JP2003535847A - 蛋白質キナーゼ／ホスファターゼ阻害剤としてのインドリノン誘導体 - Google Patents

蛋白質キナーゼ／ホスファターゼ阻害剤としてのインドリノン誘導体

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JP2003535847A
JP2003535847A JP2002501862A JP2002501862A JP2003535847A JP 2003535847 A JP2003535847 A JP 2003535847A JP 2002501862 A JP2002501862 A JP 2002501862A JP 2002501862 A JP2002501862 A JP 2002501862A JP 2003535847 A JP2003535847 A JP 2003535847A
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ハリス，ジー・デイビス
リー，シャオユアン
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Abstract

(57)【要約】 本発明は，蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）およびホスファターゼの活性を調節するある種の２−インドリノン化合物に関する。したがって，本発明の化合物は，異常なＰＫ活性に関連する疾患の治療に有用である。これらの化合物を含む医薬組成物，これらの化合物を含む医薬組成物を用いて疾病を治療する方法，およびこれらを製造する方法もまた開示される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】クロス・リファレンス 本出願は，米国特許仮出願６０／２０９，１６２（２０００年６月２日出願）
に基づく優先権を主張する。この開示はその全体を本明細書の一部としてここに
引用する。
【０００２】発明の背景 発明の分野 本発明は，蛋白質キナーゼ（"ＰＫ"）およびホスファターゼの活性を調節する
ある種の２−インドリノン化合物に関する。したがって，本発明の化合物は，異
常なＰＫ活性に関連する疾患の治療に有用である。これらの化合物を含む医薬組
成物，これらの化合物を含む医薬組成物を用いて疾病を治療する方法，およびこ
れらを製造する方法もまた開示される。
【０００３】発明の背景 細胞シグナル伝達は，細胞外の刺激が細胞の内部にリレーされ，次に多様な細
胞プロセスを制御する基本的なメカニズムである。シグナル伝達の鍵となる生化
学的メカニズムの１つには，蛋白質の可逆的リン酸化が関与する。ポリペプチド
のリン酸化は，成熟蛋白質の構造および機能を変化させることによりその活性を
制御する。リン酸は，ほとんどの場合，蛋白質中のセリン，トレオニン，または
チロシンアミノ酸のヒドロキシル基（−ＯＨ）に存在する。
【０００４】 細胞エフェクターのリン酸化を媒介する酵素は一般に２つの群に分けられる。
第１の群は，アデノシン三リン酸から蛋白質基質にリン酸基を転移する蛋白質キ
ナーゼからなる。第２の群は，ホスホリル蛋白質基質からのリン酸基を加水分解
する蛋白質ホスファターゼからなる。蛋白質キナーゼと蛋白質ホスファターゼの
逆の機能は，シグナル伝達プロセスにおけるシグナルの流れを平衡させ制御する
。
【０００５】 蛋白質キナーゼおよび蛋白質ホスファターゼは，一般に２つのグループに分け
られる：レセプターおよび非レセプタータイプの蛋白質。ほとんどのレセプター
タイプ蛋白質チロシンホスファターゼは，２つの保存された触媒ドメインを含み
，それぞれは，２４０アミノ酸残基のセグメントを包含する（Ｓａｉｔｏ，ｅｔ
ａｌ．，１９９１，Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｄｉｆｆ．２：５９−
６５）。レセプター蛋白質チロシンホスファターゼは，さらに，その細胞外ドメ
インのアミノ酸配列の多様性に基づいて副分類することができる（Ｓａｉｔｏ，
ｅｔ ａｌ．，上掲；Ｋｒｕｅｇｅｒ，ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎ
ａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７４１７−７４２１）。
【０００６】 蛋白質キナーゼおよび蛋白質ホスファターゼはまた，これが作用するアミノ酸
に基づいて，典型的には３つのクラスに分けられる。あるものはセリンまたはト
レオニンのみでリン酸の付加または加水分解を触媒し，あるものはチロシンのみ
でリン酸の付加または加水分解を触媒し，あるものはセリン，トレオニン，およ
びチロシンでリン酸の付加または加水分解を触媒する。
【０００７】 チロシンキナーゼは，細胞増殖に関与する他の蛋白質キナーゼの触媒活性を制
御することができる。不適切な活性を有する蛋白質キナーゼはまた，ある種の癌
に関与する。異常に上昇したレベルの細胞増殖は，制御されない活性を有するレ
セプターおよび非レセプター蛋白質キナーゼと関連する。
【０００８】 蛋白質キナーゼは，細胞増殖におけるその役割に加えて，細胞分化プロセスに
関与していると考えられている。細胞分化は，ある細胞においては，神経成長因
子（ＮＧＦ）または表皮成長因子（ＥＧＦ）刺激によって生ずる。細胞分化は，
急速な膜波打ち運動，細胞の平板化，および細胞接着の増加により特徴づけられ
る（Ｃｈａｏ，１９９２，Ｃｅｌｌ ６８：９９５−９９７）。
【０００９】 癌およびその他の疾病の新規な治療を発見することをめざして，生物医学研究
者および化学者は，蛋白質キナーゼの機能を阻害する分子を設計し，合成し，試
験してきた。いくつかの小さい有機分子は蛋白質キナーゼの機能を調節する化合
物の一群を形成する。蛋白質キナーゼの機能を阻害することが報告されている分
子の例としては，限定されないが，ビス単環式，二環式または複素環式アリール
化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２０６４２），ビニレン−アザインドール誘導体（
ＰＣＴ ＷＯ９４／１４８０８），１−シクロプロピル−４−ピリジル−キノロ
ン類（米国特許５，３３０，９９２），スチリル化合物（Ｌｅｖｉｔｚｋｉ ｅ
ｔ ａｌ． 米国特許５，２１７，９９９，表題"Ｓｔｙｒｙｌ ｃｏｍｐｏｕ
ｎｄｓ ｗｈｉｃｈ Ｉｎｈｉｂｉｔ ＥＧＦ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅｓ），スチリル置換ピリジル化合物（米
国特許５，３０２，６０６），ある種のキナゾリン誘導体（欧州特許出願０５６
６２６６Ａ１），セレオインドール類およびセレニド類（ＰＣＴ ＷＯ９４／０
３４２７），三環式ポリヒドロキシ化合物（ＰＣＴ ＷＯ９２／２１６６０），
およびベンジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ ＷＯ９１／１５４９５）が挙げられ
る。
【００１０】 細胞膜を横切ることができ，酸加水分解に耐性の化合物は，患者に経口投与さ
れた後に高度に生物利用性となることができるため，治療剤として利点を有する
可能性がある。しかし，これらの蛋白質キナーゼ阻害剤の多くは，蛋白質キナー
ゼの機能を弱くしか阻害しない。さらに，多くは種々の蛋白質キナーゼを阻害し
，したがって，疾病の治療剤として多くの副作用を引き起こすであろう。
【００１１】 癌を治療するための化合物の開発における著しい進歩にもかかわらず，当該技
術分野においては，特定の蛋白質キナーゼの機能を調節することができる化合物
を形成する特定の構造および置換パターンを同定することが求められている。
【００１２】発明の概要 第１の観点においては，本発明は，式（Ｉ）：
【化７】 ［式中， （ａ）Ｒ4−Ｒ6，およびＲ8−Ｒ10は水素であり， （ｂ）Ｒ1，Ｒ2およびＲ3は，それぞれ独立して，水素，ハロゲン，カルボン酸
，任意に置換されていてもよいエステル，任意に置換されていてもよいアミド，
任意に置換されていてもよいアルキル，任意に置換されていてもよいアルコキシ
，トリハロメチル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換さ
れていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ7は，置換アルキル，および置換アルコキシからなる群より選択される
］ に記載される構造を有するインドリノン化合物またはその薬学的に許容しうる塩
を提供する。
【００１３】 好ましくは， （ａ）Ｒ1は，水素および任意に置換されていてもよいアルキルからなる群より
選択され，より好ましくは水素であり； （ｂ）Ｒ2およびＲ3は，それぞれ独立して，水素，ハロ，カルボン酸，任意に置
換されていてもよいヘテロアリール，および任意に置換されていてもよいフェニ
ルからなる群より選択される。好ましくは，Ｒ2は，水素，ハロ，フェニル，ま
たはカルボン酸であり，より好ましくは，水素，フェニル，−ＣＯＯＨ，クロロ
，フルオロまたはブロモである。好ましくは，Ｒ3は，水素，ハロ，カルボン酸
，で任意に置換されていてもよいピリジル，および低級アルコキシまたはハロで
任意に置換されていてもよいフェニルであり，より好ましくは，フェニル，−Ｃ
ＯＯＨ，ピリジン−３−イル，３−，または４−メトキシフェニルまたは４−フ
ルオロフェニルであり；および （ｃ）Ｒ7は，ヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
ルキル；またはヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
ルコキシからなる群より選択され，好ましくは，Ｒ7は，ヘテロ脂環式環または
ジアルキルアミノで置換されている低級アルキルであり；より好ましくは，Ｒ7
は，３−ジエチルアミノプロピルまたは３−ピロリジン−１−イル−プロピル，
２−ジメチルアミノエトキシ，２−ジエチルアミノエトキシ，２−ピロリジン−
１−イル−エトキシ，または２−モルホリン−４−イル−エトキシである。
【００１４】 第２の観点においては，本発明は，式（ＩＩ）：
【化８】 式中， （ａ）Ｒ11−Ｒ14は水素であり； （ｂ）Ｒ15およびＲ16は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていてもよ
いアルキル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換されてい
てもよいヘテロアリールからなる群より選択され，またはＲ15およびＲ16は，こ
れらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員の複素芳香族環，
５員または６員のヘテロ脂環式環，９員の縮合二環複素芳香族環，および１０員
の縮合二環複素芳香族環からなる群より選択される環構造を形成し；および （ｃ）Ａは，式（ＩＩＩ），（ＩＶ），および（Ｖ）からなる群より選択される
：
【化９】 ［式中， （ｉ）Ｒ19−Ｒ25およびＲ27−Ｒ31は水素であり； （ｉｉ）Ｒ17およびＲ18は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていても
よいアルキル，および任意に置換されていてもよいアルコキシからなる群より選
択され，ただし，Ｒ17およびＲ18の両方が水素であることはなく；および （ｉｉｉ）Ｒ26は，任意に置換されていてもよいアルキルからなる群より選択さ
れる］ に記載される構造を有するインドリノン化合物またはその薬学的に許容しうる塩
を提供する。
【００１５】 １つの好ましい態様においては： （ｉ）Ｒ15は，水素またはアルキルであり，より好ましくは水素またはメチルで
あり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択さ
れる１個または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，または５
または６員のヘテロアリールであり；より好ましくは，水素，メチル，イソプロ
ピル，フェニル，ピリジン−３−イル，３−クロロフェニル，または４−クロロ
−２−フルオロフェニルであり；または （ｉｉｉ）Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素と一緒になって，２，
３−ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−
イル，または２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イル環を形成し
，ここで，前記環は，ハロまたはアルキルで任意に置換されていてもよく，好ま
しくは，Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，２
，３−ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１
−イル，５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２
，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イルを形成し； （ｉｖ）Ａは式ＩＩＩの基であり，式中， Ｒ17は，水素，メチル，またはメトキシであり，好ましくは，水素であり；およ
び Ｒ18は，ヘテロ脂環式で置換されている低級アルコキシからなる群より選択され
，好ましくは，２−ピロリジン−１−イル−エトキシおよび２−モルホリン−４
−イルエトキシである。
【００１６】 化合物の別の好ましい群は以下のものである： （ｉ）Ｒ15は，水素またはアルキルであり，好ましくは水素またはメチルであり
； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択さ
れる１個または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，または５
または６員のヘテロアリールであり；好ましくは，水素，メチル，イソプロピル
，フェニル，ピリジン−３−イル，３−クロロフェニル，または４−クロロ−２
−フルオロフェニルであり；または Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素と一緒になって２，３−ジヒドロ
インドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または
２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イル環を形成し，ここで，前
記環は，ハロまたはアルキルで任意に置換されていてもよく，好ましくは，３−
ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル
，５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３−
ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イルであり；および （ｉｉｉ）Ａは式ＩＶの基であり，ここで，Ｒ26は，任意に置換されていてもよ
いアルキルからなる群より選択され，好ましくは水素またはメチルである。
【００１７】 化合物の別の好ましい群は以下のものである： （ｉ）Ｒ15は，水素またはアルキルであり，好ましくは水素またはメチルであり
； （ｉｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択
される１個または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，または
５または６員のヘテロアリールであり；より好ましくは，水素，メチル，イソプ
ロピル，フェニル，ピリジン−３−イル，３−クロロフェニル，または４−クロ
ロ−２−フルオロフェニルであり；または Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素と一緒になって，２，３−ジヒド
ロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，また
は２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−２−イル環を形成し，ここで，前記
環はハロまたはアルキルで任意に置換されていてもよく，好ましくは，Ｒ15およ
びＲ16はこれらが結合している窒素原子と一緒になって２，３−ジヒドロインド
ール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，５ブロモ−２
，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３−ジヒドロ−２Ｈ−
イソイソキノリン−２−イルを形成し； （ｉｉ）Ａは式Ｖの基である。
【００１８】 本明細書において用いる場合，"任意に置換されていてもよいアルキル"との用
語は，脂肪族炭化水素基を表す。アルキル成分は，"飽和アルキル"基（すなわち
，アルケンまたはアルキン成分を含まない）であってもよい。アルキル成分はま
た，"不飽和アルキル"成分（少なくとも１つのアルケンまたはアルキン成分を含
む）であってもよい。"アルケン"成分とは，少なくとも２つの炭素原子および少
なくとも１つの炭素−炭素二重結合からなる基を表し，"アルキン"成分とは，少
なくとも２つの炭素原子および少なくとも１つの炭素−炭素三重結合からなる基
を表す。アルキル成分は，飽和であっても不飽和であってもよく，分枝鎖，非分
枝鎖，または環状であってもよい。好ましくは，アルキル基は，１−２０個の炭
素原子を有する（数値範囲，例えば"１−２０"は，本明細書において記載される
場合には常に，所定の範囲内の各整数を表す。例えば，"１−２０個の炭素原子"
とは，アルキル基が１個の炭素原子，２個の炭素原子，３個の炭素原子，以下同
様にして，２０個までの炭素原子からなっていてもよいことを意味する。ただし
，この定義はまた，"アルキル"との用語が数値範囲が示されずに用いられること
もカバーする）。より好ましくは，これは１−１０個の炭素原子を有する"中級"
サイズのアルキルである。最も好ましくはこれは１−４個の炭素原子を有する"
低級"アルキルである。アルキル基は，シクロアルキル，アリール，ヘテロアリ
ール，ヘテロ脂環式，ヒドロキシ，アルコキシ，アリールオキシ，メルカプト，
アルキルチオ，アリールチオ，シアノ，またはハロから個々にかつ独立して選択
される１，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよい。"置換アル
キル"との用語は，上で定義したアルキル基が上述した置換基の少なくとも１つ
を有することを意味する。
【００１９】 "任意に置換されていてもよいアリール"との用語は，６−１２個の環原子を有
し，共役したパイ電子系を有する少なくとも１つの環を含む芳香族炭素環式基（
例えば，フェニル，ナフチル，テトラヒドロナフチル等）を表し，これらは，任
意に置換されていてもよいアルキル，ハロゲン，トリハロメチル，ヒドロキシ，
アルコキシ，カルボキシルアミノ，アミド，ニトロ，およびエステルから独立し
て選択される１，２，または３個の置換基で任意に置換されていてもよい。
【００２０】 "任意に置換されていてもよいフェニル"とは，任意に置換されていてもよいア
ルキル，ハロゲン，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシルア
ミノ，アミド，ニトロ，およびエステルから独立して選択される１，２，または
３個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル基を表す。
【００２１】 "シクロアルキル"との用語は，３−６個の炭素原子を有する飽和環状基（例え
ば，シクロプロピル，シクロブチル，シクロペンチルまたはシクロヘキシル）を
表し，これは，任意に置換されていてもよいアルキル，ハロゲン，トリハロメチ
ル，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシルアミノ，アミド，ニトロ，およびエ
ステルから独立して選択される１，２，または３個の置換基で任意に置換されて
いてもよい。
【００２２】 "任意に置換されていてもよいヘテロアリールまたは複素芳香族環"との用語は
，５−１０個の環原子を有し，骨格を形成する原子の１，２，３，または４個が
窒素，酸素，またはイオウから選択される複素原子であり残りが炭素である環系
を表し，例えば，ピリジン，フラン，ピロール，インドール，ピラジン，ピリミ
ジン，テトラゾール，イミダゾール等が挙げられる。複素芳香族／ヘテロアリー
ル環は，単環であっても縮合二環であってもよく，かつ，環の１つが部分的にま
たは完全に飽和していてもよく，例えば，２，３−ジヒドロインドール，２，３
−ジヒドロキノリン，２，３−ジヒドロイソキノリン等が挙げられる。ヘテロア
リール／複素芳香族環は，任意に置換されていてもよいアルキル，ハロゲン，ト
リハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシルアミノ，アミド，ニトロ
，およびエステルから独立して選択される１，２，または３個の置換基で任意に
置換されていてもよい。
【００２３】 "任意に置換されていてもよいヘテロ脂環式またはヘテロ脂環式"との用語は，
５−９個の環原子を有し，骨格を形成する原子の１，２，３，または４個は窒素
，酸素，またはイオウから選択される複素原子であり，残りが炭素である飽和環
系を表し，例えば，ピペラジン，ピペリジン，ピロリジン，モルホリン，テトラ
ヒドロフラン等が挙げられる。ヘテロ脂環式環は，任意に置換されていてもよい
アルキル，ハロゲン，トリハロメチル，ヒドロキシ，アルコキシ，カルボキシル
アミノ，アミド，ニトロ，およびエステルから独立して選択される１，２，また
は３個の置換基で任意に置換されていてもよい。
【００２４】 "ハロゲン"との用語は，フッ素，塩素，臭素およびヨウ素からなる群より選択
される原子を表す。
【００２５】 "トリハロメチル"との用語は，−Ｃ（Ｘ）3基を表し，ここで，Ｘは上で定義
したハロゲン基であり，例えば，トリフルオロメチル，トリクロロメチル，トリ
ブロモメチル等が挙げられる。
【００２６】 "任意に置換されていてもよいアルコキシ"との用語は，式−Ｏ−アルキルの基
を表し，ここで，アルキルは上で定義したとおりである。"置換アルコキシ"との
用語は，上で定義したアルキル基が上述の置換基の少なくとも１つを有すること
を意味する。"アルコキシ"との用語は，アルコキシ基中の上で定義したアルキル
鎖が置換されていないことを意味する。
【００２７】 Ｘが水素であるとき，アルコキシ基は"ヒドロキシ"基，すなわち−ＯＨとなる
。
【００２８】 "ニトロ"とは式−ＮＯ2の置換基である。
【００２９】 "アルキルチオ"との用語は，−ＳＲ基を表し，ここで，Ｒは上で定義した未置
換アルキルであり，例えば，メチルチオ，エチルチオ等が挙げられる。
【００３０】 "アリールオキシ"との用語は，−ＯＲ基を表し，ここで，Ｒは上で定義したア
リール基であり，例えば，フェノキシ等が挙げられる。
【００３１】 "アリールチオ"との用語は，−ＳＲ基を表し，ここで，Ｒは上で定義したアリ
ール基であり，例えば，フェニルチオ等が挙げられる。
【００３２】 "ジアルキルアミノ"との用語は，−ＮＲＲを表し，ここで各Ｒは１−６個の炭
素原子を有する未置換アルキル基であり，例えば，ジメチルアミノ，ジエチルア
ミノ等が挙げられる。
【００３３】 "任意に置換されていてもよいエステル"との用語は，−ＣＯＯＲを表し，ここ
で，Ｒは上で定義したアルキル基である。
【００３４】 "任意に置換されていてもよいアミド"との用語は，−ＣＯＮＲaＲbを表し，こ
こで，ＲaおよびＲbは水素または未置換低級アルキルである。
【００３５】 "薬学的に許容しうる塩"とは，遊離塩基の生物学的効力および特性を保持し，
無機酸または有機酸，例えば，塩酸，臭化水素酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタン
スルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエンスルホン酸，サリチル酸，リンゴ
酸，クエン酸，マレイン酸，コハク酸，酒石酸等と反応させることにより得られ
る塩を表す。
【００３６】 式Ｉの一般構造を有する本発明の好ましい化合物のいくつかが表１に示される
。 表１
【表１】
【表２】
【表３】
【００３７】 上述の化合物のいくつかは，式Ｘの構造を有し，ここで，Ｒ101，Ｒ102，Ｒ10 3 ，およびＲ112置換基は表２で定義されるとおりである。
【化１０】 表２
【表４】
【表５】
【００３８】 式ＩＩの一般構造を有する本発明の化合物のいくつかが表３に示される。 表３
【表６】
【表７】
【表８】
【００３９】 上述の化合物のいくつかは，式ＸＩの構造を有し，ここで，Ｒ104，Ｒ105，Ｒ106 ，およびＲ113置換基は表４で定義されるとおりであるが，他のものは，式Ｘ
ＩＩの構造を有し，ここで，Ｒ107，Ｒ108，およびＲ109置換基は表５で定義さ
れるとおりであり，さらに別のものは，式ＸＩＩＩの構造を有し，ここで，Ｒ11 0 およびＲ111置換基は表６で定義されるとおりである。
【化１１】 表４
【表９】
【表１０】
【００４０】
【化１２】 表５
【表１１】
【００４１】
【化１３】 表６
【表１２】
【００４２】 さらに別の観点においては，本発明は式ＶＩ：
【化１４】 ［式中， （ａ）Ｒ41は，水素，アミド，およびスルホンアミドからなる群より選択され； （ｂ）Ｒ42およびＲ44は，それぞれ独立して，水素，ハロゲン，およびアルコキ
シからなる群より選択され； （ｃ）Ｒ43は，水素，アルキル，ハロゲン，ヒドロキシ，アルコキシ，パーハロ
アルコキシ，ニトロ，スルホン，およびスルホンアミドからなる群より選択され
； （ｄ）Ｒ45は，水素，アルキル，ニトロ，およびアミドからなる群より選択され
；および （ｅ）Ｒ46は，水素，アルキル，カルボン酸，およびアミンからなる群より選択
される］ に記載される構造を有するインドリノン化合物に関する。
【００４３】 好ましくは，式ＶＩの化合物について， （ａ）Ｒ42およびＲ44は，それぞれ独立して，水素，クロロ，およびメトキシか
らなる群より選択され； （ｂ）Ｒ43は，水素，フルオロ，クロロ，ブロモ，メトキシ，ヒドロキシ，メチ
ル，エチル，ニトロ，トリフルオロメトキシ，−ＳＯ2ＣＨ3および−ＮＨＳＯ2
ＣＨ3からなる群より選択され， （ｃ）Ｒ45は，水素，メチル，−ＮＯ2，および−ＮＨＣ（Ｏ）Ｃ（ＣＨ3）3か
らなる群より選択され，および （ｄ）Ｒ46は，水素，メチル，−ＣＨ2Ｎ（ＣＨ3）2，−ＣＨ2Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）2 ，−ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ，および−ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨからなる
群より選択される。
【００４４】 式ＶＩに記載される構造を有する本発明の好ましい化合物は，
【化１５】
【化１６】
【化１７】
【化１８】 ［式中，Ｒ41は，−ＳＯ2Ｎ（Ｘ1）2，−ＮＨＳＯ2Ｘ1，−ＮＨＣ（Ｏ）Ｘ1から
なる群より選択され，ここでＸ1は水素またはアルキルである］ からなる群より選択される。
【００４５】 別の観点においては，本発明は，オキシインドールをアルデヒドと反応させる
ことにより形成することができる少なくとも５種類のインドリノン化合物を含む
コンビナトリアルライブラリに関し，ここで，オキシインドールは式ＶＩＩまた
はＶＩＩＩ：
【化１９】 ［式中， （ａ）Ｒ51−Ｒ54，Ｒ64，およびＲ65は水素であり； （ｂ）Ｒ55およびＲ56は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていてもよ
いアルキル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換されてい
てもよいヘテロアリールからなる群より選択されるか，またはＲ55およびＲ56は
一緒になって任意に置換されていてもよい５員または６員のヘテロ脂環式環を形
成し； （ｃ）Ｒ61−Ｒ63は，それぞれ独立して，水素，ハロゲン，カルボン酸，任意に
置換されていてもよいアリール，任意に置換されていてもよいヘテロアリール，
およびアミドからなる群より選択される］ に記載される構造を有し，アルデヒドは式ＩＸ：
【化２０】 ［式中， （ｄ）Ｒ71およびＲ73−Ｒ75は水素であり； （ｅ）Ｒ72は，水素，任意に置換されていてもよいアルキル，および任意に置換
されていてもよいアルコキシからなる群より選択される］ に記載される構造を有する。
【００４６】 "コンビナトリアルライブラリ"とは，化合物の多次元アレイにおいて，１つの
次元の各化合物を他の次元の各化合物と反応させることにより形成されるすべて
の化合物を表す。本発明の文脈においては，アレイは２次元であり，一方の次元
は本発明の全オキシインドールであり，他方の次元は本発明の全アルデヒドであ
る。インドリノン化合物を形成するために，各オキシインドールを各アルデヒド
と反応させることができる。このようにして形成されるすべてのインドリノン化
合物は，本発明の範囲内である。また，本発明のオキシインドールのいくつかと
本発明のすべてのアルデヒド，またはすべてのオキシインドールとアルデヒドの
いくつかと，またはオキシインドールのいくつかとアルデヒドのいくつかとを反
応させることにより形成される，より小さいコンビナトリアルライブラリも，本
発明の範囲内である。
【００４７】 好ましくは，本発明のコンビナトリアルライブラリにおいては， （ａ）Ｒ55およびＲ56は，それぞれ独立して，水素，メチル，イソプロピル，２
−メトキシエチル，ベンジル，４−フルオロベンジル，２−メトキシフェニル，
３−フルオロフェニル，４−フルオロフェニル，３−クロロフェニル，３−ピリ
ジルからなる群より選択され，またはＲ55およびＲ56は，一緒になって，ピロリ
ジン，４−メチルピペラジンからなる群より選択される環を形成し； （ｂ）Ｒ61−Ｒ63は，それぞれ独立して，水素，ブロモ，フェニル，２−メトキ
シフェニル，３−メトキシフェニル，４−メトキシフェニル，３−ピリジル，−
ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−
Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2 ）Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび
【化２１】 からなる群より選択され， （ｃ）Ｒ72は，水素，２−ジエチルアミノ−エトキシ，３−ジエチルアミノ−１
−イル−プロピル，および３−ピロリジン−１−イル−プロピルからなる群より
選択される。
【００４８】 さらに好ましくは，本発明のコンビナトリアルライブラリにおいて，アルデヒ
ドは，２−ホルミル−１Ｈ−インドール，２−ホルミル−５−（３−ジエチルア
ミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール，２−ホルミル−５−（２−ジメチルアミ
ノエトキシ）−１Ｈ−インドール，２−ホルミル−５−（２−ジメチルアミノエ
トキシ）−１Ｈ−インドール，２−ホルミル−５−（２−モルホリン−４−イル
エトキシ）−１Ｈ−インドール，２−ホルミル−５−（２−ピロリジン−１−イ
ル−エトキシ）−１Ｈ−インドール，２−メチル−１Ｈ−インドール−３−カル
ボアルデヒド，１Ｈ−インドール−５−カルボアルデヒド，および２−ホルミル
−５−（３−ピロリジン１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドールからなる群よ
り選択され；および オキシインドールは，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−
スルホン酸アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−ス
ルホン酸メチルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５
−スルホン酸ジメチルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−５−スルホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−エチル−アミド
，５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オン，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−
５−スルホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−メチル−アミド，２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−クロロ
−２−フルオロ−フェニル）−アミド，５−フェニル−１，３−ジヒドロインド
ール−２−オン，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸［２−（４−メトキシ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−アミド，２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−メトキ
シフェニル）−アミド，Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドー
ル−５−イル）−ベンズアミド，シクロペンタンカルボン酸（２−オキソ−２，
３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−アミド，（２−オキソ−２，３
−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−カルバミン酸ベンジルエステル，
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸４−フルオ
ロ−ベンジルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−
スルホン酸［３−（２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−プロピル］−アミド
，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸−（１，
２，３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）−アミド，２−オキソ−２
，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（フラン−２−イルメチル
）−アミド，３−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−ス
ルホニルアミノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル，２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−クロロ−フェニル
）−アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン
酸メチルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド，４−（２−オキソ−２，３−ジヒ
ドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホニル）−ピペラジン−１−カルボン酸エチ
ルエステル，４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−ス
ルホニル）−ピペラジン−１−カルボアルデヒド，２−オキソ−２，３−ジヒド
ロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メトキシ−エチル）−アミド，２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸プロピルアミ
ド，５−（４−メチル−ピペラジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−イ
ンドール−２−オン，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−
スルホン酸ベンジルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
−５−スルホン酸（２−メトキシ−フェニル）−アミド，２−オキソ−２，３−
ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロプロピルアミド，２−オキ
ソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン−３−イル
アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フ
ェニルアミド，５−（ピロリジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−イン
ドール−２−オン，５−（４−アセチル−ピペラジン−１−スルホニル）−１，
３−ジヒドロ−インドール−２−オン，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
インドール−５−スルホン酸シクロヘキシルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒ
ドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−モルホリン−４−イル−エチル
）−アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン
酸シクロブチルアミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５
−スルホン酸（１−フェニル−エチル）アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロペンチルアミド，５−（２−ピロリ
ジン−１−イル−アセチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，Ｎ−
（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−アセトアミ
ド，（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−カルバ
ミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イン
ドール−５−スルホン酸イソプロピルアミド，トルエン−４−スルホン酸２−（
２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステ
ル，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸エチル
アミド，４−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，２−オキソ
−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４−メトキシ−フェ
ニル）−アミド，４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−１，３−ジヒド
ロ−インドール−２−オン，４−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−１，
３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（４−メチル−ピペラジン−
１−イル）−エチル］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン，４−［２−（
３−ブロモ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
ン，４−（２−ブロモ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，
４−（２−ブロモ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，２−
オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６−メトキシ
−４’−メチルスルファニル−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−オキソ−
２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４−メトキシ−３−チ
オフェン−３−イル−フェニル）−アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１
Ｈ−インドール−４−カルボン酸ビフェニル−３−イルアミド，２−オキソ−２
，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６−メトキシ−３’−ト
リフルオロメチル−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−オキソ−２，３−ジ
ヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４’−フルオロ−６−メトキシ−
ビフェニル−３−イル）−アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イン
ドール−４−カルボン酸（６−メトキシ［１，１’，４’，１"］テルフェニル
−３−イル）−アミド，２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４
−カルボン酸（６，４’−ジメトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド，２−
オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ−
４−メトキシ−フェニル）−アミド，イソプロピル−カルバミン酸２−（２−オ
キソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，４
−［２−（３−トリフルオロメチル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒド
ロ−インドール−２−オン，４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキ
シ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，４−［２−（４−
メトキシ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
，４−（２−エトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，
４−（２−メトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，エ
チルカルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４
−イル）−エチルエステル，ビフェニル−２−イルカルバミン酸２−（２−オキ
ソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル，６−
ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−フェニル
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−（２−メトキシ−フェニル）
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−（３−メトキシ−フェニル）
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，６−（４−メトキシ−フェニル）
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，およびシクロヘキシル−カルバミ
ン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−イル）−エ
チルエステルからなる群より選択される。
【００４９】 上述のコンビナトリアルライブラリにより形成することができる本発明の化合
物のいくつかが表７に示される。
【００５０】 表７
【表１３】
【表１４】
【表１５】
【００５１】 上述の化合物のいくつかは式ＸＩＶの構造を有し，ここで，Ｒ114，Ｒ115，お
よびＲ116置換基は表８に定義されるとおりであるが，別の化合物は，式ＸＶの
構造を有し，ここで，Ｒ107，Ｒ108，およびＲ109置換基は，表９において定義
されるとおりである。
【００５２】
【化２２】 表８
【表１６】
【００５３】
【化２３】 表９
【表１７】
【表１８】
【００５４】 別の観点においては，本発明は，式Ｉ，ＩＩ，またはＶＩの化合物を合成する
方法に関する。該方法は，式ＸＶ，ＸＶＩ，またはＸＶＩＩに記載される構造を
有するオキシインドールを，式ＸＶＩＩＩ，ＸＩＸ，またはＸＸに記載される構
造を有するアルデヒドまたはケトンと反応させることを含む。式ＸＶ−ＸＸ中の
Ｒ1−Ｒ16，Ｒ41−Ｒ46，およびＡは本明細書において定義されるとおりである
。
【化２４】
【化２５】
【００５５】 式ＸＸのアルデヒドは，対応するカルボン酸またはエステルから，以下の反応
スキームを用いて合成することができる。
【化２６】 ［Ｒ’は，水素または本明細書において定義されるアルキルである］。
【００５６】 上述の方法を用いて本発明の化合物を製造するためには，塩基を用いることが
できる。塩基は好ましくは，窒素塩基，有機塩基または無機塩基である。"窒素
塩基"は，当該技術分野において一般に用いられ，非環状および環状アミンから
選択される。窒素塩基の例には，限定されないが，アンモニア，メチルアミン，
トリメチルアミン，トリエチルアミン，アニリン，１，８−ジアザビシクロ［５
．４．０］ウンデセ−７−エン，ジイソプロピルエチルアミン，ピロリジンおよ
びピペリジンが含まれる。
【００５７】 "有機塩基"とは，炭素原子を含む塩基である。有機塩基の例には，限定されな
いが，炭酸アニオン，炭酸水素アニオン，酢酸アニオン，およびギ酸アニオンが
含まれる。"無機塩基"とは，炭素原子を含まない塩基である。無機塩基の例には
，限定されないが，水酸アニオン，リン酸アニオン，亜硫酸アニオン，水硫アニ
オン，およびアミドアニオンが含まれる。当業者には，いずれの窒素塩基または
無機塩基が所望の反応条件の要求に適合するかが明らかである。本発明のある態
様においては，用いる塩基は，ピロリジンまたはピペリジンでありうる。別の態
様においては，塩基は水酸アニオンであってもよく，好ましくは，そのナトリウ
ムまたはカリウム塩として用いる。
【００５８】 本発明の化合物の合成は溶媒中で実施する。反応の溶媒は，好ましくは，プロ
トン性溶媒または非プロトン性溶媒である。"プロトン性溶媒"とは，溶質にプロ
トンを与えることができる溶媒である。プロトン性溶媒の例には，限定されない
が，アルコールおよび水が含まれる。"非プロトン性溶媒"とは，通常の反応条件
下で，溶質にプロトンを与えない溶媒である。典型的な有機溶媒，例えば，ヘキ
サン，トルエン，ベンゼン，塩化メチレン，ジメチルホルムアミド，ジメチルス
ルホキシド，クロロホルム，テトラヒドロフランは，非プロトン性溶媒のいくつ
かの例である。他の非プロトン性溶媒もまた，本発明により用いられるものの範
囲に含まれる。ある好ましい態様においては，反応の溶媒はアルコールであり，
これは好ましくは，イソプロパノールであってもよく，最も好ましくはエタノー
ルである。水は別の好ましいプロトン性溶媒である。化学の技術分野においてＤ
ＭＦとして知られるジメチルホルムアミドおよび化学の技術分野においてＤＭＳ
Ｏとして知られるジメチルスルホキシドは，好ましい非プロトン性溶媒である。
【００５９】 本発明の合成方法では，反応が高温，すなわち室温より高い温度で行われるこ
とが必要である。より好ましくは，高温は好ましくは約３０−１５０℃であり，
より好ましくは約７０−１００℃であり，最も好ましくはエタノールが沸騰する
およその温度である約７０−９０℃である（すなわち，エタノールの沸点）。あ
る温度について"約"とは，温度範囲が，好ましくは挙げられる温度の１０℃の範
囲内，より好ましくは，挙げられる温度の５℃の範囲内，最も好ましくは，挙げ
られる温度の２℃の範囲内であることを意味する。したがって，例として，"約
８０℃"とは，温度範囲が好ましくは，８０±１０℃，より好ましくは，８０±
５℃，最も好ましくは，８０±２℃であることを意味する。
【００６０】 本発明の合成方法は，所望の活性および構造の化合物のライブラリをスクリー
ニングする工程を含んでいてもよい。したがって，本発明は，最初に所望の特性
を有する化合物をスクリーニングし，次にその化合物を化学的に合成することに
よる，化合物の合成方法を提供する。
【００６１】 別の観点においては，本発明は，（ｉ）生理学的に許容しうる担体，希釈剤ま
たは賦形剤；および（ｉｉ）本明細書に記載される本発明のインドリノン化合物
，を含む医薬組成物を特徴とする。本発明のインドリノン化合物は，式Ｉ，ＩＩ
，またはＶＩのいずれか，または本発明のコンビナトリアルライブラリから得ら
れる化合物でありうことが理解される。
【００６２】 "医薬組成物"との用語は，本発明のインドリノン化合物と他の薬学的に許容し
うる希釈剤，賦形剤，または担体との混合物を表す。医薬組成物は，化合物の生
物への投与を容易にする。医薬組成物は，化合物を無機酸，例えば塩酸，臭化水
素酸，硫酸，硝酸，リン酸，メタンスルホン酸，エタンスルホン酸，ｐ−トルエ
ンスルホン酸，サリチル酸等と反応させることにより得ることができる。
【００６３】 "薬学的に許容しうる"との用語は，化合物の生物学的活性および特性を排除し
ない担体または希釈剤を規定する。
【００６４】 "担体"との用語は，細胞または組織内への化合物の取り込みを容易にする化学
化合物を規定する。例えば，ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は，多くの有機
化合物の生物の細胞または組織内への取り込みを容易にするため，一般的に用い
られている担体である。
【００６５】 "希釈剤"との用語は，水中に希釈して，目的とする化合物を溶解させ，ならび
に生物学的に活性な形の化合物を安定化させる化学化合物を規定する。緩衝化溶
液中に溶解した塩は，当該技術分野において希釈剤として用いられている。一般
に用いられている緩衝化溶液の１つはリン酸緩衝化食塩水である。これはヒト血
液の塩条件を模倣するためである。緩衝化塩は低い濃度で溶液のｐＨを調節する
ことができるため，緩衝化希釈剤はほとんど化合物の生物学的活性を変化させな
い。
【００６６】 本発明はまた，本発明のインドリノン化合物を用いてＰＫまたは蛋白質ホスフ
ァターゼ（ＰＰ）の機能を調節する方法を特徴とする。該方法は，ＰＫまたはＰ
Ｐを発現する細胞を化合物と接触させる工程を含む。本発明のインドリノン化合
物は，式Ｉ，ＩＩ，またはＶＩのいずれか，または本発明のコンビナトリアルラ
イブラリから得られる化合物でありうることが理解される。
【００６７】 "機能"との用語は，ＰＫまたはＰＰの細胞における役割を表す。これらの蛋白
質には，シグナリングカスケードの多くの段階，例えば，細胞成長，移動，分化
，遺伝子発現，筋肉構築，グルコース代謝，細胞性蛋白質合成および細胞サイク
ルの制御を制御するカスケードを制御するメンバーが含まれる。
【００６８】 本発明の文脈においては，"触媒活性"との用語は，蛋白質キナーゼが基質をリ
ン酸化するかまたは蛋白質ホスファターゼが基質を脱リン酸化する速度を規定す
る。触媒活性は，例えば，生成物に変換される基質の量を時間の関数として決定
することにより測定することができる。基質のリン酸化または脱リン酸化は，蛋
白質キナーゼの活性部位において生ずる。活性部位は，通常は，基質が蛋白質キ
ナーゼまたはホスファターゼに結合する空洞であり，生成物につなげられる。
【００６９】 本明細書において用いられる場合，"基質"との用語は，ＰＫによりリン酸化さ
れるかまたはＰＰにより脱リン酸化される分子を表す。基質は，好ましくはペプ
チドであり，より好ましくは蛋白質である。
【００７０】 "活性化する"との用語は，ＰＫまたはＰＰの細胞性機能を増加させることを表
す。この機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用であり，最も
好ましくは触媒活性である。
【００７１】 "阻害する"との用語は，ＰＫまたはＰＰの細胞性機能を低下させることを表す
。ＰＫまたはＰＰの機能は，好ましくは，天然の結合パートナーとの相互作用で
あり，最も好ましくは触媒活性である。
【００７２】 "調節する"との用語は，蛋白質キナーゼと天然の結合パートナーとの間に複合
体が形成される確率を増加または減少させることにより，蛋白質キナーゼの機能
を変化させることを表す。調節剤は，好ましくは，ＰＫまたはＰＰと天然の結合
パートナーとの間にそのような複合体が形成される確率を増加させ，より好まし
くは，ＰＫまたはＰＰに暴露される化合物の濃度に依存して，ＰＫまたはＰＰと
天然の結合パートナーとの間に複合体が形成される確率を増加または減少させ，
最も好ましくは，ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間に複合体が形成
される確率を減少させる。調節剤は，好ましくは，ＰＫまたはＰＰの触媒活性を
活性化し，より好ましくは，ＰＫまたはＰＰに暴露される化合物の濃度に依存し
て，ＰＫまたはＰＰの触媒活性を活性化または阻害し，または最も好ましくは，
ＰＫまたはＰＰの触媒活性を阻害する。
【００７３】 "複合体"との用語は，互いに結合する少なくとも２つの分子の組み合わせを表
す。シグナル伝達複合体はしばしば，互いに結合する少なくとも２つの蛋白質分
子を含む。
【００７４】 "天然の結合パートナー"との用語は，細胞においてＰＫまたはＰＰに結合する
ポリペプチドを表す。天然の結合パートナーは，ＰＫまたはＰＰシグナル伝達プ
ロセスにおいてシグナルを伝播する役割を果たすことができる。ＰＫまたはＰＰ
と結合パートナーとの間の相互作用の変化は，相互作用が形成される可能性の増
加または減少，またはＰＫまたはＰＰ／天然の結合パートナー複合体の濃度の増
加または減少として現れることができる。
【００７５】 ＰＫまたはＰＰの天然の結合パートナーは，ＰＫまたはＰＰの細胞内領域に高
い親和性をもって結合することができる。高い親和性とは，１０-6Ｍのオーダー
またはそれより低い平衡結合定数を表す。さらに，天然の結合パートナーはまた
，蛋白質キナーゼの細胞内領域と過渡的に相互作用して，これを化学的に修飾す
ることができる。ＰＫまたはＰＰの天然の結合パートナーは，限定されないが，
ＳＲＣホモロジー２（ＳＨ２）または３（ＳＨ３）ドメイン，他のホスホリルチ
ロシン結合（ＰＴＢ）ドメイン，グアニンヌクレオチド交換因子，蛋白質ホスフ
ァターゼ，および他の蛋白質キナーゼから選択される。ＰＫまたはＰＰとその天
然の結合パートナーとの間の相互作用の変化を測定する方法は，当該技術分野に
おいて容易に利用可能である。
【００７６】 本明細書において用いられる場合，"接触させる"との用語は，本発明のインド
リノン化合物を含む溶液をこの方法の細胞を浸す液体培地と混合することを表す
。化合物を含む溶液はまた，インドリノン化合物または化合物のこの方法の細胞
内への取り込みを容易にする他の成分，例えばジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ
）を含んでいてもよい。インドリノン化合物を含む溶液は，輸送装置，例えばピ
ペットに基づく装置またはシリンジに基づく装置を用いることにより，細胞を浸
す培地に加えることができる。
【００７７】 本発明のインドリノン化合物は，好ましくはインビトロでＰＫまたはＰＰの活
性を調節する。これらの化合物は，好ましくは問題とする疾病または疾患の治療
に対応する活性についての１またはそれ以上のインビトロアッセイ（以下の実施
例において記載されるようなアッセイ）において陽性の結果を示す。本発明のイ
ンドリノン化合物は，式Ｉ，ＩＩ，またはＶＩのいずれか，または，本発明のコ
ンビナトリアルライブラリから得られる化合物でありうることが理解される。
【００７８】 本発明はまた，ＰＫまたはＰＰの機能を調節する化合物を同定する方法を特徴
とする。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）ＰＫまたはＰＰを発現する細胞を
化合物と接触させ；そして（ｂ）細胞に及ぼす影響をモニターする。細胞に及ぼ
す影響は，好ましくは，細胞表現型の変化または無変化であり，より好ましくは
，これは細胞増殖の変化または無変化であり，さらに好ましくは，これはＰＫま
たはＰＰの触媒活性の変化または無変化であり，最も好ましくは，これは本明細
書に記載されるようなＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間の相互作用
の変化または無変化である。本発明のインドリノン化合物は，式Ｉ，ＩＩ，また
はＶＩのいずれか，または，本発明のコンビナトリアルライブラリから得られる
化合物でありうることが理解される。
【００７９】 "モニターする"との用語は，化合物をこの方法の細胞に加える影響を観察する
ことを表す。影響は，細胞表現型，細胞増殖，ＰＫまたはＰＰ触媒活性，または
ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化として現れるこ
とができる。
【００８０】 "影響"との用語は，細胞表現型または細胞増殖の変化または無変化を記述する
。"影響"はまた，ＰＫまたはＰＰの触媒活性の変化または無変化を記述しうる。
"影響"はまた，ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間の相互作用の変化
または無変化を記述しうる。
【００８１】 "細胞表現型"との用語は，細胞または組織の外見，または細胞または組織の機
能を表す。細胞表現型の例は，細胞の大きさ（縮小または拡大），細胞増殖（細
胞の数の増加または減少），細胞分化（細胞の形の変化または無変化），細胞生
存，アポトーシス（細胞死），代謝栄養物の利用（例えばグルコース取り込み）
である。細胞表現型の変化または無変化は，当該技術分野において知られる技術
により容易に測定される。
【００８２】 好ましい態様においては，本発明は，本発明のインドリノンを参照として用い
て，ＰＫまたはＰＰの活性を調節しうる他の化合物を同定する方法を特徴とする
。該方法は，以下の工程を含む：（ａ）細胞を溶解させてＰＫまたはＰＰを含む
溶解物とし；（ｂ）ＰＫまたはＰＰを抗体に吸着させ；（ｃ）吸着したＰＫまた
はＰＰを，試験化合物または本発明のインドリノン化合物の存在下または非存在
下で，基質とともにインキュベートし；そして（ｄ）基質を固体支持体または抗
体に吸着させ，次に細胞に与える影響をモニターする。細胞に及ぼす影響をモニ
ターする工程は，基質のリン酸濃度を測定することを含む。本発明のインドリノ
ン化合物は，式Ｉ，ＩＩ，またはＶＩのいずれか，または，本発明のコンビナト
リアルライブラリから得られる化合物でありうることが理解される。
【００８３】 "抗体"との用語は，ＰＫまたはＰＰまたはそのフラグメントに特異的結合親和
性を有する抗体（例えばモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体），また
は抗体フラグメントを表す。
【００８４】 "特異的結合親和性"とは，抗体が，特定の条件下において，他のポリペプチド
に結合するより高い親和性をもって標的（ＰＫまたはＰＰ）ポリペプチドに結合
することを意味する。ＰＫまたはＰＰに対して特異的結合親和性を有する抗体は
，免疫複合体が形成するような条件下で試料を抗体と接触させ，ＰＫまたはＰＰ
に結合した抗体の存在および／または量を検出することにより，試料中のＰＫま
たはＰＰの存在および／または量を検出するための方法において用いることがで
きる。そのような方法を実施するための診断キットは，抗体を含む第１の容器，
および抗体の結合パートナーと標識，例えば放射性同位体とのコンジュゲートを
有する第２の容器を含むように構築することができる。診断キットはまた，ＦＤ
Ａに認可された用途の通知およびその指針を含んでいてもよい。
【００８５】 "ポリクローナル"との用語は，抗原またはその抗原性機能的誘導体で免疫した
動物の血清から誘導される抗体分子の異成分集団である抗体を表す。ポリクロー
ナル抗体の製造のためには，種々の宿主動物に抗原を注射することにより免疫す
ることができる。宿主の種により，種々のアジュバントを用いて免疫学的応答を
増加させることができる。
【００８６】 "モノクローナル抗体"は，特定の抗原に対する抗体の実質的に均一な集団であ
る。モノクローナル抗体は，連続細胞株の培養物による抗体分子の生成を与える
任意の技術により得ることができる。モノクローナル抗体は，当業者に知られる
方法により得ることができる。例えば，Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒ
ｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５），および米国特許．４，３７６，１１
０を参照されたい。
【００８７】 "抗体フラグメント"との用語は，特定の分子に対して特異的結合親和性を表示
