ES2473584T3 - Composiciones y métodos para la inhibición de la ruta de JAK - Google Patents

Composiciones y métodos para la inhibición de la ruta de JAK Download PDF

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Abstract

Compuesto que es N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

Composiciones y métodos para la inhibición de la ruta de JAK
5 Introducción
CAMPO
La presente descripción se refiere a un compuesto y a su uso en el tratamiento de estados en los que la modulación 10 de la ruta de JAK o la inhibición de cinasas JAK, particularmente JAK3, es terapéuticamente útil.
ANTECEDENTES
Las cinasas Janus (o JAK) son una familia de proteína tirosina cinasas citoplasmáticas que incluyen JAK1, JAK2,
15 JAK3 y TYK2. Cada una de las cinasas JAK es selectiva para los receptores de determinadas citocinas, aunque múltiples cinasas JAK pueden afectarse por determinadas rutas de se�alizaci�n o citocinas particulares. Los estudios sugieren que JAK3 se asocia con la cadena gamma común (Dc) de los diversos receptores de citocina. En particular, JAK3 se une selectivamente a receptores y es parte de la ruta de se�alizaci�n de citocina para IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21. La cinasa JAK1 interacciona con, entro otros, los receptores para citocinas IL-2, IL-4, IL-7,
20 IL-9 e IL-21, mientras que JAK2 interacciona con, entro otros, los receptores para IL-9 y TNF-α. Tras la unión de determinadas citocinas a sus receptores (por ejemplo, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21), se produce la oligomerizaci�n del receptor, dando como resultado que las colas citoplasmáticas de cinasas JAK asociadas se acerquen y facilitando la transfosforilaci�n de residuos de tirosina en la cinasa JAK. Esta transfosforilaci�n da como resultado la activación de la cinasa JAK.
25 Las cinasas JAK fosforiladas se unen a diversas proteínas transductoras de señal y activadoras de la transcripción (STAT). Estas proteínas STAT, que son proteínas de unión a ADN activadas mediante fosforilaci�n de residuos de tirosina, funcionan tanto como moléculas de se�alizaci�n como factores de transcripción y en última instancia se unen a secuencias de ADN específicas presentes en los promotores de los genes que responden a citocina
30 (Leonard et al., (2000), J. Allergy Clin. Immunol.105:877-888). La se�alizaci�n de JAK/STAT se ha implicado en la mediación de muchas respuestas inmunitarias anómalas tales como alergias, asma, enfermedades autoinmunitarias tales como rechazo de trasplante (aloinjerto), artritis reumatoide, esclerosis lateral amiotr�fica y esclerosis múltiple, as� como en tumores malignos sólidos y hematol�gicos tales como leucemia y linfomas. Para una revisión de la intervención farmacéutica de la ruta de JAK/STAT véase Frank, (1999), Mol. Med. 5:432:456 y Seidel et al., (2000),
35 Oncogene 19: 2645-2656.
En particular, JAK3 se ha implicado en una variedad de procesos biológicos. Por ejemplo, se ha mostrado que la proliferaci�n y supervivencia de mastocitos murinos inducidos mediante IL-4 e IL-9 depende de la se�alizaci�n de JAK3 y cadena gamma (Suzuki et al., (2000), Blood 96:2172-2180). Teniendo un papel crucial en respuestas de 40 desgranulaci�n de mastocitos mediadas por receptores de IgE (Malaviya et al., (1999), Biochem. Biophys. Res. Commun. 257:807-813), se ha mostrado que la inhibición de la cinasa JAK3 impide reacciones de hipersensibilidad de tipo I, incluyendo anafilaxia (Malaviya et al., (1999), J. Biol. Chem. 274:27028-27038). También se ha mostrado que la inhibición de JAK3 da como resultado la supresión inmunitaria para el rechazo de aloinjerto (Kirken, (2001), Transpl. Proc. 33:3268-3270). Las cinasas, particularmente cinasas JAK3, también se han implicado en el
45 mecanismo implicado en estadios tempranos y tardíos de artritis reumatoide (Muller-Ladner et al., (2000), J. Immunol. 164:3894-3901); esclerosis lateral amiotr�fica familiar (Trieu et al., (2000), Biochem Biophys. Res. Commun. 267:22-25); leucemia (Sudbeck et al., (1999), Clin. Cancer Res. 5:1569-1582); micosis fungoide, una forma linfoma de células T (Nielsen et al., (1997), Prac. Natl. Acad. Sci. USA 94:6764-6769); y crecimiento celular anómalo (Yu et al., (1997), J. Immunol. 159:5206-5210; Catlett- Falcone et al., (1999), Immunity 10:105-115).
50 Las cinasas JAK, incluyendo JAK3, se expresan abundantemente en células leuc�micas primarias de niños con leucemia linfobl�stica aguda, la forma más común de cáncer infantil, y los estudios han correlacionado la activación de STAT en determinadas células con señales que regulan la apoptosis (Demoulin et al., (1996), Mol. Cell. Biol, 16:4710-6; Jurlander et al., (1997), Blood. 89:4146-52; Kaneko et al., (1997), Clin. Exp. Immun. 109:185-193; y
55 Nakamura et al.,(1996), J. Biol. Chem. 271:19483-8). También se sabe que son importantes para la diferenciación, función y supervivencia de linfocitos. En particular, JAK3 desempeña un papel esencial en la función de linfocitos, macr�fagos y mastocitos. Dada la importancia de cinasas JAK, particularmente JAK3, el compuesto que modula la ruta de JAK, incluyendo los selectivos para JAK3, puede ser útil para tratar enfermedades o condiciones en las que la función de linfocitos, macr�fagos o mastocitos est� implicada (Kudlacz et al., (2004) Am. J. Transplant 4:51-57;
60 Changelian (2003) Science 302:875-878). Las condiciones en las que se contempla que la selección como diana de la ruta de JAK o la modulación de las cinasas JAK, particularmente JAK3, va a ser terapéuticamente útil incluyen, leucemia, linfoma, rechazo de trasplante (por ejemplo, rechazo de trasplante de islotes de páncreas, aplicaciones de trasplante de médula ósea (por ejemplo, enfermedad injerto contra huésped), enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, diabetes) e inflamación (por ejemplo, asma, reacciones alérgicas). Condiciones que pueden beneficiarse de
65 la inhibición de JAK3 se tratan en más detalle a continuación.
En vista de los numerosos estados que se contempla que van a beneficiarse mediante el tratamiento que implica la modulación de la ruta de JAK es inmediatamente evidente que el nuevo compuesto que modula rutas de JAK y métodos de uso de este compuesto deben proporcionar beneficios terapéuticos sustanciales a una amplia variedad de pacientes. En el presente documento se proporciona un compuesto de 2,4-pirimidindiamina novedoso para su
5 uso en el tratamiento de estados en los que la selección como diana de la ruta de JAK o la inhibición de cinasas JAK, particularmente JAK3, es terapéuticamente útil.
El documento WO 2008 118822 da a conocer composiciones y métodos para la inhibición de la ruta de JAK. El documento WO 2008 9458 da a conocer compuestos de 2,4-di(arilamino)-pirimidin-5-carboxamida como inhibidores
10 de cinasa JAK.
Sumario
En una realización, la presente descripción se refiere a N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3
15 benzoxazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina en el tratamiento de estados en los que la modulación de la ruta de JAK o la inhibición de cinasas JAK, particularmente JAK2, JAK3, o ambas, ser� terapéuticamente útil.
Una realización, descrita en el presente documento incluye un compuesto que es N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo.
20 Otra realización es el compuesto descrito anteriormente para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad mediada por cinasa JAK, que incluye administrar a un sujeto una cantidad del compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por cinasa JAK.
25 Otra realización es una formulación farmacéutica que incluye el compuesto descrito anteriormente. La terapia que usa el compuesto de 2,4-pirimidindiamina y las formulaciones farmacéuticas descritas en el presente documento puede aplicarse sola, o puede aplicarse en combinación con o complementaria a otras terapias inmunosupresoras.
A continuación se proporciona una descripción más detallada para esta y otras realizaciones. 30
Descripci�n detallada
VISI�N GENERAL
35 La invención abarca N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina y las composiciones y el compuesto para su uso en el tratamiento de condiciones en las que la modulación de la ruta de JAK o la inhibición de cinasas JAK, particularmente JAK3, son terapéuticamente útiles. También se describen formulaciones, usos como agentes de examen y otras utilidades.
40 TÉRMINOS
Tal como se usan en el presente documento, se pretende que las siguientes palabras y frases tengan los significados expuestos a continuación, excepto hasta el grado de que el contexto en el que se usan indique lo contrario o se defina expresamente que significan algo diferente.
45 El símbolo “-” significa un enlace sencillo, “=” significa un doble enlace, “=” significa un triple enlace. El símbolo ” se refiere a un grupo en un doble enlace que ocupa cualquier posición en el extremo terminal del doble enlace al que el símbolo est� unido; es decir, la geometría, E o Z, del doble enlace es ambigua y se pretende que ambos isómeros est�n incluidos. Cuando se representa un grupo eliminado de su fórmula original, se usar� el
50 símbolo “~” al final del enlace que se ha escindido teóricamente con el fin de separar el grupo de su fórmula estructural original.
Cuando se representan o describen estructuras químicas, a menos que se indique explícitamente lo contrario, se asume que todos los carbonos tienen sustitución de hidrógeno para conformar una valencia de cuatro. Por ejemplo, 55 en la estructura del lado izquierdo del esquema a continuación hay nueve hidrógenos implicados. Los nueve hidrógenos est�n representados en la estructura a la derecha. En ocasiones un átomo particular en una estructura se describe en fórmula de texto que tiene un hidrógeno o hidrógenos como sustitución (hidrógeno definido expresamente), por ejemplo, -CH2CH2-. Un experto habitual en la técnica entender� que las técnicas descriptivas mencionadas anteriormente son comunes en la técnica química para proporcionar brevedad y simplicidad a la
60 descripción de estructuras por lo demás complejas.
En esta solicitud, algunas estructuras de anillo est�n representadas de manera genérica y se describirán en el texto. Por ejemplo, en el esquema a continuación si el anillo A se usa para describir un fenilo, hay como máximo cuatro hidrógenos en el anillo A (cuando R no es H).
Si un grupo R se representa como “flotando” en un sistema de anillos, tal como por ejemplo en el grupo:
entonces, a menos que se defina lo contrario, un sustituyente R puede residir en cualquier átomo del sistema de anillos bic�clico condensado, excluyendo el átomo que porta el enlace con el símbolo “~”, siempre que se forme una 15 estructura estable. En el ejemplo representado, el grupo R puede residir en un átomo en cualquiera del anillo de 5 miembros o de 6 miembros del sistema de anillos de indolilo.
Cuando haya más de uno de tales grupos “flotantes” representados, como por ejemplo en las fórmulas:
en las que hay dos grupos, concretamente, el R y el enlace que indica unión a una estructura original; entonces, a menos que se defina lo contrario, los grupos “flotantes” pueden residir en cualquier átomo del sistema de anillos, asumiendo de nuevo que cada uno sustituye a un hidrógeno representado, implicado o definido expresamente en el
25 sistema de anillos y que se formar� un compuesto químicamente estable mediante una disposición de este tipo.
Cuando se representa que un grupo R existe en un sistema de anillos que contiene carbonos saturados, como por ejemplo en la fórmula:
en la que, en este ejemplo, y puede ser más de uno, asumiendo que cada uno sustituye a un hidrógeno actualmente representado, implicado o definido expresamente en el anillo; entonces, a menos que se defina lo contrario, dos R pueden residir en el mismo carbono. Un ejemplo simple es cuando R es un grupo metilo; puede existir un dimetilo
35 geminal en un carbono del anillo representado (un carbono “anular”). En otro ejemplo, dos R en el mismo carbono, incluyendo el mismo carbono, pueden formar un anillo, creando as� una estructura de anillo espiroc�clico (un grupo “espirociclilo”). Usando el ejemplo anterior, en el que dos R forman, por ejemplo un anillo de piperidina en una disposición espiroc�clica con el ciclohexano, tal como por ejemplo en la fórmula:
“Alquilo” en su sentido más amplio se pretende que incluya estructuras hidrocarbonadas lineales, ramificadas o cíclicas, y combinaciones de las mismas. Los grupos alquilo pueden estar completamente saturados o con una o más unidades de insaturaci�n, pero no pueden ser aromáticos. Generalmente los grupos alquilo se definen mediante
un subíndice, o bien un número entero fijado o bien un intervalo de números enteros. Por ejemplo, “alquilo C8” incluye n-octilo, iso-octilo, 3-octinilo, ciclohexeniletilo, ciclohexiletilo, y similares; en los que el subíndice “8” designa que todos los grupos definidos por este término tienen un número de carbonos fijado de ocho. En otro ejemplo, el término “alquilo C1-6” se refiere a grupos alquilo que tienen desde uno hasta seis átomos de carbono y, dependiendo 5 de cualquier insaturaci�n, ramificaciones y/o anillos, el número requerido de hidrógenos. Los ejemplos de grupos alquilo C1-6 incluyen metilo, etilo, vinilo, propilo, isopropilo, butilo, s-butilo, t-butilo, isobutilo, isobutenilo, pentilo, pentinilo, hexilo, ciclohexilo, hexenilo, y similares. Cuando un residuo alquilo que tiene un número específico de carbonos se denomina de manera genérica, se pretende que se abarquen todos los isómeros geométricos que tienen ese número de carbonos. Por ejemplo, o bien “propilo” o bien “alquilo C3” incluyen cada uno n-propilo, cpropilo, propenilo, propinilo e isopropilo. Cicloalquilo es un subconjunto de alquilo e incluye grupos hidrocarbonados cíclicos de desde tres hasta trece átomos de carbono. Los ejemplos de grupos cicloalquilo incluyen c-propilo, cbutilo, c-pentilo, norbornilo, norbornenilo, c-hexenilo, adamantilo y similares. Tal como se menciona, alquilo se refiere a residuos alcanilo, alquenilo y alquinilo (y combinaciones de los mismos), se pretende que incluya, por ejemplo, ciclohexilmetilo, vinilo, alilo, isoprenilo y similares. Un alquilo con un número particular de carbonos puede 15 denominarse usando una restricción geométrica más específica pero todavía genérica, por ejemplo “cicloalquilo C3-6” que significa que se pretende que sólo los cicloalquilos que tienen entre 3 y 6 carbonos se incluyan en esa definición particular. A menos que se especifique lo contrario, los grupos alquilo, o bien solos o bien como parte de otro grupo, por ejemplo -C(O)alquilo, tienen desde uno hasta veinte carbonos, es decir alquilo C1-20. En el ejemplo “-C(O)alquilo”, en el que no había limitaciones de recuento de carbonos definidas, el carbonilo del grupo -C(O)alquilo no est� incluido en el recuento de carbonos, puesto que “alquil” se designa de manera genérica. Pero cuando se facilita una limitación de carbono específica, por ejemplo en el término “alquilo C1-20 opcionalmente sustituido”, en la que la sustitución opcional incluye “oxo” se incluyen los carbonos de cualquier carbonilo formado mediante tal sustitución “oxo” en el recuento de carbonos puesto que eran parte de la limitación del recuento de carbonos original. Sin embargo, haciendo referencia de nuevo a “alquilo C1-20 opcionalmente sustituido”, si la sustitución
25 opcional incluye grupos que contienen carbono, por ejemplo -CH2CO2H, los dos carbonos en este grupo no se incluyen en la limitación de carbonos del alquilo C1-20.
Cuando se facilita un límite del número de carbonos al final de un término que por s� mismo comprende dos términos, se entiende que la limitación del número de carbono incluye ambos términos. Por ejemplo, para el término “arilalquilo C7-14”, tanto la parte de “arilo” como la de “alquilo” del término se incluye el recuento de carbonos, un máximo de 14 en este ejemplo, pero los grupos sustituyentes adicionales en éste no est�n incluidos en el recuento de átomos a menos que incorporen un carbono del recuento de carbonos designado del grupo, como en el ejemplo de “oxo” anterior. De manera similar cuando se facilita un límite del número de átomos, por ejemplo “heteroarilalquilo de 6-14 miembros”, tanto la parte de “heteroarilo” como la de “alquilo” se incluyen en la limitación del recuento de
35 átomos, pero no se incluyen grupos sustituyentes adicionales en éste en el recuento de átomos a menos que incorporen un carbono del recuento de carbonos designado del grupo. En otro ejemplo, “cicloalquilalquilo C4-10” significa un cicloalquilo unido a la estructura original por medio de un alquileno, alquilideno o alquilidino; en este ejemplo el grupo est� limitado a 10 carbonos que incluyen la subunidad de alquileno, alquilideno o alquilidino. Como otro ejemplo, la parte de “alquilo” de, por ejemplo “arilalquilo C7-14” se pretende que incluya alquileno, alquilideno o alquilidino, a menos que se indique lo contrario, por ejemplo como en los términos “arilalquileno C7-14” o “aril C6-10-CH2CH2-”.
“Alquileno” se refiere a un radical divalente lineal, ramificado y cíclico (y combinaciones del mismo) que consiste solamente en carbono y átomos de hidrógeno, que no contiene insaturaciones y que tiene desde uno hasta diez
45 átomos de carbono, por ejemplo, metileno, etileno, propileno, n-butileno y similares. Alquileno es similar a alquilo, haciendo referencia a los mismos residuos que alquilo, pero teniendo dos puntos de unión y, específicamente, completamente saturado. Los ejemplos de alquileno incluyen etileno (-CH2CH2-), propileno (-CH2CH2CH2-), dimetilpropileno (-CH2C(CH3)2CH2-), ciclohexan-1,4-diilo y similares.
“Alquilideno” se refiere a un radical divalente lineal, ramificado y cíclico (y combinaciones del mismo) insaturado que consiste solamente en carbono y átomos de hidrógeno, que tiene desde dos hasta diez átomos de carbono, por ejemplo, etilideno, propilideno, n-butilideno, y similares. Alquilideno es similar a alquilo, haciendo referencia a los mismos residuos que alquilo, pero teniendo dos puntos de unión y, específicamente, al menos una unidad de insaturaci�n de doble enlace. Los ejemplos de alquilideno incluyen vinilideno (-CH=CH-), ciclohexilvinilideno
55 (-CH=C(C6H13)-), ciclohexen-1,4-diilo y similares.
“Alquilidino” se refiere a un radical divalente lineal, ramificado y cíclico (y combinaciones del mismo) insaturado que consiste solamente en carbono y átomos de hidrógeno que tiene desde dos hasta diez átomos de carbono, por ejemplo, propilid-2-inilo, n-butilid-1-inilo, y similares. Alquilidino es similar a alquilo, haciendo referencia a los mismos residuos que alquilo, pero teniendo dos puntos de unión y, específicamente, al menos una unidad de insaturaci�n de triple enlace.
Cualquiera de los radicales anteriores “alquileno”, “alquilideno” y “alquilidino”, cuando est�n opcionalmente sustituidos, pueden contener sustitución de alquilo que por s� misma puede contener una insaturaci�n. Por ejemplo, 65 2-(2-feniletinil-but-3-enil)-naftaleno (nombre IUPAC) contiene un radical n-butilid-3-inilo con un sustituyente vinilo en la posición 2 del radical. Combinaciones de alquilos y sustituciones que contienen carbono en éstos se limitan a
treinta átomos de carbono.
“Alcoxilo” se refiere al grupo -O-alquilo, en el que alquilo es tal como se define en el presente documento. Alcoxilo incluye, a modo de ejemplo, metoxilo, etoxilo, n-propoxilo, isopropoxilo, n-butoxilo, t-butoxilo, sec-butoxilo, n5 pentoxilo, ciclohexiloxilo, ciclohexeniloxilo, ciclopropilmetiloxilo, y similares.
“Haloalquiloxilo” se refiere al grupo -O-alquilo, en el que el alquilo es tal como se define en el presente documento, y además, alquilo est� sustituido con uno o más halógenos. A modo de ejemplo, un grupo “haloalquiloxilo C1-3” incluye -OCF3, -OCF2H, -OCHF2, -OCH2CH2Br, -OCH2CH2CH2I, -OC(CH3)2Br, -OCH2Cl y similares.
10 “Acilo” se refiere a los grupos -C(O)H, -C(O)alquilo, -C(O)arilo y -C(O)heterociclilo.
“α-Amino�cidos” se refiere a α-amino�cidos que se producen de manera natural y comercialmente disponibles y a isómeros ópticos de los mismos. α-Amino�cidos naturales y comercialmente disponibles t�picos son glicina, alanina,
15 serina, homoserina, treonina, valina, norvalina, leucina, isoleucina, norleucina, ácido asp�rtico, ácido glut�mico, lisina, ornitina, histidina, arginina, ciste�na, homociste�na, metionina, fenilalanina, homofenilalanina, fenilglicina, ortotirosina, meta-tirosina, para-tirosina, tript�fano, glutamina, asparagina, prolina e hidroxiprolina. Una “cadena lateral de un α-amino�cido” se refiere al radical encontrado en el carbono αXde un α-amino�cido tal como se definió anteriormente, por ejemplo, hidrógeno (para glicina), metilo (para alanina), bencilo (para fenilalanina), etc.
20 “Amino” se refiere al grupo -NH2.
“Amida” se refiere al grupo -C(O)NH2 o -N(H)acilo.
25 “Arilo” (en ocasiones denominado “Ar”) se refiere a un grupo carboc�clico monovalente aromático de, a menos que se especifique lo contrario, desde 6 hasta 15 átomos de carbono que tiene un único anillo (por ejemplo, fenilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, naftilo o antrilo), anillos condensados que pueden ser o pueden no ser aromáticos (por ejemplo, 2-benzoxazolinona, 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-on-7-ilo, 9,10-dihidrofenantrenilo, indanilo, tetralinilo, y fluorenilo y similares), siempre que el punto de unión sea a través de un átomo de una parte aromática
30 del grupo arilo y la parte aromática en el punto de unión contenga solo carbonos en el anillo aromático. Si cualquier parte del anillo aromático contiene un hetero�tomo, el grupo es un heteroarilo y no un arilo. Los grupos arilo son monoc�clicos, bic�clicos, tric�clicos o tetrac�clicos.
“Arileno” se refiere a un arilo que tiene al menos dos grupos unidos al mismo. Para un ejemplo más específico,
35 “fenileno” se refiere a un radical divalente de anillo de fenilo. Un fenileno, por tanto puede tener más de dos grupos unidos, pero se define por un mínimo de dos grupos no hidrógeno unidos al mismo.
“Arilalquilo” se refiere a un residuo en el que un resto arilo est� unido a una estructura original por medio de uno de un radical alquileno, alquilideno o alquilidino. Los ejemplos incluyen bencilo, fenetilo, fenilvinilo, fenilalilo y similares.
40 Cuando se especifica como “opcionalmente sustituido”, tanto el arilo, como la parte alquileno, alquilideno o alquilidino correspondiente de un grupo arilalquilo puede estar opcionalmente sustituida. A modo de ejemplo, “arilalquilo C7-11” se refiere a un arilalquilo limitado a un total de once carbonos, por ejemplo, un feniletilo, un fenilvinilo, un fenilpentilo y un naftilmetilo son todos ejemplos de un grupo “arilalquilo C7-11”.
45 “Ariloxilo” se refiere al grupo -O-arilo, en el que arilo es tal como se define en el presente documento, incluyendo, a modo de ejemplo, fenoxilo, naftoxilo, y similares.
“Carboxilo”, “carboxi” o “carboxilato” se refiere a -CO2H o sales del mismo.
50 “éster carbox�lico” o “carboxi éster” o “éster” se refiere al grupo -CO2alquilo, -CO2arilo o -CO2heterociclilo.
“Carbonato” se refiere al grupo -OCO2alquilo, -OCO2arilo o -OCO2heterociclilo.
“Carbamato” se refiere al grupo -OC(O)NH2, -N(H)carboxilo o éster -N(H)carbox�lico.
55 “Ciano” o “nitrilo” se refiere al grupo -CN.
“Formilo” se refiere al grupo acilo específico -C(O)H.
60 “Halo” o “halógeno” se refiere a fluoro, cloro, bromo y yodo.
“Haloalquilo” y “haloarilo” se refieren de manera genérica a radicales alquilo y arilo que est�n sustituidos con uno o más halógenos, respectivamente. A modo de ejemplo “dihaloarilo”, “dihaloalquilo”, “trihaloarilo” etc. se refieren a arilo y alquilo sustituidos con una pluralidad de halógenos, pero no necesariamente una pluralidad del mismo halógeno;
65 por tanto 4-cloro-3-fluorofenilo es un grupo dihaloarilo.
“Heteroalquilo” se refiere a un alquilo en el que uno o más, pero no todos los carbonos est�n sustituidos por un hetero�tomo. Un grupo heteroalquilo tiene geometría o bien lineal o bien ramificada. A modo de ejemplo, un “heteroalquilo de 2-6 miembros” es un grupo que puede contener no más de 5 átomos de carbono, debido a que al menos uno de los 6 átomos máximos debe ser un hetero�tomo, y el grupo es lineal o ramificado. Además, para los
5 fines de esta invención, un grupo heteroalquilo siempre comienza con un átomo de carbono, es decir, aunque un heteroalquilo pueda contener uno o más hetero�tomos, el punto de unión de la molécula original no es un hetero�tomo. Un grupo heteroalquilo de 2-6 miembros incluye, por ejemplo, -CH2XCH3, -CH2CH2XCH3, -CH2CH2XCH2CH3, -C(CH2)2XCH2CH3 y similares, en los que X es O, NH, N-alquilo C1-6 y S(O)0-2, por ejemplo.
“Perhalo” como modificador significa que el grupo as� modificado tiene todos sus hidrógenos disponibles sustituidos con halógenos. Un ejemplo sería “perhaloalquilo”. Los perhaloalquilos incluyen -CF3, -CF2CF3, percloroetilo y similares.
“Hidroxi” o “hidroxilo” se refiere al grupo -OH.
15 “Hetero�tomo” se refiere a O, S, N o P.
