SK11192000A3 - 2-(purin-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom, ich použitie a medziprodukty - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolových derivátov, spôsobu výroby týchto látok, farmaceutických prostriedkov s ich obsahom a ich použitia na liečebné účely.

Doterajší stav techniky

Zápal je primárna reakcia na poranenie tkaniva alebo mikrobiálnu inváziu a je charakterizovaný adhézlou leukocytov na endotel ciev a aktiváciou tkaniva. Aktivácia leukocytov môže mať za následok vznik toxických zlúčenín kyslíka (napríklad superoxidového aniónu) a uvoľnenie rôznych produktov, napríklad peroxidáz a proteáz. Leukocyty v obehu zahrnujú neutrofilné, eozinofilné, bazofilné leukocyty, monocyty a lymfocyty. Pri rôznych formách zápalu dochádza k infiltrácii rôznymi typmi leukocytov, najmä v závislosti na cytokínoch a chemotaktických faktoroch, k expresii ktorých dochádza v príslušnom tkanive.

Primárnou funkciou leukocytov je brániť hostiteľa pred inváziou mikroorganizmov, ako napríklad baktérií a parazitov. Pri poranení alebo infekcii tkaniva dochádza k celému radu javov, v dôsledku ktorých dôjde k výstupu leukocytov z obehu do napadnutého tkaniva. Týmto spôsobom má byť zaistené zničenie a fagocytóza cudzorodých a mŕtvych buniek a potom vstrebanie zápalového infiltrátu a vyhojenie tkaniva. Pri chronických zápaloch je však výstup leukocytov často neadekvátny, hojenie je často nedostatočné a zápalová reakcia môže spôsobiť deštrukciu tkaniva.

Štúdie in vitro a in vivo preukazujú, že látky s účinkom na receptor A2a adenozínu majú protizápalové účinky. Príslušné poznatky zhrnul napríklad

Cronstein, 1994. Pokusy na izolovaných neutrofiloch preukázali inhibíciu tvorby superoxidov, degranulácie, zhlukovania a priľnutia k stenám podľa Cronstein a ďalší, 1993 a 1985, Burkey a Webster 1993, Richter, 1992, Skubitz a ďalší, 1988.

·· ·· ·· ·· • · · · · ··· • · · · · ·

-2V prípade použitia látok so selektivitou pre receptory A2a väčšou ako pre A2b (napríklad CGS21680), zdá sa byť profil inhibície v súlade s pôsobením na podtyp receptora A2a podlá Dianzani a ďalší, 1994. Látky s agonistíckým účinkom s adenozínom môžu tiež potlačovať dálšie typy leukocytov podľa Elliot a Leonard, 1989, Peachell a dálší, 1989. Pokusy na zvieratách preukázali protizápalový účinok metotrexátu na receptororoch A2 pre adenozín podľa Asako a ďalší, 1993, Cronstein a ďalší, 1993 a 1994. Adenozín ako taký a tiež látky, zvyšujúce jeho koncentráciu v obehu majú tiež protizápalové účinky in vivo podľa Green a ďalší, 1991, Rosengren a ďalší, 1995. Zvýšená koncentrácia adenozínu v krvnom obehu, napríklad pri deficiencii adenozíndeaminázy, potlačuje reaktivitu imunitného systému podľa Hirschorn, 1993.

Niektoré substituované 4'-karboxamidové a 4'-tioamidoadenozínové deriváty, použiteľné na liečenie zápalových ochorení, sú opísané v medzinárodných patentových prihláškach WO 94/17090, WO 96/02553 a WO 96/02543 (Glaxo Group). Substituované 4'-karboxamidoadenozínové deriváty, ktoré je možné použiť na liečenie demencie, boli opísané v AU 8771946 (Hoechst Japan). Substituované 4'-hydroxymetyladenozínové deriváty, použiteľné na liečenie porúch hybnosti žalúdka a čriev boli uvedené v EP-A-423776 a EP-A-423777 (Searle). Substituované 4'-hydroxymetyladenozínové deriváty, ktoré je možné použiť ako inhibítory zhlukovania krvných doštičiek sú predmetom BE 768925 (Takeda). 4-Hydroxymetyladenozínové deriváty a ich 4-estery s antihypertenzívnym účinkom alebo s iným účinkom na kardiovaskulárny systém boli opísané v US 4663313, EP 139358 a US 4767747 (Warner Lambert), US 4985409 (Nippon Zoki) a US 5043325 (Whitby Research). 4'-Hydroxymetyladenozínové deriváty na použitie na liečenie autoimunitných ochorení sú uvedené v US 5106837 (Scrips Research Inštitúte). 4'Hydroxymetyladenozínové deriváty, ktoré je možné použiť ako antialergícké látky boli opísané vUS 4704381 (Boehringer Mannheim). Niektoré 4-tetrazolylalkyladenozínové deriváty na liečenie srdcových a obehových ochorení sú všeobecne predmetom DT-A-2621470 (Pharma-Waldhof). Ďalšie 4-karboxamidoadenozínové deriváty, vhodné na liečenie chorobných stavov srdcovej a cievnej sústavy boli opísané v US 5219840, GB 2203149 a GB 2199036 (Sandoz), WO (94/02497 (US

-3Dept. Health), US 4968697 a EP 277917 (Ciba-Geigy), US 5424297 (Univ. Virginia) a EP 232813 (Warner Lambert).

Ďalšie 4'-karboxamidoadenozínové deriváty, ktoré nie sú substituované v polohe 2 purínového kruhu boli opísané vDT 2317770, DT 2213180, US 4167565, US 3864483 a US 3966917 (Abbott Labs), DT 2034785 (Boehringer Mannheim), JP 58174322 a JP 58167599 (Tanabe Seiyaku), WO 92/05177 a US 5364862 (Rhône Poulenc Rorer), EP 66918 (Procter and Gambie), WO 86/00310 (Nelson), EP 222330, US 4962194, WO 88/03147 a WO 88/03148 (Warner Lambert) a US 5219839, WO 95/18817 a WO 93/14102 (Lab UPSA). 4'-Hydroxymetyladenozínové deriváty bez substitúcie v polohe 2 purínového kruhu boli opísané aj vo WO 95/11904 (Univ. Florida).

4-Substituované adenozínové deriváty na použitie ako inhibítory adenozínkinázy sú opísané vo WO 94/18215 (Gensia).

Ďalšie 4'-halogénmetyl-, metyl-, tioalkylmetyl- alebo alkoxymetyl-adenozínové deriváty sú predmetom EP 161128 a EP 181129 (Warner Lambert) a US 3983104 (Schering). Ďalšie 4'-karboxamidoadenozínové deriváty boli opísané v US 7577528 (NIH), WO 91/13082 (Whitby Research) a WO 95/02604 (US Dept. Health).

Niektoré deoxynukleotidy, obsahujúce tetrazolovú skupinu a bez protiinfekčnej účinnosti boli uvedené v publikácii Baker a ďalší, 1974, Tetrahedron 30, 2939 až 2942. Iné adenozínové deriváty s obsahom tetrazolovej skupiny, účinné ako inhibítory zhlukovania krvných doštičiek boli opísané v publikácii Mester a Mester, 1972, Pathologie - Biológie, 20 (Suppl.), 11 až 14.

Niektoré deriváty ribózy s obsahom nitrilových skupín boli opísané v publikácii Schmidt a ďalší, 1974, Liebigs Ann. Chem. 1856 až 1863.

Patentové prihlášky zverejnené tesne po dátume prvého práva prednosti predmetnej prihlášky zahrnujú WO 98/28319 (Glaxo Group Limited), opisujúce 4'substituované tetrazol-2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty, WO 98/16539 (Novo Nordisk A/S), opisujúce adenozínové deriváty, použiteľní na liečenie ischémie srdcového svalu a mozgu a na liečenie epilepsie, WO 98/01426 (Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc.), týkajúce sa adenozínových derivátov s antihypertenzívnym, kardioprotektívnym, antiischémickým a antilipolytickým účinkom a WO 98/01459 (Novo Nordisk A/S), opisujúce N,9-substituované adení··

-4• · · · · · • · · · · · · f • · · · · · ··· ·· ···· ·· nové deriváty, substituované v polohe 4' nesubstituovanou oxazolylovou alebo izoxazolylovou skupinou a použitie takýchto zlúčenín na liečenie porúch, vyvolaných u človeka pôsobením cytokínov.

Teraz bola zistená nová skupina zlúčenín so širokým spektrom protizápalovej účinnosti. Tieto látky vyvolávajú inhibíciu priťahovania leukocytov a inhibíciu ich aktivácie a majú agonistický účinok na receptore 2a pre adenozín. Tieto látky je teda možné použiť na liečebné účely na zabránenie poškodenia tkaniva pôsobením leukocytov a chorôb, pri ktorých dochádza k nahromadeniu leukocytov v mieste zápalu. Uvedené látky sú bezpečnejšie ako kortikosteroidy, ktorých použitie je obmedzené ich závažnými vedľajšími účinkami.

Zlúčeniny podľa vynálezu majú zlepšený profil účinnosti v porovnaní so známymi agonistami, selektívnymi pre receptory A2a v tom zmysle, že všeobecne nemajú agonistický účinok na ľudskom receptore A3. Môžu mať dokonca na tomto receptore antagonistický účinok. Táto účinnosť je veľmi výhodná vzhľadom na to, že receptory A3 sa nachádzajú aj na leukocytoch, najmä eozinofilných a ďalších zápalových bunkách a aktivácia týchto receptorov teda môže podporovať zápalové pochody podľa Kohno a ďalší, 1996, Van Schaick a ďalší, 1996. Je dokonca pravdepodobné, že bronchokonstrikčné účinky adenozínu u astmatikov môžu byť sprostredkované cez receptor A3 pre adenozín podľa Kohno a ďalší, 1996.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu sú 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I

(I) .0 • · kde

R¹ a R² nezávisle znamenajú niektorú z nasledujúcich skupín:

i) C3-8cykloalkyl, ii) atóm vodíka, iii) (aryl)₂CHCH₂-, iv) C3.8cykloalkyl-Ci-6alkyl,

v) Ci.₈alkyl, vi) aryl-Ci-ealkyl, vii) R⁴R⁵N-Ci-₆alkyl, viii) Ci.₆alkyl-CH(CH₂OH)-, ix) aryl-C₁.5alkyl-CH(CH₂OH)-,

x) aryl-Ci-5alkyl-C(CH₂OH)₂-, xi) 03-ecykloalkyl, nezávisle substituovaný jednou alebo viacerými skupinami, napríklad 1, 2 alebo 3 skupinami -(CH₂)_PR⁶, xii) H₂NC(=NH)NHCi.₆alkyl, xiii) skupinu všeobecného vzorca (CH₂)_b alebo podobnú skupinu, v ktorej je jeden atóm uhlíka metylénovej skupiny, susediaci so skupinou X alebo obidva tieto atómy, substituované metylovou skupinu, xiv) -Ci-6alkyl-OH, xv) -C-i-ehalogénalkyl, xvi) skupinu všeobecného vzorca

xvii) aryl, a xviii) -(CH₂)fSO₂NHg(Ci^alkyl)₂._g alebo -(CH₂)fSO₂NH_g(arylCi.4alkyl)₂.g,

R³ znamená metyl, etyl, -CH=CH₂, n-propyl, -CH₂CH=CH₂, -CH=CHCH₃, izopropyl, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, cyklopropylmetyl, cyklopropenylmetyl,

··· ···· ·· ···· ··

-CH(OH)CH₂, -(CH₂)_qhalogén, -(CH^YÍCH^H, -(CH₂)_kZ, -(CH₂)_hCO(CH₂)_oH, -(CH₂)_rS(O)_t(CH₂)_sH alebo -(CH₂)_kC((CH₂)_uH)=NO(CH₂)_vH,

Y znamená O, S alebo N(CH₂)jH,

Z znamená -COO(CH₂)íH alebo -CON(CH₂)_mH((CH₂)_nH), a a b nezávisle znamenajú celé čísla 0 až 4 za predpokladu, že a+b je v rozmedzí 3 až 5, c, d a e nezávisle znamenajú celé čísla 0 až 3 za predpokladu, že c+d+e je v rozmedzí 2 až 3, f znamená 2 alebo 3 a g znamená celé číslo 0 až 2, p znamená 0 alebo 1, q znamená celé číslo 0 až 3, h znamená celé číslo 0 až 2, i znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+i je v rozmedzí 0 až 3, j znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+i+j je v rozmedzí 0 až 3, k znamená 0 alebo 1,

I znamená 1 alebo 2, pričom k+l je v rozmedzí 1 až 2, m a n nezávisle znamenajú celé číslo 0 až 2, pričom k+m+n je v rozmedzí 0 až 2, o znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+o je v rozmedzí 0 až 2, r a s nezávisle znamenajú 1 alebo 2, pričom r+s je v rozmedzí 2 až 3, t znamená 1 alebo 2, u a v nezávisle znamenajú 0 alebo 1, pričom k+u+v je v rozmedzí 0 až 1,

R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka, Ci^alkyl, aryl, aryl-Ci-6alkyl alebo môže skupina NR⁴R⁵ znamenať pyridinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo /V-C-i-ealkylpiperazinyl alebo 2-(1-metyl-1/-/-imidazol-4yi)-.

R⁶ znamená -OH, -NH₂, -NHCOCH3 alebo atóm halogénu,

R⁷ znamená atóm vodíka, Ci^alkyl, Ci-ealkylaryl alebo -COCi^alkyl,

X znamená NR⁷, O, S, SO alebo SO₂, ako aj soli a solváty týchto zlúčenín.

Ci-ealkyl znamená alifatický uhľovodíkový zvyšok s priamym alebo rozvetveným reťazcom, nasýtený alebo nenasýtený a obsahujúci 1 až 6 atómov uhlíka.

• ·

Podobným spôsobom je možné interpretovať skupiny s inou dĺžkou reťazca ako je C^alkyl, Ci.₅alkyl, C-i-ealkyl. To isté sa týka aj alkoxyskupiny. Výhodne sú uvedené skupiny nasýtené.

Aryl znamená mono- a bicyklické aromatické kruhy, ako fenyl alebo naftyl a tiež heterocyklické aromatické kruhy, obsahujúce 1 až 3 heteroatómy zo skupiny N, O a S, napríklad pyridinyl, pyrimidinyl, tiofenyl, imidazolyl, chinolinyl, furanyl, pyrolyl alebo oxazolyl, prípadne substituované napríklad substituentmi zo skupiny Ci.₆alkyl, atóm halogénu, hydroxyskupina, nitroskupina, Ci-ealkoxyskupina, kyanoskupina, aminoskupina, -SO2NH2 alebo -CH2OH.

Príkladom C3-ecykloalkylových skupín vo význame R¹ a R² môžu byť monocyklické skupiny, ako je cyklopentyl alebo cyklohexyl a bicyklické skupiny, napríklad norbornyl ako je exonorborn-2-yl.

Zo skupín (aryl)₂CHCH2- vo význame R¹ a R² je možné uviesť skupinu Ph₂CHCH₂- alebo podobnú skupinu, v ktorej je jedna alebo obidve fenylové skupiny substituované, napríklad atómom halogénu alebo CMalkylovým zvyškom.

Príkladom C3-ecykloalkylCi^akylu vo význame R¹ a R² môže byť etylcyklohexyl.

Ako príklad Ci-ealkylovej skupiny vo význame R¹ a R² je možné uviesť skupiny -(CH₂)₂C(Me)3, -CH(Et)₂a CH₂=C(Me)CH₂CH₂-.

Z arylCi-6alkylových skupín vo význame R¹ a R² je možné uviesť skupiny -(CH₂)₂Ph, -CH₂Ph, v ktorých fenylová skupina môže byť raz alebo viackrát substituovaná atómom halogénu, napríklad fluóru alebo jódu, aminoskupinou, metoxyskupinou, hydroxyskupinou, -CH₂OH alebo -SO₂NH₂, ďalej môže ísť o -(CH₂)₂-pyridinyl, napríklad -(CH₂)₂-pyridín-2-yl, prípadne substituovaný aminoskupinou, -(CH₂)₂-imidazolyl, napríklad 1H-imidazol-4-yl, v tejto skupine môže byť imidazolyl prípadne A/-substituovaný Cí^alkylovým zvyškom, najmä metylovým zvyškom.

Ako príklady skupiny R⁴R⁵N-Ci-6alkyl vo význame R¹ a R² je možné uviesť etylpiperidín-1-yl, etylpyrolidín-1-yl, etylmorfolín-1-yl, -(CH₂)₂NH(pyridín-2-yl) a

-(CH₂)₂NH₂.

Príkladom skupiny Ci-6alkyl-CH(CH₂OH)- vo význame R¹ a R² je napríklad

Me₂CHCH(CH₂OH)-.

··

-8Skupiny arylCi-5alkyl-CH(CH₂OH)- vo význame R¹ a R² zahrnujú skupinu PhCH₂CH(CH₂OH)- a najmä skupinu vzorca

OH

Ako príklad skupiny arylCi.₅alkyl-C(CH₂OH)₂ vo význame R¹ a R² je možné uviesť skupinu PhCH₂C(CH₂OH)₂-.

Príkladom C₃-ecykloal kýlových skupín, nezávisle substituovaných jednou alebo väčším počtom (1, 2 alebo 3) skupín -(CH₂)_PR⁶ vo význame R¹ a R² je napríklad možné uviesť 2-hydroxycyklopentyl a 4-aminocyklohexyl, najmä trans-4aminocyklohexyl.

Skupiny H₂NC(=NH)NHCi-6alkyl vo význame R¹ a R² zahrnujú skupinu H₂NC(=NH)NH(CH₂)₂-.

Príkladom skupiny

x (CH₂)f vo význame R¹ a R² je možné uviesť pyrolidín-3-yl, piperidín-3-yl, piperidín-4-yl, tetrahydro-1,1-dioxidtiofén-3-yl, tetrahydropyrán-4-yl, tetrahydrotiopyrán-4-yl, 1-oxohexahydro-1 X4-tiopyrán-4-yl a 1,1-dioxohexahydro-1X6.tiopyrán-4-yl alebo deriváty týchto skupín, v ktorých atóm dusíka v kruhu je substituovaný Ci.₆alkylovou skupinou, napríklad metylovou skupinou, Ci^alkylacylovou skupinou, ako je napríklad acetylová skupina, arylCi_6alkylovou skupinou alebo benzylovou skupinou.

Skupiny -Ci-6alkyl-OH vo význame R¹ a R² zahrnujú napríklad skupinu -CH₂CH₂OH.

Ci-ehalogénalkylové skupiny vo význame R¹ a R² sú napríklad skupiny -CH₂CH₂CI a (CH₃)₂CIC(CH₂)₃-.

Príkladom skupín všeobecného vzorca (CH₂)_cCO(CH₂) —Q J^NR? ^(CH₂)_e/

-9vo význame R¹ a R² je možné uviesť 2-oxopyrolidín-4-yl, 2-oxopyrolidin-5-yl alebo deriváty týchto skupín, v ktorých je atóm dusíka v kruhu substituovaný C1.6alkylovou skupinou, ako je napríklad metylová skupina alebo benzylovou skupinou.

Ako príklad arylovej skupiny vo význame R¹ a R² je možné uviesť fenyl, prípadne substituovaný atómom halogénu, napríklad fluóru, najmä v polohe 4.

Ako príklady skupiny -(CH2)fSO2NH_g(CMalkyl)₂-g vo význame R¹ a R² je možné uviesť skupiny -(ChhhSC^NHMe a príkladom skupiny (CH2)fSO2NHg(arylCi-4alkyl)2_g môže byť vo význame R¹ a R² skupina -(CH2)2SO2NHCH2Ph.

Vo význame R⁷ môže byť príkladom Ci-6alkylového zvyšku metyl, príkladom Ci-6alkylarylového zvyšku vo význame R⁷ môže byť benzyl a príkladom COCi-6alkylovej skupiny vo význame R⁷ môže byť -COCH3.

Vo výhodných uskutočneniach neznamenajú R¹ a R² súčasne atómy vodíka.

Výhodným významom pre R¹ je C3-ecykloalkyl, (aryl^CHCHk-, arylCi-ealkyl, Ci-ealkylaryl, -(CH₂)fSO2NHg(CMalkyl)₂^, tetrahydropyrán-n-yl alebo tetrahydrotiopyrán-n-yl, kde n znamená 3 alebo 4, C3-8cykloalky1Ci_6alkyl, atóm vodíka alebo R⁴R⁵N-Ci^alkyl, kde NR⁴R⁵ spoločne tvoria piperidinyl alebo morfolinyl.

Výhodným významom pre R¹ je tiež Ci-6alkyl-CH(CH2OH)-, 1,1-dioxohexahydro-1 A.6-tiopyrán-4-yl, /V-acetylpiperidín-4-yl, 1 S-hydroxymetyl-2-fenyletyl, piperidín-4-yl a 1-oxohexahydro-1X4-tiopyrán-4-yl.

Výhodným významom pre R² môžu byť skupiny C^ealkyl-OH, H2NC(=NH)NHCi-6alkyl, R⁴R⁵NCi-6alkyl, kde NR⁴R⁵ spoločne tvoria pyridinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl), arylCi-5alkylCH(CH2OH)-, aryl, C3_8cykloalkylCi_6alkyl, tetrahydro-1,1-dioxidtiofén-3-yl, C3-ecykloalkyl, Ci_6alkylΟΗ(ΟΗ2ΟΗ)-, arylCi-6alkyl, pyrolidín-3-yl, 2-oxopyrolidín-4-yl, 2-oxopyrolidín-5-yl, piperidín-3-yl, arylCi_6alkyl, ako benzyl, C3-ecykloalkyl, nezávisle substituovaný jednou alebo väčším počtom skupín, ako 1, 2 alebo 3 skupinami -(CH₂)_PR⁶ alebo piperidίη-4-yl, v ktorom je atóm dusíka v kruhu prípadne substituovaný Ci-6alkylovou skupinou.

Výhodným významom pre R² je tiež C^alkyl alebo R⁴R⁵NCi-6alkyl, kde R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo aryl alebo skupina R⁴R⁵N spoločne znamená pyrolidinyl.

·· ·· ·· · • · · · · · ·· • · · · · · ··· ···· · • · · · · · ·· ···· ·· ···

-10V prípade, že R³ znamená atóm halogénu, je výhodný bróm alebo chlór, najmä bróm.

R³ výhodne znamená metyl, etyl alebo n-propyl.

R³ výhodne znamená -CH=NQH, cyklopropyl, COOCH3, -COOCH2CH3,

-CH2OH, -CH(OH)CH3 alebo atóm halogénu.

Zvlášť výhodným významom pre R³ je metyl, etyl, n-propyl, -CH₂OH,

-CH(OH)CH₃, -CH=NOH alebo atóm halogénu.

Zvlášť výhodným významom pre R³ je metyl, etyl, -CH₂OH alebo

-CH(OH)CH3, najmä metyl, etyl alebo -CH₂OH, špecificky etyl alebo -CH₂OH, najvýhodnejším významom je etyl.

Zvlášť výhodným významom pre R⁴ a R⁵ je nezávisle atóm vodíka, C^alkyl, aryl, arylCi-6alkyl alebo NR⁴R⁵ znamená pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo /V-Ci-ealkylpiperazinyl.

Zvlášť výhodným významom pre R⁴ a R⁵ je atóm vodíka, C-i-ealkyl alebo aryl alebo tvorí skupina NR⁴R⁵ spoločne pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo /V-metylpiperazinyl.

Výhodným významom pre p je 0. R⁶ výhodne znamená OH alebo NH₂ a najmä OH.

Symbol q výhodne znamená 0 alebo 1 a najmä 0. Výhodným významom pre

Y je atóm kyslíka a pre Z skupina -COOCH3. Skupina -(CH₂)_hY(CH₂)iH výhodne znamená skupinu -(CH₂)i.₂OH. Výhodným významom pre k je 0. Výhodným významom pre u a vje taktiež 0 a pre r a sje 1. Skupina -(CH₂)hCO(CH₂)_oH výhodne znamená -COCH3. Výhodným významom pre I je 1.

Symboly a a b výhodne súčasne znamenajú 2. Výhodným významom pre X je skupina NR⁷, O, S alebo SO₂, najmä O alebo S.

Výhodným významom pre c je 0, pričom buď d znamená 2 a e znamená 0 alebo d znamená 1 a e znamená 1.

