JP2023536737A - Sars-cov-2を検出するためのアッセイ - Google Patents
Sars-cov-2を検出するためのアッセイ Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023536737A JP2023536737A JP2023507601A JP2023507601A JP2023536737A JP 2023536737 A JP2023536737 A JP 2023536737A JP 2023507601 A JP2023507601 A JP 2023507601A JP 2023507601 A JP2023507601 A JP 2023507601A JP 2023536737 A JP2023536737 A JP 2023536737A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- identity
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000003556 assay Methods 0.000 title description 47
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 147
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 139
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 139
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 139
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 119
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 117
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 84
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 79
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims abstract description 72
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 71
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 126
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 49
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 43
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 41
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 claims description 27
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 11
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 9
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 96
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 65
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 54
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 51
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 30
- 239000000463 material Substances 0.000 description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 25
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 25
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 25
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 21
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 19
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 17
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 17
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 17
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 17
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 16
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 16
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 16
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 15
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 11
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical group N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 8
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 8
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 8
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 7
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 6
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 6
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 5
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 5
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 5
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 5
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- -1 morpholino nucleic acids Chemical class 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 4
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 4
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 4
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 4
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 3
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 3
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 3
- 101100151951 Homo sapiens SARS1 gene Proteins 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 3
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 3
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 230000023898 viral genome packaging Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N (-)-ephedrine Chemical compound CN[C@@H](C)[C@H](O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 241000494545 Cordyline virus 2 Species 0.000 description 2
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 244000309467 Human Coronavirus Species 0.000 description 2
- 241000342334 Human metapneumovirus Species 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710144120 Non-structural protein 8 Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- NDDAHWYSQHTHNT-UHFFFAOYSA-N indapamide Chemical compound CC1CC2=CC=CC=C2N1NC(=O)C1=CC=C(Cl)C(S(N)(=O)=O)=C1 NDDAHWYSQHTHNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004569 indapamide Drugs 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000007430 reference method Methods 0.000 description 2
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 238000010897 surface acoustic wave method Methods 0.000 description 2
- VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N tenofovir disoproxil fumarate Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.N1=CN=C2N(C[C@@H](C)OCP(=O)(OCOC(=O)OC(C)C)OCOC(=O)OC(C)C)C=NC2=C1N VCMJCVGFSROFHV-WZGZYPNHSA-N 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonyl chloride Chemical compound FC(F)(F)CS(Cl)(=O)=O CXCHEKCRJQRVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 22,23-dihydroavermectin B1a Natural products C1CC(C)C(C(C)CC)OC21OC(CC=C(C)C(OC1OC(C)C(OC3OC(C)C(O)C(OC)C3)C(OC)C1)C(C)C=CC=C1C3(C(C(=O)O4)C=C(C)C(O)C3OC1)O)CC4C2 AZSNMRSAGSSBNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEUAEICGCMSYCQ-UHFFFAOYSA-N 4-n-(7-chloroquinolin-1-ium-4-yl)-1-n,1-n-diethylpentane-1,4-diamine;dihydrogen phosphate Chemical compound OP(O)(O)=O.ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 AEUAEICGCMSYCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 8883yp2r6d Chemical compound O1[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](OC)C[C@H](O[C@@H]2C(=C/C[C@@H]3C[C@@H](C[C@@]4(O[C@@H]([C@@H](C)CC4)C(C)C)O3)OC(=O)[C@@H]3C=C(C)[C@@H](O)[C@H]4OC\C([C@@]34O)=C/C=C/[C@@H]2C)/C)O[C@H]1C.C1C[C@H](C)[C@@H]([C@@H](C)CC)O[C@@]21O[C@H](C\C=C(C)\[C@@H](O[C@@H]1O[C@@H](C)[C@H](O[C@@H]3O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](OC)C3)[C@@H](OC)C1)[C@@H](C)\C=C\C=C/1[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\1)O)C[C@H]4C2 SPBDXSGPUHCETR-JFUDTMANSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000112287 Bat coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241001631457 Cannula Species 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000283153 Cetacea Species 0.000 description 1
- 241001647372 Chlamydia pneumoniae Species 0.000 description 1
- JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N Chlorothiazide Chemical compound C1=C(Cl)C(S(=O)(=O)N)=CC2=C1NCNS2(=O)=O JZUFKLXOESDKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102220559731 Cytoplasmic protein NCK1_D63G_mutation Human genes 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 101150074155 DHFR gene Proteins 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 101710204837 Envelope small membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000605952 Fusobacterium necrophorum Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- HSRJKNPTNIJEKV-UHFFFAOYSA-N Guaifenesin Chemical compound COC1=CC=CC=C1OCC(O)CO HSRJKNPTNIJEKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 241001500351 Influenzavirus A Species 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N Kaletra Chemical compound N1([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)COC=2C(=CC=CC=2C)C)CC=2C=CC=CC=2)CCCNC1=O KJHKTHWMRKYKJE-SUGCFTRWSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 1
- 101710159910 Movement protein Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 241000588649 Neisseria lactamica Species 0.000 description 1
- 241001440871 Neisseria sp. Species 0.000 description 1
- 101710144118 Non-structural protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 101710082648 ORF9b protein Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710189624 Protein 7a Proteins 0.000 description 1
- 101710188658 Protein 9b Proteins 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710153041 Replicase polyprotein 1a Proteins 0.000 description 1
- 101710151619 Replicase polyprotein 1ab Proteins 0.000 description 1
- 101710152114 Replication protein Proteins 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N Ritonavir Natural products C=1C=CC=CC=1CC(NC(=O)OCC=1SC=NC=1)C(O)CC(CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006197 SARS-CoV-2 Nucleocapsid Protein Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 241000191984 Staphylococcus haemolyticus Species 0.000 description 1
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241000194024 Streptococcus salivarius Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 229940100389 Sulfonylurea Drugs 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005411 Van der Waals force Methods 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N albuterol Chemical compound CC(C)(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(CO)=C1 NDAUXUAQIAJITI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- 229940127003 anti-diabetic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003460 anti-nuclear Effects 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 239000003472 antidiabetic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000011504 assay standardization Methods 0.000 description 1
- 238000013096 assay test Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 238000010170 biological method Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229940124630 bronchodilator Drugs 0.000 description 1
- 239000000168 bronchodilator agent Substances 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 229960002328 chloroquine phosphate Drugs 0.000 description 1
- 229960002155 chlorothiazide Drugs 0.000 description 1
- SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N chlorphenamine Chemical compound C=1C=CC=NC=1C(CCN(C)C)C1=CC=C(Cl)C=C1 SOYKEARSMXGVTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003291 chlorphenamine Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000006854 communication Effects 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N d-ephedrine Natural products CNC(C)C(O)C1=CC=CC=C1 KWGRBVOPPLSCSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000004720 dielectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000003748 differential diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N diphenhydramine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OCCN(C)C)C1=CC=CC=C1 ZZVUWRFHKOJYTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000520 diphenhydramine Drugs 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000007812 electrochemical assay Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 1
- 239000012156 elution solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002179 ephedrine Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000003172 expectorant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003419 expectorant effect Effects 0.000 description 1
