DK152427B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 4-thiomethylpyridinforbindelser eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf - Google Patents

Description

i

DK 152427 B

Opfindelsen angår en analogifremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte 4-thiomethylpyridinforbindelser med den i krav l's indledning angivne almene formel I eller farmaceutisk acceptable syreadditionssalte deraf, 5 hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved det i krav l's kendetegnende del anførte.

Der kendes inden for medicinen en række forbindelser, der er anvendelige til behandling af arthritis og andre inflammatoriske tilstande. Disse inkluderer antiinflam-10 matoriske midler, f.eks. corticosteroider, phenylbutazon, indomethacin, piroxicam og andre benzothiazindioxider (Lombardino, U.S.A. patent 3 591 584), 2-oxo-2,3-dihydro-benzofuran-3-carboxamider (Kadin, U.S.A. patent 3 676 463) og substituerede diarylimidazoler (Lombardino, 15 U.S.A. patent 3 707 475). Sådanne sygelige tilstande er også blevet behandlet ved indgivning af immunregule-rende midler, som f.eks. levamisol, således som beskrevet i Arthritis and Rheumatism, 2j), 1445 (1977) og Lancet, 1, 393 (1976).

20 Man har forsøgt at finde nye og forbedrede terapeutisk virkende midler til behandling af disse tilstande, og det har nu uventet vist sig, at de omhandlede hidtil u-kendte 4-thiomethylpyridinforbindelser og deres farmaceutisk acceptable syreadditionssalte er aktive som re-25 gulatorer af immunresponset hos pattedyr, og er af særlig værdi ved behandlingen af rheumatoid arthritis og andre tilstande, hvor regulering af immunresponset er ønskelig.

Den isomere 3-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin er blevet 30 omtalt i litteraturen (Vejdelek et al., Chem. Listy, _47, 49 (1953)? se Chem. Abstr. 49, 336f (1955)); imidlertid er der ikke berettet om farmakologisk virkning for denne forbindelse.

2

DK 152427B

Foretrukne blandt forbindelserne med formlen I er de, hvori Y er o-phenylen, ethylen, -CH2-CH-, -CH-CH-, og

-CH2~CH- , især i form af alkoholen eller acetatesteren 5 CH2OH

(dvs. R er hydrogen eller acetyl). På grund af den udmærkede perorale virkning er den mest foretrukne forbindelse (der også kan dannes in vivo som nedbrydningsprodukt af acetatesteren) selve 4-(2-hydroxyethylthiomethyl) 10 pyridinen.

Immunoregulerende virkning undersøges ved den såkaldte E-roset-procedure hos mus, hvor prøveforbindelsens evne til at genoprette erythrocytroset-dannelsen hos thymecto-miserede mus måles. Disse prøvninger er beskrevet nærme-15 re nedenfor.

En hel række bekvemme metoder er tilgængelige til frem stilling af de udgangsforbindelser, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen. Fremstillingen af udgangsforbindelserne, og fremgangsmåden ifølge opfindel-20 sen belyses ved de efterfølgende reaktionsskemaer, hvor nr. 1 og 4 repræsenterer variant (a) i krav 1, de afslut tende hydridreduktionstrin under nr. 2,3,5 og 6 repræsenterer variant (b) i krav 1, de alternative omsætninger med Grignardreagens under nr. 2,3,5 og 6 repræsente-25 rer variant (c) i krav 1, og nr. 7 repræsenterer den eventuelle bireaktion i krav 1.

(1) Omsætning af 4-picolylmercaptan med en passende substitueret halogenhydrin.

For eksempel: 3

DK 152427 B

ff/r\

N Vc^SH + C1CH2CH20H -> ilV-CH2-S-CH2CH2OH

/^CH2SH + BrCH2CH2OCH3-> V-CH2“S-CH2CH2GCH3

N ^ '\-CH2SH + BrCH-CHOH-y-CH2-S-CH -CHOS

W ch3ch3 CH3 ch3 y-CK2SH + Cl-CH-CH2OK-\VcH2S-CHCH20n \~rr~_/ p h \rrr./ (VH..

‘•'β 5 6 5

N \-CH2SH + C1CH2-CH0H -y-CH^S-CHCHOH

\=J CH2OH \s=lJ CH2OH

(2) Omsætning af 4-picolylmercaptan med en a.-halogen- syre eller ester deraf, efterfulgt åf passende hydrid-reduktion til alkohol eller tilsætning af et passende Grignard-reagens.

For eksempel: f ^V-CH-SH + Cl-CHC^-► H /-CHj-S-Ca-C^ W 2 /W |fcH3^ _ / /""Λ V q eVcH-SH + BrCH-C^-0--4·/ VcHS-CH-C^ W/ 2 i«, X°C2H5 / W * in3 X°C2B5 2 1 H_

N xVCH2-S-CHCH2OH

W/ iH3 4 DK 1524271 /-\-CH,SH + ClCHof0 -->/ yCHSCHC^ W i6y0H w J*~VcB,SH ♦ C1CHC'5'0 4-N yCH-S-CHC-f0 W 2 t6H>CB3 / V=/. i6H^°Ca3 F\ ► *

N xVCH2S-CHCH2OH

w i6H5 i/ \ i? ft \ -^° N X\-CH,-SH + ClCH,COC-Hc->-N yCH2-S-CH0~Cx

\ / 2 2 2 5 \-—J ** GC

^^CH3MgBr H~ QCH3 it a Λ y

CH2-S-CH2-C-OH / yCH2SCH2CB2OH

CH^ i (3) Omsætning af 4-picolylmercaptan med en dHialo- genketon eller et α-halogenaldehyd (fortrinsvis beskyttet som acetalen), efterfulgt af eventuel fjernelse af beskyttelsen og herefter enten passende hy-10 dridreduktion eller tilsætning af et passende Grig- nard-reagens.

For eksempel: 5

DK 152427 B

fi λ /0 Γ~·\

;i y-CHjSH + BrCH2C ^y-CH2-SCH2C

W Vs W C6H5 /\i~ CH^MgBr fi \ ^ n xVch2-s-ch2choh n Vch2-s-ch2coh \--=—/ J· η \~y Cj-H- N\ ^"CH2SH't'arCH2',‘CH(0C2H5 * 2 —> O — ^OC2H55 2 H+ /Γ-λ H" /T\ Y ^

N ^-CH2S^CH2CH2-OH <4-- NN^^y"Cil2SCH2C\H

^_^^CH3MgBr CgHgMgBr yT^v /f λ ▼

5 N y-CH2S-CH2CHOH N ^-CI^S-C^CEOS

\c=/ ^ \=z/ CgSg (4) Omsætning af et 4-picolylhalogenid med en passende substitueret mercaptan (jfr. fremgangsmåde 1 ovenfor).

For eksempel:

DK 152427 B

6 fy*,* + HS'CH2CH2OH -► ^-CH2-S-CH2CH20a // \ O \

N 'V-CH-Cl + HSCH-CHOH -► N )-CK-·-S-CH-CH-OH

\=J W ^3^3 /Γ\ fT\ N y-CH2Cl + HSCH2-CHOH-*-N xV-CH2S-CH2CHOa CH2OH \=J CH2 oh

Q

^)-C52Cl + ^3 -^ ^ ^)^CH2~S 0H

SE OH

5 (5) Omsætning af et 4-picolylhalogenid med en a-mercap- tosyre eller ester deraf, efterfulgt af passende hydridreduktion eller tilsætning af et passende Grignard-reagens (jfr. fremgangsmåde 2 ovenfor)

For eksempel:

10 O* * HS-CH><H->\^y-C!{2SCH2CCOB

+ HSCH<CH3-^QCHfSCH2<oca\

^^CH3MgBr >/H

/T~\ fH3 * r\ T

n ^-ch2-s-ch2c-oh n Vch2s-ch2ch2oh \ ~·/ CH3

DK 152427 B

7 (6) Omsætning af et 4-picolylhalogenid med en a-mercap-toketon, efterfulgt af hydridreduktion eller reaktion med et passende Grignard-reagens (jfr. fremgangsmåde 3 ovenfor).

5 For eksempel: Q/ O /T~\ s?

CH2-CI * HSCHjC'"'-> N VCH2S-CS2C

ch3 v CH3 /h CgHjMgBr /Γ\ * /T\ T 1585 n xVch2-s-ch2-choh n Vch2-s-ch2-c-oh \=y ch3 ch3

f, λ . o f/ 'X

N VcH2C1 + HSCH—->N VCH2-S-CH—C

C6H5iH3 C6H5CH3 h" CH^MgBr

\-CH2S-CH—CHOH Ί! ^-CH2S-CK—COH

c6h5ch3 c6h5ch3 10 (7) Acylering eller alkylering af alkoholerne fremstil let ved fremgangsmåderne (1) til (6).

DK 152427B

8

Fremgangsmåderne (1) - (6) omfatter i alle tilfælde en reaktion, ved hvilken halogenet i et organisk halogenid erstattes med en organisk thiorest. Reaktionen lettes ved at anvende et ækvivalent stærk base for at omdanne 5 mercaptanen til anionsaltet, der er betydeligt effektivere til at omdanne det organiske halogen til thioether-en. Dersom et surt salt af pyridingruppen (f.eks. 4-pico-lylchlorid-hydrochlorid) eller en syre (f.eks. a-mercap-topropionsyre) anvendes som den ene af reaktanterne, til-10 sættes en kompenserende mængde base. En hel række opløsningsmidler kan anvendes til denne reaktion, idet det eneste krav er, at opløsningsmidlet er inert over for reaktanterne og den forbindelse, der fremstilles, og at reaktanterne har en vis opløselighed deri. Vandige og polære 15 organiske opløsningsmidler kan anvendes til sådanne ombytningsreaktioner. Opløsningsmidlerne omfatter C^-Cg-alkoholer, -Cg-ketoner, C^-Cg-formamider, Cg-C^-acet- amider, acetonitrat og dimethylsulfoxid. Fortrinsvis bør opløsningsmidlet være mindre surt end mercaptanen, såle-20 des at dannelsen af thioanionen lettes. Den anvendte temperatur til denne reaktion er ikke kritisk (f.eks. fra 0 til 120°C, fortrinsvis fra 10-75°C og bekvemt ved stuetemperatur) . Temperaturen skal være høj nok til at give en passende reaktionshastighed, men ikke så høj, at det fører 25 til uønsket dekomponering. Således som det er velkendt inden for fagområdet, vil hastigheden variere med arten af det organiske halogenid (hastighed: I > Br Cl), opbyg ningen af både halogenidet og mercaptanen og af opløsningsmidlet. Reaktionstiden bør være således, at reaktionen 30 er næsten løbet til ende (f.eks.>95% omdannelse, dersom ækvivalente mængder af halogenid og mercaptan anvendes) for at få maksimum i udbytter (f.eks. 1 time til flere dage) . Reaktionerne kontrolleres let ved hjælp af tyndtlags-kromatografi, idet man anvender en af de kommercielt til-35 gængelige silicagelplader, der indeholder en ultraviolet indikator. Passende elueringsmidler er chloroform-methanol-blandinger med forhold af disse opløsningsmidler varieret