R⁷ výhodne znamená atóm vodíka, Ci^alkyl, C-i-ealkylaryl alebo -COCH3, najmä atóm vodíka, benzyl alebo COCH3, najvýhodnejšie atóm vodíka.

R³ výhodne znamená metyl, etyl alebo n-propyl a R⁷ atóm vodíka, Ci.₆alkyl,

Ci^alkylaryl alebo -COCH₃.

• ·

Μ · Λ · · · · · · • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ··

-11 Zvlášť výhodným významom pre R¹ je C₄-7cykloalkyl, najmä cyklopentyl, Ph2CHCH₂-, PhCH₂CH2-, C^alkyl, najmä -(CH₂)₂C(Me)3 alebo -CH(Et)₂ a fenyl, substituovaný tak hydroxyskupinou ako aj atómom halogénu, ako je fluór, ide teda napríklad o 3-fluór-4-hydroxyfenyl, ďalej -(CH₂)₂SO₂NHMe alebo tetrahydropyrán-nyl alebo tetrahydrotiopyrán-n-yl, kde n = 4.

Špecifickým výhodným významom pre R¹ je atóm vodíka, 1 S-hydroxymetyl2-metylpropyl, 3-jód-fenylmetyl, cyklohexyletyl, benzyl, 1,1-dioxohexahydro-1.X.6tiopyrán-4-yl, A/-acetylpiperidín-4-yl, 1S-hydroxymetyl-2-fenyletyl, piperidín-4-yl a 1oxohexahydro-1.X.4-tiopyrán-4-yl.

Najvýhodnejším významom pre R¹ je -CH₂CHPh₂, -CH(Et)₂ alebo fenyletyl.

Výhodným významom pre R² je C^alkyl-OH, H2NC(=NH)NHC2^alkyl alebo R⁴R⁵N-C2^alkyl, v ktorom NR⁴R⁵ spoločne tvoria pyridinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo 2-( 1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl).

Zvlášť výhodným významom pre R² je 2-(1 -metyl-1 A7-imidazol-4-yl)etyl, pyridín-2-yletyl, 1S-hydroxymetyl-2-fenyletyl, pyridin-2-yl-NH(CH₂)₂-, 4-(H₂NSO₂)fenyletyl, ŕrans-4-aminocyklohexyl, ŕrans-4-(CH₂CONH)cykolohexyl, pyrolidín-3-yl,

3,4-dimetoxyfenyletyl, /V-benzyl-pyrolidin-3-yl, pyrolidín-1-yletyl, aminoetyl alebo etyl.

Najvýhodnejším významom pre R² je piperidín-1-yletyl alebo 2-(1 -metyl-1 Himidazol-4-yl)etyl.

Najvýhodnejšími zlúčeninami všeobecného vzorca I sú nasledujúce zlúčeniny: (2R,3/?,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-

5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-fenetylamino-2-(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-5[3-(1-hydroxyetyl)izoxazol-5-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol, ·· • ···· ·· ·· • · ··

9· • · · •· · ·· ···· • · •· · •· •9

9· • · · (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-7H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-metylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-7H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-hydroxymetylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, ako aj soli a solváty týchto látok.

Vo všeobecnom vzorci I je znázornená absolútna stereochémia. V prípade, že bočné reťazce obsahujú stredy chirality, zahrnuje vynález aj zmesi enantiomérov vrátane racemických zmesí, diastereoméry a jednotlivé enantioméry. Všeobecne je výhodné použitie zlúčenín všeobecného vzorca I vo forme čisteného jednotlivého enantioméru.

Súčasť podstaty vynálezu tvorí aj spôsob výroby derivátov všeobecného vzorca I, v ktorom sa

a) na zlúčeninu všeobecného vzorca II

kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, ako je atóm halogénu, najmä chlóru, alebo na jej chránený derivát, pôsobí zlúčeninou R²NH2 alebo jej chráneným derivátom;

alebo sa

b) na zodpovedajúcu zlúčeninu všeobecného vzorca III

(III)

·· ·· ·· • · · · · • · · · · ··· pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca IV

(IV) kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo jej chráneným derivátom, alebo sa

c) premení takto získaný derivát všeobecného vzorca I na iný derivát všeobecného vzorca I, alebo sa

d) odštiepi z chráneného derivátu všeobecného vzorca I ochranná skupina, a potom sa prípadne premení derivát všeobecného vzorca I alebo jeho soľ na inú soľ.

Reakcia podľa postupu a) sa zvyčajne uskutočňuje zahriatím reakčných zložiek na teplotu 50 až 150 °C v prítomnosti inertného rozpúšťadla, napríklad DMSO. Derivát všeobecného vzorca II sa obyčajne použije vo forme, v ktorej sa obidve hydroxylové skupiny chránené, napríklad acetylovou skupinou.

Pri uskutočňovaní postupu b) je výhodné použiť zlúčeninu všeobecného vzorca IV, v ktorej sú 2- a 3-hydroxylové skupiny ribózy chránené, napríklad acetylovými skupinami. Odštiepiteľnou skupinou L môže byť hydroxyskupina, výhodne ide o Ci-6alkoxyskupinu, ako napríklad metoxyskupinu alebo etoxyskupinu, esterovú skupinu, ako je acetyloxyskupina alebo benzoyloxyskupina alebo atóm halogénu. Výhodnou odštiepiteľnou skupinou L je acetyloxyskupina. Reakciu je možné uskutočniť zmiešaním reakčných zložiek v inertnom rozpúšťadle, ako je MeCN v prítomnosti Lewizovej kyseliny, ako je TMSOTf a DBU.

Príkladom uskutočnenia postupu c) môže byť premena derivátov všeobecného vzorca I, v ktorom R³ znamená atóm halogénu, napríklad brómu, na zodpovedajúci derivát všeobecného vzorca I, v ktorom R³ znamená alkyl alebo chránenú alkoholovú skupinu. Postup je možné uskutočniť napríklad pôsobením kovového reakčného činidla, ako napríklad halogenidu horečnatého alebo zinočnatého, prípadne v prítomnosti ďalšieho kovu, napríklad paládia ako katalyzátora v prítomnosti ligandov, ako je PPh₃. Deriváty všeobecného vzorca I, • ·

-14• ·· ·· · · • · • · • · ······· ·· ·· • · · · •· · •· · • ·· ·· ···· ·· · • ··· • ·· • ·· • ·· ····· v ktorých R³ znamená atóm halogénu, napríklad atóm brómu, je možné premeniť na zodpovedajúce deriváty všeobecného vzorca I, v ktorých R³ znamená alkoxyskupinu pôsobením zodpovedajúceho alkoxidu kovu, ako je KOCH₃ v zodpovedajúcom alkoholovom rozpúšťadle.

Pri uskutočňovaní spôsobu d) je možné príklady ochranných skupín a spôsob ich odstránenia nájsť v publikácii T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, J. Wiley and Sons, 1991. Vhodnými ochrannými skupinami na hydroxyskupine sú napríklad alkyl, ako metyl, acetálové skupiny, ako acetonidy a acylové skupiny, ako acetyl alebo benzoyl. Tieto skupiny je možné odstrániť hydrolýzou. Ďalšou vhodnou skupinou je arylalkyl, ako napríklad benzyl, odstrániteľný katalytickou hydrogenolýzou. Výhodnými ochrannými skupinami na aminoskupine sú napríklad sulfonyl ako tosyl, acyl ako je benzoylkarbonyl alebo ŕerc-butoxykarbonyl a arylalkyl, ako napríklad benzyl, tieto skupiny je možné odstrániť hydrolýzou alebo hydrogenolýzou podľa potreby.

Uskutočniť je možné aj ďalší postup e), ktorý spočíva vtom, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca Ila

kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, ako atóm halogénu, najmä chlóru, alebo na jej chránený derivát, pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R¹NH₂ alebo jej chráneným derivátom.

Reakciu je možné uskutočniť za podmienok, ktoré boli opísané vyššie pre postup a).

Výhodnými soľami zlúčenín všeobecného vzorca I sú fyziologicky prijateľné soli, napríklad adičné soli s kyselinami, odvodené od anorganických a organických kyselín, napríklad hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, fosfáty, acetáty, benzoáty, citráty, jantarany, mliečnany, vínany, fumaráty a maleáty, 1-hydroxynaftoáty, metán

-15sulfonáty a tiež soli s anorganickými bázami, napríklad soli s alkalickými kovmi, ako sú sodné soli. Tie soli, ktoré nie sú fyziologicky prijateľné, je možné použiť na prípravu zlúčenín vzorca I a ich fyziologicky prijateľných soli. Ako príklady týchto solí je možné uviesť trifluóracetáty a mravčany.

Príkladom vhodných solvátov zlúčenín všeobecného vzorca I môžu byť ich hydráty.

Adičné soli uvedených látok s kyselinami je možné pripraviť tak, že sa na voľnú látku všeobecného vzorca I pôsobí príslušnou kyselinou.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II je možné pripraviť tak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca V

kde L¹ a L² nezávisle znamenajú odštiepiteľné skupiny, najmä atómy halogénu, ako je chlór, alebo na jej chránený derivát pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R¹NH₂.

Táto reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti bázy, napríklad amínu, ako napríklad diizopropyletylamínu v rozpúšťadle, napríklad DMF alebo alkohole ako je izopropanol pri zvýšenej teplote, napríklad 50 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V je možné získať tak, že sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca IV s purínovým derivátom, ako je dihalogénpurín, najmä 2,6-dichlórpurín za podmienok, aké boli opísané v prípade postupu b).

Zlúčeniny všeobecného vzorca I je tiež možné pripraviť spôsobom analogickým postupu b).

Zlúčeniny všeobecného vzorca IV alebo ich chránené deriváty je možné pripraviť zo zlúčenín všeobecného vzorca VI

-16·· ·· ·· ·· • · · · · · · • f · · · • · · · · · • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ·♦ ·

tak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca VI pôsobí roztokom kyseliny trifluóroctovej vo vode a potom anhydridom kyseliny octovej v rozpúšťadle ako je pyridín, EfeN, DCM alebo v zmesi týchto rozpúšťadiel.

Zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorých L znamená atóm halogénu je možné pripraviť zo zodpovedajúceho 5-alkoholu alebo 5-esteru, napríklad z acetátu. Reakcia sa zvyčajne uskutočňuje pôsobením bezvodej HCI alebo HBr. 5-Jodidy je možné pripraviť priamo pôsobením trimetylsilyljodidu a 5-fluoridy je možné pripraviť pôsobením DAST. Zvyčajne sa použije inertné rozpúšťadlo, ako dietyléter, DCM, THF alebo CCI₄.

Zlúčeninu vzorca VI je možné pripraviť podľa nasledujúcej schémy 1.

Schéma 1

(VI)

• ··	·· ··	·· ·
• · · ·	• · · ·	• ·	• ·
• ·	• · ·	• ·	•
• ·	• · · ·	• · ·	•
• ·	• · ·	• ·	•
·······	·· ····	··	• · ·

Všeobecné podmienky pre stupne 1 až 5 tejto schémy sú odborníkom známe. Je tiež zrejmé, že podmienky a reakčné činidlá, boli uvedené len ako príklady, odborník ľahko zvolí inú kombináciu na dosiahnutie toho istého výsledku. Napríklad vstupní 1 je možné použiť iný alkohol, napríklad Ci.₆alkylalkohol na zavedenie odlišnej odštiepiteľnej Ci-6alkyloxyskupiny v zlúčeninách všeobecného vzorca VI.

Niektoré zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorých L znamená OMe, je tiež možné pripraviť podľa nasledujúcej schémy 1A.

Schéma 1A

Stupeň (a) (i)CDI/DCM (ii)MeN(OMeJOH

Stupeň (c) (i) hydroxylamln/MeOH (ii) k. HCI/MeOH/teplo

OH OH

V prípade, že R³ znamená -CH2OH, sú vhodnými podmienkami na uskutočnenie stupňa b) pôsobením vhodným reakčným činidlom s obsahom lítia, ako je nBuLi/HC=CCH2OTHP a potom BF3.Et2O v prítomnosti inertného rozpúšťadla, ako je THF pri nízkych teplotách, typicky -78 °C. V prípade, že R³ znamená alkyl, najmä etyl, transformáciu je možné uskutočniť za použitia Grignardovho reakčného činidla, ako je MgBrCsCCH2CH₃ v inertnom rozpúšťadle, ako je THF s následným spracovaním reakčnej zmesi.

Zlúčeniny všeobecného vzorca III je možné pripraviť napríklad podľa nasledujúcej schémy 2.

Schéma 2

známa zlúčenina

Schéma 2 - pokračovanie	POCI31 Λ/,/V-dimetylanilin, MeCN, reflux
NHR1 JÓ5 r’hn^n^n (iii)	Cl MeOH.R’NHj O	r
90-100°C R’HN N	M H

Zlúčeniny všeobecného vzorca II je tiež možné pripraviť podľa nasledujúcej schémy 3.

Schéma 3

Stupeň 4 AcOH-H₂O 100°C, 4.5h

(II) ·· ·· • ·

·· • ···· ·· ···· • · · • · ·· ·

Výhodnou odštiepiteľnou skupinou L je atóm halogénu, najmä chlóru.

Všeobecné podmienky uvedené pre stupne 1 až 4, sú odborníkom známe. Je tiež zrejmé, že reakčné činidlá a reakčné podmienky, uvedené v schéme 2, sú len príkladom a v celom rade prípadov je možné použiť aj iné podmienky na dosiahnutie tej istej chemickej premeny vrátane modifikácie ochranných skupín. Tieto možnosti sú odborníkom taktiež známe.

Podmienky uvedené v stupňoch 1 až 4 schémy 3, sú tiež vhodné na tvorbu substituovaného izoxazolylového kruhu v zlúčeninách vzorcov IV, V a VI.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II je možné pripraviť aj spôsobom, ktorý spočíva v tom, že sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca XI

NHR (XI)

HO

OH kde L znamená odštiepiteľnú skupinu, ako je atóm halogénu, najmä chlóru, alebo jej chránený derivát s nitriloxidom, odvodeným od zlúčeniny všeobecného vzorca R³CH₂NO₂. Vhodné podmienky pre túto reakciu boli opísané vyššie v stupni 5 schémy 1. Je výhodné použiť zlúčeniny vzorca XI ako derivát, v ktorom sú obe hydroxylové skupiny chránené formou acetylesteru.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XI, najmä tie, v ktorých L znamená atóm chlóru, je možné pripraviť zo zodpovedajúcich dichlórpurínových derivátov, ktoré je možné získať zo zlúčenín, ktoré sú produktom schémy 1. V stupni 4 sa používajú bežné postupy alebo postupy, ktoré budú opísané v nasledujúcich príkladoch.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II je možné pripraviť aj spôsobom, ktorý spočíva v tom, že sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca XI alebo jej chránený derivát so zlúčeninou všeobecného vzorca XII ^OH

Hal (XII) ·· ·· • · · · • · ·

·· ·· ···· kde Hal znamená atóm halogénu, napríklad chlóru alebo brómu.

Reakcia môže prebiehať tak, že sa reakčné zložky zmiešajú v prítomnosti slabej zásady, napríklad hydrogénuhličitanu sodného alebo trietylamínu v prítomnosti systému polárnych organických rozpúšťadiel, môže ísť napríklad o zmes etylacetátu a vody alebo DMF.

Zlúčeniny všeobecného vzorca II, v ktorých R³ znamená CH(OH)CH3, je možné pripraviť redukciou zodpovedajúceho metylketónu s použitím bežných reakčných činidiel, ako NaBH4. Zodpovedajúci metylketón je možné pripraviť z derivátu zlúčeniny všeobecného vzorca XII, v ktorom R³ znamená COCH₃.

Zlúčeniny všeobecného vzorca lla je možné pripraviť tak, že sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca XIII (XIII) so zlúčeninou všeobecného vzorca IV za podmienok, podobných tým, ktoré boli opísané vyššie pre hlavný postup b).

Zlúčeniny všeobecného vzorca XIII, v ktorých L znamená atóm chlóru, je možné pripraviť reakciou 2-brómoxantínu s R²NH2 a potom s POCI3. Deriváty zlúčenín všeobecného vzorca XIII, obsahujúce odlišnú odštiepiteľnú skupinu L, je možné pripraviť analogickými postupmi.

Zlúčeniny R¹NH2, R²NH2 a R³CH2NO2 sú známe látky alebo je možné ich pripraviť bežnými postupmi.

Zlúčeniny všeobecného vzorca VII je možné pripraviť spôsobom opísaným v medzinárodnej patentovej prihláške č. WO 94/17090.

Zlúčeniny vzorca R³ -=- MgCI je možné pripraviť známymi spôsobmi, napríklad reakciou metylmagnéziumchloridu s terminálnou acetylénovou zlúčeninou pri teplote 0 až 25 °C v THF.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XII sú známe látky alebo je možné ich pripraviť známymi spôsobmi.

-21 • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Ako už bolo uvedené vyššie, niektoré medziprodukty môžu byť použité v chránenej forme. Príklady ochranných skupín a spôsoby ich odštiepenia boli opísané vyššie v hlavnom postupe d).

Účinnosť zlúčenín všeobecného vzorca I vyvolať inhibíciu funkcie leukocytov je možné preukázať napríklad ich schopnosťou vyvolať inhibíciu tvorby superoxidu (O₂’) z neutrofilov, stimulovaných chemickými látkami, ako je napríklad N-formylmetionylleucylfenylalanín, fMLP. Zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa vynálezu je možné využiť na ochranu poškodenia tkaniva, vyvolaného leukocytmi pri tých ochoreniach, kde sú leukocyty priťahované do miesta zápalovej reakcie.

Ako príklady chorobných stavov, pri ktorých je možné očakávať pri podaní zlúčenín podľa vynálezu priaznivý protizápalový účinok je možné uviesť ochorenie dýchacích ciest, ako syndróm nedostatočnosti dýchacieho systému dospelých, ARDS, zápal priedušiek vrátane chronického zápalu, cystickú fibrózu, astmu, vrátane alergických reakcií, vyvolaných týmto spôsobom, chronické obštrukčné ochorenia pľúc, nádchu a septický šok. Ďalšie chorobné stavy, ktoré je možné uvedenými látkami zlepšiť zahrnujú choroby tráviacej sústavy, ako sú zápalové ochorenia vrátane dráždivého čreva, ide napríklad o Crohnovu chorobu alebo ulceratívny colitis, gastritída, vyvolaná Helicobacter pylorí a sekundárne zápalové ochorenia čriev po ožiarení alebo po pôsobení alergénu a tiež gastropatie, vyvolané nesteroidnými protizápalovými látkami. Okrem toho je možné zlúčeniny podľa vynálezu použiť na liečenie niektorých kožných ochorení, ako je lupienka, alergická dermatitída a rôzne reakcie, prejavujúce sa precitlivelosťou a tiež ochorenia centrálneho nervového systému so zápalovou zložkou, ako je Alzheimerova choroba a roztrúsená skleróza.

Ďalšími chorobami, na ktoré môžu mať zlúčeniny podľa vynálezu priaznivý vplyv sú choroby srdcového a obehového systému, ako sú choroby periférnych ciev, post-ischemické poškodenie po reperfúzii a idiopatický hypereozinofilný syndróm.

Zlúčeniny podľa vynálezu, ktoré vyvolávajú inhibíciu funkcie leukocytov môžu byť vhodné tiež ako imunosupresívne prostriedky pri autoimunitných ochoreniach, ako sú reumatoidná artritída a cukrovka.

Okrem toho môžu zlúčeniny podľa vynálezu byť použité na inhibíciu tvorby metastáz a na vyvolanie hojenia rán.

-22• · · · · · ···· · · · · • · · · · ·

Je zrejmé, že v prípade, že sa uvádza liečenie, môže ísť tak o liečenie už vyvinutej choroby, ako aj o prevenciu.

Ako už bolo uvedené, je možné zlúčeniny všeobecného vzorca I použiť v humánnom alebo veterinárnom lekárstve, najmä ako protizápalové látky.

Súčasť podstaty vynálezu tvoria tiež deriváty všeobecného vzorca alebo ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty na použitie v humánnom alebo veterinárnom lekárstve, najmä pri liečení chorých so zápalovými chorobami, pri ktorých dochádza k poškodeniu tkaniva pôsobením leukocytov.

Uvedené deriváty všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľné soli je možné použiť na výrobu farmaceutických prostriedkov, určených na liečenie zápalových ochorení, najmä chorých, u ktorých dochádza k poškodeniu tkaniva pôsobením leukocytov.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné na takéto prostriedky spracovávať akýmkoľvek bežným spôsobom. Súčasť podstaty vynálezu tvorí aj farmaceutický prostriedok s protizápalovým účinkom, obsahujúci ako svoju účinnú zložku zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty spolu s fyziologicky prijateľnými nosičmi alebo pomocnými látkami. Tieto farmaceutické prostriedky sa zvyčajne pripravujú bežným miešaním zložiek.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné napríklad spracovať na prostriedky, určené na perorálne, parenterálne, miestne alebo rektálne podanie, výhodné je parenterálne alebo miestne podanie, napríklad vo forme aerosólu. Najvýhodnejší spôsob podania je miestne podanie do pľúc, napríklad vo forme aerosólu alebo vo forme suchého prášku.

Tablety a kapsuly na perorálne podanie môžu obsahovať bežné pomocné látky, ako sú spojivá, napríklad sirup, akáciovú gumu, želatínu, sorbitol, tragant, povarený škrob, celulóza alebo polyvinylpyrolidón, ďalej plnivá, ako sú laktóza, mikrokryštalická celulóza, cukry, kukuričný škrob, fosforečnan vápenatý alebo sorbitol, klzné látky, ako sú stearan horečnatý, kyselina stearová, mastenec, polyetylénglykol alebo oxid kremičitý, dezintegračné činidlá, ako zemiakový škrob, sodná soľ zosietenej karmelózy alebo sodná soľ glykolátu škrobu alebo zmáčadlo, napríklad laurylsíran sodný. Tablety môžu byť potiahnuté zvyčajným spôsobom. Kvapalné prostriedky na perorálne podanie môžu mať napríklad formu suspenzií,

-23• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· roztokov alebo emulzií vo vode alebo v oleji, sirupov alebo elixírov, alebo môžu byť dodávané ako suché produkty, určené na rekonštitúciu vo vode alebo v inom nosnom prostredí tesne pred podaním. Tieto kvapalné prostriedky môžu obsahovať bežné prísady, ako suspenzné činidlá, ako sú sorbitolový sirup, metylcelulóza, glukózový sirup, želatína, hydroxymetylcelulóza, karboxymetylcelulóza, gél stearanu hlinitého alebo hydrogenované jedlé oleje, ďalej emulgačné činidlá, ako je lecitín, sorbitan monooleát alebo akáciová guma, nosné prostredie nevodnej povahy, vrátane jedlých olejov, ako sú mandľový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejov, propylénglykol alebo etylalkohol a tiež konzervačné prostriedky, ako sú metyl- alebo propyl-p-hydroxybenzoát alebo kyselina sorbová. Tieto prostriedky môžu obsahovať aj pufre, chuťové látky, farbivá a/alebo sladidlá, napríklad manitol.

Na podanie vstrebávaním ústnou sliznicou môžu prostriedky mať formu tabliet alebo kosoštvorčekových tabliet, pripravených bežnými postupmi.

Zlúčeniny môžu byť tiež spracované na čapíky, obsahujúce bežné základy na výrobu čapíkov, napríklad kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť tiež spracované na prostriedky, určené na parenterálne podanie jednorázovou injekciou alebo kontinuálnou infúziou a môžu byť dodávané vo forme s obsahom jednej alebo väčšieho počtu dávok, napríklad vo forme ampúl, liekoviek, infúzií s malým objemom alebo vopred naplnených injekčných striekačiek alebo môže ísť o fľaštičky s obsahom väčšieho počtu dávok a s prísadou konzervačného prostriedku. Tieto prostriedky môžu mať formu roztokov, suspenzií alebo emulzií vo vodnom alebo nevodnom nosnom prostredí a môžu obsahovať pomocné látky, ako sú antioxidačné činidlá, pufre, antimlkrobiálne látky a/alebo látky na úpravu osmotlckého tlaku. Účinnú zložku je možné dodávať vo forme prášku, určeného na zmiešanie s vhodným prostredím, napríklad sterilnou bezpyrogénnou vodou tesne pred použitím. V tomto prípade sa suchý prášok dodáva ako aseptický prášok v jednotlivých sterilných nádobkách alebo je možné plniť do nádobiek aseptický sterilný roztok a tento roztok potom lyofilizovať.

