CN115060722A - 一种红禾麻药材的质量评价方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药材质量控制技术领域,特别涉及一种红禾麻药材的质量评价方法,所述红禾麻药材为珠芽艾麻、大蝎子草;所述质量评价包括药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别,以及对干品中水分含量、总灰分含量和浸出物含量检测;本发明方法科学合理、准确率高、稳定性强、鉴别成本低、鉴别时间短的优点。本发明针对珠芽艾麻和大蝎子草存在表观形态的不同,但同属于红禾麻且具有相同功效,为了保证用药效果,扩大药材来源,建立了一套稳定性强、经济、准确、全面的质量评价方法,在现有技术上新增了显微鉴别和薄色谱鉴别,提高了药材质量标准的可控性,确保药材相关产品的内在质量和疗效,对保证患者用药安全和治疗效果多个方面意义重大。
Description
技术领域
本发明属于中药材质量控制技术领域,特别涉及一种红禾麻药材的质量评价方法。
背景技术
红禾麻为荨麻科植物珠芽艾麻Laporteabulbifera(Sieb.etZucc.)Wedd.、大蝎子草Girardiniadiversifolia(Link)Friis的干燥全草。春、夏、秋三季采收,除去泥沙,趁鲜切段,鲜用或晒干。
红禾麻为贵州省等少数民族习用药物,使用历史悠久,其具有祛风除湿、活血化瘀的功效,常用于治疗类风湿关节炎、风湿关节痛、坐骨神经痛、骨折、肾炎等,也是润燥止痒胶囊等产品的主要原料。2003版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中仅收载了珠芽艾麻一个种,而贵州民间称呼“红禾麻”的原植物有两个种和一个变种分别是荨麻科艾麻属植物珠芽艾麻以及蝎子草属大蝎子草和蝎子草属蝎子草的变种红火麻,这为红禾麻药材来源增加了方向,并且珠芽艾麻为多年生草本,花期6~8月,果期8~12月,生于海拔1400~1840m的山林下或林边,而大蝎子草为多年生高大草本,生于海拔500m~1400m山谷、林边、水沟旁湿地,花期9月~10月,果期10月~11月,花期短,分布较广,这扩宽了红禾麻药材的来源,但由于大蝎子草的形态变异较大,这促使了急需建议一套完善的红禾麻药材质量评价方法。
目前,中药传统的质量评价方法包括性状、色泽、气味等等,一方面由于受到主观性影响而使得精度偏低,另一方面未深入探究生药、干品差异,进而使得评价体系不全面,进而影响用药效果和用药方向;同时,目前关于红禾麻质量评价、质量检测的文献报道鲜少,这也极大阻碍了该药材的深入研究与应用发展。
发明内容
本发明针对现有技术的不足,提出了一种红禾麻药材的质量评价方法,本发明中质量评价方法亦指检测方法,旨在用于控制红禾麻药材的质量。
具体是通过以下技术方案来实现的:
一种红禾麻药材的质量评价方法,所述红禾麻药材为荨麻科艾麻属植物珠芽艾麻\蝎子草属大蝎子草;所述质量评价包括药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别,以及对干品中水分含量、总灰分含量和浸出物含量检测;
所述水分含量检测照《中国药典》2020年版四部水分测定法(0832)中的第二法(烘干法);
所述总灰分含量检测照《中国药典》2020年版四部灰分测定法(2302);
所述浸出物含量检测照《中国药典》现行版2020年版浸出物测定法(2201)中醇溶性浸出物测定法项下的热浸法;
所述性状鉴别:
①大蝎子草:全草长0.5m~3m,切段后长10~30cm;茎下部常木质化,茎具5棱,生刺毛和细糙毛或伸展的柔毛,多分枝;叶皱缩,展平后轮廓五角形,分枝上的叶较小,长、宽为8cm~25cm,基部浅心形或近截形,掌状3~7深裂,边缘有粗锯齿,两面均有毛;叶柄长3cm~15cm;托叶长圆状卵形;气微,味苦;
②珠芽艾麻:根略呈纺锤状或细长圆锥状,多弯曲,表面棕褐色或灰棕色,具纵皱纹;质硬而脆,易折断,粉性强,可见纤维,淡红褐色;茎平滑或具短毛及少数螫毛,高18~40cm,切段后长10~30cm;叶狭卵形或卵形,先端渐尖,基部宽楔形或圆形,边缘具钝锯齿、圆齿或尖齿,两面疏生短毛和螫毛,常以脉上较密,具柄;叶腋常生1~4个珠芽;雌花序圆锥形生上部叶腋,无总梗,花被4~5,雄蕊4~5,退化子房杯状;雌花序近顶生,具总梗,花序轴及总梗密生短毛及螫毛,花被片4,内侧2枚花后增大;瘦果歪卵形,扁平,长2~3mm;气微,味微苦;
所述显微鉴别:
①大蝎子草粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
②珠芽艾麻粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;单细胞非腺毛多碎断;
所述薄层鉴别包括如下步骤:
(1)取供试品粉末1.5-2.0g,加乙醇25ml,超声处理20-30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,即得供试品溶液;
(2)取β-谷甾醇为对照品,甲醇为溶剂,制成每1ml含0.5mg对照品的溶液,即得对照品溶液;
(3)分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一薄层色谱板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,判定供试品中含有红禾麻。
所述红禾麻干燥品的水分含量≤13.0%,总灰分含量≤15.0%,浸出物含量≥12.5%。
所述浸出物含量检测中选用乙醇为浸出溶剂。
进一步优选,所述浸出物含量检测中选用质量浓度50%的乙醇为浸出溶剂。
步骤(1)中所述乙醇的质量浓度为70%。
步骤(1)中所述超声处理的工艺条件为:功率500W,时间20-30min。
步骤(3)中所述展开剂选择石油醚-乙酸乙酯为10:4。
所述石油醚的温度为90-120℃。
有益效果:
本发明针对珠芽艾麻和大蝎子草存在表观形态的不同,但同属于红禾麻且具有相同功效,为了保证用药效果,扩大药材来源,建议了一套稳定性强、经济、准确、全面的质量评价方法,弥补了现有技术关于红禾麻原料药质量控制的空白。
本发明在《贵州省中药材、民族药材质量标准》DB52/YC269-2003版“红禾麻”质量标准的基础上新增了显微鉴别和薄色谱鉴别,提高了药材质量标准的可控性,确保药材相关产品的内在质量和疗效,对保证患者用药安全和治疗效果多个方面意义重大。
