ES2971881T3

ES2971881T3 - Combinación de zanubrutinib con un anticuerpo anti-cd20 o anti-pd-1 para su uso en el tratamiento del cáncer

Info

Publication number: ES2971881T3
Application number: ES17841107T
Authority: ES
Inventors: Nan Hu; Lai Wang; Jing Song; Tong Zhang; Kang Li; Lusong Luo; Min Wei; Zhiwei Wang; Yunhang Guo
Original assignee: Beigene Switzerland GmbH
Current assignee: Beigene Switzerland GmbH
Priority date: 2016-08-19
Filing date: 2017-08-18
Publication date: 2024-06-10
Anticipated expiration: 2037-08-18
Also published as: DK3500299T3; EP3500299B1; EP3500299A4; HUE065528T2; US20210275530A1; US20230364096A1; FI3500299T3; CN110087680A; WO2018033135A1; TWI739887B; TW201808298A; CA3034326A1; CN118252927A; AU2017313085B2; AU2017313085A1; EP3500299A1; PT3500299T; CN110087680B; US11701357B2; EP4353747A2

Abstract

Un método para la prevención, retraso de la progresión o tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprende administrar al sujeto que lo necesita un inhibidor de Btk, particularmente, (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunológico o un agente de terapia dirigida. Una combinación farmacéutica que comprende un inhibidor de Btk, particularmente, (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5- a]pirimidina-3-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma, en combinación con un inhibidor de puntos de control inmunológico o un agente de terapia dirigida. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Combinación de zanubrutinib con un anticuerpo anti-cd20 o anti-pd-1 para su uso en el tratamiento del cáncer

La presente solicitud reivindica el beneficio de prioridad a la Solicitud Internacional N.° PCT/CN2016/096082 presentada el 19 de agosto de 2016.

Campo de la invención

En el presente documento se desvela un método para retrasar la progresión o para el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprende administrar al sujeto que lo necesite un inhibidor de Btk(en particular (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo-[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma) en combinación con un inhibidor de punto de control inmunitario o un agente de terapia dirigida. En el presente documento también se desvela una combinación farmacéutica que comprende un inhibidor de Btk (en particular (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma) en combinación con un inhibidor de punto de control inmunitario o un agente de terapia dirigida, y el uso de la misma.

Las referencias a los métodos de tratamiento mediante terapia o cirugía o métodos de diagnósticoin vivoen la presente descripción deben interpretarse como referencias a compuestos de la presente invención para su uso en esos métodos.

La invención se define en las reivindicaciones. Cualquier materia objeto desvelada en el presente documento que esté fuera del alcance de las reivindicaciones se proporciona únicamente como información o referencia.

Antecedentes de la invención

La tirosina cinasa de Bruton (Btk) pertenece a la familia Tec de tirosina cinasas citoplasmáticas, que es la segunda familia más grande de cinasas no receptoras en seres humanos [Vetrieet al., Nature361: 226-233, 1993; Bradshaw,Cell Signal.22: 1175-84, 2010]. Se expresa en todos los linajes celulares del sistema hematopoyético, excepto los linfocitos T, y se ubica en la médula ósea, el bazo y el tejido de los ganglios linfáticos [Smithet al., J. Immunol.152: 557-565, 1994]. Las mutaciones inactivadoras en el gen que codifica Btk provocan agammaglobulinemia ligada a X (XLA) en seres humanos e inmunodeficiencia ligada a X (XID) en ratones [Conleyet al., Annu. Rev. Immunol.27: 199 227, 2009]. Ambas enfermedades se caracterizan por defectos drásticos en el desarrollo y la función de los linfocitos B, lo que sugiere la función esencial de Btk para el desarrollo y la función de los linfocitos B. Además, la activación constitutiva de Btk en linfocitos B da como resultado la acumulación de células plasmáticas autorreactivas [Kersseboomet al., Eur J Immunol.40: 2643-2654, 2010]. Btk se activa mediante cinasas de la familia Src corriente arriba en la vía de señalización de BCR. Una vez activada, Btk a su vez fosforila la fosfolipasa-Cy (PLCy), conduciendo a la movilización de Ca2+ y la activación de las vías de NF-kB y MAP cinasa. Estos acontecimientos de señalización proximal promueven la expresión de genes implicados en la proliferación y la supervivencia [Humphrieset al., J. Biol.Chem.279: 37651, 2004]. Además de función reguladora esencial corriente abajo del BCR, la actividad de Btk también desempeña una función fundamental en la señalización de FcR. La señalización a través de receptores asociados a FcRy también promueve la producción de citocinas proinflamatorias dependientes de Btk por parte de células tales como los macrófagos [Di Paoloet al., Nat. Chem. Biol.7: 41-50, 2011]. Btk ha sido una diana importante debido a su ubicación proximal en las vías de señalización de BCR y FcR. Los estudios preclínicos muestran que los ratones con deficiencia de Btk son resistentes al desarrollo de artritis inducida por colágeno. Por otra parte, estudios clínicos de Rituxan, un anticuerpo CD20 para agotar los linfocitos B maduros, revelan la función clave de los linfocitos B en una serie de enfermedades inflamatorias tales como artritis reumatoide, lupus eritematoso sistémico y esclerosis múltiple [Gurcanet al., Int. Immunopharmacol.9: 10-25, 2009]. Además, la activación aberrante de Btk desempeña una función importante en la patogenia de linfomas de linfocitos B, lo que indica que la inhibición de Btk es útil en el tratamiento de neoplasias malignas hemáticas [Daviset al., Nature463: 88-92, 2010].

Además, la activación aberrante de Btk desempeña una función importante en la patogenia de los linfomas de linfocitos B, lo que indica que la inhibición de Btk es útil en el tratamiento de neoplasias malignas hemáticas [Daviset al., Nature463: 88-92, 2010)]. El inhibidor covalente de BTK ibrutinib (PCI-32765, Imbruvica®) fue aprobado por la Administración de Alimentos y Fármacos de EE.UU. para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica (LLC), el linfoma de células del manto (LCM) y la macroglobulinemia de Waldenstrom (MW).

El documento WO 2016/087994 A1 describe un método de tratamiento de un cáncer en un ser humano, que comprende la etapa de administrar una dosis terapéuticamente eficaz de un inhibidor de BTK, es decir, ibrutinib y un anticuerpo anti-CD20, incluyendo Obinutuzumab.

El documento WO 2015/061752 A1 describe métodos de tratamiento de cánceres y trastornos autoinmunitarios, que implican el uso de un inhibidor de BTK, ibrutinib, con anticuerpo anti-PD-1.

El documento WO2014/173289A1 desveló una serie de compuestos heterocíclicos condensados que tienen la siguiente Fórmula general (I) o un estereoisómero de los mismos, o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos como inhibidores de Btk, que han demostrado una actividad inhibidora potente contra la tirosina cinasa de Bruton.

La solicitud PCT no publicada PCT/CN2016/095510 desveló una forma cristalina del inhibidor de Btk en el documento WO 2014/173289 A1, en particular, (S)-7-(1 -acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida (en lo sucesivo en el presente documentoCompuesto 1) para el tratamiento de cánceres con aberraciones en el receptor de linfocitos B (BCR) y la vía de señalización de FcR en los que Btk desempeña funciones importantes. ElCompuesto 1ha demostrado tener actividades inhibidoras potentes e irreversibles contra Btk.

Los inventores de la presente solicitud han descubierto que la combinación de un inhibidor de Btk (en particular, elCompuesto 1mencionado anteriormente) con un agente de inmunoterapia o un agente de terapia dirigida produce una inhibición significativa del crecimiento tumoral en cánceres con aberraciones en el receptor de linfocitos B en comparación con la monoterapia de cada uno de los agentes farmacéuticos activos anteriores solos.

Sumario de la invención

La invención proporciona un inhibidor de Btk, como se define en las reivindicaciones, para su uso en un método para el retraso de la progresión o el tratamiento del cáncer en un sujeto, también como se define en las reivindicaciones. No se reivindica explícitamente, pero es útil para comprender la invención, una combinación farmacéutica para su uso en la prevención, el retraso de la progresión o el tratamiento del cáncer, que comprende un inhibidor de Btk de Fórmula(I)o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación con un inhibidor de punto de control inmunitario o un agente de terapia dirigida.

No se reivindica explícitamente, pero es útil para comprender la invención, un uso de una combinación farmacéutica en la fabricación de un medicamento para su uso en la prevención, el retraso de la progresión o el tratamiento del cáncer, comprendiendo dicha combinación farmacéutica un inhibidor de Btk de Fórmula(I)o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y un inhibidor de punto de control inmunitario o un agente de terapia dirigida.

No se reivindica explícitamente, pero es útil para comprender la invención, un artículo de fabricación o "kit" que comprende un primer recipiente, un segundo recipiente y un prospecto, en donde el primer recipiente comprende al menos una dosis de un medicamento que comprende un inhibidor de Btk de Fórmula(I)o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, el segundo recipiente comprende al menos una dosis de un medicamento que comprende un inhibidor de punto de control inmunitario o un agente de terapia dirigida, y el prospecto comprende instrucciones para tratar el cáncer en un sujeto que usa los medicamentos.

El método y la combinación farmacéutica desvelados en el presente documento, como terapia de combinación, producen significativamente más eficacia que cualquiera de los agentes por sí solos.

En una realización, el agente de terapia dirigida es un anticuerpo anti-CD20 como se define en las reivindicaciones. En una realización, el inhibidor de punto de control inmunitario es un inhibidor de PD-1 como se define en las reivindicaciones.

En una realización, el cáncer es un cáncer hemático. En una realización, el cáncer hemático es una leucemia, un linfoma, un mieloma, un linfoma no Hodgkin (LNH), un linfoma de Hodgkin (LH) o una neoplasia maligna de linfocitos B. En una realización, el cáncer hemático es una neoplasia maligna de linfocitos B. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), tricoleucemia (TL), leucemia de tipo Burkitt (LB), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro germinal (LDLBG-BCG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro no germinal (LDLBG-BCnoG), LDLBG con subtipo indeterminado, linfoma primario del sistema nervioso central (LPSNC), linfoma secundario del sistema nervioso central (LSNCS) de origen mamario o testicular, mieloma múltiple, linfoma de linfocitos B de la zona marginal extranodal, linfoma de linfocitos B de la zona marginal nodal, linfoma de Burkitt, linfoma de alto grado no Burkitt de linfocitos B, linfoma mediastínico primario de linfocitos B, linfoma inmunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico de linfocitos B precursores, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de la zona marginal esplénica, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastínico (tímico) de linfocitos B grandes, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma de efusión primaria, granulomatosis linfomatoide o una combinación de los mismos. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG). En una realización, el LDLBG es un linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), LDLBG-BCG o LDLBG-BCnoG. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R). En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG). En una realización, el LDLBG en recaída o refractario es linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), LDLBG-BCG o LDLBG-BCnoG. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R) es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B metastatizada. En una realización, la neoplasia maligna de linfocitos B metastatizada es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos.

En una realización, el cáncer es un sarcoma o carcinoma. En una realización, el cáncer se selecciona de cáncer anal; cáncer de apéndice; cáncer de vías biliares (es decir, colangiocarcinoma); cáncer de vejiga; cáncer de mama; cáncer de cuello de útero; cáncer de colon; cáncer de primario desconocido (CPD); cáncer de esófago; cáncer de ojo; cáncer de las trompas de Falopio; cáncer gastroenterológico; cáncer de riñón; cáncer de hígado; cáncer de pulmón; meduloblastoma; melanoma; cáncer oral; cáncer de ovario; cáncer pancreático; enfermedad paratiroidea; cáncer de pene; tumor de la pituitaria; cáncer de próstata; cáncer de recto; cáncer de piel; cáncer de estómago; cáncer testicular; cáncer de garganta; cáncer de tiroides; cáncer de útero; cáncer de vagina; cáncer de vulva; o una combinación de los mismos. En una realización, el cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal, melanoma o una combinación de los mismos. En una realización, el cáncer de colon es adenocarcinoma, tumores carcinoides gastrointestinales, tumores del estroma gastrointestinal, linfoma colorrectal primario, leiomiosarcoma, melanoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma mucinoso, adenocarcinoma de células en anillo de sello o una combinación de los mismos. En una realización, el cáncer es un cáncer en recaída o refractario. En una realización, el cáncer en recaída o refractario se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal, melanoma o una combinación de los mismos. En una realización, el cáncer es un cáncer metastatizado. En una realización, el cáncer metastatizado se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal y melanoma.

El inhibidor de BTK es (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida (Compuesto 1)o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. En una realización de cada uno de los cinco aspectos anteriores, el inhibidor de Btk y el inhibidor de punto de control inmunitario, o un agente de terapia dirigida, se administran simultáneamente, secuencialmente o intermitentemente.

Breve descripción de los dibujos

LaFIG. 1muestra el efecto de la combinación deCompuesto 1y mAb anti-CD20 (obinutuzumab) sobre el crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de LCM REC-1/NK92MI.

LaFIG. 2muestra el efecto de la combinación deCompuesto 1y mAb anti-CD20 (obinutuzumab) sobre el crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de LDLBG TMD-8 humano.

LaFIG. 3muestra los efectos de la combinación de mAb anti-CD20 (rituximab) e inhibidor de BTK (incluyendo elCompuesto 1e ibrutinib) sobre el crecimiento tumoral en el modelo de xenoinjerto de LCM REC-1 humano. LaFIG. 4muestra los efectos de la combinación de mAb anti-CD20 (rituximab) e inhibidor de BTK (incluyendo elCompuesto 1e ibrutinib) sobre el peso tumoral en el modelo de xenoinjerto de LCM REC-1 humano (el Día 14). LaFIG. 5muestra los efectos de la combinación de mAb anti-PD-1 (Mab 1) yCompuesto 1sobre el volumen tumoral en el modelo alógeno de carcinoma epidermoide A431 humano.

LaFIG. 6muestra los efectos de la combinación deCompuesto 1y mAb anti-PD-1 (pembrolizumab) sobre el volumen tumoral en el modelo alógeno de carcinoma epidermoide A431 humano.

LaFIG. 7muestra el efecto del inhibidor de BTK (incluyendo elCompuesto 1e ibrutinib) sobre el efecto ADCC inducido por mAb anti-CD20 (obinutuzumab).