する抗体の一部，しばしば超可変領域および周囲の重鎖および軽鎖の一部を表す
。超可変領域は，物理的にポリペプチド標的に結合する抗体の部分である。
【００８８】 さらに別の観点においては，本発明は，制御されないチロシンキナーゼまたは
ホスファターゼシグナル伝達に関連する疾病を治療する方法を特徴とする。該方
法は，治療を必要とする対象に，治療上有効量の本明細書に記載されるインドリ
ノン化合物を投与する工程を含む。本発明のインドリノン化合物は，式Ｉ，ＩＩ
，またはＶＩのいずれか，または本発明のコンビナトリアルライブラリから得ら
れる化合物でありうることが理解される。
【００８９】 "治療する"または"治療"との用語は，必ずしも完全な治癒を意味しない。疾病
の任意の望ましくない症状のいかなる程度のいかなる緩和，または疾病の進行の
減速も治療であると考えることができる。さらに，治療は患者の全体的な安寧の
感覚または外観を悪化させるかもしれない作用を含むかもしれない。例えば，癌
患者において患者の感覚を"より重症に"するかもしれない化学療法剤を投与する
ことも，やはり治療であると考えられる。
【００９０】 本発明はまた，チロシンキナーゼまたはホスファターゼシグナル伝達を制御す
る方法を特徴とする。該方法は，対象に治療上有効量の本明細書に記載されるイ
ンドリノン化合物を投与することを含む。本発明のインドリノン化合物は，式Ｉ
，ＩＩ，またはＶＩのいずれか，または本発明のコンビナトリアルライブラリか
ら得られる化合物でありうることが理解される。
【００９１】 さらに，本発明は，生物において異常な状態を予防または治療する方法を特徴
とし，ここで，異常な状態は，ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間の
相互作用により特徴づけられるシグナル伝達経路の異常に関連する。該方法は，
以下の各工程を含む：（ａ）本明細書に記載される本発明の化合物を投与し；そ
して（ｂ）異常な相互作用を促進または中断させる。生物は，好ましくは哺乳動
物であり，異常な状態は好ましくは癌である。本発明のインドリノン化合物は，
式Ｉ，ＩＩ，またはＶＩのいずれか，または，本発明のコンビナトリアルライブ
ラリから得られる化合物でありうることが理解される。異常な状態は，好ましく
は，高血圧，鬱病，一般的不安症，恐怖症，外傷後ストレス症候群，思春期人格
障害，性的不全，摂取疾患，肥満，化学物質依存症，群発性頭痛，片頭痛，疼痛
，アルツハイマー病，強迫性障害，恐慌性障害，記憶障害，パーキンソン病，内
分泌疾患，血管痙攣，小脳性運動失調，および胃腸管疾患からなる群より選択さ
れる。
【００９２】 シグナル伝達プロセスに関して，"異常"との用語は，生物において過剰発現ま
たは過小発現されているか，その触媒活性が野生型ＰＫまたはＰＰ活性より低い
かまたは高いように変異しているか，天然の結合パートナーともはや相互作用す
ることができないように変異しているか，もはや別の蛋白質キナーゼまたは蛋白
質ホスファターゼにより修飾されることができないか，またはもはや天然の結合
パートナーと結合することができないＰＫまたはＰＰを表す。
【００９３】 "異常な相互作用を促進または破壊する"との用語は，本発明の化合物を生物の
細胞または組織に投与することにより達成することができる方法を表す。化合物
は，例えば，複合体界面において多数の原子と望ましい相互作用を形成すること
により，ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーとの間の相互作用を促進するこ
とができる。あるいは，化合物は，複合体界面において原子間に形成される望ま
しい相互作用を妨害することにより，ＰＫまたはＰＰと天然の結合パートナーと
の間の相互作用を阻害することができる。
【００９４】 上述した本発明の概要は非限定的であり，本発明の他の特徴および利点は，以
下の好ましい態様の説明および特許請求の範囲から明らかとなるであろう。
【００９５】用途 本発明は，ＰＫまたはＰＰシグナル伝達，特にレセプターおよび非レセプター
チロシンキナーゼシグナル伝達を制御および／または調節することができる化合
物に関する。
【００９６】 レセプターキナーゼ媒介性シグナル伝達は，特定の成長因子（リガンド）との
細胞外相互作用により開始され，続いて，レセプターの二量化，固有の蛋白質キ
ナーゼ活性の過渡的刺激およびリン酸化が生ずる。このようにして形成された細
胞内シグナル伝達分子用の結合部位は，適切な細胞性応答（例えば，細胞***，
細胞外微小環境に対する代謝的効果）を容易にする一連の細胞質シグナリング分
子との複合体の形成につながる。Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｕｌｌｒ
ｉｃｈ，１９９２，Ｎｅｕｒｏｎ ９：３０３−３９１を参照されたい。
【００９７】 成長因子レセプターのチロシンリン酸化部位は，シグナリング分子のＳＨ２（
ｓｒｃホモロジー）ドメインの高親和性結合部位として機能することが示されて
いる（Ｆａｎｔｌ ｅｔ ａｌ．１９９２，Ｃｅｌｌ ６９：４１３−４２３；
Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１
４：２７７７−２７８５）；Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅ
ｌｌ ７２：７６７−７７８；およびＫｏｃｈ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２５２：６６８−６７８）。レセプターキナーゼに付随するいくつ
かの細胞内基質蛋白質が同定されている。これらは２つの主要な群に分けること
ができる：（１）触媒ドメインを有する基質；および（２）そのようなドメイン
を有しないがアダプターとして作用し，触媒的に活性な分子と会合する基質（Ｓ
ｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：７６７−７７８）
。レセプターとその基質のＳＨ２ドメインとの間の相互作用の特異性は，リン酸
化されるチロシン残基のすぐ近傍のアミノ酸残基により決定される。特定のレセ
プター上におけるＳＨ２ドメインとホスホチロシン残基の周りのアミノ酸配列と
の間の結合親和性の相違は，基質のリン酸化プロファイルにおいて観察される相
違と一致する（Ｓｏｎｇｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７２：
７６７−７７８）。これらの知見は，各レセプターキナーゼの機能が，その発現
のパターンおよびリガンド利用性のみならず，特定のレセプターにより活性化さ
れる下流のシグナル伝達経路のアレイによっても決まることを示唆する。すなわ
ち，リン酸化は，特定の成長因子レセプターならびに分化因子レセプターにより
リクルートされるシグナリング経路の選択性を決定する重要な制御工程を提供す
る。
【００９８】 チロシンキナーゼシグナル伝達により，他の応答の中でも特に，細胞増殖，分
化および代謝が生ずる。異常な細胞増殖により，新生物の発達を含む広範な疾患
および疾病，例えば癌腫，肉腫，白血病，神経膠芽細胞腫，血管腫，乾癬，アテ
ローム性動脈硬化症，関節炎および糖尿病性網膜症（または制御されない新脈管
形成および／または脈管形成に関連する他の疾患）が生ずる。
【００９９】 したがって，本発明は，ＲＴＫおよび／または非レセプターチロシンキナーゼ
の酵素活性に影響を与え，そのような蛋白質により伝達されるシグナルに干渉す
ることにより，チロシンキナーゼシグナル伝達を制御，調節および／または阻害
する化合物に関する。より詳細には，本発明は，多くの種類の固形腫瘍，例えば
，限定されないが，癌腫，肉腫，赤芽球腫，神経膠芽細胞腫，髄膜腫，星状細胞
腫，黒色腫および筋原細胞腫を治癒するための治療的方法として，ＲＴＫおよび
／または非レセプターチロシンキナーゼ媒介性シグナル伝達経路を制御，調節お
よび／または阻害する化合物に関する。適応症には，限定されないが，脳癌，膀
胱癌，卵巣癌，胃癌，膵臓癌，結腸癌，血液癌，肺癌および骨癌が含まれる。本
発明はまた，非固形腫瘍，例えば白血病を治癒するための治療方法において用い
られる化合物に関する。
【０１００】Ｉ．本発明の化合物により標的とすべき標的疾病 本明細書に記載される化合物は，制御されないチロシンキナーゼシグナル伝達
に関連する疾患，例えば，細胞増殖性疾患，繊維性疾患および代謝性疾患の治療
に有用である。
【０１０１】 本発明によって治療またはさらに研究することができる細胞増殖疾患には，癌
，血管増殖疾患およびメサンギウム細胞増殖疾患が含まれる。
【０１０２】 血管増殖性疾患とは，一般に血管の異常な増殖を引き起こす新脈管形成性およ
び脈管形成性疾患を表す。血管の形成および広がり，またはそれぞれ脈管形成お
よび新脈管形成は，種々の生理学的プロセス，例えば，胚発生，黄体形成，創傷
治癒および臓器再生において重要な役割を果たす。これらはまた，癌の発達にお
いても中枢的役割を果たす。血管増殖疾患の他の例には，新たな毛細血管が関節
に侵入して，軟骨を破壊する関節炎，および眼性疾病，例えば網膜中の新たな毛
細血管が硝子体に侵入し，出血し，失明を引き起こす糖尿病性網膜症，および身
体のある部分における血管の異常な成長を特徴とする遺伝性多系疾患であるフォ
ン・ヒッペル−リンダウ（ＶＨＬ）疾病が含まれる。逆に，血管の収縮，攣縮ま
たは閉塞に関連する疾患，例えば再狭窄における関与も示唆されている。
【０１０３】 繊維性疾患とは，細胞外マトリックスの異常な形成を表す。繊維性疾患の例に
は，肝硬変およびメサンギウム細胞増殖性疾患が含まれる。肝硬変は，肝臓瘢痕
の形成を引き起こす細胞外マトリックスの組成の増加を特徴とする。肝硬変は，
肝臓の硬変等の疾病を引き起こしうる。肝臓瘢痕を引き起こす細胞外マトリック
スの増加はまた，肝炎ウイルス等のウイルス感染に起因する。脂肪細胞は，肝硬
変において主要な役割を果たすようである。示唆されている他の繊維性疾患には
，アテローム性動脈硬化症（以下を参照）が含まれる。
【０１０４】 メサンギウム細胞増殖疾患とは，メサンギウム細胞の異常な増殖により引き起
こされる疾患を表す。メサンギウム増殖疾患には，種々のヒト腎臓疾病，例えば
，糸球体腎炎，糖尿病性腎症，悪性腎硬化症，血栓性細小血管症候群，移植拒絶
，および糸球体症が含まれる。ＰＤＧＦ−Ｒは，メサンギウム細胞増殖の維持に
関与することが示唆されている（Ｆｌｏｅｇｅ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｋｉ
ｄｎｅｙ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ４３：４７Ｓ−５４Ｓ）。
【０１０５】 ＰＫはそのような細胞増殖性疾患に関連づけられてきた。例えば，ＲＴＫファ
ミリーのいくつかのメンバーが癌の発生と関連づけられている。ＥＧＦＲ（Ｔｕ
ｚｉ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ６３：２２７−２３
３，Ｔｏｒｐ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＡＰＭＩＳ １００：７１３−７１９
），ＨＥＲ２／ｎｅｕ（Ｓｌａｍｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ ２４４：７０７−７１２），およびＰＤＧＦ−Ｒ（Ｋｕｍａｂｅ ｅｔ ａ
ｌ．，１９９２，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，７：６２７−６３３）等のこれらのレセプ
ターのいくつかは多くの腫瘍において過剰発現され，および／またはオートクリ
ンループにより持続的に活性化される。事実，ほとんどの一般的かつ重症の癌に
おいては，これらのレセプターの過剰発現（Ａｋｂａｓａｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅ
ｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｓｃｉ．，
１１１：１１９−１３３，Ｄｉｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｒｅｓ．６１：２４９−２７３，Ｋｏｒｃ ｅｔ
ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０，１３５２−１３６０）
，およびオートクリンループ（Ｌｅｅ ａｎｄ Ｄｏｎｏｇｈｕｅ，１９９２，
Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１１８：１０５７−１０７０，Ｋｏｒｃ ｅｔ ａ
ｌ．，前掲，Ａｋｂａｓａｋ ａｎｄ Ｓｕｎｅｒ−Ａｋｂａｓａｋ ｅｔ ａ
ｌ．，前掲）が示されている。例えば，ＥＧＦＲは扁平上皮癌，星状細胞腫，神
経芽細胞腫，頭頚部癌，肺癌，および膀胱癌と関連づけられている。ＨＥＲ２は
乳，卵巣，胃，肺，膵臓，および膀胱の癌と関連づけられている。ＰＤＧＦ−Ｒ
は神経芽細胞腫，ならびに肺，卵巣，黒色腫および前立腺の癌と関連づけられて
いる。ＲＴＫ ｃ−ｍｅｔは一般に肝臓腫瘍発生に，したがって肝細胞腫瘍に関
連づけられている。さらに，ｃ−ｍｅｔは悪性腫瘍形成に関連づけられている。
より詳細には，ＲＴＫ ｃ−ｍｅｔは，他の癌の中でも特に，結腸直腸，甲状腺
，膵臓，および胃の癌腫，および白血病およびリンパ腫と関連づけられている。
さらに，ｃ−ｍｅｔ遺伝子の過剰発現はまたホジキン病およびバーキット病の患
者およびリンパ種細胞株で検出されている。
【０１０６】 ＩＧＦ−ＩＲは，栄養上の支持およびＩＩ型糖尿病に関係づけられていること
に加えて，いくつかの型の癌に関係づけられている。例えば，ＩＧＦ−Ｉはいく
つかの型の腫瘍，例えばヒト乳癌の癌腫細胞（Ａｒｔｅａｇａ ｅｔ ａｌ．，
１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１４１８−１４２３），および
小細胞肺腫瘍（Ｍａｃａｕｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ．，５０：２５１１−２５１７）のオートクリン成長刺激因子として示唆さ
れている。さらに，ＩＧＦ−Ｉは神経系の正常な成長および分化に完全に関与し
ており，ヒトの神経膠腫のオートクリン刺激因子であるように見える。Ｓａｎｄ
ｂｅｒｇ−Ｎｏｒｄｑｖｉｓｔ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅ
ｓ．５３：２４７５−２４７８。細胞増殖におけるＩＧＦ−ＩＲとそのリガンド
の重要性は，培養されている多くの細胞型（線維芽細胞，上皮細胞，平滑筋細胞
，Ｔリンパ球，骨髄性細胞，軟骨細胞，および骨芽細胞（骨髄の幹細胞）がＩＧ
Ｆ−Ｉによって成長するよう刺激されるという事実によってさらに支持される。
Ｇｏｌｄｒｉｎｇ ａｎｄ Ｇｏｌｄｒｉｎｇ，１９９１，Ｅｕｋａｒｙｏｔｉ
ｃ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，１：３０１−３２６。最近の一連の発表
においてＢａｓｅｒｇａは，ＩＧＦ−ＩＲが形質転換の機構において中心的な役
割を果たしていること，またそれ自体がヒトの広範囲の悪性腫瘍に対する治療的
介入のための好ましい標的となり得ることを示唆している。Ｂａｓｅｒｇａ，１
９９５，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５：２４９−２５２，Ｂａｓｅｒｇａ，１
９９４，Ｃｅｌｌ ７９：９２７−９３９，Ｃｏｐｐｏｌａ ｅｔ ａｌ．，１
９９４，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１４：４５８８−４５９５。
【０１０７】 しかし，ＲＴＫの異常と疾病との間の関連性は，癌に限られない。例えば，Ｒ
ＴＫは，乾癬，真性糖尿病，創傷治癒，炎症，および神経変性性疾病等の代謝性
疾病に関連づけられている。これらの疾病には，限定されないが，高血圧，鬱病
，一般的不安症，恐怖症，外傷後ストレス症候群，思春期人格障害，性的不全，
摂取疾患，肥満，化学物質依存症，群発性頭痛，片頭痛，疼痛，アルツハイマー
病，強迫性障害，恐慌性障害，記憶障害，パーキンソン病，内分泌疾患，血管痙
攣，小脳性運動失調，および胃腸管疾患が含まれる。例えば，ＥＧＦ−Ｒは角膜
および皮膚の創傷治癒と関連づけられている。ＩＩ型の真性糖尿病においてイン
スリン−ＲおよびＩＧＦ−１Ｒの欠陥が示されている。特定のＲＴＫとそれらの
治療上の摘要との間のさらに完全な相関関係は，Ｐｌｏｗｍａｎ ｅｔ ａｌ．
，１９９４，ＤＮ＆Ｐ７：３３４−３３９に記載されている。
【０１０８】 レセプタータイプのチロシンキナーゼのみならず，多くの細胞性チロシンキナ
ーゼ（ＣＴＫ），例えばｓｒｃ，ａｂｌ，ｆｐｓ，ｙｅｓ，ｆｙｎ，ｌｙｎ，ｌ
ｃｋ，ｂｌｋ，ｈｃｋ，ｆｇｒ，ｙｒｋ（Ｂｏｌｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９９２
，ＦＡＳＥＢ Ｊ．６：３４０３−３４０９により概説されている）が，増殖お
よび代謝シグナル伝達経路に，したがって本発明の摘要に関与している。例えば
，変異体ｓｒｃ（ｖ−ｓｒｃ）は，ニワトリにおける腫瘍蛋白質（ｐｐ６０v-sr c ）であることが示されている。さらに，その細胞性相同体であるプロトオンコ
ジンｐｐ６０c-srcは，多くのレセプターの発癌シグナルを伝達する。例えば，
腫瘍におけるＥＧＦ−ＲまたはＨＥＲ２／ｎｅｕの過剰発現は，ｐｐ６０c-src
の構成的活性化につながり，これは悪性腫瘍細胞に特徴的であるが正常細胞には
ない。一方，ｃ−ｓｒｃの発現を欠如しているマウスは大理石骨病の表現型を示
し，破骨細胞機能におけるｃ−ｓｒｃの重要な関与と，関連する疾患における関
与の可能性を暗示している。同様に，Ｚａｐ７０はＴ細胞シグナリングに関与す
ることが示唆されている。
【０１０９】 さらに，ＣＴＫ調節化合物を同定して，ＲＴＫを目標とするブロッカーを増大
させるか，さらに相乗効果を得ることは，本発明の１つの観点である。
【０１１０】 さらに，ＲＴＫおよび非レセプタータイプのキナーゼの両方が，過免疫疾患に
関連づけられている。
【０１１１】 本発明の化合物はまた，ＰＹＫ−２蛋白質に関連する疾病を治療するのにも有
効である。この蛋白質，その細胞性機能，およびこれに関連する疾病は，米国特
許５，８３７，５２４（１９９８年１１月１７日発行，Ｌｅｖ ｅｔ ａｌ．，
表題"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"
（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ書類番号２０９／０７０），米国特許５，８３７，８１５
（１９９８年１１月１７日発行，Ｌｅｖ ｅｔ ａｌ．，表題"ＰＹＫ２ ＲＥ
ＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏ
ｎ書類番号２１１／１２１），米国特許出願０８／９８７，６８９（１９９７年
１２月９日出願，Ｌｅｖ ｅｔ ａｌ．，表題"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ Ｐ
ＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ書類番号２３
０／１１０），米国特許出願０９／１６５，０６２（１９９８年１０月１日出願
，Ｌｅｖ ｅｔ ａｌ．，表題"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ
ＡＮＤ ＭＥＴＨＯＤＳ"（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ書類番号２３７／２０１），
国際公開ＷＯ９８／２６０５４（１９９８年６月１８日公開，Ｌｅｖ ｅｔ ａ
ｌ．，表題"ＰＹＫ２ ＲＥＬＡＴＥＤ ＰＲＯＤＵＣＴＳ ＡＮＤ ＭＥＴＨ
ＯＤＳ"（Ｌｙｏｎ＆Ｌｙｏｎ書類番号２２２／１２６），および国際出願ＵＳ
９８／２７８７１（１９９８年１２月３１日出願，Ｓｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ
ｅｔ ａｌ．，表題"ＰＹＫ２ ＡＮＤ ＩＮＦＬＡＭＭＡＴＩＯＮ"（Ｌｙｏｎ
＆Ｌｙｏｎ書類番号２３６／０７５）に詳細に記載されている（これらのすべて
は図面を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する）。
【０１１２】 さらに，本発明の化合物のいくつかは，慢性関節リウマチ（ＲＡ）にも有効で
ある。ＲＡは複数のタイプの細胞および細胞プロセスにより媒介される慢性の炎
症性疾病である。これらには，マクロファージおよびＴ細胞の浸潤，および新脈
管形成の関与が含まれる。ＲＡの治療における小分子阻害剤の有用性を，ラット
コラーゲン誘導性関節炎モデルにおいて調べた。本発明の化合物のいくつかは，
生化学的キナーゼアッセイにおいてチロシンキナーゼＦＬＫ−１／ＫＤＲ，ｐｙ
ｋ２，およびＺＡＰ−７０を様々な程度で阻害する。さらに，化合物は，ＲＡの
病理学における関与が示唆されている細胞を標的とする細胞アッセイにおいて活
性である：ＺＡＰ−７０活性により媒介されるＴ細胞増殖の阻害，ＦＬＫ−１／
ＫＤＲ活性化により媒介されるＶＥＧＦ刺激ＨＵＶＥＣ増殖の阻害，およびｐｙ
ｋ２活性化により媒介されるネズミ骨髄由来マクロファージからのＴＮＦ−α産
生の阻害。さらに，ヒトＲＡに伴う組織学的および病理学的変化を模倣する齧歯
類コラーゲン誘導性関節炎モデルにおいて，本発明の化合物のいくつかは，コラ
ーゲン免疫の時点から毎日投与したとき，関節腫脹を阻害するのに有効である。
【０１１３】ＩＩ．ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターおよびＶＥＧＦ 正常な脈管形成および新脈管形成は，胚発生，損傷治癒，臓器再生等の種々の
生理学的過程，および***期の黄体における濾胞形成と妊娠後の胎盤の成長等の
女性の生殖過程において，重要な役割を果たす。Ｆｏｌｋｍａｎ ａｎｄ Ｓｈ
ｉｎｇ，１９９２，Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍ．２６７：１０９３１
−３４。しかし，多くの疾病が，制御されないまたは不適切な新脈管形成の持続
により推進される。例えば，関節炎においては，新たな毛細血管が関節に侵入し
，軟骨を破壊する。糖尿病においては，網膜中の新たな毛細血管が硝子体に侵入
し，出血して失明を引き起こす（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８７：Ｃｏｎｇｒｅｓｓ
ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ ａｎｄ Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ（Ｖｅｒｓｔ
ｒａｅｔｅ，ｅｔ．ａｌ，ｅｄｓ．），Ｌｅｕｖｅｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｌｅｕｖｅｎ，ｐｐ．５８３−５９６）。眼性新生血管形成は，失
明の最も一般的な原因であり，ほぼ２０種の眼性疾病において支配的である。
【０１１４】 さらに，脈管形成および／または新脈管形成は，悪性固形腫瘍の成長および転
移に関連づけられている。腫瘍は，腫瘍それ自体が成長するために，新たな毛細
血管の増殖を刺激しつづけなければならない。さらに，腫瘍中に埋め込まれた新
たな血管は，腫瘍細胞が循環中に入り，身体の遠い部位に転移するための道を提
供する（Ｆｏｌｋｍａｎ，１９９０，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．
８２：４−６；Ｋｌａｇｓｂｒｕｎｎ ａｎｄ Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：６９９−７０２；Ｆｏｌｋｍａｎ，１９９１，
Ｊ．Ｎａｔｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．８２：４−６；Ｗｅｉｄｎｅｒ ｅ
ｔ ａｌ，１９９１，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２４：１−５）。
【０１１５】 インビトロ内皮細胞成長促進活性を有するいくつかのポリペプチドが同定され
ている。例としては，酸性および塩基性繊維芽細胞成長因子（ａＦＧＦ，ｂＦＧ
Ｆ），血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）および胎盤成長因子が挙げられる。ａＦＧ
ＦおよびｂＦＧＦとは異なり，ＶＥＧＦは内皮細胞特異的な細胞***促進物質で
あることが最近報告された（Ｆｅｒｒａｒａ ａｎｄ Ｈｅｎｚｅｌ，１９８９
，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６１：８５１−８５
８；Ｖａｉｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
．５：１９４６１−１９５６６）。
【０１１６】 すなわち，ＶＥＧＦが結合する特異的レセプターの同定は，内皮細胞増殖の制
御の理解の重要な進歩である。高親和性をもってＶＥＧＦに結合する２つの構造
的に密接に関連するＲＴＫが同定されている：ｆｌｔ−１レセプター（Ｓｈｉｂ
ｕｙａ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ５：５１９−５２４；Ｄ
ｅＶｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５５：９８９−９
９１）およびＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプター（ＶＥＧＦＲ２とも称される）（米
国特許出願０８／１９３，８２９および０８／９６５，５９８において議論され
ている）。したがって，これらのＲＴＫが内皮細胞増殖の調節および制御におい
て役割を果たすであろうと推定されている。
【０１１７】 同時係属中のの米国特許出願０８／１９３，８２９および０８／９６５，５９
８に記載される開示等の証拠は，ＶＥＧＦが内皮細胞増殖の原因であるのみなら
ず，正常なおよび病的な新脈管形成の主要な制御因子であることを強く示唆する
。一般に，Ｋｌａｇｓｂｕｍ ａｎｄ Ｓｏｋｅｒ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：６９９−７０２；Ｈｏｕｃｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２
，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：２６０３１−２６０３７を参照されたい。
さらに，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１およびｆｌｔ−１は，成長している腫瘍の増殖しつ
つある内皮細胞において大量に発現されているが，周囲の静止内皮細胞において
は発現されていないことが示されている（Ｐｌａｔｅ ｅｔ ａｌ．，１９９２
，Ｎａｔｕｒｅ ３５９：８４５−８４８；Ｓｈｗｅｉｋｉ ｅｔ ａｌ．，１
９９２，Ｎａｔｕｒｅ ３５９：８４３−８４５）。
【０１１８】ＩＩＩ．ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターに対するアゴニストおよびアンタゴニス トの同定 内皮細胞増殖，および潜在的には脈管形成および／または新脈管形成の管理，
制御および調節におけるＲＴＫの推定される重要性の観点から，種々の方法を用
いてＲＴＫ"阻害剤"を同定するための多くの試みが行われてきた。これらには，
変異体リガンド（米国特許４，９６６，８４９）；可溶性レセプターおよび抗体
（ＷＯ９４／１０２０２；Ｋｅｎｄａｌｌ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ，１９９４，
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：１０７０５−１０７０
９；Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｎａｔｕｒｅ ３６２：８４１−８４４
）；およびＲＮＡリガンド（Ｊｅｌｌｉｎｅｋ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３３：１０４５０−１０４５６）の使用が含まれる。
【０１１９】 さらに，キナーゼ阻害剤（ＷＯ９４／０３４２７；ＷＯ９２／２１６６０；Ｗ
Ｏ９１／１５４９５；ＷＯ９４／１４８０８；米国特許５，３３０，９９２；Ｍ
ａｒｉａｎｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ．３５：２２６８），およびレセプターキナーゼシグナル伝達経
路に作用する阻害剤，例えば蛋白質キナーゼＣ阻害剤が同定されている（Ｓｃｈ
ｕｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：６８２
−６８７）；Ｔａｋａｎｏ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｍｏｌ．Ｂｉｏ．Ｃｅｌ
ｌ ４：３５８Ａ，Ｋｉｎｓｅｌｌａ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｅｘｐ．Ｃｅ
ｌｌ Ｒｅｓ．１９９：５６−６２；Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，
Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｈｙｓ．７５２：４４８−５７）。
【０１２０】 最近，チロシンキナーゼ阻害剤として作用する小分子を同定する試みが行われ
ている。例えば，ビス−単環式，２環式および複素環式アリール化合物（ＰＣＴ
ＷＯ ９２／２０６４２），ビニレン−アザインドール誘導体（ＰＣＴ ＷＯ
９４／１４８０８）および１−シクロプロピル−４−ピリジルキノロン（米国
特許５，３３０，９９２）がチロキシン・キナーゼ阻害剤として記載されている
。スチリル化合物（米国特許５，２１７，９９９），スチリル置換ピリジル化合
物（米国特許５３０２６０６），キナゾリン誘導体（ＥＰ出願５６６２６６Ａ１
），セレナインドールおよびセレニド（ＰＣＴ ＷＯ９４／０３４２７）および
３環式ポリヒドロキシル化合物（ＰＣＴ ＷＯ ９２／２１６６０）およびベン
ジルホスホン酸化合物（ＰＣＴ ＷＯ ９１／１５４９５）は，癌の治療に用い
るためのチロシンキナーゼ阻害剤として用いるための化合物として記載されてい
る。
【０１２１】 したがって，脈管形成を有効にかつ特異的に抑制するためにＫＤＲ／ＦＬＫ−
１レセプターのシグナル伝達を選択的に阻害する有効な小化合物を同定し生成す
ることについての満たされていない要求が存在する。
【０１２２】 本発明のある化合物は生物学的アッセイにおいて優れた活性を示し，したがっ
て，これらの化合物および関連する化合物は，Ｆｌｋ関連疾患，例えば持続する
制御されないまたは不適切な新脈管形成により推進される疾患の治療に有効であ
ることが予測される。
【０１２３】医薬処方および投与経路 本明細書に記載される化合物は，そのままヒトの患者に投与するか，または組
み合わせ治療におけるように，これを他の活性成分とともに適当な担体または賦
形剤と混合した医薬組成物中で投与することができる。本明細書に記載される化
合物の製剤および投与の技術は，"Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍｃｏｌ
ｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ"（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．
，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ）の最新版に見いだされる。
【０１２４】１．投与の経路 適当な投与経路は，例えば，経口，直腸，経粘膜，または腸管投与，あるいは
筋肉内，皮下，静脈内，骨髄内等の非経口輸送，ならびに髄内，直接心室内，腹
腔内，鼻腔内，または眼内の注射を含む。
【０１２５】 あるいは，化合物は，全身的方法ではなく局所に，例えば化合物を固形腫瘍内
に直接，しばしばデポ剤または持続放出製剤中で注射することにより投与しても
よい。
【０１２６】 さらに，薬物はターゲティングされたドラッグデリバリーシステムにおいて，
例えば腫瘍特異的抗体により被覆されたリポソーム中で投与してもよい。リポソ
ームは腫瘍にターゲティングされ，選択的に取り込まれるであろう。
【０１２７】２．組成物／処方 本発明の医薬組成物は，それ自体知られる方法，例えば慣用の混合，溶解，顆
粒化，糖衣作成，研和，乳化，カプセル封入，捕捉，または凍結乾燥により製造
することができる。
【０１２８】 すなわち，本発明にしたがって使用するための医薬組成物は，活性物質を薬剤
として使用することができる製品に加工することを容易にする賦形剤および補助
剤を含む，１またはそれ以上の生理学的に許容しうる担体を用いて，慣用の方法
で処方することができる。適切な処方は，選択される投与経路に依存する。
【０１２９】 注射用には，本発明の薬剤を水性溶液，好ましくはハンクス溶液，リンゲル溶
液，または生理的食塩緩衝液等の生理学的に適合性の緩衝液中で処方することが
できる。経粘膜投与用には，浸透すべき障壁に適した浸透剤が処方に用いられる
。そのような浸透剤は当該技術分野において一般に知られている。
【０１３０】 経口投与のためには，化合物を当該技術分野においてよく知られる薬学的に許
容しうる担体と混合することにより化合物を容易に製剤することができる。その
ような担体は，本発明の化合物を，治療すべき患者による経口摂取のための錠剤
，丸薬，糖衣剤，カプセル，液体，ゲル，シロップ，スラリー，懸濁液等として
製剤することを可能とする。経口で使用するための医薬製剤は，１またはそれ以
上の固体賦形剤を１またはそれ以上の本発明の化合物と混合し，得られた混合物
を任意にすりつぶし，所望の場合には適当な助剤を加えた後に，顆粒の混合物を
加工して，錠剤または糖衣錠コアを得ることができる。適当な担体には，特に，
ラクトース，ショ糖，マンニトール，またはソルビトール等の糖類；トウモロコ
シデンプン，小麦デンプン，米デンプン，およびジャガイモデンプン等のセルロ
ース製品，ゼラチン，トラガカントゴム，メチルセルロース，ヒドロキシプロピ
ルメチルセルロース，カルボキシメチルセルロースナトリウム，および／または
ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）等の増量剤などの賦形剤が含まれる。所望の場
合には，架橋されたポリビニルピロリドン，寒天，またはアルギン酸またはその
塩，例えばアルギン酸ナトリウム等の崩壊剤を加えてもよい。
【０１３１】 糖衣剤のコアは，適当なコーティングとともに供給される。この目的のために
は，濃縮された糖溶液を用いることができる。これは，アラビアゴム，タルク，
ポリビニルピロリドン，カルボポールゲル，ポリエチレングリコール，および／
または二酸化チタン，ラッカー溶液，および適当な有機溶媒または溶媒混合物を
任意に含むことができる。識別のため，あるいは活性成分の用量の異なる組合せ
を特徴づけるため，染料または色素を錠剤または糖衣剤コーティングに添加して
もよい。
【０１３２】 経口で使用することができる医薬製剤は，ゼラチンから作成されるプッシュフ
ィットカプセル，ならびにゼラチンおよびグリセロール，ソルビトール等の可塑
剤から作成される密封軟カプセルを含む。プッシュフィットカプセルは，活性成
分を，ラクトース等の増量剤，デンプン等の結合剤，および／またはタルクおよ
びステアリン酸マグネシウム等の潤滑剤，さらに任意に安定剤との混合物中に含
むことができる。軟カプセルにおいては，活性化合物は脂肪油，流動パラフィン
，または液体ポリエチレングリコール等の適当な液体中に溶解または懸濁するこ
とができる。さらに安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての処方は，そ
のような投与に適当な用量で調製すべきである。
【０１３３】 口内投与のためには，組成物は，慣用的な方法で錠剤またはトローチ剤の形を
とることができる。
【０１３４】 吸入による投与用には，本発明に従って用いられる物質は，噴射剤，例えば，
ジクロロジフルオロメタン，トリクロロフルオロメタン，ジクロロテトラフルオ
ロエタン，二酸化炭素または他の適当な気体を用いて，加圧されたパックまたは
ネブライザーからエアロゾルスプレイの形状で便利に輸送される。加圧されたエ
アロゾルの場合，用量単位は計量された量を送達するべく備えられたバルブによ
り調節することができる。例えば吸入器または注入器において使用するためのゼ
ラチン製のカプセルおよびカートリッジは，化合物の粉末混合物と，ラクトース
またはデンプン等の適当な粉末基剤とを含むよう処方することができる。
【０１３５】 化合物は，例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方する
ことができる。注射用の処方は，単位用量にて，例えばアンプルにて，あるいは
添加された保存料と共に多用量容器中で提供することができる。組成物は油性ま
たは水性のベヒクル中で，懸濁液，溶液，または乳濁液等の形状をとることがで
き，懸濁剤，安定剤および／または分散剤等の処方物質を含んでいてもよい。
【０１３６】 非経口投与用の薬剤組成物は，水溶性の形態の活性化合物の水性溶液を含む。
さらに，活性化合物の懸濁液は，適当な油性の注入用懸濁液として調製すること
ができる。適切な親油性溶媒またはベヒクルには，ゴマ油等の脂肪油，オレイン
酸エチルまたはトリグリセリド等の合成脂肪酸エステル，またはリポソーム等を
含む。水性の注射用懸濁液は，カルボキシメチルセルロースナトリウム，ソルビ
トール，またはデキストラン等の，懸濁液の粘度を増加させる物質を含んでいて
もよい。任意に，懸濁液はまた，高度に濃縮された溶液の調製を可能にする，当
該化合物の溶解性を増加させる適当な安定剤または薬剤を含んでいてもよい。
【０１３７】 あるいは，活性成分は粉体の形態であって，使用前に適当なベヒクル，例えば
発熱物質を含まない滅菌水を用いて構成することができる。
【０１３８】 化合物はまた，例えばカカオバターまたは他のグリセリド等の慣用の坐剤基剤
を用いて，坐剤または停留浣腸等の直腸用組成物に処方することができる。
【０１３９】 上述した処方に加えて，化合物はまたデポ製剤として処方することができる。
そのような長時間作用性の処方は，埋込み（例えば皮下または筋肉内への）によ
るか，または筋肉内注射により投与することができる。すなわち，化合物は，適
当な高分子性または疎水性物質と共に（例えば薬理学的に許容される油剤中の乳
濁液として），イオン交換樹脂と共に，溶けにくい塩等の溶けにくい誘導体とし
て，処方することができる。
【０１４０】 本発明の疎水性化合物のための薬学的担体は，ベンジルアルコール，非極性界
面活性剤，水混和性有機ポリマーおよび水性相を含む共溶媒系である。共溶媒系
はＶＰＤ共溶媒系であってもよい。ＶＰＤは，３％（ｗ／ｖ）ベンジルアルコー
ル，８％（ｗ／ｖ）非極性界面活性剤ポリソルベート８０（商標），および６５
％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール３００を純粋エタノール中に作成した溶液
である。ＶＰＤ共溶媒系（ＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）は，ＶＰＤを５％デキストロースの
水溶液中に１：１で希釈したものである。この共溶媒系は疎水性化合物をよく溶
解し，それ自体，全身投与に際して低い毒性を示す。本来，共溶媒系の比率は，
その溶解性および毒性特性を破壊することなく相当変化させることができる。さ
らに，共溶媒成分の種類も変化させることができる。例えば，他の低毒性非極性
界面活性剤をポリソルベート８０（商標）の代わりに用いることができ，ポリエ
チレングリコールの分画サイズは様々でありうる。他の生体適合性ポリマー，例
えばポリビニルピロリドンをポリエチレングリコールの代わりに用いることがで
き，他の糖または多糖類をデキストロースの代わりに用いることができる。
【０１４１】 あるいは，疎水性の医薬化合物のための他の輸送系を用いてもよい。リポソー
ムおよび乳剤は，疎水的薬剤のための輸送用ベヒクルまたは担体の例としてよく
知られている。さらに，ある種の有機溶媒，例えばジメチルスルホキシドもまた
用いることができるが，しばしば毒性がより高くなる。さらに，化合物は，持続
放出系，例えば治療薬剤を含む固体疎水性ポリマーの準透過性マトリックスを用
いて輸送することができる。種々の持続放出材料が確立されており，当業者には
よく知られている。持続放出カプセルはその化学的性質に応じて，数週間から１
００日を越える期間，化合物を放出する。治療薬剤の化学的性質および生物学的
安定性に応じて，さらに別の蛋白質安定化戦略を用いてもよい。
【０１４２】 医薬組成物はまた，適切な固体またはゲル相の担体または賦形剤を含んでいて
もよい。そのような担体または賦形剤の例には，限定されないが，炭酸カルシウ
ム，リン酸カルシウム，種々の糖，デンプン，セルロース誘導体，ゼラチン，お
よびポリエチレングリコールなどのポリマーが含まれる。
【０１４３】 本発明のＰＫ調節化合物の多くは，薬学的に適合性のカウンターイオンとの塩
として提供することができる。薬学的に適合性の塩は，多くの酸，例えば，限定
されないが，塩酸，硫酸，酢酸，乳酸，酒石酸，マレイン酸，コハク酸等を用い
て形成することができる。塩は，対応する遊離塩基の形に比べて，水性または他
のプロトン性溶媒においてより溶解性が高い傾向にある。
【０１４４】３．有効投与量 本発明において用いるのに適した医薬組成物には，活性成分がその意図する目
的を達成するのに有効な量で含まれる組成物が含まれる。より詳細には，治療上
有効量とは，疾病の症状を予防，緩和，または改善するか，または治療中の患者
の生存を延長するのに有効な化合物の量を意味する。治療上有効量の決定は，特
に本明細書において提供された詳細な開示を考慮すれば，十分に当業者の能力の
範囲内である。
【０１４５】 本発明の方法において用いられる任意の化合物について，治療上有効な用量は
，最初は細胞培養アッセイから見積もることができる。例えば，動物モデルにお
いて，培養細胞において決定されたＩＣ50（すなわちＰＫ活性の最大阻害の半分
を達成する試験化合物の濃度）を含む循環濃度範囲を達成するような用量を処方
することができる。そのような情報は，ヒトにおける有用な用量のさらに正確な
決定のために用いることができる。
【０１４６】 本明細書に記載される化合物の毒性および治療上有効性は，培養細胞または実
験動物における標準的な薬学的方法，例えば，ＬＤ50（集団の５０％に致死的な
用量）およびＥＤ50（集団の５０％において治療上有効な用量）を決定するため
の方法により決定することができる。毒性と治療的効果との間の用量の比は治療
指数であり，これはＬＤ50とＥＤ50との間の比率として表すことができる。高い
治療指数を示す化合物が好ましい。これらの培養細胞アッセイおよび動物研究か
ら得られるデータは，ヒトにおいて用いるための投与量の範囲を定式化するため
に用いることができる。そのような化合物の投与量は，好ましくは，ＥＤ50を含
み毒性がほとんどまたは全くない循環濃度の範囲内にある。投与量は，用いる投
与形態および用いる投与経路により，この範囲内で様々でありうる。正確な製剤
，投与経路，および投与量は，個々の医師が，患者の状態を考慮して選択するこ
とができる（例えば，Ｆｉｎｇｌ ｅｔ ａｌ．１９７５，"Ｔｈｅ Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ"，Ｃ
ｈ．１，ｐ．１を参照）。
【０１４７】 投与量および間隔は，個々に，活性成分がキナーゼ調節効果を維持するのに十
分な血漿レベル，すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を与えるよう調節することが
できる。ＭＥＣは，各化合物について異なるが，インビトロのデータ，例えば，
本明細書に記載されるアッセイを用いて，キナーゼの５０−９０％の阻害を達成
するのに必要な濃度から見積もることができる。ＭＥＣを達成するのに必要な投
与量は，個々の特性および投与経路に依存するであろう。しかし，ＨＰＬＣアッ
セイまたはバイオアッセイを用いて血漿濃度を決定することができる。
【０１４８】 投与間隔もまた，ＭＥＣ値を用いて決定することができる。化合物は，１０−
９０％の時間，好ましくは３０−９０％の時間，最も好ましくは５０−９０％の
時間，ＭＥＣより高い血漿レベルを維持する投与計画を用いて投与すべきである
。
【０１４９】 局所投与または選択的取り込みの場合には，薬剤の有効な局所濃度は血漿濃度
とは関係ないであろう。
【０１５０】 投与される組成物の量は，もちろん，治療中の患者，患者の体重，苦痛の激し
さ，投与方法，および担当医師の判断に依存するであろう。
【０１５１】４．包装 組成物は，所望の場合には，活性成分を含む１またはそれ以上の単位用量形を
含んでいてもよいパックまたはディスペンサー装置中で提供することができる。
パックは，例えば，ブリスターパックなどの金属またはプラスチック箔を含むこ
とができる。パックまたはディスペンサー装置には，投与の指示が添付されてい
てもよい。パックまたはディスペンサー装置はまた，薬剤の製造，用途，または
販売を規制する政府機関によって規定された形式の，容器に付随した注意書が添
付されていてもよく，その注意書は当該組成物の形状について，あるいはヒトま
たは獣医学的投与についての当該機関による承認を反映するものである。かかる
注意書は，例えば米国食品医薬品局により処方箋調剤薬として承認されたラベル
によるものか，または承認された製品に差込まれたものでもよい。適合した薬学
的担体中で処方された，本発明の化合物を含む組成物もまた調製され，適当な容
器内に配置され，さらに指示された条件による処置のためにラベルを付すことが
できる。ラベル上に示される適切な状態としては，腫瘍の治療，新脈管形成の阻
害，線維症，糖尿病等の治療が挙げられる。
【０１５２】ＩＶ．本発明のインドリノン化合物の生物学的活性 本発明のインドリノン化合物のいくつかを，ほとんどの蛋白質チロシンキナー
ゼ活性を阻害するその活性について試験した。生物学的アッセイおよびこれらの
阻害実験の結果は，本明細書に記載される。インドリノン化合物による蛋白質キ
ナーゼ機能の調節を測定するために用いた方法は，この方法のハイスループット
の観点に関する，国際公開ＷＯ９８／０７６９５（１９９８年３月２６日公開，
Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，表題"Ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒ
ｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａ
ｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｓｅ
ａｓｅ，"に記載される方法と類似する。ＷＯ９８／０７６９５公開は，図面を
含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する。
【０１５３】Ｖ．本発明のインドリノン化合物の医薬組成物および投与 化合物の医薬処方を製造する方法，患者に投与すべき化合物の量を決定する方
法，および化合物を生物に投与するモードは，国際公開ＷＯ９８／０７６９５（
Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．，表題"Ｉｎｄｏｌｉｎｏｎｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒ
ｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｉｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａ
ｎｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｉｓｅ
ａｓｅ"），および国際公開ＷＯ９６／２２９７６（Ｂｕｚｚｅｔｔｉ ｅｔ
ａｌ．，表題"Ｈｙｄｒｏｓｏｌｕｂｌｅ３−Ａｒｙｌｉｄｅｎｅ−２−Ｏｘｙ
ｉｎｄｏｌｅ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｓ Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓ
ｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，"，１９９６年８月１日公開）に開示されており，
いずれも図面を含めその全体を本明細書の一部としてここに引用する。当業者は
，そのような記載が本発明に適用可能であり，容易に適合させることができるこ
とを理解するであろう。
【０１５４】実施例 以下の実施例は，非限定的なものであり，本発明の種々の観点および特徴の代
表例にすぎない。実施例は，本発明の化合物を合成する方法，および蛋白質キナ
ーゼの機能に及ぼす化合物の影響を測定する方法を記載する。
【０１５５】 この方法において用いられる細胞は，市販されている。細胞に含まれる核酸ベ
クターもまた市販されており，種々の蛋白質キナーゼの遺伝子の配列は配列デー
タバンクで容易にアクセス可能である。すなわち，当業者は，市販の細胞，市販
の核酸ベクター，および蛋白質キナーゼ遺伝子を当業者には容易に利用可能な手
法を用いて組み合わせることにより，短時間で容易に細胞株を再形成することが
できる。
【０１５６】合成法 以下の実施例は，本発明の化合物のいくつかを合成する方法を記載する。
【０１５７】実施例１：５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カ ルボアルデヒドの製造 ５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（２ｇ，
１０ｍｍｏｌ），２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（１．３３ｇ，１
１ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（９．８ｇ，３０ｍｍｏｌ））のジメチルホル
ムアミド（２０ｍＬ）中の混合物を室温で１６時間撹拌した。反応液を酢酸エチ
ル（１５０ｍＬ）で希釈し，水（５ｘ５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し，乾燥
し，濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して，１．４ｇの５
−ジメチルカルバモイルメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエ
ステルを茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．０６（ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．０１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）
，６．９４（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），４．７４（ｓ，
２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＯＮ（ＣＨ3）2，４．３１（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣ
Ｈ2ＣＨ3），３．０（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ3），２．８３（ｓ，３Ｈ，ＮＣＨ3），
１．３２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２
９０［Ｍ+］
【０１５８】 水素化リチウムアルミニウム（１．７ｇ，４５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラ
ン（８０ｍＬ）中の５−ジメチルカルバモイルメトキシ−１Ｈ−インドール−２
−カルボン酸エチルエステル（１．４ｇ，４．８ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を
室温で４時間撹拌し，０℃に冷却した。次にこれを水（１．７ｍＬ），１５％水
酸化ナトリウム（１．７ｍＬ）および水（１．７ｍＬ）で急冷した。沈殿物を濾
別し，濾液を濃縮して，０．６ｇ（５４％）の［５−（２−ジメチルアミノ−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．９５（ｄ，Ｊ＝
２．１Ｈｚ，Ｈ−４），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝２．１＆８．９Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−
６），６．６１（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，Ｈ−３），５．１８（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ，１Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），４．５４（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），
３．９８（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５９（ｔ，Ｊ＝
６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．２０（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．
ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２３４［Ｍ+］
【０１５９】 酸化マンガン（ＩＶ）（３．３ｇ，３８ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００
ｍＬ）中の５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イ
ル］−メタノール（０．６ｇ，２．５ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を室温で１６
時間撹拌した。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮して，０．４１ｇ（７１％）の５−
（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド
を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），９．７８（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ−７），７．２５（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，Ｈ−３），７．１８（ｄ，Ｊ＝２
．３Ｈｚ，Ｈ−４），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．３＆８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６
），４．０４（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．６３（ｔ，
Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．２２（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2 ）．ＭＳ ｍ／ｚ２３３．２［Ｍ+＋１］
【０１６０】実施例２：５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール− ２−カルボアルデヒドの製造 ピロリジン（１．７ｇ，２４ｍｍｏｌ），ブロモアセチルブロミド（４．６ｇ
，２４ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２．０２ｇ，２０ｍｍｏｌ）のジク
ロロメタン（４０ｍＬ）中の混合物を室温で４時間撹拌した。沈殿物を濾別し，
残渣を濃縮して，３．１ｇの２−ブロモ−１−ピロリジン−１−イル−エタノン
を淡茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ４．０３（ｓ，２Ｈ，ＢｒＣＨ2 ＣＯ），３．４５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ），３．２７（ｔ，Ｊ＝６．６
Ｈｚ，），１．７４−１．８９（ｍ，４Ｈ）
【０１６１】 ５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（２ｇ，
１０ｍｍｏｌ），２−ブロモ−１−ピロリジン−１−イル−エタノン（３ｇ，２
０ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（１９．５ｇ，６０ｍｍｏｌ）のジメチルホル
ムアミド（１６ｍＬ）中の混合物を室温で２４時間撹拌した。反応液を酢酸エチ
ル（１５０ｍＬ）で希釈し，水（５ｘ５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し，乾燥
し，濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して，０．８ｇ（２
５％）の５−（２−オキソ−２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イ
ンドール−２−カルボン酸エチルエステルを茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．０７（ｄ，Ｊ＝
２．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．０２（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３）
，６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆８．７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），４．６７（ｓ，
２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＯＮ，４．３１（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）
，３．４７（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），３．３１（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２
Ｈ），１．８８（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，２Ｈ），１．７６（ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ
，２Ｈ），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ
ｍ／ｚ３１６［Ｍ+］
【０１６２】 水素化リチウムアルミニウム（０．４ｇ，１０ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラ
ン（１２０ｍＬ）中の５−（２−オキソ−２−ピロリジン−１−イル−エトキシ
）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（０．６ｇ，１．９ｍｍ
ｏｌ）に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し，０℃に冷却した。次にこれを
水（０．４ｍＬ），１５％水酸化ナトリウム（０．４ｍＬ）および水（０．４ｍ
Ｌ）で急冷した。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮して，０．３１ｇ（６３％）の［
５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インド−２−イル］−メ
タノールを白色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．９４（ｄ，Ｊ＝
２．５Ｈｚ，Ｈ−４），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−
６），６．１５（ｄ，Ｊ＝０．７Ｈｚ，Ｈ−３），５．１２（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈ
ｚ，１Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），４．５５（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），
４．０１（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７６（ｔ，Ｊ＝
６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５３（ｍ，ＤＭＳＯ下，Ｈ−ピロリ
ジン），１．６７（ｍ，４Ｈ，Ｈ−ピロリジン） ＭＳｍ／ｚ２６１．１［Ｍ+＋１］
【０１６３】 酸化マンガン（ＩＶ）（１ｇ，１２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１００ｍＬ
