KR102599909B1 - 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 - Google Patents
근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR102599909B1 KR102599909B1 KR1020177012963A KR20177012963A KR102599909B1 KR 102599909 B1 KR102599909 B1 KR 102599909B1 KR 1020177012963 A KR1020177012963 A KR 1020177012963A KR 20177012963 A KR20177012963 A KR 20177012963A KR 102599909 B1 KR102599909 B1 KR 102599909B1
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- sod1
- sirna
- aav
- artificial sequence
- synthetic oligonucleotide
- Prior art date
Links
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 title claims abstract description 161
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 65
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 68
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims abstract description 393
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 177
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 claims abstract description 148
- 101150062190 sod1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims abstract description 9
- 108010021188 Superoxide Dismutase-1 Proteins 0.000 claims description 233
- 102000008221 Superoxide Dismutase-1 Human genes 0.000 claims description 232
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 178
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 166
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 149
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 119
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 94
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 84
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 71
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 71
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 71
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims description 65
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 64
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 57
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 54
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 41
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 40
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 38
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 36
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 27
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 claims description 26
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 claims description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 23
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 21
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 21
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 12
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 9
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 8
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N Riluzole Chemical compound C1=C(OC(F)(F)F)C=C2SC(N)=NC2=C1 FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 229960004181 riluzole Drugs 0.000 claims description 6
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 claims description 5
- SGEIEGAXKLMUIZ-ZPTIMJQQSA-N (3e)-n-[(2r)-2-hydroxy-3-piperidin-1-ylpropoxy]-1-oxidopyridin-1-ium-3-carboximidoyl chloride Chemical compound C([C@H](O)CN1CCCCC1)O\N=C(\Cl)C1=CC=C[N+]([O-])=C1 SGEIEGAXKLMUIZ-ZPTIMJQQSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 claims description 4
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 claims description 4
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 claims description 4
- UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N Gabapentin Chemical compound OC(=O)CC1(CN)CCCCC1 UGJMXCAKCUNAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 4
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 4
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 4
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 4
- 229950011582 arimoclomol Drugs 0.000 claims description 4
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 claims description 4
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 claims description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 4
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 4
- MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N (aminomethyl)phosphonic acid Chemical compound NCP(O)(O)=O MGRVRXRGTBOSHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 3
- 108020005029 5' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 3
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 claims description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 230000002424 anti-apoptotic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 2-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-1H-isoindole-1,3(2H)-dione Chemical compound O=C1C2=CC=CC=C2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O UEJJHQNACJXSKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 2
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 claims description 2
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 claims description 2
- XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N L-pyroglutamyl-L-histidyl-L-proline amide Natural products NC(=O)C1CCCN1C(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MKXZASYAUGDDCJ-SZMVWBNQSA-N LSM-2525 Chemical compound C1CCC[C@H]2[C@@]3([H])N(C)CC[C@]21C1=CC(OC)=CC=C1C3 MKXZASYAUGDDCJ-SZMVWBNQSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000627 Thyrotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 2
- 102400000336 Thyrotropin-releasing hormone Human genes 0.000 claims description 2
- 101800004623 Thyrotropin-releasing hormone Proteins 0.000 claims description 2
- KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N Topiramic acid Chemical compound C1O[C@@]2(COS(N)(=O)=O)OC(C)(C)O[C@H]2[C@@H]2OC(C)(C)O[C@@H]21 KJADKKWYZYXHBB-XBWDGYHZSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004960 anterior grey column Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 2
- LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N azathioprine Chemical compound CN1C=NC([N+]([O-])=O)=C1SC1=NC=NC2=C1NC=N2 LMEKQMALGUDUQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960002170 azathioprine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N ceftriaxone Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC1=NC(=O)C(=O)NN1C VAAUVRVFOQPIGI-SPQHTLEESA-N 0.000 claims description 2
- 229960004755 ceftriaxone Drugs 0.000 claims description 2
- RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N celecoxib Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C1=CC(C(F)(F)F)=NN1C1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 RZEKVGVHFLEQIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000590 celecoxib Drugs 0.000 claims description 2
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182912 cyclosporin Natural products 0.000 claims description 2
- 229960001985 dextromethorphan Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002870 gabapentin Drugs 0.000 claims description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940083761 high-ceiling diuretics pyrazolone derivative Drugs 0.000 claims description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 2
- PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N lamotrigine Chemical compound NC1=NC(N)=NN=C1C1=CC=CC(Cl)=C1Cl PYZRQGJRPPTADH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001848 lamotrigine Drugs 0.000 claims description 2
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 claims description 2
- DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N minocycline Chemical compound C([C@H]1C2)C3=C(N(C)C)C=CC(O)=C3C(=O)C1=C(O)[C@@]1(O)[C@@H]2[C@H](N(C)C)C(O)=C(C(N)=O)C1=O DYKFCLLONBREIL-KVUCHLLUSA-N 0.000 claims description 2
- 229960004023 minocycline Drugs 0.000 claims description 2
- BSCCSDNZEIHXOK-UHFFFAOYSA-N phenyl carbamate Chemical class NC(=O)OC1=CC=CC=C1 BSCCSDNZEIHXOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N protirelin Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CN=CN1 XNSAINXGIQZQOO-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims description 2
- JEXVQSWXXUJEMA-UHFFFAOYSA-N pyrazol-3-one Chemical class O=C1C=CN=N1 JEXVQSWXXUJEMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000001202 rhombencephalon Anatomy 0.000 claims description 2
- 229960002232 sodium phenylbutyrate Drugs 0.000 claims description 2
- VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M sodium phenylbutyrate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CCCC1=CC=CC=C1 VPZRWNZGLKXFOE-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 229960003433 thalidomide Drugs 0.000 claims description 2
- 229940034199 thyrotropin-releasing hormone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960004394 topiramate Drugs 0.000 claims description 2
- 229940022663 acetate Drugs 0.000 claims 1
- 230000001910 anti-glutamatergic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 abstract description 371
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 735
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 704
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 509
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 79
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 77
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 62
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 57
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 49
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 36
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 30
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 28
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 24
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 24
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 23
- 239000002585 base Substances 0.000 description 22
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 21
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- -1 small molecule compounds Chemical class 0.000 description 21
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 20
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 20
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 20
- 101100149812 Homo sapiens SOD1 gene Proteins 0.000 description 19
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 19
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 19
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 18
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 18
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 17
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 15
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 15
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 15
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 15
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102100037935 Polyubiquitin-C Human genes 0.000 description 12
- 108010056354 Ubiquitin C Proteins 0.000 description 12
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 12
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 12
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 12
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 11
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 11
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 11
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 11
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 11
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 11
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 10
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 10
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 10
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 10
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 10
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 10
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 10
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 10
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 10
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 9
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 description 9
- 101000664887 Homo sapiens Superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 9
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 102000056070 human SOD1 Human genes 0.000 description 9
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 9
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100024007 Neurofilament heavy polypeptide Human genes 0.000 description 8
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 8
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 8
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 8
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 8
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 7
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 description 7
- 102100026031 Beta-glucuronidase Human genes 0.000 description 7
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 7
- 101000933465 Homo sapiens Beta-glucuronidase Proteins 0.000 description 7
- 102100023057 Neurofilament light polypeptide Human genes 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 7
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 7
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 230000016273 neuron death Effects 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 description 6
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 description 6
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 description 6
- 241000649047 Adeno-associated virus 12 Species 0.000 description 6
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 6
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 6
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 6
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 6
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 6
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 6
- 102100040347 TAR DNA-binding protein 43 Human genes 0.000 description 6
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 6
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 6
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 6
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 6
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 6
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 6
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020003589 5' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 5
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 5
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 5
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 5
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 5
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 5
- 230000003492 excitotoxic effect Effects 0.000 description 5
- 231100000063 excitotoxicity Toxicity 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 102000018146 globin Human genes 0.000 description 5
- 108060003196 globin Proteins 0.000 description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 230000004065 mitochondrial dysfunction Effects 0.000 description 5
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 5
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 5
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010013887 Dysarthria Diseases 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 4
- 102000006890 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Human genes 0.000 description 4
- 108010072388 Methyl-CpG-Binding Protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 4
- 101000819572 Mus musculus Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 4
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 4
- 102000003890 RNA-binding protein FUS Human genes 0.000 description 4
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 4
- 101710150875 TAR DNA-binding protein 43 Proteins 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 4
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 4
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 4
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 4
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 4
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 4
- 102200076255 rs199474711 Human genes 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 208000026473 slurred speech Diseases 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010051109 Cell-Penetrating Peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000020313 Cell-Penetrating Peptides Human genes 0.000 description 3
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 3
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 3
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 3
- 239000012097 Lipofectamine 2000 Substances 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 3
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 108010027834 activity-dependent neurotrophic factor Proteins 0.000 description 3
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 3
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002939 deleterious effect Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 230000002636 effect on genome Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 3
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 3
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 3
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 3
- 210000000337 motor cortex Anatomy 0.000 description 3
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 3
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 description 3
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 3
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 3
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 3
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 3
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 210000000976 primary motor cortex Anatomy 0.000 description 3
- 230000004845 protein aggregation Effects 0.000 description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 3
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 3
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 3
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 3
- 210000000515 tooth Anatomy 0.000 description 3
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 1,3-Dimethyl-2-imidazolidinon Chemical compound CN1CCN(C)C1=O CYSGHNMQYZDMIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 4-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 5-ethylsulfanyl-2h-tetrazole Chemical compound CCSC=1N=NNN=1 GONFBOIJNUKKST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000000187 Abnormal Reflex Diseases 0.000 description 2
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 102100032047 Alsin Human genes 0.000 description 2
- 101710187109 Alsin Proteins 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 102000007370 Ataxin2 Human genes 0.000 description 2
- 108010032951 Ataxin2 Proteins 0.000 description 2
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102100023387 Endoribonuclease Dicer Human genes 0.000 description 2
- QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N Ethylamine Chemical compound CCN QUSNBJAOOMFDIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031562 Excitatory amino acid transporter 2 Human genes 0.000 description 2
- 229940124602 FDA-approved drug Drugs 0.000 description 2
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 2
- 101000907904 Homo sapiens Endoribonuclease Dicer Proteins 0.000 description 2
- 101000866287 Homo sapiens Excitatory amino acid transporter 2 Proteins 0.000 description 2
- 101000693844 Homo sapiens Insulin-like growth factor-binding protein complex acid labile subunit Proteins 0.000 description 2
- 101000836337 Homo sapiens Probable helicase senataxin Proteins 0.000 description 2
- 101000891092 Homo sapiens TAR DNA-binding protein 43 Proteins 0.000 description 2
- 206010021588 Inappropriate affect Diseases 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 2
- SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N N-Methylpyrrolidone Chemical compound CN1CCCC1=O SECXISVLQFMRJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 102100031822 Optineurin Human genes 0.000 description 2
- 101710131459 Optineurin Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- 102100027178 Probable helicase senataxin Human genes 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102220542676 Putative uncharacterized protein FLJ46641_D90A_mutation Human genes 0.000 description 2
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 2
- 102100032891 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 102000001435 Synapsin Human genes 0.000 description 2
- 108050009621 Synapsin Proteins 0.000 description 2
- JACAAXNEHGBPOQ-LLVKDONJSA-N Talampanel Chemical compound C([C@H](N(N=1)C(C)=O)C)C2=CC=3OCOC=3C=C2C=1C1=CC=C(N)C=C1 JACAAXNEHGBPOQ-LLVKDONJSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 102100026145 Transitional endoplasmic reticulum ATPase Human genes 0.000 description 2
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 2
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- 108010027273 Valosin Containing Protein Proteins 0.000 description 2
- 108091093126 WHP Posttrascriptional Response Element Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000007825 activation reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 description 2
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 2
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 2
- 230000008335 axon cargo transport Effects 0.000 description 2
- 230000003376 axonal effect Effects 0.000 description 2
- SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N benzyl benzoate Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 SESFRYSPDFLNCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- OZVBMTJYIDMWIL-AYFBDAFISA-N bromocriptine Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@]2(C(=O)N3[C@H](C(N4CCC[C@H]4[C@]3(O)O2)=O)CC(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=C(Br)NC3=C1 OZVBMTJYIDMWIL-AYFBDAFISA-N 0.000 description 2
- 229960002802 bromocriptine Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 2
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical group C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012350 deep sequencing Methods 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- GUVUOGQBMYCBQP-UHFFFAOYSA-N dmpu Chemical compound CN1CCCN(C)C1=O GUVUOGQBMYCBQP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 102000054767 gene variant Human genes 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229940060367 inert ingredients Drugs 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 2
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 2
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 2
- HYWYRSMBCFDLJT-UHFFFAOYSA-N nimesulide Chemical compound CS(=O)(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1OC1=CC=CC=C1 HYWYRSMBCFDLJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000965 nimesulide Drugs 0.000 description 2
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- FASDKYOPVNHBLU-ZETCQYMHSA-N pramipexole Chemical compound C1[C@@H](NCCC)CCC2=C1SC(N)=N2 FASDKYOPVNHBLU-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- 229960003089 pramipexole Drugs 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 2
- 230000026447 protein localization Effects 0.000 description 2
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 102220139917 rs201521886 Human genes 0.000 description 2
- 206010039722 scoliosis Diseases 0.000 description 2
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 229950004608 talampanel Drugs 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009752 translational inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N (+/-)-Camphoric acid Chemical compound CC1(C)C(C(O)=O)CCC1(C)C(O)=O LSPHULWDVZXLIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKUDPHPHKOZXCD-UHFFFAOYSA-N 1,3,5-trimethoxybenzene Chemical compound COC1=CC(OC)=CC(OC)=C1 LKUDPHPHKOZXCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GWEHVDNNLFDJLR-HSGWXFLFSA-N 1,3-diphenylurea Chemical class C=1C=CC=CC=1N[11C](=O)NC1=CC=CC=C1 GWEHVDNNLFDJLR-HSGWXFLFSA-N 0.000 description 1
- GZEFTKHSACGIBG-UGKPPGOTSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)-2-propyloxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1=CC(=O)NC(=O)N1[C@]1(CCC)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O GZEFTKHSACGIBG-UGKPPGOTSA-N 0.000 description 1
- UTQUILVPBZEHTK-ZOQUXTDFSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-3-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1N(C)C(=O)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UTQUILVPBZEHTK-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- NEOJKYRRLHDYII-TURQNECASA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-(2-oxopropyl)pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(CC(=O)C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NEOJKYRRLHDYII-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- WZIZREBAUZZJOS-TURQNECASA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-[2-(methylamino)ethyl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(CCNC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 WZIZREBAUZZJOS-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- QLOCVMVCRJOTTM-TURQNECASA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-prop-1-ynylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C#CC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 QLOCVMVCRJOTTM-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- SGKGZYGMLGVQHP-ZOQUXTDFSA-N 1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-6-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC1=CC(=O)NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SGKGZYGMLGVQHP-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFYLSDSUCHVORB-IOSLPCCCSA-N 1-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(=N)N(C)C=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O GFYLSDSUCHVORB-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- WJNGQIYEQLPJMN-IOSLPCCCSA-N 1-methylinosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)N(C)C=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O WJNGQIYEQLPJMN-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 2'-deoxythymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- IQZWKGWOBPJWMX-UHFFFAOYSA-N 2-Methyladenosine Natural products C12=NC(C)=NC(N)=C2N=CN1C1OC(CO)C(O)C1O IQZWKGWOBPJWMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HTOVHZGIBCAAJU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-propyl-1h-purin-6-one Chemical compound CCCC1(N)NC(=O)C2=NC=NC2=N1 HTOVHZGIBCAAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 2-aminophenol Chemical group NC1=CC=CC=C1O CDAWCLOXVUBKRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQZWKGWOBPJWMX-IOSLPCCCSA-N 2-methyladenosine Chemical compound C12=NC(C)=NC(N)=C2N=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O IQZWKGWOBPJWMX-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 2-methylbenzenesulfonate Chemical compound CC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O LBLYYCQCTBFVLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940080296 2-naphthalenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- USCCECGPGBGFOM-UHFFFAOYSA-N 2-propyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CCCC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 USCCECGPGBGFOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 1
- RDPUKVRQKWBSPK-UHFFFAOYSA-N 3-Methylcytidine Natural products O=C1N(C)C(=N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 RDPUKVRQKWBSPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTQUILVPBZEHTK-UHFFFAOYSA-N 3-Methyluridine Natural products O=C1N(C)C(=O)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UTQUILVPBZEHTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDPUKVRQKWBSPK-ZOQUXTDFSA-N 3-methylcytidine Chemical compound O=C1N(C)C(=N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 RDPUKVRQKWBSPK-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 3-phenylpropionate Chemical compound [O-]C(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 4-Thiouridine Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BCZUPRDAAVVBSO-MJXNYTJMSA-N 4-acetylcytidine Chemical compound C1=CC(C(=O)C)(N)NC(=O)N1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 BCZUPRDAAVVBSO-MJXNYTJMSA-N 0.000 description 1
- XXSIICQLPUAUDF-TURQNECASA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-prop-1-ynylpyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C(C#CC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 XXSIICQLPUAUDF-TURQNECASA-N 0.000 description 1
- GCNTZFIIOFTKIY-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxypyridine Chemical compound OC1=CC=NC=C1 GCNTZFIIOFTKIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 5-methoxyuridine Chemical compound O=C1NC(=O)C(OC)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZXIATBNUWJBBGT-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- SNNBPMAXGYBMHM-JXOAFFINSA-N 5-methyl-2-thiouridine Chemical compound S=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 SNNBPMAXGYBMHM-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008682 Argonaute Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010088141 Argonaute Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Natural products CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 108700030955 C9orf72 Proteins 0.000 description 1
- 101150014718 C9orf72 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100001231 Caenorhabditis elegans aha-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004657 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Human genes 0.000 description 1
- 108010003721 Calcium-Calmodulin-Dependent Protein Kinase Type 2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 108010046288 Colivelin Proteins 0.000 description 1
- 108020004394 Complementary RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000012192 Cystatin C Human genes 0.000 description 1
- 108010061642 Cystatin C Proteins 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 208000016192 Demyelinating disease Diseases 0.000 description 1
- 206010012305 Demyelination Diseases 0.000 description 1
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 description 1
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 235000019739 Dicalciumphosphate Nutrition 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 1
- 102100040278 E3 ubiquitin-protein ligase RNF19A Human genes 0.000 description 1
- 101710157279 E3 ubiquitin-protein ligase RNF19A Proteins 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 102100027186 Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] Human genes 0.000 description 1
- 208000001308 Fasciculation Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 108010072051 Glatiramer Acetate Proteins 0.000 description 1
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102100029301 Guanine nucleotide exchange factor C9orf72 Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000744174 Homo sapiens DNA-3-methyladenine glycosylase Proteins 0.000 description 1
- 101000836222 Homo sapiens Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn] Proteins 0.000 description 1
- 101001111338 Homo sapiens Neurofilament heavy polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 101000979333 Homo sapiens Neurofilament light polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 101000775932 Homo sapiens Vesicle-associated membrane protein-associated protein B/C Proteins 0.000 description 1
- 101001046426 Homo sapiens cGMP-dependent protein kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021089 Hyporeflexia Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 101100366157 Macaca mulatta SOD1 gene Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L Malonate Chemical compound [O-]C(=O)CC([O-])=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100036837 Metabotropic glutamate receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N Methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O AFVFQIVMOAPDHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000008238 Muscle Spasticity Diseases 0.000 description 1
- 206010028293 Muscle contractions involuntary Diseases 0.000 description 1
- 206010049816 Muscle tightness Diseases 0.000 description 1
- 206010028347 Muscle twitching Diseases 0.000 description 1
- RSPURTUNRHNVGF-IOSLPCCCSA-N N(2),N(2)-dimethylguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N(C)C)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O RSPURTUNRHNVGF-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- SLEHROROQDYRAW-KQYNXXCUSA-N N(2)-methylguanosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(NC)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O SLEHROROQDYRAW-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- NIDVTARKFBZMOT-PEBGCTIMSA-N N(4)-acetylcytidine Chemical compound O=C1N=C(NC(=O)C)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NIDVTARKFBZMOT-PEBGCTIMSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N NSC 29409 Natural products C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O VQAYFKKCNSOZKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150062285 PGF gene Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000002508 Peptide Elongation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010068204 Peptide Elongation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004590 Peripherins Human genes 0.000 description 1
- 108010003081 Peripherins Proteins 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102100040990 Platelet-derived growth factor subunit B Human genes 0.000 description 1
- 101710103494 Platelet-derived growth factor subunit B Proteins 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000004005 Prostaglandin-endoperoxide synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000459 Prostaglandin-endoperoxide synthases Proteins 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005917 R-SNARE Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010005730 R-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101150020107 SCN8A gene Proteins 0.000 description 1
- 101150089504 SDO1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001000154 Schistosoma mansoni Phosphoglycerate kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000720976 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ATP-dependent helicase dcr1 Proteins 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710119418 Superoxide dismutase [Mn] Proteins 0.000 description 1
- 101710202572 Superoxide dismutase [Mn], mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 229910052770 Uranium Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100032026 Vesicle-associated membrane protein-associated protein B/C Human genes 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 108700029631 X-Linked Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000028247 X-linked inheritance Diseases 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N acetic acid;(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-aminopentanedioic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(O)=O.C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 FHEAIOHRHQGZPC-KIWGSFCNSA-N 0.000 description 1
- 102000015296 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040006409 acetylcholine-gated cation-selective channel activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L adipate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC([O-])=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002266 amputation Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002226 anterior horn cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 208000025261 autosomal dominant disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021024 autosomal recessive inheritance Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 229940077388 benzenesulfonate Drugs 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M benzenesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N benzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 SRSXLGNVWSONIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940092714 benzenesulfonic acid Drugs 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002903 benzyl benzoate Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N beta-phenylpropanoic acid Natural products OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 XMIIGOLPHOKFCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102220384821 c.144C>A Human genes 0.000 description 1
- 102100022422 cGMP-dependent protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L calcium glucoheptonate Chemical compound [Ca+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)C([O-])=O FATUQANACHZLRT-KMRXSBRUSA-L 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 235000011132 calcium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N camphorsulfonic acid Chemical compound C1CC2(CS(O)(=O)=O)C(=O)CC1C2(C)C MIOPJNTWMNEORI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002041 carbon nanotube Substances 0.000 description 1
- 229910021393 carbon nanotube Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 210000003164 cauda equina Anatomy 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000002032 cellular defenses Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 210000004289 cerebral ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000006726 chronic neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- PTTAQOYOJJTWFD-IBAOLXMASA-N colivelin Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)[C@@H](C)O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO)[C@@H](C)CC PTTAQOYOJJTWFD-IBAOLXMASA-N 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011258 core-shell material Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 210000004087 cornea Anatomy 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000005226 corpus cavernosum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002594 corticospinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical class O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000002716 delivery method Methods 0.000 description 1
- 230000002638 denervation Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- FASDKYOPVNHBLU-SSDOTTSWSA-N dexpramipexole Chemical compound C1[C@H](NCCC)CCC2=C1SC(N)=N2 FASDKYOPVNHBLU-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 229950004920 dexpramipexole Drugs 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- GDLBFKVLRPITMI-UHFFFAOYSA-N diazoxide Chemical compound ClC1=CC=C2NC(C)=NS(=O)(=O)C2=C1 GDLBFKVLRPITMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004042 diazoxide Drugs 0.000 description 1
- 229910000390 dicalcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940038472 dicalcium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N dihydrouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)CC1 ZPTBLXKRQACLCR-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 229910001882 dioxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M dodecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC([O-])=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003210 dopamine receptor blocking agent Substances 0.000 description 1
- 239000003136 dopamine receptor stimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000009513 drug distribution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000000613 ear canal Anatomy 0.000 description 1
- 239000003221 ear drop Substances 0.000 description 1
- 229940047652 ear drops Drugs 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 230000005584 early death Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M ethanesulfonate Chemical compound CCS([O-])(=O)=O CCIVGXIOQKPBKL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003971 excitatory amino acid agent Substances 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000004880 explosion Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 1
- 210000001652 frontal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 230000008717 functional decline Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229960003082 galactose Drugs 0.000 description 1
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 229960003776 glatiramer acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 1
- 230000000848 glutamatergic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N hexanoic acid Chemical compound CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000004295 hippocampal neuron Anatomy 0.000 description 1
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004276 hyalin Anatomy 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N hydron;triethylazanium;trifluoride Chemical compound F.F.F.CCN(CC)CC IKGLACJFEHSFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 description 1
- 206010020745 hyperreflexia Diseases 0.000 description 1
- 230000035859 hyperreflexia Effects 0.000 description 1
- 210000003016 hypothalamus Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 239000007926 intracavernous injection Substances 0.000 description 1
- 238000000185 intracerebroventricular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000003447 ipsilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N isethionic acid Chemical compound OCCS(O)(=O)=O SUMDYPCJJOFFON-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000829 kaolin Drugs 0.000 description 1
- 229940001447 lactate Drugs 0.000 description 1
- 229940099584 lactobionate Drugs 0.000 description 1
- JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N lactobionic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O JYTUSYBCFIZPBE-AMTLMPIISA-N 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940070765 laurate Drugs 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 206010024627 liposarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003712 lysosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000001868 lysosomic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000002418 meninge Anatomy 0.000 description 1
- 108010038421 metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 1
- 230000006724 microglial activation Effects 0.000 description 1
- 231100000324 minimal toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 230000006676 mitochondrial damage Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004769 mitochondrial stress Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000007659 motor function Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000016334 muscle symptom Diseases 0.000 description 1
- NZDWTKFDAUOODA-CNEMSGBDSA-N n-[9-[(2r,3r,4s,5r)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]purin-6-yl]benzamide Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(NC(=O)C=3C=CC=CC=3)=C2N=C1 NZDWTKFDAUOODA-CNEMSGBDSA-N 0.000 description 1
- KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M naphthalene-2-sulfonate Chemical compound C1=CC=CC2=CC(S(=O)(=O)[O-])=CC=C21 KVBGVZZKJNLNJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006764 neuronal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 235000003170 nutritional factors Nutrition 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000003300 oropharynx Anatomy 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 210000003695 paranasal sinus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000003239 periodontal effect Effects 0.000 description 1
- 210000005047 peripherin Anatomy 0.000 description 1
- 210000002824 peroxisome Anatomy 0.000 description 1
- JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L peroxydisulfate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O JRKICGRDRMAZLK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940075930 picrate Drugs 0.000 description 1
- OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M picrate anion Chemical compound [O-]C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O OXNIZHLAWKMVMX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229950010765 pivalate Drugs 0.000 description 1
- IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N pivalic acid Chemical compound CC(C)(C)C(O)=O IUGYQRQAERSCNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 210000004224 pleura Anatomy 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 238000013105 post hoc analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 210000000063 presynaptic terminal Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000000272 proprioceptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 208000007153 proteostasis deficiencies Diseases 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 210000000449 purkinje cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002804 pyramidal tract Anatomy 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N pyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CCCN1 HNJBEVLQSNELDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003019 respiratory muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 108010074709 ronidase Proteins 0.000 description 1
- 102200108316 rs121909178 Human genes 0.000 description 1
- 102220323181 rs1330918776 Human genes 0.000 description 1
- 102220005401 rs28928883 Human genes 0.000 description 1
- 102200028488 rs782308462 Human genes 0.000 description 1
- 102200078754 rs863223435 Human genes 0.000 description 1
- 102220086060 rs864622635 Human genes 0.000 description 1
- 239000013609 scAAV vector Substances 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N sn-glycerol 3-phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017550 sodium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 208000018198 spasticity Diseases 0.000 description 1
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 108010045815 superoxide dismutase 2 Proteins 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 210000003478 temporal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N tetracopper;tetrazinc Chemical compound [Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2].[Zn+2] TUGDLVFMIQZYPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N tetraethylammonium Chemical compound CC[N+](CC)(CC)CC CBXCPBUEXACCNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylammonium Chemical compound C[N+](C)(C)C QEMXHQIAXOOASZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001103 thalamus Anatomy 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical group [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008280 toxic mechanism Effects 0.000 description 1
- 231100000563 toxic property Toxicity 0.000 description 1
- 238000013417 toxicology model Methods 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000011824 transgenic rat model Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 230000001296 transplacental effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N transportan Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)CN)[C@@H](C)O)C1=CC=C(O)C=C1 PBKWZFANFUTEPS-CWUSWOHSSA-N 0.000 description 1
- 108010062760 transportan Proteins 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 150000004684 trihydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 1
- ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N undecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC(O)=O ZDPHROOEEOARMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 1
- RVCNQQGZJWVLIP-VPCXQMTMSA-N uridin-5-yloxyacetic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(OCC(O)=O)=C1 RVCNQQGZJWVLIP-VPCXQMTMSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N valeric acid Chemical class CCCCC(O)=O NQPDZGIKBAWPEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
- A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
- C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
- C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2330/00—Production
- C12N2330/50—Biochemical production, i.e. in a transformed host cell
- C12N2330/51—Specially adapted vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Virology (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 SOD1 유전자에 대한 작은 간섭 RNA(siRNA), siRNA 분자를 암호화하는 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터, 및 이러한 siRNA 분자 및 AAV 벡터를 사용하여 근위축성 측삭 경화증(ALS)을 치료하는 방법에 관한 것이다.
Description
관련된 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2014년 11월 14일자로 출원된 SOD-1을 표적화하는 siRNA를 이용한 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료라는 제목의 미국 가특허출원 제62/079,588호, 2015년 8월 31일자로 출원된 근위축성 측삭 경화증(ALS)을 치료하는 조성물 및 방법이라는 제목의 미국 가특허출원 제62/211,992호, 2015년 9월 29일자로 출원된 근위축성 측삭 경화증(ALS)을 치료하는 조성물 및 방법이라는 제목의 미국 가특허출원 제62/234,466호의 이익을 주장하며, 이들 각각의 내용은 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다.
서열목록에 대한 참조
본 출원은 전자적으로 포맷된 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2015년 11월 12일자로 생성된 1011PCTSL.txt라는 명칭의 파일로 제공되고, 그 크기는 126,873바이트이다. 서열 목록의 전자 포맷으로 된 정보는 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다.
발명의 기술 분야
본 발명은 조절성(modulatory) 폴리펩티드, 예컨대 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(SOD1) 유전자를 표적화하는 작은 간섭 RNA(siRNA) 분자의 설계, 제제, 제조, 사용 및/또는 제형을 위한 조성물, 방법 및 공정에 관한 것이다. 본원에 사용된 "조절성 폴리뉴클레오티드"는 표적 유전자, 예컨대, mRNA의 수준 또는 양, 또는 단백질 수준을 조절(증가 또는 감소)하는 기능을 하는 임의의 핵산 서열(들)이다. SOD1 유전의 표적화는 SOD1 유전자의 발현 및 SOD1 효소 생산을 방해할 수 있다. 일부 구현예에서, siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열은 재조합 아데노-관련 바이러스 (AAV) 벡터에 삽입된다. 신경퇴행성 질환(예컨대, 근위축성 측삭 경화증(ALS))을 가진 대상에서 SDO1 유전자 발현을 저해하기 위해 siRNA 분자를 사용하는 방법이 또한 개시된다.
발명의 배경
루게릭병으로도 알려진 근위축성 측삭 경화증(ALS)은 일차 운동 피질, 뇌간 및 척수에서 운동 뉴런(MN)의 두드러진 손실을 특징으로 하는 가장 치명적인 진행성 신경퇴행성 질환이다. 운동 뉴런의 손실은 호흡과 같은 기본적이고 근본적인 움직임을 파괴하고, 일반적으로 진단 후 2~5년 이내에 환자의 사망을 초래한다. 환자의 운동 기능의 점진적인 악화는 환자의 호흡 능력을 심각하게 저해하여 환자의 생존을 위한 어떤 형태의 호흡 보조기구를 필요로 한다. 다른 증상으로는 손, 팔, 다리 또는 연하 근육의 근육 약화도 포함된다. 일부 환자(예컨대, FTD-ALS)는 전두측두엽 치매를 발달시킬 수도 있다.
ALS 협회에 따르면, 미국에서 약 5,600명이 매년 ALS로 진단된다. ALS의 발병률은 100,000명 당 2명이며, 임의의 주어진 시간에 30,000명의 미국인이 이 질환을 갖는 것으로 추정된다.
2가지 형태의 ALS가 기술되어 있다: 하나는 산발성 ALS(sALS)로, 이는 미국에서 가장 흔한 형태의 ALS이고 진단된 모든 사례의 90 내지 95%를 차지한다; 또 다른 하나는 가족성 ALS(fALS)로, 주로 우성 유전을 가진 가족 계통에서 발생하며 미국에서 모든 사례의 약 5 내지 10%만을 차지한다. sALS와 fALS는 임상적으로 구별할 수 없다.
병리학적 연구로 확인된 바에 따르면, 소포체 스트레스(ER stress) 증가, 자유 라디칼(즉, 반응성 산소종(ROS)) 생성, 미토콘드리아 기능부전, 단백질 응집, 아폽토시스, 염증 및 글루타메이트 흥분독성(excitotoxicity)을 포함하여, 질환 발병 후 일부 세포 과정의 교란이 특히 운동뉴런(MN)에서 일어난다.
ALS의 원인은 복잡하고 이질적이다. 일반적으로, ALS는 환경 노출과 함께 다수의 유전자가 합쳐져 사람을 취약하게 만드는 복잡한 유전적 장애로 간주된다. SOD-1(Cu2+/Zn2+ 슈퍼옥사이드 디스뮤타제), TDP-43(TARDBP, TAR DNA 결합 단백질-43), FUS(육종 융합/육종 전좌), ANG(안지오제닌), ATXN2(아탁신-2), 발로신(valosin) 함유 단백질(VCP), OPTN(옵티뉴린) 및 9번 염색체의 개방형 해독 틀 72(C9ORF72)에서 비암호화 GGGGCC 헥사뉴클레오티드 반복의 확장을 포함하여 ALS와 관련된 12개가 넘는 유전자가 발견되었다. 그러나, 운동 뉴런 퇴행의 정확한 메커니즘은 아직 파악하기 어렵다.
현재, ALS의 치료법은 없다. 유일하게 FDA에서 승인된 약물은 릴루졸(Riluzole)로, 글루타메이트 반응에 길항하여 ALS의 병리학적 발달을 감소시킨다. 그러나 초기 단계의 ALS 환자에 대해 단지 약 3개월의 수명 연장이 보고되었고, 후기 단계의 ALS 환자에 대한 치료학적 이점은 관찰되지 않았으며, 이는 환자를 위한 치료 선택의 부족을 나타낸다 (Bensimon G et al., J Neurol. 2002, 249, 609-615). 따라서, 질환 진행을 효과적으로 예방할 수 있는 새로운 치료 전략이 여전히 요구된다.
산발성과 가족성 ALS 모두의 잠재적인 치료법에 대하여 많은 상이한 전략이 연구 중에 있다. 하나의 전략은, 뉴런의 생존을 촉진할 수 있는 신경영양 인자, 예컨대 인슐린-유사 성장 인자 I(IGF-I), 신경아교세포주 유도 신경영양인자(GDNF), 혈관내피성장인자(VEGF), 콜리벨린(Colivelin) 및 활성 의존성 신경영양 인자(ADNF) 유도된 펩티드의 신경보호 및/또는 재생 효과에 기초한다. 몇몇 연구들은 신경영양 인자가 운동 뉴런 기능을 보존하므로 SOD1 형질전환 마우스에서 운동 능력을 향상시킬 수 있음을 보여주었다. 그러나, 이러한 치료법은 종종 SOD1 마우스의 생존 연장에 실패하여, 신경영양 인자가 뉴런의 생존을 연장하기에는 충분하지 않음을 시사한다(Yacila and Sari, Curr Med Chem., 2014, 21(31), 3583-3593에 의한 리뷰 참조).
ALS 치료를 위한 또 다른 전략은 줄기 세포에 기초한 치료요법에 초점을 맞추어 왔다. 줄기 세포는 운동 뉴런을 생성하여 ALS의 영향을 받은 CNS, 예컨대 일차 운동 피질, 뇌간 및 척수에서 퇴행성 운동 뉴런을 대체할 잠재력이 있다. 유도만능줄기세포(iPSC), 중간엽 기질 세포(MSC)(예컨대 골수 중간엽 기질 세포(BMSC) 및 지방 줄기 세포(ASC)) 및 신경 조직 기원 신경 줄기 세포(예컨대 태아 척수 신경 줄기 세포(NSC), 다능성 신경 전구 세포(NPC))를 포함하여, 여러 소스로부터 유도된 줄기 세포가 조사되었다(예컨대, Kim C et al., Exp. Neurobiol., 2014, 23(3), 207-214에 의해 검토됨).
슈퍼옥사이드 디스뮤타제 유형 I(SOD1; Cu2+/Zn2+ 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 유형 I) 유전자에서의 돌연변이는 가장 흔한 fALS의 원인이며, 전체 fALS의 사례 중 약 20 내지 30%를 차지한다. 최근 보고는 SOD1 돌연변이가 모든 sALS 사례의 약 4% 정도와 관련이 있을 수도 있음을 나타낸다(Robberecht and Philip, Nat. Rev. Neurosci., 2013, 14, 248-264). SOD1-관련 fALS는 정상 SOD1 활성의 상실에 의한 것이 아니라 독성 기능의 획득에 의한 것일 가능성이 크다. 돌연변이 SOD1-관련 fALS 독성에 대한 가설 중 하나는 비정상적인 SOD1 효소가 과산화질산염 또는 과산화수소와 같은 작은 분자를 생성하여 유해한 자유 라디칼을 생성한다고 제시한다. 돌연변이 SOD1 신경 독성에 대한 다른 가설은 프로테아좀 활성의 저해, 미토콘드리아 손상, RNA 처리과정의 파괴 및 세포 내 응집체 형성을 포함한다. ALS에서 돌연변이 SOD1 변이체 및/또는 야생형 SOD1의 비정상적인 축적은 병리학적인 봉입체(inclusion)로서 확인되는 불용성 섬유성 응집체를 형성한다. 응집된 SOD1 단백질은 미토콘드리아 스트레스(Vehvilainen P et al., Front Cell Neurosci., 2014, 8, 126) 및 세포, 특히 운동 뉴런에 대해 다른 독성을 유도할 수 있다.
이러한 발견은 SOD1이 가족성과 산발성 ALS 모두에 대한 잠재적인 치료 표적일 수 있음을 나타낸다. ALS 환자의 중추신경계에서 생산된 SOD1 단백질을 감소시킬 수 있는 치료요법은, 환자에서 운동 뉴런 퇴행 및 근육 약화 및 위축과 같은 ALS 증상을 개선할 수 있다. 야생형 및/또는 돌연변이 SOD1 단백질 응집체의 형성을 방지하는 것을 목표로 하는 제제 및 방법은 질환 진행을 예방할 수 있고 ALS 증상을 개선할 수 있다. RNA 간섭(RNAi)이 매개된 유전자 침묵은 최근에 연구자들의 관심을 불러 일으켰다. SOD1 유전자를 표적화하는 작은 이중 가닥 RNA(작은 간섭 RNA) 분자는 ALS 치료에서 이의 잠재력에 대해 당업계에서 교시되었다(미국특허 제7,632,938호 및 미국공개특허 제20060229268의 전체 내용을 참고문헌으로서 본문에 포함).
본 발명은 질환의 치료를 위해 ALS 환자에서 SOD1의 발현을 억제 또는 예방하기 위한 RNA 간섭에 기초한 접근법을 개발한다.
본 발명은 새로운 종류의 이중 가닥 RNA(dsRNA) 작제물과 siRNA 작제물 및 이들의 설계 방법을 제공한다. 또한, 이러한 신규한 siRNA 작제물은 합성 분자이거나 세포로 전달하기 위해 발현 벡터(하나 또는 두 가닥 모두)에 암호화될 수 있다. 이러한 벡터는 비제한적으로 임의의 AAV 혈청형의 벡터 게놈 또는 렌티 바이러스 등과 같은 기타 바이러스 전달 비히클과 같은 아데노-관련된 바이러스 벡터를 포함한다.
발명의 요약
본 발명은 유전자 발현 및 단백질 생산을 특이적으로 간섭하는 RNA 분자 매개된 유전자에 관한 것이다. 운동 뉴런 퇴행성 질환, 예컨대 근위축성 측삭 경화증 치료 방법 또한 본 발명에 포함된다. 본원에 특징화된 조성물에 포함된 siRNA는 SOD1 유전자의 mRNA 전사물의 적어도 일부분에 대해 실질적으로 상보성인, 30개 이하 길이의 뉴클레오티드, 일반적으로 19 내지 24개 길이의 뉴클레오티드인 영역을 갖는 안티센스 가닥(안티센스 가닥)을 갖는 dsRNA를 포함한다.
본 발명은, SOD1 유전자 발현 및/또는 SOD1 단백질 생산을 저해하기 위해 SOD1 mRNA를 표적화하는 작은 간섭 RNA(siRNA) 듀플렉스(duplex)와 같은 짧은 이중 가닥 RNA 분자를 제공한다. 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 SOD1 유전자에서 임의의 특정 돌연변이와는 무관하게 SOD1 유전자의 두 대립유전자를 저해할 수 있고, 특히 ALS 질환에서 발견되는 두 대립유전자와 상호작용할 수 있다.
일부 구현예에서, 이러한 siRNA 분자 또는 siRNA 분자의 단일 가닥은 아데노-관련 바이러스 벡터에 삽입되어 세포, 특히 운동 뉴런 및/또는 중추신경계의 다른 주변 세포 내에 도입된다.
본 발명의 siRNA 듀플렉스는 함께 혼성화되어 듀플렉스 구조를 형성하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 포함하며, 이때, 안티센스 가닥은 표적화된 SOD1 유전자의 핵산 서열에 대해 상보성이고, 센스 가닥은 표적화된 SOD1 유전자의 핵산 서열에 대해 상동성이다. 일부 양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단은 5' 인산염 기를 갖고, 센스 가닥의 3' 말단은 3' 히드록시 기를 함유한다. 다른 양태에서, 각 가닥의 3' 말단에는 하나 또는 2개의 뉴클레오티드 오버행(overhang)이 있거나 존재하지 않는다.
본 발명에 따르면, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스의 각 가닥은 약 19 내지 25개 길이의 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 19개 길이의 뉴클레오티드, 20개 길이의 뉴클레오티드, 21개 길이의 뉴클레오티드, 22개 길이의 뉴클레오티드, 23개 길이의 뉴클레오티드, 24개 길이의 뉴클레오티드 또는 25개 길이의 뉴클레오티드이다. 일부 양태에서, siRNA는 변형되지 않은 RNA 분자일 수 있다.
다른 양태에서, siRNA는 염기, 당 또는 백본(backbone) 변형과 같은 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 함유할 수 있다.
하나의 구현예에서, siRNA 또는 dsRNA는 서로 상보성인 2개 이상의 서열을 포함한다. dsRNA는 제1서열을 갖는 센스 가닥 및 제2서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 안티센스 가닥은 SOD1을 암호화하는 mRNA의 적어도 일부분에 대해 실질적으로 상보성인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상보성 영역은 30개 이하 길이의 뉴클레오티드, 15개 이상 길이의 뉴클레오티드이다. 일반적으로, dsRNA는 19 내지 24개 길이, 예컨대, 19 내지 21개 길이의 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, dsRNA는 약 15 내지 약 25개 길이의 뉴클레오티드 이고, 다른 구현예에서, dsRNA는 약 25 내지 약 30개 길이의 뉴클레오티드이다.
dsRNA는, SOD1을 발현하는 세포와 접촉하거나, SOD1을 발현하는 세포내에서 전사되면, 본원에 기술된 방법으로 분석했을 때, SOD1 유전자의 발현을 10% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상 또는 40% 이상 저해 또는 억제한다.
본 발명에 따르면, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스, siRNA 듀플렉스 중 하나의 가닥 또는 dsRNA를 암호화하는 핵산을 포함하는 AAV 벡터가 생산되며, AAV 벡터 혈청형은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8 및/또는 AAV-DJ 및 이들의 변이체일 수 있다.