本发明的薄层色谱鉴别的适应性、专属性、重现性、耐用性好,且不受展开温湿度、饱和时间等因素影响,所用薄层色谱板无需活化,极大降低了薄层鉴别的条件限制。
附图说明
图1:大蝎子草粉末的导管显微特征图;左图为螺纹,中图为具缘纹孔,右图为梯纹;
图2:珠芽艾麻粉末的导管显微特征图;左图为螺纹,中图为具缘纹孔,右图为梯纹;
图3:提取溶剂及提取方法筛选考察色谱图,其中1为供试品溶液红①,2为供试品溶液红②,3为供试品溶液红③,4为供试品溶液红④,5和6为β-谷甾醇对照品;
图4:提取溶剂及提取方法筛选考察色谱图,其中1为供试品溶液大①,2为供试品溶液大②,3为供试品溶液大③,5为供试品溶液大④,4和6为β-谷甾醇对照品。
图5:珠芽艾麻样品的薄层色谱图,其中,1-珠芽艾麻3号,2-珠芽艾麻4号,4-珠芽艾麻5号,3和5为β-谷甾醇对照品;
图6:大蝎子草样品的薄层色谱图,其中1-大蝎子草3号,2-大蝎子草4号,4-大蝎子草5号,3和5为β-谷甾醇对照品;
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明,但本发明并不局限于这些实施方式,任何在本实施例基本精神上的改进或代替,仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实验例1红禾麻药材性状检查项目的研究
1.性状研究
考虑到红禾麻为润燥止痒胶囊等产品的主要原料,为了进一步控制药材质量,确保药材来源,本发明前期进行民间走访和对其资源的调查、原植物鉴定,对民间称呼的“红禾麻”的原植物两个种进行了采集和性状观察与总结,为了避免产地土壤环境、气候特征等对红禾麻的性状、形态带来的差异性的,我们收集了来自贵州毕节、六盘水、黔东南州、铜仁地区、贵阳、修文等贵州多地和东北、华北、中南、陕西、甘肃等多省珠芽艾麻,以及毕节、大方、遵义县、龙里县、雷山县、修文等贵州多地和湖北西部、四川西南部、云南多省的大蝎子草进行性状观察,根据对药材样品的实际观察,通过对采集的药材样品除去杂质后晒干,对药材样品的大小、形状、颜色、质地、断面特征进行对比观察和描述,具体性状如下:
大蝎子草:全草长0.5m~3m,切段后长10~30cm;茎下部常木质化,茎具5棱,生刺毛和细糙毛或伸展柔毛,多分枝;叶皱缩,展平后轮廓五角形,分枝上的叶较小,长和宽为8cm~25cm,基部浅心形或近截形,掌状3~7深裂,边缘有粗锯齿,两面均有毛;叶柄长3cm~15cm;托叶长圆状卵形;气微,味苦;
珠芽艾麻:根略呈纺锤状或细长圆锥状,多弯曲,表面棕褐色或灰棕色,具纵皱纹;质硬而脆,易折断,粉性强,可见纤维,淡红褐色;茎平滑或具短毛及少数螫毛,高18~40cm,切段后长10~30cm;叶狭卵形或卵形,先端渐尖,基部宽楔形或圆形,边缘具钝锯齿、圆齿或尖齿,两面疏生短毛和螫毛,常以脉上较密,具柄;叶腋常生1~4个珠芽;雌花序圆锥形生上部叶腋,无总梗,花被4~5,雄蕊4~5,退化子房杯状;雌花序近顶生,具总梗,花序轴及总梗密生短毛及螫毛,花被片4,内侧2枚花后增大;瘦果歪卵形,扁平,长2~3mm;气微,味微苦。
2.药材的水分、灰分、浸出物的测定
为了更好地控制药材质量,本发明通过对不同产地、批次的药材进行水分、灰分和浸出物测定,具体如下:
2.1.试验材料
表1红禾麻样品来源
2.2试验材料检测:
2.2.1水分:按《中国药典》2020年版四部水分测定法(通则0832第二法)进行测定,见表2:
表2不同来源的多批红禾麻干燥品水分测定数据
结果显示:高、低水分量分别为12.26%和9.88%,考虑到复杂的气候状况对药材水分波动大的影响,确定红禾麻干燥品水分≤13.0%。
2.2.2总灰分:在现有标准基础上增加总灰分检测,采用《中国药典》2020年版四部通则2302灰分测定法,测定数据见表3;
表3不同来源的多批红禾麻干燥品灰分测定数据
结果:确定了红禾麻总灰分限度不得过15.0%。
2.2.3浸出物:采用《中国药典》2020年版四部通则2201中水溶性浸出物测定法项的下冷浸法及热浸法进行浸出溶剂筛选试验,分别以水、70%的乙醇、甲醇作浸出溶剂;检测结果见表4;
表4红禾麻干燥品浸出溶剂及浸出方法筛选检测数据
结果显示:以水作溶剂的浸出物含量最高,且热浸法浸出物含量高于冷浸法,所以初步选择热浸法作浸出方法,水为浸出溶剂来进行多批次的验证,验证结果见表5;
表5不同来源的多批次红禾麻干品浸出物测定数据
验证结果:水作浸出溶剂存在过滤困难,不易操作的缺陷,所以根据表3中不同溶剂筛选结果比较,另选用乙醇作浸出溶剂,热浸法为测定方法,并对浸出溶剂的醇浓度进行考察,考察结果见表6;
表6红禾麻干燥品乙醇浓度筛选浸出物检测数据
结果:以热浸法作浸出方法,选用50%乙醇作浸出溶剂时,珠芽艾蔴、大蝎子草的浸出物含量最高,且样品易过滤,操作方便,所以,最终优选50%乙醇作为浸出溶剂,以热浸法为浸出方法,再次进行多批次验证,并积累浸出物测定数据,测定结果见表7;
表7不同来源的多批次红禾麻干品浸出物测定数据
结果:以50%乙醇为溶剂,大蝎子草浸出物测定结果在11.92~24.59%之间,平均值为15.58%;珠芽艾麻浸出物测定结果在11.58~20.71%之间,平均值为16.37%;拟定药材浸出物不得低于12.5%。
实验例2红禾麻药材显微鉴别和薄层色谱鉴别
取实验例1中表1试材经除杂、晒干、粉磨后制成粉末,进行显微特征和薄层色谱鉴别,以提高珠芽艾麻的检测精准度:
1.显微鉴别结果
大蝎子草1-5号样:粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹(见图1);纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
珠芽艾麻1-5号样:粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹(见图2);单细胞非腺毛多碎断。
2.薄层色谱鉴别
