SK12942002A3 - Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia - Google Patents

Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia Download PDF

Info

Publication number
SK12942002A3
SK12942002A3 SK1294-2002A SK12942002A SK12942002A3 SK 12942002 A3 SK12942002 A3 SK 12942002A3 SK 12942002 A SK12942002 A SK 12942002A SK 12942002 A3 SK12942002 A3 SK 12942002A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
antibody
human
seq
antigen
amino acid
Prior art date
Application number
SK1294-2002A
Other languages
English (en)
Inventor
Tariq Ghayur
Richard W. Dixon
Mike Roguska
Michael White
Boris Labkovsky
Jochen Salfeld
Alexander Robert Duncan
Simon Mark Brocklehurst
John Mankovich
Celia Patricia Shorrock
Julia Elizabeth Thompson
Simon Nicholas Lennard
Original Assignee
Abbott Laboratories
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22665007&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK12942002(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Abbott Laboratories filed Critical Abbott Laboratories
Publication of SK12942002A3 publication Critical patent/SK12942002A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A61K38/13—Cyclosporins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/02—Antidotes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A61P5/16—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4 for decreasing, blocking or antagonising the activity of the thyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/18—Drugs for disorders of the endocrine system of the parathyroid hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/38—Drugs for disorders of the endocrine system of the suprarenal hormones
    • A61P5/40—Mineralocorticosteroids, e.g. aldosterone; Drugs increasing or potentiating the activity of mineralocorticosteroids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)