본 발명에 따르면, ALS에서 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 표 3, 표 11 또는 표 13에 나열되어 있는 siRNA 듀플렉스로부터 선택된다. 바람직하게는, ALS에서 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 siRNA 듀플렉스: D-2757, D-2806, D-2860, D-2861, D-2875, D-2871, D-2758, D-2759, D-2866, D-2870, D-2823 및 D-2858로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 SOD1 유전자를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 듀플렉스 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 양태에서, siRNA 듀플렉스를 암호화하는 핵산 서열이 AAV 벡터에 삽입된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포에서 SOD1 유전자 발현을 저해/침묵시키는 방법을 제공한다. 따라서, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 세포, 특히 운동 뉴런에서 SOD1 유전자 발현을 실질적으로 저해하기 위해 사용될 수 있다. 일부 양태에서, SOD1 유전자 발현의 저해는 약 20% 이상, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지의 저해를 지칭한다. 따라서, 표적화된 유전자의 단백질 산물은 약 20%, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지 저해될 수 있다. SOD1 유전자는 야생형 유전자이거나 하나 이상의 돌연변이를 갖는 돌연변이된 SOD1 유전자일 수 있다. 따라서, SOD1 단백질은 야생형 단백질 또는 하나 이상의 돌연변이를 갖는 돌연변이된 폴리펩티드이다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상에서 비정상적인 SOD1 유전자 및/또는 SOD1 단백질과 관련된 근위축성 측삭 경화증을 치료 또는 개선하는 방법을 제공하며, 이 방법은 SOD1 유전자를 표적화하는 약제학적으로 유효한 양의 하나 이상의 siRNA 듀플렉스를 대상에 투여하는 것, 상기 siRNA 듀플렉스를 표적화된 세포에 전달하는 것, SOD1 유전자 발현 및 단백질 생산을 저해하는 것, 및 대상에서 ALS 증상을 개선하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, SOD1 유전자를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 듀플렉스를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터가 ALS의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상에 투여된다. AAV 벡터 혈청형은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10 및 AAV-DJ 및 이들의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
일부 양태에서, ALS는 SOD1 돌연변이와 관련된 가족성 ALS이다. 다른 양태에서, ALS는 SOD1 단백질의 비정상적인 응집 또는 SOD1 단백질 기능 또는 위치화 (localization)의 중단을 특징으로 하는 산발성 ALS이지만, 유전적 돌연변이의 결과일 필요는 없다. 본 방법에 의해 개선되는 ALS의 증상은 운동 뉴런 퇴행, 근육 약화, 근육 경직, 불분명한 발음 및/또는 호흡 곤란을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA 또는 이러한 siRNA를 암호화하는 분자를 포함하는 AAV 벡터가, 예컨대 두개내 주사에 의해 대상의 중추신경계 내로 직접 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 단독 치료요법으로서 사용된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 병용 치료요법으로서 사용된다. 병용 치료요법은 운동 뉴런 퇴행에 신경보호 효과가 시험된 하나 이상의 신경보호제, 예컨대 작은 분자 화합물, 성장인자 및 호르몬과 병용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 필요로 하는 대상에 본원에 기술된 약제학적으로 유효한 양의 플라스미드 또는 AAV 벡터를 투여하여 근위축성 측삭 경화증을 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. ALS는 가족성 ALS 또는 산발성 ALS일 수 있다.
도면의 간단한 설명
전술한 목적 및 다른 목적, 특징 및 이점은 첨부된 도면에서 도시된 바와 같이 본 발명의 특정 구현예에 대한 다음의 설명으로부터 명백해질 것이며, 도면에서 동일한 참조 부호는 상이한 도면 전반에 걸쳐 동일한 부분을 지칭한다. 도면은 축척일 필요는 없으며, 대신에 본 발명의 다양한 구현예의 원리를 설명할 때 강조된다.
도 1은 AAV 벡터에 암호화된 작제물의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 2는 HEK293T 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 가이드 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 3은 HEK293T 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 패신저(passenger) 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 4는 HeLa 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 가이드 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 5는 HeLa 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 패신저 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 6은 세포내 AAV DNA에 대한 히스토그램이다.
도 7은 인간 운동 뉴런에서 AAV 벡터에 암호화된 작제물의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 8은 U251MG 세포에서 SOD1의 용량-의존적인 침묵을 보여주는 도표이다.
도 9는 인간 성상세포에서 SOD1의 용량-의존적인 침묵을 보여주는 도표이다.
도 10은 U251MG 세포에서 SOD1의 시간 경과에 따른 침묵을 보여주는 도표이다.
도 11은 작제물의 용량-의존적인 효과를 보여주는 도 11A, 도 11B 및 도 11C를 포함한다. 도 11A는 상대적인 SOD1 발현을 보여준다. 도 11B는 가이드 가닥의 퍼센트를 보여준다. 도 11C는 패신저 가닥의 퍼센트를 보여준다.
도 12는 ITR, 인트론(I) 및 폴리A(P)와 관련하여 조절성 폴리뉴클레오티드(MP)의 위치를 나타내는 다이아그램이다.
전술한 목적 및 다른 목적, 특징 및 이점은 첨부된 도면에서 도시된 바와 같이 본 발명의 특정 구현예에 대한 다음의 설명으로부터 명백해질 것이며, 도면에서 동일한 참조 부호는 상이한 도면 전반에 걸쳐 동일한 부분을 지칭한다. 도면은 축척일 필요는 없으며, 대신에 본 발명의 다양한 구현예의 원리를 설명할 때 강조된다.
도 1은 AAV 벡터에 암호화된 작제물의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 2는 HEK293T 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 가이드 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 3은 HEK293T 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 패신저(passenger) 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 4는 HeLa 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 가이드 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 5는 HeLa 세포에서 AAV 벡터에 암호화된 조절성 폴리뉴클레오티드의 패신저 가닥의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 6은 세포내 AAV DNA에 대한 히스토그램이다.
도 7은 인간 운동 뉴런에서 AAV 벡터에 암호화된 작제물의 활성을 보여주는 히스토그램이다.
도 8은 U251MG 세포에서 SOD1의 용량-의존적인 침묵을 보여주는 도표이다.
도 9는 인간 성상세포에서 SOD1의 용량-의존적인 침묵을 보여주는 도표이다.
도 10은 U251MG 세포에서 SOD1의 시간 경과에 따른 침묵을 보여주는 도표이다.
도 11은 작제물의 용량-의존적인 효과를 보여주는 도 11A, 도 11B 및 도 11C를 포함한다. 도 11A는 상대적인 SOD1 발현을 보여준다. 도 11B는 가이드 가닥의 퍼센트를 보여준다. 도 11C는 패신저 가닥의 퍼센트를 보여준다.
도 12는 ITR, 인트론(I) 및 폴리A(P)와 관련하여 조절성 폴리뉴클레오티드(MP)의 위치를 나타내는 다이아그램이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 치료제로서 조절성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 RNA 또는 DNA 분자에 관한 것이다. RNA 간섭 매개된 유전자 침묵은 특히 표적화된 유전자 발현을 저해할 수 있다. 이어서, 본 발명은 SOD1 유전자를 표적화하는 작은 이중가닥 RNA(dsRNA) 분자(작은 간섭 RNA, siRNA), 이러한 siRNA를 포함하는 약제학적 조성물 및 이들의 설계 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 신경퇴행성 질환, 특히 근위축성 측삭 경화증(ALS)을 치료하기 위한, SOD1 유전자 발현 및 단백질 생산을 저해하기 위한 이의 용법을 제공한다.
본 발명은 SOD1 mRNA를 표적화하여 SOD1 유전자 발현 및/또는 SOD1 단백질 생산을 저해하는, 작은 간섭 RNA(siRNA) 듀플렉스(및 이를 암호화하는 조절성 폴리뉴클레오티드)를 제공한다. 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 SOD1 유전자에서 임의의 특정 돌연변이와는 무관하게 SOD1 유전자의 두 대립유전자를 저해할 수 있고, 특히 ALS 질환에서 발견되는 두 대립유전자와 상호작용할 수 있다.
일부 구현예에서, 이러한 siRNA 분자 또는 siRNA 분자의 단일 가닥을 암호화하는 핵산 서열은 아데노-관련 바이러스 벡터에 삽입되어 세포, 특히 운동 뉴런 및/또는 중추신경계의 다른 주변 세포 내에 도입된다.
본 발명의 암호화된 siRNA 듀플렉스는 함께 혼성화되어 듀플렉스 구조를 형성하는 안티센스 가닥 및 센스 가닥을 함유하며, 이때, 안티센스 가닥은 표적화된 SOD1 유전자의 핵산 서열에 대해 상보성이고, 센스 가닥은 표적화된 SOD1 유전자의 핵산 서열에 대해 상동성이다. 일부 양태에서, 안티센스 가닥의 5' 말단은 5' 인산염 기를 갖고, 센스 가닥의 3' 말단은 3' 히드록시 기를 함유한다. 다른 양태에서, 각 가닥의 3' 말단에는 하나 또는 2개의 뉴클레오티드 오버행이 있거나 이것이 존재하지 않는다.
본 발명에 따르면, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플레스의 각 가닥은 약 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개 길이의 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 19개 길이의 뉴클레오티드, 20개 길이의 뉴클레오티드, 21개 길이의 뉴클레오티드, 22개 길이의 뉴클레오티드, 23개 길이의 뉴클레오티드, 24개 길이의 뉴클레오티드 또는 25개 길이의 뉴클레오티드이다. 일부 양태에서, siRNA는 변형되지 않은 RNA 분자일 수 있다.
다른 양태에서, siRNA는 염기, 당 또는 백본 변형과 같은 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드를 함유할 수 있다.
하나의 구현예에서, siRNA 또는 dsRNA는 서로 상보성인 2개 이상의 서열을 포함한다. dsRNA는 제1서열을 갖는 센스 가닥 및 제2서열을 갖는 안티센스 가닥을 포함한다. 안티센스 가닥은 SOD1을 암호화하는 mRNA의 적어도 일부분에 대해 실질적으로 상보성인 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 상보성 영역은 30개 이하 길이의 뉴클레오티드, 15개 이상의 길이의 뉴클레오티드이다. 일반적으로 dsRNA는 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개 길이의 뉴클레오티드이다. 일부 구현예에서, dsRNA는 약 15 내지 약 25개 길이의 뉴클레오티드이고, 다른 구현예에서, dsRNA는 약 25 내지 약 30개 길이의 뉴클레오티드이다.
dsRNA는, SOD1을 발현하는 세포와 접촉시 발현 벡터에 직접 투여되거나 이에 암호화되든지 간에, 본원에 기술된 방법으로 분석했을 때, SOD1 발현을 10% 이상, 20% 이상, 25% 이상, 30% 이상, 35% 이상 또는 40% 이상까지 저해한다.
본원에 기술된 조성물에 포함된 siRNA 분자는 30개 이하 길이의 뉴클레오티드, 일반적으로 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개 길이의 뉴클레오티드인 영역을 갖는 안티센스 가닥(안티센스 가닥)을 갖는 dsRNA를 포함하며, 이는 SOD1 유전자의 mRNA 전사물의 적어도 일부분에 대해 실질적으로 상보성이다.
본 발명에 따르면, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스, siRNA 듀플렉스 중 하나의 가닥 또는 dsRNA의 핵산을 포함하는 AAV 벡터가 생산되며, AAV 벡터 혈청형은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8 및 AAV-DJ 및 이의 변이체일 수 있다.
본 발명에 따르면, ALS에서 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 표 3에 나열된 siRNA 듀플렉스로부터 선택된다. 일부 구현예에서, ALS에서 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 siRNA 듀플렉스: D-2757, D-2806, D-2860, D-2861, D-2875, D-2871, D-2758, D-2759, D-2866, D-2870, D-2823 및 D-2858로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 발명은 또한 SOD1 유전자를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 듀플렉스 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 양태에서, siRNA 듀플렉스는 AAV 벡터에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 세포에서 SOD1 유전자 발현을 저해/침묵시키는 방법을 제공한다. 따라서, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 세포, 특히 운동 뉴런에서 SOD1 유전자 발현을 실질적으로 저해하는데 사용될 수 있다. 일부 양태에서, SOD1 유전자 발현 저해는 적어도 약 20%까지, 예컨대 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 저해하는 것을 지칭한다. 따라서, 표적화된 유전자의 단백질 생산은 적어도 약 20 까지, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 저해될 수 있다. SOD1 유전자는 야생형 유전자이거나 하나 이상의 돌연변이를 갖는 돌연변이된 SOD1 유전자일 수 있다. 따라서, SOD1 단백질은 야생형 단백질 또는 하나 이상의 돌연변이를 갖는 돌연변이된 폴리펩티드이다.
하나의 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 SOD1 단백질 발현을 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 감소시키는데 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, SOD1 단백질 발현의 발현은 50 내지 90% 감소될 수 있다.
하나의 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 SOD1 mRNA 발현을 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 감소시키는데 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, SOD1 mRNA 발현의 발현은 50 내지 90% 감소될 수 있다.
하나의 구현예에서, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 하나 이상의 CNS 영역, 예컨대 비제한적으로 척수, 전뇌, 중뇌 및 후뇌에서 SOD1 단백질 및/또는 mRNA의 발현을 감소시키는데 사용될 수 있다. SOD1 단백질 및/또는 mRNA의 발현은 하나 이상의 CNS 영역에서 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 감소시킨다. 비제한적인 예로서, 척수에서 SOD1 단백질 및 mRNA의 발현은 50 내지 90%까지 감소된다.
일부 구현예에서, 본 발명은 치료를 필요로 하는 대상에서 비정상적인 SOD1 유전자 및/또는 SOD1 단백질과 관련된 근위축성 측삭 경화증을 치료 또는 개선하는 방법을 제공하며, 이러한 방법은 SOD1 유전자를 표적화하는 약제학적으로 유효량의 하나 이상의 siRNA 듀플렉스 또는 siRNA 듀플렉스를 암호화하는 핵산을 대상에 투여하는 것, 상기 siRNA 듀플렉스(또는 암호화된 듀플렉스)를 표적화된 세포에 전달하는 것, SOD1 유전자 발현 및 단백질 생산을 저해하는 것, 및 대상에서 ALS 증상을 개선하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, SOD1 유전자를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 듀플렉스의 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터가 ALS의 치료 및/또는 개선을 필요로 하는 대상에 투여된다. AAV 벡터 혈청형은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8(AAVDJ8) 및 AAV-DJ(AAVDJ) 및 이들의 변이체로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 하나의 구현예에서, AAV 벡터 혈청형은 AAV2이다. 또 다른 구현예에서, AAV 벡터 혈청형은 AAVDJ이다. 또 다른 구현예에서, AAV 벡터 혈청형은 AAVDJ8이다.
하나의 구현예에서, 본 발명에서 유용할 수 있는 혈청형은 AAV-DJ8일 수 있다. AAV-DJ8의 아미노산 서열은 헤파린 결합 도메인(HBD)을 제거하기 위한 2개 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 미국특허 제7,588,772호(이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)에서 서열번호 1로 기재된 AAV-DJ 서열은, 2개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 587번 아미노산에서 아르기닌(R; arg)이 글루타민(Q; gln)으로 바뀐 R587Q, 및 (2) 590번 아미노산에서 아르기닌(R; arg)이 트레오닌(T; thr)으로 바뀐 R590T. 또 다른 비제한적인 예로서 3개의 돌연변이를 포함할 수 있다: (1) 406번 아미노산에서 리신(K; lys)이 아르기닌(R; arg)으로 바뀐 K406R, (2) 587번 아미노산에서 아르기닌(R; arg)이 글루타민(Q; gln)으로 바뀐 R587Q, 및 (3) 590번 아미노산 590에서 아르기닌(R; arg)이 트레오닌(T; thr)으로 바뀐 R590T.
일부 양태에서, ALS는 SOD1 돌연변이와 관련된 가족성 ALS이다. 다른 양태에서, ALS는 SOD1 단백질의 비정상적인 응집 또는 SOD1 단백질 기능 또는 위치화(localization)의 수차(abberation)를 특징으로 하는 산발성 ALS이다. 본 방법에 의해 개선되는 ALS 증상은, 비제한적으로 운동 뉴런 퇴행, 근육 약화, 근육 경직, 불분명한 발음 및/또는 호흡 곤란을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA 또는 이러한 siRNA 분자를 포함하는 AAV 벡터가, 예컨대 두개내 주사에 의해 대상의 중추신경계 내로 직접 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 단독 치료요법으로서 사용된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 약제학적 조성물은 병용 치료요법으로서 사용된다. 병용 치료요법은 운동 뉴런 퇴행에 신경보호 효과가 시험된 하나 이상의 신경보호제, 예컨대 작은 분자 화합물, 성장인자 및 호르몬과 병용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명은 필요로 하는 대상에 본원에 기술된 약제학적으로 유효한 양의 플라스미드 또는 AAV 벡터를 투여하여 근위축성 측삭 경화증을 치료 또는 개선하는 방법을 제공한다. ALS는 가족성 ALS 또는 산발성 ALS일 수 있다.
본 발명의 하나 이상의 구현예의 세부 사항은 이하의 첨부된 설명에서 설명된다. 본원에 기술된 것과 유사 또는 동일한 임의의 물질 및 방법이 본 발명의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있지만, 바람직한 재료 및 방법을 이하에 설명한다. 본 발명의 다른 특징, 목적 및 이점이 이 설명으로부터 명백해질 것이다. 본 설명에서, 단수 형태는 달리 문맥에서 명확하게 지시하지 않는 한 복수도 포함한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적이고 과학적인 용어는 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자 중 하나에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 상충이 있는 경우, 본 설명이 우선할 것이다.
근위축성
측삭
경화증(
ALS
)
성인-발병 신경퇴행성 장애인 근위축성 측삭 경화증(ALS)은 운동 피질, 뇌간 및 척수에서의 운동 뉴런의 선택적인 사멸을 특징으로 하는 진행성이고 치명적인 질환이다. ALS의 발병률은 100,000명당 약 1.9명이다. ALS로 진단된 환자는 경직, 과다반사 또는 반사저하, 근섬유다발수축(fasciculation), 근육 위축 및 마비를 특징으로 하는 진행성 근육 표현형을 발달시킨다. 이러한 운동 장애는 운동 뉴런의 손실로 인한 근육의 탈신경화(denervation)에 기인한다. ALS의 주요 병리학적 특징은 피질척수로(corticospinal tract)의 퇴행 및 하위 운동 뉴런(LMN) 또는 전각 세포(anterior horn cell)의 광범위한 손실(Ghatak et al., J Neuropathol Exp Neurol., 1986, 45, 385-395), 일차 운동 피질에서의 베츠(Betz) 세포 및 추상세포의 퇴행 및 손실(Udaka et al., Acta Neuropathol, 1986, 70, 289-295; Maekawa et al., Brain, 2004, 127, 1237-1251) 및 운동 피질 및 척수에서의 반응성 신경아교증(reactive gliosis)(Kawamata et al., Am J Pathol., 1992, 140,691-707; 및 Schiffer et al., J Neurol Sci., 1996, 139, 27-33)을 포함한다. ALS는 호흡 결함 및/또는 염증에 의해 보통 진단 후 3 내지 5년 이내에 치명적이다(Rowland LP and Shneibder NA, N Engl. J. Med., 2001, 344, 1688-1700).
ALS의 세포 특징은 퇴행성 운동 뉴런 및 주변 세포(예컨대, 성상세포)에서 단백질성 유비퀴틴화된 세포질 봉입체의 존재이다. 유비퀴틴화된 봉입체(즉, 루이체 유사 봉입체 또는 스케인 유사 봉입체)는 ALS에서 가장 흔하고 특이적인 유형의 봉입체며, 척수 및 뇌간의 LMN, 및 피질척수 상위 운동 뉴런(UMN)에서 발견된다(Matsumoto et al., J Neurol Sci., 1993, 115, 208-213; 및 Sasak and Maruyama, Acta Neuropathol., 1994, 87, 578-585). 일부 단백질은 유비퀴틴, Cu/Zn 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(SOD1), 페리페린 및 도르핀(Dorfin)을 비롯하여, 봉입체의 구성요소로 확인되었다. 신경미세섬유성 봉입체는 종종 ALS의 척수 운동 뉴런에서 유리질 거대 봉입체(HCI) 및 축삭 "스페로이드(spheroid)"에서 발견된다. 다른 유형 및 덜 특이적인 봉입체는 피질 위층에서의 부니나 바디(Bunina body)(시스타틴 C-함유 봉입체)와 크레센트(Crescen) 모양의 봉입체(SCI)를 포함한다. ALS에서 나타나는 다른 신경병리학적 특징은 골지체의 분절화, 미토콘드리아의 액포화 및 시냅스 말단의 초미세구조의 비정상을 포함한다(Fujita et al., Acta Neuropathol. 2002, 103, 243-247).
추가로, 전두측두엽 치매 ALS(FTD-ALS)에서의 피질 위축(전두엽 및 측두엽 포함)이 또한 관찰되며, 이는 FTD-ALS 환자에서 인지 장애를 야기할 수 있다.
ALS는 복잡하고 다요인성 질환이고, ALS 발병기전을 담당하는 것으로 가설되는 다수의 메커니즘은 비제한적으로, 단백질 분해의 기능장애, 글루타메이트 흥분독성, 미토콘드리아 기능장애, 아폽토시스, 산화 스트레스, 염증, 단백질 미스폴딩(misfolding) 및 응집, 비정상적인 RNA 대사, 및 변경된 유전자 발현을 포함한다.
ALS 사례의 약 10% 내지 15%는 질환의 가족력이 있으며, 이러한 환자는 가족성 ALS(fALS) 또는 유전된 환자라고 지칭되며, 일반적으로 유전 및 높은 침투도의 멘델식 우성 방식으로 유전된다. 나머지(약 85% 내지 95%)는 이들은 기록된 가족력과는 관련이 없기 때문에 산발성 ALS(sALS)으로 분류되지만, 대신에 비제한적으로 환경적인 요인, 유전적 다형성, 체세포 돌연변이 및 가능한 유전-환경적 상호작용을 포함하는 다른 위험 요소에 기인하는 것으로 생각된다. 대부분의 경우에서, 가족성(또는 유전성) ALS는 상염색체 우성 질환으로 유전되지만, 상염색체 열성 및 X-연관된 유전 및 불완전한 침투가 있는 내력이 존재한다. 산발성 및 가족성 형태는 임상적으로 구분할 수 없고, 이는 일반적인 병인을 시사한다. ALS에서 운동 뉴런의 선택적인 사멸의 정확한 원인은 여전히 불분명하다. 두 형태의 질환에 대한 fALS에서 유전적인 요인을 이해하는 과정이 밝혀질 수 있다.
최근에, ALS의 유전적 원인으로의 폭발적인 증가는 fALS의 원인으로 공지된 10개 이상의 상이한 유전자에서 돌연변이를 발견하였다. 가장 흔한 한 가지는 Cu/Zn 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 1(SOD1; 약 20%)을 암호화하는 유전자(Rosen DR et al., Nature, 1993, 362, 59-62), 육종에서 융합됨/지방육종에서 번역됨(FUS/TLS; 1 내지 5%) 및 TDP-43(TARDBP; 1 내지 5%)에서 발견된다. 최근에, C9 또는 F72 유전자에서의 헥사뉴클레오티드 반복 확장 (GGGGCC)n은 서양인에서 fALS의 가장 빈번한(약 40%) 원인으로 확인되었다(Renton et al., Nat. Neurosci., 2014, 17, 17-23 참조). ALS에서 돌연변이된 다른 유전자는 알신(ALS2), 세나탁신(SETX), 소포-관련된 막 단백질(VAPB), 및 안지오제닌(ANG)을 포함한다. fALS 유전자는 상이한 세포 메커니즘을 제어하며, 이는 ALS의 병인이 복잡하고 결국 운동 뉴런 퇴행을 야기하는 일부 상이한 처리과정과 관련되어 있을 수 있음을 시사한다.
SOD1은 포유류에서 확인되고 특성확인되는 3종의 인간 슈퍼옥사이드 디스뮤타제: 구리-아연 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(Cu/ZnSOD 또는 SOD1), 망간 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(MnSOD 또는 SOD2), 및 세포외 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(ECSOD 또는 SOD3) 중 하나이다. SOD1은 서브유닛 당 하나의 구리- 및 하나의 아연-결합 부위를 갖는 153-잔기 폴리펩티드의 32 kDa의 동형이합체이며, 이는 인간 21번 염색체상의 SOD1 유전자(GeneBank 접근 번호 NM_000454.4)에 의해 암호화된다(표 2 참조). SOD1은 결합된 구리 이온에서 슈퍼옥사이드 음이온(O2-)의 분자 산소(O2) 및 과산화수소(H2O2)로의 반응을 촉매한다. SOD1의 세포내 농도는 높으며(10 내지 100μM의 범위), 이는 중추신경계(CNS)에서의 총 단백질 농도의 1%를 차지한다. 단백질은 진핵생물 세포의 세포질뿐만 아니라, 핵, 리소좀, 퍼옥시좀 및 미토콘드리아 막간 공간(intermembrane space)에 위치한다(Lindenau J et al., Glia, 2000, 29, 25-34).
SOD1 유전자의 돌연변이는 fALS 환자에서 15 내지 20% 및 모든 ALS 경우에서 1 내지 2% 까지 나타난다. 현재, 153-아미노산 SOD1 폴리펩티드를 통해 분포된 170종 이상의 상이한 돌연변이가 ALS를 유발하는 것으로 밝혀졌고, 업데이트된 목록을 ALS 온라인 유전자 데이터베이스(ALSOD)(Wroe R et al., Amyotroph Lateral Scler., 2008, 9, 249-250)에서 찾을 수 있다. 표 1은 ALS에서 SOD1의 돌연변이의 일부 예를 나열한다. 이러한 돌연변이는 결실, 삽입 및 C-말단 절단도 발생하지만, 우세하게는 단일 아미노산 치환(즉, 미스센스 돌연변이)이다. 상이한 SOD1 돌연변이는 상이한 지리적 분포 패턴을 나타낸다. 예컨대, SOD1 유전자 돌연변이에 의해 야기된 ALS를 가진 모든 미국인의 40 내지 50%는 Ala4Val(또는 A4V)의 특정 돌연변이를 갖는다. A4V 돌연변이는 전형적으로 심각한 징후 및 증상과 관련되어 있으며 생존 기간은 전형적으로 2 내지 3년이다. I113T 돌연변이는 영국에서 가장 흔한 돌연변이이다. 유럽에서 가장 흔한 돌연변이는 D90A 치환이며 생존 기간은 보통 10년 초과이다.
[표 1]
SOD1 유전자 결함과 관련된 신경세포 사멸의 메커니즘을 조사하기 위해서, SOD1-관련 ALS의 몇몇 설치류 모델이 당업계에서 개발되었고, 이는 미스센스 돌연변이, 작은 결실 또는 삽입을 비롯하여 상이한 돌연변이를 갖는 인간 SOD1 유전자를 발현한다. 비제한적인 ALS 마우스 모델의 예로는 SOD1G93A, SOD1A4V, SOD1G37R, SOD1G85R, SOD1D90A, SOD1L84V, SOD1I113T, SOD1H36R/H48Q, SOD1G127X, SOD1L126X 및 SOD1L126delTT가 포함된다. 2종의 상이한 인간 SOD1 돌연변이를 갖는 이러한 2종의 형질전환 랫트 모델: SOD1H46R 및 SOD1G93R이 존재한다. 이러한 설치류 ALS 모델은, 인간 ALS 환자와 유사한 근육 약화, 및 인간 질환의 몇몇 특징, 특히 척추 운동 뉴런의 선택적인 사멸, 운동 뉴런에서 단백질 봉입체의 응집 및 미세아교세포 활성화를 반영하는 기타 병인적 특징을 발달시킬 수 있다. 형질전환 설치류는 인간 SOD1-관련 ALS 질환의 우수한 모델이이며, 질환 발병을 연구하고 질환 치료법을 개발하기 위한 모델을 제공한다는 것이 당업계에 잘 공지되어 있다.
동물 및 세포 모델에서의 연구는 SOD1 병원성 변이체가 기능 획득에 의해 ALS를 유발한다는 것을 보여주었다. 즉, 슈퍼옥사이드 디스뮤타제 효소는 SOD1 돌연변이에 의해 변경될 때 신규하지만 해로운 특성을 얻는다. 예컨대, ALS에서 일부 SOD1 돌연변이된 변이체는 산화환원 주기의 방해에 의해 산화 스트레스를 증가시킨다(예컨대, 독성의 슈퍼옥사이드 라디칼의 축적 증가). 다른 연구는 또한 ALS에서의 일부 SOD1 돌연변이된 변이체가 이의 정상적인 생리학적 기능과 독립적인 독성의 특성을 획득할 수 있음을 나타낸다(예컨대, 미스폴딩된 SOD1 변이체의 비정상적인 응집). 비정상적인 산화환원 화학적 모델에서, 돌연변이체 SOD1은 불안정하며, 비정상적인 화학을 통해 비통상적인 기질과 반응하여 반응성 산소종(ROS)의 과생산을 야기한다. 단백질 독성 모델에서, 불안정하고 미스폴딩된 SOD1은 세포질 봉입체로 응집되어 세포 처리과정에 중요한 단백질을 격리시킨다. 이러한 두 가지 가설은 상호 배타적이지 않다. 활성 부위에서 금속에 결합하는 선택된 히스티딘 잔기의 산화는 SOD1 응집을 매개한다는 것이 밝혀졌다.
응집된 돌연변이체 SOD1 단백질은 또한 미토콘드리아 기능부전(Vehvilainen P et al., Front Cell Neurosci., 2014, 8, 126), 축삭 수송 장애, 비정상적인 RNA 대사, 신경아교세포 병리학 및 글루타메이트 흥분독성을 유발할 수 있다. 일부 산발성 ALS 경우에서, 미스폴딩된 야생형 SOD1 단백질은 가족성 ALS-관련 SOD1 변이체에서 나타나는 것과 유사한 "독성 형태(toxic conformation)"를 형성하는 질환에 걸린 운동 뉴런에서 발견된다(Rotunno MS 및 Bosco DA, Front Cell Neurosci., 2013, 16, 7, 253). 이러한 증거는, ALS가 다른 신경퇴행성 질환, 예컨대 알츠하이머병 및 파킨슨병과 유사한 단백질 폴딩 질환임을 시사한다.
현재, ALS를 겪는 환자가 이용가능한 치료법이 없다. 유일하게 FDA에서 승인된 약물은 글루타메이트 방출을 저해하는 릴루졸로, ALS에 대해 중간 정도의 효과를 가지며, 18개월 동안 복용하는 경우 단지 2 내지 3개월 까지만 생존을 연장시킨다. 불행하게도, 릴루졸을 복용하는 환자는 질환 진행의 늦춤 또는 근육 기능의 개선을 경험하지 못한다. 따라서, 릴루졸은 치료법 또는 효과적인 치료법을 제시하지 않는다. 연구자들은 보다 우수한 치료제를 계속해서 찾고 있다.
SOD1 응집을 예방 또는 개선할 수 있는 치료적 접근법이 이미 시험되어 왔다. 예컨대, 히드록실아민 유도체인 애리모클로몰(arimoclomol)은 열 충격 단백질을 표적화하는 약물이며, 이는 이러한 응집체에 대한 세포 방어 메커니즘이다. 연구는 애리모클로몰을 이용한 치료가 SOD1 마우스 모델에서 근육 기능을 개선하였음을 보여주었다. ALS에서 하나 이상의 세포 결함을 표적화하는 다른 약물은 AMPA 길항제, 예컨대 운동 뉴런에 대한 글루타메이트-유도된 흥분독성을 감소시킬 수 있는 베타-락탐 항체인 탈람파넬(talampanel); 산화 유도된 운동 뉴런 사멸을 저해할 수 있는 브로모크립틴(Bromocriptine)(예컨대, 미국공개특허 제20110105517호; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨); SOD1 유전자 발현을 감소시킬 수 있는 1,3-디페닐우레아 유도체 또는 다중효소 저해제(예컨대, 미국공개특허 제20130225642호; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨); 미토콘드리아에서 산화 반응을 개선할 수 있는 도파민 작용제인 프라미펙솔(pramipexole) 및 이의 거울상이성질체인 덱스프라미펙솔(dexpramipexole); 사이클로옥시게나제 효소를 저해하는 니메술리드(nimesulide)(미국공개특허 제20060041022호 전체를 참고로서 본문에 포함함); 자유 라디칼 스캐빈저로 작용하는 약물(미국특허 제6,933,310호 및 PCT 공개특허 제WO2006075434호의 각 내용 전체를 참고문헌으로서 본문에 포함)을 포함할 수 있다.
비정상적인 SOD1 단백질 응집을 저해하기 위한 또 다른 접근법은 ALS에서 SOD1 유전자 발현을 침묵/저해하는 것이다. 돌연변이된 대립유저자의 특정 유전자 침묵을 위한 작은 간섭 RNA가 fALS의 치료에 대해 치료학적으로 유익하다는 것이 보고되었다(예컨대, Ralgh GS et al., Nat. Medicine, 2005, 11(4), 429-433; 및 Raoul C et al., Nat. Medicine, 2005, 11(4), 423-428; 및 Maxwell MM et al., PNAS, 2004, 101(9), 3178-3183; 및 Ding H et al., Chinese Medical J., 2011, 124(1), 106-110; 및 Scharz DS et al., Plos Genet., 2006, 2(9), e140; 이의 각 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
ALS에서 SOD1 유전자를 표적화하고 SOD1 발현을 조절하는 다수의 다른 RNA 치료제가 당업계에 교시되어 있다. 이러한 RNA에 기초한 제제는 안티센스 올리고뉴클레오티드 및 이중 가닥의 작은 간섭 RNA를 포함한다. 예컨대, Wang H et al., J Biol. Chem., 2008, 283(23), 15845-15852); 미국특허 제7,498,316호; 제7,632,938호; 제7,678,895호; 제7,951,784호; 제7,977,314호; 제8,183,219호; 제8,309,533호 및 제8,586,554호; 및 미국공개특허 제2006/0229268 및 2011/0263680호(각 내용 전체가 본원에 참조로서 포함됨)를 참조한다.
본 발명은 조절성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 분자 및 이의 설계 및 제조 방법을 제공한다. 특히, 본 발명은 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터와 같은 바이러스 벡터를 이용한다. 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 운동 뉴런으로의 활성제의 전달을 증가시킬 수 있다. SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화하는 dsRNA는 세포내에서 SOD1 유전자 발현(예컨대, mRNA 수준)을 현저하게 저해할 수 있고; 따라서, 단백질 응집 및 봉합체 형성, 증가된 자유 라디칼, 미토콘드리아 기능부전 및 RNA 대사와 같은 세포 내에서 SOD1 발현 유도된 스트레스를 개선할 수 있다.
이러한 siRNA 매개된 SOD1 발현 저해가 ALS 치료에 사용될 수 있다. 본 발명에 따르면, 환자에서 ALS의 치료 및/또는 개선 방법은, 환자에게 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터의 유효량을 세포 내로 투여하는 것을 포함한다. 이러한 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터의 투여는 SOD1 유전자 발현의 억제/침묵을 야기하는 siRNA 분자를 암호화할 것이다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 AAV는 대상에서 돌연변이체 SOD1의 발현을 감소시킨다. 돌연변이체 SOD1의 감소는 또한 독성 메커니즘, 예컨대 비제한적으로 산화 스트레스, 미토콘드리아 기능부전, 손상된 축삭 수송, 비정상적인 RNA 대사, 신경아교세포 병리학 및/또는 글루타메이트 흥분독성을 야기할 수 있는 독성 응집체의 형성을 감소시킬 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 치료를 필요로 하는 대상에서 SOD1의 양을 감소시키며 따라서 본원에 기술된 치료적 이익을 제공한다.
본 발명의 조성물
siRNA
분자
본 발명은 신경퇴행성 장애를 치료하기 위한 유전자 발현의 RNA 간섭(RNAi) 유도된 저해에 관한 것이다. SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA(본원에서 집합적으로 "siRNA 분자"로 지칭됨)가 본원에서 제공된다. 이러한 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 세포, 예컨대 운동 뉴런에서 SOD1 유전자 발현을 감소시키거나 침묵시킬 수 있으며, 이에 의해 비제한적으로 운동 뉴런 사멸 및 근육 위축과 같은 ALS 증상을 개선할 수 있다.
RNAi(전사 후 유전자 침묵(PTGS), 진압(quelling), 또는 공동 억제로도 공지됨)는 RNA 분자가 서열 특이적인 방식으로 전형적으로는 특이적인 mRNA 분자를 파괴시킴으로써 유전자 발현을 저해하는 전사 후 유전자 침묵 처리과정이다. RNAi의 활성 구성요소는 작은 간섭 RNA(siRNA)라 불리는 짧은/작은 이중 가닥의 RNA(dsRNA)이며, 이는 전형적으로 15 내지 30개의 뉴클레오티드(예컨대, 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드) 및 2개의 뉴클레오티드의 3' 오버행을 포함하며, 표적 유전자의 핵산 서열과 일치한다. 이러한 짧은 RNA 종은 보다 큰 dsRNA의 다이서(Dicer)-매개된 절단에 의해 생체내에서 자연적으로 생성될 수 있고, 이들은 포유류 세포에서 기능적이다.
마이크로RNA(miRNA)로 명명된 자연적으로 발현된 작은 RNA 분자는 mRNA의 발현을 조절함으로써 유전자 침묵을 유도한다. RNA 유도된 침묵 복합체(RISC)를 함유하는 miRNA는 시드(seed) 영역이라고 불리는 miRNA의 5' 영역에서 2 내지 7개의 뉴클레오티드, 및 이의 3' 영역에서 다른 염기쌍과 완벽한 서열 상보성을 제시하는 mRNA를 표적화한다. 유전자 발현의 miRNA 매개된 유전자 발현의 하향 조절은 표적 mRNA의 절단, 표적 mRNA의 번역 억제 또는 mRNA 분해에 의해 야기될 수 있다. miRNA 표적화 서열은 보통 표적 mRNA의 3'-UTR에 위치한다. 단일 miRNA는 다양한 유전자로부터 100개 초과의 전사물을 표적화할 수 있고, 하나의 mRNA는 상이한 miRNA에 의해 표적화될 수 있다.
특정 mRNA를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 시험관내에서 설계되고 합성되어 RNAi 처리과정을 활성화시키기 위해 세포 내에 도입될 수 있다. Elbashir 등은, 21-뉴클레오티드의 siRNA 듀플렉스(작은 간섭 RNA라고 칭해짐)가 포유류 세포에서 면역 반응을 유도하지 않고 강력하고 특이적인 유전자 넉다운에 영향을 미칠 수 있었음을 보여주었다(Elbashir SM et al., Nature, 2001, 411, 494-498). 이러한 초기 보고 이래로, siRNA에 의한 번역 후 유전자 침묵은 포유류 세포에서 유전자 분석을 위한 강력한 도구로서 등장하였으며, 신규한 치료제를 생산할 잠재력이 있다.
시험관내에서 합성된 siRNA 분자는 RNAi를 활성화시키기 위해 세포 내로 도입될 수 있다. 내인성 dsRNA와 유사한 외인성 siRNA 듀플렉스는, 이것이 세포 내로 도입될 때 조립되어, siRNA 듀플렉스의 2개의 가닥 중 하나에 상보성인 RNA 서열(즉, 안티센스 가닥)에 대해 게놈 검색을 용이하게 하는 다중유닛 복합체인 RNA 유도된 침묵 복합체(RISC)를 형성할 수 있다. 이러한 처리과정 중에, siRNA의 센스 가닥(또는 패신저 가닥)이 복합체로부터 손실되는 반면, siRNA의 안티센스 가닥(또는 가이드 가닥)은 이의 상보성인 RNA와 매칭된다. 특히, siRNA 함유 RISC 복합체의 표적은 완벽한 서열 상보성을 제시하는 mRNA이다. 그 다음, siRNA 매개된 유전자 침묵이 발생하여, 표적을 절단, 방출 및 분해한다.
표적 mRNA와 상동성인 센스 가닥 및 표적 mRNA와 상보성인 안티센스 가닥으로 구성된 siRNA 듀플렉스는, 표적 RNA 파괴 효율의 관점에서 단일 가닥(ss)-siRNA(예컨대, 안티센스 가닥 RNA 또는 안티센스 올리고뉴클레오티드)의 사용에 비해 보다 더 많은 이점을 제공한다. 다수의 경우에서, 상응하는 듀플렉스의 효과적인 유전자 침묵 효능을 달성하기 위해서는 보다 높은 농도의 ss-siRNA가 요구된다.
임의의 전술된 분자는 AAV 벡터 또는 벡터 게놈에 의해 암호화될 수 있다.
SOD1
유전자를
표적화하는
siRNA
이중가닥의
설계 및 서열
siRNA의 설계에 대한 일부 지침이 당업계에 제안되어 있다. 이러한 지침은 일반적으로 침묵되는 유전자에서 한 영역을 표적화하는 19-뉴클레오티드의 듀플렉스 영역, 대칭의 2 내지 3개 뉴클레오티드의 3' 오버행, 5-인산염 및 3-히드록실 기를 생성할 것을 권장한다. siRNA 서열 선호를 지배할 수 있는 다른 규칙으로는, 비제한적으로 (i) 안티센스 가닥의 5' 말단에서의 A/U; (ii) 센스 가닥의 5' 말단에서의 G/C; (iii) 안티센스 가닥의 5' 말단 1/3에서의 5개 이상의 A/U 잔기; 및 (iv) 9개 초과의 길이의 뉴클레오티드의 임의의 GC 스트레치의 부재가 포함된다. 이러한 고려에 따라, 표적 유전자의 특정 서열과 함께, 포유류의 표적 유전자 발현을 억제하기 위해 필수적인 고도로 효과적인 siRNA 분자가 용이하게 설계될 수 있다.
본 발명에 따르면, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 분자(예컨대, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA)가 설계된다. 이러한 siRNA 분자는 SOD1 유전자 발현 및 단백질 생산을 특이적으로 억제할 수 있다. 일부 양태에서, siRNA 분자는 세포에서 SOD1 유전자 변이체, 즉, ALS 질환을 갖는 환자에서 식별되는 돌연변이된 SOD1 전사물(예컨대, 표 1의 돌연변이)을 선택적으로 "넉아웃" 시키기 위해 설계되고 사용된다. 일부 양태에서, siRNA 분자는 세포에서 SOD1 유전자 변이체를 선택적으로 "넉다운"시키기 위해 설계되고 사용된다. 다른 양태에서, siRNA 분자는 SOD1 유전자에서 임의의 특정 돌연변이와는 무관하게 야생형 및 SOD1 유전자의 돌연변이된 대립유전자 둘 다를 저해 또는 억제할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 두 가닥 모두 함께 혼성화되어 듀플렉스 구조를 형성하는, 센스 가닥 및 상보성인 안티센스 가닥을 포함한다. 안티센스 가닥은 SOD1 mRNA 서열을 표적-특이적인 RNAi를 지시하기에 충분한 상보성을 가지고 있으며, 즉, siRNA 분자는 RNAi 기구(machinery) 또는 처리과정에 의해 표적 mRNA의 파괴를 유발시키기에 충분한 서열을 가지고 있다.
일부 구현예에서, 안티센스 가닥 및 표적 mRNA 서열은 100% 상보성이다. 안티센스 가닥은 표적 mRNA 서열의 임의의 부분에 대해 상보성일 수 있다.
다른 구현예에서, 안티센스 가닥 및 표적 mRNA 서열은 하나 이상의 미스매치(mismatch)를 포함한다. 비제한적인 예로서, 안티센스 및 표적 mRNA 서열은 적어도 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 99%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 99%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 99%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 99%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 99%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 99%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 99%, 90 내지 95%, 90 내지 99% 또는 95 내지 99% 상보성이다.
본 발명에 따르면, siRNA 분자는 약 10 내지 50개 이상의 뉴클레오티드 길이, 즉, 10 내지 50개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체)를 포함하는 각각의 가닥의 길이를 갖는다. 바람직하게는, siRNA 분자는 각 가닥에서 약 15 내지 30, 예컨대 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 뉴클레오티드의 길이를 가지며, 가닥 중 하나는 표적 영역에 대해 충분히 상보성이다. 하나의 구현예에서, siRNA 분자는 약 19 내지 25개, 19 내지 24개 또는 19 내지 21개의 뉴클레오티드의 길이를 갖는다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 약 19개의 뉴클레오티드 내지 약 25개의 뉴클레오티드, 및 3' 말단에 2개의 오버행 뉴클레오티드를 포함하는 합성 RNA 듀플렉스일 수 있다. 일부 양태에서, siRNA 분자는 변형되지 않은 RNA 분자일 수 있다. 다른 양태에서, siRNA 분자는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 염기, 당 또는 백본 변형을 함유할 수 있다.
다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터(예컨대, AAV 벡터), 게놈, 또는 세포로의 전달을 위한 핵산 발현 벡터에 암호화될 수 있다.
DNA 발현 플라스미드는 세포에서 본 발명의 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA를 안정적으로 발현시키고 표적 유전자의 장기 저해를 달성하기 위해 사용될 수 있다. 하나의 양태에서, siRNA 듀플렉스의 센스 및 안티센스 가닥은, 전형적으로 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)라고 불리는 줄기-루프 구조의 발현을 야기하는 짧은 스페이서 서열에 의해 연결된다. 헤어핀은 다이서에 의해 인식되고 절단되어 성숙한 siRNA 분자를 생성한다.
본 발명에 따르면, SOD1 mRNA를 표적화하는 siRNA 분자를 암호화하는 핵산을 포함하는 AAV 벡터가 제조되며, 이러한 AAV 벡터의 혈청형은 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8 및 AAV-DJ 및 이들의 변이체일 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 표적 mRNA(즉, SOD1)를 억제(또는 분해)한다. 따라서, siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 세포, 예컨대 운동 뉴런에서 SOD1 유전자 발현을 실질적으로 저해하는데 사용될 수 있다. 일부 양태에서, SOD1 유전자 발현의 저해는 약 20% 이상까지, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 저해를 지칭한다. 따라서, 표적화된 유전자의 단백질 생산은 적어도 약 20 까지, 바람직하게는 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%까지, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 저해될 수 있다. SOD1 유전자는 야생형 유전자이거나 하나 이상의 돌연변이를 갖는 돌연변이된 SOD1 유전자일 수 있다. 따라서, 단백질은 야생형 단백질 또는 하나 이상의 돌연변이가 있는 돌연변이된 폴리펩티드이다.
