BG107045A - Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, методи за получаването и използването им - Google Patents

Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, методи за получаването и използването им Download PDF

Info

Publication number
BG107045A
BG107045A BG107045A BG10704502A BG107045A BG 107045 A BG107045 A BG 107045A BG 107045 A BG107045 A BG 107045A BG 10704502 A BG10704502 A BG 10704502A BG 107045 A BG107045 A BG 107045A
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
antibody
human
seq
antigen
amino acid
Prior art date
Application number
BG107045A
Other languages
English (en)
Inventor
Tariq Ghayur
Richard Dixon
Michael Roguska
Michael White
Boris Labkovsky
Jochen Salfeld
Alexander Duncan
Simon BROCKLEHURST
John Mankovich
Celia Shorrock
Julia THOMPSON
Simon LENNARD
Original Assignee
Abbott Laboratories
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22665007&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=BG107045(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Abbott Laboratories filed Critical Abbott Laboratories
Publication of BG107045A publication Critical patent/BG107045A/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Abstract

Антителата се свързват с човешки интерлевкин-18 (hIL-18), по-специално с епитопа(ите) на човешки IL-18. Те могат да бъдат изцяло човешки, рекомбинантни или моноклонални антитела. Предпочитаните антитела имат висок афинитет към hIL-18 и неутрализиратактивността на hIL-18 in vitro и in vivo. Антитялото съгласно изобретението може да бъде с пълната дължина на антитяло или антигенсвързваща негова част. Изобретението се отнася също до метод за получаване и до метод за използване на посочените антитела. Антителата или частите от тях се използват в медицината за детекция на hIL-18 и за инхибиране на активността на hIL-18, например при пациенти, страдащи от заболявания, при които активността на hIL-18 е вредна.