LaFIG. 8muestra un patrón de difracción de rayos X delCompuesto 1en forma cristalina.

LaFIG. 9muestra la RMN-1H de la forma cristalina delCompuesto 1.

LaFIG. 10muestra la RMN-13C de la forma cristalina delCompuesto 1.

Descripción detallada de la invención

Abreviaturas (1):

Abreviaturas (2):

Definiciones

A menos que se defina específicamente en otra parte del presente documento, todos los demás términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el significado comprendido habitualmente por un experto en la materia a la que pertenece la presente invención.

Como se usa en el presente documento, incluyendo las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular de palabras tales como"un","uno/a"y"el/la", incluyen sus referencias en plural correspondientes a menos que el contexto indique claramente otra cosa.

El término"o"se usa en el presente documento para expresar, y se usa indistintamente con, el término "y/o" a menos que el contexto dicte claramente otra cosa.

A lo largo de la presente memoria descriptiva y de las siguientes a continuación, a menos que el contexto requiera otra cosa, el término"comprenden"y variantes tales como"comprende"y"que comprende", se entenderá que implica la inclusión de un agente activo (por ejemplo, un mAb o un inhibidor de Btk) o una secuencia de aminoácidos indicada, pero sin la exclusión de cualquier otro principio activo o secuencia de aminoácidos. Cuando se usa en el presente documento, la expresión "que comprende" puede ser intercambiable con la expresión"que contiene"o"que incluye".

El término"alquilo"se refiere a un grupo hidrocarburo seleccionado de grupos hidrocarburo saturados lineales y ramificados de 1-18, o 1-12, o 1-6 átomos de carbono. Los ejemplos del grupo alquilo incluyen metilo, etilo, 1 -propilo 0 n-propilo ("n-Pr"), 2-propilo o isopropilo ("i-Pr"), 1 -butilo o n-butilo ("n-Bu"), 2-metil-l -propilo o isobutilo ("i-Bu"), 1-metilpropilo o s-butilo ("s-Bu"), y 1,1-dimetiletilo o t-butilo ("t-Bu"). Otros ejemplos del grupo alquilo incluyen los grupos 1 -pentilo, 2-pentilo, 3-pentilo, 2-metil-2-butilo, 3-metil-2-butilo, 3-metil-1-butilo, 2-metil-l -butilo, 1-hexilo, 2-hexilo, 3-hexilo, 2-metil-2-pentilo, 3-metil-2-pentilo, 4-metil-2-pentilo, 3-metil-3-pentilo, 2-metil-3-pentilo, 2,3-dimetil-2-butilo y 3.3- dimetil-2-butilo. Alquilo inferior significa 1-8, preferentemente 1-6, más preferentemente 1-4 átomos de carbono; alquenilo o alquinilo inferior significa 2-8, 2-6 o 2-4 átomos de carbono.

El término"alquenilo"se refiere a un grupo hidrocarburo seleccionado de grupos hidrocarburo lineales y ramificados que comprenden al menos un doble enlace C=C y 2-18, o 2-12, o 2-6 átomos de carbono. Los ejemplos del grupo alquenilo pueden seleccionarse de los grupos etenilo o vinilo, prop-1-enilo, prop-2-enilo, 2-metilprop-l-enilo, but-l-enilo, but-2-enilo, but-3-enilo, buta-l,3-dienilo, 2-metilbuta-l,3-dieno, hex-l-enilo, hex-2-enilo, hex-3-enilo, hex-4-enilo y hexa-1.3- dienilo.

El término"alquirnlo"se refiere a un grupo hidrocarburo seleccionado de un grupo hidrocarburo lineal y ramificado, que comprende al menos un triple enlace C=C y 2-18, o 2-12, o 2-6 átomos de carbono. Los ejemplos del grupo alquinilo incluyen los grupos etinilo, 1 -propinilo, 2-propinilo (propargilo), 1 -butinilo, 2-butinilo y 3-butinilo.

El término"cicloalquilo"se refiere a un grupo hidrocarburo seleccionado de grupos hidrocarburo cíclicos saturados y parcialmente insaturados, que comprenden grupos monocíclicos y policíclicos (por ejemplo, bicíclicos y tricíclicos). Por ejemplo, el grupo cicloalquilo puede ser de 3-12, 3-8 o 3-6 átomos de carbono. Aún más, por ejemplo, el grupo cicloalquilo puede ser un grupo monocíclico de 3-12, 3-8 o 3-6 átomos de carbono. Los ejemplos del grupo cicloalquilo monocíclico incluyen los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, 1 -ciclopent-l-enilo, 1-ciclopent-2-enilo, l-ciclopent-3-enilo, ciclohexilo, 1-ciclohex-l-enilo, l-ciclohex-2-enilo, l-ciclohex-3-enilo, ciclohexadienilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclononilo, ciclodecilo, cicloundecilo y ciclododecilo. Los ejemplos de los grupos cicloalquilo bicíclicos incluyen aquellos que tienen 7-12 átomos en el anillo dispuestos como un anillo de biciclo seleccionado de sistemas de anillos [4,4], [4,5], [5,5], [5,6] y [6,6], o como un anillo bicíclico con puente seleccionado de biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano y biciclo[3.2.2]nonano. El anillo puede estar saturado o tener al menos un doble enlace (es decir, parcialmente insaturado), pero no está totalmente conjugado y no es aromático, como se define aromático en el presente documento.

El término"Arilo"en el presente documento se refiere a un grupo seleccionado de: anillos aromáticos carbocíclicos de 5 y 6 miembros, por ejemplo, fenilo; sistemas de anillos bicíclicos tales como sistemas de anillos bicíclicos de 7-12 miembros en donde al menos un anillo es carbocíclico y aromático, seleccionado, por ejemplo, de naftaleno e indano; y sistemas de anillos tricíclicos tales como sistemas de anillos tricíclicos de 10-15 miembros en donde al menos un anillo es carbocíclico y aromático, por ejemplo, fluoreno. Por ejemplo, el grupo arilo se selecciona de anillos aromáticos carbocíclicos de 5 y 6 miembros condensados con un cicloalquilo o anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros que comprende opcionalmente al menos un heteroátomo seleccionado de N, O y S, a condición de que el punto de unión esté en el anillo aromático carbocíclico cuando el anillo aromático carbocíclico está condensado con un anillo heterocíclico, y el punto de unión puede estar en el anillo aromático carbocíclico o en el grupo cicloalquilo cuando el anillo aromático carbocíclico está condensado con un grupo cicloalquilo. Los radicales bivalentes formados a partir de derivados de benceno sustituidos y que tienen las valencias libres en los átomos en el anillo se denominan radicales fenileno sustituidos. Los radicales bivalentes derivados de radicales hidrocarbonados policíclicos univalentes cuyos nombres terminan en "-ilo" por la eliminación de un átomo de hidrógeno del átomo de carbono con valencia libre se denominan añadiendo "-ideno" al nombre del radical univalente correspondiente, por ejemplo, un grupo naftilo con dos puntos de unión se denomina naftilideno. Arilo, sin embargo, no abarca ni se superpone con heteroarilo, que se define por separado a continuación. Por lo tanto, si uno o más anillos aromáticos carbocíclicos están condensados con un anillo aromático heterocíclico, el sistema de anillos resultante es heteroarilo, no arilo, como se define en el presente documento.

El término"halógeno"o"halo"se refiere a F, CI, Br o I.

El término"heteroalquilo"se refiere a alquilo que comprende al menos un heteroátomo.

El término"heteroarilo"se refiere a un grupo seleccionado de: anillos monocíclicos aromáticos de 5 a 7 miembros que comprenden 1, 2, 3 o 4 heteroátomos seleccionados de N, O y S, siendo los átomos en el anillo restantes carbono; anillos bicíclicos de 8 a 12 miembros que comprenden 1, 2, 3 o 4 heteroátomos, seleccionados de N, O y S, siendo los átomos en el anillo restantes carbono y en donde al menos un anillo es aromático y al menos un heteroátomo está presente en el anillo aromático; y anillos tricíclicos de 11 a 14 miembros que comprenden 1, 2, 3 o 4 heteroátomos, seleccionados de N, O y S, siendo los átomos en el anillo restantes carbono y en donde al menos un anillo es aromático y al menos un heteroátomo está presente en un anillo aromático. Por ejemplo, el grupo heteroarilo incluye un anillo aromático heterocíclico de 5 a 7 miembros condensado con un anillo de cicloalquilo de 5 a 7 miembros. Para dichos sistemas de anillos de heteroarilo bicíclicos condensados en donde sólo uno de los anillos comprende al menos un heteroátomo, el punto de unión puede estar en el anillo heteroaromático o en el anillo de cicloalquilo. Cuando el número total de átomos de S y O en el grupo heteroarilo es superior a 1, los heteroátomos no son adyacentes entre sí. En algunas realizaciones, el número total de átomos de S y O en el grupo heteroarilo no es superior a 2. En algunas realizaciones, el número total de átomos de S y O en el heterociclo aromático no es superior a 1. Los ejemplos del grupo heteroarilo incluyen, pero sin limitación, (numerados desde la posición de unión a la que se le asigna prioridad 1) piridilo (tal como 2-piridilo, 3-piridilo o 4-piridilo), cinolinilo, pirazinilo, 2,4-pirimidinilo, 3,5-pirimidinilo, 2,4-imidazolilo, imidazopiridinilo, isoxazolilo, oxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, tiadiazolilo, tetrazolilo, tienilo, triazinilo, benzotienilo, furilo, benzofurilo, benzoimidazolilo, indolilo, isoindolilo, indolinilo, ftalazinilo, pirazinilo, piridazinilo, pirrolilo, triazolilo, quinolinilo, isoquinolinilo, pirazolilo, pirrolopiridinilo (tal como lH-pirrolo[2,3-b]piridin-5-ilo), pirazolopiridinilo (tal como lH-pirazolo[3,4-b]piridin-5-ilo), benzoxazolilo (tal como benzo[d]oxazol-6-ilo), pteridinilo, purinilo, 1-oxa-2,3-diazolilo, loxa-2,4-diazolilo, l-oxa-2,5-diazolilo, l-oxa-3,4-diazolilo, l-tia-2,3-diazolilo, l-tia-2,4-diazolilo, l-tia-2,5-diazolilo, 1 -tia-3,4-diazolilo, furazanilo, benzofurazanilo, benzotiofenilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, naftiridinilo, furopiridinilo, benzotiazolilo (tal como benzo[d]tiazol-6-ilo), indazolilo (tal como lH-indazol-5-ilo) y 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolina.

El término "heterocíclico" o "heterociclo" o "heterociclilo" se refiere a un anillo seleccionado de anillos de 4 a 12 miembros monocíclicos, bicíclicos y tricíclicos, saturados y parcialmente insaturados, que comprenden al menos un átomo de carbono además de 1, 2, 3 o 4 heteroátomos, seleccionados de oxígeno, azufre y nitrógeno. "Heterociclo" también se refiere a un anillo heterocíclico de 5 a 7 miembros que comprende al menos un heteroátomo seleccionado de N, O y S condensado con un anillo de cicloalquilo, carbocíclico aromático o heteroaromático de 5, 6 y/o 7 miembros, a condición de que el punto de unión esté en el anillo heterocíclico cuando el anillo heterocíclico está condensado con un anillo aromático o heteroaromático carbocíclico, y que el punto de unión pueda estar en el cicloalquilo o anillo heterocíclico cuando el anillo heterocíclico está condensado con cicloalquilo.

El "heterociclo" también se refiere a un anillo espirocíclico alifático que comprende al menos un heteroátomo seleccionado de N, O y S, a condición de que el punto de unión esté en el anillo heterocíclico. Los anillos pueden estar saturados o tener al menos un doble enlace (es decir, parcialmente insaturados). El heterociclo puede estar sustituido con oxo. El punto de unión puede ser carbono o un heteroátomo en el anillo heterocíclico. Un heterociclo no es un heteroarilo como se define en el presente documento. Los ejemplos del heterociclo incluyen, pero sin limitación, (numerados desde la posición de unión a la que se le asigna prioridad 1) 1 -pirrolidinilo, 2-pirrolidinilo, 2,4-imidazolidinilo, 2,3-pirazolidinilo, 1 -piperidinilo, 2-piperidinilo, 3-piperidinilo, 4-piperidinilo, 2,5-piperazinilo, piranilo, 2-morfolinilo, 3-morfolinilo, oxiranilo, aziridinilo, tiiranilo, azetidinilo, oxetanilo, tietanilo, 1,2-ditietanilo, 1,3-ditietanilo, dihidropiridinilo, tetrahidropiridinilo, tiomorfolinilo, tioxanilo, piperazinilo, homopiperazinilo, homopiperidinilo, azepanilo, oxepanilo, tiepanilo, 1,4-oxatianilo, 1,4-dioxepanilo, 1,4-oxatiepanilo, 1,4-oxaazepanilo, 1,4-ditiepanilo, 1,4-tiazepanilo y 1,4-diazepano 1,4-ditianilo, 1,4-azatianilo, oxazepinilo, diazepinilo, tiazepinilo, dihidrotienilo, dihidropiranilo, dihidrofuranilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotienilo, tetrahidropiranilo, tetrahidrotiopiranilo, 1 -pirrolinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, indolinilo, 2H-piranilo, 4H-piranilo, 1,4-dioxanilo, 1,3-dioxolanilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, ditianilo, ditiolanilo, pirazolidinilimidazolinilo, pirimidinonilo, l,l-dioxo-tiomorfolinilo, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanilo, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanilo y azabiciclo[2.2.2]hexanilo. El heterociclo sustituido también incluye sistemas de anillos sustituidos con uno o más restos oxo, tales como N-óxido de piperidinilo, morfolinil-N-óxido, 1-oxo-1-tiomorfolinilo y 1,1 -dioxo-l-tiomorfolinilo.

