JPH08508721A - 超常磁性粒子、その製法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 腫瘍の破壊、免疫の増強及び診断の医薬に有用な新規な超常磁性粒子。非常に小さい超常磁性単一ドメイン粒子が凝集されて超常磁性粒子を形成し、その表面に反応性安定剤物質を化学的に結合させることによって更なる凝集を防いでいる。この超常磁性粒子は、磁界中で定められた行動をする粒径１０ないし１０００ｎｍの安定で分解可能な凝集体からなる。凝集体は、鉄酸化物、鉄混合酸化物、鉄の粒径３ないし２０の小さな超常磁性単一、ドメイン粒子からなり、その表面に、ホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト、チオホスフェイト、ホスホネート基含有ポリアルキレングリコール、ホスフェイト基含有ヌクレオチド、そのオリゴマーまたはポリマー、さらなる結合部位を提供するホスフェイト基含有カルボヒドレートを包含する群から選んだ化学的に結合した有機物質を有している。新規な超常磁性凝集体及び反応性安定剤物質はともに、活性物質である。

Description

【発明の詳細な説明】 超常磁性粒子、その製法及びその用途 本発明は、表面に化学的に結合した物質を有し、任意にはさらに、組織特定物 質、診断または薬理学的に作用する物質を結合する、さらなる結合位置を所有す る超常磁性粒子、及び新規な関連する化合物、及びこの超常磁性粒子及び化合物 を腫瘍の破壊、免疫の増強及び病状の診断に用いる医薬への用途に関する。 磁性粒子については、多くの刊行物及び特許に、ことに磁気分離技術及びＮＭ Ｒ診断におけるコントラスト剤として、記載されている。 １９６０年代には、強磁性粒子を、Ｘ線診断のコントラスト剤として、また磁 気的に制御された医薬の目標点投与剤として用いる試みがなされた。これらにつ いては、例えば、Meyers,P.H.et al.J.Am.J.Roentgenol.Radium Ther.Nucl.Med. ,90,1068.1963:Frei,F.H.et al.J.Appl.Phys.,39,999,1968;Nakamura et al.J.A ppl.Phys,42,1320,1971を参照されたい。磁界の影響下における磁性粒子の非可 逆的凝集は、生体内投与において問題であることが分かっている。同じことが、 DE-A-3590398,US-A-4,675,173,US-A-4,615,879,WO84/02643,GB-A-8408127及びWO 84/04330にいえる。結合させようとする組織に対する結合親和性を物質に与え得 るポリマー被覆を備えた数百から数千オングストローム単位程度のワイスドメイ ンの強磁性粒子が、ここでは提案されている。 提案されている粒径の強磁性粒子は、これがポリマー被覆を備えている場合で も、粒子が固まりになって大きな凝集体を形成するような大きな磁気モーメント を有している。この強磁性粒子は、被覆工程中でさえ凝集体の形となっている。 このような強磁性粒子は、非経口的投与においても体内に沈積され、毒性の副作 用が著しい。 同様の欠点が、DE-A-3443251及びDE-A-3443252において用いられている強磁性 粒子の分散液にもいえる。この場合、強磁性粒子間の磁気相互作用が、凝集、沈 積を導くのである。磁性粒子の非可逆的沈積は、ことに磁界の影響の下では非常 に急速に生じる。磁界が非等質性であると、磁性粒子は、きまって磁界強度の高 い点に集中する。この欠点は、ことにＮＭＲ診断及び磁性薬剤目標投与において 生じ、粒子の非常に大きな非可逆的凝集体が形成されて、血管に塞栓が詰まる大 きな危険性を生ずるのである。 さらに大きな強磁性粒子について、US-A-3,933,997,US-A-3,652,761,Nature27 0,259,1977,J.AllergyClin.Immunol.61,23,1978,US-A-4,177,253,Clin.Chem.,26 ,730,1980,Clin.Chem.,26,1281,1980,US-A-3,970,518,US-A-4,230,685,US-A-4,2 67,234,US-A-4,152,210,US-A-4,343,901に記載されている。１０ないし１６０ミ クロンの粒径のこれらの磁性粒子は、弱い磁界によっても分離されるが、その沈 積が非常に急速であるという欠点を有し、薬理学的に活性を有する物質の結合の ための特定表面面積が小さく、磁界中で非可逆的に凝集し、血液塞栓の危険ゆえ に目標投薬のためには余りにも大きい。 これらの超常磁性粒子の水性分散液内での沈積を妨げるために、吸着により粒 子表面にそれ自体で付着する安定剤物質を添加する。このような粒子は、US-A-3 ,215,572,US-A-3,531,413,US-A-3,917,538,WO85/02772,US-A-4,101,435及びUS-A -US-A-4,452,773,SE-A-8307060-7に記載されている。 吸着安定化磁性粒子は、生理学的な条件下では安定でない。これは、安定剤物 質が釈放されるので容易に凝集するからである。特定の組織に対する結合親和性 または薬理的な活性を有する物質が吸着安定化磁気粒子に結合されるならば、安 定剤物質、従って結合親和性及び薬理活性を備えた物質は、磁気粒子から釈放さ れ、この磁気粒子は結合部位に達しないか、或いは薬理活性物質が磁気目標投薬 中に作用部位において濃厚化されないという危険がある。 EP-A-0284549においては、安定剤物質はリン酸塩（ホスフェイト）またはホス ホン酸塩（ホスホネート）基を含有し、これらにより安定剤物質は、超常磁性粒 子の表面に化学的に結合する。この安定剤物質がなお、化学的に反応性のある基 を包含すると、薬理活性物質を結合することができる。これらの化学的に安定化 した超常磁性粒子な水性分散液中で沈積せず、僅かに０．００３ないし０．０１ μｍの粒径を有するのみである。非経口投薬中に安定剤物質を釈放することがな い。すなわち、血液中での凝集や沈積がなく、従って生体内での分布が良好であ る。 これらの磁性粒子は磁性薬目標投与のためには余りにも小さく、身体の特定領 域において磁性粒子を濃厚化するためには、非常に 大きな磁界勾配を用いなければならない。 小さな０．０１μｍの超常磁性粒子を、多孔質ポリマー粒子（SE-A-7706431） 、ポリグルタアルデヒドポリマー（US-A-4,267,234）、シランポリマー（US-A-4 ,554,088）、アルブミン濃縮ポリマー（US-A-4,675,173）またはセルローズエス テル（Ito,R.etal.,Int.J.Pharm.,61,109,1990）内にカプセル化することにより 、より大きな超常磁性粒子を作ることができる。この粒子の径は、０．０５ない し１００μｍの範囲である。アルブミン濃縮ポリマー及びセルローズエステル以 外の使用されるすべての重合薬品は、生理的に有害であり、体の中での磁性粒子 の溶解率は非常にゆっくりである。上述のすべての大きな超常磁性粒子は、地球 の重力場において沈積し、従って使用に先立って再分散させなければならない。 ポリマー粒子の酸化鉄成分は、重量比にして１０ないし最高５０パーセント、 容量比にして最高１０パーセントの範囲である。磁性粒子が少ないほど、体の特 定の領域においてこの磁性粒子を集中させるためには磁気目標投薬時に必要とさ れる磁界勾配は高くなる。磁性粒子の粒径が大きいほど、これらの磁性粒子は網 内皮系によって結合される。すなわち生体適合性（バイオコンパティビリティ） が減少し、結合された薬理的活性物質の量が減少する。それ故、磁気目標投薬の ための最適磁性粒子をできるだけ少なくし、薬理的活性物質の量を可能な限り多 くし、磁性材料の量を可能な限り最大限とし、この磁性材料の透磁率を可能な限 り最大限とし、体内における溶解率を可能な限り最大限として、適度の生 体適合性を有するようにしなければならない。 請求の範囲１に特定された本発明の目的は、冒頭に述べた欠点を回避し、さら に新たな適用領域、ことに腫瘍の破壊及び免疫の増強という適用領域を開くため に、新規な化合物及び超常磁性粒子を作り出すことにある。 本発明によれば、非常に小さな超常磁性の単一ドメイン粒子は凝集されるが、 この超常磁性粒子の表面上の反応性安定剤物質の化学的結合により、さらなる凝 集からは保護されることで、上述の目的が達成される。この新規の超常磁性凝集 体は、その反応性安定剤物質とともに、本発明における活性物質となる。 生物分解性を高く、毒性を可能な限り低く保つために超常磁性単一ドメイン粒 子を可能な限り小さく作ることが有利である。この超常磁性単一ドメイン粒子は 粒径が０．００１ないし０．０２ミクロンの範囲、好適には０．００３ないし０ ．０１ミクロンの範囲である。 γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、Ｆｅ₃Ｏ₄及びＦｅが、生体内投与用の生理的適合性のある物質 として使用される。さらに毒性のある磁性材料も生体外の適用として使用できる 。例えば、一般式ＭＯ−Ｆｅ₂Ｏ₃に対応する鉄混合酸化物、ここでＭは、Ｆｅ、 Ｍｇ、Ｂｅ、Ｍｎ、Ｚｎ，Ｃｏ、Ｂａ、Ｓｒ，Ｃｕまたはその混合物のような２ 価のイオン、または一般式ｍＦｅ₂Ｏ₃・ｎＭｅ₂Ｏ₃、ここでＭｅはＡｌ、Ｃｒ、 希土類金属またはその混合物のような鉄混合酸化物があげられる。 本発明によれば、超常磁性単一ドメイン粒子は、ｐＨ、温度及び 場合によっては圧力を変えることによる水性分散液中での熱処理により凝集され る。驚くべきことに、この超常磁性単一ドメイン粒子は、沈殿分散液のｐＨが８ ．０から１０．０までの範囲から３．０から７．０の範囲に変化し、５０℃から １２０℃までの範囲の温度に加熱した時に、より大きな超常磁性粒子の集塊にな るという事実が見い出されたのである。驚くべきことには、この際、強磁性粒子 に導かれるような結晶成長が生じることがなく、かえって単一ドメイン粒子の単 なる凝集が粒子のより大きな結集を生じ、これによって集塊の超常磁性特性が維 持されるのである。この集塊の安定性は、安定化超常磁性単一ドメイン粒子の極 く僅かな部分が、後の安定剤物質の添加によって形成されるに充分な程度に大き い。近接した粒径範囲内の異なった粒径が、ｐＨ温度、温度勾配、凝集時間、電 解質の型式、及び水性分散液の電解質濃度に従って生成される。分散液のｐＨが 低いほど、凝集が大きくなる。温度の上昇及び凝集時間の延長は、同じ方向に作 用する。凝集時間が余りにも長いと、本発明の用途に適さない強磁性粒子が多く なる。電解質の型式及び電解質の濃度もまた、超常磁性単一ドメイン粒子の電気 化学的複層の厚さを介して粒子の凝集に作用する。 作り出すことができる粒径は、０．０１ミクロンないし１０ミクロンの範囲で あるが、好適には０．０２ミクロンないし１ミクロン、ことに０．０２ミクロン ないし０．５ミクロンの範囲である。