Description

Doterajší stav techniky
Interleukín-18 (IL-18) bol prvý raz opísaný v roku 1989 ako faktor indukujúci gama-interferón. Okrem schopnosti indukovať gama-interferón je protizápalovým cytokínom s rôznymi funkciami. Medzi tieto biologické vlastnosti patrí aktivácia NF-Kb, expresia Fas ligandu, indukcia chemokínov CC i CXC a zvýšená produkcia kompetentného ľudského vírusu imunodeficiencie.
V dôsledku jeho schopnosti indukovať produkciu gama-interferónu v T bunkách a makrofágoch je IL-18 dôležitý pri imunitných odpovediach typu Thl a zúčastňuje sa prirodzenej aj získanej imunity. Čo sa týka štruktúry aj funkcie je IL-18 príbuzný rodu IL-1. Prehľad o štruktúre, funkcii a biologickej aktivite IL-18 je možné nájsť napríklad v Dinarello, C. et el. (1998) J. Leukoc. Biol. 63:658-654; Dinarello, C. A. (1999) Methods 19:121-132 a Dinarello, C.A. (1999) J. Alergy Clin. Immunol. 103: 1-24.
Použitie modulácie IL-18 je žiaduce v mnohých ľudských imunitných odpovediach. Hlavne sú žiadané protilátky, ktoré viažu a neutralizujú IL-18. Okrem toho je in vivo použitie myších IL-18 protilátok obmedzené v dôsledku problémov spojených s podávaním myších protilátok človeku, v dôsledku krátkeho polčasu života séra, neschopnosti zastaviť určité ľudské efektorové funk2 cie a s vyvolaním nechcenej imunitnej reakcie proti myšej protilátke u človeka („ľudská antimyšia protilátková reakcia (HAMA)).
Prístupy na prekonanie problémov, spojených s kompletne myšími protilátkami u človeka, zahrnovali genetickú manipuláciu týchto protilátok, aby sa stali „ podobnejšími“ ľudským. Boli napríklad pripravené chimerické protilátky, v ktorých boli variabilné oblasti reťazca protilátky odvodené od myši a konštantné oblasti protilátkových reťazcov odvodené od človeka (Junghans, et al. (1990) Cancer Res. 50: 1495-1502; Brown et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. 88: 2663-2667; Kettleborough et al. (1991) Protein Engineering. 4: 773783. Pretože tieto chimerické protilátky si stále udržujú niektoré myšie sekvencie, môžu stále vyvolávať nežiadanú imunitnú reakciu, ľudskú anti-myšiu protilátkovú reakciu (HAMA), obzvlášť, ak sú podávané dlhší čas.
Výhodným IL-18 inhibičným prostriedkom voči myším protilátkam alebo ich derivátom (napr. chimerickým alebo humanizovaným protilátkam) by mohla byť anti-IL-18 protilátka, ktorá by bola úplne ľudského pôvodu, pretože takýto prostriedok by nevyvolával HAMA reakciu, ani keď by bol podávaný dlhý čas. Takéto protilátky však ešte neboli v tejto oblasti opísané a teda existuje ich stála potreba.
Podstata vynálezu
Tento vynález sa týka zlúčenín, ako sú protilátky, ktoré sa viažu k ľudskému IL-18, a tiež spôsobov a použitia týchto zlúčenín alebo protilátok.
V jednom aspekte sa vynález týka zlúčeniny schopnej väzby na sekvenciu aminokyselín ľudského IL-18 alebo jeho časť, pričom táto aminokyselinová sekvencia obsahuje N- alebo C-koncovú oblasť ľudského IL-1 8, ako je uvedená v SEQ ID NO:70 alebo SEQ ID NO:71. V jednom uskutočnení je zlúčenina malou molekulou, peptidom, polypeptidom, protilátkou alebo jej fragmentom, tak ako protilátkou úplne ľudského pôvodu alebo jej fragmentom, schopným väzby k ľudskému IL-1 8. V inom uskutočnení táto protilátka alebo jej fragment disociuje z ľudského IL-18, ako je stanovené rezonanciou plazmónu, s kOff rýchlostnou konštantou 0,1 s’1 alebo menšou, 1 x 10'2 s'1 alebo menšou, 1 x 10' 3 s'1 alebo menšou, 1 x 10’4 s'1 alebo menšou, 1 x 10‘5 s'1 alebo menšou, 1 x 10' 6 s1 alebo menšou, , 1 x 10'7 s'1 alebo menšou, 1 x 10'8 s'1 alebo menšou, 1 x 10'9 s'1 alebo menšou, 1 x 10‘10 s'1 alebo menšou, 1 x 10'11 s'1 alebo menšou.
Z iného hľadiska sa vynález týka izolovanej protilátky alebo jej antigén viažucej časti, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDCRDNA (SEQ ID NO:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO;33) alebo ich časť. Je výhodné, keď protilátka je neutralizujúcou protilátkou. Táto protilátka je s výhodou ľudská protilátka. V rôznych uskutočneniach je protilátka rekombinantná protilátka (napr., jednoreťazcová protilátka (scFv) alebo monoklonálna protilátka.
V iných uskutočneniach sa izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuci fragment viaže na epitop ľudského IL-18 alebo na jeho časť, pričom táto protilátka alebo jej antigén viažuci fragment disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 0,1 s’1 alebo menšou, stanovenou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10‘6 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'2 s'1 alebo môžu inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10’7 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'3 s'1 alebo inhibovať aktivitú ľudského IL-18 s IC50 1 x 10' M alebo menším. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'4 s'1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL18 s ICso 1 x 10'9 M alebo menším.
Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'5 s'1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'10 M alebo menším. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s k0ff rýchlostnou konštantou 1 x 10'6 s*1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'11 M alebo menším.
Z iného hľadiska sa vynález týka izolovanej ľudskej protilátky alebo jej antigén viažucej časti, obsahujúcej najmenej jednu CDR doménu variabilnej oblasti, schopnú väzby na epitop ľudského IL-18. V príbuzných uskutočneniach, izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť má variabilnú oblasť, obsahujúcu ťažký a/alebo ľahký reťazec CDR1 domény, CDR2 domény alebo CDR3 domény ako je uvedené v tabuľke 6 alebo 9. Tieto domény môžu mať napríklad jednu alebo viac aminokyselinových substitúcií alebo inzercií na alebo v blízkosti ľubovoľnej z Kabátových polôh, uvedených v tabuľke 7 až 8 a 10 až 11. Vo výhodnom uskutočnení obsahuje izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť ľahký reťazec variabilnej oblasti (LCVR), obsahujúci sekvenciu aminokyselín SEQ ID NO:29 a ťažký reťazec variabilnej oblasti (HCVR), obsahujúci sekvenciu aminokyselín SEQ ID NO:26. V inom výhodnom uskutočnení obsahuje izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť ľahký reťazec variabilnej oblasti (LCVR) s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 29 a ťažký reťazec variabilnej oblasti (HCVR), ktorý má sekvenciu aminokyselín SEQ ID NO:27.
Iný aspekt vynálezu sa týka farmaceutických prostriedkov, obsahujúcich protilátku podľa tohto vynálezu alebo jej antigén viažucu časť a farmaceutický prijateľný nosič. V jednom uskutočnení obsahuje tento farmaceutický prostriedok navyše najmenej jedno ďalšie terapeutické činidlo na liečbu poruchy, na ktorej sa IL-18 škodlivo zúčastňuje.
Z iného hľadiska sa vynález týka spôsobov výroby protilátky, ktorá sa viaže na ľudský interleukín-18 ( IL-18). Vynález poskytuje spôsob zahrnujúci vystavenie súboru protilátok účinkom antigénu, ktorý obsahuje epitop ľudského IL-18, obsahujúceho aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO:33) alebo ich časti, a výber takejto protilátky z tohto súboru, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18, zahrnujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO:33) alebo ich časti.
V jednom uskutočnení je súbor protilátok in vivo súborom v živočíchovi a vyššie uvedený spôsob zahrnuje imunizáciu živočícha antigénom, obsahujúcim epitop ľudského IL-18, ktorý obsahuje aminokyseliny PLFED5
MTDSDCRDNA (SEQ ID NO:I), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO:33), N- alebo C-koncovú časť ľudského IL-1 S (SEQ ID NO:70 až 71) alebo časť ľubovoľného z týchto epitopov. V inom uskutočnení je súbor protilátok knižnicou rekombinantných protilátok a uvedený spôsob obsahuje skrínink tejto knižnice antigénom, obsahujúcim epitop ľudského IL-18, ktorý má aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO:1), VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO:33), peptidy predstavované SEQ ID NO:31 až 32 a až 60 alebo ľubovoľnú časť z predchádzajúcich. Výhodne je knižnicou knižnica ľudských protilátok.
Z iného hľadiska poskytuje tento vynález izolovanú nukleovú kyselinu, kódujúcu protilátku podľa ľubovoľného z vyššie uvedených ohľadov, napríklad, ťažký a/alebo ľahký reťazec variabilnej oblasti alebo ich časť. V súvisiacich uskutočneniach je izolovaná nukleová kyselina, kódujúca anti-IL-18 protilátku alebo jej časť, rekombinantným expresným vektorom, napríklad na expresiu v hostiteľskej bunke.
V inom aspekte sa teda vynález týka spôsobu použitia vyššie uvedenej hostiteľskej bunky, do ktorej bol zavedený expresný vektor, na syntézu protilátky viažucej sa k ľudskému IL-18, kultiváciou tejto hostiteľskej bunky v kultivačnom médiu, pokiaľ je bunkou syntetizovaná protilátka, ktorá sa viaže k ľudskému IL-18.
Z iného hľadiska sa vynálezu týka spôsobu inhibície ľudskej IL-18 aktivity, ktorý obsahuje kontakt ľudskej IL-18 s protilátkou podľa tohto vynálezu alebo s jej antigén viažucou časťou, takže dôjde k inhibícii aktivity ľudskej IL18.
Z ďalšieho hľadiska sa vynález týka spôsobu inhibície aktivity ľudského IL-18 u ľudských jedincov, trpiacich poruchou, pri ktorej sa škodlivo zúčastňuje aktivita IL-18, ktorý zahrnuje podávanie protilátky podľa tohto vynálezu alebo jej antigén viažucej časti ľudskému subjektu, čím je v tomto subjekte inhibovaná aktivita ľudského IL-18. V jednom uskutočnení môže byť anti-IL-18 protilátka podávaná napríklad pred, súbežne alebo po ďalšom činidle, ako je anti-IL-12 protilátka alebo jej antigén viažuci fragment, metotrexat, anti-TNF protilátka alebo jej antigén viažuci fragment, kortikosteroidy, cyklosporín, rapamycín, FK506 alebo nesteroidné protizápalové činidlo.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 uvádza štruktúrny model IL-18 (v prostriedku) v porovnaní s IL-Ιβ (vľavo) a IL1RA (vpravo).
Obrázok 2 ukazuje štruktúrny model IL-18 v komplexe s receptorom IL18, pričom tento peptidový epitóp, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDCRDNA (SEQ ID NO:1) z IL-18, je vyznačený tmavošedou. Tento peptidový epitóp je viazaný anti-IL-18 protilátkou 2E1.
Obrázok 3 ukazuje štruktúrny model IL-18 v komplexe s receptorom IL18, pričom tento peptidový epitóp, obsahujúci aminokyseliny YFGKLESKSVIRN (SEQ ID NO:33) z IL-18, je vyznačený tmavošedou. Tento peptidový epitóp je viazaný anti-IL-18 protilátkou LT28.
Obrázok 4 ukazuje štruktúrny model celej dĺžky IL-18 v komplexe s receptorom IL-18. Okrúhle svetlo a tmavo šedé epitopy predstavujú N a C koncové spojovacie body epitopov IL-18 (SEQ ID NO:70, resp. 71).
Obrázok 5 ukazuje schopnosť troch rôznych anti-IL-18 protilátok pri neutralizácii biologických účinkov IL-18 ako funkciu inhibície IFN-γ indukcie KG1 buniek. Hodnoty IC50 pre protilátky 125H (štvorčeky) a protilátku 2E1 takisto ako IgG protilátku (krúžky) alebo ako protilátku s jedným reťazcom (trojuholníky) sú 2,1.1O'10, resp. 9,0.1O'10, resp. 3,3.10'9.
Tento vynález sa týka selekcie peptidových epitopov, ktoré sú schopné generovať neutralizačné protilátky voči transdukčným signálom, sprostredkovaným IL-18, prípravy protilátok voči týmto epitoppm a použitia týchto protilátok, vrátane použitia na liečbu porúch spojených s IL-18. Spôsob výberu epitopov predstavuje konštrukciu homologického modelu proteínu IL-18 a jeho zodpovedajúceho receptoru. Na výber reprezentatívnych peptidových segmentov pre syntézu a tvorbu protilátok bolo použité spojenie vizuálnej kontroly a počítačového vyhodnotenia. Tu uvedené aminokyselinové sekvencie používajú štandardné jednopísmenkové skratkové kódy.
Výber IL-18 epitopov
Použil sa program Modeler (Sali, A. et ak, Evaluation of comparative proteín modeling by MODELLER.. Proteins: Struct., Funct., Genet. (1995), 23 (3), str. 3 18 až 26.
KÓDY: PSFGEY; (ISSN : 0887 až 3585) na generovanie homologických modelov IL-18 a receptora IL-18. Rentgénové kryštalické štruktúry IL-18 (Priestle, J., et al. The three-dimensonal structure of human interleukin-1 beta refined to 2.0. ANG. Resolution. Prog. Clin. Biol. Res. (1990), 349 (Cytokines Lipocortins Inflammation Differ.), pp. 297 až 307) a IL-1RA (Schreuder, H. et al., Refined crystal structure of thwe interleukin-1 receptor antagonist: presence of a disulfide link and a cis-proline. Eur. J. Biochem. (1995), 227(3), pp. 838-847) sú dostupné a boli použité ako referenčné koordináty na zostrojenie modelu IL-18. Štruktúra receptora IL-18 (Vigers, G., et al. Crystal structure of the type-I interleukin-1 -receptor complexed with interleukin-1 .beta. Náture (London) (1997), 386(6621), str. 190 až 194) sa použila ako model receptora IL-18.
Zostrojenie štruktúrneho modelu IOL-18 a IL-18 receptoru je opísané nižšie.
Zostrojenie modelu IL-18
Aj keď celková sekvenčná homológia s týmito dvoma proteínmi (tj., IL1 β a IL-18) je malá, existuje zaujímavý dôkaz, že IL-18 je členom IL-1 rodiny (viď Dinarello, C.A. IL-18: a THl-inducing, proinflammatory cytokine and new member of the IL-1 family. J. Allergy Clin, Immunol. (1999), 103(1, Pt. 1), str. 11 až 24, a že má veľmi podobné priestorové usporiadanie. Tak ako IL-Ιβ, je aj IL-18 najskôr vylučovaný v proforme. Obidva, pro-IL-Ιβ aj pro-IL-18, sú aktivované účinkom IL-1 β-konvertujúceho enzýmu (ICE) (Fantuzzi, G. a Dinarello,
C.A. Interleukin-I8 and ilnterleukin-lfi: two cytokine substrates for ICE (caspase-1). J. Clin. Immunol. (1999), 19(1), str. 1 až 11). Je tiež známe, že IL-1 receptor a IL-1 8 receptor sú podobné (Dinarello, C.A. et al. Overwiev of interleukin-18: more than an interferon-y inducing factor. J. Leukocyte Bio. (1998), 63(6), 658 až 664. IL-Ιβ je schopný väzby na IL-18 receptor. Hlavným argumentom je identické priestorové usporiadanie, aj keď celková sekvenčná homológia medzi týmito dvoma proteínmi je nominálne rovnaká s homológií s IL18. Porovnanie sekvencie týchto troch proteínov (tj., IL-18, IL-Ιβ a IL1-RA bolo realizované manuálne pomocou programu Insightll. Toto porovnanie je zrejmé z tabuľky 1:
Tabuľka 1: Porovnanie sekvencie IL-18 vzhľadom k IL-Ιβ a IL-1RA
IL-18 : YFGK-LESKLS-VIRNLNDQVLFIDQGNRPLFE-DMT-DSDCRD-NAP IL-Ιβ : AP-VRS-LNCTLRDSQQKSLVMS-G-P-YELKALHLQGQ-D-MEQ IL-1RA : SSKMQA-FR-IWDVNQKTFYLR-N-N—QLVAGYLQGP-NVNLEE
IL-18 : RTIFIISMY-KDSQPRG-MAVTISVKCEKISTLSC—ENK-IISFKEM
IL-Ιβ : QVVFSMS-FVQGEESNDKIPVALGLK-EKNLYLSCVLK-DDKPTLQLESV IL-1RA : KI-DV—VP-IEPH—ALFLGIH-GGKMCLSCV-KSGDETRLQLEAV
123
IL-18 : NPPDNI-KDTKSDIIF-FQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACE-KERDL IL-Ιβ : DPKNYP-KK-KMEKRFVFNK-I-EINNKLEFESAQFPNWYISTS-QAENM IL-1RA: NITDLSENR-KQDKRFAFIR-S-DSGPTTSFESAACPGWFLCTAMEADQ170
IL-18: FKLILKKED-ELGDRSIM-FTVQNED (SEQ ID NO : 4)
IL-Ιβ :-PVFL-GG-TKGGQDITDFTMQFVSS (SEQ ID NO: 5)
IL-1 RA :-PVSL-TNMPDEGVMVTKFYFQED (SEQ ID NO : 6)
Sekvenčná homológia medzi týmito sekvenciami je opísaná v tabuľke 2. Horný trojuholník (od uhlopriečky nahor) je percento presnej sekvenčnej identity a dolný trojuholník (od uhlopriečky dole) je percento konzervatívnej sekvenčnej homológie. V tabuľke 2 je uvedená len časť sekvencií z tabuľky 1. Ako bolo spomínané vyššie, celková homológia je malá, ale konzistentne v celej rodine IL-1.
Tabuľka 2: Sekvenčná homológia medzi členmi IL-1 rodiny
Molekula IL-18 IL-Ιβ IL-1RA IL-IRec IL-18Rec
IL-18 - 20,0 21,8 - -
IL-lb 53,5 - 27,5 - -
IL-1RA 50,6 54,4 - - -
IL-IRec - - - - 26,1
IL-18Rec - - - 50,5 -
Výsledná štruktúra IL-1 8 je zobrazená na obrázku 1 spolu s IL-Ιβ a IL1RA. Celkové usporiadanie, ako bolo odhadnuté programom What Check (Hooft, R.W. et al., Errors in Protein Structures. Náture (1996) 381, str. 2752), bolo prijateľné, ale trochu nízke (viď tabuľku 3 nižšie).
Tabuľka 3: Štruktúrne Z-skóre podľa programu What Check (kladné hodnoty sú lepšie než priemer)
IL-Ιβ IL-1RA IL-IRec IL-18 (model) IL-18Rec (model)
Packing Quality -1,6 -2,3 -3,6 -5,5 -5,7
Remachandran Plot -2,0 -1,3 -2,9 -3,3 -2,3
Rotamer Normality -1,6 -0,8 -1,5 -0,6 -0,6
Backbone Confor- mation -1,7 +0,5 -1,6 -5,6 -2,7
Aj keď je odhad referenčných štruktúr podľa What Check tiež nízky, zdá sa, že priestorové usporiadanie tohto proteínu je len veľmi málo zastúpené v databáze referenčných štruktúr. Nízka sekvenčná homológia bezpochyby však prispela menej než presná výsledná štruktúra, čo sa týka našej dôvery v celkové priestorové usporiadanie. S cieľom výberu epitopov na generovanie protilátok bola však táto štruktúra považovaná za dostatočnú.
Zostrojenie modelu receptora pre IL-18
Štruktúra receptora pre IL-18 bola takisto generovaná pomocou programu Modeler. Referenčné koordináty boli z receptora pre IL-1. Tak ako v prípade cytokínov, spojených s týmito receptormi, je celková sekvenčná identita nízka, ale dostatočná na porovnanie. Obrázky sekvenčnej homológie sú zahrnuté v tabuľke 2 vyššie. Porovnanie sa uskutočnilo manuálne podľa programu Insightll a je uvedené v tabuľke 4.
Tabuľka 4: Porovnanie sekvencie receptora pre IL-18 s receptorom pre IL1 receptor
IL-18 Rec : CTSRPHITVVEGEPFYLKHCSCSLAHEIETTTKSWYKSSGSQEHVELNPR
IL-1 Rec :
CKEREEKIILVSSANEIDVRPCPLNPNEHKGTITWYKDD-SKTPVSTEQA
IL-18 Rec : SSSRIALHDCVLEFWPVELNDTGSYFFQMKNYTQKWKLNVIRRNKHS—
IL-1 Rec :
S-RIHQHKEKLWFVPAKVEDSGHYYCVVRNSSYCLRIKISAKFVENEPN
119
IL-18 Rec :
-CFTERQVTSKIVEVKKFFQÍTCENSYYQTLVNST—-SLYKNCKKLLL IL-1 Rec : LCYNAQAIFKQKLPVAGDGGLVCPYMEFFKNENNELPKLQWYKDCKPLLL
163
IL-18 Rec :
EN.....NKNPTIKKNAEFEDQGYYSCVHFLHHNGKLFNITKTFNITIVE
IL-1 Rec : DNIHFSGVKDRLIVMNVAEKHRGNYTCHASYTYLGKQYPITRVIEFITLE
209
IL-18 Rec :
DRSNIVPVLLGPKLNHVAVELGKNVRLNCSALLNEEDVIYWMF-GEE-NG IL-1 Rec : ENKPTRPVIVSPANETMEVDLGSQIQLICNVTGQLSDIAYWK.WNGSVIDE
257
IL-18 Rec :
SDPNIHEE-KEMRIMTPEGKWHASKVLRIENIGESNLNVLYNCTVASTGG IL-1 Rec : DDPVLGEDYYSVENPANKRRSTLITVLNISEIESRFYKHPFTCFAKNTHG
306
IL-18 Rec : TDTKSFILVRKAD (SEQ ID NO : 7)
IL-1 Rec : IDAAYIQLIYPVT (SEQ ID NO : 8)
Celkové zloženie štruktúry receptora pre IL-18, ako bolo stanovené pomocou programu Modeler, je prijateľné, ale skóre sú opäť trochu nižšie vzhľadom k What Check (viď tabuľku 3 vyššie). Dôvera v priestorové usporiadanie pramenila pôvodne zo skutočnosti, že IL-1 β sa viaže na receptor IL-1 aj IL-18. Nízka sekvenčná homológia tiež prispieva ku kvalite výslednej štruktúry, tak ako je tomu vo vyššie uvedenom prípade asociovaných cytokínov, táto aktuálna štruktúra je však považovaná za dostačujúcu. Ako doplnkový pokus, bol IL-18 peptidový epitop, naviazaný na LT28 (SEQ ID NO:33), modelom tvorby komplexu s receptorom pre IL-18 (obrázok 3). Nakoniec bol model komplexu IL-18 a receptoru pre IL-18 generovaný na základe štruktúry receptora IL-^/IL-l (obrázok 4). Táto štruktúra bola generovaná superpozíciou štruktúr a štruktúr receptorov. Neboli vykonané žiadne pokusy o energetickú minimalizáciu výslednej štruktúry.
Výber peptidového epitopu
Pôvodným zámerom vytvárania štruktúrnych modelov bolo umožniť výber vhodných peptidov najprv na vizuálnom hodnotení. Boli vzaté do úvahy úseky proteínov a časti proteínov, vystavené účinku rozpúšťadiel, ktoré boli obidva hydrofilné a boli maskované v komplexe receptor/cytokín. Výsledné hodnotenie spočívalo na kritériu selektivity. Vybraný peptidový epitop mal mať odlišnú sekvenciu u podobných častí ostatných členov rodiny. Podľa tohto kritéria boli selektované peptidy z IL-18. Okrem toho bol zhotovený hrubý zoznam prekrývajúcich sa peptidov (SEQ ID NOS: 31 až 60),
Tabuľka 5: Vybrané peptidy, reprezentujúce IL-18
Peptidová sekvencia SEQ ID NO :
PLFEDMTDSDCRDNA
CPLFEDMTDSDCRDNA
PLFEDMTDSDCR (SEQ ID NO: 1) (SEQ ID NO : 2) (SEQ ID NO : 3)
YFGKLESKLSVIRN (SEQ ID NO : 31)
ESKLSVIRNLNDQV (SEQ ID NO : 32)
VIRNLNDQVLFIDQ (LT28 viažuci epitop) (SEQ ID NO : 33)
NDQVLFIDQGNRPL (SEQ ID NO : 34)
FIDQGNRPLFEDMT (SEQ ID NO : 35)
NRPLFEDMTDSDCR (2E1 viažuci epitop) (SEQ ID NO : 36)
EDMTDSDCRDNAPR (SEQ ID NO : 37)
SDCRDNAPRTIFII (SEQ ID NO: 38)
NAPRTIFIISMYKD (SEQ ID NO: 39)
IFIISMYKDSQPRG (SEQ ID NO : 40)
MYKDSQPRGMAVTI (SEQ ID NO : 41)
QPRGMAVTISVKCE (SEQ ID NO : 42)
AVTISVKCEKISTL (SEQ ID NO : 43)
VKCEKISTLSCENK (SEQ ID NO :44)
ISTLSCENKIISFK (SEQ ID NO :45)
CENKIISFKEMNPP (SEQ ID NO : 46)
ISFKEMNPPDNIKD (SEQ ID NO : 47)
MNPPDNIKDTKSDI (SEQ ID NO : 48)
NIKDTKSDIIFFQR (SEQ ID NO :49)
KSDIIFFQRSVPGH (SEQ ID NO :50)
FFQRSVPGHDNKMQ (SEQ ID NO : 51)
VPGHDNKMQFESSS (SEQ ID NO : 52)
NKMQFESSSYEGYF (SEQ ID NO : 53)
ESSSYEGYFLACEK (SEQ ID NO : 54)
EGYFLACEKERDLF (SEQ ID NO : 55)
ACEKERDLFKLILK (SEQ ID NO :56)
RDLFKLILKKEDEL (SEQ ID NO : 57)
LILKKEDELGDRSI (SEQ ID NO : 58)
EDELGDRSIMFTVQ (SEQ ID NO 59)
DRSIMFTVQNED (SEQ ID NO :60)
YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTD (SEQ ID NO : 61) SDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEK LT28 a 2E1
ISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRS epitopy sú
VPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKK označené hrubo
EDELGDRSIMFTVQNED
N-terminálny cysteín peptidu IL-18, predstavovaný SEQ ID NO:2, nie je časťou natívneho IL-18, ale bol pridaný ako konjugačné miesto. V súhlase s tým v aminokyselinovej sekvenčii natívneho IL-18, oblasť zodpovedajúca selektovanému epitopu obsahuje aminokyselinové zvyšky, ktoré majú aminokyselinovú sekvenciu PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1).
Schématický model IL-18 peptidu (SEQ ÍD NO: 1), viazaného v komplexe s receptorom pre IL-18, je uvedený na obrázku 2, kde tento epitop je vyznačený tmavo šedo.
Na sekvenčii IL-18 peptidov boli vykonané následné výpočty antigenicity, ktorých výsledkom bolo zistenie, že tento peptid má neobyčajne vysoký účinok. Tento peptid bol syntetizovaný a použitý ako epitop na generovanie protilátok v králikovi ako hostiteľovi. Molekulárne modelované údaje, získané použitím IL-18 peptidu PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) alebo YFGK.LESK.LSVIRN (SEQ ID NO: 31), v porovnaní s príbuzným receptorom, t.j., receptorom pre IL-18, ako je uvedené na obrázkoch 2 a 3, poskytli zistenie, s ktorými zvyškami môže reagovať neutralizujúca protilátka alebo zlúčenina.
Alternatívny spôsob selekcie peptidových epitopov môže byť realizovaný bez akýchkoľvek molekulárnych modelov skríninkom skupiny reprezentatívnych peptidov, pomocou imunoselekcie.
V jednom prístupe môžeme použiť prekrývajúce sa peptidy, reprezentujúce úplnú sekvenciu proteínu. V kombinovanom prístupe môže byť molekulárne modelovanie použité na identifikáciu epitopov, ktoré sa zdajú byť dôležité. Identifikované sekvencie epitopu(ov) je možné potom použiť na zostavenie skupiny peptidov (napr., prekrývajúcich sa peptidov), ktoré sú reprezentatívne pre identifikovaný epitop(y). Prípravu požadovaných peptidových sekvenčii je možné vykonať použitím štandardných spôsobov, známych v tomto odbore.
Akonáhle bol väzbový peptid alebo peptidy (napr., skupina prekrývajúcich sa peptidov) selektovaný, môže byť vykonaný imunoskrínink na príbuzný receptor. Imunoskrínink môže byť tiež vykonaný s vybraným príbuzným receptorom, takže môže byť identifikovaný peptid, ktorý má určitú väzbovú špecifitu. Môže byť použitý ľubovoľný počet imunoskríninkov, aby bol identifikovaný buď požadovaný peptid alebo požadovaný receptor, ako kandidátska väzbová molekula pre ďalšie štúdie. Takéto “lovecké” spôsoby analyzovania interakcií proteín-proteín na identifikáciu kandidátskych väzbových molekúl a/alebo na vyhodnocovanie väzbových afinít sú v odbore opísané. Jeden výhodný spôsob, ktorý využíva fága, je takisto zahrnutý.
Protilátky anti-IL-18
Tento vynález poskytuje protilátky, tak ako ich časti, ktoré viažu IL-18. Je výhodné, keď tieto protilátky alebo ich časti sú izolovanými protilátkami.
Tu používaný termín “protilátky” označuje imunoglobulínové molekuly, tvorené štyrmi polypeptidovými reťazcami, dvoma ťažkými (H) reťazcami a dvoma ľahkými (L) reťazcami, ktoré sú vzájomne spojené disulfidickými väzbami. Každý ťažký reťazec obsahuje variabilnú oblasť ťažkého reťazca (označovanú tu skratkou HCVR alebo HV) a konštantnú oblasť ťažkého reťazca. Konštantná oblasť ťažkého reťazca sa sklada z troch domén, CH1, CH2 a CH3. Každý ľahký reťazec je zložený z variabilnej oblasti ľahkého reťazca (tu označované skratkou LVCR alebo VL) a konštantnej oblasti ľahkého reťazca. Konštantná oblasť ľahkého reťazca sa skladá z jednej domény, CL. VH a VL oblasti môžu byť ďalej delené na oblasti hypervariability, nazývané oblasťami určujúcimi komplementaritu (complementarity determining regions) (CDR), ktoré sú roztrúsené medzi oblasti, ktoré sú viac konzervatívne, nazývané rámcové oblasti (FR, framework regions). VH aj VL sú zložené z troch CDR a štyroch FR, usporiadaných od N- konca k C- koncu v nasledujúcom poradí: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
Termín “antigén viažuci časť” protilátky (alebo jednoducho “časť protilátky”), ako je tu používaný, označuje jeden alebo viac fragmentov protilátky, ktoré si zachovávajú schopnosť sa špecificky viazať na antigén (napr. hIL-18). Zistilo sa, že antigén väzbová funkcia protilátky môže byť reprezentovaná fragmentmi celej dĺžky protilátky. Príklady viažucich sa fragmentov, obsiahnutých v termíne “antigén viažuca časť” protilátky, zahrnujú (i) Fab fragment, monovalentný fragment obsahujúci VL, VH, CL a CF1 domény; (ii) F(ab')2 fragment, bivalentný fragment, obsahujúci dva Fab fragmenty, spojené disulfidickým mostíkom v oblasti spojenia; (iii) Fd fragment, obsahujúci VH a CH1 domény; (iv) Fv fragment, obsahujúci VL a VH domény jedného ramena protilátky, (v) dAb fragment (Ward el al. (1989) Náture 341:544 až 546), ktorý sa skladá z VH domény a (vi) izolovaná oblasť určujúca komplementaritu (CDR).
Aj keď dve domény Fv fragmentu, VL a VH, sú kódované rôznymi génmi, môžu byť, použitím rekombinačných spôsobov, spojené syntetickým mostíkom, ktorý im umožňuje, aby boli jednoduchým proteínovým reťazcom, v ktorom sa VL a VH oblasti spojujú, čím tvoria monovalentné molekuly (známe ako jednoreťazcové Fv (scFv); viď napríklad Bird et al. )1988) Science 242:423 až 426 a Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85,:5879 až 5883). Takéto jednoreťazcové protilátky môžu byť tiež chápané ako zahrnuté pod termínom “antigén viažuca časť” protilátky. Iné formy jednoreťazcových protilátok, ako diaprotilátky, sú tiež zahrnuté do tohto termínu. Diaprotilátky (diabodies) sú bivalentné, bišpecifické molekuly, v ktorých sú VH a VL domény exprimované na jednom polypeptidovom reťazci, ale majú linker, ktorý je príliš krátky, aby umožnil párovanie medzi obidvoma doménami na tom istom reťazci, čím sú tieto domény nútené sa párovať s komplementárnymi doménami iných reťazcov a vytvárať tak dve antigén viažuce miesta (viď napríklad, Holliger, P. et al. (1933) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444 až 6448; Poljak, R.J. et al. (1994) Structure 2: 1121 až 1123).
Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu ďalej tiež byť časťou väčších imunoadhezívnych molekúl, vzniknutých kovalentnou alebo nekovalentnou asociáciou protilátky alebo jej antigén viažucej časti s jedným alebo viacerými proteínmi alebo peptidmi. Príklady takýchto imunoadhezívnych molekúl zahrnujú použitie vnútornej oblasti streptavidínu na prípravu tetramérnej scFv molekuly (Kypriyanov, S.M., et al. (1995) Human Antibodies and Hybridomas 6:93 až 101) a použitie cysteínových zvyškov, markerového peptidu a Ckoncové polyhistidínové úseky na prípravu bivalentných a biotinylovaných scFv molekúl (Kypriyanov, S.M. et al. (1994) Mol. Immunol. 31: 1047 až 1058). Časti protilátok, ako sú Fab a F(ab')2 fragmenty, môžu byť pripravené z úplných protilátok konvenčnými spôsobmi, ako sú digescia úplných protilátok papaínom alebo trypsínom. Okrem toho môžu byť protilátky, časti protilátok a imunoadhezívnej molekuly získané použitím štandardných spôsobov rekombinácie DNA, ktoré sú tu opísané.
Tu používaný termín „izolovaná protilátka“ označuje protilátku, ktorá je v podstate bez iných protilátok, ktoré majú odlišnú antigénovú špecifitu (napríklad izolovaná protilátka, ktorá špecificky viaže hIL-18, je v podstate bez protilátok, ktoré špecificky viažu antigén iný než hIL-18). Izolovaná protilátka, špecificky viaže hIL-18, reaguje však krížovo s inými antigénmi, ako sú IL-18 molekuly z iných druhov. Izolovaná protilátka je okrem toho v podstate bez ostatného bunkového materiálu a/alebo chemikálií. Izolovaná protilátka, napr. izolovaná ľudská protilátka, môže byť chimérickou protilátkou, kde sú napríklad implantované do rodičovskej ľudskej protilátky variabilné oblasti, CDR domény alebo izotypy, odvodené od iného ľudského zdroja