DK 152427B

9 efter reaktionsproduktets polaritet, en praksis der er velkendt af fagmanden. For de fleste reaktioner af denne type er et elueringsmiddel bestående af 9 dele chloroform og 1 del methanol særdeles velegnet. Til mere po-5 lære forbindelser øges forholdet af methanol (f.eks. 4 chloroform/1 methanol). Det er sommetider fordelagtigt at tilsætte indtil 5% eddikesyre som elueringsmiddel, specielt hvor det drejer sig om syreadditonssalte. Ethyl-acetat og andre alkoholer (f.eks. butanol) såvel som en 10 vis mængde vand kan anvendes som elueringsmiddel. Alt efter som reaktionen skrider frem, frembringes et ækvivalent stærk syre, der neutraliserer det mol base, der anvendes ved reaktionen. Af denne grund kan pH-værdien også anvendes som en hjælp til at kontrollere reaktion-15 en.

Hydridreduktioner, der kræves ved fremgangsmåderne (2), (3), (5) og (6) ovenfor, kan udføres med en hel række reagenser, sædvanligvis under milde betingelser, typisk ved en temperatur i området fra 0 til 50°C, bekvemt ved 20 stuetemperatur. De mest almindelige kommercielt tilgængelige metalhydridreducerende midler er anført med faldende aktivitet lithiumaluminiumhydrid, lithiumborhydrid og na-triumborhydrid. Det sidstnævnte kan aktiveres ved tilsætning af lithiumchlorid eller aluminiumchlorid. Også kom-25 mercielt tilgængeligt er et mindre reaktivt derivat af lithiumaluminiumhydrid solgt under handelsnavnet "Red-al", der er en 70% opløsning af bis-(2-methoxyethoxy)alumini-umhydrid i benzen, og lithiumaluminiumhydrid som en 50% suspension i olie, der lettere håndteres end selve li-30 thiumaluminiumhydridet. Reduktionen af carboxylsyrer og estere (fremgangsmåderne 2 og 5) kræver et stærkt hydrid-reducerende middel, som f.eks. selve lithiumaluminium-hydridet eller natriumbrohydrid aktiveret med aluminiumchlorid. Det er nødvendigt, at opløsningsmidlet til hy-35 dridreduktion er aprotisk og fri for reducerbare grupper 10

DK 152427 B

(enhver type carbonylfunktion, nitril, nitro, alifatisk halogen, sulfonat osv.). Foretrukne opløsningsmidler er ethere, som f.eks. tetrahydrofuran, dioxan, 1,2-dimetho-xyethan, bis(2-methoxyethyl)ether osv. Temperaturen og 5 reaktionstiden er ikke kritisk, men den ligger sædvanligvis i området 0 - 100°C i indtil 24 timer. Til reduktion af estere anvendes de samme reagenser som dem, der anvendes til reduktion af syrer. Lithiumborhydrid alene kan også anvendes, men kraftigere reaktionsbetingelser 10 (f.eks. tilbagesvaling af tetrahydrofuran) kræves. Også velegnet til reduktion af estere er "Red-al" (omtalt ovenfor). Passende opløsningsmidler, der kan anvendes sammen med "Red-al", er toluen, benzen, diethylether, tetrahydrofuran, dimethoxyethan osv. Temperaturer og 15 reaktionstider er omtalt ovenfor. Til reduktion af aldehyder eller ketoner (fremgangsmåderne 3 og 6), undtagen aromatisk nitrosubstitueret keton, kan betingelserne anvendt til reduktion af syrer og estere også anvendes. Lithiumborhydrid under milde betingelser (f.eks.

20 25°C i tetrahydrofuran) under de samme opløsningsmiddel betingelser som omtalt ovenfor for lithiumaluminiumhy-drid kan også anvendes til reduktion af ketoner og aldehyder. Imidlertid foretrækkes det mildere reagens natri-umborhydrid. Dette reagens anvendes sædvanligvis i et 25 ikke surt, protisk opløsningsmiddel (vand, C^-C^-alkohol-er) ved temperaturer på 85°C eller mindre (sædvanligvis mindre end 35°C i vand). Reaktionstiden er ikke kritisk, men den ligger sædvanligvis fra 1 til 24 timer. Natrium-borhydrid kan også anvendes i etheropløsningsmidler, men 30 tilstedeværelsen af et protisk opløsningsmiddel er sædvanligvis nødvendig til at opnå en rimelig reduktionshastighed. Et endnu mildere hydridreducerende middel, natriumcyanborhydrid, foretrækkes til reduktionen af keton i nærværelse af en aromatisk nitrofunktionalitet.

35 Noget surt vand eller methanol foretrækkes med dette 11

DK 152427B

reagens, skønt pH holdes over 3 for at undgå uønsket dekomponer ing af reagenset. Temperaturen er sædvanligvis i området 0 - 40°C med en reaktionstid på indtil 24 timer .

5 Grignard-reagens-tilsætningerne (fremgangsmåderne 2, 3, 5 og 6) udføres sædvanligvis ved at tilsætte en opløsning af et forud dannet Grignard-reagens i etheropløs-ning til en opløsning af den fri baseform af pyridin-esteren eller ketonen i et etheropløsningsmiddel, som 10 f.eks. tetrahydrofuran, dioxan eller 1,2-dimethoxyethan, ved temperaturer sædvanligvis i området 0 - 60°Cf passende ved 0 - 25°C, med en reaktionstid på op til 3 dage.

Methyletherderivaterne ved fremgangsmåde (7) kan dannes 15 ud fra alkoholerne fra fremgangsmåderne (1)-(6) ved anvendelse af methylhalogenider (fortrinsvis methyliodid, fordi det reagerer kraftigt) eller dimethylsulfat, omsat med det forud dannede jordalkalisalt af precursor-alkoholen i et inert, aprotisk opløsningsmiddel, som f.eks. et car-20 bonhydrid (f.eks. toluen, methylcyclohexan), en ether (f.eks. tetrahydrofuran, dimethoxyethan) eller et andet inert opløsningsmiddel (f.eks. dimethylformamid). Reaktionstemperaturen, der sædvanligvis ligger i området 0 -100°C, er ikke kritisk, idet man foretrækker stuetempera-25 tur. Reaktionen kan kontrolleres ved tyndtlagskromatografi såvel som ved pH-måling som beskrevet ovenfor for omsætningen af organiske halogenider med mercaptaner.

En hel række metoder kan anvendes til acyleringerne ved fremgangsmåde (7). Mest direkte er omsætningen af den fri 30 baseform af pyridinalkoholen [fremstillet ved fremgangså-derne (1) - (6)] med et syrechlorid eller et syreanhydrid. Yderligere base (uorganisk eller tertiær amin) kan eventuelt tilsættes. Alternativt kan et surt salt af pyridin-

DK 152427 B

12 alkoholen acyleres mea samme reagenser i nærværelse af et ækvivalent eller mere af en base. I en beslægtet fremgangsmåde omsættes syren med et chloroformat i nærværelse af et ækvivalent af en tertiær amin, som f.eks. triethyl-5 amin, N-methylmorpholinf dimethylanilin, N-methylpiperidin osv., under dannelse af et blandet anhydrid, der herefter omsættes i pyridinalkoholen. Opløsningsmidler til disse acyleringsreaktioner kan være selve anhydridet eller et hvilket som helst opløsningsmiddel, der er aprotisk og 10 inert over for reaktanterne og slutprodukterne,som f.eks. halogenerede carbonhydrider (f.eks. methylenchlorid), di-methylformamid, dimethylacetamid, ethere (f.eks, tetra-hydrofuran, 1,2-dimethoxyethan) osv.

Udgangsmaterialerne, der kræves til fremgangsmåderne 15 (1) - (6), er almindeligt tilgængelige fra litteraturen eller kommercielt. Alifatiske mercaptaner kan fremstilles ud fra de tilsvarende halogenider ved omsætning af halogenidet med thiourinstof under dannelse af iso-thiuroniumsaltet efterfulgt af basisk hydrolyse [se 20 præparation 1 og 2 nedenfor], ved omsætning af organiske halogenider med hydrogensulfid eller alkalimetalhydrosulfid [f.eks. mercaptoacetone, Hromatka et al., Monatsh, 78, 32 (1948)] eller ved hydrolyse af thiolestere [f.eks. 2-meth-oxyethylmercaptan, 2-mercapto-l-propanol, alfa-mercapto-25 alfa-phenylacetone , Chapman et al., J. Chem. Soc., 579 (1950); Sjoberg, Ber. 75, 13 (1942); von Wacek et al.,

Ber 75, 1353 (1942)], medens den eneste aromatiske mercaptan, der kræves som udgangsmateriale til fremgangsmåden ifølge opfindelsen, 2-mercaptophenol, er kommercielt til-30 gængelig. Organiske halogenider, der kræves som udgangsmaterialer, er også kommercielt tilgængelige eller kan syntetiseres som angivet i litteraturen. Typiske fremgangsmåder til at fremstille· de nødvendige halogenider er direkte halogenering, indvirkning af hydrogen eller 35 phosphorhalogenider på en alkohol, eller tilsætning af

DK 152427 B

13 hydrogenhalider til epoxider. De nødvendige reagenser, herunder hydrid-reduktionsmidler og Grignard-reagenser, er kommercielt tilgængelige.

De farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af de om-5 handlede pyridiner omfattes også af opfindelsen, og de kan let fremstilles ved at bringe den fri base i kontakt med den passende mineral- eller organiske syre i enten vandig opløsning eller i et passende organisk opløsningsmiddel. Saltet kan herefter opnås ved udfæld-10 ning eller ved afdampning af opløsningsmidlet. Omhandlede farmaceutisk acceptable syreadditionssalte omfatter, men er ikke begrænset til de, der dannes af saltsyre, hydrogenbromidsyre, salpetersyre, svovlsyre, phos-phorsyre, benzensulfonsyre, citronsyre, laurylsulfonsyre, 15 fumarsyre, oxalsyre, maleinsyre, methansulfonsyre, vinsyre, p-toluensulfonsyre og ravsyre. Med polybasiske syrer kan saltet indeholde en eller flere mol base pr. mol syre. Imidlertid foretrækkes de syreadditionssalte, der er mol til mol. Et omhandlet salt af særlig værdi 20 er 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridiniumdihydrogenphos-phat: ^οη2-β-οη2οη2οη · H3P04 der let krystalliseres og renses, og som udviser udmærket opløselighed i vand, hvilket letter den biologiske 25 anvendelse.

Som nævnt ovenfor bedømmes den immunoregulerende virkning af de omhandlede forbindelser ved E-rosetmetoden i mus.

Hos mus er tilstedeværelsen af en thymus nødvendig for at få fuld normal rosetdannelse med fåreerythrocyter 30 [se f.eks. Bach og Dardenne, Immunol. 25, 353 (1973)].

Metoden bedømmer et lægemiddels evne til at genoprette

DK 152427 B

14 azathioprin-følsomme, rosetdannende celler hos voksne thymectomerede mus til det niveau, der findes hos normale dyr. Specielt undersøges rosetdannelsen i CD-1-mus thymectomeret i en alder af 4 uger, og som har til-5 bragt mindst 14 dage efter operationen,inden de behandles (ATX-mus). ATX-musene doseres oralt enten med saltbære-opløsning eller lægemiddel. 16 timer senere fremstilles enkeltcellesuspensioner i Hanks afbalanceret saltopløsning (HBSS) fra miltene fra 3 mus. Til hvert glas sæt- 7 10 tes 0,1 ml lymphocyter (6 x 10 /ml) i HBSS og enten 0,1 ml HBSS eller 0,1 40^,ug/ml azathioprin i HBSS. Efter 90 minutters inkubering ved 37°C vaskes cellerne to gange med 5 ml HBSS, fyldes igen op til 0,2 ml, og derefter tilsættes 0,2 ml røde blodlegemer fra får (erythrocyter) 15 med 1,2 x 10 celler/ml. lO^ul afpipetteres på hæmagglu-tinationspladen, og man tæller antallet af rosetter. Prøveforbindelsens evne til at genoprette antallet af aza-thioprinfølsomme rosetdannende celler til normalværdi eller højere bestemmes. Hos normale mus findes 42% - 12% 20 azathioprinfølsomhed. Hos voksne thymectomerede mus fin des 3-3% azathioprinfølsomhed. De omhandlede forbindelsers evne til at genoprette azathioprinfølsomme rosetdannende celler til normalværdi eller derover ved forskellige orale doseringer (mg/kg, dvs. mg lægemiddel/ 25 kg muselegemsvægt) er angivet i tabel 1. Jo højere procent og jo lavere den effektive dosis, des mere aktiv er den omhandlede forbindelse som immunoregulerende middel.

TABEL 1

Immunoregulerende virkning 30 Virkning af pyridin-derivater ved E-rosetdannelsesmetoden på mus (Oral dosis på 1 mg/kg) CH2 -s-y-or 15

DK 152427 B

% Rosetdannen- Y R_ de celler -CH2-CH2- H ’ · 50, 43a'b -CH-CH- H 63 —CH.-CH- H 57 ch2oh 5 O H 59 -CH-CH-- H 40 i 2 CH3 -CH-CH.- H 33 I 1 C6H5 -CH--CH- H '56 2 i CH3

-CH--CH- H 8, 39a'C

2 i C6H5 10 -CH--CH- H 43 0 °ca3 -CH,-CH- H 40 0 no2 -CH-CH- H 33 CH3C6H5 CH_ I 3 -CH--C- H 39 2 I CH3 -CH2CH2CH2- H 36 15 -CH2CH2- CH3 33 -CH-CH-- CCH. 40 22. I, 3 0 rTKahanrllaWa Ifnnfrnllpr ί hh^rm^n-hnnu^ rpåe 0 — 3 16

DK 152427B

a. Separate resultater opnået ved to prøvninger.

b. Yderligere prøvningsresultater: 60, 58 ved 3 mg/kg 42, 53 ved 0,3 mg/kg 5 42, 51 ved 0,1 mg/kg 21, 33 ved 0,03 mg/kg 16 ved 0,01 mg/kg c. Yderligere prøvningsresultat: 50 ved 10 mg/kg.

10 Virkningen af 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin (Y

er -CE^CE^-, og R er H) ved immunoreguleringsproceduren (tabel 1) er bemærkelsesværdig. Yderligere hæmmer denne forbindelse ikke prostaglandinsyntesen i MC5-5 celler in vitro (IC50> lOO^um), og udviser derfor ikke samme uhel-15 dige bivirkning som mange ikke-steroide antiinflammato-riske (NSAI) lægemidler, dvs. ulcerogenitet. At 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin virker anderledes end klassiske NSAI-lægemidler demonstreres yderligere af dens manglende virkning ved en ultraviolet-lys-induce-20 ret erytemprocedure ved en dosis på 33 mg/kg peroral, en procedure, hvor indomethacin, phenylbutazon og andre NSAI-lægemidler forårsager klar undertrykkelse af ery-tem.

4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin giver dosisafhængig 25 beskyttelse over for polyarthritis frembragt ved injektion af Freund's komplette adjuvans i Wistar-Lewis-rot-ter. Dette middel er aktivt ved denne procedure over et dosisområde på 3,3 - 33 mg/kg peroralt og har en EDj-q-værdi på ca. 33 mg/kg. Dens anti-arthritiske virkning 30 er selektiv for det langsomt indsættende, lymphoidcelle-formidlede, sekundære respons (spredning af sygdommen 17

DK 152427 B

til uindsprøjtet fod) med ingen virkninger på den hurtigt indsættende, akutte inflammation af den adjuvans-indsprøjtede fod, hverken på fjerde dag eller på sekstende dag. Den påvirker ikke vægttabet induceret af ad-5 juvanssyge. Piroxicam og phenylbutazon er på den anden side effektive til at undertrykke både det primære og sekundære respons og specielt til at forhindre vægttab.

Dette mønster på antiarthritisk virkning adskiller igen 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin fra de klassiske 10 NSAl-lægemidler.

Fire daglige orale doser af 4-;(2-hydroxyethylthiomethyl)-pyridin på 33 mg/kg påvirker ikke det humorale immunrespons hos mus over for røde blodlegemer fra får. Under samme betingelser er de immunundertrykkende lægemidler 15 methotrexat, cyclophosphamid, azathioprin og 6-mercapto-purin kraftigt hæmmende.

4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin udviser ingen signifikante ulcerogene virkninger hos rotter ved en dosis på 100 mg/kg peroralt. Skønt en svag ulcerogen tendens ses 20 for levamisol ved 100/kg peroralt, frembringes der ingen statistisk signifikant virkning. Disse resultater står i bemærkelsesværdig kontrast til resultaterne fra phenylbutazon, aspirin og indomethacin, hvor distinkte ulcerogene virkninger ses ved perorale doser på henholdsvis 25 100, 50 og 10 mg/kg.

4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin er mindre akut toxisk end levamisol over for rotter og mus. Den orale LD^q hos mus er mere end 1000 mg/kg. Hos rotter er LD^p-værdien mere end 1000 mg/kg. Administreret peroralt som kapsler 30 (uden iblanding) i 14 dage til hunde i en dosis på 30 mg/kg/dag sås ingen abnormaliteter generelt pathologisk og histopathologisk. Der observeredes ingen forandringer i klinisk kemi, hæmatologi eller legemsvægt.

18

DK 152427B

De omhandlede pyridiner og deres farmaceutisk acceptable syreadditionssalte er således nyttige terapeutisk som regulatorer af immunresponset hos varmblodige dyr. Den immunregulerende virkning er særlig værdifuld ved behand-5 ling af sygelige tilstande som rheumatoid arthritis og andre sygdomme, der er forbundet med immundefekt. Således virker de omhandlede forbindelser ved at regulere individets immunreaktion og således afhjælpe den underliggende immunforstyrrelse ved at opretholde immunkom-10 petens. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser kan således anvendes ved en fremgangsmåde til at regulere immunreaktionen hos varmblodede dyr ved at indgive det pågældende dyr en 4-thiomethyl-pyridinforbindelse med formlen I eller et farmaceutisk 15 acceptabelt syreadditionssalt deraf i en mængde, der er tilstrækkelig til at regulere immunresponset. Ved denne metode indgives de omhandlede forbindelser til individet, som skal behandles, ad konventionelle veje, såsom oralt eller parenteralt, i doseringer på fra ca. 0,10 20 til ca. 50 mg/kg legemsvægt pr. dag, fortrinsvis fra ca. 0,10 til ca. 10 mg/kg legemsvægt pr. dag i en enkelt eller i opdelte doser. Imidlertid vil den optimale dosis for det enkelte individ blive bestemt af den behandlende læge, idet der sædvanligvis indgives mindre 25 doser til at begynde med og derefter foretages gradvise forøgelser for at bestemme den mest egnede dosering.

Denne vil variere afhængigt af den bestemte anvendte forbindelse og af individet, som behandles.

De omhandlede forbindelser kan anvendes i farmaceutiske 30 præparater indeholdende forbindelsen eller et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf sammen med et farmaceutisk acceptabelt bærestof eller fortyndingsmiddel. Passende farmaceutisk acceptable bærestoffer omfatter inerte faste fyldstoffer eller fortyndingsmidler 35 og sterile vandige eller organiske opløsninger. Den ak-

DK 152427 B

19 tive forbindelse vil være til stede i disse farmaceutiske præparater i mængder, der er tilstrækkelige til at give den ønskede dosis inden for det ovenfor beskrevne område. Således kan forbindelserne til peroral admini-5 strering kombineres med et passende fast eller flydende bærestof eller fortyndingsmiddel til dannelse af kapsler, tabletter, pulvere, siruper, opløsninger, suspensioner og lignende. De farmaceutiske præparater kan eventuelt indeholde yderligere komponenter som smagskorrige-10 rende midler, sødemidler, hjælpestoffer og lignende. Til parenteral administrering kan forbindelserne kombineres med sterile vandige eller organiske substrater til dannelse af opløsninger eller suspensioner. For eksempel kan anvendes opløsninger i sesam- eller jordnøddeolie, 15 vandig propylenglycol og lignende såvel som vandige opløsninger af vandopløselige farmaceutisk acceptable syreadditionssalte af forbindelserne. De injicerbare opløsninger, der er fremstillet på denne måde, kan indgives intravenøst, intraperitonealt, subcutant eller in-20 tramusculært, idet man foretrækker den intravenøse og intramusculære indgivning.