Description

СХОДНИ ЗАЯВКИ
Тази заявка е не-временна заявка, претендираща за предимство с U.S. временен Сериен Номер 60/181,608, подадена на 10 Февруари 2000, озаглавена “Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18 и методи за получаване и използване”, съдържанието на която е въведено тук в литературата. Също така, съдържанията на всички цитирани източници, включително литературни източници, приети патенти и публикувани патентни заявки, цитирани в тази заявка са изрично включени тук в литературата.
ПРЕДШЕСТВАЩО НИВО НА ТЕХНИКАТА
Интерлевкин-18 (IL-18) първоначално е описан през 1989, като интерферон-гама индуциращ фактор (IGIF) и е про-възпалителен цитокин с разнообразни функции, освен това че индуцира интерферон гама. Тези биологични свойства включват активирането на NF-kb, експресията на Fas лиганд, индуцирането на СС и СХС хемокини и увеличена продукция на конкурентен вирус на човешкия имунодефицит.
Поради способността на IL-18 да индуцира продукцията на интерферон гама в Т-клетки и макрофаги, той играе важна роля в имунните отговори тип T-hl и има значение както за вродения, така и за придобития имунитет. IL-18 се отнася до семейството на IL-1, по
отношение и на структурата и на функцията. За преглед на структурата на IL-18, функцията му и биологичната му активност, виж например Dinarello, С. et. al. (1998) J. Leukoc. Biol. 63:658-654; Dinarello, C.A. (1999) Methods 19:121-132; and Dinarello, C.A. (1999) J. Allergy Clin. Immunol. 103:11-24.
Желателно е да се приложи модулиране на IL-18 в различите човешки имунни отговори. По-специално антитела, които свързват и неутрализират IL-18 са специално желателни. Още повече, in vivo използването на миши антитела срещу IL-18 е ограничено, поради проблеми свързани с въвеждането на миши антитела в хора, такива като кратко им време на полуживот в серума, неспособността да се насочат към определени човешки ефекторни функции и такива като появата на нежелателен човешки имунен отговор срещу миши антитела (реакция “човешки анти-миши антитела” (НАМА)).
Най-общо, опити да се преодолеят проблемите, свързани с използване на пълни миши антитела в хора, включват генетично конструирани антитела, които повече “наподобяват човешките”. Например, приготвят се химерни антитела, в които различни райони от веригите на антителата са с миши произход, а веригите на константните райони са с човешки произход (Junghans, et. al. (1990) Cancer Res. 50:1495-1502; Brown et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88:2663-2667; Kettleborough et al. (1991) Protein Engineering. 4:773-783). Обаче, тъй като тези химерни и наподобяващи човешките антитела, все още притежават някои миши последователности, те могат да доведат до нежелана имунна реакция, до реакцията на човешките анти-химерни антитела (НАМА), по специално когато се въвеждат за по-продължителни периоди.
Предпочитан инхибиторен агент на IL-18 към миши антитела или негови производни (например химерни или наподобяващи човешките антитела) може да е да е изцяло човешко анти-1Ь-18 антитяло, тъй като такъв агент няма да предизвика НАМА реакция, дори когато се използва за продължителни периоди. Обаче, такива антитела не са описани в областта и ето защо все още са необходими.
ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Това изобретение се отнася до съединения, такива като антитела, конто свързват човешки IL-18, и също до методи за тяхното получаване и използване, като съединения или антитела.
V В един аспект, изобретението се отнася до съединение, способно да свързва аминокиселинна последователност от човешки IL-18, или част от нея, където аминокиселината включва N- или Скрайната част на човешкия IL-18, които са осигурени от SEQ ID N0:70 или SEQ ID N0: 71. В един вариант, съединението е все още малка молекула, пептид, полипептид, антитяло или фрагмент от антитяло, като напълно човешко антитяло или фрагмент.
В друг аспект, изобретението се отнася до човешко моноклонално антитяло или до неговата антиген-свързващата част, способно да се свързва с човешкия IL-18. В други варианти, антитялото или неговия фрагмент се дисоциира от човешкия IL-18, като се определя от плазмон резонанса, със коя скоростна константа O.ls-Ι или по-ниска, lxlOE-2s-l или по-ниска, lxlOE-3s или по-ниска, lxlOE-4s-l или по-ниска, lxlOE-5s-l или по-ниска, lxlOE-6s-l или пониска, или инхнбира активността на човешкия IL-18 с IC 50 с 1х10Е-6 или по-ниска, 1х10Е-7 или по-ниска, 1х10Е-8 или по-ниска, 1х10Е-9 или по-ниска, 1х10Е-10 или по-ниска, или 1х10Е-11 или по-ниска.
В друг аспект, изобретението се отнася до изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, която се свързва с епитопа на човешки IL-18, включва аминокиселините последователности
PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID
N0:33) или част от една от тях. За предпочитане, антитялото е неутрализиращо антитяло. За предпочитане е, антитялото да е човешко антитяло. В различни варианти, антитялото е рекомбинантно антитяло (например едноверижно антитяло (scFv)) или моноклонално антитяло.
В други варианти, изолираното антитяло, или антигенсвързващата негова част, се свързва с епитоп на човешкия IL-18, или с част от една или друга аминокиселинна последователност, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 с скоростна константа koff 0.1s'1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с 1С50 от 1х10'6М или пониска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част, може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа k0ff lxlO’V или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL18 с 1С50 1х10’7М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия ILQ 1 със скоростна константа к0® 1х10‘ s' или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да о
инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50 1x10' М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа кок lxloV1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50 lxlO’^M или по-ниска. От друга страна, антитялото или антигенсвързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа kOff lxlO’V1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50 1хЮ10М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа к0# lxlO'V1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с IC50 lxlO'nM или пониска.
Друг аспект от изобретението се отнася до изолирано човешко антитяло, или антиген-свързваща негова част, включваща най-малко един вариабилен район CDR домен, способен да се свърже с епитопа на човешки IL-18. В сходни варианти, изолираното антитяло или ф антиген-свьрзваща негова част, има вариабилен район включващ тежката и/или леката верига CDR1 домен, CDR2 домен или CDR3 домен, както е показано в Таблица 6 или 9, който може да има, например едно или повече аминокиселинни замествания или инсерции на или в близост до която и да е от Rabat позициите, посочени в Таблици 7-8 и 10-11. В предпочитан вариант, изолираното антитяло, или антиген-свьрзващата негова част включва вариабилна област на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинна последователност SEQ ID N0:29 и вариабилния район на тежката верига (HCVR) включващ амниокиселинна последователност SEQ ID ч N0: 26. В друг предпочитан вариант, изолираното антитяло, или антиген-свързващата негова част, включва вариабилния район на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинна последователност SEQ ID N0:29 и вариабилния район на тежката верига (HCVR) включващ амниокиселинна последователност SEQIDNO: 27.
Друг аспект от изобретението се отнася до фармацевтични състави, включващи антитяло, или антиген-свьрзваща негова чест от изобретението и фармацевтично приемлив носител. В един вариант, фармацевтичният състав, по-нататък включва най-малко един допълнително терапевтично средство за лечение на нарушения при които активността HaIL-18 е вредна.
Друг аспект от изобретението се отнася до методи за получаване на антитела, които свързват човешки интерлевкин-18 (IL18). Изобретението осигурява метод, който включва излагането на репертоар от антитела на антиген-включващ епитоп на човешки IL18, включващ амникосиселинните последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO : 1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33) или част от една от двете, и селекция от репертоара на антитяло, което свързва епитоп на човешки IL-18, включващ аминокиселинните последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33) или част от една от двете.
В един вариант, репертоарът от антителата е in vivo репертоар в животно и методът включва имунизиране на животното с антиген, включващ епитоп от човешки IL-18, включващ амникосиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33), N- или C- терминалния участък на човешкия IL-18 (SEQ ID NOS: 70-71) или част от който и да е от тези епитопи. В друг вариант на изобретението, репертоарът от антитела е рекомбинантна библиотека на антитела и методът включва скрининг на библиотеката с антиген, включващ епитопът на IL-18, който включва амникосиселинните последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33), пептидите представени от секвенции SEQ ID NOS:31-32 и 34-60 или част от която и да е от дадените по-горе. За предпочитане е библиотеката да е библиотека на човешки антитела
В друг аспект, изобретението осигурява изолирана нуклеинова киселина, кодираща антитяло на който и да е от горе-описаните аспекти, например вариабилната област на тежката и/или леката верига, или част от тях. В сходни варианти, изолираната нуклеинова киселина, кодираща анти-IL-18 антитяло, или част от него е рекомбинантен експресионен вектор, например за експресия в компетентни клетки.
Така в друг аспект, изобретението се отнася до метод, който използва гореспоменатите компетентни клетки, в които се въвежда експресионния рекомбинанетн вектор, за да синтезират антитяло, което свързва човешки IL-18, чрез култивиране на компетентните клетки в хранителна среда, докато антитялото, което свързва човешки IL-18 не се синтезира от клетките.
Друг аспект от изобретението се отнася до метод за инхибиране С на активността на човешкия IL-18, включващ осъществяването на контакт между човешкия IL-18 с антитялото, или антигенсвьрзващата негова част от изобретението, като се инхибира активността на човешкия IL-18.
Един друг аспект на изобретението се отнася до метод за инхибиране на активността на човешки IL-18 в обект-човек, страдащ от нарушения при които активността на IL-18 е вредна, включващ въвеждане в човека на антитяло, или антиген-свързваща негова част от изобретението, така че активността на човешкия IL-18 в обектачовек се инхибира. В един друг вариант на изобретението, анти-1Ь-18 антитялото може да бъда въведено, например преди, по време на или след допълнително средство, като анти-IL-12 антитяло или антигенсвързващ негов фрагмент, метотрексат, анти-TNF антитяло или антиген-свързващ негов фрагмент, кортикостероиди, циклоспорин, рапамицин, FK506 или не-стероидни противо-вьзпалнтелно средство.
КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ФИГУРИТЕ
Фиг. 1 показва структурен модел на1Ь-18 (в центъра) сравнен с
IL-1 β (вляво) и IL1RA (вдясно).
Фиг. 2 показва структурен модел на IL-18 в комплекс с IL-18 рецептора, където пептидният епитоп, включващ амникосиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) от IL-18 е маркиран с тъмно сиво. Този пептиден епитоп е свързан със анти-ПЛ8 антитялото 2Е1.
Фиг. 3 показва структурен модел на IL-18, в комплекс със IL18 рецептор, където пептидният епитоп включващ амникосиселинна последователност VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33) е маркиран с тъмно сиво. Този пептиден епитоп е свързан със aHTH-IL-18 антитялото LT28.
Фиг. 4 показва структурен модел на IL-18, в комплекс със IL18 рецептор. Сферичните по-светли и тъмно-сивите епитопи представляват N- и С- терминалните контактни епитопи на IL-18 (съответно SEQ ID NOS: 70 и 71).
Фиг. 5 показва афинитетът натри различни aHTH-IL-18 антитела при неутрализирането на биологичните ефекти HaIL-18 като функция от инхибирането на INF-γ индукцията в KG1 клетки. IC50 стойностите за антителата 125Н (квадратчета) и за 2Е1 антитялото, като IgG антитяло (кръгчета) или като едно-верижно антитяло (триъгълничета), са съответно 2.1Е-10,9.0Е-10 и З.ЗЕ-9.
ПОДРОБНО ОПИСАНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Това изобретение се отнася до селекцията на пептиден епитоп, който е способен да генерира неутрализиращи антитела за IL18 медиираната сигнална трансдукция, получаване на антитела към тези епитопи и използването на такива антитела, включително използването за лечение на нарушения, включващи IL-18. Стратегията при избор на епитопи е последвана от конструиране на хомоложен модел на IL-18 белтъка и съответния негов рецептор. Комбинацията от визуални оценки и оценки на база на изчисления, се използва след това за избор на представителни пептидни сегменти за синтеза и генериране на антитяло. Аминокоселинните последователности, показани тук са представени със стандартни едно-буквени кодове.
Избор на епитопи на IL-18
Използва се Програмата Modeler (Sali, A. et al., Evolution of comparative protein modeling by MODELLER. Proteins: Struct., Fund, Genet. (1995), 23 (3), pp. 318-26. CODEN: PSFGEY; ISSN: 0887-3585) се използва за създаване на хомоложни модели за IL-18 и за IL-18 рецептора. Рентгенов кристално структурен анализ на IL-1 β (Priestle, J., et al. The three-dimensional structure of human interleukin-1 beta, refined to 2.0. ANG. resolution. Prog. Clin. Biol. Res. (1990), 349 (Cytokines Lipocortins Inflamation Differ.) pp. 297-307) и IL-IRA (Schreuder, H. et al., Refined crystal structure of the interleukin-1 receptor antagonist: presence of a disulfide link and a cis-proline. Eur. J. Biochem. (1995), 227 (3), pp. 838-47) са налични и са използвани като литература, която ръководи конструирането на модела на IL-18. IL-1 рецепторната структура (Vigers, G., et al., Cyrstal structure of the type-I interleukin-1 receptor complexed with interleukin-l.beta. Nature (London) (1997), 386 (6621), pp. 190-194) се използва за моделиране на IL-18 рецептора.
Структурният модел на изграждане HaIL-18 и IL-18 рецептора е описан по-нататък по-долу.
Конструиране на модел на IL-18
Цялата последователност е с по-малка хомология по отношение на тези два белтъка (IL-Ιβ и IL-18 ), обаче има неоспорими доказателства, че IL-18 е член на IL-1 семейството (виж Dinarello,
С.А., IL-18: THl-inducing, proinflammaory cytokine and new member of the IL-1 family. J. Allergy Clin. Immunol. (1999), 103 (1, Pt. 1), pp. 1124) и че като цяло пептидните вериги са много подобни. Както IL-Ιβ, така и IL-18 се секретира първоначално като форма-предшественик. И двата предшественика - на IL-1 β и на IL-18 се активират чрез IL-Ιβ конвертиращ ензим (ICE) (Fantuzzi, G. and Dinarello, C.A. Interleukin18 and interleukin-ip: two cytokine substrates for ICE (caspase-1). J. Clin. Immunol. (1999), 19 (1), pp. 1-11). Също е известно, че IL-1 рецептора и IL-18 рецептора са подобни (Dinarello, C.A. et al. C Overview of in terleukin-18: more than an interferon-γ inducing factor. J.
Leukocyte Biol. (1998), 63 (6), 658-664). IL-Ιβ е способен да се свърже с рецептора на IL-18. Като последен аргумент, IL-Ιβ и IL-1RA показват идентично нагъване, дори и цялостната структурна хомология със секвенциите на тези два белтъка е такава, каквато е хомологията със секвенцията на IL-18. Подредбата в секвенциите между тези три белтъка (т.е. IL-18, IL-Ιβ и IL1-RA) е конструирана ръчно с програмата InsightIL Тази подредба може да се види в Таблица 1.
ТАБЛИПА 1: ПОДРЕЖДАНЕ НА СЕКВЕНПИИТЕ ЗА IL-18. СХОДНИ С
ТЕЗИНАП.-1 BHIL-1RA
IL-18 : YFGK-LESKLS-VIRNLNDQVLFIDQGNRPLFE—DMT-DSDCRD—NAP IL-Ιβ: AP-VRS-LNCTLRDSQQKSLVMS-G—P-YELKALHLQGQ—D—MEQ IL-IRA: SSKMQA-FR—IWDVNQKTFYLR-N—N—QLVAGYLQGP—NVNLEE
IL-18 : RTIFIISMY-KDSQPRG-MAVTISVKCEKISTLSC----ENK-IISFKEM IL-Ιβ: QVVFSMS-FVQGEESNDKIPVALGLK-EKNLYLSCVLK-DDKPTLQLESV IL-IRA: KI — DV---VP-IEPH---ALFLGIH-GGICMCLSCV-KSGDETRLQLEAV
123
IL-18: NPPDNI-KDTKSDIIF-FQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACE-KERDL IL-Ιβ: DPKNYP-KK-KMEKRFVFNK-I-EINNKLEFESAQFPNWYISTS-QAENM IL-IRA: NITDLSENR-KQDKRFAFIR-S-DSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQ170
IL-18: FKLILKKED-ELGDRSIM-FTVQNED (SEQ ID N0: 4)
IL-Ιβ: -PVFL—GG-TKGGQDITDFTMQFVSS (SEQ ID NO: 5)
IL-1RA: -PVSL—TNMPDEGVMVTKFYFQED (SEQ ID NO: 6)
Хомологията между тези секвенции, е дадена в Таблица 2. Найгорният триъгълник е процент на точна секвенционна идентичност, а най-ниският триъгълник е процент консервативни хомоложни секвенции. Само части от целите секвенции дадени в Таблица 1 са представени в Таблица 2. Както е споменато по-горе, цялостната хомология е по-малка, но е в съответствие с тази на семейството.
ТАБЛИЦА 2: ХОМОЛОГИЯ МЕЖДУ СЕКтНППТИТЕ НА ЧЛЕНОВЕТЕ
НА 0-1 СЕМЕЙСТВОТО
Молекула IL-18 IL-Ιβ IL-IRA IL-1 Rec IL-18 Rec
IL-18 20.0 21.8
IL-1 β 53.5 27.5 И,
IL-1RA 50.6 54.4 w
IL-1 Rec 26.1
IL-18 Rec - - - 50.5 -
Получената IL-18 структура е показана на Фигура 1 заедно със тези на IL-Ιβ и IL-1RA. Цялостното качество, оценено чрез програмата WhatCheck (Hooft, R.W. et al, Errors in Protein Structures. Nature (1996) 381, pp. 272) е приемливо, но малко ниско (виж Таблица 3, по-долу).
ТАБЛИЦА 3: СТРУКТУРНИ Z-ТОЧКИ ОТ WHAT CHECK (ПОЛОЖИТЕЛНИТЕ СА ПО-ГОЛЕМИ ОТ СРЕДНИТЕ)
IL-Ιβ IL-1RA IL-1 Rec IL-18 (модел) IL-18 Rec (модел)
Качество на нагъване -1.6 -2.3 -3.6 -5.5 -5.7
Ramachandran плот -2.0 -1.3 -2.9 -3.3 -2.3
Нормалност на ротамерияга -1.6 -0.8 -1.5 -0.6 -0.6
Конформация на оста -1.7 +0.5 -1.6 -5.6 -2.7
Оценките на препоръчаните от What Check структури обаче са ниски, което предполага че този тип белтъчно нагъване е слабо представено в базата данни на препоръчаните структури. Въпреки това и въпреки нашата увереност за цялостното белтъчно нагъване, без съмнение ниската хомология на секвенциите допринася малко за перфектната крайна структура. Счита се обаче, че за целта при избора на епитопи за създаване на антитяло, тази структура е достатъчна.
Конструиране на модел на IL-18 рецептор
Структурата на IL-18 рецепторът също се прави от програмата L. Modler. Препоръчаните координати са на IL-1 рецептора. Както е при случая за цитокините, свързани с тези рецептори, цялостната идентичност на секвенциите е ниска, но достатъчна за създаване на подредба. Хомологията на секвенциите е представена в Таблица 2 по-горе. Подредбата се създава ръчно, като се използва програмата Insighfll и е представена в Таблица 4.
ТАБЛИЦА 4. СЕКВЕНЦИОННА ПОЛРЙЛБА НА РЕЦЕПТОРА НА IL-18
ОТНЕСЕНА КЪМ РЕЦЕПТОРА НА 0-1
IL-18 Rec 22 CTSRPHITWEGEPFYLKHCSCSLAHEIETTTKSWYKSSGSQEHVELNPR
IL-1 Rec CKEREEKIILVSSANEIDVRPCPLNPNEHKGTITWYKDD-SKTPVSTEQA 72 SSSRIALHDCVLEFWPVELNDTGSYFFQMKNYTQKWKLNVIRRNKHS---
IL-18 Rec
IL-1 Rec S—RIHQHKEKLWFVPAKVEDSGHYYCWRNSSYCLRIKISAKFVENEPN 119
IL-18 Rec -CFTERQVTSKIVEVKKFFQITCENSYYQTLVNST----SLYKNCKKLLL
IL-1 Rec LCYNAQAIFKQKLPVAGDGGLVCPYMEFFKNENNELPKLQWYKDCKPLLL 163
IL-18 Rec
IL-1 Rec DNIHFSGVKDRLIVMNVAEKHRGNYTCHASYTYLGKQYPITRVIEFITLE 209
IL-18 Rec DRSNIVPVLLGPKLNHVAVELGKNVRLNCSALLNEEDVIYWMF-GEE-NG
IL-1 Rec ENKPTRPVIVSPANETMEVDLGSQIQLICNVTGQLSDIAYWKWNGSVIDE 257
IL-18 Rec: SDPNIHEE-KEMRIMTPEGKWHASKVLRIENIGESNLNVLYNCTVASTGG
IL-1 Rec DDPVLGEDYYSVENPANKRRSTLITVLNISEIESRFYKHPFTCFAKNTHG 306
IL-18 Rec: TDTKSFILVRKAD (SEQ ID NO: 7)
IL-1 Rec IDAAYIQLIYPVT (SEQ ID NO: 8)
Цялостното качество на структурата на IL-18 рецептора опредено, като се използва програмата Modler, е приемливо, но отново точките са ниски по отношение на What Check (Таблица 3 погоре). Увереността, която може да бъде дадена върху цялостното нагъване се дължи най-напред на факта, че IL-Ιβ се свързва и с рецептора на IL-1 и с рецептора на IL-18. Ниската хомология между секвенциите със сигурност допринася до качеството на крайната структура, обаче, както е в случая при свързването с цитокините погоре, тази настояща структура се счита за достатъчна. Като w допълнителен контрол, пептидният епитоп за IL-18, като се свързва с
LT28 (SEQ ID NO: 33) е моделиран в комплекс с IL-18 рецептора (Фиг.З). Като краен контрол, моделът на IL-18/IL-18 рецепторния комплекс е изграден на базата на IL-ip/IL-l рецепторната структура (Фиг.4). Тази структура се получава, чрез нанасяне отгоре на цитокиновите структури и рецепторните структури. Нито един опит не е направен да се минимизира енергията на крайната структура
Селекция на пептидни епитопи ** Първоначалната цел на създаването на структурни модели е да бъде възможен изборът на подходящи пептиди, който да се осъществява първоначално на базата на визуална преценка. Взимат се под внимание областите на белтъците, разположени откъм разтворителя и на части от белтъците които са едновременно хидрофилни и разположени в комплекса рецептор/цитокин. Крайният елемент, който се взима под внимание се базира на селективен критерий. Селекцията на пептиден епитоп, ще бъде различна при секвенции от подобни участъци на други членове от семейството. На базата на този критерий, е избран пептид от IL-18. В допълнение, голямата област на припокриване (SEQ ID NOS: 31-60) представляваща пълната секвенция на IL-18 (SEQ ID N0: 61) също е направена и секвенцията на всички тези IL-18 подобни пептиди е показана на Таблица 5, по-долу.
ТАБЛИЦА 5. ИЗБРАНИ ПЕПТИДИ. ПРЕДСТАВЯЩИ IL-18
Пептидна секвенция SEQ ID NO:
PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1)
СPLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 2)
PLFEDMTDSDCR (SEQ ID NO: 3)
YFGKLESKLSVIRN (SEQ ID NO: 31)
ESKLSVIRNLNDQV (SEQ ID NO: 32)
VIRNLNDQVLFIDQ (LT28 binding epitope) (SEQ ID NO: 33)
NDQVLFIDQGNRPL (SEQ ID NO: 34)
FIDQGNRPLFEDMT (SEQ ID NO: 35)
NRPLFEDMTDSDCR (2E1 binding epitope) (SEQ ID NO: 36)
EDMTDSDCRDNAPR (SEQ ID NO: 37)
SDCRDNAPRTIFII (SEQ ID NO: 38)
NAPRTIFIISMYKD (SEQ ID NO: 39)
IFIISMYKDSQPRG (SEQ ID NO: 40)
MYKDSQPRGMAVTI (SEQ ID NO: 41)
QPRGMAVTISVKCE (SEQ ID NO: 42)
AVTISVKCEKISTL (SEQ ID NO: 43)
VKCEKISTLSCENK (SEQ ID NO: 44)
ISTLSCENKIISFK (SEQ ID NO: 45)
CENKIISFKEMNPP (SEQ ID NO: 46)
ISFKEMNPPDNIKD (SEQ ID NO: 47)
MNPPDNIKDTKSDI (SEQ ID NO: 48)
NIKDTKSDIIFFQR (SEQ ID NO: 49)
KSDIIFFQRSVPGH (SEQ ID NO: 50)
FFQRSVPGHDNKMQ (SEQ ID NO: 51)
VPGHDNKMQFESSS (SEQ ID NO: 52)
NKMQFESSSYEGYF (SEQ ID NO: 53)
ESSSYEGYFLACEK (SEQ ID NO: 54)
EGYFLACEKERDLF (SEQ ID NO: 55)
ACEKERDLFKLILK (SEQ ID NO: 56)
RDLFKLILKKEDEL (SEQ ID NO: 57)
LILKKEDELGDRSI (SEQ ID NO: 58)
EDELGDRSIMFTVQ (SEQ ID NO: 59)
DRSIMFTVQNED (SEQ ID NO: 60)
YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTD (SEQ ID NO: 61)
SDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEK LT28 and 2E1
ISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRS Епитопи,
VPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKK показани в болд
EDELGDRSIMFTVQNED
N-крайният цистеин на IL-18 пептида, представен на SEQ ID N0:2 не е част от нативната IL-18 последователност, но е добавен като свързващо място. Съответно, в нативната IL-18 аминокиселинна последователност, района съответстващ на избрания епитоп включва аминокиселинни остатъци имащи аминокиселинна последователност PLFEDMIDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1).
Схематичен модел на пептида на 11-18 (SEQ ID NO: 1) в комплекс с IL-18 рецептора е показан на Фиг.2, като този пептиден епитоп е маркиран в тъмно сиво.
Резултатния сбор на антигенните свойства се образува на базата на IL-18 пептидните секвенции, тъй като точно този пептид дава добър резултат. Този пептид се синтезира и се използва като епитоп за генериране на антитела в заек-гостоприемник. Данните от молекулното моделиране са получени, като се използва пептида на IL18 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) или YFGKLESKLSVIRN (SEQ ID NO: 31) при сравнение със сходен рецептор, т.е. IL-18 рецептора, който е показан на Фигури 2 и 3, осигуряващ индикация кои остатъци или съединения ще взаимодействат с неутрализиращото антитяло.