Tu používaný termín „zlúčenina“ označuje viažuce sa molekuly, ako sú protilátky, napr., polyklonálne protilátky, monoklonálne protilátky, ich viažuce sa fragmenty (napr., Fab fragmenty), jednoreťazcové protilátky (napr., scFv), peptidy alebo peptidové mimetiká, takisto ako nepeptidové molekuly, ako sú malé molekuly, ktoré majú ligandovú väzbovú aktivitu.
Pojem „neutralizujúca protilátka“, ktorý je tu používaný, (alebo „protilátka, ktorá neutralizovala hIL-18 aktivitu“), označuje protilátku, ktorej väzba na hIL-18 má za následok inhibíciu biologickej aktivity hIL-18. Táto inhibícia biologickej aktivity hIL-18 môže byť zistená meraním jedného alebo viacerých indikátorov biologickej aktivity hIL-18. Indikátory biologickej aktivity hIL-18 je možné stanoviť pomocou jedného alebo viacerých štandardných in vivo alebo in vitro testov, známych v tomto odbore.
Tu používaný termín „povrchová rezonancia plazmónu“ označuje optický jav, ktorý umožňuje analýzu biošpecifických interakcií v reálnom čase na základe detekcie zmien koncentrácie proteínu v matrici biosenzora, napríklad po17 užitím BIAcore systému (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala. SA, a Piscataway, NJ, US). Podrobnejší opis viď Jonsson, U., et al. (1993) Ann. Biol.C.Iin. 51:19 až 26;, Jonsson, U. et al. (1991) Biotechniques 1 1:320 až 627; Jsson, B., etal. (1995) J. Mol. Recognit. 8/ 125 až 131 a Johnsson, B. et al. (1991) Anál. Biochem. 198: 268 až 277.
Tu používaný termín “Koff“ označuje rozpadovú disociačnú konštantu pre disociáciu protilátky z komplexu protilátka/antigén.
Tu používaný termín „Ka“ označuje disociačnú konštantu jednotlivej interakcie protilátka-antigén.
Z jedného hľadiska sa vynález týka izolovanej protilátky alebo jej antigén viažucej časti, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18, obsahujúcej aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) alebo VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO: 33) alebo časť ľubovoľného z týchto epitopov. Je výhodné, keď táto protilátka je neutralizačná protilátka. Je výhodné, keď táto protilátka je ľudská. V iných uskutočneniach je táto protilátka buď rekombinantná alebo monoklonálna protilátka.
V iných uskutočneniach sa izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť viaže na epitop ľudského IL-18, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), pričom táto protilátka alebo jej antigén viažuca časť, disociuje od ľudského IL-18 s rýchlostnou konštantou kOff 0,1 s _1 alebo menšou, ako je stanovené povrchovou rezonanciou plazmónu alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 rovnou 1 x 10'6 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuca časť môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'2 s'1 alebo môžu inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'7 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'3 s'1 alebo inhibovať aktivitu ľudského
Q
IL-18 s IC50 1 x 10 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 104 s1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'9 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu po18 dobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'5 s'1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 1O'10 M alebo menšou. Protilátka alebo jej antigén viažuci fragment môžu podobne disociovať z komplexu s ľudským IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10‘6 s'1 alebo inhibovať aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 1O‘H M alebo menšou.
Afinitné zrenie identifikovaných anti-IL-18 protilátok.
Vynález tiež poskytuje ako možnosť pre ďalšiu modifikáciu identifikovanej protilátky väzbu k epitopu IL-18. Modifikáciou identifikovanej anti-IL-18 protilátky sa zlepšia väzbové a/alebo neutralizačné aktivity.
Terapeutické prostriedky a spôsoby podávania
Vynález tiež poskytuje farmaceutické prostriedky obsahujúce protilátku alebo jej antigén viažucu časť podľa tohto vynálezu a farmaceutický prijateľný nosič. V jednom uskutočnení farmaceutický prostriedok ďalej obsahuje najmenej jedno doplnkové terapeutické činidlo na liečbu poruchy, v ktorej je aktivita IL-18 škodlivo prítomná.
Protilátky a ich časti viažuce antigén môžu byť začlenené do farmaceutických prostriedkov, vhodných na podávanie subjektu. Farmaceutický prostriedok obsahuje typicky protilátku podľa vynálezu alebo jej antigén viažucu časť a farmaceutický prijateľný nosič. Tu používaný termín „farmaceutický prijateľný nosič“ označuje ľubovoľné a všetky rozpúšťadlá, disperzné média, povlaky, antibakteriálne a antimykotické činidlá, izotonické a absorpciu predlžujúce činidla a im podobné, ktoré sú fyziologicky kompatibilné. Príklady farmaceutický prijateľných nosičov obsahujú jednu alebo viac molekúl vody, fyziologický roztok, fosfátový fyziologický roztok, sacharózu, glycerol, etanol a im podobné, tak ako aj vo vzájomnej kombinácii. V mnohých prípadoch, môže byť výhodné, keď prostriedok obsahuje izotonické činidlá, napríklad, cukry, polyalkoholy ako je manitol, sorbitol alebo chlorid sodný. Farmaceutický pri19 jateľné nosiče môžu ďalej obsahovať menšie množstvo pomocných substancií, ako sú zmáčacie alebo emulgačné činidlá, konzervačné prostriedky alebo pufry, ktoré zvyšujú polčas života alebo účinnosť protilátky alebo jej časti.
Protilátky podľa tohto vynálezu a ich časti môžu byť začlenené do farmaceutických prostriedkov, vhodných na parenterálne podanie. Je výhodné, keď sa protilátka alebo jej časť pripraví ako injekčný roztok, obsahujúci 0,1 až 250 mg/ml protilátky. Injekčný roztok môže byť buď kvapalnej alebo v lyofilizovanej liekovej forme v penicilínke z flintového alebo opálového skla, ampúl alebo jednorázovej injekčnej striekačke. Pufer môže byť L-histidín (1 až 50 mM), optimálne 5 až 10 mM, pri pH 5,0 až 7,0 (optimálne pH 6,0). Inými vhodnými puframi sú, ale bez obmedzenia, sukcinát sodný, citrát sodný, fosfát sodný alebo fosfát draselný. Chlorid sodný môže byť použitý na modifikáciu toxicity roztoku v koncentrácii 0 až 300 mM (optimálne 150 mM pre kvapalnú liekovú formu). Ako ochrana pred mrazom môže byť v lyofilizovanej liekovej forme obsiahnutých 0 až 10 % sacharózy (optimálne 0,5 až 1,5 %). Inou vhodnou ochranou proti mrazu môže byť trehalóza a laktóza. Ako plnivo môže byť v lyofilizovanej liekovej forme obsiahnutý hlavne manitol (1 až 10 %, optimálne 2 až 4 %). V kvapalnej aj v lyofilizovanej liekovej forme môže byť ako stabilizátor použitých hlavne 1 až 50 mM L-metionínu (optimálne 5 až 10 mM). Iné vhodné plnivo predstavuje glycín a arginín, 0 až 0,05 % polysorbátu-80 (optimálne 0,005 až 0,01 %). Prídavné zmáčadlá sú, ale bez obmedzenia, polysorbát 20 a rôzne druhy BRIJ.
Prostriedky podľa tohto vynálezu môžu byť v rôznych formách. Tieto formy sú, ale bez obmedzenia, pevná, polopevná a pevná lieková forma, tak ako kvapalné roztoky (napr., injekčné a infúzne roztoky), disperzie alebo suspenzie, tablety, pilulky, prášky, lipozómy a čipky. Výhodná forma závisí na zamýšlanom spôsobe podania terapeutickej aplikácie. Typické výhodné prostriedky sú vo forme injekčných alebo infúznych roztokov, tak ako prostriedky podobné tým, ktoré sa používajú na pasívnu imunizáciu človeka inými protilátkami. Výhodný spôsob podania je parenterálny (napr., intravenózny, subkutánny, intraperitoneálny, intramuskulárny). Vo výhodnom uskutočnení je protilát20 ka podaná intravenóznou infúziou alebo injekciou. V inom výhodnom uskutočnení je protilátka podaná intramuskulárnou alebo subkutánnou injekciou.
Terapeutické prostriedky musia byť sterilné a stabilné za podmienok výroby a skladovania. Prostriedok môže byť formulovaný ako roztok, mikroemulzia, disperzia, lipozóm alebo iná usporiadaná štruktúra, vhodná pre vysokú koncentráciu liečiva. Sterilné injekčné roztoky môžu byť pripravené začlenením aktívnej zlúčeniny (napr. protilátky alebo jej časti) v potrebnom množstve v príslušnom rozpúšťadle s jednou alebo viacerými vyššie vymenovanými látkami, ak je treba, sterilnou filtráciou. Disperzie môžu byť všeobecne pripravené zabudovaním aktívnej zlúčeniny do sterilného nosiča, ktorý obsahuje základné disperzné médium a potrebné ostatné zložky, vybrané z vyššie uvedených. V prípade sterilných, lyofilizovaných práškov na prípravu sterilných injekčných roztokov, sú výhodnými spôsobmi prípravy vákuové sušenie a sušenie rozprachom do vákua, ktoré poskytuje prášok aktívnej látky plus ľubovoľnú ďalšiu požadovanú ingredienciu z predošlého sterilné filtrovaného roztoku. Udržanie roztoku môže byť realizované, napríklad, použitím povrchovo aktívnych látok, ako je lecitín, udržanie potrebnej veľkosti častíc v prípade disperzie je možné vykonať pomocou zmáčadiel. Predĺžená absorpcia injekčných roztokov môže byť dosiahnutá zahrnutím činidiel, spomaľujúcich absorpciu, ako sú napríklad soli monostearátu a želatína, do farmaceutického prostriedku.
Protilátky a ich časti podľa predkladaného vynálezu môžu byť podané rôznymi spôsobmi známymi v odbore, aj keď pre mnohé terapeutické aplikácie je výhodným miestom a/alebo spôsobom podania subkutánna injekcia, intravenózna injekcia alebo infúzia. Ako odborník v tejto oblasti uzná, miesto a/alebo spôsob podania sa bude líšiť podľa požadovaných výsledkov. V niektorých uskutočneniach môže byť aktívna látka pripravená s nosičom, ktorý bude aktívnu látku chrániť pred rýchlym uvoľnením, ako sú kontrolované formulácie uvolňovania, vrátane implantátov, kožných náplastí a systémov prenosu na miesto pomocou mikropuzdier. Je možné tiež použiť biologicky odbúrateľne, biokompatibilné polyméry, ako sú etylén(vinyl)acetát, polyanhydridy, polyglykolát, kolagén, polyortoestery a polylaktát. Je patentovaných mnoho spôsobov takýchto formulácií alebo sú všeobecne známe odborníkom v tejto oblasti. Viď napríklad Sustained and Controlled Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcel Dekker, Inc., New York, 1978.
V určitých uskutočneniach môžu byť protilátky alebo ich časti podané orálne, napríklad, v inertnom rozpúšťadle alebo v metabolizovateľnom jedlom nosiči. Zlúčenina (a poprípade ďalšie zložky) môžu byť tiež uzavreté v tvrdej alebo mäkkej kapsuli, lisovanej do tabliet alebo začlenené priamo do diéty subjektu. Na orálne terapeutické použitie môže byť zlúčenina spojená s plnivom a použitá vo forme stráviteľných tabliet, bukálnych tabliet, čípkov, kapsúl, elixírov, suspenzií, sirupov, oplátok a im podobných. Na podanie zlúčeniny podľa tohto vynálezu iným než parenterálnym spôsobom môže byť nevyhnutné potiahnutie zlúčeniny alebo spoločné podanie tejto zlúčeniny s materiálom, ktorý zabraňuje jej inaktivácii.
Do prípravkov môžu byť tiež začlenené doplnkové aktívne zlúčeniny. V určitých uskutočneniach môže byť protilátka alebo jej časť podľa tohto vynálezu v prípravku spoločne obsiahnutá a/alebo spoločne podávaná s jedným alebo viacerými terapeutickými činidlami, ktoré sú použiteľné na liečbu ochorení, na ktorých sa IL-18 škodlivo podiela. Napríklad anti- IL-18 protilátka alebo jej časť podľa tohto vynálezu môže byť spoločne obsiahnutá v prostriedku a/alebo spoločne podávaná s jednou alebo viacerými protilátkami, ktoré sa viažu na iné ciele (napr. protilátky, ktoré viažu iné cytokíny alebo ktoré viažu molekuly bunkového povrchu). Okrem toho môže byť jedna alebo viac protilátok podľa tohto vynálezu použitých v kombinácii s dvoma alebo viacerými predchádzajúcimi terapeutickými činidlami. V takýchto kombinovaných terapiách sa môžu s výhodou používať nižšie dávky podávaných terapeutických činidiel, čím sú odstránené prípadné toxicity alebo komplikácie spojené s rôznymi monoterapiami.
Terapeutické použitia
Interleukín 18 sa rozhodujúcim spôsobom podieľa v patológii, spojenej s mnohými ochoreniami, ktoré obsahujú imunitné a protizápalové prvky. Tieto choroby sú, ale bez obmedzenia na ne, reumatická artritída, osteoartritída, juvenilná chronická artritída, Lymská artritída, psoriatická artritída, reaktívna artritída, spondyloartropatia, systémový lupus erythematosus, Crohnova choroba, ulceratívna kolitída, zápalové ochorenie čriev, diabetes mellitus závislý na inzulíne, thyroiditis, astma, alergické choroby, psoriasis, dermatitis scleroderma, choroby spojené s neznášanlivosťou transplantátu, odhojenie transplantovaného orgánu, akútna alebo chronická choroba spojená s transplantáciou orgánov, sarcoidóza, ateroskleróza, rozstrúsená intravaskulárna koagulácia, Kawasakiho choroba, Graveova choroba, nefrotický syndróm, syndróm chronickej únavy, Wegenerova granulomatóza, Henoch-Schônleinova purpurea, mikroskopická vaskulitída obličiek, chronická aktívna hepatitída, uveitída, septický šok, syndróm toxického šoku, septický syndróm, kachexia, infekčné choroby, choroby spôsobené parazitmi, získaný syndróm imunodeficiencie, akútna transverzné myelitídy, Huntingtonova chorea, Parkinsonova choroba, Alzheimerova choroba, mŕtvica, primárna biliárna cirhóza, hemolytická anémia, zhubné choroby, choroby srdca, infarkt myokardu, Addisonova choroba, sporadická, polyglandulárna deficiencia typu I a polyglandulárna deficiencia typu II, Schmidtov syndróm, (akútny) syndróm respiračnej tiesne u dospelých, alopecia, alopecia areata, sérovo negatívna artopatia, artropatia, Reiterova choroba, psoriatická artropatia, ulceratívna kolitická artropatia, enteropatická synovitis, artropatia spojená s chlamydiou, yersiniou a salmonellou, spondyloartopatia, ateromatická choroba/arterioskleróza, atopická alergia, autoimunitná bulózna choroba, pemfigus vulgaris, pemfigoidná choroba, choroba lineárneho IgA, autoimunitná hemolytická anémia, Coombsova pozitívna hemolytická anémia, získaná perniciózna anémie, juvenilná perniciózna anémia, myalgická encefalitída/Royal Free choroba, chronická mukokutánna candidiadis, gigantocelulárna arteritis, primárna sklerotizujúca hepatitis, kryptogénna autoimunitná hepatitis, získaný syndróm imunodeficiencie (AIDS), choroby spojené so syndrómom získanej imunodeficiencie, hepatitis C, všeobecná rôznorodá imunodeficiencia - všeobecná rôznorodá hypogamaglobulinémie, dilatovaná kardiomyopatia, ženská neplodnosť, poruchy vaječníkov, predčasná porucha vaječníkov, fibrotická pľúcna choroba, kryptogénna fibrózna alveolitída, pozápalová intersticiálna pľúcna choroba, intersticiálna pneumonitis, intersticiálna pľúcna choroba spojená s chorobou väzivového tkaniva, zmiešaná choroba väzivového tkaniva spojená s pľúcnou chorobou, intersticiálna pľúcna choroba spojená so systémovou sklerózou, intersticiálna pľúcna choroba spojená s reumatickou artritídou, intersticiálna pľúcna choroba spojená so systémovým lupus erythematosus, dermatomyozitída/polymyozitída spojená s chorobou pľúc, Sjogrenova choroba spojená s chorobou pľúc, ankylózna spondylitída spojená s chorobou pľúc, vaskulitická difúzna pľúcna choroba, hemosideróza spojená s pľúcnou chorobou, liečivami vyvolaná intersticiálna pľúcna choroba, radiačná fibróza, obliterantná bronchiolitída, chronická eozinofilná pneumónia, lymfocytická infiltračná choroba pľúc, poinfekčná intersticiálna choroba pľúc, dnová artritída, autoimunitná hepatitída, autoimunitná hepatitída typu-1 (klasická autoimunitná alebo lupoidná hepatitída), autoimunitná hepatitída typu-2 (anti- LKM protilátková hepatitída) (klasická autoimunitná alebo lupoidná hepatitída), autoimunitne sprostredkovaná hypoglykémia, rezistencia na inzulín typu B s acanthosi nigricans, hypoparathyroidizmus, akútna imunitná choroba spojená s transplantáciou orgánov, chronická imunitná choroba spojená s transplantáciou orgánov, osteoartróza, primárna sklerotická cholangitída, psoriasis typu 1, psoriasis typu 2, idiopatická leukopénia, autoimunitná neutropénia, renálna choroba NOS, glomerulonefritída, mikroskopická vaskulitída obličiek, Lymská choroba, diskoidný lupus erythematosus, mužská idiopatická neplodnosť alebo NOS, spermálna autoimunita, skleróza multiplex (všetky subtypy), sympatetická oftalmia, pulmonárna hypertenzia sekundárna po chorobe väzivového tkaniva, Goodpasturov syndróm, pľúcna manifestácia polyarteritis nodóza, akútna reumatická horúčka, reumatoidná spondylitída, Stillova choroba, systémová skleróza, Sjógrenov syndróm, Takayasuova choroba/arteritis, autoimunitná trombocytopenia, idiopatická trombocytopénia, autoimunitná choroba štítnej žľazy, hypertyroidizmus, autoimunitný hypotyroidizmus strumy (Hashimotova choroba), atrofický autoimunitný hypotyroidizmus, primárny myxedém, fakogénna uveitída, primárna vaskulitída a vitiligo. Ľudské protilátky a časti protilátok podľa tohto vynálezu môžu byť použité na liečbu ľudských jedincov trpiacich chorobami autoimunity hlavne tými, ktoré sú spojené so zápalom vrátane reumatickej spondylitídy, alergie, autoimunitného diabetu, autoimunitnej uveitídy, akútnej choroby pečene, chronickej choroby pečene, alergie a astmy, mentálnych porúch (napr., depresie a schizofrénie) a chorôb sprostredkovaných Th2 typom a Thl typom.
Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuci časti je výhodné používať na liečbu reumatickej artritídy, Crohnovej choroby, sklerózy multiplex, diabetu závislého na inzulíne a psoriázy.
Protilátka alebo jej časť podľa tohto vynálezu môžu byť tiež podávané s jedným alebo viacerými dalšími terapeutickými činidlami, použiteľnými pri liečbe autoimunitných a zápalových chorôb.
Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich časti viažuce antigén môžu byť použité na liečbu týchto chorob samé alebo v kombinácii. Tomu je potrebné rozumieť tak, že protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť použité buď samé alebo v kombinácii s doplnkovým činidlom napr., terapeutickým činidlom, pričom toto doplnkové činidlo je vybrané odborníkom podľa jeho zamýšľaného použitia. Doplnkové činidlo môže napríklad byť terapeutickým činidlom, o ktorom je známe, že ošetruje chorobný stav, ktorý je liečený protilátkou podľa predkladaného vynálezu. Doplnkové činidlo môže byť tiež činidlom, ktoré zlepšuje terapeutický prostriedok, napríklad činidlo, ktoré ovplyvňuje viskozitu prostriedku.
Ďalej je potrebné rozumieť, že kombinácie, ktoré sú tiež zahrnuté vo vynáleze, sú tie kombinácie, ktoré sú použiteľné na zamýšľaný účel. Ďalej uvedené činidlá slúžia ako ilustrácia účelu a nie sú myslené ako obmedzenie. Kombinácie, ktoré sú časťou tohto vynálezu, môžu byť protilátky podľa predkladaného vynálezu a najmenej jedno doplnkové činidlo, vybrané z nižšie uvedeného zoznamu. Kombinácia môže tiež obsahovať viac ako jedno prídavné činidlo, napríklad dve alebo tri doplnkové činidlá, pokiaľ je táto kombinácia taká, že takto utvorený prostriedok môže splniť u nej požadovanú funkciu.
Výhodnými kombináciami je nesteroidné proti zápalové liečivo (liečiva), tiež označované ako NSAIDS, ktoré obsahujú liečiva podobné ibuprofénu. Iná výhodná kombinácia sú kortikosteroidy, vrátane prednizolónu; dobre známe vedľajšie účinky steroidov môžu byť redukované alebo úplne eliminované znížením potrebnej dávky steroidov, pri liečbe pacienta v kombinácii s anti-IL-18 protilátkami podľa tohto vynálezu. Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel pre reumatickú artritídu, s ktorými môžu byť protilátky alebo časti pro25 tilátok podľa tohto vynálezu kombinované sú nasledujúce: cytokin supresívne protizápalové liečivo (liečiva) (CSAID); protilátka alebo antagonisti ľudských cytokínov alebo rastových faktorov, napríklad TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12, IL-15, IL-16, EMAP-II, GM-CSF, FGP a PDGF. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť kombinované s protilátkami voči molekulám bunkového povrchu, ako sú CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80 (B7.1), CD86, CD90 alebo ich ligandy, vrátane CD154 (gp39 alebo CD40L).
Výhodné kombinácie terapeutických činidiel môžu interferovať v rôznych miestach v autoimunitnej a následne zápalovej kaskáde; výhodné príklady zahrnujú TNF antagonistov, ako sú chimérické, humanizované alebo humánne TNF protilátky, D2E7, (zverejnená prihláška PCT č. WO 97/29 131 (, CA2 (Remicade™), CDP 571 a rozpustné p55 alebo p75 TNF receptory, ich deriváty, (p75TNFRlgG (Enbrel™) alebo 55TNFRlgG (Lenercept) a tiež inhibítory TNFa konvertujúceho enzýmu (TACE); podobne inhibítory IL-1 (inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-1, IL-1RA atď.) môžu byť účinné z rovnakého dôvodu. Iné výhodné kombinácie zahrnujú interleukin 11. Ešte ďalšou výhodnou kombináciou sú ostatné kľúčové faktory autoimunitnej odpovede, ktoré môžu účinkovať paralelne, v závislosti na alebo spoločne s funkciou IL18; obzvlášť výhodní sú antagonisti IL-18, vrátane protilátok IL-12 alebo rozpustných IL-12 receptorov alebo proteíny viažuce IL-12. Dokázalo sa, že IL-12 a IL-18 majú prekrývajúce sa, ale odlišné funkcie a kombinácia obidvoch ich antagonistov môže byť najúčinnejšia. Ešte inou výhodnou kombináciou môžu byť neporušené inhibítory anti-CD4. Ešte iné výhodné kombinácie obsahujú antagonistov kostimulačnej metabolickej dráhy CD80 (B7.1) alebo CD86 (B7.2), zahrnujúce protilátky, rozpustné receptory alebo ligandy antagonistov.
Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť tiež kombinované s činidlami, ako je metotrexát, 6-MP, azatioprín sulfasalazín, mesalazín, olsalazín chlorochinón/hydrochlorochinón, penicilamín, aurotiomalát (intramuskulárne a orálne), azatioprín, kochicín, kortikosteroidy (orálne, inhalačné a lokálnou injekciou), agonisti β-2 adrenoreceptoru (salbutamol, terbutalín, salmeteral), xantíny (teofylín, aminofylín), kromoglykát, nedokromil, ketotifén, ipratropium a oxitropium, cyklosporín, FK506, rapamycín, mykofenolát mofetil, leflunomid, NSAID, napríklad ibuprofén, cox-2 inhibítory, cox-2 selektívne inhibítory (napr., rofecoxib (VIOXX™); Merck & Čo., Inc.)) kortikosteroidy ako prednizolón, inhibítory fosfodiesteráz, agonisti adenozínu, antitrombotické činidlá, inhibítory komplementu, adrenergné činidlá, činidlá, ktoré interferujú so signalizáciou prozápalovými cytokínmi, ako TNFa alebo IL-1 (napr., IRAK, NIK, IKK, p38 alebo MAP inhibítory kinázy), inhibítory enzýmu konvertujúceho IL-Ιβ, inhibítory enzýmu konvertujúceho TNFa (TACE), signalizujúce inhibítory T-buniek, ako sú inhibítory kináz, inhibítory metaloproteináz, sulfasalazín, azatioprín, 6-merkaptopuríny, inhibítory enzýmu konvertujúceho angiotenzín, receptory rozpustných cytokínov a ich deriváty (napr., rozpustné p55 alebo p75 TNF receptory a deriváty p75TNFRIgG (Enbrel™ a p55TNFRIgG (Lenercept)), sIL-lRI, sIL-lRII, sIL-6R a protizápalové cytokíny (napríklad IL-4, IL-10, IL-13 a TGFP). Výhodné kombinácie zahrnujú metotrexát alebo leflunomid a v málo alebo niekoľkých prípadoch reumatickej artritídy cyklosporín.
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel proti zápalovej chorobe čriev, s ktorými môže byť kombinovaná protilátka alebo jej časť podľa tohto vynálezu sú nasledujúce: budenozid; epidermálny rastový faktor; kortikosteroidy; cyklosporín; sulsalazín; 6-merkaptopurín; azatioprín; metronidazol; inhibítory lipoxygenáz; mesaľamin; olsalazín; balsalazid; antioxidanty; inhibítory tromboxánu; antagonisti receptoru IL-18; anti-IL-Ιβ rronoklonálne protilátky; anti-IL-6 monoklonálne protilátky; rastové faktory; inhibítory elastázy; pyridinyl-imidazolové zlúčeniny; protilátky alebo antagonisti iných ľudských cytokínov alebo rastových faktorov, napríklad, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IKL18, IL-12, IL-15, IL-16, EMAP.II, GM-CSF, FGP a PGDF. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti, môžu byť kombinované s protilátkami proti molekulám bunkového povrchu, ako sú CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 alebo ich ligandy. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť tiež kombinované s činidlami, ako je metotrexát, cyklosporín, FK506, rapamycín, mykofenolát mofetil, leflunomid, NSAIDs, napríklad ibuprofén, kortikosteroidy, ako prednizolón, inhibítory fosfodiesteráz, agonisti adenozínu, antitrombotické činidlá, inhibítory komplementu, adrenergné činidlá, činidlá, ktoré interferujú so signalizáciou prozápalovými cytokínmi, ako je TNFa alebo IL-1 (napr., IRAK, NIK, IKK, p38 alebo inhibítory MAP kinázy), inhibítory IL-Ιβ konvertujúceho enzýmu, inhibítory TNFa konvertujúceho enzýmu, inhibítory Tbunkovej signalizácie, inhibítory metaloproteinázy, sulfasalazín, azatioprín, 6merkaptopuríny, enzým konvertujúci angiotenzín, rozpustné receptory cytokínov a ich deriváty (napr., p55 alebo p75 TNF receptory, sIL-lRI, sIL-lRII, sIL-6R) a protizápalové cytokíny (napr., IL-4, IL-10. IL-11. IL-13 a TGFp).
Príklady výhodného terapeutického činidla proti Crohnovej chorobe, s ktorým môže byť protilátka alebo jej antigén viažuca časť kombinovaná, sú nasledujúce: antagonisti TNF, napríklad anti-TNF protilátky, D2E7 (zverejnená prihláška PCT č. WO 97/29 131, CA2 (RemicadeTM1, CDP 571, TNFR-Ig zostavy, (p75TNFRIgG (Enbrel™) a p55TNFRIgG (Lenercept)) inhibítory a inhibítory PDE4. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť kombinované s kortikosteroidmi, napríklad budenozidom a dexametazónom. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť tiež kombinované s činidlami, ako je sulfasalazín, kyselina 5aminosalicylová a olsalazín, a činidlami, ktoré interferujú so syntézou alebo funkciou prozápalových cytokínov, ako je IL-1, napríklad inhibítory enzýmu konvertujúceho IL-18 a IL-lra. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť tiež použité s inhibítormi signalizácie T bunkami, napríklad inhibítory tyrozín kinázy, 6-merkaptopuríny. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť kombinované s IL-11.
Neobmedzujúce príklady terapeutických činidiel pre sclerosis multiplex, s ktorými môže byť protilátka podľa tohto vynálezu alebo jej časť kombinovaná, obsahujú nasledujúce: kortikosteroidy; prednizolón; metylprednizolón; azatioprín; cyklofosfamid; cyklosporín; metotrexát; 4-aminopyridín; tizanidín; interferon-pia (Avonex); Biogen); interferón-β lb (Betaseron; Chiron/Berlex); Copolymer 1 (Cop-1; Copaxone; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); pretlakový kyslík; intravenózny imunoglobulín; klabribín; protilátky alebo antagonisti ostatných ľudských cytokínov alebo rastových faktorov, napríklad, TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IKL-18, IL-12, IL-15, IL-16, EMAP.II, GM-CSF,
FGP a PGDF. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť kombinované s protilátkami proti molekulám povrchu buniek CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD90 alebo ich ligandmi. Protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti môžu byť tiež kombinované s činidlami, ako je metotrexát, cyklosporín, FK506, rapamycín, mykofenolát mofetil, leflunomid, NSAIDs, napríklad ibuprofén, kortikosteroidy, ako prednizolón, inhibítory fosfodiesteráz, agonisti adenozínu, antitrombotické činidlá, inhibítory komplementu, adrenergné činidlá, činidlá, ktoré interferujú so signalizáciou prozápalovými cytokínmi, ako je TNFa alebo IL-1 (napr., IRAK, NIK, IKK, p38 alebo inhibítory MAP kinázy), inhibítory IL-1 β konvertujúceho enzýmu, inhibítory TNFa konvertujúceho enzýmu, inhibítory T-bunkovej signalizácie, inhibítory metaloproteinázy, sulfasalazín, azatioprín, 6-merkaptopuríny, enzým konvertujúci angiotenzín, rozpustné receptory cytokínov a ich deriváty (napr., p55 alebo p75 TNF receptory, sIL-lRI, sIL1RII, sIL-6R) a protizápalové cytokíny (napr., IL-4, IL-10, IL-11, IL-13 a TGFP).
Výhodnými príkladmi terapeutických činidiel pre sklerózu multiplex, s ktorými môžu byť protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich antigén viažuce časti kombinované sú interferón-β, napríklad, IFNpi a IFNpb; kopaxón, kortikosteroidy, inhibítory IL-1, inhibítory TNF a protilátky proti ligandom CD40 a CD80.
Farmaceutické prostriedky podľa tohto vynálezu môžu obsahovať „terapeuticky účinné množstvo“ alebo „profylaktický účinné množstvo“ protilátky podľa tohto vynálezu alebo jej časti. „Terapeuticky účinné množstvo“ označuje množstvo, ktoré je, pri dávkach a nevyhnutných časových úsekoch, účinné na dosiahnutie požadovaného terapeutického výsledku. Terapeuticky účinné množstvo protilátky alebo jej časti sa môže meniť podľa faktorov, ako sú stav choroby, vek, pohlavie a váha jedinca a schopnosť protilátky alebo časti protilátky vyvolať požadovanú odpoveď v jedincovi. Terapeuticky účinné množstvo je tiež to množstvo, pri ktorom sú akékoľvek toxické a škodlivé účinky protilátky alebo jej časti vyvážené terapeuticky priaznivým účinkom. „Profylaktický účinné množstvo“ označuje množstvo, ktoré je pri dávkach a nevyhnutných ča29 sových intervaloch účinné na dosiahnutie požadovaného profylaktického výsledku. Pretože profylaktická dávka je používaná pred vypuknutím alebo v skorej fázy choroby, je profylaktický účinné množstvo typicky nižšie než terapeuticky účinné množstvo.