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen belyses nærmere ved de følgende eksempler.

DK 152427 B

20 EKSEMPEL 1 lli2lhYdroxY§thYlthiomethYl)_£Yridin (A) Undér en nitrogenatmosfære opløses natriumethoxid (170,1 g, 3,15 mol, 2,1 ækvivalent) i 2,7 liter absolut 5 ethanol, og den omrørte opløsning afkøles i et isbad.

Fast 4-picolylchlorid-hydrochlorid (97%, 253,6 g, 1,5 mol, 1 ækvivalent) tilsættes portionsvis i løbet af cirka 15 minutter. En opløsning af 2-mercaptoethanol (128,9 g, 1,65 mol) opløst i 300 ml ethanol tilsættes herefter dråbe-10 vis i løbet af cirka 30 minutter. Man lader reaktionsblandingen stige til stuetemperatur og omrører i 21,5 timer.

Der tilsættes diatomerjord til reaktionsblandingen, hvorefter der efter en kort omrøring filtreres. Filterkagen vaskedes to gange med 1500 ml absolut ethanol, filtraterne 15 sloges sammen med det oprindelige filtrat, og den samlede * ethanolopløsning inddampedes til en faststofholdig olie (omtrent 290 g). Olien opløstes i 1500 ml varm chloroform, der behandledes med aktivcarbon og filtreredes, hvorefter der atter koncentreredes til en olie (274 g) og kromato-20 graferedes på 1,5 kg silicagel i en 10 cm søjle, idet man anvendte chloroform som elueringsmiddel. Der udtoges fraktioner på omtrent 3,5 liter. Fraktionerne 3-18 blev slået sammen, der koncentreredes til en olie, og olien optoges i omtrent 1 liter ethylacetat og inddampedes, 25 hvorved man fik det rene 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)py-ridin. (195,7 g).

ir (film) μ: 3,17, 3,51, 3,58, 6,27, 9,45 og 12,27. - pnmr/CDCl3/TMS/é: 8,63-8,42 (m, 2H) PPm 7,38-7,18 (m, 2H) 30 3,73 (t, 2H) 3,72 (s, 2H) 2,98 (s, bred, IH) 2,63 (t, 2H)

DK 152427 B

21

Ved henstand udkrystalliserer forbindelsen langsomt med smeltepunkt 47-48°C.

Dihydrogenphosphatsaltet fremstilles på følgende måde:

Den fri base (frisk fremstillet olie, 195,7 g, 1,16 mol) 5 opløses i 488 ml ethylacetat og afkøles i et isbad. En opløsning af vandig phosphorsyre (85,5%, 132,5 g, 116 mol) i 488 ml ethylacetat tilsattes dråbevis i løbet af cirka 10 minutter til den omrørte opløsning af den frie base. Dihydrogenphosphatsaltet udfældede under tilsætningen i form 10 af en olie/faststofblanding. Fuldstændig udkrystallisation opnåedes ved at fjerne opslæmningen fra isbadet, tilsætte 687 ml methanol og omrøre. Filtrering gav det rå dihydro-genphosphatsalt (274,5 g). Omkrystallisation med omtrent 7 liter varm absolut ethanol, idet der opløstes varmt og 15 filtreredes og inddampedes til omtrent 5,5 liter, hvorefter man ved afkøling fik det rensede 4-(2-hydroxyethylthio-methyDpyridinium-dihydrogenphosphat [228,9 g; smeltepunkt 96,5 - 98,5°C.

ir (KBr)μ: 3,00, 3,57, 6,12, 7,75, 9,44.

20 pnmr/DMSO-dø/TMS/S: 8,73-8,33 (m, 6H, 4H bytter med D20) ppm 7,53-7,25 (m, 2H) 3,80 (s, 2H) 3,55 (t, 2H) 2,52 (t, 2H) 25 Analyse for CgH^-^NOS.H^PO^:

Beregnet: C 35,96 - H 5,28 - N 5,24 - P 11,59

Fundet : C 35,61 - H 5,03 - N 5,08 - P 11,71.

Den kraftigt rensede fri base (smeltepunkt 48 - 49°C) regenereredes ud fra phosphatsaltet ved at opløse saltet 30 i vand, gøre opløsningen basis med natriumhydroxid, ekstrahere den fri base over i chloroform og inddampe til tørhed.

DK 152427 B

22 (B) I en alternativ fremgangsmåde opløstes 2-mercapto-ethanol (11,9 g, 0,152 mol) i 138,5 ml absolut ethanol, og der afkøledes til 18°C. Der tilsattes natriummethoxid (15,7 g, 0,291 mol); temperaturen steg til 38°C, og man 5 fik en klar opløsning. Reaktionsblandingen afkøledes noget; medens man holdt temperaturen under 30°C, tilsattes 4-picolylbromid-hydrobromid (35 g, 0,138 mol) portionsvis i løbet af 10 minutter. Reaktionsblandingen opvarmedes herefter med tilbagesvaling, og der kogtes 10 med tilbagesvaling i 80 minutter. Reaktionsblandingen koncentreredes til en tyk masse, der opløstes i 140 ml vand, hvorefter der ekstraheredes to gange med 140 ml ethylacetat. Saltet opløstes i den vandige base under den anden ekstraktion. De forenede ethylacetatekstrakter 15 vaskedes atter med 150 ml IN NaOH to gange, der tørredes over vandfrit magnesiumsulfat, filtreredes og koncentreredes til omtrent det halve rumfang. Medens man holder temperaturen mellem 30 og 35°C, sættes phosphorsyren (12,0 g, 0,122 mol) langsomt til for direkte at udfælde det rå 20 produkt i form af dihydrogenphosphatsaltet, der udvindes ved filtrering efter omrøring 1 time. Det rå produkt omkrystalliseres med absolut ethanol, hvilket giver det rene 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridinium-hydrogenphos-phat (14,0 g).

25 EKSEMPEL 2 åli^-hydroxy^ibutyltiiigmethyl^pyridin

Natriummethoxid (3,40 g, 63 mmol) opløses i 30 ml absolut ethanol under nitrogen, og der afkøles i et isbad. Til den afkølede opløsning sættes en suspension af fintforma-30 let 4-picolylchlorid-hydrochlorid (5,07 g, 30 mmol) opslæm-met i omtrent 30 ml absolut ethanol i løbet af 15 minutter, hvorefter man tilsætter en opløsning af 3-mercapto-2-bu-tanol[3,19 g, 30 mmol, Price et al., J. Am. Chem. Soc.

75, 2396 (1953)] i 6 ml absolut ethanol i løbet af 5 minut-35 ter. Reaktionsblandingen opvarmes til stuetemperatur, og

DK 152427 B

23 man omrører i 14 timer. Reaktionsblandingen filtreres, de faste stoffer ekstraheres med yderligere ethanol. Ethanolopløsningerne slås sammen, og der inddampes til en olie, der indeholder faste stoffer (6,31 g), der op-5 tages i chloroform, de faste stoffer fjernes ved filtrering, og der koncentreres til en olie. Den fremkomne olie kro-matograferes på 200 g silicagel, idet man anvender chloroform som elueringsmiddel. Produktfraktionerne slås sammen, og der strippes til en olie (5,03 g). Opløsningen 10 i omtrent 50 ml ethylacetat, filtrering gennem diatomer-jord og fjernelse af opløsningsmidlet giver det rene 4-(3-hydroxy-2-butylthiomethyl)pyridin (olie).

ir (film)fi: 3,08, 3,40, 3,45, 6,24, 7,08, 9,20, 12,27.

15 m/e: Beregnet 197

Fundet 197.

pnmr/CDCl^/TMS/Sί 8,57 (m, 2H) 7,30 (m, 2H) 3,85 (m, IH) 20 3,76 (s, 2H) 3,12 (s, bred, IH, bytter med D2O) 2,75 (m, IH) 1,20 (d, 6H)

Analyse for C10H15NOS: 25 Beregnet: C 60,88 - H 7,66 - N 7,10

Fundet : C 60,81 - H 7,77 - N 7,18.

EKSEMPEL 3 4-_(2_,3-d ihydroxy^l-prgpylthiomethyljpyridin

Natriummethoxid (3,24 g, 60 mmol) opløstes i 36 ml abso-30 lut ethanol under en nitrogenatmosfære, og den omrørte op-

DK 152427 B

24 løsning afkøledes i et isbad. Under stadig afkøling tilsattes fintfordelt 4-picolylchlorid-hydrochlorid (5,07 g, 30 mmol) opslæmmet i cirka 35 ml absolut ethanol i løbet af 15 minutter, hvorefter en opløsning af 3-mercapto-5 1,2-propandiol (3,24 g, 30 mmol) i 6 ml absolut alkohol i løbet af 5 minutter tilsattes dråbevis. Reaktionsblandingen henstod,for at temperaturen kunne stige til stuetemperatur, og der omrørtes natten over (16 timer). Reaktionsblandingen klaredes ved filtrering gennem diato-10 merjordj de uopløselige rester og diatomerjorden ekstra- heredes med ethanol, og det oprindelige filtrat sloges sammen med ekstrakten, hvorefter man inddampede hele mængden til en olie (5,83 g). Vakuumdestillation, der syntes at bevirke betydelig nedbrydning, gav omtrent 2,0 ml af 15 et forholdsvis rent produkt (kogepunkt 230°C/0,3 mm). Destillatet opløstes i kold methanol, en fast urenhed fjernedes ved filtrering, og det rene 4-(2,3-dihydroxy- l-propylthiomethyl)pyridin udvandtes ved inddampning af filtratettil en olie (2,15 g).

20 ir (film) ji: 2,97, 3,46, 3,50, 6,21, 7,05, 9,40 og 12,25.

Analyse for :

Beregnet: C 54,25 - H 6,58 - N 7,03

Fundet : C 54,11 - H 6,39 - N 7,31.

