TW201625668A

TW201625668A - 作為胜肽性雙重ｇｌｐ－１／昇糖素受體激動劑之艾塞那肽－４衍生物

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Publication number: TW201625668A
Application number: TW104110615A
Authority: TW
Inventors: 馬汀博薩特; 洛夫艾維特; 安卓斯伊維斯; 托斯登哈克; 席格佛萊德史丹哲林; 麥可維格納
Original assignee: 賽諾菲公司
Priority date: 2014-04-07
Filing date: 2015-04-01
Publication date: 2016-07-16
Also published as: SI3129395T1; CN106414486B; EP3129395A1; BR112016022754A2; AU2015243610B2; KR20160142322A; CN106414486A; MX2016013244A; HRP20190388T1; US9775904B2; CA2944682A1; RU2016142018A; RU2016142018A3; JP6535026B2; JP2017519718A; IL247834A0; US20150315260A1; SG11201607646UA; WO2015155139A1; EP3129395B1

Abstract

本發明是有關於雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑，及其例如在治療包括糖尿病與肥胖症之代謝症候群的病症，以及減少食物攝取過量的醫學用途。

Description

作為胜肽性雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑之艾塞那肽-4衍生物

本發明是有關於雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑，及其例如於治療代謝症候群的病症(包括糖尿病及肥胖症)以及用於降低食物攝取過度的醫學用途。這些雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑顯示對GIP受體的活性降低，俾以降低低血糖症的風險並且在結構上是衍生自艾塞那肽-4，其為一種純GLP-1受體激動劑。

Pocai等人(Obesity 2012；20：1566-1571；Diabetes 2009,58,2258)以及Day等人(Nat Chem Biol 2009；5：749)描述例如藉由將昇糖素樣胜肽-1(GLP-1)與昇糖素的作用合併在一個分子中的GLP-1與昇糖素受體的雙重激動劑，其產生優於純GLP-1激動劑之抗糖尿病作用以及顯著降低體重效果的治療方式，尤其是因為昇糖素受體媒介的飽足感與能量消耗增加。

Holst(Physiol.Rev.2007,87,1409)與Meier(Nat.Rev.Endocrinol.2012,8,728)描述GLP-1受體激動劑(諸如GLP-1、利拉魯肽(liraglutide)與艾塞那肽-4)在T2DM患者中藉由減少空腹與餐後葡萄糖(FPG與PPG)而具有3種主要的藥理學活性來增進血糖控制：(i)增加葡萄糖依賴性胰島素分泌(改善的第一期與第二期)、(ii)在高血糖狀態下的昇糖素壓抑活性、(iii)延遲胃排空速率，使得餐食衍生的葡萄糖吸收延遲。

GLP-1(7-36)-醯胺的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：2。

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGR-NH₂

利拉魯肽是一種經化學修飾的市售GLP-1類似物，其中在其他修飾中，脂肪酸連結至位置20中的離胺酸，使得作用持續時間延長(Drucker DJ et al,Nature Drug Disc.Rev.9,267-268,2010；Buse,J.B.et al.,Lancet,374：39-47,2009)。

利拉魯肽的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：4。

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-)EFIAWLVRGRG-OH

昇糖素是一個具有29個胺基酸的胜肽，當循環葡萄糖為低時，其被釋放至血流中。昇糖素的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：3。

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH

在低血糖期間，當血糖位準掉至正常值以下時，昇糖素發出訊號給肝臟以分解肝醣並且釋放出葡萄糖，使得血糖位準增加達到正常位準。近來的出版物已暗示，昇糖素對於降低體脂質量、降低食物攝取，以及增加能量消耗有額外增益效果(KM Heppner,Physiology & Behavior 2010,100,545-548)。

GIP(葡萄糖-依賴性促胰島素多肽)是一個具有42個胺基酸的胜肽，其在食物攝取之後從小腸K細胞被釋放。GIP及GLP-1是兩種腸內分泌細胞衍生之關於腸促胰島素效用的激素，是對口服葡萄糖測試有超過70%胰島素反應的主因(Baggio LL,Drucker DJ.Biology of incretins：GLP-1 and GIP.Gastroenterology 2007；132：2131-2157)。

GIP的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：5。

YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ-OH

基於GLP-1或昇糖素的結構，且結合並活化昇糖素與GLP-1受體(Hjort et al.Journal of Biological Chemistry,269,30121-30124,1994；Day JW et al,Nature Chem Biol,5：749-757,2009)與抑制體重增加和降低食物攝取的胜肽描述在專利申請案WO 2008/071972、WO 2008/101017、WO 2009/155258、WO 2010/096052、WO 2010/096142、WO 2011/075393、WO 2008/152403、WO 2010/070251、WO 2010/070252、WO 2010/070253、WO 2010/070255、WO 2011/160630、WO 2011/006497、WO 2011/087671、WO 2011/087672、WO 2011/117415、WO 2011/117416、WO 2012/177443WO 2012/177444、WO 2012/150503、WO 2013/004983、WO 2013/092703、WO 2014/041195以及WO 2014/041375中，該等專利申請案的內容併入本文做為參考資料。體重降低顯示優於純GLP-1激動劑。

此外，不僅活化GLP-1與昇糖素受體，還活化GIP受體的三重共激動劑胜肽描述於WO 2012/088116與VA Gault等人(Biochem Pharmacol,85,16655-16662,2013；Diabetologia,56,1417-1424,2013)中。

艾塞那肽-4是一個具有39個胺基酸的胜肽，其由毒蜥(吉拉毒蜥)的唾腺所製造(Eng J.et al.,J.Biol.Chem.,267：7402-05,1992)。艾塞那肽-4是GLP-1受體的活化因子，但它顯示GIP受體的低活化作用且不會活化昇糖素受體(參見表1)。

艾塞那肽-4的胺基酸序列顯示為SEQ ID NO：1。

HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2

艾塞那肽-4被發現到與GLP-1共有一些葡萄糖調節作用。臨床與非臨床研究已顯示，艾塞那肽-4具有數種有益的抗糖尿病特性，包括在胰島素合成與分泌時的葡萄糖依賴性增高、昇糖素分泌的葡萄糖依賴性壓抑、減緩胃排空、食物攝取與體重的減少，以及β細胞質量與β細胞功能標記的增加(Gentilella R et al.,Diabetes Obes Metab.,11：544-56,2009；Norris SL et al,Diabet Med.,26：837-46,2009；Bunck MC et al,Diabetes Care., 34：2041-7,2011)。

這些效用不僅對糖尿病有益，對於罹患肥胖症的患者也有益。肥胖症患者有更高的風險得到糖尿病、高血壓、高血脂、心血管疾病與肌肉骨骼疾病。

相對於GLP-1，艾塞那肽-4對於二肽基胜肽酶-4(DPP4)的切割更為具有抗性，使其在活體內有較長的半衰期與作用持續時間(Eng J.,Diabetes,45(Suppl 2)：152A(abstract 554),1996)。

當與GLP-1、昇糖素或調酸素相比較時，艾塞那肽-4也顯示對於中性胜肽內切酶(NEP)的分解更為穩定(Druce MR et al.,Endocrinology,150(4),1712-1721,2009)。但是，因為在位置14中的甲硫胺酸氧化(Hargrove DM et al.,Regul.Pept.,141：113-9,2007)以及在位置28中的天冬醯胺酸的去醯胺化與異構化(WO 2004/035623)，艾塞那肽-4在化學上是不穩定的。