- 229940066493 expectorants Drugs 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- WIGIZIANZCJQQY-RUCARUNLSA-N glimepiride Chemical compound O=C1C(CC)=C(C)CN1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)N[C@@H]2CC[C@@H](C)CC2)C=C1 WIGIZIANZCJQQY-RUCARUNLSA-N 0.000 description 1
- 229960004346 glimepiride Drugs 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 244000052637 human pathogen Species 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 229960002418 ivermectin Drugs 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 238000012125 lateral flow test Methods 0.000 description 1
- IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N lauryl sulfobetaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O IZWSFJTYBVKZNK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960004525 lopinavir Drugs 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 239000000133 nasal decongestant Substances 0.000 description 1
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 230000000474 nursing effect Effects 0.000 description 1
- VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N oseltamivir Chemical compound CCOC(=O)C1=C[C@@H](OC(CC)CC)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](N)C1 VSZGPKBBMSAYNT-RRFJBIMHSA-N 0.000 description 1
- 229960003752 oseltamivir Drugs 0.000 description 1
- 229960005162 oxymetazoline hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- BEEDODBODQVSIM-UHFFFAOYSA-N oxymetazoline hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C)=C1CC1=NCCN1 BEEDODBODQVSIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005022 packaging material Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000149 penetrating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003733 phenylephrine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N phenylephrine hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].CNC[C@H](O)C1=CC=CC(O)=C1 OCYSGIYOVXAGKQ-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical group [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 239000013643 reference control Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N ribavirin Natural products O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1N=CN=C1 HZCAHMRRMINHDJ-DBRKOABJSA-N 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 229960000311 ritonavir Drugs 0.000 description 1
- NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N ritonavir Chemical compound N([C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C[C@H](O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)OCC=1SC=NC=1)CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N(C)CC1=CSC(C(C)C)=N1 NCDNCNXCDXHOMX-XGKFQTDJSA-N 0.000 description 1
- 229960002052 salbutamol Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000004557 single molecule detection Methods 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 229940037649 staphylococcus haemolyticus Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N sulfonylurea Chemical class OC(=N)N=S(=O)=O YROXIXLRRCOBKF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 description 1
- 229960004556 tenofovir Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000007486 viral budding Effects 0.000 description 1
- 230000006490 viral transcription Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001028 zanamivir Drugs 0.000 description 1
- ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N zanamivir Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)C=C(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO ARAIBEBZBOPLMB-UFGQHTETSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1002—Coronaviridae
- C07K16/1003—Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 [SARS‐CoV‐2 or Covid-19]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
- G01N33/6857—Antibody fragments
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本開示は、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに結合する、一次抗体またはその抗原結合フラグメントと、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに結合する、二次抗体またはその抗原結合フラグメントを使用して、対象から得られた試料中で、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントを検出する方法に関する。【選択図】図1
Description
関連出願の相互参照
本出願は、2020年8月4日に出願された米国仮特許出願第63/060,975号、2020年8月14日に出願された同第63/065,898号、2020年8月18日に出願された同第63/067,051号、及び2020年12月16日に出願された同第63/126,336号の利益を主張し、これらの内容は、それぞれ、全体が本明細書に参照により組み込まれる。
本出願は、2020年8月4日に出願された米国仮特許出願第63/060,975号、2020年8月14日に出願された同第63/065,898号、2020年8月18日に出願された同第63/067,051号、及び2020年12月16日に出願された同第63/126,336号の利益を主張し、これらの内容は、それぞれ、全体が本明細書に参照により組み込まれる。
配列表の記載
2021年8月4日に作成された「38691-601_SEQUENCE_LISTING_ST25」という名称の、13,107バイトのファイルサイズを有する、本明細書と共に出願されたコンピュータ可読配列表のテキストは、全体が本明細書で参照により組み込まれる。
2021年8月4日に作成された「38691-601_SEQUENCE_LISTING_ST25」という名称の、13,107バイトのファイルサイズを有する、本明細書と共に出願されたコンピュータ可読配列表のテキストは、全体が本明細書で参照により組み込まれる。
本開示は、SARS-CoV-2抗原を検出するための構成要素及び方法に関する。
発熱、重度の呼吸器疾患、及び肺炎を引き起こす、新しいコロナウイルス(SARS-CoV-2(2019-nCoV))は、2019年後半に中国の湖北省でヒト病原体として出現した。SARS-CoV-2(2019-nCoV)と関連する疾患は、COVID-19と名付けられた。新しいコロナウイルスは、ベータコロナウイルス属のメンバーであり、いくつかのコウモリコロナウイルス及び重症急性呼吸器症候群コロナウイルス(SARS-CoV)と密接に関連する。しかし、SARS-CoVとは異なり、SARS-CoV-2(2019-nCoV)は、ヒト間で急速に伝染する。
2021年7月末現在で、200を超える国において、1億9,000万件を超えるCOVID-19の症例が確認されており、COVID-19の合併症は、400万人を超える死因として特記された。SARS-CoV-2伝染による健康上のリスクがあるので、ヒトのコロナウイルス感染を評価するための方法及びキットが必要であり、これは、対象から得られた1つ以上の試料において、SARS-CoV-2タンパク質の存在を判定し、及び/または、その量を検出する方法を含む。
本開示は、対象由来の試料中のSARS-CoV-2の存在を検出するか、または、その量を決定するための方法、デバイス、及びキットを提供する。
いくつかの実施形態では、方法は、試料中に存在する場合、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントの、一次抗体またはその抗原結合フラグメントとの結合を可能にする条件下で、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する一次抗体またはその抗原結合フラグメントと、対象から得られた試料を接触させること;SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する二次抗体、及び検出可能な標識を含むコンジュゲートと、試料を接触させること;ならびに、検出可能な標識のシグナルの存在を評価すること、を含み、検出可能な標識のシグナルの存在は、試料中のSARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントの存在を示す。
いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントは、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質である。一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質の異なるエピトープ(例えば、SARS-CoV-2ウイルスヌクレオキャプシド(N)タンパク質)を認識し得る。
一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、(i)配列番号1と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号2と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号3と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)配列番号4と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号5と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号6と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号7と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号8と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号17と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号18と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、(i)配列番号9と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号10と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号11と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)配列番号12と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号13と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号14と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号15と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号16と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、方法は、イムノアッセイを使用して実施される。イムノアッセイは、酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)またはラテラルフローイムノアッセイ(LFA)であってよい。
試料は、SARS-CoV02を含む、または含むと疑われる対象由来の任意の試料であってよい。いくつかの実施形態では、試料は、鼻または鼻咽頭のスワブもしくはブラシ、唾液、粘液、血液、血清、または血漿を含む。
本明細書では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する、一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する、二次抗体またはその抗原結合フラグメント、を含むラテラルフローデバイスも開示される。いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントが固定される。いくつかの実施形態では、検査ラインは、一次抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。いくつかの実施形態では、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、試料パッドは、二次抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。
いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントは、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質である。一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質の異なるエピトープ(例えば、SARS-CoV-2ウイルスヌクレオキャプシド(N)タンパク質)を認識し得る。
一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、(i)配列番号1と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号2と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号3と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)配列番号4と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号5と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号6と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号7と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号8と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号17と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号18と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、(i)配列番号9と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号10と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号11と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)配列番号12と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号13と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号14と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含んでもよい。いくつかの実施形態では、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号15と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号16と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む。
さらに、本明細書に記載のラテラルフローデバイスを含むキットが開示される。キットは、さらに、抽出緩衝液及びサンプリングデバイス(例えば、鼻スワブ)の少なくとも一方または両方を含んでもよい。
本開示の他の態様及び実施形態は、以下の詳細な説明及び添付の図面に照らして明らかになるであろう。
本開示は、少なくとも部分的に、特異度を高め、検出限界を下げたSARS-CoV-2の検出を可能にする抗体のペアを用いる方法の開発に基づいている。
本明細書で使用される語「含む」、「含む」、「有すること」、「有する」、「できる」、「含有する」、及びそれらの変形は、追加の行為または構造の可能性を排除しない、制限のない移行句、用語、または単語であることが意図される。単数形「a」、「及び」、及び「the」には、文脈に別途明示のない限り、複数の参照を含む。本開示は、明示的に記載されているかどうかにかかわらず、本明細書で提示される実施形態または要素を「含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」他の実施形態も企図する。
本明細書における数値範囲を詳述する場合、同程度の精度で、その間に介在する各数値が、明確に企図される。例えば、6~9の範囲では、7及び8の数字が、6及び9に加えて考えられ、6.0~7.0の範囲では、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、及び7.0の数字が、明示的に企図される。
本明細書で使用される「免疫グロブリン」または「抗体」という用語は、脊椎動物の血液または他の体液に見出されるタンパク質を指し、これは、異物、例えば、細菌及びウイルスを同定及び中和するために免疫系により使用される。通常は、免疫グロブリンまたは抗体は、少なくとも1つの相補性決定領域(CDR)を含むタンパク質である。CDRは、抗体の「超可変領域」を形成し、これは、抗原結合に関与する(さらに以下で検討)。免疫グロブリン全体は、通常、4つのポリペプチド:2つの同一コピーの重(H)鎖ポリペプチド及び2つの同一コピーの軽(L)鎖ポリペプチド、からなる。各重鎖のそれぞれは、1つのN末端可変(VH)領域及び3つのC末端定常(CH1、CH2、及びCH3)領域を含み、各軽鎖は、1つのN末端可変(VL)領域及び1つのC末端定常(CL)領域を含む。抗体の軽鎖は、定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ(κ)またはラムダ(λ)の2つの異なるタイプの1つに割り当てることができる。代表的な免疫グロブリンでは、各軽鎖は、ジスルフィド結合で重鎖に連結されており、2つの重鎖は、ジスルフィド結合で互いに連結されている。軽鎖可変領域は、重鎖の可変領域とアラインされ、軽鎖定常領域は、重鎖の最初の定常領域とアラインされる。重鎖の残りの定常領域は、互いにアラインされる。
軽鎖及び重鎖の各ペアの可変領域は、抗体の抗原結合部位を形成する。VH及びVL領域は、同じ一般構造を有し、各領域は、4つのフレームワーク(FWまたはFR)領域を含む。本明細書で使用される「フレームワーク領域」という用語は、CDR間に位置する可変領域内の比較的保存されたアミノ酸配列を指す。各可変ドメインには、4つのフレームワーク領域があり、これは、FR1、FR2、FR3、及びFR4と呼ばれる。フレームワーク領域は、可変領域の構造フレームワークを提供するβシートを形成する(例えば、以下を参照、C.A.Janeway et al.(eds.),Immunobiology,5th Ed.,Garland Publishing,New York,N.Y.(2001))。
フレームワーク領域は、3つのCDRで連結される。上で検討されるように、CDR1、CDR2、及びCDR3として既知の3つのCDRは、抗体の「超可変領域」を形成し、これは、抗原結合に関与する。CDRは、フレームワーク領域で形成されたベータシート構造を連結する、いくつかの場合では、それの一部を含むループを形成する。軽鎖及び重鎖の定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、定常領域は、可変領域の配向に影響を与え得る。定常領域は、様々なエフェクター機能、例えば、エフェクター分子及び細胞との相互作用を介した抗体依存性補体媒介溶解または抗体依存性細胞毒性への関与、も示す。
