CN114113509A - 一种槐枝药材的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药材质量控制技术领域，特别涉及一种槐枝药材的质量检测方法，所述槐枝药材包括国槐干枝、刺槐干枝、国槐鲜枝、刺槐鲜枝；所述质量检测方法包括对药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，以及对干枝的水分含量和浸出物含量测定；本发明方法科学合理、准确率高、稳定性强、鉴别成本低、鉴别时间短的优点。
Description
技术领域
本发明属于药材质量控制技术领域，特别涉及一种槐枝药材的质量检测方法。
背景技术
槐枝为豆科植物槐Sophora japonica L.及刺槐Robinia pseudoacaciaL.的新鲜或干燥枝条。四季采收，去叶，晒干或鲜用。性平味苦，归心、肝、脾、大肠经，具有散瘀止血，清热燥湿，祛风杀虫的功能，用于崩漏，赤白带下，心痛，目赤，痔疮，疥癣。
槐枝之名始载于《名医别录》，曰“味苦、性平，主洗疮及阴囊下湿痒”。《新修本草》：“嫩糵煮汁酿酒疗大风痿痹”，“枝炮熨止蝎毒”。《本草拾遗》：“木为灰，长毛发”。《本草图经》：“春采嫩枝，锻为黑灰以揩齿去蚛，烧青枝取沥以涂癣”。《滇南本草》：“洗皮肤疥癞，去皮肤瘙痒之风”。《纲目》：“治赤目，崩漏”。《安徽中草药》：“祛风止痒”。使用历史悠久，《淮南子》曰：“槐之生也，入季春五日而兔目，十日而鼠耳，更旬而始规，二旬叶成。”《本草图经》云：“谨按《尔雅》，槐有数种，叶大而黑者名欀槐，昼合夜开者名守宫槐。叶细而青绿者但谓之槐，其功用不言有别。四月、五月开花，六月、七月结实。”所附“高邮军槐实”图，荚果有缢束，呈串珠状，叶与羽状复叶相似。又《纲目》云，“其花未开时，状如米粒，炒过煎水，染黄甚鲜。其实作荚连珠，中有黑子，以子连多者为好”，上述槐特征及图形均与豆科植物槐一致。
刺槐始载于《贵州民间方药集》，《贵州民间方药集》:“止大肠下血,咯血,又治妇女红崩”。刺槐原产美国东部，17世纪传入欧洲及非洲，我国于18世纪末从欧洲引入青岛栽培，现全国各地广泛栽植。所以目前我国各地均有分布国槐或刺槐，具体有国槐干枝、刺槐干枝、国槐鲜枝、刺槐鲜枝，而其在化学成分组成等方面存在着差异，比如国槐主要以黄酮类化学成分为主，主要含有槐属双苷、芦丁、染料木素、槲皮素、山柰酚、染料木苷、7,4′-二葡萄糖苷、樱黄素4′-O-β-D-葡萄糖苷、染料木素4′-O-(6″-O-α-L-鼠李糖)-β-槐糖苷、染料木素4′-O-(6″′-O-α-L-鼠李糖)-β-槐糖苷、槲皮素3-O-β-D-葡萄糖苷、山奈酚3-O-β-D-葡萄糖苷、6-甲氧基-7-羟基-4′-O-β-D-糖基异黄酮、黄豆黄素-4′-O-β-D-葡糖苷等。而刺槐的化学成分研究报道较少，目前报道仅有β-谷甾醇、山奈酚-3-葡萄糖-7-鼠李糖甙。而在中药行业，药材的化学成分直接影响药物组合物及制剂的药效、稳定性以及安全性等，所以槐枝的鉴别至关重要。
目前槐枝主要按照《中国药典》2015年版四部通则0502中的薄层色谱法进行鉴定，具体是取槐枝粉末1g，加乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取芦丁对照品，加乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液1～3μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，预饱和20分钟，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，在105℃下加热3～6分钟，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。但该法主要针对国槐，无法具体鉴别国槐与刺槐，而关于其他槐枝的鉴别方案鲜少，这直接造成了关于国槐干枝、刺槐干枝、国槐鲜枝、刺槐鲜枝的鉴别、区分技术的空白，进而导致药材识别准确性低，影响实用效果和推广。
目前现有技术中关于槐枝的质量控制方法鲜少，且评价指标单一，不准确，以及通常槐枝干枝的用量为10-20g，而鲜枝则加倍，这些因素均直接影响了用药规律和效果，因此对槐枝进行质量控制和有效鉴别至关重要。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提出了一种槐枝药材的质量检测方法。
具体是通过以下技术方案来实现的：
一种槐枝药材的质量检测方法，所述槐枝药材包括国槐干枝、刺槐干枝、国槐鲜枝、刺槐鲜枝；所述质量检测方法包括对药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，以及对干枝的水分含量和浸出物含量测定；
所述水分含量和浸出物含量测定照《中国药典》2015版四部水分和浸出物测定法进行；
所述性状鉴别：
国槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色，幼枝暗绿色，无毛，皮孔明显，切断面浅黄色或黄白色，质坚硬，具臭味；气微，味微苦；
刺槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色或红棕色，纵裂，具托叶刺，切面黄白色，质坚硬；具豆腥味，味微涩；
国槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表棕绿色或暗绿色，具毛，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色，不平坦，具臭味；气微，味微苦；
刺槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表褐色，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色。
所述显微鉴别：
国槐粉末黄绿色；淀粉粒可见，单粒呈卵形、类圆形或长圆形，直径4～12μm，脐点人字状或短缝状；复粒由2～4个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；木栓细胞无色、棕红色或黄棕色，多角形或类多角形，壁稍厚；石细胞单个散在或数个成群，呈类方形或长圆形，具明显的分枝状孔沟；导管多为具缘纹孔导管和网纹导管；
刺槐粉末浅黄褐色；淀粉粒可见，常见单粒，卵形、类圆形或长圆形，直径6～14μm，脐点人字状、点状或短缝状；复粒由2～3个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；石细胞单个散在或数个成群，呈多角形、类方形或不规则状，具明显的分枝状孔沟；具缘纹孔导管多见，少数为网纹导管。