）中の［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インド−２−イ
ル］−メタノール（０．３１ｇ，１．２ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を室温で４
時間撹拌した。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮して，０．１９ｇ（６１％）の５−
（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアル
デヒドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），９．７９（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ−７），７．２５（ｄ，Ｊ＝１．１Ｈｚ，Ｈ−３），７．１８（ｄ，Ｊ＝２
．４Ｈｚ，Ｈ−４），６．９８（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６
），４．０６（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７９（ｔ，
Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５２（ｍ，ＤＭＳＯ下，Ｈ−ピ
ロリジン），１．６７（ｍ，４Ｈ，Ｈ−ピロリジン）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２５
８［Ｍ+］
【０１６４】実施例３：５（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２ −カルボアルデヒドの製造 ５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（２ｇ，
１０ｍｍｏｌ），ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート（２．３５ｇ，１２ｍｍｏ
ｌ）および炭酸セシウム（１０．５ｇ，３０ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド
（１０ｍＬ）中の混合物を室温で１６時間撹拌した。反応液を酢酸エチル（１５
０ｍＬ）で希釈し，水（５ｘ５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮
した。残渣を酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して，２ｇ（６３％）の５−
ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エ
チルエステルを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．０２−７．０３
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−３＆４），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．３＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，
Ｈ−６），４．５９（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＯ，４．３１（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ
，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），１．４１（ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ3）3），１．３２（ｔ
，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３１９［Ｍ+］
【０１６５】 ５−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボ
ン酸エチルエステル（２ｇ，６ｍｍｏｌ）およびトリフルオロ酢酸（８ｍＬ）の
ジクロロメタン（８ｍＬ）中の混合物を室温で２時間撹拌した。反応液を濃縮し
て，１．６ｇ（９７％）の５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カ
ルボン酸エチルエステルを淡茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．０４（ｄ，Ｊ＝
２．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），６．９４（ｄｄ
，Ｊ＝２．２＆８．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），４．６２（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
Ｏ，４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），１．３２（ｔ，Ｊ
＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２６３［Ｍ+］
【０１６６】 ５−カルボキシメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル
（１．５ｇ，５．７ｍｍｏｌ）および１−１’−カルボニルジイミダゾール（１
．１１ｇ，６．８５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の混合物
を室温で３０分間撹拌した。次にこの混合物にモルホリン（１ｍＬ）を加え，一
夜撹拌を続けた。反応液を濃縮し，残渣をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解
し，１Ｎ塩酸，飽和炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮
して，１．６ｇ（８５％）の５−（２−モルホリン−４−イル−２−オキソ−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステルを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３５（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．１０（ｄ，Ｊ＝
２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．０２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），６．９５（ｄｄ
，Ｊ＝２．３＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），４．７７（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
Ｏ，４．３２（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），３．４６−３．５
８（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
Ｈ3）
【０１６７】 水素化リチウムアルミニウム（０．４６ｇ，１２ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフ
ラン（５０ｍＬ）中の５−（２−モルホリン−４−イル−２−オキソ−エトキシ
）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（０．８ｇ，２．４ｍｍ
ｏｌ）に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し，０℃に冷却した。次にこれを
水（４．６ｍＬ），１５％水酸化ナトリウム（４．６ｍＬ）および水（４．６ｍ
Ｌ）で急冷した。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮して，０．７ｇの［５−（２−モ
ルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノール
を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．１７（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．９５（ｍ，１Ｈ
，Ｈ−４），６．６６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６），６．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），
５．１１（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），４．５５（ｄ，Ｊ＝５．
４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），４．０３（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｎ），３．５６（ｍ，４Ｈ，２ＸＣＨ2），２．６７（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，
２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．４７（ｍ，ＤＭＳＯ下，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｅ
Ｉ ｍ／ｚ２７６［Ｍ+＋２］
【０１６８】 酸化マンガン（ＩＶ）（３．２ｇ，３６ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１５０
ｍＬ）中の［５−（２−モルホリン−４−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−
２−イル］−メタノール（０．７ｇ）に加えた。混合物を室温で１６時間撹拌し
た。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮した。残渣を酢酸エチルおよびヘキサンから再
結晶して，０．１８ｇの５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−
インドール−２−カルボアルデヒドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），９．７９（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ−７），７．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），７．１９（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，
１Ｈ，Ｈ−４），６．９９（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆９．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），
４．０８（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），３．５７（ｍ，４Ｈ
，２ｘＣＨ2），２．７０（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２
．４８（ｍ，ＤＭＳＯ下，２ｘＣＨ2）
【０１６９】実施例４：５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カ ルボアルデヒドの製造 ５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（１ｇ，
５ｍｍｏｌ），２−クロロ−Ｎ，Ｎ−ジエチルアセトアミド（１ｍＬ，７．５ｍ
ｍｏｌ）および炭酸セシウム（５ｇ，１５ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（
１０ｍＬ）中の混合物を室温で６時間撹拌した。反応液を酢酸エチル（１６０ｍ
Ｌ）で希釈し，水（５ｘ５０ｍＬ）およびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した
。残渣を酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して，０．５２ｇの５−ジエチル
カルバモイルメトキシ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステルを灰
白色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．０８（ｄ，Ｊ＝
２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．０２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），６．９４（ｄｄ
，Ｊ＝２．３＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
ＯＮ（ＣＨ2ＣＨ3）2，４．３１（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）
，３．２５−３．３８（ｍ，４Ｈ，Ｎ（ＣＨ2ＣＨ3）２，１．３２（ｔ，Ｊ＝７
．２Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）１．１５（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＮＣＨ2 ＣＨ3，１．０３（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，３Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ
ｍ／ｚ３１８［Ｍ+］
【０１７０】 水素化リチウムアルミニウム（３．６ｇ，４５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラ
ン（８０ｍＬ）中の５−ジメチルカルバモイルメトキシ−１Ｈ−インドール−２
−カルボン酸エチルエステル（０．５２ｇ，１．６ｍｍｏｌ）に加えた。混合物
を室温で１６時間撹拌し，０℃に冷却した。次にこれを水（３．６ｍＬ），１５
％水酸化ナトリウム（３．６ｍＬ）および水（３．６ｍＬ）で急冷した。沈殿物
を濾別し，濾液を濃縮して，０．４ｇ（４３％）の［５−（２−ジエチルアミノ
−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．１６（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），６．９４（ｄ，Ｊ＝
２．３Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），６．６４（ｄｄ，Ｊ＝２．３＆８．５Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ−６），６．１５（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），５．１７（ｔ，
Ｊ＝５．６Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），４．５４（ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，
ＣＨ2ＯＨ），３．９６（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．
７５（ｔ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５４（ｑ，Ｊ＝７．
１Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），０．９６（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，６Ｈ，２
ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ ｍ／ｚ２６３．２［Ｍ+＋１］
【０１７１】 酸化マンガン（ＩＶ）（１．９５ｇ，２３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０
０ｍＬ）中の５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イル］−メタノール（０．４ｇ，１．５ｍｍｏｌ）に加えた。混合物を室温で２
４時間撹拌した。沈殿物を濾別し，濾液を濃縮して，０．３１ｇ（７９％）の５
−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒ
ドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，９．７８（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．３４（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−
７），７．２５（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−３），７．１８（ｄ，Ｊ＝２
．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），６．９７（ｄｄ，Ｊ＝２．４＆９．０Ｈｚ，１Ｈ，
Ｈ−６），４．０１（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７８
（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５５（ｑ，Ｊ＝７．０Ｈ
ｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮ
ＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２６０［Ｍ+］
【０１７２】実施例５：５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カ ルボアルデヒドの製造 ５−ブロモ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（５．３６ｇ
，２０ｍｍｏｌ）のトリエチルアミン（３０ｍＬ）およびピリジン（６ｍＬ）中
の混合物を窒素を１０分間通すことにより脱気し，次に，ジエチルプロパルギル
アミンを加え，脱気をさらに５分間続けた。ジクロロビス（トリフェニルホスフ
ィン）パラジウム（ＩＩ）（７０２ｍｇ，１ｍｍｏｌ）およびヨウ化銅（Ｉ）（
９５ｍｇ，０．５ｍｍｏｌ）を混合物に加え，９０℃で窒素下で１７時間加熱し
た。反応液を濃縮し，残渣を１ＮＨＣｌ（１５０ｍＬ）と酢酸エチル（３００ｍ
Ｌ）との間に分配した。層を分離し，水性層をさらに３００ｍＬの酢酸エチルで
抽出した。合わせた有機層をブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮して，３．４ｇ（
５７％）の５−（３−ジエチルアミノ−プロピ−１−イニル）−１Ｈ−インドー
ル−２−カルボン酸エチルエステル（塩酸塩）を淡茶色結晶固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．２３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），７．
４９（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．３６（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆８
．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ６），７．１７（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），４
．３４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），４．２９（ｓ，ＣＨ2）
，３．１６−３．２４（ｍ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），１．２８−１．３５（
９Ｈ，３ｘＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２９８［Ｍ+］
【０１７３】 ５−（３−ジエチルアミノ−プロピ−１−イニル）−１Ｈ−インドール−２−
カルボン酸エチルエステル塩酸塩（２ｇ，６．７ｍｍｏｌ）をパラジウム担持炭
素（１０％）（７１３ｍｇ，０．６７ｍｍｏｌ）で窒素下で５時間水素化した。
水酸化パラジウム担持炭素（２０％）（２ｘ３５０ｍｇ）および酢酸（４ｍＬ）
を混合物に加え，さらに１２時間撹拌を続けた。反応液をセライトを通して濾過
し，濾液を濃縮した。残渣を１ＮＨＣｌ（１５０ｍＬ）と酢酸エチル（３００ｍ
Ｌ）との間に分配した。水性層を塩基性にしてｐＨ８とし，酢酸エチルで抽出し
，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮して，１．１２６ｇの橙色固体を得た。上述
の固体のＮＭＲスペクトルは所望の飽和化合物およびアルケン物質を示した。し
たがって，固体をエタノール（１０ｍＬ）および酢酸（７ｍＬ）に溶解し，これ
を水酸化パラジウム（１７５ｍｇ）で４２時間水素化した。上述したように後処
理した後，１．２ｇ（５９％）の５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ
−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（酢酸塩）を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．７０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．４２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），７．３５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ
．Ｈ−７），７．１１（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．
０４（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），４．３２（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，
２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），２．６２（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．
３９−２．５０（ｍ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3＆ＣＨ2），１．６８−１．７２
（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．３２（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）
，０．９２（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ
／ｚ３０２［Ｍ+］
【０１７４】 テトラヒドロフラン（４８ｍＬ）中の５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）
−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステル（１．２ｇ，３．９７ｍｍ
ｏｌ）を，テトラヒドロフラン（３０ｍＬ）中で撹拌した水素化リチウムアルミ
ニウム（６０２ｍｇ，１５．８７ｍｍｏｌ）に窒素下で滴下した。２時間撹拌し
た後，反応を水（０．６ｍＬ），１５％水酸化ナトリウム（０．６ｍＬ），次に
水（１．８ｍＬ）で急冷した。混合物を一夜撹拌した。沈殿物を濾別し，濾液を
濃縮して，６８０ｍｇ（６６％）の［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−
１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．８３（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．２２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ
，Ｈ−７），６．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．４Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），６．
１６（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），５．１８（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，
１Ｈ，ＯＨ），４．５５（ｄ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），２．５８
（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３３−２．４５（ｍ，６Ｈ，３ｘ
ＣＨ2），１．６４−１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．０
Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２６０［Ｍ+］
【０１７５】 二酸化マンガン（３．７５ｇ，４３．１ｍｍｏｌ）を，ジクロロメタン（６８
ｍＬ）に溶解した［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール
−２−イル］−メタノール（６６０ｍｇ，２．５３ｍｍｏｌ）に窒素下で室温で
少しずつ加えた。沈殿物をセライトを通して濾過し，熱ジクロロメタンで洗浄し
た。濾液を濃縮して，５６３ｍｇ（８３％）の５−（３−ジエチルアミノ−プロ
ピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドをワックス状茶色固体として
得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．８０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），９．８０（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．５０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−３），７．
３５（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），７．２８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−４），
７．１７（ｄｄ，Ｊ＝１．１＆８．５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），２．６３（ｔ，Ｊ
＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３４−２．４５（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），
１．６７１．７１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ
，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ２５８［Ｍ+］
【０１７６】実施例６：５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール− ２−カルボアルデヒドの製造 ５−ブロモインドール−２−カルボン酸エチルエステル（２．６８ｇ，１０ｍ
ｍｏｌ），ｔｅｒｔ−ブチルアクリレート（４．４ｍＬ，３０ｍｍｏｌ）および
ジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ＩＩ）（０．７ｇ，１ｍ
ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１７ｍＬ）の酢酸（１７ｍＬ）中の混合物を
１２０℃で密封容器中で６時間加熱した。冷却した反応混合物を水およびジクロ
ロメタンに注加した。二相混合物をセライトパッドを通して濾過し，水層をジク
ロロメタン（２ｘ）で抽出した。合わせた有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液
，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（１
０％酢酸エチル／ヘキサン）により精製して，９００ｍｇ（２８％）の５−（２
−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ビニル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン
酸エチルエステルを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝１．３５＆９．１５Ｈｚ
，１Ｈ），７．６２（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈｚ，Ｈ−ビニル），７．４４（ｄ，Ｊ
＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），６．４１（ｄ，Ｊ＝１６．２Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），４．３３（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3 ），１．４７（ｓ，９Ｈ，３ｘＣＨ3），１．３３（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ
，ＯＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ３１５［Ｍ+］
【０１７７】 ５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−ビニル）−１Ｈ−インドール−２
−カルボン酸エチルエステル（１．６ｇ，５ｍｍｏｌ）の酢酸エチル（４０ｍＬ
）およびメタノール（８０ｍＬ）中の溶液を，５％パラジウム担持炭素（０．２
ｇ）で室温で一夜水素化した。触媒を濾別し，濾液を濃縮して，１．６ｇ（９９
％）の５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−１Ｈ−インドール
−２−カルボン酸エチルエステルを白色固体として得た。固体はさらに精製する
ことなく次の工程で用いた。
【０１７８】 ５−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−エチル）−１Ｈ−インドール−２
−カルボン酸エチルエステル（１．６ｇ，５ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１２
ｍＬ）中の溶液に，８ｍＬの４０％トリフルオロ酢酸を加えた。混合物を室温で
１時間撹拌した。反応液を濃縮し，トルエンに溶解し，濃縮し，ジクロロメタン
に溶解し，濃縮して，１．３ｇ（９９％）の５−（２−カルボキシ−エチル）−
１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチルエステルを得た。
【０１７９】 ５−（２−カルボキシ−エチル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチル
エステル（１．３ｇ，５ｍｍｏｌ）の１０ｍＬのジメチルホルムアミド中の溶液
に，１，１’−カルボニルジイミダゾール（９７３ｍｇ，６ｍｍｏｌ）を加えた
。混合物を窒素下で室温で３０分間撹拌した。反応混合物にピロリジン（１．３
ｍＬ，１５ｍｍｏｌ）を滴下した。室温で一夜撹拌した後，反応液をジクロロメ
タン（３００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ塩酸，飽和炭酸水素ナトリウム溶液，ブライ
ンで洗浄し，乾燥し，濃縮して，１．５ｇ（９５％）の５−（３−オキソ−３−
ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸エチル
エステルを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．６９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．４５Ｈｚ，１Ｈ），７
．１４（ｄｄ，Ｊ＝１．８７＆８．４５Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｍ，１Ｈ），
４．３２（ｑ，Ｊ＝７．１８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3），３．３１（ｔ，Ｊ＝
６．５５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２６（ｔ，Ｊ＝６．９３Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2 ），２．８７（ｔ，Ｊ＝７．６９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｔ，Ｊ＝７
．６１Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６９−１．８０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１
．３２（ｔ，Ｊ＝７．１８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）
【０１８０】 ５−（３−オキソ−３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドー
ル−２−カルボン酸エチルエステル（１．５ｇ，４．８ｍｍｏｌ）の１００ｍＬ
のテトラヒドロフラン中の溶液に，水素化リチウムアルミニウム粉末（７２８ｍ
ｇ，１９．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を窒素下で室温で２時間撹拌した。反
応混合物に水（０．７５ｍＬ），１５％水酸化ナトリウム（０．７５ｍＬ）およ
び水（０．７５ｍＬ）を加えた。次にこれをセライトパッドを通して濾過し，濾
液を濃縮した。残渣を酢酸エチルで洗浄して，９６０ｍｇ（７８％）の［５−（
３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタ
ノールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７８（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），７．２２（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝８．０５Ｈｚ，１Ｈ），６．
８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２７＆８．０５Ｈｚ，１Ｈ），６．１６（ｄ，Ｊ＝１．２
７Ｈｚ，１Ｈ），５．１１（ｔ，Ｊ＝５．５３Ｈｚ，１Ｈ，ＯＨ），４．５６（
ｄ，Ｊ＝５．１７Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＯＨ），２．６１（ｔ，Ｊ＝７．７３Ｈｚ
，２Ｈ，ＣＨ2），２．３４−２．３８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），１．７３（ｍ
，２Ｈ，ＣＨ2），１．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）
【０１８１】 二酸化マンガン（ＩＶ）（４．７ｇ，５４ｍｍｏｌ）を，［５−（３−ピロリ
ジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イル］−メタノール（９
４０ｍｇ，３．６ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）およびトルエン（
１５０ｍＬ）中の混合物に加えた。混合物を室温で一夜撹拌した。反応液をセラ
イトパッドを通して濾過し，濾液を濃縮して，６７０ｍｇ（７２％）の５−（３
−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒ
ドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．８５（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），９．７９（ｓ，１Ｈ，ＣＨＯ），７．５０（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｄ，
Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．２９（ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（
ｄ，Ｊ＝１．６＆８．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６５（ｔ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，２Ｈ，
ＣＨ2），２．３３−２．３８（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），１．７４（ｍ，２Ｈ，
ＣＨ2），１．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ ２５６［Ｍ+］
【０１８２】実施例７：オキシインドールとアルデヒドとの一般的縮合 １等量のオキシインドール，１等量のアルデヒドおよび１−３等量のピペリジ
ン（またはピロリジン）のエタノール（０．４Ｍ）中の混合物を８０−１００℃
で反応が完了するまで加熱した。混合物を室温に冷却し，固体を真空濾過により
回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，生成物を得た。反応混合物から固体が
得られなかった場合には，混合物を濃縮し，カラムクロマトグラフィーにより精
製した。
【０１８３】実施例８：化合物ＩＮ−００１ ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン オキシインドール（２６ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ），５−（３−ジエチルアミ
ノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５０ｍｇ，０．１
９ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混合
物を密封管中で９５℃で２０時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エ
タノールで洗浄し，乾燥して，１３ｍｇ（１８％）の表題化合物を橙色結晶固体
として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．４９（ｍ，２Ｈ
），７．２０（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆８．５Ｈｚ，１Ｈ）
，７．０−７．０４（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ），２
．６３（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）；２．３４−２．４４（ｍ，６Ｈ
，３ｘＣＨ2），１．６７−１．７２（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９１（ｔ，Ｊ＝
７．０Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３７３［Ｍ+］
【０１８４】実施例９：化合物ＩＮ−００２ ５−ブロモ−３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール
−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ），５−（
３−ジエチルアミノプロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５
０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１
ｍＬ）中の混合物を密封管中で９℃で２０時間加熱した。沈殿物を真空濾過によ
り回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，５２ｍｇ（５９％）の表題化合物を
赤橙色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．９７（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４７−７．５１（ｍ，２Ｈ
），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ）
，７．０５（ｓ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），２．５３−
２．６８（ｍ，８Ｈ，４ｘＣＨ2），１．７５−１．７９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），
０．９７（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／
ｚ４５１および４５３［Ｍ+−１およびＭ+＋ｌ］
【０１８５】実施例１０：化合物ＩＮ−００３ ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）５−（
３−ジエチルアミノプロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５
０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１
ｍＬ）中の混合物を密封管中で９５℃で２０時間加熱した。沈殿物を真空濾過に
より回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，４９ｍｇ（５６％）の表題化合物
を橙色結晶固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．７９（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ
，２Ｈ），７．４４７．４９（ｍ，４Ｈ），７．３２−７．３８（ｍ，２Ｈ），
７．１３−７．１５（ｍ，２Ｈ），７．０６（ｓ，１Ｈ），２．６４（ｔ，Ｊ＝
７．４Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３６−２．４６（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2），１
．６７−１．７５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），０．９２（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ
，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４４９［Ｍ+］
【０１８６】実施例１１：化合物ＩＮ−００４ ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−フェニル−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ），５−
（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド
（５０ｍｇ，０．１９ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール
（１ｍＬ）中の混合物を密封管中で９５℃で２０時間加熱した。沈殿物を真空濾
過により回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，１０ｍｇ（１１％）の表題化
合物を橙色結晶固体として得た。 ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４４９［Ｍ+］
【０１８７】実施例１２：化合物ＩＮ−００５ ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−フェニル−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（
２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（
４６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１
ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し
，エタノールで洗浄し，乾燥して，５８ｍｇ（６８％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０８（ｓ，２Ｈ），７．７
０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．４４−７．５３（ｍ，４Ｈ），７．３３
（ｍ，１Ｈ），７．１６（ｓ，１Ｈ），６．９２−７．０（ｍ，３Ｈ），４．０
６（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．６５（ｔ，Ｊ＝５．８
Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．２３（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．ＭＳ−
ＥＩ ｍ／ｚ４２３［Ｍ+］
【０１８８】実施例１３：化合物ＩＮ−００６ ５−フェニル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イ
ンドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−フェニル−２−オキシインドール（２３ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ），５−
（２−ピロリジン−１−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデ
ヒド（２９ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノ
ール（１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過によ
り回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，３０ｍｇ（６１％）の表題化合物を
橙色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０８（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ
，２Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），７．４４−７．５３（ｍ，
４Ｈ），７．３１−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，１
Ｈ），６．９１−７．０３（ｍ，３Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ
，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ）
，２．４９（ｍ，ＤＭＳＯ下，Ｈ−ピロリジン），１．６８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−ピ
ロリジン）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４５１［Ｍ+＋２］
【０１８９】実施例１４：化合物ＩＮ−００７ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ２−オキシインドール（２９ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ），５−（２−モルホリ
ン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（６０ｍ
ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ
）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エ
タノールで洗浄し，乾燥して，８１ｍｇ（９５％）の表題化合物を黄色固体とし
て得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１０．９７（ｓｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７
．７１（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｍ，１Ｈ），７．２１（ｔ，
Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０３（ｍ，２Ｈ），６．
８９−６．９５（ｍ，２Ｈ），４．１０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2
ＣＨ2Ｎ），３．５８（ｔ，Ｊ＝４．５Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．７１（ｔ
，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．４９（ｍ，ＤＭＳＯ下，２ｘ
ＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３８９［Ｍ+］
【０１９０】実施例１５：化合物ＩＮ−００８ ５−ブロモ−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（４６ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ），５−（
２−モルホリン−４−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒ
ド（６０ｍｇ，０．２２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノー
ル（１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により
回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，６５ｍｇ（６４％）の表題化合物を得
た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．０２（ｓｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７
．９６（ｍ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３５（ｄｄ
，Ｊ＝１．４＆８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｍ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１
Ｈ），６．９３−６．９６（ｍ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ
），４．０９（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），３．５８（ｔ，
Ｊ＝４．３Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．７１（ｔ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，２Ｈ，
ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．４９（ｍ，ＤＭＳＯ下，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ
／ｚ４６８［Ｍ+］
【０１９１】実施例１６：化合物ＩＮ−００９ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（４４ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ），５−
（２−モルホリン−４−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデ
ヒド（５８ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノ
ール（１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過によ
り回収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，７０ｍｇ（７１％）の表題化合物を
橙色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ
，２Ｈ），７．４４７．５１（ｍ，３Ｈ），７．３５（ｍ，２Ｈ），７．１２−
７．１５（ｍ，２Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．１＆
８．１Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ）
，３．５８（ｔ，Ｊ＝４．６Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．７１（ｔ，Ｊ＝５
．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．４９（ｍ，ＤＭＳＯ下，２ｘＣＨ2）
．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４６５［Ｍ+］
【０１９２】実施例１７：化合物ＩＮ−０１０ ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン オキシインドール（２８ｍｇ，０．２１６ｍｍｏｌ），５−（２−ジメチルア
ミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５０ｍｇ，０．
２１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混
合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノール
で洗浄し，乾燥して，５９ｍｇ（７９％）の表題化合物を橙色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．７１（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ
，１Ｈ），７．２０（ｄｔ，Ｊ＝０．９＆７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，
Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０−７．０５（ｍ，２Ｈ），６．８８−６．９３
（ｍ，２Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．
６３（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．２２（ｓ，６Ｈ，Ｎ
（ＣＨ3）2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３４７［Ｍ+］
【０１９３】実施例１８：化合物ＩＮ−０１１ ５−ブロモ−３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール
−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（４６ｍｇ，０．２１５ｍｍｏｌ），５−
（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド
（５０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール
（１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回
収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，７２ｍｇ（７８％）の表題化合物を赤色
固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．９７（ｄ，Ｊ＝１．２Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ
，１Ｈ），７．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｄ，
Ｊ＝２．１Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．３
＆８．８Ｈｚ，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０４（ｔ
，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．６３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，
２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．２２（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．ＭＳ−ＥＩ
ｍ／ｚ４２６［Ｍ+］
【０１９４】実施例１９：化合物ＩＮ−０１２ ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（４５ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ），５−
（２−ジメチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（
５０ｍｇ，０．２１ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（
１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収
し，エタノールで洗浄し，乾燥して，６８ｍｇ（７６％）の表題化合物を固体と
して得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニ
ル），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ
，２Ｈ），７．４４−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，２Ｈ）
，７．１２−７．１５（ｍ，２Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，
Ｊ＝２．１＆８．７Ｈｚ，１Ｈ），４．０５（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣ
Ｈ2ＣＨ2Ｎ），２．６３（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．
２２（ｓ，６Ｈ，Ｎ（ＣＨ3）2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４２３［Ｍ+］
【０１９５】実施例２０：化合物ＩＮ−０１３ ３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン オキシインドール（２６．６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（２−ピロリジン
−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５２ｍｇ
，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中