本明細書で使用される場合、抗体または他のエンティティ(例えば、抗原結合ドメイン)が抗原またはエピトープを「特異的に認識する」または「特異的に結合する」時、タンパク質及び/または巨大分子の複雑な混合物中の抗原を優先的に認識し、抗原またはエピトープを提示しない他のエンティティよりも実質的に高い親和性を有する抗原またはエピトープに結合する。この点に関しては、「実質的により高い親和性」は、所望のアッセイまたは測定装置を使用してエンティティと区別される抗原またはエピトープの検出を可能にするのに十分に高い親和性を意味する。通常は、少なくとも107M-1(例えば、>107M-1、>108M-1、>109M-1、>1010M-1、>1011M-1、>1012M-1、>1013M-1など)の結合定数(Ka)を有する結合親和性を意味する。そのような特定の実施形態では、抗体は、異なる抗原がその特定のエピトープを含む限り、異なる抗原に結合することが可能である。特定の場合では、例えば、異なる種由来の相同タンパク質は、同じエピトープを含んでもよい。
本明細書で使用される「抗体」及び「抗体(複数)」は、モノクローナル抗体、単一特異性抗体(例えば、モノクローナルであり得るか、または共通の生殖細胞からそれらを産生する他の手段でも産生され得る)、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体(完全または部分的ヒト化)、動物抗体、例えば、限定されないが、鳥類(例えば、アヒルまたはガチョウ)、サメ、クジラ、及び非霊長類(例えば、ウシ、ブタ、ラクダ、ラマ、ウマ、ヤギ、ウサギ、ヒツジ、ハムスター、モルモット、ネコ、イヌ、ラット、マウスなど)を含む哺乳動物、または非ヒト霊長類(例えば、サル、チンパンジーなど)、組み換え抗体、キメラ抗体、一本鎖可変フラグメント(「scFv」)、一本鎖抗体、単一ドメイン抗体、Fabフラグメント、F(ab’)フラグメント、F(ab’)2フラグメント、ジスルフィド結合Fv(「sdFv」)、及び抗イディオタイプ(「抗Id」)抗体、二重ドメイン抗体、二重可変ドメイン(DVD)、または三重可変ドメイン(TVD)抗体(二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作製する方法は、Wu,C.,et al.,Nature Biotechnology,25(11):1290-1297(2007)及びPCT国際出願WO2001/058956に記載されており、これらのそれぞれの内容は、参照により本明細書に組み込まれる)、またはドメイン抗体(dAb)(例えば、Holt et al.(2014)Trends in Biotechnology 21:484-490に記載されるもの、ならびに、例えば、軟骨魚類及びラクダ科動物のような天然に存在する単一ドメイン抗体sdAb、または合成的なもの、例えば、ナノボディ、VHH、もしくは他のドメイン構造である単一ドメイン抗体sdAbを含むもの)、ならびに、上記のいずれかの機能的に活性なエピトープ結合フラグメントのいずれかを指す。特に、抗体には、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性なフラグメント、すなわち、分析物結合部位を含有する分子を含む。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ(例えば、IgG、IgE、IgM、IgD、IgA、及びIgY)、クラス(例えば、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、及びIgA2)、またはサブクラスのものであり得る。簡単にするために、分析物に対する抗体は、多くの場合、本明細書では、「抗分析物抗体」または単に「分析物抗体」と呼ばれる。
抗体の「抗体のフラグメント」、「抗体フラグメント」、及び「抗原結合フラグメント」という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の1つ以上のフラグメントを指すために、本明細書では互換的に使用される(一般には、以下を参照:Holliger et al.,Nat.Biotech.,23(9):1126-1129(2005))。本明細書に記載の抗体の任意の抗原結合フラグメントは、本発明の範囲内である。抗体フラグメントは、望ましくは、例えば、1つ以上のCDR、可変領域(もしくはその部分)、定常領域(もしくはその部分)、またはそれらの組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、部分には、インタクト抗体のFc領域の定常重鎖ドメイン(すなわち、抗体アイソタイプに応じて、CH2、CH3、またはCH4)を含まれない。抗体フラグメントの例としては、(i)VL、VH、CL、及びCH1ドメインからなる一価フラグメントであるFabフラグメント、(ii)ヒンジ領域でジスルフィド架橋により連結された2つのFabフラグメントを含む二価フラグメントであるF(ab’)2フラグメント、(iii)抗体の単一アームのVL及びVHドメインからなるFvフラグメント、(iv)穏やかな還元条件を使用して、F(ab’)2フラグメントのジスルフィド架橋を切断することにより得られるFab’フラグメント、(v)ジスルフィド安定化Fvフラグメント(dsFv)、(vi)抗原に特異的に結合する抗体単一可変領域ドメイン(VHまたはVL)ポリペプチドであるドメイン抗体(dAb)、(vii)Fab’-SHフラグメント、(viii)Fdフラグメント、(ix)ダイアボディ、(x)一本鎖Fv(scFv)分子、(xi)軽鎖可変ドメインを1つのみ含有する一本鎖ポリペプチド、(xii)軽鎖可変ドメインの3つのCDRを含有する一本鎖ポリペプチド、(xii)重鎖可変領域を1つのみ含有する一本鎖ポリペプチド、及び、(xiii)重鎖可変領域の3つのCDRを含有する一本鎖ポリペプチド、が挙げられるが、これらに限定されない。
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントは、既知の手法で生成され得る。例えば、Fab及びF(ab’)2フラグメントは、パパイン(2つの同一のFabフラグメントを生成する)またはペプシン(F(ab’)2フラグメントを生成する)などの酵素を使用して、免疫グロブリン分子のタンパク質分解切断で生成され得る。IgG分子のF(ab’)2フラグメントは、より大きな(「親」)IgG分子の2つの抗原結合部位を保持し、これには、両方の軽鎖(可変軽鎖領域及び定常軽鎖領域を含有)、重鎖のCH1ドメイン、ならびに親IgG分子のジスルフィド形成ヒンジ領域が含まれる。従って、F(ab’)2フラグメントは、依然として、親IgG分子のような抗原分子を架橋することが可能ある。
本明細書で使用される「フラグメント抗原結合フラグメント」または「Fabフラグメント」は、抗原に結合し、1つの抗原結合部位、1つの完全な軽鎖、及び1つの重鎖の一部を含む抗体のフラグメントを指す。Fabは、VL、VH、CL、及びCH1ドメインからなる一価フラグメントである。Fabは、重鎖及び軽鎖のそれぞれの1つの定常ドメイン及び1つの可変ドメインからなる。可変ドメインは、パラトープ(抗原結合部位)を含み、これは、単量体のアミノ末端に一連の相補性決定領域を含む。従って、Yの各アームは、抗原上のエピトープに結合する。例えば、酵素パパインを使用して、当該技術分野で記載されているように、Fabフラグメントを生成することができ、免疫グロブリン単量体を2つのFabフラグメントとFcフラグメントに切断するために、これを使用することができるか、または、組み換え手段で、これを生成することができる。
本明細書で使用される「F(ab’)2フラグメント」は、ヒンジ領域の一部をインタクトのままにしながら、Fc領域の大部分を除去するIgG抗体全体のペプシン消化で生成された抗体を指す。F(ab’)2フラグメントは、ジスルフィド結合で互いに連結された2つの抗原結合F(ab)部分を有し、従って、約110kDaの分子量を有する二価のものである。二価抗体フラグメント(F(ab’)2フラグメント)は、IgG分子全体よりも小さく、組織への浸透を良好にし、それにより、免疫組織化学における抗原認識が容易になる。また、F(ab’)2フラグメントを使用すると、生細胞上のFc受容体またはプロテインA/Gへの非特異的結合が回避される。F(ab’)2フラグメントは、抗原に結合して沈殿し得る。
本明細書で使用される「フレームワーク」(FR)または「フレームワーク配列」は、可変領域の残りの配列からCDRを差し引いたものを意味し得る。CDR配列の正確な定義が、種々のシステムで決定することができるので、フレームワーク配列の意味は、それに対応して、種々の解釈の対象となる。6つのCDR(軽鎖のCDR-L1、CDR-L2、及びCDR-L3、ならびに重鎖のCDR-H1、CDR-H2、及びCDR-H3)はまた、軽鎖及び重鎖のフレームワーク領域を4つのサブ領域(FR1、FR2、FR3、及びFR4)に分割し、CDR1は、FR1及びFR2間に位置し、CDR2は、FR2及びFR3間に位置し、CDR3は、FR3及びFR4間に位置する。特定のサブ領域をFR1、FR2、FR3、またはFR4と特定することなく、他者が言及するフレームワーク領域は、単一の天然に存在する免疫グロブリン鎖の可変領域内で組み合わされたFRを表す。本明細書で使用される場合、FRは、4つのサブ領域のうちの1つを表し、FRは、フレームワーク領域を構成する4つのサブ領域のうちの2つ以上を表す。
ヒト重鎖及び軽鎖FR配列は、当該技術分野で既知であり、当該技術分野で既知の手法を使用して非ヒト抗体をヒト化するため重鎖及び軽鎖「アクセプター」フレームワーク配列(または、単に「アクセプター」配列)として使用することができる。一実施形態では、ヒト重鎖及び軽鎖アクセプター配列は、一般公開されているデータベース、例えば、V-base(ハイパーテキスト転送プロトコール:vbase(dot)mrc-cpe(dot)cam(dot)ac(dot))uk)または国際ImMunoGeneTics(登録商標)(IMGT(登録商標))情報システム(ハイパーテキスト転送プロトコール:imgt(dot)cines(dot)fr/texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/)に記載されているフレームワーク配列から選択される。
「組み換え抗体」及び「組み換え抗体」は、1つ以上のステップで調製された抗体を指し、これには、組み換え手法で、適切な発現ベクターに1つ以上のモノクローナル抗体の全部または一部をコードする核酸配列をクローニングすること、続いて、適切な宿主細胞に抗体を発現させること、が含まれる。用語には、組み換え産生されたモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体(完全または部分的にヒト化)、抗体フラグメントから形成された多重特異性または多価構造、二機能性抗体、ヘテロコンジュゲート抗体、DVD-Ig(登録商標)、及び本明細書(i)に記載される他の抗体が含まれるが、これらに限定されない。(二重可変ドメイン免疫グロブリン及びそれらを作製する方法は、Wu,C.,et al.,Nature Biotechnology,25:1290-1297(2007)に記載されている)。
「核酸」、「ポリヌクレオチド」、「ヌクレオチド配列」、及び「オリゴヌクレオチド」という用語は、本明細書では互換的に使用され、それぞれ、ピリミジン及び/またはプリン塩基、好ましくは、シトシン、チミン、及びウラシル、ならびにアデニン及びグアニンのポリマーまたはオリゴマーを指す(以下を参照:Albert L.Lehninger,Principles of Biochemistry,at 793-800(Worth Pub.1982))。用語は、任意のデオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、またはペプチド核酸構成成分、及びそれらの任意の化学バリアント、例えば、それらの塩基のメチル化形態、ヒドロキシメチル化形態、またはグリコシル化形態を包含する。ポリマーまたはオリゴマーは、組成物中で不均一または均一であり得るか、天然源から単離され得るか、または人工的もしくは合成的に生成され得る。加えて、核酸は、DNAもしくはRNA、またはそれらの混合物であってよく、ホモ二本鎖、ヘテロ二本鎖、及びハイブリッド状態を含む、一本鎖形態または二本鎖形態で永続的または一時的に存在し得る。いくつかの実施形態では、核酸または核酸配列は、他の種類の核酸構造、例えば、DNA/RNAヘリックス、ペプチド核酸(PNA)、モルホリノ核酸(例えば、以下を参照:Braasch and Corey,Biochemistry,41(14):4503-4510(2002)及び米国特許第5,034,506号)、ロックされた核酸(LNA;以下を参照:Wahlestedt et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,97:5633-5638(2000))、シクロヘキセニル核酸(以下を参照:J.Am.Chem.Soc.,122:8595-8602(2000))、及び/またはリボザイムを含む。「核酸」及び「核酸配列」という用語は、天然ヌクレオチドと同じ機能を示し得る、非天然ヌクレオチド、改変ヌクレオチド、及び/または非ヌクレオチド構成単位を含む鎖(例えば、「ヌクレオチドアナログ」)も包含し得る。
「ペプチド」、「ポリペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書では互換的に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマー形態を指し、これには、コード化及び非コード化アミノ酸、化学的または生化学的に改変または誘導体化されたアミノ酸、ならびに改変ペプチド骨格を有するポリペプチドが含まれ得る。
「免疫原」及び「抗原」という用語は、本明細書では互換的に使用され、動物(例えば、哺乳動物)において免疫応答を誘導する任意の分子、化合物、または物質を指す。「免疫応答」は、例えば、抗体産生及び/または免疫エフェクター細胞の活性化を伴い得る。本開示の文脈における抗原は、哺乳動物において免疫応答を誘発する任意のタンパク質性または非タンパク質性(例えば、炭水化物または脂質)分子の任意のサブユニット、フラグメント、またはエピトープを含み得る。「エピトープ」とは、抗体または抗原受容体に認識される抗原の配列を意味する。エピトープは、当該技術分野では「抗原決定基」とも呼ばれる。特定の実施形態では、エピトープは、抗体に特異的に結合される抗原の領域である。特定の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基を含んでもよい。特定の実施形態では、エピトープは、特定の3次元構造特性(例えば、「立体配座」エピトープ)及び/または特定の電荷特性を有し得る。抗原は、ウイルス、細菌、寄生虫、真菌、原生動物、プリオン、細胞、または細胞外起源のタンパク質またはペプチドであり得、これは、哺乳動物において免疫応答を誘発し、好ましくは、防御免疫がもたらされる。
本明細書で使用される「検出可能な標識」及び「標識」という用語は、視覚的または機器的手段で検出可能なシグナルを生成し得る部分を指す。いくつかの実施形態では、標識は、直接標識、例えば、その自然状態で、肉眼で、または光学フィルター及び/または適用された刺激、例えば、蛍光を促進するUV光、を用いて容易に見えるエンティティである。例えば、着色微粒子、例えば、染料ゾル、金属ゾル(例えば、金)、及び着色ラテックス粒子が非常に適している。いくつかの実施形態では、標識は、間接標識、例えば、酵素、例えば、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼ、である。間接標識は、通常、可視シグナルが検出され得る前に、1つ以上の展開試薬、例えば、基質を添加することを要する。
本明細書で使用される場合、「存在」または「非存在」(あるいは、「存在する」または「存在しない」)は、特定のエンティティ(例えば、分析物)の量またはレベルについて記載するための相対的な意味で使用される。例えば、分析物が検査試料中に「存在する」と言われる場合、それは、この分析物のレベルまたは量が、所定の閾値を超えていることを意味し、逆に、分析物が検査試料中に「存在しない」と言われる場合、それは、この分析物のレベルまたは量が所定の閾値を下回っていることを意味する。所定の閾値は、分析物を検出するために使用される特定の検査に関連する検出可能性の閾値、または任意の他の閾値であり得る。分析物が試料中で「検出」される場合、それは、試料中に「存在し」;分析物が「検出されない」場合、それは、試料中に「存在しない」。さらに、分析物が「検出される」または分析物が「存在する」試料は、分析物に対して「陽性」である試料である。分析物が「検出されない」または分析物が「存在しない」試料は、分析物に対して「陰性」である試料である。
本明細書で使用される場合、「分析物」という用語は、リガンド、受容体、または酵素(例えば、抗体または抗原)への特異的結合で検出及び/または測定されるべき化合物または組成物を指す。いくつかの実施形態では、分析物は、タンパク質または核酸である。いくつかの実施形態では、分析物は、抗原である。いくつかの実施形態では、分析物は、抗原のフラグメントである。いくつかの実施形態では、分析物は、分析物アナログまたは分析物誘導体(例えば、化学的または生物学的方法で改変された分析物)である。いくつかの実施形態では、分析物は、エピトープである。いくつかの実施形態では、「分析物」という用語は、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質及び/または核酸を指す。いくつかの実施形態では、分析物は、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質及び/または核酸のフラグメント及び/またはエピトープである。いくつかの実施形態では、分析物は、SARS-CoV-2スパイクタンパク質(UniProtKBアクセッション番号P0DTC2で提供される「S」タンパク質)またはスパイクタンパク質受容体結合ドメインである(例えば、以下を参照:Wrapp(2020)Cryo-EM structure of the 2019-nCoV spike in the prefusion conformation”Science 367:1260-63;Walls(2020)“Structure,Function,and Antigenicity of the SARS CoV-2 Spike Glycoprotein”Cell 180:1-12(これらは、参照により本明細書に組み込まれる)。いくつかの実施形態では、分析物は、ウイルス転写及び/または複製タンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC1で提供されるレプリカーゼポリタンパク質1a(R1a)またはUniProtKBアクセッション番号P0DTD1で提供されるレプリカーゼポリタンパク質1ab(R1ab))である。いくつかの実施形態では、分析物は、ウイルス出芽タンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC3で提供されるタンパク質3aまたはP0DTC4で提供されるエンベロープ小膜タンパク質(E))である。いくつかの実施形態では、分析物は、ウイルス形態形成タンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC5で提供される膜タンパク質(M))である。いくつかの実施形態では、分析物は、非構造タンパク質6(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC6で提供される)、タンパク質7a(NS7A)(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC7で提供される)、タンパク質7b(NS7B)(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTD8で提供される)、非構造タンパク質8(NS8)(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC8で提供される)、またはタンパク質9b(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTD2で提供される)である。いくつかの実施形態では、分析物は、ウイルスゲノムパッケージングタンパク質(例えば、核タンパク質(例えば、N)、例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC9で提供される)である。いくつかの実施形態では、分析物は、未同定タンパク質である(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTD3またはA0A663DJA2で提供される)。
本明細書で使用される場合、「システム」は、共通の目的のために一緒に動作する複数の実コンポーネント及び/または抽象コンポーネントを指す。いくつかの実施形態では、「システム」は、ハードウェア及び/またはソフトウェアコンポーネントの統合集合体である。いくつかの実施形態では、システムの各コンポーネントは、1つ以上の他のコンポーネントと相互作用し、及び/または1つ以上の他のコンポーネントに関連する。いくつかの実施形態では、システムは、方法を制御及び指示するためのコンポーネント及びソフトウェアの組み合わせを指す。
本明細書で使用される場合、「試料」という用語は、SARS-CoV-2またはその一部もしくは構成成分を含むか、あるいは、SARS-CoV-2またはその一部もしくは構成成分を潜在的に含む、任意の試料を指す。従って、「試料」という用語は、分析物、例えば、SARS-CoV-2またはその一部もしくは構成成分の存在または量について検査されるべき材料を指す。好ましくは、試料は、流体試料、好ましくは、液体試料である。例えば、試料は、体液、例えば、血液(例えば、毛細血管血、静脈血、乾燥血斑などを含む)、血清、血漿、眼液、尿、粘液、***、鼻もしくは鼻咽頭スワブ液、咽頭スワブ、涙、汗、または唾液、であってよい。試料となり得る溶液、溶出液、懸濁液、または抽出物を作成するために、粘性液体、半固体、または固体の標本が使用されてもよい。例えば、喉または生殖器スワブが、試料を作成するために溶液に懸濁され得る。
「ポイント・オブ・ケアデバイス」は、患者のケアの時間及び場所(例えば、病院、内科医の診療所、緊急もしくは他の医療施設、患者の家庭、介護施設、及び/または長期ケア及び/またはホスピス施設)で、ポイント・オブ・ケアまたはその近く(つまり、研究室外)において検査する医療診断法を提供するために使用されるデバイスを指す。ポイント・オブ・ケアデバイスの例としては、Abbott Laboratories(Abbott Park,IL)(例えば、i-STAT及びi-STAT Alinity、Universal Biosensors(Rowville,Australia)(以下を参照:US2006/0134713)、Axis-Shield PoC AS(Oslo,Norway)、及びClinical Lab Products(Los Angeles,USA)で製造されたものが挙げられる。
本明細書で使用されるアッセイの「感度」は、結果が陽性である対象に対する、陽性と正確に同定(例えば、対象が検査されている疾患または病状に罹患する対象を正確に同定)された対象の比を指す。例えば、これには、β-コロナウイルスなどのコロナウイルスに感染していると対象を、β-コロナウイルスなどのコロナウイルスに感染していないか、または感染したことがない対象から正確に識別することが含まれ得る。いくつかの態様では、アッセイのシグナル対ノイズ(S/N)比の変化を評価することにより、アッセイの感度を決定することができる。例えば、いくつかの態様では、S/N比の増加は、特定の分析物(例えば、SARS-CoV-2ヌクレオキャプシドタンパク質)に対するアッセイの感度の改善を示し得る。
本明細書で使用されるアッセイの「特異度」は、結果が陰性である対象に対する、陰性と正確に同定(例えば、対象が検査されている疾患または病状に罹患していない対象を正確に同定)された対象の比を指す。例えば、これには、β-コロナウイルスなどのコロナウイルスに感染している対象を、β-コロナウイルスなどのコロナウイルスに感染したことがない対象から正確に識別することが含まれ得る。
本明細書で特に定義しない限り、本開示に関連して使用される科学用語及び技術用語は、当業者らが一般に理解する意味を有するものとする。用語の意味及び範囲は明確でなければならない。但し、潜在的なあいまいさがある場合は、本明細書で提供される定義が、任意の辞書または外部の定義よりも優先される。さらに、別途文脈上必要のない限り、単数形の用語は、複数形を含み、複数形の用語は、単数形を含むものとする。
好ましい方法及び材料を以下に記載するが、本明細書に記載のものと同様または同等の方法及び材料を本開示の実施または検査に使用することができる。本明細書で言及された全ての刊行物、特許出願、特許、及び他の参考文献は、全体が参照により組み込まれる。本明細書に開示の材料、方法、及び実施例は、例示のみを目的としており、限定を意図しない。
1.抗体