Režimy dávkovania môžu byť nastavené na dosiahnutie optimálnej požadovanej odpovede (napr., terapeutickej alebo profylaktickej odpovede). Môže byť napríklad podaný jednoduchý bolus, môže byť podaných niekoľko oddelených dávok v priebehu času alebo môže byť dávka úmerne znížená alebo zvýšená podľa naliehavosti situácie. Obzvlášť je výhodné formulovať parenterálne prostriedky v jednotnej dávkovej forme, kvôli ľahkosti podávania a dodržania jednotnosti dávok. Dávkové jednotky, ako sú tu používané, označujú fyzikálne oddelené jednotky, vhodné ako jednotné dávky pre cicavčie subjekty, ktoré majú byť liečené; každá jednotka obsahujúca vopred určené množstvo aktívnej zlúčeniny, vypočítané na dosiahnutie požadovaného účinku v spojení s potrebným farmaceutickým nosičom. Špecifikácie pre dávkové jednotkové formy podľa tohto vynálezu sú určované a priamo závislé na (a) unikátnych charakteristikách aktívnej zlúčeniny a jednotlivých terapeutických alebo profylaktických účinkoch, ktoré majú byť dosiahnuté a (b) obmedzeniach súvisejúcich so znášanlivosťou tejto aktívnej zlúčeniny u liečeného indivídua.
Príkladným, neobmedzujúcim rozsahom pre terapeutické alebo profylaktické množstvo protilátky podľa tohto vynálezu alebo jej časti je rozsah 0,1 až 20 mg/kg, výhodnejšie 1 až 10 mg/kg. Je treba poznamenať, že hodnoty dávok sa môžu meniť podľa typu a stavu, ktorý má byť zmiernený. Je treba ďalej tiež pochopiť, že pre každý jednotlivý subjekt je treba nastaviť špecifický dávkový režim v časovom úseku podľa individuálnej potreby a profesionálneho rozhodnutia osoby, ktorá podáva alebo dohliada na podávanie týchto prostriedkov, a že tu vyššie uvedené rozsahy dávok sú len ako príklad a nie sú myslené ako obmedzenie zámeru alebo použitia prostriedku, na ktorý sú vznášané patentové nároky.
Spôsoby prípravy anti-IL-18 protilátok
Anti-IL-1 8 protilátky podľa tohto vynálezu sú pripravované ľubovoľným spôsobom, známym v oblasti prípravy protilátok a používajúcim antigény, obsahujúce IL-18 peptidový epitop, opísaný v odstavci I, napr., epitop ľudského IL-18, obsahujúcim aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1).
Spôsoby prípravy protilátky, ktorá viaže ľudský iňterleukín-18 (IL-18), podľa tohto vynálezu všeobecne obsahujú:
vystavenie súboru protilátok antigénu, ktorý obsahuje epitop ľudského IL-18, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) alebo jej časť (napr., SEQ ID NO: 3 alebo 33) a selektovanie tej protilátky zo súboru protilátok, ktorá viaže epitop ľudského IL-18, obsahujúci PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) alebo jej časť (napr., SEQ ID NO: 3 alebo 33).
V jednom uskutočnení je tento súbor protilátok predstavovaný in vivo súborom protilátok v živočíchovi a tento spôsob obsahuje imunizáciu živočícha antigénom, obsahujúcim epitop ľudského IL-18, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1). V inom uskutočnení je súborom protilátok knižnica rekombinantných protilátok a skrínink knižnice je vykonávaný antigénom, obsahujúcim epitop ľudského IL-18, obsahujúcim PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1). Je výhodné, keď touto knižnicou je knižnica ľudských protilátok.
Spôsoby imunizácie živočícha antigénom s cieľom vyvolať nárast protilátok špecifických voči antigénu je v tomto odbore veľmi dobre známy. Antigén IL-18, obsahujúci epitop ľudského IL-18, obsahujúci PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), môže byť podaný živočíchovi, aby bola vyvolaná tvorba polyklonálnych protilátok a mohli z nich byť izolované špecifické protilátky, ktoré sa viažu na epitop (napr., priechodom polyklonálneho antiséra kolónou, ktorá obsahuje peptid, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) z hIL-18. Antigén, použitý na vyvolanie tvorby polyklonálnych protilátok môže byť intaktný (tj., s úplnou dĺžkou) hIL-18 alebo môže byť časťou hIL-18, ktorá obsahuje požadovaný epitop, napr., syntetický peptid, obsahujúci aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) zhIL-18. Monoklonálne protilátky proti tomuto epitopu môžu byť okrem toho pripravené vo vyššie uvedených živočíšoch, použitím štandardných hybridómových technológií a selekciou týchto hybridómov, vylučujúcich protilátku, ktorá sa špecificky viaže na požadovaný epitop, napr., skríninkom tohto hybridómu peptidom, obsahujúcim aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1) z hIL-18 a selektovaním na protilátky, ktoré sa špecificky viažu na tento peptid.
Spôsoby in vitro môžu byť na prípravu protilátok podľa tohto vynálezu tiež použité, pričom knižnica protilátok je skrínovaná na identifikáciu protilátky, ktorá má požadovanú väzbovú špecifitu. Takéto spôsoby skrínovania rekombinantných knižníc sú v odboru veľmi dobre známe a obsahujú spôsoby, ktoré sú opísané napríklad v Ladner et al.JA.S. Patent No. 5 223 409; Kang et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 92/18 619; Dower et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 91/17 271; Winter et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 92/20 791 ; Markland et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 92/15 679 ; Breitling et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 93/01 288 ; McCafferty et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 92/01 047 ; Garrard et al. zverejnená prihláška PCT č. WO 92/09 690 ; Fuchs et al. (1991) Biol/Technology 9 : 1370-1372 ; Hay et al. (1992) Hum Antibod Hybridomas 3 : 81-85 ; Huse et al. (1989) Science 246 : 1275-1281 ; McCafferty et al., Náture (1990) 348 : 552-554 ; Griffiths et al. (1993) EMBO J 12 : 725-734 ; Hawkins et al. (1992) JMol Biol 226 : 889-896 ; Clackson et al. (1991) Náture 352 : 624-628 ; Gram et al. (1992) PNAS 89 : 3576-3580 ; Garrad et al.(1991) Bio/Technology 9 : 13731377 ; Hoogenboom et al. (1991) Nuc Acid Res 19 : 4133- 4137 ; a Barbas et al. (1991) PNAS 88 : 7978-7982, a zverejnená prihláška PCT č. WO 97/29 131, ktorých obsah je tu začlenený citáciou.
Knižnica rekombinantných protilátok môže pochádzať od subjektu, imunizovaného pomocou IL-18 alebo časti IL-18, obsahujúceho epitop s aminokyselinami PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO: 1), Knižnica rekombinantných protilátok môže tiež pochádzať od „naivného“ subjektu, tjktorý nebol imunizovaný s IL-18, takže takáto knižnica ľudských protilátok pochádza od ľudského subjektu, ktorý nebol imunizovaný sIL-1. Protilátky podľa tohto vynálezu sú selektoväné skríninkom knižnice rekombinantných protilátok s epitopom ľudského IL-18, ktorý má aminokyseliny PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO:
1), aby došlo k selekcii protilátok, ktoré rozpoznajú tento epitóp. Spôsoby selekcie a skríninku sú v odbore dobre známe, ako je opísané v referenciách v predchádzajúcom odstavci.
Na selekciu protilátok podľa tohto vynálezu, ktoré majú väzbovú afinitu len pre hIL-18, bola použitá povrchová plazmónová rezonancia. Na selekciu protilátok, ktoré majú len schopnosť neutralizovať hIL-18, bol použitý štandardný spôsob na určenie inhibičnej aktivity hIL-18, ktorý je v odbore dobre známy. Spôsoby imunizácie myší, ktoré boli transgénovo zmenené tak, aby kódovali množinu ľudských imunoglobulínov, čím bolo ich organizmu umožnené, aby ako odpoveď na antigén, exprimoval úplne ľudské protilátky, sú tiež v odbore dobre známe (viď, napríklad, USPN 5 877 397 a USPN 6 150 584).
Použitie anti-IL-18 protilátok
Vzhľadom na ich schopnosti sa viazať k hIL-18, sú anti-IL-18 protilátky podľa tohto vynálezu alebo ich časti použiteľné na detekciu hIL-18 (napr., v biologickej vzorke ako je sérum alebo plazma) za použitia konvenčných imunologických spôsobov, ako je ELISA (enzýme linked immunosorbent assay), RIA (radioimmunoassay) alebo tkanivová imunohistochémia. Tento vynález poskytuje spôsob detekcie hIL-18 v biologickej vzorke, ktorá zahrnuje kontakt tejto biologickej vzorky s protilátkou podľa tohto vynálezu alebo jej časťou a detekciu buď protilátky (alebo jej časti), naviazanej na hIL-18 alebo nenaviazanej protilátky (alebo jej časti), čím je v biologickej vzorke detekovaná hlL18. Protilátka je priamo alebo nepriamo označená detekovateľnou látkou na uľahčenie detekcie viazanej alebo neviazanej protilátky. Vhodnými detekovateľnými látkami sú rôzne enzýmy, prostetické skupiny, fluorescentné materiály, luminiscenčné materiály a rádioaktívne materiály. Príklady vhodných enzýmov zahrnujú krenovú peroxidázu, alkalickú fosfatázu, β-galaktozidázu alebo acetylcholinesterázu; príklady vhodných prostetických skupín sú streptavidín/biotín a avidín/biotín; príklady vhodných fluorescenčných materiálov sú umbeliferón, fluoresceín, fluoresceín izotiokyanát, rodamín, dichlórtriazinylamín, fluoresceín, danzylchlorid alebo fykoerytrín; príkladom luminiscenčného materiálu je luminol a príklady vhodných rádioaktívnych materiálov sú l25I, 131I, 35S, 32P, 33P alebo 3H.
Okrem označenia protilátok, môže byť hIL-18 v biologických tekutinách stanovený kompetične, za použitia štandardov hIL-18, označených detekovateľnou látkou a neznačenej protilátky anti-hIL-18. V tomto stanovení sú biologická vzorka, označené rhIL-18 štandardy a anti-hIL-18 protilátka spojené a je určené množstvo označeného štandardu rhlL-18, viazaného ku neznačenej protilátke. Množstvo hIL-18 v biologickej vzorke je nepriamo úmerné množstvu označeného štandardu rhIL-18, viazanému na anti-hIL-18 protilátku.
Protilátky podľa tohto vynálezu a ich časti sú s výhodou schopné neutralizácie aktivity hIL-18, ako in vivo, tak in vitro. V súlade s tým môžu byť protilátky podľa tohto vynálezu a ich časti použité na inhibíciu aktivity hIL-18, napr. v bunkovej kultúre, obsahujúcej hIL-18, v ľudskom subjekte alebo v iných cicavčích subjektoch, ktoré majú IL-18, s ktorou protilátka podľa tohto vynálezu krížovo reaguje. V jednom uskutočnení poskytuje tento vynález spôsob inhibície aktivity IL-18, zahrnujúci kontakt IL-18 s protilátkou podľa tohto vynálezu alebo s jej časťou, čím dôjde k inhibícii aktivity IL-18. IL-18 je s výhodou ľudským IL-18. Napríklad, k bunkovej kultúre, skutočne alebo domnelo obsahujúcej hIL-18, môže byť pridaná protilátka podľa tohto vynálezu alebo jej časť, aby bola inhibovaná aktivita IL-18 v tejto kultúre.
V inom uskutočnení poskytuje tento vynález spôsob inhibície aktivity IL18 v subjekte, ktorý je postihnutý poruchou, na ktorej sa aktivita IL-18 škodlivo podiela. Tento vynález poskytuje subjektom, trpiacim takýmito poruchami, spôsoby na inhibovanie aktivity IL-18 v týchto subjektoch, pričom tento spôsob obsahuje podanie protilátky podľa tohto vynálezu alebo jej časti subjektu, takže je inhibovaná aktivita IL-18 v tomto subjekte. Je výhodné, keď IL-18 je ľudským IL-18 a subjektom je človek. V inom prípade môže byť subjektom cicavec, ktorý vylučuje IL-18, s ktorým protilátka podľa tohto vynálezu krížovo reaguje. Ešte ďalej môže byť subjektom cicavec, do ktorého bol zavedený hIL-18 (napríklad, podaním hIL-18 alebo expresiou hIL-18 transgénom). Protilátka podľa tohto vynálezu môže byť ľudskému subjektu podaná na liečebné účely. Okrem toho, protilátka podľa tohto vynálezu môže byť podaná inému než ľud34 skému cicavcovi, ktorý vylučuje IL-18, s ktorým táto protilátka krížovo reaguje, na veterinárne účely alebo ako živočišnému modelu ľudského ochorenia. Čo sa týka posledne menovaného, tieto živočíšne modely môžu byť použiteľné na vyhodnotenie terapeutickej účinnosti protilátok podľa tohto vynálezu (napr., testovanie dávok a časové úseky podávania).
Zvláštným živočíšnym modelom na ovplyvňovanie aktivity IL-18 v živočíchovi je NOD-SCID myš, ktorej boli transplantované ľudské mononukleárne krvné bunky. Potom, dva až štyri týždne po transplantácii (ako je merané podľa titru ľudského IgG v sére) je myši injikovaný LPS (lipopolysacharid). O štyri až šesť hodín neskôr sú stanovené titre ľudského gamainterferónu, indukovaného LPS, v sére. Účinnosť (sila) anti-IL-protilátok (napríklad, protilátok, neutralizujúcich IL-18) je určená injikovaním protilátok (ip) jeden deň pred indukciou LPS, nasledovanom monitorovaním zníženia titru gama-interferónu v sére pokusného zvieraťa (funkcia aktivity IL-18 in vivo), v porovnaní s kontrolami (viď, napríklad, Holmes et al., Hybridoma, 19: 363 až 367 (2000).
Tu používaný termín „poruchy, v ktorej sa škodlivo zúčastňuje aktivita IL-18“ sa týka tých chorôb a ostatných porúch, u ktorých bolo zistené, že prítomnosť IL-18 v subjekte, ktorý trpí touto poruchou, bola zodpovedná alebo je v podozrení, že je zodpovedná za patofyziológiu tejto poruchy alebo je faktorom, ktorý zodpovedá za zhoršenie tejto poruchy. V súhlase s tým, porucha, pri ktorej sa aktivita IL-18 škodlivo zúčastňuje, je taká porucha, u ktorej sa očakáva, že inhibícia aktivity IL-18 zmierni symptómy a/alebo postup poruchy. Takéto poruchy môžu byť dokázané, napríklad, zvýšením koncentrácie IL-18 v biologickej tekutine subjektu, trpiaceho touto poruchou (napr., zvýšením koncentrácie IL-18 v sére, plazme, synoviálnej tekutine apod. v subjekte), ktorá môže byť detekovaná, napríklad, použitím anti-IL-18 protilátky, ako je opísané vyššie.
Neobmedzujúce príklady porúch, ktoré môžu byť liečené protilátkami podľa tohto vynálezu zahrnujú tie poruchy, ktoré sú diskutované vo vyššie uvedenom odseku, týkajúcom sa farmaceutických prostriedkov protilátok podľa tohto vynálezu.
Iné varianty tohto vynálezu budú zrejmé z nasledujúcich príkladov, ktoré nie sú uvedené ako obmedzenia.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Predkladaný vynález všeobecne používa, pokiaľ nie je uvedené inak, konvenčné spôsoby chémie, molekulárnej biológie, technológie rekombinantnej DNA, PCR technológie, imunológie (zvlášť, napríklad, technológie protilátok) a ľubovoľných bunkových kultúr alebo správania laboratórnych zvierat, ktoré sú v odbore známe a ktoré sú podrobne opísané v literatúre. Viď napríklad Sambrook, Fritsch a Maniatis, Molecular Cloning: Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); DNA Cloning, sv. 1 a 2, (D. N. Glover, Ed. 1985) ; Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, Ed. 1984) ; PCR Handbook Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry, Beaucage, vyd. John Wiley & Sons (1999) (Editor) ; Oxford Handbook of Nucleic Acid Structure, Neidle, Ed., Oxford Univ Press (1999) ; PCR Protocols : A Guide to Methods and Applications, Innis et al., Academic Press (1990) ; PCR Essential Techniques : EssentialTechniques, Búrke, Ed., John Wiley & Son Ltd (1996) ; The PCR Technique : RT-PCR, Siebert, Ed., Eaton Pub. Čo. (1998) ; Quantitative PCR Protocols, Kochanowski et al., Eds., Humana Press (1999) ; Clinical Applications of PCR, Lo, Ed., Humana Press (1998) ; Antibody Engineering Protocols (Methods in Molecular Biology), 510, Paul, S., Humana Pr (1996) ; Antibody Engineering : A Practical Approach (Practical Approach Šerieš, 169), McCafferty, Ed., Irl Pr (1996) ; Antibodies : A Laboratory Manual, Harlow etal., C. S. H. L. Press, Pub. (1999) ; Current Protocols in Molecular Biology, ed.Ausubel et al., John Wiley & Sons (1992) ; Large-Scale Mammalian Celí CultureTechnology, Lubiniecki, A., Ed., Marcel Dekker, Pub., (1990) a Manipuilating theMouse Embryo, Hogan et ak, C. S. H. L. Press, Pub (1994).
Pokiaľ nie je uvedené inak, boli v príkladoch použité vyššie uvedené materiály a postupy.
Príklad 1
Izolácia anti-IL-18 protilátok
Protilátky voči hIL-18 boli izolované skríninkom separovaných scFv fágových zobrazovacích knižníc, pripravených použitím ľudských VL a VH cDNA z mRNA, odvodenej od ľudských B buniek (napr. mandle a slezina). Zostrojenie tejto knižnice a spôsoby selekcie sú opísané vo Vaughan et al. (1996) Náture Biotech. 14: 309 až 314.
Tieto knižnice boli skrínované použitím buď celej dĺžky ľudskej IL-18 (SEQ ID NO: 61), peptidového epitopu IL-18 (SEQ ID NO: 1 až 3) alebo skupiny prekrývajúcich sa peptidov. Reprezentujúcich IL-18 (ktorého sekvencia je prezentovaná v tabuľke 5; SEQ ID NO: 6o). IL-18 špecifické protilátky boli selektované nanesením antigénu na steny skúmaviek štandardnými spôsobmi (Marks et al., (1991) J. Mol. Biol. 222: 581 až 597). Knižnice scFv boli skrínované použitím buď IL-18, peptidového epitopu od IL-18 alebo skupinou peptidov IL-18, na generáciu dokázateľného počtu prípadov špecifickej väzby IL-18. Selektovali sa niektoré odlišné typy klonov, zistené pomocou digescie reštrikčnými enzýmami a potvrdené sekvenovaním DNA.
Na identifikáciu protilátok IL-18, ktoré prednostne viažu buď celú dĺžku IL-18 alebo jeho reprezentatívny peptid, bol titrovaný supernatant, obsahujúci scFv na biotínu viazanom na IL-18 pomocou ELISA. Súčasne boli stanovené väzbové charakteristiky.
Získali sa dve jednoreťazcové anti-IL-18 protilátky, jedna nazvaná 2E1, izolovaná nezávisle pomocou peptidového epitopu a skupiny peptidov a druhá anti-IL-18 protilátka, nazvaná LT28, izolovaná pomocou celej dĺžky IL-18. Tieto rodičovské anti-IL-18 protilátky boli selektované na ďalšie štúdium a modifikácie.
Príklad 2
Afinitná zrelosť anti-18 protilátok
Jednoreťazcová verzia Fv protilátky 2E1, s identifikovanou IL-189 väz bovou aktivitou a sekvencia ľahkého reťazca a ťažkého reťazca, uvedené v ta buľke 6, boli ďalej modifikované na zlepšenie neutralizácie aktivity IL-18.
Tabuľka 6. Sekvencia jednoreťazcovej anti-IL-18 protilátky 2E1
2E1 ťažký reťazec (SEQ ID NO : 18)
CDR1 (SEQ ID NO : 9) QVQLVQSGAEVKKPGASMKVSCKTSGYTFTGYYIHWVRQAHGOGFEWI
CDR2 (SEQ ID NO : 10) CDR3 (SEQ ID NO : 11)
GRLNPTTGDANFAEKFQGRVALTRDTSISTAYLQLDSLKSDDTAVYYCAGKEGAWGQGTLVTVSS
2E1 ľahký reťazec (SEQ IDNO: 19)
CDR1 (SEQ IDNO : 12) CDR2 (SEQ ID NO : 13) SSELTODPAVSVALGQTVRITCOGDSLRHFYPNWYQQKPGOAPVLVIYGKNNRPS
CDR3 (SEQ ID NO : 14) GIPDRFSGSGSGNTGSLTITGAOAEDEADYYCGSRDSSGIHWFGGGTKVTVLG
Anti-IL-18 protilátka 2E1 bola nezávisle selektovaná použitím IL-18 peptidu a skupiny sekvenovaných, prekrývajúcich sa peptidov, reprezentujúcich IL-18 (viď tabuľku 6).
Špecifické aminokyselinové zvyšky variabilnej oblasti ťažkého reťazca, vybrané na mutagenézu, sú sumarizované v tabuľke 7. S ohľadom na oblasť ťažkého reťazca, boli substitúcie jednotlivých aminokyselín testované zvlášť na pozíciách H30, H31, H32, H33 a H35 u CDR1, pozíciách H, H52a, H53, H54, H56 a H58 uCDR2 a H95, H96, H97 a H98 od CDR3.
S ohľadom na aminokyselinové zvyšky ľahkého reťazca, vybrané na mutagenézu, boli jednotlivé aminokyselinové substitúcie testované na pozíciách L30, L31, L32 a L34 u CDR1, L50, L52, L53 a L55 u CDR2 a pozíciách L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L95b, L96 a L97 u CDR3.
Tabuľka 7. Substitúcie aminokyselín zavedené v ťažkom reťazci 2E1
Mutácie v ťažkom reťazci
CDR/Kabat substituovaný zvyšok
Pozícia
CDR1
H30 A, R, N, D, C, G, H, I, F, P, S alebo V
H31 A, C, H, S, T, alebo Y
H32 R, N, C, H, P, S alebo T
H33 N, D, C, Q, H, L, M, F, S neboV
H35 N, D, L alebo F
CDR2
H52 T
H52a R Q, L, S, T alebo W
H53 A, R, N, L, P, S alebo Y
H54 A, R, N, D, Q, L, K, M, P, S alebo Y
H56 A, R, N, C, G, H, I, L alebo F
H58 A, R, Q, E, H, I, L, K, M, F, S, T, Y, P, S, T, W, Y alebo V
CDR3
H95 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
H96 A, R, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
H97 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
H98 R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
Tabuľka 8. Aminokyselinové substitúcie zavedené do ľahkého reťazca 2E1
Mutácie v ľahkom reťazci
CDR/Kabat
Pozícia
CDR1
L30
L31
L32
L34 A, R, N,
CDR2 substituované zvyšky
N , D, C, G, I, L, S, W alebo Y
R, N, D, C, G, H, I, L, P, S, T alebo Y
R, N, D, E, G, I, L, P, S, T aleboV , E, H, I, L, K, M, F, P, S, T, Y alebo V
L50
L52
L53
L55
CDR3
L89
L90
L91
L92
L93
L94
L95
L95a
L95b
L96
L97
A, N, I, L, F, P, S, W, Y aleboV A, R, D, E, H, I, L, M, F, P, S, T aleboV A, R, C, I, L, K, M, P, S aleboT A, R, N, D, C, G, H, I, L, S, T alebo Y
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, Y, V, H, P, W alebo C R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, V, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, H, P, W alebo C
Substitúcie boli zavedené štandardným spôsobom (napr., ako je opísané v Taylor et al., Nucleic Acids Res. 13: 8764 až 8758 (1985); Nakamaye et al., Nucleic Acids Res. 14: 9679 až 9689 (1986) a Olsen et al., Methods in Enzymology, 2\T. 189 (1993)). V stručnosti, boli syntezované oligonukleotidy, de41 generované pre daný kodón, v každej pozícii, ktorá mala byť mutovaná. Bol pripravený templát jednovláknovej DNA z originálneho plazmidu, obsahujúceho jednoreťazcovú verziu Fv od protilátkového 2E1 génu. Sekvencia nukleovej kyseliny ťažkého a ľahkého reťazca rodičovskej 2E1 protilátky je uvedená v SEQ ID NOS: 62 a 94. Tieto mutantné oligonukleotidy boli potom použité na tvorbu komplementárneho DNA vlákna a následne dvojvláknového plazmidu, teda na degeneráciu alebo rôzne mutácie v danom kodóne protilátky. Obzvlášť bola zmenená CDR3 oblasť ťažkého aj ľahkého reťazca 2E1, použitím QuikChange Kit (Stratagene) podľa návodu výrobcu.
Od každej mutačnej reakcie bol potom sekvenovaný reprezentatívny počet klonov (t.j., 7 až 36 klonov), klony, ktoré predstavovali zmenu voči sekvencii rodičovskej jenovláknovej protilátky 2E1, boli exprimované v baktérii a vyčistené pre ďalšie in vivo a in vitro testovanie, ako je opísané ďalej.
Pri inom skríninku, používajúcom úplnú dĺžku ligandu IL-1 8, bola identifikovaná kvôli ďalšiemu zlepšeniu, použitím afinitnej zrelosti, druhá anti-IL-18 protilátka. Zvlášť bola, použitím vyššie uvedeného spôsobu, modifikovaná protilátka LT28, ktorá má sekvencie ťažkého a ľahkého reťazca uvedené v tabuľke 9 (a nukleotidové sekvencie v SEQ ID NO: 66 a 68).
Tabuľka 9: Sekvencie jednoreťazcovej anti-IL-18 protilátky LT28
LT28 ťažký reťazec _(SEQ ID NO;28)_
CDR1 (SEQ ID NO : 20) CDR2 (SEQ ID NO : 21) LVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKG
CDR3 (SEQ ID NO : 22) RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARPDPDYDFDYWGRGTMVTVSS
LT28 ľahký reťazec (SEQ ID NO : 29)
CDR1 (SEQ ID NO : 23) CDR2 (SEQ ID NO : 24)
QSVLTOPPSASGTPGORVTISCSGSSSNIGINAVNWYOOLPGTAPKLLIYGNDQRPS
CDR3 (SEQ ID NO : 25) GVPDRFSGSKSGTSASLAISGLOSEDEAPYYCAAWDDSLSGPVFGGGTKLTVLG
S ohľadom na oblasť ťažkého reťazca, boli aminokyselinové substitúcie zavedené na pozíciách H31, H32, H33 a H35 u CDR1, pozíciách H50, H51, H52, H52a, H53, H54, H56 a H58 od CDR2 a H95, H96, H97, H98, H99, H100, H 101a, H101 a Hl02 od CDR3.
S ohľadom na zvyšky ľahkého reťazca, vybrané na mutáciu, boli aminokyselinové substitúcie zavedené na pozíciách L30, L31, L32, L34 u CDR1, L50, L52, L53, L55 u CDR2 a pozíciách L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L95b, L96, L97.
Tabuľka 10: Aminokyselinové substitúcie v ťažkom reťazci, zavedené do LT28 substituovaný zvyšok
CDR/Kabat
Pozícia
CDR1
H31
H32
H33
H35
CDR2
H50
H51
H52
H52a
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
Η53
Η54
Η56
Η58
CDR3
Η95
Η96
Η97
Η98
Η99
Η100
HlOOa
H1O1
H102
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W alebo C
Tabuľka 11: Aminokyselinové substitúcie v ľahkom reťazci, zavedené do LT28
Mutácie v ľahkom reťazci
CDR / Pozícia substituovaný zvyšok
CDR1
L30 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L31 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L32 R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C, G
L34 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
CDR2
L50 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, C
L52 A, R, E, S, Y, V, H, P, W, C
L53 A, R, E, S, Y, V, H, P, W, C, N
L55 A, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
CDR3
L89 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L90 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L91 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L92 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L93 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L94 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L95 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L95a A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L95b A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L96 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
L97 A, R, E, Q, S, Y, V, H, P, W, C
Substitúcie boli zavedené, ako je opísané vyššie. Pre každú mutačnú reakciu bol potom sekvenovaný reprezentatívny počet klonov, a tie, ktoré predstavovali zmenu voči sekvencii rodičovskej jednoreťazcovej protilátky LT28, boli exprimované v baktérii a purifikované na ďalšie testovanie, ako je opísané nižšie.
Príklad 3
Väzbová aktivita ľudských protilátok voči IL-18
Väzbové interakcie v reálnom čase medzi ligandom (biotinylovaný ľudský IL-18 (rHIL-18), imobilizovaný na biosenzorovej matrici) a analyzovaná látka (protilátky v roztoku) boli merané povrchovou plazmónovou rezonanciou (SPR), použitím BIAcore systému (Pharmacia Biosensor, Piscataway, NY). Tento spôsob využíva optických vlastností SPR na detekciu zmien v koncentrácii proteínu v dextránovej biosenzorovej matrici. Proteíny sú kovalentne viazané dextránovou matricou v známych koncentráciách. Protilátky sú injikované cez dextránovú matricu a špecifická väzba medzi injikovanými protilátkami a imobilizovaným ligandom má za výsledok zvýšenie koncentrácie proteínu v matrici a výsledné zvýšenie SPR signálu. Zmeny v SPR signálu sú zaznamenávané ako rezonančné jednotky (RU) a sú zobrazované vzhľadom na čas na y osi senzorogramu.
Na uľahčenie imobilizácie biotinylovaného rhIL-18 na matricu biosenzoru bol kovalentne naviazaný streptavidín cez voľné amínové skupiny na dextrá45 novú matricu pomocou prvej aktivácie karboxylových skupín na matricu s 100 mM N-hydroxysukcínimidu (NHS) a 400 mM N-etyl-N'-(3dietyl(amino)propyl)karbodiimid hydrochloridu (EDC). Potom sa injikuje streptavidín do aktivovanej matrice. 25 μΐ streptavidínu (25 pg/ml) zriedeného v acetáte sodnom, pH 4,5, sa injikuje priamo do aktivovaného biosenzoru a voľné amíny proteinu sa priamo naviažu na aktivované karboxylové skupiny. Nezreagované EDC-estery matrice sa deaktivujú injekciou 1 M etanolamínu. Imobilizovaný streptavidín viazaný na biosenzor je komerčne dostupný (Pharmacia BR-1000-16, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NY).
Biotinylovaný rhIL-18 bol pripravený najprv rozpustením 5,0 mg biotínu (N-hydroxysukcínimid ester kyseliny D-biotinyl-e-aminokaprónovej; Boehringer Mannheim Cat., No. 1 008 960) v 500 μΐ dimetylsulfoxidu, aby sa dosiahla koncentrácia 10 mg/ml roztoku. Desať μΐ biotínu sa pridalo na ml rhIL-18 (pri 2,65 mg/ml) v molárnom pomere 2:1 biotínu ku rhIL-18. Reakčná zmes sa potom opatrne miešala a dve hodiny inkubovala pri teplote miestnosti v tme. Kolóna PD-10 sa naplnila Sephadexom G-25M (Pharmacia Catalog No. 17-0 85101), ekvilibrovala sa s 25 ml chladného PBS a aplikovali sa na ňu 2 ml rhlL18-biotínu. Kolóna sa premyla 10 x 1 ml chladného PBS. Frakcie sa zozbierali a merali pri OD280 (1,0 OD = 1,25 mg/ml). Zodpovedajúce frakcie sa spojili a uchovávali pri -80 °C do použitia.
Na imobilizáciu na matrici prostredníctvom streptavidínu bol biotinylovaný rhIL-18 rozpustený v PBS elučnom pufry (Gibco Cat. No. 14 190-144, Gibco BRL, Grand Island, NY), obsahujúcom 0,05% (BIAcore) zmáčadlo P20 (Pharmacia BR-1000-54, Pharmacia Biosensor, Piscataway, NJ). Na určenie kapacity väzby rhIL-18-špecifických protilátok k imobilizovanému rhIL-18 bol vykonaný nasledujúci väzbový pokus. Alikvóty biotinylovaného rhIL-18 (25 nM; alikvóty po 10 μΐ) sa naniesli na dextránovú matricu s naviazaným streptavidínom pri rýchlosti toku 5 μΙ/min. Pred injekciou proteinu a okamžite po nej, začal celou prietokovou bunkou pretekať prúd PBS. Čistý rozdiel v signáli medzi blankovou hodnotou a hodnotou približne 30 sekúnd po skončení nanášania biotinylovaného rhIL-18 bol vzatý ako väzbová hodnota. Merala sa priama väzba rhIL-18 špecifickej protilátky na imobilizovaný biotinylovaný rhIL-18. Pro46 tilátky (20 pg/ml) sa rozpustili v PBS elučnom pufry a 25 μΐ alikvóty sa naniesli na imobilizovanú proteínovú matricu pri prietoku 5 μΙ/min. Pred nanesením protilátok a okamžite po ňom pretekal každou prietokovou bunkou samotný PBS pufer. Rozdiel medzi signálom blankovej hodnoty a signálom po nanesení protilátky bol vzatý ako reprezentatívny pre väzbovú hodnotu konkrétnej vzorky. Pred nanesením ďalšej vzorky boli matrice biosenzora regenerované pomocou 100 mM HCI. Na určenie rýchlostnej konštanty uvolňovania (KOff), rýchlostnej konštanty naviazania (Kon), asociačnej konštanty (Ka) a disociačnej konštanty (K<j) sa použil Software kinetického hodnotenia BIAcore (verzia 2.1)