Pri miestnom podaní je zahrnuté aj podanie inhaláciou alebo insufláciou. Inak ako príklady prostriedkov na miestne podanie je možné uviesť masti, krémy, emulzie, prášky, pesary, spreje, aerosóly, kapsuly alebo ampuly na použitie

-24• · · · · · • · · · ···· • · · · · · v inhalačných alebo insuflačných prístrojoch, a roztoky, určené na rozprašovanie alebo kvapky, napríklad očné alebo nosné kvapky.

Masti alebo krémy môžu byť napríklad spracované pri použití vodného alebo olejového základu s pridaním vhodného zahusťovadla a/alebo gélov a/alebo rozpúšťadiel. Takýto základ môže obsahovať vodu a/alebo olej, ako kvapalný parafín alebo rastlinné oleje, napríklad arašidový olej alebo ricínový olej alebo rozpúšťadlo, ako je polyetylénglykol. Použitým zahusťovadlom môže byť mäkký parafín, stearan hlinitý, cetostearylalkohol, polyetylénglykoly, mikrokryštalický vosk a včelí vosk.

Emulzie môžu byť vyrobené s použitím vodného alebo olejového základu a zvyčajne budú obsahovať emulgačné činidlá, stabilizátory, dispergačné činidlá, suspenzné činidlá alebo zahusťovadlá.

Prášky na vonkajšie podanie sa pripravujú s použitím vhodného práškového základu, ako je mastenec, laktóza alebo škrob. Kvapky môžu byť pripravené vo vodnom alebo nevodnom prostredí a môžu obsahovať jeden alebo viac dispergačných, solubilizačných alebo suspenzných činidiel a vodné a nevodné bázy.

Spreje je možné pripraviť napríklad ako vodné roztoky alebo suspenzie alebo aerosóly, uložené do tlakových balení spolu s vhodným hnacím prostriedkom, ako je napríklad dichlórdifluórmetán, trichlórfluórmetán, dichlórtetrafluóretán, 1,1,1,2,3,3,3-heptafluórpropán, 1,1,1,2-tetrafluóretán, oxid uhličitý alebo iný vhodný plyn.

Spreje na aplikáciu do nosa môžu byť získané s použitím vodného alebo nevodného prostredia a pomocných látok, ako sú zahusťovadlá, pufre, kyseliny alebo bázy na úpravu pH, látky na úpravu osmotického tlaku alebo prípadne antioxidačné činidlá.

Kapsuly a ampuly, napríklad zo želatíny, alebo blistre s použitím laminovanej hliníkovej fólie na použitie v inhalačných alebo insuflačných prístrojoch môžu obsahovať práškovú zmes zlúčeniny podľa vynálezu a vhodného práškového nosiča, napríklad laktózy alebo škrobu.

Roztoky na inhaláciu rozprašovaním môžu byť vytvorené s použitím vodného nosného prostredia s pridaním rôznych pomocných látok, ako kyselín alebo báz,

-25pufrov, látok na úpravu osmotického tlaku alebo antimikrobiálnych látok. Prostriedky môžu byť sterilizované filtráciou alebo zahrievaním v autokláve alebo môže ísť o nesterilné výrobky.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu byť použité aj spoločne s inými látkami s liečebným účinkom, napríklad s protizápalovými látkami, ako sú kortikosteroidy, napríklad fluticazónpropionát, beclometazóndipropionát, mometazónfuroát, triamcinolonacetonid alebo -budesonid, alebo môže ísť o látky typu NSAID, ako je cromoglycat sodný alebo tiež o β-adrenergné látky ako je salmoterol, salbutamol, formoterol, fenoterol alebo terbutalín alebo ich soli a tiež o protiinfekčné látky, ako sú antibiotiká alebo protivírusové látky.

Podľa vynálezu je teda možné kombinovať deriváty všeobecného vzorca I alebo ich fyziologicky prijateľné soli alebo solváty sinými účinnými látkami, napríklad pritizápalovými látkami, ako sú kortikosteroidy alebo NSAID.

Vyššie uvedená kombinácia môže byť upravená na farmaceutický prostriedok, ktorý potom obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu, ďalšiu účinnú látku a farmaceutický prijateľný nosič.

Jednotlivé zložky uvedených kombinácií je možné podávať súčasne alebo následne v kombinovaných farmaceutických prostriedkoch alebo oddelene. Príslušné dávky jednotlivých účinných látok budú odborníkom zrejmé.

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť podávané napríklad v dávkach 0,01 až 500 mg/kg hmotnosti, výhodne 0,01 až 100 mg/kg hmotnosti 1 až 4 krát denne. Presná dávka bude závisieť od veku a celkového stavu chorého a od zvoleného spôsobu podania.

Niektoré vyššie opísané medziprodukty sú nové látky, ktoré tiež tvoria súčasť podstaty vynálezu.

Zlúčeniny podľa vynálezu majú v porovnaní so známymi látkami s podobnými účinkami tú výhodu, že sú účinnejšie, selektívnejšie, majú menej vedľajších účinkov, ich účinok je predĺžený a zlúčeniny sú dobre biologicky dostupné pri výhodných spôsoboch podania, majú menšiu systemickú účinnosť pri podávaní inhaláciou alebo majú iné žiadúce vlastnosti, ktoré známe látky používané na rovnaký účel, nemajú.

-26Zlúčeniny podľa vynálezu majú najmä tú výhodu, že majú vyššiu selektivitu pre podtyp 2a receptora adenozinu, najmä v porovnaní sinými podtypmi týchto receptorov, najmä pre podtypy A1 a A3 v porovnaní so známymi látkami.

Biologická účinnosť zlúčenín podľa vynálezu bola sledovaná in vitro a in vivo nasledujúcim spôsobom:

1) Agonistický účinok na receptory podtypov 2a, 1 a 3 pre adenozín

Selektivita zlúčenín podľa vynálezu proti rôznym podtypom receptora adenozinu bola stanovená na vaječníkových bunkách čínskeho škrečka, CHO po transfekcii génom pre príslušný ľudský receptor pre adenozín spôsobom, opísaným v publikácii Castanon M. J., Spevák W„ 1994. Bunky CHO boli tiež podrobené transfekcii cyklickými prvkami AMP, podporujúcimi gén na vylučovanie alkalickej fosfatázy placentou, SPAP podľa Wood, 1995. Účinok skúmaných látok bol stanovený na základe ich účinku na základnú koncentráciu cAMP (A2a) alebo na koncentráciu cAMP po podaní forskolínu (A1 a A3), čo sa prejaví zmenou koncentrácie SPAP. Týmto spôsobom boli stanovené hodnoty EC50 pre jednotlivé látky ako pomer účinnosti neselektívneho agonistu, ktorým je /V-etylkarboxamidadenozín, NECA.

2) Nahromadenie eozinofilov v pľúcnom tkanive senzitizovaných morčiat pôsobením antigénu

Morčatám senzitizovaným vaječným albumínom bol podaný merypamín v dávke 1 mg/kg i.p. na ich ochranu proti anafylaktickému bronchospazmu. Potom boli podané zlúčeniny podľa vynálezu inhaláciou aerosólu týchto látok počas 30 minút bezprostredne pred podaním ovalbumínu v priebehu 30 minút inhaláciou aerosólu z roztoku ovalbumínu pri koncentrácii 50 pg/ml. Po 24 hodinách boli morčatá usmrtené, pľúca boli vybraté a premyté. Potom sa stanoví celkový a diferenciálny počet leukocytov v kvapaline, vymytej z priedušiek a z pľúcnych komôr a stanoví sa dávka skúmanej látky, ktorá vyvolá 50% zníženie hromadenia eozinofilov, ED50 podľa Sanjar a ďalší, 1992.

-27• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Praktické uskutočnenie vynálezu bude vysvetlené nasledujúcimi príkladmi, ktoré však nemajú slúžiť na obmedzenie jeho rozsahu. Podrobnejšie údaje o vyššie uvedených literárnych citáciách budú uvedené v literatúre nižšie.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Všeobecne údaje

Všetky produkty v príkladovej časti boli čistené chromatografiou na stĺpci. Pod pojmom „rýchla chromatografia“ sa rozumie chromatografia na silikagéli s priemerom častíc 0,040 až 0,063 mm (napríklad Merck 9385), pričom elúcia stĺpca je urýchlená tlakom dusíka až 0,035 MPa (5 psi). Biotage používa Biotage Flash 40 systém s predloženou náplňou oxidu kremičitého, pričom elúcia stĺpca je urýchlená tlakom dusíka až 0,138 MPa (20 psi).V prípade chromatografie na tenkej vrstve, TLC, boli použité dosky silikagélu 5 x 10 cm (silikagél 60 F254, napríklad Merck 5719).

V prípade, že produkty boli čistené preparatívnou HPLC, bol tento postup uskutočňovaný na stĺpci C18 v reverznej fáze (Γ Dynamax) pri elúcii gradientom acetonitrilu (obsahujúceho 0,1% kyselinu trifluóroctovú) vo vode (obsahujúcej 0,1% kyselinu trifluóroctovú) a zlúčeniny boli izolované vo forme trifluórocetátov, v prípade že nie je vyslovene uvedené inak.

Štandardná automatizovaná preparatívna HPLC, stĺpec, podmienky a elučné činidlo

Automatizovaná preparatívna vysokotlaková kvapalinová chromatografia (autoprep. HPLC) bola vykonávaná pri použití stĺpca Supelco ABZ+5 pm, 100 x 22 mm, elúcia bola vykonávaná zmesou rozpúšťadiel i) 0,1% kyselina mravčia vo vode a ii) 0,05% kyselina mravčia v acetonitrile, rozpúšťadlo je uvedené ako percentuálny obsah zložky ii) v systéme, rýchlosť elúcie bola 4 ml za minútu. Ak nie je uvedené inak, bol použitý gradient 5 až 95 % v priebehu 20 minút.

Systém LC/MS

Na kombináciu kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektroskopie boli použité nasledujúce systémy:

-28• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Systém A: A Supelco ABZ+, 3,3 cm x 4,6 mm vnútorný priemer, na elúciu boli použité rozpúšťadlá: A - 0,1 % obj. kyseliny mravčej + 0,077 g octanu amónneho na 100 ml vody a B - 99:5 acetonitriLvoda + 0,05 % obj. kyseliny mravčej. Bol použitý nasledujúci gradient: 100 % A na 0,7 min, A+B gradient 0 až 100 % B na 3,5 min, 100 % B na 3,5 min, návrat k 0 % B v priebehu 0,3 min. Bola použitá pozitívna a negatívna ionizácia.

Systém B: A Supelco ABZ+, 5 cm x 2,1 mm vnútorný priemer, na elúciu boli použité rozpúšťadlá: A - 0,1 % obj. kyseliny mravčej + 0,077 g octanu amónneho na 100 ml vody a B-95:5 acetonitriLvoda + 0,05 % obj. kyseliny mravčej. Bol použitý nasledujúci gradient: 0 až 100 % B na 3,5 min, 100 % B na 1,5 min, návrat k 0 % B v priebehu 0,5 min. Bola použitá pozitívna a negatívna ionizácia.

Systém C: A Supelco ABZ+, 3,3 cm x 4,6 mm vnútorný priemer, na elúciu boli použité rozpúšťadlá: A - 0,1 % obj. kyseliny mravčej + 10 mmol octanu amónneho vo vode a B-95:5 acetonitriLvoda + 0,05 % obj. kyseliny mravčej. Bol použitý nasledujúci gradient: 100 % A na 0,7 min, A+B zmes, gradient 0 až 100 % B na 3,7 min, podržanie pri 100 % B 0,9 min, návrat k 0 % B v priebehu 0,2 min. Bola použitá pozitívna a negatívna ionizácia.

Medziprodukty

Medziprodukt 1

Príprava 3-etyl-5-(6/?-metoxy-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aŕ?,6aŕ?)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S)izoxazolu

K zmesi, pripravenej zmiešaním 0,271 g (1,37 mmol) 4f?-etinyl-6R-metoxy-

2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aR,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]dioxolu (pozri referát v odbornom časopise Helv. Chim. Acta, 63, 1181 až 1189 (1980)) a 0,328 ml (3,01 mmol) fenylizokyanátu v 1,5 ml vysušeného toluénu sa po kvapkách pridala v atmosfére dusíka počas 5 minút zmes, získaná zmiešaním 0,134 ml (1,51 mmol) 1-nitropropánu a 0,038 ml (0,27 mmol) trietylamínu v 1,0 ml vysušeného toluénu. Počas tejto operácie sa pomaly vytvorila zrazenina.

··

Výsledná reakčná zmes sa potom zahrievala počas 18 hodín v tepelnom rozmedzí od 73 do 82 °C. Po ochladení sa zmes dôkladne premyla éterom a potom zmesou 40% etylacetát:cyklohexán a potom sa rozpúšťadlo odstránilo vo vákuu.

Získalo sa 0,487 g svetlohnedej tuhej látky, ktorá sa potom spracovala rýchlou stĺpcovou chromatografiou za použitia najskôr 20%-nej, potom 25%-nej a nakoniec 30%-nej zmesi etylacetát:cyklohexán ako elučného činidla.

Získalo sa 0,329 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme čírej látky olejovitej konzistencie.

Chromatografia na tenkej vrstve (TLC) za použitia 40%-nej zmesi etylacetát/cykohexán; detekcia v tanku s jódovými parami.

R_f = 0,49.

Medziprodukt 2

Medziprodukt 2a

Príprava 4R_J5S-diacetoxy-2S-(3-etyl-izoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej a

Medziprodukt 2b

Príprava 4R,5R-diacetoxy-2S-(3-etyl-izoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej

Roztok, pripravený rozpustením 0,355 g (1,32 mmol) medziproduktu 1, t.j. 3etyl-5-(6R-metoxy-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3a/?,6aR)-furo[3,4-d][1,3]di-oxol-4S)-izoxazolu, získaného v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného medziproduktu 1 v zmesi 5 ml kyseliny trifluóroctovej a 0,005 ml vody sa miešal pri teplote miestnosti počas 27 hodín a potom sa za vákua odparil.

Vzniknutý zvyšok sa v atmosfére dusíka po trojnásobnom spracovaní s toluénom rozpustil v 10 ml dichlórmetánu a k získanému roztoku, vychladenému na teplotu 0 °C sa pridalo 0,048 g (0,40 mmol) 4-(/V,/V-dimetylaminopyridínu, ďalej

8,30 ml (60,0 mmol) trietylamínu a nakoniec 2,49 ml (26,4 mmol) acetanhydridu.

-30• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Vzniknutá reakčná zmes sa miešala v rozmedzí teplôt od 0 °C až po teplotu miestnosti cez noc a potom sa za vákua odparila. Získalo sa 1,34 g zvyšku vo forme hnedej kvapaliny, ktorá sa ďalej spracovala rýchlou stĺpcovou chromatografiou za postupného použitia 20%-nej, 30%-nej a nakoniec 40%-nej zmesi etylacetátu v hexáne, ako elučného činidla.

Získalo sa 0,192 g žiadaného, v nadpise uvedeného Medziproduktu 2a vo forme svetlohnedej látky olejovitej konzistencie.

TLC (zmes 40%-ného etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia melybdenanu amónneho ako reagensu).

R_f = 0,28, a

0,16 g žiadaného, v nadpise uvedeného medziproduktu 2b vo forme svetlohnedej látky olejovitej konzistencie.

TLC (zmes 40%-ného etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia melybdenanu amónneho ako reagensu).

R_f = 0,22.

Medziprodukt 3

Príprava 4ŕ?-acetoxy-2R-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

K zmesi, pripravenej zmiešaním 0,909 g (2,67 mmol) zmesi medziproduktu 2a a medziproduktu 2b, získanej v rámci predchádzajúcej, vyššie opísanej prípravy medziproduktu 2, v 5 ml acetonitrilu, sa pridalo pri teplote 0 °C v atmosfére dusíka postupne 0,779 g (4,0 mmol), 2,6-dichlórpurínu, ďalej 0,692 ml (4,53 mmol) 1,8diazabicyklo[5.4.0]-undek-7-énu a 0,99 ml (5,06 mmol) trimetylsilyl-trifluórmetánsulfonátu (triflátu) a vzniknutá reakčná zmes sa potom miešala pri teplote miestnosti 20 hodín.

Potom sa zmes zmiešala s 30 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a po trojnásobnej extrakcii vždy so 40 ml etylacetátu sa získalo 3,54 g hnedej kvapaliny, ktorá sa prečistila rýchlou stĺpcovou chromatografiou za

-31 • ·· ·· ·· ·· ·· · · · · · · ··· • · · · · · · • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· použitia zmesi najskôr 40-ného a potom 50%-ného etylacetátu v cyklohexáne, ako elučného činidla.

Získalo sa 0,798 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovo-bielej látky penovitého charakteru.

TLC (zmes 60%-ného etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia molybdenanu amónneho ako reagensu alebo detekcia pod ultrafialovou lampou). R_f = 0,25.

Medziprodukt 4

Príprava metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6/?,6a/?)-6-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej

K roztoku, pripravenému rozpustením 6,015 g (11,23 mmol) kyseliny (3aS,4S,6/?,6a/?)-6-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej (pripravenej podľa postupu 4, publikovaného v rámci medzinárodnej patentovej prihlášky číslo WO 94/17090) v 30 ml vysušeného dichlórmetánu sa pridalo za stáleho miešania v atmosfére dusíka 2,37 g (14,60 mmol) karbonyl-diimidazolu a vzniknutá reakčná zmes sa miešala 1 hodinu.

K reakčnej zmesi, pripravenej vyššie opísaným spôsobom sa pridal dichlórmetánový roztok (25,8 mmol) Λ/,Ο-dimetylhydroxylamínu, získaný alkalizáciou 10 ml vodného roztoku 2,75 g príslušného hydrochloridu a vychladeného na teplotu 0 °C vodným roztokom hydroxidu sodného a následnou trojnásobnou extrakciou vždy s 5 ml dichlórmetánu a vysušením extraktu síranom sodným.

Táto zmes bola potom miešaná pri teplote miestnosti 60 hodín a potom sa zmiešala so 40 ml 10%-ného vodného roztoku kyseliny citrónovej (kyselina citrónová = kyselina 2-hydroxypropán-1,2,3-trikarboxylová) (hmotnosť/objem) a po oddelení organickej a vodnej fázy sa organická vrstva premyla 40 ml 8%-ného (hmotnosť/objem) vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a po vysušení síranom sodným sa prefiltrovala a rozpúšťadlo sa z filtrátu odstránilo vo vákuu.

-32··

Získalo sa 6,66 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme kremovobielej látky penovitého charakteru.

TLC (100% etylacetát, detekcia za použitia ultrafialovej lampy), Rf = 0,51.

Medziprodukt 5

Príprava 1-{6R-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S-yl}pent-2-ín-1-ónu

Tetrahydrofuránový roztok chlórmagnéziumetylacetylidu sa pripravil v atmosfére dusíka v teplotnom rozmedzí od 0 °C po teplotu miestnosti za miešania zmesi, získanej zmiešaním približne 10 ml etylacetylénu a 8,70 ml (26,0 mmol) 3M roztoku metylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne cez noc.

K výslednej šedej reakčnej zmesi rôsolovitého charakteru, udržiavanej v atmosfére dusíka a vychladenej na teplotu 0 °C sa pridal roztok, získaný rozpustením 5,012 g (8,66 mmol) medziproduktu 4, t.j. metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6R,6aR)-6-[2-chlór-6-(2,2-difenyletyl-amino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej, získaného v rámci vyššie opísanej prípravy medziproduktu 4 v 40 ml vysušeného tetrahydrofuránu.

Vzniknutá reakčná zmes sa potom, čo sa miešala pri teplote 0 °C 4 hodiny zmiešala s 50 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a potom sa 3x extrahovala vždy 50 ml etylacetátu. Po oddelení organickej a vodnej fázy sa etylacetátové extrakty vysušili síranom horečnatým a potom sa za vákua odparili.

Získalo sa 4,91 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme krémovobielej látky penovitého charakteru.

TLC (zmes etylacetátu:cyklohexánu v pomere 7:3, detekcia pod ultrafialovou lampou), R_f = 0,54.

Medziprodukt 6

Príprava 1-{6R-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S-yl}pentán-1,3-dión-3-oxímu • ·

-33··

Za stáleho miešania a pri teplote miestnosti sa k roztoku, pripravenému rozpustením 0,117 g (0,203 mmol) medziproduktu 5, t.j. 1-{6/?-[2-chlór-6-(2,2difenyletylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]dioxol4S-yl}pent-2-ín-1-ónu, získaného v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 5, pridal vodný roztok 0,019 ml (0,304 mmol) (50%-ný, hmotn. %, vo vode) hydroxylamínu a vzniknutá reakčná zmes sa potom, čo sa miešala 19 hodín za vákua nechala odparovať.

Vzniknutý zvyšok sa vytrepal medzi 5 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 10 ml etylacetátu a po oddelení vodnej a organickej fázy sa vodná vrstva extrahovala vždy 5 ml etylacetátu. Spojené organické etylacetátové extrakty sa vysušili síranom horečnatým a potom sa vákua sa odparili.

Získalo sa 0,121 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme tuhej látky gumovitej konzistencie.

Kombinovaný systém kvapalinovej chromatografie a hmotnostnej spektrometrie, systém A: LC/MS systém A: R_t = 4,78 minút; m/z = 605,0 (MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C3iH33³⁵CIN6O5.

Medziprodukt 7

Príprava (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Roztok, pripravený rozpustením 0,12 g (0,199 mmol) 1-{6/?-[2-chlór-6-(2,2difenyletylamino)purín-9-ylj-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3jdioxol4S-yl}pentán-1,3-dión-3-oxímu, t.j. medziproduktu 6, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 6, v zmesi 8 ml kyseliny octovej a 1 ml vody sa zahrieval pri teplote 100 °C 4,5 hodiny.

Po ochladení sa reakčná zmes za vákua odparila a získal sa roztok vo forme hnedej látky gumovitej konzistencie, ktorý sa prečistil pomocou rýchlej chromatografie za použitia zmesi najskôr 50%-ného a potom 70%-ného etylacetátu v cyklohexáne, ako elučného činidla.

·· ·· ·· • · · · · · • t 4 · • · · · · • · · · ···· ·· ···· ·· ·· • · · •e • ·· •· ·· ·

-34Získalo sa 0,073 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bezfarebnej tuhej látky gumovitej konzistencie.

TLC (100%-ný etylacetát, detekcia pod svetlom ultrafialovej lampy), Rf = 0,43.

Medziprodukt 8

Príprava 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etyl-propylamino)purín-9-yl]-5S-(3-etyl-izoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej

Zmes, pripravená zmiešaním 0,518 g (1,10 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 3, ďalej 0,29 ml diizopropyletylamínu (1,65 mmol) a 0,14 ml (1,21 mmol) 1-etylpropylamínu sa miešala v izopropanole pri teplote 50 °C 21 hodín.

Potom sa rozpúšťadlo z reakčnej zmesi za vákua odstránilo a získalo sa 0,528 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme hnedej látky gumovitej konzistencie.

TLC (oxid kremičitý, zmes cyklohexán:etylacetát, 1:1), Rf = 0,19.

Medziprodukt 9

Príprava 2-chlór-N-(1 -etylpropyl)adenozínu

Zmes, pripravená zmiešaním 10,1 g (22,6 mM) 2,6-dichlór-9-(2,3,5-tri-Oacetyl-p-D-ribofuranosyl)-9H-purínu (pozri odborný časopis Canad. J. Chem. 59 (17), 2608 (1981), autori M. J. Robins a B. Uznanski), ďalej 300 ml izopropanolu, 5,0 g uhličitanu draselného a 2,17 g (24,84 mM) 1-etylpropylamínu, sa miešala pri teplote 20 °C 24 hodín. Potom sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 54 °C 73 hodín.

Potom čo sa rozpúšťadlo z reakčnej zmesi za vákua odstránilo, k zvyšku sa pridalo 50 ml vody a táto zmes sa 3x extrahovala vždy s 80 ml etylacetátu. Spojené extrakty sa vysušili síranom horečnatým a získalo sa 9,44 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme krémovej až svetlohnedej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém A: R_t = 2,66 minút; m/z = 372,0 (MH⁺).

