CN111122804A - 一种九龙藤药材的质量控制方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种九龙藤药材的质量控制方法，涉及中药材技术领域。包括(1)药材粉末显微鉴别；(2)药材水分、总灰分及浸出物含量范围：水分不得过15.0％，总灰分不得过9.0％，浸出物照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于15.0％；(3)薄层色谱鉴别；供试品色谱中，应与没食子酸对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。本发明建立了一种科学、完整、可靠、有效的九龙藤药材的质量控制方法，该方法专属性较强，具有良好的重现性；同时，采用该方法建立了九龙藤药材的质量标准，能够有效的评价和控制药材的内在质量和用药品质。

Description

一种九龙藤药材的质量控制方法
技术领域
本发明涉及中药材技术领域，具体涉及一种九龙藤药材的质量控制方法。
背景技术
九龙藤为豆科植物龙须藤Bauhinia championii(Benth.)Benth.的新鲜或干燥藤茎。全年均可采收，除去杂质，鲜用或晒干。首载于《生草药性备要》，并云：“叶如燕尾，根红色，作花心。又名过岗龙(《生草药性备要》)，乌郎藤(《中国树木分类学》)，乌藤、串鼻藤(《广西中兽医药植》)，燕子尾(《南宁市药物志，)，猪蹄叉、羊蹄又(《广西中草药，)，黄开口、子燕藤、五里蘑、双木蟹(《浙江民间常用草药》)，夜合草、干打捶、九牛燥、五花血藤；马脚藤(《湖南药物志》)，飞扬藤、羊蹄风(《广西药植名录》)，民间用药也习称九龙藤，为我省少数民族用药。收载在1983版《贵州省中药材、民族药材质量标准》书中描述九龙藤为豆科植物龙须藤Bauhinia championii(Benth.)Benth.的新鲜或干燥藤茎。
九龙藤为龙须藤木质藤本：有卷须。嫩枝和花序被紧贴的小柔毛。叶互生；叶柄长1-2.5cm，纤细，略被毛；叶片纸质，卵形或心形，长3-10cm，宽2.5-6.5cm，先端锐渐尖，微凹或2裂以至不裂，基部截形，微凹或心形；上面无毛，下面被紧贴的短柔毛，渐变无毛或近无毛，干时粉百褐色；基出脉5-7条。花两性，总状花序狭长，腋生，有时与叶对生或数个聚生于枝顶而成复总状花序，长7-20cm；苞片与小苞片小，锥尖，早落；花梗纤细，长1-1.5cm；花托漏斗形，长约2mm；萼杯状，裂片5，披针形，长约3mm；花瓣5，百色，具瓣柄，瓣片匙形，外面中部疏生丝毛；能育雄蕊3，无毛，退化雄蕊2；子房具短柄，仅沿两缝线被毛，花柱短，柱头小。荚果倒卵状长圆形或带状，扁平，长7-12cm，宽2.5-3cm，无毛果瓣革质。种子2-5颗，圆形，扁平，直径约1.2cm。花期6-10月，果期7-12月。
目前，九龙藤主要具有驱风，止痛，去瘀的作用，其特有的药效已被民间广泛认同。目前市场上已开始对含有九龙藤作为有效成分的药品进行开发，但由于缺少好的质量控制方法，难以控制九龙藤药材的质量，给正常的生产经营带来了困难，因此需要对其质量控制方法进行规范，以控制九龙藤药材的质量。目前，九龙藤药材尚未建立相关标准。现有技术仅涉及九龙藤药材性状(《贵州省中药材、民族药材质量标准》)的检查，针对性不强，使用这些方法难以达到真正控制药材质量的目的。
发明内容
为解决上述背景技术中存在的问题，本发明提供了一种九龙藤药材的质量控制方法，能够有效的评价和控制药材的内在质量和用药品质。
为了实现上述技术目的，本发明采用以下技术方案：
一种九龙藤药材的质量控制方法，包括(1)药材粉末显微鉴别粉末为浅棕色或棕褐色，具缘纹孔导管，大多破碎，直径约10～300μm，草酸钙方晶众多，直径2～30μm，纤维细长，直径10～25μm，常成束或单个散在，有的周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；(2)药材水分、总灰分及浸出物含量范围：水分不得过15.0％，总灰分不得过9.0％，浸出物照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于15.0％；(3)薄层色谱鉴别；供试品色谱中，应与没食子酸对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
其中，所述薄层色谱采用硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，以10％磷钼酸乙醇溶液作为显色剂。
本发明中，所述薄层色谱按以下操作进行：取供试品溶液5-10μl，对照品溶液5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4-6:3-5:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液作为展开剂，展开，取出，晾干；10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