開示された方法に従って、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する一次抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、Fab)、及び、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質に特異的に結合する二次抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、Fab)と、試料を接触させる。一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、SARS-CoV-2ウイルスまたはそのフラグメント由来のタンパク質の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質は、ウイルスゲノムパッケージングタンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC9で提供される、例えば、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質)である。
開示された方法に従って、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する一次抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、Fab)、及び、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質に特異的に結合する二次抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、Fab)と、試料を接触させる。一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、SARS-CoV-2ウイルスまたはそのフラグメント由来のタンパク質の異なるエピトープを認識する。いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質は、ウイルスゲノムパッケージングタンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC9で提供される、例えば、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質)である。
一次抗体またはその抗原結合フラグメント抗体は、(i)配列番号1と少なくとも70%(例えば、75%、80%、85%、90%、95%、98%)同一であるCDR1アミノ酸配列、配列番号2と少なくとも70%同一であるCDR2アミノ酸配列、及び配列番号3と少なくとも70%同一であるCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)、配列番号4と少なくとも70%同一であるCDR1アミノ酸配列、配列番号5と少なくとも70%同一であるCDR2アミノ酸配列、及び配列番号6と少なくとも70%同一であるCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む。
あるいは、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号1、配列番号2、及び/または配列番号3と少なくとも90%同一である重鎖可変領域CDR1、CDR2、及びCDR3アミノ酸配列、及び/または、それぞれ、配列番号4、配列番号5、及び/または配列番号6と少なくとも90%同一である軽鎖可変領域CDR1、CDR2、及びCDR3アミノ酸配列、を含んでもよい。
一実施形態では、(i)重鎖可変領域CDR1、CDR2、及び/またはCDR3アミノ酸配列のそれぞれは、それぞれ、配列番号1、配列番号2、及び/または配列番号3を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、(ii)軽鎖可変領域CDR1、CDR2、及び/またはCDR3アミノ酸配列のそれぞれは、それぞれ、配列番号4、配列番号5、及び/または配列番号6を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。開示された抗体の重鎖及び/または軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3が、上記のアミノ酸配列から本質的になる場合、追加の構成要素は、抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、精製または単離を容易にするビオチンなどのタンパク質部分)に実質的に影響を及ぼさないCDRに含まれ得る。開示された抗体の重鎖及び/または軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3が上記のアミノ酸配列からなる場合、各CDRは、任意の追加の構成要素(例えば、CDRに対して内因性でない構成要素)を含まない。
配列番号1-CKASGYSFTSYWMHW
配列番号2-MIDPSDSETRLNQRFKDK
配列番号3-CARSLLRGVYAMDYW
配列番号4-CKASQSVSNDVAW
配列番号5-YYASNRYTGVPDR
配列番号6-CQQDYSSPYTF
配列番号1-CKASGYSFTSYWMHW
配列番号2-MIDPSDSETRLNQRFKDK
配列番号3-CARSLLRGVYAMDYW
配列番号4-CKASQSVSNDVAW
配列番号5-YYASNRYTGVPDR
配列番号6-CQQDYSSPYTF
いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号7を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列、及び、配列番号8を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む。VHアミノ酸配列が配列番号7から本質的になり、VLアミノ酸配列が配列番号8から本質的になる場合、追加の構成要素が、抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、精製または単離を容易にするビオチンまたはHisタグなどのタンパク質部分)に実質的に影響を及ぼさない重鎖または軽鎖可変領域に含まれ得る。VHアミノ酸配列が配列番号7からなり、VLアミノ酸配列が配列番号8からなる場合、重鎖及び軽鎖可変領域は、任意の追加の構成要素(例えば、重鎖または軽鎖の可変領域に内因性でない構成要素)を含まない。
他の実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号7と少なくとも70%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号8と少なくとも70%である軽鎖可変領域アミノ酸配列、を含んでもよい。
配列番号7-QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQRFKDKATLTVDRSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARSLLRGVYAMDYWGQGTSVTVSS
配列番号8-
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIK
配列番号7-QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQRFKDKATLTVDRSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARSLLRGVYAMDYWGQGTSVTVSS
配列番号8-
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIK
いくつかの実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号17を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列、及び、配列番号18を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む。VHアミノ酸配列が配列番号17から本質的になり、VLアミノ酸配列が配列番号18から本質的になる場合、追加の構成要素が、抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、精製または単離を容易にするビオチンまたはHisタグなどのタンパク質部分)に実質的に影響を及ぼさない重鎖または軽鎖可変領域に含まれ得る。VHアミノ酸配列が配列番号17からなり、VLアミノ酸配列が配列番号18からなる場合、重鎖及び軽鎖可変領域は、任意の追加の構成要素(例えば、重鎖または軽鎖の可変領域に内因性でない構成要素)を含まない。
他の実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号17と少なくとも70%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列及び配列番号18と少なくとも70%である軽鎖可変領域アミノ酸配列、を含んでもよい。
配列番号17-QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQRFKDKATLTVDRSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARSLLRGVYAMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDC
配列番号18-
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNES
配列番号17-QVQLQQSGPQLVRPGASVKISCKASGYSFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGMIDPSDSETRLNQRFKDKATLTVDRSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCARSLLRGVYAMDYWGQGTSVTVSSAKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDC
配列番号18-
SIVMTQTPKFLLVSAGDRVTITCKASQSVSNDVAWYQQKPGQSPKLLIYYASNRYTGVPDRFTGSGYGTDFTFTISTVQAEDLAVYFCQQDYSSPYTFGGGTKLEIKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNES
二次抗体またはその抗原結合フラグメント抗体は、(i)配列番号9と少なくとも70%(例えば、75%、80%、85%、90%、95%、98%)同一であるCDR1アミノ酸配列、配列番号10と少なくとも70%同一であるCDR2アミノ酸配列、及び配列番号11と少なくとも70%同一であるCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、ならびに、(ii)、配列番号12と少なくとも70%同一であるCDR1アミノ酸配列、配列番号13と少なくとも70%同一であるCDR2アミノ酸配列、及び配列番号14と少なくとも70%同一であるCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む。
あるいは、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、それぞれ、配列番号9、配列番号10、及び/または配列番号11と少なくとも90%同一である重鎖可変領域CDR1、CDR2、及びCDR3アミノ酸配列、及び/または、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び/または配列番号14と少なくとも90%同一である軽鎖可変領域CDR1、CDR2、及びCDR3アミノ酸配列、を含んでもよい。
一実施形態では、(i)重鎖可変領域CDR1、CDR2、及び/またはCDR3アミノ酸配列のそれぞれは、それぞれ、配列番号9、配列番号10、及び/または配列番号11を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなり、(ii)軽鎖可変領域CDR1、CDR2、及び/またはCDR3アミノ酸配列のそれぞれは、それぞれ、配列番号12、配列番号13、及び/または配列番号14を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる。開示された抗体の重鎖及び/または軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3が、上記のアミノ酸配列から本質的になる場合、追加の構成要素は、抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、精製または単離を容易にするビオチンなどのタンパク質部分)に実質的に影響を及ぼさないCDRに含まれ得る。開示された抗体の重鎖及び/または軽鎖のCDR1、CDR2、及びCDR3が上記のアミノ酸配列からなる場合、各CDRは、任意の追加の構成要素(例えば、CDRに対して内因性でない構成要素)を含まない。
配列番号9-SYAIS
配列番号10-GIIPIFGTANYAQKFQG
配列番号11-GYWGSGYHYYGMDV
配列番号12-GGNNIGSKSVH
配列番号13-YDSDRPS
配列番号14-QVWDRSSDLVV
配列番号9-SYAIS
配列番号10-GIIPIFGTANYAQKFQG
配列番号11-GYWGSGYHYYGMDV
配列番号12-GGNNIGSKSVH
配列番号13-YDSDRPS
配列番号14-QVWDRSSDLVV
いくつかの実施形態では、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号15を含むか、それから本質的になるか、またはそれからなる重鎖可変領域(VH)アミノ酸配列、及び、配列番号16を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる軽鎖可変領域(VL)アミノ酸配列を含む。VHアミノ酸配列が配列番号15から本質的になり、VLアミノ酸配列が配列番号16から本質的になる場合、追加の構成要素が、抗体またはその抗原結合フラグメント(例えば、精製または単離を容易にするビオチンまたはHisタグなどのタンパク質部分)に実質的に影響を及ぼさない鎖または軽鎖可変領域に含まれ得る。VHアミノ酸配列が配列番号15からなり、VLアミノ酸配列が配列番号16からなる場合、重鎖及び軽鎖可変領域は、任意の追加の構成要素(例えば、重鎖または軽鎖の可変領域に内因性でない構成要素)を含まない。
他の実施形態では、二次抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号15と少なくとも70%同一である重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号16と少なくとも70%である軽鎖可変領域アミノ酸配列を含んでもよい。
配列番号15-EVQLVESGGGVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYWGSGYHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKC
配列番号16-DIQMTQSPSSSVAPGKTARIPCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVIYYDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRSSDLVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTESS
配列番号15-EVQLVESGGGVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYWGSGYHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKC
配列番号16-DIQMTQSPSSSVAPGKTARIPCGGNNIGSKSVHWYQQKPGQAPVLVIYYDSDRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISRVEAGDEADYYCQVWDRSSDLVVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTESS
本明細書に記載の核酸またはアミノ酸配列「同一性」は、目的の核酸またはアミノ酸配列を、参照核酸またはアミノ酸配列と比較することにより決定することができる。パーセント同一性は、最長配列の長さ(例えば、目的の配列または参照配列のいずれかの長さの、いずれか長い方)で除した、目的の配列及び参照配列間で同じである(例えば、同一である)ヌクレオチドまたはアミノ酸残基の数である。最適なアラインメントを取得し、2つ以上の配列間の同一性を計算するための多数の数学的アルゴリズムが既知であり、多数の利用可能なソフトウェアプログラムに組み込まれる。そのようなプログラムの例としては、CLUSTAL-W、T-Coffee、及びALIGN(核酸及びアミノ酸配列のアラインメント用)、BLASTプログラム(例えば、BLAST2.1、BL2SEQ、及びそれらの後のバージョン)、ならびにFASTAプログラム(例えば、FASTA3x、FAS(商標)、及びSSEARCH)(配列アラインメント及び配列類似検索用)が挙げられる。配列アラインメントアルゴリズムはまた、例えば、Altschul et al.,J.Molecular Biol.,215(3):403-410(1990)、Beigert et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,106(10):3770-3775(2009)、Durbin et al.,eds.,Biological Sequence Analysis:Probabilistic Models of Proteins and Nucleic Acids,Cambridge University Press,Cambridge,UK(2009),Soding,Bioinformatics,21(7):951-960(2005)、Altschul et al.,Nucleic Acids Res.,25(17):3389-3402(1997)、及びGusfield,Algorithms on Strings,Trees and Sequences,Cambridge University Press,Cambridge UK(1997)に開示される。
上述の抗体またはその抗原フラグメントの1つ以上のアミノ酸を、異なるアミノ酸で置換(replaced)または置換(substituted)することができる。アミノ酸の「置換(replacement)」または「置換(substitution)」は、ポリペプチド配列内の同じ位置または残基の別のアミノ酸で、所与の位置または残基の1個のアミノ酸を置換することを指す。
加えて、1個以上のアミノ酸を、抗体またはその抗原結合フラグメントに挿入することができる(例えば、重鎖及び/または軽鎖可変領域アミノ酸配列への挿入)。任意数の任意の好適なアミノ酸を、抗体またはその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列に挿入することができる。この点において、少なくとも1個のアミノ酸(例えば、2個以上、5個以上、または10個以上のアミノ酸)であるが、多くとも20個のアミノ酸(例えば、18個以下、15個以下、または12個以下のアミノ酸)を、抗体またはその抗原結合フラグメントのアミノ酸配列に挿入することができる。例えば、1~10個のアミノ酸(例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10個のアミノ酸)は、抗体または抗原結合フラグメントのアミノ酸配列に挿入され得る。この点において、アミノ酸(複数可)を、抗体またはその抗原結合フラグメントの任意の好適な位置に挿入することができる。好ましくは、アミノ酸(複数可)は、抗体またはその抗原結合フラグメントのCDR(例えば、CDR1、CDR2、またはCDR3)に挿入される。
本発明の方法で使用される抗体またはその抗原結合フラグメントは、本明細書に記載の特定のアミノ酸配列を含むポリペプチドに限定されない。実に、抗体またはその抗原結合フラグメントは、テノホビルまたはテノホビル誘導体への結合について本発明の抗体またはその抗原結合フラグメントと競合する任意の重鎖ポリペプチドまたは軽鎖ポリペプチドを含み得る。抗体競合は、例えば、ELISA、ウェスタンブロット、または免疫組織化学法などの通常のペプチド競合アッセイを使用してアッセイすることができる(例えば、以下を参照:U.S.Patents 4,828,981 and 8,568,992;及びBraitbard et al.,Proteome Sci.,4:12(2006))。
抗体は、当該技術分野で既知の多数の手法のいずれかで産生され得る。例えば、重鎖及び軽鎖をコードする発現ベクター(複数可)が標準的な手法で宿主細胞にトランスフェクトされる、宿主細胞からの発現。「トランスフェクション」という用語の様々な形態は、内因性DNAを原核または真核宿主細胞に導入するために一般に使用される多種多様な手法、例えば、エレクトロポレーション、リン酸カルシウム沈殿、DEAE-デキストラントランスフェクションなど、を包含することが意図される。原核宿主細胞または真核宿主細胞のいずれにおいても抗体を発現させることが可能であるが、真核細胞における抗体の発現が、好ましく、哺乳動物宿主細胞における抗体の発現が、最も好ましい。その理由は、そのような真核細胞(特に、哺乳動物細胞)が、原核細胞よりも、適切に折りたたまれ、免疫学的に活性な抗体を組み立てて分泌する可能性が高いからである。
組み換え抗体を発現するための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター(CHO細胞)(例えば、Kaufman and Sharp,J.Mol.Biol.,159:601-621(1982)に記載のDHFR選択マーカーと共に使用されるdhfr-CHO細胞(Urlaub and Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216-4220(1980)に記載)、NS0骨髄腫細胞、COS細胞、及びSP2細胞を含む)が挙げられる。抗体遺伝子をコードする組み換え発現ベクターが哺乳動物宿主細胞に導入される場合、抗体は、宿主細胞における抗体の発現、または、より好ましくは、宿主細胞が成長する培地への抗体の分泌、を可能にするのに十分な時間、宿主細胞を培養することにより産生される。抗体は、標準的なタンパク質精製法を使用して培地から回収することができる。いくつかの態様では、抗体は、当該技術分野で既知の通常の手法を使用して、CHO及び/またはHEK細胞で精製することができる。
FabフラグメントまたはscFv分子などの機能的な抗体フラグメントを生成するために、宿主細胞を使用することもできる。上記の手順の変形形態が実行され得ることが理解されるであろう。例えば、抗体の軽鎖及び/または重鎖のいずれかの機能的フラグメントをコードするDNAで宿主細胞をトランスフェクトすることが望ましいことがある。組み換えDNA技術はまた、目的の抗原への結合に必要でない軽鎖及び重鎖のいずれかまたは両方をコードするDNAの一部または全部を除去するために使用され得る。そのような切断されたDNA分子から発現される分子も抗体に包含される。
抗体またはその抗原結合部分の組み換え発現のための好ましいシステムでは、抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションでdhfr-CHO細胞に導入される。組み換え発現ベクター内で、抗体の重鎖及び軽鎖遺伝子は、それぞれ、高レベルの遺伝子の転写を駆動するように、CMVエンハンサー/AdMLPプロモーター調節エレメントに作動可能に結合している。組み換え発現ベクターは、メトトレキサート選択/増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトされているCHO細胞の選択を可能にするDHFR遺伝子も担持する。抗体の重鎖及び軽鎖の発現を可能にするために、選択された形質転換体宿主細胞が培養され、インタクト抗体が培地から回収される。組み換え発現ベクターを調製し、宿主細胞にトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、及び培地から抗体を回収するために、標準的な分子生物学的手法が使用される。さらに、本開示は、組み換え抗体が合成されるまで、好適な培地中で宿主細胞を培養することにより、組み換え抗体を合成する方法を提供する。この方法は、さらに、培地から組み換え抗体を単離することを含み得る。