“Heterociclilo” en el sentido más amplio incluye sistemas de anillos aromáticos y no aromáticos y más específicamente se refiere a un radical de anillo de tres a quince miembros estable que consiste en átomos de carbono y desde uno a cinco hetero�tomos. Para los fines de esta invención, el radical heterociclilo puede ser un sistema de anillos monoc�clico, bic�clico o tric�clico, que puede incluir sistemas de anillos condensados o con puente as� como sistemas espiroc�clicos; y los átomos de nitrógeno, fosforo, carbono o azufre en el radical heterociclilo pueden estar opcionalmente oxidados hasta diversos estados de oxidación. En un ejemplo específico, el grupo -S(O)0-2-, se refiere a uniones -S- (sulfuro), -S(O)- (sulf�xido) y -SO2- (sulfona). Por conveniencia, nitr�genos, 25 particularmente pero no exclusivamente, los definidos como nitr�genos aromáticos anulares, se pretende que incluyan su forma de N-óxido correspondiente, aunque no se define explícitamente como tal en un ejemplo particular. Por tanto, para un compuesto que tiene, por ejemplo, un anillo de piridilo; se pretende que el piridil-N�xido correspondiente se incluya en los compuestos dados a conocer en el presente documento. Además, los átomos de nitrógeno anulares pueden estar opcionalmente cuaternizados. “Heterociclo” incluye heteroarilo y heteroaliciclilo, es decir un anillo heteroc�clico puede estar parcial o completamente saturado o ser aromático. Por tanto un término tal como “heterociclilalquilo” incluye heteroaliciclilalquilos y heteroarilalquilos. Los ejemplos de radicales heterociclilo incluyen, pero no se limitan a, azetidinilo, acridinilo, benzodioxolilo, benzodioxanilo, benzofuranilo, carbazoilo, cinolinilo, dioxolanilo, indolizinilo, naftiridinilo, perhidroazepinilo, fenazinilo, fenotiazinilo, fenoxazinilo, ftalazinilo, pteridinilo, purinilo, quinazolinilo, quinoxalinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, tetrazoilo,
35 tetrahidroisoquinolilo, piperidinilo, piperazinilo, 2-oxopiperazinilo, 2-oxopiperidinilo, 2-oxopirrolidinilo, 2-oxoazepinilo, azepinilo, pirrolilo, 4-piperidonilo, pirrolidinilo, pirazolilo, pirazolidinilo, imidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, dihidropiridinilo, tetrahidropiridinilo, piridinilo, pirazinilo, pirimidinilo, piridazinilo, oxazolilo, oxazolinilo, oxazolidinilo, triazolilo, isoxazolilo, isoxazolidinilo, morfolinilo, tiazolilo, tiazolinilo, tiazolidinilo, isotiazolilo, quinuclidinilo, isotiazolidinilo, indolilo, isoindolilo, indolinilo, isoindolinilo, octahidroindolilo, octahidroisoindolilo, quinolilo, isoquinolilo, decahidroisoquinolilo, bencimidazolilo, tiadiazolilo, benzopiranilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, furilo, diazabicicloheptano, diazapano, diazepina, tetrahidrofurilo, tetrahidropiranilo, tienilo, benzotieliilo, tiamorfolinilo, sulf�xido de tiamorfolinilo, sulfona de tiamorfolinilo, dioxafosfolanilo y oxadiazolilo.
“Heteroarilo” se refiere a un grupo aromático que tiene desde 1 hasta 10 átomos de carbono anulares y de 1 a 4
45 hetero�tomos anulares. Los grupos heteroarilo tienen al menos un componente de anillo aromático, pero los heteroarilos pueden estar completamente insaturados o parcialmente insaturados. Si cualquier anillo aromático en el grupo tiene un hetero�tomo, entonces el grupo es un heteroarilo, incluso, por ejemplo, si otros anillos aromáticos en el grupo no tienen hetero�tomos. Por ejemplo, 2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4H)-on-7-ilo, indolilo y bencimidazolilo son “heteroarilos”. Los grupos heteroarilo pueden tener un único anillo (por ejemplo, piridinilo, imidazolilo o furilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, indolizinilo, quinolinilo, bencimidazolilo o benzotienilo), en el que los anillos condensados pueden o pueden no ser aromáticos y/o contener un hetero�tomo, siempre que el punto de unión a la molécula original sea a través de un átomo de la parte aromática del grupo heteroarilo. En una realización, el/los átomo(s) de anillo de nitrógeno y/o azufre del grupo heteroarilo est�n opcionalmente oxidados para proporcionar los restos N-óxido (N-O), sulfinilo o sulfonilo. Los compuestos descritos en el presente documento que
55 contienen fósforo, en un anillo heteroc�clico o no, incluyen las formas oxidadas de fósforo. Los grupos heteroarilo son monoc�clicos, bic�clicos, tric�clicos o tetrac�clicos.
“Heteroariloxilo” se refiere a -O-heteroarilo.
“Heteroarileno” de manera genérica se refiere a cualquier heteroarilo que tiene al menos dos grupos unidos al mismo. Para un ejemplo más específico, “piridileno” se refiere a un radical divalente de anillo de piridilo. Un piridileno, por tanto puede tener más de dos grupos unidos, pero se define mediante un mínimo de dos grupos no hidrógeno unidos al mismo.
65 “Heteroalic�clico” se refiere específicamente a un radical heterociclilo no aromático. Un heteroalic�clico puede contener insaturaci�n, pero no es aromático. Tal como se menciona, arilos y heteroarilos se unen a la estructura original por medio de un anillo aromático. As�, por ejemplo, 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-on-4-ilo es un heteroalic�clico, mientras que 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-on-7-ilo es un arilo. En otro ejemplo, 2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4H)-on-4ilo es un heteroalic�clico, mientras que 2H-pirido[3,2-b][1,4]oxazin-3(4H)-on-7-ilo es un heteroarilo.
“Heterociclilalquilo” se refiere a un grupo heterociclilo unido a la estructura original por medio de por ejemplo un ligador alquileno, por ejemplo (tetrahidrofurano-3-il)metil- o (piridin-4-il)metil-
10 “Heterocicliloxilo” se refiere al grupo -O-heterociclilo.
“Nitro” se refiere al grupo -NO2.
“Oxo” se refiere a un radical de oxígeno y doble enlace, =O.
15 “Oxi” se refiere un radical -Oí radical (también designado - O), es decir, un radical de oxígeno y enlace sencillo. A modo de ejemplo, los N-óxidos son nitr�genos que portan un radical oxi.
Cuando se indica que un grupo con su estructura de enlace est� unida a dos parejas; es decir, un radical divalente,
20 por ejemplo, -OCH2-, entonces se entiende que cualquiera de las dos parejas puede unirse al grupo particular en un extremo, y la otra pareja se une necesariamente al otro extremo del grupo divalente, a menos que se indique explícitamente lo contrario. Dicho de otra manera, no debe considerarse que los radicales divalentes se limitan a la orientación representada, por ejemplo “-OCH2-” pretende significar no solo “-OCH2-” tal como se dibuja, sino también“-CH2O-”.
25 “Opcional” u “opcionalmente” significa que el acontecimiento o circunstancia descrito a continuación puede o puede no producirse, y que la descripción incluye ejemplos en los que dicho acontecimiento o circunstancia se produce y ejemplos en los que no. Un experto habitual en la técnica entender� que, con respecto a cualquier molécula descrita como que contiene uno o más sustituyentes opcionales, sólo se pretende incluir compuestos factibles
30 sintéticamente. “Opcionalmente sustituido” se refiere a todos los modificadores posteriores en un término, por ejemplo en el término “arilalquilo C1-8 opcionalmente sustituido”, la sustitución opcional puede producirse tanto en la parte “alquilo C1-8” como en la parte “arilo” del grupo arilalquilo C1-8. También a modo de ejemplo, alquilo opcionalmente sustituido incluye grupos cicloalquilo opcionalmente sustituidos. El término “sustituido”, cuando se usa para modificar un grupo o radical especificado, significa que uno o más átomos de hidrógeno del grupo o radical
35 especificado est�n sustituidos cada uno, independientemente entre s�, por los mismos o diferentes grupos de sustituyente tal como se definió anteriormente. Por tanto, cuando un grupo se define como “opcionalmente sustituido” la definición pretende abarcar cuando los grupos est�n sustituidos con uno o más de los radicales definidos a continuación, y cuando no est�n sustituidos de esta manera.
40 Grupos de sustituyentes para sustituir uno o más hidrógenos (pueden sustituirse dos hidrógenos cualquiera en un único carbono por =O, =NR70, =N-OR70, =N2 o =S) en átomos de carbono saturados en el grupo o radical especificado son, a menos que se especifique lo contrario, -R60, halo, =O, -OR70, -SR70, -N(R80)2, perhaloalquilo, -CN, -OCN, -SCN, -NO, NO2, =N2, -N3, -SO2R70, -SO3-M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3-M+, -OSO3R70, -P(O)(O-)2(M+)2, -P(O)(O-)2M2+, -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2-M+, -CO2R70, -C(S)OR70,
-
M+
45 -C(O)N(R80)2, -C(NR70)(R80)2, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 , -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70,
-
M+
-
NR70C(S)R70, -NR70CO2 , -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)N(R80)2, -NR70C(NR70)R70 y -NR70C(NR70)N(R80)2, en los que R60 es alquilo C1-6, heterociclilo de 3 a 10 miembros, heterociclilalquilo C1-6 de 3 a 10 miembros, arilo C6-10 o aril C6-10-alquilo C1-6; cada R70 es independientemente para cada aparición hidrógeno o R60; cada R80 es independientemente para cada aparición R70 o alternativamente, dos R80, tomados juntos con el 50 átomo de nitrógeno al que est�n unidos, forman un heteroaliciclilo de 3 a 7 miembros que opcionalmente incluye desde 1 hasta 4 de los mismos o diferentes hetero�tomos adicionales seleccionados de O, N y S, de los que N opcionalmente tiene sustitución de H o alquilo C1-C3; y cada M+ es un contraion con una carga positiva individual neta. Cada M+ es independientemente para cada aparición, por ejemplo, un ion alcalino, tal como K+, Na+, Li+; un ion amonio, tal como +N(R60)4; o un ion alcalinot�rreo, tal como [Ca2+]0,5, [Mg2+]0,5 o [Ba2+]0,5 (un “subíndice de 0,5 55 significa por ejemplo que uno de los contraiones para tales iones alcalinot�rreos divalentes puede ser una forma ionizada de un compuesto de la invención y el otro un contraion t�pico tal como cloruro, o dos compuestos ionizados pueden servir como contraiones para tales iones alcalinot�rreos divalentes, o un compuesto doblemente ionizado puede servir como el contraion para tales iones divalentes alcalinot�rreos). Como ejemplos específicos, se pretende que -N(R80)2 incluya NH2, NH-alquilo, -NH-pirrolidin-3-ilo, N-pirrolidinilo, N-piperazinilo, 4N-metil-piperazin-1-ilo, N
60 morfolinilo y similares.
Grupos de sustituyentes para sustituir hidrógenos en átomos de carbono insaturados en grupos que contienen carbonos insaturados son, a menos que se especifique lo contrario, -R60, halo, -O -M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -N(R80)2, perhaloalquilo, -CN, -OCN, -SCN, -NO, -NO2, -N3, -SO2R70, -SO3-M+, -SO3R70, -OSO2R70, -OSO3-M+, -OSO3R70,
-
2M2+
-
PO3-2(M+)2, -PO3 , -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)2, -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2-M+, -CO2R70,
-
M+
-
C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)N(R80)2, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2 , -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2-M+, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)N(R80)2, -NR70C(NR70)R70 y 5 -NR70C(NR70)N(R80)2, en los que R60, R70, R80 y M+ son tal como se definieron previamente, siempre que en caso de alqueno o alquino sustituido, los sustituyentes no sean -O -M+, -OR70, -SR70 o -S-M+.
Grupos de sustituyentes para sustituir hidrógenos en átomos de nitrógeno en grupos que contienen tales átomos de nitrógeno son, a menos que se especifique lo contrario, -R60, -O-M+, -OR70, -SR70, -S-M+, -N(R80)2, perhaloalquilo,
2-M2+
10 -CN, -NO, -NO2, -S(O)2R70, -SO3-M+, -SO3R70, -OS(O)2R70, -OSO3-M+, -OSO3R70, -PO32-(M+)2, -PO3 , -P(O)(OR70)O-M+, -P(O)(OR70)(OR70), -C(O)R70, -C(S)R70, -C(NR70)R70, -CO2R70, -C(S)OR70, -C(O)NR80R80, -C(NR70)NR80R80, -OC(O)R70, -OC(S)R70, -OCO2R70, -OC(S)OR70, -NR70C(O)R70, -NR70C(S)R70, -NR70CO2R70, -NR70C(S)OR70, -NR70C(O)N(R80)2, -NR70C(NR70)R70 y NR70C(NR70)N(R80)2, en los que R60, R70, R80 y M+ son tal como se definieron previamente.
15 En una realización, un grupo que est� sustituido tiene 1, 2, 3 � 4 sustituyentes, 1, 2 � 3 sustituyentes, 1 � 2 sustituyentes o 1 sustituyente.
Se entiende que en todos los grupos sustituidos, no se pretende que los pol�meros a los que se llega definiendo
20 sustituyentes con sustituyentes adicionales a los mismos (por ejemplo, arilo sustituido que tiene un grupo arilo sustituido como sustituyente que a su vez est� sustituido con un grupo arilo sustituido, que además est� sustituido con un grupo arilo sustituido, etc.) se incluyan en el presente documento. En tal caso en el que el lenguaje permita tales sustituciones múltiples, el número máximo de tales iteraciones de sustitución es tres.
25 “Sulfonamida” se refiere al grupo -SO2NH2, -N(H)SO2H, -N(H)SO2alquilo, -N(H)SO2arilo o -N(H)SO2heterociclilo.
“Sulfonilo” se refiere al grupo -SO2H, -SO2alquilo, -SO2arilo o -SO2heterociclilo.
“Sulfanilo” se refiere al grupo: -SH, -S-alquilo, -S-arilo o -S-heterociclilo.
30 “Sulfinilo” se refiere al grupo: -S(O)H, -S(O)alquilo, -S(O)arilo o -S(O)heterociclilo.
“Grupo saliente adecuado” se define como el término entendido por un experto habitual en la técnica; es decir, un grupo en un carbono, en el que tras reacción, se forma un nuevo enlace, el carbono pierde el grupo tras la formación
35 del nuevo enlace. Un ejemplo t�pico que emplea un grupo saliente adecuado es una reacción de sustitución nucle�fila, por ejemplo, en un carbono hibridado sp3 (SN2 o SN1), por ejemplo en el que el grupo saliente es un haluro, tal como un bromuro, el reactante puede ser bromuro de bencilo. Otro ejemplo t�pico de una reacción de este tipo es una reacción de sustitución aromática nucle�fila (SNAr). Otro ejemplo es una reacción de inserción (por ejemplo mediante un metal de transición) en el enlace entre una pareja de reacción aromática que porta un grupo
40 saliente seguido por acoplamiento reductor. “Grupo saliente adecuado” no se limita a tales restricciones mecanicistas. Los ejemplos de grupos salientes adecuados incluyen halógenos, arilo opcionalmente sustituido o alquilsulfonatos, fosfonatos, azidas y -S(O)0-2R en el que R es, por ejemplo alquilo opcionalmente sustituido, arilo opcionalmente sustituido o heteroarilo opcionalmente sustituido. Los expertos en la técnica de síntesis orgánica identificarán fácilmente grupos salientes adecuados para realizar una reacción deseada en una reacción diferente.
45 “Estereois�mero” y “estereois�meros” se refieren a compuestos que tienen la misma conectividad atómica pero diferente disposición atómica en el espacio. Los estereois�meros incluyen isómeros cis-trans, isómeros E y Z, enanti�meros y diastere�meros. Los compuestos de la invención, o sus sales farmac�uticamente aceptables pueden contener uno o más centros asimétricos y por tanto pueden dar lugar a enanti�meros, diastere�meros y otras formas
50 estereoisom�ricas que pueden definirse, en términos de estereoqu�mica absoluta, como (R)- o (S)- o, como (D)-o (L)- para amino�cidos. La presente invención pretende incluir todos los isómeros posibles, as� como sus formas rac�micas y �pticamente puras. Pueden prepararse isómeros �pticamente activos (+) y (-), (R)- y (S)- o (D)- y (L)- usando sintones quirales, reactivos quirales o resolverse usando técnicas convencionales, tales como mediante: formación de sales o complejos diaestereoisom�ricos que pueden separarse, por ejemplo, mediante cristalización;
55 por medio de formación de derivados diaestereoisom�ricos que pueden separarse, por ejemplo, mediante cristalización, reacción selectiva de un enanti�mero con un reactivo específico del enanti�mero, por ejemplo oxidación o reducción enzim�tica, seguido por separación de los enanti�meros modificados o no modificados; o cromatograf�a de gas-líquido o de líquidos en un entorno quiral, por ejemplo un soporte quiral, tal como sílice con un ligando quiral unido o en presencia de un disolvente quiral. Se apreciar� que cuando se convierte un enanti�mero
60 deseado en otra entidad química mediante uno de los procedimientos de separación descritos anteriormente, puede requerirse una etapa adicional para liberar la forma enantiom�rica deseada. Alternativamente, puede sintetizarse un enanti�mero específico mediante síntesis asimétrica usando reactivos, sustratos, catalizadores o disolventes �pticamente activos, o convirtiendo un enanti�mero en el otro mediante transformación asimétrica. Para una mezcla de enanti�meros, enriquecidos en un enanti�mero particular, el enanti�mero componente principal puede
65 enriquecerse adicionalmente (con pérdida concomitante del rendimiento) mediante recristalizaci�n.
Cuando los compuestos descritos en el presente documento contienen dobles enlaces olef�nicos u otros centros de asimetría geométrica, y a menos que se especifique lo contrario, se pretende que los compuestos incluyan isómeros geométricos tanto E como Z.
5 “Taut�mero” se refiere a formas alternativas de una molécula que difieren sólo en la unión electrónica de átomos y/o en la posición de un protón, tal como taut�meros enol-ceto e imina-enamina, o las formas tautom�ricas de grupos heteroarilo que contienen una disposición de átomos de anillo -N=C(H)-NH-, tal como pirazoles, imidazoles, bencimidazoles, triazoles y tetrazoles. Un experto habitual en la técnica reconocer� que otras disposiciones de átomo de anillo tautom�ricas son posibles y se contemplan en el presente documento.
“Para”, para los fines de esta invención se refiere a la posición de un sustituyente en un fenilo o un anillo de heteroarilo de seis miembros en relación con otro sustituyente en el anillo; siendo la posición relativa sustitución 1,4. Es decir, empezando desde un sustituyente que est� unido a un primer átomo del anillo de seis miembros y, contando átomos incluyendo en primer átomo, otro sustituyente est� en el átomo 4 del anillo de seis miembros, la
15 orientación relativa de los sustituyentes alrededor del anillo de seis miembros es “para”. Por ejemplo el compuesto L, representado a continuación, tiene un grupo metilo “para” con respecto al N2 de la pirimidindiamina; el compuesto M también tiene un grupo metilo “para”.
“Paciente” o “sujeto” se refiere a mamíferos y otros animales, particularmente seres humanos. Por tanto los métodos pueden aplicarse tanto en terapia humana como en aplicaciones veterinarias. En una realización el paciente o sujeto es un mamífero. En otra realización el paciente o sujeto es un ser humano.
25 “Sal farmac�uticamente aceptable” se refiere a sales farmac�uticamente aceptables de un compuesto, sales que se derivan de una variedad de contraiones orgánicos e inorgánicos bien conocidos en la técnica e incluyen, a modo de ejemplo sólo, sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetraalquilamonio, y similares; y cuando la molécula contiene una funcionalidad básica, sales de ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como clorhidrato, bromhidrato, tartrato, mesilato, acetato, maleato, oxalato, y similares. Sales de adición de ácido farmac�uticamente aceptables son las sales que mantienen la eficacia biológica de las bases libres mientras est�n formadas por parejas de ácido que no son indeseables biol�gicamente o de otra manera, por ejemplo, ácidos inorgánicos tales como ácido clorhídrico, ácido bromh�drico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosf�rico, y similares, as� como ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido trifluoroac�tico, ácido propi�nico, ácido glic�lico, ácido pir�vico, ácido ox�lico, ácido maleico, ácido mal�nico, ácido succ�nico, ácido fum�rico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido cin�mico, ácido
35 mand�lico, ácido metanosulf�nico, ácido etanosulf�nico, ácido p-toluenosulf�nico, ácido salicílico y similares. Sales de adición de base farmac�uticamente aceptables incluyen las derivadas de bases inorgánicas tales como sales de sodio, potasio, litio, amonio, calcio, magnesio, hierro, zinc, cobre, manganeso, aluminio y similares. Sales a modo de ejemplo son las sales de amonio, potasio, sodio, calcio y magnesio. Las sales derivadas de bases no tóxicas orgánicas farmac�uticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales de aminas primarias, secundarias y terciarias, aminas sustituidas incluyendo aminas sustituidas que se producen de manera natural, aminas cíclicas y resinas de intercambio iónico básicas, tales como isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina, tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, diciclohexilamina, lisina, arginina, histidina, cafeína, proca�na, hidrabamina, colina, beta�na, etilendiamina, glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina, resinas de poliamina, y similares. Bases orgánicas a modo de ejemplo son
45 isopropilamina, dietilamina, etanolamina, trimetilamina, diciclohexilamina, colina y cafeína. (Véase, por ejemplo, S.
M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts”, J. Pharm. Sci., 1977; 66:1-19 que se incorpora en el presente documento como referencia).
“Cantidad farmac�uticamente eficaz” y “cantidad terapéuticamente eficaz” se refieren a una cantidad de un compuesto suficiente para tratar un trastorno o enfermedad especificados o uno o más de sus síntomas y/o para prevenir la aparición de la enfermedad o trastorno. La cantidad de un compuesto que constituye una “cantidad terapéuticamente eficaz” variar� dependiendo del compuesto, el estado patológico y su gravedad, la edad del paciente que va a tratarse, y similares. La cantidad terapéuticamente eficaz puede determinarse de manera rutinaria por un experto habitual en la técnica.
55 “Prof�rmaco” se refiere a compuestos que se transforman in vivo para proporcionar el compuesto original, por ejemplo, mediante hidrólisis en el intestino o conversión enzim�tica en la sangre. Los ejemplos comunes incluyen, pero no se limitan a, formas de éster y amida de un compuesto que tiene una forma activa que porta un resto de ácido carbox�lico. Los ejemplos de ésteres farmac�uticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, ésteres de alquilo (por ejemplo con entre aproximadamente uno y aproximadamente seis carbonos) en los que el grupo alquilo es una cadena lineal o ramificada. Los ésteres aceptables también incluyen ésteres de cicloalquilo y ésteres de arilalquilo tales como, pero sin limitarse a bencilo. Los ejemplos de amidas farmac�uticamente aceptables de los compuestos de esta invención incluyen, pero no se limitan a, amidas primarias y alquilamidas secundarias y terciarias (por ejemplo con entre aproximadamente uno y aproximadamente seis carbonos). Las amidas y los ésteres de los compuestos de la presente invención pueden prepararse según
5 métodos convencionales. Se proporciona una discusión meticulosa de prof�rmacos en T. Higuchi y V. Stella, “Prodrugs as Novel Delivery Systems”, vol. 14 de la A.C.S. Symposium Series, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, incorporándose ambos en el presente documento como referencia para todos los fines.
“Metabolito” se refiere al producto de descomposición o final de un compuesto o su sal producido mediante metabolismo o biotransformaci�n en el cuerpo animal o humano; por ejemplo, biotransformaci�n en una molécula más polar tal como mediante oxidación, reducción o hidrólisis, o en un conjugado (véase Goodman y Gilman, “The Pharmacological Basis of Therapeutics” 8� ed., Pergamon Press, Gilman et al. (eds.), 1990 que se incorpora en el presente documento como referencia). El metabolito de un compuesto descrito en el presente documento o su sal 15 pueden a su vez ser un compuesto biol�gicamente activo en el cuerpo. Aunque un prof�rmaco descrito en el presente documento cumpliría este criterio, es decir, forma un compuesto original biol�gicamente activo descrito in vivo, se pretende que “metabolito” abarque los compuestos que no se contempla que han perdido un progrupo, sino más bien todos los otros compuestos que se forman in vivo tras la administración de un compuesto de la invención que mantiene las actividades biológicas descritas en el presente documento. Por tanto un aspecto da a conocer compuestos de 2,4-pirimidindiamina que se contempla específicamente en el presente documento que son un metabolito de un compuesto descrito en el presente documento. Por ejemplo, un metabolito biol�gicamente activo se descubre de manera fortuita, es decir, no se realizó el diseño de un prof�rmaco per se. Dicho de otra manera, los compuestos biol�gicamente activos formados de manera inherente como resultado de poner en práctica los métodos de la invención, se contemplan y se dan a conocer en el presente documento. “Solvato” se refiere a un complejo
25 formado mediante combinación de moléculas de disolvente con moléculas o iones del soluto. El disolvente puede ser un compuesto orgánico, un compuesto inorgánico, o una mezcla de ambos. Algunos ejemplos de disolventes incluyen, pero no se limitan a, metanol, N,N-dimetilformamida, tetrahidrofurano, dimetilsulf�xido y agua. Los compuestos descritos en el presente documento pueden existir en formas no solvatadas as� como solvatadas con disolventes, farmac�uticamente aceptables o no, tales como agua, etanol, y similares. Las formas solvatadas de los compuestos dados a conocer en el presente documento se contemplan en el presente documento y se abarcan por la invención, al menos en términos generales.
“Tratar” o “tratamiento” tal como se usa el presente documento cubre el tratamiento de la enfermedad o el estado de interés en un mamífero, preferiblemente un ser humano, que tiene la enfermedad o el estado de interés, e incluye:
(i)
prevenir que se produzca la enfermedad o el estado en un mamífero, en particular, cuando tal mamífero est� predispuesto al estado pero todavía no se ha diagnosticado que lo tiene;
(ii)
inhibir la enfermedad o el estado, por ejemplo, deteniendo o ralentizando su desarrollo;
(iii) mitigar la enfermedad o el estado, por ejemplo, provocando regresión de la enfermedad o el estado o un síntoma de los mismos; o
(iv) estabilizar la enfermedad o el estado.
45 Tal como se usan en el presente documento, los términos “enfermedad” y “estado” pueden usarse de manera intercambiable o pueden ser diferentes en que la enfermedad o estado particular puede no tener un agente causal conocido (de modo que la etiolog�a todavía no se ha descubierto) y por tanto no se ha reconocido aún como una enfermedad pero sólo como un estado o síndrome no deseado, en el que los m�dicos han identificado un conjunto de síntomas más o menos específicos.