小径の粒子が、その表面面積の大きさ及び これに関係して活性成分の結合が多いことを考えると、好適である。 本発明によると、磁性粒子は、超常磁性粒子の表面の安定剤物質としての、モ ノホスフェイト、ジポスフェイト、ポリホスフェイト、ホスホネート、チオホス ホネートから選んだホスホン酸含有基、またはカルボキシレート、スルフェイト 、スルホネート、メルカプト、シラントリオール、またはトリアルコキシシラン 含有基の化学的結合により安定化される。この安定剤物質は、それが水と混和で き、磁性粒子の間隔を、この磁性粒子の動力学的エネルギが相互作用の磁気エネ ルギよりも大きくなるのに充分な程度に大きく維持する。安定剤物質は、以下の 物質から選ぶことができる。 （ｉ）一般式 Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂ に対応する化合物 ここで、Ｘは、アルキル部分の炭素原子が１ないし４の数であるアルコキシ、 アルキルアミノ及びアルキルチオ基から選んだ官能基か、またはヒドロキシ、ア ミン、アルデヒド、ジメチルアセタール、ジエチルアセタール、エポキシ、チオ ール、カルボキシ、４，６−シクロロトリアジン、ヒドロキサム酸、イソシアネ ート、アシルアジド、酸無水物、ジアソニウム塩、イミノカルボネート、トルエ ンスルホネート基から選んだ官能基、 Ｒは欠除か、または Ｒは、ポリアルキレングリコール、水混和性ポリプロピレングリコール基また は、 （ＰＥＧ）_a−（ＰＥＧ）_b、（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a、 （ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_b共重合体 （ここで、ＰＥＧはポリエチレングリコール、ＰＰＧはポリプロピレングリコ ール、ａは１から１００までの範囲の正の整数、ｂは１から２０までの範囲の正 の整数とする、 ｎは、ＰＥＧについては４から３００までの範囲から選んだ正の整数、ＰＰＧに ついては３から１２までの範囲から選んだ正の整数、ＰＥＧ−ＰＰＧブロック共 重合体については３から１４０までの範囲から選んだ正の整数とする） から選んだポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリピロピレングリコール（ ＰＰＧ）の水混和性ブロック共重合体基か、または Ｒは、モノサッカリドグルコース、フルクトース、リボース、デスオキシリボ ース、イノシトールから、またオリゴサッカリドサッカロース、ラフィノース、 ゲンチアノース、マレシトース、スタキオース、パーパスコースから、ポリサッ カリドスターチ、リケニン、グリゴーケン、デキストリン、デキストラン、イヌ リン、フルクトサン、ラバン、マナン、ガラクタン、キシラン、アラバン、ペク チン、マクロポリサッカリド、グリコプロテインから、ポリウリデニル酸、ポリ グルクロン酸、ポリガラクツロン酸、ポリマンヌロン酸、及び／またはアルギン 酸から選んだ炭水化物基であり、 Ａは、欠除か、または Ａは、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキルアミン基（こ こでアルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキル基の炭素原子数は１ないし４ の範囲とする）であり、 Ｂは、モノホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト、ホスホネート 、チオホスフェイト、チオホスホネート、から選んだリン含有基、またはカルボ キシレート、スルフェート、スルホネート、メルカプト、シラントリオールまた はトリアルコキシシラン含有基である。 （ii）ホスフェイト基含有ヌクレオチド モノ、ジ、トリ リン酸エステル 、またはアデノシン、グアノシン、キチジン、ウリヂン、シミヂン、デソキシア デノシン、デソキシグアノシン、デソキシシチヂン、デソキシシミヂン、イノシ ン、ピリミヂン、シトシン、ウラシル、シミン、プリン、アデニン、グアニン、 メチルキトシン、５−ヒドロオキシメチル−キトシン、２−メチルアデニン、１ −メチルグアニン、チアミン、フラビン、リボフラビン及びピリドキサールホス フェイト、ピリドキサミンホスフェイト、リボ核酸、リボ核酸シーケンス、デソ キシリボ核酸、デソキシ核酸、デソキシ核酸シーケンスのモノ、ジ、トリリン酸 エステルクロライド。 （iii）オルトケイ酸のケイ酸塩基含有化合物及びその縮合生成物、及び／ または、 （iv）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂが、メルカプトプリン、メルカプトシトシン、メルカ プトグアニン、メルカプトウラシル、メルカプトシミン、メルカプトヒポキサン シン、及びそのメルカプトヌクレオシド及びそのメルカプトデソキシヌクレオシ ドである。 （ｖ）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂがポリアミノカルボヒドレートである。 安定剤物質の例をあげると次の通りである。 （vi）モノ及びジ［ω−エチルアミノポリエチレングリコール］−シホスフ ェイト［ＰＥＧの分子量（分子量）約１５００］、ポリグリコールＭ４１／４０ （ドイツヘキスト社の商品名）から生成したモノ及びジ［ω−エトキシポリエチ レングリコール］−チオホスフェイト（PEGの分子量約１０００）、またはモノ 及びジ［ω−メトキシポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコール］− ホスフェイト モノ及びジ［ω−ヒドロキシポリエチレングリコール］−ホスフェイト（ＰＥ Ｇの分子量約１５００）、及びモノ及びジ［ω−オキソエソキシポリエチレング リコール］−ホスフェイトまたはそのアセタール（ＰＥＧの分子量約２０００） 、モノ及びジ［ω−オキソエチルアミノポリエチレングリコール］−ホスフェイ トまたはそのアセタール（ＰＥＧの分子量約７５０）、モノ及びジ［ω−アミノ アルコキシポリエチレングリコール］−チオホスフェイト（ＰＥＧの分子量約１ ０００）、シンパーロニックＦ６８（英国ＩＣＩ社の商品名）から生成したモノ 及びジ［ω−ヒドロキシポリエチレングリコールポリブロピレングリコール］− ホスフェイト、モノ及びジ［ω−メトキシポリエチレングリコール］−ジホスフ ェイト（ＰＥＧの分子量約１０００）、モノ［ω−オキソエトキシポリエチレン グリコール］−ジホスフェイトのジメチルアセタール（ＰＥＧの分子量約２００ ０）、モノ［ω−エトキシポリエチレングリコール］−ポリホスフェイト（ＰＥ Ｇの分子量約２０００）、ポリグリコールＭ−４１／４０（ドイツヘキスト社の 商品名）から生成したモノ［ω−メトキシ ポリエチレングリコールポリプロピレングリコール］−ジホスフェイト。 これらの反応性ポリアルキレングリコール含有安定剤物質はまた、ヒドロキシ ル、カルボニルまたはアミノ基とともに用い、他の反応性官能基、例えばチオー ル、エポキシ、カルボキシ、４，４，６−ジクロロトリアソンヒドロキサム酸、 イソシアネート、アシラジド、アンヒドリド、ジアソニウム塩、イミノカルボネ ート、トルエンスルホネート基、を導入して、組織特定及び薬理活性物質のため の他の結合部位を形成させる。 （ii）ホスフェイト基含有ヌクレオチドの、アデノシン、グアノシン、シチ ジン、ウリジン、シミシン、デソキシアデノシン、デソキシグアノシン、デソキ シシチジン、デソキシシミジン、イノシン、ピリミシン、シトシン、ウラシル、 シミン、プリン、アデニン、グアニン、メチルシトシン、５−ヒドロキシメチル シトシン、２−メチルアデニン、１−メチルグアニン、シアミン、フラビン、リ ボフラビン、さらにはピリドキサルホスフェイト、ピリドキサミンホスフェイト 、リボ核酸、リボ核酸シーケンス、デソキシリボ核酸、デソキシリボ核酸イーケ ンスのモノ、ジ、トリリン酸エステルまたはモノ、ジ、トリリン酸エステルクロ ライド。 （iii）ホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト及びチオホスフ ェイト、カルボキシレート、スルフェイト、スルホネート、メルカプト、シラン トリオールまたはトリアルコキシシラン基含有カルボキシヒドレート。カルボキ シヒドレート基は、モノサッカリドグルコース、オリゴサッカリドサッカロース のフルク トース、リボース、デソキシリボース、イノシトール、ポリサッカリドスターチ のラフィノース、ゲンチアノース、マレシトース、スタキオース、ベルバスコー ス、ポリウリジニル酸、ポリグルクロン酸、ポリガラクツロン酸、ポリマンウロ ン酸及び／またはアルギン酸のリケニン、グリコーゲン、デキストリン、デキス トラン、イヌリン、フルクトーサン、ラハン、マンナン、ガラクタン、キシラン 、アラバン、ペクチン、マクロポリサッカリド、グリコプロテイン。さらには、 これらの基のいくつか。 本発明によれば、組織特定結合物質または薬理的に活性の物質は、安定剤物質 が少なくともふたつの化学的に反応性のある官能基、すなわち、超常磁性粒子に 対する化学的結合のためのホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト、 チオホスフェイト、ホスホネート、チオホスホネート、カルボキシレート、スル フェイト、スルホネート、メルカプト、シラントリオールまたはトリアルコキシ シラン基、及び残りの官能基、すなわち、例えば組織特定結合物質及び薬理活性 物質の結合に没立つヒドロキシル、アミン、アルデヒド、エポキシ、チオール、 カルボキシ、４，６−ジクロロトリアジン、ヒドロキサミン酸、イソシアネート 、アシルアジド、アンヒドリド、ジアソミウム塩、イミノカルボネート、トルエ ンスルホネート基を有するならば、超常磁性粒子に結合したこの安定剤物質に結 合されるのである。 このような安定剤物質は、例えばモノ、オリゴまたはポリサッカリドホスフェ イト、カルボキシレート、スルフェイト、スルホネート、チオール、シラントリ オール、またはトリアルコキシシ ランを包含する。これらは、超常磁性粒子の表面に化学的に結合する前または後 に対応する官能基を備えている。上述の安定剤物質はまた、対応するポリ酸を包 含している。官能基を安定剤分子に導入することは、当業界において公知である 。 カルボキシヒドレートを基礎とするこれらの反応性安定剤物質に加えて、反応 性ホスフェイト基含有バイオ分子を使用することが可能である。