Reprezentatívne výsledky väzby zlepšených kandidátských anti-IL-18 protilátok na biotinylovaný rhIL-18 v porovnaní s rodičovskými protilátkami 2E1 a LT28 a myšími protilátkami ako kontrolou sú uvedené nižšie v tabuľke 12. Na porovnanie sú tiež zahrnuté IC50 hodnoty neutralizačných testov, založených na bunkách, ktoré sú opísané v príklade 4. Všetky klony boli pripravené ako jednoreťazcové Fv protilátky na testovanie pomocou Biacore analýzy a testu na základe buniek, opísaného nižšie. Uvedené rodičovské klony obsahujú nemutovaný rodičovský ťažký a ľahký reťazec, zatiaľ čo jednoreťazcové mutanty obsahujú jeden rodičovský reťazec a jeden mutovaný reťazec, pričom tento mutovaný reťazec je buď ťažký (H) alebo ľahký (L), a ďalej je uvedená Kabatova poloha a povaha aminokyselinových substitúcií.
Tabuľka 12: Väzba anti-IL-18 protilátok, odvodených od 2E1 a LT28
Protilátka kloň Väzbová rýchlosť (M’s'1) Rýchlosť rozpadu (s’*) Kd (M) IC50 Hodno- ta+
2£1 rodič a mutanti
2E1 (rodič)ScFv 2,6E+3 6,42E-03 l,5E-07 3,3E-8M
2E1 (rodič)IgG 9,0E-10M
L34S l,69E-04 1,5E-8M
H53R 2,34E-03 2,5E-8M
H53Y - 1,5E-8M
H58Q - 1,6E-8M
L34S+H53R (2E1RS) 2,7E+03 6,82E-05 2,3E-08 3,0E-09M
L34S+H58Q - 1,5E-8M
L34S+H53Y - 6,7E-9M
H53R+H58Q 6,18E-05 1,2E-8M
H53Y+H58Q - 1,2E-8M
L34S+H53R+H58 Q 2,8E-9M
L34S+H53Y+H58 Q 8,0E-9M
L90C 4x
L93C 2-4x
L94P,Q alebo R 2-4x
L95R,Y 3-8x
L95bE,W 2-4x
LT28 rodič a mutanti
LT28 (rodič) l,3E+04 4,8E+04 3,9E-08 9,0E-8M
H54Q 2-3x
H58W 2-3 x
1
125-2H l,7E+05 1,1E-O4 6,2E-10 2,0E-10M
318-M l,2E+04 1,1E-O4 9,6E-09 4,0E-9M
+Niektoré hodnoty uvádzané ako násobné zlepšenie v porovnaní s rodičom.
Príklad 4
Neutralizačná aktivita anti-IL-18 protilátok
Na overenie neutralizačnej aktivity anti-ľudských IL-18 protilátok podľa tohto vynálezu sa použil test na sledovanie aktivity IL-18.
Stručne povedané tento test využíva KG1 bunky (ATCC #CCL-246, bunky kostnej drene myelogénnej leukémie), ktoré boli pestované podľa štandardného spôsobu (napr. použitím RPMI 1640 Culture Médium Gibco #21870-076; doplnené s 10 % fetálneho hovädzieho séra (BioWhittaker # 14-501 F); 2 mM Lglutamínu (Gibco #25030-081); 50 jednotiek/ml penicilínu, 50 pg/ml streptomycínu (Gibco #10 070-063), a 0,075 % hydrogénuhličitanu sodného.
Na testovanie neutralizácie IL-18 bolo 3 x 105 KG-1 buniek stimulovaných s 20 ng/ml hTNF-α šarže 19 130 132) a zmiešaných s 50 μΐ anti-IL-18 protilátky (4 x kone.) a 50 μΐ IL-18 (4 x kone. = 8 ng/ml) a inkubovaných pri 37 “C 1 hodinu alebo 16 až 20 hodín. Na určenie rozsahu neutralizácie IL-18, ktorá je funkciou rozsahu indukcie produkcie hIFN-gama, sa vykonal ELISA test, použitím komerčne dostupného Elisa Kits ( R & D #DIF00(Endogen #EHIFNG) podľa údajov výrobcu a produkcia hIFN-gama (pg/ml) sa vypočítala z kalibračnej krivky.
U všetkých štyroch mutantných protilátok, t.j., od 2E1 odvodených L34S, H53R, H53Y a H58Q, sa zistila vyššia schopnosť neutralizovať IL-18, než má rodičovská protilátka 2E1 (viď tabuľka 12). Zlepšenie hodnôt IC50, zistené použitím testu KG-1, bolo v rozsahu od 2 do 5 násobkov. Podobné zlepšené väzbové výsledky boli zistené analýzou BIAcore.
Pripravili a testovali sa rôzne kombinácie mutovaných klonov a tieto údaje sú sumarizované v tabuľke 12. Najlepší kombinovaný kloň, L34S-H53R, vykázal viac než lOnásobné zlepšenie voči rodičovskej protilátke 2E1 použitím ako testu KG-1, založeného na bunkách, tak aj použitím analýzy BIAcore. Výsledná protilátka bola označená názvom 2E1RS.
Niekoľko iných mutantných klonov odvodených od 2E1 tiež vykázalo zlepšenie účinnosti, t.j., neutralizácie IL-18, na základe testu KG-1. Mutant L95Y poskytol 5 až 8násobné zlepšenie IC50 hodnôt voči rodičovskej protilátke 2E1. Niektoré iné mutanty poskytli 2 až 3násobné zlepšenie. Boli to od 2E1 odvodené mutanty H96A, H96Q, H96S, H98S, L90C, L90W, L93C, L94P, L94Q, L94W, L95R, L95AaR, L95aW, L95bE, L95bW, L95bY, L97C a L97E.
Porovnala sa väzba 2E1 vo forme ScFv protilátky a vo forme IgG protilátky (viď obrázok 5).
Okrem toho dva mutanti odvedení od LT28 rodiča mali zlepšenú IL-18 neutralizačnú aktivitu vzhľadom na rodičovské protilátky.
Tieto výsledky dokazujú, že spôsobom a prostriedkami podľa tohto vynálezu môžu byť pripravené protilátky úplne ľudského pôvodu, ktoré neutralizujú IL-18.
Ekvivalenty
Odborníci v tejto oblasti sú alebo budú schopní použitím len rutinných experimentov získať mnohé ekvivalentné riešenia tu opísaných konkrétnych uskutočnení. Tieto riešenia sa tiež považujú za zahrnuté v nasledujúcich patentových nárokoch.
5V
SEKVENČNÁ LISTINA <110> Ghayur, Tariga kol.
<120> ... . .
PROTILÁTKY VIAŽUCE ĽUDSKY INTERLEUKIN-18, SPOSOBY ICH VYROBY A POUŽITIA <130> BBI-149 <140>
<141>
<150> 60/181,600 <151> 2000-02-10 <160> 71 <170> Patentln Ver. 2.1 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> l
Pro Leu Ehe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala 15 10 15 <210> 2 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2
Cys Pro Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala 15 10 15 <210> 3 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3
Pro Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg 15 10 <210> 4 <211> 157 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val íle Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gin Val Leu Phe íle Asp Gin Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr íle Phe íle
35 40 45
íle Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gin Pro Arg Gly Met Ala Val Thr íle
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Íle Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys íle
65 70 75 80
íle Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn íle Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp íle íle Phe Phe Gin Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys
100 105 110
Met Gin Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu íle Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser íle Met Phe Thr Val Gin Asn Glu Asp
145 150 155 <210> 5 <211> 153 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5
Ala Pro 1 Val Arg Ser Leu Asn Cys Thr Leu Arg Asp Ser Gin Gin 15 Lys
5 10
Ser Leu Val Met Ser Gly Pro Tyr Glu Leu Lys Ala Leu His Leu Gin
20 25 30
Gly Gin Asp Met Glu Gin Gin Val Val Phe Ser Met Ser Phe Val Gin
35 40 45
Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys íle Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Glu
50 55 60
Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp Lys Pro Thr Leu
65 70 75 80
Gin Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu
85 90 95
Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys íle Glu íle Asn Asn Lys Leu Glu Phe
100 105 110
Glu Ser Ala Gin Phe Pro Asn Trp Tyr íle Ser Thr Ser Gin Ala Glu
115 120 125
Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly Gin Asp íle Thr
130 135 140
Asp Phe Thr Met Gin Phe Val Ser Ser 145 150
52.
<210> 6
<211> 145
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 6
Ser Ser Lys Met Gin Ala Phe Arg íle Trp Asp Val Asn Gin Lys Thr
1 5 10 15
Phe Tyr Leu Arg Asn Asn Gin Leu Val Ala Gly Tyr Leu Gin Gly Pro
20 25 30
Asn Val Asn Leu Glu Glu Lys íle Asp Val Val Pro íle Glu Pro His
35 40 45
Ala Leu Phe Leu Gly íle His Gly Gly Lys Met Cys Leu Ser Cys Val
50 55 60
Lys Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gin Leu Glu Ala Val Asn íle Thr
65 70 75 80
Asp Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gin Asp Lys Arg Phe Ala Phe íle Arg
85 90 95
Ser Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly
100 105 110
Trp Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala Asp Gin Pro Val Ser Leu Thr
115 120 125
Asn Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val Thr Lys Phe Tyr Phe Gin Glu
130 135 140
Asp
145 <210> 7 <211> 297 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7
Cys 1 Thr Ser Arg Pro 5 His íle Thr Val Val 10 Glu Gly Glu Pro Phe 15 Tyr
Leu Lys His Cys 20 Ser Cys Ser Leu Ala 25 His Glu íle Glu Thr 30 Thr Thr
Lys Ser Trp 35 Tyr Lys Ser Ser Gly 40 Ser Gin Glu His Val 45 Glu Leu Asn
Pro Arg 50 Ser Ser Ser Arg íle 55 Ala Leu His Asp Cys 60 Val Leu Glu Phe
Trp Pro Val Glu Leu Asn Asp Thr Gly Ser Tyr Phe Phe Gin Met Lys
70 75 80
Asn Tyr Thr Gin Lys Trp Lys Leu Asn Val íle Arg Arg Asn Lys His
90 95
Ser Cys Phe Thr Glu Arg Gin Val Thr Ser Lys íle Val Glu 110 Val Lys
100 105
Lys Phe Phe Gin íle Thr Cys Glu Asn Ser Tyr Tyr Gin Thr Leu Val
115 120 125
Asn Ser Thr Ser Leú Tyr Lys Asn Cys Lys Lys Leu Leu Leu Glu Asn
130 • 135 140
Asn Lys Asn Pro Thr íle Lys Lys Asn Ala Glu Phe Glu Asp Gin Gly
145 150 155 160
Tyr Tyr Ser Cys Val His Phe Leu His His Asn Gly Lys Leu Phe Asn
165 170 175
íle Thr Lys Thr Phe Asn íle Thr íle Val Glu Asp Arg Ser Asn íle
180 185 190
Val Pro Val Leu Leu Gly Pro Lys Leu Asn His Val Ala Val Glu Leu
• 195 200 205
Gly Lys Asn Val Arg Leu Asn Cys Ser Ala Leu Leu Asn Glu Glu Asp
210 215 220
Val íle Tyr Trp Met Phe Gly Glu Glu Asn Gly Ser Asp Pro Asn íle
225 230 235 240
His Glu Glu Lys Glu Met Arg íle Met Thr Pro Glu Gly Lys Trp His
245 250 255
Ala Ser Lys Val Leu Arg íle Glu Asn íle Gly Glu Ser Asn Leu Asn
260 265 270
Val Leu Tyr Asn Cys Thr Val Ala Ser Thr Gly Gly Thr Asp Thr Lys
275 280 285
Ser Phe íle Leu Val Arg Lys Ala Asp
290 295 <210> 8 <211> 310 <212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 8 Cys Lys 1 Glu Arg Glu 5 Glu Lys íle íle Leu 10 Val Ser Ser Ala Asn 15 Glu
íle Asp Val Arg 20 Pro Cys Pro Leu Asn 25 Pro Asn Glu His Lys 30 Gly Thr
íle Thr Trp Tyr 35 Lys Asp Asp Ser 40 Lys Thr Pro Val Ser 45 Thr Glu Gin
Ala Ser Arg íle His Gin His Lys Glu Lys Leu Trp Phe Val Pro Ala
55 60
Lys Val Glu Asp Ser Gly His Tyr Tyr Cys Val Val Arg Asn Ser Ser
51/
70 75 80
Tyr Cys Leu Arg íle 85 Lys íle Ser Ala Lys Phe Val Glu Asn Glu Pro
90 95
Asn Leu Cys Tyr Asn Ala Gin Ala íle Phe Lys Gin Lys Leu Pro Val
100 105 110
Ala Gly Asp Gly Gly Leu Val Cys Pro Tyr Met Glu Phe Phe Lys Asn
115 120 125
Glu Asn Asn Glu Leu Pro Lys Leu Gin Trp Tyr Lys Asp Cys Lys Pro
130 135 140
Leu Leu Leu Asp Äsn íle His Phe Ser Gly Val Lys Asp Arg Leu íle
145 150 155 160
Val Met Asn Val Ala Glu Lys His Arg Gly Asn Tyr Thr Cys His Ala
165 170 175
Ser Tyr Thr Tyr Leu Gly Lys Gin Tyr Pro íle Thr Arg Val íle Glu
180 185 190
Phe íle Thr Leu Glu Glu Asn Lys Pro Thr Arg Pro Val íle Val Ser
195 200 205
Pro Ala Asn Glu Thr Met Glu Val Asp Leu Gly Ser Gin íle Gin Leu
210 215 220
íle Cys Asn Val Thr Gly Gin Leu Ser Asp íle Ala Tyr Trp Lys Trp
225 230 235 240
Asn Gly Ser Val íle Asp Glu Asp Asp Pro Val Leu Gly Glu Asp Tyr
245 250 255
Tyr Ser Val Glu Asn Pro Ala Asn Lys Arg Arg Ser Thr Leu íle Thr
260 265 270
Val Leu Asn íle Ser Glu íle Glu Ser Arg Phe Tyr Lys His Pro Phe
275 290 2S5
Thr Cys Phe Ala Lys Asn Thr His Gly íle Asp Ala Ala Tyr íle Gin
290 295 300
Leu íle Tyr Pro Val Thr 305 310 <210> 9 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9
Thr Gly Tyr Tyr íle His 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10
Gly Arg Leu Asn Pro Thr Thr Gly Asp Ala Asn Phe Ala Glu Lys Phe 15 10 15
Gin <210> 11 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11
Lys Glu Gly Ala 1 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12
Gin Gly Asp Ser Leu Arg His Phe Tyr Pro Asn 15 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser 1 5 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14
Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly íle His Val Val 15 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15
Gin Gly Asp Ser Leu Arg His Phe Tyr Ser Asn 15 10 <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16
Gly Arg Leu Asn Pro Arg Thr Gly Asp Ala Asn Phe Ala Glu Lys Phe 15 10 15
Gin <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17
Gly Arg Leu Asn Pro Arg Thr Gly Asp Ala Gin Phe Ala Glu Lys Phe 15 10 15
Gin <210> 18 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18
Gin 1 Val Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr íle His Trp Val Arg Gin Ala His Gly. Gin Gly Phe Glu Trp íle
35 40 45
Gly Arg Leu Asn Pro Thr Thr Gly Asp Ala Asn Phe Ala Glu Lys Phe
50 55 60
Gin Gly Arg Val Ala Leu Thr Arg Asp Thr Ser íle Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Leu Asp Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Lys Glu Gly Ala Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser <210> 19 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19
Ser 1 Ser Glu Leu Thr Gin 5 Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin
10 15
Thr Val Arg íle Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg His Phe Tyr Pro
20 25 30
Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val íle Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly íle Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Thr Gly 'Ser Leu Thr íle Thr Gly Ala Gin Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly íle His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 <210> 20 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20
Ser Tyr Ala Met 1 <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21
Ala íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22
Asp Asp Asp Asp Tyr Asp Phe Asp Tyr 1 5 <210> 23 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens
5$ <400> 23
Ser Gly Ser Ser Ser Asn íle Gly íle Asn Ala Val Asn 15 10 <210> 24 <211> 6 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24
Gly Asn Asp Gin Arg Pro 1 5 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val 15 10 <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26
Ala íle Ser Gly Ser Gin Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27
Ala íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Trp Tyr Ala Asp Ser Val Lys 15 10 15
Gly <210> 28 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28
Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 15 10 15
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
35 40 45
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr íle Ser Arg Asp Asn
50 55 60
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
65 70 75 80
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Asp Asp Tyr Asp Phe Asp
85 90 95
Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
100 105 <210> 29 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 29
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin
1 5 10 15
Arg Val Thr íle Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn íle Gly íle Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
íle Tyr Gly Asn Asp Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala íle Ser Gly Leu Gin
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 30
<211> 235
<212>PRT •
<213> Homo í sapiens
<400> 30
Leu Val Gin Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
1 5 10 15
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly
20 25 30
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
40 45 £ν
Tyr Tyr 50 Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg 55 Phe Thr íle 60 Ser Arg Asp Asn
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
65 70 75 80
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Asp Asp Asp Tyr Asp Phe Asp
85 90 95
Tyr Trp Gly Arg Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gin Ser Val Leu
115 120 125
Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gin Arg Val Thr íle
130 135 140
Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn íle Gly íle Asn Ala Val Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu íle Tyr Gly Asn
165 170 175
Asp Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
180 1Θ5 190
Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala íle Ser Gly Leu Gin Ser Glu Asp Glu
195 200 205
Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Pro Val
210 215 220
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
225 230 235 <210> 31 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val íle Arg Asn 15 10 <210> 32 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32
Glu Ser Lys Leu Ser Val íle Arg Asn Leu Asn Asp Gin Val 1 5 10 <210> 33 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33
Val íle Arg Asn Leu Asn Asp Gin Val Leu Phe íle Asp Gin 15 10 <210> 34 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34
Asn Asp Gin Val Leu Phe íle Asp Gin Gly Asn Arg Pro Leu 15 10 <210> 35 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35
Phe íle Asp Gin Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp Met Thr 15 10 <210> 36 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36
Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg 15 10 <210> 37 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37
Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg 15 10 <210> 38 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38
Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr íle Phe íle íle 15 10 <210> 39 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens
ÍZ.
<400> 39
Asn Ala Pro Arg Thr íle Phe íle íle Ser Met Tyr Lys Asp 15 10 <210> 40 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 íle Phe íle íle Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gin Pro Arg Gly 15 10 <210> 41 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41
Met Tyr Lys Asp Ser Gin Pro Arg Gly Met Ala Val Thr íle 15 10 <210> 42 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42
Gin Pro Arg Gly Met Ala Val Thr íle Ser Val Lys Cys Glu 15 10 <210> 43 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43
Ala Val Thr íle Ser Val Lys Cys Glu Lys íle Ser Thr Leu 15 10 <210> 44 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44
Val Lys Cys Glu Lys íle Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys 15 10 <400> 45 <210> 45 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens íle Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys íle íle Ser Phe Lys 15 10 <210> 46 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46
Cys Glu Asn Lys íle íle Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro 15 10 <210> 47 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 47 íle Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn íle Lys Asp 15 10 <210> 48 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48
Met Asn Pro Pro Asp Asn íle Lys Asp Thr Lys Ser Asp íle 15 10 <210> 49 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49
Asn íle Lys Asp Thr Lys Ser Asp íle íle Phe Phe Gin Arg 15 10 <210> 50 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50
Lys Ser Asp íle íle Phe Phe Gin Arg Ser Val Pro Gly His 15 10 <210> 51 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51
Phe Phe Gin Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys Met Gin 15 10 ί'ι <210> 52 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52
Val Pro Gly His Asp Asn Lys Met Gin Phe Glu Ser Ser Šer 15 10 <210> 53 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54
Asn Lys Met Gin Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe
1
<210> 54
<211> 14
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu Lys 15 10 <210> 55 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55
Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe 15 10 <210> 56 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56
Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu íle Leu Lys 15 10 <210> 57 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57
Arg Asp Leu Phe Lys Leu íle Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu 15 10
<210> 58 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58
Leu íle Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser íle 15 10 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59
Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser íle Met Phe Thr Val Gin 15 10 <210> 60 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60
Asp Arg Ser íle Met Phe Thr Val Gin Asn Glu Asp 15 10 <210> 61 <211> 157 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61
Tyr 1 Phe Gly Lys Leu 5 Glu Ser Lys Leu Ser 10 Val íle Arg Asn Leu 15 Asn
Asp Gin Val Leu 20 Phe íle Asp Gin Gly 25 Asn Arg Pro Leu Phe 30 Glu Asp
Met Thr Asp 35 Ser Asp Cys Arg Asp 40 Asn Ala Pro Arg Thr 45 íle Phe íle
íle Ser 50 Met Tyr Lys Asp Ser 55 Gin Pro Arg Gly Met 60 Ala Val Thr íle
Ser 65 Val Lys Cys Glu Lys 70 íle Ser Thr Leu Ser 75 Cys Glu Asn Lys íle 80
íle Ser Phe Lys Glu 85 Met Asn Pro Pro Asp 90 Asn íle Lys Asp Thr 95 Lys
Ser Asp íle íle 100 Phe Phe Gin Arg Ser 105 Val Pro Gly His Asp 110 Asn Lys
Met Gin Phe 115 Glu Ser Ser Ser Tyr 120 Glu Gly Tyr Phe Leu 125 Ala Cys Glu
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu íle Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu 14 0
130 135
Gly Asp Arg Ser íle Met Phe Thr Val Gin Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 62 <211> 341 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (1) ..(339) <400> 62
cag gtc cag ctg gtg cag tct ggg get gag gtg aag aag cct ggg Gly 15 gcc Ala
Gin Val 1 Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu Val 10 Lys Lys Pro
tcg atg aaa gtc tcc tgt aag act tct gga tac acc ttc acc ggc tat
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
tat atc cac tgg gtg ega cag gcc cct gga cag gga ttc gag tgg ata
Tyr íle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Phe Glu Trp íle
35 40 45
gga cgg ctc aac ccc acc act ggt gac gca aat ttt gca gaa aag ttt
Gly Arg Leu Asn Pro Thr Thr Gly Asp Ala Asn Phe Ala Glu Lys Phe
50 55 60
cag ggc agg gtc gcc ctg acc aga gac acg tcc atc agc aca gcc tat
Gin Gly Arg Val Ala Leu Thr Arg Asp Thr Ser íle Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
tta caa cta gac agc ctc aaa tct gac gac acg gcc gta tat tat tgt
Leu Gin Leu Asp Ser Leu Lys Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcg gga aaa gag ggt gcc tgg ggc cag ggc acc ctg gtc acc gtc tcg
Ala Gly Lys Glu Gly Ala Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
144
192
240
288
336 agt gg Ser
341 <210> 63 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Met Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr 20 25 30 (,Ί-
Tyr íle His 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Gin Gly Phe 45 Glu Trp íle
Gly Arg 50 Leu Asn Pro Thr Thr 55 Gly Asp Ala Asn Phe 60 Ala Glu Lys Phe
Gin 65 Gly Arg Val Ala Leu 70 Thr Arg Asp Thr Ser 75 íle Ser Thr Ala Tyr 80
Leu Gin Leu Asp Ser 85 Leu Lys Ser Asp Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr 95 Cys
Ala Gly Lys Glu 100 Gly Ala Trp Gly Gin 105 Gly Thr Leu Val Thr 110 Val Ser
Ser
<210> 64 <211> 327 <212> DNA <213> Homo í äapiens
<220> Z
<221> CDS <222> (1).. (327) 7
<400> 64
tct tct gag ctg act cag gac cct get gtg tct gtg gcc ttg gga cag 48
Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin
1 5 10 15
aca gtc agg atc aca tgc caa gga gac age ctc aga cac ttt tat cca 96
Thr Val Arg íle Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg His Phe Tyr Pro
20 25 30
aac tgg tac cag cag aag cca gga cag gcc cct gta ctt gtc atc tat 144
Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val íle Tyr
35 40 45
ggt aaa aac aat cgg ccc tca ggg atc cca gac ega ttc tct ggc tcc 192
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly íle Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
ggc tca gga aac aca ggt tcc ttg acc atc act ggg gcc cag gcg gaa 240
Gly Ser Gly Asn Thr Gly Ser Leu Thr íle Thr Gly Ala Gin Ala Glu
65 70 75 80
gat gag get gac tat tac tgt ggc tcc cgg gac age agt ggt atc cat 288
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly íle His
85 90 95
gtg gta ttc ggc gga ggg a cc aag gtc acc gtc cta ggt 327
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 <210> 65 <211> 109 <212> PRT
ÍS <213> Homo sapiens <400> 65
Ser Ser Glu Leu Thr Gin Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gin
1 5 10 15
Thr Val Arg íle Thr Cys Gin Gly Asp Ser Leu Arg His Phe Tyr Pro
20 25 30
Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Val Leu Val íle Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly íle Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Asn Thr Gly Ser Leu Thr íle Thr Gly Ala Gin Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Arg Asp Ser Ser Gly íle His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 66 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapiens <220>
<221> CDS <222> (1)..(354) <400> 66
gag gtg cag ctg Glu Val Gin Leu 1 ttg Leu 5 gag tet ggg gga Gly Gly ggc ttg gta cag cct ggg ggg 48
Glu Ser Gly 10 Leu Val Gin Pro Gly 15 Gly
tcc ctg aga cte tcc tgt gca gcc tet gga ttc acc ttt age age tat 96
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
gcc atg age tgg gtc ege cag get cca ggg aag ggg ctg gag tgg gtc 144
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
tca get att agt ggt agt ggt ggt age aca tac tac gca gac tcc gtg 192
Ser Ala íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
aag ggc cgg ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag aac acg ctg tat 240
Lys Gly Arg Phe Thr íle Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
ctg caa atg aac age ctg aga gcc gag gac acg gcc gtg tat tac tgt 288
Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
gcg aga gat gac gat gac tac gac ttt gac tac tgg ggc cgg ggg aca 336
Ala Arg Asp Asp Asp Asp Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
100
105
110
atg gtc acc gtc tcg agt 354
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 67
<211> 118
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 67
Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Íle Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lya Gly Arg Phe Thr íle Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gin Met Asri Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Asp Asp Tyr Asp Phe Asp Tyr Trp Gly Arg Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 68 <211> 334 <212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<221> CDS <222> (1).. (333)
<400> 68
cag tct gtg ttg acg cag ccg ccc tca gcg tct ggg gcc ccc ggt cag 48
Gin Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ala Pro Gly Gin
1 5 10 15
agg gtc acc atc tct tgt tct gga age age tcc aac atc gga att aat 96
Arg Val Thr íle Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn íle Gly íle Asn
20 25 30
get gta aac tgg tac cag cag ctc cca gga acg gcc ccc aaa ctc ctc 144
Ala Val Asn Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
atc tat ggt aat gat cag cgg ccc tca ggg gtc cct gac ega ttc tct 192
íle Tyr Gly Asn Asp Gin Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
p
240
50 55 60
ggc tcc aag tct ggc acc tca gcc tcc ctg gcc atc agt ggg ctc cag
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala íle Ser Gly Leu Gin
65 70 75 80
tct gag gat gag get gat tat aac tgt gca gca tgg gat gac age ctg
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Asn Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
agt ggt ccg gtg ttc ggc gga ggg acc aag ctg acc gtc cta ggt g
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
288
334 <210> 69 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 69
Gin 1 Ser Val Leu Thr Gin Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ala Pro Gly 15 Gin
5 10
Arg Val Thr íle Ser Cys Ser 20 Gly Ser Ser Ser Asn 25 íle Gly 30 íle Asn
Ala Val Asn 35 Trp Tyr Gin Gin Leu Pro Gly Thr Ala 40 Pro 45 Lys Leu Leu
íle Tyr Gly 50 Asn Asp Gin Arg 55 Pro Ser Gly Val Pro 60 Asp Arg Phe Ser
Gly 65 Ser Lys Ser Gly Thr Ser 70 Ala Ser Leu Ala íle 75 Ser Gly Leu Gin 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr 85 Asn Cys Ala Ala Trp 90 Asp Asp Ser 95 Leu
Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110 <210> 70 <211> 66 <212> PRT <213> Homo sapiens
<400> 7C Tyr Phe 1 1 Gly Lys Leu 5 Glu Ser Lys Leu Ser 10 Val íle Arg Asn Leu 15 Asn
Asp Gin Val Leu 20 Phe íle Asp Gin Gly 25 Asn Arg Pro Leu Phe 30 Glu Asp
Met Thr Asp 35 Ser Asp Cys Arg Asp 40 Asn Ala Pro Arg Thr 45 íle Phe íle
íle Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gin Pro Arg Gly Met Ala Val Thr íle
55 60
Ser Val 65 <210> 71 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71
Phe Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu íle Leu Lys 15 10 15
Lys Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser íle Met Phe Thr Val Gin Asn 20 25 30
Glu Asp <ζ-