25 EKSEMPEL 4 ili^zhydroxyphenylthiomethyl^pyridin

Natriummethoxid (2,16 g, 40 mmol) opløstes i 24 ml absolut alkohol, omrørtes under nitrogen, og opløsningen afkøledes i et isbad. 4-picolylchlorid-hydrochlorid (3,38 g, 20 30 mmol) der var fint formalet, opslæmmedes i omtrent 20 ml absolut ethanol, og tilsattes den ovennævnte opløsning i løbet af omtrent 15 minutter. En opløsning af 2-mercapto-phenol (2,52 g, 20 mmol) i 4 ml absolut ethanol tilsattes

DK 152427 B

25 herefter i løbet af cirka 5 minutter. Reaktionsblandingen varmedes langsomt, og man lod den omrøre under nitrogen i 14 timer ved stuetemperatur. Reaktionsblandingen filtreredes gennem diatomerjord. De faste stoffer vaskedes at-5 ter med yderligere 75 ml ethanol. Ethanolfiltraterne sloges sammen, og ved koncentrering fik man det rå produkt som et fast stof (2,02 g). Omkrystallisation med vandig ethanol gav det rene 4-(2-hydroxyphenylthiomethyl)pyridin (1,24 g, smeltepunkt: 142-145°C).

10 Analyse for C^H^NQS:

Beregnet: C 66,33 - H 5,10 - N 6,45 - m/e 217

Fundet : C 66,23 - H 5,19 - N 6,43 - m/e 217.

Fremstilling af udgangsforbindelser EKSEMPEL 5

Natrium_2-_(4-picolylthio)_gropionat 15 Natriummethoxid (5,1 g, 94 mmol) opløstes i 50 ml absolut ethanol, og der afkøledes i et isbad. En opslæmning af 4-picolylchlorid-hydrochlorid (5,0 g, 30,4 mmol) i 45 ml ethanol tilsattes, og den afkølede reaktionsblanding om-rørtes i omtrent 10 minutter. Til slut tilsattes 2-mer-20 captopropionsyre (3,23 g, 30,4 mmol) opløst i 5 ml ethanol i løbet af 10 minutter. Man lod blandingens temperatur stige til stuetemperatur, og der omrørtes natten over (omtrent 16 timer). Reaktionsblandingen filtreredes gennem en filterhjælp for at fjerne saltene, behandledes med aktiv-25 kul og koncentreredes til det rå natrium-2-(4-picolylthio)-propionat (omtrent 7 g olie), der anvendtes direkte i næste trin (eksempel 7) .

EKSEMPEL 6

Nstrium-a-phenyl j_4-picolylthio|acetat

Natriummethoxid (6,8 g, 0,124 mol) opløstes i 150 ml ethanol, 30 og der afkøledes til 0°C„ En opløsning af a-mercaptophenyl-

DK 152427 B

26 eddikesyre (7,0 g, 0,042 mol) i 50 ml ethanol tilsattes i løbet af 5 minutter til den kolde methoxidopløsning. Efter 5 minutters forløb tilsattes en opslæmning af 4-pico-lylchlorid-hydrochlorid (6,83 g, 0,042 mol) i 50 ml 5 ethanol i løbet af 5 minutter. Reaktionsblandingen fjernedes fra isbadet, og man omrørte i omtrent 60 timer.

Man filtrerede reaktionsblandingen og inddampede, hvorved man fik natrium-α-phenyl(4-picolylthio)acetat (11,8 g; voksagtigt fast stof).

10 ir:p 3,0, 6,1, 6,25, 7,3, 13,6 der anvendtes direkte i næste trin (eksempel 8).

EKSEMPEL 7 ?£l}Yil2-J[4-£icglylthio)_progionat Råt natrium-2-(4-pyridylmethylthio)propionat (omtrent 7 15 g) opløstes i 100 ml absolut ethanol, og der tilsattes omtrent 5 cm^ 3A molekylarsi. Tørt hydrogenchlorid bobledes gennem reaktionsblandingen, der kogtes med tilbagesvaling i 75 minutter, medens man fortsatte med at mætte med hydrogenchlorid under de første 15 minutter. Blandingen afkø-20 ledes til stuetemperatur, hvorefter den henstod natten over under omrøring (omtrent 16 timer). Blandingen filtreredes gennem diatomerjord, og der koncentreredes til en halvfast blanding. Esterificeringstrinnet gentoges på denne blanding, bortset fra at mætningen med hydrogenchlorid fortsat-25 tes i 1 time under kogning med tilbagesvaling, og at man kogte med tilbagesvaling natten over. Reaktionsblandingen afkøledes til stuetemperatur, der filtreredes gennem diatomer jord og inddampedes til en olie. Olien ekstraheredes med chloroform, idet det efterlod et filtrerbart salt, 30 og chloroformen strippedes, hvorved man fik ethyl-2-(4-picolylthio)propionat (voksagtigt fast stof).

DK 152427B

27 ir (KBr) μ 3,0, 3,5, 5,75, 6,15, 6,30, 6,70, 8,6 12,25 m.s.: m/e beregneti 225 m/e fundet s 225, 152, 124, 102, 5 92, 45.

EKSEMPEL 8

Methyl-of.-phenyl-4-pyridylme thyl thioace tat

Natriumphenyl(4-pyridylmethylthio)acetat opløstes i methanol, og tør hydrogenchlorid tilsattes langsomt, således 10 at der opretholdtes en svag tilbagesvaling i 1 time. Efter afkølingog omrøring i omtrent 16 timer filtreredes reaktionsblandingen, hvorefter man koncentrerede til opnåelse af methyl-a-phenyl{4-pyridylmethylthio)acetat (11,6 g; olie; ms, beregnet: m/e 273; fundet: 273, 214, 150, 15 136, 124, 121, 105, 77, 65).

EKSEMPEL 9 4-picolylthigacetone

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (2,6 g, 48 mmol) i 40 ml ethanol og afkøledes i et isbad.

4-picolylmercaptan (6,0 g, 48 mmol) i 40 ml ethanol til-20 sattes i løbet af 5 minutter, hvorefter man tilsatte chlor-acetone (4,5 g, 48 mmol) i 25 ml ethanol i løbet af 5 minutter. Efter omrøring i yderligere 15 minutter ved 0-5°C lod man reaktionsblandingens temperatur stige til stuetemperatur, og der omrørtes i omtrent 65 timer. For at 25 isolere forbindelsen filtreredes reaktionsblandingen gennem diatomerjord, og modervæsken inddampedes, hvorved man fik det rå produkt som en olie (8,3 g), Hele det rå produkt kromatograferedes på 480 g silicagel, idet man anvendte chloroform som elueringsmiddel. Når det ønskede produkt

DK 152427 B

28 begyndte at komme ud af søjlen, tilsattes 2% methanol til chloroformelueringsmidlet. Produktfraktionerne sloges sammen, og der koncentreredes til en olie. Til slut opløstes i ethylacetat, der tørredes over vandfrit magnesium-5 sulfat,og gentagen inddampning gav det rene 4-picolylthio- acetone (4,91 g, m/e beregnet: 181, fundet: 181, 138, 124, 92, 65, 43? ir (KBr) 5,8, 6,2, 7,05, 12,25 μ).

EKSEMPEL 10 “liålEi£2l¥lthio|aceto£henon

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (0,81 g, 10 15 mmol) i 17,9 ml omrørt absolut ethanol, og der afkøledes i et isbad. 4-picolylmercaptan (1,88 g, 15 mmol) i 3 ml absolut ethanol tilsattes dråbevis i løbet af cirka 5 minutter, hvorefter man i løbet af cirka 10 minutter tilsatte alfa-bromacetophenon (3,05 g, 15 mmol) i 10 ml varm absolut 15 ethanol. Den omrørte reaktionsblandings temperatur steg til stuetemperatur, hvorefter man omrørte i yderligere 17 timér. Saltene fjernedes ved filtrering gennem diatomerjord, og de faste stoffer tilsattes yderligere ethanol og behandledes hermed i o,5 timer og filtreredes. Ethanolfiltraterne 20 sloges sammen, og der koncentreredes, hvorved man fik et voksagtigt fast stof. Det voksagtige faste stof optoges i omtrent 11 rumfang diethylether, der behandledes med aktiv-carbon og filtreredes, og modervæsken koncentreredes til et fast stof (1,90 g). Omkrystallisation med diethylether/hexan 25 gav det rene a-(4-picolylthio)acetophenon (1,25 g af to gange, smeltepunkt: 55-59°C).

ir (KBr):/; 5,92, 6,18, 7,00, 7,76, 9,78, 12,38, 13,70.

Analyse for C14H^3ONS: 30 Beregnet: C 69,11 - H 5,39 - N 5,76 - m/e 243.

Fundet : C 69,07 - H 5,47 - N 5,70 - m/e 243.

DK 152427 B

29 EKSEMPEL 11 <x i!4-EicolYlthio)^ӣ-methoxYacetgghenon

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (0,62 g, 11,4 irnnol) i omtrent 15 ml absolut ethanol, og der afkøledes i et isbad. 4-picolylmercaptan (1,43 g, 11,4 mmol) 5 i omtrent 3 ml absolut ethanol tilsat i løbet af omtrent 5 minutter. Efter omrøring i yderligere 10 minutter tilsattes en opslæmning af α-brom-p-methoxyacetophenon (2,62 g, 11,4 mmol) i cirka 5 ml absolut ethanol i løbet af 10 minutter. Man lod blandingens temperatur stige til 10 stuetemperatur og omrørte yderligere i 16 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes til en olie, der indeholdt faste stoffer, der tritureredes med chloroform, saltene fjernedes ved filtrering og koncentreredes atter til en olie (3,6 g). Olien kromatograferedes på 120 g silica-15 gel, idet man anvendte chloroform som elueringsmiddel.

De produktholdige fraktioner blev kombineret og inddampet til en olie, der udkrystalliserede ved triturering med kold ether. Filtreringen gav aM4-picolylthio)-p- methoxyacetophenon [2,27 g; smeltepunkt: 64 - 65°C].

20 ir (KBr): μ 3-3,5, 5,59, 6,25, 7,95, 8,55, 12,0 og 12,2.

Massespektre: m/e Beregnet: 273

Fundet : 273, 150, 135, 124, 107, 92.

pnmr/CDCl^/TMS/T: 6,35 (s, 2H) 25 6,3 (s, 2H) 6.1 (s, 3H) 3.1 (d, 2H) 2,7 (d, 2H) 2,0 (d, 2H) 30 1/4 (d, 2H).

DK 152427B

30 EKSEMPEL 12 k-_(4-gicolYlthio)_-g-nitroacetoghenon

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (0,52 g, 9,6 mmol) i 15 ml absolut ethanol, og der afkøledes til 0-5°C.