の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノ
ールで洗浄し，乾燥して，６１ｍｇ（８１％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０１（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７
１（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７
．２０（ｄｔ，Ｊ＝１．２＆７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝２．４Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．０−７．０５（ｍ，２Ｈ），６．８８−６．９３（ｍ，２Ｈ）
，４．０６（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７９（ｔ，Ｊ
＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５２（ｍ，ＤＭＳＯ，Ｈ−ピロリ
ジン），１．６８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−ピロリジン）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３７３［
Ｍ+］
【０１９６】実施例２１：化合物ＩＮ−０１４ ５−ブロモ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（４２ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（２
−ピロリジン−１−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド
（５２ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（
１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収
し，エタノールで洗浄し，乾燥して，７２ｍｇ（８０％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０５（ｓ，１Ｈ），７．９
７（ｄ，Ｊ＝１．９Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），７
．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２．１Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．１＆９．０Ｈｚ
，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），４．０６（ｔ，Ｊ＝６．０
Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2Ｎ），２．５０（ｍ，ＤＭＳＯ下，Ｈ−ピロリジン），１．６７（ｍ，４
Ｈ，Ｈ−ピロリジン）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ４５１／４５３［Ｍ+］
【０１９７】実施例２２：化合物ＩＮ−０１５ ６−フェニル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イ
ンドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（
２−ピロリジン−１−イルエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒ
ド（５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール
（１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回
収し，エタノールで洗浄し，乾燥して，６５ｍｇ（７２％）の表題化合物を赤色
固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．１２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９４（ｓ，１Ｈ），７．８
０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，２Ｈ），７
．４４−７．５１（ｍ，３Ｈ），７．３３−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．１２−
７．１４（ｍ，２Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝１．９＆
８．６Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ）
，２．８０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５０（ｍ，Ｄ
ＭＳＯ下，Ｈ−ピロリジン），１．６８（ｍ，４Ｈ，Ｈ−ピロリジン）．ＭＳ−
ＥＩ ｍ／ｚ４４９［Ｍ+］
【０１９８】実施例２３：化合物ＩＮ−０１６ ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン オキシインドール（２６ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（２−ジエチルアミノ
−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５０ｍｇ，０．２ｍ
ｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混合物を
１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エタノールで洗浄
し，乾燥して，５０ｍｇ（６７％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１０．９８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．８９（ｓ，１Ｈ），７．７
１（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），７
．２１（ｍ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．０３（ｍ，
２Ｈ），６．８９−６．９２（ｍ，２Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２
Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７９（ｔ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ
），２．５６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），０．９８（ｔ
，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３７５［Ｍ+ ］
【０１９９】実施例２４：化合物ＩＮ−０１７ ５−ブロモ−３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール
−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（４１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（２
−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５０
ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ
）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エ
タノールで洗浄し，乾燥して，６０ｍｇ（６６％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０４（ｓ，１Ｈ），７．９
６（ｄ，Ｊ＝１．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），７
．３５（ｄｄ，Ｊ＝１．７＆８．２Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２．２＆８．９Ｈｚ
，１Ｈ），６．８５（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），４．０２（ｔ，Ｊ＝６．１
Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．７９（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2 ＣＨ2Ｎ），２．５５（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），０．
９８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）
【０２００】実施例２５：化合物ＩＮ−０１８ ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ６−フェニル−２−オキシインドール（４０．５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５
−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド
（５０ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（
１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収
し，エタノールで洗浄し，乾燥して，６５ｍｇ（７２％）の表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９２（ｓ，１Ｈ），７．８
０（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．６６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７
．４５−７．４９（ｍ，３Ｈ），７．３３−７．３６（ｍ，２Ｈ），７．１３（
ｍ，２Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，１Ｈ），４．０３（ｔ，
Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２
Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５６（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2Ｃ
Ｈ3），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−Ｅ
Ｉ ｍ／ｚ４５１［Ｍ+］
【０２０１】実施例２６：化合物ＩＮ−０１９ ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−フェニル−２−オキシインドール（３９ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ），５−
（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（
４８ｍｇ，０．１８ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（
１ｍＬ）中の混合物を１００℃で２時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収
し，エタノールで洗浄し，乾燥して，４４ｍｇ（５４％）の表題化合物を赤色固
体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１１．０５（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ
，２Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４４−７．５３（ｍ，
４Ｈ），７．３３−７．３５（ｍ，１Ｈ），７．１５（ｓ，１Ｈ），７．０３（
ｓ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝２
．２＆９．０Ｈｚ，１Ｈ），４．０３（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2Ｃ
Ｈ2Ｎ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ2Ｎ），２．５６
（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3），０．９８（ｔ，Ｊ＝７．２
Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＮＣＨ2ＣＨ3）
【０２０２】実施例２７：化合物ＩＮ−０２０ ３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン オキシインドール（２７ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−（３−ピロリジン−１
−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（５１ｍｇ，０
．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混
合物を密封管中で８０℃で３時間加熱した。沈殿物を真空濾過により回収し，エ
タノール／酢酸エチルで洗浄し，乾燥して，５５ｍｇ（７４％）の表題化合物を
得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８９（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１１．０３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９０（ｓ，１Ｈ），７．７１（ｄ，
Ｊ＝７．４５Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝８．４１Ｈｚ，１Ｈ），７．４
４（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｔ，１Ｈ），７．１３（ｄ，１Ｈ），７．０−７．
０４（ｍ，２Ｈ），６．８９（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），２．６６（ｔ，Ｊ
＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．３５−２．４０（ｍ．６Ｈ，３ｘＣＨ2），
１．７５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），１．６５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ
３７１［Ｍ+］
【０２０３】実施例２８：化合物ＩＮ−０２１ ２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
ボン酸 ５−カルボキシ−２−オキシインドール（３５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−
（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアル
デヒド（５１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．２ｍＬ）のエタノ
ール（１ｍＬ）中の混合物を密封管中で８０℃で６時間加熱した。反応混合物を
濃縮し，残渣をメタノールに溶解し，１Ｎ塩酸で固体が形成されるまで酸性にし
た。沈殿物を濾過し，１Ｎ塩酸，水，エタノールで洗浄し，乾燥して，表題化合
物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７５（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１１．３７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．６７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ）
，８．３２（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２
６＆８．２３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．５５（ｍ，２Ｈ），７．１５−７．
１９（ｍ，２Ｈ），７．０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ
，ＣＨ2），３．０９（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２
．７３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），１．８４−２．０７（ｍ，６Ｈ
，３ｘＣＨ2）．ＭＳ４１６．４［Ｍ+＋１］
【０２０４】実施例２９：化合物ＩＮ−０２１ ２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
ボン酸 ５−カルボキシ−２−オキシインドール（３５ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ），５−
（３−ジエチルアミノプロピル）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（
５１ｍｇ，０．２ｍｍｏｌ）およびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１
ｍＬ）中の混合物を８０℃で６時間加熱した。反応液を１ＮＨＣｌで酸性にし，
沈殿物を真空濾過により回収し，１ＮＨＣｌ，水およびエタノールで洗浄し，乾
燥して，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．６７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＣＯＯＨ），８
．３２（ｓ，１Ｈ），８．１４（ｓ，１Ｈ），７．８５（ｄｄ，Ｊ＝１．２６＆
８．２３Ｈｚ，１Ｈ），７．５１−７．５５（ｍ，２Ｈ），７．１５−７．１９
（ｍ，２Ｈ），７．０（ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，１Ｈ），３．５０（ｍ，２Ｈ），
３．０９（ｍ，２Ｈ），２．９４（ｍ，２Ｈ），２．７３（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ
，２Ｈ），１．８４−２．０７（ｍ，６Ｈ，３ｘＣＨ2）．ＭＳ ｍ／ｚ４１６
［Ｍ+＋１］
【０２０５】実施例３０：化合物ＩＮ−０２２ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
ボン酸 ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸を５−（
２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデ
ヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．４２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３１（ｓ，１Ｈ），８．１２（ｓ，
１Ｈ），７．８４（ｄｄ，１Ｈ），７．５３（ｄ，１Ｈ），７．２（３，１Ｈ）
，７．１４（ｍ，１Ｈ），７．０（ｍ，２Ｈ），４．２６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）
，２．９４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，ＤＭＳＯ下），１．６７（ｍ
，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４１６．５［Ｍ+−１］
【０２０６】実施例３１：化合物ＩＮ−０２３ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カル
ボン酸 ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸を５−（
２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデ
ヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．１１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７
．７８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄｄ，Ｊ＝１．５＆８Ｈｚ，１Ｈ
），７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，１Ｈ），７．１５（ｄ
，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．１０（ｓ，１Ｈ），４．１１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），２．８９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨＯ），２．６１（ｍ，４
Ｈ，２ｘＣＨ2），１．７１（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ
ｍ／ｚ４１６．５［Ｍ+−１］
【０２０７】実施例３２：化合物ＩＮ−０２４ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１３．０３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１０．９８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．７６（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７
．４８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（ｍ，３Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ
＝２．５＆９Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．７７（ｄ
，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），４．８３（ｔ，Ｊ＝５．４Ｈｚ，２Ｈ，ＯＨ），４．０
７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．７４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）３．１２（
ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）２．５２（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ
４１６．６［Ｍ+−１］
【０２０８】実施例３３：化合物ＩＮ−０２５ ６−ピリジン−３−イル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）
−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２
−オン ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（
２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデ
ヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．１３（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．８８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８．５
６（ｄｄ，１Ｈ），８．０６（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル）
，７．８３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｍ，２Ｈ），７．４０（ｄｄ
，１Ｈ），７．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１３（ｄ，１Ｈ），７．０６（ｂｒ
ｓ，１Ｈ），６．９３（ｄｄ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2 ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣ
Ｈ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４４
９．５［Ｍ+−１］
【０２０９】実施例３４：化合物ＩＮ−０２６ ６−（４−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８６（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７
．７３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｍ，２Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝
９Ｈｚ，１Ｈ），７．２８（ｄｄ，Ｊ＝１．．５＆８Ｈｚ，１Ｈ），７．１２（
ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），７．０２（ｍ，
３Ｈ），６．９２（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ
，２Ｈ，ＣＨ2），３．８０（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ
，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２
ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４７８．５［Ｍ+−１］
【０２１０】実施例３５：化合物ＩＮ−０２７ ６−（３−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．０５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７
８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．３３−
７．３９（ｍ，２Ｈ），７．２１（ｂｒｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｍ
，１Ｈ），７．１３（ｂｒｓ，２Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），６．９１−６．
９５（ｍ，２Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．８２（ｓ
，３Ｈ，ＣＨ3），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５１（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ
ｍ／ｚ４７８．７［Ｍ+−１］
【０２１１】実施例３６：化合物ＩＮ−０２８ ６−（２−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（２−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１０．９７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７
３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．３０−
７．３４（ｍ，２Ｈ），７．１０−７．１４（ｍ，３Ｈ），７．０５（ｍ，３Ｈ
），６．９３（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），３．７８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），２．５１（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣ
Ｈ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４７８．７［Ｍ+−１］
【０２１２】実施例３７：化合物ＩＮ−０２９ ６−（４−フルオロ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（４−フルオロ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボ
アルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．０８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．７
８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．６９（ｍ，２Ｈ），７．４９（ｄ，Ｊ＝９Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．２６７．３３（ｍ，３Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ
），７．１０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），６．９３
（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０７（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）
，２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2 ），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４６６
．６［Ｍ+−１］
【０２１３】実施例３８：化合物ＩＮ−０３０ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
ボン酸 ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カルボン酸を５−（
２モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデ
ヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２１４】実施例３９：化合物ＩＮ−０３１ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カル
ボン酸 ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カルボン酸を５−（
２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアル
デヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２１５】実施例４０：化合物ＩＮ−０３２ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（２−モルホ
リン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮
合させて，表題化合物を得た。
【０２１６】実施例４１：化合物ＩＮ−０３３ ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２１７】実施例４２：化合物ＩＮ−０３４ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２
−オン ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（
２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアル
デヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２１８】実施例４３：化合物ＩＮ−０３５ ６−（４−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２１９】実施例４４：化合物ＩＮ−０３６ ６−（３−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２２０】実施例４５：化合物ＩＮ−０３７ ６−（２−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（２−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２２１】実施例４６：化合物ＩＮ−０３８ ６−（４−フルオロ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
ール−２−オン ６−（４−フルオロ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン
を５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２２２】実施例４７：化合物ＩＮ−０３９ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド（
２８ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ），５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）
−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（３４ｍｇ，０．１３ｍｍｏｌ）お
よびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混合物を９０℃で２
時間加熱した。反応液を０℃で一夜冷却した。沈殿物を真空濾過により回収し，
冷エタノールで洗浄し，乾燥して，４７ｍｇ（８０％）の表題化合物を橙色固体
として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．１５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０７（
ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６９（ｂｒ ｄｄ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝
８．８４Ｈｚ，１Ｈ），７．１５（ｍ，４Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．４５Ｈ
ｚ，１Ｈ），６．９５（ｂｒ ｄｄ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，
２Ｈ，ＣＨ2），２．８０（ｔ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｍ
，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ
４５２［Ｍ+］
【０２２３】実施例４８：化合物ＩＮ−０４０ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド（
２７ｍｇ，０．１２ｍｍｏｌ），５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）
−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒド（３０ｍｇ，０．１１ｍｍｏｌ）お
よびピペリジン（０．１ｍＬ）のエタノール（１ｍＬ）中の混合物を９０℃で２
時間加熱した。反応液を０℃で一夜冷却した。沈殿物を真空濾過により回収し，
冷エタノールで洗浄し，乾燥して，３８ｍｇ（６２％）の表題化合物を橙色固体
として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１７（ｂｒｓ，１Ｈ），８．０７（
ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６９（ｂｒ ｄｄ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝
８．９Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｍ，４Ｈ），７．０５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，
１Ｈ），６．９５（ｂｒ ｄｄ，１Ｈ），４．１（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２Ｈ，
ＣＨ2），３．５８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．７１（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，
２Ｈ，ＣＨ2），２．４９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ
／ｚ４６５．７［Ｍ+−１］
【０２２４】実施例４９：化合物ＩＮ−０４１ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸メチルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルア
ミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３７（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１４（ｂｒｓ，２Ｈ），７．６３（
ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．２２
（ｍ，１Ｈ，ＣＨ3ＮＨ），７．１５（ｂｒｓ，２Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝８
Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝
６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５５
（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４４（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3），１．６
７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４６５．７［Ｍ+−
１］
【０２２５】実施例５０：化合物ＩＮ−０４２ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸ジメチルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチル
アミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２
−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．４１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８
．１４（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），
７．５２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．
１３（ｂｒｓ，１Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，
Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８
１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５５（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．
６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４７９．８［Ｍ+ −１］
【０２２６】実施例５１：化合物ＩＮ−０４３ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸イソプロピルアミド オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸イソプロピル
アミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−２−１Ｈ−インドール
−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１５（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７
．６６（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），
７．３４（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ，（ＣＨ3）2ＣＨＮＨ），７．１５（ｍ，２Ｈ
），７．０６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１
Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２７（ｍ，１Ｈ，（Ｃ
Ｈ3）2ＣＨ），２．８０（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５５（ｍ，４
Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），０．９７（ｄ，Ｊ＝６．
５Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）． ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ４９３．８［Ｍ+ −１］
【０２２７】実施例５２：化合物ＩＮ−０４４ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸フェニルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フェニル
アミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２
−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），１０．０９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８
．１４（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６
０（ｄｄ，Ｊ＝２＆８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），
７．２１（ｔ，２Ｈ），７．１１−７．１５（ｍ，４Ｈ），７．０１（ｍ，２Ｈ
），６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），２．８１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５４（ｍ，４Ｈ
，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）
【０２２８】実施例５３：化合物ＩＮ−０４５ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸ピリジン−３−イルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン
−３−イルアミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６８（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３０（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ）
，８．１９（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，
１Ｈ），８．１１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６０（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ
，１Ｈ），７．５０（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｄｄ，Ｊ＝５＆８Ｈｚ，１Ｈ），
７．１６（ｂｒｓ，２Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ
ｄ，Ｊ＝２．５＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）
，２．８５（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2 ），１．７０（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５２８
．８［Ｍ+−１］
【０２２９】実施例５４：化合物ＩＮ−０４６ ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［５−（２−ピ
ロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１
，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オンを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ
−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８
．２１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），
７．５１（ｄｄ，Ｊ＝３＆８Ｈｚ，２Ｈ），７．１２−７．２１（ｍ，４Ｈ），
６．９２−７．０１（ｍ，３Ｈ），６．９２−７．０１（ｍ，３Ｈ），４．０８
（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．９６（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）
，２．９３（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２
Ｈ，ＣＨ2），２．５４（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣ
Ｈ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５５３．８［Ｍ+−１］
【０２３０】実施例５５：化合物ＩＮ−０４７ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（３−クロロ−フェニル）−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−ク
ロロ−フェニル）−アミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１
Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１８（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８
．１２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），
７．５１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．２４（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．
１６（ｍ，２Ｈ），７．１３（ｍ，１Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），７．０１７
．０３（ｍ，２Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ
，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２
．５６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６９（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖ
ｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５６２［Ｍ+−ｌ］
【０２３１】実施例５６：化合物ＩＮ−０４８ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（３−クロロ−フェニル−メチル−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−ク
ロロ−フェニル）−メチルアミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ
）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た
。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．４３（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８
．０３（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．３
５（ｍ，２Ｈ），７．２４−７．２９（ｍ，２Ｈ），７．１１−７．１７（ｍ，
３Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆９
Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２７（ｓ，３
Ｈ，ＣＨ3），２．８１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（ｍ，４Ｈ
，２ｘＣＨ2），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ
／ｚ５７６［Ｍ+−１］
【０２３２】実施例５７：化合物ＩＮ−０４９ ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−ク
ロロ−２−フルオロ−フェニル）アミドを５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
トキシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物
を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０９（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８
．０７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），
７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｄｄ，Ｊ＝２＆１０Ｈｚ，１Ｈ
），７．２４（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｍ，３Ｈ），７．０１（ｄ
，Ｊ＝８Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．１１（
ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９２（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），
２．６６（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．７２（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−
Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５６７．７［Ｍ+−１］
【０２３３】実施例５８：化合物ＩＮ−０５０ ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−３−［５−（２
−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−１，３−ジヒ
ドロ−インドール−２−オンを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−
１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３８（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８
．１１（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．５
１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｄｄ，Ｊ＝２＆８Ｈｚ，１Ｈ），７．
１３−７．１９（ｍ，３Ｈ），７．０６（ｍ，２Ｈ），６．９４−６．９９（ｍ
，２Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．８０（ｔ，Ｊ＝６
Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．２５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８１（ｔ，Ｊ＝６Ｈ
ｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５２（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），２．４８（ｍ，２Ｈ，
ＣＨ2），１．６７（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５
８０［Ｍ+−１］
【０２３４】実施例５９：化合物ＩＮ−０５１ ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−３−［５−
（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレ
ン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ
）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た
。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３９（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２２（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８
．２０（ｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，１Ｈ），７．６７（ｄｄ，Ｊ＝１．４＆８Ｈｚ，
１Ｈ），７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．０７−７．１７（ｍ，７Ｈ）
，６．９５（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．２３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2
），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．３３（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，
２Ｈ，ＣＨ2），２．８６（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８１（ｔ，Ｊ
＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５２（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，
４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰＣＩ ｍ／ｚ５６７．７［Ｍ+−ｌ］
【０２３５】実施例６０：化合物ＩＮ−０５２ ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［
５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，
３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（２−ピロリジン−１−イル−エト
キシ）−１Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を
得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．４１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．２５（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），８
．２３（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝２＆９Ｈｚ，１Ｈ），
７．５１（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，１Ｈ），７．
３６（ｄ，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝２
．５Ｈｚ，１Ｈ），７．１４（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ）
，６．９６（ｄｄ，Ｊ＝３＆９Ｈｚ，１Ｈ），４．０８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ
，ＣＨ2），３．９７（ｔ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．９５（ｔ，Ｊ＝９
Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．８１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），２．５３（
ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2），１．６８（ｍ，４Ｈ，２ｘＣＨ2）．ＭＳ−Ｖｅ ＡＰ
ＣＩ ６３２．０および６３４．２
【０２３６】実施例６１：化合物ＩＮ−０５３ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸メチルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルア
ミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−２
−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２３７】実施例６２：化合物ＩＮ−０５４ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸ジメチルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチル
アミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−