所述薄层色谱鉴别中：
国槐薄层色谱鉴别包括如下步骤：
A1制备供试品溶液A：取供试品粉末1g，加乙醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，即得；
A2制备对照品溶液A：称取芦丁为对照品A，乙醇为溶剂，制成每1ml含0.1mg对照品A的溶液，即得对照品溶液A；
A3吸取供试品溶液A1～3μl，对照品溶液A1-2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，在105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视；供试品A色谱中，在与对照品A色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，判定所述供试品溶液A中含有国槐；
刺槐薄层色谱鉴别包括如下步骤：
B1制备供试品溶液B：取供试粉末5g，加乙醇50ml，超声处理10-50min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，即供试品溶液B；
B2制备对照药材溶液：取刺槐对照药材5g，按照B1方法制成对照药材溶液；
B3制备对照品溶液B：取β-谷甾醇为对照品B，乙醇为溶剂，制成每1mg含0.5mg对照品B的溶液，即为对照品溶液B；
B4薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液B及对照药材溶液各5～10μl，对照品溶液B2-6μl；分别点于同一薄层色谱板上，以氯仿-丙酮为展开剂，预饱和10min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点，判定所述供试品溶液B中含有刺槐。
所述干枝的水分含量≤12.0％，浸出物含量≥5.0％。
所述国槐薄层色谱鉴别的展开剂选自乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:6:1:2)、乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)中任一。
进一步优选，所述国槐薄层色谱鉴别的展开剂为乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)，即为乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水按8:1:1:1组成。
所述刺槐枝薄层色谱鉴别的展开剂是氯仿、丙酮按15:0.5组成。
所述薄层色谱板为硅胶G薄层板、硅胶G高效板、硅胶H板、硅胶GF254板、硅胶G预制板中任意一种。
进一步优选，所述薄层色谱板为硅胶G薄层板。
有益效果：
本发明质量控制方法科学合理、准确率高、稳定性强、鉴别成本低、鉴别时间短的优点，质量控制全面，可快速、精准识别槐枝，同时判别国槐、刺槐的种类以及干枝、鲜枝的状态。
基于刺槐和国槐的化学成分、功能差异，增加对刺槐和国槐的鉴别，提高了槐枝用药安全性、药效稳定性及显著性。选择水分和浸出物含量、具体类别进行质量控制，相比高效液相色谱法、质谱法、分光光度法等，操作更易、成本更低、准度更高、设备投入更少、稳定性更高。通过对供试品制备、展开***研究，提高了薄层鉴别的稳定性、重现性、专属性、耐用性以及缩短鉴别时间，对于展开温湿度的条件无特别要求。
附图说明
图1：国槐2号的淀粉粒(左图)和淀粉复粒(右图)显微特征图；
图2：国槐2号的晶纤维(左图)和草酸钙方晶(右图)显微特征图；
图3：国槐2号的木栓细胞显微特征图；
图4：国槐2号的石细胞(左图)和石细胞群(右图)显微特征图；
图5：国槐2号的具缘纹孔导管(左图)和网纹导管(右图)显微特征图；
图6：刺槐2号的淀粉粒(左图)和淀粉复粒(右图)显微特征图；
图7：刺槐2号的晶纤维(左图)和草酸钙方晶(右图)显微特征图；
图8：刺槐2号的石细胞(左图)和石细胞群(右图)显微特征图；
图9：刺槐2号的具缘纹孔导管(左图)和网纹导管(右图)显微特征图；
图10：国槐2号干枝的薄层色谱图；其中1、2、4、5为供试样品，3、6为芦丁对照品；
图11：国槐2号鲜枝的薄层色谱图；其中1、2、4、5为供试样品，3、6为芦丁对照品；
图12：刺槐2号干枝的薄层色谱图；其中1、6为β-谷甾醇对照品，2、7为对照药材，3、4、5为供试样品；
图13：刺槐2号鲜枝的薄层色谱图；其中1、6为β-谷甾醇对照品，2、7为对照药材，3、4、5为供试样品；
图14：以芦丁为对照的薄层色谱图；其中3、6为芦丁对照品0.1mg/1ml；1为供试品溶液①，2为供试品溶液②，4为供试品溶液③，5为供试品溶液④；
图15：以染料木素为对照的薄层色谱图；其中3、6为染料木素对照品0.1mg/1ml；1为供试品溶液①，2为供试品溶液②，4为供试品溶液③，5为供试品溶液④；
图16：以山奈酚的为对照薄层色谱图；其中3、6为山奈酚对照品0.1mg/1ml；1为供试品溶液①，2为供试品溶液②，4为供试品溶液③，5为供试品溶液④；
图17：以槲皮素为对照的薄层色谱图；其中3、6为槲皮素对照品0.1mg/1ml；1为供试品溶液①，2为供试品溶液②，4为供试品溶液③，5为供试品溶液④；
图18：日光检视下β-谷甾醇薄层色谱图；其中1、6为刺槐4号对照药材，2、7为β-谷甾醇对照品、3为刺槐2号，4为刺槐5号，5为刺槐6号；
图19：365nm紫外光检视下β-谷甾醇薄层色谱图；其中1、6为刺槐4号对照药材，2、7为β-谷甾醇对照品、3为刺槐2号，4为刺槐5号，5为刺槐6号。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
1.试验材料(国槐样品见表1，刺槐样品见表2)
表1 国槐样品来源
表2 刺槐样品来源
2.试验材料质量检测：
2.1 水分：按《中国药典》2015版四部水分测定法(通则0832第二法)进行测定，见表3、4：
表3 4批国槐干枝的水分测定
表4 4批刺槐干枝的水分测定
由表3、表4可得，水分因产地不同波动较大。《中国药典》2015年版四部通则0212药材和饮片检定通则“六.检查”规定：除另有规定，饮片水分通常不得过13.0％。根据不同来源多批次样品测定结果(见表2、3)，低水分量为8.7％，高水分量为11.6％，均未超过13.0％，考虑到由于贵州省气候状况复杂，导致药材水分波动大的现状，确定槐枝干燥药材水分不得过12.0％。
2.2浸出物：按《中国药典》2015版四部浸出物测定法(通则2201)，分别对刺槐及国槐的提取溶剂及浸出方法进行考察，结果由表5、表6可得，在该实验条件下，用水作提取溶剂，浸出方法为热浸时，槐枝及刺槐枝干枝的浸出物含量最高；故选择水作提取溶剂，浸出方法为热浸法作为浸出物含量的测定方法。