本發明化合物為艾塞那肽-4衍生物，除了原有艾塞那肽-4對GLP-1受體的激動活性以外，還顯示對昇糖素受體的激動活性，且其(尤其是)具有下列修飾：在位置14處於側鏈中帶有-NH₂基團的胺基酸，其進一步經親脂性殘基置換(例如與連接子結合的脂肪酸)；以及在位置27處的Aib。

Bloom等人(WO 2006/134340)揭示結合並活化昇糖素與GLP-1受體兩者的胜肽能夠從昇糖素與艾塞那肽-4被構築為混合分子，其中N-端部分(例如殘基1-14或1-24)源於昇糖素，而C-端部分(例如殘基15-39或25-39)源於艾塞那肽-4。此等胜肽在位置10-13中包含昇糖素的胺基酸模組YSKY。Krstenansky等人(Biochemistry,25,3833-3839,1986)證實，昇糖素的這些殘基10-13對於其受體交互作用以及活化腺苷酸環化酶的重要性。

在本發明中所述的艾塞那肽-4衍生物中，下面殘基中的數者不同於昇糖素以及WO 2006/134340中所述的胜肽。尤其是殘基Tyr10以及Tyr13，其已知貢獻昇糖素的纖維化(DE Otzen,Biochemistry,45,14503-14512,2006)，在位置10中被Leu取代而在位置13被Gln(一種非芳香族極性胺基酸)取代。這個取代，尤其是結合在位置23的異白胺酸與在位置24的麩胺酸，會使得艾塞那肽-4衍生物具有增強的強力生物物理特性，如在溶液中的溶解度或聚集行為。在艾塞那肽-4類似物的位置13中，具有極性胺基酸之芳香族胺基酸的非守恆性取代出乎意外地產生對昇糖素受體具有高度活性之對GLP-1受體維持活性的胜肽(亦參見WO2013/186240)。

此外，吾人意外發現，相較於如同原有艾塞那肽-4中在位置27處帶有Lys的對應衍生物，在位置27中帶有Aib胺基酸的化合物顯示對GIP受體的活性降低，如在實例5、表8中所示。GIP受體的活化減低是相當有利的，因為有在一些情況下糖尿病患體內GIP位準高而導致低血糖事件更加頻繁的文獻報導(T McLaughlin et al.,J Clin Endocrinol Metab,95,1851-1855,2010；A Hadji-Georgopoulos,J Clin Endocrinol Metab,56,648-652,1983)。

另外，本發明化合物為在位置14中帶有脂肪酸經醯化殘基的艾塞那肽-4衍生物。當與對應未醯化艾塞那肽-4衍生物(例如彼等顯示於實例5、表7中者)相比時，這個在位置14中的脂肪酸官能化造成艾塞那肽-4衍生物不僅對GLP-1受體具有高度活性，對昇糖素受體也有高度活性。再者，這個修飾會使得藥物動力學型態有所改善。

於文獻(Murage EN et al.,Bioorg.Med.Chem.16(2008),10106-10112)中描述，在位置14處帶有乙醯化離胺酸的GLP-1類似物顯示相較於天然GLP-1顯著降低對GLP-1受體的效力。

本發明化合物對中性胜肽內切酶(NEP)以及二肽基胜肽酶-4(DPP4)的切割更具有抗性，使得當與天然GLP-1和昇糖素相比時，在活體內的半衰期及作用持續時間更長。

本發明化合物較佳地不僅在中性pH下可溶解，在pH 4.5下亦可溶解。這個特性有效容許與胰島素或胰島素衍生物，且較佳與基礎胰島素(像是甘精胰島素(glargine)/Lantus®)一起共調配用於組合療法。

發明摘述

原有艾塞那肽-4是一種純GLP-1受體激動劑，對於昇糖素受體沒有活性而對GIP受體的活性低。基於原有艾塞那肽-4的結構，本文提供艾塞那肽-4衍生物，其相較於SEQ ID NO：1在十個或更多個位置處有所差異，其中該等差異增強對昇糖素受體的激動活性。在其他置換中，在位置14處的甲硫胺酸被側鏈中帶有-NH₂基團的胺基酸取代，其進一步經親脂性殘基(例如與連接子結合的脂肪酸)置換。此外，吾人出乎意料發現到，相較於GLP-1受體活性，在位置27處的離胺酸經Aib取代會致使GIP受體活性降低。GIP受體活化減低是相當有利的，因為有在一些情況下糖尿病患體內GIP位準高而導致低血糖事件更加頻繁的文獻報導(T McLaughlin et al.,J Clin Endocrinol Metab,95,1851-1855,2010；A Hadji-Georgopoulos,J Clin Endocrinol Metab,56,648-652,1983)。

本發明提供具有式(I)的胜肽性化合物：H₂N-His-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-X14-Asp-Glu-Gln-Arg-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Aib-X28-X29-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-R¹ (I)

X14代表具有官能化-NH₂側鏈基團的胺基酸殘基，選自由Lys、Orn、Dab或Dap組成之群，其中-NH₂側鏈基團經-Z-C(O)-R⁵官能化，其中Z代表呈所有立體異構形式的連接子，且R⁵是包含至多50個碳原子以及選自N與O之雜原子的部分，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹為NH₂或OH，或其鹽或溶劑合物。

本發明化合物為GLP-1及昇糖素受體激動劑，如透過其等在方法中所述分析系統中能夠刺激細胞內cAMP形成的觀察結果所決定。

依據本發明化合物的另一具體例，尤其是在位置14處帶有進一步經親脂性殘基置換的離胺酸者，相較於GLP-1(7-36)醯胺，對GLP-1受體展現至少0.1%(亦即EC₅₀<700pM)、更佳1%(亦即EC₅₀<70pM)、更佳 5%(亦即EC₅₀<14pM)以及又更佳10%(亦即EC₅₀<7pM)的相對活性。此外，相較於天然昇糖素，該等化合物對昇糖素受體展現至少0.09%(亦即EC₅₀<1111pM)、更佳0.45%(亦即EC₅₀<222pM)以及又更佳0.9%(亦即EC₅₀<111pM)的相對活性。

術語「活性」如本文所用，較佳意指一個化合物活化人類GLP-1受體以及人類昇糖素受體的能力。更佳地，術語「活性」如本文所用，意指一個化合物刺激細胞內cAMP形成的能力。術語「相對活性」如本文所用，應理解為意指一個化合物相較於另一個受體激動劑或相較於另一個受體以某個比率活化受體的能力。受體受到激動劑而活化(例如藉由測量cAMP位準)是如本文所述來進行測定，例如在實例4中所述。

本發明化合物較佳對hGLP-1受體具有450pmol或更低、較佳200pmol或更低、更佳100pmol或更低、更佳50pmol或更低、更佳25pmol或更低、更佳10pmol或更低、更佳8pmol或更低以及更佳5pmol或更低的EC₅₀，及/或對h昇糖素受體具有500pmol或更低，較佳300pmol或更低、較佳200pmol或更低、更佳150pmol或更低的EC₅₀，及/或對hGIP受體具有750pmol或更高，較佳1500pmol或更高；更佳2000pmol或更高的EC₅₀。更佳為對hGLP-1及h昇糖素受體的EC₅₀為250pmol或更低、較佳200pmol或更低、更佳150pmol或更低。對hGLP-1受體、h昇糖素受體與hGIP受體的EC₅₀可如本文方法中所述測定並用於產生實例4、表6中所述結果。

