ES2397678T3 - Suspensiones de espermatozoides para clasificación en poblaciones enriquecidas portadoras del cromosoma X o Y - Google Patents
Suspensiones de espermatozoides para clasificación en poblaciones enriquecidas portadoras del cromosoma X o Y Download PDFInfo
- Publication number
- ES2397678T3 ES2397678T3 ES09014128T ES09014128T ES2397678T3 ES 2397678 T3 ES2397678 T3 ES 2397678T3 ES 09014128 T ES09014128 T ES 09014128T ES 09014128 T ES09014128 T ES 09014128T ES 2397678 T3 ES2397678 T3 ES 2397678T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- sperm
- suspension
- cells
- enriched
- sperm cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000725 suspension Substances 0.000 title claims abstract description 119
- 210000001766 X chromosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- 210000002593 Y chromosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 153
- 230000004899 motility Effects 0.000 claims abstract description 99
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 66
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 46
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 39
- 229940076788 pyruvate Drugs 0.000 claims abstract description 39
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 29
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims abstract description 23
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 22
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 17
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 claims abstract description 9
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 claims abstract description 9
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 claims abstract description 9
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 claims abstract description 9
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 8
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 claims abstract description 8
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 claims abstract description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 150000004053 quinones Chemical class 0.000 claims abstract description 3
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 claims abstract 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 64
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 33
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 32
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 claims description 31
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 31
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 31
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 31
- 235000015165 citric acid Nutrition 0.000 claims description 27
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 claims description 16
- PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 2'-(4-ethoxyphenyl)-5-(4-methylpiperazin-1-yl)-2,5'-bibenzimidazole Chemical compound C1=CC(OCC)=CC=C1C1=NC2=CC=C(C=3NC4=CC(=CC=C4N=3)N3CCN(C)CC3)C=C2N1 PRDFBSVERLRRMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 11
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 8
- INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N pibenzimol Chemical compound C1CN(C)CCN1C1=CC=C(N=C(N2)C=3C=C4NC(=NC4=CC=3)C=3C=CC(O)=CC=3)C2=C1 INAAIJLSXJJHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 4
- 125000004195 4-methylpiperazin-1-yl group Chemical group [H]C([H])([H])N1C([H])([H])C([H])([H])N(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 claims description 2
- ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N hexanamide Chemical compound CCCCCC(N)=O ALBYIUDWACNRRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 2
- 125000001325 propanoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 230000009027 insemination Effects 0.000 abstract description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 64
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 50
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 33
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 18
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 16
- 244000309464 bull Species 0.000 description 15
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 13
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 12
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 12
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 12
- 239000004606 Fillers/Extenders Substances 0.000 description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 11
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 11
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 10
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 9
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 8
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 6
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 6
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 6
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 6
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 6
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000019100 sperm motility Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 4
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 4
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 3
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 3
- HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N carbonic acid Chemical compound OC(O)=O.OC(O)=O HFNQLYDPNAZRCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 3
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 235000020603 homogenised milk Nutrition 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 229930194936 Tylosin Natural products 0.000 description 2
- 239000004182 Tylosin Substances 0.000 description 2
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 2
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000002159 nanocrystal Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 2
- UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N spectinomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O UNFWWIHTNXNPBV-WXKVUWSESA-N 0.000 description 2
- 229960000268 spectinomycin Drugs 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229960004059 tylosin Drugs 0.000 description 2
- WBPYTXDJUQJLPQ-VMXQISHHSA-N tylosin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)O[C@H]([C@@H]([C@H]1N(C)C)O)O[C@@H]1[C@@H](C)[C@H](O)CC(=O)O[C@@H]([C@H](/C=C(\C)/C=C/C(=O)[C@H](C)C[C@@H]1CC=O)CO[C@H]1[C@@H]([C@H](OC)[C@H](O)[C@@H](C)O1)OC)CC)[C@H]1C[C@@](C)(O)[C@@H](O)[C@H](C)O1 WBPYTXDJUQJLPQ-VMXQISHHSA-N 0.000 description 2
- 235000019375 tylosin Nutrition 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N Acolongiflorosid K Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1CC2(O)CCC3C4(O)CCC(C=5COC(=O)C=5)C4(C)CC(O)C3C2(CO)C(O)C1 LPMXVESGRSUGHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N Ouabain Natural products O([C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)[C@H]1C[C@@H](O)[C@@]2(CO)[C@@](O)(C1)CC[C@H]1[C@]3(O)[C@@](C)([C@H](C4=CC(=O)OC4)CC3)C[C@@H](O)[C@H]21 LPMXVESGRSUGHW-GHYGWZAOSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 244000166550 Strophanthus gratus Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- ONXOKWFYBIQOFQ-VSXSCALHSA-N ac1l4s0d Chemical compound OS(O)(=O)=O.O([C@@H]1[C@@H](NC)[C@@H](O)[C@H]([C@@H]([C@H]1O1)O)NC)[C@]2(O)[C@H]1O[C@H](C)CC2=O.O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O[C@@H]1[C@@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]1N(C)C[C@H](C(C)C)C1 ONXOKWFYBIQOFQ-VSXSCALHSA-N 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006536 aerobic glycolysis Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 235000021258 carbohydrate absorption Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003001 depressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 150000002211 flavins Chemical class 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N ouabain Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1C[C@@]2(O)CC[C@H]3[C@@]4(O)CC[C@H](C=5COC(=O)C=5)[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@@H]3[C@@]2(CO)[C@H](O)C1 LPMXVESGRSUGHW-HBYQJFLCSA-N 0.000 description 1
- 229960003343 ouabain Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 229960000887 spectinomycin hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/52—Sperm; Prostate; Seminal fluid; Leydig cells of testes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/02—Preservation of living parts
- A01N1/0205—Chemical aspects
- A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
- A01N1/0226—Physiologically active agents, i.e. substances affecting physiological processes of cells and tissue to be preserved, e.g. anti-oxidants or nutrients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/061—Sperm cells, spermatogonia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/0611—Primordial germ cells, e.g. embryonic germ cells [EG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/05—Inorganic components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Un método de producción de una suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en géneroque comprende: (a) mezclar una suspensión de células espermáticas no humano con una composición que inhibe la motilidadde las células espermáticas no humano y comprende una ratio molar de potasio a sodio mayor que 1:1,respectivamente, y a continuación con una composición que regula las reacciones de oxidación/reducciónintracelular y/o extracelularmente seleccionada del grupo constituido por piruvato, vitamina K, ácido lipoico,glutatión, flavinas, quinonas, superóxido-dismutasa (SOD) y miméticos de SOD; (b) teñir la suspensión de células espermáticas no humanas inmóviles con un tinte selectivo del DNA durantemenos de 160 minutos y a una temperatura de 4ºC a 30ºC; y (c) clasificar la suspensión de células espermáticas no humanas inmóviles teñidas para formar una poblaciónde inseminación viable enriquecida en género de células espermáticas no humanas portadoras delcromosoma X o portadoras del cromosoma Y que tienen tinte seleccionado de DNA asociado con su DNA; y (d) retornar dichas células espermáticas no humanas a un estado activado, en donde al menos 20% de lascélulas reactivadas tienen una velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, que es al menos 50% dela velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas del eyaculado recientecomo se mide por análisis de esperma HTM-IVOS.
Description
Suspensiones de espermatozoides para clasificación en poblaciones enriquecidas portadoras del cromosoma X o Y
5 La presente invención se refiere en general a un proceso de producción de una suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género que produce una suspensión de células espermáticas enriquecidas en género. De modo más específico, la presente invención se refiere a la preparación de suspensiones de células espermáticas que tienen motilidad reducida, y más particularmente una motilidad temporalmente reducida, con relación a los espermatozoides endógenos eyaculados, teniendo las suspensiones utilidad, por ejemplo, en un proceso de clasificar células espermáticas en una población enriquecida de células espermáticas portadoras del cromosoma X o
Y.
La fertilización de los animales por inseminación artificial (AI) y el trasplante de embriones subsiguiente a la fertilización in vitro es una práctica establecida. En la industria de producción de ganado, la posibilidad de influir en el
15 resultado reproductivo hacia descendencia que tenga una o más características deseadas presenta ventajas obvias. A modo de ejemplo, se conseguiría un beneficio económico en la industria láctea preseleccionando la descendencia a favor del sexo femenino para asegurar la producción de vacas lecheras. La separación de los espermatozoides en poblaciones enriquecidas de células portadoras del cromosoma X e Y, conocidas como semen enriquecido en género o espermatozoides enriquecidos en género, es un método de consecución de descendencia preseleccionada.
Con objeto de obtener semen enriquecido en género, las células espermáticas deben teñirse con un tinte y clasificarse subsiguientemente en células portadoras de cromosoma X e Y. Cada uno de los procesos de tinción y clasificación causa un estrés en las células espermáticas que reduce la viabilidad o motilidad de las células
25 espermáticas, particularmente la motilidad progresiva.
Salisbury et al. describen una técnica para la recogida de semen de bovino eyaculado directamente en un diluyente que inhibe la motilidad celular y previene la absorción de carbohidratos del plasma seminal circundante. Cuando el eyaculado se recoge en el diluyente y la fase de aire por encima del líquido se reemplaza por gasificación con 100% CO2, las células en el eyaculado se vuelven inmóviles. Mientras las células se mantenían en el diluyente y se excluía el aire, las células permanecían inmóviles durante varias horas a la temperatura ambiente y durante al menos 8 días a 5ºC.
WO 02/41906 se refiere a un método de clasificación de células espermáticas para producir subpoblaciones
35 enriquecidas en espermatozoides portadores de determinantes de cromosomas para descendencia masculina o femenina. En dicho método, las células espermáticas se exponen a cambios en temperatura y pH que afectan a la eficiencia de tinción y separación y la viabilidad (motilidad) de las células espermáticas.
La presente invención está dirigida a un método de producción de una suspensión de células espermáticas no humano enriquecidas en género como se caracteriza en la reivindicación 1.
La FIGURA 1 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 1 en donde la motilidad
45 progresiva porcentual de células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 600 μM a 28ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM o en TCA protegido con atmósfera de dióxido de carbono que contiene piruvato 10 mM.
La FIGURA 2 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 1 en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 600 μM a 28ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM o un inhibidor basado en carbonato a pH 7,3.
La FIGURA 3 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 1 en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst
55 33342 600 μM a 28ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM o un inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
La FIGURA 4 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 2 en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 1000 μM a 28ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM y diluidas luego 1 a 3 con TCA que contiene piruvato 10 mM o un inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
La FIGURA 5 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 2 en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 1000 μM a 28ºC en (1) TCA que contiene piruvato 10 mM y diluidas 1 a 3 con el mismo o (2) un tampón
65 basado en carbonato a pH 7,3 y diluidas 1 a 3 con inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
La FIGURA 6 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 2 en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 1000 μM a 28ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM o un inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
5 La FIGURA 7 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 3 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 300 μM a 41ºC en TCA que contiene piruvato 10 mM y diluidas luego en ratio 1 a 3 con TCA que contiene piruvato 10 mM o con un inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
La FIGURA 8 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 3 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 300 μM a 41ºC en (1) TCA que contiene piruvato 10 mM y diluidas 1 a 3 con el mismo o (2) un tampón basado en carbonato a pH 7,3 y diluidas 1 a 3 con inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
15 La FIGURA 9 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 3 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de las células espermáticas se mide para células espermáticas teñidas con tinte Hoechst 33342 300 μM a 41ºC en TCA que piruvato 10 mM o un inhibidor basado en carbonato a pH 6,2.
La FIGURA 10 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 4 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 400 μM a 41ºC en un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM.
25 La FIGURA 11 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 5 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 400 μM a 41ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene vitamina K 10 μM.
La FIGURA 12 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 6 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 400 μM a 41ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene vitamina K 100 μM.
35 La FIGURA 13 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 7 que no cae dentro del alcance de la presente invención, en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 400 μM a 41ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene ácido lipoico 1 mM.
La FIGURA 14 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 8 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 600 μM a 28ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM.
45 La FIGURA 15 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 9 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 600 μM a 28ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene vitamina K 100 μM.
La FIGURA 16 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 10 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 600 μM a 28ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene ácido lipoico 1 mM.
La FIGURA 17 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 11 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte Hoechst 33342 600
55 μM a 28ºC en un tampón de TCA, un tampón de TCA que contiene piruvato 2,5 mM, un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM, un tampón de TCA que contiene piruvato 25 mM, y un tampón de TCA que contiene piruvato 50 mM.
La FIGURA 18 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 12 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte SYBR-14 20 μM a 28ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM.
La FIGURA 19 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 13 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte BBC 100 μM a 28ºC
65 en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM.
La FIGURA 20 representa gráficamente los resultados del estudio realizado en el Ejemplo 14 en donde la motilidad progresiva porcentual de los espermatozoides se mide para espermatozoides teñidos con tinte BBC 200 μM a 28ºC en un tampón de TCA o un tampón de TCA que contiene piruvato 10 mM.
5 Sorprendentemente, se ha determinado que los espermatozoides que tienen motilidad reducida con relación a los espermatozoides endógenos eyaculados (de la misma especie) tienden a poseer una mayor capacidad para resistir los diversos pasos de proceso asociados típicamente con la clasificación de las células espermáticas en una población enriquecida de espermatozoides portadores de cromosoma X o Y. En una realización preferida, por consiguiente, las poblaciones de espermatozoides enriquecidas en género según la presente invención se pueden preparar para inseminación artificial que tienen un número incrementado de células viables o un número incrementado de espermatozoides movibles, particularmente espermatozoides progresivamente movibles, en una composición posterior a la tinción o posterior a la clasificación.
Según el proceso de la presente invención, se forma una suspensión, a la que se hace referencia a veces como una
15 dispersión, que contiene espermatozoides y una o más composiciones que inhiben la motilidad de los espermatozoides, haciéndose referencia a veces a un estado de motilidad inhibida de este tipo como inmovilidad o quiescencia de los espermatozoides. En una realización preferida, las suspensiones contendrán espermatozoides en una densidad de aproximadamente 1x103 espermatozoides/ml a aproximadamente 5x1010 espermatozoides/ml de suspensión. Por ejemplo, en una realización las suspensiones pueden contener espermatozoides en una densidad “relativamente baja”, a saber, en una densidad menor que aproximadamente 1x107 espermatozoides/ml, con preferencia menor que aproximadamente 1x106 espermatozoides/ml, con más preferencia aproximadamente 1x103 a aproximadamente 5x106 espermatozoides/ml, con más preferencia todavía aproximadamente 1x103 a aproximadamente 1x106 espermatozoides/ml, con más preferencia aún aproximadamente 1x104 a aproximadamente 1x105 espermatozoides/ml, y con preferencia máxima aproximadamente 1x105 espermatozoides/ml de suspensión.
25 En una realización alternativa, las suspensiones pueden contener espermatozoides en una densidad “intermedia”, a saber en una densidad de aproximadamente 1x107 a aproximadamente 1x108 espermatozoides/ml de suspensión. En una realización alternativa adicional, las suspensiones pueden contener espermatozoides en una densidad “relativamente alta”, a saber en una densidad de al menos aproximadamente 1x108 espermatozoides/ml, con preferencia aproximadamente 1x108 a aproximadamente 5x1010 espermatozoides/ml, con más preferencia aproximadamente 1,5x108 a aproximadamente 2x1010 espermatozoides/ml, con más preferencia aún aproximadamente 1,5x108 a aproximadamente 2x108 espermatozoides/ml, y con más preferencia todavía aproximadamente 1,5x108 espermatozoides/ml de suspensión. Así, por ejemplo, en una realización la suspensión puede contener al menos aproximadamente 1,25x108, al menos aproximadamente 1,5x108, al menos aproximadamente 1,75x108, al menos aproximadamente 2x108, al menos aproximadamente 2,25x108, al menos
35 aproximadamente 2,5x108, al menos aproximadamente 2,75x108, o incluso al menos aproximadamente 3x108 espermatozoides/ml de suspensión. En una realización alternativa, la suspensión puede contener menos de aproximadamente 9x105, menos de aproximadamente 7x105, menos de aproximadamente 5x105, menos de aproximadamente 2x105, menos de aproximadamente 1x105, menos de aproximadamente 1x104, o incluso menos de aproximadamente 1x103 espermatozoides/ml de suspensión.
La densidad de espermatozoides en las suspensiones de espermatozoides depende de varias consideraciones, que incluyen el método por el cual pueden enriquecerse o clasificarse subsiguientemente las células espermáticas. Por ejemplo, las células espermáticas pueden clasificarse utilizando citometría de flujo como se describe con mayor detalle más adelante. En tal caso, la suspensión de espermatozoides tamponada puede tener típicamente una
45 densidad “intermedia” o “relativamente alta” de espermatozoides. Otras técnicas de clasificación o enriquecimiento pueden beneficiarse de una menor densidad de espermatozoides, tal como una densidad “relativamente baja” de espermatozoides, identificados con un marcador, tal como por ejemplo los tintes e identificadores descritos en esta memoria.
En una realización preferida, los espermatozoides en las suspensiones de la presente invención se comportan, en ciertos aspectos, de una manera característica de los espermatozoides epididimarios; por ejemplo, los espermatozoides pueden mantenerse inmóviles y/o pueden tener una tasa menor de respiración endógena y una tasa mayor de glicólisis aerobia en comparación con los espermatozoides lavados o recién eyaculados. Ventajosamente, los espermatozoides inhibidos tienen la capacidad, después de la separación del o de los
55 inhibidores, de comportarse de una manera característica de los espermatozoides eyaculados (y no característica de los espermatozoides epididimarios) con respecto a motilidad y, en una realización, con respecto a motilidad y respiración.
En una realización, por ejemplo, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS (sistema de análisis de esperma Hamilton-Thorne HTM-IVOS asistido por computadora de Hamilton-Thorne Research, Beverly, MA) de al menos aproximadamente el 50% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Preferentemente, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, como se mide por el análisis de esperma 65 HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 60% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Con más preferencia, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 70% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas 5 de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Con más preferencia todavía, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 80% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Aún con más preferencia, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 90% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Todavía con más preferencia, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 95% de las células espermáticas en la dispersión con
15 relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie. Muy preferiblemente, el inhibidor de la motilidad reduce la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, como se mide por un análisis de esperma HTM-IVOS, de al menos aproximadamente el 99% de las células espermáticas en la dispersión con relación a la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas en un eyaculado reciente de la misma especie.
Además de o en lugar de un tampón inhibidor, puede reducirse exclusivamente la temperatura de las células espermáticas o el ambiente inmediato que rodea las células espermáticas (a saber, una dispersión de espermatozoides) para afectar a la motilidad de las células. Una reducción de este tipo en la temperatura aumentará generalmente la inmovilidad. Además, por ejemplo, la reducción de la temperatura de las células espermáticas o la 25 dispersión de espermatozoides puede permitir una reducción en la concentración de inhibidor utilizada para inducir la inmovilidad. Según lo anterior, la dispersión de espermatozoides puede encontrarse a una temperatura que no exceda de 5ºC; con preferencia entre aproximadamente 0ºC y aproximadamente 5ºC; con más preferencia entre aproximadamente 3ºC y aproximadamente 5ºC, y con preferencia máxima aproximadamente a 5ºC. Alternativamente, la dispersión de espermatozoides puede encontrarse a una temperatura comprendida dentro del intervalo de aproximadamente 4ºC a aproximadamente 50ºC; con preferencia desde aproximadamente 7ºC a aproximadamente 43ºC; con más preferencia desde aproximadamente 10ºC a aproximadamente 39ºC; con más preferencia todavía desde aproximadamente 15ºC a aproximadamente 30ºC; con más preferencia aún desde aproximadamente 17ºC a aproximadamente 25ºC, y con preferencia máxima a aproximadamente 18ºC. Con preferencia, sin embargo, las células espermáticas no se exponen a temperaturas que afecten de modo
35 sustancialmente perjudicial a la viabilidad de las células.
El inhibidor es una composición que comprende iones sodio/potasio y que tiene un efecto depresivo sobre la motilidad de los espermatozoides. Tales composiciones incluyen, por ejemplo, inhibidores de la ATPasasodio/potasio, tales como ouabaína. Las concentraciones relativamente altas de iones potasio en la suspensión tienden a deprimir la motilidad de los espermatozoides. En general, por tanto, la suspensión contiene una fuente de iones potasio y se prefiere que la concentración de potasio en la suspensión sea al menos aproximadamente 0,05 moles/l. Con más preferencia, la concentración de potasio es al menos aproximadamente 0,05 moles/l hasta aproximadamente 0,5 moles/l. Con más preferencia todavía, la concentración de potasio es al menos aproximadamente 0,1 moles/l a aproximadamente 0,3 moles/l. Con la máxima preferencia, la concentración de 45 potasio es aproximadamente 0,173 moles/l. Tales suspensiones contendrán también típicamente, pero no con carácter necesario, una fuente de iones sodio. La ratio molar de potasio a sodio es generalmente igual a o mayor que 1:1, respectivamente. Con preferencia, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 1,25:1. Con más preferencia todavía, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 1,5:1. Con más preferencia todavía, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 1,75:1. Con más preferencia todavía, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 1,78:1. En una realización particular, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 2:1. En otra realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 3:1. En otra realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 4:1. En otra realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente
5:1. En otra realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 6:1. En otra
55 realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 7:1. En otra realización adicional, la ratio molar de potasio a sodio es al menos aproximadamente 8:1.