例えば、ピリミ ドキサルホスフェイト、ピリミドキサミンホスフェイト、またはコーカルボキシ ラーゼ；例えばメルカプトプリン、−シトシン、−グアニン、−ウラシル、−シ ミン、−ヒポキサンシン、さらにこのメルカプトヌクレオシド及びそのメルカプ トデソキシヌクレオシドのようなメルカプト基含有物質；例えばω−エチルアミ ノ−ポリエチレングリコール−トリメトキシシラン（ＰＥＧの分子量は約１００ ０）、ω−メトキシ−ポリエチレングリコール−トリメトキシシラン（ＰＥＧの 分子量は約７５０）またはポリエチレングリコールＭ４１／４０（ヘキスト社） から得たω−メトキシ−ポリエチレングリコール−ポリプロピレングリコール− チオエチル−トリエトキシシラン、ω−ヒドロキシ−ポリエチレングリコール− シラントリオール、３−クロロプロピル−トリ−メトキシシラン、２−メルカプ トプロピル−トリエトキシシラン、３−アミノプロピル−トリメトキシシラン、 ３−（２−アミノエチルアミノ）プロピル−トリメトキシシラン、ビニル−トリ エトキシシラン、ビニル−トリ（メトキシエトキシ）シラン、メタクリルオキシ プロピル−トリメトキシシラン、またはポリ−トリアルコキシシリル−スターチ 、ポリ−トリ アルコキシシリル−デキストラン、ポリ−トリアルコキシリル−デキストリン； 例えばデキストランスルフェイト、デキストリンスルフェイト、イヌリンスルフ ェイトのようなスルフェイト基含有物質；例えばポリカルボキシデキストラン、 ポリカルボキシデキストリン、ポリカルボキシアミロペクチンのようなカルボキ シレート基含有物質；ポリアミノデキストランのようなポリアミノ基含有物質； オルトケイ酸及びその縮合生成物のシリケート基含有化合物、超常磁性粒子の安 定化にここで使用される濃縮可能なヒドロキソアルミネートを伴うアルカリシリ ケート卜のナトリウムシリケートまたはカリウムシリケート溶液またはアルカリ 溶液；さらにそのポリ化合物である。 本発明によれば、例えば抗原、抗体、ハプテン、プロテインＡ、プロテインＧ 、エンドトキシン結合プロテイン、レクチン、セレクチンのような組織特定結合 物質が安定剤分子に結合できる。この安定剤分子は、そのモノホスフェイト、ジ ホスフェイト、ポリホスフェイト、ホスホネート、チオホスフェイト、チオホス ホネート、カルボキシレート、スルフェイト、スルホネート、メルカプト、シラ ントリオール、またはトリアルコキシシラン基をもって超常磁性粒子表面に化学 的に結合され得る。 例えば抗腫瘍プロテイン、酵素、抗腫瘍酵素、抗生物質、植物性アルカロイド 、アルキル化剤、代謝阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、インターロ イキン、インターフェロン、成長因子、腫瘍ネクローシス因子、エンドトキシン 、リンホトキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラシミノーゲン−ス トレ プトキナーゼ−アクチベータ−錯体、組織プラスミノーゲン−アクチベータ、デ スモーズス−プラズミノーゲン−アクチベータ、マクロファージ−アクチベータ 体、アンチセラ、プロテアーゼインヒビター、放射性リン³²Ｐ含有安定剤物質、 表面活性剤または例えば細胞器官、ウイルス、細菌、藻類、菌類、ことに赤血球 、血小板、顆粒白血球、単核白血球、リンパ球、ランケルハンス島、またはポリ カルボキシル酸、アミノカルボキシル酸、ポルフィリン、カテクラミンを包含す る群から選んだ薬理活性細胞、または細胞融合促進物質のような薬理活性物質が 、各別にまたは互いに反応性安定剤物質に結合させることができる。細胞融合促 進物質としては、ポリエチレングリコール、例えば超常磁性粒子の安定剤物質内 の高濃度の状態にある時でも約２５重量パーセントの濃度のポリエチレングリコ ールが細胞融合をもたらす。この細胞融合は、ポリエチレングリコール含有超常 磁性粒子が腫瘍中に濃縮されていると、腫瘍組織にさらに損害を与えることがで きる。 本発明によれば、ホスフェイトまたはホスホネート基含有薬はまた、例えば安 定剤物質に加えて、エストラムスチン、ジエチルスチルベンストロール−ジホス フェイトを、超常磁性粒子の表面に化学的に結合することができる。 これら薬理活性物質の毒性は、磁性粒子がその組織特定相互作用により対応す る結合部位において好適に集中されるため、または磁気薬目標投与によって活性 部位に運ばれて集中されるため、比較的に高くすることができる。この薬理活性 物質の投与量は、この物資他が活性部位に集中されるので少量に止めることがで き、 体の他の部位では僅かな影響しか与えない。 薬理活性物質の超常磁性粒子への結合は、治療の過程が各磁気スピン診断によ って観察でき、緩和時間の減少を介して更なる利益が得られる。 超常磁性粒子は、超常磁性単一ドメインの計画的な凝集によって生成される。 超常磁性単一ドメイン粒子は、水中で撹拌されオートクレーブ中で１００℃以上 の温度、５０℃から１２０℃までの温度に加熱してｐＨ３ないし７において集合 させる。冷却後、粒子は、濾液の電気導通性が、１０μＳ／ｃｍ以下となるまで 洗浄する。このようにして得た超常磁性粒子は、直ちに急速沈殿物を形成し、こ れは、激しく撹拌しても、また超音波処理をしても、安定した分散液とはなり得 ない。超常磁性粒子の表面上に、ホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェ イト、チオホスフェイト、ホスホネート、カルボキシレート、スルフェイト、ス ルホネート、チオール、シラントリオール、またはトリアルコキシシラン基含有 物質を化学的にに結合するに際しては、急速拡散を許容する。若干の安定剤物質 では、ガラス棒によりわずかに撹拌する。 適用分野によっては、磁性分散液を透折して安定剤物質の過量分を取り除くこ とができる。透析は、組織特定結合物質及び薬理活性物質の結合に使用されるべ き化学的に反応性の超常磁性粒子について必要である。 安定化超常磁性粒子分散液は、まだ凝集していないかまたは僅かに凝集してい る超常磁性単一ドメイン粒子を包含する。これらの単一ドメイン粒子は、安定な 磁性液を形成し、この液は、適宜の 強さ及び非均一性の磁界中での沈殿により容易に、大きな超常磁性粒子から分離 することができる。 磁気分離の簡単なやり方は、磁性分散液を入れたビーカを、磁束密度０．１ｍ Ｔの永久磁石上に置き、約３０分の沈殿時間の後、上澄みの磁性液をこぼす。超 常磁性粒子はビーカ内に留まり、瞬時に分散液中に再分散するか、粒径に応じて ビーカ中に沈積物として残る。超常磁性粒子は、約５００ｎｍの粒径までのもの が、同時にまたは僅かな撹拌に伴って再分布される。約５００ｎｍより大きい粒 径の超常磁性粒子は、激しく撹拌することにより、または超音波処理により容易 に分散させることができる。 本発明による超常磁性粒子の沈積安定性は、同じような磁性特性を有する既知 の磁性粒子の沈積安定性よりも目立って高い。これは、おそらく超常磁性粒子を 囲む水の分子が強い構造をなし、これによりストークの分子直径が増すことによ ると考えられる。 安定剤物質の分量が少ないので、超常磁性粒子の磁気特性は、これまで知られ ている磁性粒子の磁気特性よりも強力である。超常磁性単一ドメイン粒子の量は 、従来知られている磁性粒子中における量よりも著しく高いので、非均質磁界中 での超常磁性粒子の分離率も高い。粒径約１００ｎｍマグネタイト成分９５％の 超常磁性粒子の1０重量％水性分散液において、磁束密度０．１ｍＴの永久磁石 上での磁性粒子の分離時間は１分である。 本発明による超常磁性粒子は、９０ないし９８重量％の鉄酸化物成分を有する 。このことは、鉄酸化物の含有量５０％までの従来の磁性粒子に比べて、磁気特 性において可成りの改善があること を意味する。従って、この新規の超常磁性粒子は、同じ磁気相互作用をなす既知 の磁気粒子に比べてかなり小さくすることができる。特定表面積が増大し、より 多くの薬理活性物質または組織特定結合物質をこの表面に結合させることができ る。粒子寸法が減少するので、生物適合性が改善され、体内での分解率が増す。 磁気目標投薬中、磁性粒子の自由有効時間すなわち粒子が網内系によって結合さ れるまでの時間もまた、粒径が減少するにつれて増大する。 体内における超常磁性粒子の生体適合性はわずか数分のこと、すなわち網内系 が超常磁性粒子を非常に急速に結合する。マクロファージ及び好中球顆粒球は、 これらが超常磁性粒子に付着すると磁化特性を帯びることとなる。この付着は、 マクロファージや好中球顆粒球のレセプタに結合された超常磁性粒子の安定剤物 質次第である。このような結合が生ずると、磁化されたマクロファージや好中球 顆粒球は磁界によって動かされる。マクロファージや好中球顆粒球は、高内皮ベ ノールの内皮バリヤに浸透し、組織内に入る。磁化されたマクロファージや好中 球顆粒球をもってすれば、このプロセスは、磁界の効果により助けられる。本発 明による超常磁性粒子を腫瘍に磁気目標投与すると、磁化されたマクロファージ や好中球顆粒球の腫瘍内への加速濃縮が生じて、腫瘍組織の免疫学的破壊が開始 される。 接触材料の間の透磁率の差及び作用する磁界の自乗に比例する機械的な力が、 超常磁性粒子と反磁性細胞との位相境界に発生する。 本発明による粒子は超常磁性粒子量が非常に多く、安定剤物質は 数ナノメートルの単分子層であるのみであるので、細胞の破壊につながる力は反 磁性細胞との位相境界において生ずるのである。この力は、腫瘍の破壊、例えば 腫瘍内への超常磁性粒子の集中の過程において腫瘍の破壊を生じさせる。この磁 気機械的効果はまた、超常磁性粒子の安定剤物質と腫瘍組織との相互作用時に、 腫瘍組織の用面分子を超常磁性粒子に結合させ、この超常磁性粒子によって引き 出されるようにする。これらの超常磁性粒子が、マクロファージ及び好中球顆粒 球によって捕食されると、腫瘍の表面分子は、たとえこれらが免疫系によって抗 原として認識されなくても、抗原として認識される。腫瘍の表面分子への多少な りとも強い免疫反応が生じ、従って腫瘍の破壊が生ずるのである。 磁気機械的な効果による免疫系の刺激はまた、反応性超常磁性粒子にウイルス 、バクテリア、菌類を生体外で混合することにより達成することができる。この ようにすることにより、例えばモノ−［ω−オキソエトキシ−ポリエチレン−グ リコール］−ホスフェイトを有する安定化された超常磁性粒子が、ウイルスまた はバクテリアの表面蛋白質のアミノ基に等価の化学的結合を果たすこととなる。 ウイルス、バクテリア、または菌類の表面の表面分子は、強い均質の磁界の作用 により、または既知の細胞消化法により超常磁性粒子で形成される。これらの超 常磁性蛋白質フラグメントは、体の中に注入された時網内皮系によって吸収され 、この蛋白質フラグメントは抗原として認識され、体は対応する免疫反応をもっ て反応する。中でも、適当な抗体を形成させるのである。それ故、体内の免疫反 応はまた、体によって抗原そのものとして認 識されなかった蛋白質によって剌激され得る。このことは、今まで好適な化学療 法がなかった、または今まで使用された医薬に対する抵抗性が生じている、腫瘍 細胞、ウイルス、バクテリア、イーストまたは菌類に対する体の免疫防御の形成 に特に重要である。 生体内投与によって免疫の刺激及び生物学的活性細胞の破壊に通ずることので きる免疫刺激超常磁性分子錯体は、例えば腫瘍細胞、ウイルス、バクテリア、イ ースト菌類の表面分子への反応性超常磁性粒子の結合により、及び強い非均質磁 界を使ってまたは公知の細胞消化法によってこれらの表面分子を分離することに より得ることができる。 