优选的，所述展开剂甲苯-乙酸乙酯-甲酸的体积比为5:4:1。
本发明中，所述供试品采用以下方法制备：所述供试品采用以下方法制备：取供试品粉末置具塞锥形瓶中，加有机溶剂，超声处理，滤过，浓缩,作为供试品溶液。
优选的，所述供试品采用以下方法制备：取本品粗粉约2g，加三氯甲烷-甲醇(8:2)20ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。
本发明中，所述对照品采用以下方法制备：取没食子酸对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
其中，九龙藤药材的质量控制方法，还包括含量测定，所述含量测定采用的流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液，柱温25℃，检测波长为275nm。
进一步的，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为4：96的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相；柱温25℃，流速为1.0ml/min；检测波长为272nm；理论板数按没食子酸峰计算不得低于2000，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选的，取没食子酸对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含45ug的溶液，即得对照品溶液；取药材粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明通过药材的显微鉴别，并结合水分、总灰分、浸出物和薄层色谱法，建立了一种科学、完整、可靠、有效的九龙藤药材的质量控制方法，该方法专属性较强，具有良好的重现性；同时，本发明的质量控制方法还包括采用以没食子酸为对照品的含量检测方法。采用该方法建立了九龙藤药材的质量标准，能够有效的评价和控制药材的内在质量和用药品质。
附图说明
图1：九龙藤药材粉末的显微特征图，图中：1、具缘纹孔导管；2、草酸钙方晶；3、晶纤维；4、纤维；
图2：九龙藤用10％盐酸和50％甲醇溶液回流提取，用甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(6:3:1)为展开剂的薄层色谱方法图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：广东)；
图3：九龙藤于温度：25℃，湿度：54％时，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、样品(产地：百色)，2、3没食子酸对照品，4、样品(产地：广东)，5、样品(产地：四川)；
图4：九龙藤于温度：5℃，湿度：63％时，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图5：九龙藤于温度：40℃，湿度：40％时，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图6：九龙藤于温度：25℃，湿度：72％时，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图7：九龙藤于温度：25℃，湿度：32％时，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图8：九龙藤于温度：25℃，湿度：54％时，以青岛海洋硅胶G板用于薄层鉴别方法色谱图；图中：图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图9：九龙藤于温度：25℃，湿度：54％时，以手铺硅胶G板用于薄层鉴别方法色谱图；图中：1、没食子酸对照品，2、样品(产地：四川)，3、样品(产地：百色)，4、样品(产地：广东)；
图10：HPLC方法的专属性色谱图；
图11：HPLC中没食子酸线性图；
图12：HPLC中没食子酸拟合线性图。
具体实施方式
为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例
1、实验仪器及药材
药材:
九龙藤由贵州盛世龙方制药股份有限公司提供。样品产地：(1)广东、(2)百色、(3)四川。并鉴定为豆科植物龙须藤Bauhinia championii(Benth.)Benth.干燥藤茎。凭证标本存放于贵州盛世龙方制药股份有限公司。
仪器与试药：