本發明化合物能夠降低腸通過、增加胃內容物及/或減少患者的食物攝取。本發明化合物的這些活性可在習於技藝者熟知還有如本文在方法中所述的動物模型中進行評估。本發明化合物能夠降低患者的血糖位準，及/或降低患者的HbA1c位準。本發明化合物的這些活性可在習於技藝者熟知還有如本文在方法中所述的動物模型中進行評估。

本發明化合物能夠降低患者的體重。本發明化合物的這些活性可在習於技藝者熟知還有本文在方法與實例7中所述的動物模型中進行評估。

發現到，式(I)的胜肽性化合物，尤其是在位置14處帶有進一步經親脂性殘基置換的離胺酸者，相較於具有原有甲硫胺酸(來自艾塞那肽-4)或在位置14處帶有白胺酸的衍生物，顯示昇糖素受體活化增加(參見表7)。另外，甲硫胺酸的氧化(活體外或活體內)是不可能的。

也發現到，相較於如同原有艾塞那肽-4中在位置27處帶有Lys的對應衍生物，在位置27中帶有Aib胺基酸的化合物顯示對GIP受體的活性降低，如實例5、表8中所示。GIP受體的活化減低是相當有利的，因為有在一些情況下糖尿病患體內GIP位準高而導致低血糖事件更加頻繁的文獻報導(T McLaughlin et al.,J Clin Endocrinol Metab,95,1851-1855,2010；A Hadji-Georgopoulos,J Clin Endocrinol Metab,56,648-652,1983)。

在一個具體例中，本發明化合物在酸性及/或生理pH值下具有高溶解度，例如在25℃、pH 4.5及/或在pH 7.4下，在另一個具體例中，溶解度為至少1mg/ml以及在一個特定具體例中溶解度為至少5mg/ml。

此外，本發明化合物當儲存於溶液中時較佳具有高穩定性。用於測定穩定性的較佳分析條件為在40℃下於pH 4.5或pH 7.4的溶液中儲存歷時7天。藉由如實例中所述的層析分析測定胜肽餘量。較佳地，在40℃下於pH 4.5或pH 7.4的溶液中7天之後，胜肽餘量為至少75%，更佳至少80%、又更佳至少85%及又更佳至少90%。

較佳地，本發明化合物包含胜肽部分，其為39個胺基羧酸的線性序列，具體而言是藉由胜肽(亦即甲醯胺鍵)連結之α-胺基羧酸。

在一個具體例中，R¹為NH₂且在又一個具體例中R¹為OH。

-Z-C(O)-R⁵基團的特佳實例列於下表2中，其選自於：(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-、 (2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基-十七醯基)胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基。

較佳為立體異構物，尤其是此等基團的鏡像異構物，S-鏡像異構物或R-鏡像異構物。術語「R」在表2中意欲表示在胜肽骨架處的-Z-C(O)-R⁵附接位點，亦即Lys的ε-胺基基團。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經基團-Z-C(O)R⁵官能化，其中Z代表選自γE、γE-γE、AEEAc-AEEAc-γE及AEEAc-AEEAc-AEEAc的基團，且R⁵代表選自十五醯基、十七醯基或16-羧基-十六醯基的基團。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經基團-Z-C(O)R⁵官能化，其中Z代表選自γE、γE-γE、AEEAc-AEEAc-γE及AEEAc-AEEAc-AEEAc的基團，且R⁵代表選自十五醯基或十七醯基的基團。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自Gly與D-Ala的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自Gly與D-Ala的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表選自Ala、Ser與Lys的胺基酸殘基，X29代表選自Gly與D-Ala的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基-十七醯基)胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基官能化，X28代表Ala，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中，X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Ser，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Lys，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表D-Ala，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基 -乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基-十七醯基)胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基官能化，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表Gly，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-官能化，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表Gly，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自Gly與D-Ala的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中 X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，或其鹽或溶劑合物。

又一個具體例是有關於一群化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，或其鹽或溶劑合物。

式(I)胜肽性化合物的特定實例為SEQ ID NO：6-19之化合物，及其鹽或溶劑合物。

式(I)胜肽性化合物的特定實例為SEQ ID NO：6-18之化合物，及其鹽或溶劑合物。

式(I)胜肽性化合物的特定實例為SEQ ID NO：7與8之化合物，及其鹽或溶劑合物。

在某些具體例中，亦即當式(I)化合物包含遺傳編碼的胺基酸殘基時，本發明進一步提供編碼該化合物的核酸(其可為DNA或RNA)、包含該核酸的表現載體，以及含有該核酸或表現載體的宿主細胞。

在又一個態樣中，本發明提供包含本發明化合物與載劑混合的組成物。在較佳具體例中，該組成物為醫藥上可接受的組成物，且該載劑為在醫藥上可接受的載劑。本發明化合物可以呈鹽的形式，例如醫藥上可接受的鹽或溶劑合物，例如水合物。在又一個態樣中，本發明提供用於醫學治療，尤其是人類醫學中之方法的組成物。

在某些具體例中，該核酸或表現載體可在例如基因療法中用作為治療劑。

式(I)化合物適用於治療用途而不需要額外的治療有效劑。然而，在其他具體例中，如「組合療法」中所述與至少一種額外治療活性劑一起使用該等化合物。

式(I)化合物尤其適用於治療或預防由醣類及/或脂肪代謝混亂所致、與其相關及/或伴隨其發生的疾病或病症，例如用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、葡萄糖耐受不良、第1型糖尿病、肥胖症與代謝症候群。此外，本發明化合物尤其適用於治療或預防退化性疾病，尤其是神經退化性疾病。

所述化合物尤其用於預防增重或促進減重。「預防」表示當相較於治療不存在時抑制或降低，但不必然表示病症完全中止。

本發明化合物可使得食物攝取減少及/或能量消耗增加，在體重方面產生可觀察到的影響。

本發明化合物對循環膽固醇位準具有益的效用而與其對體重的影響無關，進而能夠改善脂肪位準，尤其是LDL與HDL位準(例如增加HDL/LDL比率)。

因此，本發明化合物可用於任何由體重過重所致或特徵在於體重過重之病況的直接或間接療法，諸如治療及/或預防肥胖症、病態肥胖症、肥胖症相關的發炎、肥胖症相關的膽囊疾病、肥胖症引起的睡眠呼吸中止。它們也可以用於治療與預防代謝症候群、糖尿病、高血壓、致動脈粥樣硬化性血脂異常、動脈粥樣硬化、動脈硬化症、冠心病或中風。它們在這些病況中的效用是因為其對體重的影響或有相關，或可能與其無關。