２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２３８】実施例６３：化合物ＩＮ−０５５ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸イソプロピルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸イソプロ
ピルアミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドー
ル−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２３９】実施例６４：化合物ＩＮ−０５６ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸フェニルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フェニル
アミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−インドール−
２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２４０】実施例６５：化合物ＩＮ−０５７ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸ピリジン−３−イルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン
−３−イルアミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１ＨＨ−イ
ンドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２４１】実施例６６：化合物ＩＮ−０５８ ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［５−（２−モ
ルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１
，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ
−インドール−２−オンを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ
Ｈ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２４２】実施例６７：化合物ＩＮ−０５９ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（３−クロロ−フェニル）−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−ク
ロロ−フェニル）−アミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１
ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２４３】実施例６８：化合物ＩＮ−０６０ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（３−クロロ−フェニル）−メチル−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−ク
ロロ−フェニル）−メチルアミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ
）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得
た。
【０２４４】実施例６９：化合物ＩＮ−０６１ ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
ホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−ク
ロロ−２−フルオロ−フェニル）アミドを５−（２−モルホリン−４−イル−エ
トキシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合
物を得た。
【０２４５】実施例７０：化合物ＩＮ−０６２ ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−３−［５−（２
−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］
−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−１，３−ジヒ
ドロ−インドール−２−オンを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−
１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２４６】実施例７１：化合物ＩＮ−０６３ ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−３−［５−
（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレ
ン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−１，３−
ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ
）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得
た。
【０２４７】実施例７２：化合物ＩＮ−０６４ ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［
５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，
３−ジヒドロ−インドール−２−オンを５−（２−モルホリン−４−イル−エト
キシ）−１ＨＨ−インドール−２−カルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物
を得た。
【０２４８】実施例７３：化合物ＩＮ−０６５ ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド ５−アミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−３−カルボキシ
アルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１０．８０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．３７（ｓ，１Ｈ），８．０９−
８．２４（ｍ，３Ｈ），７．５１（ｍ，１Ｈ），７．４１（ｍ，１Ｈ），７．１
３（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｓ，２Ｈ，ＮＨ2），６．８５（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ，１Ｈ）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３３９［Ｍ+］
【０２４９】実施例７４：化合物ＩＮ−０６６ ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド ５−アミノスルホニル−２−オキシインドールを２−メチルインドール−３−
カルボキシアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。 ＭＳ−ＥＩ ３５３［Ｍ+］
【０２５０】実施例７５：化合物ＩＮ−０６７ ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド ５−アミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−５−カルボアル
デヒドと縮合させて，表題化合物を得た。 ＭＳ−ＥＩ ３３９［Ｍ+］
【０２５１】実施例７６：化合物ＩＮ−０６８ ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド ５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−３−カル
ボキシアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．０３（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１０．８４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．３９（ｓ，１Ｈ），８．２５（
ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル），８．２２（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），８．１６（
ｍ，１Ｈ），７．４０−７．４６（ｍ，２Ｈ），７．０６−７．１５（ｍ，２Ｈ
），７．０４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ3ＮＨ），６．８８（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，１Ｈ
），２．３２（ｄ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ３５３［Ｍ+ ］
【０２５２】実施例７７：化合物ＩＮ−０６９ ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド ５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドールを２−メチルインドール
−３−カルボキシアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。
【０２５３】実施例７８：化合物ＩＮ−０７０ ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド ５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−５−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．３８（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１０．８５（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１１（ｍ，１Ｈ），８．０１（
ｍ，１Ｈ），７．９０（ｍ，１Ｈ），７．７８（ｍ，１Ｈ），７．３７−７．５
３（ｍ，３Ｈ），７．１０（ｍ，１Ｈ），６．９５（ｍ，１Ｈ），６．４（ｍ，
１Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ３５３［Ｍ+］
【０２５４】実施例７９：化合物ＩＮ−０７１ ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド ５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−２−カル
ボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．７５（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１１．４０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル）
，８．１０（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５４−７．６５（ｍ，３Ｈ），
７．２０−７．２７（ｍ，３Ｈ），７．０２−７．０６（ｍ，２Ｈ），２．３８
（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ３５３［Ｍ+］
【０２５５】実施例８０：化合物ＩＮ−０７２ ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド ５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−３−カ
ルボキシアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．１１（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１０．９４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），９．５０（ｓ，１Ｈ），８．４４（
ｓ，１Ｈ），８．３３（ｍ，２Ｈ），７．５１−７．５３（ｍ，２Ｈ），７．２
５（ｍ，２Ｈ），７．０３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），２．６３（ｓ，６Ｈ
，２ｘＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ３６７［Ｍ+］
【０２５６】実施例８１：化合物ＩＮ−０７３ ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド ５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドールを２−メチルインドー
ル−３−カルボキシアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１１．９５（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１０．８６（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル）
，７．４１（ｄｄ，Ｊ＝１．８＆８．４Ｈｚ，１Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝８．
４Ｈｚ，１Ｈ），７．０４（ｍ，１Ｈ），６．８５−６．９５（ｍ，４Ｈ）．Ｍ
Ｓ−ＥＩ ３８１［Ｍ+］
【０２５７】実施例８２：化合物ＩＮ−０７４ ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド ５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−５−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。 ＭＳ−ＥＩ ３６７［Ｍ+］
【０２５８】実施例８３：化合物ＩＮ−０７５ ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド ５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドールをインドール−２−カ
ルボアルデヒドと縮合させて，表題化合物を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８０（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），１１．４４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−ビニル）
，８．１５（ｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ，１Ｈ），７．７０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１
Ｈ），７．６０（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｓ，１Ｈ），
７．０７−７．１２（ｍ，２Ｈ），２．６３（ｓ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）．ＭＳ−
ＥＩ ３６７［Ｍ+］
【０２５９】実施例８４：化合物ＩＮ−０７６ ３−（４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２
，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルア
ミド（１９４ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ），４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２
−カルボアルデヒド（１５０ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）およびピペリジン（３６
ｍｇ，０．４３ｍｍｏｌ）のエタノール（０．２Ｍ）中の混合物を室温で合計５
日間撹拌した。反応液をその容量の１／４に濃縮し，沈殿物を真空濾過により回
収して表題化合物を淡橙赤色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１２．８２（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，１１．３６（ｂｒｓ，Ｉｈ，ＮＨ），８．１１（ｓ，ＩＨ−Ｈ−ビニル），８
．１１（ｄ，Ｊ＝１．３Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝１．３＆８．５Ｈ
ｚ，１Ｈ），７．１５７．２７（ｍ，４Ｈ），７．０８（ｄ，Ｊ＝７．９６Ｈｚ
，１Ｈ），６．５６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９２（ｓ，３Ｈ，ＯＣ
Ｈ3），２．４３（ｄ，Ｊ＝５．０２Ｈｚ，３Ｈ，ＮＣＨ3）．ＭＳ ｍ／ｚ３８
４［Ｍ+＋１］
【０２６０】オキシインドールの製造（コンビナトリアルライブラリにおいて用いられるオキ シインドール） 実施例８５：５−（ピロリジン−１−スルホニル−１，３−ジヒドロ−インドー ル−２−オン ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（１．６２ｇ，７ｍｍｏｌ），
ピロリジン（０．７０１ｍＬ，８．４ｍｍｏｌ）およびピリジン（１ｍＬ）のジ
クロロメタン（２０ｍＬ）中の懸濁液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を酢
酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ塩酸（１６ｍＬ）で酸性にした。次に有
機層を炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残渣を
エタノール（３ｍＬ）で洗浄した。次にこれをシリカゲルのクロマトグラフィー
により精製し，メタノール：ジクロロメタン１：９で溶出して，０．４３２ｇ（
２７％）の５−（ピロリジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−インドー
ル−２−オンを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，７．６−７．６４（ｍ，２Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），３．５
８（ｓ，２Ｈ，Ｈ−３），３．０７−３．１１（ｍ，４Ｈ，ｃ−ペンチル），１
．６３−１．６６（ｍ，４Ｈ，ｃ−ペンチル）．ＭＳｍ／ｚ２６６［Ｍ］+
【０２６１】実施例８６：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸ベンジルアミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（１．６２ｇ，７ｍｍｏｌ），
ベンジルアミン（０．９１８ｍＬ，８．４ｍｍｏｌ）およびピリジン（１ｍＬ）
のジクロロメタン（２０ｍＬ）中の懸濁液を室温で４時間撹拌した。反応混合物
を酢酸エチル（３００ｍＬ）で希釈し，１Ｎ塩酸（１６ｍＬ）で酸性にした。次
に有機層を炭酸水素ナトリウムおよびブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮した。残
渣をエタノール（３ｍＬ）で洗浄し，次にシリカゲルのクロマトグラフィーで精
製し，メタノール：ジクロロメタン１：９で溶出して，１．４ｇ（６６％）の２
−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ベンジルアミ
ドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ０．７０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−１
），７．９１（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨＳＯ2−），６．６３（ｄｄ，Ｊ＝
２および８Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．５７（ｓ，１Ｈ），７．２０−７．２
９（ｍ，５Ｈ，ＡｒＨ），６．９２（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），３．９４（
ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2ＮＳＯ2−），３．５４（ｓ，２Ｈ，Ｈ−３）
【０２６２】実施例８７：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸４−フルオロ−ベンジルアミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（５．０ｇ），４−フルオロベ
ンジルアミン（３．０ｍＬ）およびピリジン（３．５ｍＬ）のジクロロメタン（
３０ｍＬ）中の懸濁液を室温で４時間撹拌した。沈殿物を濾過し，ジクロロメタ
ンで洗浄し，乾燥して，５．８ｇ（８４％）の２−オキソ−２，３−ジヒドロ−
１Ｈ−インドール−５−スルホン酸４−フルオロ−ベンジルアミドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−
１），７．５０−７．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ４，６），７．２１−７．２６（ｍ，
４Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０４−７．０９（ｍ，１Ｈ，ＳＯ2ＮＨ），６．９０−
６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−７），３．９１−３．９３（ｄ，２Ｈ，ＮＨＣＨ2）
，３．５３（ｓ，２Ｈ，Ｈ−３）．ＭＳｍ／ｚ３２０
【０２６３】実施例８８：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸（３−クロロ−フェニル）−アミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（５ｇ），３−クロロアニリン
（２．７４ｍＬ）およびピリジン（３．５ｍＬ）のジクロロメタン（３０ｍＬ）
中の懸濁液を室温で一夜撹拌した。沈殿物を濾過し，ジクロロメタンで洗浄し，
乾燥して，５．２ｇ（７４％）の２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド
ール−５−スルホン酸（３−クロロ−フェニル）−アミドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１０．４１（ｓ，１Ｈ，ＳＯ2ＮＨ），７．５９−７．６４（ｍ，２Ｈ
，Ｈ−４，６），７．２２−７．２６（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．１０−７．
１１（ｍ，１Ｈ，ＡｒＨ），７．０３−７．０７（ｍ，２Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．
９−６．９２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−７），３．５４（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）．ＭＳ ｍ
／ｚ３２２（Ｍ+）
【０２６４】実施例８９：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸（２−メトキシ−フェニル）−アミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（３ｇ），ｏ−アニシジン（１
．８ｍＬ）およびピリジン（２．１ｍＬ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中の溶
液を室温で一夜撹拌し，このとき赤色固体が存在した。固体を濾過し，エタノー
ルで洗浄し，真空下で乾燥して，１．５ｇ（３７％）の２−オキソ−２，３−ジ
ヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メトキシ−フェニル）−アミ
ドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−
１），９．１９（ｓ，１Ｈ，ＳＯ2ＮＨ），７．５１−７．５４（ｍ，２Ｈ，Ｈ
−４，６），７．１８−７．２０（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．０４−７．０９
（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．７８６．８９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ａｒ−Ｈ），
３．４４−３．５６（ｍ，５Ｈ，Ｈ−３，ＯＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ（ＡＰＣＩ−
）３１７．２
【０２６５】実施例９０：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸ピリジン−３−イルアミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（３ｇ）および３−アミノピリ
ジン（１．４６ｇ）のピリジン（１５ｍＬ）中の溶液を室温で一夜撹拌し，この
とき茶色固体が存在した。沈殿物を濾過し，エタノールで洗浄し，真空下で乾燥
して，１．４ｇ（３８％）の２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
−５−スルホン酸ピリジン−３−イルアミドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７４（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−
１），１０．３９（ｓ，１Ｈ，ＳＯ2ＮＨ），８．２７−８．２８（ｄ，１Ｈ，
Ａｒ−Ｈ），８．２１−８．２３（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．５９−７．６２
（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，６），７．４４−７．６８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．
２４−７．２８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．６９−６．７１（ｄ，１Ｈ，Ｈ−
７），３．５４（ｓ，２Ｈ，Ｈ−３）．ＭＳ ｍ／ｚ（ＡＰＣＩ＋）２９０．２
【０２６６】実施例９１：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン 酸（２−メトキシ−エチル）−アミド ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（５ｇ），２−メトキシエチル
アミン（２．２５ｍＬ）およびピリジン（７ｍＬ）のジクロロメタン（３０ｍＬ
）中の溶液を室温で４時間撹拌した。反応液を濃縮し，ジクロロメタン（１５ｍ
Ｌ）を加えた。沈殿物を濾過し，ジクロロメタンで洗浄し，乾燥して，１．９ｇ
（３３％）の２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン
酸（２−メトキシ−エチル）−アミドを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．７２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝２および８Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ）
，７．４８（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ），６．９３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ
），３．５７（ｓ，２Ｈ），３．２９（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2），３．
１６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），２．８２−２．８７（ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ，Ｃ
Ｈ2）．ＭＳ ｍ／ｚ２７０Ｍ+
【０２６７】実施例９２：５−アミノスルホニル−２−オキシインドール ２７ｍＬのクロロスルホン酸を入れた１００ｍＬフラスコに，１３．３ｇの２
−オキシインドールをゆっくり加えた。添加の間，反応温度を３０℃以下に維持
した。添加後，反応混合物を室温で１．５時間撹拌し，６８℃で１時間加熱し，
冷却し，水に注加した。沈殿物を水で洗浄し，真空オーブン中で乾燥して，１１
．０ｇの５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（５０％収率）を得，こ
れをさらに精製することなく用いた。
【０２６８】 ５−クロロスルホニル−２−オキシインドール（２．１ｇ）を１０ｍＬのエタ
ノール中の１０ｍＬの水酸化アンモニウムに加え，室温で一夜撹拌した。混合物
を濃縮し，固体を真空濾過により回収して，０．４ｇ（２０％収率）の５−アミ
ノスルホニル−２−オキシインドールを灰白色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．６７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ−
１），７．６３−７．６６（ｍ，２Ｈ，Ｈ−４，６），７．１３（ｓ，２Ｈ，５
−ＳＯ2ＮＨ2），６．９１（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），および３．５６
（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2−３）．ＭＳｍ／ｚ２１１［Ｍ−１］+
【０２６９】実施例９３：５−メチルアミノスルホニル−２−オキシインドール ３．３８ｇの５−クロロスルホニル−２−オキシインドールの１０ｍＬの２Ｍ
メチルアミン／テトラヒドロフラン中の懸濁液を室温で４時間撹拌し，このとき
白色固体が存在した。沈殿物を真空濾過により回収し，それぞれ５ｍＬの水で２
回洗浄し，真空下で４０℃で一夜乾燥して，３．０ｇ（８８％収率）の５−メチ
ルアミノスルホニル−２−オキシインドールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ−１），７．８６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，−ＳＯ2ＮＨＣＨ3），７．６１（ｄ，
Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．３２（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），６
．９７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），２．５３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2−３）
，および２．３６（ｓ，３Ｈ，５−ＳＯ２ＮＨＣＨ3）．ＭＳｍ／ｚ２２６
【０２７０】実施例９４：５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドール ２．３ｇの５−クロロスルホニル−２−オキシインドールの１０ｍＬの２Ｍジ
メチルアミン／メタノール中の懸濁液を室温で４時間撹拌し，このとき白色固体
が存在した。沈殿物を真空濾過により回収し，５ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウムお
よび５ｍＬの１Ｎ塩酸で洗浄し，真空下で４０℃で一夜乾燥して，１．９ｇ（７
９％収率）の５−ジメチルアミノスルホニル−２−オキシインドールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．８７（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．７３（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．５８（ｄｄ，Ｊ＝１
および８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．０２（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），
２．５９（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3），２．５４（ｓ，２Ｈ，Ｈ−３），２．３６（ｓ
，３Ｈ，ＣＨ3）
【０２７１】実施例９５：５−イソプロピルアミノスルホニル−２−オキシインドール ３ｇの５−クロロスルホニル−２−オキシインドール，１．１５ｇのイソプロ
ピルアミンおよび１．２ｍＬのピリジンの５０ｍＬのジクロロメタン中の懸濁液
を室温で４時間撹拌し，このとき白色固体が存在した。沈殿物を真空濾過により
回収した。固体を熱エタノールでスラリー洗浄し，冷却し，真空濾過により回収
し，真空下で４０℃で一夜乾燥して，１．５ｇ（４５％収率）の５−イソプロピ
ルアミノスルホニル−２−オキシインドールを得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．６９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．６３（ｄｄ，Ｊ＝２および８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−６），７．５９（ｄ
，Ｊ＝２Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），７．３２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，１Ｈ，ＮＨ−ＳＯ2 −），６．９３（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．５７（ｓ，２Ｈ，Ｈ
−３），３．１４−３．２３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ−（ＣＨ3）2），０．９４（ｄ，
Ｊ＝７Ｈｚ，６Ｈ，２ｘＣＨ3）
【０２７２】実施例９６：５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン ５−ブロモ−２−オキシインドール（５ｇ，２３．５ｍｍｏｌ）を１１０ｍＬ
のトルエンおよび１１０ｍＬのエタノールに，撹拌しながらおよびわずかに加熱
しながら溶解した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（０）
（１．９ｇ，１．６ｍｍｏｌ）を加え，次に炭酸ナトリウム（４０ｍＬ，８０ｍ
ｍｏｌ）の２Ｍ水性溶液を加えた。この混合物にベンゼンホウ酸（３．７ｇ，３
０．６ｍｍｏｌ）を加え，混合物を１００℃の油浴中で加熱した。１２時間後，
反応液を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し，飽和水性炭酸水素ナトリウム（２
００ｍＬ），水（２００ｍＬ），１ＮＨＣｌ（２００ｍＬ）およびブライン（２
００ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し，濃縮して，茶色固
体を得た。ジクロロメタン中で砕き，濾過して，３．８ｇ（７７％）の褐色固体
を得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．４（ｂｒｓ，１Ｈ，ＮＨ
），７．５７（ｄｄ，Ｊ＝１．８および７．２Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．５
−７．３５（ｍ，５Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．２９（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），６．８
９（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2ＣＯ
）．ＭＳ ｍ／ｚ（相対強度％，イオン）実測値２０９（１００，Ｍ+）；計算
値２０９．２
【０２７３】実施例９７：６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ ン ６０ｍＬのトルエンおよび６０ｍＬのエタノールに溶解した６−ブロモ−２−
オキシインドール（４ｇ，２６．３ｍｍｏｌ）の溶液に，撹拌しながらわずかに
加熱しながら，テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２．
３ｇ，１．９ｍｍｏｌ）を加え，次に炭酸ナトリウム（５０ｍＬ，１００ｍｍｏ
ｌ）およびピリジン−３−ホウ酸プロパンジオール（５ｇ，３０．７ｍｍｏｌ）
の２Ｍ水性溶液を加えた。混合物を１００℃の油浴中で１２時間加熱した。冷却
した反応液を酢酸エチル（５００ｍＬ）で希釈し，飽和水性炭酸水素ナトリウム
（２００ｍＬ），水（２００ｍＬ）およびブライン（２００ｍＬ）で洗浄した。
有機層を硫酸マグネシウムで乾燥し，濃縮して，茶色固体を得た。残渣を塩化メ
チレン／ジエチルエーテル中で砕いて，２．３２ｇ（４２％）の６−ピリジン−
３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オンを茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．５１（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）
，８．８１（ｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８．５５（ｄｄ，Ｊ＝１
．８および５．７Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），８（ｍ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．４
５（ｄｄ，Ｊ＝５．７および９．３Ｈｚ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ
，Ａｒ−Ｈ），７．０５（ｓ，１Ｈ，Ａｒ−Ｈ），３．５１（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2
ＣＯ）．ＭＳ ｍ／ｚ２１０［Ｍ］+
【０２７４】実施例９８：６−フェニル−２−オキシインドール テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．８ｇ）を，トルエン
（５０ｍＬ）およびエタノール（５０ｍＬ）中のベンゼンホウ酸（３．１ｇ），
５−ブロモ−２−フルオロニトロベンゼン（５ｇ）および２２ｍＬの２Ｍ炭酸ナ
トリウム溶液の混合物に加えた。混合物を２時間加熱還流し，濃縮し，残渣を酢
酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を水，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮
して，黄色油状物を得た。油状物をシリカゲルで５％酢酸エチル／ヘキサン中で
カラムクロマトグラフィーにより精製して，４．７５ｇ（９６％収率）の４−フ
ルオロ−３−ニトロビフェニルを黄色油状物として得た。
【０２７５】 ２５ｍＬのジメチルスルホキシド中のジメチルマロネート（１０ｍＬ）を，２
５ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁した３．５ｇの水素化ナトリウムに滴下し
，混合物を１００℃で１０分間加熱した。混合物を室温に冷却し，２５ｍＬのジ
メチルスルホキシド中の４．７ｇの４−フルオロ−３−ニトロビフェニルを加え
た。混合物を１００℃で２時間加熱し，冷却し，３００ｍＬの飽和塩化アンモニ
ウム溶液で急冷した。混合物を酢酸エチルで３回抽出し，合わせた有機層を水お
よびブラインで洗浄し，留去して，粗ジメチル−３−ニトロビフェニル−４−マ
ロネートを黄色油状物として得た。
【０２７６】 粗ジメチル−３−ニトロビフェニル−４−マロネートを３０ｍＬの６Ｎ塩酸中
で２４時間加熱還流した。沈殿物を濾過により回収し，水で洗浄し，乾燥して，
４．５ｇ（４−フルオロ−３−ニトロビフェニルに基づき８０％）の３−ニトロ
ビフェニル−４−酢酸をクリーム色固体として得た。
【０２７７】 鉄チップ（２．６ｇ）を４０ｍＬの酢酸中の４．５ｇの３−ニトロビフェニル
−４−酢酸に一度に加えた。混合物を２時間加熱還流し，濃縮乾固し，酢酸エチ
ル中に取り出した。固体を濾過により除去し，濾液を１Ｎ塩酸およびブラインで
２回洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥した。濾液を濃縮して，３．４ｇ（９３
％収率）の６−フェニル−２−オキシインドールを淡茶色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．４（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ−１），７．５７−７．６（ｍ，２Ｈ），７．４２−７．４６（ｍ，２Ｈ），
７．３２−７．３７（ｍ，１Ｈ），７．２７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４）
，７．１９（ｄｄ，Ｊ＝２，８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），７．０１（ｄ，Ｊ＝２Ｈ
ｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．４９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ ｍ／ｚ２１０［Ｍ
＋１］+
【０２７８】実施例９９：６−（２−メトキシフェニル）−２−オキシインドール テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を，トルエン（５
０ｍＬ）およびエタノール（５０ｍＬ）中の２−メトキシフェニルホウ酸（５ｇ
），５−ブロモ−２−フルオロニトロベンゼン（６．６ｇ）および３０ｍＬの２
Ｍ炭酸ナトリウム溶液の混合物に加えた。混合物を２時間加熱還流し，濃縮し，
残渣を酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を水，ブラインで洗浄し，乾燥
し，濃縮して，暗緑色油状物を得，これは放置すると固化して，粗４−フルオロ
−２’−メトキシ−３−ニトロビフェニルを得た。
【０２７９】 ジメチルマロネート（１４ｍＬ）を，５０ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁
した２．９ｇの水素化ナトリウムに滴下した。混合物を１００℃で１５分間加熱
し，室温に冷却した。６０ｍＬのジメチルスルホキシド中の粗４−フルオロ−２
’−メトキシ−３−ニトロビフェニルを加え，混合物を１００℃で２時間加熱し
た。反応混合物を冷却し，３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液で急冷し，酢
酸エチルで２回抽出した。抽出物を合わせ，飽和塩化アンモニウム，水，および
ブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，粗ジメチル２’−
メトキシ−３−ニトロビフェニル−４−マロネートを黄色油状物として得た。
【０２８０】 粗２’−メトキシ−３−ニトロビフェニル−４−マロネートを５０ｍＬの６Ｎ
塩酸中で１００℃で２４時間加熱し，冷却した。沈殿物を濾過により回収し，水
およびヘキサンで洗浄し，乾燥して，９．８ｇの２’−メトキシ−２ニトロビフ
ェニル−４−酢酸を淡褐色固体として得た。
【０２８１】 鉄チップ（５ｇ）を５０ｍＬの氷酢酸中の９．８ｇの２’−メトキシ−３−ニ
トロビフェニル−４−酢酸に一度に加え，１００℃で３時間加熱した。反応混合
物を濃縮乾固し，酢酸エチル中で超音波処理し，濾過して不溶物質を除去した。
濾液を１Ｎ塩酸で２回，水，ブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，
濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで酢酸エチル：ヘ
キサン１：２中で精製して，５．４ｇ（５−ブロモ−２−フルオロニトロベンゼ
ンに基づき６９％収率）の６−（２−メトキシフェニル）−２−オキシインドー
ルをバラ色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．３２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．２９−７．３４（ｍ，１Ｈ），７．１９−７．２５（ｍ，２Ｈ），
７．０８（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−４），６．９７−７．０２（ｍ，２Ｈ）
，６．９１（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3）
，３．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ ｍ／ｚ２３９．８［Ｍ＋ｌ］+
【０２８２】実施例１００：６−（３−メトキシフェニル）−２−オキシインドール テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０．７ｇ）を，１００ｍ
Ｌのトルエン中の３．８ｇの３−メトキシフェニルホウ酸，５ｇの５−ブロモ−
２−フルオロニトロベンゼンおよび１１ｍＬの２Ｍ炭酸ナトリウム溶液の混合物
に加えた。混合物を２時間加熱還流し，水で希釈し，酢酸エチルで抽出した。酢
酸エチルを飽和炭酸水素ナトリウム，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃縮して，油
状固体を得た。固体をカラムクロマトグラフィーによりシリカゲルで酢酸エチル
：ヘキサン１：６中で精製して，４．３ｇ（７７％収率）の４−フルオロ−３’
−メトキシ−３−ニトロビフェニルを得た。
【０２８３】 ジメチルマロネート（９．７ｍＬ）を５０ｍＬのジメチルスルホキシドに懸濁
した２．０ｇの水素化ナトリウムに滴下した。混合物を１００℃で３５分間加熱
し，室温に冷却した。５０ｍＬのジメチルスルホキシド中の４−フルオロ−２’
−メトキシ−３−ニトロビフェニル（４．２ｇ）を加え，混合物を１００℃で１
時間加熱した。反応混合物を冷却し，３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶液で
急冷し，酢酸エチルで２回抽出した。抽出物を合わせ，ブラインで洗浄し，無水
硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，粗ジメチル３’−メトキシ−３−ニトロビ
フェニル−４−マロネートを淡黄色固体として得た。
【０２８４】 粗３’−メトキシ−３−ニトロ−ビフェニル−４−マロネートを４５ｍＬの６
Ｎ塩酸中で１１０℃で４日間加熱し，冷却した。沈殿物を濾過により回収し，水
およびヘキサンで洗浄し，乾燥して，５．３ｇの３’−メトキシ−２−ニトロビ
フェニル−４−酢酸を淡褐色固体として得た。
【０２８５】 ３’−メトキシ−３−ニトロビフェニル−４−酢酸（５．２ｇ）をメタノール
に溶解し，０．８ｇの１０％パラジウム担持炭素でで室温３時間水素化した。触
媒を濾過により除去し，メタノールで洗浄し，濾液を合わせ，濃縮して，茶色固
体を得た。固体をシリカゲルで酢酸エチル：ヘキサン：酢酸３３：６６：１でカ
ラムクロマトグラフィーにより精製して，３．０ｇ（４−フルオロ−３’−メト
キシ−３−ニトロビフェニルに基づき収率７５％）の６−（３−メトキシフェニ
ル）−２−オキシインドールをピンク色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．３９（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），７．３５（ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，１Ｈ
），７．１９（ｄｄ，Ｊ＝１，８Ｈｚ，１Ｈ），７．１３−７．１６（ｍ，１Ｈ
），７．０９−７．１（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ），６．
９０−６．９３（ｍ，１Ｈ），３．８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．４９（ｓ，
２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳｍ／ｚ２４０．０［Ｍ＋１］+
【０２８６】実施例１０１：６−（４−メトキシフェニル）−２−オキシインドール テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１ｇ）を，５０ｍＬのト
ルエンおよび５０ｍＬのエタノール中の，５ｇの４−メトキシフェニルホウ酸，
６．６ｇの５−ブロモ−２−フルオロニトロベンゼンおよび３０ｍＬの２Ｍ炭酸
ナトリウム溶液の混合物に加えた。混合物を２時間加熱還流し，濃縮し，残渣を
酢酸エチルで２回抽出した。酢酸エチル層を水，ブラインで洗浄し，乾燥し，濃
縮して，茶色油状固体を得た。固体を５％酢酸エチル／ヘキサン中でシリカゲル
のカラムクロマトグラフィーにより精製して，粗４フルオロ−４’−メトキシ−
３−ニトロビフェニルを淡黄色固体として得た。
【０２８７】 ジメチルマロネート（１０ｍＬ）を，６０ｍＬのジメチルスルホキシド中に懸
濁した２．０ｇの水酸化ナトリウムに滴下した。混合物を１００℃で１０分間加
熱し，室温に冷却した。５０ｍＬのジメチルスルホキシド中の粗４−フルオロ−
２’−メトキシ−３−ニトロビフェニル（５．２ｇ）を加え，混合物を１００℃
で２時間加熱した。反応混合物を冷却し，３００ｍＬの飽和塩化アンモニウム溶
液で急冷し，酢酸エチルで３回抽出した。抽出物を合わせ，飽和塩化アンモニウ
ム，水およびブラインで洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，濃縮して，粗ジ
メチル４’−メトキシ−３−ニトロビフェニル−４−マロネートを黄色油状物と
して得た。
【０２８８】 粗４’−メトキシ−３−ニトロ−ビフェニル−４−マロネートを６０ｍＬの６
Ｎ塩酸中で１００℃で１５時間加熱し，冷却した。沈殿物を濾過により回収し，
水およびヘキサンで洗浄し，乾燥して，７．２ｇの粗４’メトキシ−３−ニトロ
ビフェニル−４−酢酸を淡褐色固体として得た。
【０２８９】 鉄チップ（３．６ｇ）を，５０ｍＬの氷酢酸中の７．２ｇの４’−メトキシ−
３−ニトロビフェニル−４−酢酸に一度に加え，１００℃で一夜加熱した。反応
混合物を濃縮乾固し，酢酸エチル中で超音波処理し，濾過して不溶性物質を除去
した。濾液を１Ｎ塩酸，ブラインで２回洗浄し，無水硫酸ナトリウムで乾燥し，
濃縮して，２．７ｇ（５−ブロモ−２−フルオロニトロベンゼンに基づいて収率
５４％）の６−（４−メトキシフェニル）−２−オキシインドールをバラ色固体
として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．３８（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ−１），７．５２（ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），７．２３（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ，
１Ｈ，Ｈ−４），７．１４（ｄｄ，Ｊ＝１，７Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−５），７．０（
ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ，２Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝１Ｈｚ，１Ｈ，Ｈ−７），３．７
８（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3），３．４７（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ ｍ／ｚ２１４
．０［Ｍ＋１］+
【０２９０】実施例１０２：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボ ン酸（３−クロロ−４−メトキシ−フェニル）−アミド ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（２００
ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）および３−クロロ−４−メトキシ−フェニルアミン（
１７８ｍｇ，１．１３ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中の溶液
に，室温でベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホス
ホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ試薬，９９７ｍｇ，２．２６ｍｍ
ｏｌ）を加え，次に４−ジメチルアミノピリジン（２０６ｍｇ，１．６９ｍｍｏ
ｌ）を加えた。混合物を室温で７２時間撹拌した。次に反応液を酢酸エチル（３
００ｍＬ）で希釈し，飽和炭酸水素ナトリウム溶液（１００ｍＬ），水，２Ｎ塩
酸（１００ｍＬ），水（３ｘ２００ｍＬ）およびブラインで洗浄し，乾燥し（硫
酸マグネシウム），濃縮した。残渣を酢酸エチル中で砕いて，２−オキソ−２，
３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロロ４−メトキシ−
フェニル）−アミドを曇ったピンク色固体として得た。1 Ｈ ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．５０（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，
ＮＨ），１０．１２（ｓ，ｂｒ，１Ｈ，ＮＨ），７．９（ｓ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，
１Ｈ），７．６２（ｄｄ，Ｊ＝２．５＆９Ｈｚ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝７
．６Ｈｚ，１Ｈ），７．３２（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），７．１３（ｄ，Ｊ
＝９Ｈｚ，１Ｈ），６．９８（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｓ，３
Ｈ，ＯＣＨ3），３．６９（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）．ＭＳ−ＥＩ ｍ／ｚ３１６［Ｍ
］+
【０２９１】実施例１０３：２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボ ン酸エチルアミド エチルアミン（２．１ｍＬの２．０Ｍ溶液／テトラヒドロフラン，４．２ｍｍ
ｏｌ）を，ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中の４−カルボキシ−２−オキシイ
ンドール（３８０ｍｇ，２．１ｍｍｏｌ）の懸濁液に滴下し，次に，４−ジメチ
ルアミノピリジン（３８５ｍｇ，３．１５ｍｍｏｌ）およびＰｙＢＯＰ（２．１
８５ｇ，４．２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で６時間撹拌した。反応液を
濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し，飽和炭酸水素ナトリウムおよびブラ
インで洗浄し，乾燥し，濃縮し，再結晶して，２８０ｍｇ（６５％）の２−オキ
ソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸エチルアミドを得た
。1 Ｈ ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ6）δ１０．４４（ｂｒｓ，１Ｈ，Ｎ
Ｈ），８．２４（ｍ，１Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ2ＣＨ3），７．２４（ｍ，２Ｈ），６
．９０（ｄｄ，Ｊ＝２．１＆６．４Ｈｚ，１Ｈ），３．６３（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2
），３．２４（ｍ，２Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3），１．１０（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３
Ｈ，ＮＣＨ2ＣＨ3）．ＭＳ−ＥＩ ２０４［Ｍ+］
【０２９２】実施例１０４： コンビナトリアルライブラリの一般的合成方法 コンビナトリアルライブラリ法を用いて製造された本発明の化合物の製造は，
以下の一般的スキームにしたがって行った。
【０２９３】液相： オキシインドールおよびアルデヒドのＤＭＳＯ中０．５Ｍ溶液を調製した。ピ
ペリジン（２０μＬ）を各溶液に加えて溶解を助けた。各２２０μＬの適当な置
換オキシインドールおよび適当な置換アルデヒドを各ウエルに加え，次にピペリ
ジン（３０μＬ）を加えた。混合物を７０℃で１５時間加熱した。冷却した後，
ＤＭＳＯを各ウエルに加えて総容量を１μＬとした。次に溶液を９６マザープレ
ートに移し，生物学的試験に用いた。
【０２９４】 オキシインドールおよびアルデヒドのＤＭＳＯ中０．５Ｍ溶液（２．５μＬ）
を調製した。ピペリジン（２０μＬ）を各溶液に加えて溶解を助けた。各２２０
μＬの適当な置換オキシインドールおよび適当な置換アルデヒドを各ウエルに加
え，次にピペリジン（３０μＬ）を加えた。混合物を７０℃で１５時間加熱した
。冷却した後，ＤＭＳＯを各ウエルに加えて総容量を１ｍＬとした。高真空下で
ピペリジンを除去した。次に溶液を９６マザーウエルプレートに移し，生物学的
試験に用いた。
【０２９５】固相： １．樹脂のオキシインドールへの結合
【化２７】 出発オキシインドール（１．５８４ｇ，１．２当量）を窒素下で５０ｍＬのジ
クロロメタンおよび５．２ｍＬ（４当量）のＤＩＰＥＡに溶解した。ＤＭＦ（５
ｍＬ）を加えて溶解を助けた。樹脂（５ｇ，７．４５ｍｍｏｌ，１当量）を加え
，一夜穏やかに撹拌した。樹脂を濾過し，３００ｍＬの１７：２：１ＤＣＭ／Ｍ
ｅＯＨ／ＤＩＰＥＡ，２００ｍＬのＤＭＦ，および２００ｍＬのＤＣＭで洗浄し
た。溶媒を高真空下で除去した。６．１２ｇの樹脂が回収された。
【０２９６】
【化２８】 出発オキシインドール（１．７ｇ，２当量）を窒素下で６８ｍＬのＤＭＦに溶
解した。ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）（１．５ｍＬ，２当量）を加
え，次に２３４ｍｇ（０．４当量）のＤＭＡＰを加えた。次に，樹脂（６．８５
ｇ，４．７９８ｍｍｏｌ，１当量）を加え，一夜穏やかに撹拌した。樹脂を濾過
し，ＤＭＦ，ＭｅＯＨおよびＤＣＭで洗浄した。溶媒を高真空下で除去した。７
．４５ｇの樹脂が回収された。
【０２９７】２．樹脂とアルデヒドとの縮合
【化２９】 樹脂（１２５ｍｇ，１当量）を，アルデヒド（１ｍＬの０．２Ｍ溶液／ＤＭＳ
Ｏ，２当量）および１ｍＬの５０％ピペリジン／ＤＭＳＯで６０℃で１４時間処
理した。樹脂を濾過し，ＤＭＳＯ，ＤＭＦ，およびＭｅＯＨで洗浄した。次にこ
れを１．５ｍＬの１０％ＴＦＡ／ＤＣＭで１時間処理した。再び樹脂を濾過し，
ＤＭＳＯで洗浄した。真空下で揮発性物質を濾液から除去した。
【０２９８】アッセイ方法 以下のインビトロアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の，１つまたはそ
れ以上のＰＫに対する活性および効果のレベルを決定することができる。同様に
して，当該技術分野においてよく知られる技術を用いて，任意のＰＫについて類
似のアッセイを設計することができる。
【０２９９】 化合物を評価するためには３種類の一般的アッセイが有用である：細胞／触媒
，細胞／生物学およびインビボ。細胞／触媒アッセイの目的は，細胞において既