表5 国槐干枝浸出溶剂及浸出方法筛选检结果
表6 刺槐干枝浸出溶剂及浸出方法筛选检结果
按《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法)项下热浸法测定，以水作为溶剂，分别对多批刺槐及国槐的浸出物含量进行测定，测定结果见表7、表8，在该实验条件下，由于刺槐及国槐浸出物的含量相差较大，且各药材间因产地不同差异也较大，综合考虑将槐枝的浸出物限度定为不得少于5.0％；
表7 4批国槐干枝的浸出物测定
表8 刺槐干枝的浸出物测定
2.3 性状鉴别
①国槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色，幼枝暗绿色，无毛，皮孔明显，切断面浅黄色或黄白色，质坚硬，具臭味；气微，味微苦；
②刺槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色或红棕色，纵裂，具托叶刺，切面黄白色，质坚硬；具豆腥味，味微涩；
③国槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表棕绿色或暗绿色，具毛，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色，不平坦，具臭味；气微，味微苦；
④刺槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表褐色，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色；
2.4 显微鉴别：
①国槐：粉末黄绿色；淀粉粒可见，单粒呈卵形、类圆形或长圆形，直径4～12μm，脐点人字状或短缝状；复粒由2～4个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；木栓细胞无色、棕红色或黄棕色，多角形或类多角形，壁稍厚；石细胞单个散在或数个成群，呈类方形或长圆形，具明显的分枝状孔沟；导管多为具缘纹孔导管和网纹导管；
②刺槐：粉末浅黄褐色；淀粉粒可见，常见单粒，卵形、类圆形或长圆形，直径6～14μm，脐点人字状、点状或短缝状；复粒由2～3个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；石细胞单个散在或数个成群，呈多角形、类方形或不规则状，具明显的分枝状孔沟；具缘纹孔导管多见，少数为网纹导管。
结果显示：
1)以国槐2号为供试品，进行显微鉴别，显微特征图见图1-5，观测结果为：淀粉粒可见，单粒呈卵形、类圆形或长圆形，直径4～12μm，脐点人字状或短缝状；复粒由2～4个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；木栓细胞无色、棕红色或黄棕色，多角形或类多角形，壁稍厚；石细胞单个散在或数个成群，呈类方形或长圆形，具明显的分枝状孔沟；导管多为具缘纹孔导管和网纹导管。
2)以刺槐2号为供试品，进行显微鉴别，显微特征图见图6-9，观测结果为：淀粉粒可见，常见单粒，卵形、类圆形或长圆形，直径6～14μm，脐点人字状、点状或短缝状；复粒由2～3个分粒组成。纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。草酸钙方晶多见。石细胞单个散在或数个成群，呈多角形、类方形或不规则状，具明显的分枝状孔沟。具缘纹孔导管多见，少数为网纹导管。
2.5 薄层色谱鉴别：
步骤2.5.1 分别以国槐2号的干枝和鲜枝为供试品按照如下方法进行薄层色谱鉴别为：
步骤2.5.1.1 制备供试品溶液A：取供试品粉末1g，加乙醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml充分溶解，作为供试品溶液A；
步骤2.5.1.2 制备对照品溶液A：称取芦丁为对照品A，乙醇为溶剂，制成含0.1mg对照品A的1ml溶液A，即为对照品溶液；
步骤2.5.1.3：吸取供试品溶液1～3μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，在105℃下加热3～6min，置紫外光灯下检视；供试品A色谱中，在与对照品A色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，判定所述供试品溶液A中含有国槐；其中展开剂是乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水按8:1:1:1组成；鉴别结果见图10和图11。
步骤2.5.2 分别以刺槐2号的干枝和鲜枝为供试品，按照如下方法进行薄层色谱鉴别：
步骤2.5.2.1 制备供试品溶液B：取供试粉末5g，加乙醇50ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml充分溶解，作为供试品溶液B；
步骤2.5.2.2 制备对照药材溶液：取刺槐枝对照药材5g，按照B1方法制成对照药材溶液；
步骤2.5.2.3 制备对照品溶液B：取β-谷甾醇为对照品B，乙醇为溶剂，制成含0.5mg对照品B的1ml溶液，即为对照品溶液B；
步骤2.5.2.4 薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液B及对照药材溶液各5～10μl，对照品溶液B2μl；分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮为展开剂，预饱和10min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点，判定所述供试品溶液B中含有刺槐枝；其中展开剂是氯仿、丙酮按15:0.5组成；鉴别结果见图12和图13。
试验例1 国槐薄层色谱鉴别方法学验证
1 试剂与实验仪器
乙酸乙酯，成都市科龙化工试剂厂，批号2016071501；丁酮，上海化学试剂总厂，批号20040530；正丁醇，重庆川东化工(集团)有限公司，批号20170301；甲醇，重庆川东化工(集团)有限公司，批号20161001；乙醇95％，重庆川东化工(集团)有限公司，批号20161201；甲酸，重庆川东化工(集团)有限公司化学试剂厂，批号20091009；结晶氯化铝，天津市科密欧化学试剂有限公式，批号20170221；羧甲基纤维素钠，天津市致远化学试剂有限公司，批号2016041022；薄层层析硅胶G，青岛海洋化工有限公司，批号20151008；