• ·

-35Medziprodukt 10

Príprava {6R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro(SaR.ea^-furofS^-dJfl.Sjdioxol^R-ylJmetanolu

Zmes, pripravená zmiešaním 9,3 g (22,6 mol) 2-chlór-/V-(1-etylpropyl)-adenozínu, t.j. medziprodukt 9, získaného v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 9, ďalej 35 ml 2,2-dimetoxypropánu a 8,1 g kyseliny para-toluénsulfónovej v 250 ml acetónu sa miešala pri teplote 20 °C 22 hodín.

Po odstránení rozpúšťadla z reakčnej zmesi za vákua sa k zvyšku pridalo 200 ml etylacetátu a táto zmes sa 3x vytrepala vždy 70 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po oddelení vodnej a organickej fázy sa spojené organické fázy extrahovali 50 ml etylacetát a spojené organické extrakty sa vysušili síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa za vákua odstránilo.

Prečistením zvyšku za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie za použitia oxidu kremičitého a postupnej elúcie so zmesou 50%-ného, 60%-ného a nakoniec 70%-ného etylacetátu v cyklohexáne sa získalo 5,67 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej látky penovitého charakteru.

TLC (oxid kremičitý, zmes 50%-ného etylacetátu v cyklohexáne), Rf = 0,17.

Medziprodukt 11

Príprava (3aS,4S,6R,6aR)-6-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej kyseliny

K intenzívne miešanému roztoku, pripravenému rozpustením 2,02 g (4,9 mmol) {6R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydro-(3a/?, 6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4/?-yl}metanolu, t.j. medziproduktu 10, získaného postupom, opísaným vyššie v rámci prípravy zmieneného medziproduktu, v zmesi 76 ml etylacetátu a 51 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, a vychladeného vopred v priebehu 30 minút na teplotu 0 °C a obsahujúceho 0,059 g bromidu draselného a 0,004 g 2,2,6,6-tetrametyl-1-piperidinyl-oxylového voľného

-36• ·· ·· ·· ·· ·· · · · · · · ··· • · · · · 9 · • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· radikálu (TEMPO) sa postupne pridalo po kvapkách a počas 10 minút 0,156 g tuhého hydrogenuhličitanu sodného, ďalej 2,70 ml vodného roztoku chlornanu sodného (obsahujúceho 13 % aktívneho chlóru) a približne 0,50 ml vody.

Po uplynutí 2 hodín a 30 minút sa k reakčnej zmesi pridali rovnaké množstvá vyššie uvedených reagensov, t.j. bromid draselný, voľný radikál 2,2,6,6-tetrametyl-1piperidinyloxy, hydrogenuhličitan sodný a chlornan sodný vo vode.

Potom sa reakčná zmes naliala do zmesi, pripravenej zmiešaním 100 ml vody a 50 ml etylacetátu a obsahujúcej 10 g síranu sodného. Vodná, alkalický reagujúca vrstva sa po ochladení na teplotu 0 °C a po okyslení na pH 2 extrahovala 2x vždy 100 ml etylacetátu. Po oddelení organickej a vodnej fázy sa spojené extrakty vysušili síranom horečnatým. Pôvodná organická vrstva sa oddelila a 2x sa premyla vždy 100 ml vody.

Získaný vodný premývací roztok sa okyslil na pH 3 a potom sa 2x extrahoval vždy 50 ml etylacetátu. Spojené etylacetátové extrakty sa vysušili síranom horečnatým a potom sa za vákua odparili.

Získalo sa 1,309 g v nadpise uvedenej žiadanej zlúčeniny vo forme bielej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém B: R_t = 3,25 minút; m/z = 426,0 MH⁺.

Medziprodukt 12 Príprava metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6R,6aR)-6-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej

K roztoku, pripravenému za stáleho miešania rozpustením 0,7 g (1,65 mmol) kyseliny (3aS,4S,6/?,6aR)-6-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej, t.j. medziprodukt 11, získanej v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného postupu v 10 ml dichlórmetánu, sa v atmosfére dusíka pri teplote 20 °C pridalo 0,348 g (2,15 mmol) karbonyldiimidazolu.

Po uplynutí 2 hodín sa po trojnásobnej extrakcii vždy s 1,5 ml dichlórmetánu, vodného roztoku príslušného hydrochloridu, zalkalizovaného vodným 2N roztokom

-37·· ·· · ·· • · · · · · · • · · · · · • · · · ···· • · · · · · hydroxidu sodného a po vysušení extraktu síranom sodným, ku ktorému sa pridalo

4,5 ml dichlórmetánu + 0,50 ml rozpúšťadla na prepláchnutie, získal Λ/,Ο-dimetylhydroxylamín.

Po miešaní reakčnej zmesi pri teplote 20 °C 3 dni, sa reakčná zmes zriedila 40 ml dichlórmetánu a potom sa postupne premyla 40 ml 10%-nej (hmot./objem) kyseliny citrónovej (kyselina 2-hydroxypropán-1,2,3-trikarboxylová) a potom 40 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a po vysušení síranom horečnatým sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo.

Získalo sa 0,624 g žiadanej, v nadpise uvedenej, zlúčeniny vo forme bielej látky penovitého charakteru.

TLC (oxid kremičitý, samotný etylacetát, detekcia pod svetlom ultrafialovej lampy), Rf = 0,40.

Medziprodukt 13

Príprava 1-{6R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydro(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S-yl}pent-2-ín-1-ónu

K prebytku (približne 3 ml) etylacetylénu, nakondenzovaného v reakčnej banke, do ktorej bol v atmosfére dusíka a pri teplote -78 °C predložený 1 ml tetrahydrofuránu, sa pridalo 1,9 ml (5,69 mmol) trojmolárneho roztoku metylmagnéziumchloridu v tetrahydrofuráne a vzniknutá reakčná zmes sa po vytemperovaní na teplotu 0 °C miešala 6 hodín.

Potom sa k reakčnej zmesi pridalo pri teplote 0 °C prívodnou trubičkou 0,533 g (1,14 mmol) metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6/?,6aR)-6-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej, t.j. medziproduktu 12, získaného v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 12, v 6 ml vysušeného tetrahydrofuránu.

Po uplynutí 1 hodiny sa k reakčnej zmesi pridal pri teplote 0 °C nasýtený vodný roztok chloridu amónneho (10 ml) a táto zmes sa 3x extrahovala vždy 10 ml etylacetátu. Po oddelení vodnej a organickej fázy, sa etylacetátové extrakty vysušili síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa za vákua odstránilo.

Získalo sa 0,577 g žiadanej, v nadpise uvedenej, zlúčeniny vo forme svetlohnedej látky gumovitej konzistencie.

TLC (oxid kremičitý, zmes 50%-ného etylacetátu v cyklohexáne, detekcia so svetlom ultrafialovej lampy), Rf = 0,33.

Medziprodukt 14

Príprava (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,577 g (1,25 mmol) 1-{6R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4Syl}pent-2-ín-1-ónu, t.j. medziproduktu 13, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu a 0,13 ml (1,88 mmol) vodného roztoku hydroxylamínu (50%-né hmotn. pomery) v 3 ml etanolu, sa miešala pri teplote 20 °C 6 hodín.

Po státí vzniknutej reakčnej zmesi v pokoji pri teplote 20 °C 3 dni sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo a nahradilo sa 24 ml kyseliny octovej a 3 ml vody a reakčná zmes sa potom zahrievala za refluxu pod spätným chladičom 2 hodiny a potom ešte pri teplote 100 °C 3 hodiny.

Po ochladení sa reakčná zmes odparila do sucha a následne sa 2x azeotropicky spracovala s toluénom. Prečistením zvyšku za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie a zmesi 50%-ného, 60%-ného a nakoniec 70%-ného etylacetátu vcykohexáne ako elučného činidla sa získalo 0,413 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme svetlohnedej látky, gumovitej konzistencie.

TLC (oxid kremičitý, samotný etylacetát, detekcia pod svetlom ultrafialovej lampy), Rf = 0,44.

Medziprodukty 15a a 15b

Medziprodukt 15a

Príprava 2S,4R-diacetoxy-5R-etinyl-tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej a

-39• · · · · · ···· ···· • · · · · ·

Medziprodukt 15b

Príprava 2R,4R-diacetoxy-5R-etinyl-tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

Zmes, pripravená zmiešaním 0,20 ml vody a 1,80 ml kyseliny trifluóroctovej sa miešala pri teplote miestnosti 1 hodinu, potom sa pridalo 0,104 g (0,53 mmol) 4R-etinyl-6ŕ?-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-(3aŕ?,6af?)-furo[3,4-d][1,3]-dioxolu (pozri tiež odborný časopis Helv. Chim. Acta, 63,1181 až 1189 (1980)).

Potom čo sa z reakčnej zmesi odstránili prchavé zložky za vákua, sa získaný zvyšok zmiešal pri teplote miestnosti so zmesou 0,50 ml (5,25 mmol) acetanhydridu, 1,65 ml (11,8 mmol) trietylamínu a 0,019 g (0,16 mmol) 4-dimetylaminopyridínu v 5 ml vysušeného dichlórmetánu počas 19,5 hodiny.

Po vysušení zmesi za vákua sa zmes 2x azeotropicky spracovala s toluénom a výsledný tmavohnedý zvyšok sa chromatografoval na stĺpci s oxidom kremičitým za použitia najskôr zmesi 20%-ného a potom 30%-ného etylacetátu v cyklohexáne za vzniku 0,039 g žiadaného v nadpise uvedeného medziproduktu 15a vo forme bezfarebnej látky gumovitej konzistencie.

TLC (50%-ná zmes etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia molybdenanu amónneho v roztoku), Rf = 0,43; a ďalej sa získalo 0,038 g medziproduktu 15b vo forme bezfarebnej látky gumovitej konzistencie, ktorá pri státí pri teplote miestnosti tuhla do formy ihličiek voskovitého charakteru.

TLC (50%-ná zmes etylacetátu v cyklohexáne, detekcia s molybdenanom amónnym v roztoku), Rf = 0,36.

Medziprodukt 16 Príprava 4R-acetoxy-2/?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5ŕ?-etinyl-tetrahydrofurán-3f?-ylesteru kyseliny octovej

K zmesi, pripravenej v atmosfére dusíka zmiešaním 0,098 g (0,36 mmol) zmesi medziproduktov 15a a 15b, pripravenej v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu, ďalej 0,106 g (0,55 mmol) 2,6-dichlórpurínu a 0,094 ml (0,62 mmol) 1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-énu v 0,70 ml acetonitrilu a vychladenej na

-40• ·· ·· ·· ·· ···· ···· ··· e · · · · · · • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· teplotu 0 °C sa pridalo po kvapkách 0,135 ml (0,69 mmol) trimetylsilyltrifluórmetánsulfonátu a vzniknutá reakčná zmes sa po vytemperovaní na teplotu miestnosti miešala 18,5 hodiny.

Potom sa reakčná zmes zmiešala s 5 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného a následne sa extrahovala 3x vždy 5 ml etylacetátu. Po oddelení vodnej a organickej fázy sa etylacetátové extrakty vysušili síranom horečnatým a potom sa odparili.

Výsledný hnedý zvyšok sa spracoval rýchlou stĺpcovou chromatografiou za použitia oxidu kremičitého a zmesi 50%-ného etylacetátu vcyklohexáne ako elučného činidla.

Získalo sa 0,096 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

TLC (50%-ná zmes etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia roztoku molybdenanu amónneho), Rf = 0,25.

Medziprodukt 17 Príprava 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purin-9-yl]-5R-etinyltetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

Zmes pripravená zmiešaním 1,111 g (2,78 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5R-etinyltetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 16, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu prípravy a ďalej 0,34 ml (2,92 mmol) 1-etylpropylamínu a 0,534 ml (3,06 mmol) diizopropyletylamínu v 10 ml A/./V-dimetylformamidu sa zahrievala pri teplote 50 °C

17,5 hodiny.

Potom sa väčšina /V,A/-dimetylformamidu z reakčnej zmesi na rotačnej odparke za vákua odstránila a výsledný zvyšok sa zriedil s 30 ml nasýteného vodného roztoku hydrogénuhličitanu sodného. Táto zmes sa potom extrahovala najskôr s 50 ml a potom 2x vždy 25 ml etylacetátu a bola získaná hnedá látka penovitého charakteru (1,249 g), ktorá sa prečistila za použitia systému Varian Mega Bonded Elut na kolóne, obsahujúcej 10 g oxidu kremičitého (objem 60 ml) a za použitia zmesi 50%-ného etylacetátu v cyklohexáne ako elučného činidla.

-41 • φ · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Získalo sa 1,135 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej látky penovitého charakteru.

TLC (50%-ná zmes etylacetátu v cyklohexáne, detekcia za použitia ultrafialového svetla), R_f = 0,29.

Medziprodukt 18

Príprava 4-acetoxy-5S-(3-brómizoxazol-5-yl)-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

Zmes pripravená zmiešaním 0,035 g (0,17 mmol) dibrómformaldoxímu a 0,052 g (0,12 mmol) 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5Retinyltetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 17, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu prípravy v 4 ml etylacetátu a 0,20 ml vody, sa intenzívne miešala za prítomnosti 0,11 g (1,26 mmol) tuhého hydrogenuhličitanu sodného pri teplote miestnosti počas 89 hodín.

Potom sa k reakčnej zmesi pridalo ďalších 0,035 g (0,17 mmol) dibrómformaldoxímu, ďalej 0,11 g (1,26 mmol) tuhej formy hydrogenuhličitanu sodného a 0,20 ml vody a po uplynutí ďalších 21 hodín sa reakčná zmes zriedila 5 ml vody a potom sa 3x extrahovala vždy 5 ml etylacetátu.

Po oddelení vodnej a organickej fázy sa organické extrakty za vákua odparili a získaný surový produkt sa rozpustil v 2 ml toluénu.

Získaný roztok sa naniesol na zariadenie Varian Mega Bond Elut (kolóna s objemom 20 ml, 5 g oxidu kremičitého) a eluoval sa postupne 30%-nou, 40%-nou, 50%-nou, 60%-nou a nakoniec 70%-nou zmesou etylacetátu v cyklohexáne.

Frakcie, obsahujúce produkt sa spojili a odparili. Získalo sa 0,043 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej látky gumovitej konzistencie. LC/MS systém B: R_t = 3,66 minút, m/z = 571 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C2iH24⁷⁹Br³⁵CIN6O6.

Medziprodukt 19

Príprava 4R-acetoxy-5S-(3-acetylizoxazol-5-yl)-2/?-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej • ·· ·· ·· ·· ···· ···· «·· • · · · · · ·

-42• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúcej prípravy medziproduktu 18, sa pripravil v nadpise uvedený medziprodukt 19 za použitia 0,021 g (0,17 mmol) A/-hydroxy-2-oxo-propiónimidoylchloridu a ďalších množstiev reagens, pridaných po 89 hodinách, t.j. 0,021 g (0,17 mmol) A/-hydroxy-2-oxopropiónimidoylchloridu, ďalej 0,11 g (1,26 mmol) tuhej formy hydrogenuhličitanu sodného a 0,20 ml vody a po 180 hodinách ešte 0,075 g (0,62 mmol) /V-hydroxy-2oxo-propiónimidoylchloridu a 0,16 g (1,26 mmol) tuhej formy hydrogenuhličitanu sodného.

Po uplynutí ďalších 24 hodín pri teplote miestnosti sa izolovalo 0,043 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej látky gumovitej konzistencie.

LC/MS systém B: R_t = 3,51 minút, m/z = 535 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C23H27³⁵CIN6O7.

Medziprodukt 20 Príprava 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)-purín-9-yl]-5S-(3-metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

K roztoku, pripravenému rozpustením 0,10 g (0,22 mmol) 4R-acetoxy-2R-[2chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5R-etinyltetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 17, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy medziproduktu 17, ďalej 0,031 ml (0,22 mmol) trietylamínu a 0,063 ml (0,58 mmol) fenylizokyanátu v 1 ml vysušeného toluénu v atmosfére dusíka sa pridal za stáleho miešania roztok, získaný rozpustením 0,021 ml (0,29 mmol) nitroetánu v 1 ml vysušeného toluénu a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 80 °C 21 hodín.

Po ochladení sa reakčná zmes naniesla na zariadenie Varian Mega Bond Elut, za použitia kolóny s objemom 20 ml, náplň 5,0 g oxidu kremičitého a 30%-nej až 60%-nej zmesi etylacetátu v cyklohexáne ako elučného činidla.

Frakcie, obsahujúce produkt sa spojili a za vákua sa odparili. Výsledný materiál sa rozpustil v 2 ml toluénu a získaný roztok sa po prefiltrovaní cez chumáč vaty priamo naniesol na ďalšie zariadenie Varian Mega Bond Elut, za použitia

-43• · ♦ · · · · ··· ·· ···· ·· ··· kolóny s objemom 20 ml a náplne 5 g oxidu kremičitého a elúcie s 200 ml 20%-nej zmesi etylacetátu vcyklohexáne a potom so 100 m 30%-nej zmesi etylacetátu vcyklohexáne a nakoniec vždy s 50 ml 40%-nej, 50%-nej a 60%-nej zmesi etylacetátu v cyklohexáne ako elučného činidla.

Získalo sa 0,099 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovobielej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém B: R_t = 3,47 minút, m/z = 507 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C22H27³⁵CIN6O6.

Medziprodukt 21

Príprava 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)-purín-9-yl]-5S-(3-propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej

Analogickým postupom opísaným vyššie v rámci predchádzajúcej prípravy medziproduktu 20, sa pripravila žiadaná, v nadpise uvedená zlúčenina, za použitia 0,031 ml (0,29 mmol) nitrobutánu. Po uplynutí 21 hodín sa pridala zmes, získaná zmiešaním 0,063 ml fenylizokyanátu (0,58 mmol) a 0,031 ml (0,29 mmol) nitrobutánu v 0,50 ml vysušeného toluénu.

Po uplynutí ďalších 23 hodín, kedy sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 80 °C sa izolovalo 0,093 g žiadanej, v nadpise uvedenej, zlúčeniny vo forme krémovobielej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém B: R_t = 3,68 minút, m/z 535 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C24H31³⁵CIN6O6.

Medziprodukt 22

Príprava 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)-purín-9-yl]-5S-[4-(tetrahydropyrán-2-yl-oxymetyl)izoxazol-5-yl]tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci prípravy medziproduktu 20, sa použila žiadaná, v nadpise uvedená zlúčenina, za použitia 0,045 ml (0,29 mmol) 2-(2-nitroetoxy)tetrahydrofuránu. Potom sa pridalo ďalšie množstvo reagensov, t.j. 0,063 ml (0,58 mmol) fenylizokyanátu a 0,045 ml vysušeného toluénu počas 21

-44···· ···· · • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· hodín. Po uplynutí ďalších 120 hodín, keď sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 80 °C, sa izolovalo 0,113 g žiadaného produktu vo forme svetlohnedej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém B: R_t = 3,64 minút, m/z = 607 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca θ27Η35³⁵ΟΙΝβθ6.

Medziprodukt 23

Príprava (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-[3-acetylizoxazol-5-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diolu

K roztoku, pripravenému rozpustením 42 mg (0,08 mmol) 4R-acetoxy-5S-(3acetylizoxazol-5-yl)-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]ettrahydrofurán-3Rylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 19, v 1,0 ml metanolu, sa pridalo v atmosfére dusíka za stáleho miešania a pri teplote 0 °C 12 mg (0,31 mmol) tetrahydroboritanu sodného. Po uplynutí 4 hodín sa reakčná zmes odparila a získalo sa 0,057 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky (v pomere izomérov 2:1).

LC/MS systém A: R_t = 4,12 a 4,23 minút v pomere 2:1, m/z = 453 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca Cigl-ks^CINeOs.

Medziprodukt 24

Príprava trifluóracetátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1 -etylpropylamino)purín-9-yl]-5(S-hydroxymetylizoxazol-S-yntetrahydrofurán-S^-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,061 g (0,10 mmol) 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6(1-etylpropylamino)-purín-9-yl]-5S-[4-(tetra-hydropyrán-2-yl-oxymetyl)izoxazol-5yl]tetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 22, získaného v rámci vyššie opísanej prípravy a 0,01 ml 25%-ného roztoku (% hmotn.) metoxidu sodného v 2 ml metanolu, sa miešala pri teplote miestnosti 19 hodín.

-45Potom sa k reakčnej zmesi pridalo 0,10 ml kyseliny octovej a zmes sa za vákua odparovala. Výsledný zvyšok sa rozpustil v zmesi, získanej zmiešaním 0,90 ml tetrahydrofuránu a 0,10 ml vody a táto zmes sa miešala pri teplote 0 °C 6 hodín.

Po odstránení prchavých zložiek sa získalo 0,10 g žiadanej, nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedého zvyšku.

LC/MS systém B: R_t = 4,05 minút, m/z = 439 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca CieH23³⁵Cl6O5.

Medziprodukt 24 (Alternatívna príprava) Príprava trifluóracetátu (2/?,3ŕ?,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1 -etylpropylamino)purín-9-yl]-5(3-hydroxymetylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

K roztoku, pripravenému rozpustením 0,104 g (0,20 mmol) 4/?-acetoxy-5S-(3acetoxymetyl)izoxazol-5-yl)-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 34, získaného v rámci ďalej opísaného spôsobu prípravy, sa pridalo 0,10 ml 25%-ného roztoku metoxidu sodného v metanole a táto reakčná zmes sa miešala 30 minút.

Po pridaní 0,10 ml kyseliny octovej sa zmes odparila do sucha a vzniknutý zvyšok sa zmiešal s 1,8 ml kyseliny trifluóroctovej a 0,2 ml vody a táto zmes sa miešala pri teplote 0 °C 2 hodiny a potom sa odparila do sucha.

Získalo sa 0,082 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém C: Rt = 2,83 minút, m/z = 439 MH⁺.

Medziprodukt 25

Príprava (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(3-jódbenzylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol-acetátu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,032 g (0,12 mmol) hydrochloridu m-jódbenzylamínu, ďalej 0,046 ml diizopropyletylamínu a 0,050 g (0,11 mmol) 4Racetoxy-2/?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3/?-yl• ·· ·· ·· ·· ···· · · · · ··· • · · · · · ·

-46• · · · · · ··· ·· ···· ·· · esteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného postupom opísaným v rámci prípravy uvedenej vyššie, v 2 ml izopropanolu sa zohrievala pri teplote 50 °C počas 24 hodín.

Po ďalšom pridaní 0,032 g (0,12 mmol) m-jódbenzylamínu a 0,22 ml diizopropyletylamínu sa táto reakčná zmes zahrievala pri teplote 50 °C 8 hodín. Potom sa rozpúšťadlo zo zmesi za vákua odstránilo a zvyšok sa rozpustil v 2 ml bezvodého metanolu a za stáleho miešania sa získaný roztok zmiešal počas 1 hodiny pri teplote 20 °C s 0,25 ml 25%-ného (% hmotn.) roztoku metoxidu sodného v metanole. Po pridaní 1 ml kyseliny octovej sa rozpúšťadlo zo zmesi za vákua odstránilo a zvyšok sa prečistil rýchlou chromatografiou za použitia oxidu kremičitého a zmesi 50%-ného cyklohexánu v etylacetáte ako elučného činidla.

Získala sa žiadaná, v nadpise uvedená zlúčenina vo forme bielej tuhej látky (0,035 g) po predchádzajúcom mechanickm spracovaní a vybratí s metanolom. TLC (oxid kremičitý, zmes 50%-ného etylacetátu v cyklohexáne), Rf = 0,17.

Medziprodukt 26 Príprava acetátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1 S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,053 g (0,35 mmol) 3(S)-(-)-2-amino-3fenylpropanolu, ďalej 0,067 ml (0,39 mmol) diizopropyletylamínu a 0,152 g (0,32 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného postupom opísaným v rámci prípravy vyššie, v 2 ml izopropanolu sa zahrievala pri teplote 50 °C 17 hodín.

Po odstránení rozpúšťadla z reakčnej zmesi za vákua sa zvyšok rozpustil v 2 ml bezvodého metanolu a za stáleho miešania sa získaný roztok zmiešal počas 1 hodiny pri teplote 20 °C s 0,25 ml 25%-ného roztoku (% hmotn.) metoxidu sodného v metanole.