Claims (60)

1. Zlúčenina schopná väzby na aminokyselinovú sekvenciu ľudského IL-18 alebo na jej časť, kde táto aminokyselinová sekvencia zahrnuje sekvenciu vybranú zo skupiny pozostávajúcej z SEQ ID NO: 67 a SEQ ID NO: 68.
2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde táto zlúčenina je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z malej molekuly, peptidu, polypeptidu, protilátky a fragmentu protilátky.
3. Zlúčenina podľa nároku 2, kde táto protilátka alebo jej fragment sú plne ľudského pôvodu.
4. Ľudská monoklonálna protilátka alebo jej antigén viažuca časť, schopná väzby k ľudskému IL-18.
5. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 0,1 s'1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s ICso o hodnote 1 x 10'6 M alebo menšou.
6. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1x10' s' alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 o hodnote 1 x 10’7 M alebo menšou.
7. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'3 s'1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 o hodnote 1 x 10‘8 M alebo menšou.
8. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'4 s’1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 o hodnote 1 x 10*9 M alebo menšou.
9. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'5 s'1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 o hodnote 1 x 1O'10 M alebo menšou.
10. Protilátka podľa nároku 4, kde protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10‘6 s’1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 o hodnote 1 x 10'11 M alebo menšou.
11. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18 alebo na jeho časť, ktorá zahrnuje aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny zahrnujúcej SEQ ID NO: 3 a SEQ ID NO: 33.
12. Protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 11, kde protilátkou je neutralizačná protilátka.
13. Protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 11, ktorou je ľudská protilátka.
14. Protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 11, ktorou je rekombinantná protilátka.
15. Protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 11, ktorá je monoklonálnou protilátkou.
16. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18, kde táto protilátka alebo jej antigén viažuca časť disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 0,1 s*1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'6 M alebo menšou.
17. Izolovaná protilátka podľa nároku 16 alebo jej antigén viažuca časť, ktorá disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10' s' alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-1 8 s IC50 1 x 10'7 M alebo menšou.
X
18. Izolovaná protilátka podľa nároku 16 alebo jej antigén viažuca časť, ktorá disociuje z ľudského IL-1 8 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'3 s'1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10'8 M alebo menšou.
19. Izolovaná protilátka podľa nároku 16 alebo jej antigén viažuca časť, ktorá disociuje z ľudského IL-18 s koff rýchlostnou konštantou 1 x 10'4 s’1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 10‘9 M alebo menšou.
20. Izolovaná protilátka podľa nároku 16 alebo jej antigén viažuca část, ktorá disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10’5 s’1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x 1O'10 M alebo menšou.
21. Izolovaná protilátka podľa nároku 16 alebo jej antigén viažuca časť, ktorá disociuje z ľudského IL-18 s kOff rýchlostnou konštantou 1 x 10'6 s'1 alebo menšou, stanovenou povrchovou plazmónovou rezonanciou, alebo ktorá inhibuje aktivitu ľudského IL-18 s IC50 1 x ΚΓ11 M alebo menšou.
22. Izolovaná ľudská protilátka alebo jej antigén viažuca časť, zahrnujúca najmenej jednu CDR doménu variabilnej oblasti, schopnú väzby na epitop ľudského IL-18.
23. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 22, kde táto protilátka alebo jej antigén viažuca časť obsahuje najmenej jednu aminokyselinovú substitúciu alebo inzerciu, ktorá zlepšuje väzbu IL-18 v porovnaní s nemodifikovanou protilátkou alebo jej antigén viažucou časťou.
24. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 22, kde táto protilátka alebo jej antigén viažuca časť obsahuje najmenej jednu aminokyselinovú substitúciu alebo inzerciu, ktorá zlepšuje neutralizáciu IL-18 v porovnaní s nemodifikovanou protilátkou alebo jej antigén viažucou časťou.
25. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 22, kde uvedená variabilná oblasť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ťažkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 9 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO:9 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
CDR2 domény ťažkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 10 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO: 10 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny a CDR3 domény ťažkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 11 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO: 11 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny.
26. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 25, kde uvedená variabilná časť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO: 9 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H30, H31, H32, H33 alebo H35;
??
CDR2 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:10 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H52, H52a, H53, H54, H56 alebo H58
CDR3 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:11 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H95, H96, H97 alebo H98.
27. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 22, kde uvedená variabilná oblasť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ľahkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 12 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO:12 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
CDR2 domény ľahkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 13 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO: 13 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny a CDR3 domény ľahkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 14 alebo so sekvenciou, vzniknutou modifikáciou SEQ ID NO: 14 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny.
28. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 27, kde uvedená variabilná časť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ľahkého retezce, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO: 12 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L30, L31, L32 alebo L34;
CDR2 domény ľahkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:13 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L50, L52, L53 alebo L55 a CDR3 domény ľahkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO: 14 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L96 alebo L97.
29. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť, s variabilnou oblasťou zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z SEQ ID NO: 15, 16 a 17.
30. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť s variabilnou oblasťou ľahkého reťazca (LCVR) zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 15 a s variabilnou oblasťou ťažkého reťazca (HCVR) zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO:16.
31. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť s variabilnou oblasťou ľahkého reťazca (LCVR) majúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 15 a s variabilnou oblasťou ťažkého reťazca (HCVR), majúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO:17.
32. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 22, kde uvedená variabilná oblasť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ťažkého reťazca, s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 20 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 20 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
??
CDR2 domény težkého reťazca, s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 21 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 21 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
a CDR3 domény ťažkého reťazca, s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 22 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 22 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny.
33. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 32, kde uvedená variabilná časť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO: 20 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H30, H31, H32, H33 alebo H35;
CDR2 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:21 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H50, H51, H52, H52a, H53, H54, H56 alebo H58 a CDR3 domény ťažkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:11 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách H95, H96, H97, H98, H99, H100, HlOOa, H101 alebo H102.
34. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 32, kde uvedená variabilná oblasť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ľahkého reťazca s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 23 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 23 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
Íó
CDR2 domény ľahkého reťazca, s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 24 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 24 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny;
a CDR3 domény ľahkého reťazca, s aminokyselinovou sekvenciou SEQ ID NO: 25 alebo modifikovanú sekvenciu SEQ ID NO: 25 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny.
35. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť podľa nároku 34, kde uvedená variabilná časť zahrnuje CDR doménu, vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z:
CDR1 domény ľahkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO: 23 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L30, L31, L32 alebo L34;
CDR2 domény ľahkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:24 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L50, L52, L53 alebo L55 a CDR3 domény ľahkého reťazca, vzniknutej modifikáciou SEQ ID NO:25 pomocou substitúcie najmenej jednej aminokyseliny v polohách L89, L90, L91, L92, L93, L94, L95, L95a, L96 alebo L97.
36. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť s variabilnou oblasťou zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z SEQ ID NO: 26, 27 a 29.
37. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť s variabilnou oblasťou ľahkého reťazca (LCVR) zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 29 a s variabilnou oblasťou ťažkého reťazca (HCVR), zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 26.
38. Izolovaná protilátka alebo jej antigén viažuca časť s variabilnou oblasťou ľahkého reťazca (LCVR), zahrnujúca aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 29 a s variabilnou oblasťou ťažkého reťazca (HCVR), zahrnujúcou aminokyselinovú sekvenciu SEQ ID NO: 27.
39. Izolovaná nukleová kyselina kódujúca aminokyselinovú sekvenciu CDR protilátky podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4 až 38.
40. Izolovaná nukleová kyselina podľa nároku 39, ktorou je rekombinantný expresný vektor.
41. Hostiteľská bunka, do ktorej bol zavedený rekombinantný expresný vektor podľa nároku 40.
42. Spôsob syntézy protilátky, ktorá viaže ľudský IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa hostiteľská bunka podľa patentového nároku 41 pestuje v kultivačnom médiu, dokiaľ nie je bunkou syntetizovaná protilátka, ktorá sa viaže na ľudský IL-18.
43. Spôsob podľa nároku 42, vyznačujúci sa tým, že táto protilátka je ľudská.
44. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje protilátku alebo jej antigén viažucu časť podľa ktoréhokoľvek z patentových nárokov 4 až 38 a farmaceutický prijateľný nosič.
45. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 44, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahrnuje najmenej jedno ďalšie liečivo na liečbu poruchy, na ktorej sa IL-18 škodlivo zúčastňuje.
46. Farmaceutický prostriedok podľa nároku 45, vyznačujúci sa tým, že toto ďalšie liečivo je vybrané zo skupiny, zahrnujúcej protilátku alebo jej časť schopnú väzby na ľudský IL-1 8, metotrexát anti-TNF, kortikosteroidy, rapamycín, cyklosporín, FK506 a nesteroidné protizápalové látky.
47. Spôsob prípravy protilátky viažucej ľudský interleukín-18 (IL-18), vyznačujúci sa tým, že sa súbor protilátok vystaví antigénu, ktorý obsahuje epitop ľudského IL18 alebo jeho časť a z tohto súboru sa vyberie protilátka, ktorá sa viaže na epitop ľudského IL-18 alebo jeho časť.
48. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že uvedený súbor protilátok je in vivo súbor v živočíchovi a živočích sa imunizuje antigénom zahrnujúcim epitop ľudského IL-18 alebo jeho časť.
49. Spôsob prípravy protilátky podľa nároku 46 alebo 47, vyznačujúci sa tým, že uvedený epitop zahrnuje aminokyselinovú sekvenciu vybranú zo skupiny, pozostávajúcej z SEQ ID NO:3 a 33.
50. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že uvedený in vivo súbor je plne ľudský súbor imunoglobulínov integrovaný do genómu živočícha.
51. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že súbor protilátok je knižnica rekombinantných protilátok a vykonáva sa skrínink knižnice antigénom zahrnujúcim epitop ľudského IL-18 alebo jeho časť.
52. Spôsob podľa nároku 47, vyznačujúci sa tým, že knižnicou je knižnica ľudských protilátok.
53. Spôsob inhibície aktivity ľudského IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudský IL-18 uvádza do kontaktu so zlúčeninou podľa nároku 1, tak že je inhibovaná aktivita ľudského IL-18.
54. Spôsob inhibície aktivity ľudského IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudský IL-18 uvádza do kontaktu s protilátkou alebo jej časťou viažucou antigén podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4 až 38, tak že je inhibovaná aktivita ľudského IL-18.
55. Spôsob inhibície aktivity ľudského IL-18 u ľudského subjektu, ktorý trpí poruchou, na ktorej sa škodlivo podiela aktivita IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudskému subjektu podáva zlúčenina podľa nároku 1, tak že je u ľudského subjektu inhibovaná aktivita ľudského IL-18.
56. Spôsob inhibície aktivity ľudského IL-18 u ľudského subjektu, ktorý trpí poruchou, na ktorej sa škodlivo podiela aktivita IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudskému subjektu podáva protilátka alebo jej časť viažuca antigén podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4 až 38, tak že je u ľudského subjektu inhibovaná aktivita ľudského IL-18.
57. Spôsob liečby ľudského subjektu, ktorý trpí poruchou, na ktorej sa škodlivo podiela aktivita IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudskému subjektu podáva zlúčenina podľa nároku 1, tak že sa dosiahne liečba.
58. Spôsob liečby ľudského subjektu, ktorý trpí poruchou, na ktorej sa škodlivo podiela aktivita IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa ľudskému subjektu podáva protilátka alebo jej časť viažuca antigén podľa ktoréhokoľvek z nárokov 4 až 38, tak že sa dosiahne liečba.
59. Spôsob podľa nároku 57 alebo 58, vyznačujúci sa tým, že uvedená porucha je vybraná zo skupiny, ktorú tvorí reumatická artritída, osteoartritída, juvenilná chronická artritída, Lymská artritída, psoriatická artritída, reaktívna artritída, spondyloartropatia, systémový lupus erythematosus, Crohnova choroba, ulceratívna kolitída, zápalová choroba čriev, diabetes mellitus závislý na inzulíne, tyroiditis, astma, alergické choroby, psoriasis, dermatitis skleroderma, choroby spojené s neznášanlivosťou transplantátu, odhojenie transplantovaného orgánu, akútna alebo chronická imunitná choroba spojená s transplantáciou orgánov, sarkoidóza, ateroskleróza, rozstrúsená intravaskulárna koagulácia, Kawasakiho choroba, Graveova choroba, nefrotický syndróm, syndróm chronickej únavy, Wegenerova granulomatóza, Henoch-Schônleinova purpurea, mikroskopická vaskulitída obličiek, chronická aktívna hepatitída, uveitída, septický šok, syndróm toxického šoku, septický syndróm, kachexia, infekčné choroby, choroby spôsobené parazitmi, získaný syndróm imunodeficiencie, akútna transverzná myelitída, Huntingtonova chorea, Parkinsonova choroba, Alzheimerova choroba, mŕtvica, primárna biliárna cirhóza, hemolytická anémia, zhubné choroby, choroby srdca, infarkt myokardu, Addisonova choroba, sporadická, polyglandulárna deficiencia typu I a polyglandulárna deficiencia typu II, Schmidtov syndróm, akútny syndróm respiračnej tiesne dospelých, alopecia, alopecia areata, sérovo negatívna artopatia, artropatia, Reiterova choroba, psoriatická artropatia, ulceratívna kolitická artropatia, enteropatická synovitis, artropatia spojená s chlamydiou, yersiniou a salmonellou, spondyloartopatia, ateromatická choroba/arterioskleróza, atopická alergia, autoimunitná bulózna choroba, pemfigus vulgaris, pemfigoidná choroba lineárneho IgA, autoimunitná hemolytická anémia, Coombsova pozitívna hemolytická anémia, získaná perniciózna anémia, juvenilná perniciózna anémia, myalgická encefalitída/Royal Free choroba, chronická mukokutánna kandidóza, arteritis obrích buniek, primárna sklerotizujúca hepatitis, kryptogénna autoimunitná hepatitis, získaný syndróm imunodeficiencie - AIDS, choroby spojené so syndrómom získanej imunodeficiencie, hepatitis C, všeobecná rôznorodá imunodeficiencia - všeobecná rôznorodá hypogamaglobulinémia, dilatovaná kardiopatia, ženská neplodnosť, poruchy vaječníkov, predčasná porucha vaječníkov, fibrotická pľúcna choroba, kryptogénna fibrózna alveolitída, pozápalová intersticiálna pľúcna choroba, intersticiálna pneumonitída choroba väzivového tkaniva, spojená s intersticiálnou pľúcnou chorobou, zmiešaná choroba väzivového tkaniva spojená s pľúcnou chorobou, systémová skleróza spojená s intersticiálnou chorobou pľúc, reumatická artritída spojená s intersticiálnou chorobou pľúc, systémový lupus erythematosus spojený s chorobou pľúc, dermatomyozitída/polymyozitída spojená s chorobou pľúc, Sjôgrenova choroba spojená s chorobou pľúc, ankylózna spondylitída spojená s chorobou pľúc, vaskulitická difúzna pľúcna choroba, hemosideróza spojená s pľúcnou chorobou, liečivami vyvolaná intersticiálna pľúcna choroba, radiačná fibróza, obliterantná bronchiolitída, chronická eozinofilná pneumónia, lymfocytická infiltračná choroba pľúc,' poinfekčná intersticiálna choroba pľúc, dnová artritída, autoimunitná hepatitída, autoimunitná hepatitída typu-1 klasická autoimunitná alebo lupoidní hepatitída, autoimunitná hepatitída typu-2 - anti- LKM protilátkové hepatitída, klasická autoimunitná alebo lupoidná hepatitída, autoimunitné sprostredkovaná hypoglykémia, rezistencia na inzulín typu B s acanthosi nigricans, hypoparatyroidizmus, a16 kútna imunitná choroba spojená s transplantáciou orgánov, chronická imunitná choroba spojená s transplantáciou orgánov, osteoartróza, primárna sklerotická cholangitída, psoriasis typu 1, psoriasis typu 2, idiopatická leukopénia, autoimunitná neutropénia, renálna choroba NOS, glomerulonefritída, mikroskopická vazulitída obličiek, Lymská choroba, diskoidný lupus erythematosus, mužská idiopatická neplodnosť alebo NOS, spermálna autoimunita, skleróza multiplex - všetky subtypy, sympatetická oftalmia, pulmonárna hypertenzia sekundárna po chorobe väzivového tkaniva, Goodpasturov syndróm, pľúcna manifestácia polyarteritis nodóza, akútna reumatická horúčka, reumatoidná spondylitíza, Stillova choroba, systémová skleróza, Sjôgrenov syndróm, Takayasuova choroba/arteritis, autoimunitná trombocytopénia, idiopatická trombocytopénia, autoimunitná choroba štítnej žľazy, hypertyroidizmus, autoimunitný hypotyroidizmus strumy - Hashimotova choroba, atrofický autoimunitný hypotyroidizmus, primárny myxedém, fakogénna uveitída, primárna vaskulitída a vitiligo, akútna choroba pečene, chronická choroba pečene, alergia a astma, mentálne poruchy, tj., depresie a schizofrénie) a choroby sprostredkované Th2 typom a Thl typom.
60. Spôsob liečby pacienta, ktorý trpí poruchou, na ktorej sa škodlivo podiela IL-18, vyznačujúci sa tým, že sa pacientovi pred, súčasne alebo po podaní druhej látky podá protilátka proti IL-18, pričom táto druhá látka sa vyberie zo skupiny, zahrnujúcej protilátku proti IL-12 alebo jej antigén viažuca časť, metotrexát, protilátku proti TNF alebo jej antigén viažuca časť, kortikosteroidy, cyklosporín, rapamycín, FK506 a nesteroidné protizápalové látky.
SK1294-2002A 2000-02-10 2001-02-09 Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia SK12942002A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US18160800P 2000-02-10 2000-02-10
PCT/US2001/004170 WO2001058956A2 (en) 2000-02-10 2001-02-09 Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK12942002A3 true SK12942002A3 (sk) 2003-05-02