ヒト化抗体は、目的の抗原に特異的に結合し、ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有するフレームワーク(FR)領域と、非ヒト抗体のアミノ酸配列を実質的に有する相補性決定領域(CDR)を含む、抗体もしくはバリアント、誘導体、アナログ、またはそのフラグメントもしくは部分であってよい。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の1つ以上の相補性決定領域(CDR)と、ヒト免疫グロブリン分子由来のフレームワーク領域を有する所望の抗原に結合する非ヒト種抗体由来であり得る。
本明細書で使用される場合、CDRの文脈における「実質的に」という用語は、非ヒト抗体CDRのアミノ酸配列と、少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%同一のアミノ酸配列を有するCDRを指す。ヒト化抗体は、少なくとも1つ、通常は、2つの可変ドメイン(Fab、Fab’、F(ab’)2、FabC、Fv)を実質的に全て含み、CDR領域の全てまたは実質的に全てが、非ヒト免疫グロブリン(例えば、ドナー抗体)のものに対応し、フレームワーク領域の全てまたは実質的に全てが、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のものである。一態様によると、ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域(Fc)の少なくとも一部、通常は、ヒト免疫グロブリンのものも含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖と、少なくとも重鎖の可変ドメインの両方を含有する。抗体は、重鎖のCH1、ヒンジ、CH2、CH3、及びCH4領域も含んでもよい。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化軽鎖のみを含有する。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体は、ヒト化重鎖のみを含有する。特定の実施形態では、ヒト化抗体は、軽鎖及び/または重鎖のヒト化可変ドメインのみを含有する。
ヒト化抗体は、IgM、IgG、IgD、IgA、及びIgEを含む免疫グロブリンの任意のクラス、ならびに、限定されないが、IgG1、IgG2、IgG3及びIgG4を含む任意のアイソタイプから選択することができる。ヒト化抗体は、複数のクラスまたはアイソタイプ由来の配列を含んでもよく、特定の定常ドメインは、当該技術分野で周知の手法を使用して所望のエフェクター機能を最適化するように選択され得る。
ヒト化抗体のフレームワーク(FR)及びCDR領域は、親配列に正確に対応する必要はない。例えば、ドナー抗体CDRまたはコンセンサスフレームワークは、その部位のCDRまたはフレームワーク残基がドナー抗体またはコンセンサスフレームワークのいずれにも対応しないように、少なくとも1個のアミノ酸残基の置換、挿入、及び/または欠失で変異導入され得る。しかし、一実施形態では、そのような変異は、広範にわたるものではないであろう。通常、ヒト化抗体残基の少なくとも90%、少なくとも95%、少なくとも98%、または少なくとも99%が、親FR及びCDR配列のものに対応するであろう。本明細書で使用される場合、「コンセンサスフレームワーク」という用語は、コンセンサス免疫グロブリン配列中のフレームワーク領域を指す。本明細書で使用される場合、「コンセンサス免疫グロブリン配列」という用語は、関連する免疫グロブリン配列のファミリー内で最も頻繁に出現するアミノ酸(またはヌクレオチド)から形成される配列を指す(例えば、以下を参照:Winnaker,From Genes to Clones(Verlagsgesellschaft,Weinheim,Germany 1987))。免疫グロブリンのファミリーでは、コンセンサス配列の各位置は、ファミリー内のその位置で最も頻繁に出現するアミノ酸で占められている。2個のアミノ酸が同じ頻度で出現する場合、いずれもコンセンサス配列に含まれ得る。
ヒト化抗体は、齧歯動物の抗ヒト抗体に対する望ましくない免疫応答を最小限にするように設計され得、これにより、ヒトレシピエントにおける、それらの部分の治療用途の期間及び有効性が制限される。ヒト化抗体は、非ヒトである供給源から、それに導入された1個以上のアミノ酸残基を有してもよい。これらの非ヒト残基は、多くの場合、「移入」残基と呼ばれ、通常は、可変ドメインから取得される。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列を超可変領域配列で置換することにより実施され得る。従って、そのような「ヒト化」抗体は、インタクトヒト可変ドメインよりも実質的に少なく、非ヒト種由来の対応する配列で置換されているキメラ抗体である。例えば、以下を参照:米国特許第4,816,567号(この内容が参照により本明細書に組み込まれる)。ヒト化抗体は、いくつかの超可変領域残基、及び、場合により、いくつかのFR残基が、齧歯動物抗体の類似部位由来の残基で置換されているヒト抗体であってよい。本開示の抗体のヒト化または改変は、限定されないが、米国特許第5,723,323号;同第5,976,862号;同第5,824,514号;同第5,817,483号;同第5,814,476号;同第5,763,192号;同第5,723,323号;同第5,766,886号;同第5,714,352号;同第6,204,023号;同第6,180,370号;同第5,693,762号;同第5,530,101号;同第5,585,089号;同第5,225,539号;及び同第4,816,567号に記載されるものなどの任意の既知の方法を使用して実施することができる。
ヒト化抗体は、SARS-CoV-2抗原に対する高い親和性及び他の好ましい生物学的特性を保持し得る。ヒト化抗体は、親及びヒト化配列の3次元モデルを使用して、親配列及び様々な概念上のヒト化産物の分析プロセスで調製され得る。免疫グロブリンの3次元モデルは、一般に、入手可能である。選択された候補免疫グロブリン配列のありそうな3次元コンフォメーション構造を図示し表示するコンピュータプログラムが利用可能である。これらのディスプレイの調査により、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の可能な役割の分析、例えば、候補免疫グロブリンがその抗原に結合する能力に影響する残基の分析、が可能になる。このように、SARS-CoV-2に対する親和性の増加など、所望の抗体特性が達成されるように、フレームワーク残基を、レシピエント及び移入配列から選択して組み合わせることができる。一般に、超可変領域残基は、抗原結合への影響に直接且つ最も実質的に関与し得る。
ヒト化の代替として、ヒト抗体(本明細書では「完全ヒト抗体」とも呼ばれる)を生成することができる。例えば、PROfusion及び/または酵母関連技術を介して、ライブラリーからヒト抗体を単離することが可能である。トランスジェニック動物(例えば、免疫化の際、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することが可能なマウス)を生成することも可能である。例えば、キメラマウス及び生殖系列変異マウスにおける抗体重鎖結合領域(JH)遺伝子のホモ接合型欠失は、内因性抗体産生の完全な阻害をもたらす。そのような生殖系列変異マウスへのヒト生殖系列免疫グロブリン遺伝子アレイの移入は、抗原チャレンジ時にヒト抗体の産生をもたらすであろう。ヒト化抗体または完全ヒト抗体は、米国特許第5,770,429号;同第5,833,985号;同第5,837,243号;同第5,922,845号;同第6,017,517号;同第6,096,311号;同第6,111,166号;同第6,270,765号;同第6,303,755号;同第6,365,116号;同第6,410,690号;同第6,682,928号;及び同第6,984,720号(これらの内容は、それぞれ、参照により本明細書に組み込まれる)に記載の方法に従って調製され得る。
2.方法
開示された方法は、本明細書に記載されるように、試料中に存在する場合、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープを、一次抗体またはその抗原結合フラグメントに結合させて、第1の複合体を形成させることが可能な条件下で、対象から得られた試料を、検出可能な標識を含み、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープに特異的に結合する一次抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質は、ウイルスゲノムパッケージングタンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC9で提供される、例えば、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質)である。
開示された方法は、本明細書に記載されるように、試料中に存在する場合、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープを、一次抗体またはその抗原結合フラグメントに結合させて、第1の複合体を形成させることが可能な条件下で、対象から得られた試料を、検出可能な標識を含み、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープに特異的に結合する一次抗体またはその抗原結合フラグメントと接触させることを含む。いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質は、ウイルスゲノムパッケージングタンパク質(例えば、UniProtKBアクセッション番号P0DTC9で提供される、例えば、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質)である。
試料は、一次抗体またはその抗体結合フラグメントと接触する前に、1つ以上の処理ステップを受け得る。いくつかの実施形態では、そのような処理ステップには、採取場所から検査場所への試料の保管または輸送を容易にする1つ以上の防腐剤または安定剤の添加が含まれる。いくつかの実施形態では、そのような処理ステップには、目的の分析物について試料を濃縮するために、試料から1つ以上の構成成分を除去する精製ステップ(例えば、フィルター、遠心分離などを使用)が含まれる。
一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して試料と接触させ得る。本明細書で使用される「接触させること」という用語は、抗体に、特異的な目的の分析物が試料に存在する場合に結合相互作用が生じるように、抗体、特に、固体支持体上に固定された抗体を、試料中の目的の分析物(例えば、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質)と十分に極めて近づける、組み合わせ処理のいずれかのタイプを指す。接触は、抗体またはその抗原結合フラグメントと、試料を直接組み合わせること、または、試料に極めて接近した固体支持体を導入することにより、抗体またはその抗原結合フラグメントを含む固体支持体に試料を曝露することを含む、様々な異なる方法で達成され得る。接触は、結合相互作用が生じるように、必要な回数または必要な時間繰り返され得る。
本明細書に記載の方法は、望ましくは、イムノアッセイを使用して実施される。本明細書で使用される「イムノアッセイ」という用語は、抗体または抗原を使用して溶液中の巨大分子または小分子の存在または濃度を測定する生化学的検査を指す。任意の好適なイムノアッセイが使用され得、多種多様なイムノアッセイのタイプ、構成、及び形式が当該技術分野で既知であり、本開示の範囲内である。イムノアッセイの好適なタイプには、酵素結合イムノソルベントアッセイ(ELISA)、ラテラルフローアッセイ、競合阻害イムノアッセイ(例えば、フォワード及びリバース)、ラジオイムノアッセイ(RIA)、フルオロイムノアッセイ(FIA)、化学発光イムノアッセイ(CLIA)、カウンティングイムノアッセイ(CIA)、酵素増幅イムノアッセイ手法(EMIT)、ワンステップ抗体検出アッセイ、ホモジニアスアッセイ、ヘテロジニアスアッセイ、キャプチャーオンザフライアッセイ、単一分子検出アッセイなどが挙げられるが、これらに限定されない。そのような方法は、例えば、米国特許第6,143,576号;同第6,113,855号;同第6,019,944号;同第5,985,579号;同第5,947,124号;同第5,939,272号;同第5,922,615号;同第5,885,527号;同第5,851,776号;同第5,824,799号;同第5,679,526号;同第5,525,524号;同第5,480,792号;同第11,022,598号、国際特許出願公開WO2016/161400;及びAdamczyk et al.,Anal.Chim.Acta,579(1):61-67(2006)に記載されている。
イムノアッセイの形式は、「直接」または「間接」「サンドイッチ」であってよい。サンドイッチ形式は、試料中の抗原を固定化及び検出するための、捕捉抗原及び検出抗原の使用を含む。具体的には、固体支持体(例えば、ELISAプレート、ビーズなど)の表面は、捕捉抗体またはその抗原結合フラグメントでコーティングされ、捕捉抗体は、それに適用された試料中に存在する標的抗原に結合して固定化する。次に、検出抗体が、複合体に添加されるか、または接触する。検出抗体は、抗原の検出及び定量化を可能にするために、抗体で直接標識することができる(「直接サンドイッチイムノアッセイ」)。あるいは、検出抗体が標識されていない場合、二次酵素コンジュゲート検出抗体が使用されてもよい(「間接サンドイッチアッセイ」)。
従って、開示された方法は、さらに、二次抗体を含むコンジュゲートと、試料を接触させることを含んでもよく、二次抗体またはその抗原結合フラグメント、コンジュゲートの一部は、標的抗原(例えば、SARS-CoV-2由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープ)に特異的に結合し、これにより、コンジュゲートの補足された分析物への結合及び免疫サンドイッチ(本明細書では「免疫サンドイッチ複合体」とも呼ばれる)の形成がもたらされる。サンドイッチイムノアッセイ形式では、一次抗体及び二次抗体が、標的分析物/抗原上の2つの異なる重複しないエピトープを認識することが理解されるであろう。
特定の実施形態では、一次抗体またはその抗原結合フラグメントは、固体支持体に結合または固定され得る。「固相」及び「固体支持体」という用語は、本明細書では互換的に使用され、1つ以上の抗体を結合及び/または誘引及び固定するために使用することができる任意の材料を指す。当該技術分野で既知の任意の固体支持体を、本明細書に記載の方法で使用することができる。好適な固体支持体の例としては、電極、試験管、ビーズ、微粒子、ナノ粒子、マイクロウェルまたはマルチウェルプレートのウェル、ゲル、コロイド、生物細胞、シート、ストリップ、及びチップが挙げられる。
一実施形態では、固体支持体は、望ましくは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープに結合する、その表面に固定された複数(例えば、2以上、50以上、100以上、1,000以上、または5,000以上)の抗体またはその抗原結合フラグメントを含む。本明細書で使用される「固定された」という用語は、固体支持体の表面との結合メンバーの安定した会合を指す。本明細書で検討されるように、固体支持体及び試料間の十分なインキュベーション時間の後、試料中に存在する場合、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープが、望ましくは、固定された抗体により固体支持体の表面上で捕捉される。
抗体または抗体フラグメントは、結合を介して固体支持体に結合され得、これは、支持体及び/または支持体への抗体の結合を容易にする抗体の任意の部分、機能化、または改変を含んでもよい。抗体及び支持体間の結合には、1つ以上の化学的または物理的結合(例えば、ファンデルワールス力、水素結合、静電相互作用、疎水性/親水性相互作用などによる非特異的結合)及び/またはそのような結合(複数可)を提供する化学的スペーサーが含まれ得る。抗体を多種多様な固体支持体に結合させるために、多くの手法が使用され得る(例えば、以下を参照:米国特許第5,620,850号;及びHeller,Acc.Chem.Res.,23:128(1990))。
いくつかの実施形態では、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープと、一次抗体もしくは二次抗体または抗体フラグメントとの間の結合親和性は、非特異的に結合した分子または粒子を除去する洗浄ステップを含むアッセイの条件下で結合を維持するのに十分でなければならない。接触は、望ましくは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープと、一次抗体もしくは二次抗体または抗体フラグメントとの間に結合相互作用を生じさせるのに十分な時間維持される(例えば、インキュベートされる)。加えて、インキュベーションは、例えば、アルブミン(例えば、BSA)、非イオン性界面活性剤(Tween-20、TritonX-100)、及び/またはプロテアーゼ阻害剤(例えば、PMSF)などの特異的結合相互作用を促進する結合緩衝液中であってよい。一次抗体もしくは二次抗体または抗体フラグメントの結合親和性及び/または特異度は、結合緩衝液を変化させることによりアッセイで操作または変更されてもよい。
任意の未結合抗体、抗体フラグメント、またはコンジュゲートの構成要素は、例えば、液滴作動、電気泳動、エレクトロウェッティング、誘電泳動、静電作動、電場媒介、電極媒介、毛管力、クロマトグラフィー、遠心分離、吸引、または表面音響波(SAW)ベースの洗浄方法などの任意の好適な手段で免疫サンドイッチから分離され得る。
方法は、さらに、二次抗体にコンジュゲートされた検出可能な標識からのシグナルの存在を評価することを含み、検出可能な標識からのシグナルの存在は、試料中のSARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープの存在を示す。
好適な検出可能な標識には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、及び放射性物質が含まれる(例えば、以下を参照:Zola,Monoclonal Antibodies:A Manual of Techniques,CRC Press,Inc.(1987))。例えば、検出可能な標識は、放射性同位体(例えば、3H、14C、32P、35S、もしくは125I)、蛍光もしくは化学発光化合物(例えば、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、もしくはルシフェリン)、または酵素(例えば、アルカリホスファターゼ、β-ガラクトシダーゼ、もしくは西洋ワサビペルオキシダーゼ)であり得る。抗体を検出可能な標識に別々にコンジュゲートするための当該技術分野で既知の任意の方法が、本開示の文脈で用いられ得る(例えば、以下を参照:Hunter et al.,Nature,144:945(1962);David et al.,Biochemistry,13:1014(1974);Pain et al.,J.Immunol.Meth.,40:219(1981);及びNygren,J.Histochem.and Cytochem.,30:407(1982))。抗体に結合している検出可能な標識から生じるシグナルは、その分光特性に基づいて測定することができる。
上記の抗原捕捉及び免疫サンドイッチ形成方法の異なる立体配座は、本開示の範囲内であることが理解されるであろう。実に、上記の固体支持体、コンジュゲート、及び検出可能な標識の様々な構成要素は、任意の好適な組み合わせ、立体配座、または形式で配置または利用され得る。例えば、開示された方法は、試料を一次抗体、続いて、二次抗体とインキュベートするか、またはその逆でインキュベートする、一段階、遅延一段階、または二段階形式で実施され得る。アッセイ試薬(例えば、微粒子、コンジュゲート、フルオロフォアなど)は、必要に応じて、事前に混合するか、または順次添加され得る。
一実施形態では、ラテラルフローアッセイが使用される。ラテラルフローアッセイは、抗原抗体相互作用を使用して(例えば、イムノクロマトグラフィーを使用して)短時間で分析物を定性的に検出及び/または定量的に測定するための技術を提供する。これらの検査は、通常、アッセイ検査ストリップの形態のアッセイデバイス、またはアッセイストリップがプラスチックケース内に取り付けられたデバイスを使用する。例えば、以下を参照:国際特許出願公開第WO2011102563A1号;米国特許第8,828,739号(これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる)。
ラテラルフローアッセイは、一般に、ラテラルフロー検査ストリップ(例えば、ニトロセルロースまたは濾紙)、試料適用領域(例えば、試料パッド)、検査結果領域(例えば、検査ライン)、任意の対照結果領域(例えば、対照ライン)、及び検出可能な標識(例えば、着色粒子または酵素検出システム)に結合している分析物特異的結合試薬を含むデバイスで提供される。例えば、以下を参照:米国特許第6,485,982号;同第6,187,598号;同第5,622,871号;同第6,565,808号;同第6,809,687号;及び同第10,717,082号(これらのそれぞれは、参照により本明細書に組み込まれる)。いくつかの実施形態では、技術は、特異的結合アッセイ、例えば、イムノアッセイ、を提供するための試薬含浸検査ストリップを含む検査デバイスに関する。
いくつかの実施形態では、本開示は、家庭、診療所、または病院での使用に適しており、最小限の技術及びユーザーの関与で迅速な分析結果を与えることが意図される、ラテラルフローデバイスに関する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のデバイスの使用は、観察可能な検査結果を提供するためにユーザーが一連の操作を実行する方法を含む。
いくつかの実施形態では、ラテラルフローデバイスは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する一次抗体と、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する二次抗体を含む。上で提供される抗体の説明は、本明細書に記載のラテラルフローデバイスに関連する。いくつかの実施形態では、デバイスの検査ラインは、一次抗体を含む。いくつかの実施形態では、試料パッドは、二次抗体を含む。
いくつかの実施形態では、試料は、検査ストリップの一部に適用され、水などの溶離溶媒及び/または好適な抽出緩衝液(例えば、任意に界面活性剤を含む)を通常用いて、ストリップ材料に透過させる。そうすることで、試料は、検査ストリップの検出ゾーン内に、またはそれを通過して進み、分析物(例えば、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントもしくはエピトープ)(試料中に存在すると疑われる)に対する特異的結合試薬(例えば、抗体)が固定される。従って、試料中に存在する分析物は、検出ゾーン内で結合するようになる可能性がある。検査ストリップに組み込むか、またはその後、それに適用することもできる標識試薬を用いて、分析物がそのゾーン内で結合するようになる程度を決定することができる。
いくつかの実施形態では、分析検査デバイスは、液体検査試料を多孔質担体に適用することができるように、ケーシングの外側と直接的または間接的に連通する乾燥多孔質担体を含有する水分不透過性固体材料で構築された中空ケーシングを含む。いくつかの実施形態では、デバイスは、分析物に対する標識特異的結合試薬も含み、標識特異的結合試薬は、湿った状態の場合、多孔性担体内で自由に移動する。いくつかの実施形態では、デバイスは、同じ分析物に対する非標識特異的結合試薬を含み、非標識試薬は、担体材料上の検出ゾーンに永久に固定され、従って、湿った状態では移動しない。標識試薬及び検出ゾーンの相対的な配置は、デバイスに適用された液体試料が標識試薬を受け取り、その後、検出ゾーンに浸透し得、デバイスは、標識試薬が検出ゾーン内で観察されるようになる程度(存在する場合)を提供する。
いくつかの実施形態では、デバイスは、標識試薬を有する多孔性固相材料を第1のゾーンに含む。標識試薬は、多孔性材料が乾燥状態にある間第1のゾーンに保持されるが、例えば、分析物を含有すると疑われる水性液体試料を適用することにより多孔性材料を湿らせた場合、多孔性材料を通って自由に移動する。いくつかの実施形態では、多孔質材料は、第1のゾーンとは空間的に異なる第2のゾーンに、分析物に対する特異度を有する非標識特異的結合試薬を含み、これは、「サンドイッチ」または「競合」反応のいずれかで標識試薬と関与する可能性がある。非標識特異的結合試薬は、多孔性材料が湿った状態にある場合に自由に移動しないように、多孔性材料上にしっかりと固定される。