试剂试药与实验仪器:三氯甲烷、乙酸乙酯、甲酸、乙醇、甲醇、三氯化铝、羧甲基纤维素钠、丙酮、甲苯、石油醚、硫酸等均为分析纯;β-谷甾醇对照品(批号110851--201608)、儿茶素对照品(批号110877-201604)、表儿茶素(批号110878-200102)、滨蒿内酯(批号111511-201403)、异鼠李素-3-0-新橙皮苷(批号111571-201205)均购自中国食品药品检定研究院;自制硅胶G薄层板(层析硅胶G粉:批号0151008,200目,青岛海洋化工有限公司分厂制造),硅胶G薄层板(青岛海浪硅胶干燥剂有限公司,批号20140820),硅胶G高效板(批号20170831)、硅胶G薄层板(批号20170720)均购自青岛海洋化工厂有限公司。智能暗箱式三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司),照相机:Soudelor牌CANON型数码相机;电吹风:康明牌CY800;东莨菪内酯(批号110768-202105、)、芹菜素(批号111901-202004)山奈酚(110861-202013)购自中国食品药品检定研究院。
样品:药材标本来源见表8;
表8
2.1珠牙艾麻薄层色谱鉴别方法学验证
目前了解到红禾麻中含有异鼠李素-3-0-新橙皮苷、儿茶素、表儿茶素、滨蒿内酯及B-谷甾醇成分,分别以前述成分为对照品,采用实施例1中薄层色谱鉴别方法对珠芽艾麻1号至5号进行薄层鉴别前期预试验,最终确认β-谷甾醇作为指标性成分,并对其的提取、展开、点样量、重现性及耐用性等进行方法学验证:
2.1.2浸出溶剂及浸出方法的考察
在前期试验中我方发现用甲醇提取未得到指标性成分,用70%乙醇超声提取及提取后用乙酸乙酯或正丁醇萃取、或上D101大孔树脂柱制备的供试品溶液均能检测出β-谷甾醇,因此,我方进行了重复验证,以选择出优益的浸出溶剂和方法:
(1)采用70%乙醇超声提取
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样约1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理30分钟,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液红①;
(2)采用50%乙醇超声提取乙酸乙酯萃取
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样约1.5g,置具塞锥形瓶中,加50%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理30分钟,滤过,滤液置水浴上挥至无醇味,转移到分液漏斗中,并加水10ml洗涤,洗液一并倒入分液漏斗中,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20ml,合并乙酸乙酯液,置水浴上挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液红②;
(3)采用70%乙醇超声提取正丁醇萃取
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样约1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理30分钟,滤过,滤液置水浴上挥至无醇味,转移到分液漏斗中,并加水10ml洗涤,洗液一并倒入分液漏斗中,用水饱和的正丁醇萃取2次,每次20ml,合并正丁醇液,置水浴上挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液红③;
(4)采用70%乙醇提取后上大孔树脂柱后用70%乙醇洗脱
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样约1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理30分钟,滤过,滤液置水浴上挥至无醇味,转移到玻璃层析柱中,加水5ml洗涤容器,洗液一并转移到玻璃层析柱中,打开柱阀门,弃去水液层后,加入70%乙醇50ml洗脱,洗脱液挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液红④;所述玻璃层析柱为用70%乙醇浸泡D101大孔吸附树脂装柱,2g,内径1.5~2g;
(5)对照品溶液制备:取β-谷甾醇对照品适量,加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
(6)薄层鉴别方法:分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,可见光下检视;所述展开温度为20℃,相对湿度为50%;
结果见图3,可知供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上均显相同颜色的斑点,且70%乙醇超声提取、70%乙醇回流提取后用正醇萃取制备的供试品斑点最明显清晰,上D101大孔树脂柱制备的供试品溶液斑点不如前述两种方法制备的供试品溶液斑点明显,50%乙醇提取后用乙酸乙酯萃取制备的供试品溶液几乎无斑点显示,因此选择用70%乙醇超声提取的制备方法制作供试品溶液。
2.1.2提取时间的选择
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样约1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理10min、20min、30min分钟,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;对照品溶液的制作照本实验例3.1;分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(20℃,相对湿度58%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果:可见光下检视,上述三个供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上均显明显相同颜色的斑点;Rf值适中,但考虑到10min的提取时间太短,所以选择了20min、30min进行重复验证,重复验证后确认提取时间为20-30min。
2.1.3样品称样量的选择
称取粉碎过3号筛的珠芽艾麻5号样分别约0.5g、1.0g、1.5g,2.0g,置具塞锥形瓶中,加70%乙醇25ml,密塞,500W下超声处理30min,滤过,滤液置水浴上挥干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;对照品溶液的制作照本实验例3.1;分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(20℃,相对湿度58%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,可见光下检视;