Family

ID=22665007

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1294-2002A SK12942002A3 (sk) 2000-02-10 2001-02-09 Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia

Country Status (22)

Country Link
US (3) US7767207B2 (sk)
EP (4) EP2360184A3 (sk)
JP (2) JP2004500086A (sk)
KR (4) KR101111103B1 (sk)
CN (3) CN102504024A (sk)
AR (2) AR027404A1 (sk)
AU (3) AU2001236807A1 (sk)
BG (2) BG107045A (sk)
BR (1) BR0108188A (sk)
CA (2) CA2800450A1 (sk)
CL (1) CL2012001063A1 (sk)
HU (1) HUP0300423A3 (sk)
IL (2) IL151044A0 (sk)
MX (1) MXPA02007756A (sk)
MY (1) MY146017A (sk)
NO (1) NO20023788L (sk)
NZ (1) NZ520392A (sk)
PL (1) PL356836A1 (sk)
SK (1) SK12942002A3 (sk)
TW (3) TWI335336B (sk)
WO (1) WO2001058956A2 (sk)
ZA (1) ZA200206266B (sk)

Families Citing this family (163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7109308B1 (en) 1994-03-08 2006-09-19 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to human vascular endothelial growth factor 2
US6608182B1 (en) 1994-03-08 2003-08-19 Human Genome Sciences, Inc. Human vascular endothelial growth factor 2
US7153827B1 (en) 1994-03-08 2006-12-26 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2 and methods of use
US5932540A (en) 1994-03-08 1999-08-03 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
ATE309360T1 (de) 1994-03-08 2005-11-15 Human Genome Sciences Inc Vaskularer endothelialer wachstumsfaktor 2
US7186688B1 (en) 1994-03-08 2007-03-06 Human Genome Sciences, Inc. Methods of stimulating angiogenesis in a patient by administering vascular endothelial growth factor 2
US6040157A (en) 1994-03-08 2000-03-21 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
US7223724B1 (en) 1999-02-08 2007-05-29 Human Genome Sciences, Inc. Use of vascular endothelial growth factor to treat photoreceptor cells
WO2001058956A2 (en) * 2000-02-10 2001-08-16 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
DK1257292T3 (da) * 2000-02-21 2011-07-18 Merck Serono Sa Anvendelse af IL-18-inhibitorer
US20020025317A1 (en) * 2000-07-20 2002-02-28 Schering Ag Bispecific monoclonal antibodies to IL-12 and IL-18
CA2435466C (en) * 2001-01-29 2012-04-03 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of heart disease
WO2002083704A1 (en) 2001-04-13 2002-10-24 Human Genome Sciences, Inc. Vascular endothelial growth factor 2
US7402312B2 (en) 2001-04-13 2008-07-22 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies to vascular endothelial growth factor 2 (VEGF-2)
ES2334773T3 (es) * 2001-05-16 2010-03-16 Yeda Research And Development Co. Ltd. Uso de inhibidores de il-18 para el tratamiento o prevencion de la sepsis.
US20040213786A1 (en) * 2001-08-24 2004-10-28 Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences Compositions and methods for treating T-cell mediated autoimmune diseases
EP2308888B1 (en) 2001-11-14 2017-03-01 Janssen Biotech, Inc. Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses
EP1494710A4 (en) * 2002-03-26 2007-03-21 Centocor Inc DIABETES-RELEVANT IMMUNOGLOBULIN-BASED PROTEINS, COMPOSITIONS, PROCESSES AND USES
WO2003082922A1 (en) * 2002-03-28 2003-10-09 Markus Fritzsche Antibody against an epitope of the b. burgdorferi flagellar basal rod protein (fbrp)
US7253260B2 (en) * 2002-04-17 2007-08-07 Smithkline Beecham Corporation Human IL-18 crystal structure
US7601351B1 (en) 2002-06-26 2009-10-13 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies against protective antigen
EP1539235A2 (en) 2002-07-01 2005-06-15 Human Genome Sciences, Inc. Antibodies that specifically bind to reg iv
US9415102B2 (en) 2002-09-06 2016-08-16 Alexion Pharmaceuticals, Inc. High concentration formulations of anti-C5 antibodies
US20050271660A1 (en) 2002-09-06 2005-12-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Nebulization of monoclonal antibodies for treating pulmonary diseases
AR047392A1 (es) 2002-10-22 2006-01-18 Wyeth Corp Neutralizacion de anticuerpos contra gdf 8 y su uso para tales fines
JP2006519763A (ja) 2002-11-08 2006-08-31 アブリンクス エン．ヴェー． 治療用ポリペプチドの投与法およびそのためのポリペプチド
US9320792B2 (en) 2002-11-08 2016-04-26 Ablynx N.V. Pulmonary administration of immunoglobulin single variable domains and constructs thereof
EP2267032A3 (en) * 2002-11-08 2011-11-09 Ablynx N.V. Method of administering therapeutic polypeptides, and polypeptides therefor
US20060034845A1 (en) 2002-11-08 2006-02-16 Karen Silence Single domain antibodies directed against tumor necrosis factor alpha and uses therefor
KR100988129B1 (ko) * 2003-04-30 2010-10-18 쥬리디컬 파운데이션 더 케모-세로-쎄라퓨틱 리서치 인스티튜트 인간 항인간 인터루킨-18 항체와 그 단편, 및 이들의이용방법
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
AU2011224023C1 (en) * 2003-11-12 2013-08-29 Abbvie Inc. IL-18 binding proteins
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
US20050100965A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-12 Tariq Ghayur IL-18 binding proteins
US20050227289A1 (en) 2004-04-09 2005-10-13 Reilly Edward B Antibodies to erythropoietin receptor and uses thereof
NZ552908A (en) * 2004-06-30 2009-11-27 Atsuo Sekiyama Indicator agent for noninflammatory stress response and use thereof
US7141382B1 (en) 2004-10-12 2006-11-28 Parikh Chirag R Methods for detection of IL-18 as an early marker for diagnosis of acute renal failure and predictor of mortality
PE20061324A1 (es) 2005-04-29 2007-01-15 Centocor Inc Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos
KR20130108481A (ko) 2005-08-19 2013-10-02 아보트 러보러터리즈 이원 가변 도메인 면역글로불린 및 이의 용도
EP2500356A3 (en) 2005-08-19 2012-10-24 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
CN101277974A (zh) 2005-09-30 2008-10-01 阿伯特有限及两合公司 排斥性引导分子(rgm)蛋白质家族的蛋白质的结合结构域及其功能性片段和它们的用途
CN110776566A (zh) * 2005-12-20 2020-02-11 Sbi 生物技术有限公司 抗ilt7抗体
TWI417301B (zh) * 2006-02-21 2013-12-01 Wyeth Corp 對抗人類介白素-２２（ｉｌ-２２）之抗體及其用途
MY157173A (en) * 2006-05-25 2016-05-13 Glaxo Group Ltd Modified humanised anti-interleukin-18
EP2500414A1 (en) 2006-09-13 2012-09-19 Abbott Laboratories Cell culture improvements
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
CN103397065A (zh) 2006-09-13 2013-11-20 雅培制药有限公司 细胞培养改良
JP5167275B2 (ja) 2007-01-04 2013-03-21 エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド 明るさに優れたポリアリーレンスルフィド樹脂の製造方法
EP2164517A4 (en) * 2007-05-29 2011-03-09 Univ Yale IL-18 AND PROTEIN KINASE-R INHIBITION FOR THE TREATMENT OF COPD
CL2008002153A1 (es) 2007-07-24 2009-06-05 Amgen Inc Anticuerpo aislado o fragmanto de unión de antigeno del mismo que se une al receptor de il-18 (il-18r); molecula de ácido nucleico codificante; celula huesped que la comprende; composición farmaceutica; uso médico para tratar o prevenir una condición asociada con il-18r; método in vitro para inhibir la unión de il-18 al il-18r.
CA3023889A1 (en) 2007-12-27 2009-07-09 Abbott Laboratories Anti-t. cruzi antibodies and methods of use
US8962803B2 (en) 2008-02-29 2015-02-24 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Antibodies against the RGM A protein and uses thereof
AU2009241589B2 (en) 2008-04-29 2013-10-10 Abbvie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY31861A (es) 2008-06-03 2010-01-05 Abbott Lab Inmunoglobulina con dominio variable dual y usos de la misma
MX2010013239A (es) 2008-06-03 2011-02-24 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
US8188235B2 (en) 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
RU2011104348A (ru) 2008-07-08 2012-08-20 Эбботт Лэборетриз (Us) Иммуноглобулины с двойным вариабельным доменом против простагландина е2 и их применение
RU2011120178A (ru) * 2008-10-20 2012-11-27 Эбботт Лэборетриз Антитела, которые связываются с il-12, и способы их очистки
WO2010141039A1 (en) * 2008-10-20 2010-12-09 Abbott Laboratories Isolation and purification of antibodies using protein a affinity chromatography
SG10201702951RA (en) * 2008-10-20 2017-06-29 Abbvie Inc Viral inactivation during purification of antibodies
US20100150864A1 (en) * 2008-10-20 2010-06-17 Abbott Laboratories, Inc. Antibodies that bind to il-18 and methods of purifying the same
RU2481824C2 (ru) 2008-10-29 2013-05-20 Аблинкс Н.В Препараты однодоменных антигенсвязывающих молекул
KR20110079693A (ko) 2008-10-29 2011-07-07 와이어쓰 엘엘씨 단일 도메인 항원 결합 분자의 정제 방법
US8349325B2 (en) 2008-12-23 2013-01-08 Abbott Laboratories Soluble FMS-like tyrosine kinase-1 (sFLT-1) antibody and related composition, kit, methods of using, and materials and method for making
US8168165B2 (en) 2008-12-23 2012-05-01 Abbott Laboratories Alkylated interleukin-18 compositions
MX2012002651A (es) 2009-09-01 2012-05-22 Abbott Lab Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
CA2775959A1 (en) 2009-10-15 2011-04-21 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
UY32979A (es) 2009-10-28 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
CN102656190A (zh) 2009-12-08 2012-09-05 雅培股份有限两合公司 用于在视网膜神经纤维层变性治疗中使用的针对rgm a蛋白质的单克隆抗体
WO2011098424A2 (en) 2010-02-09 2011-08-18 Glaxo Group Limited Treatment of a metabolic disorder
US20110229921A1 (en) 2010-03-18 2011-09-22 Abbott Laboratories METHODS OF ASSAYING URINARY NEUTROPHIL GELATINASE-ASSOCIATED LIPOCALIN (uNGAL) IN THE PROGNOSIS OF CADAVERIC KIDNEY TRANSPLANT FUNCTION IN A PATIENT, INCLUDING A PATIENT DIAGNOSED WITH DELAYED GRAFT FUNCTION (DGF), A METHOD OF ASSAYING uNGAL IN THE ASSESSMENT OF RISK OF DGF IN A PATIENT DIAGNOSED WITH EARLY GRAFT FUNCTION (EGF), AND RELATED KITS
MX341579B (es) 2010-08-03 2016-08-25 Abbvie Inc * Inmunoglobulinas de dominio variable doble y usos de las mismas.
SG187938A1 (en) 2010-08-26 2013-04-30 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
BR112013007501B1 (pt) * 2010-09-30 2022-04-19 Chengdu Kanghong Biotechnologies Co., Ltd. Anticorpo humanizado anti-fator de necrose tumoral a, ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, uso e composição farmacêutica
US20120115244A1 (en) 2010-11-09 2012-05-10 Abbott Laboratories Materials and methods for immunoassay of pterins
US9255144B2 (en) * 2010-12-20 2016-02-09 Medimmune Limited Anti-IL-18 antibodies and their uses
WO2012088247A2 (en) * 2010-12-22 2012-06-28 Medimmune, Llc Anti-c5/c5a/c5adesr antibodies and fragments
WO2012096264A1 (ja) 2011-01-11 2012-07-19 Jsr株式会社 感放射線性樹脂組成物及び感放射線性酸発生剤
WO2012149197A2 (en) 2011-04-27 2012-11-01 Abbott Laboratories Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
JP6336397B2 (ja) 2011-12-14 2018-06-06 アッヴィ・ドイチュラント・ゲー・エム・ベー・ハー・ウント・コー・カー・ゲー 鉄関連障害を診断および治療するための組成物および方法
CN107459576A (zh) 2011-12-14 2017-12-12 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗铁相关病症的组合物和方法
WO2013102042A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Abbvie Inc. Dual specific binding proteins directed against il-13 and/or il-17
US8993248B2 (en) 2011-12-31 2015-03-31 Abbott Laboratories Truncated human vitamin D binding protein and mutation and fusion thereof and related materials and methods of use
CN104487455A (zh) 2012-01-27 2015-04-01 艾伯维德国有限责任两合公司 用于诊断和治疗与神经突变性相关的疾病的组合物和方法
US9181572B2 (en) 2012-04-20 2015-11-10 Abbvie, Inc. Methods to modulate lysine variant distribution
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
US9150645B2 (en) 2012-04-20 2015-10-06 Abbvie, Inc. Cell culture methods to reduce acidic species
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
BR112015004467A2 (pt) 2012-09-02 2017-03-21 Abbvie Inc método para controlar a heterogeneidade de proteínas
JOP20200308A1 (ar) 2012-09-07 2017-06-16 Novartis Ag جزيئات إرتباط il-18
TWI601745B (zh) 2012-11-01 2017-10-11 艾伯維有限公司 抗－ｖｅｇｆ／ｄｌｌ４雙重可變區域免疫球蛋白及其用途
EP2924117B1 (en) * 2012-11-21 2019-08-14 KM Biologics Co., Ltd. Novel human antibody against il-18
DE112013006579T5 (de) 2013-02-02 2016-03-10 Duke University Verfahren zum Isolieren zirkulierender Tumorzellen
EP2830651A4 (en) 2013-03-12 2015-09-02 Abbvie Inc HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
WO2014144280A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Abbvie Inc. DUAL SPECIFIC BINDING PROTEINS DIRECTED AGAINST IL-1β AND / OR IL-17
US9469686B2 (en) 2013-03-15 2016-10-18 Abbott Laboratories Anti-GP73 monoclonal antibodies and methods of obtaining the same
JP6581572B2 (ja) 2013-06-07 2019-09-25 デューク ユニバーシティ 補体因子ｈ阻害薬
WO2015031626A1 (en) 2013-08-28 2015-03-05 Abbvie Inc. Soluble cmet assay
HUE055608T2 (hu) 2013-09-05 2021-12-28 Ab2 Bio Sa IL-18-kötõ fehérje (IL-18BP) gyulladásos betegségekben
CN105793284A (zh) 2013-09-17 2016-07-20 大学健康网络(Uhn):技术开发和商业化公司 针对顺式RGMa/再生蛋白相互作用或脂筏的试剂及其在治疗方法中的应用
WO2015051293A2 (en) 2013-10-04 2015-04-09 Abbvie, Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US20150139988A1 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
WO2016044736A1 (en) * 2014-09-18 2016-03-24 Cell Signaling Technology, Inc. Altered antibodies and methods of making the same
AU2015336946A1 (en) * 2014-10-23 2017-04-13 La Trobe University Fn14-binding proteins and uses thereof
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
MX2017010919A (es) 2015-03-05 2017-12-07 Ab2 Bio Sa Proteina de union il-18 (il-18bp) y anticuerpos en enfermedades inflamatorias.
CN108513593A (zh) 2015-04-23 2018-09-07 南托米克斯有限责任公司 癌症新表位
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
MX2018003040A (es) 2015-09-11 2018-04-11 Abbvie Inc Metodos para el tratamiento de formas recurrentes de esclerosis multiple.
WO2017087768A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Duke University Targeted delivery of interleukin-10 to tumor infiltrating lymphocytes
WO2017156298A1 (en) 2016-03-10 2017-09-14 Medimmune, Llc Ilt7 binding molecules and methods of using the same
CN109496218A (zh) 2016-06-01 2019-03-19 艾伯维公司 用于治疗脊髓损伤和疼痛的抗反义导向分子a（rgma）拮抗性抗体
US20170363620A1 (en) 2016-06-17 2017-12-21 Abbott Laboratories BIOMARKERS TO PREDICT NEW ONSET HEART FAILURE WITH PRESERVED EJECTION FRACTION (HFpEF)
EP3279667A1 (en) 2016-08-02 2018-02-07 Abbott Laboratories Cardiac troponin i and copeptin as biomarkers for short-term mortality in acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (aecopd)
US20180106818A1 (en) 2016-10-03 2018-04-19 Abbott Laboratories Methods of assessing gfap status in patient samples
US10324041B2 (en) 2016-12-21 2019-06-18 Abbott Japan Co., Ltd. Optical imaging system using lateral illumination for digital assays
US11047854B2 (en) 2017-02-06 2021-06-29 Abbott Japan Llc Methods for reducing noise in signal-generating digital assays
AU2018219247A1 (en) 2017-02-08 2019-07-25 Silbiotech, Inc. Methods for determining breast cancer risk
CA3055256A1 (en) 2017-03-09 2018-09-13 Mab Discovery Gmbh Antibodies specifically binding to human il-1r7
WO2018175942A1 (en) 2017-03-23 2018-09-27 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and determination of the extent of traumatic brain injury in a human subject using the early biomarker ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1
CA3053409A1 (en) 2017-04-15 2018-10-18 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury in a human subject using early biomarkers
US10877038B2 (en) 2017-04-28 2020-12-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the hyperacute diagnosis and determination of traumatic brain injury using early biomarkers on at least two samples from the same human subject
US10865238B1 (en) 2017-05-05 2020-12-15 Duke University Complement factor H antibodies
WO2018218169A1 (en) 2017-05-25 2018-11-29 Abbott Laboratories Methods for aiding in the determination of whether to perform imaging on a human subject who has sustained or may have sustained an injury to the head using early biomarkers
AU2018275236A1 (en) 2017-05-30 2019-10-31 Abbott Laboratories Methods for aiding in diagnosing and evaluating a mild traumatic brain injury in a human subject using cardiac troponin I
WO2019010131A1 (en) 2017-07-03 2019-01-10 Abbott Laboratories IMPROVED METHODS FOR MEASURING CARBOXY TERMINATION HYDROLASE LEVELS OF UBIQUITIN L1 IN BLOOD
WO2019023650A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 Duke University COMPOSITIONS AND METHODS FOR PROMOTING REGENERATION OF HEMATOPOIETIC STEM CELLS
AU2018378971A1 (en) 2017-12-09 2020-01-02 Abbott Laboratories Methods for aiding in the diagnosis and evaluation of a subject who has sustained an orthopedic injury and that has or may have sustained an injury to the head, such as mild traumatic brain injury (TBI), using glial fibrillary acidic protein (GFAP) and/or ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 (UCH-L1)
CN110892266A (zh) 2017-12-09 2020-03-17 雅培实验室 使用gfap和uch-l1的组合辅助诊断和评价人类受试者中创伤性脑损伤的方法
US20190383832A1 (en) 2017-12-29 2019-12-19 Abbott Laboratories Novel biomarkers and methods for diagnosing and evaluating traumatic brain injury
JPWO2019194217A1 (ja) * 2018-04-04 2021-04-15 株式会社ｍＡｂＰｒｏｔｅｉｎ 検出感度の高いインターロイキン−１８タンパク質に対する抗体及びその応用
GB201809699D0 (en) * 2018-06-13 2018-08-01 Singapore Health Serv Pte Ltd IL-11 antibodies
EP3892300A4 (en) 2018-12-03 2022-12-14 Mabprotein Co.,Ltd. ANTIBODY RECOGNIZING A NEOEPITOPE OF ACTIVATED INTERLEUKIN-18 PROTEINS AND ITS USE
WO2020180695A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 Abbott Laboratories Methods for predicting major adverse cardiovascular events in subjects with coronary artery disease
KR102265432B1 (ko) * 2019-08-20 2021-06-15 주식회사 케어젠 피부 미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이의 용도
EP4136459A1 (en) 2020-04-13 2023-02-22 Abbott Laboratories Methods, complexes and kits for detecting or determining an amount of a ss-coronavirus antibody in a sample
JP2023536737A (ja) 2020-08-04 2023-08-29 アボット・ラピッド・ダイアグノスティクス・インターナショナル・アンリミテッド・カンパニー Ｓａｒｓ－ｃｏｖ－２を検出するためのアッセイ
US20220043000A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Abbott Laboratories Methods and kits for detecting sars-cov-2 protein in a sample
CN114773466B (zh) * 2020-11-26 2023-08-29 江苏荃信生物医药股份有限公司 一种抗人白介素23及包含其的试剂盒及其检测方法
WO2023102384A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Abbott Laboratories Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
CA3198161A1 (en) 2020-12-01 2022-06-09 Beth MCQUISTON Use of one or more biomarkers to determine traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography scan that is negative for a tbi
WO2022147147A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Methods for determining sars-cov-2 antigen and anti-sars-cov-2 antibody in a sample
WO2022147178A1 (en) 2020-12-30 2022-07-07 Abbott Laboratories Improved methods, reagents and kits for detergent-based inactivation of betacoronavirus prior to and/or while assessing a biological sample for sars-cov-2 antigen or antibody
EP4067375A1 (en) * 2021-03-30 2022-10-05 Universität Ulm Fibril peptides
JP2024519858A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 アボット・ラボラトリーズ 小児対象における脳損傷を査定する方法
CA3222291A1 (en) 2021-06-14 2022-12-22 Jaime MARINO Methods of diagnosing or aiding in diagnosis of brain injury caused by acoustic energy, electromagnetic energy, an over pressurization wave, and/or blast wind
WO2023286694A1 (ja) 2021-07-13 2023-01-19 国立大学法人東海国立大学機構 炎症性腸疾患を治療するための医薬組成物
EP4392783A1 (en) 2021-08-27 2024-07-03 Abbott Laboratories Methods for detecting immunoglobulin g, subclass 4 (igg4) in a biological sample
AU2022339759A1 (en) 2021-08-31 2024-03-07 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
WO2023056268A1 (en) 2021-09-30 2023-04-06 Abbott Laboratories Methods and systems of diagnosing brain injury
CA3240822A1 (en) 2021-12-17 2023-06-22 Tony Lee Systems and methods for determining uch-l1, gfap, and other biomarkers in blood samples
US20230213536A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Abbott Laboratories Use of biomarkers to determine sub-acute traumatic brain injury (tbi) in a subject having received a head computerized tomography (ct) scan that is negative for a tbi or no head ct scan
WO2023150652A1 (en) 2022-02-04 2023-08-10 Abbott Laboratories Lateral flow methods, assays, and devices for detecting the presence or measuring the amount of ubiquitin carboxy-terminal hydrolase l1 and/or glial fibrillary acidic protein in a sample
WO2024006876A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Abbott Laboratories Magnetic point-of-care systems and assays for determining gfap in biological samples
WO2024059708A1 (en) 2022-09-15 2024-03-21 Abbott Laboratories Biomarkers and methods for differentiating between mild and supermild traumatic brain injury
WO2024102383A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Abbott Laboratories Methods of identifying macrotroponin in biological samples

