compreende porção de alvejamento específica.

91. 0 composto terapêutico da modalidade 90, em que:

a molécula anti-FCRL compreende: uma molécula de anticorpo anti-FCRL, por exemplo, uma molécula de anticorpo anti-FCRL agonista, direcionada para FCRL1, FCRL2, FCRL3, FCRL4, FCRL5 ou FCRL6.

92. O composto terapêutico de qualquer das modalidades 81-84, em que:

Rl, R2, R3 e R4 compreendem, cada um, independentemente:

i) uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM, que minimiza ou inibe a atividade, expansão ou função de células T (uma fração de ligação/modulação efetora de células T);

ii) uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC, ou uma fração de ligação/modulação de SM, que minimiza ou inibe a atividade, expansão ou função de células B (uma fração de ligação/modulação efetora de células B);

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 206/267

189/248 iii) uma porção de alvejamento específica; ou

iv) está	ausente;	desde que, uma	fração	de
ligação/modulação	efetora	de células T, uma	fração	de
ligação/modulação	efetora	de células B e uma	porção	de

alvejamento específico estejam presentes.

93. 0 composto terapêutico da modalidade 92, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD1 agonista e um compreende uma molécula HLA-G.

94. As modalidades do composto terapêutico 92-93, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma fração de ligação/modulação de SM, por exemplo, uma molécula CD39 ou uma molécula CD73.

95. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 92-94, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende uma entidade que liga, ativa ou mantém, uma célula imune reguladora, por exemplo, uma célula Treg ou uma célula Breg.

96. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 92-95, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD1 agonista ou um compreende uma molécula HLA-G.

97. 0 composto terapêutico da modalidade 96, em que:

um de Rl, R2, R3 e R4 compreende um anticorpo anti-PD

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 207/267

190/248 agonista, um compreende uma molécula HLA-G e um compreende molécula CD39 ou uma molécula CD73.

98. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-97, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende um polipeptídeo.

99. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-98, em que a fração de ligação/modulação efetora compreende um polipeptídeo que tem pelo menos 5, 10, 20, 30, 40, 50, 150, 200 ou 250 resíduos de aminoácidos.

100. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-99, em que a fração de ligação/modulação efetora tem um peso molecular de 5, 10, 15, 20 ou 40 Kd.

101. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-100, em que a fração de ligação/modulação efetora não compreende um inibidor da expressão de apolipoproteína GUI, proteína quinase A, Src quinase ou integrina Betai.

102. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-100, em que a fração de ligação/modulação efetora não compreende um inibidor da atividade de apolipoproteína GUI, proteína quinase A, Src quinase ou integrina Betai.

103. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente um tecido selecionado de pulmão, pele, pâncreas, retina, próstata, ovário, linfonodo, glândula

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 208/267

191/248 adrenal, fígado ou tecido intestinal.

104. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente células tubulares, por exemplo, células epiteliais tubulares proximais.

105. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente TIE-2, APN, TEM4, TEM6, ICAM-1, receptor de nucleolina P2Z, Trk-A, FLJ10849, HSPA12B, APP ou OX-45.

106. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente uma proteína expressa no sentido luminal.

107. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o alvo doador não compreende um alvo específico para o coração.

108. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido pulmonar.

109. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido renal.

110. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico tecido pulmonar e pancreático.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 209/267

192/248

111. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido intestinal.

112. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido prostático.

113. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido cerebral.

114. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o o composto terapêutico não tem como alvo específico CD71.

115. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico CD90.

116. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico MAdCAM.

117. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico albumina.

118. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico anidrase carbônica IV.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 210/267

193/248

119. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico ZG16-p.

120. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico dipeptidil peptidase IV.

121. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico a superfície luminal de uma membrana celular endotelial vascular.

121. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não tem como alvo específico o tecido cardíaco.

122. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente um tumor, tumor sólido ou o vascular de um tumor sólido.

123. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente o tecido epitelial.

124. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente o tecido epidérmico.

125. O composto terapêutico de qualquer uma das

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 211/267

194/248 modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente a membrana de embasamento.

126. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente um poliepeptídeo Dsg.

127. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente Dsgl.

128. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente Dsg3.

129. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente BP180.

130. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não visa especificamente desmogleína.

131. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um modulador de complemento, por exemplo, um inibidor de complemento, tal como, mas não limitado a, aqueles descritos na Patente U.S. N° 8,454,963, que é incorporada neste documento por referência na sua totalidade.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 212/267

195/248

133. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um agente de imagiologia.

134. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um agente de imagem selecionado do grupo de: um agente radioativo, um radioisótopo, um radiofármaco, um agente de contraste, uma nanoparticula; uma enzima, um grupo protético, um material fluorescente, um material luminescente e um material bioluminescente, tal como, mas não limitado a, aqueles descritos na Patente U.S. N° 8,815,235, que é incorporada neste documento por referência na sua totalidade.

135. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um radionuclideo, tal como, mas não limitado a, aqueles descritos na Patente U.S. N° 6,232,287, que é incorporada neste documento por referência na sua totalidade.

136. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, que não é internalizado por uma célula doadora à qual se liga.

137. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não entra

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 213/267

196/248 na célula que é alvejada pela porção de alvejamento específica.

138. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não mata a célula que é alvejada pela porção de alvejamento específica.

139. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não entra na célula à qual a fração de ligação/modulação efetora se liga.

140. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não mata a célula à qual a fração de ligação/modulação efetora se liga.

141. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um peptídeo ou polipeptideo autoantigênico.

142. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende um peptídeo ou polipeptideo autoantigênico, por exemplo, não compreende um peptídeo ou polipeptideo contra o qual o sujeito tem autoanticorpos.

143. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 214/267

197/248 compreende uma molécula de anticorpo derivada de um mamífero, por exemplo, um humano, tendo um distúrbio autoimune.

144. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende uma molécula de anticorpo derivada de um mamífero, por exemplo, um humano, com PV mucocutâneo agudo.

145. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende uma molécula de anticorpo derivada de um mamífero, por exemplo, um humano, com Doença de Goodpasture.

146. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-101, em que o composto terapêutico não compreende uma molécula de anticorpo derivada de um mamífero, por exemplo, um humano, com pemphigus vulgaris.

141. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-146, compreendendo uma porção de alvejamento específica de doador.

142. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141, que se localiza preferencialmente a um tecido de doador implantado, em oposição ao tecido de um recipiente.

143. 0 composto terapêutico das modalidades 141-142, em que a porção de alvejamento específica de doador fornece um privilégio imunológico sítio-específico para um tecido de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 215/267

198/248 transplante, por exemplo, um órgão, de um doador.

144. 0 composto terapêutico das modalidades 141-143, em que a porção de alvejamento específica de doador se liga a um produto, por exemplo, um polipeptídeo, de um alelo presente em um locus no doador, cujo alelo não está presente no locus no recipiente.

145. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-144, em que a porção de alvejamento específica de doador se liga preferencialmente a um alelo de um gene expresso no tecido de doador, por exemplo, um tecido de transplante, por exemplo, um órgão, em comparação com um alelo do gene expresso no tecido do sujeito.

146. 0 composto terapêutico das modalidades 141-145, em que a porção de alvejamento específica de doador tem uma afinidade de ligação a um alelo de um gene expresso no tecido de doador, por exemplo, um tecido de transplante, por exemplo, um órgão, que é pelo menos 2, 4, 5, 10, 50, 100, 500, 1.000, 5.000 ou 10.000 vezes maior que sua afinidade para um alelo do gene expresso no tecido do sujeito.

147. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-146, em que a porção de alvejamento específica de doador se liga ao produto, por exemplo, um polipeptídeo, de um alelo presente em um locus no doador, cujo alelo não está presente no locus no recipiente.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 216/267

199/248

148. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-147, em que a ligação é suficientemente específica que, por exemplo, em uma dose clinicamente eficaz do composto terapêutico, ocorre supressão imunológica sistêmica indesejada, substancial ou clinicamente inaceitável.

149. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-148, em que o composto terapêutico se acumula no sítio alvo, por exemplo, ligação da porção de alvejamento específica de doador para resultados na acumulação do 0 composto terapêutico no sítio alvo.

150. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-149, em que a porção de alvejamento específica de doador se liga a um produto de um alelo de um locus selecionado da Tabela 2, por exemplo, o locus HLA, por exemplo, o HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DP, HLA-DQ ou HLA-DR, cujo alelo está presente no doador, mas não no recipiente. Locus de HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-DP, HLA-DQ ou HLA-DR.

151. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-150, em que a porção de alvejamento específica de doador se liga a um alelo de HLA A, um alelo de HLA-B, um alelo de HLA-C, um alelo de HLA-DP, um alelo de HLA-, ou um alelo de HLA-.

152. O composto terapêutico de qualquer uma das

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 217/267

200/248 modalidades 141-151, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito que tem, terá, ou necessita de, um transplante.

153. 0 composto terapêutico da modalidade 152, em que o transplante compreende todo ou parte de um órgão, por exemplo, um fígado, rim, coração, pâncreas, timo, pele ou pulmão.

154. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-153, em que a porção de alvejamento específica de doador compreende uma molécula de anticorpo.

155. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 141-153, em que a porção de alvejamento específica de doador compreende um polipeptídeo de ligação específico ao alvo, ou uma molécula de ligação ao ligante alvo.

156. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-155, compreendendo uma porção de alvejamento específica de tecido.

157. 0 composto terapêutico da modalidade 156, em que a porção de alvejamento específica para o tecido é uma molécula que se liga especificamente a MAdCAM.