Като алтернативен метод, селекцията на пептиден епитоп може да бъде направена в отсъствие на каквото и да е молекулно моделиране, чрез скрининг на панел от представени пептиди, като се използва имуноселекцня. При един подход, всички представени припокриващите се пептиди могат да бъдат използвани. В поограничен подход, само определени епитопи са представени от панела на пептидите. В комбиниран подход, молекулното моделиране може да бъде използвано за идентифициране на епитопи, които са вероятно значими. Идентифицираната(те) епитопна(и) секвенции може да бъде използвана след това за конструиране на панел от пептиди (напр. припокриващи се пептиди) в които е представен идентичен епитоп(и). Методи за изработване на желани пептидни последователности, могат да бъдат направени, като се използват стандартни техники, известни в областта.
Веднъж избрани свързаните пептид или пептидите (напр. панел от припокриващи се пептиди) се провежда имуно-скрининга за сроден рецептор. От друга страна имуно-скрининг може да бъде проведен със избран сроден рецептор, така че пептид, който има определен свързващ афинитет може да бъде идентифициран. Всеки един от имуно-скринираннте белтъци, може да бъде използван или като желан рецептор или като желан пептид, който може да бъде идентифициран като кандидат за свързваща молекула за понататъшно изследване. Такива техники на “примамка” и “плячка” за анализиране на белтък-белтък взаимодействия, за идентифициране на кандидат-свързващи молекули и/или за скриниране на свързващите афинитета са описани в областта. Една от предпочитаните техники е приспособила използването на фаг, както е описано тук.
Анти-Пу-18 антитела
Изобретението осигурява антитела, също и части от тях, които се свързват с IL-18. За предпочитане е, антителата или техните части да са изолирани антитела. За предпочитане е антителата, или техните участъци да са неутрализиращи антитела.
* Терминът “антитяло”, както се използва тук се отнася до имуноглобулинови молекули, представени от четири полипептидни вериги, две тежки (Н) и две леки (L) вериги, свързани помежду си чрез дисулфидни мостове. Всяка тежка верига включва вариабилен район на тежката верига (съкратен тук като HCVR или VH) и константен район на тежката верига. Константният район на тежката верига е включва три домена, CHI, СН2 и СНЗ. Всяка лека верига е представена от вариабилен район на леката верига (съкратен тук като LCVR или VL) и константен район на леката верига. Константният район на леката верига включва един домен CL. VH и VL районите могат по-нататък да се подразделят на хипервариабилни, наречени още комплементарни определящи райони (CDR), разпръснати в районите, които сапо-консервативни, наречени рамкови райони (FR). Всеки VH и VL е изграден от три CDRs и четири FRs, разположени от посока на амино-кранщата към карбокси-краищата в следния ред: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Терминът “антиген-свьрзваща част” на антитялото (или за пократко “част от антитялото”), се използва тук, отнесен като един или повече фрагменти от антитяло, което запазва способността си да свързва специфично антигена (напр. hIL-18). Показано е, че антигенсвързващата функция на антитяло може да бъде изпълнена от фрагменти, разположени по цялото дължина на антитялото. Примери за свързващи фрагменти, спадащи към термина “антиген-свьрзваща част” на антитялото включват (i) Fab фрагмент, моновалентен фрагмент, включващ VL, VH, CL и СН1 домени, (ii) Fab(ab’)2 фрагмент, бивалентен фрагмент, включващ два Fab фрагмента, свързани чрез дисулфиден мост в подвижния район; (iii) Fd фрагмент, включващ VH и СН1 домени; (iv) Fv фрагмент, включващ VL и VH домени на единично рамо на антитяло; (v) dAb фрагмент (Ward et al, (1989 Nature 341:544-546), който включва VH домен; и (vi) изолирана комплементарен определящ район (CDR). По-нататък, въпреки че двата домена HaFv фрагмента, VL и VH са кодирани от отделни гени, те могат да бъдат свързани, чрез използване на рекомбинанантни методи, чрез синтетичен линкер, който им позволява да направят единична белтъчна верига, в която VL и VH районите се сдвояват за да образуват моновалентни молекули (известни като едноверижни Fv (зсру);виж напр. Bird et al., (1988) Science 242:423-426; и Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883). Такива едно-верижни антитела също могат да бъдат отнесени към термина “антигенсвързваща част” на антитялото. Други форми на едно-верижни антитела, като “двойни антитела” също се включват в този термин. “Двойните антитела”, представляват бивалентни, би-специфични антитела, в които VH и VL домените се експресират върху една полипептидна верига, но за сдвояването между двата домена на една и съща верига се използва линкер, който е много къс, ето защо насилват домените да се сдвоят с комплементарни домени на друга верига и създават две антиген-свързващи места (виж напр. Holliger, Р., et al., (1993) Proc. Natl., Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al., (1994) Structure 2:1121-1123).
Също така, по-нататък антитялото или неговият антигенсвързваща част могат да са част от по-големи имуноадхезионни молекули, образувани чрез ковалентни или не-ковалентни свързвания на антитялото или частта от антитялото с един или повече белтъка или пептиди. Примери за такива имуноадхезионни молекули включват използването на област от стрептавидинова сърцевина за да се направи тетрамерна scFv молекула (Kipriyanov, S.M., et al., (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101) и използването на цистеинов остатък, маркерен пептид и С-терминален tag полихистидин за да се направят бивалентни и биотинилирани scFv молекули (Kipriyanov, S.M., et al. (1994) Mol. Immunol. 31:1047-1058). Участъци на антитяло, като Fab и Fab(ab)2 фрагментите, могат да бъдат приготвени от цели антитела, като се използват конвенционални техники, като рязане съответно на целите молекули на антителата с папаин или пепсин. Още повече, антителата, участъците на антителата и имуноадхезионните молекули могат да бъдат получени като се използват стандартни ДНК техники, както е описано тук.
“Изолирано антитяло”, както се използва тук, има за цел да се отнася до антитяло, което е значително пречистено от други антитела, които имат различни специфичности към антигена (напр. изолирано антитяло, което специфично свързва hIL-18 и е значително пречистено от антитела, които специфично свързват други антигени освен IL-18). Изолирано антитяло, което специфично свързва hIL-18 може обаче да има крос-реактивност по отношение на други антигени, като IL-18 молекули от други видове. Още повече, изолираното антитяло, може да бъде значително пречистено от други клетъчни материали и/или химикали. По-нататък, изолирано антитяло, например изолирано човешко антитяло, може да бъде химерно антитяло където, напр. вариабилните райони, CDR домените или изотиповете произлизат от различни човешки източници и са присадени към родителското човешко антитяло.
“Съединение”, както се използва тук, се отнася до свързващи молекули, като антитела, напр. поликлонални антитела, моноклонални антитела, свързващи техни фрагменти (напр. Fab фрагменти), едноверижни антитела (напр. scFv), пептиди или имитатори на пептиди, както и не-пептидни базови молекули, като малки молекули, които имат лиганд-свързваща активност.
“Неутрализиращо антитяло”, както се използва тук (или “антитяло, което неутрализира активността на hIL-18”), има за цел да бъде отнесено към антитяло, чието свързване към hIL-18 води до инхибиране на биологичната активност на hIL-18. Това инхибиране на биологичната активност на hIL-18 може да бъде оценено по един или повече индикатори на hIL-18 биологичната активност. Тези индикатори на hIL-18 биологичната активност могат да бъдат оценени, чрез един или повече от няколкото стандартни in vitro или in vivo анализи, известни в областта.
Терминът “повърхностен плазмон резонанс”, както се използва тук, се отнася до оптичен феномен, който позволява анализ на действителното време на биоспецифични взаимодействия, чрез детекция на промените в концентрациите на белтъка, посредством биосензорен матрикс, например чрез използване на BIAcore система (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, NJ). За понататъшни описания, виж Jonsson, U., et. al., (1993) Ann.Biol.Clin. 51:19-26; Jonsson, U., et al. (1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson, B., et al. (1995) J. Mol. Recognit. 8:125-131; and Johnnson, B. et al. (1991) Anal. Biochem. 198:268-277.
Терминът “Koff”, използван тук, има за цел да се отнесе до скоростната константа на дисоциация на антитялото, от комплекса антиген-антитяло.
Терминът “К<Г, както се използва тук, има за цел да се отнесе към дисоциационна константа на специфичното взаимодействие антитяло-антиген.
В един аспект, изобретението се отнася до изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, която се свързва с епитопа на човешки IL-18, включва аминокиселините последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID N0:33) или част от който и да е от тези епитопи. За предпочитане, антитялото е неутрализиращо антитяло. За предпочитане е антитялото е човешко антитяло. В различни варианти, антитялото е рекомбинантно антитяло или моноклонално антитяло.
В други варианти, изолираното антитяло, или антигенсвързващата негова част, се свързва с епитоп на човешкия IL-18, включващ аминокиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1), където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоцинра от човешкия IL-18 със скоростна константа kog 0.1s'1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с 1С50 от 1х10,бМ или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата w негова част, може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxlO'V1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50 1х10'7М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа к0® lxlO'V или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50 1х10'8М или пониска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff ΙχΙοΛ'1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL18 с 1С50 1х10’9М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL18 със скоростна константа koff lxlO'V1 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С501хЮ10М или по-ниска. От друга страна, антитялото или антиген-свързващата негова част може да дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxlO'6s4 или по-ниска, която се определя чрез повърхностния плазмон Сг резонанс, или може да инхибира активността на човешки IL-18 с 1С50
1x10 ‘НМ или по-ниска.
Афинитетно зреене на идентифицирани анти-1Ьг-18 антитела
Изобретените също осигурява за следваща модификация на идентифицирано антитяло, като свързване към 1L-18 епитоп. Модификацията на идентифицирано анти-1Ь-18 антитяло е с цел да подобри свързващата и/или неутрализиращата активност.
Терапевтични състави и методи за въвеждане
Изобретението също осигурява фармацевтични състави, включващи антитяло, или антиген-свьрзваща негова част, от изобретението и фармацевтично приемлив носител. В един вариант, фармацевтичният състав по-нататък включва най-малко един допълнителен терапевтичен агент за лечение на нарушения, които са свързани с вредна активност наП>-18.
Антителата и частите на антителата от изобретението могат да бъдат въведени във фармацевтични състави, подходящи за въвеждане в обект. Обикновено, фармацевтичният състав включва антитяло или
част на антитяло от изобретението и фармацевтично приемлив носител. Както се използва тук “фармацевтично приемлив носител” включва който и да е от всички разтворители, дисперсионни среди, покрития, антибактериални и антигъбни вещества, изотоници и вещества, задържащи адсорбцията и други подобни физиологично съвместими вещества. Примери за фармацевтично приемливи носители включват един или повече от вода, физиологичен разтвор, фосфатен буфер, декстроза, глицерол, етанол и други подобни, както и техни комбинации. В повечето случаи, за предпочитане е да се включат изотонични агенти, например захари, полиалкохоли, като манитол, сорбитол, или натриев хлорид в състава. Фармацевтично приемливи носители могат по-нататък да включват малки количества от ауксиларни субстанции, като попиващи или емулгиращи вещества, презервативи или буфери, които увеличават живота или ефективността на антитялото или на частта на антитялото.
Антителата или частите на антителата от изобретението могат да бъдат въведени във фармацевтични състави, подходящи за парентерално въвеждане. За предпочитане, антитялото или частта на антитялото ще бъде приготвен като се инжектиращ се разтвор, съдържащ 0.1-250 mg/ml антитяло. Инжектиращият се разтвор може да включва също течна или лиофилизирана дозирана форма във кремъчна или кехлибарена фиолка, ампула или предварително напълнена спринцовка. Буферът може да бъде L-хистидин (1-50 тМ), оптимално 5-10 mM с pH 5.0 до 7.0 (оптимално pH 6.0). Други подходящи буфери включват, но не се ограничават до натриев сукцинат, натриев цитрат, натриев фосфат или калиев фосфат. Натриевият хлорид може да бъде използван за модифициране на токсичността на разтвора при концентрация от 0-300 шМ (оптимално 150 тМ за течна дозирана форма). Криопротектори могат да бъдат включени в лиофилизираните дозирани форми, принципно 0-10% захароза (оптимално 0.5 - 1.0%). Други подходящи криопротектори включват трехалоза и лактоза. Вещества придаващи обем могат да бъдат включени в лиофилизираната дозирана форма, принципно 110% манитол (оптимално 2-4%). Стабилизатори могат да бъдат включени и в течната и в лиофилизираната дозирана форми, принципно 1-50 тМ L-метионин (оптимално 5-10тМ) Други подходящи придаващи обем вещества, включват глицин, аргинин, може да бъде включен 0-0,05% полисорбат-80 (оптимално 0,0050,01%). Допълнителни сьрфактанти включват, но не се ограничават до полисорбат 20 и BRU сьрфактанти.
Съставите на това изобретение могат да бъдат разнообразни форми. Те включват например, течна, полу-твърда и твърда дозирани форми, като течни разтвори (напр. инжекциращи се и инфузиращи се разтвори), дисперсии или суспензии, таблети, хапчета, пудри, липозоми и супозитории. Предпочитаната форма, зависи от това по какъв начин се възнамерява въвеждането и терапевтичното приложение. Типични предпочитани състави са под формата на инжектиращи се и инфузиращи се разтвори, като състави подобни на тези, използвани за пасивна имунизация на хора с други антитела. ** Предпочитан начин на въвеждане е парентералния (напр. интравенозно, подкожно, интраперитонеално, вътремускулно). В предпочитан вариант, антитялото се въвежда чрез интравенозна инфузия или чрез инжекция. В друг предпочитан вариант, антитялото се въвежда чрез вътремускулно или подкожно инжектиране.
Терапевтичните състави обикновенно трябва да бъдат стерилни и стабилни при условията на производство и съхранение. Съставите могат да бъдат формулирани като разтвор, микроемулсия, дисперсия, липозома или други подредени структури, подходящи при високи концентрации на лекарствен препарат. Стерилни инжектиращи се разтвори могат да бъдат приготвени чрез въвеждане на активни съединения (т.е. антитяло или част на антитяло) в изискващото се количество в подходящ разтворител с една или в комбинация от съставките изброени по-горе, както се изисква и последваща стерилизация, чрез филтруване. Обикновено, дисперсиите се приготвят чрез въвеждане на активните съставки в стерилно средство, което съдържа базова дисперсионна среда и изисква други съставки от тези, изброени по-горе. В този случай на стерилни, лиофилизирани прахове, за приготвянето на стерилни инжекционни разтвори, предпочитани методи за приготвяне са изсушаване под вакуум и спрей-изсушаване, което води до получаване на прах от активна съставка, плюс която и да е допълнителна желана съставка от предходните стерилно филтрувани техни разтвори. Подходящата флуидност на разтвора може да бъде подържана, например, чрез използване на покрития, като лецитин, чрез поддържане на изисквания размер на частиците в случая на дисперсия и чрез използване на сьрфактанти. Продължителна абсорбция на инжектираните съединения може да бъде проведена чрез включване в състава на вещество, забавящо абсорбцията, например соли на моностеарата и желатин.
Антителата и частите на антителата от настоящето изобретение могат да бъдат въведени чрез много методи, известни в областта, въпреки че за много терапевтични приложения, предпочитаният пьт/начин на въвеждане е подкожно инжектиране, интравенозно инжектиране и инфузия. Както ще бъде оценено високо от специалистите в областта, пътят и/или начинът на въвеждане ще варира в зависимост от желания резултат. В определени варианти, активното съединение може да бъде приготвено с носител, който ще защитава съединението от бързо освобождаване, като формулировка за контролирано освобождаване, включваща импланти, трансдермални парчета и системи за микроенкапсулирано доставяне.
Биодеградиращи, биосьвместими полимери могат да бъдат използвани, като етилен винил ацетат, полианхидриди, полигликолова киселина, колаген, полиортоестери и полимлечна киселина. Много методи за приготвяне на такива формулировки са патентовани или всеобщо известни на специалистите в областта. Виж напр. Sustained and controlled release drug delivery systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
В определени варианти, антитяло или част на антитяло от изобретението може да бъде въведено орално, например с инертен ***· разтворител или чрез приемлив за ядене носител. Съединението (и другите съставки, ако са необходими) може също да бъде запечатано в твърда или мека желатинова капсула, компресирано в таблетки или включено директно в диетата на обектите. За орално терапевтично въвеждане, съединенията могат да бъдат включени в ексципиенти и използвани под формата на входящи таблетки, орални таблетки, таблетки, капсули, еликсири, суспензии, сиропи, лепенки и други подобни. За въвеждането, може да бъде необходимо да се покрие съединението с или да се въведе паралелно съединение с материал, който предпазва инактивирането.
f Допълнително активни съединения, могат също да бъдат въведени в съставите. В определени варианти, антитяло или част от антитялото от настоящето изобретение се формулира едновременно и/или се въвежда едновременно с едно или повече допълнителни терапевтични средства, които се използват за лечение на нарушения при които активността на IL-18 е вредна. Например, анти-hIL-lS антитяло или част от антитялото от изобретението, може да бъде формулирано едновременно и/или едновременно въведено с един или повече допълнителни антитела, които свързват други прицелни молекули (напр. антитела, които свързват други цитокини или клетъчно-повърхностни молекули). По-нататък, едно или повече антитела от изобретението могат да бъдат използвани в комбинация с два или повече от гореспоменатите терапевтични вещества. Такива комбинирани терапии могат предимно да приспособят по-ниски дози на въвежданите терапевтични вещества, като по този начин се избягва възможни токсични ефекти или усложнения, свързани с различни монотерапии.
Терапевтични приложения
Интерлевкин 18 играе важна роля при патологията, свързана с различни заболявания, включващи имунни и имуновьзпалителни елементи. Тези заболявания включват, но не се ограничават до, ревматоиден артрит, остеоартрит, младежки хроничен артрит, артрит на Lyme, псориазисен артрит, реактивен артрит, спондилоартропатия, системен лупус еритрематозус, болест на Crohn, язвен колит, чревно възпалително заболяване, инсулин зависим диабет, милетус, тироидит, астма, алергични заболявания, псориазис, дерматитна склеродерма, заболяване свързано с отхвърляне на трансплантант, отхвърляне на трансплантирани органи, остро и хронично иммунно заболяване, свързано с трансплантиране на органи, саркоидоза, атеросклероза, разпространяваща се интраваскуларна коаглутинация, болест на Kawasaki, болест на Grave, нефротичен синдром, синдром на хронична умора, грануломатозис на Wegner, Henoch-Schoenlin пурпуреа, микроскопичен ваксулит на бъбреците, хроничен активен хепатит, увеит, септичен шок, синдром на токсичен шок, сепсис синдром, кахексия, инфекциозни заболявания, паразитни заболявания, придобит имунодефицитен синдром, остър трансверзен миелит, хореа на Huntington, паркинсонова болест, болест на Алцхаймер, удар, първична жлъчна цироза, хемолитична анемия, малигнени образувания, сърдечни нарушения, инфаркт на миокарда, болест на Addison, спорадична болест, полигландуларен дефицит тип I и полигландуларен дефицит тип II, синдром на Schmidt, остър респираторен дистрес синдром при възрастните, алопециа, алопециа ареата, серонегативна артепатия, артропатия, болест на Retier, псориатозна артропатия, артропатия свързана с язвен колит, ентеропатичен синовит, артропатии свързани с chlamydia, yersinia и salmonella, спондилоаргопятия, атероматозна лест/атериосклерозис, атопична алергия, автоимунно булос заболяване, pemphigus vulgaris, pemphigus foliceus, пемфигоид, линейна IgA болест, автоимунна хемолитична анемия, Combs позитивна хемолитична анемия, придобита перникозна анемия, младежка перникозна анемия, миалгичен енцефалит/Royal Free Desease, хронична мукокутанеусена кандидоза, артерит на големите клетки, първичен склерозен хепатит, криптогенен имунен хепатит, синдром на придобитата имунна недостатъчност, заболявания, свързани със синдрома на придобитата имунна недостатъчност, хепатит С, обикновени вариации на имунодефицит (обикновени вариации на хипогамаглобулинемия), късна кардиомиопатия, женски стерилитет, овариално нарушение, нарушение в овариалното зреене, фиброзно белодробно заболяване, криогенен фиброзен алвеолит, пост-вьзпалително интерстициално белодробно заболяване, интерстициални пневмонити, болест на съединителната тъкан, свързана с интерстициални белодробни заболявания, смесена болест на съединителната тъкан, свързана с белодробни заболявания, системна склероза, свързана с интерстициални белодробни заболявания, ревматоиден артрит свързан с вътрешни белодробни заболявания, ситемен лупус еритроматозис, свързан с интерстициални белодробни заболявания, дерматомиозит/полимиозит, свързан с интерстициални белодробни заболявания, болест на Sjorgen, свързана с белодробни заболявания, анкилозен спондилит, свързан с белодробни заболявания, васкулитична дифузна белодробна болест, хемосидероза, свързана с белодробни заболявания, индуцирано от лекарствени препарати интерстициално белодробно заболяване, фиброза в резултат от радиация, бронхиолит облитеранс, хронична еозинофилна пневмония, белодробно заболяване, свързано с инфилтриране на лимфоци, слединфекциозно интерстициално белодробно заболяване, артрит от подагра, автоимунен хепатит, гип-1 автоимунен хепатит (класически автоимунен или лупоиден хепатит), тип-2 автоимунен хепатит (хепатит с анти-LKM антитела), автоимунно медиирана хипогликимия, тип В инсулин резистентност с acanthosis nigricans, хипопаратироидизъм, остро имунно заболяване, свързано с органна трансплантация, хронично имунно заболяване, свързано с органна трансплантация, остеоартроза, първичен склерозен холангит, псориазис тип 1, псориазис тип 2, идиопатична левкопения, автоимунна неутропения, бъбречно заболяване NOS, гломерулонефрит, микроскопски вазулит на бъбреците, болест на Lyme, диско иден лупус еритематозус, мъжки стерилитет идиопатичен или NOS, спермален автоимунитет, множествена склероза (всички подтипове), симпатикусова офталмиа, повишено белодробно налягане, вторично заболяване-следствие от болест на съединителната тъкан, синдром на Goodpasture, белодробна проява на полиартеритис нодоза, остри ревматични гадения, ревматоиден спондилит, болест на Still, системна склероза, синдром на Sjorgen, болест на Takayasu/артерит, автоимунна тромбоцитопения, идиопатична тромбоцитопения, автоимунна тироидна болест, хипетнроидизьм, гушев автоимунен хипотироидизьм (болест на Hashimoto), атрофия с автоимунен хипотироидизьм, първична миксоедема, факогенен увеит, първичен васкулит и витилго. Човешките антитела и частите на антителата от изобретението могат да бъдат използвани за лечение на хора, страдащи от автоимунни заболявания, по-специално тези свързани с възпалителни реакции, включително ревматоиден спондилит, алергия, автоимунен диабет, автоимунен уветит, остри чернодробни заболявания, хронични чернодробни заболявания, алергии и астма, умствени нарушения (напр. депресия и шизофрения), Th2- и Thl- тип медиирани заболявания.
За предпочитане, антителата от изобретението или антигенсвързващите техни части се използват за лечение на ревматоиден артрит, болест на Crohn, множествена склероза, инсулин зависим С диабет, мелитус и псориазис.
