FI107388B - Förfarande för framställning av renade heparinfraktioner, som inte innehåller nitrosoföreningar - Google Patents

Claims (9)

1. Förfarande för framställning av en heparinfrak-tion, som har en totalmängd av nitrosoföreningar mindre än 5 eller lika stor som 500 ppb, kännetecknat därav, att en vattenlösning av en heparinfraktion, som framställts genom depolymerisation med salpetersyrlighet, besträlas med ultraviolettsträlning.

2. Förfarande enligt patentkrav 1, kanne-io tecknat därav, att heparinfraktionen, som skall be- handlas, utgörs av lägmolekulärt heparin.

3. Förfarande enligt patentkrav 1, kännetecknat därav, att en vattenlösning av en heparinfraktion, som framställts genom depolymerisation med 15 salpetersyrlighet och som har en koncentration av 5 - 15 % w/v, besträlas med ett ultraviolettbesträlningssystem med en väglängd av 180 - 350 nm, vid en temperatur av ca 5 -50 °C, da lösningens pH är 3 - 8.

4. Förfarande enligt patentkrav 7 eller 8, k ä n-20 netecknat därav, att UV-besträlningen utförs vid en väglängd av 254 nm vid ca 15 - 35 °C och i ett pH av 5-8.

5. Förfarande enligt patentkrav 1 för framställ- « ; ning av lägmolekulärt heparin, som utgörs av depolymerise- J .1 2 ; 25 rat heparin, vilket erhällits genom depolymerisation med j3: salpetersyrlighet frän naturligt heparin, som härstammar • · · ·1. : frän slemhinna hos svintarm eller nötlunga eller annat he- i · · —1 4 % parin, som extraherats frän vävnader eller organ av olika !'··, djur, och vilket har följande karakteristiska egenskaper: • · · 30 en genomsnittlig molekylvikt mindre än 8000 Da, ätminstone 60 % av alla komponenter har en genom-] 1 snittlig molekylvikt mindre än 8000 Da, <</ anti-faktor Xa-aktiviteten är icke mindre än • 60 IU/mg « t t I 35 förhällandet av anti-faktor-Xa/anti-faktor-IIa- / # aktiviteter är icke mindre än 1,5, • « « « 1 1 • 1 % 1 2 • 1 3 • · 107388 sora farmaceutiskt godtagbart sait, kännetecknat därav, att: (a) 5 - 15 % w/v av en ofraktionerad natriurahepa-rinlösning i vatten behandlas med en natriuranitritlösning, 5. ett förhällande av 15 - 69 g nitrit per kg heparin i närvaro av klorvätesyra i ett pH av 1 - 5, företrädesvis 1,5 - 4, under en behandlingstid av 20 - 50 minuter, och den sd erhällna föreningen reduceras, företrädesvis i en alkalisk lösning, med 5 - 20 g natriumborohydrid per kg ίο heparin använt sora utgängsmaterial, överskottet av natriumborohydrid sönderdelas med klorvätesyra, reaktionslös-ningen eventuellt neutraliseras, och produkten utfälls med etanol, efter att det sä erhällna lägmolekulära heparinet evetuellt fraktionerats en eller flera ganger med alkohol, 15 (b) den sä erhällna lösningen besträlas med ultra- violettstraining, (c) om sä önskas, utförs kromatografisk rening, och det depolymeriserade natriumheparinet, som renats och som ej alls innehäller nitrosoföreningar, isoleras genom 20 utfällning med natriumklorid och etanol, och eventuellt (d) omvandlas natriumsaltet tili ett annat farmaceutiskt godtagbart sait.

6. Förfarande enligt patentkrav 5, k ä n n e -. t e c k n a t därav, att man framställer lägmolekulärt • i i i 25 heparin som natriumsalt eller kalciumsalt.

.···. 7. Förfarande enligt patentkrav 5 eller 6, k ä n- • * * *· netecknat därav, att man framställer ett natrium- < » · 1 « ·· *.* sait av depolymeriserat heparin, som erhällits genom depo- **” lymerisering av naturligt heparin med salpetersyrlighet, » » i *·* ’ 30 vilket heparin härstammar frän slemhinna hos svintarm, och vilket har följande karakteristiska egenskaper: « *·’** den genomsnittliga molekylvikten är 1700 3300 Da, ; ( 90 % av dess komponenter har en molekylvikt av I i 35 1000 - 8000 Da, i < < « I t ( » 4 4 4 4 4 « 4 4 4 1 4 4 9 4 • 9 9 f 4 107388 huvuddelen av dess komponenter har en 2-O-sulfo-a-L-idopyranosuronsyrastruktur i den oreducerande ändan och en 6-0-sulfo-2,5-anhydro-D-mannitolstruktur i den reduce-rande ändan, 5 sulfateringsgraden är ca 2,1, anti-faktor Xa -aktiviteten är 60 - 80 IU/mg, anti-faktor Ha -aktiviten är icke större än 25 IU/mg, totalmängden nitrosoföreningar är mindre än eller ίο lika stor som 100 ppb.

8. Förfarande enligt patentkrav 1, känne-t e c k n a t därav, att man framställer ett nariumsalt av depolymeriserat heparin, som erhällits genom depolyme-risering av naturligt heparin med salpersyrlighet, vilket 15 heparin härstammar frän tarmslemhinna hos svin och i vilket : den genomsnittliga molekylvikten är 1700 3300 Da, 90. av dess komponenter har en molekylvikt av 20 1000 - 8000 Da, huvuddelen av dess komponenter har en 2-O-sulfo-a-L-idopyranosuronsyrastruktur i den oreducerande ändan och en 6-0-sulfo-2,5-anhydro-D-mannitolstruktur i den reduce- ( I ;·! ! rande ändan, v ' 25 sulfateringsgraden är ca 2,1, • · · anti-faktor Xa -aktiviteten är 60 - 80 IU/mg, : anti-faktor Ila -aktiviten är icke större än • « ·;· 25 IU/mg, och ···· ;1j1; totalmängden nitrosoföreningar är mindre än eller 30 lika stor som 50 ppb, kännetecknat därav, att ♦ · (a) en ofraktionerad vattenlösning av heparin be-handlas med klorvätesyra och ett aikaiimetailnitrit i en ·,· mängd av 3,5 - 4 % av heparinets vikt, lösningens pH hölls : ' : 35 hela tiden surt och närvaron av nitrit-joner observeras, < · 4 : tills dessa ej finns närvarande, blandningen görs aika- « «· • · · · • ♦ • · « « · 107388 lisk, reduceras med natriumborohydrid och den depolymeri-serade föreningen isoleras i en neutral omgivning genom utfalining med etanol, sedan (b) förs en vattenlösning av den sä erhällna fö-5 reningen i ett pH av ca 7 till ett ultraviolettbe-strälningssystem vid 254 nm, sedan sätts den sä erhällna lösningen i en anjonbytarkolonn, kolonnen tvättas med vat-ten och den slutliga föreningen tillvaratages genom ut-fällning med natriumklorid och etanol. ίο

9. Förfarande enligt patentkrav 8, kanne- t e c k n a t därav, att i steg (b) används ett ultravio-lettsträlningssystem vid 254 nm under 9-15 minuter med hjälp av en UV-lampa med 16 W, och koncentrationen av föreningen, som utsätts för UV-strälning, är 8 - 12 % w/v. • » I • « · · • · · « · · • · • 1 • ♦ · • 1 • · 1 • 2 • 1 • •o ♦ ·· • · · • · · • O 4 « · • « 4 4« · « · · • · · • · 2 • · · • · » « ·