结果:上述四个称样量的供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上,均显相同颜色的斑点,Rf值适中,但1.5g、2.0g斑点更加明显,样品分离良好。
2.1.4显色剂的确定
根据β-谷甾醇的化学性质,选则10%硫酸乙醇为显色剂。
2.1.5展开***的筛选考察
取珠芽艾麻5号样照本实验例“2.1.2中(1)”的方法制成供试品溶液①至④;另取β-谷甾醇、儿茶素、表儿茶素、滨蒿内酯对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作对照品溶液①至④;分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,分别采用几种不同的展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;展开剂如下:
(1)展开剂1:甲苯-乙酸乙酯-甲酸(3:7:0.5);
(2)展开剂2:石油醚-丙酮(10:3);
(3)展开剂3:丙酮-水(1:2);
(4)展开剂4:三氯甲烷-乙酸乙酯(10:3);
(5)展开剂5:石油醚-乙酸乙酯(10:4);
结果:
采用展开剂1的实验结果:只有β-谷甾醇与供试品溶液红①、③、④对应位置有近相同颜色的斑点,但斑点靠近溶剂前沿,分离不太好,而儿茶素、表儿茶素、滨蒿内酯三个对照品在与供试品色谱相对应位置均未观察到相同颜色的斑点显示,所以放弃选用;
采用展开剂2的实验结果:分离度和Rf值符合分析要求,但展开剂不稳定,导致出现Rf值越来越小的情况,所以放弃选择;
采用展开剂3的实验结果:供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上均未观察到相同颜色的斑点显示,所以放弃选用;
采用展开剂4的的分析结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相对应位置上,均显相同颜色的斑点,且斑点明显清晰,分离良好,Rf值稳定适中;
采用展开剂5的实验结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相对应的位置上均显相同颜色的斑点,且斑点明显清晰,分离良好,Rf值稳定适中,且与三氯甲烷-乙酸乙酯(10:3)展开***相比,其毒性较低,环保性更佳;
2.1.6对照品溶液及供试品溶液点样量的考察
(1)对照品β-谷甾醇的点样量筛选考察
分别吸取β-谷甾醇对照品溶液3μl、5μl、7μl、10μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(21℃,相对湿度55%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,可见光下检视;
结果:对照品点样量5μl、7μl的斑点大小适中圆整,并且选择了对照品点样量5μl和7μl进行重复验证试验,仍显示出斑点大小适中圆整,所以选择对照品点样量为5-7μl;
(2)供试品的点样量筛选考察
取珠芽艾麻5号样供试品溶液各2μl、3μl、5μl、7μl、10μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(24℃,相对湿度59%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果:可见光下检视,供试品色谱中,2μl、3μl、5μl、7μl、10μl供试品点样量在与β-谷甾醇对照品相对应位置均显相同颜色的斑点,但5μl、7μl、10μl斑点更为明显清晰,但点10μl时观察到有过载现像,所以确定供试品的最佳点样量为5μl~7μl;
2.1.7石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)***重现性
取3批不同产地和不同批次的珠芽艾麻照本实验例“2.1.1中(1)”的方法制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(20℃,相对湿度70%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,说明重现性良好;
2.1.8专属性
照本实验例“2.1.1中(1)”的方法制备供试品溶液,吸取供试品溶液、甲醇溶液及对照溶液各5μl~7μl分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(24℃,相对湿度57%),取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,甲醇溶液无干扰和无斑点,故专属性良好。
2.1.9耐用性考察
取珠芽艾麻5号样,照本实验例“2.1.1中(1)”制备供试品溶液,照本实验例“2.1.1中(5)”制备对照品溶液;
(1)硅胶G薄层板活化与未活化的考察
吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一硅胶G薄层板上,分别用青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板进行活化和未活化的薄层鉴别对比试验,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(23℃,相对湿度65%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果:在可见光下检视,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上分别均显相同颜色的斑点,且活化和未活化的薄层板,供试品和对照品斑点均很明显清晰,位置对应,分离良好,Rf值适中,说明活化与未活化对珠芽艾麻的薄层试验结果无明显影响;
(2)饱和时间的考察
吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,分别饱和0分钟、5分钟、10分钟,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,也无任何斑点干扰,说明饱和时间对薄层试验结果无明显影响;