본 발명에 따라, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 배양된 세포에서 SOD1 mRNA 수준을 감소시키는 이들의 능력을 위해 설계 및 시험되었다. 이러한 siRNA 듀플렉스는 표 3에 나열된 것들을 포함한다. 비제한적인 예로서, siRNA 듀플렉스는 siRNA 듀플렉스 ID: D-2757, D-2806, D-2860, D-2861, D-2875, D-2871, D-2758, D-2759, D-2866, D-2870, D-2823 및 D-2858일 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA의 3' 줄기 아암(arm)은, 5' 줄기 아암에서 패신저 가닥의 5' 말단의 상류에 13개의 뉴클레오티드들 중 11개에 대해 상보성인, 가이드 가닥의 3' 말단의 하류에 11개의 뉴클레오티드를 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 조절성 폴리뉴클레오티드의 3' 줄기 아암의 3' 말단의 6개의 뉴클레오티드 하류에 있는 시스테인을 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 가이드 가닥에 대한 miRNA 시드 매치를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 패신저 가닥에 대한 miRNA 시드 매치를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 가이드 또는 패신저 가닥에 대한 시드 매치를 포함하지 않는다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 가이드 가닥에 대해 유의한 전장 비표적(off target)을 거의 갖지 않을 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 패신저 가닥에 대해 유의한 전장 비표적을 거의 갖지 않을 수 있다. 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 패신저 가닥에 대해 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 1 내지 5%, 2 내지 6%, 3 내지 7%, 4 내지 8%, 5 내지 9%, 5 내지 10% 6 내지 10% 미만의 전장 비표적을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 가이드 가닥 또는 패신저 가닥에 대해 유의한 전장 비표적을 거의 갖지 않을 수 있다. 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 가이드 또는 패신저 가닥에 대해 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 1 내지 5%, 2 내지 6%, 3 내지 7%, 4 내지 8%, 5 내지 9%, 5 내지 10%, 6 내지 10% 미만의 전장 비표적을 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 시험관내에서 높은 활성을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 시험관내에서 낮은 활성을 가질 수 있다. 또 다른 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 시험관내에서 높은 가이드 가닥 활성 및 낮은 패신저 가닥 활성을 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 시험관내에서 높은 가이드 가닥 활성 및 낮은 패신저 가닥 활성을 갖는다. 가이드 가닥에 의한 표적 넉-다운 (KD)은 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 99.5% 또는 100%일 수 있다. 가이드 가닥에 의한 표적 넉-다운은 60 내지 65%, 60 내지 70%, 60 내지 75%, 60 내지 80%, 60 내지 85%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 99%, 60 내지 99.5%, 60 내지 100%, 65 내지 70%, 65 내지 75%, 65 내지 80%, 65 내지 85%, 65 내지 90%, 65 내지 95%, 65 내지 99%, 65 내지 99.5%, 65 내지 100%, 70 내지 75%, 70 내지 80%, 70 내지 85%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 99%, 70 내지 99.5%, 70 내지 100%, 75 내지 80%, 75 내지 85%, 75 내지 90%, 75 내지 95%, 75 내지 99%, 75 내지 99.5%, 75 내지 100%, 80 내지 85%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 99%, 80 내지 99.5%, 80 내지 100%, 85 내지 90%, 85 내지 95%, 85 내지 99%, 85 내지 99.5%, 85 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 99%, 90 내지 99.5%, 90 내지 100%, 95 내지 99%, 95 내지 99.5%, 95 내지 100%, 99 내지 99.5%, 99 내지 100% 또는 99.5 내지 100%일 수 있다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥에 의한 표적 넉-다운 (KD)은 70% 초과이다.
하나의 구현예에서, 가장 근접한 비표적에 대한 패신저 가닥의 IC50은 표적에 대한 가이드 가닥의 IC50에 100을 곱한 것을 초과한다. 비제한적인 예시로서, 가장 근접한 비표적에 대한 패신저 가닥의 IC50이 표적에 대한 가이드 가닥의 IC50에 100을 곱한 것을 초과하는 경우, 인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스 또는 암호화된 dsRNA는 시험관내에서 높은 가이드 가닥 활성 및 낮은 패신저 가닥 활성을 갖는다고 일컬어진다.
하나의 구현예에서, 시험관내 또는 생체내에서, 가이드 가닥의 5' 처리과정은 5' 말단에서 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%의 시간의 정확한 시작 (n)을 갖는다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 5' 처리과정은 정확하며, 시험관내에서 5' 말단에서 99% 이상의 시간의 정확한 시작(n)을 갖는다. 비제한적인 예로서, 가이드 가닥의 5' 처리과정은 정확하며, 생체내에서 5' 말단에서 99% 이상의 시간의 정확한 시작(n)을 갖는다.
하나의 구현예에서, 시험관내 또는 생체내에서 발현된 가이드-대-패신저(G:P) 가닥의 비는 1:99, 5:95, 10:90, 15:85, 20:80, 25:75, 30:70, 35:65, 40:60, 45:55, 50:50, 55:45, 60:40, 65:35, 70:30, 75:25, 80:20, 85:15, 90:10, 95:5, 또는 99:1이다. 비제한적인 예로서, 시험관내에서 가이드-대-패신저 가닥의 비는 80:20이다. 비제한적인 예로서, 생체내에서 가이드-대-패신저 가닥의 비는 80:20이다.
하나의 구현예에서, dsRNA를 암호화하는 벡터 게놈의 완전성은 작제물 전체 길이의 적어도 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 99% 초과이다.
siRNA
변형
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는, 전구체 또는 DNA로서 전달되지 않을 때, 화학적으로 변형되어 예컨대 비제한적으로 생체내에서 siRNA의 안정성을 증가시키는 것과 같이 RNA 분자의 일부 특징을 조절할 수 있다. 화학적으로 변형된 siRNA 분자는 인간의 치료 적용에 사용될 수 있으며, siRNA 분자의 RNAi 활성을 손상시키지 않으면서 개선된다. 비제한적인 예로서, siRNA 분자는 센스 가닥 및 안티센스 가닥 둘 다의 3' 및 5' 말단 둘 다에서 변형된다.
일부 양태에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 하나 이상의 변형된 뉴클레오티드, 예컨대 비제한적으로 당 변형된 뉴클레오티드, 핵염기 변형 및/또는 백본 변형을 함유할 수 있다. 일부 양태에서, siRNA 분자는 조합된 변형, 예컨대 조합된 핵염기 및 백본 변형을 함유할 수 있다.
하나의 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 당-변형된 뉴클레오티드일 수 있다. 당 변형된 뉴클레오티드는, 비제한적으로 2'-플루오로, 2'-아미노 및 2'-티오 변형된 리보뉴클레오티드, 예컨대 2'-플루오로 변형된 리보뉴클레오티드를 포함한다. 변형된 뉴클레오티드는 당 모이어티 뿐만 아니라, 리보실이 아닌 당 또는 이의 유사체를 갖는 뉴클레오티드상에서 변형될 수 있다. 예컨대, 당 모이어티는 만노스, 아라비노스, 글루코피라노스, 갈락토피라노스, 4'-티오리보스 및 다른 당, 헤테로사이클, 또는 카보사이클일 수 있거나 이에 기초할 수 있다.
하나의 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 핵염기-변형된 뉴클레오티드일 수 있다.
하나의 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 백본-변형된 뉴클레오티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스는 백본에 다른 변형을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 사용된 정상적인 "백본"은 DNA 또는 RNA 분자에서 반복적으로 교대하는 당-인산염 서열을 지칭한다. 디옥시리보스/리보스 당은 3'-히드록실 및 5'-히드록실 기 둘 다에서 "포스포디에스테르" 결합/링커(PO 연결)로도 공지된 에스테르 연결에서 인산염 기에 결합된다. PO 백본은 "포스포로티오에이트 백본"(PS 연결)으로 변형될 수 있다. 일부 경우에서, 천연 포스포디에스테르 결합은 아미드 결합으로 대체될 수 있지만, 2개의 당 단위 사이의 4개의 원자는 유지된다. 이러한 아미드 변형은 올리고뉴클레오티드의 고상 합성을 촉진시킬 수 있고, siRNA 보체로 형성된 듀플렉스의 열역학적 안정성을 증가시킬 수 있다. 예컨대, Mesmaeker et al., Pure & Appl. Chem., 1997, 3, 437-440(이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)을 참조한다.
변형된 염기는 하나 이상의 원자 또는 기의 대체 또는 부가에 의해 변형된 뉴클레오티드 염기, 예컨대 아데닌, 구아닌, 시토신, 티민, 우라실, 잔틴, 이노신 및 케오신을 지칭한다. 핵염기 모이어티에서의 변형의 일부 예는, 비제한적으로 알킬화, 할로겐화, 티올화, 아미노화, 아미드화 또는 아세틸화된 염기를 개별적으로 또는 조합하여 포함한다. 보다 특정한 예는, 예컨대 5-프로피닐우리딘, 5-프로피닐시티딘, 6-메틸아데닌, 6-메틸구아닌, N,N,-디메틸아데닌, 2-프로필아데닌, 2-프로필구아닌, 2-아미노아데닌, 1-메틸이노신, 3-메틸우리딘, 5-메틸시티딘, 5-메틸우리딘 및 5 위치에 변형을 갖는 다른 뉴클레오티드, 5-(2-아미노)프로필 우리딘, 5-할로시티딘, 5-할로우리딘, 4-아세틸시티딘, 1-메틸아데노신, 2-메틸아데노신, 3-메틸시티딘, 6-메틸우리딘, 2-메틸구아노신, 7-메틸구아노신, 2,2-디메틸구아노신, 5-메틸아미노에틸우리딘, 5-메틸옥시우리딘, 데아자뉴클레오티드 예컨대 7-데아자-아데노신, 6-아조우리딘, 6-아조시티딘, 6-아조티미딘, 5-메틸-2-티오우리딘, 다른 티오 염기 예컨대 2-티오우리딘 및 4-티오우리딘 및 2-티오시티딘, 디히드로우리딘, 슈도우리딘, 케오신, 아케오신, 나프틸 및 치환된 나프틸 기, 임의의 O- 및 N-알킬화된 퓨린 및 피리미딘 예컨대 N6-메틸아데노신, 5-메틸카보닐메틸우리딘, 우리딘 5-옥시아세트산, 피리딘-4-온, 피리딘-2-온, 페닐 및 변형된 페닐 기 예컨대 아미노페놀 또는 2,4,6-트리메톡시 벤젠, G-클램프 뉴클레오티드로 작용하는 변형된 시토신, 8-치환된 시티딘 및 구아닌, 5-치환된 우라실 및 티민, 아자피리미딘, 카복시히드록시알킬 뉴클레오티드, 카복시알킬아미노알킬 뉴클레오티드 및 알킬카보닐알킬화된 뉴클레오티드를 포함한다.
하나의 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 단지 센스 가닥 상에 있을 수 있다.
또 다른 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 단지 안티센스 가닥 상에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 변형된 뉴클레오티드는 센스 및 안티센스 가닥 둘 다에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 화학적으로 변형된 뉴클레오티드는 SOD1 mRNA 서열과 같은 표적 mRNA 서열과 쌍을 이루는 안티센스 가닥의 능력에 영향을 미치지 않는다.
벡터
일부 구현예에서, 본원에 기술된 siRNA 분자는 플라스미드 또는 바이러스 벡터와 같은 벡터에 의해 암호화될 수 있다. 하나의 구현예에서, siRNA 분자는 바이러스 벡터에 의해 암호화된다. 바이러스 벡터는, 비제한적으로 헤르페스바이러스(HSV) 벡터, 레트로바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 아데노-관련 바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 등일 수 있다. 일부 특정 구현예에서, 바이러스 벡터는 AAV 벡터이다.
레트로바이러스 벡터
일부 구현예에서, SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스는 레트로바이러스 벡터에 의해 암호화된다(예컨대, 미국특허 제5,399,346호; 제5,124,263호; 제4,650,764호 및 제4,980,289호 참조; 이의 각 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
아데노바이러스벡터
아데노바이러스는, 생체내에서 핵산을 다양한 세포 유형으로 효율적으로 전달하도록 변형될 수 있는 진핵생물 DNA 바이러스이며, 유전자를 신경 세포에 표적화하는 것을 포함하여, 유전자 치료요법 프로토콜에서 광범위하게 사용되어 왔다. 다양한 복제 결함 아데노바이러스 및 최소 아데노바이러스 벡터가 핵산 치료제로 기술되어 왔다(예컨대, PCT 공개특허 제WO199426914호, 제WO 199502697호, 제WO199428152호, 제WO199412649호, 제WO199502697호 및 제WO199622378호 참조; 각 내용의 전체가 참조로서 본원에 포함됨). 이러한 아데노바이러스 벡터는 또한 본 발명의 siRNA 분자를 세포로 전달하는데에 사용될 수 있다.
아데노
-관련 바이러스(
AAV
) 벡터
아데노-관련 바이러스(AAV)는 의존적인 파보바이러스(다른 파보바이러스와 마찬가지로)이고, 약 5000개 길이의 뉴클레오티드인 게놈을 갖는 단일 가닥의 비-외피 DNA 바이러스이고, 복제(Rep) 담당 단백질 및 캡시드(Cap)의 구조적 단백질을 암호화하는 2개의 개방형 해독 틀을 함유한다. 개방형 해독 틀은 바이러스 게놈의 복제 기점으로 작용하는 2개의 역위 말단 반복(ITR) 서열에 의해 측부에 위치한다(flanked). 추가로, AAV 게놈은 포장(packaging) 서열을 함유하여 바이러스 게놈을 AAV 캡시드 내로 포장할 수 있다. AAV 벡터는 감염된 세포에서 생산적인 감염을 겪기 위해 보조-헬퍼(co-helper)(예컨대, 아데노바이러스)를 필요로 한다. 이와 같은 헬퍼 기능의 부재시, AAV 비리온은 본질적으로 숙주 세포에 들어가서 세포의 게놈에 통합된다.
AAV 벡터는 일부 독특한 특징에 기인하여 siRNA 전달에 대해 조사되어 왔다. 비제한적인 특징의 예는, (i) 분열 및 비-분열 세포 둘 다를 감염시키는 능력; (ii) 인간 세포를 비롯하여 감염성 대한 광범위한 숙주 범위; (iii) 야생형 AAV는 임의의 질환과 관련되어 있지 않고, 감염된 세포에서 복제되지 않는 것으로 나타남; (iv) 벡터에 대한 세포-매개된 면역 반응 결여; 및 (v) 숙주 염색체에서의 비-통합적인 성질로 인해 장기 발현에 대한 가능성 감소를 포함한다. 또한, AAV 벡터에 의한 감염은 세포 유전자 발현의 패턴 변화에 최소한의 영향을 미친다 (Stilwell and Samulski et al., Biotechniques, 2003, 34, 148).
전형적으로, siRNA 전달을 위한 AAV 벡터는 바이러스 게놈내에서 기능적인 Rep 및 Cap 단백질을 암호화하는 서열이 결여된 복제 결함인 재조합 바이러스 벡터일 수 있다. 일부 경우에서, 결함있는 AAV 벡터는 대부분 또는 모든 암호화 서열이 결여되어 있을 수 있으며, 본질적으로 단지 하나 또는 2개의 AAV ITR 서열 및 포장 서열만을 함유한다.
AAV 벡터는 또한 자기-상보성인 AAV 벡터 (scAAV)를 포함할 수 있다. scAAV 벡터는 함께 어닐링(annealing)되어 이중 가닥의 DNA를 형성하는 두 DNA 가닥을 함유한다. 제2가닥 합성을 생략함으로써, scAAV는 세포에서의 신속한 발현을 가능케 한다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 사용된 AAV 벡터는 scAAV이다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 사용된 AAV 벡터는 ssAAV이다.
AAV 벡터의 생산 및/또는 변형 방법이 위형(pseudotype) AAV 벡터와 같이 당업계에 공개되어 있다(PCT 공개특허 제WO200028004호; 제WO200123001호; 제WO2004112727호; 제WO 2005005610호 및 제WO 2005072364호; 이의 각 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터가, 비제한적으로 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV9.47, AAV9(hu14), AAV10, AAV11, AAV12, AAVrh8, AAVrh10, AAV-DJ8 및 AAV-DJ를 비롯하여 다양한 혈청형으로부터 제조 또는 유도될 수 있다. 일부 경우에서, AAV의 상이한 혈청형은 함께 또는 다른 유형의 바이러스와 혼합되어 키메라 AAV 벡터를 생산할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 포유류 세포 내로 도입될 수 있다.
AAV 벡터는 전달 효율을 향상시키기 위해 변형될 수 있다. 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는, 이와 같이 변형된 AAV 벡터는 효율적으로 포장될 수 있고, 고주파에서 최소의 독성으로 표적 세포를 성공적으로 감염시키는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 인간 혈청형 AAV 벡터일 수 있다. 이러한 인간 AAV 벡터는 임의의 공지된 혈청형, 예컨대 AAV1 내지 AAV11 중 임의의 하나의 혈청형으로부터 유도될 수 있다. 비제한적인 예로서, AAV 벡터는 AAV1-유도된 캡시드에 AAV1-유도된 게놈을 포함하는 벡터; AAV2-유도된 게놈에 AAV2-유도된 게놈을 포함하는 벡터; AAV4 유도된 캡시드에 AAV4-유도된 게놈을 포함하는 벡터; AAV6 유도된 캡시드에 AAV6-유도된 게놈을 포함하는 벡터 또는 AAV9 유도된 캡시드에 AAV9-유도된 게놈을 포함하는 벡터일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는, 2종 이상의 상이한 AAV 혈청형으로부터 유래한 서열 및/또는 구성요소를 함유하는 위형 혼성 또는 키메라 AAV 벡터일 수 있다. 위형 AAV 벡터는 하나의 AAV 혈청형으로부터 유도된 AAV 게놈 및 적어도 부분적으로 상이한 AAV 혈청형으로부터 유도된 캡시드 단백질을 포함하는 벡터일 수 있다. 비제한적인 예시로서, 이러한 위형 AAV 벡터는, AAV1-유도된 캡시드에 AAV2-유도된 게놈을 포함하는 벡터; 또는 AAV6-유도된 캡시드에 AAV2-유도된 게놈을 포함하는 벡터; 또는 AAV4-유도된 캡시드에 AAV2-유도된 게놈을 포함하는 벡터; 또는 AAV9-유도된 캡시드에 AAV2-유도된 게놈을 포함하는 벡터일 수 있다. 이와 같은 방식으로, 본 발명은 임의의 혼성형 또는 키메라 AAV 벡터를 고려한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 siRNA 분자를 중추신경계에 전달하기 위해 사용될 수 있다(미국특허 제6,180,613호의 전체 내용을 참고문헌으로서 본문에 포함).
일부 양태에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 비-바이러스 기원의 펩티드를 포함하여 변형된 캡시드를 추가로 포함할 수 있다. 다른 양태에서, AAV 벡터는 CNS 특이적인 키메라 캡시드를 함유하여 암호화된 siRNA 듀플렉스의 뇌 및 척수로의 전달을 용이하게 할 수 있다. 예컨대, 가변 영역(VR) 서열 및 구조를 확인하기 위해, CNS 향성(tropism)을 나타내는 AAV 변이체로부터 캡 뉴클레오티드 서열을 정렬을 작제할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 다시스트론성(polycistronic) 분자인 siRNA 분자를 암호화할 수 있다. siRNA 분자는 siRNA 분자 영역 사이에 하나 이상의 링커(linker)를 추가로 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는, 비제한적으로 SV40 인트론을 갖는 CMV, U6, CBA 또는 CBA 프로모터와 같이 발현 벡터에서 프로모터의 하류에 위치할 수 있다. 추가로, 암호화된 siRNA 분자는 또한 발현 벡터에서 아데닐산중합반응(polyadenylation) 서열의 상류에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30 초과의 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 1 내지 5, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25, 1 내지 30, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 5 내지 30, 10 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 25, 10 내지 30, 15 내지 20, 15 내지 25, 15 내지 30, 20 내지 25, 20 내지 30 또는 25 내지 30 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과의 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 처음 1 내지 5%, 1 내지 10%, 1 내지 15%, 1 내지 20%, 1 내지 25%, 5 내지 10%, 5 내지 15%, 5 내지 20%, 5 내지 25%, 10 내지 15%, 10 내지 20%, 10 내지 25%, 15 내지 20%, 15 내지 25%, 또는 20 내지 25% 이내에 위치할 수 있다.
하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 아데닐산중합반응 서열의 상류에 위치할 수 있다. 추가로, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터, 예컨대 비제한적으로 SV40 인트론을 갖는 CMV, U6, CBA 또는 CBA 프로모터와 같은 프로모터의 하류에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30 초과의 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 1 내지 5, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25, 1 내지 30, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 5 내지 30, 10 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 25, 10 내지 30, 15 내지 20, 15 내지 25, 15 내지 30, 20 내지 25, 20 내지 30 또는 25 내지 30 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과의 뉴클레오티드 이내에 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 프로모터의 하류 및/또는 아데닐산중합반응 서열의 상류로부터 처음 1 내지 5%, 1 내지 10%, 1 내지 15%, 1 내지 20%, 1 내지 25%, 5 내지 10%, 5 내지 15%, 5 내지 20%, 5 내지 25%, 10 내지 15%, 10 내지 20%, 10 내지 25%, 15 내지 20%, 15 내지 25%, 또는 20 내지 25% 이내에 위치할 수 있다.
하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 scAAV에 위치할 수 있다.
하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 ssAAV에 위치할 수 있다.
하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립(filp) ITR의 5' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 3' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플랍(flop) ITR의 5' 말단 인근에 위치할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플랍 ITR의 3' 말단 인근에 위치할 수 있다. 하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 5' 말단과 플랍 ITR의 3' 말단 사이에 위치할 수 있다. 하나의 구현예에서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 플립 ITR의 3' 말단과 플립 ITR의 5' 말단 사이(예컨대, 플립 ITR의 5' 말단과 플랍 ITR의 3' 말단 사이, 또는 플랍 ITR의 3' 말단과 플립 ITR의 5' 말단 사이의 중도)에 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 하류에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30 초과의 뉴클레오티드 이내로 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 상류에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 또는 30 초과의 뉴클레오티드 이내로 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 하류에 1 내지 5, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25, 1 내지 30, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 5 내지 30, 10 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 25, 10 내지 30, 15 내지 20, 15 내지 25, 15 내지 30, 20 내지 25, 20 내지 30 또는 25 내지 30 뉴클레오티드 이내로 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 상류에 1 내지 5, 1 내지 10, 1 내지 15, 1 내지 20, 1 내지 25, 1 내지 30, 5 내지 10, 5 내지 15, 5 내지 20, 5 내지 25, 5 내지 30, 10 내지 15, 10 내지 20, 10 내지 25, 10 내지 30, 15 내지 20, 15 내지 25, 15 내지 30, 20 내지 25, 20 내지 30 또는 25 내지 30 이내로 위치할 수 있다. 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 상류에 처음 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 25% 초과로 위치할 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 암호화된 siRNA 분자는 발현 벡터에서 ITR(예컨대, 플립 또는 플랍 ITR)의 5' 또는 3' 말단으로부터 하류에 처음 1 내지 5%, 1 내지 10%, 1 내지 15%, 1 내지 20%, 1 내지 25%, 5 내지 10%, 5 내지 15%, 5 내지 20%, 5 내지 25%, 10 내지 15%, 10 내지 20%, 10 내지 25%, 15 내지 20%, 15 내지 25%, 또는 20 내지 25%로 위치할 수 있다.
발현 벡터
하나의 구현예에서, 발현 벡터(예컨대, AAV 벡터)는 본원에 기술된 하나 이상의 발현 벡터를 포함하는 하나 이상의 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있따.
하나의 구현예에서, 발현 벡터는, 5'에서 3'으로 지칭되는 ITR에서 ITR까지, ITR, 프로모터, 인트론, 조절성 폴리뉴클레오티드, 폴리A 서열 및 ITR을 포함할 수 있다.
게놈 크기
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은 단일 가닥 또는 이중 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 벡터 게놈의 크기는 작거나 중간이거나 크거나 최대 크기일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은 작은 단일 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 작은 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 2.7 내지 3.5 kb, 예컨대 크기가 약 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4 및 3.5 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 작은 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 3.2 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은 작은 이중 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 작은 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 1.3 내지 1.7 kb, 예컨대 크기가 약 1.3, 1.4, 1.5, 1.6 및 1.7 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 작은 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 1.6 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 siRNA 또는 dsRNA를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은, 중간 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 중간 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 3.6 내지 4.3 kb, 예컨대 크기가 약 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2 및 4.3 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 중간 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 4.0 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은, 중간 크기의 이중 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 중간 크기의 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 1.8 내지 2.1 kb, 예컨대 크기가 약 1.8, 1.9, 2.0, 및 2.1 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 중간 크기의 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 2.0 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은, 큰 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 큰 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 4.4 내지 6.0 kb, 예컨대 크기가 약 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9 및 6.0 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 큰 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 4.7 kb일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 큰 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 4.8 kb일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 큰 크기의 단일 가닥의 벡터 게놈은 크기가 6.0 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터 게놈은, 큰 크기의 이중 가닥의 벡터 게놈일 수 있다. 큰 크기의 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 2.2 내지 3.0 kb, 예컨대 크기가 약 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 및 3.0 kb일 수 있다. 비제한적인 예로서, 크기가 큰 이중 가닥의 벡터 게놈은 크기가 약 2.4 kb일 수 있다. 추가로, 벡터 게놈은 프로모터 및 폴리A 테일을 포함할 수 있다.
프로모터
당업자는, 표적 세포가 비제한적으로 종 특이적, 유도성, 조직-특이적 또는 세포 주기-특이적인 프로모터를 포함하는 특이적 프로모터를 필요로 할 수 있음을 알 수 있다 (Parr et al., Nat. Med.3:1145-9 (1997); 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
하나의 구현예에서, 프로모터는 조절성 폴리뉴클레오티드의 발현을 유도하는데 충분하다고 여겨지는 프로모터이다.
하나의 구현예에서, 프로모터는 표적화되는 세포에 대해 향성을 갖는 프로모터이다.
하나의 구현예에서, 프로모터는 표적화된 조직, 예컨대 비제한적으로 신경계 조직에서 일정 기간 동안 탑재물, 예컨대 조절성 폴리뉴클레오티드, 예컨대 siRNA 또는 dsRNA의 발현을 제공하는 약한 프로모터이다. 발현은 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 2주, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 3주, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 31일, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월, 1년, 13개월, 14개월, 15개월, 16개월, 17개월, 18개월, 19개월, 20개월, 21개월, 22개월, 23개월, 2년, 3년, 4년, 5년, 6년, 7년, 8년, 9년, 10년 또는 10년 초과의 기간일 수 있다. 발현은 1 내지 5 시간, 1 내지 12 시간, 1 내지 2 일, 1 내지 5 일, 1 내지 2 주, 1 내지 3 주, 1 내지 4 주, 1 내지 2 개월, 1 내지 4 개월, 1 내지 6 개월, 2 내지 6 개월, 3 내지 6 개월, 3 내지 9 개월, 4 내지 8 개월, 6 내지 12 개월, 1 내지 2 년, 1 내지 5 년, 2 내지 5 년, 3 내지 6 년, 3 내지 8 년, 4 내지 8 년 또는 5 내지 10 년 동안일 수 있다. 비제한적인 예로서, 프로모터는, 신경계 조직에서 탑재물의 지속적인 발현을 위한 약한 프로모터이다.
하나의 구현예에서, 프로모터는 1 kb 미만의 프로모터일 수 있다. 프로모터는 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 또는 800 초과의 길이를 가질 수 있다. 프로모터는 200 내지 300, 200 내지 400, 200 내지 500, 200 내지 600, 200 내지 700, 200 내지 800, 300 내지 400, 300 내지 500, 300 내지 600, 300 내지 700, 300 내지 800, 400 내지 500, 400 내지 600, 400 내지 700, 400 내지 800, 500 내지 600, 500 내지 700, 500 내지 800, 600 내지 700, 600 내지 800 또는 700 내지 800의 길이를 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 프로모터는 2개 이상의 구성요소, 예컨대 비제한적으로 CMV 및 CBA의 조합일 수 있다. 각 구성요소는 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 710, 720, 730, 740, 750, 760, 770, 780, 790, 800 또는 800 초과의 길이를 가질 수 있다. 각 구성요소는 200 내지 300, 200 내지 400, 200 내지 500, 200 내지 600, 200 내지 700, 200 내지 800, 300 내지 400, 300 내지 500, 300 내지 600, 300 내지 700, 300 내지 800, 400 내지 500, 400 내지 600, 400 내지 700, 400 내지 800, 500 내지 600, 500 내지 700, 500 내지 800, 600 내지 700, 600 내지 800 또는 700 내지 800의 길이를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, 프로모터는 382 뉴클레오티드의 CMV-인핸서 서열 및 260 뉴클레오티드의 CBA-프로모터 서열의 조합이다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 하나 이상의 요소를 포함한다(예컨대, Powell et al., Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015 참조; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨). 전이유전자의 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 요소의 비제한적인 예는, 프로모터, 내인성 miRNA, 전사 후 조절성 요소(PRE), 아데닐산중합반응(폴리 A) 신호 서열 및 상류 인핸서(USE), CMV 인핸서 및 인트론을 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 하나 이상의 요소(예컨대, Powell et al., Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨) 예컨대, 프로모터를 포함한다.
대부분의 조직에서 발현을 촉진하기 위한 프로모터는, 비제한적으로 인간 신장 인자 1α-서브유닛(EF1α), 전초기 사이토메갈로바이러스(CMV), 닭 β-액틴(CBA) 및 이의 유도체 CAG, β 글루쿠로니다제(GUSB), 또는 유비퀴틴 C(UBC)를 포함한다. 조직-특이적인 발현 요소는, 비제한적으로, 발현을 뉴런, 성상세포 또는 희돌기교세포로 제한하기 위해 사용될 수 있는 신경계 프로모터와 같이 발현을 특정 세포 유형으로 제한하기 위해 사용될 수 있다. 뉴런에 대한 조직-특이적인 발현 요소의 비제한적인 예는, 뉴런-특이적 에놀라제(NSE), 혈소판-유도된 성장 인자(PDGF), 혈소판-유도된 성장 인자 B-쇄(PDGF-β), 시냅신(Syn), 메틸-CpG 결합 단백질 2(MeCP2), CaMKII, mGluR2, NFL, NFH, nβ2, PPE, Enk 및 EAAT2 프로모터를 포함한다. 성상세포에 대한 조직-특이적인 발현 요소의 비제한적인 예는, 신경교 섬유질 산성 단백질(GFAP) 및 EAAT2 프로모터를 포함한다. 희돌기교세포에 대한 조직-특이적인 발현 요소의 비제한적인 예는, 수초 염기성 단백질(MBP) 프로모터를 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 유비퀴터스 프로모터를 포함한다. 유비퀴터스 프로모터의 비제한적인 예는, CMV, CBA(유도체 CAG, CBh 등 포함), EF-1α, PGK, UBC, GUSB(hGBp), 및 UCOE(HNRPA2B1-CBX3의 프로모터)를 포함한다. Yu 등(Molecular Pain 2011, 7:63; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)은, 랫트 DRG 세포 및 일차 DRG 세포에서 렌티바이러스 벡터를 사용하여 CAG, EFIα, PGK 및 UBC 프로모터 하에 eGFP의 발현을 평가하였고, UBC가 다른 3개의 프로모터에 비해 보다 약한 발현을 보였음을 발견하였고, 모든 프로모터에서 단지 10 내지 12%의 신경아교세포가 발현되었음을 발견하였다. Soderblom 등(E. Neuro 2015; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)은, CMV 및 UBC 프로모터를 가진 AAV8 및 운동 피질에서 주사 후 CMV 프로모터를 가진 AAV2에서의 eGFP의 발현을 평가하였다. UBC 또는 EFIα 프로모터를 함유하는 플라스미드의 비강내 투여는, CMV 프로모터에 의한 발현에 비해 보다 큰 지속적인 기도 발현을 나타냈다(예를 들면, Gill et al., Gene Therapy 2001, Vol. 8, 1539-1546; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨). Husain 등 (Gene Therapy 2009; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)은, hGUSB 프로모터, HSV-1LAT 프로모터 및 NSE 프로모터를 가진 HβH 작제물을 평가하였고, 마우스 뇌에서 HβH 작제물이 NSE에 비해 보다 약한 발현을 보였음을 발견하였다. Passini와 Wolfe(J. Virol. 2001, 12382-12392, 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)은, 신생 마우스에 뇌실내 주사 후 HβH 벡터의 장기 효과를 평가하였고, 1년 이상 동안 지속적으로 발현되었음을 발견하였다. CMV-lacZ, CMV-luc, EF, GFAP, hENK, nAChR, PPE, PPE + wpre, NSE(0.3 kb), NSE(1.8 kb) 및 NSE(1.8 kb + wpre)와 비교하여 NF-L 및 NF-H 프로모터가 사용되었을 때, 모든 뇌 영역에서의 낮은 발현이 Xu 등(Gene Therapy 2001, 8, 1323-1332; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)에 의해 발견되었다. Xu 등은 프로모터 활성이 내림차순으로 NSE(1.8 kb), EF, NSE(0.3 kb), GFAP, CMV, hENK, PPE, NFL 및 NFH임을 발견하였다. NFL은 650 뉴클레오티드 프로모터이고, NFH는 920 뉴클레오티드 프로모터이고, 둘 모두는 간에는 없지만 NFH는 감각 자기수용(proprioceptive) 뉴런, 뇌 및 척수에 풍부하고, NFH는 심장에 존재한다. Scn8a는 470 뉴클레오티드 프로모터이고 이는 DRG, 척수 및 뇌를 통해 발현되고, 해마 뉴런 및 소뇌 푸르키네 세포, 피질, 시상 및 시상하부에서 특히 높은 발현을 보인다(예를 들면, Drews et al. 2007 및 Raymond et al. 2004 참조; 이의 각각의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 UBC 프로모터를 포함한다. UBC 프로모터는 300 내지 350 뉴클레오티드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, UBC 프로모터는 332 뉴클레오티드이다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 GUSB 프로모터를 포함한다. GUSB 프로모터는 350 내지 400개의 뉴클레오티드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, GUSB 프로모터는 378개의 뉴클레오티드이다. 비제한적인 예로서, 작제물은 AAV-프로모터-CMV/글로빈 인트론-hFXN-RBG일 수 있으며, 이때, AAV는 자기-상보성일 수 있고, AAV는 DJ 혈청형일 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 NFL 프로모터를 포함한다. NFL 프로모터는 600 내지 700개의 뉴클레오티드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, NFL 프로모터는 650개의 뉴클레오티드이다. 비제한적인 예로서, 작제물은 AAV-프로모터-CMV/글로빈 인트론-hFXN-RBG일 수 있으며, 이때, AAV는 자기-상보성일 수 있고, AAV는 DJ 혈청형일 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 NFH 프로모터를 포함한다. NFH 프로모터는 900 내지 950개의 뉴클레오티드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, NFH 프로모터는 920개의 뉴클레오티드이다. 비제한적인 예로서, 작제물은 AAV-프로모터-CMV/글로빈 인트론-hFXN-RBG일 수 있으며, 이때, AAV는 자기-상보성일 수 있고, AAV는 DJ 혈청형일 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 scn8a 프로모터를 포함한다. scn8a 프로모터는 450 내지 500개의 뉴클레오티드 크기를 가질 수 있다. 비제한적인 예로서, scn8a 프로모터는 470개의 뉴클레오티드이다. 비제한적인 예로서, 작제물은 AAV-프로모터-CMV/글로빈 인트론-hFXN-RBG일 수 있으며, 이때, AAV는 자기-상보성일 수 있고, AAV는 DJ 혈청형일 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 FXN 프로모터를 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 PGK 프로모터를 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 CBA 프로모터를 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 CMV 프로모터를 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 간 또는 골격근 프로모터를 포함한다. 간 프로모터의 비제한적인 예는 hAAT 및 TBG를 포함한다. 골격근 프로모터의 비제한적인 예는 데스민(Desmin), MCK 및 C5-12를 포함한다.
하나의 구현예에서, AAV 벡터는 인핸서 요소, 프로모터 및/또는 5' UTR 인트론을 포함한다. 인핸서는 비제한적으로 CMV 인핸서일 수 있고, 프로모터는 비제한적으로 CMV, CBA, UBC, GUSB, NSE, 수냅신(Sunapsin), MeCP2, 및 GFAP 프로모터일 수 있고, 5' UTR/인트론은 비제한적으로 SV40, 및 CBA-MVM일 수 있다. 비제한적인 예로서, 조합되어 사용되는 인핸서, 프로모터 및/또는 인트론은: (1) CMV 인핸서, CMV 프로모터, SV40 5'UTR 인트론; (2) CMV 인핸서, CBA 프로모터, SV 40 5'UTR 인트론; (3) CMV 인핸서, CBA 프로모터, CBA-MVM 5'UTR 인트론; (4) UBC 프로모터; (5) GUSB 프로모터; (6) NSE 프로모터; (7) 시냅신 프로모터; (8) MeCP2 프로모터 및 (9) GFAP 프로모터일 수 있다.
하나의 구현예에서, AAV 벡터는 조작된 프로모터를 갖는다.
인트론
하나의 구현예에서, 벡터 게놈은 전이유전자 표적 특이성 및 발현을 향상시키기 위한 하나 이상의 요소(예로, Powell et al., Viral Expression Cassette Elements to Enhance Transgene Target Specificity and Expression in Gene Therapy, 2015 참조; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨), 예를 들면, 인트론을 포함한다. 인트론의 비제한적인 예는, MVM(67 내지 97 bp), F.IX 절단된(truncated) 인트론 1(300 bp), β-글로빈 SD/면역글로빈 중쇄 스플라이스 수용자(250 bp), 아데노바이러스 스플라이스 공여자/면역글로빈 스플라이스 수용자(500 bp), SV40 후기 스플라이스 공여자/스플라이스 수용자(19S/16S)(180 bp) 및 혼성 아데노바이러스 스플라이스 공여자/IgG 스플라이스 수용자(230 bp)를 포함한다.
하나의 구현예에서, 인트론은 100 내지 500개 길이의 뉴클레오티드일 수 있다. 인트론은 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490 또는 500개의 길이를 가질 수 있다. 프로모터는 80 내지 100, 80 내지 120, 80 내지 140, 80 내지 160, 80 내지 180, 80 내지 200, 80 내지 250, 80 내지 300, 80 내지 350, 80 내지 400, 80 내지 450, 80 내지 500, 200 내지 300, 200 내지 400, 200 내지 500, 300 내지 400, 300 내지 500, 또는 400 내지 500의 길이를 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, AAV 벡터 게놈은 프로모터, 예컨대 비제한적으로 CMV 또는 U6을 포함할 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV에 대한 프로모터는 CMV 프로모터이다. 또 다른 비제한적인 예로서, 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 AAV에 대한 프로모터는 U6 프로모터이다.
하나의 구현예에서, AAV 벡터는 CMV 및 U6 프로모터를 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, AAV 벡터는 CBA 프로모터를 포함할 수 있다.
세포에 도입- 합성
dsRNA
siRNA 분자(예컨대, siRNA 듀플렉스 및 dsRNA)의 화학적 및 생물학적 안정성을 확보하기 위해, siRNA 분자를 표적 세포 내에 전달하는 것이 중요하다. 일부 구현예에서, 세포는, 비제한적으로 포유류 기원 세포, 인간 기원 세포, 배아 줄기 세포, 유도 만능 줄기 세포, 신경 줄기 세포 및 신경 전구 세포를 포함할 수 있다.
siRNA를 비롯한 핵산은 정상적인 생리학적 조건하에 당-인산염 백본에서 순(net) 음전하를 띄고 있다. 세포에 들어가기 위해, siRNA 분자는 세포 막의 지질 이중층과 반드시 접촉해야 하며, 이의 머리 기(head group)도 또한 음전하를 띄고 있다.
siRNA 듀플렉스는 이를 세포막을 가로지를 수 있도록 하는 담체, 예컨대 siRNA의 세포 흡수를 촉진시키는 포장 입자와 복합체화될 수 있다. 포장 입자는, 비제한적으로 리포좀, 나노입자, 양이온 지질, 폴리에틸렌이민 유도체, 덴드리머(dendrimer), 탄소 나노튜브 및 탄소로 이루어진 나노입자와 덴드리머의 조합을 포함할 수 있다. 지질은 양이온 지질 및/또는 중성 지질일 수 있다. siRNA 분자와 양이온 담체 사이에 잘 확립된 친유성 복합체 외에, siRNA 분자는 소수성 모이어티, 예컨대 콜레스테롤과 접합될 수 있다(예컨대, 미국공개특허 제20110110937호; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨). 이러한 전달 방법은 siRNA 분자의 시험관내 세포 흡수 및 생체내 약리학적 특성을 향상시킬 잠재력을 가지고 있다. 본 발명의 siRNA 분자는 또한 특정 양이온 세포-투과 펩티드(CPP), 예컨대 MPG, 트랜스포탄(transportan) 또는 페네트라틴(penetratin)과 공유결합 또는 비공유결합으로 접합될 수 있다(예컨대 미국공개특허 제20110086425호; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
세포에 도입-
AAV
벡터
본 발명의 siRNA 분자(예컨대, siRNA 듀플렉스)는 임의의 다양한 접근법, 예컨대 비제한적으로 바이러스 벡터(예컨대, AAV 벡터)를 사용하여 세포 내로 도입될 수 있다. 이러한 바이러스 벡터는 형질감염에 대해 용이하게 조작되지 않는 세포 내로 siRNA 분자의 도입을 촉진하도록 조작되고 최적화된다. 또한, 일부 합성 바이러스 벡터는 shRNA를 세포 게놈에 통합시킬 수 있는 능력을 가지고 있으며, 이에 따라 안정한 siRNA 발현 및 표적 유전자의 장기 넉다운을 유도한다. 이러한 방식으로, 바이러스 벡터는 야생형 바이러스에서 발견되는 해로운 복제 및/또는 통합 특징이 결여된 채 특이적 전달을 위한 비히클로서 조작된다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자는, 세포를 친유성 담체 및 벡터, 예컨대 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터를 포함하는 조성물과 접촉시킴으로써 도입된다. 다른 구현예에서, siRNA 분자는, 세포를 벡터, 예컨대 세포에서 전사될 때 siRNA 분자를 생산할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터로 형질감염 또는 감염시킴으로써 세포 내에 도입된다. 일부 구현예에서, siRNA 분자는, 세포를 벡터, 예컨대 세포에서 전사될 때 siRNA 분자를 생산할 수 있는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터에 주입함으로써 세포에 도입될 수 있다.
일부 구현예에서, 형질감염 전에, 벡터, 예컨대 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 AAV 벡터는 세포 내로 형질감염시킬 수 있다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 전기천공법에 의해 세포 내로 전달될 수 있다(예컨대, 미국공개특허 제20050014264호; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
본원에 기술된 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는, 미국공개특허 제20120264807호(이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)에 기술된 바와 같은 광화학 내재화(photochemical internalization)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 기술된 제형은 본원에 기술된 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 함유할 수 있다. 하나의 구현예에서, siRNA 분자는 하나 이상의 표적 부위에서 SOD1 유전자를 표적화할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 제형은 다수의 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 포함하며, 각 벡터는 상이한 표적 부위에서 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함한다. SOD1은 2, 3, 4, 5 또는 5개 초과 부위에서 표적화될 수 있다.
하나의 구현예에서, 임의의 관련 종, 예컨대 비제한적으로 인간, 개, 마우스, 랫트 또는 원숭이로부터의 벡터, 예컨대 AAV 벡터가 세포 내로 도입될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 치료될 질환과 관련된 세포 내로 도입될 수 있다. 비제한적인 예로서, 질환은 ALS이고, 표적 세포는 운동 뉴런 및 성상세포이다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 표적 서열의 높은 수준의 내인성 발현을 갖는 세포 내로 도입될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 표적 서열의 낮은 수준의 내인성 발현을 갖는 세포 내로 도입될 수 있다.
하나의 구현예에서, 세포는 높은 효율의 AAV 형질도입을 갖는 세포일 수 있다.
약제학적 조성물 및 제형
약제학적 조성물(siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터) 외에, 인간에 투여하기에 적절한 약제학적 조성물이 본원에서 제공되며, 이러한 조성물은 일반적으로 임의의 다른 동물, 예컨대, 비-인간 동물, 예컨대 비-인간 포유류에 투여하기에 적절하다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 조성물을 다양한 동물에 투여하기에 적절하도록 하기 위해 인간에게 투여하기에 적절한 약제학적 조성물의 변형이 잘 알려져 있으며, 통상의 숙련된 수의학 약리학자는 단지 통상적인, 임의의 실험으로 이러한 변형을 설계 및/또는 수행할 수 있다. 약제학적 조성물의 투여가 고려되는 대상은, 비제한적으로 인간 및/또는 다른 영장류; 상업적으로 관련있는 포유류, 예컨대 소, 돼지, 말, 양, 고양이, 개, 마우스, 및/또는 랫트를 포함하는 포유류; 및/또는 상업적으로 관련있는 조류, 예컨대 가금, 닭, 오리, 거위 및/또는 칠면조를 포함하는 조류를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물은 인간, 인간 환자 또는 대상에 투여된다. 본 발명의 목적을 위해, 어구 "활성 성분"은 일반적으로 합성 siRNA 듀플렉스, siRNA 듀플렉스를 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터 또는 본원에 기술된 바와 같이 벡터에 의해 전달되는 siRNA 분자를 지칭한다.
본원에 기술된 약제학적 조성물의 제형은 임의의 공지된 또는 후술의 약리학 분야에서 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법은, 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 결합시키는 단계, 및 이어서 필요한 및/또는 바람직한 경우, 제품을 목적하는 단일- 또는 다중-용량 단위로 분할, 성형 및/또는 포장하는 것을 포함한다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물중의 활성 성분, 약제학적으로 허용되는 부형제, 및/또는 임의의 추가 성분의 상대적인 양은, 치료되는 대상의 개체, 크기 및/또는 상태, 및 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는, (1) 안전성 증가; (2) 세포 형질감염 또는 형질도입 증가; (3) 지속적 또는 지연된 방출 허용; (4) 생체분포 변경(예컨대, 바이러스 벡터를 특정 조직 또는 세포 유형, 예컨대 뇌 및 운동 뉴런으로 표적화)을 위해 하나 이상의 부형제를 사용하여 제형화될 수 있다.