Антитяло или част на антитяло от изобретението може също да бъде въведено с едно или повече терапевтични вещества, които се използват за лечение наавтоимунни и възпалителни заболявания.
Антитела от изобретението или антиген свързващи техни части, могат да бъдат използвани самостоятелно или в комбинация за лечение на тези заболявания. Ще се разбере, че антителата от изобретението или антиген свързващите техни части могат да бъдат използвани самостоятелно или в комбинация с допълнителни вещества, напр. терапевтични средства, наречени допълнителни w вещества, които са избрани от специалистите в областта за техните цели. Например, допълнително вещество може да бъде терапевтично средство, познато в областта което се използва за лечение на заболяване или състояние, което се лекува от антитялото на настоящето изобретение. Допълнително вещество, може също да бъде вещество, което има полезно приложение за терапевтичния състав, напр. вещество, което оказва ефект върху вискозността на състава
По-нататък може да се разбере, че комбинациите, които са включени в това изобретение са тези комбинации, полезни за техните цели. Комбинациите които са част от това изобретение, могат да бъдат антитела от настоящето изобретение и най-малко едно допълнително вещество, избрано от списъка по-долу. Комбинацията може също да включва повече от едно допълнително вещество, например две или три допълнителни вещества, ако комбинацията е такава, че да се образува състав, който може да изпълнява необходимата функция.
Предпочитани комбинации са не-стероидни противовъзпалителни лекарствени препарати, които се отнасят като NSAIDS, които включват лекарствени препарати като ибупрофен. Други предпочитани комбинации са кортикостероиди, включващи преднизолон; добре известните странични ефекти на употребата на стероиди може да бъда намалена или даже елиминирана, чрез подсилване на стероидната доза, която е необходима, когато пациентите се лекуват в комбинация с анти-1Ь-18 антитела на изобретението. He-ограничаващи примери за терапевтични вещества за ревматоиден артрит, с които антитялото или частта на антитялото от изобретението могат да бъдат комбинирани, включват следните: цитокин супресиращ анти-възпалителен лекарствен препарат(и) (CSAIDs); антитела за или антагонисти на други човешки цитокини или растежни фактори, например, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-15, IL-16, ЕМАР-П, GM-CSF, FGF и PDGF. Антитела от изобретението или антиген-свързващи техни части могат да бъдат комбинирани с антитела за клетъчно повърхностни молекули като, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (В7.1), CD86 (В7.2), CD90 или техни лиганди включващи CD 154 (gp39 или CD40L).
Предпочитани комбинации от терапевтични средства могат да бъдат въведени на различни етапи от автоимунната и съответната възпалителна каскада; предпочитани примери включват TNF антагонист, като химерни, наподобяващи човешките или човешки
TNF антитела, D2E7 (PCT Publication No. WO 97/29131) , CA2 (Remicade™), CDP 571, и разтворимите TNF рецептори - p55 или p75, техни производни, (p75TNFRlgG (Enbrel™) или p55TNFRlgG (Lenercept) и също инхибитори на TNFa конвертиращия ензим (ТАСЕ); подобни инхибитори HaIL-Ι (инхибитори на Интерлевкин-1конвертиращия ензим, 1L-1RA и т.н.) могат да бъдат ефективни поради същите причини. Други предпочитани комбинации включват Интерлевкнн 11. Още една предпочитана комбинация са други ключови участници в автоимунния отговор, които могат да действат паралелно, в зависимост или съгласно функцията на IL-18; по* специално предпочитани са антагонисти на IL-12 включително IL-12 антитела или разтворими рецептори на IL-12 или IL-12 свързващи белтъци. Показано е, че IL-12 и IL-18 имат припокриващи се, но различни функции и комбинацията от антагонистите на двата могат да бъдат по-ефективни. Още една предпочитана комбинация са ненамаляващите инхибитори на анти-СО4. Също така, други предпочитани комбинации включват антагонисти на костимулаторния път CD 80 (В 7.1) или CD 86 (В 7.2), включващи антитела, разтворими рецептори или антагонисти на лигандите.
Антителата от изобретението, или антиген-свързващите техни участъци, могат също да бъдат комбинирани с вещества, такива като метотрексат, 6-МР, азатиоприен сулфасалазин, месалазин, олсалазин хлорохинин/хидроксихлорохин, пенициламин, ауротиомалат (вьтремускулен и орален), азатиоприн, кохицин, кортикостероиди (орални, инхалационни и локални инжекции), бета-2 адренорецепторни агонисти (салбутамол, тербуталин, салметерал), ксантини (теофилин, аминофилин), кромогликат, недокромил, кетотефен, ипратропиум и окситропиум, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофенолат мофетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, сох-2 инхибитори, сох-2 селективни инхибитори (напр.
рофекоксиб (VIOXX ™, Merck & Co., Inc.)) кортикостероиди като преднизолон, инхибитори на фосфодиестеразите, агонисти на аденозина, антитромбични вещества, инхибитори на комплемента, адренергични вещества, вещества, които се наместват в сигналните пътища на про-възпалителните цитокини, такива като TNFa или IL-1 (напр. IRAK, NIK, IKK, р38 или MAP киназни инхибитори), инхибитори на IL-1 β конвертиращите ензими, инхибитори на TNFa конвертиращите ензими (ТАСЕ), инхибитори на Т-клетьчните сигнални пътища, такива като киназни инхибитори, металопротеиназни инхибитори, сулфасалазин, азатиоприн, 6меркаптопурини, инхибитори на ангиотензин конвертиращия ензим, разтворими рецептори на цитокини и техни производни (напр. разтворимите р55 или р75 рецептори на TNF и техни производни p75INFRIgG (Enbrel ™ и p55TNFRIgG (Lenercept)), sIL-IRI, sIL-lRII, sIL-6R) и противовъзпалителни цитокини (напр. IL-4, IL-10, IL-11, IL13 и TGFP). Предпочитани комбинации включват метотрексат или лефлуномид и в случаите на среден или остър ревматоиден артрит, циклоспорин.
He-лимитиращи примери за терапевтични вещества за чревни възпалителни заболявания, с които антитяло или част на антитяло от изобретението може да бъде комбиниран включва следните: буденозид; епидермален растежен фактор; котикостероиди; циклоспорин; сулфасалазин; аминосалицилати; 6-меркаптопурин; азатиоприн; метронидазол; инхибитори на липоксигеназата; мазаламин; олсалазин; балсалазид; антиоксиданти; тромбоксанови инхибитори; IL-1 рецепторни антагонисти, анти-1Ь-1р моноклонални антитела; анти-1Ь-6 моноклонални антитела; растежни фактори; инхибитори на еластазата; пиридинил-имидазолови съединения; антитела разпознаващи или антагонисти на други човешки цитокини или растежни фактори, например, TNF, LT, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL35
12, IL-15, IL-16, EMAP-II, GM-CSF, FGF и PDGF. Антитела от изобретението, или антиген-свьрзващи техни части, могат да бъдат комбинирани с антитела към клетъчно повърхностни молекули, такива като CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 или техни лиганди. Антителата от изобретението, или антиген-свързващите техни части, могат също да бъдат комбинирани с вещества, такива като метотрексат, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофенолат мофетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, кортикостероиди като преднизолон, инхибитори на фосфодиестеразите, агонисти нааденозина, антитромбични вещества, инхибитори на комплемента, адренергични вещества, вещества, които се наместват в сигналните пътища на про-възпалителните цитокини, такива като TNFa или IL-1 (напр. IRAK, NIK, IKK, р38 или MAP киназни инхибитори), инхибитори на IL-Ιβ конвертиращите ензими, инхибитори на TNFa конвертиращите ензими, инхибитори на Тклетьчните сигнални пътища, такива като киназни инхибитори, металопротеиназни инхибитори, сулфасалазин, азатиоприн, 6меркаптопурини, инхибитори на ангиотензин конвертиращия ензим, разтворими рецептори на цитокини и техни производни (напр. разтворимите р55 или р75 рецептори на TNF, sIL-IRI, sIL-lRII, sIL6R) и противовъзпалителни цитокини (напр. IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 и TGF β).
Предпочитани примери за терапевтични вещества за болест на Crohn, в които антитялото или антиген свързващата негова част може да включва следните: TNF антагонисти, например анти-TNF анититела, D2E7 (РСТ Publication No. WO 97/29131), СА2 (Remicade™), CDP 571, TNFR-Ig конструкти, (p75TNFRlgG (Enbrel™) или p55TNFRlgG (Lenercept), инхибитори на PDE4. Антителата от изобретението или антиген-свързващите техни части, могат да бъдат комбинирани с кортикостероиди, например буденозид и дексаметазон. Антителата от изобретението и антиген-свързващите техни части могат също да бъдат комбинирани с вещества, като сулфасалазин 5-аминосалицилова киселина и олсалазин и с вещества, които се намесват в синтезата или действието на про-възпалителните цитокини, като IL-1, например инхибитори на Интерлевкин-ΐβконвертиращия ензим, инхибитори на IL-lra. Антителата от изобретението или антиген-свързващите техни участъци могат също да бъдат използвани с инхибитори на Т-клетьчните сигнални пътища, например тирозин киназнн инхибитори, 6-меркаптопуринн. Антителата от изобретението или антиген-свързващите техни участъци, могат да бъдат комбинирани с IL-11.
He-ограничаващи примери за терапевтични средства за мултитиплена склероза, с които антитялото или частта на антитялото от изобретението могат да бъдат комбинирани, включват следните: кортикостероиди; преднизолон; метилпреднизолон; азатиоприн; циклофосфамид; циклоспорин; метотрексат; 4-аминопиридин; тизанидин; интерферон-р1а (Авонекс, Биоген), интерферон-р1Ь (Бетасерон; Chorion/Berelex); Кополимер 1 (Сор-1; Копаксон; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); кислород под високо налягане; интравенозен имуноглобулин; клабрибин; антитела срещу антагонисти или други човешки цитокини или растежни фактори, например, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-15, IL-16, ЕМАР-П, GM-CSF, FGF и PDGF. Антитела от изобретението или антиген-свързващи техни части могат да бъдат комбинирани с антитела към клетъчно повърхностни молекули като, CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 или техни лиганди. Антителата от изобретението, или антиген-свързващите техни части, могат също да бъдат комбинирани с вещества, такива като метотрексат, циклоспорин, FK506, рапамицин, микофенолат мофетил, лефлуномид, NSAIDs, например, ибупрофен, кортикостероиди като преднизолон, инхибитори на фосфодиестеразите, агонисти на аденозина, антитромбични вещества, инхибитори на комплемента, адренергични вещества, вещества, които се наместват в сигналните пътища на про-възпалителните цитокини, такива като TNFa или IL-1 (напр. IRAK, NIK, IKK, р38 или MAP киназни инхибитори), инхибитори на IL-Ιβ конвертиращите ензими, ТАСЕ инхибитори, инхибитори на Т-клетъчните сигнални пътища, такива като киназни инхибитори, металопротеиназни инхибитори, сулфасалазин, азатиоприн, б-меркаптопурини, инхибитори на ангиотензин С конвертиращия ензим, разтворими рецептори на цитокини и техни производни (напр. разтворимите р55 или р75 рецептори на TNF, sILIRI, sIL-lRII, sIL-6R) и противовъзпалителни цитокини (напр. IL-4, IL-10,IL-13hTGF β).
Предпочитани примери за терапевтични агенти за множествена склероза, в които антитялото или антиген свързващата негова част може да бъде комбинирано да включва интерферон-β, например П*Пф1а и ППф1Ь; копаксон, кортикостероиди, инхибитори на IL-1, инхибитори HaTNF и антитела за CD40 лнганда и CD 80.
Фармацевтичните състави от изобретението могат да включват “терапевтично ефективно количество” или “профилактично ефективно количество” от антитяло или част на антитяло от изобретението. ‘Терапевтично ефективно количество” се отнася до количество ефективно по отношение на дозирането за необходим период от време, и с цел да се получи желания терапевтичен резултат. Терапевтично ефективното количество от антитяло или част на антитяло, може да варира съгласно фактори, като етап от заболяването, възраст, пол, тегло на индивида и способност на антитялото или частта на антитялото да осъществи желания отговор в индивида. Терапевтично ефективно количество може също да е това, при което всички токсични или вредни ефекти на антитялото или частта на антитялото са преодолени от терапевтично полезните ефекти. Обикновено, тъй като профилактичната доза се използва за обекти преди или в същия етап от заболяването, профилактично ефективното количество ще е по-малко от терапевтично ефективното количество.
Дозовият режим може да бъде нагласен, така че да осигури оптималният желан отговор (напр. терапевтичен или профилактичен отговор). Например, единичен болус може да бъде въведен, като няколко отделни дози могат да бъдат въведени извънредно или дозата може да бъде пропорционално редуцирана или увеличена както се налага при неотложните случаи на терапевтичната ситуация. Специално предимство е да се приготвят парентерални състави в единица дозирана форма за улеснение при въвеждането и еднообразието на дозата. Единица дозирана форма, както се използва тук, се отнася до физически дискретни единици разпределени, като единични дози за бозайници, които трябва да бъдат лекувани; всяка единица съдържа по-малко от вредното количество от активно съединение, изчислено така че да доведе до желания терапевтичен ефект, във връзка с желания фармацевтичен носител. Спецификацията на единиците дозирани форми от изобретението са продиктувани от и директно зависят от (а) уникалните характеристики на активните съединения и специфичните терапевтични или профилактични ефекти, които трябва да бъдат постигнати, и (б) ограниченията присъщи в областта при формулиране на съединения, като активно съединение за лечение на чувствителност в индивидите.
Примерен, не-ограничаващ диапазон на терапевтично или профилактично ефективно количество от антитяло или частта на антитяло от изобретението е 0.1-20 mg/kg, за предпочитане 1-10 mg/kg. Трябва да се отбележи, че дозовите стойности могат да варират с типа и остротата на състоянието което трябва да се облекчи. Трябва по-нататък да се разбере за всеки отделен обект, специфичния дозов режим, който трябва да бъде нагласен извънредно, съгласно индивидуалната необходимост и професионалното поставяне за въвеждане в човека или контрол на въвеждането на съставите, и че дозовите диапазони изложен тук са само примерни и нямат за цел да ограничат обхвата или практиката на заявените състави.
Методи за получаване на анти-1Ь-18 антитела
Ahth-IL-18 антителата от изобретението се приготвят, като се използват много методи, известни в областта за получаване на антитела и чрез използване на антигени, включващи пептидния епитоп на IL-18, описан в подглава I, т.е. епитоп на човешки IL-18, включващ аминокиселините LFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1).
Най-общо, методите от изобретението за получаване на антитяло, което се свързва с човешки интерлевкин - 18 (IL-18) включва:
излагане на репертоар от антитела на антиген включващ епитоп на човешки IL-18, включващ амникиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1), или негови части (напр. SEQ ID N0:3 и SEQIDNO:33); и избор от репертоара от антитела на антитяло, което се свързва с епитопа на човешки IL-18, включващ амникиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID N0:1), или негови части (напр. SEQ ID N0:3 и SEQ ID N0:33).
В един вариант, репертоарът от антителата е in vivo репертоар на животно и методът включва имунизиране на животното с антиген, включващ епитоп от човешки IL-18, включващ амнокиселинните последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1). В друг вариант на изобретението, репертоарът от антитела е рекомбинантна библиотека на антитела и методът включва скрининг на библиотеката с антиген, включващ епитопьт на IL-18, който включва амнокиселинните последователности PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) За предпочитане е библиотеката да е библиотека на човешки антитела.
Методи за имунизиране на животно с антиген за да се получат специфични антитела към антигена са добре известни в областта. IL18 антигенът, включващ епитоп на човешки IL-18, включващ аминокиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) може да бъде въведен в животно за да доведе до получаването на поликлонални антитела, които се свързват с епитопа, които могат да бъдат изолирани, чрез селекция от тези поликлонални антитела, които се свързват с епитопа (напр. чрез пропускане на поликлонален антисерум през колона, която съдържа пептида, включващ аминокиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) на hIL-18). Антигенът който се използва да доведе до образуването на поликлонални антитела може да бъда интактен (т.е. в пълната си дължина) hIL-18 или може да бъде част от hIL-18, който да включва съответният епитоп, например синтетичен пептид, включващ аминокиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) на hIL-18. По-нататък, моноклонални антитела срещу епитопа могат да бъдат приготвени от гореспоменатите животни, като се използва стандартна хибридомна технология и селекция на тези хибридоми, които секретират антитяло, което специфично се свързва със съответния епитоп, напр. чрез скрининг на хибридомите за пептиди, включващи аминокиселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) на hIL-18 и избор на антитела, които се свързват специфично с пептида.
In vitro методи също могат да бъдат използвани, за да се направят антитела от изобретението, като се скринира библиотека от антитела за да се идентифицира антитяло, което има желаната свързваща специфичност. Методи за такъв скрининг от рекомбинантни библиотеки на антитела са добре известни в областта и включват методи описани в, например Lander et al. U.S. Патент No. 5, 223.409; Kang et al. PCT Publication No. WO 92/18619; Dower et al. PCT Publication No. WO 91/17271; Winter et al. PCT Publication No. WO 92/20791; Markland et al. PCT Publication No. WO 92/15679; Breitling et al. PCT Publication No. WO 93/01288; McCafferty et al. PCT Publication No. WO 92/01047; Garrard et al. PCT Publication No. WO 92/09690; Fuchs et al. (1991) Bio/Technology 9:1370-1372; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3:81-85; Huse et al. (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty et al., Nature (1990) 348:552-554; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkins et al. (1992) J Mol Biol 226:889896; Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628; Gram et al. (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrad et al (1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; и Barbas et al. (1991) PNAS 88:7978-7982 и PCT Publication No. WO 97/29131, съдържанията на всеки от които са въведени тук в литературната справка
Библиотеката на рекомбинантните антитела може да бъда от лице, имунизирано с IL-18 или част на IL-18, включващ епитоп от амино киселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1). От друга страна, библиотеката от рекомбинантните антитела може да бъде от лице, което досега не е било имунизирано с IL-18, като библиотека на човешки антитела от човек, който не е бил имунизиран с човешки IL18. Антителата от изобретението са избрани чрез скрининг на библиотека на рекомбинантни антитела, с епипота от амино киселините PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) на човешкия IL18, за да се изберат тези антитела, които разпознават епитопа. Методи за провеждане на такъв скрининг и селекция са добре известни в
областта, както е описано в литературната справка от предишния параграф.
За да се изберат антитела от изобретението, които имат специфична свързваща активност по отношение HahIL-18, може да се използва добре познатият в областта метод на повърхностния плазмон резонанс. За да се изберат антитела, които имат специфична неутрализираща активност по отношение на hIL-18, могат да се използват стандартни методи, известни в областта за оценка на инхнбирането на активността на hIL-18. Също така в областта са известни методи за имунизиране на мишки, които са трансгенно променени, за да кодират репертоар от човешки имуноглобулияи и да са способни да експресират цели човешки антитела в отговор на имуноген (виж. напр. U.S.P.N.s 5,877,397 и 6,150,584).
Използване на анти-1Ь-18 антитела
Поради тяхната способност да се свързват с hIL-18, aHTH-hIL-18 антителата или техни участъци от изобретението могат да бъдат използвани за детекция на hIL-18 (напр. в биологични проби, като серум или плазма), като се прилага общоприет имуноанализ. като ензимно свързан имуносорбентен анализ (ELISA), радиоимуноанализ (RIA) или тъканна имунохистохимия. Изобретението осигурява метод за детекция на hIL-18 в биологична проба, включваща контакт на биологичната проба с антитяло или с част на антитяло от изобретението и детекция на антитялото (или частта на антитялото) свързано с hIL-18 и на несвързано антитяло (или част на антитяло), за да се направи по този начин детекция на hIL-18 в биологичната проба. Антитялото се бележи директно или индиректно със субстанция за детекция за да се улесни детекцията на свързаното или не-свьрзаното антитяло. Подходящи субстанции за детекция, включват различни ензими, простетични групи, флуоресцентни материали, луминисцентни материали и радиоактивни материали. Примери за подходящи ензими включват пероксидаза от хрян, алкална фосфатаза, β-галактозидаза или ацетилхолинестераза; примери за комплекси на подходящи простетични групи включват стрептавидин/биотин и авидин/биотин; примери за подходящи флуоресцентни материали включват умбелиферон, флуоресцин, флуоресцин изотиоцианат, родамин, дихлоротразиниламин флуоресцин, данзил хлорид или фикоеретрин; пример за луминисцентен материал включва луминол; и примери за подходящи радиоактивни материали включват l25I, 131I, 35S, 32Р, 33Р, или 3Н.
От друга страна, белязането на антителата, hIL-18 може да бъде анализиран в биологични течности, чрез конкурентен имуноанализ, с използване HarhIL-18 стандарти, белязани със субстанция за детекция и с небелязано анти-Ь1Ь-18 антитяло. При този анализ, биологичната проба, белязаните rhIL-18 стандарти и анти-Ь1Ь-18 антитяло се смесват и се определя количеството на белязания rh-IL-18 стандарт, който се свързва с небелязаното антитяло. Количеството на hIL-18 в биологичната проба е обратно пропорционално на количеството белязан rhIL-18 стандарт, свързан към анти-ЬЛ-18 антитялото.
Антителата и участъците на антителата от изобретението за предпочитане са способни да неутрализират активността на hIL-18 in vitro и in vivo. Съгласно този факт, такива антитела и участъци на антитела от изобретението могат да бъдат използвани за да инхибират активността HahIL-18, напр. в клетъчна култура, съдържаща hIL-18, в хора или в други бозайници, които имат IL-18, с който антитялото от изобретението може да крос-реагира. В един вариант, изобретението осигурява метод за инхибиране на активността на IL-18, включващ, осъществяването на контакт между човешкия IL-18 с антитялото или частта на антитялото от изобретението, като се инхибира активността на IL-18. За предпочитане, IL-18 е човешки IL-18. Например, в клетъчна култура, която съдържа или, която се предполага че съдържа hIL-18, антитялото или частта на антитялото от изобретението, могат да бъдат добавени към културалната среда за да се инхибира активността на hIL-18 в културата.
В друг вариант, изобретението осигурява метод за инхибиране на активоността на IL-18 в човек, страдащ от нарушения при които активността на IL-18 е вредна. Изобретението осигурява методи за инхибиране на активността на IL-18 в обект, страдащ от нарушение, който метод включва въвеждане в обект на антитяло или част на антитяло от изобретението, така че активността на IL-18 в обекта да бъда инхибирана. За предпочитане IL-18 е човешки IL-18 и обекта е човек. От друга страна, обекта може да бъде бозайник, който експресира IL-18, с който антитялото от изобретението крос-реагира. Още по-нататък обектът може да бъде бозайник, в който се въвежда hIL-18 (напр. чрез въвеждане на hIL-18 или чрез експресия на трансгенен hIL-18). Антитяло от изобретението може да бъде въведено в човек с терапевтични цели. Още повече, антитяло от изобретението може да бъде въведено в бозайник, не-човек, който експресира IL-18 с който антитялото крос-реагира, с ветеринарни цели или за създаване на животински модел на човешки заболявания. Що се отнася до последното, такива животински модели могат да се използват за оценка на терапевтичната ефективност на антителата от изобретението (напр. тестване на дозировките и времевият курс на въвеждане).