(3)不同厂家生产的薄层板的比较
吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于青岛海洋化工生产硅胶G薄层板及高效硅胶G板、青岛海浪化工生产的硅胶G薄层板、自制硅胶G薄层板进行薄层鉴别对比考察试验,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,四种薄层板均显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,说明四种薄层板薄对结果均无明显差异,说明此方法的耐用性较好。
(4)温度影响的考察
分别吸取供试品溶液和对照溶液各5μl~7μl,点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,分别于4.9℃、25℃、30℃展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品与对照品斑点均明显清晰,分离良好,符合要求,Rf值适中,表明温度对分析基本无影响;
(5)湿度影响的考察
别吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,湿度分别为32%、58%、88%,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果表明,供试品与对照品斑点均明显清晰,分离良好,符合要求,Rf值适中,表明湿度对鉴别方法基本无影响。
(6)耐用性考察结果
经上述耐用性考察试验,在不同条件下进行薄层色谱分析实验,供试品在与对照品相应位置上,斑点清晰,分离度符合要求,Rf值适中,说明本方法耐用性良好;
2.1.10***适应性考察
照本实验例“2.1.2中(1)”的方法制备供试品溶液,吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板及高效硅胶G板、硅胶H薄层板、硅胶GF254薄层板进行薄层鉴别对比考察试验,以石油醚(90~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,四种类型的薄层板均显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,说明四种薄层板薄层试验对结果均无明显差异,说明***适应性良好。
2.2大蝎子草薄层色谱鉴别方法学验证
目前了解到红禾麻中含有东莨宕内酯、滨蒿内酯、山奈酚、芹菜素、β-谷甾醇成分,分别以前述成分为对照品,采用实施例1中薄层色谱鉴别方法对大蝎子草1号至5号进行薄层鉴别前期预试验,最终确认β-谷甾醇作为指标性成分,并对其的提取、展开、点样量、重现性及耐用性等进行方法学验证:
2.2.1浸出溶剂及浸出方法的考察
供试品溶液大①:将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,其他同本实验例“2.1.1中(1)”;
供试品溶液大②:将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,其他同本实验例“2.1.1中(2)”;
供试品溶液大③:将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,其他同本实验例“2.1.1中(3)”;
供试品溶液大④:将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,其他同本实验例“2.1.1中(4)”;
对照品溶液制备通本实验例“2.1.1中(5)”;
薄层鉴别方法:分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,可见光下检视;所述展开温度为17℃,相对湿度为66%;
结果见图4,可知供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上均显相同颜色的斑点,且70%乙醇超声提取、70%乙醇提取后用正醇萃取制备的供试品斑点最明显清晰,上D101大孔树脂柱制备的供试品溶液斑点不如上述两种方法制备的供试品溶液斑点明显,50%乙醇提取后用乙酸乙酯萃取制备的供试品溶液几乎无斑点显示,因此,直接选用超声提取的方法作为供试品的制备方法,选择毒性较低的70%的乙醇作为提取溶剂。
2.2.2提取时间的选择
将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,展开温度为17℃,相对湿度为66%,其他与本实验例“2.1.2”相同;
结果:不同提取时间的供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上均显明显相同颜色的斑点,Rf值适中,但考虑到10nin钟的提取时间太短,所以选择了30min进行重复验证,重复验证结果显示供试品与对照品在对应位置显示出明显相同颜色的斑点。
2.2.3样品称样量的选择
将珠芽艾麻替换为大蝎子草5号样,展开温度为17℃,相对湿度为66%,其他与本实验例“2.1.3”相同;
结果:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相应位置上,均显相同颜色的斑点,Rf值也适中,但1.5g,2.0g斑点更加明显。
2.2.4显色剂的确定
同本实验例“2.1.4”。
2.2.5展开***的筛选考察
取干燥切制好的大蝎子草5号样适量,参照本试验例的“3.1”制成供试品溶液大①至④;另取β-谷甾醇、滨蒿内酯、东莨菪内酯、芹菜素、山奈酚对照品加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液,作为多个对照品溶液;分别吸取上述对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,分别采用几种不同的展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;展开剂分别为:
(1)展开剂1:正已烷-乙酸乙酯-甲酸(7.5:5:0.8);
(2)展开剂2:三氯甲烷-乙酸乙酯(10:3);
(3)展开剂3:石油醚-乙酸乙酯(10:4);
结果:
采用展开剂1的实验结果表明:可见光下检视,只有β-谷甾醇与供试品溶液大①、②、③、④对应位置有近相同颜色的斑点,但斑点靠近溶剂前沿,分离不太好,其余四个对照品在与供试品色谱相对应位置均未观察到相同颜色的斑点显示;紫外灯下检视,供试品色谱中,在与对照品东莨菪内酯对照品相应位置上,均观察到相同颜色的荧光斑点,但东莨菪内酯与滨蒿内酯Rf值很接近;存在一定的干扰,所以放弃选用;
采用展开剂2的实验结果表明:可见光下检视,除2号样品外,其他供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品相对应位置上均显相同颜色的斑点,且斑点明显清晰,分离良好,Rf值稳定适中;
采用展开剂3的实验结果表明:可见光下检视,在与β-谷甾醇对照品相对应的位置上,均显相同颜色的斑点,且斑点明显清晰,Rf值稳定适中;
最终考虑到展开剂毒性问题等,选择石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂。
2.2.6对照品溶液及供试品溶液点样量的考察
(1)对照品β-谷甾醇的点样量筛选考察
分别吸取对照品溶液2μl、3μl、5μl、7μl、10μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(温度16℃,相对湿度72%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,可见光下检视;
结果:对照品点样量5μl、7μl的斑点大小适中圆整,并且选择了对照品点样量5μl和7μl进行重复验证试验,仍显示出斑点大小适中圆整,所以选择对照品点样量为5-7μl;
(2)供试品的点样量筛选考察
分别吸取大蝎子草5号样供试品溶液各2μl、3μl、5μl、7μl、10μl,点于同一硅胶G薄层板上,其他操作同5.1;
结果:供试品色谱中,2μl、3μl、5μl、7μl、10μl供试品点样量在与β-谷甾醇对照品相对应位置均显相同颜色的斑点,但3μl、5μl、7μl斑点更为明显清晰;
2.2.7石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)***重现性
取3批不同产地和不同批次的大蝎子草,照本实验例“2.2.1中(1)”制备供试品溶液,分别吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(16℃,相对湿度62%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果显示:供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上均显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,说明重现性良好;
2.2.8专属性
取大蝎子草5号样,照本实验例“2.2.1中(1)”制备供试品溶液,吸取供试品溶液、甲醇溶液及对照溶液各5μl~7μl分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(16℃,相对湿度72%),取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:可见光下检视,供试品色谱中,在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,甲醇溶液无干扰,也无任何斑点,说明专属性良好。
2.2.9耐用性考察
取大蝎子草5号样,照本实验例“2.2.1中(1)”制备供试品溶液,照本实验例“2.1.1中(5)”制备对照品溶液;
(1)硅胶G薄层板活化与未活化的考察
吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一硅胶G薄层板上,分别用青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板进行活化和未活化的薄层鉴别对比试验,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开(17℃,相对湿度70%),取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结论:活化与未活化对薄层试验结果无明显影响;
(2)饱和时间的考察
吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,分别饱和0分钟、5分钟、10分钟,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结论:饱和时间对薄层试验结果无明显影响;
(3)不同厂家生产的薄层板的比较
吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于青岛海洋化工生产硅胶G薄层板及高效硅胶G板、青岛海浪化工生产的硅胶G薄层板、自制硅胶G薄层板进行薄层鉴别对比考察试验,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结论:不同薄层板薄层对结果均无明显差异,此方法的耐用性较好。
(4)温度影响的考察
吸取供试品溶液和对照溶液各5μl~7μl,点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,分别于4.9℃、25℃、30℃展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结论:温度对薄层试验结果无明显影响;
(5)湿度影响的考察
吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,湿度分别为32%、58%、88%,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结论:湿度对薄层试验结果无明显影响;
(6)耐用性考察结果
经上述耐用性考察试验,在不同条件下进行薄层色谱分析实验,供试品在与对照品相应位置上斑点清晰,分离度符合要求,Rf值适中,说明本方法耐用性良好;
2.2.10***适应性考察