본 발명의 제형은 제한 없이 식염수, 리피도이드, 리포좀, 지질 나노입자, 중합체, 리포플렉스, 코어-셀 나노입자, 펩티드, 단백질, 바이러스 벡터로 형질감염된 세포(예컨대, 대상으로의 이식하기 위한), 나노입자 모방체 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. 추가로, 본 발명의 바이러스 입자는 자기-조립된 핵산 나노입자를 사용하여 제형화될 수 있다.
본원에 기술된 약제학적 조성물의 제형은 임의의 공지된 또는 후술의 약리학 분야에서 개발된 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 일반적으로, 이러한 제조 방법은 활성 성분을 부형제 및/또는 하나 이상의 다른 보조 성분과 결합시키는 단계를 포함한다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물은 단일 단위 용량 및/또는 다수의 단일 단위 용량으로서 대량으로 제조, 포장 및/또는 판매될 수 있다. 본원에 사용된 "단위 용량"은 소정량의 활성 성분을 포함하는 약제학적 조성물의 개별적인 양을 지칭한다. 활성 성분의 양은 일반적으로 대상에 투여될 활성 성분의 용량과 동일하고, 이는 이러한 용량의 편리한 분획, 예컨대 이러한 용량의 1/2 또는 1/3이다.
본 발명에 따른 약제학적 조성물중의 활성 성분, 약제학적으로 허용되는 부형제 및/또는 임의의 추가 성분의 상대적인 양은, 치료되는 대상의 개체, 크기 및/또는 상태, 및 추가로 조성물이 투여되는 경로에 따라 달라질 수 있다. 예컨대, 조성물은 0.1% 내지 99% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다. 예컨대, 조성물은 0.1% 내지 100%, 예컨대 0.5 내지 50%, 1 내지 30%, 5 내지 80%, 적어도 80% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상, 99% 이상, 또는 100% 순수할 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 인간 용도 및 수의학적 용도로 승인된다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 식품 의약국에 의해 승인될 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 약제학적 등급인 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 부형제는 미국 약전(USP), 유럽 약전(EP), 영국 약전, 및/또는 국제 약전의 표준을 만족할 수 있다.
본원에 사용된 부형제는, 원하는 특정 투약형(dosage form)에 적절한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 희석제 또는 다른 액상 비히클, 분산제 또는 현탁 보조제, 계면활성제, 등장제, 농후제 또는 유화제, 보존제 등을 비제한적으로 포함한다. 약제학적 조성물을 제형화하기 위한 다양한 부형제 및 조성물의 제조 기법이 당업계에 공지되어 있다(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, A. R. Gennaro, Lippincott, Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 2006 참조; 이의 전체가 참조로서 본원에 포함됨). 예컨대, 임의의 원하지 않는 생물학적 효과를 생성시키거나 다른 방식으로 약제학적 조성물의 임의의 다른 구성요소(들)와 유해한 방식으로 상호작용함으로써, 임의의 통상적인 부형제 매질이 물질 또는 이의 유도체와 배합될 수 없는 한을 제외하고, 통상적인 부형 매질의 사용이 본 발명의 범위 내에서 고려될 수 있다.
예시적인 희석제는, 비제한적으로 칼슘 카보네이트, 소듐 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 디칼슘 포스페이트, 칼슘 설페이트, 칼슘 하이드로겐 포스페이트, 소듐 포스페이트, 락토스, 슈크로스, 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스, 카올린, 만니톨, 솔비톨, 이노시톨, 소듐 클로라이드, 건조 전분, 옥수수 전분, 분말 당 등 및/또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 제형은 하나 이상의 불활성 성분을 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "불활성 성분"은 제형에 포함된 하나 이상의 불활성제를 지칭한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 제형에 사용될 수 있는 불활성 성분 전부, 또는 일부는 미국 식품의약국(FDA)에 의해 승인될 수 있다.
본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 벡터 제형은 양이온 또는 음이온을 포함할 수 있다. 하나의 구현예에서, 제형은 금속 양이온, 예컨대 비제한적으로 Zn2+, Ca2+, Cu2+, Mg+ 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에 사용된 "약제학적으로 허용되는 염"은 개시된 화합물의 유도체를 지칭하며, 이때, 모(parent) 화합물은 기존의 산 또는 염기 모이어티를 이의 염 형태로 전환시킴으로써(예컨대, 유리 염기 기를 적절한 유기 산과 반응시킴으로써) 변형된다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는, 비제한적으로, 아민과 같은 염기성 잔기의 무기 또는 유기산 염; 카복실산과 같은 산성 잔기의 알칼리 또는 유기 염 등을 포함한다. 대표적인 산 부가 염은 아세테이트, 아세트산, 아디페이트, 알기네이트, 아스코르베이트 아스파테이트, 벤젠설포네이트, 벤젠 설폰산, 벤조에이트, 비스설페이트, 보레이트, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포설포네이트, 시트레이트, 사이클로펜탄프로피오네이트, 디글루코네이트, 도데실설페이트, 에탄설포네이트, 푸마레이트, 글루코헵토네이트, 글리세로포스페이트, 헤미설페이트, 헵토네이트, 헥사노에이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드로요다이드, 2-하이드록시-에탄설포네이트, 락토비오네이트, 락테이트, 라우레이트, 라우릴 설페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메탄설포네이트, 2-나프탈렌설포네이트, 니코티네이트, 니트레이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 펙티네이트, 퍼설페이트, 3-페닐프로피오네이트, 포스페이트, 피크레이트, 피발레이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 타르트레이트, 티오시아네이트, 톨루엔설포네이트, 운데카노에이트, 및 발레르에이트 염 등을 포함한다. 대표적인 알칼리 또는 알칼리 토금속 염은, 소듐, 리튬, 포타슘, 칼슘, 마그네슘 등 및 비독성 암모늄, 4급 암모늄 및 아민 양이온, 비제한적으로 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 디메틸아민, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 에틸아민 등을 포함하여 아민 양이온을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은, 예컨대 비독성 무기 또는 유기산으로부터 형성된 모 화합물의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 본 발명의 약제학적으로 허용되는 염은, 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이러한 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매 중 또는 이 둘의 혼합물 중의 화학량론적 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있고; 일반적으로 비수성 매질, 예컨대 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴이 바람직하다. 적절한 염의 목록이 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418, Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Wiley-VCH, 2008, 및 Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66, 1-19 (1977) (각 내용의 전체가 참조로서 본원에 포함됨) 에서 확인된다.
본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는 용매화물"은 적절한 용매의 분자가 결정형 격자에 혼입되어 있는 본 발명의 화합물을 의미한다. 적절한 용매는 투여된 용량에서 생리학적으로 허용된다. 예컨대, 용매화물은, 유기 용매, 물 또는 이들의 혼합물을 포함하는 용액으로부터 결정화, 재결정화 또는 침전에 의해 제조될 수 있다. 적절한 용매의 예는 에탄올, 물 (예컨대, 일-, 이- 및 삼-수화물), N-메틸피롤리돈(NMP), 디메틸 설폭사이드(DMSO), N,N'-디메틸포름아미드(DMF), N,N'-디메틸아세트미드(DMAC), 1,3-디메틸-2-이미다졸리디논(DMEU), 1,3-디메틸-3,4,5,6-테트라하이드로-2-(1H)-피리미디논(DMPU), 아세토니트릴(ACN), 프로필렌 글리콜, 에틸 아세테이트, 벤질 알콜, 2-피롤리돈, 벤질 벤조에이트 등이다. 물이 용매인 경우, 용매화물은 "수화물"이라고 지칭된다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 CNS 전달을 위해 제형화될 수 있다. 뇌 혈액 장벽을 가로지르는 제제가 사용될 수 있다. 예컨대, siRNA 분자를 뇌 혈액 장벽 내피로 표적화할 수 있는 일부 세포 침투 펩티드가 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 듀플렉스를 제형화하기 위해 사용될 수 있다 (예컨대, Mathupala, Expert Opin Ther Pat., 2009, 19, 137-140; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
투여
본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터가 치료학적으로 유효한 결과를 가져오는 임의의 경로로 투여될 수 있다. 이는 비제한적으로, 장내(장관내), 위장내, 경막외(경질막내에), 경구(입을 통해), 경피, 경막주위, 뇌내(대뇌내), 뇌실내(대뇌뇌실내로), 상표피(피부에 도포), 진피내(피부 자체내) 피하(피부아래), 비강 투여 (코를 통해), 정맥내(정맥내로), 정맥내 대량주입, 정맥내 점적주입, 동맥내(동맥내에), 근육내(근육내에), 심장내(심장내에), 골내 주입(골수내로), 척수강내(척추관내로), 복강내(복막내 주입 또는 주사), 방광내 주입, 유리체내(안구를 통해), 해면내 주사(병적강내에), 강내(음경 기저부내), 질내투여, 자궁내, 양막외 투여, 경피(전신 분포를 위한 손상되지 않은 피부를 통한 확산), 점막관통(점막을 통한 확산), 질경유, 흡입제(코 흡입), 혀 밑, 입술밑, 관장, 눈점안액(결막위), 귀점적, 귓바퀴(이도 안에 또는 이를 경유하여), 협측(볼쪽을 향하여), 결막, 피부, 이(치아 또는 치아들), 전기삼투, 자궁경관내, 부비강내, 기관내, 체외, 혈액투석, 침습, 간질, 복강내, 양막내, 관절내, 난관내, 기관내, 활액낭내, 연골내(연골안에), 마미내(마미내에), 수조내(소뇌숨뇌수조 큰수조 내에), 각막내(각막내로), 치아관상(dental intracornal), 관내(관상동맥내로), 음경 해면체내(음경의 음경내 해면체의 확장가능한 공간내), 층판내(디스크내에), 관내(샘관내), 십이지장내(십이지장안에), 경막내(경막내 또는 경막밑), 표피내(표피에), 식도내(식도에), 위내(위안에), 잇몸내(잇몸안에), 회장내(소장의 말초부분내), 병변내(국부적인 병변내 또는 직접 도입), 내강내(관의 내강 안에), 림프액내(림프내로), 골수내 (골수강내로), 수막내 (수막내에), 안구내 (안구내로), 난소내 (난소내로), 심장주위내(심장주위내로), 흉막내(흉막내에), 전립선내(전립선내로), 폐내(폐 또는 기관지내), 부비강내(비강 또는 안와 주위 부비동내로), 척추내(척주내에), 활액내(관절강 활액내로), 힘줄내(힘줄내로), 고환내(고환안에), 수막공간내(임의의 수준의 뇌척수축에서의 뇌척수액내), 흉곽내(가슴우리 내에), 관내(기관의 세관내로), 종양내(종양내로), 고막내(청각매질내로), 혈관내(혈관 또는 혈관들내로), 심실내(심실내로), 이온삼투압(가용성 염 이온이 신체의 조직으로 이동하는 전류에 의해), 세척(개방상처 또는 체강을 세척하거나 씻어내서), 후두(후두에 직접), 비위관(nasogastric)(코를 통해 위장으로), 밀폐 드레싱 기술(해당 영역을 밀폐하는 드레싱에 의해 덮히는 국소 경로 투여), 안구(눈 외부에), 구강인두(입과 인두에 직접), 비경구, 경피, 관절주위, 경막주위, 신경주위, 치주, 직장, 호흡기(국소 또는 전신효과를 위해 경구 또는 비강흡입에 의한 호흡관 안에), 안구 후부(교뇌 뒤 또는 안구 뒤), 연조직, 지주막하, 결막하, 점막하, 국소, 경태반(태반을 통과 또는 통해), 기관지경(기관벽을 통해), 고실경유(고실을 통과 또는 통해), 요관(요관으로), 요도(요도로), 질, 미추차단, 진단학적 신경차단, 담즙관류, 심장관류, 광분반술(photophresis) 또는 척추를 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 벡터 또는 siRNA 분자가 중추신경계에 들어가서 운동 뉴런 내에 침투하는 것을 촉진시키는 방식으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 근육 주사에 의해 투여될 수 있다. Rizvanov 등은, 돌연변이체 인간 SOD1 mRNA를 표적화하는 siRNA 분자가 좌골 신경(sciatic nerve)에 의해 흡수되고, 운동 뉴런의 세포체(perikarya)에 역으로 수송되어, SOD1G93A 형질전환 ALS 마우스에서 돌연변이체 SOD1 mRNA를 저해한다는 것을 처음으로 밝혔다(Rizvanov AA et al., Exp. Brain Res., 2009, 195(1), 1-4; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨). 또 다른 연구는 또한, 돌연변이체 SOD1 유전자에 대한 작은 헤어핀 RNA(shRNA)를 발현하는 AAV의 근육 전달은, 근육에서 유의한 돌연변이체 SOD1 넉다운 및 운동 뉴런의 신경자극전달(innervating)을 유도함을 보여주었다(Towne C et al., Mol Ther., 2011; 19(2): 274-283; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스를 발현하는 AAV 벡터는 말초 주사 및/또는 비강내 전달에 의해 투여될 수 있다. siRNA 듀플렉스에 대한 AAV 벡터의 말초 투여가 중추신경계, 예컨대 운동 뉴런으로 수송될 수 있음이 당업계에 개시되었다(예컨대, 미국공개특허 제20100240739호; 및 제20100130594호; 각 내용의 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 포함하는 조성물은 두개내 전달에 의해 대상에 투여될 수 있다(예로, 미국특허 제8,119,611호 참조; 이의 전체 내용은 참조 문헌으로서 본원에 포함됨).
본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는, 액상 용액 또는 현택액으로서, 액상 용액 또는 액상 용액 중의 현탁액에 적절한 고체로서, 임의의 적절한 형태로 투여될 수 있다. siRNA 듀플렉스는 임의의 적절하고 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 제형화될 수 있다.
본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 "치료학적 유효"량, 즉, 질환과 관련된 하나 이상의 증상을 완화 및/또는 예방하거나, 대상의 병태의 개선을 제공하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS를 갖는 대상의 기능 및/또는 생존을 개선시키기 위해 치료학적 유효량으로 CNS에 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 척추강내로 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 척수 및/또는 뇌간에서 운동 뉴런 및 성상세포를 표적화하기 위해 siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA에 대한 치료학적 유효량으로 대상에 투여될 수 있다(예컨대 척추강내 투여를 통해 대상의 CNS로). 비제한적인 예로서, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 SOD1 단백질 또는 mRNA의 발현을 감소시킬 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, siRNA 듀플렉스 또는 dsRNA는 SOD1를 억제할 수 있고 SOD1 매개 독성을 감소시킬 수 있다. SOD1 단백질 및/또는 mRNA의 감소뿐만 아니라 SOD1 매개 독성의 감소는 염증의 증가가 거의 없이 달성될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 대상의 기능 저하를 늦추거나/늦추고(예컨대, 기능평가척도(ALSFRS)와 같이 공지된 평가 방법을 사용하여 결정됨), 대상(예컨대, 감소된 사망률 또는 인공호흡기 보조 필요)의 인공 호흡기 독립적 생존을 연장시키기 위해 치료학적 유효량으로 대상에 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 척추강내로 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 척수 운동 뉴런 및/또는 성상세포에 형질도입하기 위한 치료 유효량으로 큰수조에 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 척추강내로 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 척수 운동 뉴런 및/또는 성상세포에 형질도입하기 위한 치료학적 유효량으로 척추강내 주입을 사용하여 투여될 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터는 척추강내로 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 제형화될 수 있다. 비제한적인 예로서, 제형의 염기성도 및/또는 삼투압은 중추신경계 또는 중추신경계의 영역 또는 구성요소에서 최적의 약물 분포를 보장하도록 최적화될 수 있다.
하나의 구현예에서, 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 단일 경로 투여를 통해 대상에 전달될 수 있다.
하나의 구현예에서, 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 투여의 다중-부위 경로를 통해 대상에 전달될 수 있다. 대상은 2, 3, 4, 5 또는 5 초과의 부위에 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터가 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 대상은 볼루스 주입을 사용하여 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터가 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 대상은 수 분, 수 시간 또는 수 일의 주기에 걸친 지속 전달을 사용하여 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터가 투여될 수 있다. 주입 속도는 대상, 분포, 제형 또는 또 다른 전달 척도에 따라 변할 수 있다.
하나의 구현예에서, 카테터는 다중-부위 전달을 위해 척추의 하나 이상의 부위에 위치할 수 있다. 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 연속적인 및/또는 볼루스 주입으로 전달될 수 있다. 각 전달 부위는 투약 용법에 따라 상이할 수 있으며, 동일한 투약 용법이 각 전달 부위에 사용될 수 있다. 비제한적인 예로서, 전달 부위는 경부 및 요추 영역내일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 전달 부위는 경부 영역내일 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 전달 부위는 요추 영역내일 수 있다.
하나의 구현예에서, 대상은 본원에 기술된 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 전달 전에 척추 해부학 및 병리학에 대해 분석될 수 있다. 비제한적인 예로서, 척추측만증을 갖는 대상은 척추측만증이 없는 환자와 비교하여 상이한 투약 용법 및/또는 카테터 위치를 가질 수 있다.
하나의 구현예에서, 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 전달 동안 대상의 척추 배향은 지면에 대해 수직일 수 있다.
또 다른 구현예에서, 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 전달 동안 대상의 척추 배향은 지면에 대해 수평일 수 있다.
하나의 구현예에서, 대상의 척추는 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 대상으로의 전달 동안 지면과 비교하여 일정 각도에 있을 수 있다. 지면과 비교한 대상의 척추 각도는 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150 또는 180 도일 수 있다.
하나의 구현예에서, 전달 방법 및 지속기간은 척수에서 광범위한 형질도입을 제공하도록 선택된다. 비제한적인 예로서, 척수강내 전달은 척수의 부 리(rostral)-꼬리(caudal) 길이를 따라 광범위한 형질도입을 제공하는데 사용될 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 다중-부위 주입은 척수의 부리-꼬리 길이를 따라 보다 균일한 형질도입을 제공한다. 또 다른 비제한적인 예로서, 연장된 주입은 척수의 부리-꼬리 길이를 따라 보다 균일한 형질도입을 제공한다.
투약
본 발명의 약제학적 조성물은 SOD1 관련 장애(예컨대, ALS)를 감소, 예방 및/또는 치료하기 위해 임의의 유효량을 사용하여 대상에 투여될 수 있다. 필요한 정확한 양은 종, 연령 및 대상의 일반적인 상태, 질환의 중증도, 특정 조성물, 이의 투여 방식, 이의 활성 형태 등에 따라 대상마다 다를 것이다.
본 발명의 조성물은 투여 용이성 및 용량의 균일성을 위해 전형적으로 단위 투여형으로 제형화된다. 그러나, 본 발명의 조성물의 총 1일 사용량은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서 주치의에 의해 결정될 수 있음이 이해될 것이다. 임의의 특정 환자에 대한 특정 치료 효과는 치료될 장애 및 장애의 중증도; 사용되는 특정 화합물의 활성; 사용되는 특정 조성물; 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강, 성별 및 식이; 사용되는 siRNA 듀플렉스의 투여 시간, 투여 경로 및 배설 속도; 치료 지속기간; 사용되는 특정 화합물과 병용하여 또는 동시에 사용되는 약물; 및 의료업계에 공지된 인자를 비롯하여 다양한 인자에 따라 달라질 것이다.
하나의 구현예에서, 대상의 연령 및 성별은 본 발명의 조성물의 용량을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 비제한적인 예시로서, 나이가 많은 대상은 나이가 어린 대상에 비해 더 큰 용량의 조성물(예컨대, 5 내지 10%, 10 내지 20%, 15 내지 30% ,20 내지 50%, 25 내지 50% 또는 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 90% 초과)을 받을 수 있다. 비제한적인 예시로서, 나이가 어린 대상은 나이가 많은 대상에 비해 더 큰 용량의 조성물(예컨대, 5 내지 10%, 10 내지 20%, 15 내지 30% ,20 내지 50%, 25 내지 50% 또는 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 90% 초과)을 받을 수 있다. 비제한적인 다른 예시로서, 여자인 대상은 남자인 대상에 비해 더 큰 용량의 조성물(예컨대, 5 내지 10%, 10 내지 20%, 15 내지 30% ,20 내지 50%, 25 내지 50% 또는 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 90% 초과)을 받을 수 있다. 비제한적인 예시로서, 남자인 대상은 여자인 대상에 비해 더 큰 용량의 조성물(예컨대, 5 내지 10%, 10 내지 20%, 15 내지 30% ,20 내지 50%, 25 내지 50% 또는 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상 또는 90% 초과)을 받을 수 있다.
일부 특정 구현예에서, 본 발명의 siRNA 듀플렉스를 전달하기 위한 AAV 벡터의 용량은 질환의 상태, 대상 및 치료 전략에 따라 맞춰질 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 세포의 전달은 [VG/시간 = mL/시간 * VG/mL](여기서, VG는 바이러스 게놈이고, VG/mL은 조성물 농도이고, mL/시간은 연장된 전달의 속도이다)]로 정의된 전달 속도를 포함한다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 세포로의 전달은 약 1x106 VG 내지 약 1x1016 VG의 대상 당 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x106, 2x106, 3x106, 4x106, 5x106, 6x106, 7x106, 8x106, 9x106, 1x107, 2x107, 3x107, 4x107, 5x107, 6x107, 7x107, 8x107, 9x107, 1x108, 2x108, 3x108, 4x108, 5x108, 6x108, 7x108, 8x108, 9x108, 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010, 9x1010, 1x1011, 2x1011, 2.1x1011, 2.2x1011, 2.3x1011, 2.4x1011, 2.5x1011, 2.6x1011, 2.7x1011, 2.8x1011, 2.9x1011, 3x1011, 4x1011, 5x1011, 6x1011, 7x1011, 7.1x1011, 7.2x1011, 7.3x1011, 7.4x1011, 7.5x1011, 7.6x1011, 7.7x1011, 7.8x1011, 7.9x1011, 8x1011, 9x1011, 1x1012, 1.1 x1012, 1.2x1012, 1.3x1012, 1.4x1012, 1.5x1012, 1.6x1012, 1.7x1012, 1.8x1012, 1.9x1012, 2x1012, 3x1012, 4x1012, 4.1x1012, 4.2x1012, 4.3x1012, 4.4x1012, 4.5x1012,4.6x1012, 4.7x1012, 4.8x1012, 4.9x1012, 5x1012, 6x1012, 7x1012, 8x1012, 8.1x1012, 8.2x1012, 8.3x1012, 8.4x1012, 8.5x1012, 8.6x1012, 8.7x1012, 8.8 x1012, 8.9x1012, 9x1012, 1x1013, 2x1013, 3x1013, 4x1013, 5x1013, 6x1013, 6.7x1013, 7x1013, 8x1013, 9x1013, 1x1014, 2x1014, 3x1014, 4x1014, 5x1014, 6x1014, 7x1014, 8x1014, 9x1014, 1x1015, 2x1015, 3x1015, 4x1015, 5x1015, 6x1015, 7x1015, 8x1015, 9x1015, 또는 1x1016 VG/대상의 조성물 농도를 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 세포로의 전달은 약 1x106 VG/kg 내지 약 1x1016 VG/kg의 대상 당 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x106, 2x106, 3x106, 4x106, 5x106, 6x106, 7x106, 8x106, 9x106, 1x107, 2x107, 3x107, 4x107, 5x107, 6x107, 7x107, 8x107, 9x107, 1x108, 2x108, 3x108, 4x108, 5x108, 6x108, 7x108, 8x108, 9x108, 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010, 9x1010, 1x1011, 2x1011, 2.1x1011, 2.2x1011, 2.3x1011, 2.4x1011, 2.5x1011, 2.6x1011, 2.7x1011, 2.8x1011, 2.9x1011, 3x1011, 4x1011, 5x1011, 6x1011, 7x1011, 7.1x1011, 7.2x1011, 7.3x1011, 7.4x1011, 7.5x1011, 7.6x1011, 7.7x1011, 7.8x1011, 7.9x1011, 8x1011, 9x1011, 1x1012, 1.1 x1012, 1.2x1012, 1.3x1012, 1.4x1012, 1.5x1012, 1.6x1012, 1.7x1012, 1.8x1012, 1.9x1012, 2x1012, 3x1012, 4x1012, 4.1x1012, 4.2x1012, 4.3x1012, 4.4x1012, 4.5x1012,4.6x1012, 4.7x1012, 4.8x1012, 4.9x1012, 5x1012, 6x1012, 7x1012, 8x1012, 8.1x1012, 8.2x1012, 8.3x1012, 8.4x1012, 8.5x1012, 8.6x1012, 8.7x1012, 8.8 x1012, 8.9x1012, 9x1012, 1x1013, 2x1013, 3x1013, 4x1013, 5x1013, 6x1013, 6.7x1013, 7x1013, 8x1013, 9x1013, 1x1014, 2x1014, 3x1014, 4x1014, 5x1014, 6x1014, 7x1014, 8x1014, 9x1014, 1x1015, 2x1015, 3x1015, 4x1015, 5x1015, 6x1015, 7x1015, 8x1015, 9x1015, 또는 1x1016 VG/kg의 조성물 농도를 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 약 105 내지 106의 바이러스 게놈(단위)이 용량 당 투여될 수 있다.
하나의 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물의 세포로의 전달은 약 1x106 VG/mL 내지 약 1x1016 VG/mL의 총 농도를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 전달은 약 1x106, 2x106, 3x106, 4x106, 5x106, 6x106, 7x106, 8x106, 9x106, 1x107, 2x107, 3x107, 4x107, 5x107, 6x107, 7x107, 8x107, 9x107, 1x108, 2x108, 3x108, 4x108, 5x108, 6x108, 7x108, 8x108, 9x108, 1x109, 2x109, 3x109, 4x109, 5x109, 6x109, 7x109, 8x109, 9x109, 1x1010, 2x1010, 3x1010, 4x1010, 5x1010, 6x1010, 7x1010, 8x1010, 9x1010, 1x1011, 2x1011, 3x1011, 4x1011, 5x1011, 6x1011, 7x1011, 8x1011, 9x1011, 1x1012, 1.1x1012, 1.2x1012, 1.3x1012, 1.4x1012, 1.5x1012, 1.6x1012, 1.7x1012, 1.8x1012, 1.9x1012, 2x1012, 2.1x1012, 2.2x1012, 2.3x1012, 2.4x1012, 2.5x1012, 2.6x1012, 2.7x1012, 2.8x1012, 2.9x1012, 3x1012, 3.1x1012, 3.2x1012, 3.3x1012, 3.4x1012, 3.5x1012, 3.6x1012, 3.7x1012, 3.8x1012, 3.9x1012, 4x1012, 4.1x1012, 4.2x1012, 4.3x1012, 4.4x1012, 4.5x1012, 4.6x1012, 4.7x1012, 4.8x1012, 4.9x1012, 5x1012, 6x1012, 7x1012, 8x1012, 9x1012, 1x1013, 2x1013, 3x1013, 4x1013, 5x1013, 6x1013, 6.7x1013, 7x1013, 8x1013, 9x1013, 1x1014, 2x1014, 3x1014, 4x1014, 5x1014, 6x1014, 7x1014, 8x1014, 9x1014, 1x1015, 2x1015, 3x1015, 4x1015, 5x1015, 6x1015, 7x1015, 8x1015, 9x1015, 또는 1x1016 VG/mL의 조성물 농도를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 바람직한 siRNA 듀플렉스 용량은 다중 투여를 사용하여 전달될 수 있다 (예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14회 이상의 투여). 다중 투여가 사용되는 경우, 본원에 기술된 바와 같은 분할 투약 용법이 사용될 수 있다. 본원에 사용된 "분할 용량"은 단일 단위 용량 또는 총 1일 용량을 2회 이상의 투여, 예컨대 단일 단위 용량의 2회 이상의 투여로 나눈 것이다. 본원에 사용된 "단일 단위 용량"은 1회 용량/1회/단일 경로/단일 접촉점으로, 즉 단일 투여건으로 투여된 조절성 폴리뉴클레오티드 치료제의 용량이다. 본원에 사용된 "총 1일 용량"은 24시간 주기 내에 주어진 또는 처방된 양이다. 이는 단일 단위 용량으로서 투여될 수 있다. 하나의 구현예에서, 본 발명의 조절성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 바이러스 벡터는 분할 용량으로 대상에 투여된다. 이들은 오직 완충액중에서 또는 본원에 기술된 제형중에서 제형화될 수 있다.
ALS
의 치료 방법
본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 세포 내에 도입하는 방법이 본 발명에서 제공되며, 이러한 방법은 임의의 벡터를 표적 SOD1 mRAN의 분해가 일어나기에 충분한 양으로 세포에 도입함에 따라 세포에서 표적-특이적인 RNAi를 활성시키는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 세포는 줄기 세포, 신경 세포 예컨대 운동 뉴런, 근육 세포 및 신경아교세포 예컨대 성상세포일 수 있다.
본 발명은, 치료를 필요로하는 대상에서 비정상적인 SOD1 기능과 관련된 ALS를 치료하는 방법을 개시한다. 이러한 방법은 선택적으로 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 적어도 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을 대상에 투여하는 것을 포함한다. 비제한적인 예시로서, siRNA 분자는 SOD1 유전자 발현을 침묵시킬 수 있고, SOD1 단백질 생산을 저해할 수 있고, ALS가 치료학적으로 치료되도록 대상에서 ALS의 하나 이상의 증상을 감소시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 포함하는 조성물은 대상의 중추신경계에 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터를 포함하는 조성물은 대상의 근육에 투여된다.
특히, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는, 운동 뉴런; 희돌기교세포를 포함하는 신경아교세포, 성상세포 및 미세아교세포; 및/또는 T 세포와 같은 신경 주변의 다른 세포를 포함하여, 특이적 유형의 표적화된 세포 내에 전달될 수 있다. 인간 ALS 환자 및 동물 SOD1 ALS 모델에서의 연구는 신경아교세포가 운동 신경의 기능부전 및 사멸에서 초기 역할을 한다는 것을 보여준다. 돌연변이체 SOD1이 운동 뉴런에 존재하더라도, 주변의 보호성 신경아교세포에서의 정상적인 SOD1은 운동 뉴런이 사멸되는 것을 막을 수 있다(예컨대, Philips 및 Rothstein, Exp. Neurol., 2014, May 22. pii: S0014-4886(14)00157-5 참조; 이의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨).
일부 특정 구현예에서, 본 발명의 siRNA 분자를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS에 대한 치료제로서 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 조성물은 ALS의 치료를 위한 단독 치료제 또는 병용 치료제로서 투여된다.
SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA 이중가닥을 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 하나 이상의 다른 체료제와 병용되어 사용될 수 있다. "와 병용되어"라는 것은, 이러한 전달 방법이 본 발명의 범위 내에 있음에도 불구하고, 제제가 반드시 동시에 투여되고/되거나 함께 전달되도록 제형화되어야함을 의미하는 것으로 의도되지 않는다. 조성물은 하나 이상의 다른 목적하는 치료제 또는 의학적 처치와 동시에, 그전에 또는 후에 투여될 수 있다. 일반적으로 각 제제는 제제에 대해 결정된 용량 및/또는 시간 스케쥴로 투여될 것이다.
본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터와 병용되어 사용될 수 있는 치료제는, 항산화제, 항-염증제, 항-아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항글루타메이트제, 구조적 단백질 저해제 및 금속 이온 조절과 연관된 화합물인 작은 분자 화합물일 수 있다.
본원에 기술된 벡터와 병용하여 사용될 수 있는, ALS 치료를 위해 시험된 화합물은 비제한적으로 항글루타메이트제: 릴루졸, 토피라메이트, 탈람판넬, 라모트리진, 덱스트로메트로판, 가바펜틴 및 AMPA 길항제; 항-아폽토시스제: 미노사이클린, 소듐 페닐부틸레이트 및 아리모클로몰; 소염제: 강글리오시드, 셀레콕시브, 사이클로스포린, 아자티오프린, 사이클로포스파미드, 플라즈마포레시스, 글라티라머 아세테이트 및 탈리도마이드; 세프트리악손(Berry et al., Plos One, 2013, 8(4)); 피트-락탐 항생제; 프라미펙솔(도파민 길항제) (Wang et al., Amyotrophic Lateral Scler., 2008, 9(1), 50-58); 미국공개특허 제20060074991호의 니메슐리드; 미국공개특허 제20130143873호에 개시된 디아족사이드); 미국특허 제20080161378호에 개시된 피라졸론 유도체; 산화 스트레스-유도 세포 사멸을 저해하는 자유 라디칼 스캐빈저, 예컨대 본문에 포함된 브로모크립틴 (미국 공개특허 제20110105517호); PCT 특허공개 제2013100571호에 논의된 페닐 카바메이트 화합물; 미국특허 제6,933,310호 및 제8,399,514호 및 미국공개특허 제20110237907호 및 제20140038927호에 개시된 신경보호 화합물; 및 미국공개특허 제20070185012호에 교시된 글리코펩티드를 포함하고; 상기 문헌의 각 내용 전체는 참조로서 본원에 포함된다.
본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 암호화하는 벡터, 예컨대 AVV 벡터와의 병용 치료요법에 사용될 수 있는 치료제는 신경 손실을 보호할 수 있는 호르몬 또는 변이체, 예컨대 부신피질자극 호르몬(ACTH) 또는 이의 단편(예컨대, 미국공개특허 제20130259875호); 에스트로겐(예컨대, 미국특허 제6,334,998호 및 제 6,592,845호)(이의 각각의 내용 전체가 참조로서 본원에 포함됨)일 수 있다.
신경영양 인자가 ALS를 치료하기 위하여 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터와의 병용 치료요법에 사용될 수 있다. 일반적으로, 신경영양 인자는 뉴런의 생존, 성장, 분화, 증식 및/또는 성숙을 촉진하거나, 뉴런의 증가된 활성을 자극하는 물질로서 정의된다. 일부 구현예에서, 본 발명의 방법은 추가로 치료를 필요로 하는 대상에 하나 이상의 영양 인자를 전달하는 것을 포함한다. 영양 인자는, 비제한적으로, IGF-I, GDNF, BDNF, CTNF, VEGF, 콜리벨린, 잘리프로덴, 타이로트로핀-방출 호르몬 및 ADNF, 및 이들의 변이체를 포함할 수 있다.
하나의 양태에서, SOD1 유전자를 표적화하는 하나 이상의 siRNA 이중가닥에 대한 핵산 서열을 포함하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 신경영양 인자, 예컨대 AAV-IGF-I(Vincent 등, Neuromolecular medicine, 2004, 6, 79-85; 이의 전체 내용이 참조로서 본원에 포함됨) 및 AAV-GDNF(Wang 등, J Neurosci., 2002, 22, 6920-6928; 이의 전체 내용이 참조로서 본원에 포함됨)를 발현하는 AAV 벡터와 함께 병용투여될 수 있다.
일부 구현예에서, ALS 치료를 위한 본 발명의 조성물은 치료를 필요로 하는 대상에, siRNA 분자 또는 siRNA 분자를 포함하는 벡터가 혈-뇌 장벽 및 혈액 척수 장벽 중 하나 또는 둘 모두를 통과할 수 있도록 , 정맥내로, 근육내로, 피하로, 복강내로, 척추강내로 및/또는 심실내로 투여된다. 일부 양태에서, 이러한 방법은 대상의 중추신경계(CNS)에 본 발명의 siRNA 분자에 대한 핵산 서열을 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV를 벡터를 포함하는 조성물의 치료학적 유효량을(예컨대, 주입 펌프 및/또는 전달 스캐폴드를 사용하여) 직접 투여(예컨대, 심실내 투여 및/또는 척추강내 투여)하는 것을 포함한다. 이러한 벡터는 SOD1 유전자 발현을 침묵 또는 억제시키기 위해 사용될 수 있고/있거나 ALS가 치료학적으로 치료되도록 대상에서 ALS의 하나 이상의 증상을 감소시키기 위해 사용될 수 있다.
특정 양태에서, ALS의 증상은 비제한적으로 운동 뉴런 퇴화, 근육 약화, 근육 위축, 근육의 뻣뻣함, 호흡의 어려움, 불분명한 발음, 갑작스런 경련의 발달, 전두측두엽 치매를 포함하고/하거나 치료되는 대상에서 조기 사망이 개선된다. 다른 양태에서, 본 발명의 조성물은 뇌 및 척수 중 하나 또는 둘 다에 적용된다. 다른 양태에서, 근육 조정 및 근육 기능 중 하나 또는 둘 다가 개선된다. 다른 양태에서, 대상의 생존이 연장된다.
하나의 구현예에서, 본 발명의 siRNA를 암호화하는 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 대상으로의 투여는 대상의 CNS에서 돌연변이체 SOD1을 낮출 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 대상으로의 투여는 대상의 CNS에서 야생형 SOD1을 낮출 수 있다. 또 다른 구현예에서, 상기 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 대상으로의 투여는 대상의 CNS에서 돌연변이체 SOD1 및 야생형 SOD1을 낮출 수 있다. 돌연변이체 및 야생형 SOD1은 대상의 CNS, CNS 영역 또는 CNS의 특정 세포에서 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 85%, 90%, 95% 및 100%, 또는 적어도 20 내지 30%, 20 내지 40%, 20 내지 50%, 20 내지 60%, 20 내지 70%, 20 내지 80%, 20 내지 90%, 20 내지 95%, 20 내지 100%, 30 내지 40%, 30 내지 50%, 30 내지 60%, 30 내지 70%, 30 내지 80%, 30 내지 90%, 30 내지 95%, 30 내지 100%, 40 내지 50%, 40 내지 60%, 40 내지 70%, 40 내지 80%, 40 내지 90%, 40 내지 95%, 40 내지 100%, 50 내지 60%, 50 내지 70%, 50 내지 80%, 50 내지 90%, 50 내지 95%, 50 내지 100%, 60 내지 70%, 60 내지 80%, 60 내지 90%, 60 내지 95%, 60 내지 100%, 70 내지 80%, 70 내지 90%, 70 내지 95%, 70 내지 100%, 80 내지 90%, 80 내지 95%, 80 내지 100%, 90 내지 95%, 90 내지 100% 또는 95 내지 100%까지 낮아질 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 운동 뉴런(예컨대, 복각(ventral horn) 운동 뉴런) 및/또는 성상세포에서 야생형 SOD1의 발현을 50% 이상까지 낮출 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 운동 뉴런(예컨대, 복각 운동 뉴런) 및/또는 성상세포에서 돌연변이체 SOD1의 발현을 50% 이상까지 낮출 수 있다. 또 다른 비제한적인 예로서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 운동 뉴런(예컨대, 복각 운동 뉴런) 및/또는 성상세포에서 야생형 SOD1 및 돌연변이체 SOD1의 발현을 50% 이상까지 낮출 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터의 대상으로의 투여는 척수에서 돌연변이 및/또는 야생형 SOD1의 발현을 감소시킬 것이고, 돌연변이 및/또는 야생형 SOD1의 발현 감소는 대상에서 ALS의 영향을 감소시킬 것이다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS의 초기 단계에 있는 대상에 투여될 수 있다. 초기 단계 증상은, 비제한적으로 근육이 연약하고 유연하거나 뻣뻣한 근육, 팽팽하고 경련된 근육, 근육의 쪼임 및 떨림(갑작스런 경련), 근육 질량의 손실(위축증), 피로, 불량한 균형, 불분명한 발음의 말, 약한 손힘(grip), 및/또는 보행시 헛디딤 등을 포함한다. 이러한 증상은 단일 신체 영역에 제한될 수 있고, 가벼운 증상은 하나 초가의 영역에 영향을 미칠 수 있다. 비제한적인 예로서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS 증상의 중증도 및/또는 발생을 감소시킬 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS의 중기 단계에 있는 대상에 투여될 수 있다. ALS의 중기 단계는, 비제한적으로 초기 단계에 비해 더 광범위하게 퍼진 근육 증상, 다른 근육은 약해지거나 영향을 받지 않은 반면 일부 근육은 마비됨, 지속적인 근육 떨림 (갑작스런 경련), 사용하지 않는 근육이 수축의 원인이 되어 관절이 경직됨, 통증 및 종종 기형, 삼키는 근육 운동의 약화가 질식 및 섭취 및 침 삼킴의 보다 큰 어려움을 야기할 수 있음, 호흡 근육의 약화는 호흡의 특히 누워 있을 때 분명한 호흡의 불충분을 야기할 수 있음 및/또는 대상은 한차례의 비조절되고 부적절한 웃음 또는 울음(가성연수 효과)을 포함한다. 비제한적인 예로서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 ALS 증상의 중증도 및/또는 발생을 감소시킬 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 후기 단계의 ALS인 대상에 투여될 수 있다. 후기 단계의 ALS는, 비제한적으로 대부분 마비된 수의근, 폐의 공기의 내뱉는 운동을 도움주는 근육이 심각하게 약화됨, 운동성이 극도로 제한됨, 불량한 호흡이 피로, 생각이 몽롱해짐, 두통 및 감염 또는 질환(예컨대, 폐렴)에 취약해짐을 야기함, 말하기가 어려워지고 입을 통한 섭취 또는 식음이 불가능해질 수 있음을 포함한다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 C9orf72돌연변이를 갖는 ALS를 갖는 대상을 치료하는데 사용될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 TDP-43 돌연변이를 갖는 ALS를 갖는 대상을 치료하는데 사용될 수 있다.
하나의 구현예에서, 벡터, 예컨대 AAV 벡터는 FUS 돌연변이를 갖는 ALS를 갖는 대상을 치료하는데 사용될 수 있다.
정의
달리 언급되지 않는한, 다음의 용어 및 어구는 후술되는 의미를 갖는다. 정의는 본질적으로 제한하는 것을 의미하는 것은 아니며, 본 발명의 특정 양상의 보다 명확한 이해를 제공하기 위해 제공된다.
본원에 사용된 용어 "핵산", "폴리뉴클레오티드" 및 "올리고뉴클레오티드"는 폴리디옥시리보뉴클레오티드(2-디옥시-D-리보스 포함), 또는 폴리리보뉴클레오티드(D-리보스 포함), 또는 퓨린 또는 피리미딘 염기의 N 글리코시드, 또는 변형된 퓨린 또는 피리미딘 염기인 임의의 다른 유형의 폴리뉴클레오티드로 구성된 핵산 중합체를 지칭한다. 용어 "핵산", "폴리뉴클레오티드" 및 "올리고뉴클레오티드" 사이의 길이에는 의도된 구별이 없으며, 이러한 용어는 상호교환적으로 사용될 것이다. 이러한 용어는 오직 분자의 1차 구조만을 지칭한다. 따라서, 이러한 용어는 이중- 및 단일-가닥의 DNA뿐만 아니라 이중- 및 단일-가닥의 RNA를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "RNA" 또는 "RNA 분자" 또는 "리보핵산 분자"는 리보뉴클레오티드 중합체를 지칭한다; 용어 "DNA" 또는 "DNA 분자" 또는 "디옥시리보핵산 분자"는 디옥시리보뉴클레오티드 중합체를 지칭한다. DNA 및 RNA는, 예컨대 DNA 복제 및 DNA 전사에 의해 각각 자연적으로 합성될 수 있거나, 화학적으로 합성될 수 있다. DNA 및 RNA는 단일-가닥(예컨대 각각 ssRNA 또는 ssDNA) 또는 다중-가닥(예컨대, 이중 가닥, 즉, 각각 dsRNA 및 dsDNA)일 수 있다. 본원에 사용된 용어 "mRNA" 또는 "메신저 RNA"는 하나 이상의 폴리펩티드 쇄의 아미노산 서열을 암호화하는 단일 가닥의 RNA를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "RNA 간섭" 또는 "RANi"는 상응하는 단백질-암호화 유전자 발현의 억제, 간섭 또는 "침묵"을 야기하는, RNA 분자에 의해 매개되는 서열 특이적인 조절 메커니즘을 지칭한다. RNAi는 식물, 동물 및 진균류를 비롯하여 많은 유형의 유기체에서 발견된다. RNAi는 외래 RNA(예컨대, 바이러스 RNA)를 제거하기 위해 세포에서 자연적으로 발생한다. 천연 RNAi는 분해 메커니즘을 다른 유사한 RNA 서열로 향하게 하는 유리 dsRNA로부터 절단된 단편을 통해 진행된다. RNAi는 RNA 유도된 침묵 복합체(RISC)에 의해 조절되며, 세포질에서 짧은/작은 dsRNA 분자에 의해 개시되고, 여기에서 이들은 촉매적 RISC 구성요소인 아르고네이트(argonaute)와 상호작용한다, dsRNA 분자는 세포에 외인성으로 도입될 수 있다. 외인성 dsRNA는 리보뉴클레아제 단백질인 다이서를 활성화시킴으로써 RNAi를 개시하고, 다이서는 dsRNA에 결합하여 절단하여 각 말단에 일부 짝지워지지 않은 오버행 염기를 갖는 21 내지 25 염기쌍의 이중 가닥의 단편을 생성한다. 이러한 짧은 이중 가닥의 단편은 작은 간섭 RNA(siRNA)라고 일컬어진다.