-47• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Potom sa zmesi pridalo 0,50 ml kyseliny octovej a rozpúšťadlo sa za vákua odstránilo. Zvyšok sa prečistil rýchlou stĺpcovou chromatografiou za použitia oxidu kremičitého a etylacetátu ako elučného činidla.

Získalo sa 0,112 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krehkej bielej látky penovitého charakteru.

TLC (samotný etylacetát, oxid kremičitý), Rf = 0,26.

Medziprodukt 27

Príprava 2-(pyridín-2-yl-amino)etylamínu

K 76 g (126,6 mmol) 1,2-diaminoetánu sa po kvapkách pridalo za stáleho miešania a v atmosfére dusíka 10 g (63,3 mmol) 2-brómpyridínu a vzniknutá reakčná zmes sa potom miešala najskôr pri teplote 20 °C 4 hodiny a potom ešte za zahrievala za refluxu pod spätným chladičom 24 hodín.

Po následnom zahustení reakčnej zmesi za vákua sa zvyšok prečistil rýchlou stĺpcovou chromatografiou za použitia oxidu kremičitého a zmesi dichlórmetán:etanol:amoniak (30:8:1) ako elučného činidla a získalo sa 1,23 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme červenej látky olejovitej konzistencie. TLC (oxid kremičitý, zmes dichlórmetán:etanol:amoniak v pomere 30:8:1), Rf = 0,14. Hmotnostné spektrometria: m/z 138 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C7H11N3.

Medziprodukt 28

Príprava (2/?,3/?,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-etinyltetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,45 g (1,0 mmol) 4/?-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1etylpropylamino)purín-9-yl]-5R-etinyltetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 17, získaného v rámci prípravy opísanej vyššie, a 6,97 mmol 1metylhistamínu, získaného z 1,38 g príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s 0,48 g tuhého hydroxidu sodného v 5 ml metanolu a následnou filtráciou a odparením za vákua a 1,0 ml diizopropyletylamínu v 3 ml vysušeného dimetyl

-48• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· sulfoxidu, sa zahrievala v reakčnej banke s guľatým dnom v atmosfére dusíka najskôr pri teplote 95 °C 114 hodín a potom ešte 71 hodín pri teplote 110 °C.

Po pridaní ďalšieho množstva (6,97 mmol) 1-metylhistamínu, získaného z 1,38 g príslušného dichloridu postupom opísaným vyššie, sa po uplynutí 24 hodín reakčná zmes ochladila a zriedila dichlórmetánom a potom sa naniesla na zariadenie Varian Mega Bond Elut (kolóna s objemom 50 ml, náplň 10 g oxidu kremičitého) a kolóna sa eluovala za odsávania najskôr 50 ml dichlórmetánu, potom 2x vždy 50 ml etylacetátu a potom postupne 5%-nou, 10%-nou a nakoniec 20%-nou zmesou metanolu v etylacetáte tak, že pri každom zvýšení bola elúcia uskutočnená 2x 50 ml zmesi.

Eluáty z dichlórmetánu až z až 10%-zmesi 10%-ného metanolu v etylacetáte sa spojili a odparili a získala sa látka olejovitej konzistencie. Zvyškový dimetylsulfoxid sa za vysokého vákua odstránil.

Výsledný hnedý zvyšok sa rozpustil v 30 ml dichlórmetánu a získaný roztok sa naniesol na zariadenie Varian Mega Bond Elut (kolóna s obsahom 50 ml, náplň 10 g oxidu kremičitého) a eluoval sa vždy 50 ml 50%-nej až 90%-nej zmesi etylacetátu v cyklohexáne, po každom zvýšení koncentrácie zmesi o 10 % a potom po použití 100%-ného etylacetátu sa elúcia uskutočňovala so štvornásobnou elúciou s 50 ml zmesí 10%-ného metanolu v etylacetáte, potom s dvojnásobnou elúciou so zmesou 15%-ného metanolu v etylacetáte a nakoniec s dvojnásobnou elúciou so zmesou 20%-ného metanolu v etylacetáte (vždy s 50 ml).

Získalo sa 0,126 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej látky penovitého charakteru.

LC/MS systém B: R_t = 2,10 minút, m/z = 455 MH⁺.

Medziprodukt 29

Príprava acetátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1 S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,063 g (0,35 mmol) L-2-amino-3-metylbutanolu, ďalej 0,067 ml (0,39 mmol) diizopropyletylamínu a 0,148 g (0,32 mmol) 4R-acetoxy-2f?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3-yl· ·· ·· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · ···· ···· • · · · · ·

-49esteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného postupom, opísaným v rámci prípravy vyššie v 2 ml izopropanolu, za zahrievala pri teplote 50 °C 26 hodín.

Po odstránení rozpúšťadla z reakčnej zmesi sa vzniknutý zvyšok rozpustil v 2 ml bezvodého metanolu a k získanému roztoku sa stáleho miešania pri teplote 20 °C počas 1,5 hodiny pridalo 0,25 ml 25%-ného roztoku (% hmotn.) metoxidu sodného a potom po pridaní 1 ml kyseliny octovej sa rozpúšťadlo zo zmesi odstránili za vákua. Zvyšok sa prečistil za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie a oxidu kremičitého a najskôr samotného etylacetátu a potom ešte zmesi 10%-ného metanolu v etylacetáte ako elučných činidiel.

Získalo sa 0,126 g žiadaného, v nadpise uvedeného produktu vo forme krémovej látky penovitého charakteru.

TLC (oxid kremičitý, samotný etylacetát), Rf = 0,21.

Medziprodukt 30

Príprava metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6R,6aR)-6-metoxy-2,2-dimetyl-tetrahydrofuro[3,4-d][1,3]-dioxol-4-karboxylovej

K zmesi, pripravenej zmiešaním 5 g (22,9 mmol) (3aS,4S,6R,6aR)-metoxy-

2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]-dioxol-4-karboxylovej, pripravenej analogickým spôsobom opísaným v rámci medzinárodnej patentovej prihlášky, číslo WO 98/28319 a použitého aj vo vyššie opísanom postupe prípravy medziproduktu 1, v 100 ml dichlórmetánu sa pridalo 4,83 g (29,8 mmol) karbonyldiimidazolu v 50 ml dichlórmetánu tak, že pridávanie prebiehalo po častiach v atmosfére dusíka pri teplote miestnosti a za miešania 1 hodinu.

V rámci ďalšej operácie sa pripravil za použitia 4,47 g (45,80 mmol) hydrochloridu Λ/,Ο-dimetylhydroxylamínu, rozpusteného v 100 ml 2M roztoku hydroxidu sodného, roztok, ktorý sa 2x extrahoval 50 ml dichlórmetánu. Po oddelení organickej a vodnej fázy sa organické extrakty spojili a po pridaní k reakčnej zmesi, pripravenej v rámci vyššie opísanej operácie sa miešali 24 hodín.

Po odparení rozpúšťadla sa výsledný zvyšok vložil do 150 ml etylacetátu, premyl sa 50 ml nasýteného vodného roztoku kyseliny citrónovej (kyselina 2-50·· ·* ·· •· · · •· · •· · • ·· ·· ···· •· · •e •· •· ·· · hydroxypropán-1,2,3-trikarboxylová), ďalej 50 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nakoniec 50 ml nasýteného vodného roztoku chloridu sodného.

Po následnom vysušení síranom horečnatým, sa rozpúšťadlo za vákua odparilo a získalo sa 5,786 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej látky olejovitej konzistencie.

Hmotnostné spektrometria: m/z = 262 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C11H19NO6.

Medziprodukt 31

Príprava 1 -(6R-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4Syl)-4-(tetrahydropyrán-2-yloxy)but-2-ín-1-ónu

K roztoku, pripravenému rozpustením 1,609 g (11,48 mmol) tetrahydro-2-(2propanyloxy)-2A7-pyránu v 20 ml tetrahydrofuránu, sa pridalo pri teplote -78 °C v atmosfére dusíka a za stáleho miešania počas 20 minút 7,70 ml (11,48 mmol) 1,6M roztoku n-butyllítia v hexánoch.

Po pridaní 1,79 g (12,61 mmol) boróntrifluoriddieterátu k reakčnej zmesi, sa zmes miešala 30 minút. Potom sa k zmesi pridal roztok, získaný rozpustením 1 g (3,82 mmol) metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6R,6a/?)-6-metoxy-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]-dioxol-4-karboxylovej, t.j. medziprodukt 30, pripravený v rámci predchádzajúceho, vyššie opísaného postupu v 2 ml tetrahydrofuránu a vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote -78 °C v atmosfére dusíka 3 hodiny.

Potom sa reakčná zmes zmiešala so 100 ml nasýteného vodného roztoku chloridu amónneho a následne sa extrahovala 3x vždy 100 ml etylacetátu. Po oddelení organickej a vodnej fázy sa spojené organické extrakty vysušili síranom horečnatým a po odstránení rozpúšťadla za vákua sa získal surový produkt vo forme hnedej látky olejovitej konzistencie (2,52 g).

Časť, t.j. 0,50 g surového produktu, získaného v rámci predchádzajúcej, vyššie opísanej operácie, sa prečistila za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie (Biotage s predloženou náplňou 40 g oxidu kremičitého a za použitia zmesi 10%ného etylacetátu v cyklohexáne ako elučného činidla).

• ·· ·· ·· ·· ···· · · · · ··· • · · · · · ·

-51 • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Získalo sa 0,182 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bezfarebnej látky olejovitej konzistencie.

Hmotnostné spektrometria; m/z = 341 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C17H24O7.

Medziprodukt 32 Príprava 4/?-acetoxy-2S-(3-acetoxymetylizoxazol-5-yl)-5/?-metoxy-tetrahydrofurán3R-ylesteru kyseliny octovej

K roztoku, pripravenému rozpustením 3,18 g (9,34 mmol) 1-(6/?-metoxy-2,2dimetyltetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]-dioxol-4S-yl)-4-(tetrahydropyrán-2-yloxy)but-2-ín-1-ónu, t.j. medziproduktu 31, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu v 30 ml metanolu, sa pridalo 1,15 ml (18,6 mmol) 50%ného (% hmotn.) roztoku hydroxylamínu vo vode a vzniknutá reakčná zmes sa miešala v atmosfére dusíka pri teplote miestnosti 16 hodín. Po odstránení rozpúšťadla odparením sa získalo 3,4 g žltej látky olejovitej konzistencie.

Časť, t.j. 1 g vyššie uvedenej látky olejovitej konzistencie sa rozpustila v 30 ml metanolu a po pridaní 1 ml 37%-nej kyseliny chlorovodíkovej sa vzniknutý roztok miešal pri teplote 50 °C v atmosfére dusíka 24 hodín a potom sa ešte zahrieval za refluxu pod spätným chladičom ďalších 16 hodín.

Po ochladení sa reakčná zmes zriedila 30 ml metanolu a potom sa 50 % rozpúšťadla odstránilo odparením a nahradilo sa 2 ml pyridínu a 30 ml toluénu. Táto zmes sa potom odparila do sucha a získala sa tmavohnedá až čierna viskózna látka olejovitej konzistencie. K tomuto zvyšku sa postupne pridalo 20 ml pyridínu, ďalej 4Λ/,/V-dimetylaminopyridín a acetanhydridu (4 ml). Táto zmes sa potom miešala 3 hodiny a po odstránení rozpúšťadla odparením sa zvyšok vybral do 150 ml dichlórmetánu a postupne sa premyl 50 ml kyseliny citrónovej (2-hydroxypropán1,2,3-trikarboxylovej kyseliny), ďalej 8%-ným vodným roztokom hydrogénuhličitanu sodného (100 ml) a so 100 ml soľanky a potom po vysušení síranom horečnatým sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo a vzniknutý zvyšok sa prečistil za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie (Biotage) s predloženou náplňou 40 g oxidu kremičitého a elúciou zmesou etylacetát:cyklohexán (2:1).

-52• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Získalo sa 0,841 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltej látky olejovitej konzistencie.

TLC (oxid kremičitý, samotný etylacetát), Rf = 0,66.

Medziprodukt 33 Príprava 4R-acetoxy-5S-(3-acetoxymetyl-izoxazol-5-yl)-2ŕ?-(2,6-dichlór-purín-9-yl)tetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej

K 0,158 g (0,84 mmol) 2,6-dichlórpurínu sa pridalo 5 ml 1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazánu (HMDS) a vzniknutá reakčná zmes sa miešala v atmosfére dusíka pri teplote 100 °C 16 hodín.

Po ochladení sa rozpúšťadlo z reakčnej zmesi odparilo a zvyšok sa azeotropicky spracoval s 5 ml bezvodého toluénu a po následnom odparení do sucha sa získala biela tuhá látka amorfného charakteru, ku ktorej sa pridalo 1,35 ml roztoku, získaného rozpustením 0,100 g (0,279 mmol) 4R-acetoxy-2S-(3acetoxymetylizoxazol-5-yl)-5/?-metoxy-tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 32, pripraveného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu v 1,35 ml bezvodého acetonitrilu. Po pridaní ďalších 2 ml bezvodého acetonitrilu sa reakčná zmes ochladila na teplotu 0 °C a za stáleho miešania sa k nej pridalo 0,165 ml (0,92 mmol) trimetylsilyltrifluórmetylsulfonátu (TMSOTf).

Po následnom vytemperovaní na teplotu miestnosti počas 20 minút sa zmes zahrievala za miešania pri teplote 80 °C 20 hodín. Po ochladení sa zmes naliala do 20 ml 8%-ného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom sa extrahovala 2x vždy 30 ml etylacetátu. Po vysušení získaného extraktu so síranom horečnatým sa zmes odparila a získala sa hnedá látka gumovitého charakteru, ktorá sa prečistila rýchlou chromatografiou (Biotage) s vopred naplneným stĺpcom s 8 g oxidu kremičitého a za použitia zmesi etylacetát:cyklohexán ako elučného činidla.

Získalo sa 0,14 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej kryštalickej látky.

TLC (oxid kremičitý, samotný etylacetát), Rf = 0,55.

• · ·· • ·

-53Medziprodukt 34

Príprava 4f?-acetoxy-5S-(3-acetoxymetyl-izoxazol-5-yl)-2/?-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3/?-yl-esteru kyseliny octovej

K roztoku, pripravenému rozpustením 0,100 g (0,194 mmol) 4R-acetoxy5S-(3-acetoxymetylizoxazol-5-yl)-2R-(2,6-dichlór-purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 33, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu v 5 ml izopropylalkoholu, sa pridalo 0,025 g (0,29 mmol) 1-etylpropylamínu a 0,033 g (0,252 mmol) A/./V-diizopropyletylamínu a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala za miešania pri teplote 50 °C 16 hodín.

Po odstránení rozpúšťadla odparením sa získalo 0,104 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltej látky gumovitej konzistencie.

LC/MS systém C: R_t = 3,5 minúty, m/z = 565 MH⁺.

Medziprodukt 35

Príprava 1 -(6R-metoxy-2,2-dimetyl-tetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]-dioxol-4Syl)pent-2-ín-1-ónu

K približne 20 ml 1-butínu nakondenzovanému v atmosfére dusíka a pri teplote -78 °C do reakčnej banky, sa pridalo 140 ml tetrahydrofuránu a následne počas 10 minút 25 ml (75 mmol) 3M roztoku metylmagnéziumchloridu.

Vzniknutá reakčná zmes sa po vytemperovaní na teplotu miestnosti miešala 5 hodín a po ochladení na teplotu 0 až 5 °C sa pridal počas 20 minút roztok, získaný rozpustením 21,07 g (80,73 mmol) metoxymetylamidu kyseliny (3aS,4S,6R,6aR)-6metoxy-2,2-dimetyltetrahydrofuro[3,4-d][1,3]dioxol-4-karboxylovej, t.j medziproduktu 30 v 40 ml tetrahydrofuránu.

Táto reakčná zmes sa potom miešala pri teplote 0 až 5 °C 1 hodinu a potom sa ponechala v pokoji stáť pri teplote 4 °C cez noc. Potom sa k reakčnej zmesi pridalo pri teplote 0 až 5 °C a za stáleho miešania 200 ml 30%-ného roztoku chloridu amónneho a následne ešte 150 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej.

·· ··

-54Potom sa zmes extrahovala vždy 200 ml etylacetátu a po oddelení vodnej a organickej fázy sa organické extrakty spojili a po vysušení síranom sodným sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo. Zvyšok sa prečistil pomocou rýchlej stĺpcovej chromatografie za použitia oxidu kremičitého a zmesi hexán:etylacetát ako elučného činidla.

Získalo sa 13,76 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

TLC (oxid kremičitý, 20%-ná zmes etylacetátu v hexáne), Rf = 0,36.

Medziprodukt 36

Príprava 1 -(6R-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6aR)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4Syl)pentán-1,3-dión-3-oxímu

Zmes pripravená zmiešaním 15,02 g (59,10 mmol) 1-(6R-metoxy-2,2-dimetyltetrahydro-(3aS,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]-dioxol-4S-yl)pent-2-ín-1-ónu, t.j medziproduktu 35, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu s 300 ml metanolu, sa ďalej miešala s 7,2 ml (235,2 mmol) 50%-ného vodného roztoku hydroxylamínu a vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote 22 °C 5 hodín.

Potom sa reakčná zmes zahustila, výsledný zvyšok vo forme bielej látky sa vybral do 500 ml etylacetátu a získaný roztok sa postupne premyl 100 ml vody a 100 ml soľanky a po vysušení so síranom horečnatým sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo.

Získalo sa 15,81 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, ktorá sa za vysokého vákua cez noc vysušila, vo forme bielej tuhej látky.

TLC (oxid kremičitý, dietyléter, hexán), Rf = 0,10.

Medziprodukt 37

Príprava 2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)-1,9-dihydropurín-6-ónu

Zmes, pripravená zmiešaním 6 g (28 mmol) 2-brómhypoxantínu a 7 ml (56 mmol) 2-piperidinetylamínu v 30 ml 2-metoxyetanolu sa zahrievala za refluxu pod • ·· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · · • ···· ···· • · · · · · · ······· ·· ···· ··

-55spätným chladičom cez noc. Po ochladení reakčnej zmesi na teplotu miestnosti vznikla žltá zrazenina. Ďalšia zrazenina sa získala po pridaní 50 ml vody.

Po miešaní 1 hodinu sa suspenzia prefiltrovala a získaná tuhá látka sa premyla vodou a vysušila za vákua a pripravilo sa 5,6 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny.

LC/MS systém C: R_t = 0,82 minút, m/z = 263 MH⁺.

Medziprodukt 38

Príprava (6-chlór-9H-purín-2-yl)-(2-piperidín-1 -yl-etyl)amínu

K zmesi, pripravenej zmiešaním 4 ml (31 mmol) A/,A/-dimetylanilínu a 30 ml (314 mmol) oxychloridu fosforečného, miešanej pri teplote miestnosti 10 minút sa po častiach pridalo 5,5 g (20 mmol) 2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)-1,9-dihydropurín-6ónu, t.j. medziproduktu 36, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala za refluxu pod spätným chladičom 15 minút.

Po ochladení bol zo zmesi za vákua odparený oxychlorid fosforečný a zvyšok sa spracoval azeotroplcky za trojnásobného použitia 50 ml toluénu. Po prečistení zvyšku pomocou rýchlej stĺpcovej chromatgografie (Biotage) so stĺpcom naplneným 90 g oxidu kremičitého a za použitia zmesi 10% metanol/chloroform/1% amoniak ako elučného činidla sa získalo 4,98 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltej tuhej látky.

LC/MS systém C: R_t = 1,61 minút, m/z = 281 MH⁺.

Medziprodukt 39

Príprava /V6-(2,2-difenyletyl)-/\/2-(2-piperidín-1-yl-etyl)-9H-purín-2,6-diamínu

Zmes, pripravená zmiešaním 5 g (17,8 mmol) (6-chlór-9H-purín-2-yl)-(2piperidín-1-yl-etyl)amínu, t.j. medziproduktu 38, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu, ďalej 6,2 ml Λ/,/V-diizopropyletylamínu (36 mmol) a

5,5 g (27 mmol) 2,2-difenyletylamínu v 100 ml izopropanolu sa zahrievala za refluxu pod spätným chladičom cez noc.

-56• · · ♦ · · * ··· ·· ···· ·· ···

Po odstránení rozpúšťadla za vákua z ochladenej reakčnej zmesi sa zvyšok prečistil pomocou rýchlej stĺpcovej chromatografie za použitia stĺpca (Biotage), naplneného 90 g oxidu kremičitého a zmesou 5%-ného metanol/chloroform/1% amoniak ako elučného činidla.

Získalo sa 4,5 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

LC/MS systém C: R_t = 2,47 minút, m/z = 442 MH⁺.

Medziprodukt 40 Príprava 4R-acetoxy-2S-(3-etylizoxazol-5-yl)-5R-metoxytetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

K zmesi, pripravenej zmiešaním 15,76 g (54,91 mmol) 1-(6R-metoxy-2,2dimetyltetrahydro-(3aS,6a/?)-furo[3,4-d][1,3]dioxol-4S-yl)pentán-1,3-dión-3-oxímu, t.j. medziproduktu 36, získaného v rámci vyššie opísaného postupu, so 400 ml metanolu, sa pridalo 25 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala za refluxu pod spätným chladičom 22 hodín.

Potom sa zmes za zníženého tlaku zahustila a 2x spoluodparila so zmesou metán/toluén. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 200 ml dichlórmetánu a získaný roztok sa zmiešal postupne so 100 ml pyridínu, ďalej s 30 ml (318 mmol) acetanhydridu a s 0,064 g 4-dimetylaminopyridínu a vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti 16 hodín. Potom sa zmes zriedila 200 ml dichlórmetánu a potom postupne sa premyla s 8%-ným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (400 ml), ďalej 3x vždy s 300 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a oddelená vodná vrstva sa extrahovala 100 ml dichlórmetánu.

Spojené organické vrstvy sa potom vysušili síranom sodným a rozpúšťadlo sa za vákua odstránilo. Zvyšok vo forme hnedej látky sa za vákua odstránil. Zvyšok vo forme hnedej látky sa prečistil za použitia rýchlej stĺpcovej chromatografie a za použitia oxidu kremičitého a zmesi hexán:etylacetát (1:1) ako elučného činidla.

Získalo sa 5,71 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme oranžovej látky olejovitej konzistencie.

TLC (oxid kremičitý, zmes 50%-ného etylacetátu v hexáne), Rf = 0,38.

-57• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Medziprodukt 41

Príprava 4S-acetoxy-5S-[6-(2_l2-difenyletylamino)-2R-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-2-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej

Suspenzia, pripravená zmiešaním 0,5 g (1,0 mmol) /V6-(2,2-difenyletyl)-/V2(2-piperidín-1-yl-etyl)-9H-purín-2,6-diamínu, t.j. medziproduktu 39, získaného v rámci vyššie opísaného postupu, s 5 ml 1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazánu, sa zahrievala za refluxu pod spätným chladičom 3,5 hodiny.

Po odstránení rozpúšťadla za vákua sa vzniknutý roztok spracoval 3x s 5 ml bezvodého toluénu a k zvyšku v 2 ml acetonitrilu sa pridalo 0,42 g (1,30 mmol) 4Racetoxy-2S-(3-etylizoxazol-5-yl)-5R-metoxytetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 40, získaného v rámci predchádzajúceho vyššie opísaného postupu a 0,16 ml (1,0 mmol) 1,8-diazabicyklo[5.5.0]undek-7-énu a k vzniknutej reakčnej zmesi, ochladenej na teplotu 0 °C sa pridalo 0,6 ml (3,3 mmol) trimetylsilyltrifluórmetylsulfonátu.

Po vytemperovaní zmesi na teplotu miestnosti, sa zmes zahrievala za refluxu pod spätným chladičom cez noc. Po ochladení sa zmes naliala do 10 ml nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a potom sa 3x extrahovala vždy s 15 ml etylacetátu. Po oddelení vodnej a organickej vrstvy sa spojené organické extrakty premyli 20 ml vody a po vysušení síranom horečnatým sa rozpúšťadlo za vákua odstránilo.

Zvyšok sa prečistil pomocou rýchlej stĺpcovej chromatografie za použitia stĺpca (Biotage) naplneného 8 g oxidu kremičitého a zmesou metanol/chloroform/1 % amoniak ako elučného činidla.

Získalo sa 0,198 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém C: R_t = 2,89 minút, m/z % 722 MH⁺.