4-picolylmercaptan (1,2 g, 9,6 mmol) i 15 ml ethanol til-5 sattes i løbet af 5 minutter. α-brom-p-nitroacetophenon (2,3 g, 9,6 mmol) i 20 ml varm ethanol tilsattes herefter i løbet af 5 minutter, og man lod blandingens temperatur stige til stuetemperatur, hvorefter der omrørtes i cirka 16 timer. Reaktionsblandingen filtreredes, og filtratet kon-10 centreredes til en olie (4,3 g). Olien kromatograferedes på 175 g silicagel, idet man anvendte 1:1 hexan:ethylacetat som elueringsmiddel. De produktholdige fraktioner blev kombineret og inddampet, hvorved man fik ot-(4-pico-lylthio)-p-nitroacetophenon [1,40 g? olie].

15 pnmr/CDCl3/TMS/r: 6,5 (3, 4H) 2,7 (d, 2H) 1,9 (d, 4H) I, 5 (d, 2H)

Massespektre: m/e Beregnet: 288 20 Fundet : 288, 242, 165, 150, 138, 124, 104, 92, 76, 65, 39.

ir (film): p. 3-3,5, 5,95, 6,25, 6,55, 7,35, 7,85 II, 70.

EKSEMPEL 13

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (0,60 g, 11 mol) i cirka 15 ml ethanol, der omrørtes, og man afkølede i et isbad. 4-picolylmercaptan (1,4 g, 11 mmol)

DK 152427 B

31 i cirka 3 ml absolut ethanol tilsattes i løbet af 5 minutter, og blandingen omrørtes i 15 minutter. Alfa-brom-propiophenon (2,4 g, 11 mmol) i cirka 15 ml absolut ethanol tilsattes herefter i løbet af 5 minutter. Reaktionsblan-5 dingen opvarmedes til stuetemperatur, og der omrørtes i cirka 16 timer. Reaktionsblandingen filtreredes, og filtratet inddampedes til en olie, der kromatograferedes på 100 g silicagel, idet man anvendte chloroform som elueringsmiddel. Herved fik man det rene a-(4-picolylthio)-propiophenon 10 [2,17 g; olie].

ir (CHC13):£ 3,5, 6,0, 6,25, 6,95, 7,05, 10,55.

Massespektre: m/e: Beregnet: 257

Fundet : 251, 197, 152, 134, 105.

pnmr/CHCl^/TMS/T: 8,5 (d, 3H) 15 6,4 (s, 2H) 5,7 (g, IH) 2,8, 2,6, 2,1, 1,5 (alle multipletter, 9H). EKSEMPEL 14 4iilihYdroxy-2-gropylthigmethyl)_gyrldin "Red-al" [70% opløsning af natrium-bis(2-methoxyethyl)-20 aluminiumhydrid i benzen, 1,2 g, 1,1 ml, 5,86 mmol] afkøledes under nitrogen i et isbad. En opløsning af ethyl-2-(4-pyridylmethylthio)propionat i 10 ml tør tetrahydrofuran tilsattes dråbevis i løbet af 10 minutter, Herefter opvarmedes blandingen og kogtes svagt med tilbagesvaling 25 il time, hvorefter man omrørte ved stuetemperatur i omtrent 16 timer. Reaktionsblandingen udhældtes i 40 ml iskold IN HC1, og saltene fjernedes ved filtrering. Filtratet gjordes basisk med natriumbicarbonat, og produktet ekstraheredes over i ethylacetat (4 gange med 50 ml pr, 30 gang). De forenede ethylacetatekstrakter tørredes (ved

DK 152427B

32 vask med mættet natriumchlorid og herefter over vandfrit natriumsulfat), og der koncentreredes til opnåelse af 4-(l-hydroxy-2-propylthiomethyl)pyridin (olie; ca. 200 mg) .

pnmr/CDClg/TMS)7': 8,6 (d, 3H) 5 7,2 (d, bred, IH) 6,3 (m, 5H) 2,7 (d, 2H) 1,5 (d, 2H) m/e: Beregnet: 183 10 Fundet : 183, 152, 118, 92, 65.

ir (film) μ 3,1, 6,25, 7,1, 9,25, 12,25.

For yderligere at rense produktet opløstes det i chloroform, behandles med aktiv-carbon og koncentreredes til en olie (194 mg).

EKSEMPEL 15 15 iliizPiiÉDYiz^-hydroxye thyl thiome thyl )_gyr idin Råt methylphenyl(4-pyridylmethylthio)acetat (5 g, 0,018 mol) opløstes i 30 ml toluen og sattes dråbevis til 7,4 ml omrørt, kold "Red-al" (70% opløsning af natriumbis-(2-methoxyethoxy)aluminiumhydrid i benzen), der forud var 20 afkølet i et isbad. Efter at opskumningen var ophørt, opvarmedes reaktionsblandingen til stuetemperatur, og der omrørtes i omtrent 16 timer. For at isolere forbindelsen udhældtes reaktionsblandingen i cirka 60 ml kold IN saltsyre, de udfældede salte fjernedes ved filtrering, 25 og filtratet gjordes svagt basisk med natriumbicarbonat, bortdekanteredes fra de udfældede salte, og produktet ekstraheredes over i et stort overskud af toluen. De basiske salte ekstraheredes med varm ethylacetat. Toluenen og ethylacetat-ekstrakterne sloges sammen, der tørredes over

DK 152427B

33 vandfrit magnesiumsulfat og koncentreredes til en olie (2,05 g). Olien kromatograferedes på 110 g silicagel med 1:1 hexan:ethylacetat som elueringsmiddel. Fraktioner på omtrent 10 ml udtoges, og kromatografien fulgtes ved hjælp 5 af tyndtlagskromatografi (silicagel elueret med ethylacetat). Produktfraktionerne (der eluerede efter 3 bånd med urenheder) viste Rf på cirka 0,25 ved tyndtlagskromatografi. Produktfraktionerne sloges sammen og inddampedes, hvorved man fik methylpheny1(4-pyridylmethylthio)acetat (olie).

10 Analyse for C^H^NOS.0,25H20:

Beregnet: C 67,39 - H 6,21 - N 5,60 - m/e 245

Fundet : C 67,57 - H 6,30 - N 5,32 - m/e 245.

Andre massespektertoppe: 214, 316, 121, 103, 92, 91, 77 og 45.

15 Fremstilling af slutprodukter EKSEMPEL 16 4-j2-hydroxY-1-propylthiomethyl)pyridin

Under en nitrogenatmosfære opløstes 4-picolylthioacetone (9,10 g, 50 mmol) i 130 ml isopropanol under omrøring. Natriumborhydrid (0,76 g, 20 mmol, 1,6 ækvivalenter) til-20 sattes forsigtigt portionsvis. Der optrådte en ringe mængde skum. Reaktionsblandingen anbragtes under nitrogen og opvarmedes med tilbagesvaling i 1,5 timer. Reaktionsblandingen afkøledes, og der koncentreredes til en olie. Olien omrørtes, og der afkøledes i et isbad, og 150 ml 4N salt-25 syre tilsattes langsomt, således at skumningen kunne holdes under kontrol. Opløsningen omrørtes i yderligere 15 minutter, hvorefter den gjordes stærkt basisk ved tilsætning af 10N natriumhydroxid. Den dannede olie ved basetilsætningen ekstraheredes over i chloroform (e portioner på 250 ml 30 hver), idet man vaskede de forenede chloroformlag med na- 34

DK 152427B

triumhydroxid. Chloroformopløsningen blev tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet, hvorved man fik 4-(2-hydroxy-l-propylthiomethyl)pyridin (8,71 g; olie).

pnmr/CDCl3/TMS : 8,57 (m, 2H) 5 7,28 (m, 2H) 3,90 (sekstet, IH) pnmr/CDCl^/TMS/T: 3,87 (s, IH, bytter med D20) (forts.) 3,72 (s, 2H) 2,52 (d, 2H) 10 1/23 (d, 3H).

Hydrochloridsaltet opnåedes i form af en olie ved at opløse 0,367 g (2 mmol) af den frie base i 2 ml IN saltsyre (2 mmol) og afdampe opløsningsmidlet.

Dihydrogenphosphatsaltet fremstilledes ved at opløse 15 den frie base (5,00 g, 27,3 mmol) i 11,6 ml ethylacetat, afkøle opløsningen til 0°C og tilsætte 85,5% phosphorsyre (3,13 g, 27,3 mmol) i 11,6 ml ethylacetat. Saltet udfældedes som et gummiagtigt faststof. Der tilsattes methanol (100 ml), og blandingen opvarmedes til en klar opløsning, 20 hvorefter der koncentreredes til en olie, der udkrystalliserede ved henstand. Omkrystallisation med isopropyialkohol gav det rene dihydrogenphosphatsalt [3,78 g? smp.: 88-91°C].

ir (KBr): μ 2,95, 3,55, 6,10, 6,65.

pnmr/(CD3)2/TMS/r: 8,57 (m, 2H) 25 8,33 (s, 4H, bytter med D20) 3,80 (s, 2H) 3,77 (sekstet, IH) 2,44 (d, 2H) 1,10 (d, 3H).

DK 152427 B

35

Analyse for C^H^3N03,H3P04:

Beregnet: C 38,4 - H 5,7 - N 5,0 - m/e 183

Fundet : C 38,6 - H 5,3 - K 5,2 - m/e 183.

EKSEMPEL 17 åliål^YåiS^Ylå-^henylethylthiomethyl^g^Eidin 5 Under en nitrogenatmosfære opløstes a-(4-picolylthio)-acetophenon (852 mg, 3,5 mmol) i 8,75 ml isopropylalkohol.

Der tilsattes natriumborhydrid (54 mg, 1,4 mmol, 1,6 ækvivalenter) . Efter omrøring i en halv time ved stuetemperatur kogtes blandingen med tilbagesvaling i 1 time. Reaktions-10 blandingen afkøledes noget, hvorefter man inddampede til en olie. Under omrøring sattes saltsyre (4N, 10 ml) langsomt til olien, således at man kontrollerede opvarmningen og op-skumningen. Efter tilsætningen var afsluttet, sås ingen udvikling af gas, og den sure opløsning gjordes stærkt ba-15 sisk med 20% natriumhydroxid. Olien, der udfældede, eks-traheredes over i chloroform. Chloroformen vaskedes tilbage med fortyndet natriumhydroxid, der tørredes over vandfrit natriumsulfat og koncentreredes til en olie (0,87 g), der ved henstand krystalliserede til et voksagtigt fast 20 stof. Det faste stof tritureredes med ether, og filtreredes, hvorved man fik det rå produkt (0,61 g), Omkrystallisation med ethylacetat gav det rene 4-(2-hydroxy-2-phenylethylthiomethyl)pyridin [0,42 gj smp.: 116,5 - 119°C

(ukomplet).