Los sustituyentes se seleccionan de: halógeno, -Ra, -ORa, =O, =NRa, =N-ORa, -NRaRb, -SRa, -SiRaRaRb, -OC(O)Ra, -C(O)Ra, -CO2Ra, -CONRaRb, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRa-C(O)NRbRb, -NRa-SO2NRb, -NRbCO2Ra, -NH-C(NH2)=NH, -NRaC(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NRa, -S(O)Ra, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRbSO2R, -CN y -NO2, -N3, -CH(Ph)2, perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), en un número que varía de cero a tres, prefiriéndose particularmente los grupos que tienen cero, uno o dos sustituyentes. Ra, Rb y Rc se refieren cada uno independientemente a hidrógeno, alquilo (C-i-Ca) sin sustituir y heteroalquilo, arilo sin sustituir, arilo sustituido con uno a tres halógenos, alquilo sin sustituir, grupos alcoxi o tioalcoxi, o grupos aril-alquilo (C1-C4). Cuando Ra y Rb están unidos al mismo átomo de nitrógeno, se pueden combinar con el átomo de nitrógeno para formar un anillo de 5, 6 o 7 miembros. Por lo tanto, -NRaRb incluye 1 -pirrolidinilo y 4-morfolinilo, "alquilo" incluye grupos tales como trihaloalquilo (por ejemplo, -CF3 y -CH2CF3), y cuando el grupo arilo es 1,2,3,4-tetrahidronaftaleno, puede estar sustituido con un grupo espirocicloalquilo (C3-C7) sustituido o sin sustituir. El grupo espirocicloalquilo (C3-C7) puede estar sustituido de la misma manera que se define en el presente documento para "cicloalquilo". Los sustituyentes preferidos se seleccionan de: halógeno, -Ra, -ORa, =O, -NRaRb, -SRa, -SiRaRaRb, -OC(O)Ra, -C(O)Ra, -CO2Ra, -CONRaRb, -OC(O)NRaRb, -NRbC(O)Ra, -NRbCO2Ra, -NRa-SO2NRbRb, -S(O)Ra, -SO2Ra, -SO2NRaRb, -NRbSO2R, -CN y -NO2, perfluoroalcoxi (C1-C4) y perfluoroalquilo (C1-C4), donde Ra y Rb son como se ha definido anteriormente.

La expresión"anillo condensado"en el presente documento se refiere a un sistema de anillos policíclico, por ejemplo, un sistema de anillos bicíclico o tricíclico, en el que dos anillos comparten sólo dos átomos en el anillo y un enlace en común. Los ejemplos de anillos condensados pueden comprender un anillo de cicloalquilo bicíclico condensado, tal como los que tienen de 7 a 12 átomos en el anillo dispuestos como un anillo bicíclico seleccionado de sistemas de anillos [4,4], [4,5], [5,5], [5,6] y [6,6] como se ha mencionado anteriormente; un anillo de arilo bicíclico condensado tal como sistemas de anillos de arilo bicíclicos de 7 a 12 miembros como se ha mencionado anteriormente, un anillo de arilo tricíclico condensado tal como sistemas de anillos de arilo tricíclicos de 10 a 15 miembros como se ha mencionado anteriormente; un anillo de heteroarilo bicíclico condensado tal como anillos de heteroarilo bicíclicos de 8 a 12 miembros como se ha mencionado anteriormente, un anillo heteroarilo tricíclico condensado tal como anillos de heteroarilo tricíclicos de 11 a 14 miembros como se ha mencionado anteriormente; y un anillo de heterociclilo bicíclico o tricíclico condensado como se ha mencionado anteriormente.

Cuando los compuestos contienen dobles enlaces de olefina, a menos que se especifique otra cosa, se entiende que dichos dobles enlaces incluyen isómeros geométricos tanto E como Z.

Algunos de los compuestos pueden existir con diferentes puntos de unión de hidrógeno, denominados tautómeros. Por ejemplo, los compuestos que incluyen grupos carbonilo -CH2C(O)- (formas ceto) pueden experimentar tautomería para formar grupos hidroxilo -CH=C(o H)- (formas enol). También se pretenden incluir las formas tanto ceto como enol, individualmente, así como mezclas de las mismas, cuando corresponda.

La expresión"Sales farmacéuticamente aceptables"incluyen, pero sin limitación, sales con ácidos inorgánicos, seleccionadas, por ejemplo, de clorhidratos, fosfatos, difosfatos, bromhidratos, sulfatos, sulfinatos y nitratos; así como sales con ácidos orgánicos, seleccionadas, por ejemplo, de malatos, maleatos, fumaratos, tartratos, succinatos, citratos, lactatos, metanosulfonatos, p-toluenosulfonatos, 2-hidroxietilsulfonatos, benzoatos, salicilatos, estearatos, alcanoatos tales como acetato y sales con HOOC-(CH2)n-COOH, en donde n se selecciona de 0 a 4. De forma similar, los ejemplos de cationes farmacéuticamente aceptables incluyen, pero sin limitación, sodio, potasio, calcio, aluminio, litio y amonio.

Además, si un compuesto se obtiene como sal de adición de ácido, la base libre se puede obtener basificando una solución de la sal de ácido. Por el contrario, si el producto es una base libre, una sal de adición, tal como una sal de adición farmacéuticamente aceptable, se puede producir disolviendo la base libre en un disolvente orgánico adecuado y tratando la solución con un ácido, de acuerdo con procedimientos convencionales para la preparación de sales de adición de ácidos a partir de compuestos básicos. Los expertos en la materia reconocerán diversas metodologías de síntesis que pueden usarse sin experimentación indebida para preparar sales de adición no tóxicas y farmacéuticamente aceptables.

Los términos"administración", "administrando", "tratando"y"tratamiento"en el presente documento, cuando se aplican a un animal, ser humano, sujeto experimental, célula, tejido, órgano o fluido biológico, significa el contacto de un agente farmacéutico exógeno, terapéutico, de diagnóstico o composición con el animal, ser humano, sujeto, célula, tejido, órgano o fluido biológico. El tratamiento de una célula abarca el contacto de un reactivo con la célula, así como el contacto de un reactivo con un líquido, donde el líquido está en contacto con la célula. El término"administración"y"tratamiento"también significa tratamientosin vitroyex vivo,por ejemplo, de una célula, mediante un reactivo, diagnóstico, compuesto de unión o mediante otra célula. El término "sujeto" en el presente documento incluye cualquier organismo, preferentemente un animal, más preferentemente un mamífero (por ejemplo, rata, ratón, perro, gato, conejo) y, mucho más preferentemente, un ser humano.

Una"cantidad eficaz"se refiere a una cantidad de al menos un compuesto y/o al menos un estereoisómero del mismo, y/o al menos una sal farmacéuticamente aceptable del mismo eficaz para "tratar" una enfermedad o trastorno en un sujeto, y que desencadenará, en cierta medida, la respuesta biológica o médica de un tejido, sistema, animal o ser humano que se busca, tal como cuando se administra, es suficiente para prevenir el desarrollo de, o aliviar hasta cierto punto, uno o más de los síntomas de la afección o trastorno que se está tratando. La cantidad terapéuticamente eficaz variará dependiendo del compuesto, la enfermedad y su gravedad y la edad, el peso, etc., del mamífero que ha de tratarse.

La expresión"al menos un sustituyente"incluye, por ejemplo, de 1 a 4, tal como de 1 a 3, más como 1 o 2, sustituyentes. Por ejemplo, "al menos un sustituyente R16" en el presente documento incluye de 1 a 4, tal como de 1 a 3, más como 1 o 2, sustituyentes seleccionados de la lista de R<16> como se describe en el presente documento.

El término"anticuerpo"en el presente documento se usa en el sentido más amplio y cubre específicamente anticuerpos (incluyendo anticuerpos monoclonales de longitud completa) y fragmentos de anticuerpos a condición de que reconozcan antígenos, tales como, un antígeno diana (por ejemplo, CD20) o un punto de control inmunitario (por ejemplo, PD-1). Una molécula de anticuerpo es por lo general monoespecífica, pero también puede describirse como idioespecífica, heteroespecífica o poliespecífica. Las moléculas de anticuerpo se unen por medio de sitios de unión específicos a determinantes antigénicos específicos o epítopos en antígenos.

La expresión"anticuerpo monoclonal"o"mAb"o"Mab"en el presente documento significa una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, las moléculas de anticuerpo comprendidas en la población son idénticas en la secuencia de aminoácidos excepto por posibles mutaciones de origen natural que pueden estar presentes en cantidades minoritarias. Por el contrario, las preparaciones de anticuerpos (policlonales) convencionales incluyen normalmente una multitud de anticuerpos diferentes que tienen diferentes secuencias de aminoácidos en sus dominios variables, particularmente en sus CDR, que con frecuencia son específicos para diferentes epítopos. El modificador "monoclonal" indica el carácter del anticuerpo estando obtenido de una población de anticuerpos sustancialmente homogénea y no debe interpretarse como que requiere la producción del anticuerpo por ningún método particular. Los anticuerpos monoclonales (mAb) pueden obtenerse mediante métodos conocidos por los expertos en la materia. Véase, por ejemplo, la Pat. de los EE.UU. N.° 4.376.110. Los mAb desvelados en el presente documento pueden ser de cualquier clase de inmunoglobulina, incluyendo IgG, IgM, IgD, IgE, IgA y cualquier subclase de las mismas. Se puede cultivar un hibridoma que produzca un mAbin vitrooin vivo.Se pueden obtener títulos elevados de mAb en la producciónin vivodonde las células de los hibridomas individuales se inyectan por vía intraperitoneal en ratones, tales como ratones Balb/c prístinos estimulados para producir fluido ascítico que contenga concentraciones elevadas de los mAb deseados. Los MAb de isotipo IgM o IgG pueden purificarse a partir de dichos fluidos ascíticos o de sobrenadantes de cultivos, usando métodos de cromatografía en columna bien conocidos por los expertos en la materia.

En general, la unidad estructural básica del anticuerpo comprende un tetrámero. Cada tetrámero incluye dos pares idénticos de cadenas polipeptídicas, teniendo cada par una"cadena ligera"(de aproximadamente 25 kDa) y una"cadena pesada"(de aproximadamente 50-70 kDa). La parte amino-terminal de cada cadena incluye una región variable de aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos responsables principalmente del reconocimiento del antígeno. La parte carboxi-terminal de cadena pesada puede definir una región constante principalmente responsable de la función efectora. Normalmente, las cadenas ligeras humanas se clasifican como cadenas ligeras cappa y lambda. Además, las cadenas pesadas humanas se clasifican normalmente en a, 8, £, y o |J, y definen los isotipos del anticuerpo como IgA, IgD, IgE, IgG e IgM, respectivamente. Dentro de las cadenas ligera y pesada, las regiones variable y constante están unidas por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos, incluyendo también la cadena pesada una región "D" de aproximadamente 10 aminoácidos más.

Las regiones variables de cada par de cadena ligera/pesada (Vl/Vh) forman el sitio de unión del anticuerpo. Por lo tanto, en general, un anticuerpo intacto tiene dos sitios de unión. Excepto en anticuerpos bifuncionales o biespecíficos, los dos sitios de unión son, en general, los mismos.

Normalmente, los dominios variables de las cadenas tanto pesada como ligera comprenden tres regiones hipervariables, también denominadas"regiones determinantes de complementariedad (CDR)", que se ubican dentro de regiones marco relativamente conservadas (FR). Las CDR están por lo general alineadas por las regiones marco conservadas, lo que permite la unión a un epítopo específico. En general, del extremo N al extremo C, los dominios variables de las cadenas tanto ligera como pesada comprenden FR-1 (o FR1), CDR-1 (o CDR1), FR-2 (FR2), CDR-2 (CDR2), FR-3 (o FR3), CDR-3 (CDR3) y<f>R-4 (o FR4). La asignación de aminoácidos a cada dominio es, generalmente, de acuerdo con las definiciones deSequences of Proteins of Immunological Interest,Kabat,et al.,National Institutes of Health, Bethesda, Md. ; 5<a> ed.; Publ. de los NIH N.° 91-3242 (1991;; Kabat (1978)Adv. Prot. Chem.32: 1-75; Kabat,et al.,(1977)J. Biol. Chem.252: 6609-6616; Chothia,et al.,(1987)J Mol. Biol.196: 901-917oChothia,et al.,(1989)Nature342: 878-883.

La expresión"región hipervariable"significa los restos de aminoácidos de un anticuerpo que son responsables de la unión a antígeno. La región hipervariable comprende restos de aminoácidos de una "región determinante de complementariedad" o "CDR" (es decir, CDR-L1, CDR-L2 y CDR-L3 en el dominio variable de cadena ligera y CDR-H1, CDR-H2 y CDR-H3 en el dominio variable de cadena pesada). Véase, Kabatet al.(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,5a Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (que define las regiones CDR de un anticuerpo por secuencia); véase también Chothia y Lesk (1987)J. Mol. Biol.196: 901-917 (que define las regiones CDR de un anticuerpo por estructura). La expresión "región marco conservada" o "FR" significa los restos de dominio variable distintos de los restos de la región hipervariable definidos en el presente documento como restos de CDR.

Salvo que se indique otra cosa,"fragmento de anticuerpo"o"fragmento de unión a antígeno"significa fragmentos de unión a antígeno de anticuerpos, es decir, fragmentos de anticuerpos que conservan la capacidad de unirse específicamente al antígeno unido por el anticuerpo de longitud completa, por ejemplo, fragmentos que conservan una o más regiones CDR. Los ejemplos de fragmentos de unión a antígeno incluyen, pero sin limitación, Fab, Fab', F(ab')2 y fragmentos Fv; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo monocatenario, por ejemplo, Fv monocatenario (ScFv); nanocuerpos y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpo.

Un anticuerpo que"se une específicamente a"una proteína diana especificada es un anticuerpo que presenta unión preferente a la diana en comparación con otras proteínas, pero esta especificidad no requiere una especificidad de unión absoluta. Un anticuerpo se considera "específico" para su diana prevista si su unión es determinante de la presencia de la proteína diana en una muestra, por ejemplo, sin producir resultados no deseados tales como falsos positivos. Los anticuerpos, o fragmentos de unión de los mismos, útiles en la presente invención se unirán a la proteína diana con una afinidad que es al menos dos veces mayor, preferentemente al menos diez veces mayor, más preferentemente al menos 20 veces mayor y mucho más preferentemente al menos 100 veces mayor que la afinidad con proteínas no diana. Se dice que un anticuerpo se une específicamente a un polipéptido que comprende una secuencia de aminoácidos dada, por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de una molécula de PD-1 humana madura, si se une a polipéptidos que comprenden esa secuencia pero no se une a proteínas que carecen de esa secuencia.