158. 0 composto terapêutico da modalidade 156, em que a porção de alvejamento específica de tecido é um anticorpo que se liga especificamente ao MAdCAM.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 218/267

201/248

159. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-158, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou que está em risco ou risco elevado, de ter um distúrbio autoimune, por exemplo, um distúrbio autoimune descrito neste documento.

160. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-159, em que o composto terapêutico se acumula no sítio alvo, por exemplo, ligação da porção de alvejamento específica de tecido resulta na acumulação do composto terapêutico no sítio alvo.

161. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-160, em que o composto terapêutico que localiza, preferencialmente um tecido alvo, em oposição a outro tecido de um sujeito.

162. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-161, em que o composto terapêutico fornece privilégio imunológico específico do sítio para um tecido alvo de sujeito, por exemplo, um tecido alvo que sofre, ou corre risco, ou risco elevado, para ataque imunológico indesejado, por exemplo, em um distúrbio autoimune.

163. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-161, em que a porção de alvejamento específica do tecido, como um componente do composto terapêutico, liga preferencialmente um tecido alvo de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 219/267

202/248 sujeito sofrendo ataque imune indesejado, por exemplo, em um distúrbio autoimune.

164. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-163, em que uma porção de alvejamento específica do tecido se liga ao produto, por exemplo, um polipeptídeo, que não está presente fora do tecido alvo, ou está presente em níveis suficientemente baixos que, em concentrações terapêuticas da molécula terapêutica, níveis inaceitáveis de supressão imunológica estão ausentes ou substancialmente ausentes.

165. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-164, em que a porção de alvejamento específica do tecido se liga a um produto, ou sítio em um produto, que é mais abundante no tecido alvo do que no tecido não alvo.

166. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-165, em que o composto terapêutico se liga a um produto, ou a um sítio em um produto, que está presente ou é expresso substancialmente exclusivamente no tecido alvo.

167. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-166, em que o produto, ou sítio em um produto, ao qual a porção de alvejamento específica se liga, é suficientemente limitado ao tecido alvo, que em um nível

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 220/267

203/248 terapeuticamente eficaz de composto terapêutico, o sujeito não sofrerá um nivel inaceitável, por exemplo, um nivel clinicamente significativo, de imunossupressão sistêmica.

168. 0 composto terapêutico de qualquer das modalidades 156-167, em que o composto terapêutico, preferencialmente se liga a um tecido alvo ou antigeno de tecido alvo, por exemplo, tem uma afinidade de ligação para o tecido alvo ou antigeno que é maior para o antigeno ou tecido alvo, por exemplo, pelo menos 2, 4, 5, 10, 50, 100, 500, 1.000, 5.000 ou 10.000 vezes maior do que a sua afinidade para do que para tecido não-alvo ou antigeno presente fora do tecido alvo.

169. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-168, em que a porção de alvejamento especifica de tecido se liga a um produto, por exemplo, um produto polipeptidico, ou sitio em um produto, presente em um sitio pré-selecionado, por exemplo, um sitio de resposta imune indesejada em um distúrbio autoimune.

170. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-169, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter, diabetes tipo 1.

171. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-170, em que o tecido alvo compreende tecido

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 221/267

204/248 pancreático, por exemplo, ilhotas pancreáticas ou células beta pancreáticas, tecido intestinal (por exemplo, células endoteliais intestinais), tecido renal (por exemplo, células epiteliais renais) ou tecido hepático (por exemplo, células epiteliais hepáticas) .

172. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-171, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento liga um polipeptideo selecionado dentre os descritos neste documento, como os listados na Tabela 3, por exemplo, SEZ6L2, LRP11, DISP2, SLC30A8, FXYD2, TSPAN7 ou TMEM27.

173. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-168, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter, esclerose múltipla.

174. 0 composto terapêutico da modalidade 173, em que o tecido alvo compreende tecido do CNS, bainha de mielina ou bainha de mielina de oligodendrócitos.

175. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 173-174, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento se liga a um polipeptideo selecionado dentre os descritos neste documento e incluindo, mas não limitado a, Tabela 3, por exemplo, MOG, PLP ou MBP.

176. O composto terapêutico de qualquer uma das

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 222/267

205/248 modalidades 156-168, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter, cardiomiosite.

177. 0 composto terapêutico da modalidade 176, em que o tecido alvo compreende cardiomiócitos, monócitos, macrófagos ou células mieloides.

178. 0 composto terapêutico das modalidades 176-177, em que a fração de ligação/modulação efetora se liga ou a porção de alvejamento a um polipeptideo conforme descrito neste documento, incluindo, mas não limitada àquelas selecionadas da Tabela 3, por exemplo, SIRPA (CD172a).

179. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-168, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou em risco elevado, de ter doença de intestino inflamatória, hepatite autoimune (AIH); Colangite Esclerosante Primária (PSC); Esclerose Biliar Primária (PBC); ou transplante.

180. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-168, em que o sujeito tem, está em risco ou em risco elevado de ter doença de Crohn ou colite ulcerativa.

181. 0 composto terapêutico das modalidades 179 ou 180, em que o tecido alvo compreende células intestinais, como células epiteliais intestinais ou células hepáticas, como células epiteliais hepáticas.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 223/267

206/248

182. O composto terapêutico das modalidades 179-181, em que a fração de ligação/modulação efetora se liga a um polipeptídeo conforme descrito neste documento, incluindo, mas não limitado àqueles selecionados da Tabela 3, por exemplo, PD-1.

182. 0 composto terapêutico das modalidades 179-181, em que a porção de alvejamento se liga a um polipeptídeo conforme descrito neste documento, incluindo, mas não limitado a MAdCAM.

183. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-168, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter, artrite reumatoide.

184. 0 composto terapêutico da modalidade 183, em que o tecido alvo compreende cardiomiócitos, monócitos, macrófagos ou células mieloides.

185. 0 composto terapêutico das modalidades 183 ou 184, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento liga um polipeptídeo selecionado da Tabela 3, por exemplo, SIRPA (CD172a).

186. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 156-185, em que a porção de alvejamento específica de tecido compreende uma molécula de anticorpo.

187. O composto terapêutico de qualquer uma das

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 224/267

207/248

modalidades	156-185,	em que a	porção de	alvej amento
específica de	tecido compreende um	polipeptídeo	de ligação
específica ao	alvo, ou	uma molécul	a de ligação	ao ligante
alvo. 188. 0	composto	terapêutico	de qualque	r uma das

modalidades 156-185, em que a porção de alvejamento específica do tecido compreende um polipeptídeo de ligação específica ao alvo que se liga ao MAdCAM.

189. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-188, em que o composto terapêutico se liga a uma molécula de superfície celular de uma célula efetora imune, por exemplo, uma célula T, célula B, célula NK ou outra célula imune, a qual propaga uma resposta proimune.

190. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-189, em que o composto terapêutico reduz a

capacidade	de uma célula efetora	imune,	por exemplo,	uma
célula T,	célula B, célula NK ou	outra	célula imune,	de
propagar uma resposta pró-imune. 191. 0 composto terapêutico	de	qualquer uma	das

modalidades 1-190, em que a porção de alvejamento específica tem como alvo um alvo de mamífero, por exemplo, um polipeptídeo de mamífero, e a fração de ligação/modulação efetora liga/modula um componente imune de mamífero, por exemplo, uma célula imune humana, por exemplo, uma célula B

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 225/267

208/248 de mamífero, célula T ou macrófago.

192. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-192, em que a porção de alvejamento específica tem como alvo um alvo humano, por exemplo, um polipeptídeo humano, e a fração de ligação/modulação efetora liga/modula um componente imunológico humano, por exemplo, uma célula imune humana, por exemplo, uma célula B humana, célula T ou macrófago.

193. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-193, em que o composto terapêutico está configurado para uso em um humano.

194. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-191, em que o composto terapêutico está configurado para uso em um mamífero não humano.

195. O composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-194, em que o composto terapêutico, por exemplo, a fração de ligação/modulação efetora, compreende um agonista PD-1.

196. Método de tratamento de um sujeito com doença inflamatória intestinal, o método compreendendo administrar um composto terapêutico, de qualquer uma das modalidades 1195, ao sujeito, para tratar a doença inflamatória intestinal.

197. 0 método da modalidade 196, em que o sujeito com

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 226/267

209/248 doença inflamatória intestinal tem doença de Crohn.

198. 0 método da modalidade 196, em que o sujeito com doença inflamatória intestinal tem colite ulcerativa.

199. Um método de tratamento de um sujeito com hepatite autoimune, o método compreendendo administrar um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195, ao sujeito, para tratar a hepatite autoimune.

200. Um método de tratamento de colangite esclerosante primária, o método em que compreende administrar um um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195, ao sujeito, para tratar a colangite esclerosante primária.

201. Um método de tratamento de diabetes de tipo 1, o método compreendendo administrar um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195, tratando assim o sujeito para tratar a diabetes tipo 1.

202. Um método de tratamento de um sujeito transplantado, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195 ao sujeito, tratando, assim, um sujeito transplantado (receptor).

203. Um método de tratamento de GVHD em um sujeito tendo um tecido doador transplantado compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico, de qualquer uma das modalidades 1-195, ao

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 227/267

210/248 suj eito.

204. Um método da modalidade 203, em que o composto terapêutico é administrado ao sujeito: antes de receber o transplante; antes de desenvolver um sintoma de GVHD; após ou concomitantemente ao recebimento do transplante; ou depois ou concomitantemente ao desenvolvimento de um sintoma de GVHD.

205. Um método de tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter um distúrbio autoimune, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico de quaisquer modalidades 1-195, tratando, assim, o sujeito.