본원에 사용된 용어 "짧은 간섭 RNA", "작은 간섭 RNA" 또는 "siRNA"는 RNAi를 지시하거나 매개할 수 있는, 약 5 내지 60 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체)를 포함하는 RNA 분자(또는 RNA 유사체)를 지칭한다. 바람직하게는, siRNA 분자는 약 15 내지 30개의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체, 예컨대 약 16 내지 25개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체), 약 18 내지 23개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체), 약 19 내지 22개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체)(예컨대, 19, 20, 21 또는 22개의 뉴클레오티드 또는 뉴클레오티드 유사체), 약 19 내지 25개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체), 및 약 19 내지 24개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체)를 포함한다. 용어 "짧은" siRNA는 5 내지 23 뉴클레오티드 바람직하게는 21개의 뉴클레오티드(또는 뉴클레오티드 유사체), 예컨대, 19, 20, 21 또는 22개의 뉴클레오티드를 포함하는 siRNA를 지칭한다. 용어 "긴" siRNA는 24 내지 60개의 뉴클레오티드, 바람직하게는 약 24 내지 25개의 뉴클레오티드, 예컨대, 23, 24, 25 또는 26개의 뉴클레오티드를 포함하는 siRNA를 지칭한다. 짧은 siRNAs는 경우에 따라, 보다 짧은 siRNA가 RNAi를 매개하는 능력을 보유하는 경우, 19개 뉴클레오티드 미만, 예컨대, 16, 17 또는 18개의 뉴클레오티드, 또는 5개의 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 마찬가지로, 긴 siRNAs는 경우에 따라, 보다 긴 siRNA가 짧은 siRNA에 대한 추가 처리, 예컨대 효소 처리가 없는 경우 RNAi 또는 번역 억제를 매개하는 능력을 보유하는 경우, 26 뉴클레오티드 초과, 예컨대, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 또는 심지어는 60개의 뉴클레오티드 초과를 포함한다. siRNA는 단일 가닥의 RNA 분자(ss-siRNA) 또는 혼성화되어 siRNA 이중가닥으로 불리는 이중가닥 구조를 형성하는 센스 가닥 및 안티센스 가닥을 포함하는 이중 가닥의 RNA 분자(ds-siRNA)일 수 있다.
본원에 사용된 용어 siRNA 분자의 "안티센스 가닥" 또는 "제1가닥" 또는 "가이드 가닥"은 침묵에 대해 표적화된 유전자의 mRNA의 약 10 내지 50 뉴클레오티드, 예컨대 약 15 내지 30, 16 내지 25, 18 내지 23 또는 19 내지 22 뉴클레오티드의 부분에 실질적으로 상보성인 가닥을 지칭한다. 안티센스 가닥 또는 제1가닥은 표적-특이적 침묵을 지시하기 위해 목적하는 표적 mRNA 서열에 대해 충분히 상보성인 서열을 가지며, 예컨대, 상보성은 RNAi 기구 또는 처리과정에 의해 표적 mRNA의 파괴를 유발시키기에 충분하다.
본원에 사용된 용어 siRNA 분자의 "센스 가닥" 또는 "제2가닥" 또는 "패신저 가닥"은 안티센스 가닥 또는 제1가닥에 상보성인 가닥을 지칭한다. siRNA 분자의 안티센스 및 센스가닥은 혼성화되어 이중가닥 구조를 형성한다. 본원에 사용된 "siRNA 이중가닥"은 침묵에 대해 표적화된 유전자의 mRNA의 약 10 내지 50 뉴클레오티드 부분에 대해 충분히 상보성을 갖는 siRNA 가닥 및 siRNA 가닥과 이중가닥을 형성하기에 충분히 상보성을 갖는 siRNA 가닥 포함한다.
본원에 사용된 용어 "상보성인"은 서로 염기쌍을 형성할 수 있는 폴리뉴클레오티드의 능력을 지칭한다. 염기쌍은 전형적으로 역평행 폴리뉴클레오티드 가닥의 뉴클레오티드 단위 사이의 수소결합에 의해 형성된다. 상보성인 폴리뉴클레오티드 가닥은 왓슨-크릭 방식(예컨대, A와 T, A와 U, C와 G)으로, 또는 이중가닥 형성을 허용하는 임의의 다른 방식으로 염기쌍을 형성할 수 있다. 당업자가 알고 있는 바와 같이, DNA와 대조적으로 RNA를 사용하는 경우, 티민 대신 우라실이 아데노신에 상보성인 것으로 간주되는 염기이다. 그러나, 본 발명의 맥락에서 U가 언급되는 경우, 달리 언급되지 않는 한, T를 치환하는 능력을 의미한다. 완전한 상보성 또는 100% 상보성은 하나의 폴리뉴클레오티드 가닥의 각 뉴클레오티드 단위가 제2폴리뉴클레오티드 가닥의 뉴클레오티드 단위와 수소 결합을 형성할 수 있는 상황을 지칭한다. 완전한 상보성보다 적은 것은, 2 가닥의 전부는 아니지만 일부 뉴클레오티드 단위가 서로 수소결합을 형성할 수 있는 상황을 지칭한다. 예컨대, 2개의 20량체에 대하여, 각 가닥의 2개의 염기쌍만이 서로 수소결합을 형성할 수 있는 경우, 폴리뉴클레오티드 가닥은 10% 상보성을 나타낸다. 동일한 예에서, 각 가닥 상에 18개의 염기쌍이 서로 수소결합을 형성할 수 있는 경우, 폴리뉴클레오티드 가닥은 90%의 상보성을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "실질적으로 상보성인"은 목적하는 표적 mRNA에 결합 및 표적 mRNA의 RNA 침묵을 유발시키기에 충분한 서열(예컨대, 안티센스 가닥)을 갖는 siRNA를 의미한다.
본원에 사용된 "표적화"는 표적 핵산에 혼성화되어 목적하는 효과를 유도하는 핵산 서열의 설계 및 선별 과정을 의미한다.
용어 "유전자 발현"은 핵산이 성공적인 전사 및 대부분의 경우에서 번역되어 단백질 또는 펩티드를 생산하는 과정을 지칭한다. 명확하게 하기 위하여, "유전자 발현"의 측정을 지칭하는 경우, 측정이 전사의 핵산 생성물, 예컨대 RNA 또는 mRNA 또는 번역의 아미노산 생성물, 예컨대 폴리펩티드 또는 펩티드일 수 있음을 의미하는 것으로 이해되어야 한다. RNA, mRNA, 폴리펩티드 및 펩티드의 양 또는 수준의 측정 방법이 당업계에 공지되어 있다.
본원에 사용된 용어 "돌연변이"는 유전자의 구조를 임의로 변화시켜 후속 세대에 전달될 수 있는 변이체 형태("돌연변이체"로도 지칭됨)를 생성하는 것을 지칭한다. 유전자에서의 돌연변이는, DNA에서의 단일 염기의 교체 또는 유전자 또는 염색체의 보다 큰 부분의 결실, 삽입 또는 재배열에 의해 야기될 수 있다.
본원에 사용된 "벡터"는 이종 분자, 예컨대 본 발명의 siRNA 분자의 운반체로서 수송, 형질도입 또는 다른 방식으로 작용하는 임의의 분자 또는 모이어티이다 "바이러스 벡터"는 관심있는 분자, 예컨대 전이유전자, 폴리펩타이드 또는 다중-폴리펩티드 또는 조절성 핵산 예컨대 작은 간섭 RNA(siRNA)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 암호화하거나 포함하는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드 부위를 포함하는 벡터이다. 바이러스 벡터는 통상적으로 유전 물질을 세포 내로 전달하기 위해 사용된다. 바이러스 벡터는 종종 특정 적용을 위해 변형된다. 바이러스 벡터의 유형은 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 및 아데노-관련 바이러스 벡터를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "아데노-관련 바이러스" 또는 "AAV" 또는 "AAV 벡터"는 아데노-관련 벡터의 구성요소를 포함하거나 이로부터 유래하고 포유류 세포, 바람직하게는 인간 세포를 감염시키기에 적절한 임의의 벡터를 지칭한다. 용어 AAV 벡터는 전형적으로 siRNA 이중가닥을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 AAV 유형 바이러스 입자 또는 비리온을 나타낸다. AAV 벡터는 혈청형 조합(즉, "위형" AAV)을 비롯하여 다양한 혈청형 또는 다양한 게놈(예컨대, 단일 가닥의 또는 자기 상보성인)으로부터 유래될 수 있다. 추가로, AAV 벡터는 복제 결함 및/또는 표적화될 수 있다.
본원에 사용된 어구 "유전자 발현 억제"는 유전자 발현 산물의 양의 감소를 야기하는 것을 의미한다. 발현 산물은 유전자로부터 전사된 RNA 분자(예컨대, mRNA) 또는 유전자로부터 전사된 mRNA로부터 번역된 폴리펩티드일 수 있다. 전형적으로, mRNA의 수준 감소는 이로부터 번역된 폴리펩티드의 수준 감소를 야기한다. 발현 수준은 mRNA 또는 단백질을 측정하기 위한 표준 기법을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "시험관내"는 사건이 유기체(예컨대, 동물, 식물 또는 미생물)내에서가 아니라, 인공적인 환경, 예컨대, 시험관 또는 반응 용기, 세포 배양, 페트리 디쉬, 등에서 발생하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "생체내"는 사건이 유기체(예컨대, 동물, 식물 또는 미생물 또는 세포 또는 이의 조직)에서 발생하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "변형된"은 본 발명의 분자의 변화된 상태 또는 구조를 지칭한다. 분자는 화학적, 구조적 및 기능적을 포함하여 다양한 방법으로 변형될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "합성의"는 사람의 손에 의해 생산, 준비 및/또는 제조되는 것을 의미한다. 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 또는 본 발명의 다른 분자의 합성은 화학적 또는 효소적일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "형질감염"은 외인성 핵산을 세포 내로 도입하는 방법을 지칭한다. 형질도입 방법은 비제한적으로 화학적 방법, 물리적 처리 및 양이온 지질 또는 혼합물을 포함한다. 세포 내로 형질감염될 수 있는 제제의 목록은 크고, 비제한적으로 siRNA, 센스 및/또는 안티-센스 서열, 하나 이상의 유전자를 암호화하고 발현 플라스미드 내에 조직화된 DNA, 단백질, 단백질 단편 등을 포함한다.
본원에 사용된 "비표적"은 임의의 하나 이상의 표적, 유전자 및/또는 세포 전사물에 대한 임의의 의도하지 않은 효과를 지칭한다.
본원에 사용된 어구 "약제학적으로 허용되는"은 건전한 의학적 판단의 범위 내에서, 과도한 독성, 자극, 알러지 반응 또는 다른 문제 또는 합병증 없고 합리적인 이득/위험 비율에 상응하는, 인간 또는 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 의미하기 위해 본원에서 사용된다.
본원에 사용된 용어 제제의 "유효량"은 효과적인 이점의 또는 바람직한 결과, 예컨대 임상결과를 얻기에 충분한 양을 의미하고, 이러한 "유효량"은 이것이 적용되는 상황에 달려있다. 예컨대, ALS를 치료하기 위한 제제를 투여하는 상황에서, 제제의 유효량은, 예컨대 본원에 정의된 바와 같이, 제제의 투여 없이 수득된 반응에 비해 ALS의 치료를 달성하기에 충분한 양이다.
본원에 사용된 용어 "치료학적 유효량"은 감염, 질환, 장애 및/또는 상태에 취약하거나 이를 앓고 있는 대상에 투여되어, 감염, 질환, 장애 및/또는 상태의 발병의 치료, 증상의 개선, 진단, 예방 및/또는 지연에 충분한, 전달되는 제제(예컨대, 핵산, 약물, 치료제, 진단제, 예방제, 등)의 양을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "대상" 또는 "환자"는, 예컨대, 실험적, 진단적, 예방적 및/또는 치료적 목적으로 본 발명에 다른 조성물이 투여될 수 있는 임의의 유기체를 지칭한다. 전형적인 대상은 동물(예컨대, 포유류 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 비-인간 영장류 및 인간) 및/또는 식물을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "예방하다" 또는 "예방"은 수 주, 수 개월 또는 수 년을 포함하는 일정 기간 동안 상태 또는 질환의 발병, 발달 또는 진행의 지연 또는 방지하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 질환의 치료 또는 개선을 위해 사용되는 하나 이상의 특정 절차의 적용을 지칭한다. 특정 구현예에서, 특정 절차는 하나 이상의 약제학적 제제의 투여이다. 본 발명의 맥락에서, 특정 절차는 SOD1 유전자를 치료하는 하나 이상의 siRNA 이중가닥 또는 암호화된 dsRNA의 투여이다.
본원에 사용된 용어 "개선" 또는 "개선하다"는 상태 또는 질환의 하나 이상의 징후의 중증도를 낮추는 것을 지칭한다. 예컨대, 신경퇴행성 장애의 맥락에서, 개선은 뉴런 손실의 감소를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "투여하다"는 대상에 약제학적 제제 또는 조성물을 제공하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "신경퇴행"은 신경 세포 사멸을 야기하는 병리학적 상태를 지칭한다. 다수의 신경 장애는 공통의 병리학적 상태로서 신경퇴행을 공유한다. 예컨대, 알츠하이머, 파킨슨병, 헌팅턴병, 근위축성 측삭 경화증(ALS)은 모두 수 년에 걸쳐 느리고 진행적인 신경 세포 사멸을 특징으로 하는 만성 신경퇴행인 반면, 급성 신경퇴행은 허혈, 예컨대 뇌졸중, 외상, 컨대 외상성 뇌손상에 기인하거나, 예컨대 척수 손상 또는 경화증에 의해 야기되는 탈수초 또는 외상에 의한 축삭횡단에 의해 기인한 갑작스런 발병의 신경 세포 사멸을 특징으로 한다. 일부 신경 장애에서, 주로 하나의 유형의 신경 세포가 퇴행성이며, 예컨대 ALS에서의 운동 뉴런 퇴행이다.
균등물 및 범위
당업자는, 통상적인 실험을 사용하여 본원에 기재된 발명에 따른 특정 구현예에 대한 다수의 균등물을 사용하여 인지하거나 확인할 수 있을 것이다. 본 발명의 범위는 전술된 설명에 한정되는 것으로 의도되는 것이 아니라, 오히려 첨부된 청구범위에서 설명되는 바와 같다.
청구범위에서, 단수형 명사는 문맥에 반하여 지시되지 않는 한, 하나 이상을 의미할 수 있다. 군의 하나 이상의 구성원 사이에 "또는"을 포함하는 청구범위 또는 설명은, 문맥에 반하는 것으로 명시되어 있지 않는 한, 군 구성원의 하나 ,하나 이상 또는 모두가 주어진 생성물 또는 방법에 존재하거나, 사용되거나 다른 방식으로 관련이 있는 경우, 만족한 것으로 간주된다. 본 발명은 군의 정확히 하나의 구성원이 주어진 생성물 또는 방법에 존재하거나, 사용되거나 다른 방식으로 관련되어 있는 구현예를 포함한다. 본 발명은 주어진 산물 또는 방법에 대해 하나 이상 또는 모든 군의 구성원이 존재, 사용 또는 다른 방식으로 관련되어 있는 경우의 구현예를 포함한다.
또한, 용어 "포함하는"은 개방되고 허용되는 것으로 의도되지만, 추가 요소 또는 단계의 포함을 요하지 않음을 유의해야 한다. 용어 "포함하는"이 사용된 경우, 용어 "로 이루어진"은 따라서 포함되고 개시된다.
범위가 주어진 경우, 끝점이 포함된다. 추가로, 당업자 중 한명의 맥락 및 이해로부터 달리 지시되거나 다른 방식으로 명백하지 않는 한, 범위로 표현된 값은 본 발명의 상이한 구현예에서 언급된 범위 이내의 임의의 특정 값 또는 하위범위를, 문맥이 다른 방식으로 명백하게 지시되지 않는 한, 범위의 하한 단위의 1/10으로 가정할 수 있음이 이해되어야 한다.
추가로, 선행기술에 속하는 본 발명의 임의의 특정 구현예가 임의의 하나 이상의 청구범위로부터 명백하게 배제될 수 있음이 이해되어야 한다. 이러한 구현예는 당업자에게 공지된 것으로 간주되므로, 본원에서 명백하게 배제가 명시되지 않아도 배제될 수 있다. 본 발명의 조성물의 임읨의 특정 구현예(예컨대, 임의의 항생제, 체료제 또는 활성 성분; 임의의 생산 방법; 임의의 사용 방법 등)는 선행기술의 존재와 관계 없이, 어떤 이유로든 임의의 하나 이상의 주장으로부터 배제될 수 있다.
사용된 단어는 제한보다는 설명의 단어이고, 변경은 본 발명의 넓은 양태에서 본 발명의 진정한 범위 및 사상을 벗어나지 않고 첨부된 청구범위 내에서 이루어질 수 있음이 이해되어야 한다.
본 발명은 몇몇 설명된 구현예와 관련하여 일부 길이 및 일부 상세하게 설명되었지만, 임의의 이러한 특정 사항 또는 구현예 또는 임의의 특정한 구현예로 제한되어야 하는 것으로 의도된 것은 아니지만, 선행 기술의 관점에서 이러한 청구범위의 가장 광범위한 가능한 해석을 제공하고, 따라서 본 발명의 의도된 범위를 효과적으로 포함하도록 첨부된 청구범위를 참조하여 해석되어야 한다.
실시예
실시예 1. SOD1 siRNA 설계 및 합성
SOD1
siRNA
설계
인간 SOD1 유전자를 표적화하는 siRNA를 확인하기 위해 siRNA를 설계하였다. 표 2에 기술되어 있듯, 인간에 대한 SOD1 전사물((GeneBank 접근 번호 NM_ 000454.4(서열번호 1)), 시노몰구스(NCBI 참조서열 모음(배포 63)(서열번호 2)로부터의 (GeneBank 접근 번호 XM_005548833.1)) 및 레수스(앙상블 프로젝트(배포 75)로부터의 SOD1 전사물 ENSMMUT00000002415(서열번호 3))를 사용하여 설계하였다.
[표 2]
인간 SOD1 전사물과 안티센스 가닥의 2 내지 18번 위치에서 100% 동일하고 비-인간 영장류 SOD1 전사물과 안티센스 가닥의 2 내지 18번 위치에서 부분적 또는 100% 동일하도록 siRNA 듀플렉스를 설계하였다. 모든 siRNA 이중가닥에서, 안티센스 가닥의 1번 위치를 U로 조작하고, 센스 가닥의 19번 위치를 C로 조작하여 이러한 위치에 듀플렉스를 짝짓지 않았다.
SOD1
siRNA
서열 선택
인간, 시노몰구스 및 레수스 SOD1 유전자의 안티센스 가닥의 예측되는 선택성, 및 miRBase20.0에서 인간 서열에 대한 안티센스 가닥의 2 내지 7번 위치에서 시드 서열의 매칭 결핍에 기초하여, 총 169개의 안티센스 및 169개의 센스의 인간 SOD1 유도된 올리고뉴클레오티드를 합성하여 듀플렉스를 형성하였다(표 3). 이어서, siRNA 듀플렉스를 시험관내에서 내인성 SOD1 유전자 발현(SOD1 mRNA 수준)에 대한 저해 활성에 대해 시험하였다.
[표 3]
SOD1
siRNA
합성
포스포라미다이트 올리고머화 화학에 따라 올리고리보뉴클레오티드를 ABI 3900 합성기(Applied Biosystems)에서 조립하였다. 0.2 μmol의 합성 크기를 수득하기 위한 고상 지지체는 2'-데옥시-티미딘(Glen Research(미국 버지니아 스터링)로부터 구입)이 탑재된 폴리스티렌이었다. 보조 합성 시약인, DNA 및 RNA 포스포라미다이트를 SAFC Proligo(독일 함부르크)로부터 입수하였다. 특히, 우리딘(U)의 5'-O-(4,4'-디메톡시트리틸)-3'-O-(2-시아노에틸-N,N-디이소프로필) 포스포라미다이트 단량체, 티미딘(dT), 4-N-아세틸시티딘(CAc), 6-N-벤조일아데노신(Abz) 및 2'-O-t-부틸디메틸실릴을 가진 2-N-이소부티릴구아노신(GiBu)을 사용하여 올리고머 서열을 만들었다. 모든 포스포라미다이트(아세토니트릴 중 70 mM)의 커플링 시간은 활성화제로서 5-에틸티오-1H-테트라졸(ETT)(아세토니트릴 중 0.5 M)을 사용하여 3분이었다. 합성기에서 최종 디메톡시트리틸 기를 제거하여 서열을 합성하였다("DMT 제거(off)" 합성). 고상 합성이 완료되면, 올리고리보뉴클레오티드를 고상 지지체로부터 절단하고, 수성 메틸아민(40%) 및 에탄올중의 메틸아민(33%)의 1:1 (v/v) 혼합물을 사용하여 탈보호시켰다. 45°C에서 90분 후에, N,N-디메틸 포름아미드(DMF)로 용액을 희석하고 트리에틸아민 트리하이드로플루오라이드(TEA.HF)를 첨가하였다. 45°C에서 2시간 동안 인큐베이션시킨 후, 올리고리보뉴클레오티드를 1 M NaOAc, 및 아세톤 및 에탄올 4:1 (v/v)의 혼합물로 침전시켰다. 펠릿을 1 M 수성 NaCl 용액에 용해시키고, 크기 배제 크로마토그래피로 탈염시켰다. 이를 하이트랩(HiTrap) 5 mL 컬럼(GE 헬스케어)이 구비된 AKTA Purifier HPLC 시스템(GE 헬스케어, 독일 프라이부르크)을 사용하여 달성하였다. 올리고리보뉴클레오티드의 동일성을 MALDI 질량 분석법 또는 ESI 질량분석법으로 확인하였다. RNA 단일 가닥으로부터 siRNA를 생성하기 위해, 등몰량의 상보성인 센스 및 안티센스 가닥을 혼합하고, 20 mM NaCl, 4 mM 소듐 포스페이트 pH 6.8 완충액에서 혼합하고 어닐링시켰다. siRNA를 사용하기 전까지 냉동 보관하였다.
실시예 2. 인간 SOD1 mRNA 억제에 대한 SOD1 siRNA의 시험관내 스크리닝
SOD1 mRNA를 정량하기 위해 bDNA(분지형 DNA) 분석법을 사용하여 HeLa 세포에서 내인성 SOD1 발현의 억제에 대해 siRNA를 표적화하는 인간 SOD1(표 3에 기술되어 있음)을 분석하였다. IC50을 계산하기 위하여, 4가지 유형의 배양된 세포에서 용량 반응 실험에서, SOD1 dsRNA 이중가닥의 서브세트를 선별하기 위하여 2회 투여량 분석 결과를 사용하였다.
세포 배양 및 형질감염
HeLa 세포를 ATCC(LGC Standards와 합명회사인 ATCC, 독일 베젤)로부터 입수하고, 가습된 인큐베이터에서 5% CO2를 가진 대기에서 37°C에서 10% 태아 소 혈청(GIBCO/Life Technologies의 초저 IgG) 및 1% Pen/Strep(Biochrom GmbH, 독일 베를린)을 함유하도록 보충된 HAM F-12 배지(Biochrom GmbH, 독일 베를린)에서 배양하였다.
siRNA로 형질감염시키기 위해, 96-웰 플레이트에 19,000 내지 20,000 세포/웰의 밀도로 HeLa 세포를 씨딩하였다. 제조사의 지시에 따라 리포펙타민(Lipofectamine) 2000(Invitrogen/Life Technologies)을 사용하여 siRNA의 형질감염을 수행하였다. 2회-용량 스크린에 대하여, 1 nM 또는 0.1 nM 농도의 SOD1 siRNA를 사용하였다. 10, 2.5, 0.6, 0.16, 0.039, 0.0098, 0.0024, 0.0006, 0.00015, 및 0.000038 nM의 SOD1 siRNA 농도로 용량 반응 실험을 수행하였다. 대조군 웰을 루시페라제 siRNA, Aha-1 siRNA, PLGF siRNA, 또는 관련없는 siRNA의 대조군 혼합물로 형질감염시켰다.
분지형 DNA 검정- 퀀티진(QuantiGene) 2.0
siRNA와 함께 24시간 인큐베이션한 후, 배지를 제거하고 세포를 150μl의 용균 혼합물(1 부피의 용균 혼합물, 2 부피의 뉴클라아제가 없는 물)에서 용균시킨 다음 53°C에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 80μl의 작동 프로브 세트(Working Probe Set) SOD1(유전자 표적) 및 90μl의 작동 프로브 세트 GAPDH(내인성 대조군) 및 20μl 또는 10μl의 세포 용균물을 캡쳐 플레이트(Capture Plate)에 첨가하였다. 캡쳐 플레이트를 55°C(SOD1의 경우) 및 53°C(GAPDH의 경우)에서 배양하였다(약 16 내지 20시간). 다음날, 캡쳐 플레이트를 300μl 이상의 1X 세척 완충액(뉴클라아제가 없는 물, 완충액 구성요소 1 및 세척 완충액 구성요소 2)으로 3회 세척하였다(마지막 세척 후, 플레이트를 뒤집어 이를 깨끗한 종이 타월로 빨아들여 닦아냈다). 100μl의 예비-증폭기 작동 시약을 SOD1 캡쳐 플레이트에 첨가하고, 이를 알루미늄 포일로 밀봉하여 55°C에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 1시간 동안 인큐베이션한 후, 세척 단계를 반복한 다음 100μl의 증폭기 작동 시약을 SOD1 및 GAPDH 캡쳐 플레이트 둘 다에 첨가하였다. 55°C(SOD1) 또는 53°C(GAPDH)에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 세척 및 건조 단계를 반복하고, 100 μl의 표지 프로브를 첨가하였다. 캡쳐 플레이트를 50°C(SOD1) 또는 53°C(GAPDH)에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 1X 세척 완충액으로 세척하고, 건조시킨 다음 100 μl의 기질을 캡쳐 플레이트에 첨가하였다. 어두운 곳에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 1420 발광 계수기(WALLAC VICTOR Light, Perkin Elmer, 독일 로트가우- 유게스하임)를 사용하여 발광도를 읽었다.
bDNA
데이터 분석
각각의 SOD1 siRNA 또는 대조군 siRNA에 대해, 4개의 웰을 동시에 형질감염시키고, 개별적인 데이터포인트를 각 웰로부터 수집하였다. 각각의 웰에 대하여, SOD1 mRNA 수준을 GAPDH mRNA 수준에 대해 정규화하였다. 주어진 SOD1 siRNA 활성을, 대조군 웰을 통해 평균화된 SOD1 mRNA 농도(GAPDH mRNA에 대해 정규화됨)에 대해 상대적인, 치료된 세포에서의 SOD1 mRNA 농도(GAPDH mRNA에 대해 정규화됨)의 퍼센트로 표현하였다.
표 4는, 표 3에 주어진 서열인 SOD1 siRNA를 1 nM 또는 0.1 nM에서 시험한 시험관내 HeLa 스크린의 결과를 제공한다. 각 SOD1 siRNA에 대하여, 대조군에 비해 치료된 세포에 남아있는 SOD1 mRNA의 평균 백분율(GAPDH mRNA에 대해 정규화됨), 및 표준 편차가 표 4에 제시되어 있다. 1 nM에서의 SOD1 siRNA의 수는 HeLa 세포에서 SOD1 mRNA 수준을 80% 초과까지 감소시키는데 효과적이었다. 또한, 0.1 nM에서의 SOD1 siRNA의 수는 HeLa 세포에서 SOD1 mRNA 수준을 80% 초과까지 감소시키는데 효과적이었다.
[표 4]
HeLa 세포에서 0.1 nM에서 가장 활성인 SOD1 siRNA 12개를 용량-반응 실험으로 평가하였다. 표 5는 HeLa 세포에서 이들 12개의 선별된 SOD1 siRNA에 대해 대조군에 비해 50% SOD1 mRNA 억제를 야기하는 IC50 농도를 제공한다. 이들 12개의 SOD1 siRNA는 실험 패러다임에서 특히 강력했으며, 1 내지 8 pM에서 IC50 값을 나타냈다.
[표 5]
이들 12개의 SOD1 siRNA에 대한 IC50을 확인하기 위해 사용된 HeLa 세포로부터의 용량 반응 데이터를 아래 표 6에 상세히 나타냈다. 모든 12개의 siRNA는 pM IC50을 갖는 것으로 측정되었다. 표 5에서 SOD1 siRNA에 대한 IC50 데이터는 아래 표 6에 제시된 데이터의 요약이다.
[표 6]
실시예
3.
SH
-
SY5Y
세포,
U87
세포 및 1차 인간 성상세포에서 내인성
SOD1
mRNA 발현에 대해 선별된 SOD1 siRNA의 시험관내 스크린
SH-SY5Y 세포를 ATCC (LGC Standards와 합명회사인 ATCC, 독일 베젤)로부터 입수하고, 가습된 인큐베이터에서 5% CO2를 가진 대기에서 37°C에서 15% FCS(GIBCO/Life Technologies의 초저 IgG), 1% L-글루타민(Biochrom GmbH, 독일 베를린) 및 1% Pen/Strep(Biochrom GmbH, 독일 베를린)을 함유하도록 보충된 Dulbecco MEM(Biochrom GmbH, 독일 베를린)에서 배양하였다.
U87MG 세포를 ATCC(LGC Standards와 합명회사인 ATCC, 독일 베젤)로부터 입수하고, 가습된 인큐베이터에서 5% CO2를 가진 대기에서 37°C에서 10% FCS(GIBCO/Life Technologies의 초저 IgG) 및 1% Pen/Strep(Biochrom GmbH, 독일 베를린)을 함유하도록 보충된 ATCC-제형화된 이글(Eagle) 최소 필수 배지(LGC Standards와 합명회사인 ATCC, 독일 베젤)에서 배양하였다.
1차 인간 성상세포를 LONZA(Lonza Sales Ltd, 스위스 바젤)로부터 입수하고, 가습된 인큐베이터에서 5% CO2를 가진 대기에서 37°C에서 AGM 싱글쿼트(SingleQuot) 키트(Lonza Sales Ltd, 스위스 바젤)로 보충된 ABM 기본 배지(Lonza Sales Ltd, 스위스 바젤)에서 배양하였다.
SH-SY5Y 세포에 대한 형질감염 시약이 리포펙타민2000(Invitrogen/Life Technologies)이고, U87 세포의 경우 RNAiMAX(Invitrogen/Life Technologies), 1차 인간 성상세포의 경우 리포펙타민 2000(Invitrogen/Life Technologies)이라는 것을 제외하고, HeLa세포에 대해 기술된 방식과 유사한 방식으로 SH-SY5Y 세포, U87MG 세포 및 1차 인간 성상세포를 12개의 선별된 siRNA(D-2757, D-2806, D-2860, D-2861, D-2875, D-2871, D-2758, D-2759, D-2866, D-2870, D-2823, D-2858)로 형질감염시키고, SOD1 및 GAPDH mRNA의 수준을 bDNA로 정량화하였다.
이들 12개의 SOD1 siRNA(D-2757, D-2806, D-2860, D-2861, D-2875, D-2871, D-2758, D-2759, D-2866, D-2870, D-2823, D-2858)에 대한 IC50을 확인하기 위해 SH-SY5Y 세포, U87MG 세포 및 1차 인간 성상세포로부터의 용량 반응 데이터를 사용하였고, 아래의 표 7, 8 및 9에 각각 상세하게 나타낸다. 모든 12개의 siRNA가 U87 세포에서 pM IC50을 갖는 것으로 측정되었다.
IC50 값이 표 10에 제공된다. 일반적으로 1차 인간 성상세포에서, IC50은 SH-SY5Y 및 U87MG 세포에서보다 더 높았다.
[표 7]
[표 8]
[표 9]
표 10에서 SOD1 siRNA에 대한 IC50 데이터는 아래 표 7, 8 및 9에 제시된 데이터의 요약이다.
[표 10]
실시예
4.
SOD1
을
표적화하는
siRNA
효과가 있는 것으로 밝혀진 SOD1 siRNA의 패신저-가이드 가닥 듀플렉스를 발현 벡터로 조작하고 중추신경계 세포 또는 신경세포의 세포주에 형질감염시켰다. siRNA 넉다운 연구에서 사용된 오버행이 siRNA에 대한 표준 dTdT이지만, 작제물내의 오버행은 임의의 디뉴클레오티드 오버행을 포함할 수 있다.
사용된 세포는 1차 세포이거나 유도 만능 줄기 세포(iPS 세포)로부터 유도될 수 있다.
이어서, SOD1 넉다운을 측정하고, 심도 서열분석을 수행하여 발현 벡터에 투여된 각 작제물에서 처리된 정확한 패신저 및 가이드 가닥을 결정한다.
가이드 대 패신저 가닥의 비를 계산하여 예컨대, RNA 유도된 침묵 복합체(RISC) 처리의 넉다운 효율을 결정한다.
N-말단을 서열분석하여 절단 부위를 결정하고 표적의 퍼센트 균일(homogeneous) 절단을 결정한다. 절단은 90%보다 높을 것으로 예측된다.
SOD1의 시험관내 넉다운을 분석하기 위해 병행 시험에서 HeLa 세포를 동시-형질감염시킨다. 루시페라제 작제물을 대조군으로서 사용하여 비표적 효과를 측정하였다.
심도 서열분석을 다시 수행한다.
실시예
5.
SOD1
을
표적화하는
패신저
및 가이드 서열
본 발명에 따라, SOD1 siRNA를 설계하였다. 이들이 표 11A 및 표 11B에 주어져 있다. 패신저 및 가이드 가닥을 이러한 표에 기술하였다. 표 11A 및 표 11B에서, 서열 명칭의 "miR" 구성요소는 miRNA 유전자의 서열 번호매김과 반드시 일치하지 않는다(예컨대, VOYmiR-101은 서열 명칭이며, 반드시 miR-101이 서열의 일부임을 의미하는 것은 아니다).
[표 11A]
[표 11B]
실시예 6. AAV-miRNA 벡터에서 SOD1 siRNA 작제물
표 11에 나열된 SOD1 siRNA의 패신저-가이드 가닥 듀플렉스를 AAV-miRNA 발현 벡터 내로 조작한다. 5'에서 3'로 기술된 ITR에서 ITR까지로의 작제물은 돌연변이체 ITR, 프로모터(CMV, U6 또는 CB6 프로모터(CMVie 인핸서, CBA 프로모터 및 SV40 인트론을 포함함), 표 11의 패신저 및 가이드 가닥(패신저와 가이드 가닥 사이에 루프, 패신저 가닥 앞에 5' 측부 영역 및 가이드 가닥 뒤에 3' 측부 영역을 가짐), 토끼 글로빈 폴리A 및 야생형 ITR을 포함한다. AAV-miRNA 발현 벡터의 효율을 시험하기 위해 시험관내 및 생체내 연구를 수행하였다.
실시예
7.
HeLa
세포에서의
작제물의
활성
실시예 6에 기술된 7개의 SOD1 siRNA 작제물(VOYmiR-103, VOYmiR-105, VOYmiR-108, VOYmiR-114, VOYmiR-119, VOYmiR-120, 및 VOYmiR-127) 및 이중 가닥의 mCherry 대조군을 HeLa 세포에 형질감염시켜 작제물의 활성을 시험하였다.
A. 패신저 및 가이드 가닥의 활성
7개의 SOD1 siRNA 작제물 및 이중 가닥의 mCherry 대조군을 HeLa 세포에 형질감염시켰다. 48시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하였다. 모든 7개의 SOD1 siRNA 작제물이 가이드 가닥의 75 내지 80% 넉다운의 높은 활성, 및 패신저 가닥의 낮은 활성 또는 활성이 없음을 나타냈다. SOD1 siRNA 후보 벡터의 가이드 가닥은 SOD1의 75 내지 80% 수율의 높은 활성을 보인 반면, 패신저 가닥은 낮거나 거의 없는 활성을 보였다.
B. SOD1에 대한 작제물의 활성
7개의 SOD1 siRNA 작제물 및 이중 가닥의 mCherry(dsCherry) 대조군을 1e4 vg/세포, 1e3 vg/세포, 또는 1e2 vg/세포의 MOI로 HeLa 세포에 형질감염시켰다. 72시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하였다. 모든 7개의 SOD1 siRNA 작제물이 1e3 vg/세포로 효율적인 넉다운을 보였다. 대부분의 SOD1 siRNA 작제물이 도 1에 나타난 바와 같이 높은 활성(75 내지 80% 넉다운)을 보였다.
실시예
8.
HEK
세포에서의
작제물의
활성
실시예 6에 기술된 30개의 SOD1 siRNA 작제물(VOYmiR-102.860, VOYmiR-102.861, VOYmiR-102.866, VOYmiR-102.870, VOYmiR-102.823, VOYmiR-104.860, VOYmiR-104.861, VOYmiR-104.866, VOYmiR-104.870, VOYmiR-104.823, VOYmiR-109.860, VOYmiR-109.861, VOYmiR-109.866, VOYmiR-109.870, VOYmiR-109.823, VOYmiR-114.860, VOYmiR-114.861, VOYmiR-114.866, VOYmiR-114.870, VOYmiR-114.823, VOYmiR-116.860, VOYmiR-116.861, VOYmiR-116.866, VOYmiR-116.870, VOYmiR-116.823, VOYmiR-127.860, VOYmiR-127.861, VOYmiR-127.866, VOYmiR-127.870, VOYmiR-127.823) 및 VOYmiR-114 및 이중 가닥의 mCherry 대조군을 세포에 형질감염시켜 작제물의 활성을 시험하였다.
A.
HEK293에서의
패신저
및 가이드 가닥의 활성
30개의 작제물 및 2개의 대조군을 HEK293T 세포에 형질감염시켰다. 24시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하였다. 대부분의 작제물이 가이드 가닥의 높은 활성(도 2) 및 패신저 가닥의 낮거나 없는 활성(도 3)을 보였다.
B.
HeLa에서의
패신저
및 가이드 가닥의 활성
30개의 작제물 및 2개의 대조군을 HeLa 세포에 형질감염시켰다. 48시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하였다. 대부분의 작제물이 가이드 가닥의 높은 활성(도4) 및 패신저 가닥의 낮거나 없는 활성(도 5)을 보였다.
C. HeLa 및 HEK293의 상호관계
30개의 작제물의 넉다운은 HeLa 및 HEK293 세포에서 유사하였다. 30개의 작제물은 작제물의 가이드 가닥에 대한 넉다운을 나타냈다(도 2 및 도 4 참조). 작제물의 대부분의 가이드 가닥은 70 내지 90%의 넉다운을 나타냈다.
30개의 작제물의 넉다운은 HeLa 및 HEK293 세포에서 유사하였다. 30개의 작제물은 작제물의 가이드 가닥에 대한 넉다운을 나타냈다(도 2 및 도 4 참조). 작제물의 대부분의 가이드 가닥은 70 내지 90%의 넉다운을 나타냈다.
삭제
D.
캡시드
선별
HeLa 및 HEK293의 최상의 작제물을 AAV 내에 포장하여 HeLa에 감염시킬 것이다. 작제물을 포장하기 위한 최상의 AAV를 결정하기 위해, AAV2 또는 AAV-DJ8에 포장된 mCherry를 HeLa 세포에 10 vg/세포, 1e2 vg/세포, 1e3 vg/세포, 1e4 vg/세포 또는 1e5 vg/세포의 MOI로 감염시키고, 40시간째에 발현을 평가하였다. AAV2를 최상의 작제물을 포장하기 위한 캡시드로서 선별하였다.
E.
AAV2
생산
HeLa 및 HEK293의 최상의 작제물을 AAV2(1.6 kb)에 포장하고 이중 가닥의 mCherry(dsmCherry) 대조군을 또한 포장하였다. 분석에 앞서, 포장된 작제물을 아이도익사놀(Idoixanol) 정제를 수행하였다. AAV 역가가 표 12에 나타나있다.
[표 12]
HeLa 세포에서의 SOD1 넉다운에 대한 형질도입 효과를 도 6에 나타낸다. 또한, HeLa 세포에서, 보다 큰 MOI(1.0E+05에 비해 1.0E+04)는 모든 작제물에 대해 증가된 넉다운을 나타낸 것은 아니다.
F. 인간 운동 뉴런 전구체(
HMNP
)에서의
작제물의
활성
실시예 8E에 기술된 바와 같은 상위 18개의 pri-miRNA 작제물 및 mCherry 대조군을 인간 운동 뉴런 전구체(HMNP) 세포에 10E5의 MOI로 감염시켰다. 48시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하였다. 약 절반의 작제물이 HMNP에서 50% 초과의 SOD1 침묵을 제공하였고, 이들 중 4개는 70% 초과의 침묵을 제공하였다(도 7).
G.
생체내
연구를 위한
작제물
선별
표적 서열에 주요 효과를 갖고, 카세트는 미미한 영향을 미치는 상위 12개의 작제물을 선별하였다. AAV-rh10 캡시드에 포장된 이러한 작제물을 주입을 위해 제형화하고 포유류에 투여하여 작제물의 생체내 효과를 연구하였다.
실시예
9.
작제물의
시험관내
연구
AAV2에 포장된 실시예 8D에 기술된 바와 같은 18개의 작제물 및 mCherry 대조군을 본 연구에 사용하였다. 본 연구를 위해, 배양 배지(500 ml의 DMEM/F-12 GLUTAMAXTM 보충물(Life Technologies, Cat#.10565-018), 50 ml FBS (Life Technologies, Cat#.16000-044, lot:1347556), 5 ml MEM 비필수 아미노산 용액 (100x) (Cat.# 11140-050) 및 5 ml HEPES (1M)(Life Technologies, Cat#.15630-080))중의 HEK293T 세포(Fisher Scientific, Cat.# HCL4517), 배양 배지(500 ml의 DMEM/F-12 GLUTAMAXTM 보충물(Life Technologies, Cat#.15630-080))중의 U251MG 세포 (P18)(Sigma, Cat#.09063001-1VL) 또는 배양 배지(AGM 싱글쿼트 키트 보충 & 성장 인자(Lonza, Cat#. CC-4123)로 보충된 ABM 기초 배지 500 ml(Lonza, Cat#. CC-3186))중의 정상 인간 성상세포(HA) (Lonza, Cat#CC-2565)를 사용하여 작제물을 시험하였다. HEK293T 세포(96 웰 플레이트 중 5x10E4 세포/웰), U251MG 세포(96 웰 플레이트 중 2x10E4 세포/웰) 및 HA 세포(96 웰 플레이트 중 2x10E4 세포/웰)를 씨딩하고 1.0E+05의 MOI를 사용하여 세포를 감염시켰다. 48시간 후에, 세포를 분석하여 그 결과를 표 13에 나타내었다.
[표 13]
대부분의 작제물에 대해 HEK293T 세포에서 80% 초과의 넉다운이 관찰되었다. 절반 초과의 작제물이 U251MG 세포 및 HA 세포에서 80% 초과의 넉다운을 보였다.
실시예
10. 용량 의존적인
SOD1
강하(lowering)
실시예 8E에 기술된 바와 같은 상위 18개의 pri-miRNA 작제물 중 4개 및 mCherry 대조군을 인간 성상 세포주(U251MG) 또는 1차 인간 성상세포(HA)에 1.0E+02, 1.0E+03, 1.0E+04, 1.0E+05 또는 1.0E+06의 MOI로 형질감염시켰다. 48시간 후에 내인성 mRNA 발현을 평가하고 용량-의존적인 사일런싱을 도 8(U251MG) 및 도 9(HA)에 나타냈다. 모든 작제물에서, 투여량의 증가는 또한 넉다운된 SOD1 mRNA의 양의 증가와 관련이 있었다.
실시예
11.
SOD1
넉다운의
시간 경과
2개의 pri-miRNA 작제물(VOYmiR-120 및 VOYmiR-122), SOD1 siRNA의 음성 대조군 및 양성 대조군을 인간 성상세포주(U251MG)에 형질감염시켰다. 도 10에 나타난 바와 같이, 상대적인 SOD1 mRNA를 60시간 동안 도출하였다. hSOD1의 70 내지 75% 넉다운이 뉴클레오펙터(Nucleofector) 형질감염 후에 2개의 pri-miRNA 작제물에서 나타났으며, 12 내지 24시간 창에서 가장 큰 넉다운이 관찰되었다.
실시예
12.
SOD1
넉다운
및 표준 퍼센트
VOYmiR-104를 50pM, 100 pM 및 150 pM의 농도로 HeLa 세포에 형질감염시키고, 비치료된(UT) 세포와 비교하였다. 도 11A 내지 도 11C에 나타난 바와 같이, 상대적인 SOD1 mRNA, 가이드 가닥의 퍼센트 및 패신저 가닥의 퍼센트를 36, 72, 108 및 144 시간에 도출하였다. 가장 높은 농도(150pM)는 가장 큰 발현의 감소를 나타냈지만, 모든 3개의 투여량은 SOD1 발현에서 유의한 감소를 나타냈다.
실시예
13.
SOD1
을
표적화하는
작제물
개 SOD1에 대해 작제물을 설계하였고 이러한 작제물을 표 14에 나타냈다. 개 SOD1은 본 발명에서 표적화된 영역에서 인간과 100% 보존되어 있다. 패신저 및 가이드 서열이 표에 기술되어 있다. 표 14에서, 서열 명칭의 "miR" 구성요소는 miRNA 유전자의 서열 번호와 반드시 일치하지 않는다(예컨대, dVOYmiR-102는 서열 명칭이며, 반드시 miR-102이 서열의 일부임을 의미하는 것은 아니다)
[표 14]
실시예
14.
조절성
폴리뉴클레오티드의 위치 효과
A. 바이러스
역가에
대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114 또는 VOYmiR-126)를 발현벡터(게놈 크기 2400 뉴클레오티드; scAAV)의 6개의 상이한 위치에 삽입하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. 바이러스 역가를 타크만(TaqMan) PCR을 사용하여 6번 위치 및 대조군(조절성 폴리뉴클레오티드가 없는 작제물; scAAV)에 대해 평가하였고 이의 결과를 표 15에 나타냈다.