較佳的醫學用途包括在第2型糖尿病中延遲或預防疾病進展、治療代謝症候群、治療肥胖症或預防過重、用以減少食物攝取、增加能量消耗、降低體重、延遲從葡萄糖耐受不良(IGT)進展至第2型糖尿病；延遲從第2型糖尿病進展至需要胰島素的糖尿病；調節食慾；引起飽足感；在成功減重後預防體重又再增加；治療與過重或肥胖症有關的疾病或狀態；治療暴食症；治療狂食；治療動脈粥樣硬化、高血壓、第2型糖尿病、IGT、血脂異常、冠心病、脂肪肝、治療貝他-阻斷劑中毒、用以抑制胃腸道活動、使用諸如X射線、CT以及NMR掃描的技術用於與胃腸道的研究結合。

更多較佳醫學用途包括治療或預防退化性病症，具體而言神經退化性病症，諸如阿茲海默症、帕金森氏症、亨廷頓氏症、共濟失調(例如脊髓小腦共濟失調)、甘迺迪氏症、強直型肌肉萎縮症、路易體癡呆症、多系統性萎縮症、肌萎縮性側索硬化、原發性側索硬化、脊椎肌肉萎縮症、普恩蛋白相關的疾病(例如庫賈氏病)、多發性硬化症、毛細管擴張、巴登氏病、皮質基底核退化症、亞急性脊髓聯合退化、運動失調、泰薩斯病、中毒性腦病變、嬰兒雷夫敘姆病、雷夫敘姆病、神經棘細胞症、尼曼匹克症、萊姆病、Machado-Joseph病、山多夫氏病、Shy-Drager症候群、刺蝟搖擺不定症、蛋白質構像病、大腦β-澱粉樣血管病變、青光眼的視網膜神經節細胞退化、共核蛋白病、Tau蛋白病變、額顯葉退化(FTLD)、癡呆症、cadasil症候群、帶有類澱粉症的遺傳性腦出血、亞歷山大病、seipinopathies、家族性類澱粉神經病變、老年全身性類澱粉症、絲胺酸蛋白病變(serpinopathies)、AL(輕鏈)類澱粉症(原發性全身性類澱粉症)、AH(重鏈)類澱粉症、AA(繼發性)類澱粉症、主動脈中層類澱粉症、ApoAI類澱粉症、ApoAII類澱粉症、ApoAIV類澱粉症、芬蘭型家族性類澱粉症(FAF)、溶菌酶類澱粉症、纖維蛋白原類澱粉症、透析類澱粉症、包涵體肌炎/肌病、白內障、帶有視紫質突變的色素性視網膜炎、髓質性甲狀腺癌、心房類澱粉症、垂體催乳素瘤、遺傳性格子狀角膜營養不良、苔蘚狀皮膚類澱粉症、馬洛裏小體、角膜乳鐵蛋白類澱粉症、肺泡蛋白沉著症、齒源性(平博氏)腫瘤類澱粉症、囊腫纖維化、鎌狀細胞病或重病性肌病(CIM)。

發明詳細說明定義

本發明胺基酸序列含有習知用於天然胺基酸的一個字母代碼以及三個字母代碼，還有就其他胺基酸而言普遍認可的三個字母代碼，諸如Aib(α-胺基異丁酸)。

術語「原有艾塞那肽-4」意指具有序列HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH₂(SEQ ID NO：1)的原有艾塞那肽-4。

本發明提供如上所定義的胜肽性化合物。

本發明胜肽性化合物包含胺基羧酸藉由胜肽(亦即甲醯胺鍵)連結的線性骨架。除非另有指明，否則胺基羧酸較佳為α-胺基羧酸且更佳為L-α-胺基羧酸。胜肽性化合物較佳包含具有39個胺基羧酸的骨架序列。

本發明胜肽性化合物可具有未經修飾的側鏈，但在側鏈中之一者處帶有至少一個修飾。

為免疑問，在本文提供的定義中，胜肽性部分(I)的序列通常希望在說明容許變異之彼等位置中的至少一者處是不同於原有艾塞那肽-4。胜肽部分(I)內的胺基酸可考慮以習知N端至C端方向從1至39連續編號。因此，提及胜肽性部分(I)內的「位置」時應理解為如提及原有艾塞那肽-4與其他分子中的位置，例如在艾塞那肽-4中，His在位置1處，Gly在位置2處，...，Met在位置14處，...以及Ser在位置39處。

具有-NH₂側鏈基團的胺基酸殘基(例如Lys、Orn、Dab或Dap)經官能化，因為-NH₂側鏈基團上的至少一個H原子經-Z-C(O)-R⁵取代，其中R⁵包含一親脂性部分，例如非環狀線性或分支(C₈-C₃₀)飽和或不飽和烴基團，其未經置換或經例如鹵素、-OH及/或CO₂H置換，而Z包含呈所有立體異構形式的連接子，例如包含一或多個(例如1至5個，較佳1、2或3個)選自以下之群之胺基酸連接子基團的連接子：γ-麩胺酸(γE)及AEEAc。較佳基團R⁵包含親脂性部分，例如非環狀線性或分支(C₁₂-C₂₀)飽和或不飽和烴基團，例如十五醯基、十六醯基或十七醯基，其未經置換或經CO₂H置換，更佳為十五醯基、十七醯基或16-羧基-十六醯基。在一個具體例中，胺基酸連接子基團是選自γE、γE-γE、AEEAc-AEEAc-γE及AEEAc-AEEAc-AEEAc。在另一個具體例中，胺基酸連接子基團為γE。在另一個具體例中，胺基酸連接子基團為γE-γE。在另一個具體例中，胺基酸連接子基團為AEEAc-AEEAc-γE。在另一個具體例中，胺基酸連接子基團為AEEAc-AEEAc-AEEAc。

在又一個態樣中，本發明提供一種包含如本文所述之本發明化合物，或其鹽或溶劑合物與載劑混合的組成物。

本發明亦提供本發明化合物用作藥物，尤其是治療如下所述病況的用途。

本發明亦提供一種組成物，其中該組成物為醫藥上可接受之組成物，而該載劑為醫藥上可接受之載劑。

胜肽合成

習於技藝者知道各種不同方法來製備本發明中所述的胜肽。這些方法包括(但不限於)合成方法以及重組基因表現。因此，製備該等胜肽的一個方法是在溶液中或在固體撐體上合成，然後分離並純化。製備胜肽的一個不同方法為在宿主細胞中的基因表現，其中編碼該胜肽的DNA序列已被引入該宿主細胞中。或者，基因表現可以在不使用細胞系統的情況下達致。上述方法也可以任何方式加以組合。

製備本發明之胜肽的一個較佳方法為在適當樹脂上的固相合成。固相胜肽合成是已充分建立的方法學(參見例如：Stewart and Young,Solid Phase Peptide Synthesis,Pierce Chemical Co.,Rockford,Ill.,1984；E.Atherton and R.C.Sheppard,Solid Phase Peptide Synthesis.A Practical Approach,Oxford-IRL Press,New York,1989)。固相合成是藉由將N-端受保護的胺基酸以其羧基端附接至帶有可切割連接子的惰性固體撐體而開始。這個固體撐體可以是容許起始胺基酸偶合的任一種聚合物，例如三苯甲基樹脂、氯三苯甲基樹脂、Wang樹脂或Rink樹脂，其中羧基(或Rink樹脂的甲醯胺)與樹脂的鍵聯對酸敏感(當使用Fmoc策略時)。聚合物撐體必須是在胜肽合成期間α-胺基基團脫除保護作用條件下穩定者。