ポリアルキレングリコールを基礎とするジホスフェイトまたはポリホスフェイ ト含有安定剤物質は新規な化合物であり、これは腫瘍破壊効果を有する。 マウスの腫瘍が、この安定剤物質の生体内投与により破壊された。この腫瘍破 壊効果は、これら安定剤物質を超常磁性粒子に結合することにより増強され得る 。これは、腫瘍内の安定剤物質の集中が磁気目標投薬によって増大されるからで ある。磁気目標投薬による腫瘍破壊効果の増強に加えて、初めの目に見える腫瘍 破壊に至る作用時間の可成りの減縮も観察される。 安定剤物質は従来技術によって容易に生成させることができる。 ポリエチレングリコールは、例えば２−メトキシエタノール、アミノアセタール デヒドリド−ジメチルアセタール、２−メトキシエチルアミン、２−アミノエタ ノールにエチレンオキシドのよう な反応性有機出発化合物のオキセシレーションにより生成される。これについて は、Houben-Weyl,volume XIV/2,page 425 et seq（1963）を参照されたい。 ポリエチレングリコールへのホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイ トまたはチオホスフェイト基の導入は、室温または高めた温度での各種リン酸化 試薬により容易に行うことができる。これについては、Houben-Weyl,volume Xll /2,page 131 et seq（1964）,volume E2,Xll/2,pages 300 et seq（1982）を参 照されたい。 ホスホネート基含有カルボヒドレート及びホスフェイト基含有ポリサッカリド カルボキシル酸は、同様なやり方で生成される（US-A-2970141参照）。 ジメチルアセタールに対応するアルコールは、エトキシ化中及びホスフェイト またはホスホネート基の導入中オキソ基を保護するために、ω−オキソアルコキ シ−ポリエチレングリコール ホスフェイトの生成の出発材料として好適に使用 される。アセタールは、酸を加えた酸性加水分解またはイオン交換器による注意 深い開裂により自由化され得る。Houben-Weyl,volume VI/3,pages 203-293（196 4）参照。 ホスホネイト基含有ポリエチレングリコールは、多くの方法により生成するこ とができる。G.M.Kosolapoff,L.Maier,OriganicPhosuphorous Compounds Wiley Inters.,New York,1972-1976,volume 7,pages 1-486（1976）,Houben-Weyl,volu me Xll/1,pages338-619（1963）,Houben-Weyl,volume E2,pages 300-486（1982 ）及びことにDE-A3407565,DE-A-2424453及びDE-A-3203309参照。 シリケート基含有有機物質は、一般式 Ｘ−Ｒ−Ｌｉ または Ｘ−Ｒ−Ｎａ に対応するリチウム有機化合物またはナトリウム有機化合物と、テトラアルコ キシシランまたはトリアルコキシクロロシランとの反応によって生成される（Ho uben-Weyl,volume XIII/5,pages 180 etseq（1980）参照）。 シリケート基含有有機化合物を生成するさらに簡単な方法は、Ｘ−Ｒ−（ｐ− トルエンスルホネート）と、例えば２−メルカプトプロピル−トリエトキシシラ ン、３−アミノプロピル−トリエートキシシランとをアルカリ性媒体中で反応さ せることである（K.Nilssonn,K.Mosbach;Eur.J.Biochem.112,397-409,1980参照 ）。 メルカプト基含有有機物質は、例えばX−Ｒ−ハロゲン化合物をチオ尿素と反 応させ、次いでアルカリ加水分解し、対応するメルカプト化合物とすることによ り生成される（Houben-Weyl,volumeIX,pages 3 et seq(1955),volume E2,XIE,pa ges 32 et seq（1985）参照。 ポリカルボキシル酸基含有カルボヒドレートは、カルボヒドレーートの酸化、 例えばマンガン酸カリ、イオン（II）塩／水素 過酸化物、過ヨウ素酸による酸 化により生成される（A.H.Haines,Editor,Methods for the Oxidation of Origa nic Compounds,Academic Press,London,1988参照）。 シリケート基含有無機凝集生成物は、単にナトリウムシリケート溶液を、例え ばナトリウムアルミネートに混合するだけで生成される。 ポリスルフェート基含有カルボハイドレートは、例えばカルボハ イドレートのクロロスルホン化により生成される。 本発明による超常磁性粒子の主用途は、磁気目標投薬の分野である。磁性材料 の含有量が非常に多い（９０ないし９８重量％）ので、小さな磁性粒子でも電磁 場または永久磁石の磁場により、体の特定の領域に非常に良好にかつ非常に急速 に集中させることができる。薬理活性物質が超常磁性粒子と結合している時、そ の濃度は作用部位において劇的に増大する。この事実は、癌の治療において特に 重要である。何故ならば、腫瘍の化学療法に用いられる物質は全器官に非常に際 だった副作用を与えるが、作用場所に集中していれば、体の残りの部分は細胞分 裂抑制剤によって著しく影響されない。 超常磁性粒子は、ウイルス、細胞及びその表面分子と結合している時、体の免 疫活性化に使用することができる。この時、磁界の効果は免疫活性化を助ける。 反応性超常磁性粒子はまた、対応する診断物質がこの粒子の表面に化学的に結 合しているならば、生体外診断に使うことができる。磁界との際だった磁気相互 作用のため、非常に小さな超常磁性粒子でも、診断反応の後再び反応混合物から 容易に分離することができる。 超常磁性粒子はまた、核スピン診断のためのコントラスト剤として用いること ができる。 磁気目標投薬中、使用される超常磁性粒子の濃度は、粒径、安定剤物質の塑性 、作用部位における磁界強さ及び注射部位と作用部位との間の距離に依存する。 裸のマウスの腫瘍の壊死を果たさせ るためには、血液量の約０．０１ないし０．２容量％の注射液量が必要で、磁気 飽和誘導は約５ｍＴである。 ＭＲＩのためのコントラスト剤としての適用にあたっての超常磁性粒子の量は 、磁気飽和誘導が約５ｍＴである時、血液容量の約０．００１容量％である。 本発明による超常磁性粒子の製造を、以下に例を示して述べる。 例 １ 塩化鉄（III）（２７０ｇ）及び塩化鉄（II）（１１９ｇ）を、蒸留水１リト ッルに溶解する。この溶液のｐＨは、撹拌しながらアンモニア性液を添加するこ とにより９．６に調整される。沈降をさせた後、塩酸により分散液をｐＨ６．０ に調整し、この分散液を１００℃に加熱する。冷却後、濾液の電気導通性が１０ μＳ／ｃｍ以下になるまで、沈殿物を蒸留水で洗浄する。このようにして形成さ れた超常磁性粒子はＦｅ₃Ｏ₄からなる。これは安定化され得る。 例 ２ 塩化鉄（III）（２７０ｇ）と硫酸鉄（II）（１５３ｇ）とを蒸留水1リットル に溶解する。撹拌しながらアンモニア性液を添加して、この溶液のｐＨを９．０ に調整する。沈降させた後、分散液を、撹拌しながら塩酸を加えることにより、 ｐＨ５．０に調整する。これを３０％水素過酸化物溶液（２２ｍｌ）と反応させ 、３０分間８０℃に加熱する。分散液を冷却後、沈殿物を、濾液の電気導通性が １０μＳ／ｃｍ以下になるまで洗浄する。このようにして形成された超常磁性粒 子は、γ−Ｆｅ2Ｏ3からなり、安定 化され得る。 例 ３ 塩化鉄（III）（２７０ｇ）及び塩化亜鉛（８２ｇ）を、蒸留水１リットルに 溶解する。撹拌しながら苛性カリを加えて、ｐＨ８．５に調整する。沈降させた 後、分散液に塩酸を加えながら撹拌してｐＨ４に調整し、オートクレーブ中にお いて１１０℃に加熱する。この分散液を冷却後、濾液の電気導通性が１０μＳ／ ｃｍ以下になるまで沈殿物を水洗する。形成された亜鉄酸亜鉛は安定化され得る 。 この超常磁性粒子は、室温において水性または低沸点極性溶媒含有安定剤溶液 をこの磁性粒子に混合することにより安定化される。安定剤溶液は、所望の特性 に依存して、純粋な安定剤物質または安定剤物質混合物とすることができる。分 散及び安定化を促進するために、分散液を撹拌するか、超音波処理することがで きる。低沸点有機溶媒を用いるならば、安定化の後、真空蒸発または透析により これを除去することができる。 この超常磁性粒子の安定化については、例をあげて後述する。 例 ４ 例１により得たマグネタイト沈殿物のすべてを、蒸留水５００ｍｌ中モノ［ω −メトキシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約１０００）５ ０ｇの溶液内に導入し、５分間撹拌する。形成された分散液は、磁束密度０．１ Ｔの永久磁石上で３０分間沈降させる。表面に浮かんだ材料を磁性流体から吸引 する。磁界上の沈積物に超常磁性粒子が含まれる。この超常磁性粒子は、 蒸留水で洗浄し磁界内に沈積をなす工程を数回繰り返すことにより純化され、粒 径の分布も揃う。この超常磁性粒子は、平均粒径１２０ｎｍである。この超常磁 性粒子は、腫瘍における磁気集中に非常に好適である。これは、磁気機械的免疫 刺激またはこれに加えて高体温、すなわち電磁線照射及び腫瘍加熱により、腫瘍 を破壊することができる。超常磁性粒子はまた、ＭＲＩ用の経口または静脈注射 のコントラスト剤として用いることができる。 例 ５ 例３で得た亜鉄酸亜鉛沈殿物のすべてを、蒸留水５００ｍｌ中にジ−［ω−メ トキシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約１５００）５０ｇ の溶液中に導入し、１００Ｗの出力の超音波により５分間分散させる。この結果 得られる超常磁性粒子は、粒径３１０ｎｍである。分散液は蒸留水に対して透析 し、０．４５μｍのフィルタにより濾過する。この結果得られた製品は、ＭＲＩ 用の経ロコントラスト剤として用いることができる。 例 ６ 例２で得たγ−Ｆｅ2Ｏ3粒子のすべてを、蒸留水５００ｍｌ中モノ−［ω−オ キソエトキシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約１８００） ２０g及びジ−［ω−メトキシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分 子量約１０００）１５ｇの溶液中に導入し、超音波分散器（出力１００Ｗ）によ り５分間分散させる。得られた分散液を５０ｋＤフィルタを通して蒸留水に対し て透析し、過量分の安定剤物質を取り除く。凝集してないか、または弱く凝集し ているのみの安定した磁性流体を形 成する超常磁性単一ドメイン粒子が、例４に記載したような磁気沈積によって分 離される。この超常磁性粒子は、平均粒径１８０ｎｍである。 