La suspensión de espermatozoides puede comprender adicionalmente un ion o fuente de dióxido de carbono capaz de regular en sentido decreciente la absorción de carbohidratos. En esta realización, la fuente de dióxido de carbono puede ser, por ejemplo, uno o más carbonatos. En una realización actualmente preferida, la suspensión de espermatozoides comprende NaHCO3 y KHCO3, proporcionando de este modo una fuente de iones potasio y sodio así como una presión parcial de dióxido de carbono. Por ejemplo, en una realización actualmente preferida, la suspensión comprende NaHCO3 y KHCO3 en una solución acuosa, preferiblemente NaHCO3, KHCO3, y C6H8O7·H2O en agua. En general, la concentración de KHCO3 en la dispersión puede ser al menos aproximadamente 0,05 65 moles/l. Con más preferencia, la concentración de KHCO3 es al menos aproximadamente 0,05 moles/l a
aproximadamente 0,5 moles/l. Con más preferencia todavía, la concentración de KHCO3 es al menos aproximadamente 0,1 moles/l a aproximadamente 0,3 moles/l. En una realización particularmente preferida, la suspensión se forma utilizando un tampón inhibidor que comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua como se expone en Salisbury & Graves, J. Reprod. Fertil., 6:351-359
5 (1963). Las células espermáticas se mantendrán generalmente quiescentes mientras estén expuestas al inhibidor o inhibidores de la motilidad.
Cuando está presente C6H8O7·H2O en la dispersión, la ratio molar de KHCO3 a NaHCO3 puede ser como se ha descrito arriba. La ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O puede ser generalmente igual a o mayor que 1:1, respectivamente, pero generalmente no excederá de una ratio molar de 8:1. Con preferencia, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es de al menos aproximadamente 1,25:1. Con más preferencia todavía, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 1,5:1. Con más preferencia todavía, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 1,75:1. En una realización particular, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 1,78:1. En otra realización particular, la ratio molar de KHCO3 a 15 C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 2:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 3:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 4:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 5:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 6:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 7:1. En otra realización adicional, la ratio molar de KHCO3 a C6H8O7·H2O es al menos aproximadamente 8:1. En una realización particularmente preferida, la dispersión se forma utilizando un tampón inhibidor que contiene 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua como se expone en Salisbury & Graves, J. Reprod. Fertil., 6:351-359 (1963). Las células espermáticas se mantendrán generalmente quiescentes mientras estén expuestas al inhibidor o inhibidores de la
25 motilidad.
Pruebas experimentales obtenidas hasta la fecha sugieren adicionalmente que la salud global y otras características vitales de las células espermáticas pueden mejorarse si las sucesión de células se mantiene en una atmósfera que tenga una presión parcial aumentada de dióxido de carbono con relación al aire. En una realización preferida, la atmósfera sobre la suspensión tiene una presión parcial de dióxido de carbono de al menos 0,9; con más preferencia, al menos aproximadamente 0,95.
Las células quiescentes pueden devolverse a un estado activo separando las células del inhibidor de la motilidad y exponiendo las mismas al aire. Adicionalmente, la iniciación de un estado activo puede inducirse ulteriormente por la 35 dilución de las células en una solución salina fisiológica (Salisbury et al., 1963) o un tampón tal como tampón de TCA o PBS. Según la presente invención, al menos aproximadamente 20%, con preferencia al menos aproximadamente 50%, con más preferencia al menos aproximadamente 60%, con más preferencia todavía al menos aproximadamente 70%, con más preferencia aún al menos aproximadamente 80%, de modo aún más preferible al menos aproximadamente 90%, con más preferencia todavía al menos aproximadamente 95%, y con preferencia máxima al menos aproximadamente 99% de las células devueltas a un estado activo (a saber, células reactivadas) tendrán una velocidad de paso, velocidad progresiva, o ambas, como se mide por el análisis de esperma HTM-IVOS, que es al menos aproximadamente 50%, con preferencia al menos aproximadamente 60%, con más preferencia al menos aproximadamente 70%, con más preferencia todavía al menos aproximadamente 80%, con más preferencia aún al menos aproximadamente 90%, con más preferencia aún al menos
45 aproximadamente 95%, y con preferencia máxima al menos aproximadamente 99% de la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas antes de combinarse con el inhibidor de la motilidad (es decir, de las células espermáticas de un eyaculado reciente).
En general, el método reivindicado comprende una serie de pasos discretos, a saber la recogida de una muestra de células, tinción de las células, clasificación de las células, recogida de las células clasificadas, retorno de las células clasificadas a un estado activo y opcionalmente, crioextensión de las células clasificadas. Ventajosamente, el inhibidor de la motilidad se incluye en las suspensiones de espermatozoides formadas o empleadas por mezcla de la suspensión de células espermáticas con el inhibidor.
Las células espermáticas viables intactas de bovino, porcino, equino, u otro mamífero, pueden recogerse y ponerse en contacto con el inhibidor de la motilidad. Se conocen diversos métodos de recogida de espermatozoides viables que incluyen, por ejemplo, el método de mano enguantada, el uso de una vagina artificial, y electro-eyaculación. Como ejemplo, una muestra de esperma de bovino, que contiene típicamente alrededor de 0,5 a aproximadamente 10 billones de células espermáticas por mililitro, puede recogerse directamente del mamífero fuente en una vasija que contenga un inhibidor de la motilidad para formar una suspensión de espermatozoides. Alternativamente, la muestra de esperma puede recogerse en una vasija vacía y ponerse en contacto posteriormente con el inhibidor de la motilidad en el transcurso de varios minutos a horas después de la recogida para formar la suspensión de
65 espermatozoides.
Además de un tampón, la suspensión de espermatozoides puede contener también una serie de aditivos para mejorar la viabilidad de los espermatozoides. Aditivos ilustrativos incluyen fuentes de proteínas, y antibióticos. En cualquier caso, la suspensión de células espermáticas se mezcla con una composición que regula las reacciones de oxidación/reducción intracelular y/o extracelularmente.
5 Fuentes ilustrativas de proteínas incluyen yema de huevo, extracto de yema de huevo, leche (con inclusión de leche homogeneizada térmicamente y desnatada), extracto de leche, proteína de soja, extracto de proteína de soja, seroalbúmina, seroalbúmina bovina, suplemente sustitutivo de suero humano, y combinaciones de los mismos. Albúmina, y más particularmente seroalbúmina bovina (BSA), es una fuente de proteína preferida. Por ejemplo, si se incluye, BSA puede estar presente en la suspensión de espermatozoides en una cantidad menor que aproximadamente 5,0% (p/v), con preferencia menos de aproximadamente 2% (p/v), con más preferencia menos de aproximadamente 1% (p/v), y con preferencia máxima en una cantidad de aproximadamente 0,1% (p/v).
El uso de una fuente de proteína, tal como BSA, sola puede iniciar el proceso de capacitación en un porcentaje de
15 las células espermáticas en la suspensión. Se prefiere que este proceso tenga lugar en el tracto reproductivo de la hembra. Por esta razón, a fin de inhibir la iniciación de la capacitación durante la dilución, así como durante la tinción y clasificación subsiguientes, se puede incluir una fuente de proteína alternativa o un sustituto de proteína en la suspensión de espermatozoides. La fuente de proteína o sustituto de proteína alternativa posee los efectos ventajosos de una fuente de proteína típica, tal como BSA, además de la aptitud para inhibir la iniciación de la capacitación en un mayor porcentaje de las células en la suspensión de espermatozoides. Ejemplos de una fuente de proteína alternativa incluyen suplemento sustitutivo de suero humano (SSS) (Irvine Scientific, Santa Ana, CA) y BSA mejorada con colesterol, en tanto que un ejemplo de un sustituto de proteína incluye un poli(alcohol vinílico), tal como por ejemplo, un poli(alcohol vinílico) de viscosidad baja a media, que tiene por regla general un peso molecular de aproximadamente 30.000 a aproximadamente 60.000. Generalmente, si se incluyen, estas composiciones
25 estarán presentes en las mismas cantidades que se han descrito arriba con respecto a BSA, no excediendo por regla general el contenido total de albúmina del tampón o solución tamponada de aproximadamente 5,0% (p/v).
La composición que regula las reacciones de oxidación/reducción intracelular y/o extracelularmente se selecciona del grupo constituido por piruvato, vitamina K, ácido lipoico, glutatión, flavinas, quinonas, superóxido-dismutasa (SOD), y miméticos de SOD. Una composición de este tipo está presente en una concentración suficiente para producir el efecto protector sin afectar perjudicialmente a la salud del espermatozoide. Intervalos de concentración ilustrativos incluyen desde aproximadamente 10 μM a aproximadamente 20 mM, dependiendo de factores tales como la composición particular que se utilice o la concentración de espermatozoides en la suspensión. Por ejemplo, el piruvato puede estar presente en la suspensión de espermatozoides en una concentración que va desde
35 aproximadamente 1 mM a aproximadamente 20 mM, con preferencia desde aproximadamente 5 mM a aproximadamente 15 mM, y con más preferencia aproximadamente 10 mM. La vitamina K puede estar presente en la suspensión de espermatozoides en una concentración de aproximadamente 1 μM a aproximadamente 100 μM, con preferencia desde aproximadamente 10 μM a aproximadamente 100 μM, y con más preferencia aproximadamente 100 μM. El ácido lipoico puede estar presente en la suspensión de espermatozoides en una concentración que va desde aproximadamente 0,1 mM a aproximadamente 1 mM, con preferencia desde aproximadamente 0,5 mM a aproximadamente 1 mM, y con más preferencia aproximadamente 1 mM.
Puede incluirse un antibiótico en la suspensión de espermatozoides a fin de inhibir el crecimiento bacteriano. Antibióticos ilustrativos incluyen, por ejemplo, tilosina, gentamicina, lincomicina, espectinomicina, Linco-Spectin®
45 (hidrocloruro de lincomicina-espectinomicina), penicilina, estreptomicina, ticalcilina, o cualquier combinación de los mismos. Si se incluyen, los antibióticos pueden estar presentes en una concentración de aproximadamente 50 μg a aproximadamente 800 μg por ml de esperma, con indiferencia de si el esperma está puro, tamponado, o contiene sustancias adicionales, tales como por ejemplo, cualquiera de los aditivos mencionados en esta memoria. Los Servicios de Esperma Certificado (CSS) y la Asociación Nacional de Criadores de Animales (NAAB) han promulgado directrices relativas al uso de antibióticos con respecto a la recogida y uso del esperma.
Puede añadirse un factor de crecimiento a la dispersión de espermatozoides a fin de ayudar a mantener la viabilidad de los espermatozoides. Factores de crecimiento ilustrativos incluyen, por ejemplo, factores del crecimiento transformante (“TGF”), tales como, por ejemplo, TGFβ-1 y TGFβ-2, y factores de crecimiento semejantes a insulina
55 (“IGF”), tales como, por ejemplo, IGF-1. Por regla general, TGF puede estar presente en la dispersión de espermatozoides en la forma de TGFβ-1 en una concentración de aproximadamente 0,1 ng/l a aproximadamente 10 μg/l, o como TGFβ-2 en una concentración de aproximadamente 0,1 ng/l a aproximadamente 200 ng/l, e IGF puede estar presente en la dispersión de espermatozoides en la forma de IGF-1 en una concentración de aproximadamente 0,1 ng/l a aproximadamente 50 μg/l. el uso de tales factores de crecimiento es bien conocido en la técnica y se expone, por ejemplo, en la Publicación de la Solicitud de Patente U.S. No. 2003/0157473, cuyo contenido se incorpora por la presente en esta memoria por referencia.
Una vez recogidas, las células pueden guardarse en estado quiescente durante varias horas a la temperatura ambiente, durante varias semanas a una temperatura reducida, tal como por ejemplo a 5ºC; o guardarse durante 65 varios meses en un crioextendedor como se expone más adelante. Preferiblemente, la atmósfera sobre las células
tiene una presión parcial de CO2 alta como se ha expuesto arriba. Alternativamente, las células recogidas pueden utilizarse en el transcurso de varias horas, tal como por ejemplo en un proceso de fertilización, un proceso de tinción,
o un proceso de clasificación.
Se utiliza un inhibidor de la motilidad para mantener las células inmóviles durante la tinción celular. Un proceso de tinción de las células espermáticas comprende típicamente la formación de una mixtura de tinción, a la que se hace referencia a veces como una mixtura de identificación, que contiene células espermáticas viables intactas, un inhibidor de la motilidad, y un tinte, al que se hace referencia a veces como un identificador. El inhibidor de la motilidad se pone en contacto con las células espermáticas para formar una suspensión de espermatozoides, y la suspensión se pone a continuación en contacto con un tinte selectivo del DNA. La fuente de esperma puede ser esperma puro, o alternativamente, un derivado de esperma que contenga espermatozoides obtenidos por centrifugación o por el uso de otros medios para separar el esperma en fracciones.
15 Según la presente invención, las células espermáticas se mantendrán generalmente quiescentes mientras que las mismas se mantengan en el inhibidor (Salisbury et al., 1963). Preferiblemente, sin embargo, la mezcla de tinción se mantiene en una atmósfera que tiene una presión parcial enriquecida de dióxido de carbono con relación al aire; por ejemplo, generalmente se prefiere proporcionar una atmósfera sobre la mixtura de tinción que contiene más de 99% de CO2.
El pH de la mixtura de tinción puede mantenerse a cualquiera de una gama de valores de pH; típicamente, esta gama estará comprendida en el intervalo de aproximadamente 5,0 a aproximadamente 9,0. Por ejemplo, la mixtura de tinción puede mantenerse a un pH “ligeramente ácido”, a saber desde aproximadamente 5,0 a aproximadamente
25 7,0. En esta realización, el pH es con preferencia de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 7,0, con más preferencia de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 6,5, y con preferencia máxima aproximadamente 6,2. Alternativamente, la mixtura de tinción puede mantenerse a un pH “ligeramente básico”, a saber, desde aproximadamente 7,0 a aproximadamente 9,0. En esta realización, el pH es con preferencia de aproximadamente 7,0 a aproximadamente 8,0, con más preferencia desde aproximadamente 7,0 a aproximadamente 7,5, y con preferencia máxima aproximadamente 7,3.
La mixtura de tinción puede formarse utilizando uno o más tintes selectivos de DNA excitables por UV o por luz visible, como se ha descrito anteriormente en la patente U.S. No. 5.135.759 y WO 02/41906. Tintes selectivos excitables por luz UV incluyen Hoechst 33342 y Hoechst 33258, cada uno de los cuales está disponible
35 comercialmente de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Tintes ilustrativos excitables por luz visible incluyen SYBR-14, disponible comercialmente de Molecular Probes, Inc. (Eugene, OR) o el conjugado bisbencimida-BODIPY® 6-{[3((2Z)-2-{[1-(difluoroboril)-3,5-dimetil-1H-pirrol-2-il]-metileno}-2H-pirrol-5-il)propanoil]amino}-N-[3-(metil{3-[({4-[6-(4metilpiperazin-1-il)-1H,3'H-2,5'-bibencimidazol-2'-il]fenoxi}acetil)amino]propil}amino)propil]hexanamida ("BBC") descrito en WO 02/41906. Cada uno de estos tintes puede utilizarse solo o en combinación; alternativamente, pueden utilizarse otros tintes penetrantes en las células excitables por luz UV y por luz visible, solos o en combinación con los tintes mencionados anteriormente, con tal que el tinte no afecte perjudicialmente a la viabilidad de las células espermáticas en un grado inaceptable cuando se utiliza en concentraciones que permiten la clasificación como se describe en otro lugar de esta memoria.
45 Alternativamente, la mixtura de tinción puede formarse utilizando poliamidas fluorescentes, y más específicamente poliamidas con un identificador o informador fluorescente conjugado a ellas. Tales identificadores emitirán fluorescencia cuando se unen a ácidos nucleicos. Ejemplos de poliamidas con un identificador o informador fluorescente unido a ellas incluyen, por ejemplo, las descritas en Best et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 100(21): 12063-12068 (2003); Gygi, et al., Nucleic Acids Res., 30(13): 2790-2799 (2002); Patente U.S. No. 5.998.140; Patente U.S. No. 6.143.901; y Patente U.S. No. 6.090.947, cuyos contenidos se incorporan por la presente en esta memoria por referencia.
Puede utilizarse también una secuencia de nucleótidos fluorescente para identificar las células espermáticas. Tales secuencias de nucleótidos emiten fluorescencia cuando se hibridan a un ácido nucleico que contiene una diana o
55 secuencia complementaria, pero son, por el contrario, no fluorescentes cuando se encuentran en un estado no hibridado. Oligonucleótidos de este tipo se exponen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. No. 2003/0113765 (que se incorpora por la presente en esta memoria por referencia).
Puede utilizarse también anticuerpos específicos de género para identificar las células espermáticas en una mixtura de tinción. En esta realización, por ejemplo, un anticuerpo específico de género puede conjugarse con un resto fluorescente (o molécula informadora equivalente). Dado que el anticuerpo se fija a los antígenos presentes solamente en una célula portadora del cromosoma X o, alternativamente, en una célula portadora del cromosoma Y, tales células pueden identificarse selectivamente basándose en su fluorescencia (frente a la ausencia de fluorescencia de una célula sin identificar). Además, puede utilizarse simultáneamente más de un anticuerpo con
65 especificidad de género, teniendo cada anticuerpo un resto fluorescente diferente unido al mismo. Esto permite la diferenciación de células portadoras del cromosoma X y portadoras del cromosoma Y, basándose en la diferente fluorescencia de cada una.
Pueden utilizarse también nanocristales luminiscentes selectivos de color para identificar las células espermáticas en
5 una mixtura de tinción. Conocidas también como puntos cuánticos, estas partículas son bien conocidas en la técnica, como se demuestra por las patentes U.S. No. 6.322.901 y U.S. No. 6.576.291, cada una de las cuales se incorpora por la presente en esta memoria por referencia. Estos nanocristales se han conjugado a cierto número de materiales biológicos que incluyen por ejemplo, péptidos, anticuerpos, ácidos nucleicos, estreptavidina, y polisacáridos (véanse, por ejemplo, las patentes U.S. Núms. 6.207.392; 6.423.551; 5.990.479 y 6.326.144, todas las
10 cuales se incorporan por la presente en esta memoria por referencia), y han sido utilizados para detectar dianas biológicas (véanse, por ejemplo, las patentes U.S. Núms. 6.207.392 y 6.247.323, las dos cuales se incorporan por la presente en esta memoria por referencia).
La concentración preferida del tinte selectivo de DNA o de cualquier otro tipo de tinte en la mixtura de tinción es
15 función de una gama de variables que incluyen la permeabilidad de las células al tinte seleccionado, la temperatura de la mixtura de tinción, la cantidad de tiempo tolerada para que se produzca la tinción, y el grado de enriquecimiento deseado en el paso de clasificación subsiguiente. En general, la concentración de tinte es preferiblemente suficiente para alcanzar el grado de tinción deseado en un periodo de tiempo razonablemente breve sin afectar en un grado sustancialmente desfavorable a la viabilidad del esperma. Por ejemplo, la concentración de
20 Hoechst 33342, Hoechst 33258, SYBR-14, o BBC en la mixtura de tinción estará comprendida por regla general entre aproximadamente 0,1 μM y aproximadamente 1,0 M, con preferencia desde aproximadamente 1,0 μM a aproximadamente 700 μM, y con preferencia máxima desde aproximadamente 100 μM a aproximadamente 200 μM. En una realización particularmente preferida, la concentración de Hoechst 33342, Hoechst 33258, SYBR-14, o BBC en la mixtura de tinción estará comprendida por regla general entre aproximadamente 400 μM y aproximadamente
25 500 μM, y será con preferencia máxima aproximadamente 450 μM. Según lo anterior, en una serie de condiciones de tinción, la concentración de Hoechst 33342 es con preferencia aproximadamente 10 μM. En otra serie de condiciones de tinción, la concentración de Hoechst 33342 es aproximadamente 150 μM. En otra serie adicional de condiciones de tinción, la concentración es con preferencia aproximadamente 200 μM. En otra serie adicional de condiciones de tinción, la concentración de Hoechst 33342 es con preferencia máxima aproximadamente 450 μM.
30 Como otro ejemplo, la concentración de una poliamida fluorescente, tal como por ejemplo las descritas en la Publicación de Solicitud de Patente U.S. No. 2001/0002314, estará comprendida por regla general entre aproximadamente 0,1 μM y aproximadamente 1 mM, con preferencia desde aproximadamente 1 μM a aproximadamente 1 mM, con más preferencia aproximadamente 5 μM a aproximadamente 100 mM, y con más
35 preferencia aún aproximadamente 10 μM.
Opcionalmente, la mixtura de tinción puede contener también aditivos para mejorar la viabilidad del esperma. Aditivos ilustrativos incluyen un antibiótico, un factor de crecimiento o una composición que regula las reacciones de oxidación/reducción intracelular y/o extracelularmente como se ha expuesto con anterioridad con respecto a la
40 recogida de la muestra de células. Estos aditivos pueden añadirse al fluido de recogida según lo anterior.
Una vez formada, la mixtura de tinción se utiliza a una temperatura de aproximadamente 4ºC a aproximadamente 30ºC para tinción de las células espermáticas; con preferencia, la temperatura es desde aproximadamente 20ºC a aproximadamente 30ºC, con más preferencia desde aproximadamente 25ºC a aproximadamente 30ºC, y con
45 preferencia máxima aproximadamente 28ºC. La selección de una temperatura preferida depende generalmente de una serie de variables, que incluyen por ejemplo la permeabilidad de las células al tinte o tintes que se utilicen, la concentración del o de los tintes en la mixtura de tinción, la cantidad de tiempo que permanecerán las células en la mixtura de tinción, y el grado de enriquecimiento deseado en el paso de clasificación.
50 Se deja que la absorción del tinte por las células espermáticas en la mixtura de tinción continúe durante un periodo de tiempo suficiente para obtener el grado deseado de tinción del DNA. Dicho periodo es típicamente un periodo suficiente para que el tinte se fije al DNA de las células espermáticas a fin de que las células espermáticas portadoras del cromosoma X e Y puedan clasificarse basándose en la intensidad de fluorescencia diferente y mensurable entre las dos. Según la presente invención, dicho periodo no será mayor que aproximadamente 160
55 minutos, con preferencia no mayor que aproximadamente 90 minutos, con más preferencia todavía no mayor que aproximadamente 60 minutos, y con preferencia máxima estará comprendido entre aproximadamente 5 minutos y aproximadamente 40 minutos.