电子天平AUW-220D型(日本岛津)；数控超声波清洗器KQ-500D型(江苏省昆山市超声仪器有限公司)；数显恒温水浴锅HH-4(国华电器有限公司)；恒温干燥箱101-1型(上海浦鸿仪器厂)、干燥器；LC-2010AHT全自动高效液相色谱仪(日本岛津)；箱式电阻炉SX2-2.5-10型(泸南电炉烘箱厂)；WFH-201B紫外透射反射仪(上海精科实业有限公司)奥林巴斯MD-50型生物显微镜与配套的显像***,以及常规显微制片的刀片、载玻片盖玻片、镊子、水合氯醛、稀甘油、蒸馏水、三氯甲烷(分析纯，重庆川东化工(集团)有限公司)、甲苯(分析纯，重庆川东化工(集团)有限公司)、甲酸(分析纯，重庆川东化工(集团)有限公司)、甲醇(分析纯，重庆川东化工(集团)有限公司)、乙醇(分析纯，重庆川东化工(集团)有限公司)、乙酸乙酯(分析纯，成都市科龙化工试剂厂)、甲醇(色谱纯，赛默飞世尔科技中国有限公司)；水(娃哈哈纯化水)；磷酸(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)；盐酸(分析纯，天津市大茂化学试剂厂)、磷钼酸等。
2.1显微鉴别：
现通过对3个药材样品((1)广东、(2)百色、(3)四川)的粉末进行观察和测量，其显微鉴别特征总结如下：
本品粉末为浅棕色或棕褐色。具缘纹孔导管，大多破碎，直径约10～300μm。草酸钙方晶众多，直径约2～30μm。纤维细长，直径约10～25μm，常成束或单个散在，有的周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维。如图1所示。
2.2薄层鉴别
2.2.1以没食子酸为对照品的薄层色谱方法鉴别
(1)取本品粉末约2g，加10％盐酸50％甲醇溶液50ml加热回流2小时，放冷，滤过，滤液用盐酸饱和的***振摇提取2次，每次25ml，合并***液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液5～10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯(用水饱和)-乙酸乙酯-甲酸(6:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铁乙醇溶液，在105℃加热数分钟，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，样品的斑点比较模糊不清晰，薄层鉴别试验不理想，需进一步研究。故暂不将该方法列入新修订质量标准正文。见附图2：
(2)取本品粗粉约2g，加三氯甲烷-甲醇(8:2)20ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。另照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液5～10μl，对照品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:4:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2.2.2薄层色谱方法学耐用性考察
按照国家药典委员会《中药分析方法验证指导原则实施细则》的相关要求进行以下方法学耐用性考察。
①温度的考察：进行了室温(25℃)、低温(5℃)和高温(40℃)的考察，结果均较好。(见附图3、4、5)
②湿度的考察：进行了高湿度(72％)和低湿度(32％)的考察，结果均较好。(见附图6、7)
③不同薄层硅胶G板的考察：共试验两种薄层硅胶G板，分别为青岛海洋化工有限公司及手铺硅胶G板。(见附图8、9)
结论：在此试验条件下，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果表明，分离度好，斑点显色清晰，故选择将此项列入质量标准正文。
2.3水分的检查
取不同产地九龙藤药材粉末(过2号筛)约2.0g，照(《中国药典》2015年版四部通则0832)水分测定法第二法测定。样品测定结果为11.7～12.5％，根据水分测定结果，以最高测定值的120％设限，为15.0％，结合药材特性、采收加工及贮藏过程等因素，拟定水分不得过15.0％，因此，建议收入质量标准正文。不同产地样品测定见表1。
2.4总灰分的检查
取不同产地九龙藤药材粉末(过2号筛)约4.0g，照(《中国药典》2015年版四部通则2302)灰分测定法测定。样品测定结果为5.4～7.5％，根据总灰分测定结果，以最高测定值的120％设限，为9.0％，结合药材特性、采收加工及贮藏过程等因素，拟定总灰分不得过9.0％，因此，建议收入质量标准正文。不同产地样品测定见表1。
2.5酸不溶性灰分的检查
取总灰分检查中所得的灰分，照(《中国药典》2015年版四部通则2302)灰分测定法测定。样品测定结果为0.8～2.8％，实验结果表明，酸不容性灰分较低，故不列入标准草案正文。不同产地样品测定见表1。
表1九龙藤水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物测定结果
Figure BDA0002364617870000071
2.6浸出物的测定
2.6.1水溶性浸出物的测定：测定用的供试品需粉碎，使能通过二号筛，并混合均匀。
(1)冷浸法：取九龙藤药材粉末(样品产地：广东)约2.0g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加水50ml，密塞，冷浸，前6小时内时时振摇，再静置18小时，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(％)。结果见表2。