De manera similar, se entiende que las definiciones anteriores no pretenden incluir patrones de sustitución impermisibles (por ejemplo, metilo sustituido con 5 grupos fluoro). Un experto en la técnica reconoce fácilmente tales patrones de sustitución impermisibles.
55 COMPUESTO Y COMPOSICIONES
En el presente documento se da a conocer el compuesto de 2,4-pirimidindiamina novedoso, N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina, prof�rmacos del compuesto, métodos de preparación del compuesto y métodos de uso del compuesto en el tratamiento de estados en los que la selección como diana de la ruta o la modulación de JAK, incluyendo inhibición, de cinasas JAK, particularmente JAK3, son terapéuticamente útiles. Estos estados incluyen, pero no se limitan a, leucemia, linfoma, rechazo de trasplante (por ejemplo, rechazo de trasplante de islotes de páncreas, rechazo de trasplante de corazón, rechazo de trasplante de ri��n, rechazo de trasplante de hígado, rechazo de trasplante de pulmón), aplicaciones de trasplante de médula 65 ósea (por ejemplo, enfermedad injerto contra huésped), enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, diabetes), e inflamación (por ejemplo, asma, reacciones alérgicas, trastornos oculares). Dada la gravedad y prevalencia de estas
enfermedades y estados, se necesitan nuevas terapias.
Compuesto
5 El compuesto, y sales del mismo, descrito en el presente documento es una pirimidin-2,4-diamina, sustituida en la posición 5; sustituida en la amina 2 con un grupo aromático sustituido; y sustituida en la amina 4 con una benzo[d]oxazol-2(3H)-ona.
Tambi�n se da a conocer en el presente documento el compuesto de 2,4-pirimidindiamina en forma de un
10 prof�rmaco, as� como las sales, hidratos, solvatos y N-óxidos, del mismo. Una realización es una forma de sal farmac�uticamente aceptable del compuesto. Las sales farmac�uticamente aceptables de la presente invención pueden formarse por medios convencionales, tales como haciendo reaccionar la forma de base libre del producto con uno o más equivalentes del ácido apropiado en un disolvente o medio en el que la sal es insoluble o en un disolvente tal como agua que se elimina a vacío, mediante liofilización o intercambiando los aniones de una sal
15 existente por otro ani�n en una resina de intercambio iónico adecuada. La presente invención incluye dentro de su alcance solvatos del compuesto de 2,4-pirimidindiamina y sales e hidratos del mismo, por ejemplo, una sal de formiato hidratada.
Tal como reconocer� un experto habitual en la técnica, las presentes fórmulas incluyen otras formas de sal además
20 de las descritas específicamente en el presente documento. De manera similar, un experto habitual en la técnica entender� que las fórmulas descritas en el presente documento abarcan solvatos, tales como hidratos.
Tabla I
Comp.
X Y Z1 R5 R2a R2b R2c R2d
I-365
O NH CH CH3 CH3 CH3 CH3 H
Prof�rmacos
25 Los expertos en la técnica apreciarán que el compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento puede enmascararse con progrupos para crear prof�rmacos. Tales prof�rmacos habitualmente son, pero no necesariamente, farmacol�gicamente inactivos hasta que se convierten en su forma farmacéutica activa.
30 El mecanismo mediante el cual el/los progrupo(s) se matabolizan no es crítico y puede provocarse, por ejemplo, mediante hidrólisis en las condiciones ácidas del estómago, tal como se describió anteriormente, y/o mediante enzimas presentes en el tracto digestivo y/o tejidos u órganos del cuerpo. De hecho, el/los progrupo(s) pueden seleccionarse para que se metabolicen en un sitio particular en el interior del cuerpo. Por ejemplo, muchos ésteres se escinden en las condiciones ácidas encontradas en el estómago. Los prof�rmacos que est�n diseñados para
35 escindirse químicamente en el estómago para dar la 2,4-pirimidindiamina activa pueden emplear progrupos que incluyen tales ésteres. Alternativamente, los progrupos pueden diseñarse para metabolizarse en presencia de enzimas tales como esterasas, amidasas, lipolasas y fosfatasas, incluyendo ATPasas y cinasa, etc. Los progrupos que incluyen uniones que pueden metabolizarse in vivo se conocen bien e incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, �teres, tio�teres, silil�teres, sililtio�teres, ésteres, tio�steres, carbonatos, tiocarbonatos, carbamatos,
40 tiocarbamatos, ureas, tioureas y carboxamidas. En algunos casos, puede seleccionarse un grupo “precursor” que se oxida mediante enzimas oxidativas tales como, por ejemplo, citocromo P450 del hígado, para dar un grupo que puede metabolizarse.
En los prof�rmacos, cualquier resto funcional disponible puede enmascararse con un progrupo para proporcionar un
45 prof�rmaco. Los grupos funcionales dentro del compuesto de 2,4-pirimidindiamina que pueden enmascararse con progrupos para su inclusión en un prorresto incluyen, pero no se limitan a, aminas (secundarias). En la técnica se conoce una amplia variedad de progrupos, as� como los prorrestos resultantes, adecuados para enmascarar grupos funcionales en el compuesto de 2,4-pirimidindiamina activo para proporcionar prof�rmacos. Por ejemplo, puede enmascararse un grupo funcional hidroxilo como un prorresto sulfonato, éster o carbonato, que puede hidrolizarse in
50 vivo para proporcionar el grupo hidroxilo. Puede enmascararse un grupo funcional amino como un prorresto amida, carbamato, imina, urea, fosfenilo, fosforilo o sulfenilo, que puede hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo amino. Puede enmascararse un grupo carboxilo como un prorresto éster (incluyendo silil�steres y tio�steres), amida,
o hidrazida, que puede hidrolizarse in vivo para proporcionar el grupo carboxilo. Otros ejemplos específicos de progrupos adecuados y sus prorrestos respectivos resultarán evidentes para los expertos en la técnica. Todos estos
progrupos, solos o en combinaciones, pueden incluirse en los prof�rmacos.
Tal como se da a conocer en el presente documento, el/los progrupo(s) puede(n) unirse a cualquier amina secundaria disponible, incluyendo, por ejemplo, el átomo de nitrógeno N2 de la 2,4-pirimidindiamina, el átomo de 5 nitrógeno N4 de la 2,4-pirimidindiamina, y/o el átomo de nitrógeno secundario incluido en un sustituyente en la 2,4pirimidindiamina.
Tal como se indicó anteriormente, la identidad del progrupo no es crítica, siempre que pueda metabolizarse en las condiciones de uso deseadas, por ejemplo, en las condiciones ácidas encontradas en el estómago y/o mediante enzimas encontradas in vivo, para proporcionar un grupo biol�gicamente activo, por ejemplo, la 2,4-pirimidindiamina descrita en el presente documento. Por tanto, expertos en la técnica apreciarán que el progrupo puede incluir virtualmente cualquier grupo protector de hidroxilo, amina o tiol conocido o descubierto más tarde. Los ejemplos no limitativos de grupos protectores adecuados pueden encontrarse, por ejemplo, en Protective Groups in Organic Synthesis, Greene & Wuts, 2� ed., John Wiley & Sons, Nueva York, 1991 (especialmente las páginas 10-142
15 (alcoholes, 277-308 (tioles) y 309-405 (aminas) cuya descripción de incorpora en el presente documento como referencia, referida en el presente documento como “Green & Wuts”).
Un progrupo particularmente útil empleado en el compuesto dado a conocer es -CH2OP(OH)2 as� como ésteres, ésteres de ácido mixtos y sales del mismo. Tal como se da a conocer en el presente documento el progrupo -CH2OP(OH)2 puede estar unido por medio de un átomo de nitrógeno, anular o no, de la molécula original. Puede haber más de un progrupo de este tipo.
Tal como entender� un experto habitual en la técnica, determinados átomos aparecen en más de una forma isot�pica. Por ejemplo el hidrógeno aparece como protio (1H), deuterio (2H) y tritio (3H), y el carbono aparece de
25 manera natural como tres isótopos diferentes, 12C, 13C y 14C. Por tanto la fórmula dada a conocer en el presente documento incluye compuesto que tienen una o más formas isot�picas diferentes de determinados elementos, incluyendo hidrógeno y carbono. En una realización de la descripción, el compuesto dado a conocer en el presente documento se proporciona en una forma isot�picamente enriquecida. En ejemplos particulares, el compuesto est� enriquecido en deuterio en relación con protio.
El deuterio tiene una abundancia natural de aproximadamente el 0,015%. Por consiguiente, para aproximadamente cada 6.500 átomos de hidrógeno que se producen en la naturaleza, hay un átomo de deuterio. En el presente documento se da a conocer un compuesto enriquecido en deuterio en una o más posiciones. Por tanto, el compuesto que contiene deuterio de la descripción tiene deuterio en una o más posiciones (si puede ser el caso) en
35 una abundancia de más del 0,015%.
En una realización, el compuesto en una posición que se designa que tiene deuterio, tiene un factor de enriquecimiento isot�pico mínimo de al menos 2000 (incorporación de deuterio del 30%) en cada átomo designado como deuterio en el compuesto, o al menos 3000 (incorporación de deuterio del 45%).
En otras realizaciones, el compuesto tiene un factor de enriquecimiento isot�pico para cada átomo de deuterio designado de al menos 3500 (incorporación de deuterio del 52,5% en cada átomo de deuterio designado), al menos 4000 (incorporación de deuterio del 60%), al menos 4500 (incorporación de deuterio del 67,5%), al menos 5000 (incorporación de deuterio del 75%), al menos 5500 (incorporación de deuterio del 82,5%), al menos 6000
45 (incorporación de deuterio del 90%), al menos 6333,3 (incorporación de deuterio del 95%), al menos 6466,7 (incorporación de deuterio del 97%), al menos 6600 (incorporación de deuterio del 99%), o al menos 6633,3 (incorporación de deuterio del 99,5%).
Composiciones farmacéuticas
Otra realización es una composición farmacéutica que incluye un compuesto tal como se describió anteriormente. Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden fabricarse por medio de procedimientos convencionales de mezclado, disolución, granulación, preparación de grageas, levigación, emulsionamiento, encapsulaci�n, atrapamiento o liofilización. Las composiciones pueden formularse de manera
55 convencional usando uno o más portadores, diluyentes, excipientes o adyuvantes fisiológicamente aceptables que facilitan el procesamiento del compuesto activo en preparaciones que pueden usarse farmac�uticamente.
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede formularse en las composiciones farmacéuticas per se, o en forma de un hidrato, solvato o sal farmac�uticamente aceptable, tal como se describen en el presente documento. Normalmente, tales sales son más solubles en disoluciones acuosas que los ácidos y las bases libres correspondientes, pero también pueden formarse las sales que tienen una solubilidad más baja que los ácidos y las bases libres correspondientes.
Una realización es una formulación farmacéutica que incluye un compuesto tal como se describe en el presente
65 documento, y al menos un excipiente, diluyente, conservante, estabilizante, farmac�uticamente aceptables o mezcla de los mismos.
El compuesto puede proporcionarse en una variedad de formulaciones y dosificaciones. El compuesto puede proporcionarse en una forma farmac�uticamente aceptable, incluyendo en la que el compuesto puede formularse en las composiciones farmacéuticas per se, o en forma de un hidrato, solvato o sal farmac�uticamente aceptable, tal
5 como se describen en el presente documento. Normalmente, tales sales son más solubles en disoluciones acuosas que los ácidos y las bases libres correspondientes, pero también pueden formarse las sales que tienen una solubilidad más baja que los ácidos y las bases libres correspondientes.
En una realización, el compuesto se proporciona como sal farmac�uticamente aceptable no tóxica, tal como se indicó anteriormente. Las sales farmac�uticamente aceptables adecuadas del compuesto descrito en el presente documento incluyen sales de adición de ácido tales como las formadas con ácido clorhídrico, ácido fum�rico, ácido p-toluenosulf�nico, ácido maleico, ácido succ�nico, ácido acético, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido carbónico o ácido fosf�rico. Las sales de grupos amina también pueden incluir sales de amonio cuaternario en las que el átomo de nitrógeno de amino porta un grupo orgánico adecuado tal como un resto alquilo, alquenilo, alquinilo o alquilo
15 sustituido. Además, cuando el compuesto dado a conocer en el presente documento porta un resto ácido, las sales farmac�uticamente aceptables adecuadas del mismo pueden incluir sales de metal tales como sales de metal alcalino, por ejemplo, sales de sodio o potasio; y sales de metal alcalinot�rreo, por ejemplo, sales de calcio o magnesio.
Las composiciones farmacéuticas para la administración del compuesto de 2,4-pirimidindiamina pueden presentarse de manera conveniente en forma unitaria de dosificación y pueden prepararse mediante cualquiera de los métodos bien conocidos en la técnica de farmacia. Las composiciones farmacéuticas pueden prepararse, por ejemplo, asociando uniforme y estrechamente el principio activo con un portador líquido, un portador sólido finamente dividido
o ambos, y entonces, si es necesario, conformar el producto en la formulación deseada. En la composición
25 farmacéutica el compuesto objetivo activo se incluye en una cantidad suficiente para producir el efecto terapéutico deseado.
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede administrarse mediante vías de administración oral, parenteral (por ejemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, inyección o infusión intracisternal, inyección subcutánea o implante), mediante inhalaci�n de pulverización nasal, vaginal, rectal, sublingual, uretral (por ejemplo, supositorio uretral) o típica (por ejemplo, gel, pomada, crema, aerosol, etc.) y puede formularse, en formulaciones unitarias de dosificación adecuadas que contienen portadores, adyuvantes, excipientes y vehículos farmac�uticamente aceptables convencionales no tóxicos apropiados para cada vía de administración. Además del tratamiento de animales de sangre caliente tales como ratones, ratas, caballos, ganado, ovejas, perros, gatos y monos, el
35 compuesto descrito en el presente documento puede ser eficaz en seres humanos.
El compuesto descrito en el presente documento, o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo, en forma pura
o en una composición farmacéutica apropiada, puede ser para la administración por medio de cualquiera de los modos de administración o agentes aceptados que sirven para utilidades similares. Por tanto, la administración puede ser, por ejemplo, por vía oral, por vía nasal, por vía parenteral (intravenosa, intramuscular o subcutánea), por vía típica, por vía transd�rmica, por vía intravaginal, por vía intravesical, por vía intracisternal o por vía rectal, en forma de formas farmacéuticas sólidas, semis�lidas, polvo liofilizado o líquidas, tales como por ejemplo, comprimidos, supositorios, píldoras, cápsulas de gelatina duras y blandas elásticas, polvos, disoluciones, suspensiones, o aerosoles, o similares, preferiblemente en formas farmacéuticas unitarias adecuadas para
45 administración simple de dosificaciones precisas.
Para la administración típica, el compuesto descrito en el presente documento puede formularse como disoluciones, geles, pomadas, cremas, suspensiones, etc., tal como se conocen bien en la técnica. Tales formulaciones pueden incluirse en un parche u otra formulación o sistema de administración transd�rmica, por ejemplo, una formulación con ingredientes diseñados específicamente para ayudar al transporte del compuesto a través de la piel y al interior de los tejidos corporales.
Las formulaciones sist�micas incluyen las diseñadas para la administración mediante inyección (por ejemplo, inyección subcutánea, intravenosa, intramuscular, intratecal o intraperitoneal) as� como las diseñadas para la
55 administración transd�rmica, transmucosal oral o pulmonar.
Las preparaciones inyectables útiles incluyen suspensiones, disoluciones o emulsiones estériles del/de los compuesto(s) activo(s) en vehículos acuosos u oleosos. Las composiciones también pueden contener agentes de formulación, tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o de dispersi�n. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en forma farmacéutica unitaria, por ejemplo, en ampollas o en envases multidosis, y pueden contener conservantes añadidos.
Alternativamente, la formulación inyectable puede proporcionarse en forma de polvo para su reconstitución con un vehículo adecuado, incluyendo pero sin limitarse a agua libre de pir�genos estéril, tampón y disolución de dextrosa,
65 antes de su uso. Para este fin, el compuesto activo puede secarse mediante cualquier técnica conocida en la técnica, tal como liofilización, y reconstituirse antes de su uso.
Para la administración transmucosal, se usan penetrantes apropiados para que la barrera sea permeable en la formulación. En la técnica se conocen tales penetrantes.
5 Para la administración oral, las composiciones farmacéuticas pueden tomar la forma de, por ejemplo, pastillas para chupar, comprimidos o cápsulas preparadas por medios convencionales con excipientes farmac�uticamente aceptables tales como aglutinantes (por ejemplo, almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa); cargas (por ejemplo, lactosa, celulosa microcristalina o hidrogenofosfato de calcio); lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, talco o sílice); disgregantes (por ejemplo, almidón de patata o glicolato sádico de almidón); o agentes humectantes (por ejemplo, laurilsulfato de sodio). Los comprimidos pueden recubrirse mediante métodos bien conocidos en la técnica con, por ejemplo, azúcares, películas o recubrimientos ent�ricos. Adicionalmente, las composiciones farmacéuticas que contienen la pirimidindiamina 2,4-sustituida como principio activo en una forma adecuada para su uso oral también pueden incluir, por ejemplo, trociscos, pastillas para chupar, suspensiones acuosas u oleosas, polvos o gránulos dispersables, emulsiones, cápsulas duras o
15 blandas, o jarabes o elixires. Las composiciones previstas para su uso oral pueden prepararse según cualquier método conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes incluyendo agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes con el fin de proporcionar preparaciones farmac�uticamente agradables. Los comprimidos contienen el principio activo mezclado con excipientes farmac�uticamente aceptables no tóxicos que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio; agentes de granulación y disgregaci�n (por ejemplo, almidón de maíz o ácido alg�nico); agentes de unión (por ejemplo almidón, gelatina o goma arábiga); y agentes lubricantes (por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco). Los comprimidos pueden dejarse sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas conocidas para retrasar la disgregaci�n y absorción en el tracto
25 gastrointestinal y de esta manera proporcionar una acción sostenida a lo largo de un periodo más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de retraso en el tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato de glicerilo. También pueden recubrirse mediante las técnicas descritas en las patentes estadounidenses n.os 4.256.108; 4.166.452; y 4.265.874 para formar comprimidos terapéuticos osm�ticos para liberación controlada. Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento también pueden estar en forma de emulsiones de aceite en agua.
Las preparaciones líquidas para la administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, elixires, disoluciones, jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un producto seco para la constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de su uso. Tales preparaciones líquidas pueden prepararse mediante medios convencionales con
35 aditivos farmac�uticamente aceptables tales como agentes de suspensión (por ejemplo, jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas); agentes emulsionantes (por ejemplo, lecitina o acacia); vehículos no acuosos (por ejemplo, aceite de almendras, ésteres oleosos, alcohol etílico, Cremophore™ o aceites vegetales fraccionados); y conservantes (por ejemplo, p-hidroxibenzoatos de metilo o propilo o ácido s�rbico). Las preparaciones también pueden contener sales de tampón, conservantes, agentes aromatizantes, colorantes y edulcorantes según sea apropiado.
Las preparaciones para la administración oral pueden formularse adecuadamente para conferir liberación controlada del compuesto activo, tal como se conoce bien.
45 Para la administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de comprimidos o pastillas para chupar formuladas de manera convencional.
Para la administración nasal o la administración por inhalaci�n o insuflaci�n, el compuesto activo puede administrarse de manera conveniente en forma de una pulverización en aerosol a partir de envases a presión o un nebulizador con el uso de un propelente adecuado (por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, fluorocarbonos, di�xido de carbono, u otro gas adecuado). En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para administrar una cantidad medida. Las cápsulas y los cartuchos para su uso en un inhalador o insuflador (por ejemplo, cápsulas y cartuchos que incluyen gelatina) pueden formular conteniendo una mezcla de polvo del compuesto y una base de
55 polvo adecuada tal como lactosa o almidón.
Las composiciones farmacéuticas pueden estar en forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede formularse según la técnica conocida usando los agentes humectantes o dispersantes adecuados y los agentes de suspensión que se han mencionado anteriormente. La preparación inyectable estéril también puede ser una disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o disolvente parenteralmente aceptable no tóxico. Entre los vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse est�n el agua, solución de Ringer, y disolución isot�nica de cloruro de sodio. El compuesto de 2,4-pirimidindiamina también puede administrarse en forma de supositorios para la administración rectal o uretral del fármaco. Para las vías de administración rectal y vaginal, el/los compuesto(s) activo(s) pueden formularse como disoluciones (para enemas de 65 retención), supositorios o pomadas que contienen bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glic�ridos. En realizaciones particulares, el compuesto puede formularse como supositorios uretrales,
por ejemplo, para su uso en el tratamiento de estados de fertilidad, particularmente en hombres (por ejemplo, para el tratamiento de disfunción testicular).
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito puede usarse para fabricar una composición o medicamento,
5 incluyendo medicamentos adecuados para la administración rectal o uretral. Además en el presente documento se contemplan específicamente métodos para fabricar composiciones que incluyen el compuesto de 2,4pirimidindiamina dado a conocer en el presente documento en una forma que es adecuada para la administración uretral o rectal, incluyendo supositorios.
Para su uso t�pico, pueden emplearse cremas, pomadas, gelatinas, geles, disoluciones, suspensiones, etc., que contienen el compuesto de 2,4-pirimidindiamina. En determinadas realizaciones, el compuesto de 2,4pirimidindiamina puede formularse para la administración típica con polietilenglicol (PEG). Estas formulaciones pueden incluir opcionalmente componentes farmac�uticamente aceptables adicionales tales como diluyentes, estabilizantes y/o adyuvantes. En realizaciones particulares, las formulaciones típicas se formulan para el
15 tratamiento de estados alérgicos y/o estados cut�neos incluyendo psoriasis, dermatitis por contacto y dermatitis at�pica, entre otros descritos en el presente documento.
El compuesto dado a conocer en el presente documento de 2,4-pirimidindiamina puede usarse para fabricar una composición o un medicamento, incluyendo medicamentos adecuados para la administración típica. Por consiguiente, se contemplan específicamente métodos para fabricar composiciones que incluyen el compuesto de 2,4-pirimidindiamina en una forma que es adecuada para la administración típica.
El compuesto dado a conocer en el presente documento de 2,4-pirimidindiamina también puede administrarse mediante cualquiera de una variedad de dispositivos y métodos de inhalaci�n conocidos en la técnica, incluyendo, 25 por ejemplo: la patente estadounidense n.� 6.241.969; la patente estadounidense n.� 6.060.069; la patente estadounidense n.� 6.238.647; la patente estadounidense n.� 6.335.316; la patente estadounidense n.� 5.364.838; la patente estadounidense n.� 5.672.581; los documentos WO 96/32149; WO 95/24183; la patente estadounidense n.� 5.654.007; la patente estadounidense n.� 5.404.871; la patente estadounidense n.� 5.672.581; la patente estadounidense n.� 5.743.250; la patente estadounidense n.� 5.419.315; la patente estadounidense n.� 5.558.085; el documento WO 98/33480; la patente estadounidense n.� 5.364.833; la patente estadounidense n.� 5.320.094; la patente estadounidense n.� 5.780.014; las patentes estadounidenses n.� 5.658.878; 5.518.998; 5.506.203; la patente estadounidense n.� 5.661.130; la patente estadounidense n.� 5.655.523; la patente estadounidense n.� 5.645.051; la patente estadounidense n.� 5.622.166; la patente estadounidense n.� 5.577.497; la patente estadounidense n.� 5.492.112; la patente estadounidense n.� 5.327.883; la patente estadounidense n.� 5.277.195; la solicitud de patente
35 estadounidense n.� 20010041190; la solicitud de patente estadounidense n.� 20020006901; y la solicitud de patente estadounidense n.� 20020034477.
Incluidos entre los dispositivos que pueden usarse para administrar el compuesto de 2,4-pirimidindiamina est�n aquellos bien conocidos en la técnica, tal como inhaladores de dosis medida, nebulizadores de líquido, inhaladores de polvo seco, pulverizadores, vaporizadores térmicos, y similares. Otra tecnología adecuada para la administración del compuesto de 2,4-pirimidindiamina incluye aplicadores de aerosol electrohidrodin�micos.
Adem�s, el dispositivo de inhalaci�n es preferiblemente práctico, en el sentido de que es fácil de usar, suficientemente pequeño para llevarlo de manera conveniente, capaz de proporcionar múltiples dosis y duradero.
45 Algunos ejemplo específicos de dispositivos de inhalaci�n comercialmente disponibles son Turbohaler (Astra, Wilmington, DE), Rotahaler (Glaxo, Research Triangle Park, NC), Diskus (Glaxo, Research Triangle Park, NC), el nebulizador Ultravent (Mallinckrodt), el nebulizador Acorn II (Marquest Medical Products, Totowa, NJ) el inhalador de dosis medida Ventolin (Glaxo, Research Triangle Park, NC), y similares. En una realización, el compuesto de 2,4pirimidindiamina puede administrarse mediante un pulverizador o inhalador de polvo seco.
Tal como reconocerán los expertos en la técnica, la formulación del compuesto de 2,4-pirimidindiamina, la cantidad de la formulación administrada, y la duración de administración de una dosis individual dependen del tipo de dispositivo de inhalaci�n empleado as� como de otros factores. Para algunos sistemas de administración de aerosol, tales como nebulizadores, la frecuencia de administración y la duración del tiempo para el que se activa el sistema
55 dependerán principalmente de la concentración del compuesto de 2,4-pirimidindiamina en el aerosol. Por ejemplo, pueden usarse periodos de administración más cortos a concentraciones más elevadas del compuesto de 2,4pirimidindiamina en la disolución de nebulizador. Dispositivos tales como inhaladores de dosis medida pueden producir concentraciones de aerosol mayores y pueden operarse durante periodos más cortos para administrar la cantidad deseada del compuesto de 2,4-pirimidindiamina en algunas realizaciones. Dispositivos tales como inhaladores de polvo seco administran agente activo hasta que una carga dada de agente se expele desde el dispositivo. En este tipo de inhalador, la cantidad del compuesto de 2,4-pirimidindiamina en una cantidad dada del polvo determina la dosis administrada en una administración individual. La formulación de la 2,4-pirimidindiamina se selecciona para proporcionar el tamaño de partícula deseado en el dispositivo de inhalaci�n elegido.