En una realización de la presente invención, se forma una mixtura de tinción que comprende células espermáticas,
60 un inhibidor de la motilidad, y un tinte en una concentración comprendida entre aproximadamente 100 μM y aproximadamente 200 μM, y la mixtura de tinción se mantiene durante un periodo de tiempo a una temperatura de aproximadamente 28ºC. En otra realización, el inhibidor de la motilidad comprende 0,204 g de NaHCO3, 0,433 g de KHCO3, y 0,473 g de C6H8O7·H2O por 25 ml de agua purificada (0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua).
65 En otra realización adicional, se forma una mixtura de tinción que comprende células espermáticas, un inhibidor de la motilidad, y un tinte en una concentración de aproximadamente 400 μM a aproximadamente 500 μM, y la mixtura de tinción se mantiene durante un periodo de tiempo a una temperatura de aproximadamente 28ºC. En otra realización, la concentración de tinte es 450 μM. En otra realización, el inhibidor de la motilidad comprende 0,204 g
5 de NaHCO3, 0,433 g de KHCO3, y 0,473 g de C6H8O7·H2O por 25 ml de agua purificada (0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua).
Puede utilizarse también un inhibidor de la motilidad para hacer que las células espermáticas se mantengan inmóviles durante la clasificación de las células espermáticas. Generalmente, una vez que los espermatozoides se tiñen según la presente invención, los mismos pueden clasificarse según cualquier medio conocido que permita separación basada en fluorescencia. Métodos utilizados comúnmente y bien conocidos incluyen sistemas de citometría de flujo, como se ilustra y se describe en las Patentes U.S. Núms. 5.135.759, 5.985.216, 6.071.689,
15 6.149.867, y 6.263.745, las Publicaciones de Patente Internacional WO 99/33956 y WO 01/37655, y la Solicitud de Patente U.S. No. de Serie 10/812.351, cuyo contenido se incorpora por la presente en esta memoria por referencia, y la Publicación de Patente Internacional correspondiente WO 2004/088283. Cuando se clasifica según dichos métodos, los espermatozoides se introducen en la tobera de un citómetro de flujo en un fluido muestra. En una realización, por consiguiente, el fluido muestra puede comprender las células espermáticas teñidas y un inhibidor de la motilidad.
Análogamente, el fluido envolvente utilizado para rodear la corriente de fluido muestra a medida que la misma se desplaza a lo largo del citómetro puede comprender también un inhibidor de la motilidad. Generalmente, el fluido envolvente puede introducirse en una tobera del citómetro utilizando gas presurizado o por medio de una bomba de
25 jeringuilla. Preferiblemente, el gas presurizado es dióxido de carbono o nitrógeno, con más preferencia nitrógeno. Alternativamente, el gas presurizado puede ser dióxido de carbono, aunque en tales circunstancias, debería tenerse precaución para minimizar la efervescencia.
Opcionalmente, el fluido muestra o fluido envolvente puede contener también aditivos, tales como un antibiótico, una composición que regule las reacciones de oxidación/reducción intracelular o extracelularmente, o un factor de crecimiento como se ha expuesto anteriormente con respecto a la recogida de la muestra de células. Cada uno de estos aditivos puede añadirse a cualquiera de los fluidos según lo anterior.
35 Una vez que se han clasificado, las células clasificadas se recogen en una vasija que contiene un fluido de recogida. Generalmente, el propósito del fluido de recogida incluye amortiguar el impacto de las células espermáticas con la vasija de recogida o proporcionar un soporte fluido para las células.
En una realización, el fluido de recogida comprende un inhibidor de la motilidad y una fuente de proteína. Si se incluye, la fuente de proteína puede ser cualquier fuente de proteína que no interfiera con la viabilidad de las células espermáticas y sea compatible con el inhibidor de la motilidad. Ejemplos de fuentes comunes de proteína incluyen leche (con inclusión de leche homogeneizada térmicamente y desnatada), extracto de leche, yema de huevo, extracto de yema de huevo, proteína de soja y extracto de proteína de soja. Tales proteínas pueden utilizarse en una
45 concentración que va desde aproximadamente 1% (v/v) a aproximadamente 30% (v/v) con preferencia desde aproximadamente 10% (v/v) a aproximadamente 20% (v/v), y con más preferencia aproximadamente 10% (v/v).
Opcionalmente, el fluido de recogida puede contener también aditivos tales como un antibiótico, un factor de crecimiento o una composición que regula las reacciones de oxidación/reducción intracelular o extracelularmente, como se ha expuesto con anterioridad con respecto a la recogida de la muestra de células. Cada uno de estos aditivos puede añadirse al fluido de recogida conforme a lo anterior.
De acuerdo con ello, en cierta realización, el fluido de recogida comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O y 10% (v/v) de yema de huevo en agua, a un pH de aproximadamente 6,2,
55 con más preferencia aproximadamente 7,0, y con más preferencia todavía aproximadamente 6,5. Preferiblemente, el fluido de recogida se mantiene en una atmósfera que tenga una presión parcial enriquecida en dióxido de carbono con relación al aire; por ejemplo, la atmósfera puede tener una presión parcial de dióxido de carbono que excede de 0,9, con más preferencia 0,95 y con más preferencia todavía 0,99.
En lugar del uso de un fluido de recogida más tradicional, las células clasificadas pueden recogerse en una vasija que contenga o esté recubierta con un crioextendedor. De acuerdo con ello, en una realización particular, las células clasificadas se recogen en un crioextendedor que comprende un inhibidor de la motilidad. En otra realización, las células clasificadas se recogen en un crioextendedor que comprende un inhibidor de la motilidad, agua, Triladyl® (Minitube, Verona, WI, que comprende glicerol, tris, ácido cítrico, fructosa, 5 mg/100 ml de tilosina, 25 mg/100 ml de 65 gentamicina, 3,0 mg/100 ml de espectinomicina, y 15 mg/100 ml de lincomicina), yema de huevo, y acido pirúvico.
En otra realización adicional, el fluido de recogida es el crioextendedor que comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua, y 25 g de Triladyl®, 25 g de yema de huevo, y 10 mM de ácido pirúvico por 75 ml de agua.
Una vez que las células espermáticas se han clasificado y recogido en vasijas de recogida, pueden utilizarse las mismas para inseminación de mamíferos hembra. Esto puede ocurrir casi inmediatamente, requiriendo poco tratamiento adicional del esperma. Análogamente, el esperma puede enfriarse o congelarse también para uso en
10 una fecha posterior. En tales casos, el esperma puede beneficiarse de la adición de un crioextendedor a fin de minimizar el impacto sobre la viabilidad o la motilidad posterior a la descongelación como resultado del enfriamiento y la congelación.
Puede utilizarse un inhibidor de la motilidad para mantener inmóviles las células en el crioextendedor.
15 Generalmente, un crioextendedor puede comprender un inhibidor de la motilidad, una fuente de proteína, y un crioprotector. Si se incluye, puede añadirse una fuente de proteína para proporcionar soporte a las células y amortiguar el contacto de las células con la vasija de recogida. La fuente de proteína puede ser cualquier fuente de proteína que no interfiera con la viabilidad de las células espermáticas y sea compatible con el inhibidor de la motilidad. Ejemplos de fuentes de proteína comunes incluyen leche (con inclusión de leche homogeneizada
20 térmicamente y desnatada), extracto de leche, yema de huevo, extracto de yema de huevo, proteína de soja y extracto de proteína de soja. Tales proteínas pueden encontrarse en una concentración que va desde aproximadamente 10% (v/v) a aproximadamente 30% (v/v), con preferencia desde aproximadamente 10% (v/v) a aproximadamente 20% (v/v), y con más preferencia aproximadamente 20% (v/v).
25 Preferiblemente se incluye un crioprotector en el crioextendedor a fin de aminorar o prevenir el choque frío o para mantener la fertilidad de los espermatozoides. Se conocen en la técnica numerosos crioprotectores. La selección de un crioprotector adecuado para uso con un extendedor dado puede variar, y depende de la especie de la que se haya obtenido el esperma a congelar. Ejemplos de crioprotectores adecuados incluyen, por ejemplo, glicerol, dimetilsulfóxido, etilenglicol, propilenglicol, trehalosa, Triladyl®, y combinaciones de los mismos. Si se incluyen,
30 generalmente, estos crioprotectores están presentes en el crioextendedor en una cantidad de aproximadamente 1% (v/v) a aproximadamente 15% (v/v), con preferencia en una cantidad de aproximadamente 5% (v/v) a aproximadamente 10% (v/v), con más preferencia en una cantidad que va desde aproximadamente 7% (v/v), y con preferencia máxima en una cantidad de aproximadamente 6% (v/v).
35 En una realización particular, el crioextendedor comprende un inhibidor de la motilidad, agua, Triladyl®, yema de huevo, y ácido pirúvico. En otra realización adicional, el crioextendedor comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua, y 25 g de Triladyl®, 25 g de yema de huevo, y 10 mm de ácido pirúvico por 75 ml de agua.
40 En otra realización particular, el crioextendedor comprende un inhibidor de la motilidad, agua, Triladyl®, y yema de huevo. En otra realización adicional49(, el crioextendedor comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3, 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua, y 25 g de Triladyl®, y 25 g de yema de huevo por 75 ml de agua.
Opcionalmente, el crioextendedor puede contener también un antibiótico, un factor de crecimiento o una
45 composición que regule las reacciones de oxidación/reducción intracelular y/o extracelularmente como se ha expuesto con anterioridad con respecto a la recogida de la muestra de células. Cada uno de estos aditivos puede añadirse al fluido de recogida según lo anterior.
50 Los ejemplos no limitantes que siguen se proporcionan para ilustrar adicionalmente la presente invención.
55 Se recogió semen de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y se transportó a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, se analizó el semen respecto a concentración, motilidad y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se prepararon varios tubos de suspensiones de 150x106 espermatozoides/ml por
60 suspensión del semen en un tampón de TCA o un inhibidor basado en carbonato. La Tabla I siguiente ilustra las composiciones y condiciones de tinción utilizadas.
Tabla I.
- Nombre de la Muestra
- Composición pH Conc. (μM)Hoechst Temperatura (°C)
- 10mM pir TCA
- 10mM piruvato en TCA 7,3 600μM 28°C
- 10mM pir CO2
- 10mM piruvato en TCA; atmósfera protectora inerte con balón de CO2 7,3 600μM 28°C
- Carbonato 6,2
- Inhibidor basado en carbonato, pH 6,2 6,2 600μM 28°C
- Carbonato 7,3
- Inhibidor basado en carbonato, pH 7,3 7,3 600μM 28°C
A las suspensiones de espermatozoides se añadieron partes alícuotas de una solución 10 mM de Hoechst en agua,
5 a fin de obtener una concentración de Hoechst 600 μM. Las suspensiones de espermatozoides se mantuvieron en un baño de agua a 28ºC durante toda la duración del periodo de tinción (aproximadamente 1 hora). Las suspensiones de espermatozoides se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de espermatozoides teñida, adición de 200 μl de piruvato 10 mM a 25ºC en TCA a pH 7,3 para iniciar la inversión de la quiescencia, dejando al menos un periodo de equilibración de 5 minutos, y analizando por IVOS para medir la
10 motilidad progresiva porcentual (% Prog. Mot.). Las comparaciones de las motilidades progresivas porcentuales IVOS se ven en las Figuras 1-3.
Ejemplo 2
15 Se recogió semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y se transportó a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, el semen se analizó respecto a concentración, motilidad y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se prepararon varios tubos de suspensiones de 450x106 espermatozoides/ml por
20 suspensión del semen en un tampón de TCA o un inhibidor basado en carbonato. La Tabla II siguiente ilustra las composiciones y condiciones de tinción utilizadas.
Tabla II
- Nombre de la Muestra
- Composición pH Conc. (μM) Hoechst Temperatura (°C)
- 10mM pir TCA
- 10mM piruvato en TCA 7,3 1000μM 28°C
- Carbonato 6,2
- Inhibidor basado en carbonato, pH 6,2 6,2 1000μM 28°C
- Carbonato 7,3
- Inhibidor basado en carbonato, pH 7,3 7,3 1000μM 28°C
25 Se añadieron a las suspensiones de espermatozoides partes alícuotas de una solución de Hoechst 10 mM a fin de obtener una concentración de Hoechst 1000 μM. Las suspensiones de espermatozoides se mantuvieron en un baño de agua a 28ºC durante 1 hora, y se diluyeron luego a 150x106 espermatozoides/ml con piruvato 10 mM en TCA o un inhibidor basado en carbonato a un pH de 6,2 como se indica específicamente en cada figura para diluir hasta
30 una concentración típica para la clasificación. Las suspensiones de espermatozoides se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de espermatozoides teñida y diluida en el periodo de tiempo designado en cada figura y adición de 200 μl de piruvato 10 mM a 25ºC en TCA a pH 7,3 para iniciar la inversión de la quiescencia, dejando al menos un periodo de equilibración de 5 minutos, y analizando la parte alícuota por IVOS para medir la motilidad progresiva porcentual. Las comparaciones de las motilidades progresivas porcentuales IVOS
35 se ven en las Figuras 4-6.
Ejemplo 3
Se aisló semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y se transportó a 25ºC en un
40 recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, el semen se analizó respecto a concentración, motilidad y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se prepararon varios tubos de 450x106 espermatozoides/ml por suspensión del semen en un tampón de TCA o un inhibidor basado en carbonato. La Tabla II siguiente ilustra las composiciones y
45 condiciones de tinción utilizadas.
Tabla III
- Nombre de la Muestra
- Tampón pH Conc. (μM) Hoechst Temperatura (°C)
- 10mM pir TCA
- 10mM piruvato en TCA 7,3 300μM 41°C
- Carbonato 6,2
- Inhibidor basado en carbonato, pH 6,2 6,2 300μM 41°C
- Carbonato 7,3
- Inhibidor basado en carbonato, pH 7,3 7,3 300μM 41°C
A las suspensiones de espermatozoides, se añadieron partes alícuotas de una solución de Hoechst 10 mM en agua 5 para dar una concentración de Hoechst 300 μM. Las suspensiones de espermatozoides se mantuvieron en un baño de agua a 41ºC durante 30 minutos, y se diluyeron luego a 150x106 espermatozoides/ml con piruvato 10 mM en TCA
o un inhibidor basado en carbonato a pH de 6,2 como se indica específicamente en cada figura para diluir hasta una concentración típica para la clasificación. Las suspensiones de espermatozoides se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de espermatozoides teñida y diluida en el periodo de tiempo designado en
10 cada figura y adición de 200 μl de piruvato 10 mM en TCA a 25ºC y a pH 7,3 para iniciar la inversión de la quiescencia, dejando al menos un periodo de equilibración de 5 minutos, y analizando por IVOS para medir la motilidad progresiva porcentual. Las comparaciones de las motilidades progresivas porcentuales IVOS se ven en las Figuras 7-9.
Se recogió semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y la muestra se diluyó en 2 partes de tampón de carbonato para transporte a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, el semen se analizó respecto a concentración, motilidad, y motilidad progresiva por el 20 Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se preparó 1 ml de suspensión de 150x106 espermatozoides/ml por retirada de una parte alícuota de la suspensión de espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos, retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en tampón de TCA a 41ºC y pH 7,3. Se preparó 1 ml adicional de 25 150x106 espermatozoides/ml por suspensión de una parte alícuota de semen en tampón de TCA a 41ºC que contenía piruvato 10 mM a pH 7,3. Se añadieron a las suspensiones de espermatozoides partes alícuotas de solución de Hoechst 10 mM en agua para obtener la concentración de tinte Hoechst 400 μM. Las suspensiones de espermatozoides se mantuvieron en un baño de agua a 41ºC durante toda la duración del periodo de tinción. Las suspensiones de espermatozoides se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de
30 células espermáticas de tinción, adición de 200 μl del mismo tampón a la misma temperatura y análisis por IVOS para medir la motilidad progresiva % (% Prog. Mot.). Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 10.
Ejemplo 5
35 Se obtuvieron y se prepararon muestras de esperma de la misma manera que en el Ejemplo 4 con la excepción siguiente. Los tampones utilizados para suspender los espermatozoides para tinción y análisis IVOS eran TCA y TCA que contenía vitamina K 10 μM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 11.
Ejemplo 6
40 Se obtuvieron y se prepararon muestras de esperma de la misma manera que en el Ejemplo 4 con la excepción siguiente. Los tampones utilizados para suspender los espermatozoides para tinción y análisis IVOS eran TCA y TCA que contenía vitamina K 100 μM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 12.
Se obtuvieron y se prepararon muestras de esperma de la misma manera que en el Ejemplo 4 con la excepción siguiente. Los tampones utilizados para suspender los espermatozoides para tinción y análisis IVOS eran TCA y TCA que contenía ácido lipoico 1 mM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 13.
Ejemplo 8
Se recogió semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y la muestra se diluyó en 2 partes de tampón de carbonato para transporte a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de 55 tinción. A su recepción, el semen se analizó respecto a concentración, motilidad, y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se preparó 1 ml de suspensión de 150x106 espermatozoides/ml por centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos, retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en tampón de TCA a 28ºC y pH 7,3. Se
preparó 1 ml adicional de 150x106 espermatozoides/ml por suspensión de una parte alícuota de semen en tampón de TCA a 28ºC que contenía piruvato 10 mM a pH 7,3. Se añadieron a las suspensiones de espermatozoides partes alícuotas de una solución de Hoechst 10 mM en agua a fin de obtener la concentración de tinte Hoechst 600 μM. Las suspensiones de espermatozoides se mantuvieron en un baño de agua a 28ºC durante toda la duración del periodo
5 de tinción. Las suspensiones de espermatozoides se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de células espermáticas de tinción, adición de 200 μl del mismo tampón a la misma temperatura y análisis por IVOS para medir la motilidad progresiva porcentual (% Prog. Mot.). Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 14.
Ejemplo 9
Se obtuvieron muestras de esperma y se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 8 con la excepción siguiente. Los tampones utilizados para suspender los espermatozoides para tinción y análisis IVOS eran TCA y TCA que contenía vitamina K 100 μM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 15.
Ejemplo 10
Se obtuvieron y se prepararon muestras de esperma de la misma manera que en el Ejemplo 8 con la excepción siguiente. Los tampones utilizados para suspender los espermatozoides para tinción y análisis IVOS eran TCA y TCA que contenía ácido lipoico 1 mM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura 16.
Ejemplo 11
Se recogió semen de toro procedente de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y se diluyó la
25 muestra en 2 partes de tampón de carbonato para su transporte a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, el semen se analizó en cuanto a concentración, motilidad, y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración del semen, se prepararon suspensiones de 1 ml de 150x106 espermatozoides/ml por retirada de partes alícuotas de la suspensión de espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos, retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en 1 ml de tampón de TCA o en 1 ml de tampón de TCA con piruvato 2,5 mM, 10 mM, 25 mM, o 50 mM. Se añadió a las muestras solución MON 33342 para obtener las concentraciones finales de tinte de 600 μM. Las suspensiones se incubaron en un baño de agua a 28ºC. Las suspensiones de espermatozoides teñidas se analizaron por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión
35 de espermatozoides de tinción, adición de 200 μl del mismo tampón a la misma temperatura y análisis por IVOS a fin de medir la motilidad progresiva porcentual (% Prog. Mot.). Los resultados IVOS para % Prog. Mot. se resumen en la Figura 17.
Ejemplo 12
Se recogió semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y la muestra se diluyó en 2 partes de tampón de carbonato para transporte a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, el semen se analizó respecto a concentración, motilidad, y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. 45 Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración de semen, se preparó 1 ml de suspensión de 150x106 espermatozoides/ml en tampón de TCA por retirada de una parte alícuota de la suspensión de espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos, retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en 1 ml tampón de TCA. Se preparó 1 ml de suspensión de 150x106 espermatozoides/ml en piruvato 10 mM en TCA por retirada de una parte alícuota de la suspensión de espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos, retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en 1 ml de tampón piruvato-TCA 10 mM. Se añadió a las muestras solución de tinte SYBR 14 para obtener las concentraciones finales de tinte 20 μM. Las suspensiones se incubaron en un baño de agua a 28ºC. Se analizaron las suspensiones de espermatozoides por retirada de una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de espermatozoides de tinción, adición de 200 μl del mismo tampón a la
55 misma temperatura y análisis por IVOS para medir la motilidad progresiva porcentual (% Prog. Mot.). Los resultados IVOS para % Prog. Mot. se muestran en la Figura 18.
Ejemplo 13
Se recogió semen de toro de un toro sexualmente maduro utilizando una vagina artificial y se diluyó la muestra en 2 partes de tampón de carbonato para transporte a 25ºC en un recipiente de temperatura controlada a la instalación de tinción. A su recepción, se analizó el semen respecto a concentración, motilidad, y motilidad progresiva por el Analizador de Motilidad Hamilton-Thorn (IVOS), según procedimientos estándar y bien conocidos (Farrell et al. Theriogenology, 49(4): 871-9 (marzo 1998)). Basándose en la concentración de semen, se preparó 1 ml de 65 suspensión de 150x106 espermatozoides/ml en tampón de TCA por retirada de una parte alícuota de la suspensión
de espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos,
retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en 1 ml de tampón de TCA. Se preparó 1 ml de suspensión
de 150x106 espermatozoides/ml en piruvato 10 mM en TCA, por retirada de una parte alícuota de la suspensión de
espermatozoides en carbonato, centrifugación de la suspensión de espermatozoides a 500xg durante 5 minutos,
5 retirada del sobrenadante y re-suspensión del sedimento en 1 ml de de tampón piruvato-TCA 10 mM. Se añadió a
las muestras solución de BBC para obtener las concentraciones finales de tinte de 100 μM. Las suspensiones se
incubaron en un baño de agua a 28ºC. Las suspensiones de espermatozoides teñidas se analizaron por retirada de
una parte alícuota de 50 μl de la suspensión de espermatozoides de tinción, adición de 200 μl del mismo tampón a la
misma temperatura y análisis por IVOS para medir la motilidad progresiva porcentual (% Prog. Mot.). Los resultados 10 IVOS para % Prog. Mot. se muestran en la Figura 19.