(2)热浸法：取九龙藤药材粉末(样品产地：广东)约2.0g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加入水50ml，塞紧,称定重量,静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶,密塞,再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中水溶性浸出物的含量(％)。结果见表2。
表2广东九龙藤药材的水溶性浸出物含量(％)
产地 冷浸法 热浸法
广东 5.2％ 10.2％
试验结果：在九龙藤药材中采用热浸法测得的浸出物含量比冷浸法高，故选择热浸法。
2.6.2.醇溶性浸出物测定：照醇溶性浸出物测定法项下热浸法测定。以乙醇(为95％乙醇，下同)、稀乙醇(为49.5％-50.5％乙醇，下同)、80％乙醇作溶剂。取九龙藤药材粉末(样品产地：广东)供试品约2.0g，精密称定，2份，分别置100ml的锥形瓶中，精密加入乙醇、稀乙醇、80％乙醇50ml，密塞，按1.2法试验。结果见表3。
表3九龙藤药材的醇溶性浸出物含量(％)
溶剂 浸出物
乙醇 12.4％
80％乙醇 18.4％
稀乙醇 21.9％
试验结果：根据表3测定结果比较，九龙藤药材在稀乙醇中浸出物要比其它溶剂中浸出物含量高，参照相关文献资料，九龙藤药材中所含的主要成分易溶于甲醇或乙醇，所以选择用醇溶性浸出物测定九龙藤药材的含量比较合理。因此，浸出物选择用醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂。
不同产地九龙藤药材浸出物测定：取来自3个不同产地的九龙藤药材(1：百色、2：广东、3：四川)粉末(过二号筛)约2.0g，精密称定，各2份，分别置100ml的锥形瓶中，精密加入稀乙醇50mL，塞紧，按2.6.1(2)法试验。结果见表1。
结论：根据以上醇溶性浸出物热浸法测定结果，最低值为21.3％，以最低测定值的80％设限，为17.0％，结合药材产地、采收季节及炮制加工等因素，故拟定本品醇溶性浸出物不得少于15.0％。建议收入标准正文。
2.7含量测定
2.7.1测定方法
2.7.1.1色谱条件的选择：
(1)色谱条件色谱柱：WELCHR0M C18(5um，250×4.6mm)；流动相：甲醇-0.1％磷酸(4∶96)；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：272nm。
(2)流动相：经过实验摸索，采用甲醇-0.1％磷酸溶液(5∶95)、甲醇-0.1％磷酸溶液(4∶96)为流动相分离；其中，甲醇-0.1％磷酸溶液(4∶96)能使待测成分没食子酸与其他杂质较好分离。
(3)检测波长：选择没食子酸的检测波长为272nm。
(4)理论塔板数：根据不同品牌色谱柱测定结果含量测定，理论塔板数按没食子酸峰计算，应不低于2000。
2.7.1.2供试品溶液的制备：
取本品粉末(过三号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.7.1.3对照品溶液的制备：取没食子酸对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含45ug的溶液，即得。
2.7.1.4提取方法的选择
取九龙藤(产地：广东)样品粉末约0.5g，2份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，一份加热回流2小时，一份超声处理(250W，频率35kHz)60min，放冷，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液和两份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图(见附图)。结果见下表4：
表4提取方法选择
Figure BDA0002364617870000091
结果表明，回流2小时的含量比超声1小时的含量高，因此，提取方法选择回流2h。
2.7.1.5取样量的考察
取九龙藤(产地：广东)样品粉末各为0.3g、0.5g、1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液和三份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图(见附图)。结果见下表5：
表5取样量考察
Figure BDA0002364617870000101
结果：取样1g的含量偏低，取样0.3g和0.5g的含量偏差不大，为了考虑取样的均匀性，故取样量选择取0.5g。
2.7.1.6提取时间的选择