照2.2.9的方法制备供试品溶液和对照品溶液,吸取供试品溶液、对照溶液各5μl~7μl,分别点于青岛海洋化工生产的市销硅胶G薄层板及高效硅胶G板、硅胶H薄层板、硅胶GF254薄层板进行薄层鉴别对比考察试验,以石油醚(90~120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出晾干,再喷以10%硫酸乙醇溶液,晾至干透后置105℃~110℃的烘箱中烘至斑点显色清晰;
结果:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,四种类型的薄层板均显相同颜色的斑点,且供试品和对照品斑点均明显清晰,供试品分离度符合要求,Rf值适中,说明四种薄层板薄层试验对结果均无明显差异,说明***适应性良好。
实施例1
根据实验例1和实验例2确定的方法,本实施例取另一批次的珠芽艾麻3、4、5号样和大蝎子草3、4、5号样品为供试品分别进行质量评价,所述质量评价包括药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别,以及对干品中水分含量、总灰分含量和浸出物含量检测;
所述水分含量检测照《中国药典》2020年版四部水分测定法(0832)中的第二法(烘干法);所述总灰分含量检测照《中国药典》2020年版四部灰分测定法(2302);所述浸出物含量检测照《中国药典》现行版2020年版浸出物测定法(2201)中醇溶性浸出物测定法项下的热浸法;
所述性状鉴别:
①大蝎子草:全草长0.5m~3m,切段后长10~30cm;茎下部常木质化,茎具5棱,生刺毛和细糙毛或伸展的柔毛,多分枝;叶皱缩,展平后轮廓五角形,分枝上的叶较小,长、宽为8cm~25cm,基部浅心形或近截形,掌状3~7深裂,边缘有粗锯齿,两面均有毛;叶柄长3cm~15cm;托叶长圆状卵形;气微,味苦;
②珠芽艾麻:根略呈纺锤状或细长圆锥状,多弯曲,表面棕褐色或灰棕色,具纵皱纹;质硬而脆,易折断,粉性强,可见纤维,淡红褐色;茎平滑或具短毛及少数螫毛,高18~40cm,切段后长10~30cm;叶狭卵形或卵形,先端渐尖,基部宽楔形或圆形,边缘具钝锯齿、圆齿或尖齿,两面疏生短毛和螫毛,常以脉上较密,具柄;叶腋常生1~4个珠芽;雌花序圆锥形生上部叶腋,无总梗,花被4~5,雄蕊4~5,退化子房杯状;雌花序近顶生,具总梗,花序轴及总梗密生短毛及螫毛,花被片4,内侧2枚花后增大;瘦果歪卵形,扁平,长2~3mm;气微,味微苦;
所述显微鉴别:
①大蝎子草粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
②珠芽艾麻粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;单细胞非腺毛多碎断;
所述薄层鉴别包括如下步骤:
(1)取供试品粉末1.5g,加70%乙醇25ml,500W超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,即得供试品溶液;
(2)取β-谷甾醇为对照品,甲醇为溶剂,制成每1ml含0.5mg对照品的溶液,即得对照品溶液;
(3)分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(120℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;
结果:珠芽艾麻3-5号样品的薄层色谱图见图5,大蝎子草3-5号样品的薄层色谱图见图6,由图可知:供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,判定供试品中含有红禾麻;
珠芽艾麻3-5号样品以及大蝎子草3-5号样品的性状和显微鉴别均符合标准,珠芽艾麻3-5号样品以及大蝎子草3-5号样品的水分均未超过13%,总灰分均未超过15%,浸出物均超过12.5%。
实施例2
一种红禾麻药材的质量评价方法,本实施例对供试品的质量评价方法如下:
照《中国药典》2020年版四部水分测定法(0832)中的第二法(烘干法)、《中国药典》2020年版四部灰分测定法(2302)、《中国药典》现行版2020年版浸出物测定法(2201)中醇溶性浸出物测定法项下的热浸法对供试品进行水分、总灰分、浸出物的含量进行测定;结果显示:供试品中水分含量<13%,总灰分含量<15%,浸出物含量(溶剂为质量浓度50%的乙醇)>12.5%。
所述红禾麻性状鉴别特征:
①大蝎子草:全草长0.5m~3m,切段后长10~30cm;茎下部常木质化,茎具5棱,生刺毛和细糙毛或伸展的柔毛,多分枝;叶皱缩,展平后轮廓五角形,分枝上的叶较小,长、宽为8cm~25cm,基部浅心形或近截形,掌状3~7深裂,边缘有粗锯齿,两面均有毛;叶柄长3cm~15cm;托叶长圆状卵形;气微,味苦;
②珠芽艾麻:根略呈纺锤状或细长圆锥状,多弯曲,表面棕褐色或灰棕色,具纵皱纹;质硬而脆,易折断,粉性强,可见纤维,淡红褐色;茎平滑或具短毛及少数螫毛,高18~40cm,切段后长10~30cm;叶狭卵形或卵形,先端渐尖,基部宽楔形或圆形,边缘具钝锯齿、圆齿或尖齿,两面疏生短毛和螫毛,常以脉上较密,具柄;叶腋常生1~4个珠芽;雌花序圆锥形生上部叶腋,无总梗,花被4~5,雄蕊4~5,退化子房杯状;雌花序近顶生,具总梗,花序轴及总梗密生短毛及螫毛,花被片4,内侧2枚花后增大;瘦果歪卵形,扁平,长2~3mm;气微,味微苦;
所述红禾麻显微鉴别特征:
①大蝎子草粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
②珠芽艾麻粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;单细胞非腺毛多碎断;
结果显示:供试品性状和显微特征符合红禾麻性状鉴别特征和显微鉴别特征;
所述供试品薄层鉴别包括如下步骤:
(1)取供试品粉末1.5g,加70%乙醇25ml,500W超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,即得供试品溶液;
(2)取β-谷甾醇为对照品,甲醇为溶剂,制成每1ml含0.5mg对照品的溶液,即得对照品溶液;
(3)分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5μl,点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(90℃)-乙酸乙酯(10:4)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在110℃加热至斑点显色清晰;结果显示供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,判定供试品中含有红禾麻。