Ejemplo 14
Se obtuvieron muestras de esperma y se prepararon de la misma manera que en el Ejemplo 4 con la excepción 15 siguiente. La concentración de tinción fue BBC 200 μM. Los resultados del análisis IVOS se resumen en la Figura
20.
Claims (13)
- REIVINDICACIONES1. Un método de producción de una suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género que comprende:5 (a) mezclar una suspensión de células espermáticas no humano con una composición que inhibe la motilidad de las células espermáticas no humano y comprende una ratio molar de potasio a sodio mayor que 1:1, respectivamente, y a continuación con una composición que regula las reacciones de oxidación/reducción intracelular y/o extracelularmente seleccionada del grupo constituido por piruvato, vitamina K, ácido lipoico, glutatión, flavinas, quinonas, superóxido-dismutasa (SOD) y miméticos de SOD;10 (b) teñir la suspensión de células espermáticas no humanas inmóviles con un tinte selectivo del DNA durante menos de 160 minutos y a una temperatura de 4ºC a 30ºC; y(c) clasificar la suspensión de células espermáticas no humanas inmóviles teñidas para formar una población de inseminación viable enriquecida en género de células espermáticas no humanas portadoras del cromosoma X o portadoras del cromosoma Y que tienen tinte seleccionado de DNA asociado con su DNA; y15 (d) retornar dichas células espermáticas no humanas a un estado activado, en donde al menos 20% de las células reactivadas tienen una velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas, que es al menos 50% de la velocidad de paso, la velocidad progresiva, o ambas de las células espermáticas del eyaculado reciente como se mide por análisis de esperma HTM-IVOS.20 2. El método de la reivindicación 1, en donde la ratio molar de potasio a sodio es mayor que 1,5:1, respectivamente.
- 3. El método de la reivindicación 2, en donde la ratio molar de potasio a sodio es mayor que 1,75:1,respectivamente. 25
-
- 4.
- El método de la reivindicación 3, en donde la ratio molar de potasio a sodio es mayor que 2:1, respectivamente.
-
- 5.
- El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4 en donde el tinte se selecciona del grupo constituido
30 por Hoechst 33342, Hoechst 33258, SYBR-14, y el conjugado bisbencimida-BODIPY® 6-{[3-((2Z)-2-{[1(difluoroboril)-3,5-dimetil-1H-pirrol-2-il]-metileno}-2H-pirrol-5-il)propanoil]amino}-N-[3-(metil{3-[({4-[6-(4-metilpiperazin1-il)-1H,3'H-2,5'-bibencimidazol-2'-il]fenoxi}acetil)amino]propil}-amino)propil]hexanamida. - 6. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde la suspensión de células espermáticas 35 no humanas enriquecidas en género comprende una fuente de carbonato.
- 7. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género comprende NaHCO3, KHCO3, y C6H8O7·H2O.40 8. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género se forma a partir de un tampón que comprende 0,097 moles/l de NaHCO3, 0,173 moles/l de KHCO3 y 0,090 moles/l de C6H8O7·H2O en agua.
- 9. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la45 suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es al menos 1,25x108 espermatozoides por ml.
- 10. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en lasuspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es al menos 1,5x108 espermatozoides por 50 ml.
- 11. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es al menos 1,75x108 espermatozoides por ml.
- 12. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es menor que 9,0x105 espermatozoides por ml.60 13. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es menor que 7x105 espermatozoides por ml.
- 14. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es menor que aproximadamente 5x105 espermatozoides por ml.5 15. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es menor que 2x105 espermatozoides por ml.
- 16. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde la concentración de espermatozoides en la10 suspensión de células espermáticas no humanas enriquecidas en género es menor que 1x105 espermatozoides por ml.
- 17. El método de una cualquiera de las reivindicaciones 1-16, en donde la suspensión de células espermáticas seencuentra en una atmósfera que tiene una presión parcial enriquecida en CO2 con relación al aire. 15
Applications Claiming Priority (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US55740704P | 2004-03-29 | 2004-03-29 | |
US557407P | 2004-03-29 | ||
US61417804P | 2004-09-29 | 2004-09-29 | |
US614178P | 2004-09-29 | ||
US61844004P | 2004-10-13 | 2004-10-13 | |
US618440P | 2004-10-13 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2397678T3 true ES2397678T3 (es) | 2013-03-08 |
Family
ID=34964337
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES09014128T Active ES2397678T3 (es) | 2004-03-29 | 2005-03-29 | Suspensiones de espermatozoides para clasificación en poblaciones enriquecidas portadoras del cromosoma X o Y |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US7892725B2 (es) |
EP (5) | EP2260854A1 (es) |
JP (4) | JP2007537727A (es) |
CN (2) | CN104974983A (es) |
AR (2) | AR049259A1 (es) |
AU (2) | AU2005228893B2 (es) |
BR (2) | BRPI0509485A (es) |
CA (3) | CA2561661C (es) |
DK (2) | DK2801363T3 (es) |
ES (1) | ES2397678T3 (es) |
HK (2) | HK1173745A1 (es) |
MX (2) | MXPA06011344A (es) |
NZ (2) | NZ550196A (es) |
PL (1) | PL2151243T3 (es) |
PT (1) | PT2151243E (es) |
WO (2) | WO2005095590A2 (es) |
Families Citing this family (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ, インコーポレイテッド | 光学装置 |
US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
EP2283848A1 (en) | 1998-07-30 | 2011-02-16 | Xy, Llc | Equine system for non-surgical articificial insemination |
US7208265B1 (en) * | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
HUP0302232A2 (hu) | 2000-05-09 | 2003-10-28 | Xy, Inc. | Berendezés és eljárás X-kromoszómát hordozó hímivarsejtek és Y-kromoszómát hordozó hímivarsejtek szétválogatására, eljárás részecskék megkülönböztetésére és részecskeosztályozó berendezés |
AU2002220018A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-06-11 | Colorado State University | System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations |
US7713687B2 (en) * | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
MX337304B (es) | 2002-08-01 | 2016-02-24 | Xy Llc | Sistema de separacion de baja presion para celulas de esperma. |
US8486618B2 (en) | 2002-08-01 | 2013-07-16 | Xy, Llc | Heterogeneous inseminate system |
WO2004017041A2 (en) | 2002-08-15 | 2004-02-26 | Xy, Inc. | High resolution flow cytometer |
US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
EP2306174B1 (en) | 2003-03-28 | 2016-05-11 | Inguran, LLC | Flow cytometry nozzle for orienting particles and corresponding method |
NZ544103A (en) | 2003-05-15 | 2010-10-29 | Xy Llc | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
CN104974983A (zh) | 2004-03-29 | 2015-10-14 | 英格朗公司 | 用于授精的***悬浮液 |
AU2005266930B2 (en) | 2004-07-22 | 2010-09-16 | Inguran, Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
DE102005044530B4 (de) * | 2004-09-16 | 2010-02-18 | Masterrind Gmbh | Verfahren zur geschlechtsspezifischen Selektion von Säugerspermatozoen |
US9433484B2 (en) * | 2007-07-27 | 2016-09-06 | Brad K. Stroud | Artificial breeding techniques for bovines including semen diluents and AI apparatus |
US8415094B2 (en) * | 2007-12-21 | 2013-04-09 | Jaffar Ali bin M. Abdullah | Protein-free gamete and embryo handling and culture media products |
CN101554152B (zh) * | 2009-05-21 | 2012-05-09 | 西北农林科技大学 | 一种冷冻***稀释液及其配制方法 |
NZ600737A (en) * | 2009-11-24 | 2013-05-31 | Biassex Pty Ltd | Method for influencing sex selection in artificial insemination and apparatus for same |
CN103327934A (zh) | 2010-08-10 | 2013-09-25 | 布拉德·K·斯特劳德 | 减少牛的人工受精中所用的***数量的方法和设备 |
US11622844B2 (en) | 2010-08-10 | 2023-04-11 | Maximate, Llc | Method, apparatus and kit for artificial insemination of bovine |
US10610343B2 (en) | 2013-07-03 | 2020-04-07 | Brad K. Stroud | Method, apparatus and kit for artificial insemination of bovine |
CN103249829B (zh) | 2010-08-20 | 2015-08-19 | 孙钰 | 用于自动化***操作的***和方法 |
US9781919B2 (en) | 2011-06-01 | 2017-10-10 | Inguran, Llc | Compositions and methods for improving the quality of processed sperm |
NZ764002A (en) | 2011-06-01 | 2022-12-23 | Inguran Llc | Compositions and methods for improving the quality of processed sperm |
US20130109596A1 (en) | 2011-09-26 | 2013-05-02 | Life Technologies Corporation | High efficiency, small volume nucleic acid synthesis |
CA2905243C (en) | 2012-03-14 | 2021-11-09 | Membrane Protective Technologies, Inc. | System and substances for cryopreservation of viable cells |
EP2834357B1 (en) | 2012-04-04 | 2017-12-27 | Life Technologies Corporation | Tal-effector assembly platform, customized services, kits and assays |
US9888990B2 (en) | 2012-06-06 | 2018-02-13 | Inguran, Llc | Methods for use of sex sorted semen to improve genetic management in swine |
US9433195B2 (en) | 2012-06-06 | 2016-09-06 | Inguran, Llc | Methods for increasing genetic progress in a line or breed of swine using sex-selected sperm cells |
WO2014032017A1 (en) | 2012-08-23 | 2014-02-27 | Carrell Douglas T | Sperm separation devices and associated methods |
US10620213B2 (en) | 2012-10-05 | 2020-04-14 | Inguran, Llc | High pressure sperm sorting and flow cytometer methods |
AU2013325222B2 (en) | 2012-10-05 | 2016-06-23 | Inguran, Llc | Methods of processing sperm for sex sorting |
US10563240B2 (en) | 2013-03-14 | 2020-02-18 | Life Technologies Corporation | High efficiency, small volume nucleic acid synthesis |
WO2016011174A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | Life Technologies Corporation | Compositions and methods for nucleic acid assembly |
CA2965138A1 (en) * | 2014-10-20 | 2016-04-28 | University Of Utah Research Foundation | Tissue sample processing system and associated methods |
CA3210347A1 (en) | 2014-11-20 | 2016-05-26 | Inguran, Llc | Low sugar sperm media and compositions |
CA3147259A1 (en) | 2014-12-09 | 2016-06-16 | Life Technologies Corporation | High efficiency, small volume nucleic acid synthesis |
WO2017007925A1 (en) | 2015-07-07 | 2017-01-12 | Thermo Fisher Scientific Geneart Gmbh | Enzymatic synthesis of nucleic acid sequences |
EP3359669B1 (en) | 2015-10-06 | 2020-05-13 | Pierce Biotechnology, Inc. | Devices and methods for producing proteins |
PT110231B (pt) * | 2017-08-02 | 2021-02-22 | Universidade Do Porto | Potenciadores de mtor e suas utilizações para melhorar a qualidade e função do esperma durante o armazenamento |
US20210147830A1 (en) | 2018-06-29 | 2021-05-20 | Thermo Fisher Scientific Geneart Gmbh | High throughput assembly of nucleic acid molecules |
US10603075B1 (en) | 2018-11-30 | 2020-03-31 | Ohana Biosciences, Inc. | Compositions and methods for enhancing sperm function |
GB201905303D0 (en) | 2019-04-15 | 2019-05-29 | Thermo Fisher Scient Geneart Gmbh | Multiplex assembly of nucleic acid molecules |
US20240025939A1 (en) | 2020-03-06 | 2024-01-25 | Life Technologies Corporation | High sequence fidelity nucleic acid synthesis and assembly |
DE102021002257A1 (de) | 2021-04-29 | 2022-11-03 | Forschungsverbund Berlin E.V. | Mittel zur Konservierung von Säugetiersperma und Verwendung des Mittels |
WO2024132094A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Thermo Fisher Scientific Geneart Gmbh | Retrieval of sequence-verified nucleic acid molecules |
Family Cites Families (635)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3005756A (en) * | 1958-11-14 | 1961-10-24 | Noland L Van Demark | Diluter containing carbon dioxide for preserving semen |
US3005759A (en) * | 1959-04-24 | 1961-10-24 | American Zinc Inst | Zinc electroplating |
US3299354A (en) | 1962-07-05 | 1967-01-17 | Coulter Electronics | Aperture tube structure for particle study apparatus |
US3499435A (en) | 1967-06-02 | 1970-03-10 | Paul E Rockwell | Esophageal probe for use in monitoring |
US3547526A (en) | 1967-10-26 | 1970-12-15 | Kollsman Instr Corp | Optical beam cross-section converter |
US3810010A (en) | 1968-11-02 | 1974-05-07 | Telefunken Patent | Particle analysis method and apparatus wherein liquid containing particles is sucked into a constricted flow path |
US3829216A (en) | 1968-11-26 | 1974-08-13 | M Persidsky | Optical system and method for counting sperm cells |
DE1815352C3 (de) | 1968-12-18 | 1975-03-20 | Wolfgang Prof. Dr. Dittrich | Automatisches MeB- und Zählgerät für die Teilchen einer Dispersion |
US3894529A (en) | 1969-04-10 | 1975-07-15 | Bio Controls Inc | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
US4474875A (en) | 1969-04-10 | 1984-10-02 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
US4327177A (en) | 1969-04-10 | 1982-04-27 | Wallace Shrimpton | Method and means for controlling the sex of mammalian offspring and product therefor |
DE1919628C3 (de) | 1969-04-18 | 1975-04-10 | Wolfgang Prof. Dr. Dittrich | Anordnung zum automatischen Zählen und/oder Klassifizieren von in einem strömungsfähigen Medium dispergierten Teilchen |
US3687806A (en) | 1969-11-04 | 1972-08-29 | Bio Controls Inc | Method for controlling sex of mammalian offspring |
US3788744A (en) | 1970-01-14 | 1974-01-29 | Bio Physics Systems Inc | Method and apparatus for photoanalysis |
US3661460A (en) | 1970-08-28 | 1972-05-09 | Technicon Instr | Method and apparatus for optical analysis of the contents of a sheathed stream |
US3816249A (en) | 1970-11-23 | 1974-06-11 | B Bhattacharya | Universal medium and method for extending the useful life of semen in vitro |
US3644128A (en) | 1970-12-28 | 1972-02-22 | Stuart Lipner | Method of preparing comminuted meat products |
US3756459A (en) | 1971-01-12 | 1973-09-04 | Damon Corp | Method and apparatus for metering fluid utilizing pressure differentials |
US3791384A (en) * | 1971-07-15 | 1974-02-12 | Schaumann H | Artificial insemination of sows |
US3833796A (en) | 1971-10-13 | 1974-09-03 | Georgia Tech Res Inst | Method and apparatus for chromosome digitizing |
BE793185A (fr) | 1971-12-23 | 1973-04-16 | Atomic Energy Commission | Appareil pour analyser et trier rapidement des particules telles que des cellules biologiques |
US3826364A (en) | 1972-05-22 | 1974-07-30 | Univ Leland Stanford Junior | Particle sorting method and apparatus |
US3761941A (en) | 1972-10-13 | 1973-09-25 | Mead Corp | Phase control for a drop generating and charging system |
CA1029833A (en) | 1973-02-23 | 1978-04-18 | Hildegarde Goehde | Apparatus for the automatic counting and measuring of suspended particles |
US3791517A (en) | 1973-03-05 | 1974-02-12 | Bio Physics Systems Inc | Digital fluidic amplifier particle sorter |
US4009260A (en) | 1973-04-19 | 1977-02-22 | Schering Aktiengesellschaft | Fractionation of sperm |
US3893766A (en) | 1973-06-14 | 1975-07-08 | Coulter Electronics | Apparatus for orienting generally flat particles for slit-scan photometry |
USRE29141E (en) | 1973-06-14 | 1977-02-22 | Coulter Electronics, Inc. | Apparatus for orienting generally flat particles for sensing |
US3947093A (en) | 1973-06-28 | 1976-03-30 | Canon Kabushiki Kaisha | Optical device for producing a minute light beam |
US3944917A (en) | 1973-08-13 | 1976-03-16 | Coulter Electronics, Inc. | Electrical sensing circuitry for particle analyzing device |
US3909744A (en) | 1973-09-24 | 1975-09-30 | United Technologies Corp | Unstable resonator system producing a high irradiance beam in the far field |
US3906929A (en) | 1973-11-23 | 1975-09-23 | Lynn Lawrence Augspurger | Processes for reproduction of cellular bodies |
FR2254639B1 (es) | 1973-12-18 | 1978-06-02 | Agronomique Inst Nat Rech | |
US4070617A (en) | 1974-05-08 | 1978-01-24 | Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. | Device for controlling the particle flow in an apparatus for measuring the properties of particles suspended in liquid |
US3973196A (en) | 1974-05-24 | 1976-08-03 | Coulter Electronics, Inc. | Method and apparatus for ejecting a metered amount of particulate sample |
US3963606A (en) | 1974-06-03 | 1976-06-15 | Coulter Electronics, Inc. | Semi-automatic adjusting delay for an electronic particle separator |
US3877430A (en) | 1974-07-17 | 1975-04-15 | Horst K Wieder | Artificial insemination apparatus |
US4083957A (en) | 1974-07-26 | 1978-04-11 | Lang John L | Process for the alteration of the sex-ratio of mammals |
US4006360A (en) | 1974-08-21 | 1977-02-01 | Block Engineering, Inc. | Method of discriminating between dyed particles and background fluorescence of the dye |
US3976197A (en) | 1974-11-22 | 1976-08-24 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation method and apparatus for controlling the sex of mammalian offspring |
US4092229A (en) | 1975-12-17 | 1978-05-30 | Bhattacharya Bhairab C | Thermal convection counter streaming sedimentation and forced convection galvanization method for controlling the sex of mammalian offspring |
US4014611A (en) | 1975-04-30 | 1977-03-29 | Coulter Electronics, Inc. | Aperture module for use in particle testing apparatus |
DE2521236C3 (de) | 1975-05-10 | 1978-12-14 | Hildegard Dr. 4400 Muenster Goehde Geb. Kuhl | Einrichtung zum Zählen und Messen von in einer Flüssigkeit suspendierten Teilchen |
US3960449A (en) | 1975-06-05 | 1976-06-01 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Measurement of angular dependence of scattered light in a flowing stream |
US4058732A (en) | 1975-06-30 | 1977-11-15 | Analytical Radiation Corporation | Method and apparatus for improved analytical fluorescent spectroscopy |
US4007087A (en) | 1975-10-17 | 1977-02-08 | Gametrics Limited | Sperm fractionation and storage |
AU2154077A (en) | 1976-01-27 | 1978-07-27 | Univ Edinburgh | Control of sex ratio in mammalian offspring |
US4162282A (en) | 1976-04-22 | 1979-07-24 | Coulter Electronics, Inc. | Method for producing uniform particles |
US4302166A (en) | 1976-04-22 | 1981-11-24 | Coulter Electronics, Inc. | Droplet forming apparatus for use in producing uniform particles |
GB1563856A (en) | 1976-06-10 | 1980-04-02 | Coulter Electronics | Methods and apparatus for delectively separating small particles suspended in a liquid |
GB1583150A (en) | 1976-08-02 | 1981-01-21 | Milk Marketing Board | Apparatus for collecting eggs |
US4110604A (en) | 1976-11-04 | 1978-08-29 | Becton, Dickinson And Company | Particle density measuring system |
DE2709399C3 (de) | 1977-03-04 | 1980-07-24 | Goehde, Wolfgang, Dr., 4400 Muenster | Einrichtung zum Messen von Zelleigenschaften |
DE2716095A1 (de) | 1977-04-12 | 1978-10-19 | Zoeld Tibor Dr Phys | Gasgesteuertes verfahren zum sortieren von in einem elektrolyten suspendierten teilchen und vorrichtung zur durchfuehrung des verfahrens |
US4191749A (en) | 1977-10-11 | 1980-03-04 | Bryant Bernard J | Method and material for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
US4448767A (en) | 1977-10-11 | 1984-05-15 | Sumar Corporation | Preparation of monospecific male-specific antibody and the use thereof for increasing the percentage of mammalian offspring of either sex |
US4189236A (en) | 1978-03-20 | 1980-02-19 | Coulter Electronics, Inc. | Ellipsoid-conic radiation collector and method |
US4179218A (en) | 1978-05-15 | 1979-12-18 | The Boeing Company | Particle size analyzer |
US4251733A (en) | 1978-06-29 | 1981-02-17 | Hirleman Jr Edwin D | Technique for simultaneous particle size and velocity measurement |
DE2832091A1 (de) | 1978-07-21 | 1980-01-31 | Eidenschink Henning | Optisches verfahren zur bestimmung der teilchengroesse kolloidaler loesungen und messgeraet zur durchfuehrung des verfahrens |