Family Cites Families (113)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5019385A (en) * 1984-11-09 1991-05-28 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Novel lymphopine LK 2 and pharmaceutic compositions containing same
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
GB8823869D0 (en) * 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) * 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5060283A (en) * 1989-04-20 1991-10-22 Fuji Photo Film Co. , Ltd. Method and system for reading images with a movable light intercepting plate
US6075181A (en) * 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
DK0463151T3 (da) 1990-01-12 1996-07-01 Cell Genesys Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
ATE185601T1 (de) 1990-07-10 1999-10-15 Cambridge Antibody Tech Verfahren zur herstellung von spezifischen bindungspaargliedern
EP0542810A1 (en) * 1990-08-02 1993-05-26 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
AU664976B2 (en) * 1990-08-29 1995-12-14 Gene Pharming Europe Bv Homologous recombination in mammalian cells
US5633425A (en) * 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) * 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) * 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5661016A (en) * 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5814318A (en) * 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) * 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5770429A (en) * 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992009690A2 (en) 1990-12-03 1992-06-11 Genentech, Inc. Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
ATE439435T1 (de) 1991-03-01 2009-08-15 Dyax Corp Chimäres protein mit mikroprotein mit zwei oder mehr disulfidbindungen und ausgestaltungen davon
WO1992018619A1 (en) 1991-04-10 1992-10-29 The Scripps Research Institute Heterodimeric receptor libraries using phagemids
DE4122599C2 (de) * 1991-07-08 1993-11-11 Deutsches Krebsforsch Phagemid zum Screenen von Antikörpern
AU2515992A (en) * 1991-08-20 1993-03-16 Genpharm International, Inc. Gene targeting in animal cells using isogenic dna constructs
JPH07509137A (ja) 1992-07-24 1995-10-12 セル　ジェネシス，インク． 異種抗体の生産
US5625825A (en) * 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
EP0692536B1 (en) * 1994-07-14 2000-11-22 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo IFN-Y production inducing protein and monoclonal antibody of the same
US6309636B1 (en) * 1995-09-14 2001-10-30 Cancer Research Institute Of Contra Costa Recombinant peptides derived from the Mc3 anti-BA46 antibody, methods of use thereof, and methods of humanizing antibody peptides
JPH08101497A (ja) * 1994-09-30 1996-04-16 Shin Etsu Chem Co Ltd ペリクル
US5643763A (en) * 1994-11-04 1997-07-01 Genpharm International, Inc. Method for making recombinant yeast artificial chromosomes by minimizing diploid doubling during mating
JP4004088B2 (ja) * 1995-09-26 2007-11-07 株式会社林原生物化学研究所 免疫担当細胞においてインターフェロン−γの産生を誘導する蛋白質
US6207641B1 (en) * 1995-03-10 2001-03-27 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Pharmaceutical composition containing IFN-γ inducing polypeptide or factor for treating and/or preventing IFN-γ susceptive diseases
US7135458B1 (en) * 1995-11-15 2006-11-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interferon-γ inducing polypeptide, pharmaceutical composition thereof, monoclonal antibody thereto, and methods of use
TW581771B (en) 1994-11-15 2004-04-01 Hayashibara Biochem Lab Recombinant production of a polypeptide for inducing interferon-gamma production, and monoclonal antibody against the polypeptide
JP2724987B2 (ja) * 1994-11-15 1998-03-09 株式会社林原生物化学研究所 インターフェロン−γの産生を誘導するポリペプチド
JP2952750B2 (ja) * 1995-02-23 1999-09-27 株式会社林原生物化学研究所 モノクローナル抗体
US6130364A (en) * 1995-03-29 2000-10-10 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
US6091001A (en) * 1995-03-29 2000-07-18 Abgenix, Inc. Production of antibodies using Cre-mediated site-specific recombination
JPH11503914A (ja) * 1995-04-21 1999-04-06 セル ジェネシス，インコーポレイテッド 大ゲノムｄｎａ欠失の生成
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
AU2466895A (en) 1995-04-28 1996-11-18 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
WO1997002479A2 (en) * 1995-06-30 1997-01-23 Yale University Human monoclonal anti-tumor antibodies
US6127977A (en) 1996-11-08 2000-10-03 Cohen; Nathan Microstrip patch antenna with fractal structure
ATE352613T1 (de) * 1995-08-29 2007-02-15 Kirin Brewery Chimäres tier und methode zu dessen herstellung
AU1341797A (en) 1995-12-29 1997-07-28 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids encoding interferon gamma inducing factor-2
BRPI9707379B8 (pt) 1996-02-09 2015-07-07 Abbvie Biotechnology Ltd Composições farmacêuticas compreendendo anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado, e anticorpo humano recombinante geneticamente engenheirado.
US5714352A (en) * 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
US5994619A (en) * 1996-04-01 1999-11-30 University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
WO1997044468A1 (en) 1996-05-20 1997-11-27 Schering Corporation HUMAN INTERLEUKIN-1j AND ANTAGONISTS THEREOF
EP0816499A3 (en) * 1996-06-27 1999-10-27 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Genomic DNA encoding a polypeptide capable of inducing the production of interferon-gamma
US6790442B1 (en) * 1996-06-27 2004-09-14 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Genomic DNA encoding a polypeptide capable of inducing the production of interferon-γ
TW515843B (en) * 1996-07-25 2003-01-01 Hayashibara Biochem Lab Process for producing an active polypeptide inducing interferon-γ production
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
JP4024366B2 (ja) * 1996-11-29 2007-12-19 株式会社林原生物化学研究所 ポリペプチド
EP1972194A1 (en) 1996-12-03 2008-09-24 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human ig loci including plural vh and vk regions and antibodies produced therefrom
US7141393B2 (en) * 1996-12-26 2006-11-28 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interleukin-18-receptor proteins
US6087116A (en) * 1997-03-12 2000-07-11 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Interleukin-18 (IL-18) receptor polypeptides and their uses
EP0998300A1 (en) 1997-03-18 2000-05-10 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
US6054487A (en) * 1997-03-18 2000-04-25 Basf Aktiengesellschaft Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
IL121860A0 (en) * 1997-08-14 1998-02-22 Yeda Res & Dev Interleukin-18 binding proteins their preparation and use
US7220717B2 (en) * 1997-08-14 2007-05-22 Yeda Research And Development Company Ltd. Interleukin-18 binding proteins, their preparation and use
JP2001521906A (ja) 1997-11-03 2001-11-13 ザ・ウイスター・インステイテユート・オブ・アナトミー・アンド・バイオロジー 血管新生を阻害し、癌を処置するための方法及び組成物
US6541606B2 (en) * 1997-12-31 2003-04-01 Altus Biologics Inc. Stabilized protein crystals formulations containing them and methods of making them
JP4271850B2 (ja) 1998-01-23 2009-06-03 イミュネックス・コーポレーション Ｉｌ−１８受容体
IL137037A0 (en) * 1998-01-23 2001-06-14 Immunex Corp Acpl dna and polypeptides
EP1060193A2 (en) 1998-03-03 2000-12-20 Abgenix, Inc. Cd147 binding molecules as therapeutics
US20020029391A1 (en) 1998-04-15 2002-03-07 Claude Geoffrey Davis Epitope-driven human antibody production and gene expression profiling
ATE437947T1 (de) * 1998-06-01 2009-08-15 Agensys Inc Serpentintransmembranantigene exprimiert in menschlichem krebs und deren verwendungen
CA2276216A1 (en) * 1998-06-24 1999-12-24 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo An artificial peptide capable of neutralizing the biological activity of interleukin-18
US20020142374A1 (en) 1998-08-17 2002-10-03 Michael Gallo Generation of modified molecules with increased serum half-lives
KR100537558B1 (ko) 1998-09-01 2005-12-19 가부시끼가이샤 하야시바라 세이부쓰 가가꾸 겐꾸조 인터류킨-18 결합 단백질
US6270758B1 (en) * 1998-10-08 2001-08-07 Duke University Substantially non-toxic biologically active mucosal adjuvants in vertebrate subjects
GEP20053594B (en) 1998-12-23 2005-08-10 Pfizer Human Monoclonal Antibodies to CTLA-4
AR022952A1 (es) * 1999-03-19 2002-09-04 Smithkline Beecham Corp ANTICUERPO MONOCLONAL DE ROEDOR ESPECIFICAMENTE NEUTRALIZANTE PARA LA INTERLEUQUINA-18 HUMANA , UN FRAGMENTO FAB NEUTRALIZANTE o FRAGMENTO F(AB')2, UNA REGION DE COMPLEMENTARIEDAD DE CADENA LIGERA DE INMONOGLOBULINA(CDR), UNA MOLECULA DE ACIDO NUCLEICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE, EL
KR20140094647A (ko) 1999-03-25 2014-07-30 아비에 도이치란트 게엠베하 운트 콤파니 카게 사람 ｉｌ-12에 결합하는 사람 항체 및 이의 제조방법
US6946129B1 (en) 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
IL131047A0 (en) 1999-07-22 2001-01-28 Yeda Res & Dev Use of il-18 inhibitors
WO2001058956A2 (en) 2000-02-10 2001-08-16 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
DK1257292T3 (da) * 2000-02-21 2011-07-18 Merck Serono Sa Anvendelse af IL-18-inhibitorer
DE10019967A1 (de) * 2000-04-20 2001-10-25 Fenning Biomed Gmbh Dr Antikörper gegen natives gp96, deren Herstellung und Verwendung
MXPA02010787A (es) 2000-05-03 2003-07-14 Amgen Inc Peptidos modificados como agentes terapeuticos.
UA87658C2 (uk) * 2000-05-05 2009-08-10 Апплайд Резеч Системз Арс Холдинг Н.В. Застосування il-18 як діагностичного маркера серцевої недостатності
PE20011350A1 (es) * 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
CZ20024085A3 (cs) * 2000-06-15 2003-05-14 Smithkline Beecham Corporation Způsob přípravy fyziologicky aktivního IL-18 polypeptidu
WO2002032374A2 (en) * 2000-10-18 2002-04-25 Immunex Corporation Methods for treating il-18 mediated disorders
EP2325205A3 (en) 2000-12-28 2011-10-12 Altus Pharmaceuticals Inc. Crystals of whole antibodies and fragments thereof and methods for making and using them
CA2435466C (en) 2001-01-29 2012-04-03 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Use of il-18 inhibitors for the treatment and/or prevention of heart disease
ATE528987T1 (de) * 2001-07-12 2011-11-15 Taiho Pharmaceutical Co Ltd Il-18 transgenes tier
ME00548B (me) * 2002-03-22 2011-10-10 Serono Lab Korišćenje inhibitora il-18 za liječenje i/ili prevenciju perifernih vaskularnih bolesti
US7253260B2 (en) * 2002-04-17 2007-08-07 Smithkline Beecham Corporation Human IL-18 crystal structure
US20060177871A1 (en) * 2002-08-13 2006-08-10 Janson Cheryl A Murine IL-18 crystal structure
US7279155B2 (en) * 2002-10-08 2007-10-09 Ares Trading S.A. Method of treatment using a cytokine able to bind IL-18BP to inhibit the activity of a second cytokine
WO2004094020A2 (en) * 2003-04-17 2004-11-04 Fluidigm Corporation Crystal growth devices and systems, and methods for using same
KR100988129B1 (ko) * 2003-04-30 2010-10-18 쥬리디컬 파운데이션 더 케모-세로-쎄라퓨틱 리서치 인스티튜트 인간 항인간 인터루킨-18 항체와 그 단편, 및 이들의이용방법
SI1622939T1 (sl) * 2003-05-13 2012-06-29 Merck Serono Sa Akrivne variante il-18 vezavnega proteina in medicinske uporabe le-tega
CA2535859A1 (en) * 2003-08-14 2005-03-03 Dyax Corp. Endotheliase-2 ligands
GB0323965D0 (en) * 2003-10-13 2003-11-19 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic compositions
US7968684B2 (en) * 2003-11-12 2011-06-28 Abbott Laboratories IL-18 binding proteins
PL1720979T3 (pl) * 2004-03-01 2008-03-31 Ares Trading Sa Zastosowanie podłoża pozbawionego surowicy do hodowli komórkowej do wytwarzania IL-18BP w komórkach ssaków
US20080090766A1 (en) * 2004-03-11 2008-04-17 Tomoaki Hoshino Preventive or therapeutic agents for diseases including interleukin-18 inhibitor as an active ingredient
US7557084B2 (en) * 2004-03-31 2009-07-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. IL-18 specific polypeptides and therapeutic uses thereof
FI116804B (fi) * 2004-05-18 2006-02-28 Ekspansio Engineering Ltd Oy Materiaalikappaleiden eri suuntiin osoittavien pintojen optinen tarkastus
CA2569795C (en) * 2004-06-29 2013-08-13 Ares Trading S.A. Process for the purification of il-18 binding protein
US7887802B2 (en) * 2004-07-16 2011-02-15 Atsuo Sekiyama IL-18 receptor antagonist and pharmaceutical composition containing the antagonist
ES2372728T3 (es) * 2004-08-20 2012-01-25 Glaxosmithkline Llc Cicatrización de heridas mediante la administración de il-18 humana.
AU2006254103B2 (en) * 2005-06-03 2012-09-06 Ares Trading S.A. Production of recombinant IL-18 binding protein
US7612181B2 (en) * 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
US7615220B2 (en) * 2006-04-07 2009-11-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. High affinity human antibodies to human IL-18 receptor
PE20090190A1 (es) * 2007-03-23 2009-03-22 Smithkline Beecham Corp Combinacion de anticuerpos anti-cd20 y polipeptidos de il-18

Also Published As

Publication number Publication date
NO20023788L (no) 2002-10-09
CL2012001063A1 (es) 2013-06-21
EP1257585A2 (en) 2002-11-20
EP2338515A2 (en) 2011-06-29
EP2338515A3 (en) 2011-11-16
EP2332579A2 (en) 2011-06-15
KR20030021153A (ko) 2003-03-12
AR027404A1 (es) 2003-03-26
TW201036638A (en) 2010-10-16
HUP0300423A2 (hu) 2003-06-28
TWI335336B (sk) 2011-01-01
BR0108188A (pt) 2003-02-25
EP2360184A3 (en) 2011-11-16
IL151044A0 (en) 2003-04-10
KR20110032012A (ko) 2011-03-29
EP2360184A2 (en) 2011-08-24
US7767207B2 (en) 2010-08-03
AU2011201536A1 (en) 2011-04-28
KR100951067B1 (ko) 2010-04-07
AU2006252098B9 (en) 2011-04-14
MY146017A (en) 2012-06-15
AR077568A2 (es) 2011-09-07
KR101111103B1 (ko) 2012-02-13
US20130101595A1 (en) 2013-04-25
KR20090078372A (ko) 2009-07-17
KR20120011898A (ko) 2012-02-08
TW201305214A (zh) 2013-02-01
WO2001058956A2 (en) 2001-08-16
CN1461310B (zh) 2013-06-12
CN102206277A (zh) 2011-10-05
AU2011201536B2 (en) 2013-07-04
US20110008357A1 (en) 2011-01-13
CN1461310A (zh) 2003-12-10
CA2800450A1 (en) 2001-08-16
IL206980A0 (en) 2010-12-30
HUP0300423A3 (en) 2008-07-28
NZ520392A (en) 2005-04-29
PL356836A1 (en) 2004-07-12
CN102504024A (zh) 2012-06-20
CA2399148A1 (en) 2001-08-16
AU2006252098B2 (en) 2011-02-24
AU2006252098A1 (en) 2007-01-11
BG107045A (bg) 2003-05-30
US20100104563A1 (en) 2010-04-29
MXPA02007756A (es) 2004-09-10
JP2012139224A (ja) 2012-07-26
WO2001058956A3 (en) 2002-03-07
NO20023788D0 (no) 2002-08-09
BG111004A (bg) 2011-11-30
JP2004500086A (ja) 2004-01-08
TWI373343B (en) 2012-10-01
EP2332579A3 (en) 2011-09-21
ZA200206266B (en) 2003-11-06
AU2001236807A1 (en) 2001-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK12942002A3 (sk) Protilátky viažuce ľudský interleukín-18, spôsoby ich výroby a použitia
TWI339209B (en) Human antibodies that bind human il-12 and methods for producing
BG66209B1 (bg) Методи за получаване на антитела с двойна специфичност
JP2010513529A (ja) ヒトｉｌ−１２を結合するヒト抗体及び製造方法
JP2012139223A (ja) Ｉｌ−１８結合タンパク質
AU2013224707A1 (en) Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using

Legal Events

Date Code Title Description
FC9A Refused patent application