硅胶G薄层板，青岛海洋化工有限公司，批号20170720；自制硅胶G薄层板，批号20171108；硅胶G薄层板，青岛海浪硅胶干燥剂有限公司，批号20140820；硅胶G高效板，青岛海洋化工有限公司，批号20170831；硅胶H板，青岛海洋化工有限公司，批号：20160715；硅胶GF254板，青岛海洋化工有限公司，批号20140910；硅胶G预制板，国药集团化学试剂有限公司，批号20170912；
三用紫外分析仪，武汉药科新技术开发有限公司生产，型号WHF-3；电热鼓风干燥箱，天津市泰斯特仪器有限公司，型号101-2A型；数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司，型号KQ-500DA型；电吹风，康明牌CY800；点样毛细管，上海申立玻璃仪器销售有限公司，规格0.5×100；
2 国槐样品见表1；
3 指标性成分筛选
3.1 芦丁薄层色谱鉴别条件
展开剂配比：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)；展开温湿度条件：T＝14℃，RH＝44％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
样品编号：1.供试品溶液①(甲醇提取)；2.供试品溶液②(50％乙醇提取)；3.芦丁对照品(0.1mg/1ml)；4.供试品溶液③(70％乙醇提取)；5.供试品溶液④(乙醇提取)；薄层色谱图见图14；
3.2 染料木素薄层色谱鉴别条件
展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)；展开温湿度条件：T＝14℃，RH＝44％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
样品编号：1.供试品溶液①(甲醇提取)；2.供试品溶液②(乙醇提取)；3.染料木素对照品(0.1mg/1ml)；4.供试品溶液③(鲜枝乙醇)；5.供试品溶液④(正丁醇萃取)；薄层色谱图见图15；
3.3 山奈酚薄层色谱鉴别条件
展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)；展开温湿度条件：T＝14℃，RH＝44％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
样品编号：1.供试品溶液①(甲醇提取)；2.供试品溶液②(乙醇提取)；3.山奈酚对照品(0.1mg/1ml)；4.供试品溶液③(鲜枝乙醇提取)；5.供试品溶液④(正丁醇萃取)；薄层色谱图见图16；
3.4 槲皮素薄层色谱鉴别条件
展开剂配比：甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4.5:0.5)；展开温湿度条件：T＝14℃，RH＝44％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
样品编号：1.供试品溶液①(甲醇提取)；2.供试品溶液②(乙醇提取)；3.槲皮素对照品(0.1mg/1ml)；4.供试品溶液③(鲜枝乙醇提取)；5.供试品溶液④(正丁醇萃取)；薄层色谱图见图17；
根据薄层色谱图清晰度、分离情况以及功效，确认芦丁作为指标性成分，在下述考察中均采用芦丁对照品为溶质，甲醇为溶剂制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液；
4 供试溶液制备方法的考察
4.1 提取溶剂的选择
甲醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取国槐粗粉1g，加甲醇50ml，超声30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1ml溶解，即得供试品溶液①；
50％乙醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取国槐粗粉1g，加50％乙醇50ml，超声30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1ml溶解，即得供试品溶液②；
70％乙醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取国槐粗粉1g，加70％乙醇50ml，超声30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1ml溶解，即得供试品溶液③；
乙醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取国槐粗粉1g，加乙醇50ml，超声30min，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1ml溶解，即得供试品溶液④；
4.1.1 薄层色谱条件
展开剂配比：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)；展开温湿度条件：T＝20℃,RH＝68％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
4.1.2 结果：与芦丁对照品相应的位置上，供试品色谱均显相同颜色的荧光斑点，说明四种溶剂均能作为提取溶剂，但甲醇及乙醇的荧光斑点较50％乙醇、70％乙醇提取的斑点更明显，甲醇及乙醇二者提取效果相当，且该法简便可行，同时考虑到乙醇作为提取溶剂较甲醇更廉价、安全，故选择乙醇作为提取溶剂。
4.2 药材取样量的考察
分别取国槐4号粉末0.1、0.5、1、3、5g采用“4.1中供试品溶液④”制成供试品溶液；吸取上述供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，置展开缸中预饱和20min，展开(展开温湿度条件：T＝19℃，RH＝58％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视；
结果显示：与芦丁对照品相应的位置上，不同药材取样量的供试品色谱图中有相同颜色的荧光斑点，且取样量为1g时，荧光斑点明显且干扰较小，故选定槐枝药材取样量为1g。
4.3 加乙醇量的考察
取国槐4号粉末3份，每份1g，分别加乙醇20、30、50ml，采用“4.1中供试品溶液④”制成供试品溶液并实验按照“4.2药材取样量的考察”的薄层色谱法试验；
结果：不同溶剂量提取的供试品色谱图中，在与对照品色谱相应的位置上，均显相同颜色的荧光斑点，供试品溶液3的荧光斑点较1、2更明显，综合考虑，选择30mL作为提取溶剂的剂量；
4.4 药材提取时间的考察