いくつかの実施形態では、分析物を含有すると疑われる水性液体試料と、本明細書に記載のデバイスを接触させ、その結果、試料が、毛細管現象により多孔性固相材料を通って第1のゾーンを介して第2のゾーンに浸透し、標識試薬は、第1のゾーンから第2のゾーンに、それと共に移動し、試料中の分析物の存在は、標識試薬が第2のゾーンで結合するようになる程度(存在する場合)を観察することにより決定される。
いくつかの実施形態では、標識試薬は、分析物に対する特異的結合パートナーである。標識試薬、分析物(存在する場合)、及び固定された非標識特異的結合試薬は、「サンドイッチ」反応で協働する。これにより、分析物が試料中に存在する場合、標識試薬が第2のゾーンに結合するようになる。サンドイッチ形式では、2つの結合試薬が、分析物の異なるエピトープに対して特異性を有する。いくつかの実施形態では、一次抗体は、固定される。いくつかの実施形態では、二次抗体は、検出可能な標識を含む。
いくつかの実施形態では、検査ストリップ(例えば、担体材料)は、ニトロセルロースを含む。これは、事前の感作を必要とせずに、タンパク質を結合する自然な能力を有するので、紙などの他のストリップ材料よりもかなりの利点を有する。免疫グロブリンなどの特異的結合試薬は、ニトロセルロースに直接適用して固定することができる。試薬の本質的な特異的結合活性を妨げ得る化学処理は必要ない。その後、ニトロセルロース上の未使用の結合部位を、ポリビニルアルコールなどの単純な材料を使用してブロックすることができる。さらに、ニトロセルロースは、幅広い細孔サイズで容易に入手でき、これにより、試料流量などの特定の要件に適合する担体材料の選択が容易になる。
いくつかの実施形態では、多孔性固相材料は、多孔性受容部材に結合しており、そこへ、液体試料を適用することができ、そこから、試料が、多孔性固相材料に浸透し得る。いくつかの実施形態では、多孔性固相材料は、水分不透過性ケーシングまたはハウジング内に収容され、多孔性固相材料が結合している多孔性受容部材は、ハウジングの外に延び、液体試料がハウジングに入り、多孔性固相材料に浸透することを許容する手段として機能し得る。手段、例えば、適切に配置された窓、を有するハウジングが提供されるべきであり、この窓により、多孔性固相材料(固定された非標識特異的結合試薬を担持する)の第2のゾーンが、アッセイの結果を観察することができるように、ハウジングの外側から観察可能になる。必要に応じて、さらなる手段を有するハウジングも提供され得る。これは、多孔性固相材料の別のゾーンを、ハウジングの外側から観察可能にし、別のゾーン1が対照試薬を取り込み、これにより、アッセイ手順が完了したかどうかを表示が通知することを可能にする。いくつかの実施形態では、ハウジングは、使用前の保管中に、突出した多孔性受容部材を保護し得る取り外し可能なキャップまたはシュラウドと共に提供される。必要に応じて、試料適用後に突出している多孔性受容部材の上のキャップまたはシュラウドを交換することができるが、アッセイ手順を実施しており、任意に、標識試薬を、デバイス内のいずれかに、例えば、吸水性試料収集部材に取り込むことができるが、これは、好ましくない。
いくつかの実施形態では、デバイスは、病院、診療所、または家庭での使用に適したキットとして提供される。いくつかの実施形態では、キットは、湿気不透過性包装で個別に包装され、ユーザーへの適切な説明書と共にパッケージ化された複数(例えば、2つ)のデバイスを含む。
いくつかの実施形態では、デバイスは、任意の「対照ゾーン」を含む。存在する場合、「対照」ゾーンは、デバイスが機能しているという無関係なシグナルをユーザーに通知するように設計することができる。試料が検査ストリップに浸透していることを確認するために、例えば、第1のゾーンからの標識抗体、例えば、標識ウサギIgGに結合することになる対照ゾーンに、抗体(例えば、ヤギ抗ウサギIgG)を搭載することができる。いくつかの実施形態では、第1のゾーンは、分析物とは無関係であり、対照ゾーンで特異的に捕捉される抗原及び/または抗体を含む。いくつかの実施形態では、対照ゾーンは、湿らせた場合、変色または発色を生じる無水試薬、例えば、無水硫酸銅を含有し得る。これは、水性試料で湿らせた場合、青色に変化するであろう。さらなる代替として、対照ゾーンは、第1のゾーンからの過剰の標識試薬と反応する固定された分析物を含有し得る。対照ゾーンの目的は、検査が完了していることをユーザーに示すことであるので、対照ゾーンは、目的の検査結果が記録される第2のゾーンの下流に位置しなければならない。従って、陽性対照指標は、試料が検査デバイスを介して必要な距離に浸透していることをユーザーに示す。
理想的には、アッセイの結果は、目で識別できる必要があり、これを容易にするために、直接標識が検出ゾーンに集中するようになる必要がある。いくつかの実施形態では、検出可能な標識は、直接標識、例えば、その自然状態で、肉眼で、または光学フィルター及び/または適用された刺激、例えば、蛍光を促進するUV光、を用いて容易に見えるエンティティである。例えば、着色微粒子、例えば、染料ゾル、金属ゾル(例えば、金)、及び着色ラテックス粒子が非常に適している。小さなゾーンまたは体積(例えば、検査ライン)内の標識の濃縮は、容易に検出可能なシグナル、例えば、強く着色された領域、を生じさせる。目測で、または、必要に応じて、機器で、これを評価することができる。
いくつかの実施形態では、技術は、間接標識の使用を含む。間接標識、例えば、酵素、例えば、アルカリホスファターゼ及び西洋ワサビペルオキシダーゼを使用することができるが、これらは、通常、可視シグナルが検出され得る前に、基質などの1つ以上の展開試薬を追加する必要がある。それらが水性液体試料に溶解または分散するように、多孔性固相材料または、存在する場合は、試料受容部材に、組み込むことができる。あるいは、多孔性材料と接触する前に、展開試薬を試料に添加することができるか、または、結合反応が起こった後に、多孔性材料を展開試薬に曝露することができる。
いくつかの実施形態では、試料の流れは、検出ゾーンを超えて続き、十分な試料が多孔性材料に適用され、その結果、これが生じ得、第2のゾーンで、いかなる結合反応にも関与しない第1のゾーンからの任意の過剰な標識試薬が、この継続的な流れにより検出ゾーンから洗い流される。必要に応じて、担体材料の遠位端に吸収性「シンク」を備えることができる。吸収性シンクは、例えば、Whatman 3MMクロマトグラフィー紙から構成されてもよく、いかなる未結合コンジュゲートも検出ゾーンから洗い流すことを可能にする十分な吸収能力を提供するべきである。そのようなシンクの代替として、検出ゾーンを越えて延びる、ある長さの多孔性固相材料を有することで十分であり得る。
いくつかの実施形態では、担体材料は、試薬が空間的に別個のゾーンに適用されるストリップまたはシートの形態であり、液体試料を、シートまたはストリップを片側または端から別の側または端に浸透させる。
いくつかの実施形態では、多孔性固相を含む材料は、ニトロセルロースである。これは、事前の化学処理なしに、第2のゾーンの抗体をしっかりと固定することができるという利点を有する。例えば、多孔性固相材料が紙を含む場合、第2のゾーンにおける抗体の固定化は、例えば、CNBr、カルボニルジイミダゾール、または塩化トレシルを使用する化学カップリングで行う必要がある。
抗体を検出ゾーンに適用した後、多孔性固相材料の残部を処理して、他の箇所の任意の残りの結合部位をブロックする。ブロッキングは、タンパク質(例えば、ウシ血清アルブミンもしくは乳タンパク質)またはポリビニルアルコールもしくはエタノールアミン、またはこれらの薬剤の任意の組み合わせで処理することにより達成することができる。次に、第1のゾーン用の標識試薬を、乾燥担体上に分配することができ、湿った状態の場合、キャリア内で移動可能になるであろう。これらの様々なプロセスステップ(増感、非標識試薬の適用、ブロッキング、及び標識試薬の適用)のそれぞれの間に、多孔性固相材料が乾燥される。
開示された方法は、品質管理構成要素を含み得る。本明細書に記載のイムノアッセイ及びキットの文脈における「品質管理構成要素」には、キャリブレーター、対照、及び感度パネルが含まれるが、これらに限定されない。抗原などの分析物の濃度を内挿するための較正(標準)曲線を確立するために、「キャリブレーター」または「標準」(例えば、1つ以上、例えば、複数)を使用することができる。あるいは、参照レベルまたは対照レベル(例えば、「低」レベル、「中」レベル、または「高」レベル)に近い単一のキャリブレーターを使用することができる。「感度パネル」を構成するために、複数のキャリブレーター(例えば、複数のキャリブレーターまたは様々な量のキャリブレーター(複数可))を組み合わせて使用することができる。任意に、キャリブレーターは、一連のキャリブレーターの一部であり、キャリブレーターのそれぞれは、例えば、濃度または検出方法(例えば、比色または蛍光検出)で、一連の他のキャリブレーターとは異なる。
開示された方法は、SARS-CoV-2に加えて、さらに、1つ以上の病原体またはその抗原を検出することを含んでもよい。病原体は、目的の感染症を引き起こすか、または、適切な治療のための鑑別診断が必要とされる疾患の症状を引き起こし得る、任意の感染性生物であり得る。目的の感染性生物には、細菌(限定されないが、Escherichia種、Streptococcus種、Haemophilus種、Staphylococcus種、及びNeisseria種を含む)、ウイルス(限定されないが、アデノウイルス、Enterovirus、Echovirus、ヒトヘルペスウイルス、おたふくかぜウイルスAg、インフルエンザ、パラインフルエンザ、呼吸器合胞体ウイルス(RSV)、他のヒトコロナウイルス、ライノウイルス、ヒトメタニューモウイルスを含む)、または真核病原体(真菌及び原生動物を含む)が含まれる。いくつかの実施形態では、方法は、さらに、インフルエンザ、ライノウイルス、RSV、及び/またはアデノウイルスを検出することを含む。
他の病原体の検出は、SARS-CoV-2抗原の検出に使用されるのと同じタイプの方法、例えば、上記のイムノアッセイ、を使用し得る。あるいは、他の病原体の検出は、限定されないが、核酸検出(例えば、マイクロアレイ)、核酸増幅(例えば、RT-PCR)、及び/またはシーケンシング(例えば、次世代シーケンシング)、免疫蛍光アッセイ、血清学的アッセイ、及び細胞培養ベースの検出を含む、検出の非イムノアッセイを使用し得る。
他の病原体の検出は、SARS-Cov-2抗原の検出と同時に、その前に、またはその後に行われ得る。例えば、他の病原体を検出する方法が同じタイプのイムノアッセイである場合、試料は、SARS-Cov-2抗原の検出のためのもの(例えば、ラテラルフローアッセイにおける複数の検査ストリップ用の単一の試料パッド)と同時に、他の病原体の検出試薬と共にインキュベートされ得る。
3.キット及び測定器
本明細書では、上記の方法を実施するためのキットも提供される。キットに含まれる使用説明書は、パッケージ材料に添付されても、添付文書として含まれ得る。使用説明書は、書面または印刷物であり得るが、そのようなものに限定されない。そのような使用説明書を格納し、それらをエンドユーザーに通知することが可能な任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体には、電子記憶媒体(例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ)、光学媒体(例えば、CD ROM)などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「使用説明書」という用語には、使用説明書を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれ得る。
本明細書では、上記の方法を実施するためのキットも提供される。キットに含まれる使用説明書は、パッケージ材料に添付されても、添付文書として含まれ得る。使用説明書は、書面または印刷物であり得るが、そのようなものに限定されない。そのような使用説明書を格納し、それらをエンドユーザーに通知することが可能な任意の媒体が、本開示により企図される。そのような媒体には、電子記憶媒体(例えば、磁気ディスク、テープ、カートリッジ、チップ)、光学媒体(例えば、CD ROM)などが含まれるが、これらに限定されない。本明細書で使用される場合、「使用説明書」という用語には、使用説明書を提供するインターネットサイトのアドレスが含まれ得る。
キットには、本明細書に記載のラテラルフローデバイスが含まれ得る。いくつかの実施形態では、ラテラルフローデバイスは、密封パッケージ内にある(例えば、湿気を通さないラッピングで包まれている)。ラテラルフローデバイスは、使い捨てであってもよい。いくつかの実施形態では、デバイスは、病院、診療所、または家庭での使用に適したキットとして提供される。いくつかの実施形態では、キットは、湿気不透過性包装で個別に包装され、ユーザーへの適切な説明書と共にパッケージ化された複数(例えば、2つ)のデバイスを含む。
キットは、試料容器を含んでもよい。試料容器は、キュベットであってよい。試料ホルダーは、マイクロフルイディクスモジュールを含むカートリッジであってよい。試料ホルダーは、ELISAプレートであってよい。試料容器には、本明細書に開示の方法を実施するのに有用な1つ以上の試薬(例えば、結合緩衝液及び抗体)を含まれ得る。試料ホルダーには、ユーザーの観点から望ましい可能性のある他の材料(複数可)、例えば、緩衝液(複数可)、希釈剤(複数可)、標準(複数可)(例えば、キャリブレーター及び対照)、及び/または試料処理、洗浄、もしくはアッセイのその他のステップの実施に有用な他の任意材料も含まれ得る。
キットは、さらに、試料中のSARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントを検出するための参照標準を含んでもよい。参照標準は、SARS-CoV-2ウイルスまたはそのフラグメントの濃度からのタンパク質の内挿及び/または外挿のための標準曲線を確立するために用いられ得る。キットには、濃度レベルが異なる参照標準が含まれ得る。例えば、キットには、高濃度レベル、中濃度レベル、または低濃度レベルのいずれかを有する1つ以上の参照標準が含まれ得る。参照標準の濃度範囲に関して、これを、アッセイごとに最適化することができる。
キットには、品質管理構成要素(例えば、感度パネル、キャリブレーター、陽性対照)も含まれ得る。品質管理試薬の調製は、当該技術分野で周知であり、様々な免疫診断製品の挿入シートに記載されている。感度パネル部材は、任意に、アッセイ性能特性を確認するために使用され、キット試薬の完全性及びアッセイの標準化の有用な指標である。
キットには、任意に、試料中の追加の病原体を検出するために必要な他の試薬、及び任意の参照標準またはその品質管理構成要素も含まれ得る。
キットには、任意に、アッセイを実施するために、または品質管理評価を容易にするために必要な他の試薬、例えば、緩衝液、塩、酵素、酵素補因子、基質、検出試薬なども含まれ得る。検査試料の単離及び/または処理のための緩衝液及び溶液(例えば、前処理試薬または抽出緩衝液)などの他の構成要素も、キットに含まれ得る。キットには、さらに、1つ以上の他の対照が含まれ得る。キットの構成要素のうちの1つ以上を凍結乾燥することができ、その場合には、キットは、さらに、凍結乾燥構成要素の再構成に適した試薬を含み得る。構成要素のうちの1つ以上は、液体形態であってよい。
キットの様々な構成要素は、任意に、必要に応じて好適な容器で提供される。キットには、さらに、試料を保持または保管するための容器(例えば、試料用の容器またはカートリッジ)が含まれ得る。必要に応じて、キットは、任意に、反応容器、混合容器、及び試薬または検査試料の調製を容易にする他の構成要素を含有し得る。キットには、検査試料の取得を支援するための1つ以上の試料収集/取得器具(例えば、組織試料を取得、保存、または吸引するための、マイクロサンプリングデバイス、マイクロニードル、もしくは他の低侵襲無痛採血法;採血管(複数可);ランセット;毛細血管採血管;他の単一の指先穿刺採血方法;口腔スワブ、鼻/咽頭スワブ;16ゲージもしくは他のサイズの針、手術用ナイフもしくはレーザー(例えば、特に、手持ち式の)、注射器、滅菌容器、またはカニューレ)も含まれ得る。
本明細書に記載の概念、キット、及び方法は、イムノアッセイを実施するための任意の手動、自動、または半自動システムを含む、任意のシステムまたは機器で実施することができる。特定の実施形態では、本明細書に記載のアッセイ、キット、及びキット構成要素を、病院、家庭、または診療所で実施することができる。
特定の実施形態では、本明細書に記載のアッセイ、キット、及びキット構成要素を、例えば、Abbott(商標)ARCHITECT(商標)(Abbott Laboratories)イムノアッセイアナライザーなどのハイスループットイムノアッセイ実験室システムで実施することができる。そのようなデバイス及びその構成要素は、例えば、米国特許第5,468,646号;同第5,543,524号;同第5,545,739号;同第5,565,570号;同第5,669,819号;及び同第5,783,699号に記載されている。
特定の実施形態では、本明細書に記載のアッセイ、キット、及びキット構成要素を、電気化学的または他の手持ち式のまたはポイント・オブ・ケアアッセイシステム、例えば、サンドイッチアッセイ及びAxis-Shield POC ASを実施するAbbottポイント・オブ・ケア(I-STAT(登録商標)、Abbott Laboratories)電気化学アッセイシステムで、実施することができる。免疫センサー及びそれらの製造方法ならびに使い捨て検査デバイスでの操作は、例えば、米国特許第5,063,081号;同第7,419,821号;同第7,682,833号;及び同第7,723,099号;ならびに、米国特許出願公開第2004/0018577号に記載されている。
実施例1
ラテラルフローアッセイ
サンドイッチ型アッセイを利用する、SARS-CoV-2を検出するための例示的なラテラルフローアッセイが提供される。特に、デバイスは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的な標識抗体、例えば、検出可能な標識で標識されたモノクローナル抗体を含む第1のゾーン(例えば、試薬ゾーン)を含む。デバイスは、第2のゾーン(例えば、検出ゾーン)に固定された、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントとは異なるエピトープに特異的な二次抗体を含む。陽性検査は、検出ゾーン(例えば、検査ラインの)に目に見える線が現れることにより示される。
ラテラルフローアッセイ
サンドイッチ型アッセイを利用する、SARS-CoV-2を検出するための例示的なラテラルフローアッセイが提供される。特に、デバイスは、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的な標識抗体、例えば、検出可能な標識で標識されたモノクローナル抗体を含む第1のゾーン(例えば、試薬ゾーン)を含む。デバイスは、第2のゾーン(例えば、検出ゾーン)に固定された、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントとは異なるエピトープに特異的な二次抗体を含む。陽性検査は、検出ゾーン(例えば、検査ラインの)に目に見える線が現れることにより示される。
デバイスの最初の検査を、試薬ゾーンに適用された発泡スワブ上で希釈された熱不活化SARS-CoV-2ウイルスで実施した。LODは、22.5の50%組織培養感染量(TCID50)(TCID50)/検査希釈または1125のTCID50/mLであることが判明した。
アデノウイルス(1型、5型、及び7型)、Enterovirus(EV68及びD68)、Echovirus(1型及び2型)、ヒトヘルペスウイルス(1型及び2型)、おたふくかぜウイルスAg、インフルエンザウイルスA(H1N1株(A/Virginia/ATCC1/2009)、H1N1株(A/WS/33)、及びH3N2株(A/Hongkong/8/68))、インフルエンザB(株(B/Lee/40))、パラインフルエンザ(1型、2型、3型、及び4A型)、呼吸器合胞体ウイルスまたはRSV(A型及びB型)、ヒトコロナウイルス(HKU1、NL63、OC43及び229E)、ライノウイルス(A16型)、MERs-CoV、及びヒトメタニューモウイルス(16A1型)を含む検査された他の多数のウイルスでは、交差反応性は観察されなかった。加えて、非SARS-CoV-2ウイルス(インフルエンザA、ライノウイルス、RSV、またはアデノウイルス)との同時感染は、検出限界近くのSARS CoV-2の検出に影響しなかった。
しかし、25ng/mL~25μg/mLのヒトSARSコロナウイルス核タンパク質を使用した場合、ヒトSARSコロナウイルスに対する交差反応性が観察された。これは、ゲノムまたはSARS-CoV及びSARS-CoV-2間の79.6%の類似性に起因すると思われる。2.5ng/mLのヒトSARSコロナウイルス核タンパク質を含む試料では、交差反応は生じなかった。
Candida albicans、Chlamydia pneumoniae、Streptococcus pyogenes(Group A 19615)、Staphylococcus aureus、Staphylococcus saprophyticus、Neisseria sp.(Neisseria lactamica)、Escherichia coli、Staphylococcus haemolyticus、Streptococcus salivarius、Hemophilus parahaemolyticus、Proteus vulgaris、Moraxella catarrhalis、Klebsiella pneumoniae、Fusobacterium necrophorum、及びMycobacterium tuberculosisを含む他の生物では、交差反応性は観察されなかった。加えて、ポーリングされたヒト鼻洗浄試料では交差反応性は観察されなかった。
例えば、内因性物質、例えば、ムチン、ヘモグロビン、トリグリセリド、黄疸(ビリルビン)、リウマチ因子、抗核抗体、妊娠、及び全血、ならびに、去痰薬、例えば、グアイアコールグリセリルエーテル;気管支拡張薬、例えば、アルブテロール及びエフェドリン;抗ヒスタミン薬、例えば、クロルフェニラミン及びジフェンヒドラミン;鼻充血除去薬、例えば、フェニレフリンヒドロクロリド、及びオキシメタゾリンヒドロクロリド;抗ウイルス薬、例えば、リバビリン、オセルタミビル、及びザナミビル;抗生物質、例えば、アモキシシリン;一般的な薬、例えば、アセチルサリチル酸及びイブプロフェン;降圧薬、例えば、クロロチアジド及びインダパミド;抗糖尿病薬、例えば、グリメピリド(スルホニル尿素)及びインダパミド;ならびに、想定されるCOVID-19薬、例えば、イベルメクチン、ロピナビル、リトナビル、及びクロロキンホスファートを含む様々な既知の干渉物質も含めて、検査を実施した。干渉物質の溶液をフォームスワブまたは試料リポジトリにスパイクし、上記のように検査を完了した。検査された濃度では、干渉は観察されなかった。
実施例2
ラテラルフローアッセイキット
例示的なラテラルフローアッセイキットには、以下の少なくとも1つまたは全てが、別々またはラテラルフローデバイス内に含まれる:ラテラルフローデバイス;1XのXTBE及び1%のBSA溶液中の組み換えSARS-CoV-2Nタンパク質を含む陽性対照スワブ;検査ライン及び対照ラインを備えたニトロセルロース検査ストリップ;患者のスワブ(例えば、フォームが先端についたアプリケーター);ならびに、一次抗体及び二次抗体またはそのフラグメントの少なくとも一方または両方。ラテラルフローデバイスは、ブリッジパッド(例えば、Ahlstrom 1281-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、コンジュゲートパッド(例えば、PNPK002123)、試料パッド(例えば、Ahlstrom 1281-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、Abパッド(例えば、Ahlstrom 904-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、及びハウジングを含む検査ストリップ構成要素を含む。抽出バッファーは、200mMのTricine、1.2%のNaCl、0.75%のZwittergent、0.5%のTween20、及び0.0125%のアジド(pH8.8)を含む。検査ラインを、2mg/mLのBSA-Fab、1.5%のトレハロース、50mMのトリス、0.1%のアジド、及び0.02%のIntrawhite(UV)を含む溶液で包埋または処理した。対照ラインを、1mg/mLのニワトリIgY、1%のトレハロース、50mMのトリス、0.1%のアジド、及び0.05%のFD&C青色色素を含む溶液で包埋または処理した。
ラテラルフローアッセイキット