206. 0 método da modalidade 205, em que o sujeito recebeu, receberá, ou necessita de, tecido do doador de aloenxerto.

207. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-206, em que o tecido doador compreende um órgão sólido, por exemplo, um fígado, rim, coração, pâncreas, timo ou pulmão.

208. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-206, em que o tecido doador compreende todo ou parte de um órgão, por exemplo, um fígado, rim, coração, pâncreas, timo ou pulmão.

209. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-206, em que o tecido de doador compreende pele.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 228/267

211/248

210. O método de qualquer uma das modalidades 205-206, em que o tecido de doador não compreende pele.

211. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-210, em que o tecido de doador apresenta ou expressa um produto de um alelo de um locus, cujo alelo não está presente ou expesso no sujeito.

212. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-210, em que o tecido de doador apresenta ou expressa um produto de um alelo de um locus selecionado na Tabela 2, por exemplo, o locus HLA, por exemplo, o locus HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLADP, HLA-DQ ou HLA-DR, cujo alelo não está presente ou expresso no sujeito.

213. 0 método de qualquer uma das modalidades 205-212, compreendendo a introdução do tecido de transplante no suj eito.

214. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-213, compreendendo monitorar o sujeito para inativação de células imunes (por exemplo, para monitorar a agonização indesejada de uma molécula inibidora do checkpoint imunológico) em um sitio distante do sitio alvo, por exemplo, na circulação periférica ou no sistema linfático.

215. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-214, compreendendo monitorar o sujeito quanto à ativação de células imunes (por exemplo, monitorar antagonização

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 229/267

212/248 indesejada de uma molécula inibidora do checkpoint imunológico) em um local distante do sitio alvo, por exemplo, na circulação periférica ou no sistema linfático.

216. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-215, em que responsive ao resultado do monitoramento, selecionar um curso de tratamento para o sujeito, por exemplo, aumentando a dose do composto terapêutico, diminuindo a dose do composto terapêutico, continuando o tratamento com o composto terapêutico sem alteração da dose.

217. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-216, compreendendo a administração do composto das modalidades 1195, ao receptor.

218. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-216, em que a administração compreende administração sistêmica, por exemplo, ao sistema circulatório periférico.

219. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-216, em que a administração compreende administração local, por exemplo, no tecido alvo, no tecido de doador ou no sítio em que o tecido alvo ou o tecido de doador está ou estará localizado.

220. 0 método de qualquer uma das modalidades 219, compreendendo a administração do composto terapêutico ao receptor antes da introdução do tecido de doador no receptor.

221. 0 método de qualquer uma das modalidades 219,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 230/267

213/248 compreendendo a administração do composto terapêutico ao recipiente após introdução do tecido de doador no receptor.

222. 0 método de qualquer uma das modalidades 213, compreendendo a administração do composto terapêutico ao receptor simultaneamente com a introdução do tecido de doador no receptor.

223. 0 método da modalidade 213, compreendendo colocar em contato o composto terapêutico com o tecido de doador antes da introdução do tecido de doador no receptor.

224. 0 método de qualquer uma das modalidades 213, compreendendo o fornecimento do composto terapêutico ao sujeito, em que o tecido transplantado foi colocado em contato com o composto terapêutico antes da introdução no suj eito.

225. 0 método de qualquer uma das modalidades 213, compreendendo colocar em contato o composto terapêutico com o tecido de doador após a introdução do tecido de doador no receptor, por exemplo, por administração local no tecido de doador.

226. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-226, compreendendo a administração de um composto terapêutico conforme fornecido neste documento, de modo que os níveis terapêuticos estejam presentes por pelo menos 1, 5, 10, 14 ou 28 dias, por exemplo, dias consecutivos ou não

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 231/267

214/248 consecutivos .

227. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-226, em que o sujeito não recebe um agente imunossupressor não direcionado.

228. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-226, em que o sujeito não recebeu um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60 ou 90 dias antes da administração inicial do composto terapêutico.

229. 0 método de qualquer uma das modalidades 213, em que o sujeito não recebeu um agente imunossupressor não direcionado durante pelo menos 1, 15, 30, 60 ou 90 dias antes da introdução do tecido transplantado.

230. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-229, em que o sujeito não recebe um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias após a administração inicial do composto terapêutico.

231. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-229, em que o sujeito não recebe um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias após a introdução do tecido transplantado.

232. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-231, compreendendo a administração de um agente imunossupressor não direcionado ao sujeito.

233. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-232,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 232/267

215/248 em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60 ou 90 dias antes da administração inicial do composto terapêutico.

234. O método da modalidade 213, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado durante pelo menos 1, 15, 30, 60 ou 90 dias antes da introdução do tecido transplantado.

235. O método da modalidade 234, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias após a administração inicial do composto terapêutico.

236. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-235, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado por pelo menos 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias após a introdução do tecido transplantado.

237. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-235, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado antes da administração inicial do composto terapêutico, mas por não mais que 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias.

238. O método da modalidade 213, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado antes da introdução do tecido transplantado, porém por não mais do que 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 233/267

216/248

239. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-238, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado após a administração inicial do composto terapêutico, mas por não mais que 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias.

240. 0 método da modalidade 213, em que o sujeito recebe um agente imunossupressor não direcionado após a introdução do tecido transplantado, porém por não mais do que 1, 15, 30, 60, 90 ou 180 dias.

241. 0 método da modalidade 213, em que o sujeito é monitorado quanto à rejeição do tecido transplantado.

242. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-242, uma dosagem de um agente imunossupressor não direcionado é selecionada ou em que, responsiva ao monitoramento, uma dosagem de um agente imunossupressor não direcionado é selecionada.

243. 0 método da modalidade 242, em que a dosagem é administrada.

244. 0 método da modalidade 243, em que a dosagem selecionada é zero, isto é, um agente imunossupressor não direcionado não é administrado.

245. 0 método da modalidade 243, em que a dosagem selecionada é diferente de zero, isto é, é administrado um agente imunossupressor não direcionado.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 234/267

217/248

246. 0 método da modalidade 243, em que a dosagem é menor do que a que seria administrada na ausência de administração de um composto terapêutico.

247. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-246, em que o sujeito é um mamífero, por exemplo, um mamífero não humano.

248.0 método de qualquer uma das modalidades 196-246, em que o sujeito é um humano.

249.0 método da modalidade 213, em que o doador e o sujeito são incompatíveis em um locus de HLA, por exemplo, um locus maior ou menor.

250. 0 método da modalidade 249, em que o sujeito é um mamífero, por exemplo, um mamífero não humano.

251. 0 método da modalidade 249, em que o sujeito é um humano.

252.0 método de tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter um distúrbio autoimune, compreendendo administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195, tratando, assim, o sujeito.

253. 0 método da modalidade 252, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes do início, ou antes da identificação do início, dos sintomas do distúrbio autoimune.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 235/267

218/248

254. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-253, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após o início, ou após a identificação do início, dos sintomas do distúrbio autoimune.

255. 0 método das modalidades 252-254, em que o distúrbio autoimune compreende diabetes tipo 1.

256. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 252-255, em que o tecido alvo compreende ilhotas pancreáticas ou células beta pancreáticas, tecido intestinal (por exemplo, células endoteliais intestinais), tecido renal (por exemplo, células epiteliais renais) ou tecido hepático (por exemplo, células epiteliais do fígado).

257. 0 composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 252-256, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento se liga a um polipeptídeo selecionado da Tabela 3, por exemplo, MAdCAM, SEZ6L2, LRP11, DISP2, SLC30A8, FXYD2, TSPAN7 ou polipeptídeo TMEM27.

258. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-257, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciada antes do início, ou antes da identificação do início, de sintomas de diabetes tipo 1.

259. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-258, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes, ou antes da identificação do sujeito tendo uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 236/267

219/248 característica ou sintoma pré-selecionado.

260. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-259, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após o início, ou após a identificação do início, dos sintomas de diabetes tipo 1.

261. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-260, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após, ou após a identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

262. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-261, em que o composto terapêutico é um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195.

263. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-257, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter, esclerose múltipla.

264. 0 método da modalidade 263, em que o tecido alvo compreende tecido do CNS, bainha de mielina ou bainha de mielina de oligodendrócitos.

65. 0 método de qualquer uma das modalidades 2 63 ou 264, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento se liga a um polipeptideo selecionado da Tabela 3, por exemplo, um polipeptideo MOG, PLP, ou MBP.

266. 0 método de qualquer uma das modalidades 263-265,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 237/267

220/248 em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes do início, ou antes da identificação do início, de sintomas de esclerose múltipla.

267. 0 método de qualquer uma das modalidades 263-265, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes, ou antes da identificação do sujeito uma característica ou sintoma pré-selecionado.

268. 0 método de qualquer uma das modalidades 263-265, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após o início, ou após a identificação do início, de sintomas de esclerose múltipla.

269. 0 método de qualquer uma das modalidades 263-265, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após, ou após a identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

270. 0 método de qualquer uma das modalidades 263-269, em que o composto terapêutico é um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195.

271. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-257, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter cardiomiosite.

272. 0 método da modalidade 271, em que o tecido alvo compreende cardiomiócitos, monócitos, macrófagos ou células

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 238/267

221/248 mieloides.

273. 0 método das modalidades 271 ou 272, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento liga um polipeptideo selecionado da Tabela 3, por exemplo, um polipeptideo SIRPA (CD172a).

274. 0 método de qualquer uma das modalidades 271-273, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes do início, ou antes da identificação do início, de sintomas de cardiomiosite.

275. 0 método de qualquer uma das modalidades 271-273, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes, ou antes da identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

276. 0 método de qualquer uma das modalidades 271-273, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após o início, ou após a identificação do início, dos sintomas de cardiomiosite.