取国槐4号(干枝、鲜枝)粉末三份，每份1g，分别加乙醇30ml，超声(功率：500W、频率40KHz)10min、30min、50min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，即得不同提取时间的供试品溶液，然后在展开温度15℃，湿度38％的条件下按照“4.2药材取样量的考察”的薄层色谱法试验；
试验结果：超声提取30min(功率：500W、频率40KHz)时，样品斑点成点性好，斑点荧光清晰，故将样品提取时间定为30min。
结论：国槐供试品溶液的制备方法确定为：取国槐枝粗粉约1g，加乙醇30mL，超声30min，滤过，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇使溶解，作为供试品溶液，并参与***适应性考察中；
5 ***适应性考察
5.1 采用不同的硅胶薄层板进行***适应性考察
5.1.2 薄层色谱条件
展开剂配比：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)；展开温湿度条件：T＝18.5℃，RH＝52％；显色剂：3％三氯化铝乙醇试液；
5.1.3 硅胶薄层板的选择：
1)硅胶G薄层板，批号20170720，厂家青岛海洋化工有限公司；2)硅胶GF254板，批号20140910，青岛海洋化工有限公司；3)硅胶H板，批号20160715，青岛海洋化工有限公司；4)4硅胶G高效板，批号20170831，青岛海洋化工有限公司；
结果：在该条件下对不同的硅胶薄层板进行筛选，硅胶G薄层板对供试品的分离效果较好，故选择硅胶G薄层板；
5.2 硅胶薄层板是否活化的考察：
采用点状点样，分别点于活化(105℃活化30min)与未活化的硅胶G薄层板上，其调整展开温湿度条件：T＝20℃，RH＝68％，其他条件和操作不变；
结果：在该实验条件下，活化与未活化的硅胶G薄层板对供试品均可达到良好的分离效果，故硅胶G薄层板无须活化。
6 展开***适应性考察
吸取供试品溶液及对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以4个展开***进行实验：(1)乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:6:1:2)、(2)乙酸乙酯-甲酸-水(8:1:1)、(3)乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8：1：1：1)、(4)正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5))，置展开缸中预饱和20min，展开(温湿条件T＝20℃，RH＝58％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3min-6min，置365nm紫外灯下检视；
3 结果：除正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)外，其余三个不同的展开***均可作为国槐的薄层鉴别展开***，相比较下，展开***：乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)的展开效果最好，Rf值适中，斑点成点性好，分离效果好，因此选择乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为槐枝薄层鉴别的展开***。
7 供试品及对照点样量的考察
7.1 对照品点样量的考察
分别吸取下对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，置展开缸中预饱和20min，展开(温湿条件T＝18℃，RH＝42％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视；
试验结果：芦丁对照品溶液浓度为0.1mg/ml，点样量为1～2μl时，斑点圆整，荧光亮度适中；
7.2 供试品点样量的考察
按照“7.1对照品点样量的考察”的方法对干枝和鲜枝供试品溶液进行实验；其中干枝展开条件：T＝18.5℃，RH＝52％；鲜枝展开条件：T＝20℃，RH＝68％；
结果：干枝(鲜枝)样品点样为0.5～3μl时斑点圆整，干扰较小；
7.3 结论：国槐(干枝、鲜枝)供试品溶液的点样量确定为：1～3μl，芦丁对照品溶液的点样量确定为：1～2μl。
8 饱和时间的考察
吸取的供试品溶液及对照品各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点四块板，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，分别置展开缸中预饱和0、10、20、30min，展开(展开温湿条件：T＝20℃，RH＝68％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视。
结论：饱和时间对斑点的呈点效果有一定的影响，其中饱和20min，展开后呈点效果最好，故饱和时间确定为20min。
9 显色时间考察
9.1 药材及对照品显色时间的考察
芦丁为黄酮类化合物，不同的黄酮化合物与显色剂反应后呈色时间是不同的，因此进行显色时间考察，以确定适宜的观察时间。
取国槐(干枝、鲜枝)粉末制备供试品溶液，吸取对照品溶液及供试品溶液各2μl，分别点于硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，置展开缸中预饱和20min，展开(展开温湿度条件：T＝20℃，RH＝58％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热，每隔3min，置365nm紫外光灯下检视一次，分别考察了加热3、6、10min后的显色变化。
结果：喷显色剂晾干后，在105℃下加热3min-6min后在365nm紫外灯下，荧光斑点清晰，故显色时间为3～6min即可。
10 专属性考察
取槐枝(干枝、鲜枝)及刺槐粉末制备供试品溶液，按照“9.1药材及对照品显色时间的考察”的方法和确定的显色时间进行实验；
结果：国槐4号(干枝、鲜枝)在与芦丁对照品色谱图相对应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，而伪品刺槐在与芦丁对照品对应的位置上没有斑点出现，而且与槐枝其他斑点也不同，说明该法专属性强。
11 耐用性考察
取国槐4号干枝及鲜枝粉末制备供试品溶液；
11.1 不同温度的考察