La expresión"anticuerpo humano"significa en el presente documento un anticuerpo que comprende solamente secuencias de proteína de inmunoglobulina humana. Un anticuerpo humano puede contener cadenas de hidratos de carbono murinos si se produce en un ratón, en una célula de ratón o en un hibridoma derivado de una célula de ratón. De forma similar,"anticuerpo de ratón"o "anticuerpo de rata" significan un anticuerpo que comprende solo secuencias de proteína de inmunoglobulina de ratón o rata, respectivamente.

La expresión"anticuerpo humanizado"significa formas de anticuerpos que contienen secuencias de anticuerpos no humanos (por ejemplo, murinos) así como anticuerpos humanos. Dichos anticuerpos contienen una secuencia mínima derivada de inmunoglobulina no humana. En general, el anticuerpo humanizado comprenderá sustancialmente la totalidad de al menos uno, y normalmente dos, dominios variables, en los que todos o sustancialmente todos los bucles hipervariables corresponden a los de una inmunoglobulina no humana y todas o sustancialmente todas las regiones FR son las de una secuencia de inmunoglobulina humana. El anticuerpo humanizado comprenderá también opcionalmente al menos una porción de una región constante de inmunoglobulina (Fc), normalmente la de una inmunoglobulina humana. El prefijo"hum", "hu", "Hu"o"h"se añade a las designaciones de clones de anticuerpos cuando sea necesario para distinguir los anticuerpos humanizados de anticuerpos de roedores precursores. Las formas humanizadas de anticuerpos de roedores comprenderán en general las mismas secuencias de CDR de los anticuerpos de roedores precursores, aunque pueden incluirse determinadas sustituciones de aminoácidos para aumentar la afinidad, aumentar la estabilidad del anticuerpo humanizado o por otras razones.

Los términos"cáncer"o"tumor"en el presente documento significan o describen la afección fisiológica que implica un crecimiento celular anormal con el potencial de invadir o diseminarse a otras partes del cuerpo. La"enfermedad"se refiere a cualquier enfermedad, malestar, dolencia, síntomas o indicaciones, y se puede sustituir por el término"trastorno"o"afección".

En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer hemático. En algunas realizaciones, el cáncer hemático es una leucemia, un linfoma, un mieloma, un linfoma no Hodgkin (LNH), un linfoma de Hodgkin (LH) o una neoplasia maligna de linfocitos B. En algunas realizaciones, el cáncer hemático es una neoplasia maligna de linfocitos B. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), tricoleucemia (TL), leucemia de tipo Burkitt (LB), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro germinal (LDLBG-BCG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro no germinal (LDLBG-BCnoG), LDLBG con subtipo indeterminado, linfoma primario del sistema nervioso central (LPSNC), linfoma secundario del sistema nervioso central (LSNCS) de origen mamario o testicular, mieloma múltiple, linfoma de linfocitos B de la zona marginal extranodal, linfoma de linfocitos B de la zona marginal nodal, linfoma de Burkitt, linfoma de alto grado no Burkitt de linfocitos B, linfoma mediastínico primario de linfocitos B, linfoma inmunoblástico de células grandes, linfoma linfoblástico de linfocitos B precursores, leucemia prolinfocítica de linfocitos B, linfoma linfoplasmacítico, linfoma de la zona marginal esplénica, mieloma de células plasmáticas, plasmacitoma, linfoma mediastínico (tímico) de linfocitos B grandes, linfoma intravascular de linfocitos B grandes, linfoma de efusión primaria, granulomatosis linfomatoide o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG). En algunas realizaciones, el LDLBG es un linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDlBg -LBA), LDLBG-BCG o LDLBG-BCnoG. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R). En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R) es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG). En algunas realizaciones, el LDLBG en recaída o refractario es linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), LDLBG-BCG o LDLBG-BCnoG. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R) es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B metastatizada. En algunas realizaciones, la neoplasia maligna de linfocitos B metastatizada es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el cáncer es un sarcoma o carcinoma. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer anal; cáncer de apéndice; cáncer de vías biliares (es decir, colangiocarcinoma); cáncer de vejiga; cáncer de mama; cáncer de cuello de útero; cáncer de colon; cáncer de primario desconocido (CPD); cáncer de esófago; cáncer de ojo; cáncer de las trompas de Falopio; cáncer gastroenterológico; cáncer de riñón; cáncer de hígado; cáncer de pulmón; meduloblastoma; melanoma; cáncer oral; cáncer de ovario; cáncer pancreático; enfermedad paratiroidea; cáncer de pene; tumor de la pituitaria; cáncer de próstata; cáncer de recto; cáncer de piel; cáncer de estómago; cáncer testicular; cáncer de garganta; cáncer de tiroides; cáncer de útero; cáncer de vagina; o cáncer de vulva; o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal, melanoma o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el cáncer de colon es adenocarcinoma, tumores carcinoides gastrointestinales, tumores del estroma gastrointestinal, linfoma colorrectal primario, leiomiosarcoma, melanoma, carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma mucinoso, adenocarcinoma de células en anillo de sello o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer en recaída o refractario. En algunas realizaciones, el cáncer en recaída o refractario se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal, melanoma o una combinación de los mismos. En algunas realizaciones, el cáncer es un cáncer metastatizado. En las realizaciones, el cáncer metastatizado se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal y melanoma.

El término "CDR" significa una o más regiones determinantes de complementariedad en una región variable de inmunoglobulina, definida usando el sistema de numeración de Kabat, salvo que se indique otra cosa.

Inhibidores de punto de control inmunitario

En algunas realizaciones, el inhibidor de Btk se coadministra con un inhibidor de punto de control inmunitario como se define en las reivindicaciones.

Los"puntos de control inmunitario (proteínas de punto de control)"son moléculas en el sistema inmunitario que aumentan una señal (moléculas coestimuladoras) o disminuyen una señal. Y también regulan la activación o función de los linfocitos T. Muchos cánceres se protegen del sistema inmunitario mediante la inhibición de la señal de los linfocitos T. Un"inhibidor de punto de control inmunitario",que reduce, inhibe, modula o interfiere total o parcialmente con una o más proteínas de punto de control, se considera cada vez más una diana para las inmunoterapias contra el cáncer. Se conocen numerosas proteínas de punto de control, tales como PD-1 (Muerte Programada 1, CD279) con sus ligandos PD-L1 (también denominado CD274 o B7-H1) y PD-L2; TIM-3 (Dominio 3 de mucina y dominio de inmunoglobulina de linfocitos T, también conocido como HAVCR2) y su ligando Gal-9; CTLA-4 (Proteína 4 asociada a linfocitos T citotóxicos, CD152) y sus ligandos CD80 y CD86; y A2Ar (Receptor de adenosina A2A); B7-H3 (CD276); B7-H4 (VTCN1); BTLA (Atenuador de linfocitos B y T, CD272) y su ligando HVEM (Mediador de entrada de herpesvirus); IDO (Indolamina 2,3-dioxigenasa); LAG3 (Gen 3 de activación de linfocitos); VISTA (Supresor de Ig de dominio V de la activación de linfocitos T); KIR (Receptor de tipo inmunoglobulina de linfocitos citolíticas). Estas proteínas son responsables de las interacciones inhibidoras o coestimuladoras de las respuestas de los linfocitos T. Las proteínas de punto de control inmunitario regulan y mantienen la autotolerancia y la duración y amplitud de las respuestas inmunitarias fisiológicas. Los inhibidores de punto de control inmunitario incluyen anticuerpos o derivan de anticuerpos.

El sistema inmunitario tiene múltiples vías inhibidoras que son críticas en el mantenimiento de la autotolerancia y en la modulación de las respuestas inmunitarias. En los linfocitos T, la amplitud y la calidad de la respuesta se inician mediante el reconocimiento de antígenos por parte del receptor de linfocitos T y están reguladas por proteínas de punto de control inmunitario que equilibran las señales coestimuladoras e inhibidoras.

PD-1 es una proteína de punto de control inmunitario, que limita la actividad de los linfocitos T en los tejidos periféricos en el momento de una respuesta inflamatoria a la infección y para limitar el bloqueo autoinmunitario de PD-1in vitropotencia la proliferación de linfocitos T y la producción de citocinas en respuesta a una exposición por dianas de antígenos específicos o por células alógenas en reacciones mixtas de linfocitos. Se demostró una fuerte correlación entre la expresión y la respuesta de PD-1 con el bloqueo de PD-1 (Pardoll,Nature Reviews Cáncer,12: 252-264, 2012). El bloqueo de PD-1 se puede lograr mediante una diversidad de mecanismos que incluyen anticuerpos que se unen a PD-1 o sus ligandos. Se describen ejemplos de bloqueadores de PD-1 y PD-L1, también denominados inhibidores de PD-1 y PD-L1, en los documentos US7488802; US7943743; US8008449; US8.168.757; US8217149 y WO03042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400, WO2011161699 y WO2015035606. En algunas realizaciones, los inhibidores de PD-1 incluyen un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno del mismo, que se une específicamente a PD-1. En determinadas otras realizaciones, los bloqueadores de PD-1 incluyen anticuerpos anti-PD-1 y proteínas de unión similares tales como nivolumab (MDX 1106, BMS 936558, ONO-4538, Opdivo®) descrito en el documento US8008449B2, un anticuerpo IgG4 totalmente humano que se une y bloquea la activación de PD-1 mediante sus ligandos PD-L1 y PD-L2; pembrolizumab (lambrolizumab, MK-3475 o Sc H 900475, Keytruda®) desvelado en el documento US8168757B2, un anticuerpo monoclonal humanizado IgG4 contra PD-1; pidilizumab (CT-011), un anticuerpo humanizado que se une a PD-1; AMP-224, una proteína de fusión de B7-DC; una porción Fc de anticuerpo; BMS-936559 (MDX-1105-01) para el bloqueo de PD-L1 (B7-H1) para el bloqueo de PD-1.

Otra proteína de punto de control inmunitario es CTLA-4, que regula negativamente las vías de activación de linfocitos T (Fonget al., Cáncer Res.69(2): 609-615, 2009;Weber Cáncer Immunol. Immunother,58: 823-830, 2009). Se ha demostrado que el bloqueo de CTLA-4 aumenta la activación y la proliferación de linfocitos T. Los inhibidores de CTLA-4 incluyen anticuerpos anti-CTLA-4. Los anticuerpos anti-CTLA-4 se unen a CTLA-4 y bloquean la interacción de CTLA-4 con sus ligandos CD80/CD86 expresados en células presentadoras de antígenos y, por lo tanto, bloquean la regulación negativa de las respuestas inmunitarias provocadas por la interacción de estas moléculas. Se describen ejemplos de anticuerpos anti-CTLA-4 en las patentes de los EE.Uu . N.°: 5.811.097; 5.811.097; 5.855.887; 6.051.227; 6.207.157; 6.682.736; 6.984.720;y7.605.238. Un anticuerpo anti-CDLA-4 es tremelimumab (ticilimumab, CP-675.206). En una realización, el anticuerpo anti-CTLA-4 es ipilimumab (MDX-010, MDX-101, Yervoy®); un anticuerpo IgG monoclonal totalmente humano que se une a CTLA-4. Ipilimumab se comercializa con el nombre de Yervoy™ y se ha aprobado para el tratamiento del melanoma irresecable o metastásico. Otros inhibidores de punto de control inmunitario incluyen: inhibidores de LAG-3, tales como IMP321, una proteína de fusión de Ig soluble (Brignoneet al.,2007,J. Immunol.179:4202-4211);inhibidores de B7, tales como inhibidores de B7-H3 y B7-H4, por ejemplo, anticuerpo anti-B7-H3 MGA271 (Looet al.,2012,Clin. Cáncer Res.15 de julio (18) 3834); inhibidores de TIM3; inhibidores de A2AR; inhibidores de BTLA; inhibidores de IDO, por ejemplo, INCB024360, un inhibidor de IDO1; inhibidores de VISTA; o inhibidores de KIR, tales como lirilumab (DCI), un anticuerpo que se une a KIR2DL1/2L3.

El anticuerpo monoclonal anti-PD-1 comprende regiones CDR de acuerdo con "317-4B6" en la siguiente tabla, que también incluye otros anticuerpos, no reivindicados explícitamente, que son útiles para entender la invención:

No se reivindica explícitamente, aunque es útil para entender la invención, un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada (Vh) y una región variable de cadena ligera (Vl) que contiene cualquier combinación de CDR enumeradas a continuación:

El anticuerpo anti-PD-1 comprende dominios Vh y Vl de acuerdo con "317-4B6" en la siguiente tabla, que también incluye otros anticuerpos, no reivindicados explícitamente, que son útiles para entender la invención:

El anticuerpo monoclonal anti-PD1 comprende una región constante de IgG4 como se define en las reivindicaciones, en concreto, SEQ ID NO: 88.

Preferentemente, el anticuerpo monoclonal anti-PD-1 es un anticuerpo que contiene un F(ab) o un F(ab)2 que comprende un dominio mencionado anteriormente, incluyendo una región variable de cadena pesada (Vh), una región variable de cadena ligera (Vl) y un dominio constante o efector de cadena pesada de IgG4.

El anticuerpo monoclonal anti-PD-1 como se define en las reivindicaciones es un anticuerpo que comprende una región variable de cadena pesada (Vh) y una región variable de cadena ligera (Vl) (que comprende SEQ ID NO 24 y SEQ ID NO 26, respectivamente) y un dominio constante o efector de cadena pesada de IgG4 (que comprende SEQ ID NO 88), en lo sucesivo en el presente documentoMab 1,que se une específicamente a PD-1, especialmente restos de PD-1 que incluyen K45 e I93; o, I93, L95 y P97, e inhibe las actividades y la señalización celular mediada por PD-1 en las células inmunitarias, anticuerpos que se unen a un conjunto de restos de aminoácidos necesarios para la unión del ligando.

Los anticuerpos monoclonales anti-PD1 y los fragmentos de anticuerpos de los mismos se pueden preparar de acuerdo con la divulgación del documento WO2015/035606 A1. En una realización preferida, el anticuerpo monoclonal anti-PD1 esMab 1,que se administra a una dosificación de aproximadamente 2 mg/kg 1 V./3 S a aproximadamente 200 mg/kg 1 V./3 S.