知の基質上のチロシンをリン酸化するＴＫの能力に及ぼす化合物の影響を判定す
ることである。細胞／生物学アッセイの目的は，細胞においてＴＫにより刺激さ
れる生物学的応答に及ぼす化合物の影響を判定することである。インビボアッセ
イの目的は，特定の疾患，例えば癌の動物モデルにおける化合物の影響を判定す
ることである。
【０３００】 本明細書に記載される細胞／触媒アッセイは，ＥＬＩＳＡフォーマットで実施
する。一般的方法は以下のとおりである：天然にまたは組換え的に試験キナーゼ
を発現する細胞に化合物を導入する。ある時間が経過した後，試験キナーゼがレ
セプターである場合には，レセプターを活性化することが知られているリガンド
を加える。細胞を溶解し，酵素的リン酸化反応の基質を認識する特異的抗体であ
らかじめコーティングしたＥＬＩＳＡプレートのウエルに溶解物を移す。細胞溶
解物の非基質成分を洗い流し，ホスホチロシンを特異的に認識する抗体で基質の
リン酸化の量を検出し，試験化合物と接触させていない対照細胞と比較する。
【０３０１】 本明細書に記載される細胞／生物学的アッセイは，試験キナーゼの活性化に応
答して生成したＤＮＡの量を測定し，これは一般的な増殖性応答の測定である。
このアッセイの一般的方法は次のとおりである：天然にまたは組換え的に試験キ
ナーゼを発現する細胞に化合物を導入する。ある時間が経過した後，試験キナー
ゼがレセプターである場合にはレセプターを活性化することが知られているリガ
ンドを加える。少なくとも一夜インキュベーションした後，ＤＮＡ標識試薬，例
えばブロモデオキシ−ウリジン（ＢｒｄＵ）または３Ｈ−チミジンを加える。抗
ＢｒｄＵ抗体でまたは放射活性を測定することにより標識されたＤＮＡの量を検
出し，試験化合物と接触させていない対照細胞と比較する。
【０３０２】細胞／触媒アッセイ 酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて，ＰＫ活性の存在
を検出し測定することができる。ＥＬＩＳＡは，例えば，Ｖｏｌｌｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，１９８０（"Ｅｎｚｙｍｅ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎ
ｔ Ａｓｓａｙ，" Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｙ，第２版，Ｒｏｓｅ ａｎｄ Ｆｒｉｅｄｍａｎ編，ｐｐ３５９−３７１
Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ
．Ｃ．）に記載の既知のプロトコルに従って実施することができる。
【０３０３】 開示されるプロトコルを，特定のＰＫに関する活性を判定するように適合させ
ることができる。例えば，特定のＰＫに関するＥＬＩＳＡ実験を実施するための
好ましいプロトコルは以下に記載される。ＲＴＫファミリーの他のメンバー，な
らびにＣＴＫおよびＳＴＫに対する化合物の活性を判定するためにこれらのプロ
トコルを適合させることは，十分に当業者の知識の範囲内である。
【０３０４】実施例１０５：ＦＬＫ−１ ＥＬＩＳＡアッセイを実施して，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性，より
詳細にはＦＬＫ−１レセプター上のＴＫ活性の阻害または活性化を測定した。詳
細には，以下のアッセイを実施して，Ｆｌｋ−１を発現するように遺伝子工学処
理された細胞において，ＦＬＫ−１レセプターのキナーゼ活性を測定した。材料および方法 材料 以下の試薬および供給物を用いた。 ａ． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
Ｎｏ．２５８０５−９６）； ｂ． Ｃａｐｐｅｌヤギ抗ウサギＩｇＧ（カタログＮｏ．５５６４１）； ｃ． ＰＢＳ（ＧｉｂｃｏカタログＮｏ．４５０−１３００ＥＢ）； ｄ． ＴＢＳＷ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ（ｐＨ７．２），１５０ｍＭＮａＣｌ
および０．１％Ｔｗｅｅｎ−２０）； ｅ． エタノールアミン保存液（１０％エタノールアミン（ｐＨ７．０），４℃
で保存）； ｆ． ＨＮＴＧ緩衝液（２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．５），１５０ｍＭ
ＮａＣｌ，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，および１０％グリセロール）； ｇ． ＥＤＴＡ（０．５Ｍ（ｐＨ７．０）１００Ｘ保存液として）； ｈ． オルトバナジウム酸ナトリウム（０．５Ｍ，１００Ｘ保存液として）； ｉ． ピロリン酸ナトリウム（０．２Ｍ，１００Ｘ保存液として）； ｊ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃカタログＮｏ．ＡＳ−７２０９２）； ｋ． ＮＩＨ３Ｔ３ Ｃ７＃３細胞（ＦＬＫ−１発現細胞）； ｌ． ＤＭＥＭ，１Ｘ高グルコースＬ−グルタミン含有（カタログＮｏ．１１９
６５−０５０）； ｍ． ＦＢＳ，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．１６０００−０２８）； ｎ． Ｌ−グルタミン，Ｇｉｂｃｏ（カタログＮｏ．２５０３０−０１６）； ｏ． ＶＥＧＦ，ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ，Ｉｎｃ．（カタログＮｏ．１００−２０
）Ｍｉｌｌｉ−ＱｄＨ2Ｏ中１μｇ／１００μｌ保存液として保持し，−２０℃
で保存； ｐ． アフィニティー精製抗ＦＬＫ−１抗血清； ｑ． ホスホチロシン特異的ＵＢ４０モノクローナル抗体（Ｆｅｎｄｌｅｙ，ｅ
ｔ ａｌ．，１９９０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５０：１５５０−１
５５８を参照）； ｒ． ＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧ−ＰＯＤ（ＢｉｏＲａｄカタログＮｏ．１
７２−１０１１）； ｓ． ２，２−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸（ＡＢＴ
Ｓ）溶液（１００ｍＭクエン酸（無水），２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4（ｐＨ４．０
），０．５ｍｇ／ｍｌＡＢＴＳ（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ａ−１８８８）），
溶液は，使用まで暗所で４℃で保存しなければならない； ｔ． Ｈ2Ｏ2（３０％溶液）（ＦｉｓｈｅｒカタログＮｏ．Ｈ３２５）； ｕ． ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１５ｍｌＡＢＴＳ溶液，２μｌＨ2Ｏ2）使用の５分間
に調製，室温に保持； ｖ． ０．２ＭＨＣｌ保存液，Ｈ2Ｏ中； ｗ． ジメチルスルホキシド（１００％）（ＳｉｇｍａカタログＮｏ．Ｄ−８４
１８）；および ｙ． トリプシン−ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬカタログＮｏ．２５２００−
０４９）
【０３０５】プロトコル 以下のプロトコルを用いてアッセイを実施した： １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，ウエルあたり１．０μ
ｇの，０．１ＭＮａ2ＣＯ3（ｐＨ９．６）中Ｃａｐｐｅｌ抗ウサギＩｇＧ抗体，
でコーティングする。最終容量をウエルあたり１５０μｌとする。プレートを４
℃で一夜コーティングする。プレートは，４℃で保存したとき，２週間まで保存
することができる。 ２． 細胞を適当な培養皿中で成長培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭＬ−グルタミン
，１０％ＦＢＳを補充）中で，コンフルエントとなるまで３７℃，５％ＣＯ2で
成長させる。 ３． トリプシン処理により細胞を回収し，Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８５０ポリスチ
レン９６ウエル丸底細胞プレートに，２００μｌの成長培地中２５，０００細胞
／ウエルで播種する。 ４． 細胞を３７℃，５％ＣＯ2で少なくとも１日成長させる。 ５． 細胞をＤ−ＰＢＳ １Ｘで洗浄する。 ６． ２００μｌ／ウエルの飢餓培地（ＤＭＥＭ，２．０ｍＭ ｌ−グルタミン
，０．１％ＦＢＳ）を加える。３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。 ７． 化合物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で飢餓培地を用いて１：２
０に希釈する。対照ウエルで使用するために，ジメチルスルホキシドを１：２０
に希釈する。 ８． ９６ウエル細胞培養プレートから飢餓培地を除去し，１６２μｌの新たに
調製した飢餓培地を各ウエルに加える。 ９． １：２０に希釈された化合物希釈物１８μｌ（工程７より）を各ウエルに
加え，１：２０ジメチルスルホキシド希釈物を対照ウエルに加え（＋／−ＶＥＧ
Ｆ），細胞刺激の後，１：２００の最終希釈とする。最終ジメチルスルホキシド
は０．５％である。プレートを３７℃，５％ＣＯ2で２時間インキュベートする
。 １０． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合抗体をＥＬＩ
ＳＡプレートから除去する。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７．０
で３回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体およ
び気泡を除去する。 １１． ウエルあたり１５０μｌのＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ
７．０でプレートをブロッキングする。プレートをマイクロタイタープレート振
盪器で振盪しながら，３０分間インキュベートする。 １２． プレートを工程１０で記載したように３回洗浄する。 １３． ０．５μｇ／ウエルのアフィニティー精製抗ＦＬＵ−１ポリクローナル
ウサギ抗血清を加える。ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミンｐＨ７．０で最終
容量を１５０μｌ／ウエルとする。プレートを振盪しながら３０分間インキュベ
ートする。 １４． 細胞に１８０μｌの飢餓培地を加え，２０μｌ／ウエルの１０．０ｍＭ
オルトバナジウム酸ナトリウムおよび５００ｎｇ／ｍｌＶＥＧＦ（最終濃度；ウ
エルあたり１．０ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウムおよび５０ｎｇ／ｍｌＶＥ
ＧＦ）で３７℃，５％ＣＯ2で８分間細胞を刺激する。陰性対照ウエルには飢餓
培地のみを加える。 １５． ８分後，培地を細胞から除去し，２００μｌ／ウエルのＰＢＳで１回洗
浄しなければならない。 １６． １５０μｌ／ウエルのＨＮＴＧ中で室温で５分間振盪しながら細胞を溶
解させる。ＨＮＴＧ配合物はオルトバナジウム酸ナトリウム，ピロリン酸ナトリ
ウムおよびＥＤＴＡを含む。 １７． ＥＬＩＳＡプレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 １８． 細胞溶解物を細胞プレートからＥＬＩＳＡプレートに移し，振盪しなが
ら２時間インキュベートする。細胞溶解物を移すには，ウエルを掻きながらピペ
ットアップおよびダウンを行う。 １９． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２０． ＥＬＩＳＡプレートを０．０２μｇ／ウエルのＴＢＳＷ＋０５％エタノ
ールアミン中のＵＢ４０とともにインキュベートする。最終容量を１５０μｌ／
ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２１． プレートを工程１０に記載したように３回洗浄する。 ２２． ＥＬＩＳＡプレートを，ＴＢＳＷ＋０．５％エタノールアミン，ｐＨ７
．０中で１：１０，０００に希釈したＥＩＡ等級ヤギ抗マウスＩｇＧコンジュゲ
ート西洋ワサビペルオキシダーゼとともにインキュベートする。最終容量を１５
０μｌ／ウエルとする。振盪しながら３０分間インキュベートする。 ２３． 工程１０で記載したようにプレートを洗浄する。 ２４． １００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルに加える。振盪しながら１
０分間インキュベートする。 ２５． １００μｌの０．２ＭＨＣｌを０．１ＭＨＣｌ最終濃度となるように加
えて，発色反応を停止する。室温で１分間振盪する。ゆっくりした空気の流れで
気泡を除去し，ＥＬＩＳＡプレートをＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍ
で読む。
【０３０６】実施例１０６：ＧＳＴ−ＦＬＫ−１バイオアッセイ このアッセイは，ポリｇｌｕ，ｔｙｒペプチドにおけるＧＳＴ−Ｆｌｋｌのチ
ロシンキナーゼ活性を分析する。
【０３０７】材料および試薬： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
Ｎｏ．５８０５−９６） ２．ポリｇｌｕｔｙｒ４：１，ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｅ（Ｓｉｇｍａカタログ
＃Ｐ０２７５）。滅菌ＰＢＳ中に１ｍｇ／ｍＬのポリｇｌｕｔｙｒを調製し，１
ｍｌアリコート中で−２０℃で保存する。 ３．ポリｇｌｕｔｙｒ（ｐＥＹ）被覆アッセイプレートの調製：１００μｌＰＢ
Ｓ中の２μｇ／ウエルのポリ（ｇｌｕ，ｔｙｒ）（ｐＥＹ）を加え，室温で２時
間保持するか，４℃で一夜保持する。プレートをよく覆って蒸発を防ぐ。 ４．ＰＢＳ緩衝液：１Ｌにつき，０．２ｇＫＨ2ＰＯ4，１．１５ｇＮａ2ＨＰＯ4 ，０．２ｇＫＣｌおよび８ｇＮａＣｌを約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。
すべての試薬が溶解したとき，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。ｄＨ2Ｏで総
容量を１Ｌとする。 ５．ＰＢＳ−Ｔｗ緩衝液：１ＬのＰＢＳ緩衝液に１．０ｍｌＴｗｅｅｎ２０を加
える。溶解するまで撹拌する。 ６．ＴＢＢ−ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１．２１ｇＴＲＩＳ，８．７７
ｇＮａＣｌ，１ｍｌＴＷＥＥＮ−２０を約９００ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。
ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する。１０ｇＢＳＡを加え，撹拌して溶解させる。
ｄＨ2Ｏで総容量を１Ｌとする。濾過して粒子状物質を除去する。 ７．１％ＢＳＡ，ＰＢＳ中：１ｘ作業溶液を作成するためには，１０ｇＢＳＡを
約９９０ｍｌのＰＢＳ緩衝液に加え，撹拌して溶解させる。ＰＢＳ緩衝液で総容
量を１Ｌに調節し，濾過して，粒子状物質を除去する。 ８．５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５ ９．ｓｆ９組換えバキュロウイルストランスフォーメーションから精製したＧＳ
Ｔ−Ｆｌｋｌｃｄ。 １０．４％ＤＭＳＯ，ｄＨ2Ｏ中 １１．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中 １２．４０ｍＭＭｎＣｌ2 １３．キナーゼ希釈緩衝液（ＫＤＢ）：１０ｍｌＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５），１
ｍｌ５ＭＮａＣｌ，４０μｌの１００ｍＭＮａＶＯ4および０．４ｍｌの５％Ｂ
ＳＡ（ｄＨ2Ｏ中）を８８．５６ｍｌのｄＨ2Ｏ中で混合する。 ．１４．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２ １５．ＥＤＴＡ：１４．１２ｇエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を約７０ｍ
ｌｄＨ2Ｏに混合する。ＥＤＴＡが溶解するまで１０ＮＮａＯＨを加える。ｐＨ
を８．０に調節する。ｄＨ2Ｏで総容量を１００ｍｌに調節する。 １６．第１抗体希釈緩衝液：１０ｍｌのＰＢＳ緩衝液中５％ＢＳＡを８９．５ｍ
ｌのＴＢＳＴｗと混合する。 １７．西洋ワサビペルオキシダーゼとコンジュゲートした抗ホスホチロシンモノ
クローナル抗体（ＰＹ９９ＨＲＰ，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈ） １８．２，２’−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−スルホン酸（
ＡＢＴＳ，Ｍｏｓｓ，Ｃａｔ．Ｎｏ．ＡＢＳＴ） １９．１０％ＳＤＳ
【０３０８】方法： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレートを無菌ＰＢＳ中の２μｇの
ポリＥＹペプチドで，材料および試薬の工程３に記載されるように被覆する。 ２．プレートを逆さにすることにより未結合液体をウエルから除去する。ＴＢＳ
Ｔで１回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過剰の液体を
除去する。 ３．１００μｌの１％ＢＳＡ（ＰＢＳ中）を各ウエルに加える。振盪しながら室
温で１時間インキュベートする。 ４．工程２を繰り返す。 ５．ウエルを５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）（１５０μｌ／ウエル）に浸漬
する。 ６．試験化合物を９６−ウエルポリプロピレンプレート中でｄＨ2Ｏ／４％ＤＭ
ＳＯで所望の最終アッセイ濃度の４倍に希釈する。 ７．２５μｌの希釈試験化合物をＥＬＩＳＡプレートに加える。対照ウエルには
，２５μｌのｄＨ2Ｏ／４％ＤＭＳＯを加える。 ８．２５μｌの４０ｍＭＭｎＣｌ2および４ｘＡＴＰ（２μＭ）を各ウエルに加
える。 ９．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。 １０．ＧＳＴ−Ｆｌｋｌを０．００５μｇ（５ｎｇ）／ウエルでＫＤＢで希釈す
る。５０ｍｌのＫＤＢにつき，１００μｌの０．０５０ｍｇ／ｍＬＧＳＴ−Ｆｌ
ｋｌ酵素を加える。 １１．５０μｌの希釈酵素を各ウエルに加える。 １２．振盪しながら室温で１５分間インキュベートする。 １３．５０μｌの２５０ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）を加えることにより反応を
停止する。 １４．ＴＢＳＴで３回洗浄し，プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過剰
の液体を除去する。 １５．抗体希釈緩衝液中で１：５，０００に希釈した１００μｌ／ウエルの抗ホ
スホチロシンＨＲＰコンジュゲートを加える。振盪しながら室温で９０分間イン
キュベートする。 １６．工程１４と同様に洗浄する。 １７．１００μｌの室温のＡＢＴＳ溶液を各ウエルに加える。 １８．振盪しながら１０−１５分間インキュベートする。泡を除去する。 １９．２０μｌの１０％ＳＤＳを各ウエルに加えることにより反応を停止する。 ２０．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１
０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭで結果を読む。
【０３０９】実施例１０７：ＰＹＫ２バイオアッセイ このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイにおいて，ＨＡエピトープタグ付
け全長ｐｙｋ２（ＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ）のインビトロキナーゼ活性を測定する
。
【０３１０】材料および試薬： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
＃２５８０５−９６） ２．１２ＣＡ５モノクローナル抗ＨＡ抗体 ３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１
３００ＥＢ） ４．ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌにつき，８．７６６ｇＮａＣｌ，６．０５７ｇＴＲＩ
Ｓおよび１ｍｌの０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００を約９００ｍｌｄＨ2Ｏ中で
混合する。ｐＨを７．２に調節し，容量を１Ｌとする。 ５．ブロッキング緩衝液：１Ｌにつき，１００ｇ１０％ＢＳＡ，１２．１ｇ１０
０ｍＭＴＲＩＳ，５８．４４ｇ１ＭＮａＣｌおよび１０ｍＬの１％ＴＷＥＥＮ２
０を混合する。 ６．ｓｆ９細胞溶解物からのＦＬ．ｐｙｋ２−ＨＡ ７．４％ＤＭＳＯ，ＭｉｌｌｉＱｕｅＨ2Ｏ中 ８．１０ｍＭＡＴＰ，ｄＨ2Ｏ中 ９．１ＭＭｎＣｌ2 １０．１ＭＭｇＣｌ2 １１．１Ｍジチオスレイトール（ＤＴＴ） １２．１０Ｘキナーゼ緩衝液リン酸化：５．０ｍｌ１ＭＨｅｐｅｓ（ｐＨ７．５
），０．２ｍｌ１ＭＭｎＣｌ2，１．０ｍｌ１ＭＭｇＣｌ2，１．０ｍｌ１０％Ｔ
ｒｉｔｏｎＸ−１００を２．８ｍｌｄＨ2Ｏ中で混合する。使用直前に０．１ｍ
ｌ１ＭＤＴＴを加える。 １３．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ カタログ＃ＡＳ−７２０９２） １４．ＥＤＴＡ １５．ビオチンコンジュゲート化抗ホスホチロシンｍａｂ（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｃ．，クローン４Ｇ１０；カタログ＃１６−１
０３，シリアル＃１４４９５） １６．Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ試薬（アビジンペルオキシダ
ーゼコンジュゲート，Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒｏｔｏｒｉｅｓ（ＰＫ−６１０
０） １７．ＡＢＴＳ溶液：１９．２１ｇのクエン酸および３５．４９ｇのＮａ2ＨＰ
Ｏ4を約９００ｍＬのｄＨ2Ｏ中で混合する。リン酸でｐＨを４．０に調節する。
５または１０ｇのＡＢＳＴを加える。すべて溶解したときに濾過する。 １８．過酸化水素３０％溶液 １９．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2：使用の５分前に１５ｍＬのＡＢＴＳ溶液と３μｌの３
０％Ｈ2Ｏ2を混合する。 ２０．０．２ＭＨＣｌ
【０３１１】方法： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１００μｌＰＢＳ中の０．
５μｇ／ウエルの１２ＣＡ５抗ＨＡ抗体で被覆する。４℃で一夜保存する。 ２．プレートを逆さにすることにより未結合ＨＡ抗体をウエルから除去する。プ
レートをｄＨ2Ｏで洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて，過
剰の液体を除去する。 ３．１５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら室温で
１時間インキュベートする。 ４．プレートをＴＢＳ−Ｔで洗浄する。 ５．溶解物をＰＢＳ中で希釈する（１．５μｇ溶解物／１００μｌＰＢＳ）。 ６．１００μｌの希釈溶解物を各ウエルに加える。室温で１時間振盪する。 ７．工程４と同様に洗浄する。 ８．５０μｌの２Ｘキナーゼ緩衝液を捕捉ｐｙｋ２−ＨＡを含むＥＬＩＳＡプレ
ートに加える。 ９．２５μｌの４％ＤＭＳＯ中４０μＭ試験化合物を各ウエルに加える。対照ウ
エルには４％ＤＭＳＯのみを用いる。 １０．２５μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。 １１．２５μｌの２０μＭＡＴＰをすべてのウエルに加える。振盪しながら１０
分間インキュベートする。 １２．２５μｌの５００ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）をすべてのウエルに加える
ことにより反応を停止する。 １３．工程４と同様に洗浄する。 １４．１００μｌのビオチンコンジュゲート化抗ホスホチロシンｍａｂ（１：５
０００希釈，ブロッキング緩衝液中）を各ウエルに加える。振盪しながら室温で
３０分間インキュベートする。 １５．ＶｅｃｔａｓｔａｉｎＡＢＣ試薬を作成する。アビジンとビオチニル化Ｈ
ＲＰを完全にカップリングさせるために３０分間放置する。１滴（または５０μ
ｌ）の試薬Ａを１５ｍＬのブロッキング緩衝液に加える。管を数回逆さにするこ
とにより混合する。１滴（または５０μｌ）の試薬Ｂを加え，再び混合する。ビ
オチン−４Ｇ１０抗ホスホチロシンをアッセイプレートでインキュベートする間
，ＡＢＣ試薬を室温で混合させる。 １６．工程４と同様に洗浄する。 １７．調製したＶｅｃｔａｓｔａｉｎペルオキシダーゼコンジュゲートを１００
μｌ／ウエルで加える。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 １８．工程４と同様に洗浄し，次にＰＢＳで１回洗浄する。 １９．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ２Ｏ２溶液を各ウエルに加える。 ２０．振盪しながら１０−１５分間インキュベートする。泡を除去する。 ２１．必要ならば，１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣＩを加えることにより反
応を停止する。 ２２．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタ４１
０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０３１２】実施例１０８：ＦＧＦＲ１バイオアッセイ このアッセイを用いて，ＥＬＩＳＡアッセイでＦＧＦ１−Ｒのインビトロキナ
ーゼ活性を測定する。
【０３１３】材料および試薬： １．Ｃｏｓｔａｒ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃
３３６９） ２．ポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙｒ）（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ｐ０２７５） ３．ＰＢＳ（Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−１３００ＥＢ） ４．５０ｍＭＨｅｐｅｓ緩衝液溶液 ５．ブロッキング緩衝液（５％ＢＳＡ／ＰＢＳ） ６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１ ７．キナーゼ希釈緩衝液：５００μｌの１ＭＨｅｐｅｓ（ＧＩＢＣＯ），２０μ
ｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳ，１０μｌの１００ｍＭオルトバナジン酸ナトリウムお
よび５０μｌの５ＭＮａＣｌを混合する。 ８．１０ｍＭＡＴＰ ９．１ＭＭｎＣｌ2 １０．ＡＴＰ／ＭｎＣｌ2リン酸化ミックス：２０μｌのＡＴＰ，４００μｌの
１ＭＭｎＣｌ2および９．５６ｍｌのｄＨ2Ｏを混合する。 １１．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２） １２．０．５ＭＥＤＴＡ １３．０．０５％ＴＢＳＴ ５００μｌのＴＷＥＥＮを１リットルのＴＢＳに加える。 １４．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン血清 １５．ヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシダーゼコンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃ
ｅ，カタログ＃ＡＬＩ０４０４） １６．ＡＢＴＳ溶液 １７．３０％過酸化水素 １８．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2
【０３１４】方法： １．Ｃｏｓｔａｒ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを１μｇ／ウエルの１００μｌ
ＰＢＳ中ポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）で被覆する。４℃で一夜保存する。 ２．被覆したプレートをＰＢＳで１回洗浄する。 ３．１５０μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。
振盪しながら室温で１時間インキュベートする。 ４．プレートをＰＢＳで２回，次に５０ｍＭＨｅｐｅｓで１回洗浄する。プレー
トをペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体および泡を除去する。 ５．２５μｌの０．４ｍＭ試験化合物（４％ＤＭＳＯ中），または４％ＤＭＳＯ
単独（対照）をプレートに加える。 ６．精製ＧＳＴ−ＦＧＦＲ１を希釈緩衝液（５μキナーゼ／５０μｌＫＤＢ／ウ
エル）で希釈する。 ７．５０μｌの希釈キナーゼを各ウエルに加える。 ８．２５μｌ／ウエルの新たに調製したＡＴＰ／Ｍｎ＋＋（０．４ｍｌ１ＭＭｎ
Ｃｌ2，４０μｌ１０ｍＭＡＴＰ，９．５６ｍｌｄＨ2Ｏ，新たに調製）を加える
ことによりキナーゼ反応を開始する ９．これは迅速なキナーゼ反応であり，ＡＴＰの添加と同様の様式で２５μｌの
０．５ＭＥＤＴＡを加えることにより停止しなければならない。 １０．プレートを新たなＴＢＳＴで４回洗浄する。 １１．抗体希釈緩衝液を作成する：５０ｍｌにつき，５ｍｌの５％ＢＳＡ，２５
０μｌの５％ミルクおよび５０μｌの１００ｍＭバナジン酸ナトリウムを混合し
，０．０５％ＴＢＳＴで最終容量とする。 １２．１００μｌ／ウエルの抗ホスホチロシン（１：１００００希釈，ＡＤＢ中
）を加える。振盪しながら室温で１時間インキュベートする。 １３．工程１０と同様に洗浄する。 １４．１００μｌ／ウエルのＢｉｏｓｏｕｒｃｅヤギ抗ウサギＩｇＧペルオキシ
ダーゼコンジュゲート（１：６０００希釈，ＡＤＢ中）を加える。振盪しながら
室温で１時間インキュベートする。 １５．工程１０と同様に洗浄し，次にＰＢＳで洗浄して泡および過剰のＴＷＥＥ
Ｎを除去する。 １６．１００μｌのＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液を各ウエルに加える。 １７．振盪しながら１０−２０分間インキュベートする。泡を除去する。 １８．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００Ｅｌｉｓａリーダーで，試験フィルタ４１
０ｎＭ，参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０３１５】実施例１０９：細胞性ＨＥＲ−２キナーゼアッセイ このアッセイを用いて，全細胞におけるＨＥＲ−２キナーゼ活性をＥＬＩＳＡ
フォーマットで測定する。
【０３１６】材料および試薬： １．ＤＭＥＭ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１１９６５−０９２） ２．ウシ胎児血清（ＦＢＳ，ＧＩＢＣＯカタログ＃１６０００−０４４），水浴
中で５６℃で３０分間熱不活性化する。 ３．トリプシン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５２００−０５６） ４．Ｌ−グルタミン（ＧＩＢＣＯカタログ＃２５０３０−０８１） ５．ＨＥＰＥＳ（ＧＩＢＣＯカタログ＃１５６３０−０８０） ６．成長培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，５５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍｌＨＥ
ＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合する。 ７．血清飢餓培地：５００ｍｌＤＭＥＭ，２．５ｍｌ熱不活性化ＦＢＳ，１０ｍ
ｌＨＥＰＥＳおよび５．５ｍｌＬ−グルタミンを混合物する。 ８．ＰＢＳ ９．平底９６−ウエル組織培養マイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇカタ
ログ＃２５８６０） １０．１５ｃｍ組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ＃０８７５７１４８） １１．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥＬＩＳＡプレート １２．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート １３．Ｃｏｓｔａｒトランスファーカートリッジ，Ｔｒａｎｓｔａｒ９６（Ｃｏ
ｓｔａｒカタログ＃７６１０）用 １４．ＳＵＭＯ１：モノクローナル抗ＥＧＦＲ抗体 １５．ＴＢＳＴ緩衝液 １６．ブロッキング緩衝液：５％カーネーションインスタントミルク，ＰＢＳ中
１７．ＥＧＦリガンド：ＥＧＦ−２０１，Ｓｈｉｎｋｏ Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ｊ
ａｐａｎ。粉体を１００μｌの１０ｍＭＨＣｌに懸濁する。１００μｌの１０ｍ
ＭＮａＯＨを加える。８００μｌのＰＢＳを加え，エッペンドルフチューブに移
し，使用するまで−２０℃で保存する。 １８．ＨＮＴＧ溶解緩衝液：保存５ＸＨＮＴＧ用には，２３．８３ｇＨｅｐｅｓ
，４３．８３ｇＮａＣｌ，５００ｍｌグリセロールおよび１００ｍｌＴｒｉｔｏ
ｎＸ−１００および十分なｄＨ2Ｏを混合して１Ｌの溶液とする。１ＸＨＮＴＧ
＊用には，２ｍｌＨＮＴＧ，１００Ｌ０．１ＭＮａ3ＶＯ4，２５０μｌ０．２Ｍ
Ｎａ4Ｐ2Ｏ7および１００μｌＥＤＴＡを混合する。 １９．ＥＤＴＡ ２０．Ｎａ3ＶＯ４．保存溶液を作成するためには，１．８４ｇＮａ3ＶＯ4を９
０ｍｌｄＨ2Ｏと混合する。ｐＨを１０に調節する。電子レンジで１分間沸騰さ
せる（溶液は透明になる）。室温に冷却する。ｐＨを１０に調節する。ｐＨが１
０で安定するまで加熱／冷却のサイクルを繰り返す。 ２１．２００ｍＭＮａ4Ｐ2Ｏ7 ２２．ホスホチロシン特異的ウサギポリクローナル抗血清（抗Ｐｔｙｒ抗体） ２３．アフィニティー精製抗血清，ヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体，ペルオキシダーゼ
コンジュゲート（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅカタログ＃ＡＬＩ０４０４） ２４．ＡＢＴＳ溶液 ２５．３０％過酸化水素溶液 ２６．ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2 ２７．０．２ＭＨＣｌ
【０３１７】方法： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートをＰＢＳ中１．０μｇ／ウエ
ルのＳＵＭ０１で被覆する。最終容量１００μｌ／ウエル。４℃で一夜保存する
。 ２．使用の日に，被覆緩衝液を除去し，プレートをｄＨ2Ｏで３回，ＴＢＳＴ緩
衝液で１回洗浄する。このアッセイにおいては，特に記載しない限り，すべての
洗浄はこのように行う。 ３．１００μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。プレートを振盪しな
がら室温で３０分間インキュベートする。使用直前にプレートを洗浄する。 ４．このアッセイにはＥＧＦｒ／ＨＥＲ−２キメラ／３Ｔ３−Ｃ７細胞株を用い
る。 ５．８０−９０％コンフルエントの皿を選択する。トリプシン処理により細胞を
回収し，１０００ｒｐｍで室温で５分間遠心分離する。 ６．細胞を血清飢餓培地に懸濁し，トリパンブルーで計数する。９０％より高い
生存度が必要である。細胞を血清飢餓培地に２，５００細胞／ウエルの密度で，
９０μｌ／ウエルで９６ウエルマイクロタイタープレートに播種する。播種した
細胞を３７℃，５％ＣＯ2で一夜インキュベートする。 ７．播種の２日後にアッセイを開始する。 ８．試験化合物希釈： 一次スクリーニング： 試料は血清飢餓ＤＭＥＭを含むポリプロピレンプレート中で直接希釈する。この
希釈は，スクリーニングする試料により，１：１０またはそれより高い。対照ウ
エルには同量のＤＭＳＯを加える。次にすべてのウエルを細胞プレートに１：１
０希釈で移す（１０μｌの試料および培地を９０μｌの血清飢餓培地に加える）
。最終ＤＭＳＯ濃度は１％またはそれ未満となる。 二次スクリーニング： １０種類の試料をポリプロピレンプレートの列Ａのウエル２−１１に加える。こ
れらのウエルはストレート飢餓ＤＭＥＭを含む。１：１０希釈のためには，１０
μｌの試験化合物溶液を９０μｌの培地中で用いる。残りのウエル（対照を含む
）にはＤＭＳＯ／培地混合物が含まれるであろう。この混合物中のＤＭＳＯのパ
ーセンテージは，初期希釈因子，この例では１：１０により決定する。したがっ
て，ＤＭＳＯ濃度は１０％である。列Ａからの同量の薬剤および培地をＤＭＳＯ
および培地を含む列Ｂに加える。次に同量を取り出し列Ｃに加え，以下同様にす
る。このようにして１：２希釈を作成する。次にすべてのウエルを１：１０希釈
で細胞プレートに移す（１０μｌの試料および培地を９０μｌの血清飢餓培地に
加える）。最終ＤＭＳＯ濃度は１％またはそれ未満となる。 ９．５％ＣＯ2，３７℃で２時間インキュベートする。 １０．保存ＥＧＦ（１６．５μＭ）を暖めたＤＭＥＭで１５０ｎＭに希釈するこ
とによりＥＧＦリガンドを調製する。 １１．１００μｌ／ウエルに十分な量のＨＮＴＧ＊を新たに調製する。氷上に置
く。 １２．試験化合物とともに２時間インキュベートした後，調製したＥＧＦリガン
ドを細胞に５０μｌ／ウエルで加える。最終濃度は５０ｎＭである。陽性対照ウ
エルには同量のＥＧＦを加える。陰性対照にはＥＧＦを加えない。３７℃で１０
分間インキュベートする。 １３．試験化合物，ＥＧＦ，およびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで１回洗
浄する。 １４．ＨＮＴＧ＊を細胞に１００μｌ／ウエルで移す。氷上に５分間置く。この
間にブロッキング緩衝液をＥＬＩＳＡプレートから除去し，洗浄する。 １５．マイクロピペッターにしっかり固定したピペットチップを用いて細胞をプ
レートから掻き取り，ＨＮＴＧ＊溶解緩衝液を繰り返し吸引分配することにより
細胞材料をホモジナイズする。溶解物を，被覆しブロッキングし洗浄したＥＬＩ
ＳＡプレートに移す。あるいは，Ｃｏｓｔａｒトランスファーカートリッジを用
いて溶解物をプレートに移す。 １６．振盪しながら室温で１時間インキュベートする。 １７．溶解物を除去し，洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗体（１：３００
０，ＴＢＳＴ中）をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。 １８．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 １９．抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，洗浄する。新たに希釈したＢＩＯＳＯＵＲＣＥ
抗体をＥＬＩＳＡプレートに加える（１：８０００，ＴＢＳＴ中，１００μｌ／
ウエル）。 ２０．振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ２１．ＢＩＯＳＯＵＲＣＥ抗体を除去し，洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ／
Ｈ2Ｏ2溶液をＥＬＩＳＡプレートに１００μｌ／ウエルで加える。 ２２．振盪しながら５−１０分間インキュベートする。泡を除去する。 ２３．１００μｌ／ウエルの０．２ＭＨＣｌを加えて反応を停止する。 ２４．ＤｙｎａｔｅｃｈＭＲ７０００ＥＬＩＳＡリーダーで，試験フィルタセッ
ト４１０ｎＭおよび参照フィルタ６３０ｎＭでアッセイを読む。
【０３１８】実施例１１０：ＣＤＫ２／サイクリンＡアッセイ 以下のプロトコルは，ＳＰＡにおけるｃｄｋ２／サイクリンＡの蛋白質セリン／
トレオニンキナーゼ活性を分析するために用いる方法を記載する。この方法はま
た，キナーゼ活性の阻害または活性化についての薬剤の初期スクリーニングのプ
ロトコルも記載する。
【０３１９】材料および試薬： １．Ｗａｌｌａｃ９６−ウエルポリエチレンテレフタレート（ｆｌｅｘｉ）プレ
ート（Ｗａｌｌａｃカタログ＃１４５０−４０１） ２．Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒｅｄｉｖｕｅ［γ33Ｐ］ＡＴＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍカ
タログ＃ＡＨ９９６８） ３．Ａｍｅｒｓｈａｍストレプトアビジン被覆ポリビニルトルエンＳＰＡビーズ
（Ａｍｅｒｓｈａｍカタログ＃ＲＰＮＱ０００７）。ビーズはＰＢＳ中でマグネ
シウムまたはカルシウムなしで２０ｍｇ／ｍｌで再構成しなければならない。 ４．Ｓｆ９細胞から精製した活性化ｃｄｋ２／サイクリンＡ酵素複合体。２００
μｌアリコート中，−８０℃ ５．ビオチニル化ペプチド基質（ｄｅｂ−ｔｉｄｅ）：ペプチドビオチン−Ｘ−
ＰＫＴＰＫＫＡＫＫＬをｉｎｄＨ２Ｏ中に５ｍｇ／ｍＬの濃度で溶解する。１０
０μｌアリコート中で−８０℃で保存する。 ６．ペプチド／ＡＴＰ混合物：
【表１９】 ７．２．５Ｘキナーゼ緩衝液
【表２０】 ８．１０ｍＭＡＴＰ（Ｓｉｇｍａカタログ＃Ａ−５３９４） ９．１ＭＴｒｉｓ，ｐＨ７．４ １０．１ＭＭｇＣｌ２ １１．１ＭＤＴＴ １２．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水），マグネシウムまたはカルシウ
ムなし（Ｇｉｂｃｏカタログ＃１４１９０−１４４） １３．ＥＤＴＡ（１４．１２ｇ／１００ｍＬ） １４．停止溶液：
【表２１】
【０３２０】方法： １．試験化合物の溶液を５％ＤＭＳＯ中に所望の最終濃度の５倍で調製する。各
ウエルに１０μｌを加える。陰性対照用には，１０μｌの５％ＤＭＳＯ飲みをウ
エルに加える。 ２．５μｌのｃｄｋ２／サイクリンＡ溶液を２．１ｍｌ２ｘキナーゼ緩衝液で希
釈する。 ３．２０μｌの酵素を各ウエルに加える。 ４．１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。 ５．キナーゼ反応を開始させるため，２０μｌのペプチド／ＡＴＰ混合物をハン
ドピペットまたはＴｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用いて加える。実験
ベンチの上で反応性シールドの後に１時間放置する。 ６．２００μｌの停止溶液をＴｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐまたはハン
ドピペットを用いて各ウエルに加える。 ７．少なくとも１０分間保持する。 ８．プレートを約２３００ｒｐｍで３−５分間回転させる。 ９．Ｔｒｉｌｕｘリーダーでプロトコル＃２８（ＢｒｉａｎＳＰＡアッセイ）を
用いてプレートを計数する。
【０３２１】実施例１１１：ＰＤＧＦ−ＲＥＬＩＳＡ すべての細胞培養培地，グルタミンおよびウシ胎児血清は，特に記載しないか
ぎり，Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌ
ａｎｄ，ＮＹ）から購入した。すべての細胞は，９０−９５％空気および５−１
０％ＣＯ2の湿潤雰囲気下で３７℃で成長させた。すべての細胞株は，日常的に
１週間に２回サブカルチャーし，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉｂｃｏ）によりマイ
コプラズマがないことを確認した。
【０３２２】 ＥＬＩＳＡアッセイのためには，細胞（Ｕ１２４２，Ｊｏｓｅｐｈ Ｓｃｈｌ
ｅｓｓｉｎｇｅｒ，ＮＹＵから入手）を成長培地（ＭＥＭ，１０％ＦＢＳ，ＮＥ
ＡＡ，１ｍＭ ＮａＰｙｒおよび２ｍＭＧＬＮ含有）で８０−９０％コンフルエ
ントまで成長させ，９６ウエル組織培養プレートに０．５％血清中で，ウエルあ
たり２５，０００−３０，０００細胞を播種した。０．５％血清含有培地で一夜
インキュベーションした後，細胞を無血清培地に移し，５％ＣＯ2，３７℃イン
キュベーター中で試験化合物で２時間処理した。次に細胞をリガンドで５−１０
分間刺激し，ＨＮＴＧ（２０ｍＭＨｅｐｅｓ，１５０ｍＭＮａＣｌ，１０％グリ
セロール，５ｍＭＥＤＴＡ，５ｍＭＮａ3ＶＯ4，０．２％ＴｒｉｔｏｎＸ−１０
０，および２ｍＭＮａＰｙｒ）で溶解した。細胞溶解物（ＰＢＳ中０．５ｍｇ／
ウエル）をレセプター特異的抗体であらかじめ被覆し，ＴＢＳＴ（５０ｍＭＴｒ
ｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．２，１５０ｍＭＮａＣｌおよび０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−
１００）中５％ミルクで室温で３０分間ブロッキングしたＥＬＩＳＡプレートに
移した。溶解物を振盪しながら室温で１時間インキュベートした。プレートをＴ
ＢＳＴで４回洗浄し，次にポリクローナル抗ホスホチロシン抗体とともに室温で
３０分間インキュベートした。プレートをＴＢＳＴで４回すすぐことにより過剰
の抗ホスホチロシン抗体を除去した。ＥＬＩＳＡプレートにヤギ抗ウサギＩｇＧ
抗体を室温で３０分間加え，次にＴＢＳＴでさらに４回すすいだ。ＡＢＴＳ（１
００ｍＭクエン酸，２５０ｍＭＮａ2ＨＰＯ4および０．５ｍｇ／ｍＬ２，２'−
アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン−６−硫酸）），およびＨ2Ｏ2（１
．２ｍＬ３０％Ｈ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）をＥＬＩＳＡプレートに加
えて発色を開始させた。ＡＢＴＳ添加の約１５から３０分後，４１０ｎｍおよび
６３０ｎｍの参照波長における吸光度を記録した。
【０３２３】実施例１１２：ＩＧＦ−ＩレセプターＥＬＩＳＡ 以下のプロトコルを用いて，ＩＧＦ−Ｉレセプター上のホスホチロシンレベル
を測定することができ，これはＩＧＦ−Ｉレセプターチロシンキナーゼ活性を示
す。
【０３２４】材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． このアッセイにおいて用いる細胞株は，ＩＧＦ−１レセプターを過剰発現
するように遺伝子工学処理された細胞株３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒである。 ｂ． ＮＩＨ３Ｔ３／ＩＧＦ−１Ｒを，５％ＣＯ2，３７℃のインキュベーター
で成長させる。成長培地はＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ（熱不活性化）＋２ｍＭＬ−
グルタミンである。 ｃ． アフィニティー精製抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体１７−６９ ｄ． Ｄ−ＰＢＳ： ＫＨ2ＰＯ4 ０．２０ｇ／ｌ Ｋ2ＨＰＯ4 ２．１６ｇ／ｌ ＫＣｌ ０．２０ｇ／ｌ ＮａＣｌ ８．００ｇ／ｌ（ｐＨ７．２） ｅ． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴプラス５％ミルク（Ｃａｒｎａｔｉｏｎイ
ンスタント脱脂乾燥ミルク） ｆ． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １０Ｎ） ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１％ ＴＢＳ（１０Ｘ）の保存溶液を調製し，希釈の間に緩衝液にＴｒｉｔｏｎＸ−１
００を加える。 ｇ． ＨＮＴＧ緩衝液： ＨＥＰＥＳ ２０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ（ｐＨ７．２／ＨＣｌ １Ｎ） グリセロール １０％ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．２％ 保存溶液（５Ｘ）を調製し，４℃で保存する。 ｈ． ＥＤＴＡ／ＨＣｌ：０．５ＭｐＨ７．０（ＮａＯＨ），１００Ｘ保存液と
して ｉ． Ｎａ3ＶＯ4：１００Ｘ保存液として０．５Ｍ，アリコートは−８０℃で保
存する。 ｊ． Ｎａ4Ｐ2Ｏ7：１００Ｘ保存液として０．２Ｍ ｋ． インスリン様成長因子−１，Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｃａｔ＃Ｇ５１１１） ｌ．ウサギポリクローナル抗ホスホチロシン抗血清 ｍ． ヤギ抗ウサギＩｇＧ，ＰＯＤコンジュゲート（検出抗体），Ｔａｇｏ（Ｃ
ａｔ．Ｎｏ．４５２０，ＬｏｔＮｏ．１８０２）：Ｔａｇｏ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒ
ｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｎ． ＡＢＴＳ（２，２'−アジノビス（３−エチルベンズチアゾリン硫酸））
溶液： クエン酸 １００ｍＭ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２５０ｍＭ（ｐＨ４．０／１ＮＨＣｌ） ＡＢＴＳ ０．５ｍｇ／ｍｌ ＡＢＴＳ溶液は暗所で４℃で保存しなければならない。溶液は緑色に変色したと
きは廃棄しなければならない。 ｏ． 過酸化水素：３０％溶液を暗所で４℃で保存する。
【０３２５】方法 以下のすべての工程は，特に記載しないかぎり，室温で実施する。すべてのＥ
ＬＩＳＡプレート洗浄は，プレートを水道水で３回すすぎ，ＴＢＳＴで１回すす
ぐことにより実施する。プレートを軽くたたいてペーパータオルで乾燥させる。
【０３２６】Ａ．細胞播種 ： １． 組織培養皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５０２０−１００）で８０−９０％コンフ
ルエントまで成長させた細胞を，トリプシン−ＥＤＴＡ（０．２５％，０．５ｍ
ｌ／Ｄ−１００，ＧＩＢＣＯ）で回収する。 ２． 細胞を新鮮なＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋２ｍＭＬ−グルタミン中に再懸濁
し，９６ウエル組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，２５８０６−９６）に２０
，０００細胞／ウエル（１００μｌ／ウエル）で移す。１日インキュベートし，
次に培地を無血清培地（９０／μｌ）で置き換え，５％ＣＯ2，３７℃で一夜イ
ンキュベートする。
【０３２７】Ｂ．ＥＬＩＳＡプレートコーティングおよびブロッキング ： １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ２５８０５−９６）を，１００μｌ
ＰＢＳ中の抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体で０．５μｇ／ウエルで少なくとも２時間コーテ
ィングする。 ２． コーティング溶液を除去し，１００μｌのブロッキング緩衝液で置き換え
，３０分間振盪する。ブロッキング緩衝液を除去し，溶解物を加える直前にプレ
ートを洗浄する。
【０３２８】Ｃ．アッセイ方法 ： １． 薬剤は，無血清条件で試験する。 ２． 薬剤保存液（１００％ＤＭＳＯ中）を９６ウエルポリプロピレンプレート
中でＤＭＥＭで１：１０に希釈し，１０μｌ／ウエルのこの溶液を細胞に移して
，最終薬剤希釈１：１００，最終ＤＭＳＯ濃度１．０％とする。細胞を５％ＣＯ2 中で３７℃で２時間インキュベートする。 ３． 新鮮な細胞溶解緩衝液（ＨＮＴＧ＊）を調製する。 ＨＮＴＧ ２ｍｌ ＥＤＴＡ ０．１ｍｌ Ｎａ3ＶＯ4 ０．１ｍｌ Ｎａ4（Ｐ2Ｏ7） ０．１ｍｌ Ｈ2Ｏ ７．３ｍｌ ４． 薬剤を２時間インキュベートした後，１０μｌ／ウエルのＰＢＳ中２００
ｎＭＩＧＦ−１リガンドを細胞に移し（最終濃度２０ｎＭ），５％ＣＯ2で３７
℃で１０分間インキュベートする。 ５． 培地を除去し，１００μｌ／ウエルのＨＮＴＧ＊を加え，１０分間振盪す
る。細胞を顕微鏡下で観察して，これらが適切に溶解したか否かを見る。 ６． １２チャネルピペットを用いて細胞をプレートから掻き取り，吸引と分配
を繰り返すことにより溶解物をホモジナイズする。すべての溶解物を抗体コーテ
ィングＥＬＩＳＡプレートに移し，１時間振盪する。 ７． 溶解物を除去し，プレートを洗浄し，抗ｐＴｙｒ（ＴＢＳＴ中１：３，０
００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ８． 抗ｐＴｙｒを除去し，プレートを洗浄し，ＴＡＧＯ（ＴＢＳＴ中１：３，
０００）を１００μｌ／ウエルで移し，３０分間振盪する。 ９． 検出抗体を除去し，プレートを洗浄し，新鮮なＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2（１．２
μｌＨ2Ｏ2を１０ｍｌＡＢＴＳに加える）を１００μｌ／ウエルでプレートに移
して，発色を開始させる。 １０． ＤｙｎａｔｅｃＭＲ５０００で参照波長６３０ｎｍで４１０ｎｍのＯＤ
を測定する。
【０３２９】実施例１１３：ＥＧＦレセプターＥＬＩＳＡ ヒトＥＧＦ−Ｒを発現するよう遺伝子工学処理された細胞中のＥＧＦレセプター
キナーゼ活性を以下に記載するように測定した。
【０３３０】材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ＥＧＦリガンド：保存液濃度＝１６．５μＭ；ＥＧＦ２０１，ＴＯＹＯＢ
Ｏ，Ｃｏ．，Ｌｔｄ．Ｊａｐａｎ ｂ． ０５−１０１（ＵＢＩ）（ＥＧＦＲ細胞外ドメインを認識するモノクロー
ナル抗体） ｃ． 抗ホスホチロシン抗体（抗Ｐｔｙｒ）（ポリクローナル） ｄ． 検出抗体：ヤギ抗ウサギｌｇＧ西洋ワサビペルオキシダーゼコンジュゲー
ト，ＴＡＧＯ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｅ． ＴＢＳＴ緩衝液： Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ７ ５０ｍＭ ＮａＣｌ １５０ｍＭ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ０．１ ｆ． ＨＮＴＧ ５Ｘ保存液： ＨＥＰＥＳ ０．１Ｍ ＮａＣｌ ０．７５Ｍ グリセロール ５０ ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ １．０％ ｇ． ＡＢＴＳ保存液： クエン酸 １００ｍＭ ＮａＶＯ4 ２５０ｍＭ ＨＣｌ（濃） ４．０ｐＨ ＡＢＴＳ* ０．５ｍｇ／ｍｌ 溶液は使用するまで暗所で４℃で保存する。 ｈ． 試薬保存液： ＥＤＴＡ １００ｍＭ ｐＨ７．０ Ｎａ3ＶＯ4 ０．５Ｍ Ｎａ4（Ｐ2０7） ０．２Ｍ
【０３３１】方法 以下のプロトコルを用いた：Ａ．ＥＬＩＳＡプレートのプレコート １． ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ，９６ウエル，Ｃａｔ．＃２５８０
５−９６）をウエルあたりＰＢＳ中０．５μｇ，１５０μｌ最終容量／ウエルの
０５−１０１抗体でコーティングし，４℃で一夜保存する。コーティングしたプ
レートは４℃で保存した場合１０日間まで良好に使用しうる。 ２． 使用の日，コーティング緩衝液を除去し，ブロッキング緩衝液（ＰＢＳ中
５％Ｃａｒｎａｔｉｏｎインスタント脱脂乾燥ミルク）で置き換える。プレート
を振盪しながら室温（約２３℃−２５℃）で３０分間インキュベートする。使用
の直前に，ブロッキング緩衝液を除去し，プレートをＴＢＳＴ緩衝液で４回洗浄
する。
【０３３２】Ｂ．細胞播種 １． このアッセイにはＮＩＨ３Ｔ３／Ｃ７細胞株（Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，ｅｔ
ａｌ．，Ｃｅｌｌ５１：１９９−２０９，１９８７）を用いることができる。 ２． ８０−９０％コンフルエントの皿を実験用に選択する。細胞をトリプシン
処理し，１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地を加えることにより反応を停止させる。細胞
をＤＭＥＭ培地（１０％ＣＳ ＤＭＥＭ培地）中に懸濁し，１０００ｒｐｍで室
温で５分間，１回遠心分離する。 ３． 細胞を播種培地（ＤＭＥＭ，０．５％ウシ血清）に再懸濁し，トリパンブ
ルーを用いて細胞を計数する。９０％を越える生存率が許容範囲である。細胞を
９６ウエルマイクロタイタープレート上で，ＤＭＥＭ培地（０．５％ウシ血清）
中に，ウエルあたり１０，０００細胞の密度でウエルあたり１００μｌで播種す
る。播種した細胞を５％ＣＯ2，３７℃で約４０時間インキュベートする。
【０３３３】Ｃ．アッセイ方法 １． 倒立顕微鏡を用いて，播種した細胞のコンタミネーションを調べる。試験
化合物保存液（ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）をＤＭＥＭ培地中で１：１０に希釈
し，次に５μｌを試験ウエルに移して，１：２００の最終薬剤希釈および１％の
最終ＤＭＳＯ濃度とする。対照ウエルにはＤＭＳＯのみを加える。５％ＣＯ2，
３７℃で１時間インキュベートする。 ２． ＥＧＦリガンドの調製：保存液ＥＧＦを，１０μｌの希釈ＥＧＦ（１：１
２希釈）を移したときに２５ｎＭの最終濃度が得られるように，ＤＭＥＭ中で希
釈する。 ３． ウエルあたり１００μｌに十分なように新鮮なＨＮＴＧ*１０ｍｌを調製
する。ＨＮＴＧ＊は以下のものを含む：ＨＮＴＧ保存液（２．０ｍｌ），ｍｉｌ
ｌｉ−ＱＨ2Ｏ（７．３ｍｌ），ＥＤＴＡ，１００ｍＭ，ｐＨ７．０（０．５ｍ
ｌ），Ｎａ3ＶＯ4０．５Ｍ（０．１ｍｌ）およびＮａ4（Ｐ2Ｏ7），０．２Ｍ（
０．１ｍｌ） ４． 氷上に置く。 ５． 薬剤とともに２時間インキュベーションした後，調製したＥＧＦリガンド
を，ウエルあたり１０μｌで，２５ｎＭの最終濃度となるように細胞に加える。
対照ウエルにはＤＭＥＭのみを加える。振盪しながら室温で５分間インキュベー
トする。 ６． 試験化合物，ＥＧＦおよびＤＭＥＭを除去する。細胞をＰＢＳで２回洗浄
する。ＨＮＴＧ*をウエルあたり１００μｌで細胞に移す。氷上に５分間置く。
その間に，他のＥＬＩＳＡプレートからブロッキング緩衝液を除去し，上述した
ようにＴＢＳＴで洗浄する。 ７． マイクロピペッターにぴったりと固定したピペットチップを用いて，細胞
をプレートからはがし，ＨＮＴＧ*溶解緩衝液を繰り返し吸引および分配するこ
とにより，細胞物質をホモジナイズする。コーティングし，ブロッキングし，洗
浄したＥＬＩＳＡプレートに溶解物を移す。振盪しながら室温で１時間インキュ
ベートする。 ８． 溶解物を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈した抗Ｐｔｙｒ抗
体をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。抗Ｐｔｙｒ抗血清（
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）の存在下で，振盪しながら室温で３０分間インキ
ュベートする。 ９． 抗Ｐｔｙｒ抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに希釈したＴＡ
ＧＯ３０抗ウサギＩｇＧ抗体をＥＬＩＳＡプレートにウエルあたり１００μｌで
移す。振盪しながら室温で３０分間インキュベートする（抗ウサギＩｇＧ抗体：
ＴＢＳＴ中１：３０００希釈）。 １０． 検出抗体を除去し，ＴＢＳＴで４回洗浄する。新たに調製したＡＢＴＳ
／Ｈ2Ｏ2溶液をウエルあたり１００μｌでＥＬＩＳＡプレートに移す。室温で２
０分間インキュベートする（ＡＢＴＳ／Ｈ2Ｏ2溶液：１０ｍｌＡＢＴＳ保存液中
１．２μｌの３０％Ｈ2Ｏ2）。 １１． ５０μｌの５ＮＨ2ＳＯ4を加えることにより反応を停止し（任意），４
１０ｎｍでＯ．Ｄ．を測定する。 １２． 最大ホスホチロシンシグナルは，陰性対照の値を陽性対照の値から差し
引くことにより決定する。次に，陰性対照を差し引いた後，抽出物含有ウエルに
ついてのホスホチロシン含有量のパーセント阻害を計算する。
【０３３４】実施例１１４：Ｍｅｔ自己リン酸化アッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイは，Ｍｅｔレセプター上のＭｅｔ蛋白質チロシンキナーゼレベル
を分析することにより，Ｍｅｔチロシンキナーゼ活性を決定する
【０３３５】材料および試薬 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ＨＮＴＧ（５Ｘ保存溶液）：２３．８３ｇＨＥＰＥＳおよび４３．８３ｇ
ＮａＣｌを約３５０ｍｌｄＨ2Ｏに溶解する。ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを７
．２に調節し，５００ｍｌグリセロールおよび１０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００
を加え，混合し，ｄＨ2Ｏを加えて総容量を１Ｌとする。１Ｘ作業溶液１Ｌを作
成するためには，２００ｍｌの５Ｘ保存溶液を８００ｍｌｄＨ2Ｏに加え，必要
に応じてｐＨを調べて調節し，４℃で保存する。 ｂ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水），Ｇｉｂｃｏ Ｃａｔ．＃４５