277. 0 método de qualquer uma das modalidades 271-273, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após, ou após a identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

278. 0 método de qualquer uma das modalidades 271-277, em que o composto terapêutico é um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 239/267

222/248

279. 0 método de qualquer uma das modalidades 252-257, em que o composto terapêutico é adequado para o tratamento de um sujeito tendo, ou em risco, ou risco elevado, de ter artrite reumatoide.

280. 0 método da modalidade 279, em que o tecido alvo compreende cardiomiócitos, monócitos, macrófagos ou células mieloides.

281. 0 método das modalidades 279 ou 280, em que a fração de ligação/modulação efetora ou porção de alvejamento liga um polipeptídeo selecionado da Tabela 3, por exemplo, um polipeptídeo SIRPA (CD172a).

282. O método das modalidades 279-281, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes do início, ou antes da identificação do início, de sintomas de artrite reumatoide.

283. O método das modalidades 279-281, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado antes, ou antes da identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

284. O método das modalidades 279-281, em que o fornecimento do composto terapêutico é iniciado após o início, ou após a identificação do início, de sintomas de artrite reumatoide.

285. O método das modalidades 279-281, em que o

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 240/267

223/248 fornecimento do composto terapêutico é iniciado após, ou após a identificação do sujeito tendo uma característica ou sintoma pré-selecionado.

286. 0 método das modalidades 279-285, em que o composto terapêutico é um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195.

287. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-286, compreendendo monitorar o sujeito para inativação de células imunes (por exemplo, monitorar a agonização indesejada de uma molécula inibidora do checkpoint imunológico) em um sítio distante do sítio alvo, por exemplo, na circulação periférica ou no sistema linfático.

288. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-287, compreendendo monitorar o sujeito quanto à ativação de células imunes (por exemplo, monitorar antagonização indesejada de uma molécula inibidora do checkpoint imunológico) em um sítio distante do sítio alvo, por exemplo, na circulação periférica ou no sistema linfático.

289. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-288, em que responsive ao resultado do monitoramento, selecionar um curso de tratamento para o sujeito, por exemplo, aumentando a dose do composto terapêutico, diminuindo a dose do composto terapêutico, continuando o tratamento com o composto terapêutico sem alteração da dose.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 241/267

224/248

290. O método de qualquer uma das modalidades 196-289, em que o sujeito monitorado quanto a ataque autoimune do tecido alvo.

291. 0 método da modalidade 290, em que responsive ao monitoramento, uma dosagem do composto terapêutico é selecionada.

292. 0 método da modalidade 291, em que a dosagem é administrada.

293. 0	método da modalidade	290,	em	que a	dosagem
selecionada terapêutico	é zero, isto é, a administração do é cessada.	composto
294. 0 selecionada	método da modalidade é diferente de zero.	290,	em	que a	dosagem
295. 0 selecionada	método da modalidade é uma dosagem aumentada	290,	em	que a	dosagem
2 9 6. 0 selecionada	método da modalidade é uma dosagem reduzida.	290,	em	que a	dosagem
297. 0	método de qualquer uma	das modalidades	196-296,

em que a administração compreende administração sistêmica, por exemplo, ao sistema circulatório periférico.

298. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-297, em que a administração compreende administração local, por exemplo, ao tecido alvo.

299. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-298,

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 242/267

225/248 compreendendo a administração de um composto terapêutico fornecido neste documento, de modo que os níveis terapêuticos estejam presentes por pelo menos 1, 5, 10, 14 ou 28 dias, por exemplo, consecutivos ou não consecutivos.

300. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-299, em que o sujeito é um mamífero, por exemplo, um mamífero não humano.

301. 0 método de qualquer uma das modalidades 196-299, em que o sujeito é um humano.

302. Uma molécula de ácido nucleico ou uma pluralidade de moléculas de ácido nucleico que codificam um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195.

303. Um vetor ou uma pluralidade de vetores compreendendo as moléculas de ácido nucleico da modalidade 302 .

304. Uma célula compreendendo as moléculas de ácido nucleico da modalidade 302 ou o vetor da modalidade 303.

305. Um método de fabricação de um composto terapêutico compreendendo cultivar uma célula da modalidade 304 para fabricar o composto terapêutico.

306. Um método de fabricação de uma sequência de ácido nucleico que codifica um composto terapêutico de qualquer uma das modalidades 1-195, compreendendo

a) fornecer um vetor que compreende uma sequência que

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 243/267

226/248 codifica uma porção de alvejamento e que insere no vetor sequência que codifica uma fração de ligação/modulação efetora para formar a sequência que codifica um composto terapêutico; ou

b) fornecer um vetor que compreende uma sequência que codifica uma fração de ligação/modulação efetora e que insere no vetor sequência que codifica uma porção de alvejamento para formar uma sequência que codifica um composto terapêutico, produzindo, assim, uma sequência que codifica um composto terapêutico.

307. 0 método da modalidade 306, em que a porção de alvejamento é selecionada em resposta à necessidade de um suj eito.

308. Um método da modalidade 306 ou 307, em que a fração de ligação/modulação efetora é selecionada em resposta à necessidade de um sujeito.

309. Um método de qualquer uma das modalidades 306 ou 307, compreendendo adicionalmente expressar a sequência que codifica o composto terapêutico para produzir o composto terapêutico.

310. 0 método, de qualquer uma das modalidades 306-309, compreendendo adicionalmente transferir a sequência, ou um polipeptídeo feito da sequência, para outra entidade, por

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 244/267

227/248 exemplo, um profissional de saúde que administrará o composto terapêutico a um sujeito.

311. Um método de tratamento de um sujeito compreendendo:

adquirir, por exemplo, receber de outra entidade, um composto terapêutico ou um ácido nucleico que codifica um composto terapêutico, fabricado pelo método de qualquer um dos fornecidos neste documento, mas não limitado às modalidades 306-310;

administrar o composto terapêutico, ou um ácido nucleico que codifica um composto terapêutico ao sujeito, tratando, desse modo, o sujeito.

312. O método da modalidade 311, compreendendo adicionalmente identificar o composto terapêutico, ou ácido nucleico que codifica um composto terapêutico para outra entidade, por exemplo, a entidade que irá produzir o composto terapêutico, ou ácido nucleico que codifica um composto terapêutico.

313. 0 método das modalidades 311 ou 312, compreendendo adicionalmente solicitar o composto terapêutico, ou ácido nucleico que codifica um composto terapêutico de outra entidade, por exemplo, a entidade que produziu o composto terapêutico ou ácido nucleico que codifica um composto terapêutico.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 245/267

228/248

314. 0 método de qualquer uma das modalidades 311-333, em que o sujeito tem um distúbrio autoimune e o composto terapêutico não compreende um peptideo autoantigênico ou polipeptideo característico do distúrbio autoimune, por exemplo, não compreende um peptideo ou polipeptideo contra o qual o sujeito tem anticorpos.

[0332] Os exemplos a seguir são ilustrativos, mas não limitativos, dos compostos, composições e métodos descritos neste documento. Outras modificações e adaptações adequadas conhecidas dos versados na técnica estão dentro do escopo das modalidades seguintes.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1: COMPOSTOS TERAPÊUTICOS AGONIZANTES DE PD-1 DIRECIONADOS A HLA.

Manipulação de um terapêutico agonista de PD-1 direcionado a HLA [0333] Os domínios de ligação específicos para HLAA2 são obtidos clonando as regiões variáveis das cadeias pesada e leve de Ig do hibridoma BB7.2 (ATCC) e convertendo em um Ab de cadeia simples (scFv) . A atividade e a especificidade do scFv podem ser confirmadas avaliando a ligação de BB7.2 a células que expressam HLA-A2 em comparação com células que expressam outros alelos de HLA-A. Os resíduos

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 246/267

229/248 de PD-L1 mínimos requeridos para atividade de ligação a PD1 são identificados ao avaliar sistematicamente os requisitos de aminoácidos 3' e 5' do domínio IgV de PD-L1 correspondente aos aminoácidos 68-114. Construtos de expressão são projetados e proteínas sintetizadas e purificadas, com atividade de ligação a PD-1 testada por Biacore. Os aminoácidos essenciais mínimos requeridos para ligação a PD-1 pelo domínio IgV de PD-L1 são referidos como PD-Ll-IgV. Para gerar uma molécula biespecífica BB7.2 scFv e PD-Ll-IgV, um fragmento de DNA é sintetizado codificando o anticorpo biespecífico de cadeia simples BB7.2 x PD-Ll-IgV com o arranjo de domínio VLBB7.2-VHBB7.2-PD-Ll-IgV-IgG4 Fc e clonado em um vetor de expressão contendo um cassete de seleção de DHFR.

[0334] O DNA de plasmídeo do vetor de expressão é transfectado de forma transitória em células 293T, e anticorpos biespecíficos BB7.2 x PD-Ll-IgV são purificados de sobrenadantes usando uma coluna de proteína A/G. A integridade do anticorpo biespecífico BB7.2 x PD-Ll-IgV é avaliada por gel de poliacrilamida. A ligação do domínio BB7.2 scFV ao HLA-A2 e do domínio PD-Ll-IgV a PD-1 é avaliada por ELISA e ensaio FACS baseado em células.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 247/267

230/248 [0335] A função in vitro dos anticorpos biespecificos BB7.2 x PD-Ll-IgV é avaliada usando o ensaio de reação mista de linfócitos (MLR). Em um formato de placa de 96 poços, 100.000 PBMCs humanos irradiados de um doador de HLA-A2+ são aliquotados por poço e usados como ativadores. Células T responsivas a HLA-A1~ são então adicionadas em conjunto com quantidades crescentes de anticorpo biespecifico BB7.2 x PD-Ll-IgV. A capacidade das células T responsivas de proliferar ao longo de um periodo de 72 horas é avaliada por incorporação de BrdU, e com a produção de citocinas IFNg e IL2 adicionalmente avaliada no sobrenadante de co-cultura conforme avaliado por ELISA. Verificou-se que o anticorpo biespecifico BB7.2 x PD-Ll-IgV suprime a reação MLR conforme demonstrado pela inibição da proliferação de células T responsivas a HLA-A2~ e produção de citocina.