[표 15]
B. 게놈 완전성 (integrity)에 대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 2400 뉴클레오티드; scAAV)의 6개의 상이한 위치에 삽입하였고, 조절성 폴리뉴클레오티드(scAAV)가 없는 대조군이다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. 바이러스 게놈을 정제된 AAV 제제물로부터 추출하고 중성의 아가로스 겔에서 수행(running)시켰다 절단된(truncated) 게놈이 모든 작제물에서 관찰되었고, 절단된 게놈의 대략적인 퍼센트(전체 중 퍼센트)가 표 16에 나타나 있다.
[표 16]
6번 위치에 절단된 게놈의 수가 가장 많았고, 4번 및 5번 위치에서 절단된 게놈의 양이 가장 적었다.
C.
넉다운
효율에 대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(AAV2)(게놈 크기 2400 뉴클레오티드; scAAV)의 6개의 상이한 위치에 삽입하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. HeLa 세포의 형질도입을 1 x 104 vg/세포l, 1 x 103 vg/세포 및 1 x 102 vg/세포로 수행하였다. SOD1 mRNA 발현(대조군(eGFP)의 % 로서)을 감염 72 시간 후에 결정하였고 그 결과를 표 17에 나타내었다.
[표 17]
3번 위치에서 가장 큰 SOD1 mRNA 발현(대조군의 %로서)을 가졌고 4번 위치에서 가장 낮은 SOD1 mRNA 발현(대조군의 %로서)을 가졌다.
실시예 15. 게놈 크기의 영향
A. 바이러스
역가에
대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 2 kb; scAAV)의 1번, 2번, 5번 및 6번 위치에 삽입하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. siRNA 분자가 없는 이중 가닥의 대조군(게놈 크기 1.6 kb; scAAV 대조군) 및 이중 가닥의 발현 벡터(scAAV miR114; ITR(105 뉴클레오티드) - 프로모터(약 900 뉴클레오티드)- siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드(158 뉴클레오티드)- 폴리A 서열(127 뉴클레오티드) 및 ITR) 뿐만 아니라 siRNA 분자가 없는 대조군을(eGFP; scAAV)을 비교하였다. 바이러스 역가를 타크만 PCR을 사용하여 평가하였고 이의 결과를 표 18에 나타냈다.
[표 18]
작제물의 5번 위치에서 가장 낮은 역가가 관찰되었고, 작제물의 2번 위치에서 가장 큰 역가가 관찰되었다.
B. 게놈 완전성 (integrity)에 대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 2 kb; scAAV)의 1번, 2번, 5번 및 6번 위치에 삽입하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. siRNA 분자가 없는 이중 가닥의 대조군(게놈 크기 1.6 kb; scAAV 대조군) 및 이중 가닥의 발현 벡터(scAAV miR114; ITR (105 뉴클레오티드) - 프로모터(약 900 뉴클레오티드)- siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드(158 뉴클레오티드)- 폴리A 서열(127 뉴클레오티드) 및 ITR) 뿐만 아니라 siRNA 분자가 없는 대조군(eGFP; scAAV)을 비교하였다. 절단된 게놈이 모든 작제물에서 관찰되었고, 절단된 게놈의 대략적인 퍼센트(전체 중 퍼센트)가 표 19에 나타나 있다.
[표 19]
모든 작제물은 몇몇 절단된 게놈을 갖는 것으로 확인되었다.
상이한 siRNA 분자의 효과를 결정하기 위해 추가 연구를 수행하였다. 도 12에 나타난 바와 같이, VOYmiR-114 및 VOYmiR-126 를 분리된 발현 벡터(게놈 크기 1.6 kb; scAAV)의 3번 위치에 삽입하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. VOYmiR-114 작제물의 경우, 벡터 게놈의 5' 말단(1526 뉴클레오티드)과 조절성 폴리뉴클레오티드의 중심(신축성 루프 (flexible loop)의 중심) 사이의 거리는 1115 뉴클레오티드이다. VOYmiR-126 작제물의 경우, 벡터 게놈의 5' 말단(1626 뉴클레오티드)과 조절성 폴리뉴클레오티드의 중심(신축성 루프의 중심) 사이의 거리는 1164 뉴클레오티드이다.
VOYmiR-114 작제물의 경우, 바이러스 역가(15-cm 디쉬 당 VG)는 약 1.1E+11 이었다. VOYmiR-126 작제물의 경우, 인트론 프로브 바이러스 역가(15-cm 디쉬 당 VG)는 약 1.2E+12 이었다. 대조군은 약 2.1E+11(15-cm 디쉬 당 VG) 이었다. VOYmir-114는 약 20%의 절단된 게놈을 갖고, VOYmiR-126는 약 15%의 절단된 게놈을 갖고, 대조군은 약 5%의 절단된 게놈을 갖는다.
실시예
16. 단일 가닥의
작제물의
영향
A. 바이러스
역가에
대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 폴리뉴클레오티드(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 4.7 kb; scAAV)의 1번, 3번 및 5번 위치에 삽입하고, 대조군 또한 siRNA 폴리뉴클레오티드(게놈 크기 2 kb; scAAV) 없이 시험하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. 바이러스 역가를 타크만 PCR을 사용하여 평가하였고 이의 결과를 표 20에 나타냈다.
[표 20]
3번 위치에서 가장 큰 바이러스 역가가 관찰되었고, 1번 위치 및 이어서 5번 위치가 뒤를 이었다.
B. 게놈 완전성 (integrity)에 대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 4.7 kb; scAAV)의 1번, 3번 및 5번 위치에 삽입하고, 대조군 또한 조절성 폴리뉴클레오티드(게놈 크기 2 kb; scAAV) 없이 시험하였다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. 바이러스 게놈을 정제된 AAV 제제물로부터 추출하고 중성의 아가로스 겔에서 수행(running)시켰다 절단된 게놈이 모든 작제물에서 관찰되었고, 절단된 게놈의 대략적인 퍼센트(전체 중 퍼센트)가 표 21에 나타나 있다.
[표 21]
5번 위치에서 가장 큰 수의 절단된 게놈을 가졌고, 3번 위치에서 가장 적은 양의 절단된 게놈을 가졌다.
C. 넉다운 효율에 대한 효과
도 12에 나타난 바와 같이, siRNA 분자(VOYmiR-114)를 발현벡터(게놈 크기 4.7 kb; scAAV)의 1번, 3번 및 5번 위치에 삽입하고, 대조군 또한 조절성 폴리뉴클레오티드(게놈 크기 2 kb; scAAV) 없이 시험하였다. siRNA 분자(게놈 크기 2 kb; ssAAV 대조군)가 없는 단일 가닥의 대조군, siRNA 분자(게놈 크기 1.6 kb; scAAV 대조군)가 없는 이중 가닥의 대조군 및 siRNA 분자를 가진 이중 가닥의 발현 벡터(게놈 크기 2.4 kb; scAAV miR114)가 있다. 도 12에서, "ITR"은 역위 말단 반복이고, "I"는 인트론을 나타내고, "P"는 폴리A이고 "MP"는 siRNA 분자를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드이다. HeLa 세포의 형질도입을 1 x 104 vg/세포l, 1 x 103 vg/세포 및 1 x 102 vg/세포로 수행하였다. SOD1 mRNA 발현(대조군(eGFP)의 % 로서)을 감염 72 시간 후에 결정하였고 그 결과를 표 22에 나타내었다.
[표 22]
3번 위치에서 가장 높은 SOD1 mRNA 발현(대조군의 % 로서)을 보였고, 이어서 1번 위치였고, 가장 낮은 SOD1 mRNA 발현(대조군의 %로서)을 갖는 단일 가닥의 작제물은 5번 위치였다. 단일 가닥의 작제물 중 그 어떤 것도 siRNA 폴리뉴클레오티드를 가진 이중 가닥의 대조군 만큼의 낮은 넉다운 효율을 갖지 않았다.
실시예
17.
생체내
SOD1
넉다운
생체내에서 pri-miRNA의 생물학적 활성을 평가하기 위해서, 자기-상보성인 pri-miRNA(VOYmiR-114.806, VOYmiR127.806, VOYmiR102.860, VOYmiR109.860, VOYmiR114.860, VOYmiR116.860, VOYmiR127.860, VOYmiR102.861, VOYmiR104.861, VOYmiR109.861, VOYmiR114.861, VOYmiR109.866, VOYmiR116.866, 또는 VOYmiR127.866)를 CBA 프로모터가 있는 AAV-DJ 내에 포장하였다.
마우스에, 이와 같이 포장된 pri-miRNA 또는 대조군 비히클만(5% 솔비톨 및 0.001% F-68이 있는 인산염-완충된 식염수)을 10분의 선조체내 주입으로 투여하였다. 인간 SOD1를 발현하는 약 20 내지 30 g의 체중의 암컷 또는 수컷의 Tg(SOD1)3Cje/J 마우스(Jackson Laboratory,메인 바하버)에 선조체를 표적화하는 시험 물질 5 uL를 단방향으로 주사하였다(정수리점(bregma)에 대해 전후측 +0.5 mm, 중외측 + 2 mm; 두개골 표면에 대해 배복방향 3.8 mm). 33 게이지 바늘이 구비된 사전-충진 펌프-조 해밀턴 미세-주사기(1701 모델, 10 μl)을 사용하여 시험 물질을 0.5 uL/분으로 주사하였다(시험 물질 당 5 마리). 주사 후 1, 2, 3, 4 또는 6주에, 동물을 희생시키고 뇌를 제거하여 1 mm 두정 판(coronal slab) 및 인접한 1 mm 선조체의 주입 부위를 포함하는 동측 선조를 해부하여 이를 냉동시켰다. 마우스 조직 샘플을 용균시키고, 인간 SOD1 단백질 수준, SOD1 및 마우스 GAPDH(mGAPDH) mRNA 수준을 정량하였다. SOD1 단백질 수준을 ELISA(eBioscience Affymetrix, 캐나다 샌디에고)로 정량하고, 총 단백질 수준을 BCA 분석법(ThermoFisher Scientific, 마이애미 월섬)으로 정량하였다. 각 조직 샘플에 대하여, 총 단백질에 대해 정규화된 SOD1 단백질의 수준을 평균 2회 측정으로 계산하였다. 이와 같이 정규화된 SOD1 단백질 수준을 추가로 비히클 군에 대해 정규화하고, 평균화하여 군(치료) 평균을 수득하였다. SOD1 및 mGAPDH mRNA 수준을 qRT-PCR로 정량하였다. 각 조직 샘플에 대하여 SOD1/mGAPDH(정규화된 SOD1 mRNA 수준) 비를 평균 3회 측정으로 계산하였다. 이와 같은 비를 평균화하여 군(치료) 평균을 수득하였다. 이들 군 평균을 추가로 비히클 군에 대해 정규화하였다.
시험 물질(1 x 1013 - 3 x 1013vg의 CBA 프로모터가 있는 AAV-DJ에 포장된 pri-miRNA) 또는 비히클을 척수강내 요추 볼루수로 비인간 영장류에 투여하였다. 약 2.5 내지 8.5 kg 체중의 암컷 시노몰구스 원숭이(필리핀 원숭이(Macaca fascicularis), CR Research Model Houston, 텍사스 휴스턴)에 요추에 위치한 카테터 팁이 구비된 단일 척수강내 카테터를 이식시켰다. 약 60분 간격으로 3회의 1 mL 볼루스 주사(1 mL/분)를 포함하는 시험 물질을 투여하였다(시험 물질 당 4 마리). 투여 후 4 내지 6주에 동물을 희생시키고, 생체분석 및 조직학적 평가를 위해 선별된 조직을 회수하였다. 비히클 군에 대해 상대적인 SOD1 단백질 및 mRNA 수준을 CBA 프로모터가 있는 AAV-DJ 내에 포장된 pri-miRNA로 치료한 후 억제에 대해 평가하였다.
실시예
18.
VOYmiR
-114.806을 사용한
생체내
SOD1
넉다운
Tg(SOD1)3Cje/J 마우스에서, VOYmiR-114.806을 실시예 17에 기술된 바와 같은 CBA 프로모터가 있는 AAV-DJ 내에 포장하였다. 3.7 x 109 vg의 투여량을 단방향 선조체내 투여를 통해 마우스에 투여하였다. 1주 또는 2주 후에, 정규화된 SOD1 단백질 수준에서 유의한 감소는 없었다; 정규화된 SOD1 단백질 수준은 1주 및 2주 후에 각각 비히클 대조군의 98±11%(표준편차) 및 98±10%였다. 3주까지, VOYmiR-114.806은 정규화된 SOD1 단백질 수준을 비히클 대조군의 84±9.0%로 감소시켰고, 이는 통계적으로 유의한 것이었다(p<0.05, 듀멧(Dunnett)의 사후 분석을 이용한 일원 분산분석). 4주 및 6주까지, VOYmiR-114.806은 정규화된 SOD1 단백질 수준을 비히클 대조군의 각각 73±7.9%(p < 0.0001) 및 75±7.4%(p<0.0001)로 감소시켰다. 이러한 결과는 CBA 프로모터가 있는 AAV-DJ 내에 포장된 VOYmiR-114.806이 생체내에서 SOD1 단백질 수준을 하향조절 하는데 효과적임을 보여준다. 추가로, 이러한 결과는, CBA 프로모터가 있는 AAVDJ 내에 포장된 VOYmiR-114.806의 3.7 x 109 vg 만큼 낮은 총 선조체내 투여량이 SOD1 단백질 수준을 유의하게 하향 조절함을 보여준다.
본 발명은 몇몇 설명된 구현예와 관련하여 일부 길이 및 일부 상세하게 설명되었지만, 임의의 이러한 특정 사항 또는 구현예 또는 임의의 특정한 구현예로 제한되어야 하는 것으로 의도된 것은 아니지만, 선행 기술의 관점에서 이러한 청구범위의 가장 광범위한 가능한 해석을 제공하고, 따라서 본 발명의 의도된 범위를 효과적으로 포함하도록 첨부된 청구범위를 참조하여 해석되어야 한다.
본원에서 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 다른 참조문헌은 그 전체가 참조로서 본원에 포함된다. 상충하는 경우, 정의를 포함하여 본 명세서에 따른다. 추가로, 섹션 말머리, 재료, 방법 및 실시예는 단지 예시적인 것이며 제한하려는 의도가 아니다.
SEQUENCE LISTING
<110> VOYAGER THERAPEUTICS, INC.
<120> COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS)
<130> 2057.1011PCT
<150> US 62/079,588
<151> 2014-11-14
<150> US 62/211,992
<151> 2015-08-31
<150> US 62/234,466
<151> 2015-09-29
<160> 396
<170> KopatentIn 3.0
<210> 1
<211> 981
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
gtttggggcc agagtgggcg aggcgcggag gtctggccta taaagtagtc gcggagacgg 60
ggtgctggtt tgcgtcgtag tctcctgcag cgtctggggt ttccgttgca gtcctcggaa 120
ccaggacctc ggcgtggcct agcgagttat ggcgacgaag gccgtgtgcg tgctgaaggg 180
cgacggccca gtgcagggca tcatcaattt cgagcagaag gaaagtaatg gaccagtgaa 240
ggtgtgggga agcattaaag gactgactga aggcctgcat ggattccatg ttcatgagtt 300
tggagataat acagcaggct gtaccagtgc aggtcctcac tttaatcctc tatccagaaa 360
acacggtggg ccaaaggatg aagagaggca tgttggagac ttgggcaatg tgactgctga 420
caaagatggt gtggccgatg tgtctattga agattctgtg atctcactct caggagacca 480
ttgcatcatt ggccgcacac tggtggtcca tgaaaaagca gatgacttgg gcaaaggtgg 540
aaatgaagaa agtacaaaga caggaaacgc tggaagtcgt ttggcttgtg gtgtaattgg 600
gatcgcccaa taaacattcc cttggatgta gtctgaggcc ccttaactca tctgttatcc 660
tgctagctgt agaaatgtat cctgataaac attaaacact gtaatcttaa aagtgtaatt 720
gtgtgacttt ttcagagttg ctttaaagta cctgtagtga gaaactgatt tatgatcact 780
tggaagattt gtatagtttt ataaaactca gttaaaatgt ctgtttcaat gacctgtatt 840
ttgccagact taaatcacag atgggtatta aacttgtcag aatttctttg tcattcaagc 900
ctgtgaataa aaaccctgta tggcacttat tatgaggcta ttaaaagaat ccaaattcaa 960
actaaaaaaa aaaaaaaaaa a 981
<210> 2
<211> 465
<212> DNA
<213> Macaca fascicularis
<400> 2
atggcgatga aggccgtgtg cgtgttgaag ggcgacagcc cagtgcaggg caccatcaat 60
ttcgagcaga aggaaagtaa tggaccagtg aaggtgtggg gaagcattac aggattgact 120
gaaggcctgc atggattcca tgttcatcag tttggagata atacacaagg ctgtaccagt 180
gcaggtcctc actttaatcc tctatccaga caacacggtg ggccaaagga tgaagagagg 240
catgttggag acctgggcaa tgtgactgct ggcaaagatg gtgtggccaa ggtgtctttc 300
gaagattctg tgatctcgct ctcaggagac cattccatca ttggccgcac attggtggtc 360
catgaaaaag cagatgactt gggcaaaggt ggaaatgaag aaagtaaaaa gacaggaaac 420
gctggaggtc gtctggcttg tggtgtaatt gggatcgccc aataa 465
<210> 3
<211> 464
<212> DNA
<213> Macaca mulatta
<400> 3
atggcgatga aggccgtgtg cgtgttgaag ggcgacagcc cagtgcaggg caccatcaat 60
ttcgagcaga aggaaagtaa tggaccagtg aaggtgtggg gaagcattac aggattgact 120
gaaggcctgc atggattcca tgttcatcag tttggagata atacacaagg ctgtaccagt 180
gcaggtcctc actttaatcc tctatccaga caacacggtg ggccaaagga tgaagagagg 240
catgttggag acctgggcaa tgtgactgct ggcaaagatg gtgtggccaa ggtgtctttc 300
gaagattctg tgatctcgct ctcaggagac cattccatca ttggccgcac attggtggtc 360
catgaaaaag cagatgactt gggcaaaggt ggaaatgaag aaagtaaaaa gacaggaaac 420
gctggaggtc gtctggcttg tggtgtaatt gggatcgcca ataa 464
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 4
cggaggucug gccuauaact t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 5
ggaggucugg ccuauaaact t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 6
gaggucuggc cuauaaagct t 21
<210> 7
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 7
aggucuggcc uauaaaguct t 21
<210> 8
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 8
ggucuggccu auaaaguact t 21
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 9
ucuggccuau aaaguaguct t 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 10
cuggccuaua aaguagucct t 21
<210> 11
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 11
uggccuauaa aguagucgct t 21
<210> 12
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 12
ggccuauaaa guagucgcct t 21
<210> 13
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 13
gccuauaaag uagucgcgct t 21
<210> 14
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 14
ccuauaaagu agucgcggct t 21
<210> 15
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 15
gucguagucu ccugcagcct t 21
<210> 16
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 16
cguagucucc ugcagcguct t 21
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 17
guagucuccu gcagcgucct t 21
<210> 18
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 18
uagucuccug cagcgucuct t 21
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 19
auggcgacga aggccgugct t 21
<210> 20
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 20
cgacgaaggc cgugugcgct t 21
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 21
gaaggccgug ugcgugcuct t 21
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 22
ggccgugugc gugcugaact t 21
<210> 23
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 23
agggcgacgg cccagugcct t 21
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 24
ugcagggcau caucaauuct t 21
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 25
gcagggcauc aucaauuuct t 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 26
agggcaucau caauuucgct t 21
<210> 27
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 27
gggcaucauc aauuucgact t 21
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 28
ggcaucauca auuucgagct t 21
<210> 29
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 29
gcaucaucaa uuucgagcct t 21
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 30
caucaucaau uucgagcact t 21
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 31
aauuucgagc agaaggaact t 21
<210> 32
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 32
uucgagcaga aggaaaguct t 21
<210> 33
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 33
ucgagcagaa ggaaaguact t 21
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 34
aagguguggg gaagcauuct t 21
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 35
ggugugggga agcauuaact t 21
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 36
gacugacuga aggccugcct t 21
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 37
cugacugaag gccugcauct t 21
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 38
ugacugaagg ccugcaugct t 21
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 39
ugaaggccug cauggauuct t 21
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 40
gaaggccugc auggauucct t 21
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 41
ugcauggauu ccauguucct t 21
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 42
cauggauucc auguucauct t 21
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 43
ggauuccaug uucaugagct t 21
<210> 44
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 44
uuccauguuc augaguuuct t 21
<210> 45
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 45
guucaugagu uuggagauct t 21
<210> 46
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 46
uucaugaguu uggagauact t 21
<210> 47
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 47
ugaguuugga gauaauacct t 21
<210> 48
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 48
gaguuuggag auaauacact t 21
<210> 49
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 49
aggcuguacc agugcaggct t 21
<210> 50
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 50
ggcuguacca gugcagguct t 21
<210> 51
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 51
gcagguccuc acuuuaauct t 21
<210> 52
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 52
cagguccuca cuuuaaucct t 21
<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 53
ucacuuuaau ccucuaucct t 21
<210> 54
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 54
cuauccagaa aacacgguct t 21
<210> 55
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 55
uauccagaaa acacggugct t 21
<210> 56
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 56
auccagaaaa cacgguggct t 21
<210> 57
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 57
ccagaaaaca cggugggcct t 21
<210> 58
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 58
gaaaacacgg ugggccaact t 21
<210> 59
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 59
aaaacacggu gggccaaact t 21
<210> 60
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 60
cggugggcca aaggaugact t 21
<210> 61
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 61
aggaugaaga gaggcaugct t 21
<210> 62
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 62
augaagagag gcauguugct t 21
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 63
gagaggcaug uuggagacct t 21
<210> 64
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 64
agaggcaugu uggagacuct t 21
<210> 65
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 65
auguuggaga cuugggcact t 21
<210> 66
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 66
guuggagacu ugggcaauct t 21
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 67
ggagacuugg gcaaugugct t 21
<210> 68
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 68
ggcaauguga cugcugacct t 21
<210> 69
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 69
caaugugacu gcugacaact t 21
<210> 70
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 70
cugacaaaga ugguguggct t 21
<210> 71
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 71
ugacaaagau gguguggcct t 21
<210> 72
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 72
cucaggagac cauugcauct t 21
<210> 73
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 73
ucaggagacc auugcaucct t 21
<210> 74
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 74
agaccauugc aucauuggct t 21
<210> 75
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 75
gaccauugca ucauuggcct t 21
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 76
auugcaucau uggccgcact t 21
<210> 77
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 77
cauuggccgc acacugguct t 21
<210> 78
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 78
cgcacacugg ugguccauct t 21
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 79
cacacuggug guccaugact t 21
<210> 80
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 80
acacuggugg uccaugaact t 21
<210> 81
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 81
ugguggucca ugaaaaagct t 21
<210> 82
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 82
ugguccauga aaaagcagct t 21
<210> 83
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 83
aaagcagaug acuugggcct t 21
<210> 84
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 84
gcagaugacu ugggcaaact t 21
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 85
augacuuggg caaaggugct t 21
<210> 86
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 86
ugacuugggc aaagguggct t 21
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 87
gacuugggca aagguggact t 21
<210> 88
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 88
guacaaagac aggaaacgct t 21
<210> 89
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 89
acaaagacag gaaacgcuct t 21
<210> 90
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 90
caaagacagg aaacgcugct t 21
<210> 91
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 91
aggaaacgcu ggaagucgct t 21
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 92
gucguuuggc uuguggugct t 21
<210> 93
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 93
ucguuuggcu ugugguguct t 21
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 94
cguuuggcuu gugguguact t 21
<210> 95
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 95
guuuggcuug ugguguaact t 21
<210> 96
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 96
uuggcuugug guguaauuct t 21
<210> 97
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 97
ggcuuguggu guaauuggct t 21
<210> 98
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 98
gcuuguggug uaauugggct t 21
<210> 99
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 99
cuuguggugu aauugggact t 21
<210> 100
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 100
ugugguguaa uugggaucct t 21
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 101
gugguguaau ugggaucgct t 21
<210> 102
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 102
ugguguaauu gggaucgcct t 21
<210> 103
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 103
guaauuggga ucgcccaact t 21
<210> 104
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 104
uaauugggau cgcccaauct t 21
<210> 105
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 105
aauugggauc gcccaauact t 21
<210> 106
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 106
auugggaucg cccaauaact t 21
<210> 107
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 107
uugggaucgc ccaauaaact t 21
<210> 108
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 108
ugggaucgcc caauaaacct t 21
<210> 109
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 109
gggaucgccc aauaaacact t 21
<210> 110
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 110
aucgcccaau aaacauucct t 21
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 111
ccaauaaaca uucccuugct t 21
<210> 112
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 112
caauaaacau ucccuuggct t 21
<210> 113
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 113
aauaaacauu cccuuggact t 21
<210> 114
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 114
auaaacauuc ccuuggauct t 21
<210> 115
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 115
uaaacauucc cuuggaugct t 21
<210> 116
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 116
aaacauuccc uuggauguct t 21
<210> 117
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 117
aacauucccu uggauguact t 21
<210> 118
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 118
auucccuugg auguagucct t 21
<210> 119
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 119
cuuggaugua gucugaggct t 21
<210> 120
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 120
cugaggcccc uuaacucact t 21
<210> 121
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 121
gaggccccuu aacucaucct t 21
<210> 122
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 122
aggccccuua acucaucuct t 21
<210> 123
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 123
ccccuuaacu caucuguuct t 21
<210> 124
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 124
cccuuaacuc aucuguuact t 21
<210> 125
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 125
ccuuaacuca ucuguuauct t 21
<210> 126
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 126
cuuaacucau cuguuaucct t 21
<210> 127
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 127
uuaacucauc uguuauccct t 21
<210> 128
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 128
uaacucaucu guuauccuct t 21
<210> 129
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 129
aacucaucug uuauccugct t 21
<210> 130
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 130
guuauccugc uagcuguact t 21
<210> 131
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 131
cugcuagcug uagaaaugct t 21
<210> 132
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 132
ugcuagcugu agaaauguct t 21
<210> 133
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 133
gcuguagaaa uguauccuct t 21
<210> 134
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 134
cuguagaaau guauccugct t 21
<210> 135
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 135
uguagaaaug uauccugact t 21
<210> 136
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 136
guagaaaugu auccugauct t 21
<210> 137
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 137
aaauguaucc ugauaaacct t 21
<210> 138
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 138
guauccugau aaacauuact t 21
<210> 139
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 139
uuaaacacug uaaucuuact t 21
<210> 140
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 140
acuguaaucu uaaaagugct t 21
<210> 141
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 141
cuguaaucuu aaaaguguct t 21
<210> 142
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 142
uguaaucuua aaaguguact t 21
<210> 143
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 143
guaaucuuaa aaguguaact t 21
<210> 144
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 144
cuuaaaagug uaauugugct t 21
<210> 145
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 145
uaccuguagu gagaaacuct t 21
<210> 146
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 146
uuaugaucac uuggaagact t 21
<210> 147
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 147
augaucacuu ggaagauuct t 21
<210> 148
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 148
aucacuugga agauuuguct t 21
<210> 149
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 149
uggaagauuu guauaguuct t 21
<210> 150
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 150
uauaaaacuc aguuaaaact t 21
<210> 151
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 151
aaacucaguu aaaaugucct t 21
<210> 152
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 152
gucuguuuca augaccugct t 21
<210> 153
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 153
augaccugua uuuugccact t 21
<210> 154
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 154
accuguauuu ugccagacct t 21
<210> 155
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 155
ccuguauuuu gccagacuct t 21
<210> 156
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 156
uaaaucacag auggguauct t 21
<210> 157
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 157
aucacagaug gguauuaact t 21
<210> 158
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 158
ucacagaugg guauuaaact t 21
<210> 159
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 159
acagaugggu auuaaacuct t 21
<210> 160
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 160
cagaugggua uuaaacuuct t 21
<210> 161
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 161
agauggguau uaaacuugct t 21
<210> 162
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 162
auggguauua aacuugucct t 21
<210> 163
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 163
uaaacuuguc agaauuucct t 21
<210> 164
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 164
ucauucaagc cugugaauct t 21
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 165
cauucaagcc ugugaauact t 21
<210> 166
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 166
aauaaaaacc cuguauggct t 21
<210> 167
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 167
auaaaaaccc uguauggcct t 21
<210> 168
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 168
aacccuguau ggcacuuact t 21
<210> 169
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 169
acccuguaug gcacuuauct t 21
<210> 170
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 170
gaggcuauua aaagaaucct t 21
<210> 171
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 171
aaagaaucca aauucaaact t 21
<210> 172
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 172
gaauccaaau ucaaacuact t 21
<210> 173
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 173
uuuauaggcc agaccuccgt t 21
<210> 174
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 174
uuuuauaggc cagaccucct t 21
<210> 175
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 175
ucuuuauagg ccagaccuct t 21
<210> 176
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 176
uacuuuauag gccagaccut t 21
<210> 177
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 177
uuacuuuaua ggccagacct t 21
<210> 178
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 178
uacuacuuua uaggccagat t 21
<210> 179
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 179
ugacuacuuu auaggccagt t 21
<210> 180
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 180
ucgacuacuu uauaggccat t 21
<210> 181
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 181
ugcgacuacu uuauaggcct t 21
<210> 182
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 182
ucgcgacuac uuuauaggct t 21
<210> 183
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 183
uccgcgacua cuuuauaggt t 21
<210> 184
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 184
ugcugcagga gacuacgact t 21
<210> 185
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 185
uacgcugcag gagacuacgt t 21
<210> 186
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 186
ugacgcugca ggagacuact t 21
<210> 187
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 187
uagacgcugc aggagacuat t 21
<210> 188
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 188
ucacggccuu cgucgccaut t 21
<210> 189
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 189
ucgcacacgg ccuucgucgt t 21
<210> 190
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 190
uagcacgcac acggccuuct t 21
<210> 191
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 191
uuucagcacg cacacggcct t 21
<210> 192
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 192
ugcacugggc cgucgcccut t 21
<210> 193
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 193
uaauugauga ugcccugcat t 21
<210> 194
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 194
uaaauugaug augcccugct t 21
<210> 195
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 195
ucgaaauuga ugaugcccut t 21
<210> 196
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 196
uucgaaauug augaugccct t 21
<210> 197
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 197
ucucgaaauu gaugaugcct t 21
<210> 198
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 198
ugcucgaaau ugaugaugct t 21
<210> 199
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 199
uugcucgaaa uugaugaugt t 21
<210> 200
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 200
uuuccuucug cucgaaauut t 21
<210> 201
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 201
uacuuuccuu cugcucgaat t 21
<210> 202
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 202
uuacuuuccu ucugcucgat t 21
<210> 203
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 203
uaaugcuucc ccacaccuut t 21
<210> 204
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 204
uuuaaugcuu ccccacacct t 21
<210> 205
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 205
ugcaggccuu cagucaguct t 21
<210> 206
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 206
uaugcaggcc uucagucagt t 21
<210> 207
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 207
ucaugcaggc cuucagucat t 21
<210> 208
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 208
uaauccaugc aggccuucat t 21
<210> 209
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 209
ugaauccaug caggccuuct t 21
<210> 210
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 210
ugaacaugga auccaugcat t 21
<210> 211
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 211
uaugaacaug gaauccaugt t 21
<210> 212
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 212
ucucaugaac auggaaucct t 21
<210> 213
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 213
uaaacucaug aacauggaat t 21
<210> 214
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 214
uaucuccaaa cucaugaact t 21
<210> 215
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 215
uuaucuccaa acucaugaat t 21
<210> 216
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 216
uguauuaucu ccaaacucat t 21
<210> 217
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 217
uuguauuauc uccaaacuct t 21
<210> 218
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 218
uccugcacug guacagccut t 21
<210> 219
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 219
uaccugcacu gguacagcct t 21
<210> 220
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 220
uauuaaagug aggaccugct t 21
<210> 221
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 221
ugauuaaagu gaggaccugt t 21
<210> 222
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 222
ugauagagga uuaaagugat t 21
<210> 223
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 223
uaccguguuu ucuggauagt t 21
<210> 224
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 224
ucaccguguu uucuggauat t 21
<210> 225
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 225
uccaccgugu uuucuggaut t 21
<210> 226
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 226
ugcccaccgu guuuucuggt t 21
<210> 227
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 227
uuuggcccac cguguuuuct t 21
<210> 228
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 228
uuuuggccca ccguguuuut t 21
<210> 229
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 229
uucauccuuu ggcccaccgt t 21
<210> 230
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 230
ucaugccucu cuucauccut t 21
<210> 231
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 231
ucaacaugcc ucucuucaut t 21
<210> 232
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 232
ugucuccaac augccucuct t 21
<210> 233
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 233
uagucuccaa caugccucut t 21
<210> 234
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 234
uugcccaagu cuccaacaut t 21
<210> 235
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 235
uauugcccaa gucuccaact t 21
<210> 236
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 236
ucacauugcc caagucucct t 21
<210> 237
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 237
ugucagcagu cacauugcct t 21
<210> 238
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 238
uuugucagca gucacauugt t 21
<210> 239
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 239
uccacaccau cuuugucagt t 21
<210> 240
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 240
ugccacacca ucuuugucat t 21
<210> 241
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 241
uaugcaaugg ucuccugagt t 21
<210> 242
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 242
ugaugcaaug gucuccugat t 21
<210> 243
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 243
uccaaugaug caauggucut t 21
<210> 244
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 244
ugccaaugau gcaaugguct t 21
<210> 245
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 245
uugcggccaa ugaugcaaut t 21
<210> 246
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 246
uaccagugug cggccaaugt t 21
<210> 247
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 247
uauggaccac cagugugcgt t 21
<210> 248
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 248
uucauggacc accagugugt t 21
<210> 249
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 249
uuucauggac caccagugut t 21
<210> 250
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 250
ucuuuuucau ggaccaccat t 21
<210> 251
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 251
ucugcuuuuu cauggaccat t 21
<210> 252
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 252
ugcccaaguc aucugcuuut t 21
<210> 253
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 253
uuuugcccaa gucaucugct t 21
<210> 254
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 254
ucaccuuugc ccaagucaut t 21
<210> 255
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 255
uccaccuuug cccaagucat t 21
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 256
uuccaccuuu gcccaaguct t 21
<210> 257
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 257
ucguuuccug ucuuuguact t 21
<210> 258
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 258
uagcguuucc ugucuuugut t 21
<210> 259
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 259
ucagcguuuc cugucuuugt t 21
<210> 260
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 260
ucgacuucca gcguuuccut t 21
<210> 261
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 261
ucaccacaag ccaaacgact t 21
<210> 262
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 262
uacaccacaa gccaaacgat t 21
<210> 263
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 263
uuacaccaca agccaaacgt t 21
<210> 264
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 264
uuuacaccac aagccaaact t 21
<210> 265
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 265
uaauuacacc acaagccaat t 21
<210> 266
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 266
uccaauuaca ccacaagcct t 21
<210> 267
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 267
ucccaauuac accacaagct t 21
<210> 268
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 268
uucccaauua caccacaagt t 21
<210> 269
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 269
ugaucccaau uacaccacat t 21
<210> 270
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 270
ucgaucccaa uuacaccact t 21
<210> 271
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 271
ugcgauccca auuacaccat t 21
<210> 272
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 272
uuugggcgau cccaauuact t 21
<210> 273
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 273
uauugggcga ucccaauuat t 21
<210> 274
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 274
uuauugggcg aucccaauut t 21
<210> 275
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 275
uuuauugggc gaucccaaut t 21
<210> 276
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 276
uuuuauuggg cgaucccaat t 21
<210> 277
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 277
uguuuauugg gcgaucccat t 21
<210> 278
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 278
uuguuuauug ggcgauccct t 21
<210> 279
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 279
ugaauguuua uugggcgaut t 21
<210> 280
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 280
ucaagggaau guuuauuggt t 21
<210> 281
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 281
uccaagggaa uguuuauugt t 21
<210> 282
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 282
uuccaaggga auguuuauut t 21
<210> 283
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 283
uauccaaggg aauguuuaut t 21
<210> 284
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 284
ucauccaagg gaauguuuat t 21
<210> 285
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 285
uacauccaag ggaauguuut t 21
<210> 286
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 286
uuacauccaa gggaauguut t 21
<210> 287
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 287
ugacuacauc caagggaaut t 21
<210> 288
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 288
uccucagacu acauccaagt t 21
<210> 289
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 289
uugaguuaag gggccucagt t 21
<210> 290
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 290
ugaugaguua aggggccuct t 21
<210> 291
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 291
uagaugaguu aaggggccut t 21
<210> 292
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 292
uaacagauga guuaaggggt t 21
<210> 293
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 293
uuaacagaug aguuaagggt t 21
<210> 294
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 294
uauaacagau gaguuaaggt t 21
<210> 295
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 295
ugauaacaga ugaguuaagt t 21
<210> 296
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 296
uggauaacag augaguuaat t 21
<210> 297
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 297
uaggauaaca gaugaguuat t 21
<210> 298
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 298
ucaggauaac agaugaguut t 21
<210> 299
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 299
uuacagcuag caggauaact t 21
<210> 300
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 300
ucauuucuac agcuagcagt t 21
<210> 301
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 301
uacauuucua cagcuagcat t 21
<210> 302
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 302
uaggauacau uucuacagct t 21
<210> 303
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 303
ucaggauaca uuucuacagt t 21
<210> 304
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 304
uucaggauac auuucuacat t 21
<210> 305
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 305
uaucaggaua cauuucuact t 21
<210> 306
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 306
uguuuaucag gauacauuut t 21
<210> 307
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 307
uuaauguuua ucaggauact t 21
<210> 308
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 308
uuaagauuac aguguuuaat t 21
<210> 309
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 309
ucacuuuuaa gauuacagut t 21
<210> 310
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 310
uacacuuuua agauuacagt t 21
<210> 311
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 311
uuacacuuuu aagauuacat t 21
<210> 312
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 312
uuuacacuuu uaagauuact t 21
<210> 313
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 313
ucacaauuac acuuuuaagt t 21
<210> 314
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 314
uaguuucuca cuacagguat t 21
<210> 315
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 315
uucuuccaag ugaucauaat t 21
<210> 316
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 316
uaaucuucca agugaucaut t 21
<210> 317
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 317
uacaaaucuu ccaagugaut t 21
<210> 318
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 318
uaacuauaca aaucuuccat t 21
<210> 319
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 319
uuuuuaacug aguuuuauat t 21
<210> 320
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 320
ugacauuuua acugaguuut t 21
<210> 321
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 321
ucaggucauu gaaacagact t 21
<210> 322
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 322
uuggcaaaau acaggucaut t 21
<210> 323
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 323
ugucuggcaa aauacaggut t 21
<210> 324
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 324
uagucuggca aaauacaggt t 21
<210> 325
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 325
uauacccauc ugugauuuat t 21
<210> 326
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 326
uuuaauaccc aucugugaut t 21
<210> 327
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 327
uuuuaauacc caucugugat t 21
<210> 328
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 328
uaguuuaaua cccaucugut t 21
<210> 329
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 329
uaaguuuaau acccaucugt t 21
<210> 330
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 330
ucaaguuuaa uacccaucut t 21
<210> 331
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 331
ugacaaguuu aauacccaut t 21
<210> 332
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 332
ugaaauucug acaaguuuat t 21
<210> 333
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 333
uauucacagg cuugaaugat t 21
<210> 334
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 334
uuauucacag gcuugaaugt t 21
<210> 335
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 335
uccauacagg guuuuuauut t 21
<210> 336
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 336
ugccauacag gguuuuuaut t 21
<210> 337
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 337
uuaagugcca uacaggguut t 21
<210> 338
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 338
uauaagugcc auacagggut t 21
<210> 339
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 339
ugauucuuuu aauagccuct t 21
<210> 340
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 340
uuuugaauuu ggauucuuut t 21
<210> 341
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 341
uuaguuugaa uuuggauuct t 21
<210> 342
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 342
caaugugacu gcugacaacc c 21
<210> 343
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 343
uuugucagca gucacauugu u 21
<210> 344
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 344
caaugugacu gcugacaauc c 21
<210> 345
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 345
caaugugacu gcugacaagc c 21
<210> 346
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 346
caaugugacu gcugacaaac c 21
<210> 347
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 347
caaugugaca gcugacaaac c 21
<210> 348
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 348
caaugugacu gcugacaacc 20
<210> 349
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 349
caaugugacu gcugacaauc cc 22
<210> 350
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 350
caaugugacu gcugacaaca c 21
<210> 351
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 351
uuugucagca gucacauugu c 21
<210> 352
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 352
caaugugacu gcugacaaau c 21
<210> 353
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 353
caaugugacu gcugacaauu c 21
<210> 354
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 354
uuugucagca gucacauuga c 21
<210> 355
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 355
caaugugacu gcugacaauc cc 22
<210> 356
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 356
cgacgaaggc cgugugcgcc c 21
<210> 357
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 357
ucgcacacgg ccuucgucgu u 21
<210> 358
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 358
ugacuugggc aaagguggcc c 21
<210> 359
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 359
uccaccuuug cccaagucau u 21
<210> 360
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 360
aacucaucug uuauccugcc c 21
<210> 361
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 361
ucaggauaac agaugaguuu u 21
<210> 362
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 362
ccccuuaacu caucuguucc c 21
<210> 363
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 363
uaacagauga guuaaggggu u 21
<210> 364
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 364
cccuuaacuc aucuguuacc c 21
<210> 365
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 365
uuaacagaug aguuaagggu u 21
<210> 366
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 366
aacucaucug uuaucuugcc c 21
<210> 367
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 367
gcuguggaaa uguaucuucc c 21
<210> 368
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 368
uaggauacau uucuacagcu u 21
<210> 369
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 369
ugacuugggc aaaggugagc c 21
<210> 370
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 370
ccccuuaacu caucuguugc c 21
<210> 371
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 371
cccuuaacuc aucuguuagc c 21
<210> 372
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 372
aacucaucug uuaucuuagc c 21
<210> 373
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 373
gcuguggaaa uguaucuugc c 21
<210> 374
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 374
ugacuugggc aaagguaggc c 21
<210> 375
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 375
ccccuuaaca caucuguuac c 21
<210> 376
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 376
cccuuaacug aucuguuaac c 21
<210> 377
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 377
aacucaucuc uuaucuugcc c 21
<210> 378
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 378
gcuguggaau uguaucuugc c 21
<210> 379
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 379
ugacuugggg aaaggugagc c 21
<210> 380
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 380
aacucaucug uuaucuuggc c 21
<210> 381
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 381
ccccuuaacu cauuuguucc c 21
<210> 382
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 382
ugacuugggc aaagguagcc c 21
<210> 383
<211> 19
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 383
caaugugacu gcugacaaa 19
<210> 384
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 384
uuugucagca gucacauugu c 21
<210> 385
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 385
gcagguccuc acuuuaaugc c 21
<210> 386
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 386
gauuaaagug aggaccugcu u 21
<210> 387
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 387
ggcaauguga cugcugaccc c 21
<210> 388
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 388
ugucagcagu cacauugccu u 21
<210> 389
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 389
gcagguccuc acuuuaauuc c 21
<210> 390
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 390
ggcaauguga cugcugaugc c 21
<210> 391
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 391
gcagguccuc acuuuaaucc c 21
<210> 392
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 392
ggcaauguga cugcugauac c 21
<210> 393
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 393
gcagguccug acuuuaaucc c 21
<210> 394
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 394
ggcaaugugu cugcugauac c 21
<210> 395
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 395
gauuaaagug aggaccugcu uu 22
<210> 396
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<400> 396
ugucagcagu cacauugccu uu 22
Claims (32)
- 센스 가닥 서열 및 안티센스 가닥 서열을 포함하는, SOD1의 발현을 억제하기 위한 siRNA 듀플렉스로서, 상기 센스 가닥 서열은 서열번호 51의 뉴클레오티드 1 내지 18을 포함하고, 상기 안티센스 가닥 서열은 서열번호 220의 뉴클레오티드 1 내지 19를 포함하는, siRNA 듀플렉스.
- 제1항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열은 상보성 영역을 포함하고, 상기 상보성 영역은 17 내지 20개의 뉴클레오티드 길이인, siRNA 듀플렉스.
- 제1항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열은 독립적으로 20개, 21개 또는 22개의 뉴클레오티드 길이인, siRNA 듀플렉스.
- 제1항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열의 적어도 하나가 적어도 1개 또는 2개 뉴클레오티드의 3'오버행을 포함하는, siRNA 듀플렉스.
- 제1항의 siRNA 듀플렉스를 포함하는, SOD1의 발현을 억제하기 위한 조절성 폴리뉴클레오티드.
- 제5항에 있어서,
(i) 5' 측부 영역 (flanking region);
(ii) 루프 영역; 및
(iii) 3' 측부 영역
을 포함하는, 조절성 폴리뉴클레오티드. - 2개의 역위된 말단 반복부 (ITR) 사이에 위치한 핵산 서열을 포함하는 아데노-관련 바이러스 (AAV) 벡터 게놈으로서, 상기 핵산 서열이 제5항의 조절성 폴리뉴클레오티드를 암호화하는, 아데노-관련 바이러스 벡터 게놈.