０−１３００ＥＢ（１Ｘ溶液） ｃ． ブロッキング緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏ中に，１００ｇＢＳＡ，１２．
１ｇＴｒｉｓ−ｐＨ７．５，５８．４４ｇＮａＣｌおよび１０ｍｌＴｗｅｅｎ−
２０を加え，希釈して総容量１Ｌとする。 ｄ． キナーゼ緩衝液：５００ｍｌｄＨ2Ｏに，１２．１ｇＴＲＩＳ（ｐＨ７．
２），５８．４ｇＮａＣｌ，４０．７ｇＭｇＣｌ2および１．９ｇＥＧＴＡを加
え，ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｅ． ＰＭＳＦ（フッ化フェニルメチルスルホニル），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃
Ｐ−７６２６，４３５．５ｍｇに１００％エタノールを総容量２５ｍｌとなるよ
うに加え，ボルテックスする。 ｆ． ＡＴＰ（細菌起源），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，粉末を−２
０℃で保存する；作業溶液を作成するためには，３．３１ｍｇを１ｍｌｄＨ2Ｏ
中に溶解する。 ｇ． ＲＣ−２０Ｈ ＨＲＰＯコンジュゲート化抗ホスホチロシン，Ｔｒａｎｓ
ｄｕｃｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｃａｔ．＃Ｅ１２０Ｈ ｈ． Ｐｉｅｒｃｅ １−Ｓｔｅｐ（商標）Ｔｕｒｂｏ−ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（
３，３'，５，５'−テトラメチルベンジジン），Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔ．＃３４
０２２ ｉ． Ｈ2ＳＯ4，濃硫酸１ｍｌ（１８Ｎ）を３５ｍｌｄＨ2Ｏに加える。 ｊ． ＴＲＩＳ ＨＣＬ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５；材料１
２１．１４ｇに６００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌでｐＨを７．
５（または７．２）に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで容量を１Ｌとする。 ｋ． ＮａＣｌ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，５Ｍ溶液を作成
する。 ｌ． Ｔｗｅｅｎ−２０，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ３３７−５００ ｍ． Ｎａ3ＶＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０，材料１．８ｇ
に８０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨを１０
．０に調節し，電子レンジで沸騰させ，冷却し，ｐＨを調べ，ｐＨが１０．０で
安定となるまでこの工程を繰り返し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加えて総容量１０
０ｍｌとし，１ｍｌアリコートを作成し，−８０℃で保存する。 ｎ． ＭｇＣｌ2，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，１Ｍ溶液を作
成する。 ｏ． ＨＥＰＥＳ，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００，２００ｍ
ｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，材料５９．６ｇを加え，ｐＨを７．５に調節し，総
容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する。 ｐ． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−４５０３，材
料３０ｇに滅菌蒸留水を加えて総容量３００ｍｌとし，４℃で保存する。 ｑ． ＴＢＳＴ緩衝液：１Ｌの目盛り付きシリンダー中の約９００ｍｌのｄＨ2
Ｏに６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加え，溶解したとき，
ＨＣｌでｐＨを７．２に調節し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎＸ−１００を加え，ｄ
Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｒ． ヤギアフィニティー精製抗体ウサギＩｇＧ（全分子），Ｃａｐｐｅｌ Ｃ
ａｔ．＃５５６４１ ｓ． 抗ｈ−Ｍｅｔ（Ｃ−２８）ウサギポリクローナルＩｇＧ抗体，Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃ＳＣ−１６１ ｔ． 過渡的にトランスフェクションされたＥＧＦＲ／Ｍｅｔキメラ細胞（ＥＭ
Ｒ）（Ｋｏｍａｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，８：２３８１−２３９
０（１９９３） ｕ． 炭酸ナトリウム緩衝液，（Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４
９５）：材料１０．６ｇに８００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏを加え，溶解した
とき，ＮａＯＨでｐＨを９．６に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌと
し，濾過し，４℃で保存する。
【０３３６】方法 以下の工程は，特に記載のない限り，全て室温で実施する。ＥＬＩＳＡプレー
ト洗浄は全てＴＢＳＴで４回すすぐことにより行う。Ａ．ＥＭＲ溶解 この方法は，レセプター捕捉の開始の前夜または直前に実施することができる
。 １． 溶解物を３７℃の水浴中で渦巻き動作により最後の結晶が消失するまで急
速に溶解する。 ２． 細胞ペレットを１ｍＭＰＭＳＦを含有する１Ｘ ＨＮＴＧ中で溶解する。
１５ｃｍ皿の細胞あたり３ｍｌのＨＮＴＧを用いる。計算したＨＮＴＧ容量の１
／２を加え，管を１分間ボルテックスし，残量のＨＮＴＧを加え，さらに１分間
ボルテックスする。 ３． 管の釣り合いをとり，１０，０００ｘｇ，１０分間，４℃で遠心分離する
。 ４． 上清をプールし，アリコートを除去して蛋白質測定を行う。 ５． プールしたサンプルをドライアイス／エタノール浴中で急速凍結する。こ
の工程は，溶解物を一夜保存するか蛋白質測定後に直ちに使用するかにかかわら
ず実施する。 ６． 標準的ビシンコニン酸（ＢＣＡ）法を用いて蛋白質測定を実施する（ＢＣ
Ａアッセイ試薬キット，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃａｔ．＃２３２２
５）。
【０３３７】Ｂ．ＥＬＩＳＡ法 １． Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥＬＩＳＡプレートを，総ウエル容量５０μｌ
，ウエルあたり５μｇの炭酸塩緩衝液中のヤギ抗ウサギ抗体でコーティングする
。４℃で一夜保存する。 ２． プレートを逆さにして液体を除去することにより，未結合ヤギ抗ウサギ抗
体を除去する。 ３． １５０μｌのブロッキング緩衝液を各ウエルに加える。振盪しながら３０
分間インキュベートする。 ４． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて過
剰の液体および気泡を除去する。 ５． ウエル総容量１００μｌに対して，ＴＢＳＴ中で希釈したウサギ抗Ｍｅｔ
抗体をウエルあたり１μｇ加える。 ６． 溶解物をＨＮＴＧで希釈する（９０μｇ溶解物／１００μｌ）。 ７． 希釈した溶解物１００μｌを各ウエルに加える。６０分間振盪する。 ８． ＴＢＳＴで４回洗浄する。ペーパータオル上で軽くたたいて過剰の液体お
よび気泡を除去する。 ９． ウエルあたり５０μｌの１Ｘ溶解物緩衝液を加える。 １０． 化合物／抽出物をポリプロピレン９６ウエルプレート中で１Ｘキナーゼ
緩衝液中で１：１０に希釈する。 １１． 希釈した化合物５．５μｌをＥＬＩＳＡプレートウエルに移す。振盪し
ながら室温で２０分間インキュベートする。 １２． ウエルあたり５．５μｌの６０μＭＡＴＰ溶液を加える。陰性対照には
ＡＴＰを加えない。振盪しながら９０分間インキュベートする。 １３． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １４． ウエルあたり１００μｌのＲＣ２０（ブロッキング緩衝液中１：３００
０希釈）を加える。振盪しながら３０分間インキュベートする。 １５． ＴＢＳＴで４回洗浄する。プレートをペーパータオル上で軽くたたいて
過剰の液体および気泡を除去する。 １６． ウエルあたり１００μｌのＴｕｒｂｏ−ＴＭＢを加える。振盪しながら
３０−６０分間インキュベートする。 １７． ウエルあたり１００μｌの１ＭＨ2ＳＯ4を加えて反応を停止させる。 １８． Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ７０００ ＥＬＩＳＡリーダーでアッセイを読
む。試験フィルター＝４５０ｎｍ，参照フィルター＝４１０ｎｍ。
【０３３８】実施例１１５：生化学的ｓｒｃアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ビオチニル化ペプチドのリン酸化を読出しとして測定
することにより，ｓｒｃ蛋白質キナーゼ活性を決定する。
【０３３９】材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ｓｒｃでトランスフォームした酵母 ｂ． 細胞溶解物：ｓｒｃを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再びペレット化して，使用するまで−８０℃で保存する。 ｃ． Ｎ−末端ビオチニル化ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹは，当業
者に周知の標準的な方法により調製する。 ｄ． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ｅ． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ｆ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物の希釈用：Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃Ａ−７２０９２ ｇ． Ｖｅｃａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌ
ｉｎｇａｍｅ，ＣＡ ｈ． 抗ｓｒｃ（３２７）ｍａｂ：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＳｒｃを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒｔｉ−
Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１４：６００−
６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕｒａ４
ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，酢酸リチウム法（Ｓｕｐｅｒｔ
ｉ−Ｆｕｒｇａ，（上掲））によりｐＲＳＰ発現プラスミドでトランスフォーム
する。細胞は１μＭチアミンの存在下で増殖させてｎｍｔｌプロモーターの発現
を抑制するか，またはチアミンの非存在下で増殖させて発現を誘導する。 ｉ． モノクローナル抗ホスホチロシン，ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵＢ４
０を用いることができる） ｊ． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡペルオキシダーゼ基質：Ｐｉｅｒｃｅ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ
【０３４０】緩衝溶液： ａ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）：ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ，ＧＩＢ
ＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ｂ． ブロッキング緩衝液：５％無脂乳（Ｃａｒｎａｔｉｏｎ），ＰＢＳ中 ｃ 炭酸塩緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５，１００
ｍＭ保存溶液を作成する。 ｄ． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液から）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液から）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ｅ． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液から）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液から）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液から）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液から）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液から）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ｆ． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ｇ． ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００
ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを７
．５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｈ． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ｉ． Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭ
ｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ
を１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加
熱／冷却サイクルの後にｐＨが安定に維持されるまでｐＨ調節を繰り返す；Ｍｉ
ｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−
８０℃で保存する。 ｊ． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｋ． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００ｍ
ｌＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節し，
ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶液）
。 ｌ． ＴＢＳＴ緩衝液：ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５７
ｇＴＲＩＳおよび８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調節
し，１．０ｍｌＴｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｍ． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液とする。 ｎ． ＤＴＴ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ ｏ． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに
，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量を１Ｌとする。 ｐ． キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの量
：１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
最終容量８．０ｍｌとする。 ｑ． ビオチン標識ＥＥＥＹＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ：水中のペプチド
保存溶液（１ｍＭ，２．９８ｍｇ／ｍｌ）を使用の直前に新たに作成する。 ｒ． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬：１４ｍｌの作業用試薬
を調製するためには，１滴の試薬Ａを１５ｍｌＴＢＳＴに加え，管を数回逆さに
して混合する。次に１滴の試薬Ｂを加える。管を室温で環状振盪器に入れ，３０
分間混合する。
【０３４１】方法 ａ．ｓｒｃでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）
中の０．５μｇ／ウエルの抗ｓｒｃｍａｂで，４℃で一夜コーティングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートをＰＢＳ中５％ミルク０．１５ｍｌで，室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． 溶解緩衝液中で希釈した，ｓｒｃでトランスフォームした酵母の溶解物を
１０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。（溶解物の量は
，バッチにより異なるであろう）。プレートを室温で２０分間振盪する。ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ４Ｇ１０プレート：１００μｌＰＢＳ中の０．５μｇ／ウエルの４Ｇ１０
で４℃で一夜コーティングし，１５０μｌのＰＢＳ中５％ミルクで室温で３０分
間ブロッキングする。ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 工程１−７からの未結合蛋白質を除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄す
る。 ２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり１０μｌ
の１０Ｘキナーゼ緩衝液および１０μＭ（最終濃度）のビオチン−ＥＥＥＹＥＥ
ＹＥＥＥＹＥＥＥＹＥＥＥＹ，水中に希釈）を加える。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中に希釈した１０μｌの化合物を加え，室温
で１５分間プレインキュベートする。 ４． １０μｌ／ウエルの水中０．０５ｍＭＡＴＰ（最終５μＭＡＴＰ）を加え
ることにより，キナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で１５分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，ブロッキングした４Ｇ１０コーティングＥＬＩＳＡプ
レートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． Ｖｅｃｔａｓｔａｉｎ ＥＬＩＴＥ ＡＢＣ試薬（１００μｌ／ウエル
）とともに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢで発色させる。
【０３４２】実施例１１６：生化学的ｌｃｋアッセイ−ＥＬＩＳＡ このアッセイを用いて，ＧＳＴ−ζのリン酸化を読出しとして測定することに
より，ｌｃｋ蛋白質キナーゼ活性を決定する。
【０３４３】材料および試薬： 以下の材料および試薬を用いた： ａ． ｌｃｋでトランスフォームした酵母：Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙ
ｃｅｓ Ｐｏｍｂｅを用いて組換えＬｃｋを発現させる（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕ
ｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ，１２：２６２５−２６３４；Ｓｕｐｅｒ
ｔｉ−Ｆｕｒｇａ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１４：６
００−６０５）。Ｓ．Ｐｏｍｂｅ ＳＰ２００株（ｈ−ｓ ｌｅｕｌ．３２ ｕ
ｒａ４ ａｄｅ２１０）を記載されたように増殖させ，ｐＲＳＰ発現プラスミド
で酢酸リチウム法によりトランスフォームする（Ｓｕｐｅｒｔｉ−Ｆｕｒｇａ，
（上掲））。細胞を１μＭチアミンの存在下で増殖させ，発現を誘導する。 ｂ． 細胞溶解物：ｌｃｋを発現する酵母細胞をペレット化し，水で１回洗浄し
，再ペレット化し，使用するまで−８０℃で凍結保存する。 ｃ． ＧＳＴ−ζ：細菌中で発現させるためのＧＳＴ−ζ融合蛋白質をコードす
るＤＮＡは，Ｈｏｗａｒｄ Ｈｕｇｈｅｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ｅ，ｔｈｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ Ｆ
ｒａｎｃｉｓｃｏのＡｒｔｈｕｒ Ｗｅｉｓｓから入手する。トランスフォーム
した細菌を振盪しながら２５℃で一夜増殖させる。ＧＳＴ−ζは，グルタチオン
アフィニティークロマトグラフィー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ，Ａｌａｍｅｄａ，Ｃ
Ａ）により精製する。 ｄ． ＤＭＳＯ：Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ ｅ． ９６ウエルＥＬＩＳＡプレート：Ｃｏｒｎｉｎｇ９６ウエルＥａｓｙ Ｗ
ａｓｈ，改変平底プレート，Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃａｔ．＃２５８０５−９６ ｆ． ＮＵＮＣ９６ウエルＶ−底ポリプロピレンプレート，化合物希釈用：Ａｐ
ｐｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃａｔ．＃ＡＳ−７２０９２ ｇ． 精製ウサギ抗ＧＳＴ抗血清：Ａｍｒａｄ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ａｕ
ｓｔｒａｌｉａ）Ｃａｔ．＃９０００１６０５ ｈ． ヤギ抗ウサギ−ＩｇＧ−ＨＲＰ：Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｃａｔ．＃Ｖ０１０
３０１ ｉ． ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）：Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ Ｃａｔ．＃
５２１５−００５−００３ ｊ． 抗Ｌｃｋ（３Ａ５）モノクローナル抗体：Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏ
ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣａｔ＃ｓｃ−４３３ ｋ． 抗ホスホチロシンモノクローナル抗体ＵＢＩ０５−３２１（代わりにＵＢ
４０を用いてもよい）
【０３４４】緩衝溶液： ａ． ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水）１Ｘ溶液：ＧＩＢＣＯＰＢＳ，
ＧＩＢＣＯ Ｃａｔ．＃４５０−１３００ＥＢ ｂ． ブロッキング緩衝液：１００ｇＢＳＡ，１２．１ｇＴＲＩＳ−ｐＨ７．５
，５８．４４ｇＮａＣｌ，１０ｍｌＴｗｅｅｎ−２０，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
総容量１Ｌとする。 ｃ． 炭酸緩衝液：Ｎａ2ＣＯ4，Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｃａｔ．＃Ｓ４９５；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで１００ｍＭ溶液とする。 ｄ． キナーゼ緩衝液：１．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｇＣｌ2；０．２ｍ
ｌ（１Ｍ保存溶液より）ＭｎＣｌ2；０．２ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＤＴＴ；
５．０ｍｌ（１Ｍ保存溶液より）ＨＥＰＥＳ；０．１ｍｌＴＸ−１００；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１０ｍｌとする。 ｅ． 溶解緩衝液：５．０ＨＥＰＥＳ（１Ｍ保存溶液より）；２．７４ｍｌＮａ
Ｃｌ（５Ｍ保存溶液より）；１０ｍｌグリセロール；１．０ｍｌＴＸ−１００；
０．４ｍｌＥＤＴＡ（１００ｍＭ保存溶液より）；１．０ｍｌＰＭＳＦ（１００
ｍＭ保存溶液より）；０．１ｍｌＮａ3ＶＯ4（０．１Ｍ保存溶液より）；Ｍｉｌ
ｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする。 ｆ． ＡＴＰ：Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ−７６９９，１０ｍＭ保存溶液（５．
５１ｍｇ／ｍｌ）を作成する。 ｇ． ＴＲＩＳ−ＨＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１５２−５，６００
ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１２１．１４ｇの物質を加え，ＨＣｌでｐＨを
７．５に調節し，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｈ． ＮａＣｌ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ２７１−１０，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで５Ｍ保存溶液を作成する。 ｉ． Ｎａ3ＶＯ4：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｓ４５４−５０；８０ｍｌのＭ
ｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，１．８ｇの物質を加える；ＨＣｌまたはＮａＯＨでｐＨ
を１０．０に調節する；電子レンジ中で沸騰させる；冷却する；ｐＨを調べ，加
熱／冷却サイクルの後にｐＨが安定となるまでｐＨ調節を繰り返す；Ｍｉｌｌｉ
Ｑ Ｈ2Ｏで総容量１００ｍｌとする；１ｍｌのアリコートを作成し，−８０℃
で保存する。 ｊ． ＭｇＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ３３−５００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｋ． ＨＥＰＥＳ：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ３１０−５００；２００ｍ
ｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，５９．６ｇの物質を加え，ｐＨを７．５に調節し
，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで総容量２５０ｍｌとし，濾過滅菌する（１Ｍ保存溶液
）。 ｌ． アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ．＃Ａ４５０３；１５
０ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに，３０ｇの物質を加え，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで
総容量３００ｍｌとし，０．２２μｍフィルターを通して濾過し，４℃で保存す
る。 ｍ． ＴＢＳＴ緩衝液：９００ｍｌのｄＨ2Ｏに，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび
８．７６６ｇＮａＣｌを加える；ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する；１．０ｍｌ
Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ10０を加える；ｄＨ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｎ． ＭｎＣｌ2：Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃Ｍ８７−１００，ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで１Ｍ保存溶液を作成する。 ｏ． ＤＴＴ；Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｃａｔ．＃ＢＰ１７２−５ ｐ． ＴＢＳ（ＴＲＩＳ緩衝化食塩水）：９００ｍｌのＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏに
，６．０５７ｇＴＲＩＳおよび８．７７７ｇＮａＣｌを加える；ＭｉｌｌｉＱ
Ｈ2Ｏで総容量１Ｌとする。 ｑ キナーゼ反応混合物：アッセイプレート（１００ウエル）１枚あたりの量：
１．０ｍｌキナーゼ緩衝液，２００μｇＧＳＴ−ζ，ＭｉｌｌｉＱ Ｈ2Ｏで最
終容量８．０ｍｌとする。
【０３４５】方法： ａ．ＬｃｋでコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． １００μｌの炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９．６）中のヤギ抗マウスＩｇ
Ｇ２．０μｇ／ウエルで，４℃で一夜コーティングする。 ２． ウエルをＰＢＳで１回洗浄する。 ３． プレートを０．１５ｍｌのブロッキング緩衝液で室温で３０分間ブロッキ
ングする。 ４． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ５． ０．１ｍｌＰＢＳ中の抗ｌｃｋ（モノクローナル抗体３Ａ５）を０．５μ
ｇ／ウエルで室温で１−２時間加える。 ６． プレートをＰＢＳで５回洗浄する。 ７． 溶解緩衝液中に希釈した，ｌｃｋでトランスフォームした酵母の溶解物を
２０μｇ／ウエルで加える（ウエルあたり総容量０．１ｍｌ）。プレートを４℃
で一夜振盪して活性の喪失を防止する。ｂ．ホスホチロシン抗体でコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの調製 １． ＵＢ４０プレート：１００μｌＰＢＳ中の１．０μｇ／ウエルＵＢ４０を
４℃で一夜加え，１５０μｌのブロッキング緩衝液で少なくとも１時間ブロッキ
ングする。ｃ．キナーゼアッセイ法 １． 工程１−７からの未結合蛋白質を除去し，プレートをＰＢＳで５回洗浄す
る。 ２． ウエルあたり０．０８ｍｌのキナーゼ反応混合物（ウエルあたり，水で希
釈した１０μｌの１０Ｘキナーゼ緩衝液および２μｇＧＳＴ−ζを含む）を加え
る。 ３． １０％ＤＭＳＯを含有する水中で希釈した化合物１０μｌを加え，室温で
１５分間プレインキュベートする。 ４． 水中０．１ｍＭＡＴＰ（最終濃度１０μＭＡＴＰ）を１０μｌ／ウエルで
加えることによりキナーゼ反応を開始させる。 ５． ＥＬＩＳＡプレートを室温で６０分間振盪する。 ６． ウエルあたり１０μｌの０．５ＭＥＤＴＡを加えることによりキナーゼ反
応を停止させる。 ７． ９０μｌの上清を，上述のＢ節からのブロッキングした４Ｇ１０コーティ
ングＥＬＩＳＡプレートに移す。 ８． 振盪しながら室温で３０分間インキュベートする。 ９． プレートをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １０． １００μｌＴＢＳＴ中１：５０００に希釈したウサギ抗ＧＳＴ抗体とと
もに室温で３０分間インキュベートする。 １１． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １２． １００μｌのＴＢＳＴ中１：２０，０００に希釈したヤギ抗ウサギ−Ｉ
ｇＧ−ＨＲＰとともに室温で３０分間インキュベートする。 １３． ウエルをＴＢＳＴで５回洗浄する。 １４． Ｔｕｒｂｏ ＴＭＢで発色させる。
【０３４６】実施例１１７：ＲＡＦのリン酸化機能を測定するアッセイ 以下のアッセイは，ＲＡＦにより触媒される，その標的蛋白質ＭＥＫならびに
ＭＥＫの標的であるＭＡＰＫのリン酸化の量を測定する。ＲＡＦ遺伝子配列は，
Ｂｏｎｎｅｒら（１９８５，Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５：１４００−
１４０７）に記載されており，多くの遺伝子配列データバンクにおいて容易にア
クセス可能である。核酸ベクターの構築および本発明のこの部分において用いら
れる細胞株は，Ｍｏｒｒｉｓｏｎら（１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：８８５５−８８５９）にすべて記載されている。
【０３４７】材料および試薬 １． Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞；ＧＩＢＣ
Ｏ−ＢＲＬ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ２． ＲＩＰＡ緩衝液：２０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣ１ｐＨ７．４，１３７ｍＭＮａ
Ｃｌ，１０％グリセロール，１ｍＭＰＭＳＦ，５ｍｇ／Ｌアプロテニン，０．５
％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００； ３． チオレドキシン−ＭＥＫ融合蛋白質（Ｔ−ＭＥＫ）：Ｔ−ＭＥＫ 発現およびアフィニティークロマトグラフィーによる精製は，製造元の方法に従
って実施する。カタログ＃Ｋ３５０−０１およびＲ３５０−４０，Ｉｎｖｉｔｒ
ｏｇｅｎＣｏｒｐ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ ４． Ｈｉｓ−ＭＡＰＫ（ＥＲＫ２）；Ｈｉｓ−タグＭＡＰＫは，Ｈｉｓ−ＭＡ
ＰＫをコードするｐＵＣ１８ベクターによりトランスフォームしたＸＬ１ Ｂｌ
ｕｅ細胞中で発現させる。Ｈｉｓ−ＭＡＰＫはＮｉ−アフィニティークロマトグ
ラフィーにより精製する。Ｃａｔ＃２７−４９４９−０１，Ｐｈａｒｍａｃｉａ
，Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ，本明細書に記載されたとおり。 ５． ヤギ抗マウスＩｇＧ：Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｅ
ｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ．カタログ，＃５１５−００６−００８，Ｌｏｔ＃２８
５６３ ６． ＲＡＦ−１蛋白質キナーゼ特異的抗体：ＵＲＰ２６５３，ＵＢＩ ７． コーティング緩衝液：ＰＢＳ；リン酸緩衝化食塩水，ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ
，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ ８． 洗浄緩衝液：ＴＢＳＴ−５０ｍＭＴｒｉｓ／ＨＣＬｐＨ７．２，１５０ｍ
ＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００ ９． ブロッキング緩衝液：ＴＢＳＴ，０．１％エタノールアミンｐＨ７．４ １０． ＤＭＳＯ，Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ １１． キナーゼ緩衝液（ＫＢ）：２０ｍＭＨＥＰＥＳ／ＨＣｌ（ｐＨ７．２）
，１５０ｍＭＮａＣｌ，０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００，１ｍＭＰＭＳＦ，５
ｍｇ／Ｌアプロテニン，７５ｍＭオルトバナジウム酸ナトリウム，０．５ＭＭＤ
ＴＴおよび１０ｍＭＭｇＣｌ2 １２． ＡＴＰ混合物：ｌ００ｍＭＭｇＣｌ2，３００ｍＭＡＴＰ，１０ｍＣｉ3 3 ＰＡＴＰ（ＤｕＰｏｎｔ−ＮＥＮ）／ｍＬ １３ 停止溶液：１％リン酸；Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＰＡ １４． Ｗａｌｌａｃリン酸セルロースフィルターマット；Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １５． フィルター洗浄溶液：１％リン酸，Ｆｉｓｈｅｒ，Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇ
ｈ，ＰＡ １６． Ｔｏｍｔｅｃプレート回収機，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌ
ａｎｄ １７． Ｗａｌｌａｃベータプレートリーダー＃１２０５，Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕ
ｒｋｕ，Ｆｉｎｎｌａｎｄ １８． 化合物用に，ＮＵＮＣ９６ウエルＶ底ポリプロピレンプレート，Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃ＡＳ−７２０９２
【０３４８】方法 以下のすべての工程は，特に指示しないかぎり，室温で実施した。 １． ＥＬＩＳＡプレートコーティング：ＥＬＩＳＡウエルを１００ｍｌのヤギ
抗マウスアフィニティー精製抗血清（１ｍｇ／ｌ００ｍＬコーティング緩衝液）
で４℃で一夜コーティングする。ＥＬＩＳＡプレートは，４℃で保存したとき，
２週間使用することができる。 ２． プレートを逆さにして液体を除去する。１００ｍＬのブロッキング溶液を
加え，３０分間インキュベートする。 ３． ブロッキング溶液を除去し，洗浄緩衝液で４回洗浄する。プレートをペー
パータオル上で軽くたたいて過剰の液体を除去する。 ４． 各ウエルに１ｍｇのＲＡＦ−１特異的抗体を加え，１時間インキュベート
する。工程３に記載したように洗浄する。 ５． ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９細胞からの溶解物を解凍し，ＴＢＳＴ
で１０ｍｇ／１００ｍＬに希釈する。１０ｍｇの希釈溶解物をウエルに加え，１
時間インキュベートする。インキュベーションの間，プレートを振盪する。陰性
対照には溶解物を加えない。各ウイルスにつきＭＯＩ５で細胞を組換えバキュロ
ウイルスで感染させた後，ＲＡＳ／ＲＡＦで感染させたＳｆ９昆虫細胞からの溶
解物を調製し，４８時間後に回収する。細胞をＰＢＳで１回洗浄し，ＲＩＰＡ緩
衝液中で溶解する。不溶物質を遠心分離（５分間，１００００ｘｇ）により除去
する。溶解物のアリコートをドライアイス／エタノール中で凍結し，使用まで−
８０℃で保存する。 ６． 非結合物質を除去し，上に簡単に述べたように洗浄する（工程３）。 ７． ウエルあたり２ｍｇのＴ−ＭＥＫおよび２ｍｇのＨｉｓ−ＭＡＥＰＫを加
え，キナーゼ緩衝液で容量を４０ｍＬに調節する。細胞抽出物からＴ−ＭＥＫお
よびＭＡＰＫを精製する方法は，本明細書の実施例に記載される。 ８． 化合物（保存溶液１０ｍｇ／ｍＬＤＭＳＯ）または抽出物をＴＢＳＴプラ
ス１％ＤＭＳＯ中であらかじめ２０倍に希釈する。５ｍＬのあらかじめ希釈した
化合物／抽出物を工程６に記載したウエルに加える。２０分間インキュベートす
る。対照には薬剤を加えない。 ９． ５ｍＬＡＴＰミックスを加えることによりキナーゼ反応を開始する。イン
キュベーションの間，ＥＬＩＳＡプレート振盪器でプレートを振盪する。 １０． ６０分後，３０ｍＬの停止溶液を各ウエルに加えることによりキナーゼ
反応を停止する。 １１． ホスホセルロースマットおよびＥＬＩＳＡプレートをＴｏｍｔｅｃプレ
ート回収機中に置く。フィルターを回収し，フィルター洗浄溶液で製造元の推奨
にしたがってこれを洗浄する。フィルターマットを乾燥する。フィルターマット
を密封し，ケース中に置く。ケースを放射活性検出装置に入れ，フィルターマッ
ト上の放射活性リンを定量する。 あるいは，アッセイプレートの個々のウエルからの４０ｍＬのアリコートを，
ホスホセルロースフィルターマットの対応する位置に移すことができる。フィル
ターを風乾した後，フィルターをトレイ中に置く。トレイを穏やかにロックし，
洗浄溶液を１５分間ごとに１時間交換する。フィルターマットを風乾する。フィ
ルターマットを密封し，サンプル中の放射活性リンを測定するのに適当なケース
中に入れる。ケースを検出装置に入れ，フィルターマット上の放射活性リンを定
量する。
【０３４９】実施例１１８：ＦＬＫ−１／ＫＤＲアッセイ
【０３５０】実施例１１９：ＺＡＰ−７０アッセイ 材料および試薬： １．Ｃｏｒｎｉｎｇ９６−ウエルＥｌｉｓａプレート，Ｃｏｒｎｉｎｇカタログ
＃；２５８０５−９６ ２．
【表２２】 ３．ＰＢＳ（ダルベッコリン酸緩衝化食塩水，）Ｇｉｂｃｏカタログ＃４５０−
１３００ＥＢ
【表２３】
【表２４】 １リットルの１０ｘ保存溶液を作成するためには： １）１リットルのメスシリンダーに約９００ｍｌのｄＨ2Ｏを加える ２）ＭｇＣｌ2以外のすべての試薬を加える ３）すべての試薬が溶解したら，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節する ４）ＭｇＣｌ2を加える ５）ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする この緩衝液を作成する必要はない。保存ＰＢＳの供給源が２つ存在する： １）滅菌ＧＩＢＣＯ ＰＢＳ（１ｘ），５００ｍｌボトル中，培地冷蔵庫中（こ
れが選択すべき緩衝液である） ２）滅菌１０ｘおよび１ｘＰＢＳ，ガラス棚中にある。このＰＢＳを用いる場合
，ＨＣｌでｐＨを７．２に調節しなければならない。 上述の１０ｘ保存溶液のいずれかから１ｘ作業溶液を作成するためには：
【表２５】 １０ｘ保存溶液を希釈した後にｐＨを調べたほうがよい。 ＊注：ＰＢＳは室温で放置することができるが，４℃が好ましい保存温度である
。 ４．５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ Ｇｉｂｃｏ組織培養等級１Ｍ ＨＥＰＥＳをＭｉｌｌｉＱｕｅ Ｈ2Ｏで５０ｍ
Ｍ ＨＥＰＥＳの最終濃度に希釈する
【表２６】 ５．ブロッキング緩衝液
【表２７】 ６．Ｚａｐ７０キナーゼドメインを含む精製ＧＳＴ融合蛋白質（Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ Ｌａｂ，ＳＵＧＥＮ，Ｉｎｃ．），−８０℃，バッチ＃；９１７ｐ
８８，濃度０．１８ｍｇ／ｍＬ ７．ＴＢＳ−Ｗ緩衝液
【表２８】 １リットルの１ｘ作業溶液を作成するためには： １）１リットルのメスシリンダーに約９００ｍｌのｄＨ2Ｏを加える ２）すべての試薬を加える ３）すべての試薬が溶解したら，ＨＣｌでｐＨを７．６に調節する ４）ｄＨ2Ｏで容量を１リットルとする ５）Ｔｗｅｅｎ２０の１０％保存溶液を保存しないこと。１００％Ｔｗｅｅｎ２
０を緩衝液に加える。 １０ｘ保存溶液は，量を１０倍にすることにより作成することができる（ただし
最終容量を１リットルに保つ）。次にこの保存溶液をｄＨ2Ｏで１０倍に希釈し
，再びｐＨを７．２に調節する。 １Ｘおよび１０ＸＴＢＳ（ｐＨ７．６）はＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔから供給される。 ８．ＭｉｌｌｉＱｕｅ Ｈ2Ｏ＋４％ＤＭＳＯ
【表２９】 ９．１ｍＭ ＡＴＰ
【表３０】 １ｍＭの保存溶液を作成するためには： １）５ｍｌのｄＨ2Ｏを２．７５ｍｇのＡＴＰに加える ２）ボルテックスする ＊注：ＡＴＰ対ｄＨ2Ｏの比を同じにすれば，任意のｍｇ量のＡＴＰを用いるこ
とができる。 ＊注：この試薬は小さいアリコート中で−２０℃で保存することができる。使用
直前に取り出し，氷中に保存する。アリコートを凍結／融解してはならない。未
使用部分は廃棄する。 １０．１Ｍ ＭｎＣｌ2
【表３１】 １２．還元型グルタチオン
【表３２】 ＊再懸濁液中では安定ではない。実験のたびに新鮮な保存溶液を調製する。 １３．２Ｘキナーゼ希釈緩衝液
【表３３】 １４．４ＸＡＴＰ反応混合物
【表３４】 １５．ＥＤＴＡ
【表３５】 保存溶液を作成するためには： １）約７０ｍｌのｄＨ2Ｏを２５０ｍｌのビーカーに加える ２）ＥＤＴＡを加える ３）ビーカー中にｐＨプローブを入れ，１０Ｎ ＮａＯＨを滴加する。ＥＤＴＡ
はｐＨが約７．０になるまで溶解しないであろう。ＥＤＴＡが溶解するにつれて
ｐＨは低下し，さらにＮａＯＨを加える。 ４）すべてのＥＤＴＡが溶解したら，ｐＨを８．０に調節する ５）１００ｍｌのメスシリンダーに移し，ｄＨ2Ｏで容量を１００ｍｌとする 保存溶液はＭｅｄｉａ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔからも
入手可能である。 １６．抗体希釈緩衝液
【表３６】 １７．ＨＲＰ−コンジュゲート化抗−Ｐｔｙｒ
【表３７】 １８．安定なＡＢＴＳ溶液
【表３８】 １９．ＮＵＮＣ９６−ウエルＶ底ポリプロピレンプレート（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃカタログ＃；ＡＳ−７２０９２） ２０．１０％ＳＤＳ（社内の一般試薬室の保存溶液より）
【０３５１】方法： １．ＥＬＩＳＡプレートを１００μｌのＰＢＳ中の２μｇのポリ（Ｇｌｕ−Ｔｙ
ｒ）で４℃で一夜被覆する（ＰｏｌｙＥＹ保存溶液１０．０ｍｇ／ｍｌ，ＰＢＳ
中，−８０℃） ２．Ｔｉｔｅｒｔｅｋプレート洗浄器のＰＢＳＲＩＮＳＥプログラムを用いて洗
浄する。プレートを１５０μＬのＴＢＢで６０分間ブロッキングする。ＰＢＳ／
ＢＬＯＣＫプログラムは，ＰＢＳリンスの後にブロッキング緩衝液を加える。 ３．プレートをＰＢＳで２回，５０ｍＭ Ｈｅｐｅｓ緩衝液，ｐＨ７．４で１回
洗浄する（洗浄器プログラム１ＳＴＷＡＳＨを用いる）。他の緩衝液を調製する
必要があれば，プレートをＨＥＰＥＳ緩衝液中に保存することができる。キナー
ゼ希釈緩衝液，ＡＴＰ混合物，およびＴＢＳ−Ｗはすべて，進行前に調製すべき
である。 ４．２５μＬの薬剤（４％ＤＭＳＯ中）またはＤＭＳＯ対照（４％，水中）をプ
レートに加える。化合物の１００％ＤＭＳＯ中１０ｍＭ保存溶液から出発する場
合は，水で２５倍に希釈する。薬剤希釈プレートの濃度は，４％ＤＭＳＯ中４０
０μＭとなる。連続希釈を作成する場合には，４％ＤＭＳＯ／水で薬剤プレート
の下方に希釈する。アッセイプレート中の最終化合物濃度（最高）は，１％ＤＭ
ＳＯ中１００μＭである。 ５．５０μｌの希釈キナーゼをすべてのウエルに加える。精製キナーゼを"キナ
ーゼ希釈緩衝液"で希釈して，５ｎｇ／ウエルの濃度とする。（現在の精製キナ
ーゼバッチの濃度は０．１８ｍｇ／ｍＬである）。現在のバッチについては，３
．３３μＬを６ｍＬのＫＤＢに加える。キナーゼは希釈すると不安定である。希
釈後，できるだけ早くキナーゼ反応を開始する。 ６．２５μＬの０．５ＭＥＤＴＡを陰性対照ウエルに加える。 ７．２５μＬのＡＴＰ／ＭｎＣｌ2混合物を全プレートに加える。反応時間は１
０分間であり，これがアッセイの最も重要な部分である。アッセイは，ＡＴＰを
加えた様式と同様にして２５μＬの０．５ＭＥＤＴＡで停止しなければならい。
酵素，ＡＴＰ，一次抗体および二次抗体はＴｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏ
ｐを用いて加えることができる。チューブはＭｉｌｌｉＱｕｅ Ｈ2Ｏでフラッ
シュし，試薬を注入する。分配容量は正確に２０μＬである。 ９．プレートをＴＢＳ−Ｗで４回洗浄する（洗浄器プログラムＷＡＳＨ１） １０．基質のリン酸化を検出する。ＨＲＰコンジュゲート化抗Ｐｔｙｒを抗体希
釈緩衝液で１：６，０００に希釈する。１００μＬ／ウエルを加え，振盪しなが
ら室温で１時間インキュベートする。 １１．プレートをＴＢＳ−Ｗで３回，ＰＢＳで１回洗浄する（洗浄器プログラム
ＬＡＳＴＷＡＳＨ）。洗浄緩衝液からの残留Ｔｗｅｅｎ２０はＨＲＰ活性を阻害
し，デルタを減少させる可能性がある。 １２．１００μｌのＡＢＴＳ溶液をＰｒｏｌｉｎｅ Ｂｉｏｈｉｔ Ｒｅｐｅａ
ｔｉｎｇ ＰｉｐｅｔｏｒまたはＴｉｔｅｒｔｅｋ Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐを用い
て各ウエルに加える。 １５．必要ならば，ウエルあたり２０μｌの１０％ＳＤＳを加えることにより発
色反応を停止させる。 １６．Ｄｙｎａｔｅｃｈ ＭＲ７０００ ｅｌｉｓａリーダーでプレートを読む
。試験フィルター：４１０ｎＭ，参照フィルター：６３０ｎＭ。 対照を配置するためのプレートのテンプレート
【表３９】
【０３５２】細胞／生物学的アッセイ 実施例１２０：ＦＯＲＢＲＤＵ取り込みアッセイの一般的方法 以下のアッセイは，目的とするレセプターを発現するよう遺伝子工学的に改変さ
れた細胞を使用して，ＤＮＡ中へのＢｒｄＵ取り込みを決定することにより，リ
ガンド−誘導性ＤＮＡ合成の活性に及ぼす目的化合物の影響を評価する。 以下の材料，試薬および方法は，以下のＢｒｄＵ取り込みアッセイのそれぞれに
ついて一般的である。特定のアッセイにおける変更は特に記載される。
【０３５３】材料および試薬： １．適当なリガンド ２．工学的に改変した適当な細胞 ３．ＢｒｄＵ標識試薬：１０ｍＭ，ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ） ４．ＦｉｘＤｅｎａｔ：固定溶液（即使用可）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎ
ｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ） ５．抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ：マウスモノクローナル抗体，ペルオキシダーゼとコ
ンジュゲート化（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ） ６．ＴＭＢ基質溶液：テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ，Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ
Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ） ７．ＰＢＳ洗浄溶液：１ＸＰＢＳ，ｐＨ７．４ ８．アルブミン，ウシ（ＢＳＡ），画分Ｖ粉体（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．，ＵＳＡ）
【０３５４】一般的方法： １．細胞を８０００細胞／ウエルで，１０％ＣＳ，２ｍＭＧｌｎ，ＤＭＥＭ中で
９６ウエルプレートに播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2で一夜インキュベー
トする。 ２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に無血清培地（０％ＣＳＤＭＥＭ，
０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 ３．第３日に，適当なリガンドおよび試験化合物を細胞に同時に加える。陰性対
照ウエルには無血清ＤＭＥＭ，０．１％ＢＳＡのみを加える。陽性対照細胞には
リガンドを加えるが試験化合物は加えない。試験化合物は，無血清ＤＭＥＭ中で
リガンドとともに９６ウエルプレート中で調製し，連続希釈して７種類の試験濃
度とする。 ４．リガンド活性化の１８時間後，希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：１００，ＤＭＥ
Ｍ中，０．１％ＢＳＡ）を加え，細胞をＢｒｄＵ（最終濃度＝１０μＭ）ととも
に１．５時間インキュベートする。 ５．標識試薬とともにインキュベートした後，デカントし逆さにしたプレートを
ペーパータオル上で軽くたたくことにより培地を除去する。ＦｉｘＤｅｎａｔ溶
液を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で４５分間イ
ンキュベートする。 ６．デカントし逆さにしたプレートをペーパータオル上で軽くたたくことにより
ＦｉｘＤｅｎａｔ溶液をよく除去する。ミルク（５％脱水ミルク，ＰＢＳ中，２
００μｌ／ウエル）をブロッキング溶液としてを加え，プレートをプレート振盪
器で室温で３０分間インキュベートする。 ７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回
洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：２００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ
）を加え（５０μｌ／ウエル），プレートをプレート振盪器で室温で９０分間イ
ンキュベートする。 ８．デカントし，ウエルをＰＢＳで５回すすぐことにより抗体コンジュゲートを
よく除去し，プレートを逆さにし，ペーパータオル上で軽くたたくことにより乾
燥する。 ９．ＴＭＢ基質溶液を加え（１００μｌ／ウエル），プレート振盪器で室温で２
０分間，発色が光学的検出に十分となるまでインキュベートする。 １０．試料の吸収をＤｙｎａｔｅｃｈＥＬＩＳＡプレートリーダーで４１０ｎｍ
で測定する（"デュアル波長"モード，参照波長として４９０ｎｍでフィルターを
読む）。
【０３５５】実施例１２１：ＥＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ） ２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７
【０３５６】実施例１２２：ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−２−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ） ２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ２／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−２キナー
ゼドメイン）
【０３５７】実施例１２３：ＥＧＦ−誘導性Ｈｅｒ−４−推進性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．マウスＥＧＦ，２０１（ＴｏｙｏｂｏＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｊａｐａｎ） ２．３Ｔ３／ＥＧＦｒ／Ｈｅｒ４／ＥＧＦｒ（ＥＧＦｒおよびＨｅｒ−４キナー
ゼドメイン）
【０３５８】実施例１２４：ＰＤＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．ヒトＰＤＧＦＢ／Ｂ（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ） ２．３Ｔ３／ＥＧＦＲｃ７
【０３５９】実施例１２５：ＦＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．ヒトＦＧＦ２／ｂＦＧＦ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ） ２．３Ｔ３ｃ７／ＥＧＦｒ
【０３６０】実施例１２６：ＩＧＦ１−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．ヒト，組換え（Ｇ５１１，Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．，ＵＳＡ） ２．３Ｔ３／ＩＧＦｌｒ
【０３６１】実施例１２７：インスリン−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．インスリン，結晶，ウシ，亜鉛（１３００７，ＧｉｂｃｏＢＲＬ，ＵＳＡ）
【０３６２】実施例１２８：ＨＧＦ−誘導性ＢｒｄＵ取り込みアッセイ 方法は，上で概要を記載した一般的方法と同じであるが，ただし以下の点を変更
する：材料および試薬： １．組換えヒトＨＧＦ（Ｃａｔ．Ｎｏ．２４９−ＨＧ，Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，
Ｉｎｃ．ＵＳＡ） ２．ＢｘＰＣ−３細胞（ＡＴＣＣＣＲＬ−１６８７）
【０３６３】方法： １．細胞をＲＰＭＩ１０％ＦＢＳ中で９６ウエルプレートに９０００細胞／ウエ
ルで播種する。細胞を３７℃で５％ＣＯ2中で一夜インキュベートする ２．２４時間後，細胞をＰＢＳで洗浄し，次に１００μｌの無血清培地（ＲＰＭ
Ｉ，０．１％ＢＳＡ）中で２４時間血清飢餓とする。 ３．第３日に，リガンド（１μｇ／ｍｌでＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ中で調製；
最終ＨＧＦ濃度２００ｎｇ／ｍｌ）および試験化合物を含有する２５μｌを細胞
に加える。陰性対照ウエルには２５μｌの無血清ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡのみ
を加える。陽性対照細胞にはリガンド（ＨＧＦ）を加えるが試験化合物は加えな
い。試験化合物は，９６ウエルプレートで，リガンドを含む無血清ＲＰＭＩ中で
その最終濃度の５倍で調製し，一連の希釈を作成して７種類の試験濃度とする。
典型的には，試験化合物の最高最終濃度は１００μＭであり，１：３希釈を用い
る（すなわち，最終試験化合物濃度範囲は０．１３７−１００μＭである）。 ４．リガンド活性化の１８時間後，１２．５μｌの希釈ＢｒｄＵ標識試薬（１：
１００，ＲＰＭＩ，０．１％ＢＳＡ）を各ウエルに加え，細胞をＢｒｄＵ（最終
濃度は１０ｐＭ）とともに１時間インキュベートする。 ５．一般的方法と同じ。 ６．一般的方法と同じ。 ７．デカントすることによりブロッキング溶液を除去し，ウエルをＰＢＳで１回
洗浄する。抗−ＢｒｄＵ−ＰＯＤ溶液（１：１００希釈，ＰＢＳ中，１％ＢＳＡ
）を加え（１００μｌ／ウエル），プレートを室温でプレート振盪器で９０分間
インキュベートする。 ８．一般的方法と同じ。 ９．一般的方法と同じ。 １０．一般的方法と同じ。
【０３６４】実施例１２９：ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃアッセイ また，以下のプロトコルを用いて，ＰＤＧＦ−Ｒ，ＦＧＦ−Ｒ，ＶＥＧＦ，ａ
ＦＧＦまたはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（これらはすべてＨＵＶ−ＥＣ細胞により天然
に発現されている）に対する化合物の活性を測定することができる。
【０３６５】第０日 １． ＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ細胞（ヒト臍静脈内皮細胞，（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙ
ｐｅ Ｃｕｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ；カタログＮｏ．１７３０ＣＲＬ）
を洗浄し，トリプシン処理する。ダルベッコリン酸緩衝化食塩水（Ｄ−ＰＢＳ；
Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．１４１９０−０２９から入手）で２回，約
１ｍｌ／１０ｃｍ2組織培養フラスコで洗浄する。非酵素細胞解離溶液（Ｓｉｇ
ｍａ 化学 Ｃｏｍｐａｎｙ；カタログＮｏ．Ｃ−１５４４）中で０．０５％ト
リプシン−ＥＤＴＡでトリプシン処理する。０．０５％トリプシンは，０．２５
％トリプシン／１ｍＭＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ；カタログＮｏ．２５２００−０４
９）を細胞解離溶液中で希釈することにより作成する。約１ｍｌ／２５−３０ｃ
ｍ2組織培養フラスコで３７℃で約５分間トリプシン処理する。細胞をフラスコ
からはがした後，等量のアッセイ培地を加え，５０ｍｌ滅菌遠心分離管（Ｆｉｓ
ｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；カタログＮｏ．０５−５３９−６）に移す。 ２． ５０ｍｌ滅菌遠心分離管中にアッセイ培地を加えることにより，細胞を約
３５ｍｌのアッセイ培地で洗浄し，約２００ｇで１０分間遠心分離し，上清を吸
引し，３５ｍｌのＤ−ＰＢＳに再懸濁する。Ｄ−ＰＢＳでさらに２回洗浄し，細
胞を約１ｍｌ／組織培養フラスコ１５ｃｍ2のアッセイ培地に再懸濁する。アッ
セイ培地は，Ｆ１２Ｋ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ；カタログＮｏ．２１１２７−
０１４）＋０．５％熱不活性化ウシ胎児血清からなる。Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕ
ｎｔｅｒ（商標）（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）で細