[0336] A função in vivo do anticorpo biespecifico BB7.2 x PD-Ll-IgV é avaliada usando um modelo de camundongo murino de tolerância ao aloenxerto de pele. A cepa C57BL/6Tg(HLA-A2.1)lEnge/J (Jackson Laboratories, Bar Harbor Maine) de camundongo é cruzada com Balb/cJ, com progenia El que expressa o transgene HLA-A2.1 e que serve como doador de aloenxerto. Os camundongos C57BL/6J são depilados e enxertados cirurgicamente com a pele removida de camundongos C57BL/6-Tg(HLA-A2.1)lEnge/J x Balb/cJ El eutanasiados. Ao

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 248/267

231/248 mesmo tempo, os camundongos hospedeiros começam a receber injeções intraperitoneais do anticorpo biespecifico BB7.2 x PD-Ll-IgV manipulado para conter apenas controles IgGl Fc ou BB7.2 murinos ou apenas PD-Ll-IgV. A rejeição ou aceitação do aloenxerto da pele é monitorada ao longo de um período de 30 dias, em que os hospedeiros foram eutanizados e as populações de linfócitos linfonodos e de aloenxerto residente quantificadas.

Exemplo 2: Cd39 E/Ou Cd73 Como Domínios Efetores Criando Um Halo Purinérgico Em Torno De Um Tipo De Célula Ou Tecido De Interesse [0337] Um fragmento cataliticamente ativo de CD39 e/ou CD73 é fundido a um domínio de alvejamento. Após ligação e acúmulo no sítio alvo, o CD39 fosfo-hidrolisa o ATP em AMP. Após ligação e acúmulo no sítio alvo, o CD73 desfosforila o AMP extracelular em adenosina. Verificou-se que uma forma solúvel cataliticamente ativa de CD39 adequada para uso neste documento circula em sangue humano e murino, ver, por exemplo, Yegutkin et al. FASEB J. , setembro de 2012; 26(9):3875-83. Um fragmento de CD39 recombinante solúvel é também descrito em Inhibition of platelet function by recombinant soluble ecto-ADPase/CD39, Gayle, et al. , J Clin Invest., 1 de maio de 1998; 101(9):1851-1859. Uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 249/267

232/248 molécula CD73 adequada compreende uma forma solúvel de CD73 que pode ser eliminada da membrana das células endoteliais por divagem proteolitica ou hidrólise da âncora GPI por tensão de cisalhamento, ver, por exemplo, Referência:Yegutkin G, Bodin P, Burnstock G. Effect of shear stress on the release of soluble ecto-enzymes ATPase and 5'nucleotidase along with endogenous ATP from vascular endothelial cells. Br J. Pharmacol 2000; 129:921-6.

[0338] A catálise local de ATP para AMP ou AMP para adenosina esgotará os estoques locais de energia necessáriospara a função das células efetoras T fulminantes. A função de Treg não deve ser afetada pela depleção de ATP devido à sua dependência da fosforilação oxidativa para necessidades de energia (que requer menos ATP), em que a memória T e outras células efetoras devem ser afetadas devido à sua dependência da glicólise (que requer alto uso de ATP) para a função fulminante.

Exemplo 3: Medição Da Sinalização De Pd-1 Induzida Por Anticorpos.

[0339] Células Jurkat que expressam estavelmente 2 construtos, 1) um polipeptideo PD-1 humano fundido a uma bgalactosidase, que pode ser referido como um doador enzimático e 2) um polipeptideo SHP-2 fundido a uma b

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 250/267

233/248 galactosidase, que pode ser referido como um aceptor de enzimas. Um anticorpo PD-1 é colocado em contato com a célula e quando a PD-1 está envolvida, a SHP-2 é recrutada para PD-1. 0 aceptor de enzima e doador de enzima formam uma enzima b-galactosidase totalmente ativa que pode ser testada. Este ensaio pode ser usado para mostrar a ativação da sinalização de PD-1.

Exemplo 4: Medição Do Agonismo De PD-1. Os Agonistas De PD-1 Inibem A Ativação De Células T.

[0340] Sem estar ligado a nenhuma teoria em particular, o agonismo de PD-1 inibe a ativação de células T induzidas por anti-CD3. As células humanas ou de camundongo são pré-ativadas com PHA (para células T humanas) ou ConA (para células T de camundongo) de modo a expressarem PD-1. As células T são então ser reativadas com anti-CD3 na presença de anti-PD-1 (ou PD-L1) para o ensaio de agonismo de PD-1. Células T que recebem um sinal agonista de PD-1 na presença de anti-CD3 mostrarão ativação diminuída, em relação à estimulação anti-CD3 sozinha. A ativação pode ser lida pela proliferação ou produção de citocinas (IL-2, IFNg, IL-17) e possivelmente por outros marcadores, como o marcador de ativação CD69.

Exemplo 5. Expressão E Função Da Proteína De Fusão De

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 251/267

234/248

Anti-MAdCAM/ PD-L1 de Camundongo Não É Afetada Pela Configuração Molecular.

[0341] Uma molécula de fusão biespecifica compreendendo uma molécula de anti MAdCAM Ab de camundongo/ PD-L1 de camundongo foi expressa em duas orientações. A primeira orientação consistiu em um anti-MAdCAM IgG de camundongo com PD-L1 de camundongo fundido no terminal c de sua cadeia pesada. A segunda orientação consistiu em PD-L1 de camundongo fundido no terminal N de um domínio Ig Fc, com um anti-MAdCAM scFv de camundongo fundido no terminal c. Verificou-se que ambas as moléculas foram bem expressas em um sistema de expressão de mamíferos. Verificou-se também que as moléculas podem se ligar a seus respectivos parceiros de ligação, MAdCAM ou PD-1 em ambas as orientações, simultaneamente. Estes resultados demonstram que uma molécula que consiste em um anticorpo anti-MAdCAM fundido com PD-L1, pode ser expressa em configurações nas quais PDL1 é fundido no termminal N ou C ao Fc e retém a atividade de ligação funcional adequada.

[0342] Resumidamente, um vetor pTT5 contendo o único gene que codifica um único polipeptideo com o PD-L1 do camundongo fundido no terminal Ndo domínio IgGl Fc humano e com scFv MECA-89 anti-MAdCAM fundido no C-terminal foi transfectado em células Expi HEK293. Alternativamente, dois

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 252/267

235/248 plasmideos foram co-transfectados em razões equimolares. 0 primeiro plasmideo codificou a cadeia leve de MECA-89 e o segundo codificou a cadeia pesada IgGl completa de MECA-89 com PD-L1 de camundongo fundido no terminal C. Após 5-7 dias, os sobrenadantes da cultura celular que expressam as moléculas foram coletadas e clarificados por centrifugação e filtração através de um dispositivo de filtração de 0,22 pm. As moléculas biespecificas foram capturadas em resina proA. A resina foi lavada com PBS pH 7,4 e a molécula capturada foi eluida usando Glicina 100 mM, pH 2,5, com neutralização usando um décimo volume de Tris IM, pH 8,5. A proteína foi trocada de tampão para PBS pH 7,4 e analisada por cromatografia por exclusão de tamanho em um Superdex 200 3,2/300. A análise de 1 pg do material purificado por SDSPAGE redutora e não redutora em um gel Bis-Tris 4-12% foi conduzida.

[0343] Ambas as proteínas, independentemente da orientação, foram expressas acima de 10 mg/L e foram mais de 95% monodispersas após purificação, como mostrado por cromatografia por exclusão de tamanho e SDS-PAGE redutora/não redutora. Em conformidade, isto demonstra a produção e atividade de moléculas biespecificas de dupla função com diferentes imunomoduladores e porções de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 253/267

236/248 alvejamento de tecido no terminal N e C de um dominio Fc. Isto também mostra especificamente que um agonista de PD-1 e um parceiro de ligação podem ser expressos no terminal N ou C de um domínio Ig Fc.

Exemplo 6. Uma Molécula Biespecifica Compreendendo Um Protótipo Agonista De PD-1 ligado Ao MAdCAM Pode Se Ligar Ao MAdCAM E Ao PD-1 Simultaneamente.