65 Las formulaciones del compuesto de 2,4-pirimidindiamina para la administración desde un inhalador de polvo seco pueden incluir normalmente un polvo seco finamente dividido que contiene el compuesto de 2,4-pirimidindiamina,
pero el polvo también puede incluir un agente de carga, tampón, portador, excipiente, otro aditivo, o similares. Los aditivos pueden incluirse en una formulación de polvo seco del compuesto de 2,4-pirimidindiamina, por ejemplo, para diluir el polvo según se requiera para la administración desde el inhalador de polvo particular, para facilitar el procesamiento de la formulación, para proporcionar propiedades de polvo ventajosas a la formulación, para facilitar 5 la dispersi�n del polvo desde el dispositivo de inhalaci�n, para estabilizar la formulación (por ejemplo, antioxidantes
o tampones), para proporcionar sabor a la formulación, o similares. Los aditivos t�picos incluyen mono, di y polisac�ridos; alcoholes de azúcar y otros polioles, tales como, por ejemplo, lactosa, glucosa, rafinosa, melecitosa, lactitol, maltitol, trehalosa, sacarosa, manitol, almidón, o combinaciones de los mismos; tensioactivos, tales como sorbitoles, difosfatidilcolina, o lecitina; y similares.
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina también puede ser adecuado para la administración mediante inhalaci�n. Por ejemplo, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede usarse para fabricar una composición o un medicamento, incluyendo medicamentos adecuados para la administración mediante inhalaci�n. Por consiguiente, la presente descripción incluye métodos para fabricar composiciones que incluyen el compuesto de 2,4-pirimidindiamina en una
15 forma que es adecuada para la administración, incluyendo administración mediante inhalaci�n. Por ejemplo, puede fabricarse una formulación de polvo seco de varias maneras, usando técnicas convencionales, tales como se describen en cualquiera de las publicaciones mencionadas anteriormente e incorporadas expresamente en el presente documento como referencia, y, por ejemplo, Baker, et al., la patente estadounidense n.� 5.700.904, cuya descripción completa se incorpora expresamente en el presente documento como referencia. Pueden prepararse partículas en el intervalo de tamaño apropiado para la deposición máxima en las vías respiratorias inferiores micronizando, moliendo, o similares. Puede fabricarse una formulación líquida disolviendo el compuesto de 2,4pirimidindiamina en un disolvente adecuado, tal como agua, a un pH apropiado, incluyendo tampones u otros excipientes.
25 Para la administración ocular, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede formularse como disolución, emulsión, suspensión, etc., adecuada para la administración al ojo. La administración al ojo es una exposición generalmente por vía típica del ojo a la formulación, pero también incluye inyección en el ojo si es necesario. En la técnica se conoce una variedad de vehículos adecuados para administrar el compuesto al ojo. Ejemplos no limitativos específicos se describen en la patente estadounidense n.� 6.261.547; la patente estadounidense n.� 6.197.934; la patente estadounidense n.� 6.056.950; la patente estadounidense n.� 5.800.807; la patente estadounidense n.� 5.776.445; la patente estadounidense n.� 5.698.219; la patente estadounidense n.� 5.521.222; la patente estadounidense n.� 5.403.841; la patente estadounidense n.� 5.077.033; la patente estadounidense n.� 4.882.150; y la patente estadounidense n.� 4.738.851.
35 Normalmente las formulaciones para la administración ocular contienen una cantidad farmac�uticamente eficaz del compuesto de 2,4-pirimidindiamina dado a conocer en el presente documento, tal como desde aproximadamente el 0,0001% hasta aproximadamente el 1,0% en peso (p/p). En determinadas formulaciones, la cantidad farmac�uticamente eficaz del compuesto es del 0,0003% a aproximadamente el 0,1% (p/p), tal como desde aproximadamente el 0,003% hasta aproximadamente el 0,5% (p/p), o desde aproximadamente el 0,01% hasta aproximadamente el 0,03% (p/p).
En determinados ejemplos una composición oft�lmica que contiene el compuesto de 2,4-pirimidindiamina para la administración ocular incluye un agente de tonicidad, un tampón, o ambos. En determinados ejemplos de composiciones oft�lmicas el agente de tonicidad es un carbohidrato sencillo o un alcohol de azúcar. Tal como
45 conocen los expertos en la técnica, los agentes de tonicidad pueden usarse en las presentes composiciones para ajustar la tonicidad de la composición, preferiblemente a la de las lágrimas normales. Los ejemplos de agentes de tonicidad adecuados incluyen, sin limitación cloruro de sodio, cloruro de potasio, cloruro de magnesio, cloruro de calcio, carbohidratos, tales como dextrosa, fructosa, galactosa, polioles, tales como alcoholes de azúcar, incluyendo a modo de ejemplo, manitol, sorbitol, xilitol, lactitol, isomaltosa, maltitol y combinaciones de los mismos. Las composiciones que contienen un tampón contienen, en algunos ejemplos, un fosfato, citrato, o ambos.
En un aspecto, las composiciones para la administración ocular del compuesto de 2,4-pirimidindiamina contienen opcionalmente un tensioactivo, un pol�mero estabilizador, o ambos. Los tensioactivos se emplean en determinadas composiciones para facilitar la administración de concentraciones más altas del compuesto de 2,4-pirimidindiamina.
55 Tales tensioactivos pueden funcionar solubilizando el compuesto. Los tensioactivos a modo de ejemplo incluyen polisorbato, polox�mero, estearato de polioxilo 40, aceite de ricino polioxilo, tiloxapol, Triton y monolaurato de sorbitano. En determinadas realizaciones el tensioactivo se selecciona de Triton X114, tiloxapol y combinaciones de los mismos. Todavía en otra realización de composiciones para la administración ocular, el pol�mero estabilizador es carb�mero 974p.
Para la administración prolongada, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede formularse como una preparación de depósito para la administración mediante implantación o inyección intramuscular. El principio activo puede formularse con materiales polim�ricos o hidrófobos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o como derivados moderadamente solubles (por ejemplo, como una sal 65 moderadamente soluble). Alternativamente, pueden usarse sistemas de administración transd�rmica fabricados como disco o parche adhesivo que libera lentamente el/los compuesto(s) activo(s) para la absorción percut�nea.
Para este fin, pueden usarse potenciadores de la permeaci�n para facilitar la penetraci�n transd�rmica del compuesto activo. Parches transd�rmicos adecuados se describen en, por ejemplo, la patente estadounidense n.� 5.407.713.; la patente estadounidense n.� 5.352.456; la patente estadounidense n.� 5.332.213; la patente estadounidense n.� 5.336.168; la patente estadounidense n.� 5.290.561; la patente estadounidense n.� 5.254.346; la
5 patente estadounidense n.� 5.164.189; la patente estadounidense n.� 5.163.899; la patente estadounidense n.� 5.088.977; la patente estadounidense n.� 5.087.240; la patente estadounidense n.� 5.008.110; y la patente estadounidense n.� 4.921.475.
Alternativamente, pueden emplearse otros sistemas de administración farmacéuticos. Los liposomas y las emulsiones son ejemplos bien conocidos de vehículos de administración que pueden usarse para administrar el/los compuesto(s) activo(s) o prof�rmaco(s). También pueden emplearse determinados disolventes orgánicos tales como dimetilsulf�xido (DMSO), aunque habitualmente con el coste de mayor toxicidad.
Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse, si se desea, en un envase o dispositivo de dispensación que
15 puede contener una o más formas farmacéuticas unitarias que contienen el/los compuesto(s) activo(s). El envase puede incluir, por ejemplo, lámina de metal o de plástico, tal como un envase de bl�ster. El envase o dispositivo de dispensación puede estar acompañado por instrucciones para la administración.
Otra realización es un kit que incluye un compuesto, prof�rmaco o composición farmacéutica tal como se describe en cualquiera de las realizaciones anteriores. Las realizaciones de kit se describen en más detalles a continuación.
M�TODOS
La presente invención proporciona el compuesto de 2,4-pirimidindiamina y composiciones farmacéuticas del mismo,
25 tal como se describe en el presente documento, para su uso en la terapia para los estados descritos en el presente documento. La presente invención proporciona además el uso del compuesto de la presente invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de estados en los que la selección como diana de ruta de JAK o la inhibición de cinasas JAK, particularmente JAK3, son terapéuticamente útiles. éstos incluyen estados en los que la función de linfocitos, macr�fagos o mastocitos est� implicada. Los estados en los que la selección como diana de la ruta de JAK o la inhibición de las cinasas JAK, particularmente JAK3, son terapéuticamente útiles incluyen leucemia, linfoma, rechazo de trasplante (por ejemplo, rechazo de trasplante de islotes de páncreas), aplicaciones de trasplante de médula ósea (por ejemplo, enfermedad injerto contra huésped), enfermedades autoinmunitarias (por ejemplo, artritis reumatoide, etc.), inflamación (por ejemplo, asma, etc.) y otros estados tal como se describen en mayor detalle en el presente documento.
35 Tal como se indicó anteriormente, pueden tratarse numeroso estados usando el compuesto de pirimidindiamina 2,4sustituida descrito en el presente documento. Tal como se usa en el presente documento, “tratar” o “tratamiento” de una enfermedad en un paciente se refiere a (1) prevenir la enfermedad de que se produzca en un paciente que est� predispuesto o que aún no presente los síntomas de la enfermedad; (2) inhibir la enfermedad o detener su desarrollo; o (3) aliviar o provocar la regresión de la enfermedad. Tal como se entiende bien en la técnica, “tratamiento” es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, incluyendo resultados cl�nicos. Para los fines de esta invención, resultados beneficiosos o deseados pueden incluir uno o más, pero no se limitan a, alivio
o mejora de uno o más síntomas, disminución del grado de un estado, incluyendo una enfermedad, estado estabilizado (es decir, no empeoramiento) de una condición, incluyendo enfermedades, prevención de la
45 propagación de la enfermedad, retraso o ralentizaci�n del estado, incluyendo enfermedad, progresión, mejora o paliaci�n del estado, incluyendo enfermedad, estado y remisión (o bien parcial o bien total), o bien detectable o bien indetectable.
El compuesto descrito en el presente documento es un inhibidor potente y selectivo de cinasas JAK y es particularmente selectivo para la ruta de se�alizaci�n de citocinas que contiene JAK3. Como consecuencia de esta actividad, el compuesto puede usarse en una variedad de contextos in vitro, in vivo y ex vivo para regular o inhibir la actividad de cinasa JAK, cascadas de se�alizaci�n en las que las cinasas JAK desempeñan un papel, y las respuestas biológicas efectuadas mediante tales cascadas de se�alizaci�n. Por ejemplo, en una realización, el compuesto puede usarse para inhibir la cinasa JAK, o bien in vitro o bien in vivo, en prácticamente cualquier tipo 55 celular que expresa la cinasa JAK, tal como en células hematopoy�ticas en las que, por ejemplo, se expresa predominantemente JAK3. También puede usarse para regular las cascadas de transducci�n de señales en las que las cinasas JAK, particularmente JAK3, desempeñan un papel. Tales cascadas de transducci�n de señales dependientes de JAK incluyen, pero no se limitan a, las cascadas de se�alizaci�n de receptores de citocina que implican la cadena gamma común, tal como, por ejemplo, las cascadas de se�alizaci�n del receptor IL-4, IL-7, IL-5, IL-9, IL-15 e IL-21, o IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 e IL-21. El compuesto también puede usarse in vitro o in vivo para regular, y en particular para inhibir, respuestas celulares o biológicas afectadas por tales cascadas de transducci�n de señales dependientes de JAK. Tales respuestas celulares o biológicas incluyen, pero no se limitan a, regulaci�n por incremento de IL-4/ramos CD23 y proliferaci�n de células T mediada por IL-2. De manera importante, el compuesto puede usarse para inhibir cinasas JAK in vivo como un enfoque terapéutico para el tratamiento o la 65 prevención de enfermedades mediadas, o bien completamente o bien en parte, mediante una actividad de cinasa JAK (denominada en el presente documento como “enfermedades mediadas por cinasa JAK”). Los ejemplos no
limitativos de enfermedades mediadas por cinasa JAK que pueden tratarse o prevenirse con el compuesto dado a conocer en el presente documento incluyen, pero no se limitan a, los siguientes: alergias; asma; enfermedades autoinmunitarias, incluyendo trastornos del sistema autoinmunitario, rechazo de trasplante (por ejemplo, de ri��n, corazón, pulmón, hígado, páncreas, piel; reacción del huésped contra el injerto (HVGR), y reacción de injerto contra
5 huésped (GVHR)), artritis reumatoide, y esclerosis lateral amiotr�fica; enfermedades autoinmunitarias mediadas por células T tales como esclerosis múltiple, psoriasis y síndrome de Sjogren; enfermedades inflamatorias de tipo II tales como inflamación vascular (incluyendo vasculitis, arteritis, aterosclerosis y arteriopat�a coronaria); enfermedades del sistema nervioso central tales como accidente cerebrovascular; enfermedades pulmonares tales como bronquitis obstructiva e hipertensión pulmonar primaria; reacciones de hipersensibilidad de tipo IV retrasadas, sólidas; y tumores malignos hematol�gicos tales como leucemia y linfomas.
En el presente documento se da a conocer un método de inhibición de una actividad de una cinasa JAK, que incluye poner en contacto la cinasa JAK con una cantidad de un compuesto eficaz para inhibir una actividad de la cinasa JAK, en la que el compuesto N2-(3,4,5 trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-il)-2,4
15 pirimidindiamina. El método puede llevarse a cabo in vivo.
Tambi�n se da a conocer en el presente documento un método de inhibición de una actividad de una cinasa JAK, que incluye poner en contacto in vitro una cinasa JAK3 con una cantidad de un compuesto eficaz para inhibir una actividad de la cinasa JAK, en la que el compuesto es tal como se describió anteriormente.
En una realización específica, el compuesto puede ser para su uso en el tratamiento y/o la prevención de rechazo en receptores de trasplante de órganos y/o tejidos (es decir, tratar y/o prevenir el rechazo de aloinjerto). Los aloinjertos pueden rechazarse a través de una reacción inmunitaria o bien mediada por células o bien humoral del receptor contra los ant�genos del trasplante (histocompatibilidad) presentes en las membranas de las células del donante. Los
25 ant�genos más fuertes se rigen mediante un complejo de loci genéticos denominados ant�genos leucocitarios humanos (HLA) del grupo A. Junto con los ant�genos de los grupos sanguíneos ABO, son los ant�genos de trasplante principales que pueden detectarse en seres humanos.
El rechazo tras el trasplante puede dividirse generalmente en tres categorías: hiperagudo, que se produce de horas a días tras el trasplante; agudo, que se produce de días a meses tras el trasplante; y crónico, que se produce de meses a años tras el trasplante.
El rechazo hiperagudo est� provocado principalmente por la producción de anticuerpos del huésped que atacan el tejido del injerto. En una reacción de rechazo hiperagudo, se observan anticuerpos en la vasculatura del trasplante
35 muy pronto tras el trasplante. Poco tiempo después de esto, se produce la coagulación vascular, que conduce a isquemia, finalmente necrosis y muerte. El infarto del injerto no responde a las terapias inmunosupresoras conocidas. Debido a que los ant�genos de HLA pueden identificarse in vitro, se usa el examen antes del trasplante para reducir significativamente el rechazo hiperagudo. Como consecuencia de este examen, hoy en día el rechazo hiperagudo es relativamente poco común.
Se cree que el rechazo agudo est� mediado por la acumulación de células específicas de ant�geno en el tejido del injerto. La reacción inmunitaria mediada por células T frente a estos ant�genos (es decir, HVGR o GVHR) es el mecanismo principal de rechazo agudo. La acumulación de estas células conduce a daño del tejido del injerto. Se cree que tanto las células T auxiliares CD4+ como las células T citot�xicas CD8+ est�n implicadas en el proceso y
45 que el ant�geno se presenta por células dendr�ticas del donante y del huésped. Las células T auxiliares CD4+ ayudan a reclutar otras células efectoras, tales como macr�fagos y eosin�filos, al injerto. También est� implicado el acceso a cascadas de transducci�n de señales de la activación de células T (por ejemplo, cascadas de CD28, CD40L, y CD2).
El rechazo agudo mediado por células puede invertirse en muchos casos intensificando la inmunoterapia. Tras la inversión satisfactoria, elementos gravemente dañados del injerto se curan mediante fibrosis y el resto del injerto parece normal. Tras la resolución de rechazo agudo, las dosificaciones de fármacos inmunosupresores pueden reducirse a niveles muy bajos.
55 El rechazo crónico, que es un problema particular en trasplantes renales, a menudo progresa de manera insidiosa a pesar del aumento de la terapia inmunosupresora. Se cree que se debe, en gran parte, a hipersensibilidad de tipo IV mediada por células. El perfil patológico difiere del de rechazo agudo. El endotelio arterial est� implicado principalmente con la proliferaci�n extensa que puede ocluir gradualmente la luz del vaso, conduciendo a isquemia, fibrosis, una íntima engrosada y a cambios ateroescler�ticos. El rechazo crónico se debe principalmente a una obstrucción progresiva de la vasculatura del injerto y se asemeja a un proceso vascul�tico, lento.
En la hipersensibilidad de tipo IV, las células T citot�xicas CD8 y las células T auxiliares CD4 reconocen ant�geno sintetizado o bien intracelular o bien extracelular cuando forma complejos, respectivamente, con moléculas de CMH
o bien de clase I o bien de clase II. Los macr�fagos funcionan como células presentadoras de ant�geno y liberan IL
65 1, que promueve la proliferaci�n de células T auxiliares. Las células T auxiliares liberan interfer�n gamma e IL-2, que juntos regulan reacciones de hiperactividad retrasada mediadas por la activación de macr�fagos e inmunidad mediada por células T. En el caso de trasplante de órgano, las células T citot�xicas destruyen las células del injerto al entrar en contacto.
Puesto que las cinasas JAK desempeñan un papel crítico en la activación de células T, el compuesto de 2,4
5 pirimidindiamina descrito en el presente documento puede ser para su uso en el tratamiento y/o la prevención de muchos aspectos de rechazo de trasplante, y son particularmente útiles en el tratamiento y/o la prevención de reacciones de rechazo que est�n mediadas, al menos en parte, por células T, tales como HVGR o GVHR. El compuesto de 2,4-pirimidindiamina también puede ser para su uso en el tratamiento y/o la prevención de rechazo crónico en receptores de trasplante y, en particular, en receptores de trasplante renal. El compuesto también puede
10 administrarse a un tejido o un órgano antes de trasplantar el tejido o el órgano en el receptor del trasplante.
En otra realización, esta invención proporciona el compuesto de 2,4-pirimidindiamina para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria mediada por células T, que incluye administrar a un paciente que padece una enfermedad autoinmunitaria de este tipo una cantidad del compuesto eficaz para tratar la enfermedad
15 autoinmunitaria tal como se describe en el presente documento. En determinadas realizaciones de los métodos la enfermedad autoinmunitaria es esclerosis múltiple (MS), psoriasis o síndrome de Sjogren.
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento puede aplicarse para su uso en terapia solo, o puede aplicarse en combinación con o de manera complementaria a otras terapias inmunosupresoras 20 comunes, tales como, por ejemplo, los siguientes: mercaptopurina; corticosteroides tales como prednisona; metilprednisolona y prednisolona; agentes alquilantes tales como ciclofosfamida; inhibidores de calcineurina tales como ciclosporina, sirolimus y tacrolimus; inhibidores de inosina monofosfato deshidrogenasa (IMPDH) tales como micofenolato, micofenolato de mofetilo y azatioprina; y agentes diseñados para suprimir la inmunidad celular mientras que mantienen la respuesta inmunol�gica humoral del receptor intacta, incluyendo diversos anticuerpos 25 (por ejemplo, globulina antilinfoc�tica (ALG), globulina antimioc�tica (ATG), anticuerpos monoclonales anti-células T (OKT3)) e irradiación. Estos diversos agentes pueden usarse según sus dosificaciones convencionales o comunes, tal como se especifique en la información prescrita que acompaña a las formas comercialmente disponibles de los fármacos (véase también: la información prescrita en la edición de 2006 de The Physician’s Desk Reference), cuyas descripciones se incorporan en el presente documento como referencia. Azatioprina est� disponible actualmente de 30 Salix Pharmaceuticals, Inc., con el nombre comercial AZASAN; mercaptopurina est� disponible actualmente de Gate Pharmaceuticals, Inc., con el nombre comercial PURINETHOL; prednisona y prednisolona est�n disponibles actualmente de Roxane Laboratories, Inc.; metil-prednisolona est� disponible actualmente de Pfizer; sirolimus (rapamicina) est� disponible actualmente de Wyeth-Ayerst con el nombre comercial RAPAMUNE; tacrolimus est� disponible actualmente de Fujisawa con el nombre comercial PROGRAF; ciclosporina est� disponible actualmente 35 de Novartis con el nombre comercial SANDIMMUNE y de Abbott con el nombre comercial GENGRAF; inhibidores de IMPDH tales como mocofenolato de mofetilo y ácido micofen�lico est�n disponibles actualmente de Roche con el nombre comercial CELLCEPT y de Novartis con el nombre comercial MYFORTIC; azatioprina est� disponible actualmente de Glaxo Smith Kline con el nombre comercial IMURAN; y anticuerpos est�n disponibles actualmente de Ortho Biotech con el nombre comercial ORTHOCLONE, de Novartis con el nombre comercial SIMULECT
40 (basiliximab) y de Roche con el nombre comercial ZENAPAX (daclizumab).
En otra realización, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina podría ser para la administración o bien en combinación con o de manera complementaria a un inhibidor de una cinasa Syk. La cinasa Syk es una tirosina cinasa que se sabe que desempeña un papel crítico en la se�alizaci�n de receptores FcD, as� como en otras cascadas de 45 se�alizaci�n, tales como las que implican la se�alizaci�n de receptores de células B (Tumer et al., (2000), Immunology Today 21:148-154) e integrinas beta (1), beta (2) y beta (3) en neutr�filos (Mocsavi et al., (2002), Immunity 16:547-558). Por ejemplo, la cinasa Syk desempeña un papel central en la se�alizaci�n de receptores IgE de alta afinidad en mastocitos que conduce a la activación y posterior liberación de múltiples mediadores químicos que desencadenan ataques alérgicos. Sin embargo, a diferencia de las cinasas JAK, que ayudan a regular las rutas
50 implicadas en reacciones de hipersensibilidad de tipo IV mediada por células o retrasada, la cinasa Syk ayuda a regular las rutas implicadas en reacciones de hipersensibilidad de tipo I mediadas por IgE, inmediatas. Determinados compuestos que afectan la ruta de Syk pueden o pueden no afectar también a las rutas de JAK.
Compuestos inhibidores de Syk adecuados se describen, por ejemplo, en el documento con n.� de serie 10/355.543
55 presentado el 31 de enero de 2003 (publicación n.� 2004/0029902); el documento WO 03/063794; el documento con n.� de serie 10/631.029 presentado el 29 de julio de 2003 (publicación n.� 2007/0060603); el documento WO 2004/014382; el documento con n.� de serie 10/903.263 presentado el 30 de julio de 2004 (publicación n.� 2005/0234049); el documento PCT/US2004/24716 presentado el 30 de julio de 2004 (documento WO 05/016893); el documento con n.� de serie 10/903.870 presentado el 30 de julio de 2004 (publicación n.� 2005/0209224); el
60 documento PCT/US2004/24920 presentado el 30 de julio de 2004; el documento con n.� de serie 60/630.808 presentado el 24 de noviembre de 2004; el documento con n.� de serie 60/645.424 presentado el 19 de enero de 2005; y el documento con n.� de serie 60/654.620, presentado el 18 de febrero de 2005, cuyas descripciones se incorporan en el presente documento como referencia. La 2,4-pirimidindiamina descrita en el presente documento y el compuesto inhibidor de Syk podrían usarse solos o en combinación con uno o más tratamientos de rechazo de
65 trasplante convencionales, tal como se describieron anteriormente.
En una realización específica, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede ser para su uso para tratar o prevenir estas enfermedades en pacientes que o bien son insensibles (resistentes) inicialmente a o que se vuelven insensibles al tratamiento con un compuesto inhibidor de Syk o uno de los otros tratamientos actuales para la enfermedad particular. El compuesto de 2,4-pirimidindiamina también podría ser para su uso en combinación con el
5 compuesto inhibidor de Syk en pacientes que son resistentes o insensibles al compuesto de Syk. Los compuestos inhibidores de Syk adecuados con los que puede administrase el compuesto de 2,4-pirimidindiamina se proporcionan anteriormente.
En otra realización, esta invención proporciona un método de tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria mediada por células T, que incluye administrar a un paciente que padece una enfermedad autoinmunitaria de este tipo una cantidad del compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito anteriormente en combinación con o de manera complementaria a un compuesto que inhibe cinasa Syk con una CI50 de al menos 10 μM, eficaz para tratar la enfermedad autoinmunitaria.
15 En otra realización, esta invención proporciona un método de tratamiento de rechazo de trasplante de aloinjerto, o bien agudo o bien crónico, en un receptor de trasplante, que incluye administrar al receptor del trasplante una cantidad del compuesto de 2,4-pirimidindiamina eficaz para tratar o prevenir el rechazo. En una realización adicional, el compuesto se administra a un tejido o un órgano antes de o simultáneamente con, el trasplante del tejido u órgano en el receptor del trasplante. En otra realización, el compuesto se administra al tejido u órgano y al paciente. En una realización específica el rechazo de trasplante de aloinjerto est� mediado por HVGR o GVHR. En otra realización, el órgano de trasplante de aloinjerto es un ri��n, un corazón, un hígado o un pulmón. En otra realización, en la que el órgano de trasplante de aloinjerto es un ri��n, un corazón, un hígado o un pulmón, el compuesto se administra en combinación con o de manera complementaria a otro inmunosupresor. En una realización más específica, el inmunosupresor es ciclosporina, tacrolimus, sirolimus, un inhibidor de IMPDH, micofenolato, micofenolato de
25 mofetilo, un anticuerpo anti-células T u OKT3.
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento es un moderador de citocina de la se�alizaci�n de IL-4. Como consecuencia, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina podría ralentizar la respuesta de reacciones de hipersensibilidad de tipo I. Por tanto, en una realización específica, el compuesto de 2,4pirimidindiamina podría ser para su uso en el tratamiento de tales reacciones y, por tanto, de las enfermedades asociadas con, mediadas por, o provocadas por tales reacciones de hipersensibilidad (por ejemplo, alergias), de manera profiláctica. Por ejemplo, alguien que padece alergia podría tomar el compuesto selectivo para JAK descrito en el presente documento antes de la exposición esperada a al�rgenos para retrasar el inicio o el progreso de, o eliminar totalmente, una respuesta alérgica.