胞を計数し，アッセイ培地を細胞に加えて０．８−１．０ｘ１０5細胞／ｍｌの
濃度とする。 ３． 細胞を９６ウエル平底プレートに１００μｌ／ウエルまたは０．８−１．
０ｘ１０4細胞／ウエルで加える；３７℃，５％ＣＯ2で約２４時間インキュベー
トする。
【０３６６】第１日 １． 試験化合物の２倍滴定を別々の９６ウエルプレート中に作成する。一般に
，５０μＭから０μＭまで。上述の第０日，工程２と同じアッセイ培地を用いる
。滴定は，９０μｌ／ウエルの試験化合物を２００μＭ（４Ｘ最終ウエル濃度）
で特定のプレートカラムの最上のウエルに加えることにより行う。試験化合物保
存液濃度は通常ＤＭＳＯ中２０ｍＭであるため，２００μＭの薬剤濃度は２％Ｄ
ＭＳＯを含む。 したがって，ＤＭＳＯ濃度を一定に保持しながら薬剤を希釈するために，アッ
セイ培地中（Ｆ１２Ｋ＋０．５％ウシ胎児血清）２％ＤＭＳＯとした希釈剤を，
試験化合物滴定の希釈剤として用いる。この希釈物をカラム中の残りのウエルに
６０μｌ／ウエルで加える。カラムの最上ウエル中の１２０μｌの２００μＭ試
験化合物希釈物から６０μｌを採取し，カラムの第２のウエル中の６０μｌと混
合する。このウエルから６０μｌを採取し，カラム中の第３のウエル中の６０μ
ｌと混合し，２倍滴定が完了するまでこれを続ける。最後から２番目のウエルが
混合されたとき，このウエル中の１２０μｌの６０μｌを採取し，これを廃棄す
る。最後のウエルには薬剤非含有対照として６０μｌのＤＭＳＯ／培地希釈物を
加える。以下のアッセイの，滴定する試験化合物の三重のウエルに十分な９つの
カラムを作成する：（１）ＶＥＧＦ（Ｐｅｐｒｏ Ｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，から入
手，カタログＮｏ．１００−２００，（２）内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）（酸
性繊維芽細胞成長因子またはａＦＧＦとしても知られる）（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅ
ｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａから入手，カタログＮｏ．１４３
９６００）；または（３）ヒトＰＤＧＦ Ｂ／Ｂ（１２７６−９５６，Ｂｏｅｈ
ｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）およびアッセイ培地対照。
ＥＣＧＦはヘパリンナトリウムを有する調製物として得た。 ２． ５０μｌ／ウエルの試験化合物希釈物を，第０日からのＨＵＶ−ＥＣ−Ｃ
細胞０．８−１．０ｘ１０4細胞／１００μｌ／ウエルを含む９６ウエルアッセ
イプレートに移し，３７oＣ，５％ＣＯ2で約２時間インキュベートする。 ３． 三重に，８０μｇ／ｍｌＶＥＧＦ，２０ｎｇ／ｍｌＥＣＧＦ，または各試
験化合物の条件に対する培地対照を５０μｌ／ウエルで加える。試験化合物につ
いては，成長因子濃度は所望の最終濃度の４倍である。第０日，工程２からのア
ッセイ培地を用いて，成長因子の濃度を調節する。３７℃，５％ＣＯ2で約２４
時間インキュベートする。各ウエルに５０μｌの試験化合物希釈物，５０μｌの
成長因子または培地，および１００μｌの細胞を加え，総量２００μｌ／ウエル
とする。すなわち，すべてをウエルに加えたとき，４倍濃度の試験化合物および
成長因子は１倍となる。
【０３６７】第２日 １． 3Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ；カタログＮｏ．ＴＲＫ−６８６）を
１μＣｉ／ウエル（ＲＰＭＩ培地＋１０％熱不活性化ウシ胎児血清中で調製した
１００μＣｉ／ｍｌ溶液を１０μｌ／ウエル）で加え，３７℃，５％ＣＯ2で約
２４時間インキュベートする。注：３Ｈ−チミジンはＲＰＭＩ培地中で作成する
。これは，３Ｈ−チミジンを含む実験に用いるすべての他の用途はＲＰＭＩ中で
行ったためである。この工程における培地の相違はおそらくは有意ではない。Ｒ
ＰＭＩはＧｉｂｃｏ ＢＲＬから入手する，カタログＮｏ．１１８７５−０５１ 第３日 １． プレートを−２０℃で一夜凍結する。第４日 １． プレートを融解し，９６ウエルプレート回収器（Ｔｏｍｔｅｃ Ｈａｒｖ
ｅｓｔｅｒ９６（登録商標））でフィルターマット（Ｗａｌｌａｃ；カタログＮ
ｏ．１２０５−４０１）上に回収する；Ｗａｌｌａｃ Ｂｅｔａｐｌａｔｅ（商
標）液体シンチレーション計数機で計数する。
【０３６８】インビボ動物モデル 実施例１３０：異種移植片動物モデル ヒト腫瘍が無胸腺マウス（例えば，Ｂａｌｂ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）中で異種移植
片として成長する能力は，ヒト腫瘍の治療に対する生物学的応答を研究するのに
有用なインビボモデルを提供する。ヒト腫瘍の無胸腺マウスへの最初の成功的な
異種移植（Ｒｙｇａａｒｄ ａｎｄ Ｐｏｖｌｓｅｎ，１９６９，Ａｃｔａ Ｐ
ａｔｈｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．Ｓｃａｎｄ．７７：７５８−７６０）以来，
多くの異なるヒト腫瘍細胞株（例えば，***，肺，尿生殖器，胃腸，頭頸部，神
経膠芽細胞腫，骨，および悪性黒色腫）が移植され，ヌードマウス中での成長に
成功してきた。以下のアッセイを用いて，本発明の種々の化合物の活性，特異性
および効果のレベルを決定することができる。
【０３６９】 皮下異種移植片実験に適した細胞株としては，Ｃ６細胞（神経膠腫，ＡＴＣ
Ｃ＃ＣＣＬ１０７），Ａ３７５細胞（黒色腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１６１９），Ａ
４３１細胞（類表皮癌腫，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１５５５），Ｃａｌｕ６細胞（肺，
ＡＴＣＣ＃ＨＴＢ５６），ＰＣ３細胞（前立腺，ＡＴＣＣ＃ＣＲＬ１４３５），
およびＥＧＦＲ，ＰＤＧＦＲ，ＩＧＦ−１Ｒまたは任意の他の試験キナーゼを過
剰発現するように遺伝子工学処理されたＳＫＯＶ３ＴＰ５細胞およびＮＩＨ３Ｔ
３繊維芽細胞が挙げられる。以下のプロトコルを用いて異種移植片実験を行うこ
とができる。
【０３７０】 雌無胸腺マウス（ＢＡＬＢ／ｃ，ｎｕ／ｎｕ）はＳｉｍｏｎｓｅｎ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｇｉｌｒｏｙ，ＣＡ）から入手する。すべての動物は，クリ
ーンルーム条件下で，マイクロアイソレーターケージでアルファドライ敷きわら
で維持する。動物には，滅菌齧歯類食および水を任意に与える。
【０３７１】 細胞株は，適当な培地（例えば，ＭＥＭ，ＤＭＥＭ，Ｈａｍ'ｓＦ１０，また
はＨａｍ'ｓＦ１２プラス５％−１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）および２ｍＭグ
ルタミン（ＧＬＮ））中で成長させる。すべての細胞培養培地，グルタミン，お
よびウシ胎児血清は，特に断らない限り，Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏ
ｌｏｇｉｅｓ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から購入する。すべての細胞
は，９０−９５％空気および５−１０％ＣＯ2の湿潤環境下で３７℃で成長させ
る。すべての細胞株は，週に２回，定期的に継代し，Ｍｙｃｏｔｅｃｔ法（Ｇｉ
ｂｃｏ）により判定して，マイコプラズマについては陰性である。
【０３７２】 細胞は，コンフルエント，またはそれに近い状態で，０．０５％トリプシン−
ＥＤＴＡで回収し，４５０ｘｇで１０分間ペレット化する。ペレットを滅菌ＰＢ
Ｓまたは培地（ＦＢＳなし）中に懸濁して特定の濃度とし，細胞をマウス（１群
あたり，８−１０匹のマウス，２−１０ｘ１０6細胞／動物）の後側腹部内に移
植する。腫瘍成長は，ベニエカリパスを用いて３−６週間にわたり測定する。腫
瘍体積は，とくに記載のないかぎり，長さｘ幅ｘ高さの積として計算する。Ｐ値
は，スチューデントｔ−テストを用いて計算する。５０−１００μｌの賦形剤（
ＤＭＳＯ，またはＶＰＤ：Ｄ５Ｗ）中の試験化合物は，通常は移植後の第１日か
ら初めて，異なる濃度でＩＰ注入により輸送することができる。
【０３７３】実施例１３１：腫瘍侵襲モデル 以下の腫瘍侵襲モデルが開発されており，ＫＤＲ／ＦＬＫ−１レセプターまた
はＣＤＫ２を選択的に阻害すると同定された化合物の治療的価値および有効性を
評価するために用いることができる。
【０３７４】方法 ８週齢のヌードマウス（雌）（Ｓｉｍｏｎｓｅｎ Ｉｎｃ．）を実験動物とし
て用いる。腫瘍細胞の移植は，層流フード内で行うことができる。麻酔用に，キ
シラジン／ケタミンカクテル（１００ｍｇ／ｋｇケタミンおよび５ｍｇ／ｋｇキ
シラジン）を腹膜内に投与する。中線切開を行って，腹腔を露出して（約１．５
ｃｍの長さ），容量１００μｌの培地中の１０7個の腫瘍細胞を注入する。細胞
は，膵臓の十二指腸葉または結腸の漿膜下に注入する。腹膜および筋肉を６−０
絹連続縫糸により縫合し，皮膚は創傷クリップを用いて縫合する。動物は毎日観
察する。
【０３７５】分析 動物の全体的所見により２−６週間後，マウスを殺し，局所腫瘍の種々の臓器
（肺，肝臓，脳，胃，脾臓，心臓，筋肉）への転移を調べ，分析する（腫瘍サイ
ズ，侵襲の程度，免疫化学，およびインサイチオハイブリダイゼーション測定等
）。
【０３７６】実施例１３４：細胞毒性の測定 治療用化合物は，細胞毒性効果を示すよりも蛋白質キナーゼの阻害活性におい
てより強力でなければならない。化合物の有効性および細胞毒性の尺度は，治療
指数，すなわち，ＩＣ50／ＬＤ50を決定することにより得ることができる。ＩＣ50 （５０％の阻害を達成するのに必要な用量）は，本明細書に記載されるもの等
の標準的な手法を用いて測定することができる。ＬＤ50（５０％の毒性をもたら
す用量）もまた，放出されるＬＤＨの量を測定することにより（Ｋｏｒｚｅｎｉ
ｅｗｓｋｉ ａｎｄ Ｃａｌｌｅｗａｅｒｔ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
Ｍｅｔｈｏｄｓ，６４：３１３，Ｄｅｃｋｅｒ ａｎｄ Ｌｏｈｍａｎｎ−Ｍａ
ｔｔｈｅｓ，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１１５：６１）
，または動物モデルにおける致死用量を測定することにより，標準的な手法によ
り測定することができる（Ｍｏｓｓｍａｎ，１９８３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ，６５：５５−６３）。より大きい治療指数を有する化合物が望ま
しい。治療指数は，２より高くあるべきであり，好ましくは少なくとも１０，よ
り好ましくは少なくとも５０である。
【０３７７】実施例１３５：本発明の化合物の活性 本発明の化合物のいくつかの生物学的および生化学的活性を上述したアッセイ
を用いて試験した。本発明の化合物のいくつかについてＩＣ５０値を測定した。
結果は以下の表１０に示される。
【０３７８】 表１０
【表４０】
【０３７９】
【表４１】
【０３８０】
【表４２】
【０３８１】結論 当業者は，本発明は，その目的を実施し，記載される結果および利点，ならび
に本明細書に固有のものを得るのによく適合していることを容易に理解するであ
ろう。本明細書に記載される分子複合体および方法，手順，処理，分子，特定の
化合物は，現在のところ好ましい態様の代表的なものであり，例示的なものであ
って，本発明の範囲を限定することを意図するものではない。当業者は，特許請
求の範囲において定義される本発明の精神の中に包含される変更および他の用途
をなすであろう。
【０３８２】 当業者は，本発明の範囲および精神から逸脱することなく，本明細書に開示さ
れる本発明に対して置換基の変更および改変をなすことができることを容易に理
解するであろう。
【０３８３】 本明細書において言及されるすべての特許および刊行物は，本発明の属する技
術分野の技術者のレベルを示す。すべての特許および刊行物は，それぞれの刊行
物が特定的に個々に本明細書の一部としてここに引用されることと同じ程度に，
本明細書の一部として引用される。
【０３８４】 本明細書に例示的に記載されている発明は，本明細書に特定的に開示されてい
ない任意の要素または限定なしでも適切に実施することができる。本明細書にお
いて用いた用語および表現は，説明の用語として用いるものであり，限定ではな
い。そのような用語および表現の使用においては，示されかつ記載されている特
徴またはその一部の等価物を排除することを意図するものではなく，特許請求の
範囲に記載される本発明の範囲中で種々の変更が可能であることが理解される。
すなわち，好ましい態様および任意の特徴により本発明を特定的に開示してきた
が，当業者には本明細書に記載される概念の変更および変種が可能であり，その
ような変更および変種も特許請求の範囲に定義される本発明の範囲内であると考
えられることが理解されるべきである。
【０３８５】 さらに，発明の特徴および局面がマーカッシュグループの用語で記載されてい
る場合，当業者は，本発明が，マーカッシュグループのメンバーの個々のメンバ
ーまたはサブグループに関してもまた記載されていることを認識するであろう。
例えば，Ｘが，臭素，塩素およびヨウ素からなる群より選択されるとして記載さ
れている場合，Ｘが臭素である特許請求の範囲およびＸが臭素および塩素である
特許請求の範囲も完全に記載されている。
【０３８６】 本明細書においては，本発明を広くかつ一般的に記載している。一般的開示に
含まれるより狭い種および亜属のそれぞれのグループもまた本発明の一部を形成
する。これには，除かれたものが具体的に記載されているか否かにかかわらず，
属から任意の主題を除く「ただし・・・」またはネガティブ限定を含む発明の一
般的記載が含まれる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4725 Ａ６１Ｋ 31/4725 31/5377 31/5377 Ａ６１Ｐ 3/10 Ａ６１Ｐ 3/10 9/00 9/00 17/06 17/06 19/02 19/02 29/00 29/00 35/00 35/00 37/02 37/02 37/06 37/06 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 401/14 Ｃ０７Ｄ 401/14 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 タン，ペン・チョウ アメリカ合衆国 94556 カリフォルニア 州 モラガ，カミノ リカルド 827 (72)発明者 ハリス，ジー・デイビス アメリカ合衆国 94114 カリフォルニア 州 サン フランシスコ，ルーズベルト ウェイ 417 (72)発明者 リー，シャオユアン アメリカ合衆国 95130 カリフォルニア 州 サン ホセ，ヴェーウッド ドライブ 2437 Ｆターム(参考） 4C063 AA03 AA05 BB01 BB02 BB07 BB08 CC06 CC12 CC14 CC15 CC54 DD03 DD06 EE01 4C086 AA01 AA02 AA03 BC07 BC13 BC17 BC28 BC30 BC73 GA07 GA08 GA09 GA12 MA01 MA04 NA14 ZA36 ZA89 ZA96 ZB07 ZB09 ZB11 ZB15 ZB26 ZC20 ZC35 4C204 BB01 CB03 DB13 DB30 EB03 FB01 GB07 GB24 GB31

Claims (25)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 式（Ｉ）： 【化１】 ［式中， （ａ）Ｒ4−Ｒ6，およびＲ9−Ｒ10は水素であり； （ｂ）Ｒ1，Ｒ2，およびＲ3は，それぞれ独立して，水素，ハロゲン，カルボン
    酸，任意に置換されていてもよいエステル，任意に置換されていてもよいアミド
    ，任意に置換されていてもよいアルキル，任意に置換されていてもよいアルコキ
    シ，トリハロメチル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換
    されていてもよいヘテロアリールからなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ7は，置換されているアルキルおよび置換されているアルコキシからな
    る群より選択される］ に記載される構造を有する化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
  2. 【請求項２】 （ａ）Ｒ1は，水素および任意に置換されていてもよいアル
    キルからなる群より選択され； （ｂ）Ｒ2およびＲ3は，それぞれ独立して，水素，ハロ，カルボン酸，任意に置
    換されていてもよいヘテロアリール，および任意に置換されていてもよいフェニ
    ルからなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ7は，ヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
    ルキル，およびヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
    ルコキシからなる群より選択される， 請求項１記載の化合物。
  3. 【請求項３】 （ａ）Ｒ1は水素からなる群より選択され； （ｂ）Ｒ2は，水素，ハロ，フェニル，またはカルボン酸であり；および （ｃ）Ｒ3は，水素，ハロ，カルボン酸，任意に置換されていてもよいピリジル
    ，および低級アルコキシまたはハロで任意に置換されていてもよいフェニルであ
    り；および （ｄ）Ｒ7は，ヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
    ルキルである，請求項２記載の化合物。
  4. 【請求項４】 Ｒ7は，３−ジエチルアミノプロピルおよび３−ピロリジン
    −１−イル−プロピルからなる群より選択される，請求項３記載の化合物。
  5. 【請求項５】 （ａ）Ｒ1は，水素からなる群より選択され； （ｂ）Ｒ2は，水素，ハロ，フェニル，またはカルボン酸であり； （ｃ）Ｒ3は，水素，ハロ，カルボン酸，任意に置換されていてもよいピリジル
    ，および低級アルコキシまたはハロで任意に置換されていてもよいフェニルであ
    り；および （ｄ）Ｒ7は，ヘテロ脂環式環またはジアルキルアミノで置換されている低級ア
    ルコキシである，請求項３記載の化合物。
  6. 【請求項６】 Ｒ7は，２−ジメチルアミノエトキシ，２−ジエチルアミノ
    エトキシ，２−ピロリジン−１−イル−エトキシ，および２−モルホリン−４−
    イル−エトキシからなる群より選択される，請求項５記載の化合物。
  7. 【請求項７】 ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール
    −２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−フェニル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イ
    ンドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール
    −２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ６−フェニル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イ
    ンドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール
    −２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノ−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    エチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−ブロモ−３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール
    −２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
    ボン酸， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
    ボン酸， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カル
    ボン酸， ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−ピリジン−３−イル−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）
    −１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２
    −オン， ６−（４−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−（３−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−（２−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−（４−フルオロ−フェニル）−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
    ボン酸， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カル
    ボン酸， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ４−（２−ヒドロキシ−エチル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２
    −オン， ６−（４−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−（３−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ６−（２−メトキシ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン，および ６−（４−フルオロ−フェニル）−３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン； からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
  8. 【請求項８】 式（ＩＩ）： 【化２】 ［式中， （ａ）Ｒ11−Ｒ14は水素であり； （ｂ）Ｒ15およびＲ16は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていてもよ
    いアルキル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換されてい
    てもよいヘテロアリールからなる群より選択されるか，またはＲ15およびＲ16は
    ，これらが結合している窒素原子と一緒になって，５員または６員の複素芳香族
    環，５員または６員のヘテロ脂環式環，９員の縮合二環複素芳香族環，および１
    ０員の縮合二環複素芳香族環からなる群より選択される環構造を形成し；および
    （ｃ）Ａは，式（ＩＩＩ），（ＩＶ），および（Ｖ）： 【化３】 ［式中， （ｉ）Ｒ19−Ｒ25およびＲ27−Ｒ31は水素であり； （ｉｉ）Ｒ17およびＲ18は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていても
    よいアルキル，および任意に置換されていてもよいアルコキシからなる群より選
    択され，ただし，Ｒ17およびＲ18の両方が水素であることはなく；および （ｉｉｉ）Ｒ26は，任意に置換されていてもよいアルキルからなる群より選択さ
    れる］ からなる群より選択される］ に記載される構造を有するインドリノン化合物またはその薬学的に許容しうる塩
    。
  9. 【請求項９】 （ｉ）Ｒ15は，水素またはアルキルであり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択さ
    れる１個または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，または５
    または６員のヘテロアリールであり；またはＲ15およびＲ16は，これらが結合し
    ている窒素と一緒になって，２，３−ジヒドロインドール−１−イル，２，３−
    ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイ
    ソキノリン−２−イル環を形成し，ここで，前記環は，ハロまたはアルキルで任
    意に置換されていてもよく； （ｉｉｉ）Ｒ17は，水素，メチル，またはメトキシであり； （ｉｖ）Ｒ18は，ヘテロ脂環式で置換されている低級アルコキシからなる群より
    選択され；および （ｖ）Ａは式ＩＩＩの基である， 請求項８記載の化合物。
  10. 【請求項１０】 （ｉ）Ｒ15は水素またはメチルであり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，メチル，イソプロピル，フェニル，ピリジン−３−イル
    ，３−クロロフェニル，または４−クロロ−２−フルオロフェニルであるか，ま
    たはＲ15およびＲ16は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，２，３
    −ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イ
    ル，５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３
    −ジヒドロ−２Ｈ−イソキノリン−２−イルを形成し； （ｉｉｉ）Ｒ17は，水素，メチル，およびメトキシからなる群より選択され；お
    よび （ｉｖ）Ｒ18は，水素，２−ピロリジン−１−イルエトキシおよび２−モルホリ
    ン−４−イル−エトキシからなる群より選択される； 請求項８記載の化合物。
  11. 【請求項１１】 （ｉ）Ｒ15は，水素またはアルキルであり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択さ
    れる１または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，または５員
    または６員のヘテロアリールであり；または （ｉｉｉ）Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素と一緒になって，２，
    ３−ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−
    イル，または２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イル環を形成し
    ，ここで，前記環はハロまたはアルキルで任意に置換されていてもよく； （ｉｖ）Ｒ26は，任意に置換されていてもよいアルキルからなる群より選択され
    ；および （ｖ）Ａは式ＩＶの基である， 請求項８記載の化合物。
  12. 【請求項１２】 （ｉ）Ｒ15は水素またはメチルであり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，メチル，イソプロピル，フェニル，ピリジン−３−イル
    ，３−クロロフェニル，または４−クロロ−２−フルオロフェニルであり，また
    はＲ15およびＲ16は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，２，３−
    ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル
    ，５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３−
    ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イルを形成し；および （ｉｉｉ）Ｒ26はメチルである， 請求項８記載の化合物。
  13. 【請求項１３】 （ｉ）Ｒ15は水素またはアルキルであり； （ｉｉ）Ｒ16は，水素，アルキル，ハロもしくは未置換低級アルキルから選択さ
    れる１個または２個の置換基で任意に置換されていてもよいフェニル，５または
    ６員のヘテロアリールであり；または Ｒ15およびＲ16は，これらが結合している窒素と一緒になって，２，３−ジヒド
    ロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，また
    は２，３−ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イル環を形成し，ここで，
    前記環はハロまたはアルキルで任意に置換されていてもよく；および （ｉｉｉ）Ａは式Ｖの基である， 請求項８記載の化合物。
  14. 【請求項１４】 （ｉ）Ｒ15は水素またはメチルであり；および （ｉｉ）Ｒ16は，水素，メチル，イソプロピル，フェニル，ピリジン−３−イル
    ，３−クロロフェニル，または４−クロロ−２−フルオロフェニルであり，また
    はＲ15およびＲ16は，これらが結合している窒素原子と一緒になって，２，３−
    ジヒドロインドール−１−イル，２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル
    ，５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−イル，または２，３−
    ジヒドロ−２Ｈ−イソイソキノリン−２−イルを形成し；および （ｉｉｉ）Ａは式Ｖの基である， 請求項８記載の化合物。
  15. 【請求項１５】 ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エ
    トキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
    インドール−５−スルホン酸アミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸アミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸メチルアミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸ジメチルアミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸イソプロピルアミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸フェニルアミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸ピリジン−３−イルアミド， ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［５−（２−ピ
    ロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１
    ，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（３−クロロ−フェニル）−アミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（３−クロロ−フェニル）−メチル−アミド， ２−オキソ−３−［５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−アミド， ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−３−［５−（２
    −ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］
    −１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−３−［５−
    （２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレ
    ン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［
    ５−（２−ピロリジン−１−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸メチルアミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸ジメチルアミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸イソプロピルアミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸フェニルアミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸ピリジン−３−イルアミド， ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［５−（２−モ
    ルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−１
    ，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（３−クロロ−フェニル）−アミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（３−クロロ−フェニル）−メチル−アミド， ３−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−
    イルメチレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スル
    ホン酸（４−クロロ−２−フルオロ−フェニル）−アミド， ５−（３，４−ジヒドロ−２Ｈ−キノリン−１−スルホニル）−３−［５−（２
    −モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］
    −１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−スルホニル）−３−［５−
    （２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレ
    ン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ５−（５−ブロモ−２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−３−［
    ５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド， ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
    ３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド， ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド， ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド， ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
    ３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド， ３−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イルメチレン）−２−オキソ−２，
    ３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−５−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド，および ３−（４−メトキシ−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２
    ，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド； からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容しうる塩。
  16. 【請求項１６】 オキシインドールをアルデヒドと反応させることにより形
    成することができる少なくとも５種類のインドリノン化合物のコンビナトリアル
    ライブラリであって，前記オキシインドールは，式ＶＩＩまたはＶＩＩＩ： 【化４】 ［式中， （ａ）Ｒ51−Ｒ54，Ｒ64，およびＲ65は水素であり； （ｂ）Ｒ55およびＲ56は，それぞれ独立して，水素，任意に置換されていてもよ
    いアルキル，任意に置換されていてもよいアリール，および任意に置換されてい
    てもよいヘテロアリールからなる群より選択されるか，またはＲ55およびＲ56は
    ，一緒になって，任意に置換されていてもよい５員または６員のヘテロ脂環式環
    を形成し； （ｃ）Ｒ61−Ｒ63は，それぞれ独立して，水素，ハロゲン，カルボン酸，任意に
    置換されていてもよいアリール，任意に置換されていてもよいヘテロアリール，
    およびアミドからなる群より選択される］ に記載される構造を有するかまたはその薬学的に許容しうる塩であり，および前
    記アルデヒドは，式（ＩＸ）： 【化５】 ［式中， （ｄ）Ｒ71およびＲ73−Ｒ75は水素であり； （ｅ）Ｒ72は，水素，任意に置換されていてもよいアルキル，および任意に置換
    されていてもよいアルコキシからなる群より選択される］ に記載される構造を有するすることを特徴とするコンビナトリアルライブラリ。
  17. 【請求項１７】 （ａ）Ｒ55およびＲ56は，それぞれ独立して，水素，メチ
    ル，イソプロピル，２−メトキシエチル，ベンジル，４−フルオロベンジル，２
    −メトキシフェニル，３−フルオロフェニル，４−フルオロフェニル，３−クロ
    ロフェニル，３−ピリジルからなる群より選択されるか，またはＲ55およびＲ56 は，一緒になってピロール，４−メチルピペラジンからなる群より選択される環
    を形成し； （ｂ）Ｒ61−Ｒ63は，それぞれ独立して，水素，ブロモ，フェニル，２−メトキ
    シフェニル，３−メトキシフェニル，４−メトキシフェニル，３−ピリジル，−
    ＣＯＯＨ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ2ＣＨ3，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ2Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−
    Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ3）Ｃ（Ｏ）ＯＨ，−Ｃ（Ｏ）ＮＨＣＨ（ＣＨ（ＣＨ3）2 ）Ｃ（Ｏ）ＯＨおよび 【化６】 からなる群より選択され；および （ｃ）Ｒ72は，水素，２−ジエチルアミノ−エトキシ，および３−ピロリジン−
    １−イル−プロピルからなる群より選択される， 請求項１６記載のコンビナトリアルライブラリ。
  18. 【請求項１８】 ：（ａ）前記アルデヒドが，２−ホルミル−１Ｈ−インド
    ール，２−ホルミル−５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドー
    ル，２−ホルミル−５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール，
    および２−ホルミル−５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イ
    ンドールからなる群より選択され；および （ｂ）前記オキシインドールが， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミ
    ド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルア
    ミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−クロ
    ロ−２−フルオロ−フェニル）エチル−アミド， ５−（２，３−ジヒドロ−インドール−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−
    インドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−クロ
    ロ−２−フルオロ−フェニル）メチル−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−クロ
    ロ−２−フルオロ−フェニル）アミド， ５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸［２−（４
    −メトキシ−フェニル）−２−オキソ−エチル］−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−メト
    キシ−フェニル）−アミド， Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−ベンズ
    アミド， シクロペンタンカルボン酸（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
    −５−イル）−アミド， （２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−カルバミン
    酸ベンジルエステル， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸４−フルオ
    ロ−ベンジルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸［３−（２
    −オキソ−ピロリジン−１−イル）プロピル］−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（１，２，
    ３，４−テトラヒドロ−ナフタレン−１−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（フラン−
    ２−イルメチル）−アミド， ３−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホニルアミ
    ノ）−チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−クロ
    ロ−フェニル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ｍ−トリル
    アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−ヒド
    ロキシ−エチル）−アミド， ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホニル）−
    ピペラジン−１−カルボン酸エチルエステル， ４−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホニル）−
    ピペラジン−１−カルボアルデヒド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メト
    キシ−エチル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸プロピルア
    ミド，５−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−イ
    ンドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ベンジルア
    ミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メト
    キシ−フェニル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロプロ
    ピルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ピリジン−
    ３−イルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸フェニルア
    ミド， ５−（ピロリジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オ
    ン， ５−（４−アセチル−ピペラジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−イン
    ドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロヘキ
    シルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−モル
    ホリン−４−イル−エチル）アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロブチ
    ルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（１−フェ
    ニル−エチル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸シクロペン
    チルアミド， ５−（２−ピロリジン−１−イル−アセチル）−１，３−ジヒドロ−インドール
    −２−オン， Ｎ−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−アセト
    アミド， （２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−イル）−カルバミン
    酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸イソプロピ
    ルアミド， トルエン−４−スルホン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インド
    ール−４−イル）−エチルエステル， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸エチルアミ
    ド， ４−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４−メト
    キシ−フェニル）−アミド， ４−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−
    ２−オン， ４−（２−ピロリジン−１−イル−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−
    ２−オン， ４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−エチル］−１，３−ジヒド
    ロインドール−２−オン， ４−［２−（３−ブロモ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−インド
    ール−２−オン， ４−（２−ブロモ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ４−（２−ブロモ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６−メト
    キシ−４’−メチルスルファニル−ビフェニル−３−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４−メト
    キシ−３−チオフェン−３−イル−フェニル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸ビフェニル
    −３−イルアミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６−メト
    キシ−３’−トリフルオロメチル−ビフェニル−３−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（４’−フ
    ルオロ−６−メトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６−メト
    キシ［１，１’，４’，１"］テルフェニル−３−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（６，４’
    −ジメトキシ−ビフェニル−３−イル）−アミド， ２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（３−クロ
    ロ−４−メトキシフェニル）−アミド， イソプロピル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イン
    ドール−４−イル）−エチルエステル， ４−［２−（３−トリフルオロメチル−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒ
    ドロ−インドール−２−オン， ４−［２−（５−クロロ−ピリジン−３−イルオキシ）−エチル］−１，３−ジ
    ヒドロ−インドール−２−オン， ４−［２−（４−メトキシ−フェノキシ）−エチル］−１，３−ジヒドロ−イン
    ドール−２−オン， ４−（２−エトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ４−（２−メトキシ−エチル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， エチル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール
    −４−イル）−エチルエステル， ビフェニル−２−イル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１
    Ｈ−インドール−４−イル）−エチルエステル， ６−ピリジン−３−イル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ６−（２−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ６−（３−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ６−（４−メトキシ−フェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン，
    および シクロヘキシル−カルバミン酸２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−イ
    ンドール−４−イル）−エチルエステル； またはその薬学的に許容しうる塩からなる群より選択される，請求項１６記載の
    コンビナトリアルライブラリ。
  19. 【請求項１９】 オキシインドールとアルデヒドとの前記反応により， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    ジメチルアミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−（４−メチルピペラジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ
    −インドール−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−５−（ピロリジン−１−スルホニル）−１，３−ジヒドロ−インドー
    ル−２−オン， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    （２−メトキシ−エチル）−アミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    ピリジン−３−イルアミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    （２−メトキシ−フェニル）アミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    （３−クロロフェニル）アミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    （４−フルオロベンジル）アミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    アミド， ３−［５−（３−ジエチルアミノ−プロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメ
    チレン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−スルホン酸
    イソプロピルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ベンジルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−５−（ピロリジン−１−スルホ
    ニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メトキシエチル）アミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（２−メトキシフェニル）アミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（３−クロロフェニル）アミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸（４−フルオロベンジル）アミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸アミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸メチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸ジメチルアミド， ３−（１Ｈ−インドール−２−イルメチレン）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ
    −１Ｈ−インドール−５−スルホン酸イソプロピルアミド， ５−ブロモ−３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−
    ２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−６−（３−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
    オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−６−（４−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
    オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−６−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−６−（２−メトキシフェニル）−１，３−ジヒドロ−インドール−２−
    オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸エ
    チルアミン， ６−ブロモ−３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−
    ２−イルメチレン］−１，３−ジヒドロインドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−６−ピリジン−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−５−フェニル−１，３−ジヒドロ−インドール−２−オン， ３−［５−（２−ジエチルアミノエトキシ）−１Ｈ−インドール−２−イルメチ
    レン］−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−４−カルボン酸（
    ３−クロロ−４−メトキシフェニル）−アミド， ２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−カル
    ボン酸， ２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−イン
    ドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−カル
    ボン酸， （｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−
    インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−５−
    カルボニル｝−アミノ）−酢酸， ［｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１Ｈ−
    インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−６−
    カルボニル｝−アミノ）−酢酸， ２−（｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１
    Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−
    ５−カルボニル｝−アミノ）−プロピオン酸， ３−メチル−２−（｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プ
    ロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
    インドール−５−カルボニル｝−アミノ）−酪酸， ２−（｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プロピル）−１
    Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−
    ６−カルボニル｝−アミノ）−プロピオン酸，および ３−メチル−２−（｛２−オキソ−３−［５−（３−ピロリジン−１−イル−プ
    ロピル）−１Ｈ−インドール−２−イルメチレン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−
    インドール−６−カルボニル｝−アミノ）−酪酸； からなる群より選択される化合物またはその薬学的に許容しうる塩が形成される
    ，請求項１６記載のコンビナトリアルライブラリ。
  20. 【請求項２０】 請求項１，７，８，または１６のいずれかに記載のインド
    リノン化合物を用いて，インビトロでまたはインビボで蛋白質キナーゼまたは蛋
    白質ホスファターゼの機能を調節する方法であって，前記蛋白質キナーゼまたは
    蛋白質ホスファターゼを発現する細胞を前記化合物と接触させる工程を含む方法
    。
  21. 【請求項２１】 制御されない蛋白質キナーゼまたは蛋白質ホスファターゼ
    シグナル伝達により媒介される異常な状態を治療する方法であって，治療を必要
    とする生物に，治療上有効量の請求項１，７，８，または１６のいずれかに記載
    の化合物を投与することを含む方法。
  22. 【請求項２２】 前記生物が哺乳動物であり，および前記異常な状態が，血
    管増殖性疾患，メサンギウム細胞増殖性疾患，および繊維性疾患からなる群より
    選択される，請求項２１記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記異常な状態が癌である，請求項２２記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記癌が，扁平上皮癌，星状細胞腫，カポジ肉腫，神経膠
    芽細胞腫，肺癌，膀胱癌，頭頚部癌，黒色腫，卵巣癌，前立腺癌，乳癌，小細胞
    肺癌，神経膠腫，結腸直腸癌，尿生殖器癌および胃腸癌からなる群より選択され
    る，請求項２３記載の方法。
  25. 【請求項２５】 前記異常な状態が，糖尿病，自己免疫疾患，過増殖性疾患
    ，再狭窄，繊維症，乾癬，フォン・ヒッペル−リンダウ疾病，変形性関節症，慢
    性関節リウマチ，新脈管形成，炎症性疾患，免疫学的疾患および心臓血管疾患か
    らなる群より選択される，請求項２２記載の方法。
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