По-специално, като животински модел на активността на IL-18 в животно се използват NOD-SCID мишки, в които са трансплантирани мононуклеарни клетки на периферна човешка кръв.
След две до четири седмици след приемането на трансплантанта (което се определя, чрез измерването на титъра на човешки IgG в серума), мишките се инжектират с LPS (липополизахарид). След четири до щест часа по-късно се определя титъра на LPSиндуцирания интерферон-гама. Ефективността (силата) на анти-1Ь-18 антителата (напр. IL-18 неутрализиращите антитела) се определя чрез инжектиране на антиелата (ip) един ден преди LPS въвеждането, последвано от проследяване на тестваните животни за способността да редуцират титъра на интерферон-гама в серума (функцията на IL18 in vivo) в сравнение с контроли (виж напр. Holmes et al., Hybridoma, 19:363367 (2000)).
Както се използва тук, терминът “нарушение при което активността на IL-18 е вредна” има за цел да включи заболявания или други нарушения за които е показано или се подозира, че присъствието HaIL-18 в обекта, страдащ от нарушението, е отговорно за патофизиологията или за нарушението, или е фактор допринасящ за влошаване на нарушението. Съгласно това, нарушение, при което активността HaIL-18 е вредна, е нарушение, при което инхибирането на активността на IL-18 се очаква да облекчи симптомите и/или прогресията на нарушението. Такива нарушения могат да бъдат доказани, например, чрез увеличаване на концентрацията на IL-18 в ** биологичните течности на обекта, страдащ от нарушение (напр.
повишена концентрация на IL-18 в серума, плазмата, синовиалната течност и т.н. на обекта), който може да бъде детектиран, например чрез използване наанти-1Е-18 антитела, както е вписано по-горе.
Не-ограничаващи примери на нарушения, могат да бъдат лекувани с антитела от изобретението, отнасящи се до фармацевтични състави на антителата от изобретението, вкюлчително тези нарушения, дискутирани в главата по-горе.
Други характеристики на изобретението, които не са конструирани с цел да ограничат обхвата на изобретението, ще станат очевидни от следващите примери.
ПРИМЕРИ ЗА ИЗПЪЛНЕНИЕ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТО
Най-общо, практиката на настоящето изобретение използва, освен ако не показва, конвенционални техники на химията, молекулярната биология, рекомбинантната ДНК технология, PCR технологията, имунологията (по-специално напр. технологията, касаеща антителата) и всички необходими техники за клетъчно култивиране и отглеждане на животни, които са известни за специалистите в областта и са напълно обяснени в литературата. Виж напр. Sam brook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); DNA Cloning, Vols. 1 and 2, (D.N. Glover, Ed. 1985); Oligonucoeotide Synthesis (M.J. Gait, Ed. 1984); PCR Handbook Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Beaucage, Ed. John Wiley & Sons (1999) (Editor); Oxford Handbook of Nucleic Acid Structure, Neidle, Ed., Oxford Univ Press (1999); PCR Protocols: A Guide to Methods and Applications, Innis et al., Academic Press (1990); PCR Essential Techniques: Essential Techniques, Burke, Ed, John Wiley & Son Ltd (1996); The PCR Technique: RT-PCR, Siebert, Ed., Eaton Pub. Co. (1998); Quantitative PCR Protocols, Kochanowski et al., Eds., Humana Press (1999); Clinical Applications of PCR, Lo, Ed, Humana Press (1998); Antibody Engineering Protocols (Methods in Molecular Biology), 510, Paul, S., Humana Pr 1996; Antibody Engeneering A Practical Approach (Practical Approach Series, 169), McCafferty, Ed. Irl Pr (1996); Antibodies A Laboratory Manual, Harlow et al., Press, Pub (1991); Current Protocols in Molecular Biology, eds. Ausubel et al.., John Wiley & Sons (1992); Large-Scale Mammalian Cell Culture Technology, Lubiniecki, A., Ed., Marcel Dekker, Pub., (1990); and Manipulating the Mouse Embryo, Hogan et al., C.S.H.L. Press, Pub (1994).
В примерите са използвани гореспоменатите методи, освен ако не е оказано друго,
ПРИМЕР 1
Изолиране иа анти-1Ь-18 антитела
Антителата за hIL-18 се изолират, чрез скрининг на отделни scFv фагови библиотеки, приготвени, чрез използването на човешки VL и VH кДНКи от иРНК, получени от човешки В-клетки (например от сливиците или далака). Конструирането на библиотеката и методите за селекция са изложени във Vaughan et al. (1996) Nature Biotech. 14:309-314.
Библиотеките се скринират, като се използва пълната дължина на човешкия IL-18 (SEQ ID NO: 61), пептиден епитоп на IL-18 (SEQ ID NOS: 1-3 ) или панел от припокриващи се пептиди, включващи 15 амино киселини, представящи IL-18 (епитопната секвенция, представена в Таблица 5; SEQ ID NOS: 31-60). Специфичните антитела за IL-18 са избрани чрез покриване с антиген на имуноепруветките, като се използват стандартни процедури (Marks et al., (1991) J. Mol. Biol. 222:581-597). svFv библиотеките се скринират, като се използва IL-18, пептиден епитоп на IL-18 или панел от IL-18 пептиди, за да се създаде значителен брой IL-18 специфично свързващи се антитела. Няколко различни клонотипове се избират, определят се чрез моделите на ензимно рестрнктазно рязане и се потвърждават, чрез секвениране.
За да се идентифицират IL-18 антителата, които се свързват специфично с пълната дължина на IL-18 или с представителен неин пептид, супернатантата, съдържаща scFv се титрува върху биотин, свързан с IL-18, чрез ELISA и се определят характеристиките на свързване.
Две анти-1Ь-18 едно-верижни антитела са получени, едното е наречено 2Е1, независимо изолирано, чрез използването на пептиден епитоп и пептиден панел, и второто анти-1Ь-18 антитяло е наречено LT28, изолирано, чрез използване на пълната дължина на IL-18. Тези родителски анти-1Ь-18 антитела са избрани за по-нататъшно изследване и модификация.
ПРИМЕР 2
Афинитетно зреене на анти-1Ь-18 антителата
Версия на едно-верижното Fv антитяло 2Е1, което притежава доказана IL-18 свързваща способност, секвенциите на тежката и леката верига на което са показани в Таблица 6, е по-нататък модифицирано, с цел подобряване способността за неутрализиране на активността HaIL-18.
ТАБЛИЦА б СЕКВЕНПИЯ НА ЕДНО-ВЕРИЖНОТО АНТИ-Пи-18
АНТИТЯЛО 2Е1
2Е1 тежка верига (SEQ ID NO: 18)
CDR1 (SEQ ID NO: 9) QVQLVQSGAEVKKPGASMKVSCKTSGYTFTGYYIHWVRQAHGQGFEWI
CDR2 (SEQ ID NO: 10) CDR3 (SEQ ID NO: 11)
GRLNPTTGDANFAEKFQGRVALTRDTS I ST AYLQLDSLKS DDTAVY YCAGKEGAWGQG
TLVTVSS
ТАБЛИЦА 6 СЕкВЕПТТИЯ НА ЕЛНО-ВЕРИЖНОТО AHTH-IL-18 ____________АНТИТЯЛО 2Е1 (ПРОДЪЛЖЕНИЕ)_________________ 2Е1 лека верига (SEQ ID N0: 19)
CDR1 (SEQ ID NO: 12) CDR2 (SEQ ID NO: 13)
SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRHFYPNWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPS
CDR3 (SEQ ID NO: 14) GIPDRFSGSGSGNTGSLTITGAQAEDEADYYCGSRDSSGIHWFGGGTKVTVLG
Ahth-1L-18 антитялото 2E1 е независимо избрано, чрез използване наIL-18 пептид и след това, на панел от припокриващи се пептиди, представителни за IL-18 (вижТабл.6).
Специфичните амино-киселинни остатъци на вариабилния район на тежката верига, избрани за мутагенезиса са обобщени в Таблица 7. По-специално, по отношение на района на тежката верига, отделни аминокиселинни самествания са тествани в позиции НЗО, Н31, Н32, НЗЗ и Н35 от CR1, позициите Н52, Н52а, Н53, Н54, Н56 и Н58 от CDR2 и Н95, Н96, Н97 и Н98 от CDR3.
По отношение на леката верига, аминокиселинните остатъци, избрани за мутагенез caL30, L31, L32, L33 и L35 от CR1, позициите L50, L52, L53 и L55 от CDR2 и L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L95b, L96 и L97 от CDR3.
г
ТАБЛИЦА 7 АМИНОКИСЕЛИННИ ЗАМЕСТВАНИЯ В ТЕЖКАТА
ВЕРИГА, ВЪВЕДЕНИ В 2Е1
Мутации в тежката верига
CDR / Kabat Позиция : заместен остатък
CDR1
нзо A, R, N, D, С, G, Η, I, F, Р, S, or V
Н31 А, С, Н, S, Т, or Y
Н32 R, N, С, Η, Р, S, or Т
НЗЗ N, D, С, Q, Н, L, М, F, S, or V
Н35 N, D, L, or F
CDR2
Н52 Т
Н52а R, Q, L, S, T, or W
Н53 A, R, N, L, P, S, or Y
Н54 A, R, N, D, Q, L, K, Μ, P, S, or Y
Н56 A, R, N, C, G, Η, I, L, or F
Н58 A, R, Q, Ε, Η, I, L, K, M, F, S, T, Y, P, S, T, W, Y, or V
CDR3
Н95 A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
Н96 A, R, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
Н97 A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
Н98 R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
ТАБЛИЦА 8. АМИНОКИСЕЛИННИ ЗАМЕСТВАНИЯ В ЛЕКАТА
ВЕРИГА, ВЪВЕДЕНИ В 2Е1
Мутации в леката верига
CDR / Kabat Позиция заместен остатък
CDR1
L30 N, D, C, G, I, L, S, W, or Y
L31 R,N, D, C, G, Η, I, L, P, S, T, orY
L32 R,N, D, E, G, I, L, P, S,T, orV
L34 A, R, N, D, E, Η, I, L, K, M, F, P, S, T, Y, or V
CDR2
L50 A, Ν, I, L, F, P, S, W, Y, or V
L52 A, R, D, E, Η, I, L, M, F, P, S, T, or V
L53 A, R, C, I, L, K, Μ, P, S, or T
L55 A, R, N, D, C, G, Η, I, L, S, T, or Y
CDR3
L89 A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
L90 A, R, E, Q, Y, V, Η, P, W, or C
L91 R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
L92 A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
L93 A, R, E, Q, Y, V, Η, P, W, or C
L94 A, R, E, Q, Y, V, Η, P, W, or C
L95 A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
L95a A, R, E, Q, S, Y, V, Η, P, W, or C
L95b A, R, E, Q, S, Y, V, P, W, or C
L96 A, R, E, Q, S, Y, Η, P, W, or C
L97 A, R, E, Q, S, Y, Η, P, W, or C
Заместванията са въведени, като се използват стандартни техники (напр., както е описано в Taylor et al, Nucleic Acids Res. 13:8764-8758 (1985); Nakamaye et al., Nucleic Acids Res. 14:9679-9698 (1986); и Olsen et al., Methods in Enzymology, 217:189 (1993)). Накратко, олигонуклеотидни мутанти нададен кодон се синтезират за всяка от позициите, подлежаща на мутагенез. Едно-верижна ДНК матрица се приготвя от оригинален плазмид, носещ едноверижната версия на Fv на гена на антитялото 2Е1. Секвенцията от нуклеинови киселини на тежката и лека вериги на 2Е1 антитялото е осигурена във
SEQ ID NOS: 62 и 64. Мутантните олигонуклеотиди се използват за да се създаде комплементарна ДНК верига и накрая двойно-верижен плазмид, като по този начин се въвежда тази мутация или различни мутации в даден кодон от антитялото. По-специално, CDR3 районът на тежката и леката вериги на 2Е1 се променя, като се използва QuikChange Kit (Strategene), съгласно инструкциите на производителя.
Представителен брой клонове, после се получават от всяка мутагенна реакция (т.е. 7 до 36 клона) и тези представляват променена форма на родителското едноверижно 2Е1 антитяло, чиято секвенцията се експресира в бактерии и се пречиства за по-нататъшни in vitro и in vivo тестове, както е описано по-долу.
При друго скриниране, чрез използване на пълната дължина на IL-18 лиганд, второ анти-1Ь-18 антитяло е идентифицирано и избрано за по-нататъшни подобрения, като се използва афинитетно зреене. По-специално, чрез използване на техники, описани по-горе, LT28 антитялото, което има секвенция на тежката и леката вериги, показани в Таблица 9 (и нуклеиново-киселинната последователност, осигурена в SEQ IDNOS: 66 и 68) по-нататък се модифицира.
ТАБЛИЦА 9. СЕКВЕНЦИЯ НА ЕДНО-ВЕРИЖНОТО АНТИ-ПЯ8
АНТИТЯЛО LT28
LT28 Тежка верига (SEQ ID NO: 28)
CDR1 (SEQ ID NO: 20) CDR2 (SEQ ID NO: 21) LVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKG
CDR3 (SEQ ID NO: 22)
RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDDDDYDFPYWGRGTMVTVSS
ТАБЛИПА 9. СЕКВЕНПИЯ НА Е ЛНО-ВЕРИЖНОТО AHTH-IL-18 АНТИТЯЛО LT28 (ПРОДЪЛЖЕНИЕ) LT28 Лека верига (SEQ ID NO: 29)
CDR1 (SEQ ID NO: 23} CDR2 (SEQ ID NO: 24)
QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGINAVNWYQQLPGTAPKLLIYGNDQRPS
CDR3 (SEQ ID NO: 25) gvpdrfsgsksgtsaslaisglosedeadyycaawddslsgpvfgggtkltvlg
По отношение на района на тежката верига, аминокиселинни замествания са въведени в позиции Н31, Н32, НЗЗ и Н35 от CDR1, в позициите Н50, Н51, Н52, Н52а, Н53, Н54, Н56 и Н58 от CDR2 и Н95, Н96, Н97,Н98, Н99, Н100, ШООа, НЮ 1 и Н102 от CDR3.
По отношение на леката верига, аминокиселинните остатъци, избрани за мутациите, заместванията са въведени в позиции L30, L31, L32, L34 от CDR1, в позициите L50, L52, L53 и L55 от CDR2 и L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a> L95b, L96 и L97.
ТАБЛИЦА 10. АМИНОКИСЕЛ
ЗАМЕСТВАНИЯ. ВЪЛК ЛЕНИ
В ТЕЖКАТА ВЕРИГА НА LT 28
| Мутации в тежката верига
CDR / Rabat Позиция заместен остатък
CDR1
Н31 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, or С
Н32 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, or С
НЗЗ A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, or С
Н35 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, or С
CDR2
Н50 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н51 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н52 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н52а A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н53 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н54 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н56 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Н58 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, C
CDR3
Н95 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H96 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H97 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H98 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H99 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H100 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Hl 00a A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
H101 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
Hl 02 A, R, E, Q, S, Υ, V, Η, P, W, or C
ТАБЛИЦА 11. АМИНОКИСЕЛИННИ ЗАМЕСТВАНИЯ, ВЪДЕДЕНИ
В ЛЕКАТА ВЕРИГА НА LT 28
' Мутации в леката верига
CDRi Позиция заместен остатък
CDR1
L30 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L31 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L32 R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С, G
L34 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
CDR2
L50 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, С
L52 A, R, Е, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L53 A, R, Е, S, Υ, V, Η, Р, W, С, N
L55 А, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
CDR3
L89 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L90 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L91 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L92 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L93 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L94 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L95 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L95a A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L95b A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L96 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
L97 A, R, Е, Q, S, Υ, V, Η, Р, W, С
Заместванията са въведени, както е описано по-горе.
Представителен брой клонове са получени след това, от всяка реакция на мутагенез и те представляват променени родителски LT28 едноверижни антитела, секвенциите на които се експресират в бактерии и се пречистват по-натагък. както е описано по-долу.
ПРИМЕР 3
Свързваща активност на човешките антитела за IL·! 8
Реалното време за свързване на лиганда (биотинилиран рекомбинантен човешки IL-18 (rhIL-18) имобилизиран върху биосензорен матрикс) и аналитичен разтвор (антителата в разтвора) се измерват чрез повърхностен плазмон резонанс (SPR), като се използва BIAcore система (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Системата използва оптичните качества на SPR за детекция на промени в концентрацията на белтък в декстранов биосензорен матрикс. Белтъците са ковелентно свързани с декстрановия матрикс, като се знаят концентрациите. Антителата се инжектират през декстрановия матрикс и специфичното свързване на антителата и имобилизирания лиганд води до повишаване на белтъчната концентрация в матрикса и съответно до промяна в SPR сигнала. Тези промени в SPR сигнала се записват като резонансни единици (RU) и е показана зависимостта от времето нау-оста на сензиограмата.
За да се улесни имобилизирането на биотинилиран rhIL-18 върху биосензорния матрикс, към свободните амино групи на декстрановия матрикс се свързва ковалентно стрептавидин, като първо се активират карбоксилните групи на матрикса със 100 mM Nхидроксисукцинимид (NHS) и 400 mM N-eTiui-N’-(3диегиламинопропил) карбодиимид хидрохлорид (EDC). След това, стрептавидииьт се инжектира през активирания матрикс. Тридесет и пет микролитра стрептавидин (25pg/ml), разтворен в натриев ацетат, рН4.5 се инжектира през активирания биосензор и свободните амини на белтъка се свързват директно с активираните карбоксилни групи. Нереактивните матриксни EDC-естери се деактивират чрез инжектиране на 1М етаноламин. Стрептавидин-свързаните биосензорни чипове също са достъпни в търговската мрежа (PharmaciaBR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ).
Биотинилиран rhIL-18 се приготвя първо, чрез разтваряне на 5.0 mg биотин (N-хидроксисукцинимид естер на В-биотинил-еаминокапроевата киселина, Beohringer Mannheim Cat. No. 1008 960) в 500 μΐ диметилсулфоксид за да се направи разтвор 10 mg/ml. Десет микролитра биотин се добавят за 1 ml от rhIL-18 (2.65 mg/ml) за моларно съотношение 2:1 биотин спрямо rhIL-18. Реакционната смес се разбърква внимателно и се инкубира за два часа на стайна температура на тъмно. PD-10 колона, Sephadex G-25M (Pharmacia Catalog No. 17-0851-01) се еквилибрира с 25 ml изстуден PBS и се натоварва с 2 ml rh-IL-18-биотин на колона. Колоната се елуира с 10 х 1 ml изстуден PBS. Фракциите се събират и се отчита OD280 (1.0 OD = 1.25 mg/ml). Подходящите фракции се събират и се съхраняват на 80 0 С преди употреба.
Биотинилираният rhIL-18 за да бъде имобилнзиран върху матрикс, чрез стрептавидин, е разреден в PBS разделящ буфер (Gibco Cat. No. 14190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY). Към него се добавят 0.05% (BIAcore), сьрфактант Р20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). За да се определи капацитета на rhIL-18специфичните антитела на свързване с биотинилиран rhIL-18, се провежда анализ на свързване както следва. Аликвоти от биотинилиран rhIL-18 (25 пМ, 10 μΐ аликвоти) се инжектират през стрептавидин-свързан декстранов матрикс със скорост на потока 5 μΙ/min. Преди инжектирането на белтъка и непосредствено след това, през всяка клетка се пропуска само PBS буфер. Чистата разлика в сигнала между базовата линия и приблизително 30 секунди след инжектирането на биотинилиран rhIL-18 се взема, за да се покаже свързващата стойност. Измерва се директното свързване на rhIL-18специфичното антитяло. Антителата (20 με/ml) се разреждат в PBS разделящ буфер и 25 μΐ аликвоти се инжектират през имобилизираните белтъчни матрикси със скорост на потока 5 μΙ/min. Преди инжектирането на антитяло и непосредствено след това, през всяка клетка се пропуска само PBS. Чистата разлика на сигнала на базовата линия и сигнала след инжектирането на антитялото се взема за да се покаже свързващата стойност на всяка проба. Биосензорните матрикси се регенерират, като се използва 100 mM НС1 преди инжектирането на следващата проба. За да се установят скоростната константа (Koff), скоростната константа (Коп), асоциационната скоростна константа (Ка) и дисоциационна скоростна константа (КД се прави оценка чрез BIAcore кинетичен софтуер (версия 2.1).
Представителни резултати за подобрен кандидат на анти-1Ь-18 антитяло, свързващо се към биотинилиран rhIL-18, в сравнение с родителските антитела 2Е1 и LT28 (и миши контроли), са представени в Таблица 12 по-долу. За всяко сравнение, IC50 стойностите от клетъчно-неутрализиращ анализ са също включени и са описани в Пример 4. Всички клонове се приготвят, като едноверижни Fv антитела, за тестване се провеждат чрез Biacore анализ и клетьчнобазиран анализ, описан по-долу. Родителските клонове включват немутирали родителски тежка и лека верига, където мутанти на единична верига съдържат една родителска верига и една мутирала верига, където мутантната верига е определена, независимо дали е тежка (Н) или лека (L), в зависимост от Kabat позицията и природата на амииокиселинното заместване.
ТАБЛИЦА 12. СВЪРЗВАНЕ НА АШПИ-1Ь-18 АНТИТЕЛА, С ПРОИЗХОД
OT2E1HLTZ8
Антитяло Клон Скорост на Скорост на Kd свързване дисоцииране (MV) (s’1) IC50 стойност*
2Е1 родителски и мутантни
2Е1 poflHTencicoScFv 2.6Е+3 6.42Е-03 1.5Е-07 З.ЗЕ-8М
2^Ί роднтелск^З® 9.0Е-10М
L34S 1.69Е-04 1.5Е-8М
H53R 2.34Е-03 2.5Е-8М
H53Y - 1.5Е-8М
H58Q - 1.6Е-8М
L34S + H53R (2E1RS) 2.7Е+03 6.82Е-05 2.3Е-08 3.0Е-09М
L34S + H58Q - 1.5Е-8М
L34S + H53Y 5.28Е-05 6.7Е-9М
H53R + H58Q - 1.2Е-8М
H53Y + H58Q - 1.2Е-8М
L34S + H53R + H58Q 6.18Е-05 2.8Е-9М
L34S + H53Y + H58Q 8.0Е-9М
L90C 4х
L93C 2-4х
L94P, Q, or R 2-4х
L95R, Y 3-8х
L95bE, W 2-4х
LT28 род ителски и мутантни
LT28 родителско 1.3Е+04 4.8Е-04 3.9Е-08 9.0Е-8М
H54Q 2-Зх
H58W 2-Зх
1
125-2Н 1.7Е+05 1.1Е-04 6.2Е-10 2.Е-10М
318-М 1.2Е+04 1.1Е-04 9.6Е-09 4.0Е-9М
Показани са някои стойности на подобрено нагъване, в сравнение с роднгелкиге.
ПРИМЕР 4
Неутрализираща активност на анти-1Ь-18 антителата
За да се изследва неутрализиращата активност на човешките анти-1Ь-18 антитела от изобретението, се провежда изкуствен анализ на реорганизация, за контрол на активността HaIL-18.
Накратко, в анализа се използват KG1 клетки (ATCC #CCL-246, миелогенни левкимични костно мозъчни клетки), които се култивират, съгласно стандартни техники (напр. чрез използването на RPMI 1640 културална среда Gibco # 21870-076; (допълнена с 10 % фетален говежди серум (BioWhittaker#14-501F); 2mM L-glutamine (Gibco#25030-081); 50 единици/ml пеницилин, 50ug/ml стрептомицин (Gibco#15070-063); и 0,75% натриев бикарбонат.
За да се тества за неутрализиране на IL-18, Зх10Е5 KG-1 клетки, стимулирани с 20 ng/ml hTNF-алфа (Lot#19130132) се инкубират с 50 ul анти-IL-lS антитяло (4 х Конц.) и 50 ul IL-18 (4 х Конц. = 8ng/ml) и се инкубират на 37 0 С за 1 час или 16-20 часа. За да се определи количествено неутрализирането на IL-18, което се проявява като функция от индуцирането на hINF-гама продукцията, се провежда ELISA, като се използват налични в търговската мрежа ELISA китове (R&D #DIF00/Endogen # EH-IFNG), съгласно инструкциите на производителя и hINF-гама продукцията се изчислява (pg/ml) от стандартна крива
При всичките четири мутантни антитела, т.е. получени от 2Е1 L34S, H53R, H53Y и H58Q, се наблюдава по-висока степен на неутрализиране на IL-18, в сравнение с родителското 2Е1 антитяло (виж Таблица 12). Подобренията в IC50 стойностите, при използване на KG-1 анализа са от порядъка от 2 до 5 пъти, и са определени чрез BIAcore анализ, подобно на подобрените резултати за свързването.
Много комбинации от мутантни клонове също са направени и тествани и тези данни са обобщени в Таблица 12. Най-добрият комбиниран клон L34S-K35R показва по-голямо от 10 пъти подобрение, в сравнение с родителското антитяло 2Е1 и при двата анализа - KG-1 анализа и BIAcore анализа. Полученото антитяло се означава с името 2E1RS.
Няколко други мутантни клона на 2Е1, показват подобрена сила, т.е. подобрена способност за неутрализиране на IL-18, както е определено от KG-1 анализа. Мутантът L95Y показва от 5 до 8 пъти по-добри IC50 стойности, в сравнение с 2Е1 антитялото. Няколко други мутанти, показват от 2 до 3 пъти подобрение и това са 2Е1 мутантите Н96А, H96Q, H96S, H98S, L90C, L90W, L93C, L94P, L94Q, L94R, L94W, L95R, L95aA, L95aH, L95aP, L95aR, L95aW, L95bE, L95bW, L95bY, L97C и L97E.
Също се сравнява свързването на 2Е1 под формата на ScFv антитяло или IgG антитяло (виж Фиг. 5).
Още по-нататък, два мутанта, произлизащи от LT28 родител, биха подобрили неутрализирането HaIL-18 активността, в сравнение с родителското антитяло.
Тези резултати показват, че напълно неутрализиращи човешкия IL-18 антитела, могат да бъдат получени, като се използват методите и съставите на изобретението.
ЕКВИВАДЕНГИ
Специалистите в областта ще разпознаят, или ще бъдат способни да разберат, като използват не повече от рутинни експерименти, многото еквиваленти на специфичните варианти от изобретението, описани тук. Такива еквиваленти са с цел да влезнат в обхвата на дадените по-долу патентни претенции.