例６に従って作った超常磁性粒子は、アルデヒド基の反応性が適用される多く の結合反応に用いることができる。例えば、ストレプトキネーゼまたはプラスミ ノーゲンストレプトキネーゼアクチベータ錯体のようなアミノ基含有薬理活性物 質の結合に用いられる。 例 ７ 磁気飽和誘導５ｍＴを有する例６からの分散液１０ｍｌを、アニストレプラー ゼ（anistreplase）３０ｍｇと混合し、室温において２０分間静置する。こうし て得た生成物は、血栓溶解用の磁気目標投薬に用いることができる。 例６に従って作った反応性超常磁性粒子はまた、例８において記載するように 、腫瘍治療の磁気目標投薬用の物質の生成にも好適である。 例 ８ 磁気飽和誘導５ｍＴの例６による分散液１０ｍｌを、１０重量％のミトマイシ ンＣ１０ｍｌと混合し、室温下で３０分間震とうする。得られた生成物は、白血 病に対する磁気目標投薬に好適である。 例 ９ 磁気飽和誘導５ｍＴの例６の分散液１０ｍｌを、エピルビシン塩酸塩１０ｍｇ と混合し、室温において２０分間震とうする。得ら れた生成物は、腫瘍治療における磁気目標投薬に好適である。 ホスフェイトまたはホスホネート基含有薬もまた、本発明による超常磁性粒子 の表面に直接に化学的に結合させることができる。これは、加えようとする安定 剤の量の０．２ないし０．３倍の量が薬の形で不安定の沈殿物に加えられ、対応 する残りの量の安定剤が５分間の撹拌後、連続撹拌をもって加えられる。 例 １０ 例１により得たマグネタイト沈殿物のすべてを、２５０ｍｌの蒸留水中１０ｇ のエストラムスチンの溶液と混合し、５分間撹拌する。次いで、ジ−［ω−メト キシポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約７５０）４０ｇを、混 合液に加え、５分間撹拌する。得られた分散液は、磁束密度０．１ｍＴの永久磁 石の上で３０分間沈積し、上澄み材料は磁性流体から吸引する。永久磁石上の沈 積物は超常磁性粒子を含み、これを０．４５μｍのフィルタを通して濾別する。 得られた生成物は、前立腺の癌への磁気目標投薬に用いられる。 例 １１ 例１のマグネタイト沈殿物のすべてを、混合比約８：１：１、平均分子量約７ ５０のモノ−［ω−メトキシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト、−ジ ホスフェイト、−ポリホスフェイトの混合物４０ｇを蒸留水５００ｍｌに溶解し た溶液に導入し、５分間撹拌する。こうして得られた分散液を、磁束密度０．１ Ｔの永久磁石の上で３０分間沈積する。上澄み材料は磁性流体から吸引して出す 。磁界上の沈積物は、超常磁性粒子を包含している。 超常磁性粒子は、蒸留水の洗浄を数回行い、磁界での沈積を繰り返すことにより 、純粋な形でしかも粒径分布が揃った形で得ることができる。超常磁性粒子は平 均流径１２０ｎｍである。 この超常磁性粒子は、腫瘍での磁気集中に非常に好適である。超常磁性粒子は 、磁気機械的免疫刺激により、またはこれに加えて高体温すなわち電磁線の照射 及び腫瘍の加熱により、腫瘍を破壊することができる。この超常磁性粒子は、Ｍ ＲＩ用の経口または静脈注射のコントラスト剤として用いることができる。 超常磁性粒子は、安定剤混合物を用いることにより、特定の選択されたｐＨ値 で凝集され得る。このようにして、アルカリ性腫瘍内の超常磁性粒子の沈積が、 例えばコカルボキシアーゼ、モノ−及びジ−［ω−メトキシ−ポリエチレングリ コール］−ホスフェイトの混合物を安定剤として用いて、磁気目標投薬による集 中に加えて、腫瘍の磁気機械的破壊に導かせることができる。 例 １２ 例１のマグネタイト沈積物を、蒸留水５００ｍｌ中、モノ−［メトキシ−ポリ エチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約２０００）１５ｇ、ジ−［メト キシ−ポリエチレングリコール］−ホスフェイト（分子量約２０００）１５ｇ、 及びコカルボキシラーゼ１２ｇの溶液内に導入し、超音波により５分間分散させ る。この結果得られた分散液は、磁束密度０．１Ｔの永久磁石上で沈積させ、上 澄み材料は磁界から吸引して出す。磁界上の沈積物は、超常磁性粒子を含んでい る。この超常磁性粒子は、蒸留水で数回洗浄し、磁界内で沈降を繰り返して純粋 な形で近接した粒径分布 のものとして得られる。この超常磁性粒子は、平均粒径１２０ｎｍである。 この超常磁性粒子は、腫瘍内への磁気集中に非常に好適である。超常磁性粒子 は、磁気機械的免疫刺激、またはこれに加えて高体温すなわち電磁線照射及び腫 瘍の加熱により、腫瘍を破壊する。磁界は免疫剌激の有効性を増大させることが できる。 本発明による新規なジホスフェイト−及びポリホスフェイト含有安定剤物質は 、単独で、すなわち超常磁性の凝集体に結合させることなく、体に全身的に投与 して腫瘍を破壊するのに用いることができる。上述の安定剤物質のひとつまたは それ以上と薬理的に受け入れることができるキャリヤ、例えば生理食塩水の混合 物をこの目的に用いることができる。 例 １３ モノ−［ω−メトキシ−ポリエチレングリコール］−ジホスフェイト（分子量 約１０００）４ｇを生理的食塩水１００ｍｌに溶解し、０．２μｍのフィルタを 介して無菌濾別する。得られた流体は、腫瘍の破壊に用いるに好適である。 例 １４ 例１で得られたマグネタイト沈積物のすべてを、蒸留水５００ｍｌ中に４０％ ケイ酸ナトリウム溶液５０ｇを入れた溶液中に導入し、５分間撹拌する。この結 果得られた分散液を、磁束密度０．１Ｔの永久磁石上で３０分間沈積し、上澄み 材料を磁性流体から吸引して除去する。磁界内の沈積物は超常磁性粒子である。 この超常磁性粒子は、蒸留水で数回洗浄し、磁界内で沈降を繰り返し て純粋な形で近接した粒径分布のものとして得られる。この超常磁性粒子は、平 均粒径１２０ｎｍである。 この超常磁性粒子は、腫瘍内への磁気集中に非常に好適である。超常磁性粒子 は、磁気機械的免疫刺激、またはこれに加えて高体温すなわち電磁線照射及び腫 瘍の加熱により、腫瘍を破壊する。超常磁性粒子はまた、ＭＲＩ用の経口または 静脈注射のコントラスト剤として用いることができる。 例 １５ 例２で得たγ−Ｆｅ₂Ｏ₃沈積物のすべてを、蒸留水５００ｍｌに３−メルカプ トプロピル−トリメトキシシラン２０ｇの溶液内に導入し、出力１００Ｗの超音 波により５分間分散させる。 このようにして得た超常磁性粒子は、直径３１０ｎｍである。分散液は、蒸留 水に対して透析され、０．４５μｍのフィルタを通して濾別する。得られた生成 物は、モノクロナール抗体の結合用に用いることができる。 例 １６ 例１で得たマグネタイト沈積物のすべてを、水５００ｍｌ中のω−メトキシ− ポリエチレングリコール−トリメトキシシラン（分子量１０００）４０ｇの溶液 中に導入し、７０℃に加熱しながら超音波発生器（出力１００Ｗ）により１０分 間分散させる。安定な磁性流体を形成する非凝集または僅かに凝集したのみの超 常磁性単一ドメイン粒子の分離は、例４に示した磁気沈降により行わせる。 反磁性ポリアルキレン基含有薬理活性物質もまた、吸着によりポ リアルキレングリコール基含有超常磁性粒子に結合させることができる。これら の物質は、非均質磁界の影響の下、磁気目標投薬中超常磁性粒子の表面から再び 離脱される。例えばドキソルブシンモノポリエチレングリコールホスフェイトを 、例５に従って粒子上に吸着により結合させるとすると、この生成物は、腫瘍の 治療における細胞***抑制剤の磁気目標投薬に用いることができる。 例 １７ 例１により得たマグネタイト沈積物のすべてを、蒸留水５００ｍ１中のω−オ キソエトキシ−ポリエチレングリコール−シラントリオール（分子量約１８００ ）４５ｇの溶液中に導入し、超音波発生器（出力１００Ｗ）により５分間分散さ せる。このようにして得た分散液を５０ｋＤのフィルタを介して水に対して透析 し、過量分の安定剤物質を除去する。 安定な磁性流体を形成する非凝集または僅かに凝集したのみの超常磁性単一ド メイン粒子の分離は、例４に示した磁気沈降により行わせる。この超常磁性粒子 は、１８０ｎｍの平均粒径を有する。 この例に従って生成した超常磁性粒子は、アルデヒド基の反応性を適用できる 多くの結合反応に用いることができる。このようにして、例えばストレプトキナ ーゼまたはプラスミノーケン−ストレプトキナーゼアクチベータ錯体のようなア ミノ基含有薬理活性物質の結合に用いることができる。 例 １８ ５ｍＴの磁気飽和誘導を有する例１７で得た分散液１０ｍｌをアニストレプラ ーゼ（anistreplase）３０ｍｇと混合し、室温において ２０分間放置する。この結果得られた生成物は、血栓溶解のための磁気目標投与 に好適である。 例 １９ ５ｍＴの磁気飽和誘導を有する例１７で得た分散液１０ｍｌを、１０ｍｇドキ ソルビシン含有溶液１０ｍｌと混合し、室温において３０分間震とうする。この 結果得られた生成物は、腫瘍治療における磁気目標投与に用いることができる。 この超常磁性粒子は、腫瘍への磁気集中に好適であり、腫瘍破壊細胞***抑制 剤は、より高い濃度で腫瘍に作用する。腫瘍破壊は、これに加えて、高体温、例 えば電磁線の照射により、及び腫瘍の加熱によっても果たされるのである。 磁場は、免疫剌激の有効性を増大する。 例 ２０ 例１で得たマグネタイト沈積物のすべてを、水５００ｍｌ中のケイ酸ナトリウ ム７０％、アルミン酸ナトリウム３０％の混合物２５ｇの溶液中に導入し、７０ ℃に加熱しながら超音波発生器（出力１００Ｗ）により１０分間分散させる。こ の分散液を希塩酸で中和してｐＨ７とした後、安定な磁性流体を形成する非凝集 または僅かに凝集したのみの超常磁性単一ドメイン粒子は、例４に示した磁気沈 降により分離される。この超常磁性粒子は、胃腸領域の経口コントラスト剤とし て用いることができる。 例 ２１ 例１で得たマグネタイト沈積物のすべてを、水５００ｍｌ中のデキストランス ルフェイトのナトリウム塩２０ｇの溶液中に導入し、 ７０℃に加熱しながら超音波発生器（出力１００Ｗ）により１０分間分散させ、 安定な磁性流体を形成する非凝集または僅かに凝集したのみの超常磁性単一ドメ イン粒子は、例４に示した磁気沈降により分離される。この超常磁性粒子は、胃 腸領域の経口コントラスト剤として用いることができる。 超常磁性粒子は、これが表面活性剤と結合した時、細胞膜も破壊することがで き、このため生体外及び生体内において細胞を破壊することができる。好適な表 面活性剤の例としては、ノニルフェノール−ポリエチレングリコール−ホスフェ イト、アルキル−またはアルキルアリル−ポリエチレングリコール−スルフェイ ト（エチレンオキシド基の数５ないし４０）があげられる。 体の中で磁気機械的な免疫剌激を開始させるには、磁化可能な白血球を体の中 に非経口的に投与し、磁界により活性部位に集中させる。磁気機械的な力により 、磁化された白血球、及びここではことに好中球顆粒球及びマクロファージが、 高内皮ベノール（endothethial venols）内に集中し、加速された状態で内皮に 浸透して、組織に浸透する。