在第一個胺基酸已被偶合至固體撐體之後，這個胺基酸的α-胺基保護基團被移除。剩餘受保護的胺基酸以胜肽序列所表示的順序使用適當醯胺偶合試劑(例如BOP、HBTU、HATU或DIC(N,N'-二異丙基碳二醯亞胺)/HOBt(1-羥基苯并***))一個接著一個偶合，其中BOP、HBTU與HATU與三級胺鹼一起使用。或者，被釋出的N-端可以經胺基酸以外的基團(例如羧酸等)官能化。

通常，胺基酸的反應性側鏈基團經適當阻斷基團保護。這些保護基團在所要胜肽已組裝之後被移除。它們隨著所要產物從樹脂切除下的同時在相同條件下被移除。保護基團與引入保護基團的程序可以在Protective Groups in Organic Synthesis,3d ed.,Greene,T.W.and Wuts,P.G.M.,Wiley & Sons(New York：1999)中找到。

在一些情況下，帶有可被選擇性移除的側鏈保護基團同時其他側鏈保護基團保持完整將會是合於需要的。在這種情況下，被釋出的官能性可選擇性地被官能化。例如，離胺酸可以用ivDde([1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基環己-1-亞基)-3-甲基丁基)保護基團予以保護(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)，其僅對極親核性鹼(例如DMF(二甲基甲醯胺)中的4%肼)是不穩定的。因此，若N-端胺基基團與所有側鏈官能性以酸不穩定性保護基團予以保護時，則ivDde基團可以選擇性地使用DMF中的4%肼予以移除且對應游離胺基基團可接著被進一步修飾，例如藉由醯化。或者離胺酸可以偶合至經保護的胺基酸，且這個胺基酸的胺基基團則可以脫除保護，產生另一個可被醯化或附接至再一個胺基酸的游離胺基基團。

最後，從樹脂切下胜肽。這可以藉由使用金氏混合物(King’s cocktail)來達致(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。若需要的話，原料接著藉由層析(例如製備型RP-HPLC)被純化。

效力

如本文所用，術語「效力」或「活體外效力」是關於在以細胞為主的分析中，化合物活化GLP-1、昇糖素或GIP之受體的能力的一種度量方法。其以數值表示為「EC50值」，其為化合物在劑量反應實驗中引起半最大反應增加(例如細胞內cAMP形成)的有效濃度。

治療用途

代謝症候群為醫學病症的一種組合，當同時發生時，增加發生第2型糖尿病還有動脈粥樣硬化血管疾病(例如心臟病與中風)的風險。用於代謝症候群的定義醫學參數包括糖尿病、葡萄糖耐受不良、禁食葡萄糖升高、胰島素抗性、尿白蛋白分泌、腹部肥胖、高血壓、三酸甘油酯升高、LDL膽固醇升高與HDL膽固醇降低。

肥胖症是一種醫學病況，其中過量體脂積累至可能對健康與預期餘命具有不利影響的程度，且因為其在成人與兒童中的盛行率增加，變成現代世界死亡的主要可預防病因之一。其增加各種其他疾病的可能性，包括心臟病、第2型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸中止、某些類型的癌症，以及骨關節炎，而且它最通常是由過量攝取食物、能量消耗降低，以及遺傳易感性的組合所致。

糖尿病(diabetes mellitus)，通常簡稱為糖尿病(diabetes)，是一群代謝疾病，其中某人具有高血糖位準(不論是因為身體未能產生足夠胰島素，或因為細胞無法對製造出的胰島素作出反應)。最常見的糖尿病類型為：(1)第1型糖尿病，其中身體無法製造胰島素；(2)第2型糖尿病(T2DM)，其中身體無法適當地使用胰島素，加上隨著時間胰島素缺乏的增加，以及(3)妊娠型糖尿病，其中女性因為懷孕而產生糖尿病。所有形式的糖尿病增加在數年後發生長期併發症的風險。這些長期併發症中的大多數是基於對血管的損傷且可以分成兩類：「大血管"疾病(因為較大血管的動脈粥樣硬化所致)以及「小血管」疾病(因為小血管損傷所致)。大血管疾病病況的實例為缺血性心臟病、心肌梗塞、中風與周邊血管疾病。小血管疾病的實例為糖尿病視網膜病變、糖尿病腎病變，還有糖尿病神經病變。

GLP-1與GIP以及昇糖素的受體是跨膜7次、異三聚體G蛋白偶合受體家族的成員。它們在結構上彼此相關且不僅共有一個明顯程度的序列一致性，還具有相似的配體辨識機制和細胞內訊號傳遞路徑。

類似地，胜肽GLP-1、GIP與昇糖素共有高序列一致性/相似性的區域。GLP-1與昇糖素是由相同的前驅體前原昇糖素所製成，前原昇糖素以組織特異性的方式受到差異加工處理而產生例如腸內分泌細胞的GLP-1以及胰島阿伐細胞中的昇糖素。GIP是衍生自較大的原GIP原激素前軀體且由位於小腸的K細胞合成並釋放。

胜肽性腸促胰島素激素GLP-1與GIP是由腸內分泌細胞對食物反應所分泌，且佔飲食刺激之胰島素分泌至多70%。證據暗示，GLP-1分泌在帶有葡萄糖耐受不良或第2型糖尿病的個體中是降低的，但在這些患者中對GLP-1的反應性仍維持不變。因此，以適當激動劑靶定GLP-1受體對治療代謝病症(包括糖尿病)提供充滿吸引力的方法。GLP-1的受體分布廣泛，主要在胰島、腦、心臟、腎臟與胃腸道中被發現到。在胰臟中，GLP-1以嚴格葡萄糖依賴性的方式藉由增加胰島素從貝他細胞分泌來作用。這個葡萄糖依賴性顯示，活化GLP-1受體不會致使低血糖症。GIP的受體也廣泛地表現在周邊組織中，周邊組織包括胰島、脂肪組織、胃、小腸、心臟、骨、肺臟、腎臟、睪丸、腎上腺皮質、垂體、內皮細胞、氣管、脾臟、胸腺、甲狀腺與腦。與其作為腸促胰島素激素的生物功能相同，胰臟β-細胞在人類體內表現最高位準的GIP受體。有一些GIP-受體媒介訊號傳遞的臨床證據在帶有T2DM的患者中顯示受到障礙，但GIP-作用顯示為可逆且可以利用改善糖尿病狀態而獲得回復。儘管有一些GIP作用於胰島素分泌為葡萄糖依賴性的報導。但是文獻中也有高GIP血漿位準可能導致低血糖症更加頻繁的報導(T McLaughlin et al.,J Clin Endocrinol Metab,95,1851-1855,2010；A Hadji-Georgopoulos,J Clin Endocrinol Metab,56,648-652,1983)。此外，在肥胖個體中報導血漿GIP位準比正常值更高，暗示GIP可能誘發肥胖症以及胰島素抗性(W Creutzfeldt et al.Diabetologia.1978,14,15-24)。這受到切除GIP受體可防止彼等病況的報導所支持：食用高脂飲食的GIP受體剔除小鼠相較於野生型小鼠實際上顯示壓抑體重(K Miyawaki et al.Nat Med.2002,8,738-42)，且長期投與GIP受體拮抗劑(Pro3)GIP在小鼠中也防止肥胖症及胰島素抗性(VA Gault et al.Diabetologia.2007,50,1752-62)。因此，本發明之目的在於提供對GIP受體的活性減少的雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑。