吸取对照品溶液及供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点四块板，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，在湿度为65％，温度分别为4.8、20、35℃下展开，展开之前预饱和20min，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视；
试验结果：湿度不变，温度变化较大的条件下，对供试品溶液展开后呈点性及分离度影响较小。
11.2 不同湿度的考察
按照“11.1不同温度的考察”方法进行实验，条件转换为：在温度为25℃，湿度分别为42％、65％、88％；
试验结果：温度不变，湿度变化较大的条件下，对供试品展开后呈点性及分离度影响较小。
12 重现性试验
分别取四个批次的国槐干枝及鲜枝粗粉制备供试品溶液；吸取对照品溶液及供试品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水(8:1:1:1)为展开剂，置展开缸中预饱和20min，展开(展开温湿度条件：T＝20℃，RH＝68％)，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，105℃下加热3～6min，365nm置紫外光灯下检视。
四个不同批次的供试品色谱图的分离效果好，Rf值均为0.5，在与对照品色谱相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，重现性较好。
试验例2刺槐薄层色谱鉴别方法学验证
因刺槐的化学成分研究报道较少，文献报道的化学成分仅见β-谷甾醇、山奈酚-3-葡萄糖-7-鼠李糖甙，但β-谷甾醇专属性不强，故结合刺槐薄层鉴别前期预试验的结果，确认以β-谷甾醇对照品及刺槐对照药材相结合作为对照对刺槐进行薄层鉴别，因此先确认的指标性成分进行方法学验证，具体为：展开剂配比：氯仿-丙酮(15:0.5)；展开温湿条件：T＝11℃，RH＝42％；基线至斑点中心：3.7cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值＝0.4；显色剂：10％硫酸乙醇溶液；样品编号：1,6为刺槐4号对照药材，2、7为β-谷甾醇对照品，3为刺槐2号，4为刺槐5号，5为刺槐6号；日光下检视结果见图18，365nm紫外光下检视结果见图19；
1 试剂试药与实验仪器：
1.1 试剂与实验仪器同试验例1；
1.2 对照品选自中国食品药品检定研究院，批号：110851-201608，含测用(含量为97％)，β-谷甾醇对照品；
1.3 对照药材：批号20170404，采自贵州沿河县沙子镇；
1.4 刺槐样品：
表7 刺槐样品来源
2 对照品溶液的制备：称取β-谷甾醇对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液；
3 对照药材溶液的制备：取对照药材粉末5g，加50ml乙醇超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，即得；
4 供试品溶液制备方法的考察
4.1 提取溶剂的选择
乙醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取刺槐干枝粗粉5g，加乙醇50ml，超声提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液①；
甲醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取刺槐干枝粗粉5g，加甲醇50ml，超声提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液②；
乙酸乙酯超声提取(功率500W、频率40KHz)：取刺槐干枝粗粉5g，加乙酸乙酯50ml，超声提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液③；
稀乙醇超声提取(功率500W、频率40KHz)：取刺槐干枝粗粉5g，加稀乙醇50ml，超声提取30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇溶解，作为供试品溶液④；
分别吸取供试品溶液及对照药材溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，置展开缸中预饱和10min，展开(温湿条件：T＝11℃，RH＝42％)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液显色，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视。
结果：供试品色谱中，供试品溶液④分别置日光和365nm紫外光灯下检视无斑点或荧光斑点，其余各供试品色谱均有与对照品色谱及对照药材色谱相同的斑点或荧光斑点，且乙醇作提取溶剂斑点较清晰，故选择乙醇作为提取溶剂；
4.2 刺槐药材取样量的考察
分别取刺槐干枝3号粉末3g、5g、7g、10g，按照“供试品溶液④”的方法制备供试品溶液；分别吸取上述供试品溶液及对照药材溶液10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，置展开缸中预饱和10min，展开(温湿条件：T＝14℃，RH＝50％)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：不同药材取样量的供试品色谱图中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点；且取样量为5g时，斑点及荧光斑点清晰且呈点性较好，故选定刺槐药材取样量为5g。
4.3 加乙醇量的考察
取刺槐3号粉末3份，每份5g，分别加乙醇50ml、70ml、100ml，然后照“供试品溶液④”的方法制备，在展开温湿度为13℃，62％的条件下照“4.2刺槐药材取样量的考察”的薄层色谱实验操作进行；
结果：在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，不同溶剂量提取的供试品色谱图均显相同颜色的斑点或荧光斑点，且供试品溶液的斑点及荧光斑点差别不大，故综合考虑选择50mL作为提取溶剂的剂量；
4.4 药材提取时间的考察
取刺槐3号粉末三份，分别超声提取10min、30min、50min，得到供试品溶液后，按照“4.3加乙醇量的考察”的薄层色谱实验操作进行；
试验结果：不同提取时间的供试品色谱效果相当。综合考虑，选择30min作为超声提取的时间；