Claims (59)

  1. ПАТЕНТНИ ПРЕТЕЕ
    Ill'll
    1. Съединение, способно да се свързва с аминокиселинната последователност на човешки IL-18, или част от нея, където аминокиселинната последователност включва секвенция, избрана от групата включваща SEQ ГО N0:67 и SEQ ID N0: 68.
  2. 2. Съединение, съгласно претенция 1, където споменатото съединение е избрано от групата, включваща малка молекула, пептид, полипептид, антитяло и фрагмент от антитяло.
  3. 3. Съединение, съгласно претенция 2, където споменатото антитяло, или фрагмент от антитяло е изцяло човешко.
  4. 4. Човешко моноклонално антитяло, или антиген-свързваща негова част, способна да се свързва с човешкия IL-18.
  5. 5. Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа кок 0.1 s'1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 **М или по-малка.
  6. 6. Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа k1х10‘‘ s или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 ’7М или по-малка.
  7. 7Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxlO'3 s1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 '8М или по-малка.
  8. 8.Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koft- lxlO’4 s1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 ’9М или по-малка
  9. 9-Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциираот човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxlO'5 s’1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 ‘10М или по-малка
  10. 10.Антитялото, съгласно претенция 4, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxlO'6 s“ или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или която инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 ПМ или по-малка
    П.Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, което се свързва с епитопа на човешки IL-18, или с част от него, включващо амннокиселинна секвенция, избрана от групата, включваща SEQ П) N0:3 и SEQ П) N0:33.
  11. 12. Антитялото или антиген-свързващата негова част, съгласно претенция 11, където антитялото е неутрализиращо антитяло.
  12. 13. Антитялото или антиген-свързващата негова част, съгласно претенция 11, което е човешко антитяло.
  13. 14. Антитялото или антиген-свързващата негова част, съгласно претенция 11, което е рекомбинантно антитяло.
  14. 15. Антитялото или антиген-свързващата негова част, съгласно претенция 11, което е моноклонално антитяло.
  15. 16. Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, което се свързва с епитопа на човешки IL-18, където антитялото или антиген-свързващата негова част, се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff 0.1 s1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 бМ или по-малка.
  16. 17. Изолираното антитяло, съгласно претенция 16 или антиген- свьрзваща негова част, което се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff 1 х 1 'V1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 7М или по-малка.
  17. 18. Изолираното антитяло, съгласно претенция 16 или антиген- свързваща негова част, което се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff 1 х 1 *3s4 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 ‘8М или по-малка.
  18. 19. Изолираното антитяло, съгласно претенция 16 или антиген- свързваща негова част, което се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff lxl V1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 '9М или по-малка.
  19. 20. Изолираното антитяло, съгласно претенция 16 или антиген- свързваща негова част, което се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа koff 1 х 1 У1 или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 10М или по-малка.
  20. 21. Изолираното антитяло, съгласно претенция 16 или антиген- свьрзваща негова част, което се дисоциира от човешкия IL-18 със скоростна константа кок 1 х 1 ‘V или по-малка, което се определя от повърхностен плазмон резонанс, или което инхибира активността на човешкия IL-18 с IC 50 от 1x10 41М или по-малка.
  21. 22. Изолирано човешко антитяло или антиген-свързваща негова част, включващо най-малко един вариабилен район CDR домен, способен да се свърже с епитопа на човешки IL-18.
  22. 23. Изолираното антитяло или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 22, където споменатото антитяло, или антигенсвьрзваща негова част, съдържа най-малко едно аминокиселинно заместване или инсерция, което подобрява свързващата активност на IL-18, в сравнение с не-модифицирано антитяло, или антиегнсвързваща негова част.
  23. 24. Изолираното антитяло или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 22, където споменатото антитяло, или антигенсвьрзваща негова част, съдържа най-малко едно аминокиселинно заместване или инсерция, което подобрява неутрализиращата активност на IL-18, в сравнение с не-модифицирано антитяло, или антиегн-свързваща негова част.
  24. 25. Изолираното антитяло или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 22, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    тежка верига CDR1 домен, която има аминокиселинни последователност на SEQ ID N0:9 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:9, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване; тежка верига CDR2 домен, която има амино киселинна последователност на SEQ ID N0:10 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:10, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване; тежка верига CDR3 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:11 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:11, чрез най-малко едно
    аминокиселинно заместване;
  25. 26. Изолираното антитяло или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 25, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    тежка верига CDR1 домен, модифицирана от SEQ ID N0:9, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Н 30, Н31, Н32, НЗЗ или Н35;
    тежка верига CDR2 домен, модифицирана от SEQ ID N0:10, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Н 52, Н52а, Н53, Н54, Н56 или Н58; и тежка верига CDR3 домен, модифицирана от SEQ ID N0:11, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Н 95, Н96, Н97, илиН98.
  26. 27. Изолираното антитяло или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 22, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    лека верига CDR1 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:12 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:12, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
    лека верига CDR2 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:13 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:13, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
    лека верига CDR3 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:14 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:14, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
  27. 28. Изолираното антитяло, или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 27, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    6Ί fi·- .
    лека верига CDR1 домен, модифицирана от SEQ ID N0:12, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 30, L31, L32 или L34;
    лека верига CDR2 домен, модифицирана от SEQ ID N0:13, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 50, L52, L53 или L55; и лека верига CDR3 домен, модифицирана от SEQ ID N0:14, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 89, L90, L91, L92, L 93, L94, L95, L 95а, L95b, L96 или L97.
  28. 29. Изолирано антитяло или антнген-свьрзваща негова част, с вариабилен район, включващ аминокиселинна секвенция, избрана от групата на SEQ П) N0:15,16 и 17.
  29. 30. Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, вариабилен район на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинната секвенция SEQ ID N0: 15 и вариабилен район на тежката верига (HCVR), включващ аминокиселинната секвенция на SEQIDNO: 16.
  30. 31. Изолирано антитяло или антнген-свьрзваща негова част, вариабилен район на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинната секвенция SEQ ID N0: 15 и вариабилен район на тежката верига (HCVR), включващ аминокиселинната секвенция на SEQIDNO: 17.
  31. 32. Изолираното антитяло или антиген-свързваща негова част, съгласно претенция 22, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    тежка верига CDR1 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:20 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:20, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
    тежка верига CDR2 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:21 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:21, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
    тежка верига CDR3 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:22 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:22, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
  32. 33. Изолираното антитяло, или антиген-свьрзваща негова част, съгласно претенция 32, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    тежка верига CDR1 домен, модифицирана от SEQ ID N0:20, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Н 30, Н31, Н32. НЗЗ или Н35;
    тежка верига CDR2 домен, модифицирана от SEQ ID N0:21, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Ή50, Н51, Н 52, Н52а, Н53, Н54, Н56 или Н58; и тежка верига CDR3 домен, модифицирана от SEQ ID N0:22, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция Н 96, Н96, Н97, Н98, Н99, Н100, НЮОа, Н101 или Н102.
  33. 34. Изолираното антитяло или антиген-свързваща негова част, съгласно претенция 32, където споменатия вариабилен район включва CDR домен, избран ог групата на:
    лека верига CDR1 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:23 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:23, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
    лека верига CDR2 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:24 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:24, чрез най-малко едно аминокиселннно заместване;
    лека верига CDR3 домен, която има аминокиселинна последователност на SEQ ID N0:25 или модифицирана последователност на SEQ ID N0:25, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване;
  34. 35. Изолираното антитяло, или антиген-свързваща негова част, съгласно претенция 34, където споменатият вариабилен район включва CDR домен, избран от групата на:
    лека верига CDR1 домен, модифицирана от SEQ ID N0:23, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 30, L31, L32 или Н34;
    лека верига CDR2 домен, модифицирана от SEQ ID N0 :24, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 50, L52, L53 или L55; и лека верига CDR3 домен, модифицирана от SEQ ID N0:25, чрез най-малко едно аминокиселинно заместване в позиция L 89, L90, L91, L92, L 93, L94, L95, L 95а, L95b, L96 или L97.
  35. 36. Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, с вариабилен район, включващ аминокиселина, избрана от групата на SEQIDNO: 26,27 и 29.
  36. 37. Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, с вариабилен район на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинна секвенция SEQ ID N0: 29 и вариабилен район на тежката верига (HCVR), включващ аминокиселинна секвенция на SEQ IDN0: 26.
  37. 38. Изолирано антитяло или антиген-свързваща негова част, с вариабилен район на леката верига (LCVR), включващ аминокиселинна секвенция SEQ ID N0: 29 и вариабилен район на тежката верига (HCVR), включващ аминокиселинна секвенция на SEQ IDNO: 27.
  38. 39. Изолирана нуклеинова киселина, кодираща антитяло с CDR аминокиселинна последователност, съгласно която и да е от претенции 4-38.
  39. 40. Изолираната нуклеинова киселина, съгласно претенция 39, кояго е в рекомбинантен експресионен вектор.
  40. 41. Компетентна клетка, в която рекомбинантният експресионен вектор, съгласно претенция 40 е въведен.
    w
  41. 42. Метод за синтез на антитяло, което се свързва с човешки IL18, характеризиращ се с това, че включва култивирана компетентна клетка, съгласно претенция 41, в културална среда, докато антитяло, което се свързва с човешки И-18 се синтезира от клетката.
  42. 43. Метод, съгласно претенция 42, характеризиращ се с това, че споменатото антитяло е човешко.
  43. 44. Фармацевтичен състав, характеризиращ се с това, че включва антитяло или антиген-свързваща негова част, съгласно която и да е от претенции 4-38 и фармацевтично приемлив носител.
  44. 45. Фармацевтичен състав, съгласно претенция 44, ** характеризиращ се с това, че по-нататък включва най-малко едно допълнително терапевтично средство за лечение на нарушение, при което активността HaIL-18 е вредна.
  45. 46. Фармацевтичен състав, съгласно претенция 45, характеризиращ се с това, че споменатото допълнително вещество е избрано от групата, включваща антитяло или негов фрагмент, способно да се свързва с човешки IL-12, метотрексат анти-TNF, кортикостероиди, циклоспорин, рапамицин, FK506 и не-стероидни противовъзпалителни вещества.
  46. 47. Метод за получаване на антитяло, което се свързва с човешки интерлевкин-18 (IL-18), характеризиращ се с това, че включва:
    излагане на репертоар от антитела на антиген, включващ епитоп на човешки IL-18 или негова част; и избор от репертоара от антителата, на антитяло, което се свързва с епитопа на човешкия IL-18, или с негова част
  47. 48. Метод, съгласно претенция 47, характеризиращ се с това, че репертоара от антителата е in vivo репертоар в животно и методът се характеризира с това че включва имунизиране на животното с антиген, включващ епитоп на човешки IL-18 или негова част.
  48. 49. Методът, съгласно претенция 46 или 47, характеризиращ се с това, че споменатият епитоп включва аминокиселинната последователност, избрана от групата, включваща SEQ П) N0:3 и 33
  49. 50. Методът, съгласно претенция 47, характеризиращ се с това, че споменатият in vivo репертоар е пълен репертоар на човешки имуноглобулини, въведени в генома на животно.
  50. 51. Методът, съгласно претенция 47, характеризиращ се с това, че репертоарът от антитела е рекомбинантна библиотека от антитела и методът се характеризира с това, че включва скриниране на библиотеката с антиген, включващ епитоп на човешки IL-18 или негова част.
  51. 52. Методът, съгласно претенция 47, характеризиращ се с това, че библиотеката е библиотека от човешки антитела.
  52. 53. Метод за инхибиране на активността на човешки IL-18, характеризиращ се с това, че включва осъществяване на контакт на човешки IL-18 със съединение, съгласно претенция 1, така че тази активност на човешкият JL-18 се инхибира.
  53. 54. Метод за инхибиране на активността на човешки IL-18, характеризиращ се с това, че включва осъществяване на контакт на човешкият IL-18 c антитялото или c антиген-свьрзваща негова част, съгласно която и да е от претенции 4-38, така че активността на човешкият IL-18 се инхибира.
  54. 55. Метод за инхибиране на активността на човешки IL-18, в обект-човек страдащ от нарушение, при което активността на IL-18 е вредна, характеризиращ се с това че включва въвеждане в обектачовек на съединението, съгласно претенция 1, така, че активността на IL-18 в обекта-човек се инхибира.
  55. 56. Метод за инхибиране на активността на човешки IL-18 в обект-човек, страдащ от нарушение, при което активността на IL-18 е вредна, характеризиращ се с това, че включва въвеждане в обектачовек на човешко антитяло или на антиген-свьрзваща негова част, съгласно която и да е от претенции 4-38, така че активността на човешкия IL-18 в обекта-човек се инхибира.
  56. 57. Метод за лечение на обект-човек, страдащ от нарушение при което активността на IL-18 е вредна, характеризиращ се с въвеждане на съединение, съгласно претенция 1, така че се постига лечение.
  57. 58. Метод за лечение на обект-човек, страдащ от нарушение при което активността на IL-18 е вредна, характеризиращ се с въвеждане на антитяло, съгласно която и да е претенция 4-38, така че се постига лечение.
  58. 59. Метод, съгласно претенция 57 или 58, характеризиращ се с това, че споменатото заболяване е избрано от групата на ревматоиден артрит, остеоартрит, младежки хроничен артрит, артрит на Lyme, псориазисен артрит, реактивен артрит, спондилоартропатия, системен лупус еритрематозус, болест на Crohn, язвен колит, чревно възпалително заболяване, инсулин зависим диабет, милетус, тироидит, астма, алергични заболявания, псориазис, дерматитна склеродерма, заболяване свързано с отхвърляне на трансплантант, отхвърляне на трансплантирани органи, остро и хронично иммунно заболяване, свързано с трансплантиране на органи, саркоидоза, атеросклероза, разпространяваща се интраваскуларна коаглутинация, болест на Kawasaki, болест на Grave, нефротичен синдром, синдром на хронична умора, грануломатозис на Wegner, Henoch-Schoenlin пурпуреа, микроскопичен ваксулит на бъбреците, хроничен активен хепатит, увеит, септичен шок, синдром на токсичен шок, сепсис синдром, кахексия, инфекциозни заболявания, паразитни заболявания, придобит имунодефицитен синдром, остър трансверзен миелит, хореа на Huntington, паркинсонова болест, болест на Алцхаймер, удар, първична жлъчна цироза, хемолитична анемия, малигнени образувания, сърдечни нарушения, инфаркт на миокарда, болест на Addison, спорадична болест, полигландуларен дефицит тип I и полигландуларен дефицит тип II, синдром на Schmidt, остър респираторен дистрес синдром при възрастните, алопециа, алопециа ареата, серонегативна артепатия, артропатия, болест на Retier, псориатозна артропатия, артропатия свързана с язвен колит, ентеропатичен синовит, артропатии свързани с chlamydia, yersinia и salmonella, спондилоартопатия, атероматозна болест/атериосклерозис, атопична алергия, автоимунно булос заболяване, pemphigus vulgaris, pemphigus foliceus, пемфигоид, линейна IgA болест, автоимунна хемолитична анемия. Combs позитивна хемолитична анемия, придобита перникозна анемия, младежка перникозна анемия, миалгичен енцефалит/Коуа! Free Desease, хронична мукокутанеусена кандидоза, артерит на големите клетки, първичен склерозен хепатит, криптогенен имунен хепатит, синдром на придобитата имунна недостатъчност, заболявания, свързани със синдрома на придобитата имунна недостатъчност, хепатит С, обикновени вариации на имунодефицит (обикновени вариации на хипогамаглобулинемия), късна кардиомиопатия, женски стерилитет, овариапно нарушение. нарушение в овариалното зреене, фиброзно белодробно заболяване, криогенен фиброзен алвеолит, пост-вьзпалнтелно интерстициално белодробно заболяване, интерстициални пневмонити, болест на съединителната тъкан, свързана с интерстициални белодробни заболявания, смесена болест на съединителната тъкан, свързана с белодробни заболявания, системна склероза, свързана с интерстициални белодробни заболявания, ревматоиден артрит свързан с вътрешни белодробни заболявания, ситемен лупус еритроматозис, свързан с интерстициални белодробни заболявания, дерматомиозит/полимиозит, свързан с интерстициални белодробни заболявания, болест на Sjorgen, свързана с белодробни заболявания, анкилозен спондилит, свързан с белодробни заболявания, васкулитична дифузна белодробна болест, хемосидероза, свързана с белодробни заболявания, индуцирано от лекарствени препарати интерстициално белодробно заболяване, фиброза в резултат от радиация, бронхиолит облитеранс, хронична еозинофилна пневмония, белодробно заболяване, свързано с инфилтриране на лимфоци, слединфекциозно интерстициално белодробно заболяване, артрит от подагра, автоимунен хепатит, тип-1 автоимунен хепатит (класически автоимунен или лупоиден хепатит), тип-2 автоимунен хепатит (хепатит с анти-LKM антитела), автоимунно медиирана хипогликимия, тип В инсулин резистентност с acanthosis nigricans, хипопаратироидизъм, остро имунно заболяване, свързано с органна трансплантация, хронично имунно заболяване, свързано с органна трансплантация, остеоартроза, първичен склерозен холангит, псориазис тип 1, псориазис тип 2, идиопатична левкопения, автоимунна неутропения, бъбречно заболяване NOS, гломерулонефрит, микроскопски вазулит на бъбреците, болест на Lyme, диско иден лупус еритематозус, мъжки стерилитет идиопатичен или NOS, спермален автоимунитет, множествена склероза (всички подтипове), симпатикусова офталмиа, повишено белодробно налягане, вторично заболяване-следствие от болест на съединителната тъкан, синдром на Goodpasture, белодробна проява на полиартеритис нодоза, остри ревматични гадения, ревматоиден спондилит, болест на Still, системна склероза, синдром на Sjorgen, болест на Takayasu/артерит, автоимунна тромбоцитопения, идиопатична тромбоцитопения, автоимунна тироидна болест, хипетиронднзьм, гушев автоимунен хипотироидизъм (болест на Hashimoto), атрофия с автоимунен хипотироидизъм, първична миксоедема, факогенен увеит, първичен васкулит, витилго, остро чернодробно заболяване, хронични чернодробни заболявания, алергия и астма, умствени нарушения (напр. депресия и шизофрения), ТЪ2- и Thl- тип медиирани заболявания.
  59. 60. Метод за лечение на пациент страдащ от нарушение, при което активността на IL-18 е вредна, характеризиращ се с това, че включва етапа на въвеждане наанти-1Ь-18 антитяло, преди, паралелно със или след въвеждането на второ вещество, където второто вещество е избрано от групата на анти-1Ь-12 антитяло или антигенсвьрзващ негов фрагмент, метотрексат, анти-TNF антитяло или антиген свързващ негов фрагмент, кортикостероиди, циклоспорин, рапамицин, FK506 и не-стероидни противо-възпалителни вещества
    1/5
    Фиг. 1
BG107045A 2000-02-10 2002-09-02 Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, методи за получаването и използването им BG107045A (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18160800P 2000-02-10 2000-02-10
PCT/US2001/004170 WO2001058956A2 (en) 2000-02-10 2001-02-09 Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BG107045A true BG107045A (bg) 2003-05-30