昇糖素是一個具有29個胺基酸的胜肽激素，它是由胰臟阿伐細胞所製造並且在循環葡萄糖低時被釋放至血流中。昇糖素的一個重要生理角色是在肝臟中刺激葡萄糖輸出，對胰島素來說，就活體內維持葡萄糖恆定狀態是一個提供重要相對調節機制的過程。

但是，昇糖素受體也在肝臟外組織(諸如腎臟、心臟、脂肪細胞、淋巴母細胞、腦、視網膜、腎上腺與胃腸道)中表現，暗示在葡萄糖恆定以外有更為廣泛的生理學角色。因此，近來的研究已報導，昇糖素對於能量管理在治療上具有正向的影響，能量管理包括刺激能量消耗以及生熱作用，伴有減少食物攝取以及體重減輕。總之，刺激昇糖素受體在治療肥胖症與代謝症候群方面可能有用。

調酸素是一種由帶有八個胺基酸之涵括C-端延伸部分的昇糖素構成的胜肽激素。像是GLP-1與昇糖素，其預先形成為前原昇糖素且以組織特異性的方式被小腸的內分泌細胞切割並分泌。調酸素已知會刺激GLP-1與昇糖素的受體並因而是雙重激動劑的原型。

如同GLP-1已知其抗糖尿病效用，GLP-1與昇糖素均已知其壓抑食物攝取效用，而昇糖素也是額外能量消耗的中介因子，可想像兩種激素的活性組合於一個分子中可以產生強效藥物供治療代謝症候群，以及具體而言其構成要素糖尿病和肥胖症之用。

因此，本發明化合物可用於治療葡萄糖耐受不良、胰島素抗性、前糖尿病、禁食葡萄糖增加(高血糖症)、第2型糖尿病、高血壓、血脂異常、動脈硬化症、冠心病、周邊動脈疾病、中風或此等個別疾病構成要素之任何組合。

此外，它們可用於控制食慾、進食以及熱量攝取、增加能量消耗、預防增重、促使減重、減少體重過重以及治療肥胖症(包括病態肥胖症)。

本發明化合物為GLP-1受體以及昇糖素受體的激動劑(例如「雙重激動劑」)，其中對GIP受體的活性減少且可透過容許同時治療糖尿病及肥胖症提供解決靶定代謝症候群之臨床需求的治療益處。

可使用本發明化合物治療的更多疾病狀態和健康病況為肥胖症相關的發炎、肥胖症相關的膽囊病及肥胖症引起的睡眠呼吸中止。

儘管所有此等病況可能與肥胖症直接或間接相關，本發明化合物的效用可以整體或部分經由對體重的影響或與其無涉來進行媒介。

此外，待治療的疾病為神經退化性疾病，諸如阿茲海默症或帕金森氏症，或如上述的其他退化性疾病。

在一個具體例中，化合物可用於治療或預防高血糖症、第2 型糖尿病、肥胖症。

相較於GLP-1、昇糖素以及調酸素，艾塞那肽-4具有有益的物理化學特性，諸如在溶液中與在生理條件下的溶解度以及穩定性(包括對酵素(諸如DPP4或NEP)分解的酶穩定性)，其在活體內產生更長的作用持續期間。因此，純GLP-1受體激動劑艾塞那肽-4可作為良好的起始骨架，以獲得具有雙重GLP-1/昇糖素受體激動作用的艾塞那肽-4類似物。

然而，艾塞那肽-4也顯示為化學不穩定的，因為在位置14中的甲硫胺酸氧化以及在位置28中的天冬醯胺酸的去醯胺化和異構化。因此，穩定性可藉由置換在位置14處的甲硫胺酸，且避免已知容易經由天冬醯胺形成而分解的序列(尤其是在位置28與29處的Asp-Gly或Asn-Gly)進一步獲得改善。

醫藥組成物

術語「醫藥組成物」指明一種含有當混合且投與時可相容之成分的混合物。醫藥組成物可包括一或多種醫學藥物。此外，醫藥組成物可包括載劑、緩衝劑、酸化劑、鹼化劑、溶劑、佐劑、張力調節劑、柔軟劑、膨脹劑、防腐劑、物理與化學安定劑(例如界面活性劑)、抗氧化劑與其他組分，不論這些組分被視為是活性或非活性成分。對於習於製備醫藥組成物者可找到的指南為例如在Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins與R.C.Rowe et al(Ed),Handbook of Pharmaceutical Excipients,PhP,May 2013 update中找到。

本發明之艾塞那肽-4胜肽衍生物或其鹽可與作為醫藥組成物一部分的可接受醫藥載劑、稀釋劑或賦形劑組合投與。「醫藥上可接受之載劑」為生理上可接受(例如生理上可接受pH)同時維持與其一起投與之物質的治療特性的載劑。標準可接受醫藥載劑及其調配物為習於技藝者熟知且描述於例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins與R.C.Rowe et al(Ed), Handbook of Pharmaceutical excipients,PhP,May 2013 update中。一個例示性醫藥上可接受載劑為生理食鹽水溶液。

在一個具體例中，載劑是選自緩衝劑(例如檸檬酸鹽/檸檬酸)、酸化劑(例如鹽酸)、鹼化劑(例如氫氧化鈉)、防腐劑(例如苯酚)、共溶劑(例如聚乙二醇400)、張力調節劑(例如甘露醇)、安定劑(例如界面活性劑、抗氧化劑、胺基酸)之群。

使用的濃度在生理上可接受的範圍內。

可接受醫藥載劑或稀釋劑包括那些於口服、直腸、鼻或非經腸(包括皮下、肌肉內、靜脈內、皮內以及穿皮)投與的調配物中所使用者。本發明化合物通常是非經腸投與。

術語「醫藥上可接受之鹽」表示本發明化合物的鹽，就使用於哺乳動物中來說其為安全且有效的。醫藥上可接受之鹽可包括，但不限於酸加成鹽以及鹼性鹽。酸加成鹽的實例包括氯鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸(氫)鹽、乙酸鹽、檸檬酸鹽、甲苯磺酸鹽或甲磺酸鹽。鹼性鹽的實例包括與無機陽離子形成的鹽(例如鹼或鹼土金屬鹽，諸如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽或鈣鹽)，以及與有機陽離子形成的鹽(諸如胺鹽)。醫藥上可接受之鹽的更多實例描述於Remington：The Science and Practice of Pharmacy,(20th ed.)ed.A.R.Gennaro A.R.,2000,Lippencott Williams & Wilkins或Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection and Use,e.d.P.H.Stahl,C.G.Wermuth,2002,jointly published by Verlag Helvetica Chimica Acta,Zurich,Switzerland,and Wiley-VCH,Weinheim,Germany中。