US4225405A (en) | 1978-08-16 | 1980-09-30 | Lawson Rommom L | Process for separation and collection of viable female and male spermatozoa |
US4276139A (en) | 1978-08-16 | 1981-06-30 | Lawson Rommon L | Process for magnetic separation and collection of viable female and male spermatozoa |
US4230558A (en) | 1978-10-02 | 1980-10-28 | Coulter Electronics, Inc. | Single drop separator |
US4341471A (en) | 1979-01-02 | 1982-07-27 | Coulter Electronics, Inc. | Apparatus and method for measuring the distribution of radiant energy produced in particle investigating systems |
US4267268A (en) * | 1979-03-12 | 1981-05-12 | Nelson Jr Robert A | Spermatozoa extenders |
US4274408A (en) | 1979-03-26 | 1981-06-23 | Beatrice Nimrod | Method for guide-wire placement and novel syringe therefor |
US4200802A (en) | 1979-03-28 | 1980-04-29 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Parabolic cell analyzer |
US4408877A (en) | 1979-04-10 | 1983-10-11 | Ernst Leitz Wetzlar Gmbh | Device for hydrodynamic focussing of a particle-suspension in a liquid flow cytophotometer |
NO144002C (no) | 1979-04-10 | 1981-05-27 | Norsk Hydro S Inst For Kreftfo | Anordning for anvendelse ved vaeskestroemsfotometri |
US4255021A (en) | 1979-04-20 | 1981-03-10 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Optical device with conical input and output prism faces |
US4263508A (en) | 1979-04-20 | 1981-04-21 | Research Corporation | Pulse edge measurement for determining particle dimensional characteristics |
US4318482A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for measuring the velocity of a perturbed jetting fluid in an electrostatic particle sorting system |
US4325483A (en) | 1979-08-20 | 1982-04-20 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for detecting and controlling flow rates of the droplet forming stream of an electrostatic particle sorting apparatus |
US4318480A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method and apparatus for positioning the point of droplet formation in the jetting fluid of an electrostatic sorting device |
US4318481A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-09 | Ortho Diagnostics, Inc. | Method for automatically setting the correct phase of the charge pulses in an electrostatic flow sorter |
US4317520A (en) | 1979-08-20 | 1982-03-02 | Ortho Diagnostics, Inc. | Servo system to control the spatial position of droplet formation of a fluid jet in a cell sorting apparatus |
DE2943116C2 (de) | 1979-10-25 | 1986-06-19 | Gesellschaft für Strahlen- und Umweltforschung mbH, 8000 München | Einrichtung zur durchflußcytometrischen Reaktions- und/oder Diffusionsmessung |
US4284355A (en) | 1979-10-29 | 1981-08-18 | Ortho Diagnostics, Inc. | Automated method for cell volume determination |
US4400764A (en) | 1980-02-05 | 1983-08-23 | The Boeing Company | Low backscatter illumination system |
US4367043A (en) | 1980-05-05 | 1983-01-04 | Leland Stanford Junior University | Method and means for delivering liquid samples to a sample scanning device |
US4362246A (en) | 1980-07-14 | 1982-12-07 | Adair Edwin Lloyd | Method of treating collected mammal semen and separating sperm into X Y components |
US4348107A (en) | 1980-07-18 | 1982-09-07 | Coulter Electronics, Inc. | Orifice inside optical element |
EP0046345A3 (en) | 1980-08-15 | 1982-03-03 | Ortho Diagnostic Systems Inc. | Controlled hydrodynamic flow in flow cytometry systems |
US4350410A (en) | 1980-10-08 | 1982-09-21 | The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration | Multiprism collimator |
US4487320A (en) | 1980-11-03 | 1984-12-11 | Coulter Corporation | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point in a droplet generation system |
US4691829A (en) | 1980-11-03 | 1987-09-08 | Coulter Corporation | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point in a droplet generation system |
US4395676A (en) | 1980-11-24 | 1983-07-26 | Coulter Electronics, Inc. | Focused aperture module |
US4361400A (en) | 1980-11-26 | 1982-11-30 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Fluidic assembly for an ultra-high-speed chromosome flow sorter |
US4680258A (en) | 1981-03-24 | 1987-07-14 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Process for sex determination in man by use of monoclonal antibodies to the H-Y antigen |
US4673288A (en) | 1981-05-15 | 1987-06-16 | Ratcom, Inc. | Flow cytometry |
US4818103A (en) | 1981-05-15 | 1989-04-04 | Ratcom | Flow cytometry |
DE3266669D1 (en) | 1981-06-24 | 1985-11-07 | Becton Dickinson Co | Analyzer for simultaneously determining volume and light emission characteristics of particles |
US4339434A (en) | 1981-08-17 | 1982-07-13 | Gametrics Limited | Method of increasing the incidence of female offspring |
US4395397A (en) | 1981-09-17 | 1983-07-26 | Sidney Farber Cancer Institute, Inc. | Apparatus and method for killing unwanted cells |
US4422761A (en) | 1981-09-28 | 1983-12-27 | Frommer Joseph C | Photo-electric particle sensing system |
US4515274A (en) | 1981-12-02 | 1985-05-07 | Coulter Corporation | Particle analyzing and sorting apparatus |
JPS59500340A (ja) | 1982-03-08 | 1984-03-01 | モトロ−ラ・インコ−ポレ−テツド | 集積回路のリ−ドフレ−ム |
US4511661A (en) | 1982-03-19 | 1985-04-16 | University Patents, Inc. | ATCC HB8116 And its monoclonal anti-H-Y antibody, Hyclonalan |
US4498766A (en) | 1982-03-25 | 1985-02-12 | Becton, Dickinson And Company | Light beam focal spot elongation in flow cytometry devices |
DE3315194A1 (de) | 1982-04-29 | 1983-11-03 | International Remote Imaging Systems Inc., 91311 Chatsworth, Calif. | Verfahren zum trennen von in einer fluidprobe stroemenden teilchen |
DE3315195A1 (de) | 1982-04-29 | 1983-11-03 | International Remote Imaging Systems Inc., 91311 Chatsworth, Calif. | Verfahren zum ausrichten von teilchen in einer fluidprobe |
US4629687A (en) | 1982-07-29 | 1986-12-16 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Positive selection sorting of cells |
GB2125181B (en) | 1982-08-11 | 1986-01-29 | Coulter Electronics | Flow cells for particle study |
US4559309A (en) | 1982-09-01 | 1985-12-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Flow cytometry-fluorescence measurements for characterizing sperm |
WO1984001265A1 (en) | 1982-10-05 | 1984-04-12 | Genetic Engineering Inc | Method of treating collected mammal semen and separating sperm into x and y components |
US4501366A (en) | 1982-12-14 | 1985-02-26 | Adolph Coors Company | Photomultiplier tube assembly |
EP0112188B1 (en) | 1982-12-21 | 1987-06-16 | Crosfield Electronics Limited | Light beam-splitter |
US4492436A (en) | 1983-01-03 | 1985-01-08 | At&T Bell Laboratories | Polarization independent beam splitter |
JPS59143146A (ja) | 1983-02-07 | 1984-08-16 | Nippon Kogaku Kk <Nikon> | ミラ−集光型照明光学系 |
CA1206559A (en) | 1983-03-04 | 1986-06-24 | Robert E. Auer | Method of and apparatus for detecting change in the breakoff point of a droplet generation system |
IT1197570B (it) | 1983-02-11 | 1988-12-06 | Serono Ist Farm | Miscele di fsh e lh da ipofisi porcine in rapporto definito |
CH651930A5 (en) | 1983-03-24 | 1985-10-15 | Coulter Corp | Apparatus for analysis and sorting of particles |
JPS59174742A (ja) | 1983-03-25 | 1984-10-03 | Agency Of Ind Science & Technol | 微小粒子を区分又は選別する方法及びその装置 |
GB2145112B (en) | 1983-04-27 | 1987-02-18 | Milk Marketing Board | Sorting living spermatozoa |
US4523809A (en) | 1983-08-04 | 1985-06-18 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force | Method and apparatus for generating a structured light beam array |
NZ207393A (en) | 1983-08-05 | 1987-03-31 | Neal Lloyd First | Staining dna in living cells |
US4538733A (en) | 1983-10-14 | 1985-09-03 | Becton, Dickinson And Company | Particle sorter with neutralized collection wells and method of using same |
US4585736A (en) | 1983-10-18 | 1986-04-29 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Flow cytometric measurement of total DNA and incorporated halodeoxyuridine |
US4780406A (en) | 1983-10-18 | 1988-10-25 | The Regents Of The University Of California | Flow cytometric measurement of total DNA and incorporated halodeoxyuridine |
US4735504A (en) | 1983-10-31 | 1988-04-05 | Technicon Instruments Corporation | Method and apparatus for determining the volume & index of refraction of particles |
EP0148497B1 (de) | 1983-12-24 | 1990-10-31 | Inotech Ag | Vorrichtung zum Führen und Sammeln von Licht in der Fotometrie od. dgl. |
US4573796A (en) | 1984-01-06 | 1986-03-04 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Apparatus for eliminating background interference in fluorescence measurements |
US4631483A (en) | 1984-02-01 | 1986-12-23 | Coulter Electronics, Inc. | Particle analyzing apparatus and method of moving particles in suspension through such apparatus |
US4965204A (en) | 1984-02-06 | 1990-10-23 | The Johns Hopkins University | Human stem cells and monoclonal antibodies |
US4714680B1 (en) | 1984-02-06 | 1995-06-27 | Univ Johns Hopkins | Human stem cells |
WO1985004014A1 (en) | 1984-02-29 | 1985-09-12 | Research Corporation | Flow cytometers |
US4545677A (en) | 1984-03-05 | 1985-10-08 | Becton, Dickinson And Company | Prismatic beam expander for light beam shaping in a flow cytometry apparatus |
US4600302A (en) | 1984-03-26 | 1986-07-15 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with uniform incoherent light excitation |
DE3412620A1 (de) | 1984-04-04 | 1985-10-17 | Basf Ag, 6700 Ludwigshafen | Laseroptische anordnung zur messung des dispergiergrades in stroemenden systemen |
US4609286A (en) | 1984-04-16 | 1986-09-02 | Becton, Dickinson And Company | Dispersion prism for separation of wavelengths of spectrally rich light in a flow cytometry apparatus |
US4605558A (en) | 1984-04-20 | 1986-08-12 | Wallace Shrimpton | Process for cell separation |
US4660971A (en) | 1984-05-03 | 1987-04-28 | Becton, Dickinson And Company | Optical features of flow cytometry apparatus |
FR2563726B1 (fr) | 1984-05-04 | 1986-10-10 | Robert Cassou | Appareil d'insemination artificielle, notamment des carnivores |
FR2566543B1 (fr) | 1984-06-20 | 1988-02-26 | Commissariat Energie Atomique | Dispositif optique a rendement de collection eleve et cytofluorimetre en faisant application |
DE3580418D1 (de) | 1984-07-31 | 1990-12-13 | Hitachi Ltd | Elektrophoretisches trennverfahren mit freier stroemung und apparat dafuer. |
US4661913A (en) | 1984-09-11 | 1987-04-28 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for the detection and classification of articles using flow cytometry techniques |
EP0177718B1 (de) | 1984-09-11 | 1989-12-06 | Partec AG | Verfahren und Vorrichtung zur Sortierung von mikroskopischen Partikeln |
US4598408A (en) | 1984-10-22 | 1986-07-01 | Trw Inc. | High extraction efficiency cylindrical ring resonator |
JPS61139747A (ja) | 1984-12-12 | 1986-06-27 | Canon Inc | 粒子解析装置 |
JPS61159135A (ja) | 1984-12-31 | 1986-07-18 | Canon Inc | 粒子解析装置 |
US4702598A (en) | 1985-02-25 | 1987-10-27 | Research Corporation | Flow cytometer |
US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
CA1250808A (en) | 1985-04-29 | 1989-03-07 | David W. Dresser | Semen sexing |
US4662742A (en) | 1985-05-10 | 1987-05-05 | Becton, Dickinson And Company | Scatter/fluorescene beam splitter in a flow cytometry apparatus |
USRE34782E (en) | 1985-07-01 | 1994-11-08 | Diatron Corporation | Fluorometer |
US4877965A (en) | 1985-07-01 | 1989-10-31 | Diatron Corporation | Fluorometer |
US4744090A (en) | 1985-07-08 | 1988-05-10 | Trw Inc. | High-extraction efficiency annular resonator |
NO156916C (no) | 1985-07-10 | 1987-12-16 | Harald B Steen | Stroemningskammer for vaeskestroemsfotometer. |
NO156917C (no) | 1985-07-16 | 1987-12-16 | Harald B Steen | Anordning for maaling av biologiske cellers lysspredning i vaeskestroemsfotometere. |
US4989977A (en) | 1985-07-29 | 1991-02-05 | Becton, Dickinson And Company | Flow cytometry apparatus with improved light beam adjustment |
US4794086A (en) | 1985-11-25 | 1988-12-27 | Liquid Air Corporation | Method for measurement of impurities in liquids |
US4770992A (en) | 1985-11-27 | 1988-09-13 | Den Engh Gerrit J Van | Detection of specific DNA sequences by flow cytometry |
US4999283A (en) | 1986-01-10 | 1991-03-12 | University Of Kentucky Research Foundation | Method for x and y spermatozoa separation |
US5447841A (en) | 1986-01-16 | 1995-09-05 | The Regents Of The Univ. Of California | Methods for chromosome-specific staining |
US5756696A (en) | 1986-01-16 | 1998-05-26 | Regents Of The University Of California | Compositions for chromosome-specific staining |
US4710635A (en) | 1986-04-14 | 1987-12-01 | Becton, Dickinson And Company | Dual laser excitation from single laser source |
NL8601000A (nl) | 1986-04-21 | 1987-11-16 | Jan Greve T H Twente Afdeling | Het gebruik van gepolariseerd licht in stromingscytometrie. |
JPS62274238A (ja) | 1986-05-22 | 1987-11-28 | ベクトン・デイツキンソン・アンド・カンパニ− | フロ−サイトメトリ−装置に用いる光学的結合用ゲル |
US4790653A (en) | 1986-05-22 | 1988-12-13 | Becton Dickinson And Company | Housing for a flow cytometry apparatus with particle unclogging feature |
US4786165A (en) | 1986-07-10 | 1988-11-22 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Flow cytometry and apparatus therefor |
US4704891A (en) | 1986-08-29 | 1987-11-10 | Becton, Dickinson And Company | Method and materials for calibrating flow cytometers and other analysis instruments |
US4867908A (en) | 1986-08-29 | 1989-09-19 | Becton, Dickinson And Company | Method and materials for calibrating flow cytometers and other analysis instruments |
FR2609885B1 (fr) | 1987-01-22 | 1989-04-14 | Cassou Robert | Instrument pour l'insemination artificielle, le transfert d'embryons ou le prelevement de liquides folliculaires chez les mammiferes |
US4780451B1 (en) | 1987-01-23 | 1995-04-04 | Asua International Inc | Composition and method for producing superovulation in cattle |
US5162306A (en) | 1987-01-23 | 1992-11-10 | Donaldson Lloyd E | Composition and method for producing superovulation in mammals |
EP0279000B1 (en) | 1987-02-17 | 1993-07-21 | Ratcom, Inc. | Flow cytometry |
US4764013A (en) | 1987-03-23 | 1988-08-16 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Interferometric apparatus and method for detection and characterization of particles using light scattered therefrom |
US4765737A (en) | 1987-03-30 | 1988-08-23 | Cornell Research Foundation | Cell size measurements using light in flow cytometry and cell sorting |
DE3851458T2 (de) | 1987-04-08 | 1995-02-09 | Hitachi Ltd | Vorrichtung mit einer scheideförmigen Durchflusszelle. |
US5021244A (en) | 1988-12-06 | 1991-06-04 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane antibodies and their use for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
US5346990A (en) | 1987-04-08 | 1994-09-13 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
JPS63262565A (ja) | 1987-04-20 | 1988-10-28 | Hitachi Ltd | フロ−セル |
ATE110467T1 (de) | 1987-04-27 | 1994-09-15 | Preikschat F K | Vorrichtung und verfahren zur untersuchung von teilchen. |
EP0289677A3 (en) | 1987-04-27 | 1989-05-10 | Fritz K. Preikschat | Apparatus and method for particle analysis |
FR2614626B1 (fr) | 1987-04-30 | 1989-07-21 | Ranoux Claude | Conteneur pour fecondation des ovocytes et replacement des embryons chez l'homme et l'animal |
JP2642632B2 (ja) | 1987-07-03 | 1997-08-20 | 株式会社日立製作所 | 微粒子計測装置および微粒子計測方法 |
GB8716285D0 (en) | 1987-07-10 | 1987-08-19 | Medical Res Council | Light collecting device |
US4979093A (en) | 1987-07-16 | 1990-12-18 | Cavro Scientific Instruments | XYZ positioner |
US4987539A (en) | 1987-08-05 | 1991-01-22 | Stanford University | Apparatus and method for multidimensional characterization of objects in real time |
US4796788A (en) | 1987-08-26 | 1989-01-10 | Liqui-Box Corporation | Bag-in-box packaging and dispensing of substances which will not readily flow by gravity |
US4758729A (en) | 1987-08-28 | 1988-07-19 | Spectra-Physics, Inc. | Apparatus and method for measuring the included angle of a reflective cone |
DE3832901A1 (de) | 1987-10-02 | 1989-04-20 | Hitachi Ltd | Teilchenmessvorrichtung |
US4793705A (en) | 1987-10-07 | 1988-12-27 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Single molecule tracking |
US4831385A (en) | 1987-10-14 | 1989-05-16 | Burlington Industries, Inc. | Vacuum tray fluid-jet start-up system |
US4980277A (en) | 1987-10-16 | 1990-12-25 | Cultor Ltd. | Cryoprotectant solution and method |
US5712807A (en) | 1987-10-21 | 1998-01-27 | Bangham; James Andrew | Pulse analyzing method and apparatus |
US5789155A (en) | 1987-10-30 | 1998-08-04 | California Institute Of Technology | Process for identifying nucleic acids and triple helices formed thereby |
US4845025A (en) | 1987-11-10 | 1989-07-04 | Coulter Corporation | Biological sample mixing apparatus and method |
EP0386061A1 (en) | 1987-11-10 | 1990-09-12 | Secretary Of State For Defence In Her Britannic Majesty's Gov. Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern Ireland | Particle monitoring system |
GB8726305D0 (en) | 1987-11-10 | 1987-12-16 | Secr Defence | Portable particle analysers |
GB8726304D0 (en) | 1987-11-10 | 1987-12-16 | Secr Defence | Particle asymmetry analyser |
US5040890A (en) | 1987-11-25 | 1991-08-20 | Becton, Dickinson And Company | Sheathed particle flow controlled by differential pressure |
US4887721A (en) | 1987-11-30 | 1989-12-19 | The United States Of America As Represented By The United States Department Of Energy | Laser particle sorter |
US4988619A (en) | 1987-11-30 | 1991-01-29 | United States Department Of Energy | Flow cytometry apparatus |
US4936465A (en) | 1987-12-07 | 1990-06-26 | Zoeld Tibor | Method and apparatus for fast, reliable, and environmentally safe dispensing of fluids, gases and individual particles of a suspension through pressure control at well defined parts of a closed flow-through system |
US5219729A (en) | 1988-02-25 | 1993-06-15 | Serono Laboratories, Inc. | Fertility assay |
US5622820A (en) | 1988-03-10 | 1997-04-22 | City Of Hope | Method for amplification and detection of RNA and DNA sequences |
US4836038A (en) | 1988-03-18 | 1989-06-06 | Aim Instruments Ltd. | Automated sampler-injector apparatus and method for sampling a quantity of sample and testing portions of said quantity |
US5057413A (en) | 1988-06-13 | 1991-10-15 | Becton, Dickinson And Company | Method for discriminating between intact and damaged cells in a sample |
US5070080A (en) | 1988-08-10 | 1991-12-03 | Fahim Mostafa S | Method of inhibiting generation, maturation, motility and viability of sperm with minerals in bioavailable form |
JPH0718785B2 (ja) | 1988-09-19 | 1995-03-06 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
JP2635125B2 (ja) | 1988-09-30 | 1997-07-30 | 東亜医用電子株式会社 | 核の分葉指数を求めるための粒子分析装置及び方法 |
JP2635126B2 (ja) | 1988-09-30 | 1997-07-30 | 東亜医用電子株式会社 | 核の分葉指数を求めるための粒子分析装置及び方法 |
JPH02168160A (ja) | 1988-12-22 | 1990-06-28 | Omron Tateisi Electron Co | 細胞選別装置 |
US5726009A (en) | 1989-03-20 | 1998-03-10 | Anticancer, Inc. | Native-state method and system for determining viability and proliferative capacity of tissues in vitro |
JPH02289808A (ja) | 1989-04-28 | 1990-11-29 | Olympus Optical Co Ltd | 照明光学系 |
US4981580A (en) | 1989-05-01 | 1991-01-01 | Coulter Corporation | Coincidence arbitration in a flow cytomery sorting system |
ES2091823T3 (es) | 1989-05-10 | 1996-11-16 | Us Agriculture | Metodo para preseleccionar el sexo de la progenie. |
US4942305A (en) | 1989-05-12 | 1990-07-17 | Pacific Scientific Company | Integrating sphere aerosol particle detector |