35 Cuando es para su uso en el tratamiento o prevención de tales enfermedades, el compuesto de 2,4-pirimidindiamina puede administrarse individualmente, como mezclas de uno o más compuestos de 2,4-pirimidindiamina, o en mezcla
o combinación con otros agentes útiles para tratar tales enfermedades y/o los síntomas asociados con tales enfermedades. El compuesto de 2,4-pirimidindiamina también puede administrase en mezcla o en combinación con agentes útiles para tratar otros trastornos o enfermedades, tales como esteroides, estabilizantes de la membrana, inhibidores de 5-lipooxigenasa (5LO), inhibidores de la síntesis y receptores de leucotrienos, inhibidores del cambio de isotipo de IgE o la síntesis de IgE, cambio de isotipo de IgG o la síntesis de IgG, β-agonistas, inhibidores de la triptasa, aspirina, inhibidores de la ciclooxigenasa (COX), metotrexato, fármacos anti-TNF, rituximab, inhibidores de PD4, inhibidores de p38, inhibidores de PDE4 y antihistam�nicos, por nombrar unos pocos. El compuesto de 2,4
45 pirimidindiamina puede administrase per se en forma de prof�rmacos o como composiciones farmacéuticas, que incluyen un compuesto activo.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto para su uso en un método de tratamiento de una reacción de hipersensibilidad de tipo IV, que incluye administrar a un sujeto una cantidad de un compuesto eficaz para tratar o prevenir la reacción de hipersensibilidad, en el que el compuesto es la 2,4-pirimidindiamina descrita en el presente documento. En una realización, el método se pone en práctica de manera profiláctica. En algunas realizaciones, el compuesto se administra antes de la exposición a un al�rgeno.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto para su uso en un método de inhibición de una
55 cascada de transducci�n de señales en la que la cinasa JAK3 desempeña un papel, que incluye poner en contacto una célula que expresa un receptor implicado en una cascada de se�alizaci�n de este tipo con un compuesto, en el que el compuesto es la 2,4-pirimidindiamina descrita en el presente documento.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad mediada por cinasa JAK, que incluye administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por cinasa JAK, en el que el compuesto es el compuesto de 2,4pirimidindiamina descrito en el presente documento.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto para su uso en un método de tratamiento de una
65 enfermedad mediada por cinasa JAK, en el que la enfermedad mediada por JAK es HVGR o GVHR, que incluye administrar a un sujeto una cantidad de compuesto eficaz para tratar o prevenir la enfermedad mediada por cinasa JAK, en el que el compuesto es el compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento.
En otra realización, esta invención proporciona un compuesto para su uso en el tratamiento de trastornos oculares usando una cantidad eficaz del compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento. En un 5 aspecto del método dado a conocer para tratar trastornos oculares, la administración de uno o más del compuesto de 2,4-pirimidindiamina dado a conocer en el presente documento es eficaz para aumentar el volumen de producción de lágrima en comparación con el volumen de producción de lágrima no tratado, mejorando de esta manera un síntoma del síndrome de ojos secos. En un aspecto, el volumen de producción de lágrima aumenta en el plazo de cinco días, tales como en menos de cuatro días, y en algunos ejemplos en menos de dos días. En una realización, el volumen de producción de lágrima aumenta mediante al menos aproximadamente el 25% con respecto a la producción de lágrima inicial en el plazo de dos días de tratamiento inicial con un compuesto de 2,4pirimidindiamina dado a conocer en el presente documento. En otras realizaciones, la producción de lágrima aumenta en al menos aproximadamente el 30%, tal como al menos aproximadamente el 50% con respecto a la producción de lágrima inicial en el plazo de menos de dos días. Los aumentos en la producción de lágrima tras la
15 administración del presente compuesto dan como resultado, en algunos casos, un volumen de producción de lágrimas comparable a la producción de lágrima normal. Normalmente el compuesto dado a conocer, cuando se usa para tratar trastornos oculares por vía típica, se administra al menos una vez al día y normalmente como máximo dos veces al día.
Tal como se mencion�, otra realización proporciona un compuesto para su uso en un método de tratamiento de una enfermedad y/o un trastorno del ojo, que incluye administrar a un sujeto una cantidad de un compuesto eficaz para tratar la enfermedad y/o el trastorno del ojo en el que el compuesto es la 2,4-pirimidindiamina descrita en el presente documento. Las enfermedades y los trastornos del ojo incluyen, pero no se limitan a, síndrome del ojo seco, uveitis, conjuntivitis alérgica, glaucoma y ros�cea (del ojo). El síndrome del ojo seco (DES), conocido de otra manera como 25 queratoconjuntivitis seca (KCS), queratitis seca, síndrome seco o xeroftalmia, es una enfermedad ocular provocada por una disminución de la producción de lágrima o aumento de la evaporación de la película de lágrima que se encuentra comúnmente en seres humanos y algunos animales. Uveitis o iridociclitis se refiere a inflamación de la capa intermedia del ojo (la “�vea”) y en el uso común puede referirse a cualquier proceso inflamatorio que implica el interior del ojo. La conjuntivitis alérgica es la inflamación de la conjuntiva (la membrana que cubre la parte blanca del ojo) debido a alergia. Glaucoma se refiere a un grupo de enfermedades que afectan al nervio óptico e implican una pérdida de células del ganglio retinal en un patrón característica, es decir, un tipo de neuropatía óptica. La presión intraocular elevada es un factor de riesgo significativo para desarrollar glaucoma (por encima de 22 mmHg o 2,9 kPa), y procesos inflamatorios, por ejemplo uveitis, puede provocar esta elevación en la presión intraocular. La ros�cea es un estado inflamatorio crónico caracterizado por eritema facial pero puede afectar a los ojos. Tal como se
35 mencion�, el compuesto descrito en el presente documento puede ser para su uso para tratar respuestas inflamatorias. Sin querer limitarse a la teoría, se cree que el compuesto descrito en el presente documento es eficaz en el tratamiento de estos trastornos oculares debido, al menos en parte, a su actividad inhibidora de JAK.
El compuesto activo descrito en el presente documento inhibe normalmente la ruta de JAK/Stat. La actividad del compuesto como inhibidor de una cinasa JAK puede evaluarse in vitro o in vivo. La actividad del compuesto puede someterse a prueba en un ensayo celular. Los ensayos adecuados incluyen ensayos que determinan la inhibición de
o bien la actividad de fosforilaci�n o la actividad ATPasa de una cinasa JAK. Por tanto, se dice que un compuesto inhibe una actividad de una cinasa JAK si inhibe la actividad de fosforilaci�n o ATPasa de una cinasa JAK con una CI50 de aproximadamente 20 μM o menos.
45 “Trastorno proliferativo celular” se refiere a un trastorno caracterizado por proliferaci�n anómala de células. Un trastorno proliferativo no implica ninguna limitación con respecto a la velocidad de crecimiento celular, sino que simplemente indica la pérdida de controles normales que afectan al crecimiento y a la división celular. Por tanto, en algunas realizaciones, las células de un trastorno proliferativo pueden tener las mismas velocidades de división celular que las células normales pero no responden a señales que limitan tal crecimiento. Dentro del ámbito de “trastorno proliferativo celular” est� neoplasia o tumor, que es un crecimiento anómalo de tejido. Cáncer se refiere a cualquiera de las diversas neoplasias malignas caracterizadas por la proliferaci�n de células que tienen la capacidad de invadir el tejido circundante y/o metastatizar a nuevos sitios de colonización.
55 “Neoplasia hematopoy�tica” se refiere a un trastorno proliferativo celular que surge a partir de células del linaje hematopoy�tico. Generalmente, la hematopoyesis es el proceso fisiológico mediante el cual las células no diferenciadas o las células madre se desarrollan en diversas células encontradas en la sangre periférica. En la fase inicial de desarrollo, las células madre hematopoy�ticas, normalmente encontradas en la médula ósea, experimentan una serie de divisiones celulares para formar células progenitoras multipotentes que se asignan a dos rutas de desarrollo principales: el linaje linfoide y el linaje mieloide. Las células progenitoras asignadas del linaje mieloide se diferencian en tres subramificaciones principales que incluyen las rutas de desarrollo eritroide, megacarioc�tica y granuloc�tica/monoc�tica. Una ruta adicional conduce a la formación de células dendr�ticas, que est�n implicadas en la presentación de ant�geno. El linaje eritroide da lugar a glóbulos rojos mientras que el linaje megacarioc�tico da lugar a plaquetas sanguíneas. Las células asignadas del linaje granuloc�tico/monoc�tico se
65 separan en rutas de desarrollo de granulocitos o monocitos, conduciendo la primera ruta a la formación de neutr�filos, eosin�filos y bas�filos y dando lugar la última ruta a monocitos y macr�fagos sanguíneos.
Las células progenitoras asignadas del linaje linfoide se desarrollan para dar la ruta de células B, ruta de células T o la ruta de células no T/B. De manera similar al linaje mieloide, parece que una ruta linfoide adicional da lugar a células dendr�ticas implicadas en la presentación de ant�geno. La célula progenitora de célula B se desarrolla para 5 dar una célula B precursora (pre-B), que se diferencia en células B responsables de la producción de inmunoglobulinas. Las células progenitoras del linaje de células T se diferencian en células T precursoras (pre-T) que, en base a la influencia de determinadas citocinas, se desarrollan para dar células T citot�xicas o auxiliares/supresoras implicadas en la inmunidad mediada por células. La ruta de células no T/B conduce a la generación de células citol�ticas naturales (NK). La neoplasia de células hematopoy�ticas puede implicar células de cualquier fase de la hematopoyesis, que incluyen células madre hematopoy�ticas, células progenitoras multipotentes, células progenitoras asignadas oligopotentes, células precursoras y células diferenciadas maduras. Las categorías de neoplasias hematopoy�ticas pueden seguir generalmente las descripciones y criterios de diagnóstico empleados por los expertos en la técnica (véase, por ejemplo, International Classification of Disease and Related Health Problems (ICD 10), World Health Organization (2003)). Las neoplasias hematopoy�ticas también
15 pueden caracterizarse basándose en las características moleculares, tales como marcadores de superficie celular y perfiles de expresión g�nica, el fenotipo celular mostrado por las células aberrantes, y/o aberraciones cromos�micas (por ejemplo, deleciones, translocaciones, inserciones, etc.) características de determinadas neoplasias hematopoy�ticas, tales como el cromosoma Philadelphia encontrado en leucemia miel�gena crónica. Otras clasificaciones incluyen National Cancer Institute Working Formulation (Cancer, 1982,49:2112-2135) y Revised European-American Lymphoma Classification (REAL).
“Neoplasia linfoide” se refiere a un trastorno proliferativo que implica células del linaje linfoide de hematopoyesis. Las neoplasias linfoides pueden surgir a partir de células madre hematopoy�ticas as� como células progenitoras de asignación linfoide, células precursoras y células diferenciadas en fase terminal. Estas neoplasias pueden
25 subdividirse basándose en los atributos fenot�picos de las células aberrantes o el estado diferenciado del que surgen las células anómalas. Las subdivisiones incluyen, entre otras, neoplasias de células B, neoplasias de células T, neoplasias de células NK y linfoma de Hodgkin.
“Neoplasia mieloide” se refiere a un trastorno proliferativo de células del linaje mieloide de hematopoyesis. Las neoplasias pueden surgir de células madre hematopoy�ticas, células progenitoras de asignación mieloide, células precursoras y células diferenciadas en fase terminal. Las neoplasias mieloides pueden subdividirse basándose en los atributos del fenotipo de las células aberrantes o el estado diferenciado del que surgen las células anómalas. Las subdivisiones incluyen, entre otras, enfermedades mieloproliferativas, enfermedades mielodispl�sicas/mieloproliferativas, síndromes mielodispl�sicos, leucemia mieloide aguda y leucemia bifenot�pica
35 aguda.
De manera general los trastornos proliferativos celulares que pueden tratarse con el compuesto dado a conocer en el presente documento se refieren a cualquier trastorno caracterizado por proliferaci�n celular aberrante. éstos incluyen diversos tumores y c�nceres, benignos o malignos, metast�sicos o no metast�sicos. Las propiedades específicas de c�nceres, tales como invasividad de tejidos o metástasis, pueden seleccionarse como diana usando los métodos descritos en el presente documento. Los trastornos proliferativos celulares incluyen una variedad de c�nceres, que incluyen, entre otros, cáncer de mama, cáncer de ovario, cáncer renal, cáncer gastrointestinal, cáncer de ri��n, cáncer de vejiga, cáncer pancreático, carcinoma escamoso de pulmón y adenocarcinoma. Más específicamente, en relación con tejidos, órganos o áreas particulares del cuerpo, Cardiacos: sarcoma 45 (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipoma y teratoma; De pulmón: carcinoma broncog�nico (células escamosas, células pequeñas no diferenciadas, células grandes no diferenciadas, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hanlartoma condromatoso, mesotelioma; Gastrointestinales: esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinorna, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, liomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, liomioma); Del tracto genitourinario: ri��n (adenocarcinoma, tumor de Wilm [nefroblastoma], linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células uroteliales, adenocarcinoma), pr�stata (adenocarcinoma, sarcoma), 55 testículos (seminoma, teratoma, carcinoma embrional, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); Del hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; Del hueso: sarcoma osteog�nico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células reticulares), mieloma múltiple, cordoma tumoral de células gigantes malignas, osteocronfroma (exostosis osteocartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores de células gigantes; Sistema nervioso: cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteitis deformante), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma [pinealoma], glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwanoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de la médula espinal, meningioma, glioma, 65 sarcoma); Ginecológicos: útero (carcinoma endometrial), cuello del útero(carcinoma del cuello del útero, displasia del cuello del útero pretumoral), ovarios (carcinoma de ovario [adenocarcinoma qu�stico seroso, adenocarcinoma
qu�stico mucinoso, carcinoma no clasificado], tumores de células de teca-granulosa, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioides (rabdomiosarcoma embrionario], trompas de falopio (carcinoma); Hematol�gicas: sangre
5 (leucemia mieloide [aguda y crónica], leucemia linfobl�stica aguda, leucemia linfoc�tica crónica, enfermedades mieloporliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodispl�sico), enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin [linfoma maligno]; De la piel: melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, nevos pigmentosos displ�sicos, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis; y glándulas suprarrenales: neuroblastoma. El término “célula cancerosa” tal como se proporciona en el presente documento, incluye una célula afectada por cualquiera de los estados identificados anteriormente.
En algunas realizaciones, el trastorno proliferativo celular tratado es una neoplasia hematopoy�tica, que es el crecimiento aberrante de células del sistema hematopoy�tico. Los tumores malignos hematopoy�ticos tienen sus orígenes en células madre pluripotentes, células progenitoras multipotentes, células progenitoras comprometidas 15 oligopotentes, células precursoras y células terminalmente diferenciadas implicadas en hematopoyesis. Se cree que algunos tumores malignos hematol�gicos surgen de células madre hematopoy�ticas, que tienen capacidad para autorrenovaci�n. Por ejemplo, las células que pueden desarrollar subtipos específicos de leucemia mieloide aguda (AML) tras el trasplante muestran los marcadores de superficie celular de células madre hematopoy�ticas, lo que implica a las células madre hematopoy�ticas como la fuente de células leuc�micas. Los blastocitos que no tienen un marcador celular característico de células madre hematopoy�ticas parecen ser incapaces de establecer tumores tras el trasplante (Blaire et al., 1997, Blood 89:3104-3112). El origen de célula madre de determinados tumores malignos hematopoy�ticos también encuentra respaldo en la observación de que pueden encontrarse anomalías cromos�micas específicas asociadas con tipos particulares de leucemia en células normales de linaje hematopoy�tico as� como en blastocitos leuc�micos. Por ejemplo, la translocaci�n recíproca t(9q34;22q11) asociada
25 con aproximadamente el 95% de la leucemia miel�gena crónica parece estar presente en células del linaje mieloide, eritroide y linfoide, lo que sugiere que se origina aberración cromos�mica en células madre hematopoy�ticas. Un subgrupo de células en determinados tipos de CML muestra el fenotipo de marcador celular de las células madre hematopoy�ticas.
Aunque las neoplasias hematopoy�ticas a menudo se originan a partir de células madre, las células progenitoras comprometidas o células diferenciadas más terminalmente de un linaje en desarrollo también pueden ser la fuente de algunas leucemias. Por ejemplo, la expresión forzada de la proteína de fusión Bcr/Abl (asociada con leucemia miel�gena crónica) en células progenitoras mieloides comunes o células progenitoras de granulocitos/macr�fagos produce un estado similar al leuc�mico. Además, algunas aberraciones cromos�micas asociadas con subtipos de
35 leucemia no se encuentran en la población celular con un fenotipo de marcador de células madre hematopoy�ticas, pero se encuentran en una población celular que muestra marcadores de un estado más diferenciado de la ruta hematopoy�tica (Turhan et al., 1995, Blood 85:2154-2161). Por tanto, mientras que las células progenitoras comprometidas y otras células diferenciadas pueden tener sólo un potencial limitado para división celular, las células leuc�micas pueden haber adquirido la capacidad para crecer de manera no regulada, en algunos casos imitando las características de autorrenovaci�n de las células madre hematopoy�ticas (Passegue et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100:11842-9).
En algunas realizaciones, la neoplasia hematopoy�tica tratada es una neoplasia linfoide, donde las células anómalas se derivan de y/o muestran el fenotipo característico de células del linaje linfoide. Las neoplasias linfoides pueden 45 subdividirse en neoplasias de células B, neoplasias de células T y de linfocitos citol�ticos naturales y linfoma de Hodgkin. Las neoplasias de células B pueden subdividirse adicionalmente en neoplasia de células B precursoras y neoplasia de células B maduras/periféricas. Neoplasias de células B a modo de ejemplo son leucemia/linfoma linfobl�stico de células B precursoras (leucemia linfobl�stica aguda de células B precursoras) mientras que neoplasias de células B maduras/periféricas a modo de ejemplo son leucemia linfoc�tica crónica de células B/linfoma linfoc�tico pequeño, leucemia prolinfoc�tica de células B, linfoma linfoplasmac�tico, linfoma espl�nico de zona marginal de células B, leucemia de células pilosas, plasmacitoma/mieloma de células plasm�ticas, linfoma extranodal de zona marginal de células B de tipo MALT, linfoma nodal de zona marginal de células B, linfoma folicular, linfoma de células del manto, linfoma difuso de células B grandes, linfoma mediast�nico de células B grandes, linfoma de efusión primaria y linfoma de Burkitt leucemia de células de Burkitt. El compuesto dado a 55 conocer actualmente es particularmente útil en el tratamiento de neoplasias de células T y de linfocitos citol�ticos naturales, que se subdividen adicionalmente en neoplasia de células T precursoras y neoplasias de células T maduras (periféricas). Una neoplasia de células T precursoras a modo de ejemplo es leucemia/linfoma linfobl�stica de células T precursoras (leucemia linfobl�stica aguda de células T precursoras) mientras que neoplasias de células T (periféricas) maduras a modo de ejemplo leucemia prolinfoc�tica de células T, leucemia linfoc�tica granular de células T, leucemia agresiva de linfocitos citol�ticos naturales, leucemia/linfoma de células T adultas (HTLV-1), linfoma extranodal de linfocitos citol�ticos naturales/células T, linfoma de células t de tipo enteropat�a, de tipo nasal, linfoma hepatoespl�nico de células T gamma-delta, linfoma subcutáneo de células T de tipo paniculitis, micosis fungoide/síndrome de Sezary, linfoma anapl�sico de células grandes, linfoma de células T periféricas, de tipo cut�neo primario, de células T/nulas, no caracterizado de otro modo, linfoma angioinmunobl�stico de células T, 65 linfoma anapl�sico de células grandes, de células/nulas, de tipo sist�mico primario. El tercer miembro de neoplasias linfoides es el linfoma de Hodgkin, también denominado enfermedad de Hodgkin. Los diagnósticos a modo de
ejemplo de esta clase que pueden tratarse con el compuesto incluyen, entre otros, linfoma de Hodgkin de predominio linfoc�tico nodular y diversas formas clásicas de enfermedad de Hodgkin, cuyos miembros a modo de ejemplo son linfoma de Hodgkin de tipo esclerosis nodular (grados 1 y 2), linfoma de Hodgkin clásico rico en linfocitos, linfoma de Hodgkin tipo celularidad mixta y linfoma de Hodgkin tipo depleci�n de linfocitos. En diversas
5 realizaciones, cualquiera de las neoplasias linfoides que est�n asociadas con actividad de JAC aberrante pueden tratarse con el compuesto inhibidor de JAK.
En algunas realizaciones, la neoplasia hematopoy�tica tratada es una neoplasia mieloide. Este grupo incluye una gran clase de trastornos proliferativos celulares que implican o muestran el fenotipo característico de las células del linaje mieloide. Las neoplasias mieloides pueden subdividirse en enfermedades mieloproliferativas, enfermedades mielodispl�sicas/mieloproliferativas, síndromes mielodispl�sicos y leucemias mieloides agudas. Enfermedades mieloproliferativas a modo de ejemplo son leucemia miel�gena crónica (por ejemplo, positivo para cromosoma Filadelfia (t(9;22)(qq34;q11)), leucemia neutrof�lica crónica, leucemia eosinof�lica crónica/síndrome hipereosinof�lico, mielofibrosis idiop�tica crónica, policitemia vera y trombocitemia esencial. Enfermedades
15 mielodispl�sicas/mieloproliferativas a modo de ejemplo son leucemia mielomonoc�tica crónica, leucemia miel�gena crónica típica y leucemia mielomonoc�tica juvenil. Síndromes mielodispl�sicos a modo de ejemplo son anemia resistente al tratamiento, con sideroblastos en anillo y sin sideroblastos en anillo, citopenia resistente al tratamiento (síndrome mielodispl�sico) con displasia multilinaje, anemia resistente al tratamiento (síndrome mielodispl�sico) con blastocitos en exceso, síndrome 5q y síndrome mielodispl�sico. En diversas realizaciones, cualquiera de las neoplasias mieloides que est�n asociadas con actividad de JAK aberrante puede tratarse con el compuesto inhibidor de JAK.
En algunas realizaciones, el compuesto inhibidor de JAK puede usarse para tratar leucemias mieloides agudas (AML), que representan una gran clase de neoplasias mieloides que tienen su propia subdivisión de trastornos.
25 Estas subdivisiones incluyen, entre otras, AML con traslocaciones citogen�ticas recurrentes, AML con displasia multilinaje y otra AML no clasificada de otro modo. Las AML con traslocaciones citogen�ticas recurrentes a modo de ejemplo incluyen, entre otras, AML con t(8; 21)(q22;q22), AML1(CBF-alfa)/ETO, leucemia promieloc�tica aguda (AML con t(15;17)(q22;q11-12) y variantes, PML/RAR-alfa), AML con eosin�filos de médula ósea anómalos (inv(16)(p13q22) o t(16;16)(p13;q11), CBFb/MYH11X) y AML con anomalías en 11q23 (MLL). AML con displasia multilinaje a modo de ejemplo son aquellas que est�n asociadas con o sin síndrome mielodispl�sico anterior. Otras leucemias mieloides agudas no clasificadas dentro de ningún grupo definible incluyen, AML m�nimamente diferenciada, AML sin maduración, AML con maduración, leucemia mielomonoc�tica aguda, leucemia monoc�tica aguda, leucemia eritroide aguda, leucemia megacarioc�tica aguda, leucemia bas�fila aguda y panmielosis aguda con mielofibrosis.
35 Un medio de someter a ensayo una inhibición de este tipo es la detección del efecto del compuesto de 2,4pirimidindiamina sobre la regulaci�n por incremento de productos g�nicos posteriores. En el ensayo de Ramos/IL4, se estimulan células B con la citocina interleucina-4 (IL-4) que conduce a la activación de la ruta de JAK/Stat a través de la fosforilaci�n de las cinasas de la familia JAK, JAK1 y JAK3, que a su vez fosforilan y activan el factor de transcripción Stat-6. Uno de los genes regulados por incremento mediante Stat-6 activado es el receptor de IgE de baja afinidad, CD23. Para estudiar el efecto de los inhibidores (por ejemplo, el compuesto de pirimindindiamina 2,4sustituida descrito en el presente documento) sobre las cinasas JAK1 y JAK3, se estimulan células B Ramos humanas con IL-4 humana. De 20 a 24 horas tras la estimulaci�n, se tiñen las células para la regulaci�n por incremento de CD23 y se analizan usando FACS. Una reducción de la cantidad de CD23 presente en comparación
45 con las condiciones control indica que el compuesto de prueba inhibe activamente la ruta de la cinasa JAK. Un ensayo a modo de ejemplo de este tipo se describe en mayor detalle en el ejemplo 2.
La actividad del compuesto descrito en el presente documento puede caracterizarse adicionalmente sometiendo a ensayo el efecto del compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento sobre la respuesta proliferativa de las células T humanas primarias. En este ensayo, las células T humanas primarias derivadas de sangre periférica y preactivadas a través de la estimulaci�n del receptor de células T y CD28, proliferan en cultivo en respuesta a la citocina interleucina-2 (IL-2). Esta respuesta proliferativa depende de la activación de las tirosina cinasas JAK-1 y JAK-3, que fosforilan y activan el factor de transcripción Stat-5. Las células T humanas primarias se incuban con el compuesto de 2,4-pirimidindiamina en presencia de IL-2 durante 72 horas y en el punto final del
55 ensayo se miden las concentraciones de ATP intracelular de punto final del ensayo para evaluar la disponibilidad celular. Una reducción en la proliferaci�n celular en comparación con las condiciones control es indicativa de inhibición de la ruta de la cinasa JAK.
La actividad del compuesto descrito en el presente documento puede caracterizarse adicionalmente sometiendo a ensayo el efecto del compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento sobre las células epiteliales de pulmón A549 y las células U937. Las células epiteliales de pulmón A549 y las células U937 regulan por incremento la expresión en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una variedad de estímulos diferentes. Por tanto, usando la expresión de ICAM-1 expresión como lectura, pueden evaluarse los efectos del compuesto de prueba sobre diferentes rutas de se�alizaci�n en el mismo tipo celular. La estimulaci�n con IL-1β a través del 65 receptor de IL-1β activa la ruta de TRAF6/NFKB dando como resultado la regulaci�n por incremento de ICAM-1. IFNγ induce la regulaci�n por incremento de ICAM-1 a través de la activación de la ruta de JAK1/JAK2. La regulaci�n por
incremento de ICAM-1 puede cuantificarse mediante citometr�a de flujo a través de una curva de dosis de compuesto y se calculan los valores de CE50.