结论：刺槐供试品溶液的制备方法确定为：取粉末约5g，加乙醇50mL，超声30min，过滤，滤液蒸干，残渣加1ml乙醇使溶解，作为供试品溶液；
5 ***适应性考察
5.1 采用不同的硅胶薄层板进行***适应性考察：
硅胶G薄层板：展开温湿度为T＝9.5℃，RH＝40％；
硅胶GF254板：展开温湿度为T＝11℃，RH＝36％；
硅胶H板；展开温湿度为T＝11℃，RH＝36％；
硅胶G高效板：展开温湿度为T＝11℃，RH＝36％；
吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一四个不同薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，置展开缸中预饱和10min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：在该实验条件下，对不同的硅胶薄层板进行筛选，各薄层板分离效果均较好，其中硅胶G薄层板对供试品的分离效果更好，故选择硅胶G薄层板进行薄层鉴别试验；
6 展开***的考察
吸取供试品溶液及对照药材溶液各10μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以5个不同的展开***进行试验：(1)三氯甲烷-丙酮(15:0.5)、(2)甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10:2:0.25)、(3)二氯甲烷-丙酮(15:0.5)、(4)石油醚(90～120)-乙酸乙酯(15:4)、(5)三氯甲烷-丙酮(15:0.2)，置展开缸中预饱和10min，展开(温湿条件：T＝14.5℃，RH＝43％)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：5个不同的展开***均可作为刺槐的展开***，其中展开***3与展开***5供试品色谱图中，样品斑点的呈点性不好；展开***4的Rf值偏低；展开***1与2相比较，***1的分离效果、检视效果、斑点呈点性、Rf值等均比***2好，因此选择三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为刺槐薄层鉴别的展开***；
7 薄层板是否活化的考察
吸取对照品与对照药材溶液及供试品溶各10μl，对照品溶液2μl，分别点于活化(105℃活化30min)与未活化的硅胶G薄层板上，在在展开温湿度为15℃，65％条件下照“***适应性考察”的薄层色谱实验操作进行；
结果：对比了活化与未活化硅胶G薄层板的展开效果，活化对硅胶G薄层板的展开效果及分离效果影响不明显。
8 对照品与对照药材及供试品点样量的考察
8.1 对照品点样量的考察
吸取对照品溶液1、3、5、7、10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，置展开缸中预饱和10min，展开(温度13℃，湿度58％，基线至斑点中心：4.8cm；基线至展开剂前沿：8.0cm；Rf值＝0.6)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液显色，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：β-谷甾醇对照品溶液浓度0.5mg/ml，点样量3～5μl时在日光及紫外光灯下检视斑点呈点性较好，故确定为对照品点样量；
8.2 对照药材点样量的考察
按照对照品点样量的考察的方法吸取对照药材溶液1、5、10、15μl进行实验，结果：对照药材在日光和紫外光灯(365nm)下检视，5～10μl时呈点较好，分离效果较好，β-谷甾醇对照品点样量为2～4μl时与对照药材的斑点相接近；
8.3 药材供试品点样量的考察
按照对照品点样量的考察的方法吸取供试品溶液1、5、10、15μl进行实验，结果：对照药材在日光和紫外光灯(365nm)下检视，刺槐干枝(鲜枝)点样量为5～10μl时，斑点清晰，分离度较好；
结论：刺槐(干枝、鲜枝)供试品溶液的点样量确定为：5～10μl，刺槐对照药材点样量确定为：5～10μl，β-谷甾醇对照品溶液的点样量确定为：2～6μl；
9 饱和时间的考察
取刺槐粗粉供试品溶液吸取的供试品溶液与对照药材溶液各10μl，对照品溶液2μl进行薄层鉴别试验，分别点于同一硅胶G薄层板上，重复点四块板，以三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，分别饱和0、10、20、30min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：饱和时间对斑点的呈点效果有一定的影响，其中饱和0min与饱和30min，展开后样品斑点分离效果不好，饱和10min与20min的展开效果相当，但饱和20min的色谱图在日光下检视，斑点没有饱和10min的清晰，故饱和时间定为10min。
10 专属性考察
取刺槐(干枝、鲜枝)粉末供试品溶液吸取供试品溶液与刺槐对照药材及空白溶剂各5～10μl，对照品2～6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，置展开缸内预饱和10min，展开(温度11℃，湿度38％)，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外光灯下检视；
结果：刺槐(干枝、鲜枝)在与β-谷甾醇对照品色谱及刺槐对照药材色谱图相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点，而空白溶剂在与β-谷甾醇对照品及刺槐对照药材色谱图相对应位置，没有斑点出现，说明该法专属性强；
11 耐用性考察
11.1 不同温度的考察
取刺槐干枝及鲜枝粉末供试品溶液吸取对照品溶液2～6μl，供试品溶液与对照药材溶液各5～10μl，分别点于硅胶G薄层板上，三氯甲烷-丙酮(15:0.5)为展开剂，在湿度为42％，温度分别为5、20、35℃下展开，展开之前置展开缸内预饱和10min，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热至斑点显色清晰，分别置日光和365nm紫外灯下检视；
结果：湿度不变，温度变化较大的条件下，对供试品溶液展开后呈点性及分离度影响较小，说明温度变化较大对分离效果影响较小；
11.2 不同湿度的考察
同11.1不同温度的考察方法相同；在温度为25℃，湿度分别为42％、65％、88％条件下展开；
结果：温度不变，湿度变化较大的条件下，对供试品展开后呈点性及分离度影响较小，说明湿度变化较大对分离效果影响较小；
13 重现性试验