Family

ID=22665007

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG107045A BG107045A (bg) 2000-02-10 2002-09-02 Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, методи за получаването и използването им
BG10111004A BG111004A (bg) 2000-02-10 2011-07-29 Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, и методи за получаване и използване

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG10111004A BG111004A (bg) 2000-02-10 2011-07-29 Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, и методи за получаване и използване

Country Status (22)

Country Link
US (3) US7767207B2 (bg)
EP (4) EP2360184A3 (bg)
JP (2) JP2004500086A (bg)
KR (4) KR101111103B1 (bg)
CN (3) CN102504024A (bg)
AR (2) AR027404A1 (bg)
AU (3) AU2001236807A1 (bg)
BG (2) BG107045A (bg)
BR (1) BR0108188A (bg)
CA (2) CA2800450A1 (bg)
CL (1) CL2012001063A1 (bg)
HU (1) HUP0300423A3 (bg)
IL (2) IL151044A0 (bg)
MX (1) MXPA02007756A (bg)
MY (1) MY146017A (bg)
NO (1) NO20023788L (bg)
NZ (1) NZ520392A (bg)
PL (1) PL356836A1 (bg)
SK (1) SK12942002A3 (bg)
TW (3) TWI335336B (bg)
WO (1) WO2001058956A2 (bg)
ZA (1) ZA200206266B (bg)

Families Citing this family (163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7109308B1 (en) 1994-03-08 2006-09-19 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human vascular endothelial growth factor 2
US6608182B1 (en) 1994-03-08 2003-08-19 Human Genome Sciences, Inc. Human vascular endothelial growth factor 2
US7153827B1 (en) 1994-03-08 2006-12-26 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2 and methods of use
US5932540A (en) 1994-03-08 1999-08-03 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
ATE309360T1 (de) 1994-03-08 2005-11-15 Human Genome Sciences Inc Vaskularer endothelialer wachstumsfaktor 2
US7186688B1 (en) 1994-03-08 2007-03-06 Human Genome Sciences, Inc. Methods of stimulating angiogenesis in a patient by administering vascular endothelial growth factor 2
US6040157A (en) 1994-03-08 2000-03-21 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
US7223724B1 (en) 1999-02-08 2007-05-29 Human Genome Sciences, Inc. Use of vascular endothelial growth factor to treat photoreceptor cells
WO2001058956A2 (en) * 2000-02-10 2001-08-16 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
DK1257292T3 (da) * 2000-02-21 2011-07-18 Merck Serono Sa Anvendelse af IL-18-inhibitorer
US20020025317A1 (en) * 2000-07-20 2002-02-28 Schering Ag Bispecific monoclonal antibodies to IL-12 and IL-18
CA2435466C (en) * 2001-01-29 2012-04-03 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of heart disease
WO2002083704A1 (en) 2001-04-13 2002-10-24 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
US7402312B2 (en) 2001-04-13 2008-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to vascular endothelial growth factor 2 (VEGF-2)
ES2334773T3 (es) * 2001-05-16 2010-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Uso de inhibidores de il-18 para el tratamiento o prevencion de la sepsis.
US20040213786A1 (en) * 2001-08-24 2004-10-28 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Compositions and methods for treating T-cell mediated autoimmune diseases
EP2308888B1 (en) 2001-11-14 2017-03-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses
EP1494710A4 (en) * 2002-03-26 2007-03-21 Centocor Inc DIABETES-RELEVANT IMMUNOGLOBULIN-BASED PROTEINS, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES
WO2003082922A1 (en) * 2002-03-28 2003-10-09 Markus Fritzsche Antibody against an epitope of the b. burgdorferi flagellar basal rod protein (fbrp)
US7253260B2 (en) * 2002-04-17 2007-08-07 Smithkline Beecham Corporation Human IL-18 crystal structure
US7601351B1 (en) 2002-06-26 2009-10-13 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against protective antigen
EP1539235A2 (en) 2002-07-01 2005-06-15 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to reg iv
US9415102B2 (en) 2002-09-06 2016-08-16 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High concentration formulations of anti-C5 antibodies
US20050271660A1 (en) 2002-09-06 2005-12-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Nebulization of monoclonal antibodies for treating pulmonary diseases
AR047392A1 (es) 2002-10-22 2006-01-18 Wyeth Corp Neutralizacion de anticuerpos contra gdf 8 y su uso para tales fines
JP2006519763A (ja) 2002-11-08 2006-08-31 アブリンクス エン．ヴェー． 治療用ポリペプチドの投与法およびそのためのポリペプチド
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
EP2267032A3 (en) * 2002-11-08 2011-11-09 Ablynx N.V. Method of administering therapeutic polypeptides, and polypeptides therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
KR100988129B1 (ko) * 2003-04-30 2010-10-18 쥬리디컬 파운데이션 더 케모-세로-쎄라퓨틱 리서치 인스티튜트 인간 항인간 인터루킨-18 항체와 그 단편, 및 이들의이용방법
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
AU2011224023C1 (en) * 2003-11-12 2013-08-29 Abbvie Inc. IL-18 binding proteins
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
US20050100965A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
US20050227289A1 (en) 2004-04-09 2005-10-13 Reilly Edward B Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof
NZ552908A (en) * 2004-06-30 2009-11-27 Atsuo Sekiyama Indicator agent for noninflammatory stress response and use thereof
US7141382B1 (en) 2004-10-12 2006-11-28 Parikh Chirag R Methods for detection of IL-18 as an early marker for diagnosis of acute renal failure and predictor of mortality
PE20061324A1 (es) 2005-04-29 2007-01-15 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos
KR20130108481A (ko) 2005-08-19 2013-10-02 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2500356A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CN101277974A (zh) 2005-09-30 2008-10-01 阿伯特有限及两合公司 排斥性引导分子(rgm)蛋白质家族的蛋白质的结合结构域及其功能性片段和它们的用途
CN110776566A (zh) * 2005-12-20 2020-02-11 Sbi 生物技术有限公司 抗ilt7抗体
TWI417301B (zh) * 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
MY157173A (en) * 2006-05-25 2016-05-13 Glaxo Group Ltd Modified humanised anti-interleukin-18
EP2500414A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
CN103397065A (zh) 2006-09-13 2013-11-20 雅培制药有限公司 细胞培养改良
JP5167275B2 (ja) 2007-01-04 2013-03-21 エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド 明るさに優れたポリアリーレンスルフィド樹脂の製造方法
EP2164517A4 (en) * 2007-05-29 2011-03-09 Univ Yale IL-18 AND PROTEIN KINASE-R INHIBITION FOR THE TREATMENT OF COPD
CL2008002153A1 (es) 2007-07-24 2009-06-05 Amgen Inc Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r.
CA3023889A1 (en) 2007-12-27 2009-07-09 Abbott Laboratories Anti-t. cruzi antibodies and methods of use
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY31861A (es) 2008-06-03 2010-01-05 Abbott Lab Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma
MX2010013239A (es) 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
US8188235B2 (en) 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
RU2011120178A (ru) * 2008-10-20 2012-11-27 Эбботт Лэборетриз Антитела, которые связываются с il-12, и способы их очистки
WO2010141039A1 (en) * 2008-10-20 2010-12-09 Abbott Laboratories Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
SG10201702951RA (en) * 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Viral inactivation during purification of antibodies
US20100150864A1 (en) * 2008-10-20 2010-06-17 Abbott Laboratories, Inc. Antibodies that bind to il-18 and methods of purifying the same
RU2481824C2 (ru) 2008-10-29 2013-05-20 Аблинкс Н.В Препараты однодоменных антигенсвязывающих молекул
KR20110079693A (ko) 2008-10-29 2011-07-07 와이어쓰 엘엘씨 단일 도메인 항원 결합 분자의 정제 방법
US8349325B2 (en) 2008-12-23 2013-01-08 Abbott Laboratories Soluble FMS-like tyrosine kinase-1 (sFLT-1) antibody and related composition, kit, methods of using, and materials and method for making
US8168165B2 (en) 2008-12-23 2012-05-01 Abbott Laboratories Alkylated interleukin-18 compositions
MX2012002651A (es) 2009-09-01 2012-05-22 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
CA2775959A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CN102656190A (zh) 2009-12-08 2012-09-05 雅培股份有限两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
WO2011098424A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Glaxo Group Limited Treatment of a metabolic disorder
US20110229921A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Abbott Laboratories METHODS OF ASSAYING URINARY NEUTROPHIL GELATINASE-ASSOCIATED LIPOCALIN (uNGAL) IN THE PROGNOSIS OF CADAVERIC KIDNEY TRANSPLANT FUNCTION IN A PATIENT, INCLUDING A PATIENT DIAGNOSED WITH DELAYED GRAFT FUNCTION (DGF), A METHOD OF ASSAYING uNGAL IN THE ASSESSMENT OF RISK OF DGF IN A PATIENT DIAGNOSED WITH EARLY GRAFT FUNCTION (EGF), AND RELATED KITS
MX341579B (es) 2010-08-03 2016-08-25 Abbvie Inc * Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
SG187938A1 (en) 2010-08-26 2013-04-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112013007501B1 (pt) * 2010-09-30 2022-04-19 Chengdu Kanghong Biotechnologies Co., Ltd. Anticorpo humanizado anti-fator de necrose tumoral a, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, uso e composição farmacêutica
US20120115244A1 (en) 2010-11-09 2012-05-10 Abbott Laboratories Materials and methods for immunoassay of pterins
US9255144B2 (en) * 2010-12-20 2016-02-09 Medimmune Limited Anti-IL-18 antibodies and their uses
WO2012088247A2 (en) * 2010-12-22 2012-06-28 Medimmune, Llc Anti-c5/c5a/c5adesr antibodies and fragments
WO2012096264A1 (ja) 2011-01-11 2012-07-19 Jsr株式会社 感放射線性樹脂組成物及び感放射線性酸発生剤
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
JP6336397B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-06 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
CN107459576A (zh) 2011-12-14 2017-12-12 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
WO2013102042A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17
US8993248B2 (en) 2011-12-31 2015-03-31 Abbott Laboratories Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use
CN104487455A (zh) 2012-01-27 2015-04-01 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗与神经突变性相关的疾病的组合物和方法
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
BR112015004467A2 (pt) 2012-09-02 2017-03-21 Abbvie Inc método para controlar a heterogeneidade de proteínas
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
TWI601745B (zh) 2012-11-01 2017-10-11 艾伯維有限公司 抗－ｖｅｇｆ／ｄｌｌ４雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
EP2924117B1 (en) * 2012-11-21 2019-08-14 KM Biologics Co., Ltd. Novel human antibody against il-18
DE112013006579T5 (de) 2013-02-02 2016-03-10 Duke University Verfahren zum Isolieren zirkulierender Tumorzellen
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
JP6581572B2 (ja) 2013-06-07 2019-09-25 デューク ユニバーシティ 補体因子ｈ阻害薬
WO2015031626A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Abbvie Inc. Soluble cmet assay
HUE055608T2 (hu) 2013-09-05 2021-12-28 Ab2 Bio Sa IL-18-kötõ fehérje (IL-18BP) gyulladásos betegségekben
CN105793284A (zh) 2013-09-17 2016-07-20 大学健康网络(Uhn):技术开发和商业化公司 针对顺式RGMa/再生蛋白相互作用或脂筏的试剂及其在治疗方法中的应用
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2016044736A1 (en) * 2014-09-18 2016-03-24 Cell Signaling Technology, Inc. Altered antibodies and methods of making the same
AU2015336946A1 (en) * 2014-10-23 2017-04-13 La Trobe University Fn14-binding proteins and uses thereof
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
MX2017010919A (es) 2015-03-05 2017-12-07 Ab2 Bio Sa Proteina de union il-18 (il-18bp) y anticuerpos en enfermedades inflamatorias.
CN108513593A (zh) 2015-04-23 2018-09-07 南托米克斯有限责任公司 癌症新表位
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
MX2018003040A (es) 2015-09-11 2018-04-11 Abbvie Inc Metodos para el tratamiento de formas recurrentes de esclerosis multiple.
WO2017087768A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Duke University Targeted delivery of interleukin-10 to tumor infiltrating lymphocytes
WO2017156298A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Medimmune, Llc Ilt7 binding molecules and methods of using the same
CN109496218A (zh) 2016-06-01 2019-03-19 艾伯维公司 用于治疗脊髓损伤和疼痛的抗反义导向分子a（rgma）拮抗性抗体
US20170363620A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Abbott Laboratories BIOMARKERS TO PREDICT NEW ONSET HEART FAILURE WITH PRESERVED EJECTION FRACTION (HFpEF)
EP3279667A1 (en) 2016-08-02 2018-02-07 Abbott Laboratories Cardiac troponin i and copeptin as biomarkers for short-term mortality in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (aecopd)
US20180106818A1 (en) 2016-10-03 2018-04-19 Abbott Laboratories Methods of assessing gfap status in patient samples
US10324041B2 (en) 2016-12-21 2019-06-18 Abbott Japan Co., Ltd. Optical imaging system using lateral illumination for digital assays
US11047854B2 (en) 2017-02-06 2021-06-29 Abbott Japan Llc Methods for reducing noise in signal-generating digital assays
AU2018219247A1 (en) 2017-02-08 2019-07-25 Silbiotech, Inc. Methods for determining breast cancer risk
CA3055256A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 Mab Discovery Gmbh Antibodies specifically binding to human il-1r7
WO2018175942A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
CA3053409A1 (en) 2017-04-15 2018-10-18 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10877038B2 (en) 2017-04-28 2020-12-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury using early biomarkers on at least two samples from the same human subject
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
WO2018218169A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
AU2018275236A1 (en) 2017-05-30 2019-10-31 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin I
WO2019010131A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories IMPROVED METHODS FOR MEASURING CARBOXY TERMINATION HYDROLASE LEVELS OF UBIQUITIN L1 IN BLOOD
WO2019023650A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 Duke University COMPOSITIONS AND METHODS FOR PROMOTING REGENERATION OF HEMATOPOIETIC STEM CELLS
AU2018378971A1 (en) 2017-12-09 2020-01-02 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (TBI), using glial fibrillary acidic protein (GFAP) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (UCH-L1)
CN110892266A (zh) 2017-12-09 2020-03-17 雅培实验室 使用gfap和uch-l1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法
US20190383832A1 (en) 2017-12-29 2019-12-19 Abbott Laboratories Novel biomarkers and methods for diagnosing and evaluating traumatic brain injury
JPWO2019194217A1 (ja) * 2018-04-04 2021-04-15 株式会社ｍＡｂＰｒｏｔｅｉｎ 検出感度の高いインターロイキン−１８タンパク質に対する抗体及びその応用
GB201809699D0 (en) * 2018-06-13 2018-08-01 Singapore Health Serv Pte Ltd IL-11 antibodies
EP3892300A4 (en) 2018-12-03 2022-12-14 Mabprotein Co.,Ltd. ANTIBODY RECOGNIZING A NEOEPITOPE OF ACTIVATED INTERLEUKIN-18 PROTEINS AND ITS USE
WO2020180695A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Abbott Laboratories Methods for predicting major adverse cardiovascular events in subjects with coronary artery disease
KR102265432B1 (ko) * 2019-08-20 2021-06-15 주식회사 케어젠 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
JP2023536737A (ja) 2020-08-04 2023-08-29 アボット・ラピッド・ダイアグノスティクス・インターナショナル・アンリミテッド・カンパニー Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２を検出するためのアッセイ
US20220043000A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN114773466B (zh) * 2020-11-26 2023-08-29 江苏荃信生物医药股份有限公司 一种抗人白介素23及包含其的试剂盒及其检测方法
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
WO2022147178A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Improved methods, reagents and kits for detergent-based inactivation of betacoronavirus prior to and/or while assessing a biological sample for sars-cov-2 antigen or antibody
EP4067375A1 (en) * 2021-03-30 2022-10-05 Universität Ulm Fibril peptides
JP2024519858A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 アボット・ラボラトリーズ 小児対象における脳損傷を査定する方法
CA3222291A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Jaime MARINO Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2023286694A1 (ja) 2021-07-13 2023-01-19 国立大学法人東海国立大学機構 炎症性腸疾患を治療するための医薬組成物
EP4392783A1 (en) 2021-08-27 2024-07-03 Abbott Laboratories Methods for detecting immunoglobulin g, subclass 4 (igg4) in a biological sample
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3240822A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Tony Lee Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024102383A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Abbott Laboratories Methods of identifying macrotroponin in biological samples