Príklad 1

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-piperidín-1 yletylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

-58• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Zmes pripravená zmiešaním 0,02 g (0,043 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlór-purín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci postupu, opísaného vyššie, ďalej 0,1 mmol/ml 2,2-difenyletylamínu v izopropanole (0,581 ml, 0,058 mmol) a, 0,2 mmol/ml diizopropyletylamínu v izopropanole (0,345 ml, 0,069 mmol), sa v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) zahrievala pri teplote 53 °C 16 hodín.

Po odstránení prchavých zložiek pomocou prúdu dusíka z reakčnej zmesi, sa k vzniknutému zvyšku pridal 2-piperidín-1-yl-etylamín (0,044 g, 0,344 mmol) a 0,20 ml dimetylsulfoxidu a táto zmes sa zahrievala pri teplote 92 °C 4 dni.

Výsledný surový produkt sa prečistil autopreparatívnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a po vymrazení (lyofilizácii) sa získalo 0,0029 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 4,24 minút, m/z = 639 MH⁺.

V rámci príkladu 1 uvažujeme aj o použití altematívneo postupu, za použitia reakcie (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 7, získaného v rámci postupu opísaného vyššie s 2-piperidín-1-yletylamínom v dimetylsulfoxide za zvýšenej teploty.

Príklad 1 (Alternatívna príprava)

Príprava trifluóracetátu 2R-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3/?,4S-diolu

Roztok, pripravený rozpustením 0,125 g (0,10 mmol) 4S-acetoxy-5S-[6-(2,2difenyletylamino)-2R-(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-2-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j medziproduktu 41, získaného v rámci postupu opísaného vyššie, v 5 ml 10%-ného amoniaku vmetanole sa miešal pri teplote miestnosti cez noc.

-59• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Po odparení rozpúšťadla z reakčnej zmesi za vákua sa zvyšok prečistil preparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou za použitia gradientovej elúcie s 5%-ným až 95%-ným acetonitrilom.

Získalo sa 0,1 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny.

LC/MS systém C: Rt = 2,77 minút, m/z = 639 Mhľ.

Príklad 2

Príprava diformiátu (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-morfolín-4yletylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 1 sa pripravilo za použitia 0,045 g (0,344 mmol) 2-(morfolín-4-yl)etylamínu po následnej lyofilizácii 0,01 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 4,07 minút, m/z = 641 MH⁺.

Príklad 3

Príprava diformiátu (2/?,3ŕ?,4S,5S)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-fenetylamino-2-(2piperidin-1-yl-etylamino)-purin-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 1 sa pripravila v nadpise uvedená zlúčenina za použitia 0,581 ml (0,058 mmol) 0,1 mmol/ml roztok fenyletylamínu v izopropanole a 0,045 g (0,344 mmol) 2-(2-piperidín-1-yl)etylamínu.

Zmes, pripravená zmiešaním 0,02 g (0,043 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci vyššie opísaného postupu, ďalej 0,581 ml (0,058 mmol) 0,1 mmol/ml roztoku fenyletylamínu v izopropanole a 0,345 ml (0,069 mmol) 0,2 mmol/ml roztoku diizopropyletylamínu v izopropanole, sa zahrievala v uzavretej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 53 °C 16 hodín.

Po odstránení prchavých látok z reakčnej zmesi v prúde dusíka sa k vzniknutého zvyšku pridalo 0,045 g (0,344 mmol) 2-piperidín-1-yl-etylamínu a 0,2 ml dimetylsulfoxidu a táto zmes sa zahrievala pri teplote 92 °C 4 dni. Výsledný

-60·· ·· ·· ·· • ···· ··· • · · B B · • B · · · · ··· ·· ···· ΒΒ · surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 3,9 minút, m/z = 583 MH⁺.

Príklad 4

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-hydroxyetylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,5 ml (0,047 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3 (0,044 g/ml), získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a 0,013 ml (0,074 mmol) diizopropyletylamínu, sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 53 °C 16 hodín.

Po odstránení prchavých látok z reakčnej zmesi v prúde dusíka sa k zvyšku pridalo 0,017 g (0,28 mmol) etanolamínu a 0,1 ml dimetylsulfoxidu.

Potom sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 90 °C 5 dní. Výsledný surový produkt sa prečistil autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,007 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,98 minút, m/z = 572 MH⁺.

Príklad 5

Príprava diformiátu (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-{6-(1 -etylpropylamino)2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 4, sa za použitia 0,005 g (0,056 mmol) 1-etylpropylamínu a 0,035 g (0,28 mmol) 2(1-metyl-1ŕ/-imidazol-4-yl)etylamínu, pripraveného z príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s miernym prebytkom tuhého hydroxidu sodného v metanole a odparením prchavých zložiek z reakčnej zmesi v prúde dusíka a zahrievaním získala reakčná zmes pri teplote 90 °C 5 dní.

• ·· ·· ·· ·· ···· ···· ···

-61 • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Po následnej lyofilizácii sa získalo 0,009 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,61 minút, m/z = 526 MH⁺.

Príklad 6

Príprava diformiátu (2S,3S,4f?,5/?)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)2-(2-piperi-dín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 4 sa za použitia 0,005 g (0,056 mmol) 1-etylpropylamínu a 0,036 g (0,28 mmol) 2-(2-piperidín-1-yl)etylamínu vzniknutá reakčná zmes zahrievala pri teplote 90 °C 5 hodín za vzniku v nadpise uvedenej zlúčeniny.

Zmes, pripravená zmiešaním 0,5 ml (0,047 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3 (0,044 g/ml), ďalej 0,005 g (0,056 mmol) 1-etylpropylamínu a 0,013 ml (0,074 mmol) diizopropyletylamínu sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 53 °C 16 hodín.

Potom sa z reakčnej zmesi odstránili v prúde dusíka prchavé zložky a k zvyšku sa pridalo 0,036 g (0,28 mmol) 2-piperidín-1-yl-etylamínu a 0,10 ml dimetylsulfoxidu a táto zmes sa zahrievala pri teplote 90 °C 5 dní.

Výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky. LC/MS systém A: R_t = 3,76 minút, m/z = 529 MH⁺.

Príklad 7

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 Himidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 4 sa za použitia 0,006 g (0,056 mmol) 3,3-dimetylbutylamínu a 0,035 g (0,28 mmol) 2-(1 -metyl-1 H-62• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· imidazol-4-yl)etylamínu, pripraveného analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 5 a zahrievaním reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 5 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,007 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,8 minút, m/z = 540 MH⁺.

Príklad 8

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5/^:?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(cyklopentylamino)-2(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 4 sa za použitia 0,005 g (0,056 mmol) cyklopentylamínu a 0,036 g (0,28 mmol) 2-piperidín-1-yletylamínu a po zahriatí vzniknutej reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 5 dní a následnej lyofilizácii, pripravilo 0,003 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,44 minút, m/z = 527 MH⁺.

Príklad 9

Príprava diformiátu /V-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3f?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-6-(tetrahydrotiopyrán-4-yl-amino)-9H-purín-2-ylamino]etyl}guanidínu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,15 g (0,32 mmol) 4R-acetoxy-2R-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci vyššie opísanej prípravy, ďalej 0,041 g (0,35 mmol) tetrahydrotiopyrán-4-ylamínu a 0,139 ml (0,80 mmol) diizopropyletylamínu v 2,5 ml izopropanolu, sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 50 °C 19 hodín.

Po odstránení prchavých zložiek v prúde dusíka z reakčnej zmesi sa vzniknutý zvyšok rozpustil v 0,6 ml dimetylsulfoxidu.

Jedna šestina vzniknutého roztoku sa preniesla do ďalšej uzavretej reakčnej trubice a po pridaní 0,021 ml (0,32 mmol) etyléndiamínu sa reakčná zmes • ·· ·· ·· ·· ··· · · ·· · · · ·

-63• · · · · · ··· ·· ···· ·· · zahrievala v teplotnom rozmedzí 90 až 92 °C 3 dni. Po ochladení na teplotu miestnosti sa reakčná zmes zriedila 0,50 ml 50%-ného vodného roztoku etanolu a pridalo sa k nej 0,016 g (0,11 mmol) hydrochloridu 1H-pyrazol-karboxamidínu a 0,007 g (0,11 mmol) imidazolu a táto reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 60 °C 4 dni.

Po pridaní ďalších 0,016 g (0,11 mmol) hydrochloridu 1H-pyrazol-karboxamidínu a 0,007 g (0,11 mmol) imidazolu, sa reakčná zmes zahrievala ďalej počas 4 dní. Po odstránení prchavých zložiek v prúde dusíka sa výsledný zvyšok vo forme surového produktu prečistil autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,003 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,47 minút, m/z = 533 MH⁺.

Príklad 10

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(3-fluór-4-hydroxyfenylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,15 g (0,32 mmol) 4R-acetoxy-2/?-(2,6dichlórpurín-9-yl)-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci vyššie opísaného postupu a 0,139 ml (0,8 mmol) diizopropyletylamínu v 2,5 ml izopropanolu sa zahrievala v uzavretej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 50 °C 19 hodín.

Po odstránení prchavých zložiek v prúde dusíka z reakčnej zmesi sa výsledný zvyšok rozpustil v 0,6 ml dimetylsulfoxidu a jedna šestina zo získaného roztoku sa preniesla do ďalšej uzavretej reakčnej trubice a po pridaní 0,041 g (0,32 mmol) 2-piperidín-1-yletylamínu sa zmes zahrievala v teplotnom rozmedzí 90 až 92 °C 4 dni.

Výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo

0,01 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej s nádychom do biela tuhej látky.

• ·· ·· ·· ·· ·· · · ···· ···

-64• · · · · · ··· ·· ···· ·· ·

LC/MS systém A: R_t= 3,53 minút, m/z = 569 Mhľ.

Príklad 11

Príprava metylamidu diformiátu kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-2-piperidín-1-yl-etylamino)-9H-purín-6-yl-amino]etánsulfónovej

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 10 sa za použitia metylamidu kyseliny 2-aminoetylsulfónovej a 0,041 g (0,32 mmol) 2-piperidín-1-yl-etylamínu a zahrievania reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 4 dni a následnej lyofilizácii pripravilo 0,011 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme s nádychom do biela svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém: R_t = 3,41 minút, m/z = 580 Ml-ľ.

Príklad 12

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[2-(2-piperidín-1 -yletylamino)-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,04 g (0,35 mmol) tetrahydrotiopyrán-4-ylamínu a 0,041 g (0,32 mmol) 2-piperidín1-yl-etylaminu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 3 dni a po následnej lyofilizácii pripravilo 0,011 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme s nádychom do biela svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,33 minút, m/z = 559 MH⁺.

Príklad 13

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[2-(2-pyridín-2-yletylamino)-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,035 g (0,35 mmol) tetrahydropyrán-4-ylamínu a 0,039 g (0,32 mmol) 2-pyridín-2-yletyl-65·· ·· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · ···· ···· • · · · · · amínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 10 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,013 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,21 minút, m/z = 537 MH⁺.

Príklad 14

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[2-(2-piperidín-1 -yletyIamino)-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,035 g (0,35 mmol) tetrahydropyrán-4-yl-amínu a 0,041 g (0,32 mmol) 2-piperidín-1-yletylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 3 dni a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,004 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: Rt= 2,17 minút, m/z = 543 MH⁺.

Príklad 15

Príprava formiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[2-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,035 g (0,35 mmol) tetrahydropyrán-4-yl-amínu a 0,048 g (0,32 mmol) (S)-(-)-2-amino-3fenyl-1-propanolu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 12 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,015 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t= 2,64 minút, m/z = 566 Ml-ľ.

Príklad 16

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(2,2-difenyletylamino)-2-[2-(pyridín-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

-66• ·· ·· ·· ·· · · · · · · • · · · · • · · · · · • · · · · ··· ···· ·· ···· ·· •· • ·· •· ··

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 1 sa za použitia 0,047 g (0,344 mmol) 2-(pyridín-2-ylamino)etylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 92 °C 4 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 4,27 minút, m/z = 648 MH⁺.

Príklad 17

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 1 sa za použitia 0,104 g (0,688 mmol) (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 92 °C 9 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,0054 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 4,67 minút, m/z = 662 MH⁺.

Príklad 18

Príprava formiátu 4-(2-{6-amino-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-9H-purín-2-ylamino}etyl)benzénsulfónamidu

Do roztoku 0,13 g (0,28 mmol) 4/?-acetoxy-2R-(2,6-dichlórpurín-9-yl)-5S-(3etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy v 10 ml tetrahydrofuránu sa za stáleho miešania v atmosfére dusíka a pri teplote -78 °C nakondenzovalo približne 20 ml plynného amoniaku a vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Po odparení zmesi za vákua sa získalo 0,153 g žltej látky penovitého charakteru.

Jedna šestina tohto materiálu (0,0255 g) sa zahrievala spolu s 0,069 g (0,344 mmol) 4-(2-aminoetyl)benzénsulfónamidu v 0,20 ml dimetylsulfoxidu pri teplote 92 °C 4 dni. Výsledný surový produkt sa prečistil autopreparatívnou vysokovýkonnou • ·· ·· ·· ·· ·· · · ···· ·· • · · · · · · • · · · · ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ··

-67kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,002 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 3,47 minút, m/z = 531 MH⁺.

Príklad 19

Príprava diformiátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-(ŕrans-4-amino-cyklohexylamino)-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 4 sa za použitia 0,032 g (0,28 mmol) ŕrans-cyklohexán-1,4-diamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 5 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,005 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,62 minút, m/z = 625 MH⁺.

Príklad 20

Príprava diformiátu (2S_I3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(3-jódbenzylamino)-2[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 4 sa za použitia 0,013 g (0,056 mmol) 3-jódbenzylamínu a 0,035 g (0,28 mmol) 2-(1 -mety 1-1Himidazol-4-yl)etylamínu, pripraveného z príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s miernym nedostatkom tuhého hydroxidu sodného vmetanole, a odparením prchavých zložiek z reakčnej zmesi v prúde dusíka pri teplote 90 °C počas 5 dní, získalo po následnej lyofilizácii 0,011 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,64 minút, m/z = 672 MH⁺.

Príklad 21

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(2-cyklohexyletylamino)-2-[(2-(1 -metyl-1Himidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu ·· ··

-68Analogickým postupom, opísaným v príklade 4 sa za použitia 0,007 g (0,056 mmol) 2-cyklohexyletylamínu a 0,035 g (0,28 mmol) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4yl)etylamínu, pripraveného z príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s miernym nedostatkom tuhého hydroxidu sodného v metanole, a odparením prchavých zložiek z reakčnej zmesi v prúde dusíka pri teplote 90 °C počas 5 dní, získalo po následnej lyofilizácii 0,009 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,70 minút, m/z = 566 MH⁺.

Príklad 22

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(2-cyklohexyletylamino)-2-(1 S-hydroxymetyl2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v príklade 4 sa za použitia 0,007 g (0,056 mmol) 2-cyklohexyletylamínu a (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu (0,113 g, 0,75 mmol), a po zahrievaní reakčnej zmesi najskôr pri teplote 90 °C počas 5 dní a potom ešte pri teplote 100 °C počas 3 dní a následnej lyofilizácii získalo 0,006 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky. LC/MS systém A: R_t = 4,53 minút, m/z = 592 Mhľ.

Príklad 23

Príprava diformiátu A/-(2-{6-(2,2-difenyletylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4Sdihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-9H-purín-2-ylamino}etyl)guanidínu

Analogickým postupom, opísaným v príklade 4 sa za použitia 0,017 g (0,28 mmol) etyléndiamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 2 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,009 g formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(2-aminoetylamino)-6-(2,2-difenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-

3,4-diolu vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 2,61 minút, m/z = 571 MH⁺.

• ·· ·· ·· ·· ···· ···· ·· • · · · · · · • ···· ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ··

V predchádzajúcej, vyššie opísanej operácii sa získaný amín zahrieval s 0,002 g (0,03 mmol) imidazolu a 5,0 g (0,03 mmol) hydrochloridu 1/7-pyrazolkarboxamidu v zmesi 0,25 ml vody a 0,25 ml etanolu pri teplote 62 °C počas 24 hodín. Po odstránení rozpúšťadla sa vzniknutý zvyšok prečistil autopreparatívnou vysokovýkonnou plynovou chromatografiou (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,001 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,84 minút, m/z 613 MH⁺.

Príklad 24

Príprava formiátu /7-(4-(6-(2,2-difenyletylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4Sdihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-9/7-purín-2-ylamino}cyklohexyl)acetamidu

V nadpise uvedená žiadaná zlúčenina bola v množstve 0,003 g vo forme svetlohnedej tuhej látky ako vedľajší produkt reakcie, opísanej vyššie v rámci príkladu 19 a po následnej lyofilizácii, ako posledného stupňa izolácie uvedenej zlúčeniny, pripravená.

LC/MS systém B: R_t = 3,02 minút, m/z 667 MH⁺.

Príklad 25

Príprava diformiátu metylamidu kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4Sdihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-2-(2-guanidínetylamino)-9H-purín-6-ylamino]-etánsulfónovej

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 9 sa za použitia 0,041 g (0,35 mmol) metylamidu kyseliny 2-aminoetylsulfónovej a po lyofilizácii, pripravilo 0,013 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hygroskopickej hnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,38 minút, m/z = 554 MH⁺.

• ·· ·· ·· ·· ·· · · ···· ··· • · · · é · · • · · · · ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ·· ·

-70Príklad 26

Príprava diformiátu /V-(2-{6-(1,1-dioxohexahydro-1X-6-tiopyrán-4-ylamino)-9-[5S-(3etylizoxazol-5-yl)-3/?₁4S-dihydroxy-tetrahydrofurán-2R-yl]-9/7-purín-2-ylamino}etyl)guanidínu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 9 sa za použitia 0,052 g (0,35 mmol) 1,1-dioxo-hexahydro-1-X-6-tiopyrán-4-ylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 50 °C počas 4 dní a potom ešte za prítomnosti 0,021 ml (0,32 mmol) etyléndiamínu a pri zahrievaní pri teplote 90 °C počas 5 dní a po následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,002 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme oranžovohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,31 minút, m/z = 565 MH⁺.

Príklad 27

Príprava formiátu metylamidu kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3/?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-9/7-purín-6-ylaminojetánsulfónovej

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,048 g (0,35 mmol) metylamidu kyseliny 2-aminoetylsulfónovej a veľkého prebytku (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 12 dní a po následnej lyofilizácii, pripravilo 0,014 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltohnedej tuhej látky.

LC/MS systém A: Rt = 3,88 minút, m/z = 603 MH⁺.

Príklad 28

Príprava formiátu 1 -{4-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán2/?-yl]-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-9H-purín-2-ylamino]piperidín-1-yl}etanónu • · · · · · ···· · · · · • · · · · ·

-71 Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,050 g (0,35 mmol) 1-(4-aminopiperidín-1-yl)etanónu a veľkého prebytku (S)-(-)-2amino-3-fenyl- 1-propanolu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 12 dní a po následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,022 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hygroskopickej hnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 2,57 minút, m/z = 607 MH⁺.

Príklad 29

Príprava diformiátu 1 -(4-{2-(frans-4-aminocyklohexylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-9H-purin-6-ylamino]piperidín-1-yl}etanónu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,050 g (0,35 mmol) 1-(4-aminopiperidín-1-yl)etanónu a 0,037 g (0,32 mmol) frans-cyklohexán-1,4-diamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 3 dní a po následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,013 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,09 minút, m/z = 570 ΜΗ*.

Príklad 30

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[3-(2-pyridín-2-yl-etylamino)-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,037 g (0,35 mmol) tetrahydrotiopyrán-4-ylamínu a 0,039 g (0,32 mmol) 2-pyridín2-yletylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 7 dni a po následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,01 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme tmavohnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 2,41 minút, m/z = 553 MH⁺.

• ·· ·· ·· ·· ···· ···· * · • · · · · · · • ···· ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ··

-72Príklad 31

Príprava diformiátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(1,1-dioxohexahydro-1X-6-tiopyrán-4-ylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,052 g (0,35 mmol) 1,1-dioxohexahydro-1-Ä-6-tiopyrán-4-ylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 50 °C 4 dni a po pridaní 0,041 g (0,32 mmol) 2-piperidín1-yletylamínu a po ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 5 dní a po následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,006 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,17 minút, m/z = 591 MH⁺.

Príklad 32

Príprava diformiátu (2/?,3/?,4S,5S)-2-[2-(ŕrans-4-aminocyklohexylamino)-6-(1,1-dioxohexahydro-1X-6-tiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,052 g (0,35 mmol) 1,1-dioxohexahydro-1X-tiopyrán-4-ylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 50 °C počas 4 dní a po pridaní 0,037 g (0,32 mmol) transcyklohexán-1,4-diamínu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 5 dní a následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,008 žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme tmavohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,12 minút, m/z = 577 MH⁺.

Príklad 33A a 33B

Príprava A/-(2-{6-(1-acetylpiperidín-4-ylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]purín-2-ylamino}etyl)guanidínu v zmesi 1:1 s ·· ·· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ·· ·

-73diformiátom /V-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?yl]-6-(piperi-dín-4-yl-amino)-9H-purín-2-ylamino]etyl]guanidínu

Analogickým postupom opísaným v rámci príkladu 9, sa za použitia 0,05 g (0,35 mmol) 1-(4-aminopiperidín-1-yl)etanónu a po uskutočnení konečnej lyofilizácie, pripravilo 0,003 g zmesi (1:1) v nadpise uvedených zlúčenín vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,25 a 2,13 minút, m/z = 558 a 516 MH⁺.

Príklady 34A a 34B

Príprava (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, v zmesi 1:1 s formiátom (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-6-(1-oxohexahydrotio-1X-4-tiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-

3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným v rámci príkladu 10 sa za použitia 0,052 g (0,35 mmol) tetrahydrotiopyrán-4-ylamínu a veľkého prebytku (S)-(-)-2-amino-3fenyl-1-propanolu a po zahrievaní reakčnej zmesi na teplotu 90 °C počas 12 dní, pripravilo po následnej konečnej lyofilizácii 0,08 g zmesi v nadpise uvedených žiadaných zlúčenín vo forme oranžovo-hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,90 minút a 2,50 minút, m/z 582 a 598 MH⁺.

Príklad 35

Príprava formiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 -etylpropylamino)-2S(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes pripravená zmiešaním 0,046 g (0,09 mmol) 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6(1-etyl-propylamino)purín-9-yl]-5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3ŕ?-yl-esteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 8, získaného v rámci vyššie opísaného postupu • · · · · · ···· ···· • · · · · ·

-74prípravy a 0,130 g (0,89 mmol) 3-(S)-(-)-2-amino-3-fenyl-propanolu v 0,5 ml bezvodého dimetylsulfoxidu, sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 90 °C počas 175,5 hodín.

Po pridaní k zmesi ďalších 0,13 g (0,89 mmol) 3-(S)-(-)-2-amino-3-fenylpropanolu, sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 90 °C 67 hodín. Po zriedení reakčnej zmesi zmesou acetonitrilu a vody (1:1), obsahujúcej 0,1% kyselinu mravčiu až na objem 2 ml, sa zmes prečistila autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a potom sa lyofilizovala.

Získalo sa 0,017 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,91 minút, m/z = 552 MH⁺.

Príklad 36

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)2-(pyrolidín-3R-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným v rámci príkladu 35, sa za použitia 0,117 g (0,89 mmol) (3/?)-(+)-3-aminopyrolidínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 177,5 hodiny a konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,02 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme béžovej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 2,35 minút, m/z 487 MH⁺.

Príklad 37

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 -etylpropylamino)2-(2-pyridín-2-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným v rámci príkladu 36, sa za použitia 0,110 g (0,89 mmol) 2-(2-aminoetyl)pyridínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 177,5 hodiny a konečnej následnej lyofilizácii, pripravilo 0,02 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme béžovej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,44 minút, m/z 523 MH⁺.

-75• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Príklad 38

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 -etylpropylamino)2-(2-morfolín-4-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,02 g (0,04δ mmol) (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-

6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 14, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a 0,060 g (0,46 mmol) 2-etylaminomorfolínu v 0,5 ml dimetylsulfoxidu, sa zahrievala pri teplote 90 °C 19 hodín v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R).