[0344] Resumidamente, uma placa imunossorvente foi revestida com PD-1 de camundongo a uma concentração de Ipg/mL em PBS pH 7,4, 75 μΐ/poço e incubada durante a noite a 4°C. Os poços foram lavados com PBS de pH 7,4 contendo Tween-20 a 0,05% (tampão de lavagem) três vezes e depois bloqueados com 200 μΐ/poço de BSA a 1% em PBS pH 7,4 (tampão de bloqueio) por duas horas à temperatura ambiente. Após três lavagens com tampão de lavagem, duas moléculas biespecíficas que compreendem o protótipo agonista de PD-1 no terminal N ou no terminal C foram diluídas para InM, lOnM e lOOnM em PBS contendo BSA 1% e Tween-20 0, 05% (tampão de ensaio) . O material diluído foi adicionado à placa revestida com PD-1 de camundongo a 75 μΐ/poço por 1 hora à temperatura ambiente. Após três lavagens com tampão de lavagem, MAdCAM de camundongo foi adicionado à placa a 75 μΐ/poço, a uma concentração de 10 nM em tampão de ensaio por 1 hora à

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 254/267

237/248 temperatura ambiente. Após três lavagens com tampão de lavagem, um anticorpo policlonal anti-MAdCAM de camundongo biotinilado de cabra, diluído para 0,5 pg/mL em tampão de ensaio, foi adicionado à placa a 75 μΐ/poço durante 1 hora à temperatura ambiente. Após três lavagens com tampão de lavagem, adicionou-se estreptavidina HRP de alta sensibilidade diluída em tampão de ensaio a 1:5000 à placa a 75 μΐ/poço por 15 minutos à temperatura ambiente. Após três lavagens com tampão de lavagem e 1 lavagem com tampão de lavagem (sem tween-20), o ensaio foi desenvolvido com TMB e interrompido com HCL IN. OD 450nm foi medido. O experimento incluiu controles apropriados para ligação não específica à placa/bloco na ausência de PD-1 de camundongo, bem como sem controles de MAdCAM e controles monoespecificos, que são incapazes de formar uma ponte entre PD-1 de camundongo e MAdCAM de camundongo.

[0345] Os resultados demonstraram que nas concentrações de 1 nM, 10 nM e 100 nM, ambas as moléculas biespecificas, são capazes de interagir simultaneamente com MAdCAM de camundongo e PD-L1 de camundongo, enquanto os controles monoespecificos não criam um sinal de ponteamento. Além disso, não houve ligação de qualquer composto ao MAdCAM em nenhuma concentração testada, quando o PD-1 de camundongo não estava presente na superfície da placa, indicando que

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 255/267

238/248 nenhum dos compostos de teste estava interagindo não especificamente com a superfície da placa. Portanto, estes resultados demonstram que uma molécula biespecífica que tem como alvo a ligação ao MAdCAM e PD-1 pode se ligar com sucesso a ambas as moléculas. Embora as experiências tenham sido realizadas com PD-L1 como um substituto para um anticorpo PD-1, é esperado que o anticorpo PD-1 funcione de maneira semelhante.

Exemplo 7. Uma Molécula Biespecífica De Protótipo De PD-L1 Inibe Células T Em Um Ensaio Agonista De PD-1.

[0346] Uma molécula biespecífica que imita um anticorpo agonista de PD-1 foi testada para demonstrar que o agonismo de PD-1 pode inibir as células T. Resumidamente, camundongos C57LB/6 fêmeas com 7 semanas de idade foram sacrificados e os seus esplenócitos foram isolados. Os esplenócitos foram expostos a ConA durante 3 dias e depois expostos a anti-CD3 na presença ou ausência da molécula do tipo PD-1, que neste exemplo foi uma molécula biespecífica PD-L1 que foi ligado a uma placa usando IgG anti-humana. As células T foram então introduzidas na molécula biespecífica de PD-L1. Verificou-se que o PD-L1, que imita um anticorpo PD-1, é um agonista de células T e inibe a ativação de células T. Os mesmos experimentos foram repetidos usando uma

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 256/267

239/248 molécula biespecífica PD-L1 que foi fundida com um anticorpo anti-MAdCAM, que foi ligado a uma placa por interação com uma placa revestida com MAdCAM. Descobriu-se que a imitação do agonista de PD-1, o anticorpo PD-L1/anti-MAdCAM eram agonistas eficazes contra a atividade de células T. Estes resultados demonstram que uma molécula biespecífica que imita uma proteína de fusão anticorpo PD-l/MAdCAMAb pode exercer sinalização inibidora funcional em explosões primárias de células T de camundongo quando a molécula é capturada através do componente de anticorpo MAdCAM no final da molécula.

Exemplo 8:Uma Molécula de protótipo De PD-1 Biespecífica Com Uma Ligação De Tecido Diferente Pode Inibir Células T Em Um Ensaio De Agonista De PD-1.

[0347] Uma molécula de fusão de um PD-L1 foi usada como um substituto para um anticorpo PD-1 e ligada a um anticorpo de Classe I H-2Kk. A molécula de PD-L1 ligada ao MHC Classe I H-2Kk tinha ligação funcional, semelhante aos dados descritos nos Exemplos 6 e 7. Resumidamente, os esplenócitos de camundongos C57B1/6 foram estimulados com Concanavalina A (ConA) e IL-2 por 3 dias. As placas foram revestidas com anti-CD3 (2C11) durante a noite a 4°C, lavadas. As placas foram revestidas com anti-IgG humana

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 257/267

240/248 durante 3 horas a 37°C e lavadas. Adicionou-se anti-H-2Kk monoespecifico (16-3-22) ou anti-H-2Kk: mPD-Ll biespecifico, e incubou-se por 3 horas a 37°C e lavou-se. Todos os artigos de teste continham uma porção de IgGl-Fc humana. PBS (No Tx) foi adicionado para determinar o fundo genético do ensaio. Os blastos de ConA foram lavados 2 vezes, adicionados à placa e incubados a 37 °C. Os sobrenadantes foram removidos após 24 horas. Os níveis de IFNg foram determinados por MSD. Após 48 horas, a viabilidade/metabolismo celular foi analisada por Cell Titer-glo. Quando capturado através do domínio IgG Fc, um PD-L1 biespecífico ligado ao MHC Classe I pode atenuar a ativação de células T em um ensaio de agonismo de PD-1 de camundongo. Portanto, este exemplo demonstra que uma molécula de protótipo biespecífica diferente pode exercer sinalização inibidora funcional em blastos primários de células T de camundongo - quando a molécula é capturada através de um cordão de tecido diferente - neste caso, um anticorpo de camundongo para MHC Classe I H-2Kk. Em conformidade, estes dados demonstram que a ligação não é específica para MAdCAM e é possível com outras moléculas que podem atuar como porções de alvejamento, conforme fornecido neste documento.

Exemplo 9. Agonistas PD-1 Podem Induzir Sinalização Em

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 258/267

241/248

Células Jurkat [0348] As células Jurkat que expressam PD-1 humano fundido a um doador de enzima beta-galactosidase e SHP-2 fundido a um aceptor de enzima beta-galactosidase são adicionadas às condições de teste em uma placa e incubadas durante 2 horas. Os anticorpos agonistas PD-1 induzem a sinalização e o recrutamento de SHP-2, complementação enzimática e formação de uma enzima beta-galactosidase ativa. Foi adicionado substrato de beta-galactosidase e a quimioluminescência pode ser medida em um leitor de placa de luminescência padrão. O agonismo é medido por quimioluminescência, onde quanto mais quimioluminescência é medida, indica-se maior agonismo.

[0349] O agonismo de uma molécula biespecifica de PD-l/MAdCAM foi medido neste ensaio. C110 (UCB) e CC-90006 (Celgene/Anaptys) foram usados como anticorpos agonistas de PD-1. Ambos são ativos e exibem agonismo de PD-1 em ensaio funcional em formato de ensaio de captura de Ig. Resumidamente, as placas foram revestidas com IgG antihumana durante a noite a 4 °C e lavadas. A toxina antitétano (TT), os anticorpos monoclonais anti-PD-1 agonista de referência, Cl. 10 ou CC-90006 foram adicionados e incubados durante 1 hora a 37° C e lavados. Todos os artigos de teste continham uma IgGl-Fc humana. O meio (No Tx) foi adicionado

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 259/267

242/248 para determinar o fundo genético do ensaio. As placas foram lavadas 3 vezes. As células Jurkat que expressam tanto PD-1 humano fundido a um doador de enzima beta-galactosidase quanto SHP-2 fundido a um aceptor de enzima b-galactosidase foram adicionadas e incubadas por 2 horas. Os anticorpos agonistas de PD-1 induzem a sinalização e o recrutamento de SHP-2, complementação enzimática e formação de uma enzima bgalactosidase ativa. Foi adicionado substrato de bgalactosidase e a quimioluminescência foi medida em um leitor de placa de luminescência padrão. Os dois anticorpos agonistas de PD-1 humano (C110 e CC-90006) ligam-se e induzem a sinalização (um substituto para o agonismo) no ensaio repórter de Jurkat modificado. Portanto, este ensaio é um ensaio de agonismo de PD-1 funcional. C110: MECA89 (MECA89 é um anticorpo MAdCAM conhecido) é uma nova molécula biespecifica criada pela fusão do anticorpo MAdCAM, MECA89 [scFv], ao terminal C da cadeia pesada de C110. Verificouse que esta proteína de fusão é ativa e exibe agonismo de PD-1 em ensaio funcional quando capturada via domínio IgG Fc, assim como a proteína única de C110. No entanto, apenas C110: MECA89 é ativo no formato de ensaio funcional usando proteína MAdCAM como captura (os componentes monoespecíficos não sinalizam).

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 260/267

243/248 [0350] Resumidamente, as placas foram revestidas com IgG anti-humana ou mMAdCAM-1 recombinante durante a noite a 4°C e lavadas. A toxina antitétano monoespecifica (TT), antiMAdCAM-1 (MECA39) ou agonista anti-PD-1 (C110) ou C110: MECA89 biespecifico foram adicionados e incubados por 1 hora a 37 °C e lavados. Todos os artigos de teste continham uma porção de IgGl-Fc humana. PBS (No Tx) foi adicionado para determinar o fundo genético do ensaio. As placas foram lavadas 2 vezes. As células Jurkat que expressam tanto PD-1 humano fundido a um doador de enzima beta-galactosidase quanto SHP-2 fundido a um aceptor de enzima b-galactosidase são adicionadas e incubadas durante 2 horas. Os anticorpos agonistas de PD-1 induzem a sinalização e o recrutamento de SHP-2, complementação enzimática e formação de uma enzima bgalactosidase ativa. Foi adicionado substrato de bgalactosidase e a quimioluminescência foi medida em um leitor de placa de luminescência padrão. Resultados: Ambas as moléculas biespecificas de C110 e C110 ligada a MAdCAM podem induzir a sinalização de PD-1 no ensaio repórter de Jurkat quando a placa é revestida com uma captura de anti-IgG Fc, mas apenas a molécula biespecifica ligada a MAdCAM pode induzir sinalização PD-1 no ensaio repórter quando a placa é revestida com proteína MAdCAM recombinante. Estes resultados demonstram que a molécula ligada a MAdCAM e contém

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 261/267

244/248 um anticorpo agonista de PD-1 é funcional, o que é semelhante aos resultados mostrados com o PD-L1 como substituto do agonista de PD-1.