磁化可能な白血球の集中、例えば腫瘍組織内への集 中は、その免疫学的な破壊を導く。ことに、超常磁性粒子による腫瘍細胞膜の磁 気機械的な破壊が生じた時、腫瘍細胞膜の断片が隣接する好中球顆粒球により捕 食される。腫瘍抗体の形成はまた、未治療腫瘍の破壊につながる。磁界は、免疫 剌激の有効性を増大することができる。 磁化可能な白血球の集中を生じさせるために、白血球濃縮物を反応性超常磁性 粒子に混合し、室温または３７℃において反応させ る。 例 ２２ 白血球濃縮物１００ｍｌを例６の分散液１０ｍｌと混合し、磁気飽和誘導５ｍ Ｔと混合した後、３７℃において２０分間静置する。このようにして得た生成物 は、腫瘍破壊のための磁気目標投与に用いることができる。 磁気機械的免疫剌激はまた、例えば磁化可能なウイルス、バクテリア、菌類、 腫瘍細胞またはそれらの磁化可能な表面分子によっても実行できる。基か可能な ウイルス、細胞またはそれらの表面分子は、これらが網内系によって認識され、 マクロファージ及び好中球顆粒球によって結合されて捕食される。この捕食の結 果、表面分子の一部は、主組織適合性錯体からグリコプロテインに同様に再使用 される錯体としてマクロファージの表面に戻されて、ここで免疫系のＴ−リンパ 球によりチェックされ、抗体として認識されて、表面分子に対する適当な免疫応 答が活性化される。従って、対応するウイルス及び細胞に対する体の免疫の活性 化が生ずるのである。磁界はこの免疫剌激の有効性を増大させる。 このようにして、治療が困難なウイルス感染、バクテリア感染、または菌類感 染の免疫及び治療が可能となる。 磁化可能なウイルスまたは細胞は、例えば例６に従って反応性超常磁性粒子を 単に混合するだけで作り出される。ウイルス及び細胞に対して免疫を増大するた めの薬理活性剤は、磁化可能な混合物に薬理的に受け入れることができるキャリ ヤを加えることにより得られる。 ウイルス、バクテリア、または腫瘍細胞の磁化可能な表面分子は、これらの生 体片に反応性超常磁性粒子片を単に混合し、次いで生理的適応物質により残りの 反応性基をブロックすることにより生成される。このようにして、例えば、例６ による安定剤物質の過量のアルデヒド基は、生体片分散液に０．５モルのエタノ ールアミン−塩酸塩溶液（ｐＨ８．５）を加えることによりブロックされる。磁 化した表面分子は、例えば圧力消化、機械的摩砕、浸透衝撃処理などの既知の消 化プロセスにより磁化された生体片を破壊した後、磁界により消化分散液から取 り出される。磁化可能な表面分子は、数回水洗いし、磁界により分離して、精製 される。ウイルス及び細胞に対する免疫を増大させるための薬理活性調剤は、こ の精製した磁化可能な表面分子に薬埋的に受け入れることができるキャリヤを加 えることで得られる。 ウイルス、ハクテリア、腫瘍細胞及びそれらの表面分子が生体外で磁化される のにつれ、患者に特定の免疫処置も実行することができる。これは、対応するウ イルス及び患者の体から採った細胞の隔離または集中次第のことである。 超常磁性粒子は、表面活性剤と結合すると、細胞膜をも仮壊することででき、 このため生体外でも生体内でも細胞破壊をもたらすことができる。好適な表面活 性剤としては、例えばノニルフェノール−ポリエチレングリコール−ホスフェイ ト、アルキルまたはアルキルアリル−ポリエチレングリコール−スルフェイト（ エチレンオキシド基の数５ないし４０）があげられる。 本発明による超常磁性粒子の主要な用途は、磁気目標投薬の分野 である。磁性材料の含有量が非常に多い（９０ないし９８重量％）ので、小さな 磁性粒子でも、電磁石または永久磁石によって体の特定の領域に非常によく、か つ非常に急速に集中させることができる。薬理活性物質が、この超常磁性粒子に 結合されると、活性部位におけるその濃度は劇的に増大する。この事実は、腫瘍 の化学療法に用いられる物質は、体の器官全体に非常に強い副作用を与えるが、 この物質が活性部位において富化されると、残りの体の部分は細胞***抑制剤に よって著しく影響されないから、癌の治療のために特に重要である。 超常磁性粒子は、ウイルス、細胞、及びそれらの表面分子との結合による体内 の免疫活性化に用いることができる。磁界の効果は、この免疫活性化を助成する 。 反応性超常磁性粒子はまた、対応する診断物質がこの粒子の表面に化学的に結 合するならば、生体外での診断に用いることができる。磁界との磁気相互作用が 著しいので、非常に小さな超常磁性粒子でも、診断反応が生じた後、再び反応混 合物から取り出すことが容易である。 この超常磁性粒子はまた、核スピン診断のためのコントラスト剤として用いる ことができる。 超常磁性粒子の量は、磁気飽和誘導を約５ｍＴとすると、ＭＲＩのためのコン トラスト剤として用いる時、血液量の約０．００１容量％である。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９４年１０月１３日 【補正内容】 これらの超常磁性粒子の水性分散液内での沈積を妨げるために、吸着により粒 子表面にそれ自体で付着する安定剤物質を添加する。このような粒子は、US-A-3 ,215,572,US-A-3,531,413,US-A-3,917,538,WO85/02772,US-A-4,101,435及びUS-A -US-A-4,452,773,SE-A-8307060-7に記載されている。 吸着安定化磁性粒子は、生理学的な条件下では安定でない。これは、安定剤物 質が釈放されるので容易に凝集するからである。特定の組織に対する結合親和性 または薬理的な活性を有する物質が吸着安定化磁気粒子に結合されるならば、安 定剤物質、従って結合親和性及び薬理活性を備えた物質は、磁気粒子から釈放さ れ、この磁気粒子は結合部位に達しないか、或いは薬理活性物質が磁気目標投薬 中に作用部位において濃厚化されないという危険がある。 生物分解を起こすことが可能な超常磁性金属酸化物結晶は、WO90/01889に公知 である。この文献には、各個の超常磁性結晶が、多官能性の物質の添加により多 官能性の物質との凝集体を形成する。このような凝集体の生成は、WO88/00060に 記載された方法に対応している。この方法によれば、鉄酸化物粒子は、基本媒体 中に例えば多糖類（ポリサッカリド）、蛋白質（プロテイン）などの多官能性物 質を付加的に包含する溶液から沈殿させて、例えばポリサッカリド被覆超常磁性 鉄酸化物粒子を形成させ、次いでこれを透析し、最後に遠心分離する。この沈殿 した粒子は凝集される。 WO90/01295は、超常磁性金属酸化物から成るＭＲコントラスト 剤に関し、この超常磁性金属酸化物は、WO88/00060に記載された方法と同様な方 法により作られた他の重合物質との高分子化合物ないしは配合体に関連している 。 胃腸領域の生体内ＭＲイメージを得る方法がUS-A-5069216に記載されている。 この方法では、WO90/01295またはWO88/00060に記載されたようにして得た超常磁 性凝集物が使用されている。EP-A-125995は、磁性金属酸化物のコアを有する磁 性粒子に関する。この磁性金属酸化物コアは、シラン被覆を有し、これに分子が 等価的に結合することができる。 Roch,A.etalは、Magmal（1993）83-88に、例えばデキストランを鉄塩溶液に加 えることによる通常のやり方で生成させた凝集物からなる超常磁性コントラスト 剤を記載している。 EP-A-516252には、化学吸着で吸収したグリコサミノグリカン被覆を有する微 結晶磁性粒子が記載されている。グリコサミノグリカンは、超音波処理をするこ となく、環境温度における中性範囲の生体模倣の合成を介して鉄塩から得たもの である。 EP-A-0284549においては、安定剤物質はホスフェイト基またはホスホネート基 を包含し、これにより安定剤物質は、超常磁性粒子の表面に化学的に結合される 。この安定剤物質がなお、化学的に反応性のある基を包含すると、薬理活性物質 を結合することができる。これらの化学的に安定化した超常磁性粒子は、水性分 散液中で沈殿せず、僅かに０．００３ないし０．０１μｍの粒径を有するのみで ある。非経口投薬中に安定剤物質を釈放することがない。すなわち、血液中での 凝集や沈積がなく、従って器官内で の分布が良好である。 これらの磁性粒子は磁性薬目標投与のためには余りにも小さく、身体の特定領 域において磁性粒子を濃厚化するためには、非常に 大きな磁界勾配を用いなければならない。 小さな０．０１μｍの超常磁性粒子を、多孔質ポリマー粒子（SE-A-7706431） 、ポリグルタルアルデヒドポリマー（US-A-4,267,234）、シランポリマー（US-A -4,554,088）、アルブミン濃縮ポリマー（US-A-4,675,173）またはセルローズエ ステル（Ito,R.etal.，Int.J.Phatm.，61,109,1990）内にカプセル化することに より、より大きな超常磁性粒子を作ることができる。この粒子の径は、０．０５ ないし１００μｍの範囲である。アルブミン濃縮ポリマー及びセルローズエステ ル以外の使用されるすべての重合薬品は、生理的に有害であり、しかも体の中で の磁性粒子の溶解率は非常にゆっくりである。上述のすべての大きな超常磁性粒 子は、地球の重力場において沈積し、従って使用に先立って再分散させなければ ならない。 ポリマー粒子の鉄酸化物成分は、重量比にして１０ないし最高５０％、容量比 にして最高１０％の範囲である。磁性粒子が少ないほど、体の特定の領域におい てこの磁性粒子を集中させるためには磁気目標投薬時に必要とされる磁界勾配は 高くなる。磁性粒子の粒径が大きいほど、これらの磁性粒子は網内皮系によって 結合される。すなわち生体適合性が減少し、結合された薬理的活性物質の量が減 少する。それ故、磁気目標投薬のための最適磁性粒子をできるだけ小さくし、薬 理的活性物質の量を可能な限り多くし、磁性材料の量を可能な限り最大限とし、 この磁性材料の透磁率を可能な限り最大限とし、体内における溶解率を可能な限 り最大限として、適度の生 体適合性を有するようにしなければならない。 請求の範囲１に特定された本発明の目的は、冒頭に述べた欠点を回避し、さら に新たな適用領域、ことに腫瘍の破壊及び免疫の増強という適用領域を開くため に、新規な化合物及び超常磁性粒子を作り出すことにある。 本発明によれば、非常に小さな超常磁性の単一ドメイン粒子は凝集されるが、 この超常磁性粒子の表面上の反応性安定剤物質の化学的結合により、さらなる凝 集からは保護されることで、上述の目的が達成される。この新規の超常磁性凝集 体は、その反応性安定剤物質とともに、本発明における活性物質となる。 生物分解性を高く、毒性を可能な限り低く保つために超常磁性単一ドメイン粒 子を可能な限り小さく作ることが有利である。この超常磁性単一ドメイン粒子は 粒径が０．００１ないし０．０２ミクロンの範囲、好適には０．００３ないし０ ．０１ミクロンの範囲である。 