Claims (10)
1.一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述红禾麻药材为荨麻科艾麻属植物珠芽艾麻和蝎子草属大蝎子草;所述质量评价包括药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别,以及对干品中水分含量、总灰分含量和浸出物含量检测;
所述薄层鉴别包括如下步骤:
(1)取供试品粉末1.5-2.0g,加乙醇25ml,超声处理20-30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,即得供试品溶液;
(2)取β-谷甾醇为对照品,甲醇为溶剂,制成每1ml含0.5mg对照品的溶液,即得对照品溶液;
(3)分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一薄层色谱板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰;供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,判定供试品中含有红禾麻。
2.如权利要求1所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述显微鉴别为:
①大蝎子草粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
②珠芽艾麻粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;单细胞非腺毛多碎断。
3.如权利要求1所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,步骤(1)中所述乙醇的质量浓度为70%。
4.如权利要求1所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,步骤(1)中所述超声处理的工艺条件为:功率500W,时间20-30min。
5.如权利要求1所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,步骤(3)中所述展开剂选择石油醚-乙酸乙酯为10:4。
6.如权利要求1或5所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述石油醚的温度为90-120℃。
7.如权利要求1所述的一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述红禾麻药材为珠芽艾麻、大蝎子草;所述质量评价包括药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别,以及对干品中水分含量、总灰分含量和浸出物含量检测;
所述水分含量检测照《中国药典》2020版中水分测定法第二法烘干法;
所述总灰分含量检测照《中国药典》2020版中灰分测定法;
所述浸出物含量检测照《中国药典》2020版中醇溶性浸出物项的下热浸法;
所述性状鉴别:
①大蝎子草:全草长0.5m~3m,切段后长10~30cm;茎下部常木质化,茎具5棱,生刺毛和细糙毛或伸展的柔毛,多分枝;叶皱缩,展平后轮廓五角形,分枝上的叶较小,长、宽为8cm~25cm,基部浅心形或近截形,掌状3~7深裂,边缘有粗锯齿,两面均有毛;叶柄长3cm~15cm;托叶长圆状卵形;气微,味苦;
②珠芽艾麻:根略呈纺锤状或细长圆锥状,多弯曲,表面棕褐色或灰棕色,具纵皱纹;质硬而脆,易折断,粉性强,可见纤维,淡红褐色;茎平滑或具短毛及少数螫毛,高18~40cm,切段后长10~30cm;叶狭卵形或卵形,先端渐尖,基部宽楔形或圆形,边缘具钝锯齿、圆齿或尖齿,两面疏生短毛和螫毛,常以脉上较密,具柄;叶腋常生1~4个珠芽;雌花序圆锥形生上部叶腋,无总梗,花被4~5,雄蕊4~5,退化子房杯状;雌花序近顶生,具总梗,花序轴及总梗密生短毛及螫毛,花被片4,内侧2枚花后增大;瘦果歪卵形,扁平,长2~3mm;气微,味微苦;
所述显微鉴别:
①大蝎子草粉末呈褐色,草酸钙簇晶众多,直径13~24μm;单细胞非腺毛两种易见,一种为壁上具疣状突起,一种为外壁光滑;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;纤维长条状,成束;花粉粒类球形,表面具短刺状突起;
②珠芽艾麻粉末呈褐色,草酸钙簇晶较多,散在或存在于薄壁细胞中,常排列成行;纤维易见,长条状、成束或碎断;导管螺纹、具缘纹孔、梯纹;单细胞非腺毛多碎断;
所述薄层鉴别包括如下步骤:
(1)取供试品粉末1.5g,加乙醇25ml,超声处理230min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,即得供试品溶液;
(2)取β-谷甾醇为对照品,甲醇为溶剂,制成每1ml含0.5mg对照品的溶液,即得对照品溶液;
(3)分别吸取对照品溶液及供试品溶液各5~7μl,点于同一薄层色谱板上,以石油醚-乙酸乙酯为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,晾干,在105℃~110℃加热至斑点显色清晰,供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,判定供试品中含有红禾麻。
8.如权利要求1或7所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述红禾麻干燥品的水分含量≤13.0%,总灰分含量≤15.0%,浸出物含量≥12.5%。
9.如权利要求1或7所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述浸出物含量检测中选用乙醇为浸出溶剂。
10.如权利要求9所述一种红禾麻药材的质量评价方法,其特征在于,所述浸出物含量检测中选用质量浓度50%的乙醇为浸出溶剂。
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