CN114674970A - 一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，涉及中药鉴别技术领域，包括：将人参归脾丸剪碎，加甲醇加热回流，蒸干，残渣加水溶解，通过大孔吸附树脂柱，依次用水、20%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，用氨试液洗涤，加在中性氧化铝柱上，40%甲醇洗脱，残渣加甲醇溶解，作为供试品；对照品制备，薄层层析。本发明的有益效果是采用同一供试品、同一展开剂，在同一块薄层板上，鉴别人参、黄芪和酸枣仁3味药材，同时检查是否使用西洋参代替或掺伪人参药材、理枣仁或枳椇子代替酸枣仁投料，斑点清晰，分离度良好，方法快捷方便、高效准确、稳定可靠。

Description

一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法

技术领域

本发明涉及中药的薄层鉴别、检测技术领域，具体涉及一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法。

背景技术

人参归脾丸，益气养血，健脾养心。本品用于心脾两虚，气血不足所致的心悸、失眠健忘，食少体倦，面色萎黄以及脾不统血所致的便血、崩漏、带下诸证。

人参归脾丸的现行质量标准中只有显微鉴别和一个当归药材的薄层色谱鉴别，没有其他检测成分的要求。具体内容如下：

【处方】人参80g 白术(麸炒)160g 茯苓160g 甘草(蜜炙)40g 黄芪(蜜炙)80g当归160g 木香40g 远志(去心甘草炙)160g 龙眼肉160g 酸枣仁(炒)80g

【鉴别】取本品9g，剪碎，加三氯甲烷40ml，加热回流0.5小时，滤过，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5µl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

上述标准中仅收载显微和鉴别当归一味药材，标准过于简单，难于控制产品的内在质量。在中药复方制剂中，特别是传统的大蜜丸，由于含蜜较多，对药材的提取存在较大干扰，加之复方制剂处方药味较多，化学成分丰富，相互干扰较为严重，限于技术的难度，传统薄层鉴别模式一般是，有N项鉴别，就要制备N种供试品溶液，N块薄层板，N次展开。这样检测周期长，费时、费力，检测速度严重制约着中药现代化的发展速度。因此，寻找快速、简便、高效稳定、低成本的检测方法，是中药质量控制现代化必须突破的瓶颈。

人参归脾丸处方中人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎，性甘、微苦、微温，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺等功效；而西洋参为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根，性甘、微苦、凉，具有补气养阴，清热生津的功效。两味药材性味、功能主治、临床应用均不相同，文献资料表明化学物质基础也存在明显差异，若以西洋参用作人参进行投料，会给制剂有效性带来不确定的风险。人参和西洋参为同科属药材，外观性状与组织结构相似，容易混淆。同时，现行制剂标准中多以两者共有成分人参皂苷Rb₁、人参皂苷Rg₁和人参皂苷Re来进行质量控制，而西洋参中人参皂苷Re与人参皂苷Rb₁的含量远远高于人参，将西洋参边角料掺入人参投料生产，极易满足制剂中人参含量限度要求。因此，存在用西洋参或其边角料掺入人参投料的可能。并且，人参归脾丸处方中酸枣仁（为鼠李科植物酸枣Ziziphus jujuba Mill. var. spinosa(Bunge)Hu exH.F.Chou的干燥成熟种子），价格较高，市场其混淆品理枣仁（为鼠李科植物滇酸枣Ziziphus mauritiana lam.的干燥成熟种子）和枳椇子（为鼠李科植物枳椇Hovenia dulcis Thunnb.的干燥成熟种子）价格仅为酸枣仁的四分之一，三者外形相似，故不少企业使用理枣仁、枳椇子代替酸枣仁投料。

为了有效的控制产品质量、保证其临床疗效，且达到符合监管快速检验的效果，需要研究设计出能准确快速检测人参归脾丸中有效成分的检测方法。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，针对目前一个品种，如有N项鉴别，就要制备N种供试品，使用N块薄层板，展开N次的传统鉴别模式，本发明采用一板多信息薄层鉴别、检查方法，顾名思义就是在一块薄层板上，同一展开剂条件，同一显色与检视条件下，同一供试品溶液检视多种信息斑点，且该方法简便、高效、重复性好，准确度高。并通过对前处理的净化处理，解决传统的大蜜丸，由于含蜜较多，对药材的提取存在较大干扰问题，同时解决复方制剂处方药味较多，相似成分相互之间的干扰，同时检查处方药材伪品掺伪、代替生产投料可能，而提供一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法。

本发明的技术解决方案如下：

一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备：

取人参归脾丸，剪碎，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水，加热使溶解，通过大孔吸附树脂柱，依次用水、20%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，用氨试液洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解，加在中性氧化铝柱上，以40%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

S2、对照品溶液的制备：

取酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、拟人参皂苷F₁₁和黄芪甲苷对照品，分别加甲醇溶解，作为对照品溶液或对照品混合溶液；

S3、薄层层析：

吸取供试品溶液5~20μL、各对照品溶液2~5μL分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰，置日光下检视；