EP0475936B1 (en) | 1989-05-12 | 1995-09-13 | Cytogam, Inc. | Sex-associated membrane proteins and methods for increasing the probability that offspring will be of a desired sex |
US5055393A (en) | 1989-06-13 | 1991-10-08 | Salk Institute Biotechnology/Industrial Associates, Inc. | Prenatal sex determination of bovine cells using male-specific oligonucleotides |
US4954715A (en) | 1989-06-26 | 1990-09-04 | Zoeld Tibor | Method and apparatus for an optimized multiparameter flow-through particle and cell analyzer |
JPH0353164A (ja) | 1989-07-20 | 1991-03-07 | Canon Inc | サンプル供給装置及びこれを用いたサンプル測定装置 |
US5098657A (en) | 1989-08-07 | 1992-03-24 | Tsi Incorporated | Apparatus for measuring impurity concentrations in a liquid |
US5030002A (en) | 1989-08-11 | 1991-07-09 | Becton, Dickinson And Company | Method and apparatus for sorting particles with a moving catcher tube |
US5005981A (en) | 1989-09-08 | 1991-04-09 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus for method for causing vortices in a test tube |
US5215376A (en) | 1989-09-08 | 1993-06-01 | Becton, Dickinson And Company | Method for causing vortices in a test tube |
US5167926A (en) | 1989-09-13 | 1992-12-01 | Kabushiki Kaisha Tiyoda Seisakusho | Apparatus for pretreating cells for flow cytometry |
JP2808321B2 (ja) | 1989-09-19 | 1998-10-08 | 東亜医用電子株式会社 | 細胞分析方法及び装置 |
US5072382A (en) | 1989-10-02 | 1991-12-10 | Kamentsky Louis A | Methods and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens |
US5275787A (en) | 1989-10-04 | 1994-01-04 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for separating or measuring particles to be examined in a sample fluid |
EP0422616B1 (en) | 1989-10-11 | 1996-02-07 | Canon Kabushiki Kaisha | Apparatus for and method of fractionating particle in particle-suspended liquid in conformity with the properties thereof |
JPH03140840A (ja) | 1989-10-26 | 1991-06-14 | Hitachi Ltd | 流動細胞分析装置 |
FR2653885B1 (fr) | 1989-10-27 | 1994-01-14 | Abx | Appareil pour le comptage et la determination d'au moins une sous-population leucocytaire. |
US5034613A (en) | 1989-11-14 | 1991-07-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Two-photon laser microscopy |
US5101978A (en) | 1989-11-27 | 1992-04-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Fluidic sorting device for two or more materials suspended in a fluid |
AU647741B2 (en) | 1989-12-01 | 1994-03-31 | Regents Of The University Of California, The | Methods and compositions for chromosome-specific staining |
US5274240A (en) | 1990-01-12 | 1993-12-28 | The Regents Of The University Of California | Capillary array confocal fluorescence scanner and method |
EP0448931B1 (en) | 1990-01-26 | 1996-04-03 | Canon Kabushiki Kaisha | Method for measuring a specimen by the use of fluorescence light |
JP3049254B2 (ja) | 1990-02-08 | 2000-06-05 | シスメックス株式会社 | 2種類の光源を備えた光学式粒子分析装置 |
IL93634A0 (en) | 1990-03-05 | 1990-12-23 | Galai Lab Ltd | Particle size analyzer |
US5153117A (en) | 1990-03-27 | 1992-10-06 | Genetype A.G. | Fetal cell recovery method |
US5492534A (en) | 1990-04-02 | 1996-02-20 | Pharmetrix Corporation | Controlled release portable pump |
US5150313A (en) | 1990-04-12 | 1992-09-22 | Regents Of The University Of California | Parallel pulse processing and data acquisition for high speed, low error flow cytometry |
US5076472A (en) | 1990-06-13 | 1991-12-31 | Becton, Dickinson And Company | Cleaning cycle for flow cytometers |
US5087295A (en) | 1990-06-13 | 1992-02-11 | Becton Dickinson And Company | Cleaning cycle for flow cytometers |
JPH0716392B2 (ja) | 1990-06-20 | 1995-03-01 | 株式会社ピーシーシーテクノロジー | 細胞融合及び融合細胞選別システム |
JPH0710226B2 (ja) | 1990-06-20 | 1995-02-08 | 株式会社ピーシーシーテクノロジー | プロトプラスト攪拌装置並びにそれを含む細胞融合装置及びフローサイトメーター装置 |
JPH04126065A (ja) | 1990-06-25 | 1992-04-27 | Saburo Okonogi | 食品素材の棒状体成型装置 |
US5160974A (en) | 1990-06-25 | 1992-11-03 | Flow Science, Inc. | Closed sample cell for use in flow cytometry |
US5559032A (en) | 1990-06-29 | 1996-09-24 | Pomeroy; Patrick C. | Method and apparatus for post-transfer assaying of material on solid support |
EP0651787A1 (en) | 1990-07-09 | 1995-05-10 | Amrad Corporation Limited | Enhanced implantation, development and maintenance of embryos using leukaemia inhibitory factor |
JP2939647B2 (ja) | 1990-07-24 | 1999-08-25 | シスメックス株式会社 | フローイメージングサイトメータにおける自動焦点調整方法 |
IE76732B1 (en) | 1990-08-07 | 1997-11-05 | Becton Dickinson Co | One step test for absolute counts |
US5259593A (en) | 1990-08-30 | 1993-11-09 | University Of Southern California | Apparatus for droplet stream manufacturing |
JPH04115136A (ja) | 1990-09-05 | 1992-04-16 | Hitachi Ltd | 粒子計測装置 |
US5132548A (en) | 1990-09-14 | 1992-07-21 | High Yield Technology | High sensitivity, large detection area particle sensor for vacuum applications |
JPH04126080A (ja) | 1990-09-14 | 1992-04-27 | Juzo Udaka | 耐熱性キシロースイソメラーゼの製造方法 |
JP2957246B2 (ja) | 1990-09-14 | 1999-10-04 | 大和化成株式会社 | 微生物起源カルボキシペプチダーゼb様酵素 |
JPH04126064A (ja) | 1990-09-14 | 1992-04-27 | Nitto Shokai:Kk | 二重包餡食品の製造法 |
US5204884A (en) | 1991-03-18 | 1993-04-20 | University Of Rochester | System for high-speed measurement and sorting of particles |
US5273527A (en) | 1992-05-12 | 1993-12-28 | Ovamed Corporation | Delivery catheter |
US5663048A (en) | 1990-10-04 | 1997-09-02 | University Of Calgary | Y-chromosome specific polynucleotide probes for prenatal sexing |
US5840482A (en) | 1990-10-10 | 1998-11-24 | The Regents Of The University Of California | Y chromosome specific nucleic acid probe and method for determining the Y chromosome in situ |
WO1992008120A1 (en) | 1990-10-29 | 1992-05-14 | Macquarie University | Pulsed laser flow cytometry |
US5116125A (en) | 1990-10-31 | 1992-05-26 | Biophos Medical Ab | Fertility analyzer |
DE69013366T2 (de) | 1990-10-31 | 1995-04-20 | Biophos Medical Ab | Fruchtbarkeitsanalysegerät. |
JP2874746B2 (ja) | 1990-11-22 | 1999-03-24 | シスメックス株式会社 | フローイメージングサイトメータにおけるフローセル機構 |
US5991028A (en) | 1991-02-22 | 1999-11-23 | Applied Spectral Imaging Ltd. | Spectral bio-imaging methods for cell classification |
JP3121849B2 (ja) | 1991-02-27 | 2001-01-09 | シスメックス株式会社 | フローイメージサイトメータ |
JPH0734012B2 (ja) | 1991-02-27 | 1995-04-12 | 東亜医用電子株式会社 | フローイメージサイトメータ |
US5144224A (en) | 1991-04-01 | 1992-09-01 | Larsen Lawrence E | Millimeter wave flow cytometer |
US5199576A (en) | 1991-04-05 | 1993-04-06 | University Of Rochester | System for flexibly sorting particles |
EP0515211A3 (en) | 1991-05-23 | 1993-04-07 | Becton Dickinson And Company | Apparatus and method for phase resolved fluorescence lifetimes of independent and varying amplitude pulses |
DE9107792U1 (de) | 1991-06-25 | 1991-09-12 | Labotect-Labor-Technik, Göttingen, GmbH, 3406 Bovenden | Instrumentensatz zum uterinen Embryonentransfer |
FR2678506B1 (fr) | 1991-07-01 | 2000-03-10 | Claude Ranoux | Procede de fecondation en cycle spontane. |
US5548661A (en) | 1991-07-12 | 1996-08-20 | Price; Jeffrey H. | Operator independent image cytometer |
US5412466A (en) | 1991-07-26 | 1995-05-02 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Apparatus for forming flattened sample flow for analyzing particles |
EP0529666B1 (en) | 1991-08-30 | 2000-04-12 | Omron Corporation | Cell analyzing apparatus |
US5488469A (en) | 1991-08-30 | 1996-01-30 | Omron Corporation | Cell analyzing apparatus |
US5548395A (en) | 1991-09-20 | 1996-08-20 | Toa Medical Electronics Co., Ltd. | Particle analyzer |
US5578449A (en) | 1991-10-03 | 1996-11-26 | Hilding Ohlsson, S.A. | Procedure for the sex determination of embryos in mammals especially applied to bovine embryos |
JP3212647B2 (ja) | 1991-10-24 | 2001-09-25 | シスメックス株式会社 | イメージングフローサイトメータ |
IT1253226B (it) | 1991-10-24 | 1995-07-11 | Piero Serra | Catetere per l'introduzione o l'aspirazione di liquidi di diversa natura in animali particolarmente per trattamenti ginecologici in bovini, equini e simili |
US5919621A (en) | 1991-10-24 | 1999-07-06 | Brown; David B. | Methods for diagnosing human male infertility |
US5866344A (en) | 1991-11-15 | 1999-02-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibody selection methods using cell surface expressed libraries |
US5370842A (en) | 1991-11-29 | 1994-12-06 | Canon Kabushiki Kaisha | Sample measuring device and sample measuring system |
JP2593021B2 (ja) | 1991-12-13 | 1997-03-19 | 伊藤ハム株式会社 | ウシ胚の性の識別方法 |
JP3130628B2 (ja) | 1992-01-30 | 2001-01-31 | シスメックス株式会社 | 粒子判定装置 |
US5400179A (en) | 1992-02-18 | 1995-03-21 | Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha | Optical multilayer thin film and beam splitter |
DE69321748T2 (de) | 1992-02-20 | 1999-06-17 | Canon Kk | Verfahren und Messapparatur zur Handhabung von Teilchen |
EP0627073A1 (en) | 1992-02-21 | 1994-12-07 | The Secretary Of State For Defence In Her Britannic Majesty's Government Of The United Kingdom Of Great Britain And Northern | Analysis of particle characteristics |
US5558998A (en) | 1992-02-25 | 1996-09-24 | The Regents Of The Univ. Of California | DNA fragment sizing and sorting by laser-induced fluorescence |
US6120735A (en) | 1992-02-26 | 2000-09-19 | The Ohio States University | Fractional cell sorter |
JPH084601B2 (ja) * | 1992-04-10 | 1996-01-24 | 岡山県 | ***凍結方法及び***凍結装置 |
US5298967A (en) | 1992-06-02 | 1994-03-29 | Pacific Scientific Company | Measurement of concentrations of dissolved solvent |
JP3145486B2 (ja) | 1992-06-12 | 2001-03-12 | シスメックス株式会社 | イメージングフローサイトメータ |
PL307164A1 (en) | 1992-07-13 | 1995-05-02 | Pall Corp | Automatic system for and method of processing biological fluids |
JP3215175B2 (ja) | 1992-08-10 | 2001-10-02 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
US5315122A (en) | 1992-08-25 | 1994-05-24 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for fluorescent lifetime measurement |
ATE219141T1 (de) | 1992-09-03 | 2002-06-15 | Systemix Inc | Die trennung lebender säugetierzellen durch hoch geschwindigkeits-durchflusscytometrie |
US5466572A (en) | 1992-09-03 | 1995-11-14 | Systemix, Inc. | High speed flow cytometric separation of viable cells |
US5736410A (en) | 1992-09-14 | 1998-04-07 | Sri International | Up-converting reporters for biological and other assays using laser excitation techniques |
US5275933A (en) | 1992-09-25 | 1994-01-04 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Triple gradient process for recovering nucleated fetal cells from maternal blood |
US5371585A (en) | 1992-11-10 | 1994-12-06 | Pacific Scientific Company | Particle detecting instrument with sapphire detecting cell defining a rectangular flow path |
US5359907A (en) | 1992-11-12 | 1994-11-01 | Horiba Instruments, Inc. | Method and apparatus for dry particle analysis |
US5395588A (en) | 1992-12-14 | 1995-03-07 | Becton Dickinson And Company | Control of flow cytometer having vacuum fluidics |
AU5839694A (en) | 1993-01-16 | 1994-08-15 | James Andrew Bangham | Signal processing system |
JP2525713B2 (ja) | 1993-01-19 | 1996-08-21 | 農林水産省畜産試験場長 | 低分子チオ―ル化合物を用いた牛胚の培養法および輸送法 |
US5467189A (en) | 1993-01-22 | 1995-11-14 | Venturedyne, Ltd. | Improved particle sensor and method for assaying a particle |
JP3052665B2 (ja) | 1993-01-26 | 2000-06-19 | 株式会社日立製作所 | フローセル装置 |
CA2113957A1 (en) | 1993-01-29 | 1994-07-30 | University Of Guelph | Nucleotide sequences for bovine sex determination |
CA2155186A1 (en) | 1993-02-01 | 1994-08-18 | Kevin M. Ulmer | Methods and apparatus for dna sequencing |
US5453575A (en) | 1993-02-01 | 1995-09-26 | Endosonics Corporation | Apparatus and method for detecting blood flow in intravascular ultrasonic imaging |
US5367474A (en) | 1993-02-08 | 1994-11-22 | Coulter Corporation | Flow cytometer |
US5547849A (en) | 1993-02-17 | 1996-08-20 | Biometric Imaging, Inc. | Apparatus and method for volumetric capillary cytometry |
US5556764A (en) | 1993-02-17 | 1996-09-17 | Biometric Imaging, Inc. | Method and apparatus for cell counting and cell classification |
US5563059A (en) | 1993-02-23 | 1996-10-08 | Genentech, Inc. | Use of human inhibin and human activin to increase the number of mature primate oocytes |
EP0648348B1 (en) | 1993-03-01 | 1999-04-28 | General Signal Corporation | Variable annular illuminator for photolithographic projection imager. |
NO930980L (no) | 1993-03-18 | 1994-09-19 | Flowtech As | Optisk konfigurasjon for væskeströmcytofotometer |
US5658751A (en) | 1993-04-13 | 1997-08-19 | Molecular Probes, Inc. | Substituted unsymmetrical cyanine dyes with selected permeability |
US5494795A (en) | 1993-05-05 | 1996-02-27 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Specific oligonucleotide primers for detection of pathogenic campylobacter bacteria by polymerase chain reaction |
DE69418248T2 (de) | 1993-06-03 | 1999-10-14 | Hamamatsu Photonics Kk | Optisches Laser-Abtastsystem mit Axikon |
US5439578A (en) | 1993-06-03 | 1995-08-08 | The Governors Of The University Of Alberta | Multiple capillary biochemical analyzer |
PL307305A1 (en) | 1993-06-04 | 1995-05-15 | Kwahak International Co Ltd | Apparatus for arificial fertilisation and transfer of embryos |
NO932088L (no) | 1993-06-08 | 1995-01-05 | Oddbjoern Gjelsnes | Anordning for anvendelse ved væskeströmscytometri |
US5483469A (en) | 1993-08-02 | 1996-01-09 | The Regents Of The University Of California | Multiple sort flow cytometer |
US5464581A (en) | 1993-08-02 | 1995-11-07 | The Regents Of The University Of California | Flow cytometer |
US6328071B1 (en) | 1993-08-06 | 2001-12-11 | Cary Austin | Well pressure tank |
DE69434551T2 (de) | 1993-09-16 | 2006-06-14 | Sysmex Corp | Teilchen-Analysegerät |
US5503994A (en) | 1993-10-08 | 1996-04-02 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | System for sample detection with compensation for difference in sensitivity to detection of components moving at different velocities |
US5480774A (en) | 1993-10-14 | 1996-01-02 | A/F Protein, Inc. | Determination of genomic sex in salmonids |
JP3290786B2 (ja) | 1993-11-26 | 2002-06-10 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
GB9324938D0 (en) | 1993-12-04 | 1994-01-26 | Atomic Energy Authority Uk | Aerosol generator |
FI96452C (fi) | 1994-01-26 | 1996-06-25 | Pekka Haenninen | Menetelmä väriaineiden virittämiseksi |
CA2159817C (en) | 1994-02-28 | 2000-09-12 | Dae Kee Kim | Pyrimidine acyclonucleoside derivatives |
KR100402564B1 (ko) | 1994-03-25 | 2003-10-22 | 마루킨 츄유 가부시키가이샤 | 에피머라제 |
US5475487A (en) | 1994-04-20 | 1995-12-12 | The Regents Of The University Of California | Aqueous carrier waveguide in a flow cytometer |
DE4414940C2 (de) | 1994-04-28 | 1998-07-02 | Pekka Haenninen | Lumineszenz-Rastermikroskop mit zwei Photonen Anregung |
US5595866A (en) | 1994-05-27 | 1997-01-21 | Methodist Hospital Of Indiana, Inc. | Step-wise method to remove cryoprotectant from sperm |
DE4419894A1 (de) | 1994-06-07 | 1995-12-14 | Gip Medizin Technik Gmbh | Endoskopische Punktionsnadelvorrichtung |
EP0687956B2 (de) | 1994-06-17 | 2005-11-23 | Carl Zeiss SMT AG | Beleuchtungseinrichtung |
US5601234A (en) | 1994-08-01 | 1997-02-11 | Abbott Laboratories | Fluid nozzle and method of introducing a fluid |
US5891734A (en) | 1994-08-01 | 1999-04-06 | Abbott Laboratories | Method for performing automated analysis |
JP3375203B2 (ja) | 1994-08-08 | 2003-02-10 | シスメックス株式会社 | 細胞分析装置 |
FR2723735B1 (fr) | 1994-08-18 | 1996-10-31 | Abx Sa | Boitier a branchement automatique pour distribution de reactifs dans un appareil notamment un analyseur hematologique. |
US5790692A (en) | 1994-09-07 | 1998-08-04 | Jeffrey H. Price | Method and means of least squares designed filters for image segmentation in scanning cytometry |
US20020186874A1 (en) | 1994-09-07 | 2002-12-12 | Jeffrey H. Price | Method and means for image segmentation in fluorescence scanning cytometry |
US5700692A (en) | 1994-09-27 | 1997-12-23 | Becton Dickinson And Company | Flow sorter with video-regulated droplet spacing |
US5934885A (en) | 1994-10-07 | 1999-08-10 | Bayer Corporation | Reagent pump assembly |
IL115327A (en) | 1994-10-07 | 2000-08-13 | Bayer Ag | Diaphragm pump |
US5602349A (en) | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Sample introduction system for a flow cytometer |
US5643796A (en) | 1994-10-14 | 1997-07-01 | University Of Washington | System for sensing droplet formation time delay in a flow cytometer |
US5602039A (en) | 1994-10-14 | 1997-02-11 | The University Of Washington | Flow cytometer jet monitor system |
EP0786078B1 (en) | 1994-10-14 | 2004-01-07 | University of Washington | System and method for high speed flow cytometer droplet formation |
US6861265B1 (en) | 1994-10-14 | 2005-03-01 | University Of Washington | Flow cytometer droplet formation system |
US5495719A (en) | 1994-11-14 | 1996-03-05 | Gray, Jr.; Carl O. | Method of preserving spermatozoa |
JP3347495B2 (ja) | 1994-11-14 | 2002-11-20 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
US5514537A (en) | 1994-11-28 | 1996-05-07 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Process and apparatus for sorting spermatozoa |
DE69530072T2 (de) | 1994-12-08 | 2004-03-04 | Molecular Dynamics, Sunnyvale | System zur fluoreszenzabbildung unter verwendung eines objektivs mit makroabtastung |
US5632754A (en) | 1994-12-23 | 1997-05-27 | Devices For Vascular Intervention | Universal catheter with interchangeable work element |
DE69533469T2 (de) | 1994-12-26 | 2005-09-22 | Sysmex Corp. | Durchflusszytometer |
US5835262A (en) | 1994-12-28 | 1998-11-10 | Research Development Corporation Of Japan | Multi-wavelength optical microscope |
FI98765C (fi) | 1995-01-16 | 1997-08-11 | Erkki Soini | Virtaussytometrinen menetelmä ja laite |
US5608519A (en) | 1995-03-20 | 1997-03-04 | Gourley; Paul L. | Laser apparatus and method for microscopic and spectroscopic analysis and processing of biological cells |
US5793485A (en) | 1995-03-20 | 1998-08-11 | Sandia Corporation | Resonant-cavity apparatus for cytometry or particle analysis |
US5620842A (en) | 1995-03-29 | 1997-04-15 | Becton Dickinson And Company | Determination of the number of fluorescent molecules on calibration beads for flow cytometry |
US5786560A (en) | 1995-03-31 | 1998-07-28 | Panasonic Technologies, Inc. | 3-dimensional micromachining with femtosecond laser pulses |
US5699152A (en) | 1995-04-03 | 1997-12-16 | Alltrista Corporation | Electro-optical inspection system and method |
US5682038A (en) | 1995-04-06 | 1997-10-28 | Becton Dickinson And Company | Fluorescent-particle analyzer with timing alignment for analog pulse subtraction of fluorescent pulses arising from different excitation locations |
US5528045A (en) | 1995-04-06 | 1996-06-18 | Becton Dickinson And Company | Particle analyzer with spatially split wavelength filter |
US5641457A (en) | 1995-04-25 | 1997-06-24 | Systemix | Sterile flow cytometer and sorter with mechanical isolation between flow chamber and sterile enclosure |
US5687727A (en) | 1995-05-01 | 1997-11-18 | Danforth Biomedical Incorporated | Catheter adaptor with slitting blade and improved manual control and method of use |
AU713345B2 (en) | 1995-05-09 | 1999-12-02 | Curators Of The University Of Missouri, The | A system for introducing a fluid into the uterus of an animal |
FR2734637B1 (fr) | 1995-05-24 | 1997-08-14 | Abx Sa | Dispositif d'inspection optique d'un fluide, notamment pour analyses hematologiques |
US5798276A (en) | 1995-06-07 | 1998-08-25 | Molecular Probes, Inc. | Reactive derivatives of sulforhodamine 101 with enhanced hydrolytic stability |
US5650847A (en) | 1995-06-14 | 1997-07-22 | Erkki Soini | Method and device for determination of parameters of individual microparticles |