Potom sa reakčná zmes zriedila zmesou acetonitrilu a vody (1:1), obsahujúcou 0,1% kyselinu mravčiu až na objem 2 ml a potom sa prečistila pomocou autopreparativnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a následne sa lyofilizovala.

Získalo sa 0,017 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme béžovej tuhej látky.

LC/MS systém: R_t = 3,57 minút, m/z 531 MH⁺.

Príklad 39

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-ŕrans-4-aminocyklohexylamino)-6-(1 -etylpropylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným v rámci príkladu 35, sa za použitia 0,101 g (0,89 mmol) trans-l ,4-diaminocyklohexánu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 177,5 hodiny a ďalšom pridaní 0,101 g (0,89 mmol) ŕrans-1,4diaminocyklohexánu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 67 hodín a následnej lyofilizácii, pripravilo 0,017 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,21 minút, m/z 515 MH⁺.

• · · · · · • · · · ···· • · · · · ·

-76Príklad 40

Príprava diformiátu A/-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-6-(1-etylpropylamino)-9H-purín-2-ylamino]etyl}guanidínu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 35, sa za použitia 0,054 g (0,89 mmol) etyléndiamínu pripravila reakčná zmes, ktorá sa zahrievala pri teplote 90 °C 86,5 hodiny.

Potom sa k reakčnej zmesi pridalo 0,061 g (0,89 mmol) imidazolu a 0,132 g (0,89 mmol) 1H-pyrazolkarboxamidínu a táto reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 90 °C 18 hodín.

Po následnej konečnej lyofilizácii sa získalo 0,015 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovej tuhej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,45 minút, m/z 503 MH⁺.

Príklad 41

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-(2-piperidín-1 -yletylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,025 g 4R-acetoxy-2/?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydro-furán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci postupu prípravy opísanej vyššie, ďalej 0,005 g 3,3dimetylbutylamínu a 0,007 g Λ/,/V-diizopropyletylamínu v 0,7 ml izopropanolu, sa ponechala v pokoji stáť pri teplote miestnosti 16 hodín.

Po odstránení rozpúšťadla, sa k zvyšku pridalo 0,05 ml 2-piperidínetylamínu a 0,05 ml dimetylsulfoxidu a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napríklad Reacti-vial^R) pri teplote 90 °C 32 hodín. Po pridaní 0,05 ml 2-piperidínetylamínu sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 110 °C ďalších 16 hodín. Po prečistení pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a následným vymrazením lyofilizáciou sa získalo 0,005 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltej tuhej látky.

LC/MS systém A: Rt = 3,52 minút, m/z = 543 MH⁺.

-77Príklad 42

Príprava diformiátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-(2-morfolín-4-yletylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým spôsobom, opísaným v rámci príkladu 41 sa za použitia 0,05 ml, 4-(2-aminoetyl)morfolinu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 32 hodín a ďalšom pridaní 0,05 ml 4-(2-aminoetyl)morfolínu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C 16 hodín a konečnej lyofilizácii, sa pripravilo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 2,48 minút, m/z = 545 MH⁺.

Príklad 43

Príprava diformiátu (2/?,3R,4S,5S)-2-{6-benzylamino-2-[2-(1 -metyl-1 H-imidazol-4yl)-etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 41 sa za použitia 0,006 g benzylamínu a spracovaním reakčnej zmesi pri teplote miestnosti počas 16 hodín a potom po pridaní 0,033 g 2-(1-metyl-1H-imidazol)etylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 32 hodín a ďalšom pridaní 0,033 g 2-(1-metyl-1Himidazol-4-yl)etylamínu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C 16 hodín a následnej lyofilizácii, sa pripravilo 0,009 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovej látky.

LC/MS systém A: R_t = 3,43 minút, m/z = 546 M H*.

Príklad 44

Príprava diformiátu (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-benzylamino-2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 41 sa za použitia 0,006 g benzylamínu a spracovaním reakčnej zmesi pri teplote miestnosti počas 16 hodín a potom po pridaní 0,05 ml 2-piperidínetylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri • ·

-78teplote 90 °C 32 hodín a po ďalšom pridaní 0,05 ml 2-piperidínetylamínu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C 16 hodín a následnej lyofilizácii, sa pripravilo 0,005 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetložltej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,48 minút, m/z = 549 MH⁺.

Príklad 45

Príprava diformiátu (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)-2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 41 sa za použitia 0,008 g (S)-(-)-2-amino-3-fenyl-1-propanolu a po spracovaní reakčnej zmesi pri teplote miestnosti počas 16 hodín a potom po pridaní 0,05 ml 2-piperidínetylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 32 hodín a ďalšom pridaní 0,05 ml 2piperidínetylamínu a ďalšom zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C 16 hodín a následnej lyofilizácii, sa pripravilo 0,006 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetložltej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,40 minút, m/z = 593 MH⁺.

Príklad 46

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(cyklopentylamino)-6-(1 -etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Roztok, pripravený zmiešaním 0,206 g (0,472 mmol) (2R,3/?,4S,5S)-2-[2chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4diolu, t.j. medziproduktu 14, získaného postupom prípravy opísaným vyššie s 2,2 ml vysušeného dimetylsulfoxidu, sa v množstve 0,1 ml (0,021 mmol) pridal k 0,011 g (0,126 mmol) cyklopentylamínu, predloženého v uzavretej reakčnej trubicu (napríklad Reacti-vial^R) s objemom 1 ml.

Potom sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 90 °C 114,75 hodín a výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej • ·· ·· ·· Φ· ·· · · ··>· ··· • · · · · · · • · · · · · e ··· ·· ···· ·· ··· chromatografie (HPLC) a následnou lyofilizáciou sa získalo 0,001 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 3,07 minút, m/z 486 MH⁺.

Príklad 47

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(3,4-dimetoxyfenyletylamino)-6-(1 -etylpropyIamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 46 sa za použitia 0,023 g (0,126 mmol) 3,4-dimetoxyfenyletylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 73,5 hodiny a následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,003 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky. LC/MS systém A: R_t = 4,28 minút, m/z 582 MH⁺.

Príklad 48

Príprava formiátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-[2-(4-tetrahydropyranyl)amino)-6-(1 -etylpropylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 46 sa za použitia 0,013 g (0,126 mmol) tetrahydropyrán-4-ylamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 204,75 hodiny a ďalšom pridaní 0,013 g (0,126 mmol) tetrahydropyrán-4-ylamínu a zahrievaním reakčnej zmesi pri teplote 110 °C ďalších 67 hodín a následnej konečnej lyofilizácii, pripravilo 0,001 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky. LC/MS systém B: R_t = 2,73 minút, m/z 502 MH⁺.

Príklad 49

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(1 -benzylpyrolidín-3S-1 -ylamino)-6-(1 -etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

-80Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu sa za použitia 0,022 g (0,126 mmol) (3S)-(+)-1-benzyl-3-aminopyrolidinu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 204,75 hodiny, pripravilo po konečnej lyofilizácii 0,006 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS systém B: R_t = 2,59 minút, m/z 577 Ml-ľ.

Príklad 50

Príprava diformiátu 5-(5R-{6-(1 -etylpropylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-3S,4/?-dihydroxytetrahydrofurán-2S-yl)izoxazol-3-karbaldehyd-oxímu

Zmes, pripravená zmiešaním 0,016 g (0,13 mmol) /V-hydroxy-2-hydroxyiminoacetimidoylchloridu a 0,02 g (0,044 mmol) (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]purín-9-yl}-5-etinyltetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 28, získaného v rámci postupu prípravy opísanej vyššie v 2 ml etylacetátu a 0,1 ml vody, sa intenzívne miešala spolu s 0,081 g (0,96 mmol) tuhej formy hydrogénuhličitanu sodného pri teplote miestnosti.

Po miešaní vzniknutej reakčnej zmesi 169,5 hodiny sa pridalo ďalších 0,032 g (0,26 mmol) A/-hydroxy-2-hydroxyiminoacetimidoylchloridu, ďalej 0,162 g tuhej formy hydrogénuhličitanu sodného a 0,1 ml vody a rovnaké množstvo po 4 dňoch. Po uplynutí ďalších 20 hodín sa reakčná zmes zriedila 5 ml vody a potom sa 2x extrahovala vždy s 3 ml etylacetátu.

Po oddelení organickej a vodnej fázy, sa spojené organické extrakty odparili a výsledný surový produkt sa prečistil autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,001 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MS systém C: R_t = 2,25 minút, m/z 541 MH⁺.

Príklad 51

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)-2-(2-morfolín-4-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu • ·· ·· ·· ·· ···· · · · · ···

-81 • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Zmes pripravená zmiešaním 0,025 g 4/?-acetoxy-2/?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3ŕ?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie, ďalej 0,008 g (S)-(-)2-amino-3-fenyl-1-propanolu a 0,007 g Λ/,/V-diizopropyletylamínu v 0,7 ml izopropanolu sa nechala stáť v pokoji pri teplote miestnosti 16 hodín.

Potom, po odstránení rozpúšťadla vo vákuu sa k zmesi pridalo 0,05 ml 4-(2aminoetyl)morfolínu a 0,05 ml dimetylsulfoxidu a táto reakčná zmes sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R>) pri teplote 90 °C 32 hodín.

Po pridaní ďalších 0,05 ml 4-(2-aminoetyl)morfolínu sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 110 °C 16 hodín.

Po prečistení (dvojnásobnom) pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,004 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bielej tuhej látky.

LC/MC systém B: R_t = 2,4 minúty, m/z = 595 MH⁺.

Príklad 52

Príprava diformiátu (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-6-[6-benzylamino-2-(2pyridín-2-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes pripravená zmiešaním 0,025 g 4R-acetoxy-2f?-(2,6-dichlórpurín-9-yl)5S-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 3, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie, ďalej 0,006 g benzylamínu a 0,007 g /V,/V-diizopropyletylamínu v 0,7 ml izopropanolu sa nechala stáť v pokoji pri teplote miestnosti 16 hodín.

Potom, po odstránení rozpúšťadla z reakčnej zmesi vo vákuu sa k zmesi pridalo 0,05 ml 2-(2-aminoetyl)pyridínu a 0,05 ml dimetylsulfoxidu a táto reakčná zmes sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R)) pri teplote 90 °C 32 hodín. Potom po pridaní 0,05 ml 4-(2-aminoetyl)morfolínu sa reakčná zmes zahrievala pri teplote 110 °C ďalších 16 hodín.

Po dvojnásobnom prečistení pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej lyofilizácii sa získalo 0,002 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme krémovej tuhej látky.

• · • ·

-82LC/MC systém B: Rt = 2,56 minúty, m/z = 543 MH⁺.

Príklad 53

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(1 -etylpropylamino)2-[2-(pyridin-2-yl-amino)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 46, sa za použitia 0,017 g (0,126 mmolu), 3-(pyridín-2-yl-amino)etylamínu, a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C po dobu 73,5 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,005 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bielej tuhej látky. LC/MS Systém A: R_t= 3,41 minúty; m/z = 538,0 MH⁺.

Príklad 54

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(1 -etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1 -yl-etylamino)purín-9-yl]-5-[3-(1-hydroxyetyl)izoxazol·5-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným ďalej v rámci príkladu 67, sa za použitia 0,022 g (0,04 mmolu), (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5[3-(1-hydroxyetyl)izoxazol-5-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 23, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy, pripravilo po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,25 minúty; m/z = 545,0 MH⁺.

Príklad 55

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(1 -etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1 -yl-etylamino)purín-9-yl]-5-(3-metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným ďalej v rámci príkladu 67, sa za použitia 0,022 g 4R-acetoxy-2/?-[2-chlór-6-(1 -etylpropylamino)purín-9-yl]-5S-(3-metyl-izoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3/?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 20 (0,45 • · • ·

-83mmolu) získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a po zahrievaní reakčnej zmesi v tepelnom rozmedzí od 90 do 95 °C 57 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,008 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,38 minúty; m/z = 515,0 MH⁺.

Príklad 56

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(1 -etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1 -yletyIamino)purín-9-yl]-5-(3-propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným ďalej v rámci príkladu 67, sa za použitia 0,027 g (0,045 mmolu) 4R-acetoxy-2/?-[2-chlór-6-(1-etyl-propylamino)-purín-9-yl]5S-(3-propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 21, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a po zahrievaní reakčnej zmesi v tepelnom rozmedzí od 90 do 95 °C 57 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,01 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,6 minúty; m/z = 543,0 MH⁺.

Príklad 57

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(1-etyl-propylamino)-2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)purín-9-yl]-5-(3-hydroxymetylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným ďalej v rámci príkladu 67, sa za použitia 0,028 g (0,051 mmolu) trifluóracetátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-hydroxymetylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, t.j. medziproduktu 24, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 95 °C 16,5 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,002 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,21 minúty; m/z = 531,0 MH⁺.

• ·· ·· ·· ·· ···· ···· ··· • · · · · 9 ·

-84• · · · · · ··· ·· ···· ·· ·

Príklad 58

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-[3-(1-hydroxyetyl)izoxazol-5-yl]tetrahydrofurán-

3.4- diolu

Zmes pripravená zmiešaním 0,022 g (0,04 mmolu) (2R,3R,4S,5S)-2-[2-chlór6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-[3-(1-hydroxyetyl)izoxazol-5-yljtetrahydrofurán-

3.4- diolu, t.j. medziproduktu 23, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie a 0,038 g (0,3 mmolu) 2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamínu (pripraveného z príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s miernym nedostatkom tuhého hydroxidu sodného v metanole a odparením prchavých zložiek z reakčnej zmesi v prúde dusíka) v 0,1 ml vysušeného dimetylsufoxidu sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R)) pri teplote 110 °C počas 28,5 hodín.

Výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a po následnej konečnej lyofilizácii sa získalo 0,001 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme svetlohnedej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,17 minúty, m/z = 542 MH⁺.

Príklad 59

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylaminojpurín-9-yl}-5-(3-metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 58, sa za použitia 0,022 g (0,045 mmolu) 4R-acetoxy-2R-[2-chlór-6-(1-etyl-propylamino)purín-9-ylj-5S-(3-metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3R-yl-esteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 20, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C počas 28,5 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,019 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,23 minúty; m/z = 512,0 MH⁺.

• ·

-85Príklad 60

Príprava diformiátu (2R,3ŕ?,4S,5S)-2-{6-(1 -etyl-propylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 58, sa za použitia 0,027 g (0,045 mmolu) 4R-acetoxy-2/?-[2-chlór-6-(1-etyl-propylamino)-purín-9-yl]5S-(3-propyl-izoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3ŕ?-ylesteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 21, získaného v rámci vyššie opísaného postupu prípravy a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 110 °C po dobu 28,5 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,011 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MS Systém A: R_t= 3,42 minúty; m/z = 540,0 Ml-ľ.

Príklad 61

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1 -etyl-propylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 /7-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-hydroxymetylizoxadiazol-5-yl)tetrahydrofurán-

3,4-diolu

Na prípravu v nadpise uvedenej zlúčeniny sa použil analogický postup, opísaný vyššie v rámci príkladu 58, kedy bola zmes pripravená zmiešaním 0,028 g (0,051 mmolu) trifluóracetátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-

9-yl]-5-(3-hyd-roxymetylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 24, získaného postupom prípravy opísaným vyššie a 0,038 g (0,3 mmolu) 2-(1metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamínu, (pripraveného z príslušného dihydrochloridu neutralizáciou s miernym nedostatkom tuhého hydroxidu sodného v metanole a odparením prchavých zložiek z reakčnej zmesi v prúde dusíka) v 0,1 ml vysušeného dimetylsulfoxidu, ktorá sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reactivial^(R)), pri teplote 110 °C počas 16,5 hodiny.

Výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej, vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a za použitia konečnej následovnej lyofilizácie.

• ·· ·· ·· ·· ·· · · ···· ···

-86• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ···

Získalo sa 0,007 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,12 minúty, m/z = 528 Mhľ.

Príklad 62

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5/?)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-{6-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)-2-[2-(pyridín-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4diolu

Z roztoku, pripraveného rozpustením 0,11 g (0,22 mmolu) acetátu (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetra-hydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 26, získaného postupom prípravy opísaným vyššie v 2,5 ml vysušeného dimetylsulfoxidu sa odobral alikvotný podiel 0,5 ml (0,044 mmolu), ktorý sa pridal v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R)) k 0,06 g (0,44 mmolu) 2-(pyridín-2-ylamino)etylamínu t.j. medziproduktu 27, získaného postupom prípravy opísaným vyššie a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 90 °C 80 hodín.

Po prečistení surového produktu autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) a po následnom konečnom vymrazení (lyofilizácii) sa získalo 0,016 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bielej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,52 minúty, m/z = 602 MH⁺.

Príklad 63

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)-2-(2-(pyrolidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu sa za použitia 0,05 g (0,44 mmolu) 1-(2-aminoetyl)pyrolidínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C počas 80 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,024 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bielej tuhej látky.

• ·· ·· ·· ·· ···· ···· ·· • · · · · · · • · · · · · · · • · · · · · · ······· ·· ···· ··

-87LC/MC systém A: R_t = 3,43 minúty, m/z = 579 MH⁺.

Príklad 64

Príprava diformiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(2-amino-etylamino)-6-(1 S-hydroxymetyl-2fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom opísaným vyššie v rámci príkladu 62 sa za použitia 0,026 g (0,44 mmolu) etyléndiamínu a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 20 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,018 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,36 minúty, m/z = 525 MH⁺.

Príklad 65

Príprava diformiátu (2S,3S,4ŕ?,5ŕ?)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(3-jód-benzylamino)2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Roztok pripravený rozpustením 0,015 g (0,026 mmolu) acetátu (2R,3R, 4S,5S)-2-[2-chlór-6-(3-jódbenzylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 25, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie v 1 ml vysušeného dimetylsulfoxidu sa pridal k 0,016 g (0,13 mmolu) 2piperidínetylamínu predloženému v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R)) a táto reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 90 °C 76 hodín.

Po prečistení surového produktu pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie a následnej konečnej lyofilizácii sa získalo 0,003 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme bielej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 4,56 minúty, m/z = 592 MH⁺.

Príklad 66

Príprava formiátu (2R,3R,4S,5S)-2-[2-etylamino-6-(3-jódbenzylamino)purín-9-yl]-5(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diolu

-88·· ·· ·· ·· • · · · · · · • · e · · · ···· ···· • · · · · ·

Analogickým postupom opísaným vyššie v rámci predchádzajúceho príkladu 65 sa za použitia 0,017 g (0,44 mmolu) etylamínu (70%-ný (hmotnostné %) roztok vo vode) a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 76 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,004 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme bielej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,64 minúty, m/z = 675 MH⁺.

Príklad 67

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-brómizoxazol-5-yl)-5-[6-(1 -etylpropylamino)2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Zmes pripravená rozpustením 0,021 g (0,037 mmolu) 4R-acetoxy-5S-(3brómizoxazol-5-yl)-2R-[2-chlór-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3R-yl esteru kyseliny octovej, t.j. medziproduktu 18, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie a 0,038 g (0,3 mmolu) piperidín-1-yl-2-etylamínu v 0,1 ml vysušeného dimetylsulfoxidu sa zahrievala v uzavretej reakčnej trubici (napr. Reacti-vial^(R)) pri teplote 90 °C 28,5 hodín.

Výsledný surový produkt sa prečistil pomocou autopreparatívnej vysokovýkonnej kvapalinovej chromatografie (HPLC) a následnej konečnej lyofilizácii sa získalo 0,003 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme krémovo-bielej tuhej látky.

LC/MC systém A: R_t = 3,48 minúty, m/z = 579 MH⁺ pre zlúčeninu sumárneho vzorca C24H35⁷⁹BrN8O4.

Príklad 68

Príprava diformiátu etylesteru kyseliny 5-(5R-{6-(1-etyl-propylamino)-2-[2-(1-metyl1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-3S,4R-dihydroxytetrahydrofurán-2S-yl)izoxazol-3-karboxylovej

Analogickým postupom, opísaným v rámci príkladu 50, sa pripravila zmiešaním 0,02 g (0,13 mmolu) etylesteru kyseliny chlórhydroxyiminooctovej a 0,081 g (0,96 mmolu) tuhej formy hydrogénuhličitanu sodného reakčná zmes, ku

-89• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· ktorej sa pridalo po spracovaní po dobu 169,5 hodín ďalších 0,129 g (0,845 mmolu) etylesteru kyseliny chlórhydroxyiminooctovej a 0,322 g (3,83 mmolu) tuhej formy hydrogénuhličitanu sodného a po ďalších 4 dňoch ešte 0,04 g (0,26 mmolu) etylesteru kyseliny chlórhydroxyiminooctovej a 0,162 g (1,92 mmolu) tuhej formy hydrogénuhličitanu sodného.

Po následnom, konečnom vymrazovaní (lyofilizácii) sa získalo 0,002 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme hnedej tuhej látky. LC/MS Systém C: R_t= 2,39 minúty; m/z = 570,0 MH⁺.

Príklad 69

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(1 S-hydroxymetyl-2metylpropylamino)-2-(2-pyrolidín-1-yl-etylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Z roztoku, pripraveného rozpustením 0,113 g (0,25 mmolu) acetátu (2R,3R, 4S,5S)-2-[2-chlór-6-(1S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolu, t.j. medziproduktu 29, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie, v 7 ml vysušeného dimetylsulfoxidu, sa odobral alikvotný podiel 1 ml, ktorý sa pridal k 0,041 g (0,36 mmolu) 1-(2-aminoetyl)pyrolidínu, predloženého v uzavretej reakčnej trubici, (napr. Reacti-vial^(R)), a vzniknutá reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 90 °C 90 hodín.

Po prečistení surového produktu autopreparatívnou vysokovýkonnou kvapalinovou chromatografiou, (HPLC) a po následnej konečnej lyofilizácii sa získalo 0,005 g žiadanej v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme dohneda sfarbenej látky gumovitej konzistencie.

LC/MS Systém C: R_t= 2,2 minúty; m/z = 531,0 MH⁺.

Príklad 70

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-[6-(1 S-hydroxymetyl-2metylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným v rámci predchádzajúceho príkladu 49, sa za použitia 0,044g (0,36 mmolu), 2-piperidínetylamínu, a po zahrievaní reakčnej • »· ·· ·· ·· ··· · · ·· · · · · • · · · · · ·

-90• · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· zmesi pri teplote 90 °C 90 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,009 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme dohneda sfarbenej látky gumovitej konzistencie.

LC/MS Systém C: R_t = 3,39 minúty; m/z = 545,0 MH⁺.

Príklad 71

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etyl-izoxazol-5-y 1)-5-(6-(1 S-hydroxymetyl-2metylpropylamino)-2-[2-(pyridín-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 69, sa za použitia 0,049 g (0,36 mmolu), 2-(pyridín-2-ylamino)etylamínu, t.j. medziproduktu 27, získaného v rámci postupu prípravy opísaného vyššie a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 159 hodín a po následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,011 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny, vo forme svetlohnedej látky penovitého charakteru.

LC/MS Systém C: R_t = 3,39 minúty; m/z = 554,0 MH⁺.

Príklad 72

Príprava diformiátu (2S,3S,4R,5/?)-2-(3-etyl-izoxazol-5-yl)-5-{6-(1 S-hydroxymetyl-2metylpropylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl}tetrahydrofurán-

3,4-diolu

Analogickým postupom, opísaným vyššie v rámci príkladu 69, sa za použitia 0,054 g (0,36 mmolu), 3-(S)-(-)-2-amino-3-fenylpropanolu, a po zahrievaní reakčnej zmesi pri teplote 90 °C 159 hodín a následnej konečnej lyofilizácii pripravilo 0,006 g žiadanej, v nadpise uvedenej zlúčeniny vo forme žltej látky penovitého charakteru. LC/MS Systém C: R_t = 2,79 minúty; m/z = 568,0 MH⁺.