例示的なラテラルフローアッセイキットには、以下の少なくとも1つまたは全てが、別々またはラテラルフローデバイス内に含まれる:ラテラルフローデバイス;1XのXTBE及び1%のBSA溶液中の組み換えSARS-CoV-2Nタンパク質を含む陽性対照スワブ;検査ライン及び対照ラインを備えたニトロセルロース検査ストリップ;患者のスワブ(例えば、フォームが先端についたアプリケーター);ならびに、一次抗体及び二次抗体またはそのフラグメントの少なくとも一方または両方。ラテラルフローデバイスは、ブリッジパッド(例えば、Ahlstrom 1281-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、コンジュゲートパッド(例えば、PNPK002123)、試料パッド(例えば、Ahlstrom 1281-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、Abパッド(例えば、Ahlstrom 904-Ahlstrom Filtration Inc.、Mt.Holly Springs,Pa.)、及びハウジングを含む検査ストリップ構成要素を含む。抽出バッファーは、200mMのTricine、1.2%のNaCl、0.75%のZwittergent、0.5%のTween20、及び0.0125%のアジド(pH8.8)を含む。検査ラインを、2mg/mLのBSA-Fab、1.5%のトレハロース、50mMのトリス、0.1%のアジド、及び0.02%のIntrawhite(UV)を含む溶液で包埋または処理した。対照ラインを、1mg/mLのニワトリIgY、1%のトレハロース、50mMのトリス、0.1%のアジド、及び0.05%のFD&C青色色素を含む溶液で包埋または処理した。
二次抗体もしくはコンジュゲート抗体またはそのフラグメントは、再懸濁緩衝液(例えば、5mMのホウ酸、0.1%のカゼイン、0.01%のPEG化合物、及び0.01%のアジド(pH7.4))ならびに乾燥緩衝液(例えば、5mMのホウ酸、2%の酵素カゼイン(N-Zケース)、0.1%のTritonX-100、2%のTween20、6%のスクロース、及び0.02%のアジド(pH8))で提供される。二次抗体もしくはコンジュゲート抗体またはそのフラグメントは、配列番号15及び16またはその誘導体、ならびにBSAフリーロバ抗ニワトリを含んでもよい。
実施例3
ラテラルフローアッセイキット
過去7日間にCOVID-19への曝露が疑われるか、またはCOVID-19の症状を示した個人から収集された243人の鼻咽頭検体を使用して、本明細書に開示の一次抗体及び二次抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスを検査した(60人のPCR陽性及び183人のPCR陰性)。
結果は、97.9%の全体一致率を示す(表1)。
ラテラルフローアッセイキット
過去7日間にCOVID-19への曝露が疑われるか、またはCOVID-19の症状を示した個人から収集された243人の鼻咽頭検体を使用して、本明細書に開示の一次抗体及び二次抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスを検査した(60人のPCR陽性及び183人のPCR陰性)。
結果は、97.9%の全体一致率を示す(表1)。
実施例4
ラテラルフローアッセイの比較
COVID-19感染が疑われる患者の鼻腔スワブ由来の試料における、SARS-CoV-2のリアルタイムPCR(RT-PCR)を含む参照方法に対する臨床感度及び特異度について、例示的なラテラルフローデバイスを検査した。1つの例示的なラテラルフローデバイスは、本明細書に記載の一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含み、第2のラテラルフローデバイスは、一次抗体及び二次抗体のFab抗体フラグメントを含んでいた。各患者から2つの鼻スワブを採取した。一方は、ラテラルフローアッセイを使用した直接検査用であり、他方は、ウイルス移入培地に入れ、その後のRT-PCR分析のために2~8℃に冷却した。鼻腔スワブの採取順序を無作為化した。
ラテラルフローアッセイの比較
COVID-19感染が疑われる患者の鼻腔スワブ由来の試料における、SARS-CoV-2のリアルタイムPCR(RT-PCR)を含む参照方法に対する臨床感度及び特異度について、例示的なラテラルフローデバイスを検査した。1つの例示的なラテラルフローデバイスは、本明細書に記載の一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含み、第2のラテラルフローデバイスは、一次抗体及び二次抗体のFab抗体フラグメントを含んでいた。各患者から2つの鼻スワブを採取した。一方は、ラテラルフローアッセイを使用した直接検査用であり、他方は、ウイルス移入培地に入れ、その後のRT-PCR分析のために2~8℃に冷却した。鼻腔スワブの採取順序を無作為化した。
全長抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスは、RT-PCR分析と比較した場合、症状のある患者のみの全ての試料で約68%の陽性一致率を有することが判明した(表2)。陽性一致率は、培養可能なウイルス測定値(CTカットオフ=23)と比較して、約90%であったが、陰性一致率は、わずかに減少した(表3)。患者の大部分(100人)は、7日未満で症状を呈し、結果は、表2に示されるように全ての患者の要約結果と同様であった。しかし、8~10日、11~14日、または15日以上の症状を呈する患者の試料サイズが小さいので、95%信頼区間が大きくなった。
Fab抗体フラグメントを含む例示的なラテラルフローデバイスは、全長抗体を使用するデバイスよりも顕著に高い陽性一致率をもたらした。全ての患者試料(症状のある患者及び無症状の患者)の陽性一致率は、約90%であり;症状のある患者で、陽性一致率は、91.5%であった(表4)。同様の結果が、Fabラテラルフローデバイスを培養可能なウイルスと比較して判明した(CTカットオフ=23)。試料サイズが小さいので、95%信頼区間で示されているように、無症候性患者の陽性一致率は、大きな誤差があった。(表4)。
症状のある患者の大部分(102/126)は、症状を7日未満呈した。それらの試料では、陽性一致率及び全体一致は、全て、それぞれ、97.1%及び98.0%に増加し;陰性一致率は、実質的に同じままであった。しかし、無症候性患者の総数と同様に、8~10日(5人の患者)、11~14日(13人の患者)、及び15日以上(6人の患者)の症状を有する症状のある患者の試料サイズが小さいので、100.0%(29.2、100.0)、62.5%(24.5、91.5)、及び100.0%(2.5、100.0)の陽性一致率の測定値の誤差が大量にもたらされた。表5に示されるように、10日以下の症状のある患者由来の試料により、約98%の全体一致率がもたらされた。
ラテラルフローデバイスで全長抗体の代わりにFab抗体フラグメントを使用すると、検査された患者試料について、約68%~約90%の陽性一致率、及び約88%~約95%の全体一致率が増加し、10日以下の症状を有する患者由来の試料について、陽性一致率、陰性一致率、及び全体一致率が増加した。
実施例5
ラテラルフローアッセイ
本明細書に記載されている、一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含むラテラルフローデバイスを使用した追加の検査を、確認された陽性患者から単離された熱不活化SARS-CoV-2に対して実施した。LODは、79の50%組織培養感染量(TCID50)/mL((TCID50)/mL)であることが判明した。
ラテラルフローアッセイ
本明細書に記載されている、一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含むラテラルフローデバイスを使用した追加の検査を、確認された陽性患者から単離された熱不活化SARS-CoV-2に対して実施した。LODは、79の50%組織培養感染量(TCID50)/mL((TCID50)/mL)であることが判明した。
また、試料を使用して、フック効果(高用量フック効果としても既知の)の有無を判定した。フック効果は、固定化抗体及び標識抗体の両方と同時及び瞬時に、反応する過剰な標的タンパク質に起因する。従って、フック効果は、非常に高レベルの標的が、検査試料に存在する場合に見ることができる偽陰性結果を指す。フック効果を克服するために、標本の希釈が必要とされ得る。(図1)に示されるように、フック効果は、1.0×105.8(630,957)(TCID50)/mL以下の濃度で明らかではなかった。
実施例6
ラテラルフローデバイスを用いた鼻咽頭及び鼻腔標本の臨床評価
COVID-19感染が疑われる患者の鼻咽頭標本由来の試料におけるSARS-CoV-2のリアルタイムPCR(RT-PCR)を含む参照方法に対する感度及び特異度の臨床評価に、例示的なラテラルフローデバイスを使用した。例示的なラテラルフローデバイスは、本明細書に記載の一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含んでいた。
ラテラルフローデバイスを用いた鼻咽頭及び鼻腔標本の臨床評価
COVID-19感染が疑われる患者の鼻咽頭標本由来の試料におけるSARS-CoV-2のリアルタイムPCR(RT-PCR)を含む参照方法に対する感度及び特異度の臨床評価に、例示的なラテラルフローデバイスを使用した。例示的なラテラルフローデバイスは、本明細書に記載の一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含んでいた。
全長抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスは、RT-PCR分析と比較した場合、全試料で約91%の感度(上記の陽性一致率とも呼ばれる)を有することが判明した(表6)。特異度(上記の陰性一致率とも呼ばれる)は、99%を超えていた。
また、症状発現後の日数に基づいて、試料を分類した。表7に示されるように、感度は、症状発現の0~7日後の全ての陽性対象で90%を超えていた。加えて、特異度は、症状発現の0~3日後の陰性対象で100%であり、症状発現の4~7日後の陰性対象で99%を超えていた。
COVID-19感染が疑われる患者の鼻腔スワブ由来の試料における、SARS-CoV-2のリアルタイムPCR(RT-PCR)を含む参照方法に対する臨床感度及び特異度を検査するために、例示的なラテラルフローデバイスを使用した。例示的なラテラルフローデバイスは、本明細書に記載の一次抗体及び二次抗体の全長バージョンを含んでいた。
全長抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスは、RT-PCR分析と比較した場合、全ての試料で約91%の感度を有することが判明した(表8)。特異度は、99%を超えていた。
また、症状発現後の日数に基づいて、試料を分類した。表9に示されるように、感度は、症状発現の0~7日後の全ての陽性対象で90%を超えていた。加えて、特異度は、症状発現の4~7日後の陰性対象で100%であり、症状発現の4~7日後の陰性対象で99%を超えていた。
加えて、実施例4に記載され、上で使用されたように、第2の試料ではなく、試料の一部または大部分がラテラルフローアッセイで使用された後の残りの試料を使用して、RT-PCRを完了した。
全長抗体を含む例示的なラテラルフローデバイスは、残りの試料のRT-PCR分析と比較して、全ての試料で約98%の感度を有することが判明した(表10)。特異度は、99%を超えていた。全体一致率は、99%を超えていた。
また、症状発現後の日数で、試料を分類した。表11に示されるように、感度は、症状発現の0~3日後の全ての陽性対象で100%であり、症状発現の4~7日後の全ての陽性対象で96%を超えていた。加えて、特異度は、症状発現の4~7日後の陰性対象で100%であり、症状発現の4~7日後の陰性対象で99%を超えていた。
実施例7
SARS-CoV-2バリアント
デルタ株及びラムダ株を含む循環SARS-CoV-2株に見られるヌクレオキャプシド変異の影響を評価するために、検査用の臨床検体で特定された変異を有する組み換えタンパク質を調製した。個別にまたは組み合わせて検査された変異には、D63G、R203K、R203M、G204R、R209I、A220V、Q229H、M234I、S235F、D348Y、P365S、E367Q、A376T、D377Y、及び野生型(WT)武漢参照対照が含まれる。これらの変異は、いくつかの循環系統のユニークなヌクレオキャプシドシーケンスプロファイルを提示する:B.1.1.7、B.1.617.1、B.1.617.2、B.1.617.3、B.1.618、AY.1、AY.2、P.2、B.1.526、B.1.526.1、B.1.526.2、及びイタリアの株のパネル。本明細書に開示の抗体を用いて実施されたウェスタンブロット及びハイスループットイムノアッセイにより、WT対照と同等の感度で全ての変異体及びWT組み換え抗原(rAg)の検出が確認された。
SARS-CoV-2バリアント
デルタ株及びラムダ株を含む循環SARS-CoV-2株に見られるヌクレオキャプシド変異の影響を評価するために、検査用の臨床検体で特定された変異を有する組み換えタンパク質を調製した。個別にまたは組み合わせて検査された変異には、D63G、R203K、R203M、G204R、R209I、A220V、Q229H、M234I、S235F、D348Y、P365S、E367Q、A376T、D377Y、及び野生型(WT)武漢参照対照が含まれる。これらの変異は、いくつかの循環系統のユニークなヌクレオキャプシドシーケンスプロファイルを提示する:B.1.1.7、B.1.617.1、B.1.617.2、B.1.617.3、B.1.618、AY.1、AY.2、P.2、B.1.526、B.1.526.1、B.1.526.2、及びイタリアの株のパネル。本明細書に開示の抗体を用いて実施されたウェスタンブロット及びハイスループットイムノアッセイにより、WT対照と同等の感度で全ての変異体及びWT組み換え抗原(rAg)の検出が確認された。
上述の詳細な説明及び付随する実施例は、単なる例示であり、本開示の範囲において限定として解釈されるものではなく、これは、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によってのみ定義されることが理解される。
開示された実施形態に対する様々な変更及び修正は、当業者らには明らかであり、その精神及び範囲から逸脱することなく行われ得る。
Claims (19)
- 対象から得られた試料中のSARS-CoV-2ウイルスを検出する方法であって、この方法が、
前記試料中に存在する場合、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントの、一次抗体またはその抗原結合フラグメントとの結合を可能にする条件下で、前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントと、対象から得られた試料を接触させることを含み、前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントが、
(i)配列番号1と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号2と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号3と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
(ii)配列番号4と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号5と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号6と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含み、
さらに、前記方法が、前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する二次抗体、及び検出可能な標識を含むコンジュゲートと、前記試料を接触させること、を含み、前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントが、
(i)配列番号9と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号10と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号11と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
(ii)配列番号12と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号13と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号14と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含み、
さらに、前記方法が、前記検出可能な標識のシグナルの存在を評価すること、を含み、前記検出可能な標識のシグナルの存在が、前記試料中の前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントの存在を示す、前記方法。 - イムノアッセイを使用して実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記イムノアッセイが、酵素結合免疫吸着アッセイ(ELISA)またはラテラルフローイムノアッセイ(LFA)である、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 前記試料が、鼻スワブもしくは鼻ブラシ、唾液、粘液、血液、血清、または血漿を含む、請求項1~3のいずれかに記載の方法。
- 前記一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントが、前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質の異なるエピトープを認識する、請求項1~4のいずれかに記載の方法。
- 前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントが、ヌクレオキャプシド(N)タンパク質である、請求項1~5のいずれかに記載の方法。
- 前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号7と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号8と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む、請求項1~6のいずれかに記載の方法。
- 前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントが、配列番号15と少なくとも70%の同一性を有する重鎖可変領域アミノ酸配列、及び配列番号16と少なくとも70%の同一性を有する軽鎖可変領域アミノ酸配列を含む、請求項1~7のいずれかに記載の方法。
- さらに、少なくとも1つ以上の追加の病原体またはその抗原の検出を含む、請求項1~8のいずれかに記載の方法。
- ラテラルフローデバイスであって、
SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する、一次抗体またはその抗原結合フラグメント、を含み、前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントが、
(i)配列番号1と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号2と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号3と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
(ii)配列番号4と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号5と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号6と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含み、
さらに、前記ラテラルフローデバイスが、SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質またはそのフラグメントに特異的に結合する、二次抗体またはその抗原結合フラグメント、を含み、前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントが、
(i)配列番号9と少なくとも70%の同一性を有する相補性決定領域1(CDR)アミノ酸配列、配列番号10と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号11と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む重鎖可変領域、
(ii)配列番号12と少なくとも70%の同一性を有するCDR1アミノ酸配列、配列番号13と少なくとも70%の同一性を有するCDR2アミノ酸配列、及び配列番号14と少なくとも70%の同一性を有するCDR3アミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、を含む、前記ラテラルフローデバイス。 - 前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントが、固定されている、請求項10に記載のラテラルフローデバイス。
- 前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントが、検出可能な標識を含む、請求項10または11に記載のラテラルフローデバイス。
- 前記一次抗体またはその抗原結合フラグメント、及び前記二次抗体またはそのフラグメントが、前記SARS-CoV-2ウイルス由来のタンパク質の異なるエピトープを認識する、請求項10~12のいずれかに記載のラテラルフローデバイス。
- 試料パッドが、前記二次抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項10~13のいずれかに記載のラテラルフローデバイス。
- 検査ラインが、前記一次抗体またはその抗原結合フラグメントを含む、請求項10~14のいずれかに記載のラテラルフローデバイス。
- 密閉パッケージに、請求項10~15のいずれかに記載のラテラルフローデバイスを含む、キット。
- さらに、抽出緩衝液を含む、請求項16に記載のキット。
- さらに、サンプリングデバイスを含む、請求項16または17のいずれかに記載のキット。
- 前記サンプリングデバイスが、鼻スワブを含む、請求項18に記載のキット。
Applications Claiming Priority (9)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US202063060975P | 2020-08-04 | 2020-08-04 | |
US63/060,975 | 2020-08-04 | ||
US202063065898P | 2020-08-14 | 2020-08-14 | |
US63/065,898 | 2020-08-14 | ||
US202063067051P | 2020-08-18 | 2020-08-18 | |
US63/067,051 | 2020-08-18 | ||
US202063126336P | 2020-12-16 | 2020-12-16 | |
US63/126,336 | 2020-12-16 | ||
PCT/IB2021/000535 WO2022029494A1 (en) | 2020-08-04 | 2021-08-04 | Assays for detecting sars-cov-2 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023536737A true JP2023536737A (ja) | 2023-08-29 |
Family
ID=77951760
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023507601A Pending JP2023536737A (ja) | 2020-08-04 | 2021-08-04 | Sars-cov-2を検出するためのアッセイ |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11988671B2 (ja) |
EP (1) | EP4193151A1 (ja) |
JP (1) | JP2023536737A (ja) |
KR (1) | KR20230084469A (ja) |