Agente de terapia dirigida

En algunas realizaciones, el inhibidor de Btk se coadministra con un agente de terapia dirigida como se define en las reivindicaciones.

La terapia dirigida es una de las principales modalidades de tratamiento médico para el cáncer, que bloquea el crecimiento de células cancerosas al interferir con moléculas dirigidas necesarias para la carcinogénesis y el crecimiento tumoral, en lugar de simplemente interferir con todas las células que se dividen rápidamente. El antígeno de linfocitos B CD20 (CD20), que es una diana importante para el tratamiento de neoplasias malignas de linfocitos B, es una fosfoproteína glicosilada activada expresada en la superficie de todos los linfocitos B comenzando en la fase pro-B (CD45R+, CD117+) y aumentando progresivamente en concentración hasta la madurez.

El agente de terapia dirigida se selecciona de rituximab, ibritumomab tiuxetano, tositumonmab, ofatumumab u obinutuzumab.

Inhibidores de Btk

"Inhibidor de Btk" significa un compuesto de Fórmula (I), o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El inhibidor de Btk como se define en las reivindicaciones está abarcado por un compuesto de Fórmula (I),

o un estereoisómero del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde:

A es un anillo aromático de 5 o 6 miembros que comprende 0-3 heteroátomos de N, S u O;

cada W es independientemente -(CH2)- o -C(O)-;

L es un enlace, CH2, NR12, O o S;

S/D es un enlace simple o doble, y cuando es un enlace doble, R5 y R7 están ausentes;

m es 0 o un número entero de 1-4;

n es 0 o un número entero de 1-4, en donde cuando n es superior a 1, cada R2 puede ser diferente;

p es 0 o un número entero de 1-2, en donde cuando p es 0, m es distinto de cero y cuando p es superior a 1, cada R6 y cada R7 puede ser diferente;

R1, R4, R5, R6 y R7 son cada uno independientemente H, halógeno, heteroalquilo, alquilo, alquenilo, cicloalquilo, arilo, heterociclilo saturado o insaturado, heteroarilo, alquinilo, -CN, -NR13R14, -O<r>13, -COR13, -CO2R13, CONR13R14, -C(=NR13)NR14R15, -NR13COR14, -NR13CONR14R15, -NR13CO2R14, -SO2R13, -NR13SO2NR14R15 o -NR13SO2R14, en donde el alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heteroarilo, arilo y heterociclilo saturado o insaturado están opcionalmente sustituidos con al menos un sustituyente R16, en donde (R4 y R5), o ( (R6 y R7), o (R6 y R6 cuando p es 2), junto con los átomos a los que están unidos, pueden formar un anillo seleccionado de anillos cicloalquilo, heterociclo saturado o insaturado, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituidos con al menos un sustituyente R16;

R2 es halógeno, alquilo, -S-alquilo, -CN, -NR13R14, -OR13, -COR13, -CO2R13, -CONR13R14, -C(=NR13)NR14R15, -NR13COR14, -NR13CONR14R15, -NR13CO2R14, -SO2R13, -NR13SO2NR14R15 o -NR13SO2R14;

R12 es H o alquilo inferior;

R13, R14 y R15 son cada uno independientemente H, heteroalquilo, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo saturado o insaturado, arilo o heteroarilo; en donde (R13 y R14), y/o (R14 y R15) junto con los átomos a los que están unidos, pueden formar cada uno un anillo seleccionado de anillos cicloalquilo, heterociclo saturado o insaturado, arilo y heteroarilo opcionalmente sustituidos con al menos un sustituyente R16;

R16 es halógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, heterociclilo sustituido o sin sustituir, oxo, -CN, -ORa, -NRaRb, -CORa, -CO2Ra, -CONRaRb, -C(=NRa)NRbRc, -NRaCORb, -NRaCONRaRb, -NRaCO2Rb, -SO2Ra, -SO2arilo, -NRaSO2NRbRc o -NRaSO2Rb, en donde Ra, Rb y Rc son independientemente hidrógeno, halógeno, alquilo sustituido o sin sustituir, alquenilo sustituido o sin sustituir, alquinilo sustituido o sin sustituir, cicloalquilo sustituido o sin sustituir, arilo sustituido o sin sustituir, heteroarilo sustituido o sin sustituir, heterociclilo sustituido o sin sustituir,

en donde (Ray Rb), y/o (Rby RC) junto con los átomos a los que están unidos, pueden formar un anillo seleccionado de anillos cicloalquilo, heterociclo saturado o insaturado, arilo y heteroarilo.

El inhibidor de Btk como se define en las reivindicaciones es un compuesto de Fórmula (II), es decir,

elCompuesto 1,

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

El inhibidor de Btk desvelado en el presente documento, tal como el compuesto de Fórmula(II),puede sintetizarse mediante vías de síntesis desveladas en el documento WO 2014/173289 A1 y la solicitud PCT no publicada PCT/CN2016/095510. El inhibidor de Btk, es decir, elCompuesto 1,desvelado en el presente documento, se puede preparar de conformidad con los procedimientos establecidos en el documento PCT/CN2016/095510.

Terapia de combinación

La terapia de combinación se puede administrar como una pauta simultánea, o separada, o secuencial. Cuando se administra secuencialmente, la combinación se puede administrar en dos o más administraciones. La administración combinada incluye la coadministración, usando una formulación separada, y la administración consecutiva en cualquier orden, en donde, preferentemente, hay un período de tiempo en el que ambos (o todos) los agentes activos ejercen sus actividades biológicas de forma simultánea.

Las dosificaciones adecuadas para cualquiera de los agentes coadministrados anteriores son las que se usan actualmente y pueden reducirse debido a la acción combinada (sinergia) del inhibidor de Btk y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario, tal como para aumentar el índice terapéutico o mitigar la toxicidad u otros efectos secundarios o consecuencias.

En una realización particular de terapia antineoplásica, el inhibidor de Btk y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario se pueden combinar además con terapia quirúrgica y radioterapia.

En una realización de cada uno de los cinco aspectos anteriores, las cantidades del inhibidor de Btk y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario desvelados en el presente documento y los tiempos relativos de administración se determinarán según las necesidades individuales del paciente que se ha de tratar, la vía de administración, la gravedad de la enfermedad o dolencia, el calendario de dosificación, así como la evaluación y el criterio del médico designado.

El inhibidor de Btk y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario desvelados en el presente documento puede administrarse de diversas maneras conocidas, tales como por vía oral, por vía tópica, por vía rectal, por vía parenteral, mediante spray para inhalación o mediante un depósito implantado, aunque la vía más adecuada en cualquier caso dado dependerá del hospedador particular y de la naturaleza y gravedad de las afecciones para las que se administra el principio activo. El término "parenteral", como se usa en el presente documento, incluye técnicas de inyección o infusión subcutáneas, intracutáneas, intravenosas, intramusculares, intraarticulares, intraarteriales, intrasinoviales, intraesternales, intratecales, intralesionales e intracraneales.

En una realización de cada uno de los cinco aspectos anteriores, el inhibidor de Btk y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario desvelados en el presente documento puede administrarse por vías diferentes. En una realización preferida, el inhibidor de Btk se administra por vía oral, y el agente de terapia dirigida o el inhibidor de punto de control inmunitario se administra por vía parenteral tal como por vía subcutánea, por vía intracutánea, por vía intravenosa o por vía intraperitoneal. En una realización preferida, el inhibidor de Bt k se administra una vez al día, dos veces al día, tres veces al día, cuatro veces al día o cinco veces al día, y se administra en una dosis de aproximadamente 80 mg/día a aproximadamente 640 mg/día. En una realización preferida, el inhibidor de BTK se administra a una dosis de 320 mg 1 V.D. o 160 mg 2 V.D.

Ejemplo

La presente invención se ejemplifica adicionalmente mediante los siguientes ejemplos que ilustran la invención.

Ejemplo 1 Preparación de (S)-7-(1-acriloMpiperidm-4-M)-2-(4-fenoxifeml)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-ajpirimidma-3-carboxamida (Compuesto 1) y la forma cristalina A del mismo

Etapa 1: Síntesis de BG-2

En atmósfera de nitrógeno, a una solución de EA (5 v), HOBT (1,2 eq.), EDCI (1,2 eq.), ácido 4-fenoxibenzoico (BG-1,80 Kg, 1,0 eq.) y malononitrilo (1,2 eq.) se le añadió TEA (2,4 eq.) a 10 °C. Después, la mezcla se agitó a TA hasta que se completó la reacción. Después, la mezcla se centrifugó y la torta se lavó con EA. El filtrado se lavó con NaHCO3 acuoso dos veces y NH4Cl. La fase orgánica se lavó con H2SO41,5 N dos veces y se agitó. Se concentró, precipitó en metanol y agua purificada. El sólido se recogió por centrifugación y se secó al vacío. Esto proporcionó 79,9 kg de BG-2. RMN de 1H (DMSO-d6) 57,62 (d,J= 8,6 Hz, 2H), 7,46-7,38 (m, 2H), 7,18 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 7,06 (d,J= 8,0 Hz, 2H), 6,94 (d,J= 8,6 Hz, 2H).

Etapa 2: Síntesis de BG-3

En atmósfera de nitrógeno, una solución de BG-2 (79,9 kg, 1,0 eq.) en MeCN (5,0 v) se añadió a trimetoximetano (12,0 v) a 85 °C. La mezcla resultante se agitó hasta que se completó la reacción. Se tomaron muestras para el análisis por HPLC. Se concentraron al vacío. El residuo precipitó en i-PrOH y hexano. La mezcla se centrifugó y la torta se lavó con hexano y se secó al vacío. Esto proporcionó 71,7 kg de producto. RMN de 1H (400 MHz, DMSO-d6) 57,70 (d,J= 8,4 Hz, 2H), 7,52-7,45 (m, 2H), 7,28 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,22-7,06 (m, 4H), 3,93 (s, 3H).

Etapa 3: Síntesis de BG-4

En atmósfera de nitrógeno, a una solución de BG-3 (71,6 kg, 1,0 eq.) en etanol (2,5 v) se le cargó hidróxido de hidrazinio (1,0 eq) en etanol (0,6 v) gota a gota al reactor por debajo de 15 °C. La solución se calentó a TA y se agitó hasta que se completó la reacción. Se añadió agua (4,0 v) al reactor. Después, la mezcla se enfrió a 5 °C, se centrifugó y la torta se lavó con agua (1,0 v). La torta se secó al vacío. Esto proporcionó 66,9 kg de producto. RMN de 1H (DMSO-d6) 512,11 (s a, 1H), 7,80 (d,J= 8,8 Hz, 2H), 7,46-7,39 (m, 2H), 7,18 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,12-7,04 (m, 4H), 6,43 (s a, 2H).

Etapas 4 a 6: Síntesis de BG-8

A una mezcla de DCM (8,0 v), BG-5 (80,0 kg, 1,0 eq.), clorhidrato de N,0-dimetilhidroxilamina (1,2 eq.), HOBt (1,2 eq.) y EDCI (1,2 eq.), se cargó T<e a>(2,6 eq.) gota a gota por debajo de 15 °C. La mezcla se agitó a TA hasta que se completó la reacción, se centrifugó y la torta se lavó con DCM (1,0 v) dos veces. El filtrado se lavó con NH4Cl acuoso al 20 % (3 x 4,0 v). El filtrado se concentró al vacío para proporcionar el producto en bruto BG-6, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. El residuo se disolvió en tolueno (5,0 v) y THF (1,0 v), y se enfrió a 10 °C, se cargó gota a gota MeMgBr (1,4 eq.) a 10 °C y después se agitó a TA hasta que se completó la reacción. La solución se enfrió por debajo de 10 °C. Se cargó<n>H4CI acuoso saturado gota a gota por debajo de 10 °C. La mezcla se centrifugó, se separó, se filtró y la fase orgánica se lavó dos veces con NaCI acuoso. La fase orgánica se concentró para proporcionar el producto en bruto, que se usó en la siguiente etapa sin purificación adicional. El residuo en DMF (2,5 v) y DMF-DMA (2,5 v) se agitó a 110 °C hasta que se completó la reacción. La mezcla de reacción se enfrió, se concentró y después se añadió DCM. La mezcla final se lavó con NH4Cl acuoso saturado. La capa orgánica se concentró y precipitó cargando hexano. La mezcla se centrifugó y se recogió la torta. La torta se secó al vacío. Esto proporcionó 82,2 kg del producto deseado. RMN de 1H (DMSO-d6) 57,49 (d,J= 12,6 Hz, 1H), 5,01 (d,J= 12,6 Hz, 1H), 3,99-3,82 (m, 2H), 3,14-2,94 (m, 2H), 2,89-2,61 (m, 6H), 2,49-2,37 (m, 1H), 1,66-1,56 (m, 2H), 1,39 (s, 9H), 1,39 1,20 (m, 2H).

Etapa 7: Síntesis de BG-9

En atmósfera de nitrógeno, una mezcla de tolueno (8,0 v), AcOH (0,5 v), BG-8 (1,2 eq.) y BG-4 (66,9 kg 1,0 eq.) se calentó a 95 °C y se agitó hasta que se completó la reacción. La mezcla se enfrió, se concentró y precipitó en metanol. La mezcla se centrifugó y la torta se lavó con metanol. La torta se secó al vacío. Esto proporcionó 107,8 kg de producto. RMN de 1H (DMSO-d6) 58,78 (d,J= 4,6 Hz, 1H), 8,15-8,07 (m, 2H), 7,51-7,41 (m, 2H), 7,34 (d,J= 4,6 Hz, 1H), 7,27 7,19 (m, 3H), 7,17-7,10 (m, 2H), 4,24-4,02 (m, 2H), 3,81-3,69 (m, 1H), 3,12-3,82 (m, 2H), 2,15-2,04 (m, 2H), 1,76-1,60 (m, 2H), 1,43 (s, 9H).