取九龙藤(产地：广东)样品粉末约0.5g，3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流1小时、2小时、3小时，放冷，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取没食子酸对照品溶液和三份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图(见附图)。结果见下表6：
表6提取时间选择
Figure BDA0002364617870000102
结果表明，回流提取3小时含量较高，故提取时间选用3小时。
2.7.1.7提取溶剂的选择
取九龙藤(产地：广东)样品约0.5g，3份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入2mol/L盐酸溶液、3mol/L盐酸溶液、4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。分别精密吸取没食子酸对照品溶液和三份供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图(见附图)。结果见下表7：
表7提取溶剂的选择
Figure BDA0002364617870000103
Figure BDA0002364617870000111
结果表明，2mol/L盐酸溶液和3mol/L盐酸溶液的酸水解不完全，含量偏低，杂质较多，4mol/L盐酸溶液酸水解比较完全，含量较高，且与杂峰分离度较好。故提取溶剂选择4mol/L盐酸溶液。
2.7.2方法学验证
2.7.2.1专属性
取九龙藤(产地：广东)样品粉末，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，按上述色谱条件，分别取对照品溶液、样品溶液注入液相色谱仪，样品溶液色谱在对照品溶液色谱相应位置有相应的色谱峰，见专属性色谱图，图10。
2.7.2.2线性关系的考察
按上述色谱条件，精密吸取没食子酸对照品溶液(74.60128μg/ml)2μl，4μl，6μl，8μl，10μl，12μl依次注入液相色谱仪，测定峰面积。以没食子酸对照品色谱峰峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，没食子酸在0.1355～0.8129μg范围内具有良好的线性关系。结果见下表8：
表8没食子酸线性关系考察
Figure BDA0002364617870000112
将直线方程拟合为过原点的方程为：Y＝4013265.2000X。
取线性关系考察中最低点进样量(0.1355μg)与最高进样量(0.8129μg)分别代入两方程进行计算，所得峰面积相对偏差为0.99％(低)～0.08％(高)。由此可作截距近似为零，说明本品可用外标一点法进行含量测定结果计算。
2.7.2.3精密度试验
精密吸取对照品溶液10μl,重复进样6次，照上述色谱条件测定，测定对照品峰面积，记录色谱图(见附图)，求出相对标准偏差，结果表明精密度良好，结果见下表9。
表9没食子酸精密度实验结果
Figure BDA0002364617870000121
2.7.2.4重复性试验
取九龙藤(产地：广东)样品粉末，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定没食子酸的含量，结果见下表10及重复性色谱图，说明重复性好。
表10没食子酸重复性试验结果
Figure BDA0002364617870000122
2.7.2.5稳定性试验
取九龙藤(产地：广东)样品粉末，按质量标准草案中供试品溶液的制备方法制备供试品溶液。在室温下每隔一段时间进样10μl，照上述色谱条件测定，测定峰面积，记录色谱图(见附图)，计算含量，求相对标准偏差，结果表明，该样品在12小时内稳定(RSD＝0.23％)，结果见下表11。
表11没食子酸稳定性试验结果
Figure BDA0002364617870000131
2.7.2.6回收率试验
取已测定含量的九龙藤(产地：广东，没食子酸平均含量5.28mg/g)0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入含没食子酸对照品(0.025954272mg/ml)的4mol/L盐酸溶液50ml，按供试品溶液制备方法制备样品溶液，并按上述色谱条件测定没食子酸的含量，计算回收率，结果见下表12及准确度色谱图，说明有较好回收率。
表12没食子酸回收率试验数据(n＝6)
Figure BDA0002364617870000132
2.7.2.7耐用性
采用不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，分别测定了九龙藤(产地：广东)中没食子酸的含量，考察不同品牌的色谱柱的影响。色谱图见耐用性色谱图，含量测定结果见下表13。结果表明不同品牌十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱对含量测定无影响。
表13不同品牌色谱柱的测定结果
Figure BDA0002364617870000141
2.7.3样品测定