US5716852A (en) | 1996-03-29 | 1998-02-10 | University Of Washington | Microfabricated diffusion-based chemical sensor |
US6454945B1 (en) | 1995-06-16 | 2002-09-24 | University Of Washington | Microfabricated devices and methods |
US5589457A (en) | 1995-07-03 | 1996-12-31 | Ausa International, Inc. | Process for the synchronization of ovulation |
US6411835B1 (en) | 1997-01-13 | 2002-06-25 | Medispectra, Inc. | Spectral volume microprobe arrays |
NZ313947A (en) | 1995-08-11 | 1999-05-28 | Univ Guelph | Identification of non-sex and sex specific molecules; immunisation with antibodies |
US5912257A (en) | 1995-09-06 | 1999-06-15 | The Research Foundation Of State University Of New York | Two-photon upconverting dyes and applications |
DE19533092A1 (de) | 1995-09-07 | 1997-03-13 | Basf Ag | Vorrichtung zur parallelisierten Zweiphotonen-Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie (TPA-FCS) und deren Verwendung zum Wirkstoff-Screening |
US6329158B1 (en) | 1995-09-15 | 2001-12-11 | Becton Dickinson And Company | Use of dimly fluorescing nucleic acid dyes in the identification of nucleated cells |
US6040139A (en) | 1995-09-19 | 2000-03-21 | Bova; G. Steven | Laser cell purification system |
US5726751A (en) | 1995-09-27 | 1998-03-10 | University Of Washington | Silicon microchannel optical flow cytometer |
US5780230A (en) | 1995-10-06 | 1998-07-14 | Coriell Institute For Medical Research | Compositions and methods for human sperm activation and quantitative assessment of human sperm genome replication |
US5736330A (en) | 1995-10-11 | 1998-04-07 | Luminex Corporation | Method and compositions for flow cytometric determination of DNA sequences |
US6117068A (en) | 1995-10-19 | 2000-09-12 | Elite Genetics, Inc | Artificial insemination system |
DE69637625D1 (de) | 1995-10-19 | 2008-09-18 | Bio Origyn Llc | Methoden und zusammensetzungen, die das ueberleben und die funktion von keimbahnzellen und embryonen verbessern |
DE69529538T2 (de) | 1995-11-09 | 2003-11-06 | Medical Res Council London | Verwendung von cyb-medium zum transport und lagern von sperma |
DE19549015C1 (de) | 1995-12-28 | 1997-04-03 | Siemens Ag | Verfahren und Anordnung zur Überwachung eines abreißenden Flüssigkeitstrahls |
JP3584108B2 (ja) | 1996-01-08 | 2004-11-04 | キヤノン株式会社 | レンズ鏡筒 |
US6641708B1 (en) | 1996-01-31 | 2003-11-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method and apparatus for fractionation using conventional dielectrophoresis and field flow fractionation |
WO1997029354A1 (de) | 1996-02-05 | 1997-08-14 | Bayer Aktiengesellschaft | Verfahren und vorrichtung zum sortieren und zur gewinnung von planar ausgebrachten biologischen objekten wie biologische zellen bzw. zellorganellen, histologischen schnitten, chromosomenteilchen etc. mit laserstrahlen |
BR9600722A (pt) | 1996-02-14 | 1997-12-30 | Jorge Antonio Rodrigues Claro | Bomba de infusão para contidos em bolsas plásticas flexíveis |
AU1852297A (en) | 1996-02-16 | 1997-09-02 | Inphocyte, Inc. | System and method for rapid analysis of cells using spectral cytometry |
JP3127111B2 (ja) | 1996-02-22 | 2001-01-22 | 株式会社日立製作所 | フロー式粒子画像解析方法および装置 |
US6143901A (en) | 1996-07-31 | 2000-11-07 | Genesoft, Inc. | Complex formation between dsDNA and pyrrole imidazole polyamides |
US6090947A (en) | 1996-02-26 | 2000-07-18 | California Institute Of Technology | Method for the synthesis of pyrrole and imidazole carboxamides on a solid support |
US5701012A (en) | 1996-03-19 | 1997-12-23 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Fluorescent biological particle detection system |
US5895922A (en) | 1996-03-19 | 1999-04-20 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Fluorescent biological particle detection system |
US5747349A (en) | 1996-03-20 | 1998-05-05 | University Of Washington | Fluorescent reporter beads for fluid analysis |
JP3590470B2 (ja) | 1996-03-27 | 2004-11-17 | アルプス電気株式会社 | 洗浄水生成方法および洗浄方法ならびに洗浄水生成装置および洗浄装置 |
JP3640461B2 (ja) | 1996-04-03 | 2005-04-20 | シスメックス株式会社 | 粒子分析装置 |
US5707808A (en) | 1996-04-15 | 1998-01-13 | The Regents Of The University Of California | Optical selection and collection of DNA fragments |
AU736340B2 (en) | 1996-04-25 | 2001-07-26 | Genicon Sciences Corporation | Analyte assay using particulate labels |
WO1997043620A1 (en) | 1996-05-15 | 1997-11-20 | International Remote Imaging Systems, Inc. | Selectively emphasizing particles of interest from a fluid sample for analysis |
JP2963393B2 (ja) | 1996-06-14 | 1999-10-18 | 浜松ホトニクス株式会社 | 光電子増倍管用電圧分割回路 |
US5846737A (en) | 1996-07-26 | 1998-12-08 | Molecular Probes, Inc. | Conjugates of sulforhodamine fluorophores with enhanced fluorescence |
US5909278A (en) | 1996-07-29 | 1999-06-01 | The Regents Of The University Of California | Time-resolved fluorescence decay measurements for flowing particles |
US5719667A (en) | 1996-07-30 | 1998-02-17 | Bayer Corporation | Apparatus for filtering a laser beam in an analytical instrument |
US5883378A (en) | 1996-07-30 | 1999-03-16 | Bayer Corporation | Apparatus and methods for transmitting electrical signals indicative of optical interactions between a light beam and a flowing suspension of particles |
US5872627A (en) | 1996-07-30 | 1999-02-16 | Bayer Corporation | Method and apparatus for detecting scattered light in an analytical instrument |
US6042249A (en) | 1996-07-30 | 2000-03-28 | Bayer Corporation | Illuminator optical assembly for an analytical instrument and methods of alignment and manufacture |
US5844685A (en) | 1996-07-30 | 1998-12-01 | Bayer Corporation | Reference laser beam sampling apparatus |
EP0822401A3 (en) | 1996-07-30 | 1999-05-06 | Bayer Corporation | Hydraulic system for a hematology analytical instrument |
US5745308A (en) | 1996-07-30 | 1998-04-28 | Bayer Corporation | Methods and apparatus for an optical illuminator assembly and its alignment |
EP0822404B1 (en) | 1996-07-30 | 2009-06-17 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Optical system for a hematology analytical instrument |
US6074827A (en) | 1996-07-30 | 2000-06-13 | Aclara Biosciences, Inc. | Microfluidic method for nucleic acid purification and processing |
US5998140A (en) * | 1996-07-31 | 1999-12-07 | The Scripps Research Institute | Complex formation between dsDNA and oligomer of cyclic heterocycles |
US5804436A (en) | 1996-08-02 | 1998-09-08 | Axiom Biotechnologies, Inc. | Apparatus and method for real-time measurement of cellular response |
US5919360A (en) | 1996-08-07 | 1999-07-06 | Cuno, Inc. | Additive dispensing apparatus |
DE69709377T2 (de) | 1996-09-04 | 2002-08-14 | Scandinavian Micro Biodevices | Mikrofliesssystem für die teilchenanalyse und trennung |
AU721792B2 (en) | 1996-09-06 | 2000-07-13 | Medarex, Inc. | Cyanidin compositions and therapeutic and diagnostic uses therefor |
US5873254A (en) | 1996-09-06 | 1999-02-23 | Interface Multigrad Technology | Device and methods for multigradient directional cooling and warming of biological samples |
US6221654B1 (en) | 1996-09-25 | 2001-04-24 | California Institute Of Technology | Method and apparatus for analysis and sorting of polynucleotides based on size |
US5759767A (en) | 1996-10-11 | 1998-06-02 | Joseph R. Lakowicz | Two-photon and multi-photon measurement of analytes in animal and human tissues and fluids |
US6002471A (en) | 1996-11-04 | 1999-12-14 | California Institute Of Technology | High resolution scanning raman microscope |
US5799830A (en) | 1996-11-08 | 1998-09-01 | Carroll; David C. | Pressure vessel access port |
US5696157A (en) | 1996-11-15 | 1997-12-09 | Molecular Probes, Inc. | Sulfonated derivatives of 7-aminocoumarin |
JP4323571B2 (ja) | 1997-01-31 | 2009-09-02 | エックスワイ, インコーポレイテッド | 光学装置 |
US6753161B2 (en) | 1997-03-27 | 2004-06-22 | Oncosis Llc | Optoinjection methods |
US6534308B1 (en) | 1997-03-27 | 2003-03-18 | Oncosis, Llc | Method and apparatus for selectively targeting specific cells within a mixed cell population |
US5874266A (en) | 1997-03-27 | 1999-02-23 | Palsson; Bernhard O. | Targeted system for removing tumor cells from cell populations |
GB9707096D0 (en) | 1997-04-08 | 1997-05-28 | Smithkline Beecham Plc | Novel device |
JP2968231B2 (ja) | 1997-04-11 | 1999-10-25 | 株式会社荏原製作所 | 空調システム |
US6050935A (en) | 1997-05-09 | 2000-04-18 | Biofertec | Container assembly for intravaginal fertilization and culture and embryo transfer and method of intravaginal fertilization and culture employing such a container |
US6133995A (en) | 1997-05-09 | 2000-10-17 | Sysmex Corporation | Particle measuring apparatus |
WO1998057152A1 (en) | 1997-06-09 | 1998-12-17 | Guava Technologies, Inc. | Method and apparatus for detecting microparticles in fluid samples |
AU8148898A (en) | 1997-06-23 | 1999-01-04 | Luminex Corporation | Interlaced lasers for multiple fluorescence measurement |
ATE326228T1 (de) | 1997-07-01 | 2006-06-15 | Vicam Lp | Verfahren zur geschlechtsbestimmung von säuger- nachkommenschaft |
US6111398A (en) | 1997-07-03 | 2000-08-29 | Coulter International Corp. | Method and apparatus for sensing and characterizing particles |
BR9704313A (pt) | 1997-07-08 | 1999-04-06 | Alves Elias Walter | Utilização de ig-y de ovo de galinha associado a anticorpos monoclonais contra antigenos sexo especifico na imunosexagem de espermatozóides de bovinos |
US5899848A (en) | 1997-07-14 | 1999-05-04 | Haubrich; Mark A. | Device and process for artificial insemination of animals |
US5985216A (en) | 1997-07-24 | 1999-11-16 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture | Flow cytometry nozzle for high efficiency cell sorting |
US5876942A (en) | 1997-07-24 | 1999-03-02 | National Science Council Of Republic Of China | Process for sexing cow embryos |
US5985538A (en) | 1997-08-01 | 1999-11-16 | Saint Barnabas Medical Center | Cryopreservation and cell culture medium comprising less than 50 mM sodium ions and greater than 100 mM choline salt |
US5819948A (en) | 1997-08-21 | 1998-10-13 | Van Den Engh; Gerrit J. | Particle separating apparatus and method |
US6003678A (en) | 1997-08-21 | 1999-12-21 | University Of Washington | Particle separating apparatus and method |
US5880474A (en) | 1997-08-29 | 1999-03-09 | Becton Dickinson And Company | Multi-illumination-source flow particle analyzer with inter-location emissions crosstalk cancelation |
AU9247598A (en) | 1997-09-22 | 1999-04-12 | University Of Guelph | Reduction of sperm sensitivity to chilling |
US6540895B1 (en) | 1997-09-23 | 2003-04-01 | California Institute Of Technology | Microfabricated cell sorter for chemical and biological materials |
US6322901B1 (en) | 1997-11-13 | 2001-11-27 | Massachusetts Institute Of Technology | Highly luminescent color-selective nano-crystalline materials |
CA2310672A1 (en) | 1997-11-19 | 1999-05-27 | University Of Washington | High throughput optical scanner |
US6086574A (en) | 1997-11-21 | 2000-07-11 | Hyclone Laboratories, Inc. | Fluid delivery systems with diptube connector |
US5895764A (en) | 1997-11-24 | 1999-04-20 | University Of New Mexico | Controlled sheath flow injection cytometry |
US5990479A (en) | 1997-11-25 | 1999-11-23 | Regents Of The University Of California | Organo Luminescent semiconductor nanocrystal probes for biological applications and process for making and using such probes |
US6207392B1 (en) | 1997-11-25 | 2001-03-27 | The Regents Of The University Of California | Semiconductor nanocrystal probes for biological applications and process for making and using such probes |
US6221671B1 (en) | 1997-12-12 | 2001-04-24 | Chemunex S.A. | Digital flow cytometer and method |
US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
US6071689A (en) | 1997-12-31 | 2000-06-06 | Xy, Inc. | System for improving yield of sexed embryos in mammals |
EP1058688A4 (en) | 1998-02-03 | 2004-10-06 | Xy Inc | USE OF SPECIFIC OLIGONUCLEOTIDE PRIMERS TO DETECT THE PRESENCE OF MALE BOVINE CHROMOSOME BY CHAIN AMPLIFICATION BY POLYMERASE |
US6746873B1 (en) | 1998-02-20 | 2004-06-08 | Xy, Inc. | Vibratory system for a sorting flow cytometer |
CN100357723C (zh) | 1998-02-20 | 2007-12-26 | Xy公司 | 用于分类流量细胞计数器的振动***和流量细胞计数方法 |
US6154276A (en) | 1998-02-23 | 2000-11-28 | The Regents Of The University Of California | Waveguide detection of right-angle-scattered light in flow cytometry |
US6211477B1 (en) | 1998-02-26 | 2001-04-03 | Becton Dickinson And Company | Electrostatic deceleration system for flow cytometer |
US6248590B1 (en) | 1998-02-27 | 2001-06-19 | Cytomation, Inc. | Method and apparatus for flow cytometry |
US6042025A (en) | 1998-03-13 | 2000-03-28 | Smith Et Al. | Two hole dispenser with baffles |
DE69912935T2 (de) | 1998-03-16 | 2004-09-02 | Partec Partikelzählgeräte GmbH | Elektronisches gerät zur präzisen abgabe kleiner flüssigkeitsmengen |
JP3594794B2 (ja) | 1998-03-24 | 2004-12-02 | 独立行政法人 科学技術振興機構 | ナノ秒時間ゲート分光診断装置 |
US6642018B1 (en) * | 1998-03-27 | 2003-11-04 | Oncosis Llc | Method for inducing a response in one or more targeted cells |
JP2002510045A (ja) | 1998-03-30 | 2002-04-02 | バイオシャフ リミテッド | 細胞および体液における一般的診断要因を分析するためのフロー式細胞数計算器 |
US6175409B1 (en) | 1999-04-02 | 2001-01-16 | Symyx Technologies, Inc. | Flow-injection analysis and variable-flow light-scattering methods and apparatus for characterizing polymers |
JP3350442B2 (ja) | 1998-04-09 | 2002-11-25 | 科学技術振興事業団 | 顕微鏡システム |
CA2328408C (en) | 1998-05-14 | 2005-02-15 | Luminex Corporation | Zero dead time architecture and method for flow cytometer |
AU3771599A (en) | 1998-05-18 | 1999-12-06 | University Of Washington | Liquid analysis cartridge |
EP1190229B1 (en) | 1998-05-22 | 2011-10-26 | California Institute Of Technology | Microfabricated cell sorter |
US6079836A (en) | 1998-07-20 | 2000-06-27 | Coulter International Corp. | Flow cytometer droplet break-off location adjustment mechanism |
EP2283848A1 (en) * | 1998-07-30 | 2011-02-16 | Xy, Llc | Equine system for non-surgical articificial insemination |
US6729369B2 (en) | 1998-07-31 | 2004-05-04 | Chata Biosystems, Inc. | Vessel for containing/transporting a fluent substance |
US20040107150A1 (en) | 1998-07-31 | 2004-06-03 | Chata Biosystems, Inc. Of Colorado | Apparatus and method with vessel for containing/transporting a fluent substance |
DE29813921U1 (de) | 1998-08-04 | 1998-10-08 | Kisfeld, Alfons, 48691 Vreden | Vorrichtung zur Besamung von Tieren, insbesondere Sauen |
US6309815B1 (en) * | 1998-08-07 | 2001-10-30 | University Of Kansas Medical Center | Composition and method for preparation, storage and activation of large populations of immotile sperm |
WO2000009113A1 (en) | 1998-08-17 | 2000-02-24 | Trout William E | Use of zeranol to modulate reproductive cycles |
EP1105713B1 (en) | 1998-08-21 | 2007-10-17 | Union Biometrica, Inc. | Instrument for analysing and selectively dispensing sample objects |
US6326144B1 (en) | 1998-09-18 | 2001-12-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Biological applications of quantum dots |
US6495333B1 (en) | 1998-09-22 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Flow cytometric, whole blood dendritic cell immune function assay |
US6208411B1 (en) | 1998-09-28 | 2001-03-27 | Kla-Tencor Corporation | Massively parallel inspection and imaging system |
US6707555B1 (en) | 1998-10-15 | 2004-03-16 | Sysmex Corporation | Optical information measuring apparatus |
US6423505B1 (en) | 1998-12-03 | 2002-07-23 | Becton Dickinson And Company | Methods and reagents for quantitation of HLA-DR and CD11b expression on peripheral blood cells |
US7116407B2 (en) | 1998-12-15 | 2006-10-03 | Union Biometrica, Inc. | System for axial pattern analysis of multicellular organisms |
US6128133A (en) | 1998-12-22 | 2000-10-03 | Lucent Technologies Inc. | Optical beamsplitter |
EP1018644A2 (en) | 1999-01-06 | 2000-07-12 | Bayer Corporation | Variable rate particle counter and method of use |
US6256096B1 (en) | 1999-01-11 | 2001-07-03 | Softray | Flow cytometry apparatus and method |
US20010006416A1 (en) | 1999-01-11 | 2001-07-05 | Johnson Paul E. | Ribbon flow cytometry apparatus and methods |
US6150119A (en) | 1999-01-19 | 2000-11-21 | Caliper Technologies Corp. | Optimized high-throughput analytical system |
US6473176B2 (en) | 1999-01-25 | 2002-10-29 | Amnis Corporation | Imaging and analyzing parameters of small moving objects such as cells |
US6580504B1 (en) | 1999-01-25 | 2003-06-17 | Amnis Corporation | Multipass cavity for illumination and excitation of moving objects |
US6671044B2 (en) | 1999-01-25 | 2003-12-30 | Amnis Corporation | Imaging and analyzing parameters of small moving objects such as cells in broad flat flow |
US6119465A (en) | 1999-02-10 | 2000-09-19 | Mullens; Patrick L. | Shipping container for storing materials at cryogenic temperatures |
FR2789778B1 (fr) | 1999-02-12 | 2001-09-14 | France Telecom | Procede pour associer des references d'acheminement a des paquets de donnees au moyen d'une memoire trie, et routeur de paquets appliquant ce procede |
JP2000239101A (ja) * | 1999-02-18 | 2000-09-05 | Japan Science & Technology Corp | ラット***の凍結保存法 |
US6323632B1 (en) | 1999-08-13 | 2001-11-27 | Coulter International Corp. | Solid state RF oscillator-detector for flow cytometer |
CH690557A5 (de) | 1999-03-01 | 2000-10-13 | Arson Ag | Beleuchtungseinrichtung. |
US6097485A (en) | 1999-03-08 | 2000-08-01 | Integrated Waveguides, Inc. | Microchip optical transport technology for use in a personal flow cytometer |
FR2791645B1 (fr) | 1999-04-02 | 2001-06-15 | Valois Sa | Echantillon de produit fluide destine a la presse |
US6193647B1 (en) | 1999-04-08 | 2001-02-27 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Microfluidic embryo and/or oocyte handling device and method |
US6793387B1 (en) | 1999-05-08 | 2004-09-21 | Chata Biosystems, Inc. | Apparatus for automatic preparation of a mixture and method |
FR2793495B1 (fr) | 1999-05-14 | 2001-08-10 | Imv Technologies | Dilueur pour la cryoconservation de spermatozoides de bovins |
FR2793708B1 (fr) | 1999-05-21 | 2001-08-03 | Valois Sa | Dispositif de distribution de produit fluide |
US6372506B1 (en) | 1999-07-02 | 2002-04-16 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method for verifying drop delay in a flow cytometer |
JP3361778B2 (ja) * | 1999-07-09 | 2003-01-07 | 社団法人家畜改良事業団 | 家畜の人工授精用***または受精卵移植用卵子の注入器及びその操作方法 |
IT1307787B1 (it) | 1999-07-26 | 2001-11-19 | Univ Firenze | Processo per incrementare la motilita' degli spermatozoi e spermatozoia motilita' superiore cosi' ottenuti. |
DE19935766A1 (de) | 1999-07-29 | 2001-02-01 | Friedrich Schiller Uni Jena Bu | Verfahren zur optischen Anregung von Fluorophor-markierter DNA und RNA |
US6664550B2 (en) | 1999-08-30 | 2003-12-16 | Sandia National Laboratories | Apparatus to collect, classify, concentrate, and characterize gas-borne particles |
US6495366B1 (en) | 1999-09-03 | 2002-12-17 | Therakos, Inc. | Uninterrupted flow pump apparatus and method |
US6813017B1 (en) | 1999-10-20 | 2004-11-02 | Becton, Dickinson And Company | Apparatus and method employing incoherent light emitting semiconductor devices as particle detection light sources in a flow cytometer |
EP1227898A4 (en) | 1999-10-21 | 2011-11-16 | Beckman Coulter Inc | SYSTEM FOR ANALYSIS BY FLOW CYTOMETRY WITH TEMPORARY DYNAMICS |
US6472153B1 (en) | 1999-10-26 | 2002-10-29 | Epoch Biosciences, Inc. | Hybridization-triggered fluorescent detection of nucleic acids |
US7208265B1 (en) | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
EP2281879B1 (en) | 1999-11-30 | 2016-01-27 | Intrexon Corporation | Apparatus for determining a morphological or physiological characteristic of individual cells in a biological specimen |