Etapa 8: Síntesis de BG-10

A una mezcla de THF (10,0 v), BG-9 (13,0 kg, 1,0 eq.) y D-DBTA (1,0 eq.) en atmósfera de N2 se le cargó Pd/C (10 % p/p), se introdujo gas hidrógeno en el reactor y la presión de hidrógeno se mantuvo a 1,8 MPa. El reactor se calentó lentamente a 40 °C y se agitó hasta que se completó la reacción. Después, la mezcla se enfrió, se filtró y la torta se lavó con THF. El filtrado se recogió y se concentró al vacío. Se añadió Dc M. El residuo se lavó con agua NaHCO3 ac., se concentró y precipitó en MTBE y hexano, después se centrifugaron. La torta se recogió y se secó al vacío para proporcionar el compuesto deseado (rendimiento: 94,8%y pureza: 98,5 %). RMN de 1H (DMSO-d6) 57,82-7,76 (m, 2H), 7,56-7,51 (m, 1H), 7,45-7,37 (m, 2H), 7,21-7,14 (m, 1H), 7,12-7,03 (m, 4H), 4,09-3,91 (m, 3H), 3,30-3,22 (m, 2H), 2,82-2,55 (m, 2H), 2,18-1,99 (m, 2H), 1,98-1,86 (m, 1H), 1,69-1,58 (m, 1H), 1,56-1,45 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,32-1,13 (m, 2H).

Etapa 9: Síntesis de BG-11

A una solución de BG-10 (100,0 kg, 1,0 eq.) en DCM (6,0 v) se le añadió gota a gota HCl en EtOH (20,9 % p/p, 2,0 v) en atmósfera de nitrógeno. La mezcla se agitó hasta que se completó la reacción. Se añadió MTBE (4,0 v) a la solución, y se enfrió. Las tortas se recogieron mediante centrifugación y se lavaron con hexano (2,0 V), después la torta se suspendió en hexano (5 v) y se centrifugó nuevamente. La torta se lavó con hexano (2,0 V) y se secó al vacío. Esto proporcionó 85,2 kg de producto. RMN de 1H (DMSO-d6) 59,25-8,85 (m, 2H), 7,84-7,70 (m, 2H), 7,47-7,37 (m, 2H), 7,18 (t,J= 7,4 Hz, 1H), 7,12-7,03 (m, 4H), 5,73 (s a, 2H), 4,12-4,03 (m, 1H), 3,25-3,19 (m, 4H), 2,90-2,73 (m, 2H), 2,28-2,12 (m, 1H), 2,10-2,00 (m, 1H), 1,99-1,86 (m, 1H), 1,84-1,52 (m, 4H).

Etapa 10: Síntesis de BG-11A

Una mezcla de BG-11 (85,0 kg, 1,0 eq) en agua (6,0 v) y NaOH (3,0 eq) se agitó hasta que se completó la reacción a TA. La torta se recogió y se suspendió en MTBE (6,0 v). Después, la mezcla se centrifugó para recoger la torta. La torta se secó al vacío. Esto proporcionó 71,3 kg de producto. RMN de 1H (DMSO-d6) 57,82-7,74 (m, 2H), 7,54-7,49 (m, 1H), 7,45-7,38 (m, 2H), 7,21-7,14 (m, 1H), 7,12-7,04 (m, 4H), 4,03-3,95 (m, 1H), 3,29-3,21 (m, 2H), 3,00-2,87 (m, 2H), 2,46-2,31 (m, 2H), 2,11-1,83 (m, 3H), 1,58-1,12 (m, 4H).

Etapa 11: Síntesis de BG-I I B

Una mezcla de etanol/agua/ácido acético (7:3:1, 46 v) y BG-11A (30 kg, 1,0 eq.) en un reactor se calentó a 70±5 °C en atmósfera de nitrógeno, después se añadió una solución de D-DBTA (1,20 eq.) en etanol/agua/ácido acético (7:3:1, 4 v) gota a gota con una temperatura no inferior a 65 °C. La solución resultante se agitó durante 16 horas a 60-65 °C, después se enfrió a TA. El sólido se recogió mediante centrifugación y se lavó con etanol (2,0 v). La torta se suspendió en el disolvente mixto de etanol/agua/AcOH (7:3:1,20 v) durante 16 horas a 55 °C y se enfrió a TA. El sólido se recogió mediante centrifugación, se lavó con etanol (2,0 v). La torta se secó al vacío (Rendimiento: 37,9%). RMN de 1H (DMSO-d6) 58,76 (s a, 2H), 7,99-7,89 (m, 4H), 7,83-7,75 (m, 2H), 7,66-7,57 (m, 3H), 7,52-7,45 (m, 4H), 7,45-7,39 (m, 2H), 7,21-7,14 (m, 1H), 7,13-7,03 (m, 4H), 5,64 (s, 2H), 4,08-4,00 (m, 1H), 3,29-3,19 (m, 4H), 2,85-2,72 (m, 2H), 2,21 1,40 (m, 7H).

Etapa 12: Síntesis de BG-11C

A una mezcla de diclorometano (15,0 v) y KOH acuoso al 20,0 % (3,0 v) se le añadió por lotes BG-11B (48,0 kg, 1,0 eq.) en atmósfera de nitrógeno a TA. Después de que se completara la reacción, la capa orgánica se recogió y la capa acuosa se extrajo con diclorometano (5,0 v). Las capas orgánicas se combinaron. Se añadió HCl con. (0,36 v) a las capas orgánicas anteriores a TA. La mezcla resultante se agitó hasta que se completó la reacción. El sólido se recogió mediante centrifugación y se lavó con diclorometano (1,0 v). El sólido recogido se suspendió con MTBE (6,0 v). El sólido se recogió mediante centrifugación y se lavó con MTBE (1,0 v), después se secó al vacío. Esto proporcionó 31,5 kg de producto (Rendimiento: 100 %).

Etapa 12: Síntesis de BG-I I D (Intermedio alternativo)

Se cargó ACN (5,0 v), agua blanda (10,0 v), KOH (5,0 eq) en un reactor y se agitó durante al menos 15 min. Se cargó BG-11B (1,0 eq) en el reactor en porciones. La mezcla se agitó hasta que se completó la reacción. La tarta se recogió mediante centrifugación, se suspendió en ACN (1,0 v) y agua blanda (5,0 v), y se secó al vacío para proporcionar el producto.

Etapa 13: Síntesis de BG-12

Una solución de BG-11C (15,0 kg, 1,0 eq.) en MsOH (2,5 v) se agitó a 85 °C en atmósfera de nitrógeno hasta que se completó la reacción. Después de enfriar a 5 °C, se añadió agua purificada (4,0 v) gota a gota al sistema y se mantuvo la temperatura a no más de 35 °C (la temperatura aumentó obviamente). La solución resultante se agitó durante 16 horas a 30 °C y después se lavó con Dc M (2 x 3,0 v). La fase acuosa se recogió. Se añadió DCM (6,0 v) a la fase acuosa, la mezcla se enfrió a 5 °C. El valor de pH se ajustó a 11~12 con NaOH acuoso al 20 % (la temperatura aumentó obviamente) con agitación y una temperatura no superior a 30 °C. La fase orgánica se separó y recogió. La capa acuosa se extrajo con DCM (3,0 v). Las capas orgánicas se combinaron y se concentraron. Se añadió MTBE (4,0 v) al residuo. Después, la mezcla se concentró y precipitó en n-heptano. El sólido se recogió mediante centrifugación y se secó en un horno de vacío. Esto proporcionó 12,55 kg de producto (Rendimiento: 94,9 %). RMN de 1H (DMSO-da) 57,52-7,46 (m, 2H), 7,45-7,38 (m, 2H), 7,21-7,13 (m, 1H), 7,12-7,03 (m, 4H), 6,64 (s, 1H), 3,99-3,90 (m, 1H), 3,29-3,22 (m, 2H), 3,03-2,90 (m, 2H), 2,48-2,36 (m, 2H), 2,03 (dd,J= 13,9, 5,6 Hz, 2H), 2,14-1,99 (m, 1H), 1,97-1,85 (m, 1H), 1,65-1,15 (m, 3H).

Etapa 14: Síntesis de BG-13

Una mezcla de MeOH (13,5 v), agua purificada (4,5 v) y BG-12 (8,5 kg, 1,0 eq.) en un reactor se calentó a 50 °C en atmósfera de N2. A la mezcla se le cargó gota a gota una solución de L-DBTA (0,7 eq) en MeOH/agua purificada (1,5 v/0,5 v) mientras la temperatura se mantenía a 50 °C. Después de la adición, la mezcla se agitó durante al menos 2 horas a 50 °C y después se enfrió a TA y se agitó durante al menos 16 horas a TA. La torta se recogió mediante centrifugación y se lavó con MeOH (2,0 v). La torta se secó en un horno de vacío. Esto proporcionó 9,08 kg de producto (Rendimiento: 74,8 %).

Etapa 15: Síntesis de (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a1pirimidina-3-carboxamida(Compuesto 1)

En atmósfera de N2, se añadieron ACN (12,0 v), agua (12,5 v), BG-13 (8,0 kg, 1,0 eq) y NaHCO3 (2,5 eq.) a un reactor. Después, la mezcla se enfrió a -5-0 °C. A la mezcla, se le añadió la solución de cloruro de acriloílo (1,1 eq.) en MeCN (0,5 v) gota a gota y se agitó hasta que se completó la reacción. Después, se añadió EA (6,0 v) al reactor y se agitó. La fase orgánica se recogió. La capa acuosa se extrajo adicionalmente con EA (3,0 v). Las fases orgánicas se combinaron y se lavaron con salmuera. La capa orgánica se recogió y se concentró.

El residuo se purificó por columna ultrarrápida sobre gel de sílice (2 p), se eluyó con metanol al 3 % p/p en DCM (21,0 v). La solución deCompuesto 1se recogió y se concentró al vacío. El residuo precipitó en EA/MTBE (2,0 v). La torta se recogió mediante centrifugación como producto.

Etapa 15: Síntesis de (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a1pirimidina-3-carboxamida(Compuesto 1,método alternativo)

Una mezcla de CH3CN (10,0 v), agua purificada (5,0 v), NaOH (1,5 eq.) y BG-13 (1,0 eq.) se agitó para obtener una solución transparente. Después, se cargó EtOAc (6,0 v) a la reacción y se separó. La fase orgánica se recogió y se lavó dos veces con salmuera al 15 % (3,0 v). La fase orgánica preparada anteriormente se concentró y el disolvente se cambió a CH3CN (volumen de residuo: NMT 5,0 v). Se cargaron CH3CN (7,5 v) y agua purificada (12,5 v) y se enfriaron a 15-20 °C. Se cargaron ácido L-(+)-tartárico (0,5 eq) y NaHCO3 (2,5 eq.) a la mezcla de reacción. Una solución de cloruro de acriloílo (1,1 eq.) en CH3CN (0,5 v) se cargó gota a gota en la mezcla de reacción. Después de que se completara la reacción, se cargó EtOAc (6,0 v) en la mezcla de reacción y la capa orgánica se recogió. La fase acuosa se extrajo adicionalmente con EA (3,0 v). Las capas orgánicas se combinaron, se lavaron con salmuera al 15 % (5,0 v) y se concentraron. El disolvente se cambió a DCM (volumen de residuo: 1,5-2,0 v) y se purificó mediante columna de gel de sílice (gel de sílice: malla 100-200, 2,0 p/p; eluyente: 3 % p/p de MeOH en DCM (aproximadamente 50 v). La solución recogida se concentró y se cambió a EtOAc (4,0 v). Se cargó MTBE (6,4 v) gota a gota sobre el residuo a 50 °C. Después, la mezcla se enfrió a 5 °C y la torta se recogió mediante centrifugación.

Etapa 16: Preparación de la Forma cristalina A del Compuesto 1

La torta anterior se disolvió en 7,0 volúmenes de DCM y después se cambió por disolvente EA. Después de la recristalización en EA/MTBE, las tortas se recogieron mediante centrifugación y se secaron al vacío. Esto proporcionó 4,44 kg de producto (Rendimiento: 70,2 %).

Después, el producto se caracterizó mediante el método del patrón de difracción de rayos X de polvo (XRPD), que se generó en un difractómetro de polvo de rayos X PANalytical Empyrean con los parámetros de XRPD de la siguiente manera: Longitud de onda de rayos X (Cu, ka, Ka1 (Á): 1,540598, Ka2(Á): 1,544426; Relación de intensidad Ka2/Ka1: 0,50); ajuste del tubo de rayos X (45 Kv, 40 mA); rendija de divergencia (automática); modo de barrido (continuo); intervalo de barrido (°2TH) (3°-40); velocidad de etapa (°2TH) (0,0131); velocidad de barrido (°/min) (aproximadamente 10). El resultado de XRPD encontró que el producto resultante era cristalino como se muestra en laFIG. 8.

La resonancia magnética nuclear de protones (RMN-1H) mostrada como en laFIG. 9se recogió en un espectrómetro de RMN Bruker 400M en DMSO-d6. RMN-1H (DMSO-d6) 57,50 (d,J= 8,6 Hz, 2H), 7,46-7,38 (m, 2H), 7,17 (t,J= 7,6 Hz, 1H), 7,08 (d,J= 7,6 Hz, 2H), 7,05 (d,J= 8,8 Hz, 2H), 6,85-6,72 (m, 1H), 6,67 (s, 1H), 6,07 (dd,J= 16,8, 2,2 Hz, 1H), 5,64 (dd,J= 10,4 Hz, 2,2 Hz, 1H), 4,55-4,38 (m, 1H), 4,17-3,94 (m, 2H), 3,33-3,22 (m, 2H), 3,08-2,88 (m, 1H), 2,67-2,51 (m, 1H), 2,36-2,15 (m, 1H), 2,12-1,82 (m, 2H), 1,79-1,65 (m, 1H), 1,63-1,49 (m, 1H), 1,38-1,08 (m, 2H). La resonancia magnética nuclear de carbono (RMN-13C) mostrada como en laFIG. 10se recogió en un espectrómetro de RMN Bruker 400M en DMSO-d6. Espectros de RMN-13C para la Forma cristalina A delCompuesto 1.