分别取三个批次的刺槐干枝及鲜枝粗粉制备供试品溶液，按照前述确定的参数进行薄层色谱法实验；
结果：三个不同批次的刺槐(干枝及鲜枝)供试品色谱图中，分离效果好，Rf值均为0.5，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，均显相一致的斑点，说明该法重现性较好；刺槐薄层色谱鉴别方法的验证试验结果表明，该鉴别方法操作简便，稳定，专属性强，耐用性(薄层板品牌、温度、湿度)符合色谱分析要求，可用于刺槐的鉴别。
Claims (8)
1.一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述槐枝药材包括国槐干枝、刺槐干枝、国槐鲜枝、刺槐鲜枝；所述质量检测方法包括对药材的性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别，以及对干枝的水分含量和浸出物含量测定；
所述水分含量和浸出物含量测定照《中国药典》2015版四部水分和浸出物测定法进行；
所述性状鉴别：
国槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色，幼枝暗绿色，无毛，皮孔明显，切断面浅黄色或黄白色，质坚硬，具臭味；气微，味微苦；
刺槐干枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表灰棕色或红棕色，纵裂，具托叶刺，切面黄白色，质坚硬；具豆腥味，味微涩；
国槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表棕绿色或暗绿色，具毛，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色，不平坦，具臭味；气微，味微苦；
刺槐鲜枝呈圆柱形，长10-50cm，直径0.1～5.0cm，外表褐色，皮孔明显；体重，质坚实，易折断，断面灰白色。
所述显微鉴别：
国槐粉末黄绿色；淀粉粒可见，单粒呈卵形、类圆形或长圆形，直径4～12μm，脐点人字状或短缝状；复粒由2～4个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；木栓细胞无色、棕红色或黄棕色，多角形或类多角形，壁稍厚；石细胞单个散在或数个成群，呈类方形或长圆形，具明显的分枝状孔沟；导管多为具缘纹孔导管和网纹导管；
刺槐粉末浅黄褐色；淀粉粒可见，常见单粒，卵形、类圆形或长圆形，直径6～14μm，脐点人字状、点状或短缝状；复粒由2～3个分粒组成；纤维成束，壁厚，微木化，周围薄壁细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；草酸钙方晶多见；石细胞单个散在或数个成群，呈多角形、类方形或不规则状，具明显的分枝状孔沟；具缘纹孔导管多见，少数为网纹导管。
所述薄层色谱鉴别中：
国槐薄层色谱鉴别包括如下步骤：
A1制备供试品溶液A：取供试品粉末1g，加乙醇30ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，即得；
A2制备对照品溶液A：称取芦丁为对照品A，乙醇为溶剂，制成每1ml含0.1mg对照品A的溶液，即得对照品溶液A；
A3吸取供试品溶液A1～3μl，对照品溶液A1-2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为展开剂，预饱和20min，展开，取出，晾干，喷以3％三氯化铝乙醇试液，在105℃下加热3～6min，置365nm紫外光灯下检视；供试品A色谱中，在与对照品A色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点，判定所述供试品溶液A中含有国槐；
刺槐薄层色谱鉴别包括如下步骤：
B1制备供试品溶液B：取供试粉末5g，加乙醇50ml，超声处理10-50min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml溶解，即供试品溶液B；
B2制备对照药材溶液：取刺槐对照药材5g，按照B1方法制成对照药材溶液；
B3制备对照品溶液B：取β-谷甾醇为对照品B，乙醇为溶剂，制成每1mg含0.5mg对照品B的溶液，即为对照品溶液B；
B4薄层色谱鉴定：吸取供试品溶液B及对照药材溶液各5～10μl，对照品溶液B2-6μl；分别点于同一薄层色谱板上，以氯仿-丙酮为展开剂，预饱和10min，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃热至斑点显色清晰，分别置日光及365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点，判定所述供试品溶液B中含有刺槐。
2.如权利要求1所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述干枝的水分含量≤12.0％，浸出物含量≥5.0％。
3.如权利要求1所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述国槐薄层色谱鉴别的展开剂选自乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水、乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水、乙酸乙酯-甲酸-水中任一。
4.如权利要求1或3所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述国槐薄层色谱鉴别的展开剂为乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水。
5.如权利要求3或4所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水为乙酸乙酯、甲醇、甲酸和水按8:1:1:1组成。
6.如权利要求1所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述刺槐枝薄层色谱鉴别的展开剂是氯仿、丙酮按15:0.5组成。
7.如权利要求1所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述薄层色谱板为硅胶G薄层板、硅胶G高效板、硅胶H板、硅胶GF254板、硅胶G预制板中任意一种。
8.如权利要求1或7所述一种槐枝药材的质量检测方法，其特征在于，所述薄层色谱板为硅胶G薄层板。
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