術語「溶劑合物」表示本發明化合物或其鹽與溶劑分子(例如有機溶劑分子及/或水)的複合物。

在醫藥組成物中，艾塞那肽-4衍生物可呈單體或寡聚形式。

術語「治療有效量」的化合物意指無毒但足量的化合物以提供所要效用。達到所要生物效用所需的式(I)化合物數量取決於數種因素，例如選擇的特定化合物、所要用途、投與模式以及患者的臨床病況。適當「有效」量在任何個別的情況下可由習於技藝者使用慣常實驗來決定。例如，式(I)化合物的「治療有效量」為約0.01至50mg/劑量，較佳0.1至10mg/劑量。

本發明醫藥組成物為彼等適於非經腸(例如皮下、肌肉內、皮內或靜脈內)、口服、直腸、局部與經口(例如舌下)投與者，儘管最為適宜的投與模式在每一個別情況下會取決於待治療病況之本質和嚴重性，以及在各個情況下使用之式(I)化合物的本質。

適當的醫藥組成物可以呈分散單位，例如膠囊、錠劑與小瓶或安瓿中的粉劑，其各自含有一定量的化合物；作為粉劑或膠囊；作為呈水性或非水性液體的溶液或懸浮液；或做為水包油或油包水乳液。其可呈單劑量或多劑量可注射形式來提供，例如呈筆的形式。該等組成物可(如已經提及)藉由任何適當醫藥方法來製備，該等醫藥方法包括其中活性成分與載劑(其可由一或多種額外成分組成)相接觸的步驟。

在某些具體例中，醫藥組成物可與施用裝置一起提供，例如與注射器、注射筆或自動注射器一起提供。此等裝置可以與醫藥組成物分開提供或者是預先充填醫藥組成物。

組合療法

本發明化合物(GLP-1與昇糖素受體的雙重激動劑)可廣泛地與其他藥理學活性化合物組合，諸如所有在Rote Liste 2014中所提及的藥物，例如與在Rote Liste 2014第1章中提到的所有減重劑或食慾抑制劑、在Rote Liste 2014第58章中提到的所有降脂劑、在Rote Liste 2014中提到的所有抗高血壓劑及腎保護劑，或在Rote Liste 2014第36章中提到的所有利尿劑。

活性成分組合尤其可用於協同增進作用。它們可以藉由對患者分開投與活性成分或呈組合產物的形式來施用，在組合產物的形式中，數種活性成分存在於一個醫藥製品中。當活性成分藉由分開投與活性成分來投與時，這可以同時或依序完成。

下文提及的大多數活性成分揭示於USP Dictionary of USAN and International Drug Names,US Pharmacopeia,Rockville 2011中。

適用於此等組合的其他活性物質尤其包括彼等例如就所提指示症之一者使一或多種活性物質的治療效用變成可能及/或容許一或多種活性物質劑量降低者。

適於組合的治療劑包括，例如抗糖尿病劑，諸如：胰島素與胰島素類似物，例如：甘精(Glargine)/Lantus®、270-330U/mL甘精胰島素(insulin glargine)(EP 2387989 A)、300U/mL甘精胰島(EP 2387989 A)、穀賴胰島素(Glulisin)/Apidra®、地特胰島素(Detemir)/Levemir®、賴脯胰島素(Lispro)/Humalog®/Liprolog®、德谷胰島素(Degludec)/德谷胰島素Plus(DegludecPlus)、門冬胰島素(Aspart)、基礎胰島素與類似物(例如LY-2605541、LY2963016、NN1436)、聚乙二醇化胰島素Lispro、Humulin®、Linjeta、SuliXen®、NN1045、胰島素加上Symlin、PE0139、速效與短效胰島素(例如Linjeta、PH20、NN1218、HinsBet)、(APC-002)水膠、口服、可吸入、穿皮與舌下胰島素(例如Exubera®、Nasulin®、Afrezza、Tregopil、TPM 02、Capsulin、Oral-lyn®、Cobalamin®口服胰島素、ORMD-0801、NN1953、NN1954、NN1956、VIAtab、Oshadi口服胰島素)。另外亦包括彼等藉由雙功能性連接子結合至白蛋白或另一種蛋白質的胰島素衍生物。

GLP-1、GLP-1類似物以及GLP-1受體激動劑，例如：利西拉來(Lixisenatide)/AVE0010/ZP10/Lyxumia、艾塞那肽肽(Exenatide)/艾塞那肽-4/Byetta/Bydureon/ITCA 650/AC-2993、利拉魯肽(Liraglutide)/Victoza、塞馬魯肽(Semaglutide)、他司魯肽(Taspoglutide)、Syncria/阿必魯肽(Albiglutide)、度拉魯肽(Dulaglutide)、r艾塞那肽-4、CJC-1134-PC、PB-1023、TTP-054、Langlenatide/HM-11260C、CM-3、GLP-1 Eligen、ORMD-0901、NN-9924、NN-9926、NN-9927、Nodexen、Viador-GLP-1、CVX-096、ZYOG-1、ZYD-1、GSK-2374697、DA-3091、MAR-701、MAR709、ZP-2929、ZP-3022、TT-401、BHM-034、MOD-6030、CAM-2036、DA-15864、ARI-2651、ARI-2255、艾塞那肽肽-XTEN及昇糖素-Xten。

DPP-4抑制劑，例如：阿格列汀(Alogliptin)/Nesina、利拉利汀(Trajenta)/Linagliptin/BI-1356/Ondero/Trajenta/Tradjenta/Trayenta/Tradzenta、沙格列汀(Saxagliptin)/Onglyza、西格列汀(Sitagliptin)/佳糖維(Januvia)/西他列汀(Xelevia)/Tesave/Janumet/Velmetia、Galvus/維格列汀(Vildagliptin)、阿拉格列汀(Anagliptin)、吉格列汀(Gemigliptin)、特力利汀(Teneligliptin)、美格列汀(Melogliptin)、曲格列汀(Trelagliptin)、DA-1229、Omarigliptin/MK-3102、KM-223、Evogliptin、ARI-2243、PBL-1427、哌諾沙星(Pinoxacin)。

SGLT2抑制劑，例如：Invokana/卡格列淨(Canaglifozin)、Forxiga/達格列淨(Dapagliflozin)、瑞格列净(Remoglifozin)、舍格列净(Sergliflozin)、依帕列净(Empagliflozin)、伊格列净(Ipragliflozin)、托格列淨(Tofogliflozin)、魯格列净(Luseogliflozin)、LX-4211、Ertuglifozin/PF-04971729、RO-4998452、EGT-0001442、KGA-3235/DSP-3235、LIK066、SBM-TFC-039，雙胍類(例如美福明(Metformin)、丁福明(Buformin)、苯乙福明(Phenformin))、噻唑烷二酮類(例如吡格列酮(Pioglitazone)、利格列酮(Rivoglitazone)、羅格列酮(Rosiglitazone)、曲格列酮(Troglitazone))、雙重PPAR激動劑(例如阿格列扎(Aleglitazar)、莫格列扎(Muraglitazar)、替格列扎(Tesaglitazar))、磺醯脲類(例如甲苯磺丁脲(Tolbutamide)、格列苯脲(Glibenclamide)、格列美脲(Glimepiride)/瑪爾胰(Amaryl)、格列吡嗪(Glipizide))、美格列奈類(例如那格列奈(Nateglinide)、瑞格列奈(Repaglinide)、米格列奈(Mitiglinide))、α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如阿卡波糖(Acarbose)、米格列醇(Miglitol)、伏格列波糖(Voglibose))，兔胰澱素(Amylin)及兔胰澱素類似物(例如普蘭林肽(Pramlintide)、Symlin)。