WO (1) | WO2022029494A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114544960B (zh) * | 2022-04-22 | 2022-07-12 | 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 | SARS-CoV-2抗原检测试纸条 |
Family Cites Families (64)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5622871A (en) | 1987-04-27 | 1997-04-22 | Unilever Patent Holdings B.V. | Capillary immunoassay and device therefor comprising mobilizable particulate labelled reagents |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4828981A (en) | 1983-08-24 | 1989-05-09 | Synbiotics Corporation | Immunoassays for determining Dirofilaria immitis infection using antiidiotype monoclonal antibody reagents |
US5034506A (en) | 1985-03-15 | 1991-07-23 | Anti-Gene Development Group | Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages |
US6492107B1 (en) | 1986-11-20 | 2002-12-10 | Stuart Kauffman | Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique |
EP0590689B2 (fr) | 1985-03-30 | 2006-08-16 | KAUFFMAN, Stuart A. | Procédé d'obtention d'ADN, ARN, peptides, polypeptides ou protéines, par une technique de recombinaison d'ADN |
US5618920A (en) | 1985-11-01 | 1997-04-08 | Xoma Corporation | Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use |
US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
US5635600A (en) | 1986-07-07 | 1997-06-03 | Trustees Of Dartmouth College | Bifunctional and heteroantibodies specific for the high affinity Fc receptor for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes |
ATE111083T1 (de) | 1986-10-22 | 1994-09-15 | Abbott Lab | Chemilumineszierende acridinium- und phenantridiniumsalze. |
EP0291194B8 (en) | 1987-04-27 | 2003-10-22 | Inverness Medical Switzerland GmbH | Immunoassays and devices therefor |
AU2684488A (en) | 1988-06-27 | 1990-01-04 | Carter-Wallace, Inc. | Test device and method for colored particle immunoassay |
US5063081A (en) | 1988-11-14 | 1991-11-05 | I-Stat Corporation | Method of manufacturing a plurality of uniform microfabricated sensing devices having an immobilized ligand receptor |
US5530101A (en) | 1988-12-28 | 1996-06-25 | Protein Design Labs, Inc. | Humanized immunoglobulins |
US5939272A (en) | 1989-01-10 | 1999-08-17 | Biosite Diagnostics Incorporated | Non-competitive threshold ligand-receptor assays |
US5028535A (en) | 1989-01-10 | 1991-07-02 | Biosite Diagnostics, Inc. | Threshold ligand-receptor assay |
US5922615A (en) | 1990-03-12 | 1999-07-13 | Biosite Diagnostics Incorporated | Assay devices comprising a porous capture membrane in fluid-withdrawing contact with a nonabsorbent capillary network |
US5770429A (en) | 1990-08-29 | 1998-06-23 | Genpharm International, Inc. | Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies |
WO1992005282A1 (en) | 1990-09-14 | 1992-04-02 | Biosite Diagnostics, Inc. | Antibodies to complexes of ligand receptors and ligands and their utility in ligand-receptor assays |
JPH06506688A (ja) | 1991-04-10 | 1994-07-28 | バイオサイト・ダイアグノスティックス・インコーポレイテッド | クロストークインヒビターおよびその使用 |
DE69231382T2 (de) | 1991-04-12 | 2001-01-25 | Biosite Diagnostics Inc., San Diego | Neue konjugate und testverfahren für die gleichzeitige bestimmung von multiplen liganden |
EP0571613B1 (en) | 1991-12-13 | 2003-09-17 | Xoma Corporation | Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof |
US6143576A (en) | 1992-05-21 | 2000-11-07 | Biosite Diagnostics, Inc. | Non-porous diagnostic devices for the controlled movement of reagents |
US6019944A (en) | 1992-05-21 | 2000-02-01 | Biosite Diagnostics, Inc. | Diagnostic devices and apparatus for the controlled movement of reagents without membranes |
US5824799A (en) | 1993-09-24 | 1998-10-20 | Biosite Diagnostics Incorporated | Hybrid phthalocyanine derivatives and their uses |
WO1995024220A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Medarex, Inc. | Bispecific molecules having clinical utilities |
US6111166A (en) | 1994-09-19 | 2000-08-29 | Medarex, Incorporated | Transgenic mice expressing human Fcα and β receptors |
US5620850A (en) | 1994-09-26 | 1997-04-15 | President And Fellows Of Harvard College | Molecular recognition at surfaces derivatized with self-assembled monolayers |
US6410690B1 (en) | 1995-06-07 | 2002-06-25 | Medarex, Inc. | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies |
US5714352A (en) | 1996-03-20 | 1998-02-03 | Xenotech Incorporated | Directed switch-mediated DNA recombination |
US5922845A (en) | 1996-07-11 | 1999-07-13 | Medarex, Inc. | Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies |
US6113855A (en) | 1996-11-15 | 2000-09-05 | Biosite Diagnostics, Inc. | Devices comprising multiple capillarity inducing surfaces |
US6017517A (en) | 1996-12-18 | 2000-01-25 | The Dial Corporation | Method for treating human nails |
US5947124A (en) | 1997-03-11 | 1999-09-07 | Biosite Diagnostics Incorporated | Diagnostic for determining the time of a heart attack |
WO1999028349A2 (en) | 1997-12-02 | 1999-06-10 | Medarex, Inc. | CELLS EXPRESSING ANTI-Fc RECEPTOR BINDING COMPONENTS |
US6231768B1 (en) | 1999-01-19 | 2001-05-15 | Nalco Chemical Company | Rheology modification of settled solids in mineral processing |
CA2381770C (en) | 1999-08-24 | 2007-08-07 | Medarex, Inc. | Human ctla-4 antibodies and their uses |
TWI335336B (ja) | 2000-02-10 | 2011-01-01 | Abbott Gmbh & Co Kg | |
US6565808B2 (en) | 2001-05-18 | 2003-05-20 | Acon Laboratories | Line test device and methods of use |
US6809687B2 (en) | 2001-10-24 | 2004-10-26 | Alps Electric Co., Ltd. | Monopole antenna that can easily be reduced in height dimension |
AU2002357060A1 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-17 | Abgenix, Inc. | Antibody categorization based on binding characteristics |
US7419821B2 (en) | 2002-03-05 | 2008-09-02 | I-Stat Corporation | Apparatus and methods for analyte measurement and immunoassay |
US20060134713A1 (en) | 2002-03-21 | 2006-06-22 | Lifescan, Inc. | Biosensor apparatus and methods of use |
US20040018577A1 (en) | 2002-07-29 | 2004-01-29 | Emerson Campbell John Lewis | Multiple hybrid immunoassay |
US7459314B2 (en) | 2003-02-13 | 2008-12-02 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Lateral flow immunoassay controls |
US20050281828A1 (en) | 2003-03-04 | 2005-12-22 | Bowdish Katherine S | Method of treating autoimmune disease by inducing antigen presentation by tolerance inducing antigen presenting cells |
WO2005010034A1 (en) | 2003-07-21 | 2005-02-03 | Government Of The United States Of America As Represented By The Sercretary Of The Department Of Health And Human Services National Institutes Of Health | Soluble fragments of the sars-cov spike glycoprotein |
US7723099B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-05-25 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with immuno-reference electrode |
US7682833B2 (en) | 2003-09-10 | 2010-03-23 | Abbott Point Of Care Inc. | Immunoassay device with improved sample closure |
US20110159001A1 (en) * | 2008-01-17 | 2011-06-30 | Institute For Research In Biomedicine | CROSS-NEUTRALIZING HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO SARS-CoV AND METHODS OF USE THEREOF |
EP2262831B1 (en) * | 2008-03-03 | 2015-01-21 | NovelMed Therapeutics, Inc. | Anti-properdin antibodies |
WO2011102563A1 (ko) | 2010-02-17 | 2011-08-25 | 주식회사 에스디 | 면역분석장치 및 이를 이용한 면역분석방법 |
WO2016026143A1 (en) | 2014-08-22 | 2016-02-25 | Huiru Wang | Saccharide-based biomarkers and therapeutics |
FR3028318A1 (fr) | 2014-11-12 | 2016-05-13 | Phuong Lan Tran | Procede et dispositif de tri selectif, specifique et simultane de cellules rares cibles dans un echantillon biologique |
CA2981515A1 (en) | 2015-04-03 | 2016-10-06 | Abbott Laboratories | Devices and methods for sample analysis |
JP2018518655A (ja) | 2015-04-03 | 2018-07-12 | アボット・ラボラトリーズAbbott Laboratories | サンプル分析用デバイス及び方法 |
WO2017209318A1 (ko) | 2016-05-30 | 2017-12-07 | 다이노나(주) | 탄산탈수소화 효소에 결합하는 항체 및 이의 용도 |
MX2019005492A (es) | 2016-11-14 | 2019-08-26 | Aprogen Kic Inc | Anticuerpo que enlaza a anhidrasa carbonica y uso del mismo. |
US20220017615A1 (en) | 2018-12-03 | 2022-01-20 | Shanghai Pharmaexplorer Co., Ltd. | Cd47 antibody, preparation method therefor and uses thereof |
CN111187354B (zh) * | 2020-02-20 | 2020-11-27 | 北京新创生物工程有限公司 | 新型冠状病毒(SARS-CoV-2)IgM/IgG抗体检测试剂盒 |
CN111153991A (zh) * | 2020-02-26 | 2020-05-15 | 北京博奥森生物技术有限公司 | 一种人SARS-CoV-2单克隆抗体及其制备方法和应用 |
CN111333722A (zh) * | 2020-03-03 | 2020-06-26 | 江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院) | SARS-CoV-2抑制剂及其应用 |
CN111269313B (zh) * | 2020-03-07 | 2021-05-28 | 北京舜景生物医药技术有限公司 | 一种用于检测新型冠状病毒的单克隆抗体及其制备试剂盒的用途 |
CN111303280B (zh) * | 2020-03-22 | 2022-01-07 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 高中和活性抗SARS-CoV-2全人源单克隆抗体及应用 |
-
2021
- 2021-08-04 JP JP2023507601A patent/JP2023536737A/ja active Pending
- 2021-08-04 US US17/394,058 patent/US11988671B2/en active Active
- 2021-08-04 EP EP21778558.3A patent/EP4193151A1/en active Pending
- 2021-08-04 WO PCT/IB2021/000535 patent/WO2022029494A1/en unknown
- 2021-08-04 KR KR1020237007778A patent/KR20230084469A/ko unknown
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20230084469A (ko) | 2023-06-13 |
US11988671B2 (en) | 2024-05-21 |
WO2022029494A1 (en) | 2022-02-10 |
US20220043003A1 (en) | 2022-02-10 |
EP4193151A1 (en) | 2023-06-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US10215754B2 (en) | Anti-T. cruzi antibodies and methods of use | |
US20230258638A1 (en) | Methods and kits for detecting or determining an amount of an anti-b-coronavirus antibody in a sample | |
BR112019010002A2 (pt) | métodos para o uso de proteína de ligação galectina-3 detectada na urina para monitoramento da gravidade e progressão da nefrite lúpica | |
US11988671B2 (en) | Assays for detecting SARS-CoV-2 | |
JP7044721B2 (ja) | Hcvコア抗原の迅速な検出のための前処理法 | |
EP4059959A1 (en) | Antibody recognizing anti-rs virus, and immunoassay method and immunoassay instrument using same | |
US9518993B2 (en) | Reagents and methods for detecting a polymorphic protein | |
WO2022265065A1 (ja) | SARS-CoV-2の免疫測定方法及び免疫測定キット、並びにモノクローナル抗体又はその抗体断片 | |
US20220034885A1 (en) | Compositions and methods for determining coronavirus neutralization titers | |
CN117178190A (zh) | 用于检测sars-cov-2的测定 | |
CA3188349A1 (en) | Improved methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample | |
EP3820909B1 (en) | Monoclonal antibody for the detection of the antiretroviral drug emtricitabine (ftc, 2',3'-dideoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine) | |
US20240201202A1 (en) | METHODS FOR DETECTING IMMUNOGLOBULIN G, SUBCLASS 4 (IgG4) IN A BIOLOGICAL SAMPLE | |
JP7105970B1 (ja) | SARS-CoV-2の免疫測定方法及び免疫測定キット | |
US20220372171A1 (en) | Antibody directed against tenofovir and derivatives thereof | |
KR101978102B1 (ko) | 면역검정을 위한 파보바이러스의 알칼리 전처리 | |
JP2017019755A (ja) | 標識免疫複合体を用いたアレルギー反応迅速識別法およびその誘導試薬キット | |
CN117683121A (zh) | 抗水痘-带状疱疹病毒抗体及其应用 | |
JP2023552755A (ja) | 頭部コンピュータ断層撮影スキャンの結果が外傷性脳損傷(tbi)に関して陰性の対象においてtbiを判定するための1種以上のバイオマーカーの使用 | |
JP2012018160A (ja) | 精神障害の診断方法および診断薬キット | |
WO2018132639A1 (en) | Methods and kits for the diagnosis and/or prognosis of ocular cicatricial pemphigoid | |
WO2018039047A1 (en) | Lateral flow assay for assessing recombinant protein expression or reporter gene expression |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230529 |