従来技術とは対照的に、この単一ドメイン粒子の凝集がまず起こり、次いでこ の凝集体の表面への安定剤物質の結合が起こり、凝集体の他の特性が生ずるので ある。 従って、単一ドメイン粒子と安定剤物質とからなる本発明による超常磁性粒子 は、鉄酸化物、鉄混合酸化物、または３ないし２０ナノメートルの範囲の粒径を 有する鉄が合同して、磁界中で定まった行動を呈する、粒径１０ないし１０００ ナノメートルの安定で分解可能な凝集体を形成し、この凝集体がその表面上に、 ホスフェイト、ジホスフェイト、カルボキシレート、ポリホスフェ イト、チオホスフェイト、ホスホネート、チオホスホネート、スルフェイト、ス ルホネート、メルカプト、シラントリオール、トリアルコキシシラン基含有ポリ アルキレングリコール、カルボキシヒドレートまたはホスフェイト基含有ヌクレ オチド、更なる結合部位を有することができるそのオリゴマーまたはそのポリマ ーを包含する群から選んだ安定剤物質からなる単原子層を有することを特徴とす る。 生物的分解性を高く、毒性をできるだけ少なく保つために、超常磁性単一ドメ イン粒子をできるだけ小さく作ることが好都合である。この超常磁性単一ドメイ ン粒子は、０．００１ないし０．０２μｍの範囲の直径、好適には、０．００３ ないし０．０１μｍの直径である。 γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、Ｆｅ₃Ｏ₄及びＦｅが、生体内投与用の生理的適合性のある物質 として使用される。さらに毒性のある磁性材料も生体外の適用として使用できる 。例えば、一般式ＭＯ・Ｆｅ₂Ｏ₃に対応する鉄混合酸化物、ここでＭは、Ｆｅ、 Ｍｇ、Ｂｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃｏ、Ｂａ、Ｓｒ、Ｃｕまたはその混合物のような２ 価の金属イオン、または一般式ｍＦｅ₂Ｏ₃・ｎＭｅ₂Ｏ₃、ここでＭｅはＡｌ、Ｃ ｒ、希土類金属またはその混合物のような３価の金属イオン、があげられる。 本発明によれば、超常磁性単一ドメイン粒子は、ｐＨ、温度及び 請求の範囲 １． 単一ドメイン粒子と安定剤物質とから成る超常磁性粒子において、鉄酸化 物、鉄混合酸化物、または３ないし２０ナノメートルの範囲の粒径を有する鉄か らなる超常磁性単一ドメイン粒子が合同して、磁界中で定まった行動を呈する、 粒径１０ないし１０００ナノメートルの安定で分解可能な凝集体を形成し、この 凝集体がその表面上に、ホスフェイト、ジホスフェイト、カルボキシレート、ポ リホスフェイト、チオホスフェイト、ホスホネート、チオホスホネート、スルフ ェイト、スルホネート、メルカプト、シラントリオール、トリアルコキシシラン 基含有ポリアルキレングリコール、カルボキシヒドレートまたはホスフェイト基 含有ヌクレオチド、更なる結合部位を有することができるそのオリゴマーまたは そのポリマーを包含する群から選んだ安定剤物質からなる単原子層を有すること を特徴とする超常磁性粒子。 ２． 請求の範囲１記載の超常磁性粒子において、前記超常磁性単一ドメイン粒 子の粒径が３ないし２０ｎｍの範囲であり、前記超常磁性凝集体の粒径が１０な いし１０００ｎｍの範囲であることを特徴とする超常磁性粒子。 ３． 請求の範囲１または２記載の超常磁性粒子において、前記超常磁性単一 ドメイン粒子が、γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、Ｆｅ₃Ｏ₄及び一般式ＭＯ・Ｆｅ₂Ｏ₃に対応する 鉄混合酸化物、ここでＭは、２価の金属イオンＦｅ、Ｍｇ、Ｂｅ、Ｍｎ、Ｚｎ、 Ｃｏ、Ｂａ、Ｓｒ、Ｃｕまたはその混合物、または一般式ｍＦｅ₂Ｏ₃・ｎＭｅ₂ Ｏ₃に対応す る混合酸化物、ここでＭｅは、３価の金属イオンＡｌ、Ｃｒ、希土類金属または その混合物、または鉄からなることを特徴とする超常磁性粒子。 ４． 請求の範囲１ないし３のいずれかに記載の超常磁性粒子において、前記安 定剤物質が、次に記載する物質から選んだことを特徴とする超常磁性粒子。 （ｉ）一般式 Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂ に対応する化合物 ここで、Ｘは、アルキル部分の炭素原子が１ないし４の範囲の数であるアルコ キシ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアミノ及びアルキ ルチオ基から選んだ官能基、またはヒドロキシ、アミン、アルデヒド、ジメチル アセタール、ジエチルアセタール、エポキシ、チオール、カルボキシ、４，６− ジクロロトリアジン、ヒドロキサム酸、イソシアネート、アシルアジド、酸無水 物、ジアゾニウム塩、イミノカルボネート、及びトルエンスルホネート基から選 んだ官能基、 Ｒは欠除か、または Ｒは、ポリアルキレングリコール、水混和性ポリプロピレングリコール基また は、 （ＰＥＧ）_a−（ＰＥＧ）_b、（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a、 （ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_b ブロック共重合体から選んだポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリプロ ピレングリコール（ＰＰＧ）の水混和性ブロック共重合体基、 ここで、ａは１から１００までの範囲の正の整数、ｂは１から２０までの範囲 の正の整数； ｎは、ＰＥＧについては４から３００までの範囲から選んだ正の整数、ＰＰＧ については３から１２までの範囲から選んだ正の整数、ＰＥＧ−ＰＰＧブロック 共重合体については３から１４０までの範囲から選んだ正の整数；または Ｒは、モノサッカリドグルコース、フルクトース、リボース、デスオキシリボ ース、イノシトールから、またオリゴサッカリドサッカロース、ラフィノース、 ゲンチアノース、マレシトース、スタキオース、パーパスコースから、ポリサッ カリドスターチ、リケニン、グリゴーケン、デキストリン、デキストラン、イヌ リン、フルクトサン、ラパン、マンナン、ガラクタン、キシラン、アラパン、ペ クチン、マクロポリサッカリド、グリコプロテインから、ポリウリデニル酸、ポ リグルクロン酸、ポリガラクツロン酸、ポリマンヌロン酸、及び/またはアルギ ン酸から選んだ炭水化物基であり、 Ａは、欠除か、または Ａは、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキルアミン基、こ こでアルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキル基の炭素原子数は１ないし４ の範囲； であり、 Ｂは、モノホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト、ホスホネート 、チオホスフェイト、チオホスホネートから選んだリン含有基、またはカルボキ シレート−、スルフェート−、スル ホネート−、メルカプト−、シラントリオール−またはトリアルコキシシラン含 有基であり、 （ii）ホスフェイト基含有ヌクレオチド モノ−、シ−、トリ−リン酸エステ ル、またはアデノシン、グアノシン、キチジン、ウリヂン、シミヂン、デソキシ アデノシン、デソキシグアノシン、デソキシシチヂン、デソキシシミヂン、イノ シン、ピリミヂン、シトシン、ウラシル、シミン、プリン、アデニン、グアニン 、メチルキトシン、５−ヒドロオキシメチル−キトシン、２−メチルアデニン、 １−メチルグアニン、チアミン、フラビン、リボフラピン及びピリドキサールホ スフェイト、ピリドキサミンホスフェート、リボ核酸、リボ核酸シーケンス、デ ソキシリボ核酸、デソキシリボ核酸シーケンスのモノ−、シ−、トリ−リン酸エ ステルクロライド、 （iii）オルトケイ酸のケイ酸塩基含有化合物及びその縮合生成物、及び／ま たは、 （iv）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂが、メルカプトプリン、メルカプトシトシン、メルカプ トグアニン、メルカプトウラシル、メルカプトシミン、メルカプトヒポキサンシ ン、及びそのメルカプトヌクレオシド及びそのメルカプトデソキシヌクレオシド で、 （ｖ）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂがポリアミノカルボヒドレートである。 ５． 請求の範囲１ないし４のいずれかに記載の超常磁性粒子において、 （ｉ）抗原、抗体、リボ核酸、デソキシリボ核酸、リボ核酸シーケンス、デソ キシリボ核酸シーケンス、ハプテン、プロテイ ンＡ、プロテインＧ、エンドトキシン結合プロテイン、レクチン、セレクチンを 包含する群から選んだ組織特定結合物質、 （ii）抗腫瘍プロテイン、酵素、抗腫瘍酵素、抗生物質、植物性アルカロイド 、アルキル化剤、代謝阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、インターロ イキン、インターフェロン、成長因子、腫瘍ネクローシス因子、エンドトキシン 、リンホトキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミノーゲン−ス トレプトキナーゼ−アクチベータ錯体、組織プラスミノーゲン−アクチベータ、 デスモーズス−プラスミノーゲン−アクチベータ、マクロファージ−アクチベー タ体、アンチセラ、プロテアーゼインヒビタ、及び/または放射性リン³²Ｐ含有 安定剤物質、表面活性剤を包含する群から選んだ薬理活性物質、 （iii）細胞器官、ウイルス、細菌、藻類、菌類、ことに赤血球、血小板、顆 粒白血球、単核白血球、リンパ球、及び／またはランゲルハンス島を包含する群 から選んだ薬理活性細胞、 （iv）ポリカルボキシル酸、アミノカルボキシル酸、ポルフィリン、カテクラ ミンを包含する群から選んだ薬理活性錯体、 （ｖ）ホスフェイトまたホスホネート基含有薬、及び／または （vi）細胞融合促進物質、 が化学的に結合されていることを特徴とする超常磁性粒子。 ６． 単一ドメイン粒子及び安定剤物質からなる超常磁性粒子の製法において、 超常磁性単一ドメイン粒子が、鉄塩溶液をｐＨが８．０から１０．０の範囲のア ルカリ液またはアンモニア性液を 加えて沈殿させることにより、鉄酸化物、鉄混合酸化物、または粒径３ないし２ ０の範囲の鉄により形成し、これに酸を加えてｐＨ３ないし７に調整し、５０な いし１２０℃の範囲の温度、場合によってはこのｐＨ及びこの温度範囲で圧力を 高めて凝集させ、公知の方法により精製し、ホスフェイト、シホスフェイト、カ ルボキシレート、ポリホスフェイト、チオホスフェイト、ホスホネート、チオホ スホネート、スルフェイト、スルホネート、メルカプト、シラントリオール、ト リアルコキシシラン基含有ポリアルキレングリコール、カルボヒドレート、また はホスフェイト基含有ヌクレオチド、さらなる結合部位を有することができるそ のオリゴマーまたはポリマーを包含する群から選んだ前記安定剤物質の２０ない し５０重量％と反応させ、定まった作用を有する前記安定な分解可能な凝集体を 磁界の中で公知の方法で精製し、場合によっては公知の方法で薬理的にまたは診 断的に活性の物質と結合させることを特徴とする製法。 ７． 薬理的に受け入れられるキャリヤと、鉄酸化物、鉄混合酸化物、または粒 径３ないし２０ナノメートルの鉄の超常磁性単一ドメイン粒子からなる超常磁性 粒子とからなる薬理活性調剤であって、前記超常磁性粒子が合同して、磁界の下 で定まった作用を呈する粒径１０ないし１０００ナノメートルの粒径の安定した 分解可能な凝集体を形成し、この凝集体が、ホスフェイト、シホスフェイト、カ ルボキシレート、ポリホスフェイト、チオホスフェイト、ホスホネート、チオホ スホネート、スルフェイト、スルホネート、メルカプト、シラントリオール、ト リアルコキシシラン基含有ポ リアルキレングリコール、カルボヒドレート、またはホスフェイト基含有ヌクレ オチド、さらなる結合部位を有することができるそのオリゴマーまたはポリマー を包含する群から選んだ安定剤物質からなる単原子層を表面に有し、場合によっ ては、組織特定結合物質と、薬理活性物質と、薬理活性細胞と、薬理活性錯体形 成剤と、請求の範囲５記載の群から選んだ薬削または細胞融合促進物質とを有す る薬理活性調剤。 ８． 腫瘍の破壊、免疫の増強、場合によっては磁界の影響下においてのこれら のことのための請求の範囲７記載の薬理活性調剤の用途。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/77 8314−4Ｃ Ａ６１Ｋ 31/77 35/12 7431−4Ｃ 35/12 35/74 7431−4Ｃ 35/74 Ｚ 35/76 7431−4Ｃ 35/76 38/43 9284−4Ｃ 39/395 Ｍ 39/395 8825−4Ｃ Ａ６１Ｎ 1/40 Ａ６１Ｎ 1/40 9455−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/48 2/00 8825−4Ｃ Ａ６１Ｎ 1/42 Ｚ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＪＰ，ＮＯ，ＵＳ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． （ａ）磁界内で定められた行動をなす、粒径１０ないし１０００ナノメー トルの範囲の安定で分解可能な凝集体を包含し、この凝集体が、 （ｂ）鉄酸化物、鉄酸化物混合物または鉄からなり、粒径が３ないし２０ナノメ ートルの若干の小さな超常磁性単一ドメイン粒子の凝集体であり、かつ、 （ｃ）さらなる結合部位を有することができる、ホスフエイト、ジホスフェイト 、カルボキシレート、ポリホスフェイト、チオホスフェイト、ホスホネート、チ オホスホネート、スルフェイト、スルホネート、メルカプト、シラントリオール 、トリアルコキシシラン基含有ポリアルキレングリコール、カルボヒドレートま たはホスフェイト基含有ヌクレオチド、そのオリゴマーまたはそのポリマーを包 含する群から選んだ化学的に結合された物質を表面に担持できることを特徴とす る超常磁性粒子。 ２． 請求の範囲１記載の超常磁性粒子において、前記超常磁性単一ドメイン粒 子（ｂ）の粒径が３ないし２０ｎｍの範囲であり、前記超常磁性凝集体（ａ）の 粒径が１０ないし１０００ｎｍの範囲であることを特徴とする超常磁性粒子。 ３． 請求の範囲１または２記載の超常磁性粒子において、前記超常磁性単一ド メイン粒子（ｂ）が、γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、Ｆｅ₃Ｏ₄及び一般式ＭＯ・Ｆｅ₂Ｏ₃に対応 する鉄混合酸化物、ここでＭは、２価の金属イオンＦｅ、Ｍｇ、Ｂｅ、Ｍｎ、Ｚ ｎ、Ｃｏ、Ｂａ、Ｓｒ、 Ｃｕまたはその混合物、または一般式ｍＦｅ₂Ｏ₃・ｎＭｅ₂Ｏ₃に対応する混合酸 化物、ここでＭｅは、３価の金属イオンＡＬ、Ｃｒ、希土類金属またはその混合 物、または鉄からなることを特徴とする超常磁性粒子。 ４． 請求の範囲１ないし３のいずれかに記載の超常磁性粒子において、前記化 学的に結合した物質（ｃ）が、次に記載する物質から選んだことを特徴とする超 常磁性粒子。 （ｉ）一般式 Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂ に対応する化合物 ここで、Ｘは、アルキル部分の炭素原子が１ないし４の範囲の数であるアルコ キシ、モノアルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリアルキルアミノ及びアルキ ルチオ基から選んだ官能基、またはヒドロキシ、アミン、アルデヒド、ジメチル アセタール、ジエチルアセタール、エポキシ、チオール、カルボキシ、４，６− ジクロロトリアジン、ヒドロキサム酸、イソシアネート、アシルアジド、酸無水 物、ジアソニウム塩、イミノカルボネート、及びトルエンスルホネート基から選 んだ官能基、 Ｒは欠除か、または Ｒは、ポリアルキレングリコール、水混和性ポリプロピレングリコール基また は、 （ＰＥＧ）_a−（ＰＥＧ）_b、（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a， （ＰＰＧ）_b−（ＰＥＧ）_a−（ＰＰＧ）_bブロック共重合体 （ここで、ＰＥＧはポリエチレングリコール、ＰＰＧはポリプロピレングリコ ール、ａは１から１００までの範囲の正の整数、ｂは １から２０までの範囲の正の整数とする、 ｎは、ＰＥＧについては４から３００までの範囲から選んだ正の整数、ＰＰＧ については３から１２までの範囲から選んだ正の整数、ＰＥＧ−ＰＰＧブロック 共重合体については３から１４０までの範囲から選んだ正の整数とする） から選んだポリエチレングリコール（ＰＥＧ）及びポリピロピレングリコール（ ＰＰＧ）の水混和性ブロック共重合体基か、または Ｒは、モノサッカリドグルコース、フルクトース、リボース、デスオキシリボ ース、イノシトールから、またオリゴサッカリドサッカロース、ラフィノース、 ゲンチアノース、マレシトース、スタキオース、バーバスコースから、ポリサッ カリドスターチ、リケニン、グリゴーゲン、デキストリン、デキストラン、イヌ リン、フルクトサン、ラバン、マンナン、ガラクタン、キシラン、アラバン、ベ クチン、マクロポリサッカリド、グリコプロテインから、ポリウリデニル酸、ポ リグルクロン酸、ポリガラクツロン酸、ポリマンヌロン酸、及び／またはアルギ ン酸から選んだ炭水化物基であり、 Ａは、欠除か、または Ａは、アルキル、アルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキルアミン基（こ こでアルコキシ、アシル、アシルアミン、アルキル基の炭素原子数は１ないし４ の範囲とする）であり、 Ｂは、モノホスフェイト、ジホスフェイト、ポリホスフェイト、ホスホネート 、チオホスフェイト、チオホスホネートから選んだ リン含有基、またはカルボキシレート−、スルフェート−、スルホネート−、メ ルカプト−、シラントリオールまたはトリアルコキシシラン含有基であり、 （ii）ホスフェイト基含有ヌクレオチド モノ−、ジ−、トリ− リン酸エス テル、またはアデノシン、グアノシン、キチジン、ウリヂン、シミヂン、デソキ シアデノシン、デソキシグアノシン、デソキシシチヂン、デソキシシミヂン、イ ノシン、ピリミヂン、シトシン、ウラシル、シミン、プリン、アデニン、グアニ ン、メチルキトシン、５−ヒドロオキシメチル−キトシン、２−メチルアデニン 、１−メチルグアニン、チアミン、フラビン、リボフラビン及びピリドキサルホ スフェイト、ピリドキサミンホスフェイト、リボ核酸、リボ核酸シーケンス、デ ソキシリボ核酸、デソキシリボ核酸シーケンスのモノー、ジー、トリーリン酸エ ステルクロライド、 （iii）オルトケイ酸のケイ酸塩基含有化合物及びその縮合生成物、及び/また は、 （iv）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂが、メルカプトプリン、メルカプトシトシン、メルカプ トグアニン、メルカプトウラシル、メルカプトシミン、メルカプトヒポキサンシ ン、及びそのメルカプトヌクレオシド及びそのメルカプトデソキシヌクレオシド である。 （ｖ）Ｘ−Ｒ−Ａ−Ｂがポリアミノカルボヒドレートである。 ５． 請求の範囲１ないし４のいずれかに記載の超常磁性粒子において、 （ｉ）抗原、抗体、リボ核酸、デソキシリボ核酸、リボ核酸 シーケンス、デソキシリボ核酸シーケンス、ハプテン、プロテインＡ、プロテイ ンＧ、エンドトキシン結合プロテイン、レクチン、セレクチンを包含する群から 選んだ組織特定結合物質、 （ii）抗腫瘍プロテイン、酵素、抗腫瘍酵素、抗生物質、植物性アルカロイド 、アルキル化剤、代謝阻害剤、ホルモン、ホルモンアンタゴニスト、インターロ イキン、インターフェロン、成長因子、腫瘍ネクローシス因子、エンドトキシン 、リンホトキシン、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、プラスミノーゲン−ス トレプトキナーゼ−アクチベータ錯体、組織プラスミノーゲン−アクチベータ、 デスモーズス−プラスミノーゲン−アクチベータ、マクロファージ−アクチベー タ体、アンチセラ、プロテアーゼインヒビタ、及び／または放射性リン³²Ｐ含有 安定剤物質、表面活性剤を包含する群から選んだ薬理活性物質、 （iii）細胞器官、ウイルス、細菌、藻類、菌類、ことに赤血球、血小板、顆 粒白血球、単核白血球、リンパ球、及び／またはランゲルハンス島を包含する群 から選んだ薬理活性細胞、 （iv）ポリカルボキシル酸、アミノカルボキシル酸、ポルフイリン、カテクラ ミンを包含する群から選んだ薬理活性錯体、 （ｖ）ホスフェイトまたホスホネート基含有薬、及び／または （vi）細胞融合促進物質、 が化学的に結合されていることを特徴とする超常磁性粒子。 ６． 請求の範囲１記載の超常磁性粒子の製法において、超常磁性単一ドメイン 粒子（ｂ）が、鉄塩溶液をｐＨが８．０から１０．０の範囲のアルカリ液または アンモニア性液を加えて沈殿させ、 酸を加えてｐＨ３ないし７に調整し、５０ないし１２０℃の範囲の温度において 凝集させ、公知の方法により精製し、前記有機物質（ｃ）の２０ないし５０重量 ％と反応させ、公知の方法で精製し、場合によっては公知の方法で薬理的にまた は診断的に活性の物質と結合させることを特徴とする方法。 ７． 薬理的に受け入れられるキャリヤと、粒径１０ないし１０００ｎｍの範囲 の請求の範囲１記載の超常磁性粒子と、さらに場合によっては、組織特定結合物 質と、薬理活性物質と、薬理活性細胞と、薬理活性錯体形成成分と、請求の範囲 ５記載の群から選んだ細胞融合促進物質とからなる薬理活性調剤。 ８． 腫瘍の破壊、免疫の増強、場合によっては磁界の影響下においてのこれら のことのための請求の範囲７記載の薬理活性調剤の使用。