- 2개의 역위 말단 반복부 (ITR) 사이에 위치한 핵산 서열을 포함하는 아데노-관련 바이러스 (AAV) 벡터 게놈으로서, 상기 핵산 서열은 siRNA 듀플렉스의 센스 가닥 서열 및 안티센스 가닥 서열을 암호화하고; 상기 센스 가닥 서열은 서열번호 51의 뉴클레오티드 1 내지 18을 포함하고, 상기 안티센스 가닥 서열은 서열번호 220의 뉴클레오티드 1 내지 19를 포함하는, 아데노-관련 바이러스 (AAV) 벡터 게놈.
- 제8항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열은 상보성 영역을 포함하고, 상기 상보성 영역은 17 내지 20개의 뉴클레오티드 길이인, AAV 벡터 게놈.
- 제8항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열은 독립적으로 20개, 21개 또는 22개의 뉴클레오티드 길이인, AAV 벡터 게놈.
- 제8항에 있어서, 상기 센스 가닥 서열 및 상기 안티센스 가닥 서열의 적어도 하나가 적어도 1개 또는 2개 뉴클레오티드의 3'오버행을 포함하는, AAV 벡터 게놈.
- 제11항에 있어서, 상기 siRNA 듀플렉스를 포함하는 조절성 폴리뉴클레오티드를 추가로 암호화하는, AAV 벡터 게놈.
- 제12항에 있어서, 상기 조절성 폴리뉴클레오티드가:
(i) 5' 측부 영역;
(ii) 루프 영역; 및
(iii) 3' 측부 영역
을 포함하는, AAV 벡터 게놈. - 제8항에 있어서,
(i) 프로모터;
(ii) 인핸서;
(iii) 인트론;
(iv) 폴리 A 서열,
또는 이들의 조합을 추가로 포함하는, AAV 벡터 게놈. - 제14항에 있어서, 상기 프로모터가 유비퀴터스(ubiquitous) 프로모터 또는 세포-특이적 프로모터인, AAV 벡터 게놈.
- 제7항 내지 제15항 중 어느 한 항의 AAV 벡터 게놈 및 AAV 캡시드를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스 (AAV) 입자.
- 제16항에 있어서, AAV9 캡시드 또는 이의 변이체, AAV5 캡시드 또는 이의 변이체, 또는 AAVrh10 캡시드 또는 이의 변이체를 포함하는, 재조합 AAV 입자.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 siRNA 듀플렉스를 암호화하는 벡터.
- 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 siRNA 듀플렉스를 포함하는 세포.
- 대상체에서 근위축성 측삭 경화증 (ALS)을 치료 또는 개선하는데 사용하기 위한, 제16항의 재조합 AAV 입자 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
- 제20항에 있어서, 상기 대상체의 세포에서 SOD1 유전자의 발현을 저해 또는 억제하는데 사용하기 위한, 약제학적 조성물.
- 제21항에 있어서, 상기 세포가
(i) 포유류 세포;
(ii) CNS 세포;
(iii) 뉴런;
(iv) 운동 뉴런 또는 복각(ventral horn) 운동 뉴런; 또는
(v) 성상세포(astrocyte)인, 약제학적 조성물. - 제21항에 있어서, SOD1 mRNA의 발현이 20% 내지 93%까지 저해되거나 억제되는, 약제학적 조성물.
- 제20항에 있어서, SOD1 유전자, mRNA, 단백질 또는 이들의 조합의 발현이 CNS 세포, CNS 영역 또는 이들 둘다에서 저해되는, 약제학적 조성물.
- 제24항에 있어서,
(i) 상기 CNS 세포가 운동 뉴런을 포함하거나;
(ii) 상기 CNS 영역이 척수 영역, 전뇌 영역, 중뇌 영역, 후뇌 영역 또는 이의 조합을 포함하거나; 또는
(iii) 상기 CNS 영역이 척수 영역을 포함하는, 약제학적 조성물. - 제24항에 있어서, 상기 SOD1 유전자, mRNA 또는 단백질이 야생형 SOD1 유전자, mRNA 또는 단백질; 또는 적어도 하나의 돌연변이를 포함하는 SOD1 유전자, mRNA 또는 단백질이거나; 또는 이들의 조합인, 약제학적 조성물.
- 제20항에 있어서, 상기 ALS가:
(i) 가족성 ALS;
(ii) 산발성 ALS;
(iii) 조기 단계 ALS;
(iv) 중기 단계 ALS; 또는
(v) 후기 단계 ALS인, 약제학적 조성물. - 제20항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 척수에 투여되는, 약제학적 조성물.
- 제20항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여를 위해 제형화되는, 약제학적 조성물.
- 제20항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 ALS의 치료 또는 예방에 적합한 추가의 치료제와 병용하여 상기 대상체에게 투여되는, 약제학적 조성물.
- 제30항에 있어서, 상기 추가의 치료제가 항산화제, 소염제, 항아폽토시스제, 칼슘 조절제, 항-글루타메이트제 (antiglutamatergic agent), 구조적 단백질 저해제, 금속 이온 조절과 관련된 화합물, 릴루졸, 토피라메이트, 탈람판넬, 라모트리진, 덱스트로메토르판, 가바펜틴 및 AMPA 길항제, 미노사이클린, 소듐 페닐부티레이트, 아리모클로몰, 강글리오시드, 셀레콕시브, 사이클로스포린, 아자티오프린, 사이클로포스파미드, 플라즈마포레시스, 글라티라머 아세테이트, 탈리도마이드, 세프트리악손, 피라졸론 유도체, 페닐 카바메이트 화합물, 신경보호 화합물, 호르몬, 부신피질자극 호르몬(ACTH), 신경영양 제제, IGF-I, GDNF, BDNF, CTNF, VEGF, 콜리벨린, 잘리프로덴, 타이로트로핀-방출 호르몬, ADNF, 또는 이들의 조합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
- 삭제
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020237037989A KR20230169197A (ko) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 |
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462079588P | 2014-11-14 | 2014-11-14 | |
US62/079,588 | 2014-11-14 | ||
US201562211992P | 2015-08-31 | 2015-08-31 | |
US62/211,992 | 2015-08-31 | ||
US201562234466P | 2015-09-29 | 2015-09-29 | |
US62/234,466 | 2015-09-29 | ||
PCT/US2015/060562 WO2016077687A1 (en) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020237037989A Division KR20230169197A (ko) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20170071541A KR20170071541A (ko) | 2017-06-23 |
KR102599909B1 true KR102599909B1 (ko) | 2023-11-09 |
Family
ID=55955103
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020237037989A KR20230169197A (ko) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 |
KR1020177012963A KR102599909B1 (ko) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020237037989A KR20230169197A (ko) | 2014-11-14 | 2015-11-13 | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 |
Country Status (15)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US10597660B2 (ko) |
EP (1) | EP3218484A4 (ko) |
JP (4) | JP2017535266A (ko) |
KR (2) | KR20230169197A (ko) |
CN (2) | CN107109407A (ko) |
AU (2) | AU2015346162B2 (ko) |
BR (1) | BR112017010087A2 (ko) |
CA (2) | CA2967367C (ko) |
HK (1) | HK1244299A1 (ko) |
IL (3) | IL292999A (ko) |
MX (2) | MX2017006216A (ko) |
RU (2) | RU2716422C2 (ko) |
SG (1) | SG11201703281RA (ko) |
WO (1) | WO2016077687A1 (ko) |
ZA (1) | ZA201702991B (ko) |
Families Citing this family (40)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
HRP20220798T1 (hr) | 2014-04-01 | 2022-10-14 | Biogen Ma Inc. | Pripravci za modulaciju ekspresije sod-1 |
US10597660B2 (en) | 2014-11-14 | 2020-03-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
SG11201703419UA (en) | 2014-11-14 | 2017-05-30 | Voyager Therapeutics Inc | Modulatory polynucleotides |
SG11201809643UA (en) | 2016-05-18 | 2018-12-28 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating huntington's disease |
KR102392236B1 (ko) | 2016-05-18 | 2022-05-03 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
GB201609597D0 (en) * | 2016-06-01 | 2016-07-13 | Univ Sheffield | Therapy |
JP2020518266A (ja) * | 2017-05-05 | 2020-06-25 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドVoyager Therapeutics,Inc. | 調節性ポリヌクレオチド |
CN110913866A (zh) * | 2017-05-05 | 2020-03-24 | 沃雅戈治疗公司 | 治疗肌萎缩性侧索硬化(als)的组合物和方法 |
WO2018204803A1 (en) * | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating huntington's disease |
WO2019079242A1 (en) * | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
JP7502991B2 (ja) * | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 |
CN113005123A (zh) * | 2017-10-23 | 2021-06-22 | 普利维尔治疗公司 | 用于神经变性疾病的基因疗法 |
WO2019132624A1 (ko) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | 주식회사 헬릭스미스 | 하이브리드 hgf 유전자가 도입된 aav(아데노-연관 바이러스) 벡터 |
JP7350019B2 (ja) * | 2018-05-31 | 2023-09-25 | イミュニティ ファルマ リミテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)を治療するための組成物、及び治療のためにそれを使用する方法 |
EP3807404A1 (en) | 2018-06-13 | 2021-04-21 | Voyager Therapeutics, Inc. | Engineered 5' untranslated regions (5' utr) for aav production |
US20210361318A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-11-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system and use thereof |
US20210254103A1 (en) * | 2018-07-02 | 2021-08-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
CN112770812A (zh) | 2018-07-24 | 2021-05-07 | 沃雅戈治疗公司 | 产生基因治疗制剂的***和方法 |
TW202035689A (zh) | 2018-10-04 | 2020-10-01 | 美商航海家醫療公司 | 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法 |
CN113166731A (zh) | 2018-10-05 | 2021-07-23 | 沃雅戈治疗公司 | 编码aav生产蛋白的工程化核酸构建体 |
EP3867389A1 (en) | 2018-10-15 | 2021-08-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Expression vectors for large-scale production of raav in the baculovirus/sf9 system |
JP2022513721A (ja) * | 2018-12-06 | 2022-02-09 | バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症における治療的介入を導くためのニューロフィラメントタンパク質 |
EP3911410A1 (en) | 2019-01-18 | 2021-11-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | Methods and systems for producing aav particles |
CN113924115A (zh) | 2019-01-31 | 2022-01-11 | 俄勒冈健康与科学大学 | 用于aav衣壳的使用转录依赖性定向进化的方法 |
WO2020223296A1 (en) * | 2019-04-29 | 2020-11-05 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
EP3962536A1 (en) | 2019-04-29 | 2022-03-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Systems and methods for producing baculoviral infected insect cells (biics) in bioreactors |
EP4010465A1 (en) | 2019-08-09 | 2022-06-15 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors |
US20220364114A1 (en) | 2019-08-26 | 2022-11-17 | Voyager Therapeutics, Inc. | Controlled expression of viral proteins |
US20220389067A1 (en) * | 2019-11-05 | 2022-12-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods of Treating Neurodegenerative Diseases Caused by G4C2 Expansion in C9ORF72 |
EP3892283A1 (en) * | 2020-04-09 | 2021-10-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Nucleic acids encoding human fus protein and use in the treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
WO2022023284A1 (en) | 2020-07-27 | 2022-02-03 | Anjarium Biosciences Ag | Compositions of dna molecules, methods of making therefor, and methods of use thereof |
WO2022032153A1 (en) | 2020-08-06 | 2022-02-10 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors |
WO2022109368A1 (en) * | 2020-11-20 | 2022-05-27 | Texas Tech University System | Methods of treating or preventing neurological disorders using zpr1 |
IL304880A (en) * | 2021-02-12 | 2023-10-01 | Alnylam Pharmaceuticals Inc | Superoxide dismutase 1 (SOD1) IRNA compositions and methods of using them to treat or prevent superoxide dismutase 1- (SOD1-) associated neurodegenerative diseases |
TW202246516A (zh) | 2021-03-03 | 2022-12-01 | 美商航海家醫療公司 | 病毒蛋白之控制表現 |
WO2022187548A1 (en) | 2021-03-03 | 2022-09-09 | Voyager Therapeutics, Inc. | Controlled expression of viral proteins |
WO2023042178A2 (en) * | 2021-09-20 | 2023-03-23 | Aleta Neuroscience, Llc | Combination therapy for neurodegenerative diseases |
US20230193281A1 (en) * | 2021-11-08 | 2023-06-22 | University Of Massachusetts | Oligonucleotides for sod1 modulation |
US11912997B2 (en) | 2022-06-15 | 2024-02-27 | Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. | RNAi agents for inhibiting expression of Superoxide Dismutase 1 (SOD1), compositions thereof, and methods of use |
WO2024054983A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Voyager Therapeutics, Inc. | Controlled expression of viral proteins |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007109097A2 (en) | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi MODULATION OF TGF-BETA AND THERAPEUTIC USES THEREOF |
JP2013143917A (ja) | 2012-01-13 | 2013-07-25 | Mie Univ | 線維症予防又は治療剤 |
Family Cites Families (514)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2942578B2 (ja) | 1988-06-14 | 1999-08-30 | カイロン コーポレイション | 新しい結合特性を有する超酸化物不均化酵素類縁体 |
US5171680A (en) | 1988-06-14 | 1992-12-15 | Chiron Corporation | Superoxide dismutase analogs having novel binding properties |
FR2640638B1 (fr) | 1988-12-20 | 1991-02-15 | Commissariat Energie Atomique | Bioreacteur et dispositif pour la culture de cellules animales |
AU7906691A (en) | 1990-05-23 | 1991-12-10 | United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The | Adeno-associated virus (aav)-based eucaryotic vectors |
US5173414A (en) | 1990-10-30 | 1992-12-22 | Applied Immune Sciences, Inc. | Production of recombinant adeno-associated virus vectors |
US5252479A (en) | 1991-11-08 | 1993-10-12 | Research Corporation Technologies, Inc. | Safe vector for gene therapy |
US5587308A (en) | 1992-06-02 | 1996-12-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health & Human Services | Modified adeno-associated virus vector capable of expression from a novel promoter |
US6268213B1 (en) | 1992-06-03 | 2001-07-31 | Richard Jude Samulski | Adeno-associated virus vector and cis-acting regulatory and promoter elements capable of expressing at least one gene and method of using same for gene therapy |
US5693531A (en) | 1993-11-24 | 1997-12-02 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Vector systems for the generation of adeno-associated virus particles |
EP0755454B1 (en) | 1994-04-13 | 2008-02-13 | The Rockefeller University | Aav-mediated delivery of dna to cells of the nervous system |
US5658785A (en) | 1994-06-06 | 1997-08-19 | Children's Hospital, Inc. | Adeno-associated virus materials and methods |
US20020159979A1 (en) | 1994-06-06 | 2002-10-31 | Children's Hospital, Inc. | Adeno-associated virus materials and methods |
US6204059B1 (en) | 1994-06-30 | 2001-03-20 | University Of Pittsburgh | AAV capsid vehicles for molecular transfer |
US5856152A (en) | 1994-10-28 | 1999-01-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor |
US5625048A (en) | 1994-11-10 | 1997-04-29 | The Regents Of The University Of California | Modified green fluorescent proteins |
US5652224A (en) | 1995-02-24 | 1997-07-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for gene therapy for the treatment of defects in lipoprotein metabolism |
US5741657A (en) | 1995-03-20 | 1998-04-21 | The Regents Of The University Of California | Fluorogenic substrates for β-lactamase and methods of use |
US6281010B1 (en) | 1995-06-05 | 2001-08-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adenovirus gene therapy vehicle and cell line |
US5756283A (en) | 1995-06-05 | 1998-05-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for improved production of recombinant adeno-associated viruses for gene therapy |
US5688676A (en) | 1995-06-07 | 1997-11-18 | Research Foundation Of State University Of New York | In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |
US5741683A (en) | 1995-06-07 | 1998-04-21 | The Research Foundation Of State University Of New York | In vitro packaging of adeno-associated virus DNA |
US6676935B2 (en) | 1995-06-27 | 2004-01-13 | Cell Genesys, Inc. | Tissue specific adenoviral vectors |
US6197293B1 (en) | 1997-03-03 | 2001-03-06 | Calydon, Inc. | Adenovirus vectors specific for cells expressing androgen receptor and methods of use thereof |
US6143548A (en) | 1995-08-30 | 2000-11-07 | Genzyme Corporation | Chromatographic purification of adeno-associated virus (AAV) |
US6265389B1 (en) | 1995-08-31 | 2001-07-24 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Microencapsulation and sustained release of oligonucleotides |
US5846528A (en) | 1996-01-18 | 1998-12-08 | Avigen, Inc. | Treating anemia using recombinant adeno-associated virus virions comprising an EPO DNA sequence |
US5858351A (en) | 1996-01-18 | 1999-01-12 | Avigen, Inc. | Methods for delivering DNA to muscle cells using recombinant adeno-associated virus vectors |
US5962313A (en) | 1996-01-18 | 1999-10-05 | Avigen, Inc. | Adeno-associated virus vectors comprising a gene encoding a lyosomal enzyme |
US5952221A (en) | 1996-03-06 | 1999-09-14 | Avigen, Inc. | Adeno-associated virus vectors comprising a first and second nucleic acid sequence |
CA2255774C (en) | 1996-05-29 | 2008-03-18 | Cornell Research Foundation, Inc. | Detection of nucleic acid sequence differences using coupled ligase detection and polymerase chain reactions |
US7026468B2 (en) | 1996-07-19 | 2006-04-11 | Valentis, Inc. | Process and equipment for plasmid purification |
IL128736A0 (en) | 1996-09-06 | 2000-01-31 | Univ Pennsylvania | Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses |
US20020037867A1 (en) | 1999-02-26 | 2002-03-28 | James M. Wilson | Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy |
AU4255397A (en) | 1996-09-06 | 1998-03-26 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Chimpanzee adenovirus vectors |
WO1998010088A1 (en) | 1996-09-06 | 1998-03-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase |
AU723497C (en) | 1996-09-06 | 2001-10-11 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy |
US5866552A (en) | 1996-09-06 | 1999-02-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for expressing a gene in the absence of an immune response |
US20030215422A1 (en) | 1996-09-11 | 2003-11-20 | John A. Chiorini | Aav4 vector and uses thereof |
ATE550429T1 (de) | 1996-11-20 | 2012-04-15 | Crucell Holland Bv | Adenovirus-zusammensetzungen erhältlich durch ein verbessertes produktions- und reinigungsverfahren |
US7732129B1 (en) | 1998-12-01 | 2010-06-08 | Crucell Holland B.V. | Method for the production and purification of adenoviral vectors |
EP0950091A2 (en) | 1996-12-18 | 1999-10-20 | Targeted Genetics Corporation | Aav split-packaging genes and cell lines comprising such genes for use in the production of recombinant aav vectors |
US6156303A (en) | 1997-06-11 | 2000-12-05 | University Of Washington | Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom |
US6710036B2 (en) | 1997-07-25 | 2004-03-23 | Avigen, Inc. | Induction of immune response to antigens expressed by recombinant adeno-associated virus |
US6251677B1 (en) | 1997-08-25 | 2001-06-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof |
US6989264B2 (en) | 1997-09-05 | 2006-01-24 | Targeted Genetics Corporation | Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors |
US6566118B1 (en) | 1997-09-05 | 2003-05-20 | Targeted Genetics Corporation | Methods for generating high titer helper-free preparations of released recombinant AAV vectors |
AU9774998A (en) | 1997-09-19 | 1999-04-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein |
WO1999014354A1 (en) | 1997-09-19 | 1999-03-25 | The Trustees Of The University Of The Pennsylvania | Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav |
EP1015619A1 (en) | 1997-09-19 | 2000-07-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses |
US6642051B1 (en) | 1997-10-21 | 2003-11-04 | Targeted Genetics Corporation | Amplifiable adeno-associated virus(AAV) packaging cassettes for the production of recombinant AAV vectors |
IT1297074B1 (it) | 1997-11-21 | 1999-08-03 | Angeletti P Ist Richerche Bio | Forme ormone-dipendenti delle proteine rep del virus adeno-associato (aav-2), sequenze di dna codificanti per esse, vettori che le |
EP1042494A1 (en) | 1997-12-23 | 2000-10-11 | Introgene B.V. | Adeno-associated virus and adenovirus chimeric recombinant viruses useful for the integration of foreign genetic information into the chromosomal dna of target cells |
US6410300B1 (en) | 1998-01-12 | 2002-06-25 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and formulations for mediating adeno-associated virus (AAV) attachment and infection and methods for purifying AAV |
AU2882899A (en) | 1998-02-26 | 1999-09-15 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Stable protection from dystrophic sarcolemmal degeneration and restoration of the sarcoglycan complex |
US6953690B1 (en) | 1998-03-20 | 2005-10-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
US6521426B1 (en) | 1998-04-08 | 2003-02-18 | Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.P.A. | Preparation of recombinant adenovirus carrying a rep gene of adeno-associated virus |
FR2778413B1 (fr) | 1998-05-07 | 2000-08-04 | Immunotech Sa | Nouveaux reactifs et methode de lyse des erythrocytes |
EP1078096A1 (en) | 1998-05-11 | 2001-02-28 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Multiviral compositions and uses thereof |
EP1849872A1 (en) | 1998-05-20 | 2007-10-31 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated virus vectors and uses thereof |
US6436392B1 (en) | 1998-05-20 | 2002-08-20 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated virus vectors |
EP1080218A1 (en) | 1998-05-27 | 2001-03-07 | University of Florida | Method of preparing recombinant adeno-associated virus compositions by using an iodixanol gradient |
CA2329143A1 (en) | 1998-05-27 | 1999-12-02 | Cell Genesys, Inc. | Adeno-associated viral vector-mediated expression of factor viii activity |
US6984517B1 (en) | 1998-05-28 | 2006-01-10 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | AAV5 vector and uses thereof |
ATE402254T1 (de) | 1998-05-28 | 2008-08-15 | Us Gov Health & Human Serv | Aav5 vektoren und deren verwendung |
GB2338236B (en) | 1998-06-13 | 2003-04-09 | Aea Technology Plc | Microbiological cell processing |
US6900049B2 (en) | 1998-09-10 | 2005-05-31 | Cell Genesys, Inc. | Adenovirus vectors containing cell status-specific response elements and methods of use thereof |
WO2000022152A1 (en) | 1998-10-13 | 2000-04-20 | Avigen, Inc. | Compositions and methods for producing recombinant adeno-associated virus |
US6200560B1 (en) | 1998-10-20 | 2001-03-13 | Avigen, Inc. | Adeno-associated virus vectors for expression of factor VIII by target cells |
MXPA01004169A (es) | 1998-10-27 | 2002-06-04 | Crucell Holland Bv | Produccion mejorada de vector de virus adenoasociados. |
US6759237B1 (en) | 1998-11-05 | 2004-07-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same |
US6689600B1 (en) | 1998-11-16 | 2004-02-10 | Introgen Therapeutics, Inc. | Formulation of adenovirus for gene therapy |
US6759050B1 (en) | 1998-12-03 | 2004-07-06 | Avigen, Inc. | Excipients for use in adeno-associated virus pharmaceutical formulations, and pharmaceutical formulations made therewith |
US6225113B1 (en) | 1998-12-04 | 2001-05-01 | Genvec, Inc. | Use of trans-activation and cis-activation to modulate the persistence of expression of a transgene in an at least E4-deficient adenovirus |
US6387368B1 (en) | 1999-02-08 | 2002-05-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof |
DE19905501B4 (de) | 1999-02-10 | 2005-05-19 | MediGene AG, Gesellschaft für molekularbiologische Kardiologie und Onkologie | Verfahren zur Herstellung eines rekombinanten Adeno-assoziierten Virus, geeignete Mittel hierzu sowie Verwendung zur Herstellung eines Arzneimittels |
US6509150B1 (en) | 1999-03-05 | 2003-01-21 | Universite De Nantes | Compositions and methods for recombinant Adeno-Associated Virus production |
JP4693244B2 (ja) | 1999-03-18 | 2011-06-01 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法 |
US6258595B1 (en) | 1999-03-18 | 2001-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
JP2002542805A (ja) | 1999-04-30 | 2002-12-17 | ユニバーシティ オブ フロリダ | アデノ随伴ウイルス送達リボザイム組成物および使用方法 |
AU2409200A (en) | 1999-06-02 | 2000-12-28 | Trustees Of The University Of Pennsylvania, The | Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses |
JP4969002B2 (ja) | 1999-06-08 | 2012-07-04 | ユニバーシテイ・オブ・アイオワ・リサーチ・フアウンデーシヨン | rAAV形質導入を増加するための化合物および方法 |
EP1212411A2 (en) | 1999-08-20 | 2002-06-12 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Methods and compositions for the construction and use of fusion libraries |
US6399385B1 (en) | 1999-09-29 | 2002-06-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods for rapid PEG-modification of viral vectors, compositions for enhanced gene transduction, compositions with enhanced physical stability, and uses therefor |
US6365394B1 (en) | 1999-09-29 | 2002-04-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus |
US7241447B1 (en) | 1999-10-07 | 2007-07-10 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated virus vectors and uses thereof |
CA2386546A1 (en) | 1999-10-07 | 2001-04-12 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated viruses and uses thereof |
WO2001032711A2 (en) | 1999-10-21 | 2001-05-10 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Adeno-associated virus aav rep78 major regulatory protein, mutants thereof and uses thereof |
AU3642601A (en) | 1999-11-05 | 2001-05-30 | Avigen, Inc. | Ecdysone-inducible adeno-associated virus expression vectors |
WO2001036603A2 (en) | 1999-11-17 | 2001-05-25 | Avigen, Inc. | Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders |
EP1240345A2 (en) | 1999-12-10 | 2002-09-18 | Ariad Gene Therapeutics, Inc. | Methods for expression of genes in primates |
US20020045264A1 (en) | 2000-03-14 | 2002-04-18 | During Matthew J. | Production of chimeric capsid vectors |
US7638120B2 (en) | 2000-03-14 | 2009-12-29 | Thomas Jefferson University | High transgene expression of a pseudotyped adeno-associated virus type |
US6855314B1 (en) | 2000-03-22 | 2005-02-15 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells |
US6468524B1 (en) | 2000-03-22 | 2002-10-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | AAV4 vector and uses thereof |
US7048920B2 (en) | 2000-03-24 | 2006-05-23 | Cell Genesys, Inc. | Recombinant oncolytic adenovirus for human melanoma |
EP2345742B1 (en) | 2000-03-30 | 2014-06-11 | The Whitehead Institute for Biomedical Research | RNA sequence-specific mediators of RNA interference |
GB0009887D0 (en) | 2000-04-20 | 2000-06-07 | Btg Int Ltd | Cytotoxic agents |
US7125705B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-10-24 | Genzyme Corporation | Polynucleotides for use in recombinant adeno-associated virus virion production |
WO2001083692A2 (en) | 2000-04-28 | 2001-11-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav vectors with aav5 capsids and aav5 vectors pseudotyped in heterologous capsids |
US20030013189A1 (en) | 2000-04-28 | 2003-01-16 | Wilson James M. | Compositions and methods useful for non-invasive delivery of therapeutic molecules to the bloodstream |
ES2256265T3 (es) | 2000-06-01 | 2006-07-16 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Vectores de parvovirus duplicados. |
US20020106381A1 (en) | 2000-06-13 | 2002-08-08 | High Katherine A. | Methods for administering recombinant adeno-associated virus virions to humans previously exposed to adeno-associated virus |
EP1302542B1 (en) | 2000-07-18 | 2007-06-13 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Novel physiologically active peptide and use thereof |
US6593123B1 (en) | 2000-08-07 | 2003-07-15 | Avigen, Inc. | Large-scale recombinant adeno-associated virus (rAAV) production and purification |
US6329181B1 (en) | 2000-08-07 | 2001-12-11 | Neurologix, Inc. | Helper functions for recombinant vector production |
AU2001294096A1 (en) | 2000-08-17 | 2002-02-25 | Uichi Ikeda | Adeno-associated virus-mediated delivery of angiogenic factors |
DE10066104A1 (de) | 2000-09-08 | 2003-01-09 | Medigene Ag | Wirtszellen zur Verpackung von rekombinantem Adeno-assoziiertem Virus (rAAV), Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung |
FR2813891B1 (fr) | 2000-09-14 | 2005-01-14 | Immunotech Sa | Reactif multifonctionnel pour erythrocytes mettant en jeu des carbamates et applications |
ATE303808T1 (de) | 2000-10-24 | 2005-09-15 | Mitsubishi Pharma Corp | Mittel zur behandlung der amyotrophischen lateralsklerose (als) |
JP2002153278A (ja) | 2000-11-22 | 2002-05-28 | Hisamitsu Pharmaceut Co Inc | ウイルスベクターの製造に用いられる細胞、その製法およびその細胞を用いたウイルスベクターの製造方法 |
WO2002070719A2 (en) | 2001-01-19 | 2002-09-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regulatable gene expression system |
JP2004532822A (ja) | 2001-03-14 | 2004-10-28 | アビジェン, インコーポレイテッド | ビリオンの管逆行感染による組換えアデノ随伴ウイルス媒介遺伝子移入 |
EP2270024B1 (en) | 2001-06-21 | 2018-10-24 | Ionis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression |
US7344872B2 (en) | 2001-06-22 | 2008-03-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for rapid screening of bacterial transformants and novel simian adenovirus proteins |
US20040136963A1 (en) | 2001-06-22 | 2004-07-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus vectors and methods of use |
AU2007201330C1 (en) | 2001-07-12 | 2011-06-09 | University Of Massachusetts | In vivo production of small interfering RNAs that mediate gene silencing |
EP1900815B1 (en) | 2001-07-12 | 2016-09-07 | University of Massachusetts | In vivo production of small interfering RNAs that mediate gene silencing |
EP1412371B1 (en) | 2001-07-12 | 2016-02-24 | University of Massachusetts | IN VIVO PRODUCTION OF SMALL INTERFERING RNAs THAT MEDIATE GENE SILENCING |
US8241622B2 (en) | 2001-07-13 | 2012-08-14 | University Of Iowa Research Foundation | Adeno-associated virus vectors with intravector heterologous terminal palindromic sequences |
EP1279740A1 (en) | 2001-07-26 | 2003-01-29 | Vrije Universiteit Brussel | Recombinant vector derived from adeno-associated virus for gene therapy |
JP2004538005A (ja) | 2001-08-08 | 2004-12-24 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | シアル酸に結合するタンパク質を有するウイルスベクターの精製法 |
US20030092161A1 (en) | 2001-09-19 | 2003-05-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for production of recombinant viruses, and uses therefor |
EP2428569B1 (en) | 2001-09-28 | 2018-05-23 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. | Microrna molecules |
US6723551B2 (en) | 2001-11-09 | 2004-04-20 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of adeno-associated virus in insect cells |
WO2003042361A2 (en) | 2001-11-09 | 2003-05-22 | Government Of The United States Of America, Department Of Health And Human Services | Production of adeno-associated virus in insect cells |
NZ600121A (en) | 2001-11-13 | 2013-12-20 | Univ Pennsylvania | A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby |
EP1944043A1 (en) | 2001-11-21 | 2008-07-16 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
NZ550416A (en) | 2001-11-21 | 2008-06-30 | Univ Pennsylvania | Simian adenovirus nucleic acid and amino acid sequences, vectors containing same, and methods of use |
CA2469623C (en) | 2001-12-12 | 2012-05-29 | F H Faulding & Co Limited | Composition for the preservation of viruses |
AU2002360291A1 (en) | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences |
AU2002359284A1 (en) | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor |
AU2002359786A1 (en) | 2001-12-19 | 2003-07-09 | Hiroaki Mizukami | Adeno-associated virus-mediated delivery of gdnf to skeletal muscles |
CN1617938A (zh) | 2002-01-16 | 2005-05-18 | 戴诺生物技术有限公司 | 从单个样品中分离核酸和蛋白质的方法 |
US20030180756A1 (en) * | 2002-03-21 | 2003-09-25 | Yang Shi | Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression |
GB0208390D0 (en) | 2002-04-11 | 2002-05-22 | Univ London | Adeno-associated virus producer system |
US20030198620A1 (en) | 2002-04-16 | 2003-10-23 | Keiya Ozawa | Method of treating amino acid metabolic disorders using recombinant adeno-associated virus virions |
DE60310297T2 (de) | 2002-04-29 | 2007-06-06 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methode für die direkte Gewinnung und Amplifikation von integrierten Viren aus zellulärer Gewebe-DNA |
MXPA04010603A (es) | 2002-04-30 | 2004-12-13 | Oncolytics Biotech Inc | Metodos mejorados de purificacion viral. |
NZ561656A (en) | 2002-05-01 | 2009-03-31 | Univ Florida | Improved rAAV expression systems for genetic modification of specific capsid proteins |
PT1504126E (pt) | 2002-05-03 | 2014-06-02 | Univ Duke | Um método para regular a expressão génica |
US20050196854A1 (en) | 2002-05-14 | 2005-09-08 | Konz John O.Jr. | Methods of adenovirus purification |
US7419817B2 (en) | 2002-05-17 | 2008-09-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. | Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography |
WO2003104413A2 (en) | 2002-06-05 | 2003-12-18 | University Of Florida | Production of pseudotyped recombinant aav virions |
US20080274989A1 (en) | 2002-08-05 | 2008-11-06 | University Of Iowa Research Foundation | Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof |
US20050255086A1 (en) | 2002-08-05 | 2005-11-17 | Davidson Beverly L | Nucleic acid silencing of Huntington's Disease gene |
US20040241854A1 (en) | 2002-08-05 | 2004-12-02 | Davidson Beverly L. | siRNA-mediated gene silencing |
JP2006515162A (ja) | 2002-08-29 | 2006-05-25 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ リーランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティ | 環状核酸ベクター、ならびに同ベクターの作製法および使用法 |
AU2003273336A1 (en) | 2002-09-18 | 2004-04-08 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Efficient reduction of target rna's by single- and double-stranded oligomeric compounds |
US7892793B2 (en) | 2002-11-04 | 2011-02-22 | University Of Massachusetts | Allele-specific RNA interference |
US20060041022A1 (en) | 2002-11-06 | 2006-02-23 | Pasinetti Giulio M | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis with nimesulide |
US7169612B2 (en) | 2002-11-11 | 2007-01-30 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Use of EDG2 receptor in an animal model of heart failure |
EP1418185A1 (en) | 2002-11-11 | 2004-05-12 | Aventis Pharma Deutschland GmbH | Use of EDG2 receptor in an animal model of heart failure |
WO2006006948A2 (en) | 2002-11-14 | 2006-01-19 | Dharmacon, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY |
AU2003295600A1 (en) | 2002-11-14 | 2004-06-15 | Dharmacon, Inc. | Functional and hyperfunctional sirna |
US7618948B2 (en) | 2002-11-26 | 2009-11-17 | Medtronic, Inc. | Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA |
WO2005017127A2 (en) | 2003-02-21 | 2005-02-24 | The Penn State Research Foundation | Rna interference compositions and methods |
WO2004075861A2 (en) | 2003-02-26 | 2004-09-10 | Children's Hospital, Inc. | Recombinant adeno-associated virus production |
WO2004083441A2 (en) | 2003-03-19 | 2004-09-30 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Random peptide library displayed on aav vectors |
WO2004108922A2 (en) | 2003-04-25 | 2004-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of aav comprising a capsid protein from aav7 or aav8 for the delivery of genes encoding apoprotein a or e genes to the liver |
US8927269B2 (en) | 2003-05-19 | 2015-01-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Avian adenoassociated virus and uses thereof |
ES2521682T3 (es) | 2003-05-21 | 2014-11-13 | Genzyme Corporation | Procedimientos para producir preparaciones de viriones de AAV recombinantes sustancialmente exentas de cápsidas vacías |
PL1633767T3 (pl) | 2003-06-02 | 2019-07-31 | University Of Massachusetts | Sposoby i kompozycje do kontrolowania wydajności wyciszania rna |
US7750144B2 (en) | 2003-06-02 | 2010-07-06 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing |
WO2005001043A2 (en) | 2003-06-02 | 2005-01-06 | University Of Massachusetts | METHODS AND COMPOSITIONS FOR ENHANCING THE EFFICACY AND SPECIFICITY OF FNAi |
EP1486567A1 (en) | 2003-06-11 | 2004-12-15 | Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts | Improved adeno-associated virus (AAV) vector for gene therapy |
JP4888876B2 (ja) | 2003-06-13 | 2012-02-29 | 田平 武 | アルツハイマー病の治療のための組換えアデノ随伴ウィルスベクター |
PL1633772T3 (pl) | 2003-06-19 | 2016-10-31 | Wiriony AAV o zmniejszonej immunoreaktywności i ich zastosowanie | |
US7291498B2 (en) | 2003-06-20 | 2007-11-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
US7491508B2 (en) | 2003-06-20 | 2009-02-17 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of generating chimeric adenoviruses and uses for such chimeric adenoviruses |
US9441244B2 (en) | 2003-06-30 | 2016-09-13 | The Regents Of The University Of California | Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof |
WO2005007875A2 (en) | 2003-07-18 | 2005-01-27 | University Of Massachusetts | Enhanced promoters for synthesis of small hairpin rna |
ES2391975T3 (es) | 2003-07-25 | 2012-12-03 | Genvec, Inc. | Vacunas a base de vector adenovírico |
US7683036B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-03-23 | Regulus Therapeutics Inc. | Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs |
WO2005019828A1 (en) | 2003-08-20 | 2005-03-03 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Epitope protection assay and method for detecting protein conformations |
EP2821085B1 (en) | 2003-09-12 | 2020-04-29 | University of Massachusetts | Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders |
US20050064489A1 (en) | 2003-09-24 | 2005-03-24 | Zhang Fang Liang | Engineered U6 and H1 promoters |
JP5054975B2 (ja) | 2003-09-30 | 2012-10-24 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | アデノ随伴ウイルス(aav)の同源系統群、配列、それらを含有するベクターおよびそれらの用途 |
CN1926551B (zh) | 2003-10-27 | 2010-06-16 | 罗斯塔生化科技有限责任公司 | 用于基因沉默的siRNA的设计方法 |
WO2005062937A2 (en) | 2003-12-22 | 2005-07-14 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended sirna |
ATE508190T1 (de) | 2004-03-05 | 2011-05-15 | Benitec Inc | Mehrfachpromotor-expressionskassetten zurgleichzeitigen zuführung von rnai-agentien |
WO2005096781A2 (en) | 2004-04-06 | 2005-10-20 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating gain-of-function disorders using rna interference |
EP1742668B1 (en) | 2004-04-28 | 2011-02-09 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Sequential delivery of immunogenic molecules via adenovirus and adeno-associated virus-mediated administrations |
GB0412072D0 (en) * | 2004-05-28 | 2004-06-30 | Syngenta Participations Ag | Chemical compounds |
ES2647477T3 (es) | 2004-06-01 | 2017-12-21 | Genzyme Corporation | Composiciones y métodos para prevenir la agregación del vector AAV |
US7815623B2 (en) | 2004-10-05 | 2010-10-19 | Genzyme Corporation | Stepped cannula |
US7901921B2 (en) | 2004-10-22 | 2011-03-08 | Oncolytics Biotech Inc. | Viral purification methods |
EP2189469B1 (en) | 2004-11-18 | 2015-09-16 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Multicistronic siRNA constructs to inhibit tumors |
CN1286981C (zh) | 2004-11-30 | 2006-11-29 | 华中科技大学同济医学院附属同济医院 | 表达人类cyp2j2反义基因的重组腺相关病毒及其制备方法 |
AU2005316476A1 (en) | 2004-12-15 | 2006-06-22 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Chimeric vectors |
WO2006066203A2 (en) * | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Alsgen, Llc | Small interfering rna (sirna) molecules for modulating superoxide dismutase (sod) |
JP4292416B2 (ja) | 2005-01-12 | 2009-07-08 | 住友電気工業株式会社 | 超電導ケーブルの端末構造 |
US7803611B2 (en) | 2005-02-03 | 2010-09-28 | Benitec, Inc. | RNAi expression constructs |
US8614101B2 (en) | 2008-05-20 | 2013-12-24 | Rapid Pathogen Screening, Inc. | In situ lysis of cells in lateral flow immunoassays |
US7625570B1 (en) | 2005-03-10 | 2009-12-01 | The Regents Of The University Of California | Methods for purifying adeno-associated virus |
WO2006102072A2 (en) | 2005-03-23 | 2006-09-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of a pa131 polypeptide in treatment of atherosclerosis |
JP5702519B2 (ja) | 2005-04-07 | 2015-04-15 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | Aavベクターの機能を上げる方法 |
WO2006119432A2 (en) | 2005-04-29 | 2006-11-09 | The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services | Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes |
CN107007842A (zh) | 2005-05-02 | 2017-08-04 | 建新公司 | 神经代谢疾病的基因治疗 |
WO2007022470A2 (en) | 2005-08-18 | 2007-02-22 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for treating neurological disease |
US9089667B2 (en) | 2005-08-23 | 2015-07-28 | The Regents Of The University Of California | Reflux resistant cannula and system for chronic delivery of therapeutic agents using convection-enhanced delivery |
EP1857552A1 (en) | 2006-05-20 | 2007-11-21 | Cargill Incorporated | Thermostable xylose isomerase enzyme |
EP2311967B1 (en) | 2005-10-20 | 2017-09-20 | UniQure IP B.V. | Improved AAV vectors produced in insect cells |
US7887803B2 (en) | 2005-12-02 | 2011-02-15 | Amorfix Life Sciences | Methods and compositions to treat misfolded-SOD1 mediated diseases |
US7794692B2 (en) | 2005-12-02 | 2010-09-14 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Methods and compositions for detecting amyotrophic lateral sclerosis |
EP1986609A2 (en) | 2006-01-26 | 2008-11-05 | University of Massachusetts | Rna silencing agents for use in therapy and nanotransporters for efficient delivery of same |
US7867484B2 (en) | 2006-01-27 | 2011-01-11 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Heparin and heparan sulfate binding chimeric vectors |
EP1979485A2 (en) | 2006-01-31 | 2008-10-15 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Self-complementary parvoviral vectors, and methods for making and using the same |
WO2007098607A1 (en) | 2006-03-03 | 2007-09-07 | Amorfix Life Sciences Ltd. | Methods and compositions to treat and detect misfolded-sod1 mediated diseases |
WO2007120542A2 (en) | 2006-03-30 | 2007-10-25 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Aav capsid library and aav capsid proteins |
ES2715625T3 (es) | 2006-04-03 | 2019-06-05 | Roche Innovation Ct Copenhagen As | Composición farmacéutica que comprende oligonucleótidos antisentido anti-miARN |
DE602007004470D1 (de) | 2006-04-28 | 2010-03-11 | Univ Pennsylvania | Modifiziertes adenovirus-hexon-protein und anwendungen davon |
US20090317417A1 (en) | 2006-04-28 | 2009-12-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified AAV Vectors Having Reduced Capsid Immunogenicity and Use Thereof |
ES2400235T3 (es) | 2006-04-28 | 2013-04-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Método de producción escalable de AAV |
US20080003565A1 (en) | 2006-05-02 | 2008-01-03 | Government Of The Us, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Viral nucleic acid microarray and method of use |
AU2007257093A1 (en) | 2006-05-05 | 2007-12-13 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compounds and methods for modulating expression of PCSK9 |
ES2378333T3 (es) | 2006-05-25 | 2012-04-11 | Sangamo Biosciences, Inc. | Métodos y composiciones para la inactivación de genes |
RU2457252C2 (ru) | 2006-06-21 | 2012-07-27 | Амстердам Молекьюла Терапьютикс (Амт) Ип Б.В. | AAV ВЕКТОРЫ С УСОВЕРШЕНСТВОВАННЫМИ Rep-КОДИРУЮЩИМИ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЯМИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫМИ В СИСТЕМАХ ПРОДУКЦИИ НА ОСНОВЕ КЛЕТОК НАСЕКОМЫХ |
WO2008011636A2 (en) | 2006-07-21 | 2008-01-24 | California Institute Of Technology | Targeted gene delivery for dendritic cell vaccination |
US8945918B2 (en) | 2006-08-24 | 2015-02-03 | Virovek, Inc. | Expression in insect cells of genes with overlapping open reading frames, methods and compositions therefor |
FR2905806B1 (fr) | 2006-09-13 | 2008-12-26 | Valeo Equip Electr Moteur | Arbre de rotor a griffes, rotor a griffes equipe d'un tel arbre et machine electrique tournante equipee d'un tel rotor |
HUE031182T2 (en) | 2006-10-03 | 2017-06-28 | Genzyme Corp | Gene therapy for spinal muscle atrophy |
US7794443B2 (en) | 2006-10-24 | 2010-09-14 | Medtronic, Inc. | System and method for intraparenchymal drug infusion |
WO2008067480A2 (en) | 2006-11-29 | 2008-06-05 | Nationwide Children's Hospital | Myostatin inhibition for enhancing muscle and/or improving muscle function |
US8227592B2 (en) | 2006-11-29 | 2012-07-24 | University Of Iowa Research Foundation | Alternative export pathways for vector expressed RNA interference |
US8173614B2 (en) | 2007-01-03 | 2012-05-08 | Medtronic, Inc. | Therapeuting compositions comprising an RNAi agent and a neurotrophic factor and methods of use thereof |
US8183219B2 (en) | 2007-01-03 | 2012-05-22 | Medtronic, Inc. | Therapeuting compositions comprising an RNAi agent and a neurotrophic factor and methods of use thereof |
WO2008094516A2 (en) | 2007-01-29 | 2008-08-07 | City Of Hope | Multi-targeting short interfering rnas |
WO2008097503A2 (en) | 2007-02-02 | 2008-08-14 | Biogen Idec Ma Inc. | Use of semaphorin 6a for promoting myelination and oligodendrocyte differentiation |
EP3492596A1 (en) | 2007-04-09 | 2019-06-05 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Raav vector compositions having tyrosine-modified capsid proteins and methods for use |