US6263745B1 (en) | 1999-12-03 | 2001-07-24 | Xy, Inc. | Flow cytometer nozzle and flow cytometer sample handling methods |
US6558911B1 (en) | 1999-12-10 | 2003-05-06 | Oregon Health Sciences University | Sperm quality assay |
DE60014440T2 (de) | 2000-01-03 | 2005-11-17 | Ibérica de Reproducción Asistida, S.L. | Vorrichtung zur künstlichen befruchtung von schweinen |
US6465169B2 (en) | 2000-01-14 | 2002-10-15 | Artemis Pharmaceuticals Gmbh | Method for cryoconservation of Zebrafish sperm |
DK1118268T3 (da) | 2000-01-14 | 2002-08-12 | Exelixis Deutschland Gmbh | Fremgangsmåde til kryokonservering af zebrafiskesperm |
IT1317724B1 (it) * | 2000-01-14 | 2003-07-15 | Istituto Sperimentale Italiano | Procedimento per la produzione di embrioni non umani di sessopredeterminato ad alto valore genetico. |
AU2001234608A1 (en) | 2000-01-28 | 2001-08-07 | Genetrace Systems, Inc. | Methods for analysis of gene expression |
US6587203B2 (en) | 2000-02-17 | 2003-07-01 | Cornell Research Foundation, Inc. | Sort stream stabilizer for flow cytometer |
US6618143B2 (en) | 2000-02-18 | 2003-09-09 | Idexx Laboratories, Inc. | High numerical aperture flow cytometer and method of using same |
US6646742B1 (en) | 2000-02-19 | 2003-11-11 | Mwi, Inc. | Optical device and method for multi-angle laser light scatter |
GB2360360B (en) | 2000-03-14 | 2002-03-20 | Univ Bristol | A method of sorting cells |
JP3587755B2 (ja) | 2000-03-14 | 2004-11-10 | シスメックス株式会社 | 粒子測定装置およびその方法 |
US6482652B2 (en) | 2000-03-23 | 2002-11-19 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Biological particle sorter |
EP1276905A2 (en) | 2000-03-30 | 2003-01-22 | Iowa State University Research Foundation | Genetic markers for improved meat characteristics in animals |
ES2642930T3 (es) | 2000-04-11 | 2017-11-20 | Chemometec A/S | Procedimiento y aparato para detectar fluorescencia de una muestra |
EP1147774A1 (en) | 2000-04-20 | 2001-10-24 | Stichting Dienst Landbouwkundig Onderzoek | Method for improving the quality of sperm for artificial insemination of animals |
HUP0302232A2 (hu) | 2000-05-09 | 2003-10-28 | Xy, Inc. | Berendezés és eljárás X-kromoszómát hordozó hímivarsejtek és Y-kromoszómát hordozó hímivarsejtek szétválogatására, eljárás részecskék megkülönböztetésére és részecskeosztályozó berendezés |
JP2001328901A (ja) * | 2000-05-19 | 2001-11-27 | Seatsuku Yoshitomi Kk | マウス***凍結保存用キット |
CA2409833A1 (en) | 2000-05-19 | 2001-11-29 | Cytomation, Inc. | A rapid multi-material sample input system |
US6784981B1 (en) | 2000-06-02 | 2004-08-31 | Idexx Laboratories, Inc. | Flow cytometry-based hematology system |
US6700130B2 (en) | 2001-06-29 | 2004-03-02 | Honeywell International Inc. | Optical detection system for flow cytometry |
US6590911B1 (en) | 2000-06-02 | 2003-07-08 | Coherent, Inc. | Passively modelocked harmonic-generating laser |
US7351376B1 (en) | 2000-06-05 | 2008-04-01 | California Institute Of Technology | Integrated active flux microfluidic devices and methods |
US6503698B1 (en) | 2000-06-16 | 2003-01-07 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture | Cryopreservation of swine embryos |
EP1294293A4 (en) | 2000-06-12 | 2009-11-04 | Xy Inc | INTEGRATED FLUID MANAGEMENT SYSTEM USING ISOLATED POPULATIONS OF X- AND Y-CHROMOSOME-CARRYING SPERMATOZOES |
DE10031028B4 (de) | 2000-06-26 | 2008-09-04 | Gnothis Holding Sa | Verfahren zur Selektion von Partikeln |
GB0016920D0 (en) | 2000-07-10 | 2000-08-30 | Univ Cambridge Tech | Decondensation of DNA |
WO2002012441A2 (en) | 2000-08-10 | 2002-02-14 | Genzyme Transgenics Corporation | Cryopreservation of sperm |
US20040005582A1 (en) | 2000-08-10 | 2004-01-08 | Nanobiodynamics, Incorporated | Biospecific desorption microflow systems and methods for studying biospecific interactions and their modulators |
FR2813283B1 (fr) | 2000-08-25 | 2003-02-14 | Valois Sa | Distributeur a pompe integree |
EP1190684A1 (en) | 2000-09-05 | 2002-03-27 | Universiteit Gent | Device and method for artificial insemination of bovines and other animals |
US20020028434A1 (en) | 2000-09-06 | 2002-03-07 | Guava Technologies, Inc. | Particle or cell analyzer and method |
WO2002020850A2 (en) | 2000-09-08 | 2002-03-14 | Iowa State Universtiy Research Foundation, Inc. | Novel prkag3 alleles and use of the same as genetic markers for reproductive and meat quality traits |
EP1334347A1 (en) | 2000-09-15 | 2003-08-13 | California Institute Of Technology | Microfabricated crossflow devices and methods |
GB0023041D0 (en) | 2000-09-20 | 2000-11-01 | Univ Manchester | Identification apparatus |
WO2002026114A2 (en) | 2000-09-27 | 2002-04-04 | Bitensky Mark W | Cellular diagnostic arrays, methods of using and processes for producing same |
CN1325909C (zh) | 2000-09-27 | 2007-07-11 | 清华大学 | 用于微粒操纵与微粒导向的装置及其使用方法 |
BR0005045A (pt) | 2000-09-28 | 2002-05-14 | Marcos Fernando De Resende Mat | Método para sexagem de espermatozóides usando a via clássica do sistema complemento, com eliminação da via alternativa pela inativação da proteina "b" |
WO2002029106A2 (en) | 2000-10-03 | 2002-04-11 | California Institute Of Technology | Microfluidic devices and methods of use |
NZ537680A (en) | 2000-10-05 | 2007-01-26 | Xy Inc | System of hysteroscopic insemination |
US20040031071A1 (en) | 2000-10-05 | 2004-02-12 | Xy, Inc. | System of hysteroscopic insemination of mares |
WO2002031467A1 (en) | 2000-10-12 | 2002-04-18 | Amnis Corporation | Multipass cavity for illumination and excitation of moving objects |
JP2004537712A (ja) | 2000-10-18 | 2004-12-16 | バーチャル・アレイズ・インコーポレーテッド | 多重細胞分析システム |
EP1328465A4 (en) | 2000-10-23 | 2008-04-16 | Medical Instill Tech Inc | RIGID BOTTLE FLUID LIQUID DISPENSER AND FLEXIBLE INNER BLADDER |
CA2428326A1 (en) | 2000-11-09 | 2002-05-16 | University Of Guelph | Mammalian sex selection using genetic modification |
SE0004777D0 (sv) | 2000-12-22 | 2000-12-22 | Amersham Pharm Biotech Ab | Separation of X-and Y-sperm cells |
US20050064383A1 (en) | 2000-11-22 | 2005-03-24 | Bashkin James K. | Methods and apparatus for producing gender enriched sperm |
US20020064809A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Mutz Mitchell W. | Focused acoustic ejection cell sorting system and method |
US7713687B2 (en) | 2000-11-29 | 2010-05-11 | Xy, Inc. | System to separate frozen-thawed spermatozoa into x-chromosome bearing and y-chromosome bearing populations |
US20020064808A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-05-30 | Mutz Mitchell W. | Focused acoustic energy for ejecting cells from a fluid |
US6849423B2 (en) | 2000-11-29 | 2005-02-01 | Picoliter Inc | Focused acoustics for detection and sorting of fluid volumes |
AU2002220018A1 (en) | 2000-11-29 | 2002-06-11 | Colorado State University | System for in-vitro fertilization with spermatozoa separated into x-chromosome and y-chromosome bearing populations |
US6596499B2 (en) | 2000-11-30 | 2003-07-22 | The Netherlands Cancer Institute | Membrane molecule indicator compositions and methods |
US6576291B2 (en) | 2000-12-08 | 2003-06-10 | Massachusetts Institute Of Technology | Preparation of nanocrystallites |
US20040171163A1 (en) | 2000-12-15 | 2004-09-02 | Lopez Peter A. | Electrical conductive containment system |
US6577387B2 (en) | 2000-12-29 | 2003-06-10 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Inspection of ophthalmic lenses using absorption |
ATE370127T1 (de) | 2001-01-29 | 2007-09-15 | Univ Geneve | Pyrimidinische azyklonukleoside, verfahren zur ihrer herstellung und ihre verwendung |
US6673095B2 (en) | 2001-02-12 | 2004-01-06 | Wound Healing Of Oklahoma, Inc. | Apparatus and method for delivery of laser light |
US7029916B2 (en) | 2001-02-21 | 2006-04-18 | Maxcyte, Inc. | Apparatus and method for flow electroporation of biological samples |
WO2002077011A2 (en) | 2001-03-12 | 2002-10-03 | The State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon | Oxidation-reduction sensitive green fluorescent protein variants |
US6706163B2 (en) | 2001-03-21 | 2004-03-16 | Michael Seul | On-chip analysis of particles and fractionation of particle mixtures using light-controlled electrokinetic assembly of particles near surfaces |
WO2002077637A1 (en) | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Infigen, Inc. | Sex-specific selection of sperm from transgenic animals |
EP1245944B1 (en) | 2001-03-29 | 2007-02-14 | Sysmex Corporation | Flow cytometer |
AU2002251449B2 (en) | 2001-03-29 | 2008-01-31 | Cellect Technologies Corp. | Methods devices and systems for sorting and separating particles |
JP2002308897A (ja) | 2001-03-30 | 2002-10-23 | Council Scient Ind Res | ***の運動不能性を引き起こす、インドのミミズの体腔液由来のタンパク質 |
US20020159920A1 (en) | 2001-04-03 | 2002-10-31 | Weigl Bernhard H. | Multiple redundant microfluidic structures cross reference to related applications |
JP2002311027A (ja) | 2001-04-09 | 2002-10-23 | Hitachi Software Eng Co Ltd | ビーズ、ビーズ製造方法、フローサイトメータ及びプログラム |
US6416190B1 (en) * | 2001-04-27 | 2002-07-09 | University Of Chicago | Apparatus for using optical tweezers to manipulate materials |
US20020186375A1 (en) | 2001-05-01 | 2002-12-12 | Asbury Charles L. | Device and methods for detecting samples in a flow cytometer independent of variations in fluorescence polarization |
WO2002092161A1 (en) | 2001-05-10 | 2002-11-21 | Biophan, Llc | Miniaturized particle analyzer |
US7345758B2 (en) | 2001-05-17 | 2008-03-18 | Cytopeia | Apparatus for analyzing and sorting biological particles |
WO2002092247A1 (en) | 2001-05-17 | 2002-11-21 | Cytomation, Inc. | Flow cytometer with active automated optical alignment system |
US20020182590A1 (en) | 2001-05-25 | 2002-12-05 | Vanderbilt University | Determining protein function in cell culture using RNA interference |
US20030048433A1 (en) | 2001-06-01 | 2003-03-13 | Jean-Marie Desjonqueres | Cytometer signal processing system and method |
FR2825987B1 (fr) | 2001-06-19 | 2003-12-12 | Valois Sa | Distributeur de produit fluide |
WO2003008102A1 (en) | 2001-07-18 | 2003-01-30 | The Regents Of The University Of Michigan | Microfluidic gravity pump with constant flow rate |
WO2003008937A2 (en) | 2001-07-18 | 2003-01-30 | The Regents Of The University Of Michigan | Gas-focusing flow cytometer cell and flow cytometer detection system with waveguide optics |
FR2828281B1 (fr) | 2001-08-02 | 2004-12-31 | Biocytex | Dispositif pour l'analyse d'un echantillon notamment par cytometrie de flux |
AU2002320399A1 (en) | 2001-09-01 | 2003-03-18 | Pharmacia Corporation | Staining and sorting genomes and chromosomes using sequence-specific polyamides |
DE10151216A1 (de) | 2001-10-16 | 2003-04-24 | Zeiss Carl Jena Gmbh | Verfahren zur optischen Erfassung von charakteristischen Größen einer beleuchteten Probe |
US20030078703A1 (en) | 2001-10-19 | 2003-04-24 | Surromed, Inc. | Cytometry analysis system and method using database-driven network of cytometers |
US6838289B2 (en) | 2001-11-14 | 2005-01-04 | Beckman Coulter, Inc. | Analyte detection system |
US6831279B2 (en) | 2001-11-27 | 2004-12-14 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Laser diode-excited biological particle detection system |
AU2002357175A1 (en) | 2001-12-18 | 2003-06-30 | Thomson Licensing S.A. | Internally generated close captioning/tele-texting for set-up menus of network-capable signal processing apparatus |
AU2002361220A1 (en) | 2001-12-31 | 2003-07-15 | Institut Fur Physikalische Hochtechnologie E.V. | Micro-recess array for size-dependent sorting or separation of cells suspended in a flowing medium and method for analysing the functional activity of individual cells |
AU2002363895A1 (en) | 2001-12-31 | 2003-07-15 | Institut Fur Physikalische Hochtechnologie E.V. | Cell sorting system for the size-based sorting or separation of cells suspended in a flowing fluid |
EP1468266A4 (en) | 2002-01-22 | 2009-03-11 | Beckman Coulter Inc | ENVIRONMENTALLY COMPLETED SYSTEM FOR A FLOW CYTOMETER |
US6698627B2 (en) | 2002-02-19 | 2004-03-02 | Valois S.A.S. | Fluid dispenser |
US6849394B2 (en) * | 2002-02-21 | 2005-02-01 | Minitube Of America | Compositions comprising reproductive cell media and methods for using such compositions |
WO2003072765A1 (en) | 2002-02-27 | 2003-09-04 | The Regents Of The University Of Michigan | Process for sorting motile particles from lesser-motile particles and apparatus suitable therefor |
US7223371B2 (en) | 2002-03-14 | 2007-05-29 | Micronics, Inc. | Microfluidic channel network device |
US20030175980A1 (en) | 2002-03-14 | 2003-09-18 | Hayenga Jon W. | Ribbon flow cytometry and cell sorting |
JP2004000144A (ja) | 2002-03-29 | 2004-01-08 | Aisin Seiki Co Ltd | 細胞分離選別装置、細胞整列用基板 |
US7312085B2 (en) | 2002-04-01 | 2007-12-25 | Fluidigm Corporation | Microfluidic particle-analysis systems |
MXPA04012850A (es) | 2002-06-28 | 2005-02-24 | Monsanto Technology Llc | Sistema de negocios para genetica porcina. |
CA2489779A1 (en) | 2002-07-10 | 2004-01-22 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Use of compounds for increasing spermatozoa motility |
WO2004009237A2 (en) | 2002-07-22 | 2004-01-29 | Xy, Inc. | Sperm cell process system |
DK2270817T3 (en) | 2002-07-31 | 2015-07-27 | Premium Genetics Uk Ltd | System and method for sorting materials using holographic laser control |
MX337304B (es) | 2002-08-01 | 2016-02-24 | Xy Llc | Sistema de separacion de baja presion para celulas de esperma. |
WO2004017041A2 (en) | 2002-08-15 | 2004-02-26 | Xy, Inc. | High resolution flow cytometer |
US7169548B2 (en) | 2002-09-13 | 2007-01-30 | Xy, Inc. | Sperm cell processing and preservation systems |
JP3983151B2 (ja) | 2002-09-25 | 2007-09-26 | ダイワ精工株式会社 | 魚釣用スピニングリール |
US7201875B2 (en) | 2002-09-27 | 2007-04-10 | Becton Dickinson And Company | Fixed mounted sorting cuvette with user replaceable nozzle |
US20040061853A1 (en) | 2002-09-27 | 2004-04-01 | Blasenheim Barry J. | Prism-based flow cytometry excitation optics |
US6941005B2 (en) | 2002-11-01 | 2005-09-06 | Coulter International Corp. | Monitoring and control of droplet sorting |
WO2004046712A2 (en) | 2002-11-20 | 2004-06-03 | University Of Virginia Patent Foundation | Isolation of sperm cells from other biological materials using microfabricated devices and related methods thereof |
AU2003297304A1 (en) | 2002-12-19 | 2004-07-22 | Monsanto Technology Llc | Method and means for early detection of pregnancy in animals by combination testing |
EP2306174B1 (en) | 2003-03-28 | 2016-05-11 | Inguran, LLC | Flow cytometry nozzle for orienting particles and corresponding method |
BRPI0408852A (pt) | 2003-03-28 | 2006-04-04 | Monsanto Technology Llc | processo para a coloração de espermatozóide |
NZ544103A (en) | 2003-05-15 | 2010-10-29 | Xy Llc | Efficient haploid cell sorting for flow cytometer systems |
US20050011582A1 (en) | 2003-06-06 | 2005-01-20 | Haug Jeffrey S. | Fluid delivery system for a flow cytometer |
US7460223B2 (en) | 2003-09-19 | 2008-12-02 | Applied Biosystems Inc. | Inverted orientation for a microplate |
EP1730523B1 (en) | 2004-03-29 | 2010-01-13 | Inguran, LLC | Use of a composition which regulates oxidation/reduction reactions intracellularly and/or extracellularly in a staining or sorting process of spermatozoa |
CN104974983A (zh) | 2004-03-29 | 2015-10-14 | 英格朗公司 | 用于授精的***悬浮液 |
AU2005266930B2 (en) | 2004-07-22 | 2010-09-16 | Inguran, Llc | Process for enriching a population of sperm cells |
EP2884258B1 (en) | 2004-07-27 | 2016-10-12 | Beckman Coulter, Inc. | Enhancing flow cytometry discrimination with computer-implemented geometric transformation |
US20060118167A1 (en) | 2004-12-03 | 2006-06-08 | Xy, Inc. | Pressure regulated continuously variable volume container for fluid delivery |
US20060147894A1 (en) | 2004-12-30 | 2006-07-06 | Vicam, L.P. | Jacketed vessel for holding semen for sex biasing mammals through artificial insemination and systems and methods for enhancing the probability of sex biasing using the same |
US7591064B2 (en) | 2005-07-20 | 2009-09-22 | Hitachi Global Storage Technologies Netherlands B.V. | Method of fabrication for tape medium read head with unitary formation of multiple elements |
US7618770B2 (en) | 2005-07-29 | 2009-11-17 | Xy, Inc. | Methods and apparatus for reducing protein content in sperm cell extenders |
US7732408B2 (en) | 2005-10-19 | 2010-06-08 | Iversync Ii Llc | Reproductive management |
-
2005
- 2005-03-29 CN CN201510400906.7A patent/CN104974983A/zh active Pending
- 2005-03-29 WO PCT/US2005/010481 patent/WO2005095590A2/en active Application Filing
- 2005-03-29 NZ NZ550196A patent/NZ550196A/en unknown
- 2005-03-29 CA CA2561661A patent/CA2561661C/en active Active
- 2005-03-29 ES ES09014128T patent/ES2397678T3/es active Active
- 2005-03-29 PT PT90141284T patent/PT2151243E/pt unknown
- 2005-03-29 JP JP2007506489A patent/JP2007537727A/ja not_active Withdrawn
- 2005-03-29 PL PL09014128T patent/PL2151243T3/pl unknown
- 2005-03-29 EP EP20100178442 patent/EP2260854A1/en not_active Ceased
- 2005-03-29 BR BRPI0509485-2A patent/BRPI0509485A/pt not_active Application Discontinuation
- 2005-03-29 JP JP2007506461A patent/JP2007531523A/ja not_active Withdrawn
- 2005-03-29 DK DK14002489.4T patent/DK2801363T3/en active
- 2005-03-29 EP EP14002489.4A patent/EP2801363B1/en active Active
- 2005-03-29 US US11/092,338 patent/US7892725B2/en active Active
- 2005-03-29 EP EP05731409A patent/EP1730266A2/en not_active Ceased
- 2005-03-29 AU AU2005228893A patent/AU2005228893B2/en not_active Ceased
- 2005-03-29 EP EP09014128A patent/EP2151243B1/en active Active
- 2005-03-29 CA CA2972254A patent/CA2972254A1/en active Pending
- 2005-03-29 CA CA2561519A patent/CA2561519C/en active Active
- 2005-03-29 US US11/092,313 patent/US7838210B2/en active Active
- 2005-03-29 DK DK09014128.4T patent/DK2151243T3/da active
- 2005-03-29 BR BRPI0509488-7A patent/BRPI0509488A/pt not_active Application Discontinuation
- 2005-03-29 WO PCT/US2005/010599 patent/WO2005094852A2/en active Application Filing
- 2005-03-29 MX MXPA06011344A patent/MXPA06011344A/es active IP Right Grant
- 2005-03-29 NZ NZ550198A patent/NZ550198A/en unknown
- 2005-03-29 AU AU2005229073A patent/AU2005229073B2/en not_active Ceased
- 2005-03-29 CN CN201210040778.6A patent/CN102586179B/zh active Active
- 2005-03-29 MX MXPA06011345A patent/MXPA06011345A/es active IP Right Grant
- 2005-03-29 EP EP05731144A patent/EP1729789A2/en not_active Withdrawn
- 2005-03-30 AR ARP050101214A patent/AR049259A1/es unknown
- 2005-03-30 AR ARP050101215A patent/AR048515A1/es not_active Application Discontinuation
-
2008
- 2008-12-10 JP JP2008314417A patent/JP2009100752A/ja active Pending
- 2008-12-10 JP JP2008314414A patent/JP2009082143A/ja not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-01-18 HK HK13100826.5A patent/HK1173745A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2015
- 2015-05-11 HK HK15104438.5A patent/HK1203831A1/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2397678T3 (es) | Suspensiones de espermatozoides para clasificación en poblaciones enriquecidas portadoras del cromosoma X o Y | |
US7998700B2 (en) | Use of a composition which regulates oxidation/reduction reactions intracellularly and/or extracellulary in a staining or sorting process | |
US9347040B2 (en) | Compositions and methods for processing sperm | |
EP2269617A1 (en) | Process for enriching a population of sperm cells | |
US10226041B2 (en) | Compositions and methods for improving the quality of processed sperm | |
EP3220931A1 (en) | Low sugar sperm media and compositions | |
ES2583985T3 (es) | Proceso para enriquecer una población de células espermáticas |