S4、结果判定：

供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点；

具体而言，供试品色谱中，在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，显示相同颜色的斑点，则表明使用西洋参投料；供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A对照品相应位置上，未显示相同颜色的斑点，则表明使用理枣仁或枳椇子投料。

本发明的一种具体实施方式中，步骤S1中，供试品溶液的制备具体包括：

取人参归脾丸4丸，剪碎，加甲醇150ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，通过大孔吸附树脂柱，依次用水70ml、20%乙醇70ml、70%乙醇70ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇2ml使溶解，加在中性氧化铝柱上，以40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；

本发明的一种具体实施方式中，大孔吸附树脂柱的内径为1.5cm，柱高为15cm，中性氧化铝柱的内径为1.5cm，粒径为100～200目，重量为8g。

本发明的一种具体实施方式中，人参归脾丸每1丸相当于生药量3.8g。

本发明的一种具体实施方式中，大孔吸附树脂柱选用D101大孔吸附树脂柱。

本发明的一种具体实施方式中，步骤S2中，对照品加甲醇制成每1ml甲醇含1mg对照品的溶液。

本发明的一种具体实施方式中，步骤S2中，对照品溶液为单个对照品溶液，或者为多个对照品的混合溶液。

本发明的一种具体实施方式中，步骤S3中，硅胶G薄层板选用高效硅胶G板，斑点成条带状。

本发明的一种具体实施方式中，步骤S3中，喷以5%香草醛硫酸试液，加热时间为2~6min。

本发明的原理为：申请人经查阅文献与实验证实，酸枣仁主要含酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B，而其伪品理枣仁与枳椇子均只含酸枣仁皂苷B，即不含酸枣仁皂苷A。若供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A对照品相应位置上，未显示相同颜色的斑点，则表明使用理枣仁或枳椇子投料，从而能够鉴别出人参归脾丸是否用理枣仁与枳椇子替代了酸枣仁。同时，人参的特征成分为人参皂苷Rf，西洋参的特征成分为拟人参皂苷F₁₁，故将拟人参皂苷F₁₁作为对照品，若供试品色谱中，在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，显示相同颜色的斑点，则表明使用西洋参投料。本发明通过上述原理建立该专属性成分的薄层鉴别方法，同时可以达到检测监督是否按处方工艺使用酸枣仁、人参投料生产人参归脾丸的目的。

本发明至少具有以下有益效果之一：

1、本发明采用一板多信息薄层鉴别、检查方法来鉴别人参归脾丸中的3种药材（人参、黄芪和酸枣仁）的7种信息斑点，能够有效的对处方中人参、黄芪、酸枣仁进行鉴别；同时能够鉴别处方药味以及检查处方药味掺伪、掺假投料，即能够鉴定出以西洋参掺伪人参、以理枣仁或枳椇子代替酸枣仁投料，从而为完善其质量标准，保证临床疗效，也为人参归脾丸日常的质量监督，提供了行之有效的方法。本发明通过在一块薄层板上，同一展开剂条件，同一显色与检视条件下，同一供试品溶液检视多种信息斑点，结果斑点清晰，分离度良好，方法简便、高效、重复性好，准确度高。

2、本发明样品处方药味较多，化学成分复杂，且含蜂蜜占比较大，对提取存在较大干扰，为达到去除蜂蜜，且各成分有效分离，首先依据本发明所提取成分均为皂苷类，其极性较大且易溶于热甲醇原理，故采用甲醇热回流，能充分提取人参、黄芪和酸枣仁中皂苷类成分；其次通过D101大孔吸附树脂，依次用水洗脱，可以有效除去供试品中的蜂蜜，用20%乙醇洗脱可有效除去供试品中黄酮类成分，用70%乙醇洗脱可收集到供试品中皂苷类成分；再次用水饱和正丁醇萃取，利用皂苷类成分易溶于正丁醇而除去其他小极性成分，进一步纯化供试品；最后利用中性氧化铝柱适合皂苷类成分分离而达到最终纯化目的。整套提取分离过程，科学合理，思路清晰，能有效的纯化供试品中皂苷类成分。

附图说明

图1为实施例1中人参归脾丸的薄层色谱图，其中，

1号为人参皂苷Rg₁、人参皂苷 Rb₁人参皂苷Re混合对照品溶液；

2号、3号为供试品，生产厂家为A公司；

4号、7号为供试品，生产厂家为B公司；

5号为拟人参皂苷F₁₁对照品溶液；

6号为人参皂苷Rf 对照品溶液；

8号、9号为供试品，生产厂家为C公司；

10号为酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B混合对照溶液；

11号为黄芪甲苷对照品溶液。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明做进一步详细说明。但本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本发明中所描述的溶液配比在无特殊说下的情况下，均为体积比。

实施例1

药品与试剂：

黄芪甲苷（批号：110781-202118，含量以96.8%计）、拟人参皂苷F₁₁（批号：110841-202108）、人参皂苷Rg₁（批号：110703-202034，含量以94.0%计）、人参皂苷Rb₁（批号：110704-202028，含量以93.1%计）、人参皂苷Re（批号：110754-202129，含量以96.0%计）、人参皂苷Rf（批号：111719-201806）、酸枣仁皂苷A（批号：110734-201713，含量以95.4%计）、酸枣仁皂苷B（ 批号：110814-201809，含量以94.9%计）均购自中国食品药品检定研究院。