Naturalmente, los expertos en la técnica apreciarán que el compuesto que muestra CI50 inferiores, (en el orden, por
5 ejemplo, de 100 μM, 75 μM, 50 μM, 40 μM, 30 μM, 20 μM, 15 μM, 10 μM, 5 μM, 1 μM, 500 nM, 100 nM, 10 nM, 1 nM, o incluso inferiores) puede ser particularmente útil en aplicaciones terapéuticas. En los casos en que se desea actividad específica para una célula particular, el compuesto puede someterse a ensayo para determinar la actividad con el tipo celular deseado y a examen inverso para determinar una falta de actividad frente a otros tipos celulares. El grado deseado de “inactividad” en tales exámenes inversos, o la razón deseada de actividad frente a inactividad, pueden variar para diferentes situaciones y pueden seleccionarse por el usuario.
La inhibición de la expresión estimulada por IL-4 de CD23 en células B puede medirse usando el ensayo descrito en el ejemplo 2, “Ensayo para línea de células B Ramos estimulada con IL-4.”
15 La inhibición de una actividad de células T primarias humanas puede determinarse en un ensayo in vitro convencional con células T primarias humanas aisladas. Un ensayo adecuado que puede usarse es el ensayo descrito anteriormente, “ensayo de proliferaci�n de células T humanas primarias estimuladas con IL-2.”
La inhibición de expresión de ICAM1 (CD54) inducida por exposición a IFNγ en células U937 o A549 puede determinarse en un ensayo celular funcional con una línea celular A549 o U937 aislada.
Utilidad del compuesto como herramienta de búsqueda
Un experto habitual en la técnica entendería que pueden usarse determinados complejos de proteína-ligando
25 cristalizados, en particular complejos JAK-ligando, y sus correspondientes coordinadas de estructura de rayos X para revelar nueva información estructural útil para entender la actividad biológica de las cinasas tal como se describe en el presente documento. Además, las características estructurales clave de las proteínas mencionadas anteriormente, en particular la forma del sitio de unión al ligando, son útiles en métodos para diseñar o identificar moduladores selectivos de cinasas y en resolver las estructuras de otras proteínas con características similares. Un complejo de este tipo proteína-ligando puede tener el compuesto descrito en el presente documento como su componente de ligando.
Adem�s, un experto habitual en la técnica apreciaría que tales cristales de calidad para rayos X adecuados pueden usarse como parte de un método de identificar un agente candidato que puede unirse a y modular la actividad de
35 cinasas. Tales métodos pueden caracterizarse por los siguientes aspectos: a) introducir en un programa inform�tico adecuado información que define un dominio de unión a ligando de una cinasa en una conformación (por ejemplo tal como se define mediante coordenadas de estructura de rayos X obtenidas de cristales de calidad para rayos X adecuados tal como se describió anteriormente) en el que el programa inform�tico crea un modelo de estructuras tridimensionales del dominio de unión a ligando, b) introducir un modelo de la estructura tridimensional de un agente candidato en el programa inform�tico, c) superponer el modelo del agente candidato en el modelo del dominio de unión a ligando, y d) evaluar si el modelo de agente candidato encaja espacialmente en el dominio de unión a ligando. Los aspectos a-d no se llevan a cabo necesariamente en el orden mencionado anteriormente. Tales métodos pueden suponer adicionalmente: realizar diseño de fármacos racional con el modelo de la estructura tridimensional y seleccionar un agente candidato potencial conjuntamente con modelado por ordenador.
45 Adicionalmente, un experto en la técnica apreciaría que tales métodos pueden suponer adicionalmente: emplear un agente candidato, as� determinado para encajar espacialmente en el dominio de unión a ligando, en un ensayo de actividad biológica para la modulación de cinasas, y determinar si dicho agente candidato modula la actividad cinasa en el ensayo. Tales métodos también pueden incluir administrar el agente candidato, determinado para modular la actividad cinasa, a un mamífero que padece un estado que puede tratarse mediante la modulación de cinasa, tal como los descritos anteriormente.
Adem�s, un experto en la técnica apreciaría que el compuesto descrito en el presente documento puede usarse en un método de evaluación de la capacidad de un agente de prueba para asociarse con una molécula o complejo
55 molecular que incluye un dominio de unión a ligando de una cinasa. Un método de este tipo puede caracterizarse por los siguientes aspectos: a) crear un modelo inform�tico de una cavidad de unión a cinasa usando coordenadas de estructuras obtenidas de cristales de calidad para rayos X adecuados de la cinasa, b) emplear algoritmos inform�ticos para realizar una operación de ajuste entre el agente de prueba y el modelo inform�tico de la cavidad de unión y c) analizar los resultados de la operación de ajuste para cuantificar la asociación entre el agente de prueba y el modelo inform�tico de la cavidad de unión.
Utilidad del compuesto como agente de examen
Para emplear el compuesto descrito en el presente documento en un método de examen para agentes candidatos
65 que se unen a, por ejemplo una proteína JAK, la proteína se une a un soporte y se añade el compuesto descrito en el presente documento al ensayo. Alternativamente, el compuesto descrito en el presente documento se une al soporte, por ejemplo a través de un ligador que no afecta de manera excesiva a la actividad biológica y se añade la proteína. Las clases de agentes candidatos entre los cuales pueden buscarse agentes de unión novedosos incluyen anticuerpos específicos, agentes de unión no naturales identificados en exámenes de bibliotecas clónicas, análogos de p�ptidos, etc. De particular interés son los ensayos de examen para agentes candidatos que tienen una baja
5 toxicidad para células humanas. Puede usarse una amplia variedad de ensayos para este fin, incluyendo ensayos de unión de proteína-proteína in vitro marcadas, ensayos de cambio de movilidad electrofor�tica, inmunoensayos para unión de proteínas, ensayos funcionales (ensayos de fosforilaci�n, etc.) y similares.
La determinación de la unión del agente candidato a, por ejemplo, una proteína JAK puede realizarse de varias formas. En un ejemplo, el agente candidato (el compuesto descrito en el presente documento) se marca, por ejemplo, con un resto fluorescente o radioactivo y se determina directamente la unión. Por ejemplo, esto puede realizarse uniendo toda o una parte de la proteína JAK a un soporte sólido, añadiendo un agente marcado (por ejemplo un compuesto descrito en el presente documento en el que se ha sustituido al menos un átomo por un isótopo detectable), separando por lavado el reactivo en exceso y determinando si la cantidad del marcador es la
15 presente en el soporte sólido. Pueden utilizarse diversas etapas de bloqueo y lavado tal como se conoce en la técnica. “Marcado” significa que el compuesto est� marcado o bien directamente o bien indirectamente con algo que proporciona una señal detectable, por ejemplo, radiois�topo, etiqueta fluorescente, enzima, anticuerpos, partículas tales como partículas magnéticas, etiqueta quimioluminiscente o moléculas de unión específicas, etc. Las moléculas de unión específicas incluyen pares, tales como biotina y estreptavidina, digoxina y antidigoxina, etc. Para los miembros de unión específicos, el miembro complementario se marcaría normalmente con una molécula que proporciona detección, según procedimientos conocidos, tal como se explicó resumidamente antes. El marcador puede proporcionar directa o indirectamente una señal detectable.
En algunas realizaciones, sólo se marca uno de los componentes. Por ejemplo, puede marcarse una proteína JAK
25 en las posiciones de tirosina usando 125I o con fluor�foros. Alternativamente, puede marcarse un componente con marcadores diferentes, usando 125I para las proteínas, por ejemplo, y un fluor�foro para los agentes candidatos.
El compuesto descrito en el presente documento también puede usarse como competidor para examinar candidatos de fármaco adicionales. “Agente bioactivo candidato” o “candidato de fármaco” o equivalentes gramaticales tal como se usan en el presente documento describen cualquier molécula, por ejemplo, proteína, oligop�ptido, molécula orgánica pequeña, polisac�rido, polinucle�tido, etc., que va a someterse a prueba para determinar la bioactividad. Pueden ser capaces de alterar directa o indirectamente el fenotipo de proliferaci�n celular o la expresión de una secuencia de proliferaci�n celular, incluyendo tanto secuencias de ácido nucleico como secuencias de proteína. En otros casos, se examina la alteración de actividad y/o unión de proteína de proliferaci�n celular. En el caso en que
35 se examina la actividad o unión de proteína, algunas realizaciones excluyen moléculas ya conocidas por unirse a esa proteína particular. Las realizaciones a modo de ejemplo de ensayos descritos en el presente documento incluyen agentes candidatos, que no se unen a la proteína diana en su estado nativo end�geno, denominadas en el presente documento agentes “exígenos”. En un ejemplo, los agentes exígenos excluyen adicionalmente anticuerpos frente a proteínas JAK.
Los agentes candidatos pueden englobar numerosas clases químicas, aunque normalmente son moléculas orgánicas que tienen un peso molecular de más de aproximadamente 100 daltons y menos de aproximadamente
2.500 daltons. Los agentes candidatos incluyen grupos funcionales necesarios para la interacción estructural con proteínas, particularmente unión de hidrógeno y unión lip�fila y normalmente incluyen al menos un grupo amina,
45 carbonilo, hidroxilo, éter o carboxilo, por ejemplo al menos dos de los grupos químicos funcionales. Los agentes candidatos a menudo incluyen estructuras carbonadas o de heterociclilo cíclicas y/o estructuras aromáticas o poliarom�ticas sustituidas con uno o más de los grupos funcionales anteriores. Los agentes candidatos también se encuentran entre biomol�culas incluyendo p�ptidos, sac�ridos, ácidos grasos, esteroides, purinas, pirimidinas, derivados, análogos estructurales o combinaciones de los mismos.
Los agentes candidatos se obtienen de una amplia variedad de fuentes incluyendo bibliotecas de compuestos naturales o sintéticos. Por ejemplo, se dispone de numerosos medios para síntesis aleatoria y dirigida de una amplia variedad de biomol�culas y compuestos orgánicos, incluyendo la expresión de oligonucle�tidos aleatorizados. Alternativamente, se dispone o se producen fácilmente bibliotecas de compuestos naturales en forma de extractos
55 de bacterias, hongos, plantas y animales. Adicionalmente, se modifican fácilmente bibliotecas y compuestos naturales o producidos sintéticamente a través de medios químicos, físicos y bioquímicos convencionales. Los agentes farmacol�gicos conocidos pueden someterse a modificaciones químicas dirigidas o aleatorias, tales como acilaci�n, alquilaci�n, esterificaci�n, amidificaci�n para producir análogos estructurales.
En un ejemplo, la unión del agente candidato se determina a través del uso de ensayos de unión competitivo. En este ejemplo, el competidor es un resto de unión conocido por unirse a una proteína JAK, tal como un anticuerpo, p�ptido, pareja de unión, ligando, etc. En determinadas circunstancias, puede haber unión competitiva como entre el agente candidato y el resto de unión, desplazando el resto de unión al agente candidato.
65 En algunas realizaciones, se marca el agente candidato. O bien el agente candidato, o bien el competidor, o ambos, se añade en primer lugar a por ejemplo una proteína JAK durante un tiempo suficiente para permitir la unión, si est� presente. Pueden realizarse incubaciones a cualquier temperatura que facilite la actividad óptima, normalmente entre 4�C y 40�C. Los periodos de incubaci�n se seleccionan para obtener actividad óptima, pero también pueden optimizarse para facilitar un rápido examen de alto rendimiento. El reactivo en exceso generalmente se retira o se elimina por lavado. Entonces se añade el segundo componente y se sigue la presencia o ausencia del componente
5 marcado, para indicar la unión.
En un ejemplo, se añade en primer lugar el competidor, seguido por el agente candidato. El desplazamiento del competidor es una indicación de que el agente candidato se est� uniendo a una proteína JAK y por tanto puede unirse a, y potencialmente modular, la actividad de la proteína JAK. En esta realización, puede marcarse cualquier componente. Por tanto, por ejemplo, si se marca el competidor, la presencia de marcador en la disolución de lavado indica desplazamiento por el agente. Alternativamente, si se marca el agente candidato, la presencia del marcador en el soporte indica desplazamiento.
En una realización alternativa, se añade en primer lugar el agente candidato, con incubaci�n y lavando, seguido por
15 el competidor. La ausencia de unión por parte del competidor puede indicar que el agente candidato se une a una proteína JAK con afinidad superior. Por tanto, si el agente candidato est� marcado, la presencia del marcador en el soporte, junto con una falta de unión de competidor, puede indicar que el agente candidato puede unirse a la proteína JAK.
Puede ser valioso identificar el sitio de unión de una proteína JAK. Esto puede realizarse en una variedad de formas. En una realización, una vez que la proteína JAK se ha identificado unida al agente candidato, la proteína JAK se fragmenta o modifica y los ensayos se repiten para identificar los componentes necesarios para la unión.
Se somete a prueba la modulación examinando agentes candidatos que pueden modular la actividad de una
25 proteína JAK incluyendo las etapas de combinar un agente candidato con la proteína JAK, como anteriormente, y determinar una alteración en la actividad biológica de la proteína JAK. Por tanto, en esta realización, el agente candidato debe tanto unirse (aunque esto puede no ser necesario), como alterar su actividad biológica o bioquímica tal como se define en el presente documento. Los métodos incluyen tanto métodos de examen in vitro como examen in vivo de células para determinar alteraciones en la viabilidad, morfología celulares, y similares.
Alternativamente, puede usarse examen diferencial para identificar candidatos de fármaco que se unen a una proteína JAK nativa, pero no pueden unirse a una proteína JAK modificada.
Pueden incluirse una variedad de otros reactivos en los ensayos de examen. Estos incluyen reactivos tales como
35 sales, proteínas neutras, por ejemplo, albúmina, detergentes, etc., que pueden usarse para facilitar la unión proteína-proteína óptima y/o reducir interacciones no específicas o de fondo. También pueden usarse reactivos que mejoran de otro modo la eficacia del ensayo, tales como inhibidores de proteasa, inhibidores de nucleasa, agentes anti-microbianos, etc. La mezcla de componentes puede añadirse en cualquier orden que proporcione la unión necesaria.
M�todos de administración
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento, o composiciones del mismo, ser� generalmente para su uso en una cantidad eficaz para lograr el resultado pretendido, por ejemplo, en una cantidad 45 eficaz para tratar o prevenir el estado particular que est� tratándose. El compuesto puede ser para administración terapéutica para lograr beneficio terapéutico o de manera profiláctica para lograr beneficio profiláctico. Mediante beneficio terapéutico se quiere decir erradicaci�n o mejora del trastorno subyacente que est� tratándose y/o erradicaci�n o mejora de uno o más de los síntomas asociados con el trastorno subyacente de manera que el paciente notifique una mejoría en la sensación o estado, a pesar de que el paciente puede estar aquejado todavía del trastorno subyacente. Por ejemplo, la administración de un compuesto a un paciente que padece alergia proporciona beneficio terapéutico no sólo cuando se erradica o mejora la respuesta alérgica subyacente, sino también cuando el paciente notifica una disminución en la gravedad o duración de los síntomas asociados con la alergia tras la exposición al al�rgeno. Como otro ejemplo, el beneficio terapéutico en el contexto de asma incluye una mejoría en la respiración tras el comienzo de un ataque asmático o una reducción en la frecuencia o gravedad
55 de los episodios asmáticos. Como otro ejemplo específico, el beneficio terapéutico en el contexto del rechazo de trasplante incluye la capacidad para aliviar un episodio de rechazo agudo, tal como, por ejemplo, HVGR o GVHR, o la capacidad para prolongar el periodo de tiempo entre el comienzo de los episodios de rechazo agudo y/o el comienzo del rechazo crónico. El beneficio terapéutico incluye detener o ralentizar la progresión de la enfermedad, independientemente de si se consigue mejoría.
La cantidad de compuesto administrado depender� de una variedad de factores, incluyendo, por ejemplo, el estado particular que est� tratándose, el modo de administración, la gravedad del estado que est� tratándose, la edad y el peso del paciente, la biodisponibilidad del compuesto activo particular. La determinación de una dosificación eficaz est� completamente dentro de las capacidades de los expertos en la técnica.
65 Tal como conocen los expertos en la técnica, la dosificación preferida del compuesto de 2,4-pirimidindiamina depender� de la edad, el peso, la salud general y la gravedad del estado del individuo que est� tratándose. También puede ser necesario adaptar la dosificación al sexo del individuo y/o la capacidad pulmonar del individuo, cuando se administra mediante inhalaci�n. La dosificación también puede adaptarse a individuos que padecen más de un estado o a aquellos individuos que tienen estados adicionales que afectan a la capacidad pulmonar y la capacidad
5 para respirar normalmente, por ejemplo, enfisema, bronquitis, neumonía e infecciones respiratorias. La dosificación y frecuencia de administración del compuesto o prof�rmacos del mismo, también depender� de si el compuesto se formula para el tratamiento de episodios agudos de un estado o para el tratamiento profiláctico de un trastorno. Por ejemplo, episodios agudos de estados alérgicos, incluyendo asma relacionada con alergia, rechazo de trasplante, etc. Un m�dico experto podr� determinar la dosis óptima para un individuo particular.
10 Para la administración profiláctica, el compuesto puede ser para su administración a un paciente en riesgo de desarrollar uno de los estados descritos anteriormente. Por ejemplo, si se desconoce sin un paciente es alérgico a un fármaco particular, el compuesto puede administrarse antes de la administración del fármaco para evitar o mejorar una respuesta alérgica al fármaco. Alternativamente, la administración profiláctica puede aplicarse para
15 evitar el comienzo de los síntomas en un paciente diagnosticado con el trastorno subyacente. Por ejemplo, el compuesto puede administrarse a un paciente que padece alergia antes de la exposición esperada al al�rgeno.
El compuesto también puede administrarse de manera profiláctica a individuos sanos que se exponen repetidamente a agentes conocidos para una de las enfermedades descritas anteriormente para impedir el comienzo del trastorno.
20 Por ejemplo, el compuesto puede administrarse a un individuo sano que se expone repetidamente a un al�rgeno conocido por inducir alergias, tales como l�tex, en un esfuerzo por impedir que el individuo desarrolle una alergia. Alternativamente, el compuesto puede administrarse a un paciente que padece asma antes de participar en actividades que desencadenen ataques de asma para disminuir la gravedad de, o evitar completamente, un episodio asmático.
25 En el contexto del rechazo de trasplantes, el compuesto puede administrarse mientras el paciente no est� teniendo una reacción de rechazo agudo para evitar el comienzo del rechazo y/o antes de la aparición de las indicaciones clónicas de rechazo crónico. El compuesto puede administrarse sist�micamente al paciente as� como administrarse al tejido u órgano antes de trasplantar el tejido u órgano en el paciente.
30 La cantidad de compuesto administrado depender� de una variedad de factores, incluyendo, por ejemplo, la indicación particular que est� tratándose, el modo de administración, si el beneficio deseado es profiláctico o terapéutico, la gravedad de la indicación que est� tratándose y la edad y el peso del paciente, y la biodisponibilidad del compuesto activo particular. La determinación de una dosificación eficaz est� completamente dentro de las
35 capacidades de los expertos en la técnica.
Las dosificaciones eficaces pueden estimarse inicialmente a partir de ensayos in vitro. Por ejemplo, puede formularse una dosificación inicial para su uso en animales para lograr una concentración en suero o sangre circulante de compuesto activo que es de o es superior a una CI50 del compuesto particular tal como se mide en un
40 ensayo in vitro. El cálculo de dosificaciones para lograr tales concentraciones en suero o sangre circulante teniendo en cuenta la biodisponibilidad del compuesto particular est� completamente dentro de las capacidades de los expertos en la técnica. Para orientación, se remite al lector a Fingl & Woodbury, “General Principles,” En: Goodman and Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Capítulo 1, p�gs. 1-46, última edición, Pergamagon Press, y las referencias citadas en el mismo.
45 Las dosificaciones iniciales también pueden estimarse a partir de datos in vivo, tales como modelos animales. Los modelos animales útiles para someter a prueba la eficacia del compuesto para tratar o prevenir las diversas enfermedades descritas anteriormente se conocen bien en la técnica. Modelos animales adecuados de reacciones de hipersensibilidad o alérgicas se describen en Foster, (1995) Allergy 50 (21Suppl):6-9, discusión 34-38 y Tumas et
50 al., (2001), J. Allergy Clin. Immunol. 107(6):1025-1033. Modelos animales adecuados de rinitis alérgica se describen en Szelenyi et al., (2000), Arzneimittelforschung 50(11):1037-42; Kawaguchi et al., (1994), Clin. Exp. Allergy 24(3):238-244 y Sugimoto et al., (2000), Immunopharmacology 48(1):1-7. Modelos animales adecuados de conjuntivitis alérgica se describen en Carreras et al., (1993), Br. J. Ophthalmol. 77(8):509-514; Saiga et al., (1992), Ophthalmic Res. 24(1):45-50; y Kunert et al., (2001), Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 42(11):2483-2489. Modelos
55 animales adecuados de mastocitosis sist�mica se describen en O’Keefe et al., (1987), J. Vet. Intern. Med. 1(2):75-80 y Bean-Knudsen et al., (1989), Vet. Pathol. 26(1):90-92. Modelos animales adecuados de síndrome de hiper IgE se describen en Claman et al., (1990), Clin. Immunol. Immunopathol. 56(1):46-53. Modelos animales adecuados de linfoma de células B se describen en Hough et al., (1998), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:13853-13858 y Hakim et al., (1996), J. Immunol. 157(12):5503-5511. Modelos animales adecuados de trastornos at�picos tales como dermatitis
60 at�pica, eccema at�pico y asma at�pico se describen en Chan et al., (2001), J. Invest. Dermatol. 117(4):977-983 y Suto et al., (1999), Int. Arch. Allergy Immunol. 120 (Supl. 1): 70-75. Modelos animales adecuados de rechazo de trasplante, tales como modelos de HVGR, se describen en O’Shea et al., (2004), Nature Reviews Drug Discovery 3:555-564; Cetkovic-Curlje & Tibbles, (2004), Current Pharmaceutical Design 10: 1767-1784; y Chengelian et al., (2003), Science 302:875-878. Los expertos en la técnica de manera habitual pueden adaptar rutinariamente tal
65 información para determinar las dosificaciones adecuadas para la administración a seres humanos.
Las cantidades de dosificación estarán normalmente en el intervalo de desde aproximadamente 0,0001 � 0,001 � 0,01 mg/kg/día hasta aproximadamente 100 mg/kg/día, pero pueden ser superiores o inferiores, dependiendo de, entre otros factores, la actividad del compuesto, su biodisponibilidad, el modo de administración y diversos factores comentados anteriormente. La cantidad y el intervalo de dosificación pueden ajustarse individualmente para
5 proporcionar niveles plasm�ticos del compuesto que son suficientes para mantener el efecto terapéutico o profiláctico. Por ejemplo, el compuesto puede administrarse una vez a la semana, varias veces a la semana (por ejemplo, cada dos días), una vez al día o múltiples veces al día, dependiendo, entre otras cosas, del modo de administración, la indicación específica que est� tratándose y el criterio del m�dico que prescribe. En casos de administración local o captación selectiva, tal como administración típica local, la concentración local eficaz de compuesto activo puede no estar relacionada con la concentración plasm�tica. Los expertos en la técnica podrán optimizar dosificaciones locales eficaces sin experimentación excesiva.
Preferiblemente, el compuesto proporcionar� beneficio terapéutico o profiláctico sin producir toxicidad sustancial. La toxicidad del compuesto puede determinarse usando procedimientos farmacéuticos convencionales. La razón de
15 dosis entre el efecto tóxico y el terapéutico (o profiláctico) es el índice terapéutico. Se prefiere un índice terapéutico alto.
La descripción anterior relacionada con los requisitos de dosificación para el compuesto de pirimidindiamina 2,4sustituido es adecuada para las dosificaciones requeridas para prof�rmacos, entendiendo, de manera evidente para el experto en la técnica, que la cantidad de prof�rmaco(s) administrado(s) también depender� de una variedad de factores, incluyendo por ejemplo, la biodisponibilidad del/de los prof�rmaco(s) particular(es) y la tasa de conversación y eficacia para dar lugar al compuesto farmacol�gico activo con la vía de administración seleccionada. La determinación de una dosificación eficaz del/de los prof�rmaco(s) para un uso y modo de administración particulares est� completamente dentro de las capacidades de los expertos en la técnica.
25 Las dosificaciones eficaces pueden estimarse inicialmente a partir de ensayos de actividad y metabolismo in vitro. Por ejemplo, puede formularse una dosificación inicial de prof�rmaco para su uso en animales para lograr una concentración en suero o sangre circulante del compuesto activo de metabolito que es de o es superior a una CI50 del compuesto particular tal como se mide en un ensayo in vitro, tal como CHMC o BMMC in vitro y otros ensayos in vitro descritos en la solicitud estadounidense con n.� de serie 10/355.543 presentada el 31 de enero de 2003 (documento US 2004/0029902A1), solicitud internacional con n.� de serie PCT/US03/03022 presentada el 31 de enero de 2003 (documento WO 03/063794), solicitud estadounidense con n.� de serie 10/631.029 presentada el 29 de julio de 2003, solicitud internacional con n.� de serie PCT/US03/24087 (documento WO 2004/014382), solicitud estadounidense con n.� de serie 10/903.263 presentada el 30 de julio de 2004 y solicitud internacional con n.� de
35 serie PCT/US2004/24716 (documento WO 05/016893). El cálculo de dosificaciones para lograr tales concentraciones en suero o sangre circulante teniendo en cuenta la biodisponibilidad del prof�rmaco particular a través de la ruta de administración deseada est� completamente dentro de las capacidades de los expertos en la técnica. Para orientación, se remite al lector a Fingl & Woodbury, “General Principles,” En: Goodman and Gilman’s The Pharmaceutical Basis of Therapeutics, Capítulo 1, p�gs. 1-46, última edición, Pergamagon Press, y las referencias citadas en el mismo.