Výsledky biologických pokusov

Zlúčeniny z jednotlivých príkladov sa podrobili skúškam na účinnosť proti podtypom receptorov, výsledky sú uvedené v nasledujúcej tabuľke:

• ·· ·· ·· ·· • · · · · ·· · · ·· • · · · · · ·

-91 • · · · · · ··· ·· ···· ·· ·

Príklad č.	A2a	A3	A1
1	0,52	>436	288,5
2	0,43	>545	88,9
3	1,32	>375	231
4	0,92	>267	109,3
5	0,11	>237	30,1
6	0,49	>393	66,4
7	0,35	>312	>309,4
8	0,67	>310	49,1
9	2,05	>323	132,3
10	2,07	>180	59,38
11	3,66	>303	32,9
12	3,39	>410	260,3
13	3,03	>146	61,9
14	4,99	>254	77,1
15	3,66	>146	26,05
16	0,35	>1004	442
17	0,34	>298	1172
18	0,72	>460	2580
19	2,41	>295	670,2
20	2,04	>267	310,9
21	1,55	>267	1624,29
22	9,17	>254	8026,2
23	13,4	>282	>3263
24	0,23	>248	573,6
25	5,46	>198	103,8
26	6,89	>286	273,3
27	3	>273	3,18
28	14,5	>263	165,8

• ·· ·· ·ο·· ··· · · · · · ··· • · · · · ·e • ···· ···· • · · · ·· ··· ···· ·· ···· ·· ·

29	5,03	>298	27,24
30	4,58	>257	108,8
31	10,59	>310	577,2
32	3,79	>176	21,75
33	13,44	>365	1281,4
34	2,92	>198	19,86
35	2,53	>223	89,16
36	4,7	>207	68,32
37	2,65	>207	136,56
38	5,29	>737	44,1
39	2,12	>85	86,8
40	3,38	>88	70,53
41	27,39	>395	2907,96
42	41,06	>395	1369,08
43	3,53	>335	672,4
44	10,3	>221	725,4
45	1,93	>189	54,04
46	20,06	>518	148,72
47	10,42	>363	148,34
48	11,48	>363	177,71
49	7,79	>350	28,28
50	7,26	>113	>6188
51	4,86	>340	22,53
52	21,63	>340	1359,98
53	2,11	>229	128,9
54	0,066	>350	10,18
55	0,175	>353	155,3
56	5,19	>525	101,31

·· • ·

57	0,79	>525	80,76
58	0,244	>525	812,2
59	0,13	>385	194,3
60	4,53	>248,4	155,86
61	0,09	>314	38,58
62	1,03	>303	21,37
63	10,57	>262	148,43
64	16,03	>262	44,21
65	4,74	>262	128,27
66	8,32	>262	189,98
67	2,59	>238	219,1
68	30,23	>113	60,3
69	23,73	>180	298,75
70	27,39	>184	149,86
71	12,75	>184	79,51
72	5,39	>158	23,79

Hodnoty uvedené v tabuľke sú hodnoty EC50 v porovnaní s NECA.

Použité skratky:

TMSOTf	trimetylsilyltrifluórmetylsulfonát
THP	tetrahydropyrán
TMS	trimetylsilyl
TFA	kyselina trifluóroctová
DMF	Λ/,/V-dimetylformamid
HMDS	1,1,1,3,3,3-hexametyldisilazán
NECA	/V-etylkarboxamidoadenozín
DMAP	4-dimetylaminopyridín
TEMPO	2,2,6,6-tetrametyl-1-piperidinyloxy-, voľný radikál

• *· ·· ·· ·· ··· · · A · · · · · • · · · · · ·

-94• · · · · · • · · ·· ···· ·· ·

DBU	1,8-diazabicyklo[5.4.0]undek-7-én
BSA	bistrimetylsilylacetamid
DCM	dichlórmetán
DAST	fluorid dietylaminosírový
Ph	fenyl
CDI	karbonyldiimidazol
NSAID	nesteroidná protizápalová látka
THF	tetrahydrofurán
Ac	acetyl, CH3CO
Me	metyl
Et	etyl
DMSO	dimetylsulfoxid

Claims (33)

PATENTOVÉ NÁROKY

1. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I

NHR

N

HO kde

R¹ a R² sa nezávisle volia zo skupiny:

i) C3-8cykloalkyl, ii) atóm vodíka, iii) (aryl)₂CHCH₂-, iv) C3-8cykloalkyl-Ci-6alkyl,

v) Ci_aalkyl, vi) aryl-Ci-6alkyl, vii) R⁴R⁵N-Ci.₆alkyl, viii) Ci-6alkyl-CH(CH₂OH)-, ix) aryl-C₁.₅alkyl-CH(CH₂OH)-,

x) aryl-Ci.5alkyl-C(CH₂OH)₂-, xi) C3-8cykloalkyl, nezávisle substituovaný jednou alebo viacerými skupinami, napríklad 1,2 alebo 3 skupinami -(CH₂)_PR⁶, xii) H₂NC(=NH)NHCi.₆alkyl_I xiii) skupina všeobecného vzorca (CHA alebo podobná skupina, v ktorej je jeden atóm uhlíka metylénovej skupiny, susediaci so skupinou X alebo obidva tieto atómy, substituované metylovou skupinu,

-96·· ·· ·· ·· · • · ·· · · · · · • « · · · · · • · · · · · · · · • · · · · · · ··· ·· ···· ·· ··· xiv) -Ci-6alkyl-0H, xv) -Ci-ehalogénalkyl, xvi) skupina všeobecného vzorca (CH₂)_eCO(CH₂)

-Q J^NR? >CH₂)_e/ xvii) aryl, a xviii) -(CH2)fSO₂NHg(Ci-4alkyl)2-g alebo -(CH₂)fSO₂NH_g(arylCMalkyl)₂.g,

R³ znamená metyl, etyl, -CH=CH₂, n-propyl, -CH₂CH=CH₂, -CH=CHCH₃, izopropyl, izopropenyl, cyklopropyl, cyklopropenyl, cyklopropylmetyl, cyklopropenylmetyl, -CH(OH)CH_2i -(CH₂)_qhalogén, -(CH₂)_hY(CH₂)iH, -(CH₂)_kZ, -(CH₂)_hCO(CH₂)₀H, -(CH₂)_rS(O)_t(CH₂)_sH alebo -(CH₂)_kC((CH₂)_uH)=NO(CH₂)_vH,

Y znamená O, S alebo N(CH₂)jH,

Z znamená -COO(CH₂)jH alebo -CON(CH₂)_rnH((CH₂)_nH), a a b nezávisle znamenajú celé čísla 0 až 4 za predpokladu, že a+b je v rozmedzí 3 až 5, c, d a e nezávisle znamenajú celé čísla 0 až 3 za predpokladu, že c+d+e je v rozmedzí 2 až 3, f znamená 2 alebo 3 a g znamená celé číslo 0 až 2, p znamená 0 alebo 1, q znamená celé číslo 0 až 3, h znamená celé číslo 0 až 2, i znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+i je v rozmedzí 0 až 3, j znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+i+j je v rozmedzí 0 až 3, k znamená 0 alebo 1,

I znamená 1 alebo 2, pričom k+l je v rozmedzí 1 až 2, m a n nezávisle znamenajú celé číslo 0 až 2, pričom k+m+n je v rozmedzí 0 až 2, o znamená celé číslo 0 až 2, pričom h+o je v rozmedzí 0 až 2, r a s nezávisle znamenajú 1 alebo 2, pričom r+s je v rozmedzí 2 až 3, t znamená 1 alebo 2, u a v nezávisle znamenajú 0 alebo 1, pričom k+u+v je v rozmedzí 0 až 1,

-97R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka, Ci^alkyl, aryl, aryl-Ci-6alkyl alebo môže skupina NR⁴R⁵ znamenať pyridinyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo A/-Ci_6alkylpiperazinyl alebo 2-(1-metyl-1H-imidazol-4yi)->

R⁶ znamená -OH, -NH₂, -NHCOCH3 alebo atóm halogénu,

R⁷ znamená atóm vodíka, Ci.6alkyl, Ci_6alkylaryl alebo -COCi.6alkyl, X znamená NR⁷, O, S, SO alebo SO2, ako aj soli a solváty týchto zlúčenín.

2. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1, v ktorých R³ znamená metyl, etyl albo n-propyl a R⁷ znamená atóm vodíka, Ci-6alkyl, Ci-6alkylaryl alebo -COCH3.

3,4-diol alebo jeho soľ alebo solvát.

• · · t · · ♦ · · · ···· • · · · · ·

-100-

3. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1 alebo 2, v ktorých R¹ a R² neznamenajú súčasne atómy vodíka.

4- ylamino)-9H-purín-2-ylamino]etyl}guanidín, (2S,3S,4R,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-6(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-6-(1oxohexahydro-1 .X.4-tiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(1S-hydroxymetyl2-fenyletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S_l3S,4R,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(pyrolidín-3/?-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S_I4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-pyridín-2-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-morfolín-4-yletylaminoJpurín-g-yljtetrahydrofurán-S^-diol, (2ŕ?,3ŕ?,4S,5S)-2-[2-(trans-4-aminocyklohexylamino)-6-(1-etylpropylamino)purín-9yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, /V-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-6-(1-etylpropylamino)-9/7-purín-2-ylamino]etyl}guanidín, (2F?,3R,4S,5S)-2-[6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-

4-(2-{6-amino-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3ŕ?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2F?-yl]-9Hpurín-2-ylamino}etyl)benzénsulfónamid, • ·

- 101 (2R,3R,4S, 5S)-2-[2-(ŕrans-4-aminocyklohexylamino)-6-(2,2-difenyletylamino)purín-

4. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, v ktorých R¹ je C3-8cykloalkyl, (aryl)₂CHCH₂-, arylCi-ealkyl, Ci-ealkylaryl, -(CH₂)fSO₂NH_g(Ci^alkyl)₂_g, tetrahydropyrán-n-yl alebo tetrahydrotiopyrán-n-yl, kde n znamená 3 alebo 4, C₃.8cykloalkylCi-6alkyl, atóm vodíka alebo R⁴R⁵N-Ci-6alkyl, kde NR⁴R⁵ spoločne tvoria piperidinyl alebo morfolinyl.

5-(5R-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-

3S,4/?-dihydroxytetrahydrofurán-2S-yl)izoxazol-3-karbaldehydoxím, (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-2-(2morfolin-4-yletylamino)purin-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4f?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-benzylamino-2-(2-pyridín-2-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(pyridín-2-ylamino)etylamino]etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5-[3(1-hydroxyetyl)izoxazol-5-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5-(3metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2F?,3F?,4S,5S)-2-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purin-9-yl]-5-(3propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5-(3hydroxymetylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-[3-(1-hydrOxyetyl)izoxazol-5-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-1/-/-imidazol-4-yl)etylamino]purln-9-yl}-5-(3-metylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3 4-diol, (2R,3F?,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-1/-/-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-propylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3 4-diol, (ZS.SS^R.SR^-ÍS-etylizoxazol-S-ylJ-S-fO-ÍIS-hydroxymetyl^-fenyletylaminoJ^-p(pyridín-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-2-(2pyrolidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[2-(2-aminoetylamino)-6-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, ·· ·· ·· · • · · · · · · • · · · · • · · · · · • · · · · · ·· ···· ·· ··· • ·· • · · · • · • · • ·

- 104 (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(3-jódbenzylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3R,4S,5S)-2-[2-etylamino-6-(3-jódbenzylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4R,5R)-2-(3-brómizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, etylester kyseliny 5-(5ŕ?-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}-3S,4R-dihydroxytetrahydrofurán-2S-yl)izoxazol-3-karboxylovej, (2S,3S,4ŕ?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)-2(2-pyrolidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)-2(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4f?_I5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(1S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)-2[2-pyridin-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(1S-hydroxymetyl-2-metylpropylamino)-2(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diol, alebo ich soli alebo solváty.

5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, ^R.SR^S.SS^-fe-benzylamino^-^-íl-metyl-IH-imidazol^-yOetylaminojpurín-gyQ-ô-ÍS-etylizoxazol-S-ylJ-tetrahydrofurán-S^-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-benzylamino-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S_I3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-2-(2piperidín-l-yletylaminoJpurín-g-yljtetrahydrofurán-S^-diol, (2R,3R,4S, 5S)-2-[2-(cyklopentylamino)-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3ŕ?,4S,5S)-2-[2-(3,4-dimetoxyfenyletylamino)-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol,

-103 ·· ·· ·· • · · · • · · · • · · · · • · · · ··· ·· ···· ·· • · · • · · • · ·· · (2R,3R,4S,5S)-2-[2-(4-tetrahydropyranylamino)-6-(1-etylpropylamino)purín-9-yl]-5(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[2(1-benzylpyrolidín-3S-1-ylamino)-6-(1-etylpropylamino)purin-9yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol,

5- (3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-(2-morfolín-4-yletylamino)purín-9-yl]-

5. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, v ktorých R¹ je C₁.₆alkyl-CH(CH₂OH)-, 1,1-dioxohexahydro-1 X6-tiopyrán-4-yl, /\/-acetylpiperidín-4-yl, 1 S-hydroxymetyl-2-fenyletyl, piperidín-4-yl a 1-oxohexahydro-1.X.4-tiopyrán-4-yl.

6. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 3, v ktorých R¹ znamená -CH₂CHPh₂, -CH(Et)₂ alebo fenyletyl.

-98• ·· ·· ·· ·· • · · · · ·· · · ·· • · · · · · · • ♦ · · · ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ·· ·

7. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, v ktorých R² znamená skupiny Ci-6alkyl-OH, H2NC(=NH)NHCi^alkyl, R⁴R⁵NCi-6alkyl, kde NR⁴R⁵ spoločne tvoria pyridinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo 2-(1-metyl-1 H-imidazol-4-yl), arylCi-5alkylCH(CH2OH)-, aryl, C₃-8cykloalkylCi-6alkyl, tetrahydro-1,1-dioxidtiofén-3-yl, C₃-ecykloalkyl, Ci-ealkylCH(CH₂OH)-, arylC-i-ealkyl, pyrolidín-3-yl, 2-oxopyrolidín-4-yl, 2-oxopyrolidín-5-yl, piperidín-3-yl, arylCi-ealkyl, ako benzyl, C₃.ecykloalkyl, nezávisle substituovaný jednou alebo väčším počtom skupín, napríklad 1, 2 alebo 3 skupinami -(CH₂)_PR⁶, alebo piperidín-4-yl, v ktorom je atóm dusíka v kruhu prípadne substituovaný Ci-6alkylovou skupinou.

8. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podlá ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, v ktorých R² je Ci-galkyl alebo R⁴R⁵NCi.₆alkyl, kde R⁴ a R⁵ nezávisle znamenajú atóm vodíka alebo aryl alebo skupina R⁴R⁵N spoločne znamená pyrolidinyl.

9 9 9 9 9 9 99 • · * · · · • 9 · ····· • · · · · · ···· ·· ···· ··

9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4R,5/?)-2-(2-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(3-jódbenzylamino)-2-[2-(1-metyl-1Himidazol-4-yl)etylamino]purín-9-yl}tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3/?,4S,5S)-2-{6-(2-cyklohexyletylamino)-2-[2-(1-metyl-1/7-imidazol-4-yl)-etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S, 5S)-2-[6-(2-cyklohexyletylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrc>furán-3,4-diol, /V-(2-{6-(2,2-difenyletylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-9H-purín-2-ylamino}etyl)guanidín, /V-(4-{6-(2,2-difenyletylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R_I4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-9H-purin-2-ylamino}cyklohexyl)acetamid, metylamid kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-2-(2-guanidinoetylamino)-9H-purín-6-ylamino]etánsulfónovej, /V-(2-{6-(1,1-dioxohexahydro-1.X.6-tiopyrán-4-ylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)3ŕ?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-9/7-purín-2-ylamino}etylguanidín, metylamid kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R_l4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-9H-purín-6-ylamino]etánsulfónovej, 1-{4-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3ŕ?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-2-(1 Shydroxymetyl-2-fenyletylamino)-9H-purín-6-ylamino]piperidin-1-yl}etanón, 1-(4-{4-aminocyklohexylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-9H-purín-6-ylamino}piperidín-1-yl)etanón, (2R,3/?,4S,5S)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(2-pyridín-2-yletylamino)-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3/?,4S,5S)-2-[6-(1,1 -dioxohexahydro-1.X.6-tiopyrán-4-ylamino)-2-(2-piperidín-1yletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3/?,4S,5S)-2-[2-(ŕrans-4-aminocyklohexylamino)-6-(1,1-dioxohexahydro-1A.6tiopyrán-4-ylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol,

A/-(2-{6-(1-acetylpiperidin-4-ylamino)-9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-9H-purín-2-ylamino}etyl)guanidín, ·· ·· ·· • · • ·

-102 /\/-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2/?-yl]-6-(piperidín-

9. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6, v ktorých R² znamená piperidín-1 -yletyl alebo 2-( 1 -metyl-1 H-imidazol-4-yl )ety I.

10. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 a 3 až 9, v ktorých R³ znamená -CH=NOH, cyklopropyl, COOCH₃, -COOCH₂CH₃, -CH₂OH, -CH(OH)CH₃ alebo atóm halogénu.

11. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9, v ktorých R³ je metyl, etyl alebo n-propyl.

12. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 a 3 až 9, v ktorých R³ znamená etyl alebo -CH₂OH.

• ·· ·· ·· ·· • · · · · · · · ·· • · · · · · · • ♦ · · · ···· • · · · · · · ··· ···· ·· ···· ·· ·

13. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 9, v ktorých R³ znamená etyl.

14. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, v ktorých R⁴ a R⁵ je nezávisle atóm vodíka, Ci-6alkyl, aryl, arylCi-6alkyl alebo NR⁴R⁵ znamená pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo N-Ci-ealkylpiperazinyl.

15. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, v ktorých R⁴ a R⁵ je nezávisle atóm vodíka, Ci_6alkyl alebo aryl alebo tvorí skupina NR⁴R⁵ spoločne pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl, azetidinyl, azepinyl, piperazinyl alebo /V-metylpiperazinyl.

16. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-piperidín1-yl-etylamino)-purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol alebo jeho soľ alebo solvát.

17. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (2R,3R,4S,5S)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-fenetylamino-2(2-piperidín-1-yletylamino)-purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol alebo jeho soľ alebo solvát.

18. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (2S,3S,4R,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(1-etylpropylamino)-2-(2-piperidín-1 -yletylamino)-purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol alebo jeho soľ alebo solvát.

19. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolový derivát všeobecného vzorca I podľa nároku 1, ktorým je (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(1-etylpropylamino)-2-[2-(1-metyl-1Himidazol-4-yl)-etylamino]purín-9-yl}-5-(3-hydroxymetylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-

20. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa nároku 1 vybraté zo skupiny: (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-morfolín-4-yletylamino)-purín-9-yl]-5(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-[Q-(2,2-difenyletylamino)-2-(2-hydroxyetylamino)-purín-9-yl]-5-(3etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4ŕ?,5ŕ?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-{6-(1 -etylpropylamino)-2-[2-(1 -metyl-1 Himidazol-4-yl)etylamino]-purín-9-yl}-tetrahydrofurán-3 4-diol, (2R,3/?,4S,5S)-2-{6-(3,3-dimetylbutylamino)-2-[2-(1-metyl-1H-imidazol-4-yl)-etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(cyklopentylamino)-2-(2-piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol,

A/-{2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3F?,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2F?-yl]-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)-9H-purín-2-ylamino]etyl}guanidín, (2S,3S,4/?,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[6-(3-fluór-4-hydroxyfenylamino)-2-(2piperidín-1-yletylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, metylamid kyseliny 2-[9-[5S-(3-etylizoxazol-5-yl)-3R,4S-dihydroxytetrahydrofurán-2R-yl]-2-(2-piperidín-1-yletylamino)-9H-purín-6-ylamino]-etánsulfónovej, (2S,3S,4R,5/?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(2-piperidín-1-yl-etylamino)-6-(tetrahydrotiopyrán-4-ylamino)-purín-9-yl]-tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(2-pyridín-2-yl-etylamino)-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4ŕ?>5R)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(2-piperidín-1-yletylamino )-6-(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]tetrahydrofurán-3,4-diol, (2S,3S,4/?,5/^:?)-2-(3-etylizoxazol-5-yl)-5-[2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)-6(tetrahydropyrán-4-ylamino)purín-9-yl]terahydrofurán-3,4-diol, (2R,3R,4S,5S)-2-{6-(2,2-difenyletylamino)-2-[2-(pyridín-2-ylamino)etylamino]purín-9-yl}-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol, (2/?,3R,4S,5S)-2-[6-(2,2-difenyletylamino)-2-(1S-hydroxymetyl-2-fenyletylamino)purín-9-yl]-5-(3-etylizoxazol-5-yl)tetrahydrofurán-3,4-diol,

21. Spôsob výroby 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolových derivátov všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20, vyznačujúci sa t ý m, že sa

a) na zlúčeninu všeobecného vzorca II kde R¹ má význam určený v nárokoch 1,3 až 6 a 16 až 20 a R³ má význam určený v nárokoch 1, 2,10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu,

-105• ·· ·· ·· ·· · ···· · · · · ···· • · · · ···· • ···· ···· · ·· ··· ··· ··· ···· ·· ···* ·· ··· alebo na jej chránený derivát pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R²NH2, alebo jej chráneným derivátom, kde R² má význam, uvedený v niektorom z nárokov 1, 3, 7 až 9 a 16 až 20,

b) na zlúčeninu všeobecného vzorca III (III) kde R¹ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20 a R² má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3, 7 až 9 a 16 až 20, sa pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca IV (IV) kde R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo jej chráneným derivátom, alebo sa

c) premení zlúčenina všeobecného vzorca I na inú zlúčeninu všeobecného vzorca I, alebo sa

d) odstránia ochranné skupiny z chránenej zlúčeniny všeobecného vzorca I, a potom sa v prípade potreby premení zlúčenina všeobecného vzorca I alebo jej soľ na inú soľ.

-106·· ·· ··99

22. Spôsob výroby 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolových derivátov všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20, vyznačujúci sa t ý m, že sa

b) na zlúčeninu všeobecného vzorca Ila kde R² má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3, 7 až 9 a 16 až 20 a R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo na jej chránený derivát pôsobí zlúčeninou všeobecného vzorca R²NH₂, alebo jej chráneným derivátom, kde R¹ má význam uvedený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20.

23. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že ako účinnú zložku obsahuje 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolový derivát všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ alebo solvát v zmesi s jedným alebo väčším počtom fyziologicky prijateľných riedidiel alebo nosičov.

24. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo solváty na použitie ako liek.

25. 2-(Purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolové deriváty všeobecného vzorca I podlá ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo • · ·

-107- • · · ·· ··· solváty na použitie na liečenie alebo prevenciu zápalových ochorení, ako je astma alebo COPD.

26. Použitie 2-(purín-9-yl)-tetrahydrofurán-3,4-diolových derivátov všeobecného vzorca I podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20 alebo ich farmaceutický prijateľných solí alebo solvátov na výrobu lieku na liečenie zápalových ochorení, ako je astma alebo chronické obštrukčné pľúcne choroby, COPD.

27. Zlúčenina všeobecného vzorca II (II) kde R¹ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20 a R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo jej chránený derivát ako medziprodukt na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.

28. Zlúčenina všeobecného vzorca lla (lla) kde R² má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3, 7 až 9 a 16 až 20 a R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená

-108 odštiepiteľnú skupinu alebo jej chránený derivát ako medziprodukt na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.

29. Zlúčenina všeobecného vzorca IV (IV) kde R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1,2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo jej chránený derivát, ako medziprodukt na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I podľa nároku 1.

30. Zlúčenina všeobecného vzorca IV podľa nároku 29, ktorou je zlúčenina všeobecného vzorca VI (VI) kde R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2,10 až 13 a 16 až 20.

31. Zlúčenina všeobecného vzorca V (V) ·· ·· ·· ·· • · ···· ··· • · · · · · • · · · · · ···· ·· ···· ·· ·

-109 kde R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2,10 až 13 a 16 až 20 a L¹ a L² nezávisle znamenajú odštiepiteľné skupiny, alebo jej chránený derivát ako medziprodukt na výrobu zlúčeniny všeobecného vzorca I.

32. Zlúčenina všeobecného vzorca Vil ľ NHR¹ //'T —o_ ,o O JA (Vllľ) )—( HO OH

kde R¹ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu alebo jej chránený derivát.

33. Zlúčenina všeobecného vzorca IX' (IX¹) kde R¹ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20 a R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo jej chránený derivát.

-11034. Zlúčenina všeobecného vzorca X' (X¹) kde R¹ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 3 až 6 a 16 až 20 a R³ má význam určený v niektorom z nárokov 1, 2, 10 až 13 a 16 až 20 a L znamená odštiepiteľnú skupinu, alebo chránený derivát tejto zlúčeniny.