Ejemplo 2 Efecto de la combinación de mAb anti-CD20 e inhibidor de BTK en el modelo de xenoinjerto de linfoma de células del manto REC-1/NK92MI humano

Método

Se cultivaron células REC-1 en medio completo RPMI1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% (v/v) y 100 ^g/ml de penicilina y estreptomicina. La estirpe celular NK92MI/CD16V, que sobreexpresaba la cadena CD16 y FcRy, se estableció a partir de la estirpe celular precursora NK92MI. Las células se mantuvieron en MEM alfa suplementado con inositol 0,2 mM; 2-mercaptoetanol 0,1 mM; ácido fólico 0,02 mM; 1*NEAA; se ajustaron a una concentración final del 20%(v/v) de suero fetal bovino y 100 |jg/ml de penicilina y estreptomicina. Se pretrataron ratones NOD/SCID con ciclofosfamida (preparada en solución salina, 150mg/kg, i.p.) y disulfiram (preparado en Tween-80 al 0,8 % en solución salina, 125 mg/kg, v.o., una hora después de cada dosis de ciclofosfamida) una vez al día durante dos días.

El día del implante, el medio de cultivo se reemplazó por medio fresco. Cuatro horas más tarde, se retiró el medio y las células se recogieron como se ha descrito anteriormente. Las células se resuspendieron en PBS frío (4 °C) y se añadió el mismo volumen de matrigel para proporcionar una concentración final de 5 x 107 células/ml para REC-1 y 1*107 células/ml para NK92MI/CD16V, respectivamente. Las células resuspendidas se colocaron en hielo antes de la inoculación. La región del flanco derecho de cada ratón se limpió con etanol al 75 % antes de la inoculación celular. Después, a los animales se les coinyectó por vía subcutánea 1*107 células REC-1 y 2*10® células NK92MI/CD16V en 200 j l de suspensión celular en el flanco frontal derecho a través de una aguja de calibre 26.

El día 3 después de la inoculación, los animales se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos con 12 ratones por grupo. Los grupos consistieron en un grupo de control (sin tratamiento farmacológico), 2,5 mg/kg deCompuesto 1,2 mg/kg de obinutuzumab (Gazyva®, obtenido en Roch), y la combinación deCompuesto 1y obinutuzumab (2,5 mg/kg y 2 mg/kg, respectivamente). Los tratamientos se administraron en un volumen de 10ml/kg de peso corporal, evaluado inmediatamente antes de la dosificación y el volumen dosificado se ajustó en consecuencia. ElCompuesto 1se administró mediante sonda oral (v.o.) dos veces al día (2 V.D.) y obinutuzumab se administró mediante inyección intraperitoneal (i.p.) una vez a la semana (1 V.S.). Después de la implantación, se midió el volumen tumoral primario en dos dimensiones usando un calibre.

El peso corporal individual se registró dos veces por semana, controlándose los ratones a diario para detectar signos clínicos de toxicidad durante la duración del estudio. Los ratones se sacrificaron usando dióxido de carbono cuando su volumen tumoral alcanzó los 2.500 mm3 después de dos mediciones, el tumor estaba ulcerado o la pérdida de peso corporal superó el 20 %.

El volumen tumoral se calculó usando la fórmula: V = 0,5 *(a * b2) donde a y b son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente. La inhibición del crecimiento tumoral (ICT) se calculó usando la siguiente fórmula:

% de ICT = 100*[1-(tratadost/ placebot)]

tratadot = volumen tumoral de tratados en el tiempo t

placebot = volumen tumoral de placebo en el tiempo t

Resultado

Se examinó la eficaciain vivodelCompuesto 1y obinutuzumab en el modelo de xenoinjerto de LCM REC-1/NK92MI humano. ElCompuesto 1,como agente individual, demostró ser activo en este modelo, con un 72 % de ICT el día 23, mientras que el obinutuzumab, como agente individual, demostró que no tener ningún efecto antitumoral. La combinación de estos dos agentes indujo un 98 % de ICT el día 23, lo que fue significativamente más eficaz que cualquiera de los agentes solos (FIG. 1).

Ejemplo 3 Efecto de la combinación de mAb anti-CD20 e inhibidor de BTK en el modelo de xenoinjerto de LDLBG TMD-8 humano

Método

Se cultivaron células de DLBCL TMD-8 en medio completo RPMI1640 suplementado con suero bovino fetal al 10 % (v/v) y 100 jg/m l de penicilina y estreptomicina. El día del implante, el medio de cultivo se reemplazó por medio fresco. Cuatro horas más tarde, se retiró el medio y las células se recogieron como se ha descrito anteriormente. Las células se resuspendieron en PBS frío (4 °C) y se añadió el mismo volumen de matrigel para proporcionar una concentración final de 5 x 107 células/ml para células TMD-8. Las células resuspendidas se colocaron en hielo antes de la inoculación. La región del flanco derecho de cada ratón se limpió con etanol al 75 % antes de la inoculación celular. Después, a los animales se les inyectó por vía subcutánea 1*107 células TMD-8 en 200 j l de suspensión celular en el flanco frontal derecho a través de una aguja de calibre 26.

El día 7 después de la inoculación, los animales se dividieron aleatoriamente en 4 grupos con 10 ratones por grupo. Los grupos consistieron en un grupo de control (sin tratamiento farmacológico), 7,5 mg/kg deCompuesto 1,10 mg/kg de obinutuzumab (Gazyva®, obtenido en Roch), y la combinación deCompuesto 1y obinutuzumab. Los tratamientos se administraron en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal, evaluado inmediatamente antes de la dosificación y el volumen dosificado se ajustó en consecuencia. ElCompuesto 1se administró mediante sonda oral (v.o.) dos veces al día (2 V.D.) y el obinutuzumab se administró mediante inyección intraperitoneal (i.p.) una vez cada semana (1 V.S.). Después de la implantación, se midió el volumen tumoral primario en dos dimensiones usando un calibre.

Los ratones se sacrificaron usando dióxido de carbono cuando su volumen tumoral alcanzó los 2.500 mm3 después de dos mediciones, el tumor estaba ulcerado o la pérdida de peso corporal superó el 20 %.

El volumen tumoral se calculó usando la fórmula: V = 0,5 *(a x b2) donde a y b son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente. La inhibición del crecimiento tumoral (ICT) se calculó usando la siguiente fórmula:

% de ICT = 100*[1-(tratadost/ placebot)]

tratadot = volumen tumoral de tratados en el tiempo t

placebot = volumen tumoral de placebo en el tiempo t

Resultado

El día 46, los tratamientos deCompuesto 1y obinutuzumab dieron como resultado un 81 % y un 61 % de inhibición del crecimiento tumoral (ICT), respectivamente. Se observaron respuestas objetivas con elCompuesto 1a 7,5 mg/kg (1RC/4RP/5) y obinutuzumab a 10 mg/kg (0RC/2RP/2). La combinación deCompuesto 1y obinutuzumab fue más eficaz que cada tratamiento con un solo agente y dio como resultado un 111 % de ICT con un 90 % (1RC/8RP/9) de tasa de respuesta global (FIG. 2).

Ejemplo 4 Efecto de la combinación de mAb anti-CD20 e inhibidor de BTK en el modelo de xenoinjerto de LCM REC-1 humano

Método

Se cultivaron células REC-1 en medio completo RPMI1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% (v/v) y 100 |jg/ml de penicilina y estreptomicina. El día del implante, el medio de cultivo se reemplazó por medio fresco. Cuatro horas más tarde, se retiró el medio y las células se recogieron como se ha descrito anteriormente. Las células se resuspendieron en PBS frío (4 °C) y se añadió el mismo volumen de matrigel para proporcionar una concentración final de 5 x 107 células/ml para REC-1. Las células resuspendidas se colocaron en hielo antes de la inoculación. La región del flanco derecho de cada ratón se limpió con etanol al 75 % antes de la inoculación celular. Después, a los animales se les inyectó por vía subcutánea 1*107 células REC-1 en 200 j l de suspensión celular en el flanco frontal derecho a través de una aguja de calibre 26.

El día 9 después de la inoculación, los animales se dividieron aleatoriamente en 6 grupos con 7 ratones por grupo. Los grupos consistieron en un grupo de control (sin tratamiento farmacológico), 25 mg/kg de Ibrutinib, 7,5 mg/kg deCompuesto 1,200 jg/dosis de rituximab, la combinación deCompuesto 1y rituximab (7,5 mg/kg y 200 jg/dosis, respectivamente), y la combinación de Ibrutinib y rituximab (25 mg/kg y 200 jg/dosis, respectivamente). ElCompuesto 1y el ibrutinib se administraron en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal, evaluado inmediatamente antes de la dosificación y el volumen dosificado se ajustó en consecuencia. ElCompuesto 1e ibrutinib se administraron mediante sonda oral (v.o.) dos veces al día (2 V.D.) y el rituximab se administró mediante inyección intraperitoneal (i.p.) una vez cada cuatro días (1 V./4 D.). Después de la implantación, se midió el volumen tumoral primario en dos dimensiones usando un calibre.

% de ICT = 100*[1-(tratadost/ placebot)]

tratadot = volumen tumoral de tratados en el tiempo t

placebot = volumen tumoral de placebo en el tiempo t

Resultado

Como se muestra en laFIG. 3,el crecimiento tumoral se retrasó en los grupos de tratamiento con rituximab,Compuesto 1y Ibrutinib. ElCompuesto 1logró un efecto antitumoral similar al de Ibrutinib, con un 85 % y un 83 % de ICT, respectivamente. La combinación deCompuesto 1y rituximab fue más eficaz que cada agente por separado, mientras que la combinación de Ibrutinib con rituximab no mostró ningún efecto combinado evidente. El día 14, elCompuesto 1en combinación con rituximab provocó un peso tumoral significativamente menor en comparación con el tratamiento de combinación de Ibrutinib y rituximab (FIG. 4).

Ejemplo 5 Efecto de la combinación de mAb anti-PD-1 e inhibidor de Btk en el modelo alógeno de carcinoma epidermoide humano A431

Método

El día del implante, se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) a partir de 150 ml de sangre donada por un voluntario sano. En resumen, la sangre periférica se recogió en tubos de extracción de sangre al vacío que contenían heparina de sodio. Las PBMC se separaron mediante centrifugación en gradiente de densidad usando Histopaque-1077 y se lavaron una vez con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS). El sedimento celular se suspendió con DPBS en un volumen apropiado para proporcionar una concentración final de 1x108 células/ml y se colocó en hielo antes de la inoculación.

Se cultivaron células A431 en medio completo DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10 % (v/v) y 100 pg/ml de penicilina y estreptomicina. El día del implante, el medio de cultivo se reemplazó por medio fresco. Cinco horas después, se retiró el medio y las células se recogieron como se ha descrito anteriormente, excepto por que las células se resuspendieron en DPBS frío (4 °C) para proporcionar una concentración final de 5*107 células/ml y se colocaron en hielo antes de la inoculación. Se mezclaron las células A431, PBMC y matrigel en una relación de 1:1:2. Se pretrataron ratones NOD/SCID con ciclofosfamida (preparada en solución salina, 150mg/kg, i.p.) y disulfiram (preparado en Tween-80 al 0,8 % en solución salina, 125 mg/kg, v.o., una hora después de cada dosis de ciclofosfamida) una vez al día durante un día. La región de la axila derecha de cada ratón se limpió con etanol al 70 % antes de la inoculación celular. A cada animal se le inyectaron por vía subcutánea 2,5*10® células A431 y 5*10® PBMC (200 pl de mezcla celular en matrigel al 50 %) en el flanco frontal derecho a través de una aguja de calibre 2®, 24 horas después de la segunda dosis de ciclofosfamida.

A partir del día 0 después de la inoculación celular, los animales se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos con 10-11 ratones por grupo. Los grupos consistieron en un grupo de control (sin tratamiento farmacológico), 15 mg/kg deCompuesto 1, 10mg/kg deMab 1y la combinación deCompuesto 1yMab 1(15 mg/kg y 10 mg/kg, respectivamente). Los tratamientos se administraron en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal, evaluado inmediatamente antes de la dosificación y el volumen dosificado se ajustó en consecuencia. ElCompuesto 1se administró mediante sonda oral (v.o.) dos veces al día (2 V.D.) yMab 1se administró mediante inyección intraperitoneal (i.p.) una vez a la semana (1 V.S.). Después de la implantación, se midió el volumen tumoral primario en dos dimensiones usando un calibre.

El peso corporal individual se registró dos veces por semana, controlándose los ratones a diario para detectar signos clínicos de toxicidad durante la duración del estudio. Los ratones se sacrificaron usando dióxido de carbono cuando su volumen tumoral alcanzó los 2.500 mm3, el tumor estaba ulcerado o la pérdida de peso corporal superó el 20 %.

El volumen tumoral se calculó usando la fórmula: V = 0,5 *(a * b2) donde a y b son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente.

Resultado

Se examinó la eficaciain vivodelCompuesto 1yMab 1en un modelo alógeno de carcinoma epidermoide A431 humano.Mab 1,como agente individual, mostró un efecto marginal en este modelo, mientras que elCompuesto 1no mostró ningún efecto antitumoral en este modelo. Como se muestra en laFIG.5,la combinación de estos dos agentes demostró una eficacia mejor que cualquiera de los dos agentes por separado.

Ejemplo 6 Efecto de la combinación de mAb anti-PD-1 e inhibidor de BTK en el modelo alógeno de carcinoma epidermoide humano A431

Método

El día del implante, se aislaron células mononucleares de sangre periférica humana (PBMC) a partir de 150 ml de sangre donada por un voluntario sano. En resumen, la sangre periférica se recogió en tubos de extracción de sangre al vacío que contenían heparina de sodio. Las PBMC se separaron mediante centrifugación en gradiente de densidad usando Histopaque-1077 y se lavaron una vez con solución salina tamponada con fosfato de Dulbecco (DPBS). El sedimento celular se suspendió con DPBS en un volumen apropiado para proporcionar una concentración final de 5x107 células/ml y se colocó en hielo antes de la inoculación.

Se cultivaron células A431 en medio completo DMEM suplementado con suero bovino fetal al 10 % (v/v) y 100 pg/ml de penicilina y estreptomicina. El día del implante, el medio de cultivo se reemplazó por medio fresco. Cinco horas después, se retiró el medio y las células se recogieron como se ha descrito anteriormente, excepto por que las células se resuspendieron en DPBS frío (4 °C) para proporcionar una concentración final de 5*107 células/ml y se colocaron en hielo antes de la inoculación. Se mezclaron las células A431, PBMC y matrigel en una relación de 1:1:2. Se pretrataron ratones NOD/SCID con ciclofosfamida (preparada en solución salina, 150 mg/kg, i.p.) y disulfiram (preparado en Tween-80 al 0,8 % en solución salina, 125 mg/kg, v.o., una hora después de cada dosis de ciclofosfamida) una vez al día durante un día. La región de la axila derecha de cada ratón se limpió con etanol al 70 % antes de la inoculación celular. A cada animal se le inyectaron por vía subcutánea 2,5*10® células A431 y 2,5*10® PBMC (200 pl de mezcla celular en matrigel al 50 %) en el flanco frontal derecho a través de una aguja de calibre 2®, 24 horas después de la segunda dosis de ciclofosfamida.