Tal como se da a conocer en el presente documento hay kits para la administración de la 2,4-pirimidindiamina, prof�rmaco del mismo o formulaciones farmacéuticas que incluyen el compuesto que pueden incluir una cantidad de dosificación de al menos una 2,4-pirimidindiamina o una composición que incluye al menos una 2,4-pirimidindiamina,
45 tal como se da a conocer en el presente documento. Los kits pueden incluir adicionalmente acondicionamiento y/o instrucciones adecuados para el uso del compuesto. Los kits también pueden incluir un medio para la administración de la al menos una 2,4-pirimidindiamina o composiciones que incluyen al menos una 2,4-pirimidindiamina, tal como un inhalador, un dispensador en pulverizador (por ejemplo, pulverizador nasal), jeringuilla para inyección o envase a presión para cápsulas, comprimidos, supositorios u otros dispositivo tal como se describe en el presente documento. Un kit también puede proporcionar el compuesto y reactivos para preparar una composición para su administración. La composición puede estar en forma seca o liofilizada o en una disolución, particularmente una disolución estéril. Cuando la composición est� en una forma seca, el reactivo puede incluir un diluyente farmac�uticamente aceptable para preparar una formulación líquida. El kit puede contener un dispositivo para la administración o para dispensar las composiciones, incluyendo, pero sin limitarse a, jeringuilla, pipeta, parche transd�rmico o inhalador.
55 Los kits pueden incluir otros compuestos terapéuticos para su uso conjuntamente con el compuesto descrito en el presente documento. Los agentes terapéuticos pueden ser compuestos inmunosupresores o anti-al�rgenos. Estos compuestos pueden proporcionarse en forma separada o mezclada con el compuesto de la presente invención.
Los kits incluirán instrucciones apropiadas para la preparación y administración de la composición, efectos secundarios de las composiciones y cualquier otra información relevante. Las instrucciones pueden estar en cualquier formato adecuado, incluyendo, pero sin limitarse a, impresos, cinta de vídeo, disco legible en ordenador o disco óptico.
65 Un kit dado a conocer en el presente documento incluye el compuesto dado a conocer en el presente documento, o un prof�rmaco del mismo, acondicionamiento e instrucciones para su uso.
Otro kit dado a conocer en el presente documento incluye la formulación farmacéutica que incluye el compuesto dado a conocer en el presente documento o un prof�rmaco del mismo y al menos un excipiente, diluyente, conservante, estabilizador farmac�uticamente aceptable, o mezcla de los mismos, acondicionamiento e
5 instrucciones para su uso.
Se proporciona otro kit dado a conocer en el presente documento que es para tratar a un individuo que padece o es propenso a padecer los estados descritos en el presente documento, incluyendo un recipiente que incluye una cantidad de dosificación de la 2,4-pirimidindiamina o composición, tal como se da a conocer en el presente
10 documento e instrucciones para su uso. El recipiente puede ser cualquiera de los conocidos en la técnica y apropiado para el almacenamiento y la administración de formulaciones orales, intravenosas, típicas, rectales, uretrales o inhaladas.
Tambi�n se dan a conocer en el presente documento kits que contienen dosificaciones suficientes de la 2,4
15 pirimidindiamina o composición para proporcionar tratamiento eficaz para un individuo durante un periodo prolongado, tal como una semana, 2 semanas, 3 semanas, 4 semanas, 6 semanas u 8 semanas o más.
Un experto en la técnica apreciar� que las realizaciones resumidas anteriormente pueden usarse juntas en cualquier combinación adecuada para generar realizaciones adicionales no citadas expresamente antes y que se considera
20 que tales realizaciones son parte de la presente invención.
S�NTESIS DE COMPUESTO
El compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento puede sintetizarse a través de una
25 variedad de rutas sintéticas diferentes usando materiales de partida disponibles comercialmente y/o materiales de partida preparados mediante métodos sintéticos convencionales. Métodos a modo de ejemplo adecuados que pueden adaptarse de manera rutinaria para sintetizar el compuesto de 2,4-pirimidindiamina y los prof�rmacos descritos en el presente documento se encuentran en patente estadounidense n.� 5.958.935. Ejemplos específicos que describen la síntesis de numerosos prof�rmacos y el compuesto de 2,4-pirimidindiamina, as� como productos
30 intermedios se describen por tanto en la solicitud estadounidense con n.� de serie 10/355,543, presentada el 31 de enero de 2003 (documento US 2004/0029902A1). Métodos a modo de ejemplo adecuados que pueden usarse de manera rutinaria y/o adaptarse para sintetizar el compuesto de pirimidindiamina 2,4-sustituido activo también pueden encontrarse en la solicitud internacional con n.� de serie PCT/US03/03022 presentada el 31 de enero de 2003 (documento WO 03/063794), la solicitud estadounidense con n.� de serie 10/631.029 presentada el 29 de julio de
35 2003, la solicitud internacional con n.� de serie PCT/US03/24087 (documento WO 2004/014382), la solicitud estadounidense con n.� de serie 10/903.263 presentada el 30 de julio de 2004 y la solicitud internacional con n.� de serie PCT/US2004/24716 (documento WO 05/016893). El compuesto descrito en el presente documento (y prof�rmacos del mismo) puede prepararse mediante la adaptación de rutina de estos métodos.
40 También se describen métodos sintéticos a modo de ejemplo específicos para las pirimidindiaminas 2,4-sustituidas descritas en el presente documento en el ejemplo de referencia 1, a continuación. Los expertos en la técnica también podrán adaptar fácilmente estos ejemplos para la síntesis de pirimidindiaminas 2,4-sustituidas adicionales tal como se describe en el presente documento.
45 Una variedad de métodos sintéticos a modo de ejemplo para sintetizar el compuesto de 2,4-pirimidindiamina descrito en el presente documento se representan en los esquemas (I)-(VII), a continuación. Estos métodos pueden adaptarse de manera rutinaria para sintetizar el compuesto de pirimidindiamina 2,4-sustituido descrito en el presente documento. Tras cada etapa de reacción, el producto puede purificarse o, dependiendo de la química, puede usarse en la siguiente etapa sin purificación.
50 Por ejemplo, el compuesto puede sintetizarse a partir de uracilos sustituidos o no sustituidos tal como se ilustra en el esquema (I), a continuación. En el esquema (I), el anillo A, R5, (R2)p, X, Y, Z1 y Z2 son tal como se define en el presente documento en la tabla 1. Según el esquema (I), el uracilo A-1 se dihalogena en las posiciones 2 y 4 usando un agente de halogenaci�n convencional tal como POCl3 (u otro agente de halogenaci�n convencional) en
55 condiciones normales para dar 2,4-dicloropirimidina A-2. En la pirimidindiamina A-2, el cloruro en la posición C4 puede ser más reactivo hacia nucle�filos que el cloruro en la posición C2. Esto puede aprovecharse para sintetizar 2,4-pirimidindiaminas I haciendo reaccionar en primer lugar la 2,4-dicloropirimidina A-2 con un equivalente de amina A-3, dando 4N-sustituido-2-cloro-4-pirimidinamina A-4, seguido por amina A-5 para dar una 2,4-pirimidindiamina de fórmula A-6.
60 Esquema (I)
Las reacciones representadas en el esquema (I) pueden avanzar más rápidamente cuando las mezclas de reacción se calientan a través de microondas. Cuando se calientan de esta forma, pueden usarse las siguientes condiciones: 5 calentar hasta 175�C en etanol durante 5-20 min en un reactor Smith (Personal Chemistry, Uppsala, Suecia) en un tubo sellado (a 20 bar de presión).
Los materiales de partida de uracilo A-1 pueden adquirirse de fuentes comerciales o prepararse usando técnicas convencionales de química orgánica. Los uracilos disponibles comercialmente que pueden usarse como materiales 10 de partida en el esquema (I) incluyen, a modo de ejemplo y no de limitación, uracilo (Aldrich n.� 13.078-8; registro CAS 66-22-8); 5-bromouracilo (Aldrich n.� 85.247-3; registro CAS 51-20-7; 5-fluorouracilo (Aldrich n.� 85,847-1; registro CAS 51-21-8); 5-iodouracilo (Aldrich n.� 85.785-8; registro CAS 696-07-1); 5-nitrouracilo (Aldrich n.� 85.2767; registro CAS 611-08-5); 5-(trifluorometil)-uracilo (Aldrich n.� 22,327-1; registro CAS 54-20-6). Uracilos 5-sustituidos adicionales est�n disponibles en General Intermediates de Canadá, Inc., Edmonton, CA y/o Interchim, Cedex,
15 Francia, o pueden prepararse usando técnicas convencionales. Más adelante se proporcionan múltiples referencias de libros de texto que enseñan métodos sintéticos.
Las aminas A-3 y A-5 pueden adquirirse de fuentes comerciales o, alternativamente, pueden sintetizarse utilizando técnicas convencionales. Por ejemplo, pueden sintetizarse aminas adecuadas a partir de precursores nitro usando
20 química convencional. En la sección de ejemplos se proporcionan reacciones a modo de ejemplo específicas. Véase también Vogel, 1989, Practical Organic Chemistry, Addison Wesley Longman, Ltd. y John Wiley & Sons, Inc.
Los expertos en la técnica reconocerán que en algunos casos, las aminas A-3 y A-5 y/o sustituyente X en el uracilo A-1 pueden incluir grupos funcionales que requieren protección durante la síntesis. La identidad exacta de
25 cualquier/cualesquiera grupo(s) protector(es) usado(s) depender� de la identidad del grupo funcional que est� protegiéndose y resultar� evidente para los expertos en la técnica. Puede encontrarse orientación para seleccionar grupos protectores apropiados, as� como estrategias sintéticas para su unión y eliminación, por ejemplo, en Green & Wuts.
30 Por tanto, grupo protector se refiere a un grupo de átomos que, cuando se une a un grupo funcional reactivo en una molécula, enmascara, reduce o impide la reactividad del grupo funcional. Normalmente, un grupo protector puede eliminarse selectivamente cuando se desee durante el transcurso de una síntesis. Ejemplos de grupos protectores pueden encontrarse en Green & Wuts y en Harrison et al., Compendium of Synthetic Organic Methods, Vols. 1-8, 1971-1996, John Wiley & Sons, NY. Los grupos protectores de amino representativos incluyen, pero no se limitan a,
35 grupos formilo, acetilo, trifluoroacetilo, bencilo, benciloxicarbonilo (“CBZ”), terc-butoxicarbonilo (“Boc”), trimetilsililo (“TMS”), 2-trimetilsilil-etanosulfonilo (“TES”), tritilo y tritilo sustituido, aliloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo (“FMOC”), nitro-veratriloxicarbonilo (“NVOC”) y similares. Los grupos protectores de hidroxilo representativos incluyen, pero no se limitan a, aquellos en los que el grupo hidroxilo o bien se acila para formar ésteres de benzoato y acetato o bien se alquila para formar ésteres de bencilo y tritilo, as� como alquil �teres, tetrahidropiranil �teres,
40 trialquilsilil �teres (por ejemplo, grupos TMS o TIPPS) y alil �teres.
Aunque los esquemas sintéticos comentados anteriormente pueden no ilustrar el uso de grupos protectores, los expertos en la técnica reconocerán que en algunos casos determinados sustituyentes, tales como, por ejemplo, R2 y/u otros grupos, pueden incluir funcionalidad que requiere protección. La identidad exacta del grupo protector usado 45 depender�, entre otras cosas, de la identidad del grupo funcional que est� protegiéndose y de las condiciones de
reacci�n usadas en el esquema sintético particular y resultar� evidente para los expertos en la técnica. Puede encontrarse orientación para seleccionar grupos protectores, su unión y eliminación adecuadas para una aplicación particular, por ejemplo, en Green & Wuts.
5 Pueden prepararse prof�rmacos del compuesto descrito en el presente documento mediante modificación de rutina de los métodos descritos anteriormente. Alternativamente, tales prof�rmacos pueden prepararse haciendo reaccionar una 2,4-pirimidindiamina protegida de manera adecuada con un reactivo adecuado para añadir el progrupo deseado. Se conocen bien las condiciones para llevar a cabo tales reacciones y para desproteger el producto para dar un prof�rmaco tal como se describe en el presente documento.
10 Se conocen en la técnica múltiples referencias que enseñan métodos útiles para sintetizar pirimidinas generalmente, as� como materiales de partida descritos en el esquema (I). Para orientación específica, se remite al lector a Brown,
D. J., “The Pyrimidines”, en The Chemistry of Heterocyclic Compound, Volumen 16 (Weissberger, A., Ed.), 1962, Interscience Publishers, (una división de John Wiley & Sons), Nueva York (“Brown I”); Brown, D. J., “The 15 Pyrimidines”, en The Chemistry of Heterocyclic Compound, Volumen 16, Suplemento I (Weissberger, A. y Tailor, E. C., Ed.), 1970, Wiley-Interscience, (una división de John Wiley & Sons), Nueva York (Brown II”); Brown, D. J., “The Pyrimidines”, en The Chemistry of Heterocyclic Compound, Volumen 16, Suplemento II (Weissberger, A. y Tailor, E. C., Ed.), 1985, An Interscience Publication (John Wiley & Sons), Nueva York (“Brown III”); Brown, D. J., “The Pyrimidines” en The Chemistry of Heterocyclic Compounds, Volumen 52 (Weissberger, A. y Tailor, E. C., Ed.), 1994, 20 John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, p�gs. 1-1509 (Brown IV”); Kenner, G. W. y Todd, A., en Heterocyclic Compound, Volumen 6, (Elderfield, R. C., Ed.), 1957, John Wiley, Nueva York, Capítulo 7 (pirimidinas); Paquette, L. A., Principles of Modern Heterocyclic Chemistry, 1968, W. A. Benjamin, Inc., Nueva York, p�gs. 1 - 401 (síntesis de uracilo, p�gs. 313, 315; síntesis de pirimidindiamina, p�gs. 313-316; síntesis de amino-pirimidindiamina, pág. 315); Joule, J. A., Mills, K. y Smith, G. F., Heterocyclic Chemistry, 3� Edición, 1995, Chapman y Hall, Londres, RU, p�gs. 1
25 - 516; Vorbr�ggen, H. y Ruh-Pohlenz, C., Handbook of Nucleoside Synthesis, John Wiley & Sons, Nueva York, 2001, p�gs. 1-631 (protección de pirimidinas mediante acilaci�n, p�gs. 90-91; sililaci�n de pirimidinas, p�gs. 91-93); Joule,
J. A., Mills, K. y Smith, G. F., Heterocyclic Chemistry, 4� Edición, 2000, Blackwell Science, Ltd, Oxford, RU, p�gs. 1 589; y Comprehensive Organic Synthesis, Volúmenes 1 - 9 (Trost, B. M. y Fleming, I., Ed.), 1991, Pergamon Press, Oxford, RU.
Ejemplos
La invención se entiende adicionalmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos, que no pretenden ser limitativos. Diversas modificaciones de las realizaciones descritas en el presente documento resultarían evidentes
35 para un experto habitual en la técnica a partir de la descripción anterior y las figuras adjuntas.
Una realización de la invención es un compuesto, según la fórmula I, tal como se describe en los ejemplos a continuación.
40 En los ejemplos a continuación, as� como a lo largo de toda la solicitud, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados. Si no se definen, los términos tienen sus significados aceptados generalmente.
TFA = ácido trifluoroac�tico mmol = milimol
MeOH = metanol nM = nanomolar
ETOAc = acetato de etilo DMSO = dimetilsulf�xido
i-PrOH = isopropanol mL � ml = mililitro
EtOH = etanol mg = miligramo
s = singlete psi = libras por pulgada2
d = doblete N = normal
t = triplete μM = micromolar
q = cuartete rpm = revoluciones/minuto
m = multiplete ta = temperatura ambiente
dd = doblete o dobletes ac. = acuoso
a = ancho μl = microlitro
EM = espectro de masas FBS = suero bovino fetal
EM (ES) = espectrometr�a de masas (electrospray) CL-EM = cromatograf�a de líquidos espectrómetro de masas
RP-HPLC = cromatograf�a de líquidos a alta presión de fase inversa FACS = citometr�a de flujo
EJEMPLO DE REFERENCIA 1: SÍNTESIS DE PIRIMIDIN-2,4-DIAMINAS
S�ntesis de 5-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona:
5 A un vial con 5-aminobenzo[d]oxazol-2(3H)-ona (300,1 mg, 2,0 mmol) y 2,4-dicloro-5-metilpirimidina (423,8 mg, 2,6 mmol), se le añadieron MeOH (8 ml) y H2O (2 ml). Se agit� la mezcla turbia a temperatura ambiente durante 64 h. Se recogió el precipitado de la mezcla de reacción mediante filtración, lavando con EtOAc (3 ml x 2) y se secó adicionalmente a vacío. Se obtuvo 5-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona como un sólido blanquecino: 394 mg (rendimiento del 71%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,68 (s a, 1H), 8,62 (s, 1H), 7,94 (d, J = 0,8, 1H), 6,97 (d, J = 2,0, 1H), 6,82 (d, J = 8,1, 1H), 6,74 (dd, J = 2,0, 8,1, 1H), 2,15 (s, 3H); CL-EM (M+) m/z 277,10.
S�ntesis de N4-(benzo[d]oxazol-2(3H)-on-5-il)-N2-(3-metilsulfonil)fenil)-5-metilpirimidin-2,4-diamina: (I-16)
15 A un vial con 5-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona (138,3 mg, 0,5 mmol) y clorhidrato de 3(metilsulfonil)bencenamina (207,7 mg, 1,0 mmol), se le a�adi� i-PrOH (10 ml), seguido por TFA (116 μl, 1,5 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la mezcla de reacción a 85-90�C durante 40 h. Se elimin� el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se obtuvo N4-(benzo[d]oxazol-2(3H)-on-5-il)-N2-(3metilsulfonil)fenil)-5-metilpirimidin-2,4-diamina como una sal de mono-trifluoroacetato: un sólido blanquecino, 129 mg (rendimiento del 49%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,60 (s, 1H), 9,43 (s, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 8,11 (d a, J = 7,5, 1H), 7,96 (d, J = 0,8, 1H), 7,49 - 7,33 (m, 4H), 7,27 (d, J = 8,5, 1H), 3,13 (s, 3H), 2,16 (s, 3H); CL-EM (M+) m/z 412,47.
S�ntesis de 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-ilamino)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona:
25 A un vial con 5-amino-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (298,3 mg, 2,0 mmol) y 2,4-dicloro-5-fluoropirimidina (434,1 mg, 2,6 mmol), se le añadieron MeOH (8 ml) y H2O (2 ml). Se agit� la disolución turbia a ta durante 3 días. Se recogió el precipitado de la mezcla de reacción mediante filtración y lavando con EtOAc (3 ml x 2) y se secó adicionalmente a vacío. Se obtuvo 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-ilamino)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona como un sólido blanquecino: 390,3 mg (rendimiento del 70%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 10,69 (s, 1H), 10,63 (s, 1H), 9,87 (s, 1H), 8,27 (d, J = 3,6, 1H), 7,35 (d, J = 1,9, 1H), 7,18 (dd, J = 1,9, 8,3, 1H), 6,93 (d, J = 8,3, 1H); CL-EM (M+) m/z 279,80.
S�ntesis de 4-(5-nitropiridin-2-il)morfolina:
35 En un matraz de fondo redondo, a una disolución en diclorometano (125 ml) de 2-bromo-5-nitropiridina (5 g, 24,6 mmol), se le a�adi� morfolina (5,4 ml, 61,5 mmol). Se sometió a reflujo la reacción durante 4 h, entonces se enfri� hasta temperatura ambiente. Posteriormente se lav� la disolución con disolución saturada acuosa de bicarbonato de sodio y salmuera. Se secó la fase orgánica (Na2SO4), se filtr� y se elimin� el disolvente a vacío. Se obtuvo 4-(5nitropiridin-2-il)morfolina, un sólido amarillo: 4,9 g (rendimiento del 95%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 8,95 (d, J = 2,7, 1H), 8,22 (dd, J = 2,7, 9,6, 1H), 6,92 (d, J = 9,6, 1H), 3,74 - 3,65 (m, 8H); CL-EM (M+) m/z 210,34.
S�ntesis de 6-morfolinopiridin-3-amina:
45 En una disolución en EtOH (250 ml) de 4-(5-nitropiridin-2-il)morfolina (4,9 g, 23,4 mmol), se a�adi� Pd al 10% sobre carbón activado, 500 mg. Se llev� a cabo hidrogenación en un matraz Parr a temperatura ambiente, a 40 psi durante 2 h. Se separaron por filtración los sólidos y se recogió el filtrado. Se elimin� el disolvente a vacío. Se obtuvo 6morfolinopiridin-3-amina, como un sólido púrpura: 3,7 g (rendimiento del 88%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 7,64 (d, J = 2,7, 1H), 6,96 (dd, J = 2,7, 8,8, 1H), 6,65 (d, J = 8,8, 1H), 4,63 (s, 2H), 3,72 - 3,69 (m, 4H), 3,21- 3,18 (m, 4H); CL-EM (M+) m/z 180,08.
S�ntesis de N4-(bencimidazolin-2-on-5-il)-N2-((2-morfolinil)piridin-5-il)-5-fluoropirimidin-2,4-diamina: (II-19)
A un vial con 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-ilamino)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (27,6 mg, 0,1 mmol) y 6
55 morfolinopiridin-3-amina (35,8 mg, 0,2 mmol), se le a�adi� i-PrOH (2 ml), seguido por TFA (10 μl, 0,13 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la disolución turbia a 95�C durante 2 días. Se elimin� el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se obtuvo N4-(bencimidazolin-2-on-5-il)-N2-((2-morfolinil)piridin5-il)-5-fluoropirimidin-2,4-diamina como un sólido naranja claro, como una sal de di-trifluoroacetato: 51,1 mg (rendimiento del 79%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 10,61 (s, 2H), 9,79 (s a, 1H), 9,55 (s a, 1H), 8,31 (s, 1H), 8,13 (d, J = 4,4, 1H), 7,92 (d a, J = 8,8, 1H), 7,22 (d, J = 8,1, 1H), 7,18 (s, 1H), 7,10 (d a, J = 8,8, 1H), 6,89 (d, J = 8,1, 1H), 3,78 - 3,75 (m, 4H), 3,50 - 3,47 (m, 4H); CL-EM (M+) m/z 423,00.
S�ntesis de 6-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona:
65 A un vial con 6-aminobenzo[d]oxazol-2(3H)-ona (1,0 g, 6,7 mmol) y 2,4-dicloro-5-metilpirimidina (1,4 g, 8,7 mmol), se le añadieron los disolventes MeOH (20 ml) y H2O (5 ml). Se agit� la mezcla turbia a temperatura ambiente durante 2 días. Se recogió el precipitado de la mezcla de reacción mediante filtración, lavando con H2O (3 ml x 2) y EtOAc (3 ml x 2) y se secó adicionalmente a vacío. Se obtuvo 6-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona como un sólido de color tostado: 1,59 g (rendimiento del 86%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,59 (s, 1H), 8,87 (s,
5 1H), 7,99 (s, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,28 (d, J = 8,3, 1H), 7,06 (d, J = 8,3, 1H), 2,14 (s, 3H).
S�ntesis de N4-(benzo[d]oxazol-2(3H)-on-6-il)-N2-((3-morfolinil)fenil)-5-metilpirimidin-2,4-diamina: (I-48)
A un vial con 6-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona (27,7 mg, 0,1 mmol) y 3
10 morfolinobencenamina (26,7 mg, 0,15 mmol), se le a�adi� i-PrOH (2 ml), seguido por TFA (10 μl, 0,13 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la disolución a 95�C durante 2 días. Se elimin� el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se obtuvo N4-(benzo[d]oxazol-2(3H)-on-6-il)-N2-((3morfolinil)fenil)-5-metilpirimidin-2,4-diamina como un sólido de color tostado: 32,9 mg (rendimiento del 78%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,57 (s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 7,37 (d, J = 8,3,1H), 7,27 (s,
15 1H), 7,14 (d, J = 8,3, 1H), 7,07 - 7,01 (m, 2H), 6,58 - 6,50 (m, 1H), 3,68 - 3,65 (m, 4H), 2,95 - 2,92 (m, 4H), 2,14 (s, 3H); CL-EM (M+) m/z 419,03.
S�ntesis de N4-(benzoxazolin-2-on-5-il)-N2-[2-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-5-il]-5-metilpirimidin-2,4-diamina: (II-13)
20 A un vial con 5-(2-cloro-5-metilpirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona (27,7 mg, 0,5 mmol) y 6-(4metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina (38,4 mg, 1,0 mmol), se le a�adi� i-PrOH (2 ml), seguido por TFA (10 μl, 0,13 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la mezcla de reacción a 85�C durante 2 días. Se eliminaron los disolventes a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se disolvió el compuesto purificado (como una sal de trifluoroacetato) en MeOH-H2O (1:4, 2 ml) y se hizo pasar a través de una columna PL-HCO3-MP-SPE,
25 lavando con los mismos disolventes (1 ml). Se recogió el filtrado y se elimin� el disolvente mediante liofilización. Se obtuvo N4-(benzoxazolin-2-on-5-il)-N2-[2-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-5-il]-5-metilpirimidin-2,4-diamina como un sólido púrpura, 23,1 mg (rendimiento del 53%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,57 (s, 1H), 8,73 (s, 1H), 8,30 - 8,28 (m, 2H), 7,87 - 7,84 (m, 2H), 7,46 - 7,28 (m, 2H), 7,22 (d, J = 8,5, 1H), 6,71 (d, J = 9,1, 1H), 3,40 - 3,37 (m, 4H, solapado con H2O), 2,44 - 2,41 (m, 4H), 2,25 (s, 3H), 2,11 (s, 3H); CL-EM (M+) m/z 433,52.