US9725485B2 (en) | 2012-05-15 | 2017-08-08 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy |
US9611302B2 (en) | 2007-04-09 | 2017-04-04 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | High-transduction-efficiency RAAV vectors, compositions, and methods of use |
WO2008128251A1 (en) | 2007-04-17 | 2008-10-23 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Humanized viral vectors and methods of use thereof |
US20090036395A1 (en) | 2007-04-26 | 2009-02-05 | Davidson Beverly L | Rna interference suppression of neurodegenerative diseases and methods of use thereof |
EP2158211B1 (en) | 2007-05-31 | 2016-08-10 | Medigene AG | Mutated structural protein of a parvovirus |
AU2008260103B2 (en) | 2007-05-31 | 2014-04-03 | University Of Iowa Research Foundation | Reduction of off-target RNA interference toxicity |
EP2012122A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-07 | Medigene AG | Mutated parvovirus structural proteins as vaccines |
US8841437B2 (en) | 2008-06-20 | 2014-09-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Precursor miRNA loop-modulated target regulation |
KR101183764B1 (ko) | 2007-06-29 | 2012-09-17 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 프로모터 |
CA2728575A1 (en) | 2007-06-29 | 2009-01-08 | Boston Biomedical, Inc. | Enabling the use of long dsrna for gene targeting in mammalian and other selected animal cells |
EP3121190A1 (en) | 2007-07-14 | 2017-01-25 | University of Iowa Research Foundation | Methods and compositions for treating brain diseases |
EP2019143A1 (en) | 2007-07-23 | 2009-01-28 | Genethon | CNS gene delivery using peripheral administration of AAV vectors |
WO2009014445A2 (en) | 2007-07-26 | 2009-01-29 | Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. | Baculoviral vectors comprising repeated coding sequences with differential codon biases |
CA2735166C (en) | 2007-08-27 | 2020-12-01 | Boston Biomedical, Inc. | Compositions of asymmetric interfering rna and uses thereof |
EP2198016B1 (en) | 2007-09-04 | 2015-05-27 | Her Majesty The Queen In Right of Canada as represented by The Minister of Health | Porcine adeno-associated viruses |
WO2009038462A1 (en) | 2007-09-19 | 2009-03-26 | Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. | Use of aav replication machinery for improved protein production |
EP2058401A1 (en) | 2007-10-05 | 2009-05-13 | Genethon | Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors |
WO2009051421A2 (en) | 2007-10-18 | 2009-04-23 | Lg Electronics Inc. | Method and system for transmitting and receiving signals |
CN101883858B (zh) | 2007-11-28 | 2015-07-22 | 宾夕法尼亚大学托管会 | 猿猴亚家族E腺病毒SAdV-39、-25.2、-26、-30、-37和-38及其应用 |
MX2010005860A (es) | 2007-11-28 | 2010-06-22 | Univ Pennsylvania | Adenovirus simianos de la subfamilia c sadv-40, sadv-31 y sadv-34 y usos de los mismos. |
BRPI0822651A2 (pt) | 2007-11-28 | 2014-10-14 | Univ Pennsylvania | Subfamília b de adenovírus sadv-28, -27, 29, -32, -33 e -35 de símio e seus usos |
US8480626B2 (en) | 2007-11-30 | 2013-07-09 | Medtronic, Inc. | Infusion catheter assembly with reduced backflow |
EP2247617B1 (en) | 2008-01-18 | 2013-02-27 | Genentech, Inc. | Methods and compositions for targeting polyubiquitin |
CA2713338C (en) | 2008-01-29 | 2021-10-26 | Applied Genetic Technologies Corporation | Recombinant virus production using mammalian cells in suspension |
EP3643782A1 (en) * | 2008-02-11 | 2020-04-29 | Phio Pharmaceuticals Corp. | Modified rnai polynucleotides and uses thereof |
WO2009104964A1 (en) | 2008-02-19 | 2009-08-27 | Amsterdam Molecular Therapeutics B.V. | Optimisation of expression of parvoviral rep and cap proteins in insect cells |
CN102016011B (zh) | 2008-03-04 | 2013-12-11 | 宾夕法尼亚大学托管会 | 猿猴腺病毒sadv-36、-42.1、-42.2和-44及其应用 |
US8632764B2 (en) | 2008-04-30 | 2014-01-21 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Directed evolution and in vivo panning of virus vectors |
WO2009134681A2 (en) | 2008-04-30 | 2009-11-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Aav7 viral vectors for targeted delivery of rpe cells |
CN102159713A (zh) | 2008-05-20 | 2011-08-17 | Eos神经科学公司 | 用于递送光敏蛋白的载体和使用方法 |
US9217155B2 (en) | 2008-05-28 | 2015-12-22 | University Of Massachusetts | Isolation of novel AAV'S and uses thereof |
US8951979B2 (en) | 2008-06-13 | 2015-02-10 | Cornell University | Pain treatment using ERK2 inhibitors |
US20110171262A1 (en) | 2008-06-17 | 2011-07-14 | Andrew Christian Bakker | Parvoviral capsid with incorporated gly-ala repeat region |
US8945885B2 (en) | 2008-07-03 | 2015-02-03 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Minicircle DNA vector preparations and methods of making and using the same |
JP5328244B2 (ja) | 2008-07-07 | 2013-10-30 | 株式会社ニュージェン・ファーマ | 筋萎縮性側索硬化症治療剤 |
WO2010011346A1 (en) | 2008-07-24 | 2010-01-28 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | Rnai constructs and uses therof |
WO2010014857A2 (en) | 2008-07-30 | 2010-02-04 | University Of Massachusetts | Chromosome therapy |
US8664189B2 (en) | 2008-09-22 | 2014-03-04 | Rxi Pharmaceuticals Corporation | RNA interference in skin indications |
WO2010036118A1 (en) | 2008-09-29 | 2010-04-01 | Amsterdam Molecular Therapeutics (Amt) B.V. | Porphobilinogen deaminase gene therapy |
AU2009308293B2 (en) | 2008-10-22 | 2015-02-05 | Genentech, Inc. | Modulation of axon degeneration |
US8940290B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-01-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenoviruses SAdV-43, -45, -46, -47, -48, -49, and -50 and uses thereof |
WO2010093784A2 (en) | 2009-02-11 | 2010-08-19 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Modified virus vectors and methods of making and using the same |
PT2403867T (pt) | 2009-03-04 | 2019-08-29 | Deutsches Krebsforsch | Proteína de ativação de montagem (aap) e a sua utilização para o fabrico de partículas de parvovírus essenciais consistindo de vp3 |
CN102448501A (zh) | 2009-03-27 | 2012-05-09 | 西马生物医学计划公司 | 治疗肝硬化和肝纤维化的方法和组合物 |
CN102439157B (zh) | 2009-04-30 | 2015-09-16 | 宾夕法尼亚大学托管会 | 包含腺伴随病毒构建体的靶向传导气道细胞组合物 |
WO2010138263A2 (en) | 2009-05-28 | 2010-12-02 | University Of Massachusetts | Novel aav 's and uses thereof |
EP2435575A2 (en) | 2009-05-28 | 2012-04-04 | Deutsches Krebsforschungszentrum | Modified aav capsid polypeptides |
EP2435559A1 (en) | 2009-05-29 | 2012-04-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Simian adenovirus 41 and uses thereof |
CA3077531C (en) | 2009-06-16 | 2022-09-20 | Genzyme Corporation | Improved methods for purification of recombinant aav vectors |
WO2011005786A2 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and methods for enhancing production of a biological product |
WO2011008348A2 (en) | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Calimmune Inc. | Dual vector for inhibition of human immunodeficiency virus |
EP2292781A1 (en) | 2009-08-17 | 2011-03-09 | Genethon | Baculovirus-based production of biopharmaceuticals free of contaminating baculoviral virions |
WO2011038187A1 (en) | 2009-09-25 | 2011-03-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Controlled adeno-associated virus (aav) diversification and libraries prepared therefrom |
BR112012010866A2 (pt) | 2009-11-09 | 2016-11-29 | Genepod Therapeutics Ab | "nova construção de vetor viral para síntese específica otimizada contínua de dopa por neurônios in vivo". |
EP2508603B1 (en) | 2009-11-19 | 2015-05-13 | National University Corporation Okayama University | System for increasing gene expression, and vector supporting said system |
WO2011069529A1 (en) | 2009-12-09 | 2011-06-16 | Curevac Gmbh | Mannose-containing solution for lyophilization, transfection and/or injection of nucleic acids |
WO2011088081A1 (en) | 2010-01-12 | 2011-07-21 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Restrictive inverted terminal repeats for viral vectors |
WO2011097456A2 (en) | 2010-02-05 | 2011-08-11 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Compositions and methods for enhanced parvovirus transduction |
US9163261B2 (en) | 2010-02-22 | 2015-10-20 | Koteswara Rao KOLLIPARA | Adeno-associated virus 2/8—micro RNA-101 therapy for liver cancer |
US9228174B2 (en) | 2010-03-11 | 2016-01-05 | Uniqure Ip B.V. | Mutated rep encoding sequences for use in AAV production |
EP2550021A2 (en) | 2010-03-22 | 2013-01-30 | Association Institut de Myologie | Methods of increasing efficiency of vector penetration of target tissue |
US9315825B2 (en) * | 2010-03-29 | 2016-04-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
US20130023033A1 (en) | 2010-03-29 | 2013-01-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
WO2011122950A1 (en) | 2010-04-01 | 2011-10-06 | Amsterdam Molecular Therapeutics (Amt) Ip B.V. | Monomeric duplex aav vectors |
EP3444346B1 (en) | 2010-04-23 | 2022-07-27 | University of Massachusetts | Aav-based treatment of cholesterol-related disorders |
US9546369B2 (en) | 2010-04-23 | 2017-01-17 | University Of Massachusetts | Multicistronic expression constructs |
EP2826860B1 (en) | 2010-04-23 | 2018-08-22 | University of Massachusetts | CNS targeting AAV vectors and methods of use thereof |
US8927514B2 (en) | 2010-04-30 | 2015-01-06 | City Of Hope | Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment |
US9839696B2 (en) | 2010-04-30 | 2017-12-12 | City Of Hope | Recombinant adeno-associated vectors for targeted treatment |
WO2012029994A1 (en) | 2010-09-02 | 2012-03-08 | Kyoto University | Pharmaceutical composition for prevention and treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
US8808684B2 (en) | 2010-09-10 | 2014-08-19 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Epidermal growth factor receptor (EGFR) and methods of use in adenoviral-associated virus type 6 (AAV6) transduction |
EP2612909B1 (en) | 2010-10-05 | 2015-02-25 | Takara Bio, Inc. | Method for producing virus vector |
US8663624B2 (en) | 2010-10-06 | 2014-03-04 | The Regents Of The University Of California | Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof |
WO2012057363A1 (ja) | 2010-10-27 | 2012-05-03 | 学校法人自治医科大学 | 神経系細胞への遺伝子導入のためのアデノ随伴ウイルスビリオン |
WO2012064920A1 (en) | 2010-11-11 | 2012-05-18 | University Of Miami | Methods, compositions, cells, and kits for treating ischemic injury |
AU2011332025B2 (en) | 2010-11-23 | 2015-06-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily E simian adenoviruses A1321, A1325, A1295, A1309 and A1322 and uses thereof |
ES2739804T3 (es) | 2011-02-12 | 2020-02-04 | Univ Iowa Res Found | Compuestos terapéuticos |
ES2724800T3 (es) | 2011-02-17 | 2019-09-16 | Univ Pennsylvania | Composiciones y métodos para alterar la especificidad de tejido y mejorar la transferencia génica mediada por AAV9 |
GB201103062D0 (en) | 2011-02-22 | 2011-04-06 | Isis Innovation | Method |
EP2500434A1 (en) | 2011-03-12 | 2012-09-19 | Association Institut de Myologie | Capsid-free AAV vectors, compositions, and methods for vector production and gene delivery |
EP2700399B1 (en) | 2011-04-18 | 2017-05-31 | National Center of Neurology and Psychiatry | Drug delivery particles and method for producing same |
EP2699688A1 (en) | 2011-04-20 | 2014-02-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens |
US9226976B2 (en) | 2011-04-21 | 2016-01-05 | University Of Massachusetts | RAAV-based compositions and methods for treating alpha-1 anti-trypsin deficiencies |
RS60207B1 (sr) | 2011-04-22 | 2020-06-30 | Univ California | Adeno-povezani virioni virusa sa varijantama kapsida i postupci za njihovu primenu |
WO2012149646A1 (en) | 2011-05-05 | 2012-11-08 | Sunnybrook Research Institute | Mirna inhibitors and their uses |
US9249425B2 (en) | 2011-05-16 | 2016-02-02 | The Trustees Of The University Of Pennslyvania | Proviral plasmids and production of recombinant adeno-associated virus |
WO2012159006A2 (en) | 2011-05-18 | 2012-11-22 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Polypeptides and vectors for targeting her2/neu expressing cells and uses thereof |
AU2012266754B2 (en) | 2011-06-06 | 2016-04-21 | Biocartis Nv | Selective lysis of cells by ionic surfactants |
US20130019580A1 (en) | 2011-07-20 | 2013-01-24 | Anderson Noel W | Bidirectional harvesting system |
EP3290055A3 (en) | 2011-07-25 | 2018-05-30 | Nationwide Children's Hospital, Inc. | Recombinant virus products and methods for inhibition of expression of dux4 |
IN2014CN00688A (ko) | 2011-07-27 | 2015-04-03 | Genethon | |
US8852911B2 (en) | 2011-08-04 | 2014-10-07 | The Regents Of The University Of California | Method of producing dicer |
ES2558168T3 (es) | 2011-09-08 | 2016-02-02 | Uniqure Ip B.V. | Eliminación de virus contaminantes en preparaciones AVV |
US9056892B2 (en) | 2011-09-09 | 2015-06-16 | University Of Washington | Retrograde transport peptide and use of same for delivery to central nervous system |
US9441206B2 (en) | 2011-10-28 | 2016-09-13 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Cell line for production of adeno-associated virus |
EP3539568A1 (en) | 2011-11-22 | 2019-09-18 | The Children's Hospital of Philadelphia | Virus vectors for highly efficient transgene delivery |
WO2013078199A2 (en) | 2011-11-23 | 2013-05-30 | Children's Medical Center Corporation | Methods for enhanced in vivo delivery of synthetic, modified rnas |
WO2013103896A1 (en) | 2012-01-06 | 2013-07-11 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Treating cardiovascular or renal diseases |
HUE036640T2 (hu) | 2012-02-14 | 2018-07-30 | Univ California | Parakrin gének szisztémás bejuttatása és szabályozott expressziója szív és érrendszeri betegségekre és egyéb állapotokra |
ES2752191T3 (es) | 2012-02-17 | 2020-04-03 | Childrens Hospital Philadelphia | Composiciones y métodos con vectores de AAV para la transferencia de genes a células, órganos y tejidos |
IN2014DN08812A (ko) | 2012-04-18 | 2015-05-22 | Philadelphia Children Hospital | |
EP2660325A3 (en) | 2012-05-02 | 2014-02-12 | Christian Medical College | AAV vectors and corresponding nucleotide sequences and methods |
US9163259B2 (en) | 2012-05-04 | 2015-10-20 | Novartis Ag | Viral vectors for the treatment of retinal dystrophy |
US9677088B2 (en) | 2012-05-09 | 2017-06-13 | Oregon Health & Science University | Adeno associated virus plasmids and vectors |
US10294281B2 (en) | 2012-05-15 | 2019-05-21 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use |
TWI775096B (zh) | 2012-05-15 | 2022-08-21 | 澳大利亞商艾佛蘭屈澳洲私營有限公司 | 使用腺相關病毒(aav)sflt-1治療老年性黃斑部退化(amd) |
AU2013262626B2 (en) | 2012-05-18 | 2018-11-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Subfamily E simian adenoviruses A1302, A1320, A1331 and A1337 and uses thereof |
WO2013177367A2 (en) | 2012-05-23 | 2013-11-28 | The Johns Hopkins University | Compounds and methods of use thereof for treating neurodegenerative disorders |
AU2013287261B2 (en) | 2012-07-06 | 2019-03-07 | University Of Iowa Research Foundation | Modified adeno-associated virus vector compositions |
CN104603272B (zh) | 2012-07-06 | 2017-11-07 | 宝生物工程株式会社 | 能够产生腺伴随病毒载体的细胞 |
EP2875133B1 (en) | 2012-07-17 | 2018-01-10 | Université de Genève | Nucleic acids for down-regulation of gene expression |
ES2684222T3 (es) | 2012-08-01 | 2018-10-01 | Nationwide Children's Hospital | Administración intratecal de virus adenoasociado 9 recombinante |
JP2015529685A (ja) | 2012-09-17 | 2015-10-08 | ザ・リサーチ・インスティテュート・アット・ネイションワイド・チルドレンズ・ホスピタルThe Research Institute Atnationwide Children’S Hospital | 筋萎縮性側索硬化症の処置のための組成物および方法 |
WO2014052789A1 (en) | 2012-09-28 | 2014-04-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Aav vectors targeted to oligodendrocytes |
US20140243783A1 (en) | 2012-10-06 | 2014-08-28 | Raghu Raghavan | Method of backflow reduction during material delivery through a needle into tissue |
AU2013204200B2 (en) | 2012-10-11 | 2016-10-20 | Brandeis University | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis |
WO2014071042A1 (en) | 2012-10-31 | 2014-05-08 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Methods for identifying candidates for the treatment of neurodegenerative diseases |
AU2013337651B2 (en) | 2012-11-01 | 2018-12-13 | Factor Bioscience Inc. | Methods and products for expressing proteins in cells |
EP2931897B1 (en) | 2012-12-12 | 2017-11-01 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, engineering and optimization of systems, methods and compositions for sequence manipulation and therapeutic applications |
US9938541B2 (en) | 2012-12-25 | 2018-04-10 | Takara Bio Inc. | AAV variant |
CA2897444A1 (en) | 2013-01-08 | 2014-07-17 | Genzyme Corporation | Use of inos inhibitors to increase viral yield in culture |
SG10201705518SA (en) | 2013-01-08 | 2017-08-30 | Benitec Biopharma Ltd | Age-Related Macular Degeneration Treatment |
EP2954051B1 (en) | 2013-02-08 | 2019-03-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified aav8 capsid for gene transfer for retinal therapies |
WO2014160092A1 (en) | 2013-03-13 | 2014-10-02 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Adeno-associated virus vectors and methods of use thereof |
WO2014143932A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Synthetic adeno-associated virus inverted terminal repeats |
US9428537B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-08-30 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | tRNA derived small RNAs (tsRNAs) involved in cell viability |
CN105612253A (zh) | 2013-03-15 | 2016-05-25 | 费城儿童医院 | 含有填充者/填充物多核苷酸序列的载体及其制备方法 |
JP6516725B2 (ja) | 2013-04-08 | 2019-05-22 | ユニバーシテイ・オブ・アイオワ・リサーチ・フアウンデーシヨン | キメラアデノ随伴ウイルス/ボカウイルスパルボウイルスベクター |
EP2792742A1 (en) | 2013-04-17 | 2014-10-22 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf (UKE) | Gene-therapy vectors for treating cardiomyopathy |
AU2014255665B2 (en) | 2013-04-18 | 2018-08-02 | Fondazione Telethon | Effective delivery of large genes by dual AAV vectors |
AU2014253730B2 (en) | 2013-04-20 | 2018-09-13 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Recombinant adeno-associated virus delivery of exon 2-targeted U7snRNA polynucleotide constructs |
US9719106B2 (en) | 2013-04-29 | 2017-08-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and uses thereof |
KR20220119187A (ko) | 2013-05-15 | 2022-08-26 | 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타 | 중추 신경계로의 아데노-연관 바이러스 매개 유전자 전달 |
US10006049B2 (en) | 2013-05-16 | 2018-06-26 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Hairpin mRNA elements and methods for the regulation of protein translation |
US11136557B2 (en) | 2013-05-31 | 2021-10-05 | The Regents Of The University Of California | Adeno-associated virus variants and methods of use thereof |
WO2014201308A1 (en) | 2013-06-12 | 2014-12-18 | Washington University | Endothelial-targeted adenoviral vectors, methods and uses therefor |
EP3567112A1 (en) | 2013-06-13 | 2019-11-13 | Translate Bio, Inc. | Messenger rna based viral production |
KR102380265B1 (ko) | 2013-07-22 | 2022-03-29 | 더 칠드런스 호스피탈 오브 필라델피아 | 변종 aav 및 조성물, 세포, 기관 및 조직으로의 유전자 전이를 위한 방법 및 용도 |
RU2018128780A (ru) | 2013-07-26 | 2018-12-05 | Юниверсити Оф Айова Рисерч Фаундейшн | Способы и композиции для лечения болезней мозга |
ITTO20130669A1 (it) | 2013-08-05 | 2015-02-06 | Consiglio Nazionale Ricerche | Vettore adeno-associato ricombinante muscolo-specifico e suo impiego nel trattamento di patologie muscolari |
KR20160106040A (ko) | 2013-08-14 | 2016-09-09 | 퀴아젠 맨스필드, 인코퍼레이티드 | cMET 핵산의 멀티모달 분석을 위한 조성물 및 방법 |
HUE061629T2 (hu) | 2013-08-27 | 2023-07-28 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Termékek és módszerek amyotrophiás lateralis sclerosis kezelésére |
WO2015031686A1 (en) | 2013-08-30 | 2015-03-05 | Amgen Inc. | High titer recombinant aav vector production in adherent and suspension cells |
EP3561062A1 (en) | 2013-09-13 | 2019-10-30 | California Institute of Technology | Selective recovery |
EP3633041A3 (en) | 2013-09-26 | 2020-07-29 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Synthetic combinatorial aav capsid library for targeted gene therapy |
EP3068889B1 (en) | 2013-09-26 | 2019-04-17 | Universitat Autònoma De Barcelona | Gene therapy compositions for use in the prevention and/or treatment of non-alcoholic fatty liver disease |
CN106232618A (zh) | 2013-10-11 | 2016-12-14 | 马萨诸塞眼科耳科诊所 | 预测祖先病毒序列的方法及其用途 |
WO2015060722A1 (en) | 2013-10-24 | 2015-04-30 | Uniqure Ip B.V. | Aav-5 pseudotyped vector for gene therapy for neurological diseases |
EP3065784A4 (en) | 2013-11-05 | 2017-05-10 | The Research Institute at Nationwide Children's Hospital | COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING NF- kB AND SOD-1 TO TREAT AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS |
WO2015108610A1 (en) | 2013-11-08 | 2015-07-23 | The Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | Adeno-associated virus "x" oncogene |
CN105934515B (zh) | 2013-11-26 | 2020-08-04 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 用于治疗糖原贮积病的腺相关病毒载体 |
KR102245861B1 (ko) | 2013-11-29 | 2021-04-28 | 다카라 바이오 가부시키가이샤 | 아데노 수반 바이러스의 정량 방법 |
US20170002350A1 (en) | 2013-12-03 | 2017-01-05 | Agency For Science, Technology And Research | Tailed mirtron effectors for rnai-mediated gene silencing |
US9732345B2 (en) | 2013-12-09 | 2017-08-15 | Baylor College Of Medicine | Hippo and dystrophin complex signaling in cardiomyocyte renewal |
MX2016007325A (es) | 2013-12-12 | 2017-07-19 | Broad Inst Inc | Composiciones y metodos de uso de sistemas crispr-cas en desordenes debidos a repeticion de nucleotidos. |
GB201322798D0 (en) | 2013-12-20 | 2014-02-05 | Oxford Biomedica Ltd | Production system |
US20150197809A1 (en) | 2014-01-13 | 2015-07-16 | Trustees Of Boston University | Methods and assays relating to huntingtons disease and parkinson's disease |
GB201401707D0 (en) | 2014-01-31 | 2014-03-19 | Sec Dep For Health The | Adeno-associated viral vectors |
GB201403684D0 (en) | 2014-03-03 | 2014-04-16 | King S College London | Vector |
US10072251B2 (en) | 2014-02-19 | 2018-09-11 | University Of Massachusetts | Recombinant AAVS having useful transcytosis properties |
WO2015124546A1 (en) | 2014-02-19 | 2015-08-27 | Fundación Centro Nacional De Investigaciones Cardiovasculares Carlos Iii- Cnic | Aav vectors for the treatment of ischemic and non-ischemic heart disease |
US20170007720A1 (en) | 2014-02-21 | 2017-01-12 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Methods and compositions for gene delivery to on bipolar cells |
CA2941640A1 (en) | 2014-03-04 | 2015-09-11 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Improved raav vectors and methods for transduction of photoreceptors and rpe cells |
US10837027B2 (en) | 2014-03-10 | 2020-11-17 | Uniqure Ip B.V. | Further improved AAV vectors produced in insect cells |
US10280418B2 (en) | 2014-03-18 | 2019-05-07 | Univeristy Of Massachusetts | RAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis |
HRP20220798T1 (hr) | 2014-04-01 | 2022-10-14 | Biogen Ma Inc. | Pripravci za modulaciju ekspresije sod-1 |
EP2933335A1 (en) | 2014-04-18 | 2015-10-21 | Genethon | A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases |
EP3919508A1 (en) | 2014-04-25 | 2021-12-08 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Ldlr variants and their use in compositions for reducing cholesterol levels |
WO2015164786A1 (en) | 2014-04-25 | 2015-10-29 | University Of Massachusetts | Recombinant aav vectors useful for reducing immunity against transgene products |
US9194250B1 (en) | 2014-05-07 | 2015-11-24 | General Electric Company | Embedded wireless sensors for turbomachine component defect monitoring |
RU2691102C2 (ru) | 2014-05-08 | 2019-06-11 | Сангамо Байосайенсиз, Инк. | Способы и композиции для лечения болезни хантингтона |
WO2015173436A1 (en) | 2014-05-16 | 2015-11-19 | Vrije Universiteit Brussel | Genetic correction of myotonic dystrophy type 1 |
JP6663859B2 (ja) | 2014-05-20 | 2020-03-13 | ユニバーシティー オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション | ハンチントン病の治療化合物 |
EP3160980B1 (en) | 2014-05-28 | 2020-05-20 | The Regents of the University of California | HYBRID tRNA/pre-miRNA MOLECULES AND METHODS OF USE |
US10577627B2 (en) | 2014-06-09 | 2020-03-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | Chimeric capsids |
US11207424B2 (en) | 2014-06-13 | 2021-12-28 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods and materials for increasing viral vector infectivity |
US10781459B2 (en) | 2014-06-20 | 2020-09-22 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Methods of packaging multiple adeno-associated virus vectors |
US10526583B2 (en) | 2014-07-02 | 2020-01-07 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Compositions and methods for purifying recombinant adeno-associated virus |
WO2016006658A1 (ja) | 2014-07-10 | 2016-01-14 | タカラバイオ株式会社 | 非エンベロープウイルス粒子の製造方法 |
JP6872479B2 (ja) | 2014-07-31 | 2021-05-19 | アソシアシオン・アンスティテュ・ドゥ・ミオロジーAssociation Institut De Myologie | 筋萎縮性側索硬化症の処置 |
WO2016019364A1 (en) | 2014-08-01 | 2016-02-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for self-regulated inducible gene expression |
US10370432B2 (en) | 2014-10-03 | 2019-08-06 | University Of Massachusetts | Heterologous targeting peptide grafted AAVS |
US10711270B2 (en) | 2014-10-03 | 2020-07-14 | University Of Massachusetts | High efficiency library-identified AAV vectors |
WO2016057975A2 (en) | 2014-10-10 | 2016-04-14 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Guided injections for aav gene transfer to muscle |
RU2020140209A (ru) | 2014-10-21 | 2021-01-25 | Юниверсити Оф Массачусетс | Варианты рекомбинантных aav и их применения |
US10907130B2 (en) | 2014-11-05 | 2021-02-02 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Methods and materials for producing recombinant viruses in eukaryotic microalgae |
WO2016077607A1 (en) | 2014-11-13 | 2016-05-19 | The Regents Of The University Of California | Adjustable stepped cannula |
US10597660B2 (en) | 2014-11-14 | 2020-03-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
SG11201703419UA (en) | 2014-11-14 | 2017-05-30 | Voyager Therapeutics Inc | Modulatory polynucleotides |
KR20240063169A (ko) | 2014-11-21 | 2024-05-10 | 더 유니버시티 오브 노쓰 캐롤라이나 엣 채플 힐 | 중추 신경계에 표적화된 aav 벡터 |
EP3221456B1 (en) | 2014-11-21 | 2021-09-22 | University of Florida Research Foundation, Inc. | Genome-modified recombinant adeno-associated virus vectors |
FI3224376T4 (fi) | 2014-11-28 | 2023-08-31 | Dna-epäpuhtaudet koostumuksessa, joka käsittää parvovirusvirionin | |
US11697825B2 (en) | 2014-12-12 | 2023-07-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scAAV |
LT3237618T (lt) | 2014-12-24 | 2019-07-10 | Uniqure Ip B.V. | Rnri sukeltas hantingtino geno slopinimas |
ES2962439T3 (es) | 2014-12-30 | 2024-03-19 | Univ Iowa Res Found | Agente terapéutico que activa la función mTORC1 para su uso en el tratamiento de la enfermedad de Huntington |
CA2972807C (en) | 2015-01-14 | 2024-01-16 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods and compositions for targeted gene transfer |
MX2017009336A (es) | 2015-01-16 | 2017-11-15 | Voyager Therapeutics Inc | Polinucleótidos dirigidos al sistema nervioso central. |
US20180008727A1 (en) | 2015-01-30 | 2018-01-11 | The Regents Of The University Of California | Spinal subpial gene delivery system |
US20180030096A1 (en) | 2015-02-03 | 2018-02-01 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof |
PL3256594T3 (pl) | 2015-02-10 | 2022-02-14 | Genzyme Corporation | Ulepszone dostarczanie cząstek wirusa do prążkowia i kory |
BR112017017028A2 (pt) | 2015-02-10 | 2018-04-10 | Genzyme Corp | rnai variante |
WO2016137949A1 (en) | 2015-02-23 | 2016-09-01 | Voyager Therapeutics, Inc. | Regulatable expression using adeno-associated virus (aav) |
US20180094280A1 (en) | 2015-03-20 | 2018-04-05 | Bluebird Bio, Inc. | Vector formulations |
ES2860712T3 (es) | 2015-03-24 | 2021-10-05 | Univ California | Variantes de virus adenoasociados y métodos de uso de las mismas |
JP6892433B2 (ja) | 2015-04-03 | 2021-06-23 | ユニバーシティ・オブ・マサチューセッツUniversity Of Massachusetts | 十分に安定化された非対称sirna |
DK3277814T3 (da) | 2015-04-03 | 2020-08-24 | Univ Massachusetts | Oligonukleotidforbindelser til målretning mod huntingtin-mrna |
US10081659B2 (en) | 2015-04-06 | 2018-09-25 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services | Adeno-associated vectors for enhanced transduction and reduced immunogenicity |
TWI707951B (zh) | 2015-04-08 | 2020-10-21 | 美商健臻公司 | 過大腺相關載體之製造 |
ES2763551T3 (es) | 2015-04-16 | 2020-05-29 | Univ Emory | Promotores y vectores recombinantes para la expresión de proteínas en el hígado y uso de los mismos |
WO2016172155A1 (en) | 2015-04-23 | 2016-10-27 | University Of Massachusetts | Modulation of aav vector transgene expression |
WO2016172008A1 (en) | 2015-04-24 | 2016-10-27 | University Of Massachusetts | Modified aav constructions and uses thereof |
US20160346359A1 (en) | 2015-05-01 | 2016-12-01 | Spark Therapeutics, Inc. | Adeno-associated Virus-Mediated CRISPR-Cas9 Treatment of Ocular Disease |
CA2985223A1 (en) | 2015-05-07 | 2016-11-10 | Massachusetts Eye And Ear Infirmary | Methods of delivering an agent to the eye |
AU2016262467B2 (en) | 2015-05-11 | 2020-09-10 | Alcyone Therapeutics, Inc. | Drug delivery systems and methods |
JP6805174B2 (ja) | 2015-05-12 | 2020-12-23 | アメリカ合衆国 | 神経成長因子シグナルペプチド及び副甲状腺ホルモンを含むaav分離株及び融合タンパク質 |
US20170067028A1 (en) | 2015-05-15 | 2017-03-09 | Douglas J. Ballon | Radiolabeling of adeno associated virus |
WO2016191418A1 (en) | 2015-05-26 | 2016-12-01 | Salk Institute For Biological Studies | Motor neuron-specific expression vectors |
US11027024B2 (en) | 2015-05-29 | 2021-06-08 | University Of Iowa Research Foundation | Methods of delivery of transgenes for treating brain diseases |
RU2761564C9 (ru) | 2015-05-29 | 2022-03-17 | Дзе Трастиз Оф Дзе Юнивёрсити Оф Пенсильвания | Композиции и способы деградации неправильно упакованных белков |
WO2017004514A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Recombinant adeno-associated virus vectors to target medullary thyroid carcinoma |
US20170009304A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Splicingcodes.Com | Method and kit for detecting fusion transcripts |
US20170007669A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Peptide-mediated delivery of active agents across the blood-brain barrier |
WO2017005806A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods and pharmaceutical compositions for expressing a polynucleotide of interest in the peripheral nervous system of a subject |
WO2017015102A1 (en) | 2015-07-17 | 2017-01-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for achieving high levels of transduction in human liver cells |
WO2017019876A1 (en) | 2015-07-28 | 2017-02-02 | University Of Massachusetts | Transgenic expression of dnase i in vivo delivered by an adeno-associated virus vector |
US10738087B2 (en) | 2015-07-30 | 2020-08-11 | Massachusetts Eye And Ear Infirmary | Ancestral virus sequences and uses thereof |
US20180201937A1 (en) | 2015-08-04 | 2018-07-19 | The University Of Chicago | Inhibitors of cacna1a/alpha1a subunit internal ribosomal entry site (ires) and methods of treating spinocerebellar ataxia type 6 |
US10047377B2 (en) | 2015-09-22 | 2018-08-14 | Loyola University Of Chicago | Methods for modulating KLHL1 levels, methods for modulating current activity in T-type calcium channels, molecules therefor, and methods for identifying molecules therefor |
PT3356390T (pt) | 2015-09-28 | 2021-04-21 | Univ Florida | Métodos e composições para vetores virais que se evadem a anticorpos |
US11473084B2 (en) | 2015-10-09 | 2022-10-18 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for treating Huntington's disease and related disorders |
EP3359665A2 (en) | 2015-10-09 | 2018-08-15 | Genzyme Corporation | Improved flare (flow cytometry attenuated reporter expression) technology for rapid bulk sorting |
US10123969B2 (en) | 2015-10-15 | 2018-11-13 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Osmotic enhancement of drug/therapeutic delivery to the brain following infusion or injection into the cerebrospinal fluid |
CA3002982A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease |
CA3002980A1 (en) | 2015-10-22 | 2017-04-27 | University Of Massachusetts | Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors |
US20200181644A1 (en) | 2015-10-22 | 2020-06-11 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Synthetic combinatorial aav3 capsid library |
US20180236105A1 (en) | 2015-10-23 | 2018-08-23 | University Of Iowa Research Foundation | Methods for treating neurodegenerative diseases using gene therapy to delay disease onset and progression while providing cognitive protection |
WO2017075335A1 (en) | 2015-10-28 | 2017-05-04 | Voyager Therapeutics, Inc. | Regulatable expression using adeno-associated virus (aav) |
WO2017079768A1 (en) | 2015-11-08 | 2017-05-11 | Genentech, Inc. | Methods of screening for multispecific antibodies |
US10633662B2 (en) | 2015-11-10 | 2020-04-28 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for modulating AAV infection |
CN108603174A (zh) | 2015-12-01 | 2018-09-28 | 星火治疗有限公司 | 在适用于临床应用的无血清悬浮细胞培养体系中产生重组腺相关病毒(aav)载体的可扩展方法 |
US20170151416A1 (en) | 2015-12-01 | 2017-06-01 | Invivo Therapeutics Corporation | Methods and Systems for Delivery of a Trail of a Therapeutic Substance into an Anatomical Space |
WO2017096164A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Novel recombinant adeno-associated virus capsids with enhanced human skeletal muscle tropism |
US10406244B2 (en) | 2015-12-02 | 2019-09-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | AAV vectors with expanded packaging capacity |
EP3383896A1 (en) | 2015-12-03 | 2018-10-10 | Genethon | Compositions and methods for improving viral vector efficiency |
CN108699565B (zh) | 2015-12-11 | 2023-08-08 | 加州理工学院 | 用于定向腺相关病毒(aav)的靶向肽 |
US11098286B2 (en) | 2015-12-11 | 2021-08-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for AAV9 |
WO2017100674A1 (en) | 2015-12-11 | 2017-06-15 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for aav1 |
US11028372B2 (en) | 2015-12-11 | 2021-06-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for AAVRH10 |
ES2934848T3 (es) | 2015-12-11 | 2023-02-27 | Univ Pennsylvania | Método de purificación escalable para AAV8 |
JP7406783B2 (ja) | 2015-12-14 | 2023-12-28 | ザ ユニバーシティ オブ ノース カロライナ アット チャペル ヒル | パルボウイルスベクターの高められた送達のための改変キャプシドタンパク質 |
WO2017112948A1 (en) | 2015-12-24 | 2017-06-29 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Improved aav production using suspension adapted cells |
US20190022251A1 (en) | 2016-01-15 | 2019-01-24 | Jichi Medical University | Adeno-Associated Virus Virions for Treatment of Epilepsy |
US11826433B2 (en) | 2016-02-02 | 2023-11-28 | University Of Massachusetts | Method to enhance the efficiency of systemic AAV gene delivery to the central nervous system |
CA3012653A1 (en) | 2016-02-05 | 2017-08-10 | Emory University | Injection of single-stranded or self-complementary adeno-associated virus 9 into the cerebrospinal fluid |
US11702672B2 (en) | 2016-02-08 | 2023-07-18 | University Of Iowa Research Foundation | Methods to produce chimeric adeno-associated virus/bocavirus parvovirus |
CA3014637A1 (en) | 2016-02-16 | 2017-08-24 | Mark A. Kay | Novel recombinant adeno-associated virus capsids resistant to pre-existing human neutralizing antibodies |
US20190071681A1 (en) | 2016-02-26 | 2019-03-07 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Aav heparin mutants that display significantly improved eye and brain transduction |
DK3423110T3 (da) | 2016-03-03 | 2021-11-15 | Univ Massachusetts | Lineært duplex-dna med lukket ende til ikke-viral genoverførsel |
MX2018010842A (es) | 2016-03-07 | 2019-07-04 | Univ Iowa Res Found | Expresion mediada por el virus adeno-asociado (aav) usando un promotor y pontenciador sintetico. |
WO2017165859A1 (en) | 2016-03-24 | 2017-09-28 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Modified viral capsid proteins |
DK3436593T3 (da) | 2016-03-28 | 2023-02-20 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc | Fremgangsmåder til varmeinaktivering af adenovirus |
EP3436476A4 (en) | 2016-03-28 | 2020-04-29 | The Regents of The University of California | ANTI-RYK ANTIBODIES AND METHOD FOR USE THEREOF |
CN109563496B (zh) | 2016-03-30 | 2023-08-29 | 星火治疗有限公司 | 用于重组蛋白和/或病毒载体生产的细胞系 |
SG11201808354PA (en) | 2016-03-31 | 2018-10-30 | Spark Therapeutics Inc | Column-based fully scalable raav manufacturing process |
CN109661470A (zh) | 2016-04-15 | 2019-04-19 | 宾夕法尼亚州大学信托人 | 新型aav8突变衣壳和含有其的组合物 |
WO2017181162A1 (en) | 2016-04-16 | 2017-10-19 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Methods of enhancing biological potency of baculovirus system-produced recombinant adeno-associated virus |
EP3445381A4 (en) | 2016-04-21 | 2019-10-02 | Virovek, Inc. | AAV PREPARATION IN INSECT CELLS, METHOD AND COMPOSITIONS THEREFOR |
EP3235516B1 (en) | 2016-04-22 | 2019-06-26 | Georg-August-Universität Göttingen Stiftung Öffentlichen Rechts Universitätsmedizin | Regulatable adeno-associated virus (aav) vector |
EP3449250B1 (en) | 2016-04-28 | 2020-11-04 | Indiana University Research & Technology Corporation | Methods and compositions for resolving components of a virus preparation |
WO2017189963A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
WO2017192699A1 (en) | 2016-05-03 | 2017-11-09 | Children's Medical Research Institute | Adeno-associated virus polynucleotides, polypeptides and virions |
WO2017192750A1 (en) | 2016-05-04 | 2017-11-09 | Oregon Health & Science University | Recombinant adeno-associated viral vectors |
SG11201809643UA (en) | 2016-05-18 | 2018-12-28 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating huntington's disease |
KR102392236B1 (ko) | 2016-05-18 | 2022-05-03 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
JP2020518266A (ja) | 2017-05-05 | 2020-06-25 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッドVoyager Therapeutics,Inc. | 調節性ポリヌクレオチド |
CN110913866A (zh) | 2017-05-05 | 2020-03-24 | 沃雅戈治疗公司 | 治疗肌萎缩性侧索硬化(als)的组合物和方法 |
US20220090127A1 (en) | 2017-06-02 | 2022-03-24 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm | Viral vector combining gene therapy and genome editing approaches for gene therapy of genetic disorders |
JP7221275B2 (ja) | 2017-08-03 | 2023-02-13 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | Aavを送達するための組成物および方法 |
WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
JP7502991B2 (ja) | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 |
TW202015742A (zh) | 2018-05-15 | 2020-05-01 | 美商航海家醫療公司 | 投遞腺相關病毒(aav)之組成物和方法 |
US20210361318A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-11-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Cannula system and use thereof |
US20210254103A1 (en) | 2018-07-02 | 2021-08-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
WO2020077165A1 (en) | 2018-10-12 | 2020-04-16 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for delivery of aav |
WO2020223296A1 (en) | 2019-04-29 | 2020-11-05 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
-
2015
- 2015-11-13 US US15/526,690 patent/US10597660B2/en active Active
- 2015-11-13 IL IL292999A patent/IL292999A/en unknown
- 2015-11-13 EP EP15859973.8A patent/EP3218484A4/en active Pending
- 2015-11-13 MX MX2017006216A patent/MX2017006216A/es unknown
- 2015-11-13 CN CN201580072992.1A patent/CN107109407A/zh active Pending
- 2015-11-13 CN CN202210354987.1A patent/CN114717264A/zh active Pending
- 2015-11-13 RU RU2017116576A patent/RU2716422C2/ru active
- 2015-11-13 BR BR112017010087-8A patent/BR112017010087A2/pt active Search and Examination
- 2015-11-13 AU AU2015346162A patent/AU2015346162B2/en active Active
- 2015-11-13 RU RU2020108189A patent/RU2020108189A/ru unknown
- 2015-11-13 KR KR1020237037989A patent/KR20230169197A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-11-13 WO PCT/US2015/060562 patent/WO2016077687A1/en active Application Filing
- 2015-11-13 CA CA2967367A patent/CA2967367C/en active Active
- 2015-11-13 CA CA3193811A patent/CA3193811A1/en active Pending
- 2015-11-13 SG SG11201703281RA patent/SG11201703281RA/en unknown
- 2015-11-13 KR KR1020177012963A patent/KR102599909B1/ko active IP Right Grant
- 2015-11-13 JP JP2017525847A patent/JP2017535266A/ja active Pending
-
2017
- 2017-04-25 IL IL251911A patent/IL251911B/en active IP Right Grant
- 2017-04-28 ZA ZA2017/02991A patent/ZA201702991B/en unknown
- 2017-05-12 MX MX2023007728A patent/MX2023007728A/es unknown
-
2018
- 2018-03-19 HK HK18103755.9A patent/HK1244299A1/zh unknown
-
2020
- 2020-01-28 US US16/774,493 patent/US10920227B2/en active Active
- 2020-09-24 JP JP2020159246A patent/JP2021007394A/ja active Pending
- 2020-10-13 IL IL278001A patent/IL278001B/en unknown
-
2021
- 2021-01-06 US US17/143,036 patent/US11542506B2/en active Active
-
2022
- 2022-03-01 JP JP2022030717A patent/JP2022081546A/ja active Pending
- 2022-05-04 AU AU2022202979A patent/AU2022202979A1/en active Pending
- 2022-12-20 US US18/085,222 patent/US20230332156A1/en active Pending
-
2024
- 2024-03-27 JP JP2024050822A patent/JP2024079794A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007109097A2 (en) | 2006-03-16 | 2007-09-27 | Alnylam Pharmaceuticals, Inc. | RNAi MODULATION OF TGF-BETA AND THERAPEUTIC USES THEREOF |
JP2013143917A (ja) | 2012-01-13 | 2013-07-25 | Mie Univ | 線維症予防又は治療剤 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Ann Neurol.,제57권,5호,773-776면(2005.05.) 1부.* |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR102599909B1 (ko) | 근위축성 측삭 경화증(als)을 치료하는 조성물 및 방법 | |
US20230295663A1 (en) | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) | |
JP7502991B2 (ja) | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 | |
AU2018261003A1 (en) | Compositions and methods of treating Huntington's Disease | |
AU2017268382A1 (en) | Compositions and methods of treating huntington's disease | |
US20220168450A1 (en) | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord | |
US20210254103A1 (en) | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal | ||
E90F | Notification of reason for final refusal | ||
E701 | Decision to grant or registration of patent right |