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5019385A (en) * 1984-11-09 1991-05-28 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Novel lymphopine LK 2 and pharmaceutic compositions containing same
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5060283A (en) * 1989-04-20 1991-10-22 Fuji Photo Film Co. , Ltd. Method and system for reading images with a movable light intercepting plate
US6075181A (en) * 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE185601T1 (de) 1990-07-10 1999-10-15 Cambridge Antibody Tech Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
EP0542810A1 (en) * 1990-08-02 1993-05-26 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
AU664976B2 (en) * 1990-08-29 1995-12-14 Gene Pharming Europe Bv Homologous recombination in mammalian cells
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) * 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) * 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992009690A2 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
ATE439435T1 (de) 1991-03-01 2009-08-15 Dyax Corp Chimäres protein mit mikroprotein mit zwei oder mehr disulfidbindungen und ausgestaltungen davon
WO1992018619A1 (en) 1991-04-10 1992-10-29 The Scripps Research Institute Heterodimeric receptor libraries using phagemids
DE4122599C2 (de) * 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
AU2515992A (en) * 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
JPH07509137A (ja) 1992-07-24 1995-10-12 セル　ジェネシス，インク． 異種抗体の生産
US5625825A (en) * 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
EP0692536B1 (en) * 1994-07-14 2000-11-22 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo IFN-Y production inducing protein and monoclonal antibody of the same
US6309636B1 (en) * 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
JPH08101497A (ja) * 1994-09-30 1996-04-16 Shin Etsu Chem Co Ltd ペリクル
US5643763A (en) * 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
JP4004088B2 (ja) * 1995-09-26 2007-11-07 株式会社林原生物化学研究所 免疫担当細胞においてインターフェロン−γの産生を誘導する蛋白質
US6207641B1 (en) * 1995-03-10 2001-03-27 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Pharmaceutical composition containing IFN-γ inducing polypeptide or factor for treating and/or preventing IFN-γ susceptive diseases
US7135458B1 (en) * 1995-11-15 2006-11-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interferon-γ inducing polypeptide, pharmaceutical composition thereof, monoclonal antibody thereto, and methods of use
TW581771B (en) 1994-11-15 2004-04-01 Hayashibara Biochem Lab Recombinant production of a polypeptide for inducing interferon-gamma production, and monoclonal antibody against the polypeptide
JP2724987B2 (ja) * 1994-11-15 1998-03-09 株式会社林原生物化学研究所 インターフェロン−γの産生を誘導するポリペプチド
JP2952750B2 (ja) * 1995-02-23 1999-09-27 株式会社林原生物化学研究所 モノクローナル抗体
US6130364A (en) * 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6091001A (en) * 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
JPH11503914A (ja) * 1995-04-21 1999-04-06 セル ジェネシス，インコーポレイテッド 大ゲノムｄｎａ欠失の生成
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1997002479A2 (en) * 1995-06-30 1997-01-23 Yale University Human monoclonal anti-tumor antibodies
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
ATE352613T1 (de) * 1995-08-29 2007-02-15 Kirin Brewery Chimäres tier und methode zu dessen herstellung
AU1341797A (en) 1995-12-29 1997-07-28 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding interferon gamma inducing factor-2
BRPI9707379B8 (pt) 1996-02-09 2015-07-07 Abbvie Biotechnology Ltd Composições farmacêuticas compreendendo anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado, e anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado.
US5714352A (en) * 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5994619A (en) * 1996-04-01 1999-11-30 University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1997044468A1 (en) 1996-05-20 1997-11-27 Schering Corporation HUMAN INTERLEUKIN-1j AND ANTAGONISTS THEREOF
EP0816499A3 (en) * 1996-06-27 1999-10-27 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Genomic DNA encoding a polypeptide capable of inducing the production of interferon-gamma
US6790442B1 (en) * 1996-06-27 2004-09-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Genomic DNA encoding a polypeptide capable of inducing the production of interferon-γ
TW515843B (en) * 1996-07-25 2003-01-01 Hayashibara Biochem Lab Process for producing an active polypeptide inducing interferon-γ production
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
JP4024366B2 (ja) * 1996-11-29 2007-12-19 株式会社林原生物化学研究所 ポリペプチド
EP1972194A1 (en) 1996-12-03 2008-09-24 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human ig loci including plural vh and vk regions and antibodies produced therefrom
US7141393B2 (en) * 1996-12-26 2006-11-28 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interleukin-18-receptor proteins
US6087116A (en) * 1997-03-12 2000-07-11 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interleukin-18 (IL-18) receptor polypeptides and their uses
EP0998300A1 (en) 1997-03-18 2000-05-10 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
US6054487A (en) * 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
IL121860A0 (en) * 1997-08-14 1998-02-22 Yeda Res & Dev Interleukin-18 binding proteins their preparation and use
US7220717B2 (en) * 1997-08-14 2007-05-22 Yeda Research And Development Company Ltd. Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use
JP2001521906A (ja) 1997-11-03 2001-11-13 ザ・ウイスター・インステイテユート・オブ・アナトミー・アンド・バイオロジー 血管新生を阻害し、癌を処置するための方法及び組成物
US6541606B2 (en) * 1997-12-31 2003-04-01 Altus Biologics Inc. Stabilized protein crystals formulations containing them and methods of making them
JP4271850B2 (ja) 1998-01-23 2009-06-03 イミュネックス・コーポレーション Ｉｌ−１８受容体
IL137037A0 (en) * 1998-01-23 2001-06-14 Immunex Corp Acpl dna and polypeptides
EP1060193A2 (en) 1998-03-03 2000-12-20 Abgenix, Inc. Cd147 binding molecules as therapeutics
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
ATE437947T1 (de) * 1998-06-01 2009-08-15 Agensys Inc Serpentintransmembranantigene exprimiert in menschlichem krebs und deren verwendungen
CA2276216A1 (en) * 1998-06-24 1999-12-24 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo An artificial peptide capable of neutralizing the biological activity of interleukin-18
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
KR100537558B1 (ko) 1998-09-01 2005-12-19 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조 인터류킨-18 결합 단백질
US6270758B1 (en) * 1998-10-08 2001-08-07 Duke University Substantially non-toxic biologically active mucosal adjuvants in vertebrate subjects
GEP20053594B (en) 1998-12-23 2005-08-10 Pfizer Human Monoclonal Antibodies to CTLA-4
AR022952A1 (es) * 1999-03-19 2002-09-04 Smithkline Beecham Corp ANTICUERPO MONOCLONAL DE ROEDOR ESPECIFICAMENTE NEUTRALIZANTE PARA LA INTERLEUQUINA-18 HUMANA , UN FRAGMENTO FAB NEUTRALIZANTE o FRAGMENTO F(AB')2, UNA REGION DE COMPLEMENTARIEDAD DE CADENA LIGERA DE INMONOGLOBULINA(CDR), UNA MOLECULA DE ACIDO NUCLEICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE, EL
KR20140094647A (ko) 1999-03-25 2014-07-30 아비에 도이치란트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
IL131047A0 (en) 1999-07-22 2001-01-28 Yeda Res & Dev Use of il-18 inhibitors
WO2001058956A2 (en) 2000-02-10 2001-08-16 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
DK1257292T3 (da) * 2000-02-21 2011-07-18 Merck Serono Sa Anvendelse af IL-18-inhibitorer
DE10019967A1 (de) * 2000-04-20 2001-10-25 Fenning Biomed Gmbh Dr Antikörper gegen natives gp96, deren Herstellung und Verwendung
MXPA02010787A (es) 2000-05-03 2003-07-14 Amgen Inc Peptidos modificados como agentes terapeuticos.
UA87658C2 (uk) * 2000-05-05 2009-08-10 Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. Застосування il-18 як діагностичного маркера серцевої недостатності
PE20011350A1 (es) * 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
CZ20024085A3 (cs) * 2000-06-15 2003-05-14 Smithkline Beecham Corporation Způsob přípravy fyziologicky aktivního IL-18 polypeptidu
WO2002032374A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Immunex Corporation Methods for treating il-18 mediated disorders
EP2325205A3 (en) 2000-12-28 2011-10-12 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
CA2435466C (en) 2001-01-29 2012-04-03 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of heart disease
ATE528987T1 (de) * 2001-07-12 2011-11-15 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Il-18 transgenes tier
ME00548B (me) * 2002-03-22 2011-10-10 Serono Lab Korišćenje inhibitora il-18 za liječenje i/ili prevenciju perifernih vaskularnih bolesti
US7253260B2 (en) * 2002-04-17 2007-08-07 Smithkline Beecham Corporation Human IL-18 crystal structure
US20060177871A1 (en) * 2002-08-13 2006-08-10 Janson Cheryl A Murine IL-18 crystal structure
US7279155B2 (en) * 2002-10-08 2007-10-09 Ares Trading S.A. Method of treatment using a cytokine able to bind IL-18BP to inhibit the activity of a second cytokine
WO2004094020A2 (en) * 2003-04-17 2004-11-04 Fluidigm Corporation Crystal growth devices and systems, and methods for using same
KR100988129B1 (ko) * 2003-04-30 2010-10-18 쥬리디컬 파운데이션 더 케모-세로-쎄라퓨틱 리서치 인스티튜트 인간 항인간 인터루킨-18 항체와 그 단편, 및 이들의이용방법
SI1622939T1 (sl) * 2003-05-13 2012-06-29 Merck Serono Sa Akrivne variante il-18 vezavnega proteina in medicinske uporabe le-tega
CA2535859A1 (en) * 2003-08-14 2005-03-03 Dyax Corp. Endotheliase-2 ligands
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
PL1720979T3 (pl) * 2004-03-01 2008-03-31 Ares Trading Sa Zastosowanie podłoża pozbawionego surowicy do hodowli komórkowej do wytwarzania IL-18BP w komórkach ssaków
US20080090766A1 (en) * 2004-03-11 2008-04-17 Tomoaki Hoshino Preventive or therapeutic agents for diseases including interleukin-18 inhibitor as an active ingredient
US7557084B2 (en) * 2004-03-31 2009-07-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-18 specific polypeptides and therapeutic uses thereof
FI116804B (fi) * 2004-05-18 2006-02-28 Ekspansio Engineering Ltd Oy Materiaalikappaleiden eri suuntiin osoittavien pintojen optinen tarkastus
CA2569795C (en) * 2004-06-29 2013-08-13 Ares Trading S.A. Process for the purification of il-18 binding protein
US7887802B2 (en) * 2004-07-16 2011-02-15 Atsuo Sekiyama IL-18 receptor antagonist and pharmaceutical composition containing the antagonist
ES2372728T3 (es) * 2004-08-20 2012-01-25 Glaxosmithkline Llc Cicatrización de heridas mediante la administración de il-18 humana.
AU2006254103B2 (en) * 2005-06-03 2012-09-06 Ares Trading S.A. Production of recombinant IL-18 binding protein
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US7615220B2 (en) * 2006-04-07 2009-11-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-18 receptor
PE20090190A1 (es) * 2007-03-23 2009-03-22 Smithkline Beecham Corp Combinacion de anticuerpos anti-cd20 y polipeptidos de il-18

Also Published As

Publication number Publication date
NO20023788L (no) 2002-10-09
CL2012001063A1 (es) 2013-06-21
EP1257585A2 (en) 2002-11-20
EP2338515A2 (en) 2011-06-29
EP2338515A3 (en) 2011-11-16
EP2332579A2 (en) 2011-06-15
KR20030021153A (ko) 2003-03-12
AR027404A1 (es) 2003-03-26
TW201036638A (en) 2010-10-16
HUP0300423A2 (hu) 2003-06-28
TWI335336B (bg) 2011-01-01
BR0108188A (pt) 2003-02-25
EP2360184A3 (en) 2011-11-16
IL151044A0 (en) 2003-04-10
KR20110032012A (ko) 2011-03-29
EP2360184A2 (en) 2011-08-24
US7767207B2 (en) 2010-08-03
AU2011201536A1 (en) 2011-04-28
KR100951067B1 (ko) 2010-04-07
AU2006252098B9 (en) 2011-04-14
MY146017A (en) 2012-06-15
AR077568A2 (es) 2011-09-07
KR101111103B1 (ko) 2012-02-13
US20130101595A1 (en) 2013-04-25
KR20090078372A (ko) 2009-07-17
KR20120011898A (ko) 2012-02-08
TW201305214A (zh) 2013-02-01
WO2001058956A2 (en) 2001-08-16
CN1461310B (zh) 2013-06-12
CN102206277A (zh) 2011-10-05
AU2011201536B2 (en) 2013-07-04
US20110008357A1 (en) 2011-01-13
CN1461310A (zh) 2003-12-10
CA2800450A1 (en) 2001-08-16
IL206980A0 (en) 2010-12-30
HUP0300423A3 (en) 2008-07-28
NZ520392A (en) 2005-04-29
PL356836A1 (en) 2004-07-12
CN102504024A (zh) 2012-06-20
CA2399148A1 (en) 2001-08-16
AU2006252098B2 (en) 2011-02-24
AU2006252098A1 (en) 2007-01-11
US20100104563A1 (en) 2010-04-29
MXPA02007756A (es) 2004-09-10
JP2012139224A (ja) 2012-07-26
WO2001058956A3 (en) 2002-03-07
NO20023788D0 (no) 2002-08-09
BG111004A (bg) 2011-11-30
JP2004500086A (ja) 2004-01-08
TWI373343B (en) 2012-10-01
EP2332579A3 (en) 2011-09-21
SK12942002A3 (sk) 2003-05-02
ZA200206266B (en) 2003-11-06
AU2001236807A1 (en) 2001-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BG107045A (bg) Антитела, които се свързват с човешки интерлевкин-18, методи за получаването и използването им
TWI410433B (zh) 結合人類間白素－１２之人類抗體及其製法
ES2319866T3 (es) Anticuerpos de especificidad dual y metodos de fabricacion y uso.
JP2010513529A (ja) ヒトｉｌ−１２を結合するヒト抗体及び製造方法
WO2012125680A1 (en) Methods of treating vasculitis using an il-17 binding molecule
JP2010515774A (ja) 乾せんの治療方法
AU2013224707A1 (en) Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using