Exemplo 10: Geração De Anticorpos Agonistas PD-1 [0351] Camundongos deficientes em PD-1 imunizados com PD-1 de camundongo sob condições para gerar uma resposta imune contra PD-1. Foram gerados e identificados 54 hibridomas que se ligam a PD-1 de camundongo. Os anticorpos produzidos pelos diferentes hibridomas foram analisados quanto ao agonismo de células T de acordo com os métodos descritos nos Exemplos 4 e 6. Dos 54 hibridomas, pelo menos 6 foram identificados como agonistas de PD-1. Os anticorpos também foram testados quanto à ligação a PD-1 e verificouse que se ligavam ao mesmo sítio que o sítio de ligação a PD-L1.

[0352] Resumidamente, a ligação ao sítio de ligação a PD-L1 foi determinada usando o ensaio seguinte. As placas imunossorventes foram revestidas durante a noite com 75 pL de PD-Ll-Fc recombinante de camundongo (2 pg /mL) em lx PBS, pH 7,4. As placas foram então lavadas 3x com Ix PBS e bloqueadas por 2 horas à temperatura ambiente com Ix PBS suplementado com BSA 1%. PD-l-Fc recombinante de camundongo (1 nM) foi incubado com 100 nM do anticorpo anti-PD-1 de

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 262/267

245/248 camundongo indicado em lx PBS suplementado com BSA 1% e 0,05% de Tween20 (Tampão de Ensaio) durante 1 hora à temperatura ambiente em agitação. Após o bloqueio, as placas foram lavadas 3x com lx PBS suplementado com Tween20 PBST 0,05% e os conjugados de anticorpo PD-1 foram incubados com PD-L1 de camundongo ligado a placa. Após lavagem de PD-1 não ligada com PBST, as placas foram incubadas com 75 pL de anticorpo policlonal anti-PD-1 biotinilado (0,5 pg/mL) em tampão de ensaio, seguido de amplificação com estreptavidina HRP 1:5000 também diluída em tampão de ensaio. As placas foram lavadas três vezes com PBST, seguidas por três lavagens com Ix PBS antes da adição de 100 pL de TMB seguido por 100 pL de HC1 1M para parar o desenvolvimento. A absorvância lida a 450 nm e normalizada à ligação de PD-1 a PD-L1 na ausência de anticorpo. Os resultados mostraram que os anticorpos ativos se ligam ao sítio de ligação a PD-L1. Os anticorpos inativos não se ligaram ao sítio de ligação a PD-L1. Portanto, este exemplo demonstra a capacidade de produzir anticorpos anti-PD-1 que são agonistas, em adição aos anticorpos agonistas de PD-1 previamente identificados, descritos neste documento.

Exemplo 11: Anticorpos Anti-PD-1 ligados Atuam Como Agonistas De PD-1.

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 263/267

246/248 [0353] Uma biblioteca de fagos scFv de anticorpo humano foi analisada contra proteínas PD-1 humanas, de camundongo e cino recombinantes através de rodadas de seleção iterativas para enriquecimento de clones de anticorpos que reconhecem os três ortólogos de PD-1 das espécies mencionadas acima. Os clones scFv foram configurados no formato nt-VHLigante Peptídico-VL-ct e fundidos com a superfície fágica de M13 através da proteína de revestimento pill. Após as seleções, os scFvs clonais foram avaliados quanto à ligação a PD-1 humano, de camundongo e cino expresso na superfície celular das células CHO. Os clones que se mostraram reativos cruzados a todos ostrês ortólogos das espécies PD-1 expressos na superfície celular foram convertidos usando técnicas padrão de biologia molecular, em um formato de IgGl humana, em que cada molécula era composta de quatro cadeias polipeptídicas no total (2 cadeias pesadas e 2 cadeias leves). As duas cadeias leves eram idênticas uma à outra e as duas cadeias pesadas eram idênticas uma à outra, conforme fornecido.

[0354] As duas cadeias pesadas idênticas homodimerizam e as duas cadeias leves idênticas paream-se com cada cadeia pesada para formar uma IgGl humana intacta. O domínio Fc contém as mutações L235A, L236A e G237A para ablacionar interações FcyR. Os anticorpos IgGl anti-PD-1

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 264/267

247/248 humanos convertidos foram transfectados e expressos em células Expi HEK293 e purificados por cromatografia de proteína A. A concentração de proteína foi determinada usando um espectrofotômetro de nanogotas em conjunto com coeficientes de extinção específicos para anticorpos. Os anticorpos foram formulados em PBS de pH 7,4.

[0355] Os anticorpos anti-PD-1 foram em seguida testados no ensaio Jurkat descrito neste documento quanto à atividade agonista. Resumidamente, as placas de cultura de tecidos foram revestidas com anti-IgG ou deixadas sem revestimento. Para o formato capturado, os artigos de teste ou controles foram adicionados aos poços revestidos com antiIgG a 100 nM, 25 nM ou 12,5 nM e incubados durante 3 h a 37°C. As placas foram lavadas e as células Jurkat PD-1 foram adicionadas. Para o formato solúvel, adicionaram-se artigos ou controles de teste solúveis aos poços a 100 nM, 25 nM ou 12,5 nM que já continham as células Jurkat de PD1. A luminescência foi medida em um leitor de placas. Os resultados demonstraram que nove dos doze anticorpos PD-1 reativos cruzados humanos/de camundongo apresentaram atividade dependente da dose no ensaio Jurkat quando os anticorpos anti-PD-1 foram capturados via anti-IgG, mas não no formato solúvel. Estes dados demonstram que o anticorpo

Petição 870190115584, de 11/11/2019, pág. 265/267

248/248 anti-PD-1 pode atuar como um agonista quando ligado ao seu alvo por uma porção de alvejamento.

[0356] Em conclusão, sem estar vinculado a nenhuma teoria específica, os dados apresentados neste documento demonstram que uma molécula biespecífica de PD-1 Agonista/MAdCAM pode se ligar a MAdCAM e PD-1 e também agonizar a atividade das células T. Portanto, as moléculas podem ser usadas para tratar as várias condições fornecidas neste documento e fornecem uma imunomodulação localizada e/ou específica do tecido e a regulação negativa de uma resposta das células T.

[0357] As divulgações de cada patente, pedido de patente e publicações citadas neste documento são incorporadas neste pedido por referência na sua totalidade. Embora várias modalidades tenham sido divulgadas com referência a aspectos específicos, é aparente que outros aspectos e variações dessas modalidades podem ser planejados por outros versados na técnica sem se afastar do verdadeiro espírito e escopo das modalidades. As reivindicações anexas destinam-se a ser interpretadas de forma a incluir todos esses aspectos e variações equivalentes.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Composto terapêutico caracterizado por compreender:

i) uma porção de alvejamento específica selecionada dentre:

a) uma porção de alvejamento específica do doador que, por exemplo, liga, preferencialmente, um alvo doador; ou

b) uma porção de alvejamento específica do tecido que, por exemplo, se liga, preferencialmente, ao tecido alvo de um indivíduo; e ii) uma fração de ligação/modulação efetora selecionada dentre:

(a) uma fração de ligação/modulação da molécula inibidora de célula imune (fração de ligação/modulação de ICIM);

(b) uma fração de ligação/modulação de célula imune imunossupressora (fração de ligação/modulação de IIC); ou (c) uma fração de ligação/modulação efetora que, como parte de um composto terapêutico, promove um microambiente local imunossupressor, por exemplo, fornecendo, na proximidade do alvo, uma substância que inibe ou minimiza o ataque pelo sistema imune do alvo (porção de ligação/modulação de SM).
2. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 266/281

2/15 ligar e ativar diretamente um receptor inibidor.
3. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

2, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora ser uma molécula inibidora do checkpoint imunológico.
4. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

3, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora ser expressa por uma célula imune.
5. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

4, caracterizado por a célula imune contribuir para uma resposta imune indesejada.
6. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado por a célula imune causar uma patologia da doença.
7. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a capacidade da molécula terapêutica para agonizar a molécula à qual a ligação/modulação efetora se liga ser maior, por exemplo, 2, 5, 10, 100, 500 ou 1.000 vezes maior, quando o composto terapêutico está ligado a um alvo por meio da porção de alvejamento do que quando o composto terapêutico não está ligado ao alvo por meio da porção de alvejamento.
8. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a capacidade da molécula terapêutica para agonizar a molécula à qual a ligação/modulação efetora