A partir del día 0 después de la inoculación celular, los animales se dividieron aleatoriamente en cuatro grupos con 10-11 ratones por grupo. Los grupos consistieron en un grupo de control (sin tratamiento farmacológico), 15 mg/kg deCompuesto 1,10 mg/kg de pembrolizumab y la combinación deCompuesto 1y pembrolizumab (15 mg/kg y 10 mg/kg, respectivamente). Los tratamientos se administraron en un volumen de 10 ml/kg de peso corporal, evaluado inmediatamente antes de la dosificación y el volumen dosificado se ajustó en consecuencia. ElCompuesto 1se administró mediante sonda oral (v.o.) dos veces al día (2 V.D.) y pembrolizumab se administró mediante inyección intraperitoneal (i.p.) una vez a la semana (1 V.S.). Después de la implantación, se midió el volumen tumoral primario en dos dimensiones usando un calibre.

El volumen tumoral se calculó usando la fórmula: V = 0,5 *(a x b2) donde a y b son los diámetros largo y corto del tumor, respectivamente.

Resultado

Se examinó la eficaciain vivodelCompuesto 1y pembrolizumab en un modelo alógeno de carcinoma epidermoide A431 humano. Ni elCompuesto 1ni el pembrolizumab mostraron un efecto antitumoral en este modelo. Como se muestra en laFIG. 6,la combinación de estos dos agentes no mostró ningún efecto combinado.

Ejemplo 7A Selectividad para BTK frente a ITK del inhibidor de BTK

Método:

Determinación bioquímica de la CI50 de BTK e ITK

ElCompuesto 1e Ibrutinib se analizaron para determinar la inhibición de la cinasa BTK en ensayos basados en la metodología de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET). En resumen, los ensayos se realizaron en placas de color negro de volumen bajo de 384 pocillos en una mezcla de reacción que contenía la cinasa BTK, ATP 5 pM, sustrato peptídico 2 pM y compuesto 0-10 pM en tampón que contenía Tris 50 mM, pH 7,4, MgCh 10 mM, MnCh2 mM, EDTA 0,1 mM, DTT 1 mM, Tween-20 al 0,005 %, SEB 20 nM y BSA al 0,01 %. La cinasa se incubó con el compuesto durante 60 minutos a temperatura ambiente y la reacción se inició mediante la adición de ATP y sustrato peptídico. Después de la reacción a temperatura ambiente durante 60 minutos, se añadió un volumen igual de solución de parada/detección. Las placas se sellaron y se incubaron a temperatura ambiente durante 1 hora, y las señales TR-FRET se registraron en un lector de placas PHERAstar FS (BMG Labtech).

El protocolo del ensayo de ITK es similar al ensayo de BTK excepto por la siguiente modificación: En la reacción de cinasa se usaron sustrato de ATP 3 pM y TK 2 pM.

Ensayo celular de p-PLCYl de ITK

Una vez activado por la agregación del receptor de linfocitos T (TCR), ITK fosforila directamente el residuo Tyr783 de PLCy1 y posteriormente activa la vía NF-kB, conduciendo a una mayor producción de Interleucina 2 (IL-2). Se trataron células Jurkat con la concentración indicada de ibrutinib oCompuesto 1durante 2 horas. Después del tratamiento, las células se expusieron a 10 mM de peróxido de hidrógeno durante 10 min. Se detectaron PLC<y>1 y p-PLCY1 (Y783) mediante análisis de transferencia Western. Se calculó la CI50 usando el software Quantity One y Prism 5.

Ensayo celular de producción de IL-2 por ITK

Se cocultivaron células HuT-78 y células Hek293/OS8V en medio con la concentración indicada de ibrutinib oCompuesto 1durante 20 h. La potencia del ibrutinib y la delCompuesto 1se calcularon basándose en el nivel de IL-2 en medio.

Ensayo celular de ocupación de BTK

Se trataron células Z-138 con una concentración creciente deCompuesto 1durante 2 horas. El lisado celular se cargó en una placa de ELISA preinmovilizada con una sonda de detección. Después de la incubación durante la noche, la placa se lavó con PBST 3 veces y la proteína BTK conjugada con sonda se detectó mediante un anticuerpo contra BTK. La potencia de los compuestos se calculó basándose en la inhibición de la relación entre la intensidad de la señal a DO450 nm. Los valores de CI50 se calcularon con el software GraphPad Prism usando la función dosis-respuesta sigmoidea.

Resultados:

En el ensayo bioquímico, la selectividad delCompuesto 1para BTK fue 187 veces mayor que para ITK, mientras que la selectividad de Ibrutinib para BTK fue 17 veces mayor que para ITK, lo que indica que elCompuesto 1fue más selectivo que el ibrutinib para la inhibición de BTK frente a ITK.

En el ensayo de fosforilación de PLC<y>I (célula Jurkat) y el ensayo de producción de IL-2 (célula HuT-78), elCompuesto 1demostró ser 44 veces y 10 veces menos eficaz que el ibrutinib para inhibir la producción de IL-2 y la fosforilación de PLCy I inducida por H2O2, lo que sugiere que elCompuesto 1es mucho más débil en la inhibición de ITK que el ibrutinib.

T l 1 El m 1 l m n l iv r BTK fr n ITK

Ejemplo 7B Efecto del inhibidor de BTK sobre el efecto ADCC inducido por mAb anti-CD20

Método

Se cultivaron células Mino en medio completo RPMI1640 suplementado con suero bovino fetal al 10% (v/v) y 100 |jg/ml de penicilina y estreptomicina. La estirpe celular NK92MI/CD16V, que sobreexpresaba la cadena CD16 y FcRy, se estableció a partir de la estirpe celular precursora NK92MI. Las células se mantuvieron en MEM alfa suplementado con inositol 0,2 mM; 2-mercaptoetanol 0,1 mM; ácido fólico 0,02 mM; 1*NEAA; se ajustaron a una concentración final del 20 % (v/v) de suero fetal bovino y 100 jg/m l de penicilina y estreptomicina.

Se sembraron células Mino (2*104células/pocillo) como células diana (T) en placas de 96 pocillos por triplicado. Las células se trataron con vehículo o diversas concentraciones de inhibidores de BTK durante una hora, seguido de la cosiembra con células NK92MI (4 * 104células/pocillo, como células efectoras (E)) y el cotratamiento con vehículo u obinutuzumab (2 ug/pocillo) durante 24 horas adicionales. Después de la incubación, se recogieron los sobrenadantes sin células de cada pocillo y se midieron los niveles de IFN-y humano usando el kit ELISA Ready-SET-Go de IFN-y humano.

Resultado

Se evaluó la ADCC inducida por obinutuzumab mediante la secreción de IFN-y en cocultivo de linfocitos NK y células Mino (FIG. 7). El ibrutinib inhibió la secreción de IFN-<y>de manera dependiente de la dosis. A 1 jM , el ibrutinib inhibió fuertemente la secreción de IFN-y. Por el contrario, elCompuesto 1fue mucho menos eficaz en este ensayo. A las dosis elevadas sometidas a ensayo (10 jM ), tuvo un efecto de inhibición similar sobre la secreción de IFN-y que el ibrutinib a 1 jM . El resultado sugiere que elCompuesto 1es al menos 10 veces más débil que el ibrutinib para inhibir la ADCC inducida por obinutuzumab. Esto es coherente con que elCompuesto 1es el inhibidor de BTK más selectivo, con una actividad de inhibición de ITK mucho más débil que el ibrutinib en ensayos tanto bioquímicos como celulares.

Ejemplo 8 Resultado de la fase de ensayo clínico sobre inhibidor de BTK combinado con anticuerpo anti-CD20

El ensayo abierto multicéntrico de Fase 1 delCompuesto 1con obinutuzumab en pacientes con neoplasias malignas de linfocitos B se está realizando en Australia y Estados Unidos y consiste en una fase de aumento de dosis y una fase de expansión de dosis en cohortes de enfermedades específicas, que incluyen linfoma linfocítico crónico (LLC)/linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP) sin tratamiento previo (TN, del ingléstreatment naive)o en recaída/refractario (R/R) y linfoma folicular (LF) R/R. El componente de aumento de dosis está sometiendo a ensayo elCompuesto 1a 320 mg una vez al día (1 V.D.) o 160 mg dos veces al día (2 V.D.) en ciclos de 28 días, en combinación con obinutuzumab. Y, se administró obinutuzumab de acuerdo con la dosis convencional para LLC (tres dosis de carga de 1000 mg semanales seguidas de 1000 mg el día uno de los ciclos 2-6). El componente de expansión de dosis en curso está sometiendo a ensayo dosis deCompuesto 1a 160 mg 2 V.D. con el mismo calendario que el obinutuzumab. Al 31 de marzo de 2017, se inscribieron en el ensayo 45 pacientes con LLC/LLCP y 17 pacientes con LF.

43 pacientes con LLC/LLCP (18 TN, 25 R/R) y 15 pacientes con LF R/R tuvieron más de 12 semanas de seguimiento y se evaluaron en cuanto a su eficacia. En LLC/LLC<p>TN, después de una mediana de seguimiento de 7,0 meses (2,811,8 meses), la tasa de respuesta global (TRG) fue del 89%con respuestas completas (RC) en el 22%y respuestas parciales (RP) en el 67 % de los pacientes. Se observó enfermedad estable (ES) en el 11 % de los pacientes. En LLC/LLCP R/R, a una mediana de seguimiento de 8,0 meses (3,8-14,0 meses), la TRG fue del 92 % con RC en el 16 % y RP en el 76 % de los pacientes. Se observó ES en el 4 % de los pacientes. En LF R/R, a una mediana de seguimiento de 6,2 meses (1,2-10,7 meses), la TRG fue del 73 % con RC en el 33 % y RP en el 40 % de los pacientes. Se observó enfermedad estable en el 13 % de los pacientes. Un paciente con LLC/LLCP R/R tenía una enfermedad progresiva (transformación de Richter) y dos pacientes con LF R/R tenían una enfermedad progresiva.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un inhibidor de Btk para su uso en un método para el retraso de la progresión o el tratamiento del cáncer en un sujeto, que comprende administrar al sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz del inhibidor de Btk, en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de un anticuerpo anti-CD20 o un anticuerpo anti-PD-1, en donde el inhibidor de Btk es (S)-7-(1-acriloilpiperidin-4-il)-2-(4-fenoxifenil)-4,5,6,7-tetra-hidropirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carboxamida, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma,

en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab, ibritumomab tiuxetano, tositumonmab, ofatumumab u obinutuzumab, y en donde el anticuerpo anti-PD-1 es un anticuerpo monoclonal anti-PD-1 que comprende una secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena pesada (Vh) de SEQ ID NO 24, una secuencia de aminoácidos de la región variable de cadena ligera (Vl) de SEQ ID NO 26 y una secuencia de aminoácidos del dominio constante de IgG4 de SEQ ID NO 88.

2. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-CD20 es rituximab u Obinutuzumab.

3. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, en donde el anticuerpo anti-CD20 es obinutuzumab, y

en donde el inhibidor de Btk se administra en una dosis de 320 mg 1 V.D. o 160 mg 2 V.D. en ciclos de 28 días, y se administra obinutuzumab mediante tres dosis de carga de 1000 mg semanalmente seguidas de 1000 mg el día uno de los ciclos 2-6.

4. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el anticuerpo anti-PD-1 se administra a una dosis de 2 mg/kg 1 V./3 S a 200 mg/kg 1 V./3 S.

5. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el cáncer es un cáncer hemático.

6. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, en donde el cáncer hemático se selecciona de una leucemia, un linfoma, un mieloma, un linfoma no Hodgkin (LNH), un linfoma de Hodgkin (LH) o una neoplasia maligna de linfocitos B.

7. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B es leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), tricoleucemia (TL), leucemia de tipo Burkitt (LB), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG) con subtipo indeterminado, linfoma primario del sistema nervioso central (LPSNC), linfoma secundario del sistema nervioso central (LSNCS) de origen mamario o testicular, mieloma múltiple, o una combinación de dos o más de los mismos.

8. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro germinal (LDLBG-BCG) o linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro no germinal (LDLBG-BCnoG).

9. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria (R/R).

10. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro germinal (LDLBG-BCG) o linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro no germinal (LDLBG-BCnoG).

11. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B en recaída o refractaria se selecciona de leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos.

12. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 7, en donde la neoplasia maligna de linfocitos B es una neoplasia maligna de linfocitos B metastatizada.

13. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, en donde:

(i) la neoplasia maligna de linfocitos B metastásica es linfoma difuso de linfocitos B grandes (LDLBG), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B activados (LDLBG-LBA), linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro germinal (LDLBG-BCG) o linfoma difuso de linfocitos B grandes de linfocitos B de centro no germinal (LDLBG-BCnoG); o

(ii) la neoplasia maligna de linfocitos B metastásica se selecciona de leucemia linfocítica crónica (LLC), linfoma linfocítico de células pequeñas (LLCP), leucemia prolinfocítica de linfocitos B (LPL-B), linfoma no LLC/LLCP, linfoma folicular (LF), linfoma de células del manto (LCM), linfoma de la zona marginal (LZM), macroglobulinemia de Waldenstrom (MW), mieloma múltiple o una combinación de los mismos.

14. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde:

(i) el cáncer es un sarcoma o carcinoma; y/o

(ii) el cáncer se selecciona de cáncer de vejiga, cáncer de mama, cáncer de colon, cáncer gastroenterológico, cáncer de riñón, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de vías biliares proximal o distal y melanoma.

15. El inhibidor de Btk para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el inhibidor de BTK se administra a una dosis de 320 mg 1 V.D. o 160 mg 2 V.D.