25 ir (KBr): γ 3,17, 5,1-5,8, 6,22, 6,88, 9,49, 12,25, 13,88 og 14,25.

Massespektre: m/e Beregnet: 245

Fundet s 245.

DK 152427B

36 pnmr/CDCl3/TMS/6: 8,73-8,37 (m, 2H) 7,57-7,10 (m, 7H) 4,75 (t, IH) 3,63 (s, 2H) 5 3,10 (s, IH, bytter med D2O) 2,72 (d, 2H).

EKSEMPEL 18 4-^2-^4-methoxyghenyl)_-2-hydroxYethYlthiomethyl]_2yridin

Under en nitrogenatmosfære opløstes a-(4-picolylthio)-p-methoxyacetophenon (1,99 g, 7,3 mmol) i 25 ml ethanol 10 under omrøring. Natriumborhydrid (0,45 g, 11,7 mmol) tilsattes portionsvis, og blandingen kogtes forsigtigt med tilbagesvaling i 30 minutter. Blandingen afkøledes delvis, og der inddampedes til tørhed. Vand (50 ml) sattes til remanensen, der herefter gjordes sur med et overskud af 15 IN saltsyre. Den sure opløsning gjordes basisk med fast natriumbicarbonat, og produktet ekstraheredes over i ethyl-acetat. Ethylacetatopløsningen blev tørret over vandfrit natriumsulfat og koncentreret til en olie, der udkrystalise-rede ved henstand. Triturering med diethylether og filtre-20 ring gav det rene 4-[2-(4-methoxyphenyl)-2-hydroxyethylthio-ethyljpyridin (1,50 g; smp.: 70 - 72,5°C).

pnmr/CDCl3/TMS/r: 7,2 (d, 2H) 6.4 (s, 2H) 6.3 (IH, bytter med D2O) 25 6,2 (d, 3H) 5.3 (t, IH) 3,2 (bred dublet, 2H) 2,7 (d og s, 4H) 1.5 (d, 2H) 30 ir (KBr): μ 3,25, 6,25, 6,65, 8,05, 8,6, 12,5.

DK 152427B

37

Analyse for c15H17NO2S,0,25H20:

Beregnet: C 64,35 - H 6,12 - N 5,00

Fundet : C 64,34 - H 6,06 - N 4,95.

EKSEMPEL 19 5 Under en nitrogenatmosfære opløstes a-(4-picolylthio)- p-nitroacetophenon (0,45 g, 1,56 mmol) og natriumcyanborhydrid (0,10 g, 1,56 mmol) i 15 ml tør methanol, og der tilsattes et spor af bromcressolgrønt pH-indikator (blå ved 5,5, gul ved pH 3,8). Reaktionsblandingen var blågrøn. Meth-10 anolisk hydrogenchlorid tilsattes dråbevis, indtil reaktionsblandingen blev gul (pH omtrent 4). Der tilsattes små mængder methanolisk hydrogenchlorid, så snart reaktionsblandingen blev mørk, over en periode på 4 timer.

Herefter henstod reaktionsblandingen under omrøring i 15 yderligere 16 timer. Reaktionsblandingen koncentreredes til en' olie, der opløstes i 10 ml vand, hvorefter produktet ekstraheredes over i ethylacetat (3 x 20 ml). De samlede ethylacetatekstrakter blev vasket tilbage med mættet natriumbicarbonat (2 x 15 ml) og herefter med mættet 20 natriumchlorid, tørret over vandfrit natriumsulfat og inddampet, hvorved man fik 4-[2-hydroxy-2-(4-nitro-phenyl)ethylthiomethyllpyridin [0,347 g* smp.: 135 - 137°C].

ir (KBr) : yi 3,25, 6,25, 6,6, 735, 9,35, 11,75, 13,75.

25 pnmr/DMSO-dg/TMS/r: 7,2 (d, 2H) 6.5 (bred s, IH) 6,2 (2, 2H) 5,1 (t, IH) 2.6 (d, 2H) 30 2,3 (d, 2H) 38

DK 152427B

1.7 (d, 2H) 1.4 (d, 2H)

Analyse for

Beregnet: C 56,23 - H 5,05 - N 9,36 5 Pundet : C 56,50 - H 4,87 - N 9,50.

EKSEMPEL 20 ^lliz&Yå£25YzilB^§DYil2lE£2BYithiomethyl)_gyridin Under en nitrogenatmosfære opløstes ca - (4-picolylthio) -propiophenon (2,0 g, 7,8 mmol) under omrøring i 20 ml ethanol. Natriumborhydrid (0,48 g, 12,4 mmol) tilsattes 10 portionsvis i løbet af 10 minutter, hvorefter reaktionsblandingen kogte med sagte tilbagesvaling i en halv time.

Der afkøledes og inddampedes herefter til tørhed. Remanensen optoges i vand, den indstilledes til sur reaktion med IN saltsyre for at dekomponere overskud af borhydrid, 15 hvorefter man gjorde stærkt basisk med 20% natriumhydroxid, og forbindelsen ekstraheredes adkillige gange over i ethyl-acetat. De forenede ethylacetatekstrakter ekstraheredes atter med mættet natriumchlorid, der tørredes over vandfrit magnesiumsulfat og koncentreredes til en olie. Olien kro-20 matograferedes på 60 g silicagel med 1:1 hexanrethylace-tat som elueringsmiddel. De produktholdige fraktioner blev kombineret og inddampeb, hvorved man fik 4-(l-hydroxy-l-phenyl-2-propylthiomethyl)pyridin [1,45 g; olie].

25 pnmr/CDC^/TMS/r: 8,8 (d, 3H

7,0 (m, 2H, IH bytter med D20) 6.4 (s, 2H) 5.5 (g, IH) 2.7 (s, 5H) 30 2,7 (m, 2H) 1.5 (m, 2H)

DK 152427 B

39 ir (CHCI3): μ 3,25-3,5, 5,80, 6,25, 6,95, 8-8,25, 10,05.

Analyse for C^H^NOS:

Beregnet: C 69,48 - H 6,61 - N 5,40 - m/e 259 5 Fundet : C 69,00 - H 6,54 - N 5,14 - m/e 259.

EKSEMPEL 21 ^-^-h^drox^-^-methyl-l-progylthiomethyl^g^ridin

Under en nitrogenatmosfære opløstes 4-picolylthioacetone (2,0 g, 11 mmol) i 45 ml tør tetrahydrofuran og afkøledes til 0°c. En opløsning af methylmagnesiumbromid i ethyl-10 ether (3M, 4 ml, 12 mmol) tilsattes langsomt. Efter at tilsætningen var afsluttet, lod man reaktionsblandingens temperatur stige til stuetemperatur, hvorefter der omrør-tes i omtrent 64 timer. Der tilsattes mættet ammonium-chlorid (ca. 50 ml) til reaktionsblandingen, der heref-15 ter ekstraheredes med ethylacetat (4 x 50 ml). De forenede ekstrakter ekstraheredes med mættet natriumchlorid, tørredes over vandfrit magnesiumsulfat og inddampedes til en olie (1,5 g). Olien kromatograferedes på 90 g silica-gel med 19:1 chloroform:methanol som elueringsmiddel.

20 Efter et forløb på ca. 300 ml udtoges 15 ml fraktioner. Fraktionerne 18 - 25 blev kombineret og koncentreret, hvorved man fik 4-(2-hydroxy-2-methyl-l-propylthiomethyl)-pyridin [0,51 g; olie].

ir (film): μ 3,0, 3,35, 6,25, 7,05, 8,25, 8,70, 25 11,0, 12,25.

pnmr/CDCl^/TMS/T:: 8,6 (s, 6H) 7,3 (s, 2H) 7.1 (s, IH) 6.1 (s, 2H) 40

DK 152427 B

2.6 (d, 2H) 1,4 (d, 2H)

Analyse for C10H15NOS!

Beregnet: C 60,9 - H 7,7 - H 7,1 - m/e 197.

5 Fundet : C 60,5 - H 7,5 - N 7,5 - m/e 197.

EKSEMPEL 22 ^i&Ylz^-^^-gicolylthjjO^gro^ionat

Under en nitrogenatmosfære opløstes natriummethoxid (3,7 g, 68 mmol) i 45 ml methanol, og der afkøledes i et isbad.

4-picolylchlorid-hydrochlorid (5,0 g, 30 mmol) opslæmmet 10 i 7,5 ml methanol sattes langsomt til. Efter 10 minutters forløb tilsattes en opløsning af methyl-3-mercaptopropio-nat i 7,5 ml methanol i løbet af 10 minutter. Man lod reaktionsblandingens temperatur stige til stuetemperatur og omrørte ca. 16 timer. Reaktionsblandingen filtreredes, 15 og modervæsken koncentreredes til en olie. Olien kromato-graferedes på 250 g silicagel, idet man anvendte en kort, bred kolonne, hvor man eluerede med ethylacetat. De pro-duktholdige fraktioner blev kombineret, og ved inddampning fik man methyl-3-(4-picolylthio)propionat [63 g; olie].

20 pnmr/CDCl3/TMS/r: 7,4 (s, d, 4H) 6,3 (s, 5H) 2.7 (d, 2H) 1,6 (d, 2H) ir (film): μ 3,0, 3,5, 5,80, 6,25, 7,0, 7,15, 12,25.

25 Analyse for C10H13NO S,0,25H2O:

Beregnet: C 55,74 - H 6,27 - N 6,49 - m/e 211.

Fundet : C 55,87 - H 5,99 - N 6,59 - m/e 211.