30 Síntesis de N4-(bencimidazolin-2-on-5-il)-N2-[2-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-5-il]-5-fluoropirimidin-2,4-diamina: (II-16)
A un vial con 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-ilamino)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (28,0 mg, 0,1 mmol) y 6-(4metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina (38,4 mg, 0,2 mmol), se le a�adi� i-PrOH (2 ml), seguido por TFA (10 μl, 0,13 35 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la disolución a 85�C durante 2 días. Se elimin� el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se disolvió el compuesto purificado (como una sal de trifluoroacetato) en MeOH-H2O (1:4, 2 ml) y se hizo pasar a través de una columna PL-HCO3-MP-SPE, lavando con los mismos disolventes (1 ml). Se recogió el filtrado y se elimin� el disolvente mediante liofilización. Se obtuvo N4(bencimidazolin-2-on-5-il)-N2-[2-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-5-il]-5-fluoropirimidin-2,4-diamina como un sólido
40 púrpura: 26,2 mg (rendimiento del 60%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 10,56 (s, 1H), 10,52 (s, 1H), 9,16(s, 1H), 8,85 (s, 1H), 8,27 (d a, J = 2,3, 1H), 8,00 (d a, J = 3,8, 1H), 7,84 (dd, J = 2,3, 9,1, 1H), 7,30 (dd, J = 1,7, 8,2, 1H), 7,17 (d, J = 1,7, 1H), 6,86 (d, J = 8,2, 1H), 6,73 (d, J = 9,1, 1H), 3,40 - 3,37 (m, 4H, solapado con H2O), 2,44 - 2,41 (m, 4H), 2,25 (s, 3H); CL-EM (M+) m/z 436,50.
45 Síntesis de 6-(5-metil-2-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)pirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2 (3H)-ona: (II25)
A un vial con 5-(2-cloro-5-fluoropirimidin-4-ilamino)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-ona (28,0 mg, 0,1 mmol) y 6-(4metilpiperazin-1-il)piridin-3-amina (38,4 mg, 0,2 mmol), se le a�adi� i-PrOH (2 ml), seguido por TFA (10 μl, 0,13 50 mmol). Se cerr� herméticamente el vial y se agit� la disolución a 85�C durante 2 días. Se elimin� el disolvente a vacío y se purificó el producto en bruto mediante RP-HPLC. Se disolvió el compuesto purificado (como una sal de trifluoroacetato) en MeOH-H2O (1:4, 2 ml) y se hizo pasar a través de una columna PL-HCO3-MP-SPE, lavando con los mismos disolventes (1 ml). Se recogió el filtrado y se elimin� el disolvente mediante liofilización. Se obtuvo 6-(5metil-2-(6-(4-metilpiperazin-1-il)piridin-3-ilamino)pirimidin-4-ilamino)benzo[d]oxazol-2(3H)-ona como un sólido
55 púrpura: 26,2 mg (rendimiento del 60%); 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,70 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 9,49 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 7,65 (d, J = 11,7, 2H), 7,21 (d, J = 8,8, 1H), 7,05 (d, J = 8,4, 1H), 6,89 (d, J = 8,9, 1H), 4,34-4,31 (m, 4H), 3,09-3,07 (m, 4H), 2,85 (s, 3H), 2,13 (s, 3H).
Se obtuvo el compuesto de la invención de una manera similar al ejemplo de referencia anterior o mediante métodos 60 descritos en el presente documento o conocidos para los expertos en la técnica:
I-365: N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina
1H RMN (300 MHz, DMSO) δ 11,39 (a, 1H), 8,70 (s, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,30 (d, J = 6,3, 2H), 7,21 (m, 65 3H), 2,06 (s, 3H), 1,99 (s, 6H), 1,98 (s, 3H); CL-EM: pureza: 96,73%; MS (m/e): 376,27 (M+H).
EJEMPLO 2: ENSAYO PARA EXPRESIÓN DE CD23 EN CÉLULAS B RAMOS ESTIMULADAS MEDIANTE IL-4
Las células B estimuladas con la citocina interleucina-4 (IL-4) activan la ruta de JAK/Stat a través de la fosforilaci�n
5 de las cinasas de la familia JAK, JAK-1 y JAK-3, que a su vez fosforilan y activan el factor de transcripción Stat-6. Uno de los genes regulados por incremento mediante Stat-6 activado es el receptor de IgE de baja afinidad, CD23. Para estudiar el efecto de los inhibidores sobre las cinasas de la familia JAK, se estimularon células B Ramos humanas con IL-4 humana y se midió la expresión en superficie de CD23.
La línea de células B Ramos se adquirió de ATCC (N.� de catálogo de ATCC CRL-1596). Se cultivaron las células en RPMI 1640 (Cellgro, MediaTech, Inc., Herndon, VA, n.� de cat. 10-040-CM) con FBS al 10%, se inactivaron por calor (JRH Biosciences, Inc, Lenexa, Kansas, n.� de cat. 12106-500M) según el protocolo de propagación de ATCC. Se mantuvieron las células a una densidad de 3,5 x 105. El día antes del experimento, se diluyeron las células B Ramos hasta 3,5 x 105 células/ml para garantizar que estaban en una fase de crecimiento logarítmico.
15 Se centrifugaron las células y se suspendieron en RPMI con suero al 5%. Se usaron 5 x 104 células por punto en una placa de cultivo tisular de 96 pocillos. Se preincubaron las células con compuesto o control con vehículo de DMSO (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, n.� de cat. D2650) durante 1 hora en un incubador a 37�C. Entonces se estimularon las células con IL-4 (Peprotech Inc., Rocky Hill, NJ, n.� de cat. 200-04) para una concentración final de 50 unidades/ml durante 20-24 horas. Entonces se centrifugaron las células y se tiñeron con anticuerpo anti-CD23-PE (BD Pharmingen, San Diego, CA, n.� de cat. 555711) y se analizaron mediante FACS. Se realizó la detección usando un cit�metro de flujo BD LSR I System, adquirido de Becton Dickinson Biosciences de San José, California.
EJEMPLO 3: ENSAYO PARA PROLIFERACI�N DE CÉLULAS T PRIMARIAS HUMANAS ESTIMULADA 25 MEDIANTE IL-2
Las células T humanas primarias derivadas de sangre periférica y activadas previamente a través de la estimulaci�n del receptor de células T y CD28, proliferan in vitro en respuesta a la citocina interleucina-2 (IL-2). Esta respuesta proliferativa depende de la activación de las tirosina cinasas JAK-1 y JAK-3, que fosforilan y activan el factor de transcripción Stat-5.
Se prepararon células T primarias humanas de la siguiente forma. Se obtuvo sangre completa de un voluntario sano, se mezcl� 1:1 con PBS, se estratific� sobre Ficoll Hipaque (Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, n.� de catálogo 17-1440-03) en una razón 2:1 de sangre/PBS:ficoll y se centrifug� durante 30 min a 4�C a 1750 rpm. Se
35 recuperaron los linfocitos en la superficie de contacto de suero:ficoll y se lavaron dos veces con 5 volúmenes de PBS. Se resuspendieron las células en medio de Yssel (Gemini Bioproducts, Woodland, CA, n.� de catálogo 400103) que contenía 40 U/ml de IL2 recombinante (R and D Systems, Minneapolis, MN, n.� de catálogo 202-IL (20 μg)) y se sembraron en un matraz recubierto previamente con anticuerpo-anti-CD3 1 μg/ml (BD Pharmingen, San Diego, CA, n.� de catálogo 555336) y anticuerpo anti-CD28 5 μg/ml (Immunotech, Beckman Coulter de Brea California, n.� de catálogo IM1376). Se estimularon las células T primarias durante 3-4 días, entonces se transfirieron a un matraz nuevo y se mantuvieron en RPMI con FBS al 10% e IL-2 40 U/ml
El día antes de la preparación del ensayo, se centrifugaron células T primarias y se resuspendieron en medio RPMI nuevo con FBS al 10% pero sin IL-2 y se privaron de alimento durante la noche. Para el ensayo, se centrifugaron las
45 células T primarias y se resuspendieron en medio de Yssel a 2 x 106 células/ml. Se añadieron 50 μl de suspensión de células que contenía IL-2 80 U/ml a cada pocillo de una placa negra de fondo plano de 96 pocillos. Para el control no estimulado, se omitió la IL-2 de la última columna en la placa. Se diluyeron en serie los compuestos en dimetilsulf�xido (DMSO, puro al 99,7%, cultivo celular sometido a prueba, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, n.� de catálogo D2650) desde 5 mM en diluciones de 3 veces y luego se diluyeron 1:250 en medio de Yssel. Se añadieron 50 μl de 2X compuesto por pocillo por duplicado y se permitió que las células proliferaran durante 72 horas a 37�C.
Se midió la proliferaci�n usando el ensayo de viabilidad celular luminiscente CellTiter-Glo� (Promega), que determina el número de células viable en cultivo basándose en la cuantificación del ATP presente, como indicador de las células metab�licamente activas. Se descongel� el sustrato y se permitió que llegara a temperatura ambiente.
55 Tras mezclar el reactivo Cell Titer-Glo y diluyente entre s�, se añadieron 100 μl a cada pocillo. Se mezclaron las placas en un agitador orbital durante dos minutos para inducir lisis y se incubaron a temperatura ambiente durante diez minutos adicionales para permitir que se equilibrase la señal. Se realizó la detección usando un contador de múltiples etiquetas Wallac Victor2 1420 adquirido de Perkin Elmer, Shelton, CT.
EJEMPLO 4: ENSAYO PARA LA EXPRESIÓN DE ICAM1 EN CÉLULAS EPITELIALES A549 ESTIMULADAS MEDIANTE IFNγ
Las células epiteliales de pulmón, A549, regulan por incremento la expresión en superficie de ICAM-1 (CD54) en respuesta a una variedad de estímulos diferentes. Por tanto, usando la expresión de ICAM-1 como lectura, pueden 65 evaluarse los efectos del compuesto sobre diferentes rutas de se�alizaci�n en el mismo tipo celular. IFNγ regula por
incremento ICAM-1 a través de la activación de la ruta de JAK/Stat. En este ejemplo, se evalu� la regulaci�n por incremento de ICAM-1 mediante IFNγ.
La línea celular de carcinoma epitelial de pulmón A549 se origina a partir de la Colección Americana de Cultivos
5 Tipo. El cultivo de rutina se realizó con medio F12K (Mediatech Inc., Lenexa, KS, n.� de cat. 10-025-CV) con suero bovino fetal al 10%, penicilina 100 U.I. y estreptomicina 100 ng/ml (medio F12k completo). Se incubaron las células en una atmósfera humidificada de CO2 al 5% a 37�C. Antes de usar en el ensayo, se lavaron las células A549 con PBS y se sometieron a tripsinizaci�n (Mediatech Inc., n.� de cat. 25-052-CI) para levantar las células. Se neutralizó la suspensión de células con tripsina con medio F12K completo y se centrifug� para sedimentar las células. Se
10 resuspendi� el sedimento de células en medio F12K completo a una concentración de 2,0x105/ml. Se sembraron las células a 20.000 por pocillo, volumen total de 100 μl, en una placa de cultivo celular de fondo plano y se permitió que se adhirieran durante la noche.
En el día dos, se preincubaron las células A549 con compuesto de prueba o DMSO (control) (Sigma-Aldrich, St.
15 Louis, MO, n.� de catálogo D2650) durante 1 hora. Entonces se estimularon las células con IFNγ (75 ng/ml) (Peprotech Inc., Rocky Hill, NJ, n.� de cat. 300-02) y se permitió que se incubaran durante 24 horas. El intervalo de dosis del compuesto de prueba final fue de 30 μM a 14 μM en 200 μl de medio F12K que contenía FBS al 5%, DMSO al 0,3%.
20 En el día tres, se retir� el medio celular y se lavaron las células con 200 μl de PBS (solución salina tamponada con fosfato). Se sometió a tripsinizaci�n cada pocillo para disociar las células, luego se neutralizó mediante la adición de 200 μl de medio F12K completo. Se sedimentaron las células y se tiñeron con un anticuerpo de ratón anti-ICAM-1 humana conjugado con APC (CD54) (BD Pharmingen, San Diego, CA, n.� de catálogo 559771) durante 20 minutos a 4�C. Se lavaron las células con tampón de FACS helado (PBS + FBS al 2%) y se analizó la expresión de ICAM-1 en
25 superficie mediante citometr�a de flujo. Se realizó la detección usando un cit�metro BD LSR I System, adquirido de BD Biosciences de San José, California. Se separaron los acontecimientos por dispersi�n viva y se calcul� la media geométrica (software CellQuest versión 3.3 de Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Se representaron gráficamente las medias geométricas frente a la concentración de compuesto para generar una curva de respuesta a la dosis.
30 EJEMPLO 5: ENSAYO PARA LA EXPRESIÓN DE ICAM1 EN CÉLULAS MIELOIDES U937 ESTIMULADAS POR IFNγ
Las células monoc�ticas humanas U937 regulan por incremento la expresión en superficie de ICAM-1 (CD54) en
35 respuesta a una variedad de estímulos diferentes. Por tanto usando la expresión de ICAM-1 como lectura, pueden evaluarse los efectos del compuesto sobre diferentes rutas de se�alizaci�n en el mismo tipo celular. IFNγ regula por incremento ICAM-1 a través de la activación de la ruta de JAK/Stat. En este ejemplo, se evalu� la regulaci�n por incremento de ICAM-1 mediante IFNγ.
40 Se obtuvo la línea de células monoc�ticas humanas U937 de la ATCC de Rockville Mariland, número de catálogo CRL-1593.2 y se cultiv� en medio RPM1-1640 que contenía FCS al 10% (v/v). Se hicieron crecer las células U937 en RPMI al 10%. Entonces se sembraron en placa las células a una concentración de 100.000 células por 160 μl en placas de fondo plano de 96 pocillos. Entonces se diluyeron los compuestos de prueba tal como sigue: se diluyó el compuesto de prueba 10 mM 1:5 en DMSO (3 μl de compuesto de prueba 10 mM en 12 μl de DMSO), seguido por
45 una dilución en serie 1:3 del compuesto de prueba en DMSO (6 μl de compuesto de prueba diluido en serie en 12 μl de DMSO para dar diluciones de 3 veces). Entonces se transfirieron 4 μl de compuesto de prueba a 76 μl de RPMI al 10% dando como resultado una disolución 10X (compuesto de prueba 100 μM, DMSO al 5%). Para los pocillos control, se diluyeron 4 μl de DMSO en 76 ml de RPMI al 10%. Se realizó el ensayo por duplicado con 8 puntos (8 concentraciones de dilución 3 veces desde 10 μM) y con 4 pocillos de DMSO sólo (pocillos control) en condiciones
50 simuladas y 4 pocillos de DMSO sólo en condiciones no estimuladas.
Se mezcl� la placa con compuesto diluido 2X usando un dispositivo multimek (Beckman Coulter de Brea, California) y entonces se transfirieron 20 μl de los compuestos diluidos a la placa de 96 pocillos que contenía 160 μl de células, que se mezclaron entonces de nuevo dos veces a velocidades bajas. Entonces se preincubaron las células y los
55 compuestos durante 30 minutos a 37�C con CO2 al 5%.
Se realizó la mezcla de estimulaci�n 10X preparando una disolución 100 ng/ml de IFNγ humano en RPMI al 10%. Entonces se estimularon las células y el compuesto con 20 μl de mezcla de estimulaci�n de IFNγ para dar una concentración final de IFNγ 10 ng/ml, compuesto de prueba 10 μM y DMSO al 0,5%. Se mantuvieron las células en
60 condiciones para la estimulaci�n durante 18-24 horas a 37�C con CO2 al 5%.
Se transfirieron las células a una placa de fondo redondo de 96 pocillos para la tinción y luego se mantuvieron en hielo durante la duración del procedimiento de tinción. Se centrifugaron las células a 1000 rpm durante 5 minutos a 4�C, tras lo cual se retir� el sobrenadante. Tras retirar el sobrenadante, se a�adi� 1 μl de anticuerpo de ratón antiICAM-1 humana conjugado con APC por 100 μl de tampón de FACS. Entonces se incubaron las células en hielo en la oscuridad durante 30 minutos. Tras la incubaci�n, se añadieron 150 μl de tampón de FACS y se centrifugaron las células a 1000 rpm durante 5 minutos a 4�C, tras lo cual se retir� el sobrenadante. Tras retirar el sobrenadante, se añadieron 200 μl de tampón de FACS y se resuspendieron las células. Tras la suspensión, se centrifugaron las
5 células a 1000 rpm durante 5 min a 4�C. Entonces se retir� el sobrenadante antes de la resuspensi�n de las células en 150 μl tampón de FACS.
Se realizó la detección usando un cit�metro BD LSR I System, adquirido de BD Biosciences de San José, California. Se separaron las células vivas por dispersi�n viva y se midió la media geométrica de ICAM-APC (software CellQuest
10 versión 3.3 de Becton-Dickinson, Franklin Lakes, NJ). Se analizó tanto el % de células vivas como la expresión de ICAM-1. Se llevaron a cabo los ensayos para los compuestos de prueba en paralelo con un compuesto control de actividad conocida. La CE50 para el compuesto control es normalmente de 40-100 nM.
EJEMPLO 6: ENSAYOS DE CINASA POR POLARIZACIÓN DE FLUORESCENCIA DE JAK1, JAK2 Y JAK3
15 Este ensayo puede utilizarse para determinar la potencia de un compuesto descrito en el presente documento frente a determinadas cinasas JAK y la selectividad de un compuesto descrito en el presente documento en la inhibición de determinada actividad de cinasa JAK in vitro.
20 Reactivos y tampones
Kit de tirosina cinasa, Green (Invitrogen, n.� de cat. P2837)
Gamma globulina bovina (BGG) acetilada (Invitrogen, n.� de cat. P2255) 25 JAK1 activa (Carna Biosciences)
JAK2 activa (Carna Biosciences)
30 JAK3 activa (Carna Biosciences)
P�ptido TK2 (Biotina-EGPWLEEEEEAYGWMDF-CONH2) (síntesis a medida de SynPep)
M�todos
35 Se diluyeron en serie los compuestos de prueba en DMSO partiendo de 500x la concentración final deseada y luego se diluyeron hasta DMSO al 1% en tampón cinasa (HEPES 20 mM, pH 7,4, MgCl2 5 Mm, MnCl2 2 mM, DTT 1 mM, BGG acetilada 0,1 mg/ml). Se mezcl� el compuesto de prueba en DMSO al 1% (DMSO al 0,2% final) 1:5 con ATP y sustrato en cinasa tampón a temperatura ambiente.
40 Se realizaron las reacciones de cinasa en un volumen final de 20 μl que contenía el sustrato pept�dico y ATP y se comenzaron mediante la adición de cinasa en tampón cinasa. Se permitió que las reacciones avanzaran a temperatura ambiente. El sustrato final, las concentraciones de ATP y enzima y los tiempos de reacción para los diferentes ensayos de cinasa se enumeran en la tabla VIII.
Tabla VIII Sustrato final, concentraciones de ATP, enzima y tiempos de reacción
Enzima
Cantidad de enzima por reacción Sustrato Concentración de sustrato Concentración de ATP Tiempo de ensayo
JAK1
20 ng TK2 10 μM 5 μM 20 min
JAK2
0,3 ng TK2 10 μM 5 μM 20 min
JAK3
2 ng TK2 10 μM 5 μM 20 min
Se detuvieron las reacciones añadiendo 20 μl de mezcla de extinción PTK que contenía EDTA/anticuerpo antifosfotirosina (final 1X)/trazador de fosfop�ptido fluorescente (final 0,5X) diluido en tampón de dilución FP según las instrucciones del fabricante (Invitrogen). Se incubaron las placas durante 30 minutos en la oscuridad a temperatura
50 ambiente y entonces se leyeron en un lector de placas de polarización de fluorescencia Polarion (Tecan).
Se convirtieron los datos en cantidad de fosfop�ptido presente usando una curva de calibración generada por competencia con el competidor de fosfop�ptido proporcionado en el kit de ensayo de tirosina cinasa, Green (Invitrogen). Para la determinación de la CI50, se sometieron a prueba los compuestos en once concentraciones por
55 duplicado y se realizó el ajuste de la curva mediante análisis de regresión no lineal usando Matlab versión 6.5 (MathWorks, Inc., Natick, MA, EE.UU.).
EJEMPLO 7: ENSAYOS DE PROLIFERACI�N CELULAR DEPENDIENTE DE JAK2 CONSTITUTIVAMENTE ACTIVA
5 Se ha descrito una mutación en el dominio pseudocinasa JH2 de JAK2 (JAK2 V617F) en trastornos mieloproliferativos crónicos as� como en un subconjunto de líneas celulares de leucemia mieloide aguda (AML). La mutación del dominio JH2 regulador negativo y JH2 desregula la cinasa permitiéndole asociarse constitutivamente con el receptor de EPO y llegar a activarse. Las células UKE-1, derivadas de un paciente con AML, expresan JAK2 V617F que dirige su proliferaci�n. Se modificó por ingeniería genética la línea celular mieloide BaF3 dependiente de IL-3 para que expresar JAK2 V617F permitiéndole proliferar de una manera independiente de IL-3. El efecto de los inhibidores de JAK sobre la proliferaci�n de estas líneas celulares puede usarse para evaluar la actividad celular de los compuestos frente a JAK2.
Reactivos y tampones
15 Dimetilsulf�xido (DMSO) (Sigma-Aldrich, n.� de cat. D2650) (Control)
DMEM de Iscove, n.� de catálogo de ATCC 30-2005
HEPES 1 M, n.� de catálogo de Cellgro 25-060-CI (100 ml)
Piruvato de sodio 100 mM, n.� de catálogo de Cellgro 25-000-CI (100 ml)
Penicilina/estreptomicina, 10000 U/ml cada uno, n.� de catálogo de Cellgro 30-002-CI (100 ml)
25 RPMI 1640 (Cellgro, n.� de cat. 10-040-CM)
Suero bovino fetal (JRH, n.� de cat. 12106-500M)
Suero de caballo donante, n.� de catálogo de Hyclone SH30074,02 (100 ml)
Disoluci�n de hidrocortisona 50 μM, n.� de catálogo de Sigma H6909-10ml (10 ml)
Condiciones de cultivo
35 Se mantuvieron células BaF3 V617F y se sembraron en placa en RPMI con FBS al 10%. La densidad de la siembra en placa para estas células fue de 1 X 105 células/ml.
Se mantuvieron UKE-1 y se sembraron en placa en DMEM de Iscove que contenía FBS al 10%, suero de caballo al 10%, penicilina/estreptomicina al 1% e hidrocortisona 1 uM. La densidad de la siembra en placa para estas células fue de 0,4 X 106 células/ml.
M�todos
45 Se suspendieron las células en un medio correspondiente a una densidad celular requerida (véase anteriormente). Se añadieron 100 μ de suspensión celular a cada pocillo de una placa blanca de fondo plano de 96 pocillos. Se diluyó en serie el compuesto en DMSO desde 5 mM en diluciones de tres veces y luego se diluyó 1:250 en el medio RPMI 1640 que contenía FBS al 5% y pen/strep. Se añadieron 100 μl de de la disolución de compuesto 2X resultante por pocillo por duplicado y se permitió que las células proliferaran durante 72 horas a 37�C.
Se midió la proliferaci�n usando Cell Titer-Glo. Se descongel� el sustrato y se permitió que llegara hasta temperatura ambiente. Tras retirar 100 μl superiores de medio de cada pocillo, se añadieron 100 μl del reactivo Cell Titer-Glo premezclado a cada pocillo. Se mezclaron las placas en un agitador orbital durante tres minutos para inducir lisis y se incubaron a temperatura ambiente durante cinco minutos adicionales para permitir que se
55 equilibrara la señal. Se leyó la luminiscencia en el lector de placas Wallac.
Los resultados de la capacidad de los compuestos descritos en el presente documento para inhibir la actividad de JAK3, cuando se sometió a prueba en las condiciones descritas en el ejemplo 3 anteriormente, se muestran en la tabla V a continuación. Las designaciones de compuestos en la tabla V concuerdan con las de las tablas I - IV anteriores. En la tabla V, la actividad se indica mediante los siguientes intervalos: “A” representa compuestos que tienen una CI50 < 0,5 μM; “B” representa compuestos que tienen una CI50 � 0,5 μM y < 5 μM; “C” representa compuestos que tienen una CI50 � 5 μM y < 10 μM; y “D” representa compuestos que tienen actividad � 10 μM.
Los resultados de la capacidad del compuesto descrito en el presente documento para inhibir la actividad de JAK3, 65 cuando se sometió a prueba en las condiciones descritas en el ejemplo 3 anteriormente, se muestran en la tabla V a
continuaci�n. Las designaciones de compuestos en la tabla V concuerdan con las de la tabla I anterior. En la tabla V, la actividad se indica mediante los siguientes intervalos: “A” representa un compuesto que tiene una CI50 < 0,5 μM; “B” representa un compuesto que tiene una CI50 0,5 μM y< 5 μM; “C” representa un compuesto que tiene una CI50
5 μMy < 10 μM; y “D” representa un compuesto que tiene actividad 10 μM.
Tabla V I-365 A
Aunque la invención anterior se ha descrito en cierto detalle para facilitar la compresión, las realizaciones descritas han de considerarse ilustrativas y no limitativas. Resultar� evidente para un experto habitual en la técnica que pueden ponerse en práctica determinados cambios y modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones
10 adjuntas.

Claims (11)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Compuesto que es N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol-5-il)-2,4-pirimidindiamina,
    o una sal farmac�uticamente aceptable del mismo. 5
  2. 2. Compuesto según la reivindicación 1, que es N2-(3,4,5-trimetil)fenil-5-metil-N4-(2-oxo-2,3-dihidro-1,3-benzoxazol5-il)-2,4-pirimidindiamina, base libre.
  3. 3.
    Composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 1 � 2. 10
  4. 4. Compuesto según la reivindicación 1 � 2 o composición farmacéutica según la reivindicación 3 para su uso en el tratamiento de una enfermedad mediada por cinasa JAK.
  5. 5.
    Compuesto o composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de 15 rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante.
  6. 6. Compuesto o composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de una enfermedad autoinmunitaria mediada por células T.
    20 7. Compuesto o composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de una enfermedad y/o trastorno del ojo.
  7. 8. Compuesto o composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 4, para su uso en el tratamiento de
    asma. 25
  8. 9. Uso de un compuesto según la reivindicación 1 � 2 o una composición farmacéutica según la reivindicación 3 en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad mediada por cinasa JAK.
  9. 10. Uso de un compuesto o una composición farmacéutica según la reivindicación 9, en la fabricación de un 30 medicamento para tratar rechazo de trasplante de aloinjerto en un receptor de trasplante.
  10. 11. Uso de un compuesto o una composición farmacéutica según la reivindicación 9, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad autoinmunitaria mediada por células T.
    35 12. Uso de un compuesto o una composición farmacéutica según la reivindicación 9, en la fabricación de un medicamento para tratar una enfermedad y/o trastorno del ojo.
  11. 13. Uso de un compuesto o una composición farmacéutica según la reivindicación 9, en la fabricación de un medicamento para tratar asma.
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