人参归脾丸：在市场上分别购买了生产厂家为A公司、B公司以及C公司生产的人参归脾丸作为供试品，其中，A公司生产的人参归脾丸的批号分别为：170702、180302；B公司生产的人参归脾丸的批号分别为：20161202、20170202； C公司生产的人参归脾丸的批号分别为：17051006、17013852。

硅胶G高效薄层板。其它试剂均为分析纯。

取人参归脾丸4丸，剪碎，加甲醇150ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，通过D101大孔吸附树脂柱（内径为1.5cm，柱高为15cm)，依次用水70ml、20%乙醇70ml、70%乙醇70ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇2ml使溶解，加在中性氧化铝柱（100~200目，8g，内径1.5cm)上，以40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B对照品，加甲醇制每1ml各含1mg的混合溶液，取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁和人参皂苷Re对照品，加甲醇制每1ml各含1mg的混合溶液，取人参皂苷Rf、拟人参皂苷F₁₁和黄芪甲苷对照品，分别加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取供试品溶液10μl、各对照品溶液2μl分别点于同一高效硅胶G薄层板上，使成条带状，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰，置日光下检视。

结果判定：供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、黄芪甲苷、人参皂苷Rf对照品色谱相应的位置上，应显相同颜色的斑点；在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。

从图1中的薄层色谱板分析，A公司的2号与3号供试品未检出人参皂苷Rf对照品，而检出拟人参皂苷F₁₁对照品色谱斑点，未检出酸枣仁皂苷A色谱斑点，其他6种对照品色谱斑点均检出，即为使用西洋参边角料代替人参投料，理枣仁或枳椇子代替酸枣仁投料生产的人参归脾丸。

B公司4号供试品8种对照品均检出，即为西洋参边角料掺伪人参投料生产的人参归脾丸；7号供试品未检出拟人参皂苷F₁₁对照品，而其余7种对照品色谱斑点均检出，即为正品人参归脾丸。

C公司8号与9号供试品均未检出拟人参皂苷F₁₁对照品，而其余7种对照品色谱斑点均检出，即为正品人参归脾丸。

由此可以看出，本发明的方法能够鉴别人参归脾丸中7种信息斑点，能够有效的对处方中人参、黄芪、酸枣仁进行鉴别，并能够检出西洋参边角料中的的特征成分拟人参皂苷F₁₁，即可检测出处方药味掺伪、掺假投料，即能够鉴定出以西洋参掺伪人参、以理枣仁或枳椇子代替酸枣仁投料，从而为完善其质量标准，保证临床疗效，也为人参归脾丸日常的质量监督，提供了行之有效的方法。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备：

取人参归脾丸，剪碎，加甲醇，加热回流，滤过，滤液蒸干，残渣加水，加热使溶解，通过大孔吸附树脂柱，依次用水、20%乙醇、70%乙醇洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇液，用氨试液洗涤，取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇溶解，加在中性氧化铝柱上，以40%甲醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，作为供试品溶液；

S2、对照品溶液的制备：

取酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、拟人参皂苷F₁₁和黄芪甲苷对照品，加甲醇使溶解，作为对照品溶液或对照品混合溶液；

S3、薄层层析：

吸取供试品溶液5~20μl、各对照品溶液2~5μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以水饱和正丁醇为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰，置日光下检视；

S4、结果判定：

供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、黄芪甲苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，不得显示相同颜色的斑点。

2.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S1中，供试品溶液的制备具体包括：

取人参归脾丸4丸，剪碎，加甲醇150ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml，加热使溶解，通过大孔吸附树脂柱，依次用水70ml、20%乙醇70ml、70%乙醇70ml洗脱，收集70%乙醇洗脱液，蒸干，残渣加水30ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次30ml，取正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇2ml使溶解，加在中性氧化铝柱上，以40%甲醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。

3.根据权利要求2所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，大孔吸附树脂柱的内径为1.5cm，柱高为15cm，中性氧化铝柱的内径为1.5cm，粒径为100~200目，重量为8g。

4.根据权利要求2所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，人参归脾丸每1丸相当于生药量3.8g。

5.根据权利要求2所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，大孔吸附树脂柱选用D101大孔吸附树脂柱。

6.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S2中，对照品加甲醇制成每1ml甲醇含1mg对照品的溶液。

7.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S2中，对照品溶液为单个对照品溶液，或者，为多个对照品的混合溶液。

8.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S3中，硅胶G薄层板选用高效硅胶G板，斑点成条带状。

9.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S3中，喷以5%香草醛硫酸试液，加热时间为2~6min。

10.根据权利要求1所述的一种人参归脾丸一板多信息快速薄层色谱鉴别、检查方法，其特征在于，步骤S4中，供试品色谱中，在与拟人参皂苷F₁₁对照品相应的位置上，显示相同颜色的斑点，则表明使用西洋参投料；供试品色谱中，在与酸枣仁皂苷A对照品相应位置上，未显示相同颜色的斑点，则表明使用理枣仁或枳椇子投料。

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