DK 152427 B

41 !ll^ll}YdroxY£ro£YlthiomethYl)_2Y£idin

Under en nitrogenatmosfære afkøledes en omrørt "Red-al"-opløsning (2,04 ml, 10,4 mmol) til 0°C. En opløsning af methyl-3-(4-picolylthio)propionat i 10 ml tør tetrahydro-5 furan tilsattes langsomt. Reaktionsblandingen opvarmedes til stuetemperatur, og der omrørtes i 45 minutter. Reaktionsblandingen sattes langsomt til 25 ml kold IN HCl, hvorefter de faste stoffer fjernedes ved filtrering, og modervæsken ekstraheredes med fire 25 ml portioner ethyl-10 acetat. De forenede ekstrakter blev tørret over vandfrit natriumsulfat, filtreret og koncentreret, hvorved man fik 4-(3-hydroxypropylthiomethyl)pyridin [1,40 g; olie].

pnmr/CDCl3/TMS/2': 8,1 (g, 2H) 7.4 (t, 2H) 15 6,4 (t, 2H) 6,3 (d, 2H) 1.5 (d, 2H) ir (film): μ 3,1, 3,5, 6,25, 7,1, 9,5, 12,25.

Analyse for 20 Beregnet: C 58,98 - H 7,15 - N 7,64

Pundet : C 58,77 - H 7,11 - N 7,67.

EKSEMPEL· 23 4-(2-acetoxyethylthiomethyl)pyridin 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin (1,0 g) kogtes i 3 timer med tilbagesvaling med 10 ml eddikesyreanhydrid. Efter 25 henstand natten over ved stuetemperatur afdampedes eddike-syreanhydridet i vakuum, og remanensen fortyndedes med 10 ml vand, der indstilledes til basisk reaktion med na-triumbicarbonat, og produktet ekstraheredes over i chloroform (4 x 50 ml). Chloroformen behandledes med aktiv 30 carbon, der tørredes og koncentreredes til en olie (1,47 42

DK 152427 B

g). Olien kromatograferedes på 60 g silicagel med 5% methanol/chloroform som elueringsmiddel. Fraktioner, der kun indeholdt forbindelsen (Rf 0,6 på tyndtlags-silicågel-kromatografi elueret med 18:1 chloroformsmethannl) blev 5 kombineret og koncentreret, hvorved man fik 4-(2-aceto-xyethylthiomethyl)pyridin [300 mg olie].

pnmr/CDCl3/TMS/r: 7,9 (s, 3H) 7.3 (t, 2H) 6.3 (s, 2H) 10 5,8 (t, 2H) 2.7 (d, 2H) 1.4 (d, 2H) EKSEMPEL 24 iliål^sthoxyethylthiomethyl^pyridin

Natriumhydrid (170 mg, 7,1 mmol, ud fra 340 mg af en 50% 15 dispersion i olie vasket med hexan under nitrogen) op- slæmmedes i 5 ml tør tetrahydrofuran. En opløsning af 4-(2-hydroxyethylthiomethyl)pyridin (1,0 g, 5,9 mmol) i 10 ml tilsattes dråbevis i løbet af 5 minutter, og blandingen omrørtes i 5 minutter. Til slut tilsattes methyliodid (250 20 mg, 0,1 ml, 5,9 mmol) i 2 ml tetrahydrofuran, og blandingen omrørtes natten over. Reaktionsblandingen blev klaret ved filtrering og inddampet til en olie (omtrent 1,3 g), der kromatograferedes på silicagel med chloroform som elueringsmiddel. Rene fraktioner af produktet blev 25 kombineret og koncentreret, hvorved man fik 4-(2-meth-oxyethylthiomethyl)pyridin [210 mg olie].

m/e 183.

pnmr/CDCl3/TMS/r: 7,4 (t, 2H) 6.7 (s, 3H) 30 6,5 (t, 2H)

DK 152427B

43 6.3 (s, 2H) 2,7 (d, 2H) 1.4 (d, 2H).

Fremstilling af udgangsforbindelser PRÆPARATION 1 4—gxcolYlisothiouririiuinclilori^—h^d[jroc|ilor;id 5 Thiourinstof (11,42 g, 0,15 mol) opslæmmedes under omrøring i 45 ml absolut ethanol. Suspensionen opvarmedes til tilbagesvaling under nitrogen, og en suspension af fint fordelt 4-picolylchlorid-hydrochlorid (25,37 g, 0,15 mol) i ca. 100 ml absolut ethanol tilsattes i løbet af 15 minut-10 ter, idet man fjernede varme udefra for at undgå for kraftig kogning med tilbagesvaling. Efter 6 timers yderligere tilbagesvaling afkølede man reaktionsblandingen til stuetemperatur og filtrerede, der vaskedes med kold ethanol, hvorved man fik 4-picolylisothiouroniumchlorid-hydrochlo-15 rid.[35,8 g; smp.: 226-227°C (dek.)].

ir (KBr): μ 3,40, 6,05, 6,14, 6,27, 6,71 og 12,34.

Analyse for C7HgN3S,2HCl:

Beregnet: C 35,01 - H 4,62 - N 17,50

Fundet : C 35,04 - H 4,61 - N 17,55.

PRÆPARATION 2 20 4-gicolylmercaptan 4-picolylisothiouroniumchlorid-hydrochlorid (32,4 g, 0,135 mol) opløstes i 45 ml vand under omrøring, og en varm opløsning af natriumhydroxid (11,02 g, 0,27 mol) i 18 ml vand tilsattes dråbevis i løbet af ca. 10 minutter, under 25 hvilken periode der begyndte at dannes oliedråber. Man 44

DK 152427 B

lod den mildt exotherme reaktion fortsætte og omrørte i ca.

30 minutter, hvorefter pH-værdien forøgedes fra 7 til 8 ved tilsætning af natrium. pH sænkedes herefter til 6 ved langsom tilsætning af 6N saltsyre. Det olieagtige 5 produkt ekstraheredes over i ether (325 ml portioner).

De forenede etherekstrakter tørredes over vandfrit natriumsulfat, og der inddampedes til en olie, der indeholdt faste stoffer, med en kraftig mercaptanlugt (11,18 g). Fraktioneret destillation gav det rene 4-picolylmercaptan (4,47 g, 10 kogepunkt 109-104°C/15 mm; tyndtlagskromatografi på silica-gel: Rf 0,65 - 0,7, når der elueredes med 4CHC13/1CH30H).

Denne mercaptan dannede let et fast disulfid, når den kom i kontakt med luften.

PRÆPARATION_3 15 4-picolin-N-oxid (250 g) opløstes i en blanding af 2,5 1 eddikesyre og 425 ml eddikesyreanhydrid. Opløsningen opvarmedes langsomt med tilbagesvaling, og man kogte med tilbagesvaling i ca. 22 timer. Herefter fjernedes eddikesyren fra blandingen ved stripning, og eddikesyreanhydrid og den 20 tilbageblevne olie vakuumdestilleredes, idet man anvendte en ca. 15 cm fraktioneringskolonne. Det materiale, der kogte ved en kolbetemperatur på 100°C og en toptemperatur på 82°C ved 1,2 mm Hg, blev kombineret, hvilket gav 305,9 g af en 87:13 blanding af 4-picolylacetat og 3-acetoxy-4-picolin.

PRÆPARATION 4 4-picolylacetat (300 g, 87% ren) tilsattes 3,0 1 48% hy-drogenbromidsyre. Der skete en exotherm proces spontant, og temperaturen steg fra 26 til 42°C. Blandingen opvarmedes til tilbagesvaling, og man kogte med tilbagesvaling i 30 ca. 1 time (kolbetemperatur 124°C). Herefter koncentre-

Claims (2)

1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af 4-thiomethyl-pyridinforbindelser med den almene formel: /^ycVS-Y-0R (I) 10 hvori Y betyder o-phenylen, propylen, ethylen (usubstitu-eret eller substitueret med indtil 2 methylgrupper og indtil 1 phenylgruppe), -CH2CH- eller -CE^-CH-, hvori X ch2oh X betyder nitro eller methoxy, og R betyder hydrogen, methyl, C2_5alkanoyl eller benzoyl, 15 idet (i) Y ikke kan være propylen, når R er methyl/ og (ii) R er hydrogen, når Y er -CH2-CH- , eller farmaceu- ch2oh tisk acceptable salte deraf, kendetegnet ved, at (a) en forbindelse med formlen: 2 DK 152427 B omsættes med en forbindelse med formlen z -Y-OR, hvori Y og R har den ovenstående betydning, og en af Z og Z betyder halogen, og den anden SH, idet z1 er halogen, 2 og Z er SH, når Y er o-phenylen, eller 5 (b) en forbindelse med formlen: N CH2-S-W-C^z hvori W betyder methylen, som eventuelt er substitueret med en eller to methylgrupper og/eller en phenylgruppe, og Z betyder C-^alkoxy, hydrogen, methyl, phenyl, p-me-thoxyphenyl eller p-nitrophenyl, idet W ikke kan være sub-10 stitueret med phenyl, når Z er phenyl, W højst kan være substitueret med én methylgruppe, når z er methyl, og W er usubstitueret, når z er p-methoxyphenyl eller p-nitro-phenyl, reduceres med et hydrid til dannelse af en forbindelse med formlen (I), hvori Y er ethylen (usubsti-15 tueret eller substitueret med indtil 2 methylgrupper og indtil 1 phenylgruppe) eller -CH--CH-, hvor X er nit ro 0 x eller methoxy, og R er H, eller (c) en forbindelse med formlen: DK 152427 B hvori W har den ovenstående betydning, og Q betyder hydrogen, methyl, phenyl, p-methoxyphenyl eller Cj^alkoxy, idet W ikke kan være substitueret med phenyl, når Q er phenyl, W højst kan være substitueret med én methylgruppe, 5 når Q er methyl, W ikke kan være substitueret med methyl, når Q er C^_4alkoxy, og W er usubstitueret, når Q er p-me-thoxyphenyl, omsættes med et methylmagnesiumhalogenid, phe-nylmagnesiumhalogenid eller p-methoxyphenylmagnesiumhaloge-nid, hvori halogenidet er chlorid, bromid eller iodid, 10 til dannelse af en forbindelse med formlen (I), hvori Y er ethylen (usubstitueret eller substitueret med indtil 2 methylgrupper og indtil 1 phenylgruppe) eller CH2-CH-, og R er H, 0 och 3 hvorefter, om ønsket, en ved a)-c) dannet forbindelse 15 med formlen (I), hvori R er H, alkyleres eller acyleres til dannelse af den tilsvarende forbindelse, hvori R er methyl, C2_,-alkanoyl eller benzoyl, og/eller den dannede forbindelse omdannes til et farmaceutisk acceptabelt syreadditionssalt deraf.

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der fremstilles en forbindelse med formlen: /~v N 7- CH„-S-CH0CH0OH \«y 2 2 2