取3批样品，按质量标准草案方法测定没食子酸含量(结果见表14)。按下式计算含量：
Figure BDA0002364617870000142
式中：A样——供试品中没食子酸峰面积积分值
A对——没食子酸对照品峰面积积分值
C对——没食子酸对照品浓度(mg/ml)
M样——供试品取样量(g)
50—供试品稀释体积(ml)
表14不同产地样品中没食子酸的含测结果
Figure BDA0002364617870000143
结论：根据以上3个不同产地药材测定结果，含量最低值为0.52％，以最低测定值的80％设限，结合药材产地、采收季节、炮制加工及储存过程等因素，拟定本品按干燥品计算，含没食子酸(C7H6O5)不得少于0.30％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：包括(1)药材粉末显微鉴别；粉末为浅棕色或棕褐色，具缘纹孔导管，大多破碎，直径约10～300μm，草酸钙方晶众多，直径2～30μm，纤维细长，直径10～25μm，常成束或单个散在，有的周围细胞含草酸钙方晶，形成晶纤维；(2)药材水分、总灰分及浸出物含量范围：水分不得过15.0％，总灰分不得过9.0％，浸出物照醇溶性浸出物测定法(《中国药典》2015年版四部通则2201)项下的热浸法测定，用稀乙醇作溶剂，不得少于15.0％；(3)薄层色谱鉴别；供试品色谱中，应与没食子酸对照品溶液色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。
2.根据权利要求1所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述薄层色谱采用硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸为展开剂，以10％磷钼酸乙醇溶液作为显色剂。
3.根据权利要求2所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述薄层色谱按以下操作进行：取供试品溶液5-10μl，对照品溶液5-10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为4-6:3-5:1的甲苯-乙酸乙酯-甲酸溶液作为展开剂，展开，取出，晾干；10％磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求3所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述展开剂甲苯-乙酸乙酯-甲酸的体积比为5:4:1。
5.根据权利要求3所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述供试品采用以下方法制备：取供试品粉末置具塞锥形瓶中，加有机溶剂，超声处理，滤过，浓缩,作为供试品溶液。
6.根据权利要求5所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述供试品采用以下方法制备：取本品粗粉约2g，加三氯甲烷-甲醇(8:2)20ml超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解，作为供试品溶液。
7.根据权利要求3所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：所述对照品采用以下方法制备：取没食子酸对照品,加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
8.根据权利要求1所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：还包括含量测定，所述含量测定采用的流动相为甲醇-0.1％磷酸溶液，柱温25℃，检测波长为275nm。
9.根据权利要求8所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为4：96的甲醇-0.1％磷酸溶液为流动相；柱温25℃，流速为1.0ml/min；检测波长为272nm；理论板数按没食子酸峰计算不得低于2000，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
10.根据权利要求9所述的九龙藤药材的质量控制方法，其特征在于：取没食子酸对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含45ug的溶液，即得对照品溶液；取药材粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入4mol/L盐酸溶液50ml，密塞，称定重量，加热回流3小时，放冷，再称定重量，用4mol/L盐酸溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
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