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 267/281

3/15 se liga ser 10, 100, 500 ou 1.000 vezes maior, quando o composto terapêutico está ligado a um alvo por meio da porção de alvejamento do que quando o composto terapêutico não está ligado ao alvo por meio da porção de alvejamento.
9. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por, em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico, existir uma agonização sistêmica significativa da molécula à qual a fração de ligação/modulação efetora se liga.
10. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por, em uma dose terapeuticamente eficaz do composto terapêutico, a agonização da molécula à qual a fração de ligação/modulação efetora se liga ocorrer substancialmente apenas em um sítio alvo ao qual a porção de alvejamento se liga.
11. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a porção de alvejamento compreender um anticorpo anti-MAdCAM e a uma fração de ligação/modulação efetora compreender um anticorpo anti-PD-1.
12. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a ligação da fração de ligação/modulação efetora ao seu ligante cognato, inibir a ligação de um ligante contador endógeno ao ligante cognato da fração de ligação/modulação efetora por menos de 60, 50, 40, 30, 20,

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 268/281

4/15

10 ou 5%.
13. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

1, caracterizado por a ligação da fração de ligação/modulação efetora ao ligante cognato, resultar substancialmente em nenhum antagonismo do ligante cognato da molécula de ligação/modulação efetora.
14. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de ICIM.
15. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das

reivindicações 1 a 14, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de ICIM compreendendo uma molécula do

ligante da molécula inibidora do checkpoint imunológico.
16. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado por a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora compreender uma molécula PD-L1.
17. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado por a ICIM ser a molécula do contra-ligante da molécula imune inibidora que se engata a uma molécula inibidora cognata do checkpoint imunológico selecionada dentre PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4.
18. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 269/281

5/15

17, caracterizado por ICIM ser um anticorpo.
19. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

18, caracterizado por o ICIM compreender um anticorpo que se liga a PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB ou CTLA-4.
20. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

19, caracterizado por o anticorpo ser um anticorpo que se liga a PD-1.
21. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado por o anticorpo ser um anticorpo que se liga a PD-1 e ser um agonista de PD-1.
22. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado por o anticorpo ser um anticorpo que se liga a PD-1 e ser um agonista de PD-1 quando fixado em um sitio alvo.
23. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de ICIM, que compreende uma molécula de anticorpo funcional para uma molécula inibidora de superfície celular.
24. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a molécula inibidora de superfície celular ser uma molécula inibidora do checkpoint imunológico.
25. Composto, de acordo com a reivindicação 24,

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 270/281

6/15 caracterizado por a molécula inibidora do checkpoint imunológico ser selecionada dentre PD-1, KIR2DL4, LILRB1, LILRB2, CTLA-4 ou selecionada na Tabela 1.
26. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender ainda uma segunda fração de ligação/modulação efetora.
27. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por a segunda fração de ligação/modulação efetora se ligar a um alvo diferente do que a fração de ligação/modulação efetora.
28. Composto terapêutico, de acordo com as reivindicações 26 ou 27, caracterizado por a segunda fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de IIC.
29. Composto terapêutico, de acordo com as reivindicações 26 ou 27, caracterizado por a segunda fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de SM.
30. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de IIC.
31. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma fração de ligação/modulação de IIC que

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 271/281

7/15 aumenta, recruta ou acumula uma célula imune imunossupressora no sitio alvo.
32. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender um aglutinante molecular de superfície celular que se liga ou especificamente se liga a uma molécula de superfície celular sobre uma célula imune imunossupressora.
33. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma molécula do ligante da molécula de superfície celular que se liga ou especificamente se liga a uma molécula de superfície celular sobre uma célula imune imunossupressora.
34. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora compreender uma molécula de anticorpo que se liga a uma molécula de superfície celular sobre uma célula imune imunossupressora.
35. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 31 a 34, caracterizado por a célula imune imunossupressora compreender uma célula T reguladora, tal como uma célula reguladora Foxp3+CD25+T.
36. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por a fração de ligação/modulação efetora

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 272/281

8/15 compreender uma fração de ligação/modulação de SM.
37. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por a fração de ligação/modulação de SM promover um microambiente local imunossupressor.
38. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação

36, caracterizado por a fração de ligação/modulação de SM compreender uma molécula CD39.
39. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por a fração de ligação/modulação de SM compreender uma molécula CD73.
40. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por a fração de ligação/modulação de SM compreender uma molécula anti-CD39.
41. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 36, caracterizado por a fração de ligação/modulação de SM compreender uma molécula do anticorpo anti-CD73.
42. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o composto ter a fórmula do terminal N até o terminal C:

Rl---Região do Ligante Peptídico A—R2 ou R3—Região do

Ligante Peptídico B—R4, em que,

Rl, R2, R3 e R4 compreendem, independentemente, uma fração de ligação/modulação efetora, por exemplo, uma fração

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 273/281

9/15 de ligação/modulação de ICIM, uma fração de ligação/modulação de IIC ou uma fração de ligação/modulação de SM; uma porção de alvejamento específica; ou está ausente;

desde que uma fração de ligação/modulação efetora e uma porção de alvejamento específica estejam presentes.
43. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por cada uma da Região do Ligante Peptidico A e a Região do Ligante Peptidico B compreender uma região Fc.
44. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um dentre Rl e R2 ser anticorpo antiPD-1 e um dentre Rl e R2 ser um anticorpo anti-MAdCAM.
45. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um de Rl ser anticorpo anti-PD-1 e um R2 ser um anticorpo anti-MAdCAM.
46. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um de Rl ser anticorpo anti-MAdCAM e um R2 ser um anticorpo anti-PD-1.
47. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um dentre R3 e R4 ser anticorpo antiPD-1 e um dentre R3 e R4 ser um anticorpo anti-MAdCAM.
48. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um de R3 ser anticorpo anti-PD-1 e um R4 ser um anticorpo anti-MAdCAM.

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 274/281

10/15
49. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 42, caracterizado por um de R3 ser anticorpo anti-MAdCAM e um R4 ser um anticorpo anti-PD-1.
50. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 49, caracterizado por o ligante peptídico estar ausente.
51. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 49, caracterizado por o ligante peptídico ser uma região Fc.
52. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 49, caracterizado por o ligante peptídico ser um ligante peptídico de glicina/serina.
53. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 44 a 49, caracterizado por o anticorpo PD-1 ser um agonista de PD-1.
54. Composto terapêutico, de acordo com a reivindicação 44, caracterizado por:

RI e R3 compreenderem, independentemente, uma molécula do anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1); e R2 e R4 compreenderem, independentemente, frações de direcionamento específicas, por exemplo, moléculas de scFv contra um antígeno de tecido.
55. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 53, caracterizado por:

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 275/281

11/15

Rl e R3 compreenderem, independentemente, frações de direcionamento especificas, por exemplo, um anticorpo antiantígeno tecidual; e R2 e R4 compreenderem, independentemente, uma molécula de anticorpo anti-PD-1 funcional (um agonista de PD-1).
56. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 55, caracterizado por o composto terapêutico compreender um agonista de PD-1.
57. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 56, caracterizado por a porção de alvejamento compreender uma fração de reconhecimento que se liga a MAdCAM.
58. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 57, caracterizado por a porção de alvejamento compreender um anticorpo que se liga ou especificamente se liga a MAdCAM.
59. Composto terapêutico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 58, caracterizado por a porção de alvejamento compreender um anticorpo que se liga ou especificamente se liga a MAdCAM e a fração de ligação/modulação efetora compreender um anticorpo que se liga a PD-1.
60. Método de tratamento de um indivíduo com doença inflamatória intestinal caracterizado por o método

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 276/281

12/15 compreender administrar um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo, para tratar a doença inflamatória intestinal.
61. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado por o indivíduo com doença inflamatória intestinal ter doença de Crohn.
62. Método, de acordo com a reivindicação 60, caracterizado por o indivíduo com doença inflamatória intestinal ter colite ulcerativa.
63. Método de tratamento de um indivíduo com hepatite autoimune caracterizado por o método compreender administrar um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo, para tratar a hepatite autoimune.
64. Método de tratamento de colangite esclerosante primária caracterizado por o método compreender administrar um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo, para tratar a colangite esclerosante primária.
65. Método de tratamento de diabetes tipo 1 caracterizado por o método compreender administrar um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo, para tratar a diabetes tipo 1.

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 277/281

13/15
66. Método de tratamento de um indivíduo transplantado caracterizado por compreender administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo, tratando, assim, um indivíduo transplantado (receptor).
67. Método de tratamento de GVHD em um indivíduo tendo um tecido doador transplantado caracterizado por compreender administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, ao indivíduo.
68. Método de tratamento de um indivíduo que tem ou tem risco ou risco elevado de ter um distúrbio autoimune caracterizado por compreender administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, tratando, assim, o indivíduo.
69. Ácido nucleico caracterizado por codificar um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59.
70. Vetor caracterizado por compreender o ácido nucleico, conforme definido na reivindicação 69.
71. Célula caracterizada por compreender o ácido nucleico, conforme definido na reivindicação 59, ou o vetor,

Petição 870190090503, de 12/09/2019, pág. 278/281

14/15 conforme definido na reivindicação 70.
72. Método de fabricação de um composto terapêutico caracterizado por compreender cultivar uma célula, conforme definida na reivindicação 71, para fabricar o composto terapêutico.
73. Método de fabricação de uma sequência de ácido nucleico que codifica um composto terapêutico, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 59, caracterizado por compreender:

a) fornecer um vetor que compreende uma sequência que codifica uma porção de alvejamento e que insere no vetor sequência que codifica uma fração de ligação/modulação efetora para formar a sequência que codifica um composto terapêutico; ou

b) fornecer um vetor que compreende uma sequência que codifica uma fração de ligação/modulação efetora e que insere no vetor sequência que codifica uma porção de alvejamento para formar a sequência que codifica um composto terapêutico, produzindo, assim, uma sequência que codifica um composto terapêutico.
74. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 60 a 73, caracterizado por o indivíduo ter um distúrbio autoimune e o composto terapêutico não compreender um peptídeo autoantigênico ou polipeptídeo característico de