GPR119激動劑(例如GSK-263A、PSN-821、MBX-2982、APD-597、ZYG-19、DS-8500)、GPR40激動劑(例如Fasiglifam/TAK-875、TUG-424、P-1736、JTT-851、GW9508)。

其他適宜組合夥伴為：塞克洛瑟(Cycloset)、11-β-HSD的抑制劑(例如LY2523199、BMS770767、RG-4929、BMS816336、AZD-8329、 HSD-016、BI-135585)、葡萄糖激酶的活化劑(例如TTP-399、AMG-151、TAK-329、GKM-001)、DGAT的抑制劑(例如LCQ-908)、蛋白質酪胺酸磷酸酶l的抑制劑(例如曲度奎明(Trodusquemine))、葡萄糖-6-磷酸酶的抑制劑、果糖-1,6-二磷酸酶的抑制劑、肝醣磷酸酶的抑制劑、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的抑制劑、肝醣合成酶激酶的抑制劑、丙酮酸去氫酶的抑制劑、α2-拮抗劑、CCR-2拮抗劑、SGLT-1抑制劑(例如LX-2761)、雙重SGLT2/SGLT1抑制劑。

一或多種降脂劑亦適於作為組合夥伴，諸如(例如)：HMG-CoA-還原酶抑制劑(例如辛伐他汀(Simvastatin)、阿托伐他汀(Atorvastatin))、纖維酸類(例如苯扎貝特(Bezafibrate)、菲諾貝特(Fenofibrate))、菸鹼酸及其衍生物(例如菸鹼酸)、PPAR-(α、γ或α/γ)激動劑或調節劑(例如阿格列扎(Aleglitazar))、PPAR-δ激動劑、ACAT抑制劑(例如阿伐麥布(Avasimibe))、膽固醇吸收抑制劑(例如依折麥布(Ezetimibe))、膽酸結合物質(例如考來烯胺(Cholestyramine))、迴腸膽酸運輸蛋白抑制劑、MTP抑制劑，或PCSK9的調節劑。

HDL-升高化合物，諸如：CETP抑制劑(例如托徹普(Torcetrapib)、安塞曲匹(Anacetrapid)、達塞曲匹(Dalcetrapid)、依塞曲匹(Evacetrapid)、JTT-302、DRL-17822、TA-8995)或ABC1調節劑。

其他適宜的組合夥伴為用於治療肥胖症的一或多種活性物質，諸如(例如)：***(Sibutramine)、特索芬辛(Tesofensine)、羅氏鮮(Orlistat)、***素-1受體的拮抗劑、MCH-1受體拮抗劑、MC4受體激動劑、NPY5或NPY2拮抗劑(例如韋利貝特(Velneperit))、β-3-激動劑、瘦素或瘦素擬似物、5HT2c受體的激動劑(例如氯卡色林(Lorcaserin))，或布普品(bupropione)/那曲酮(naltrexone)、布普品/唑尼沙胺(zonisamide)、布普品/芬特明(phentermine)或普蘭林肽/美曲普汀(metreleptin)的組合。

其他適宜的組合夥伴為：更多胃腸胜肽，諸如胜肽YY 3-36(PYY3-36)或其類似物、胰多肽(PP)或其類似物。

昇糖素受體激動劑或拮抗劑、GIP受體激動劑或拮抗劑、飢餓素拮抗劑或反向激動劑、類爪蟾肽及其類似物。

此外，與影響高血壓、慢性心臟衰竭或動脈粥樣硬化的藥物組合是適宜的，該等藥物為諸如(例如)：血管收縮素II受體拮抗劑(例如替米沙坦(telmisartan)、坎地沙坦(candesartan)、纈沙坦(valsartan)、氯沙坦鉀(losartan)、依普羅沙坦(eprosartan)、厄貝沙坦(irbesartan)、奥美沙坦(olmesartan)、他索沙坦(tasosartan)、阿齊沙坦(azilsartan))、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、鈣拮抗劑、中樞抑制降血壓藥、α-2-腎上腺素受體拮抗劑、中性胜肽內切酶的抑制劑、血小板聚集抑制劑以及其他藥物或其適宜組合。

在另一個態樣中，本發明是有關於本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合至少一種上文所述之作為組合夥伴的活性物質的用途，其用以製備適於治療或預防可能受到結合至GLP-1與昇糖素之受體並透過調節其活性而發生作用之疾病或病況的藥物。較佳在代謝症候群的疾病中，尤其是上列疾病或病況中之一者，最為尤其是糖尿病或肥胖症或其併發症。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合一或多種活性物質的使用可同時、分開或依序發生。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽組合另一種活性物質的使用可同時或在交錯的時間，但尤其是在一段短時間裡發生。若它們同時被投與，則兩種活性物質被一起給予患者；或它們以交錯時間被使用，則兩種活性物質在少於或等於12小時，但尤其少於或等於6小時的時間時段內被給予患者。

因此，在另一個態樣中，本發明是有關於一種藥物，其包含本發明化合物或該一化合物之生理學上可接受之鹽與上述活性物質之至少一者作為組合夥伴的藥物，視情況一起選用一或多種惰性載劑及/或稀釋劑。

本發明化合物或其生理學上可接受之鹽或溶劑合物，以及要與其組合的其他活性物質可一起存在於一個調配物(例如小瓶或藥匣)中，或分開在兩個相同或不同調配物(例如所謂套組的部件)中。

圖1.在以SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8，50μg/kg bid皮下處理4週期間，在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中的體重發展。數據為平均值±SEM。

圖2. 在以SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8，50μg/kg bid皮下處理4週期間，在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中以%計的相對體重變化。數據為平均值±SEM。

圖3. 在以SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8，50μg/kg bid處理4週之前兩天以及之後，在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中藉由核磁共振(NMR)測得之總體脂測定結果。數據為平均值±SEM。

圖4. s.c.投與化合物SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8，50μg/kg在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中對血糖的急性效用。數據為平均值±SEM。

圖5. s.c.投與化合物SEQ ID NO：15，50μg/kg qd在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中對血糖的急性效用。數據為平均值±SEM。

圖6. 在以SEQ ID NO：15，50μg/kg qd皮下處理4週期間，在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中以%計的相對體重變化。數據為平均值±SEM。

圖7. 在以SEQ ID NO：15，50μg/kg qd處理4週之前兩天以及之後，在雌性高脂餵養C57BL/6小鼠中藉由核磁共振(NMR)測得之總體脂測定結果。數據為平均值±SEM。

方法

採用的縮寫如下：AA 胺基酸

AEEAc(2-(2-胺基乙氧基)乙氧基)乙醯基

cAMP 環磷酸腺苷

Boc 第三-丁基氧基羰基

BOP (苯并***-1-基氧基)參(二甲基胺基)六氟磷酸鏻

BSA 牛血清白蛋白

tBu 第三丁基

DCM 二氯甲烷

Dde 1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基亞環己基)-乙基

ivDde 1-(4,4-二甲基-2,6-二側氧基亞環己基)3-甲基-丁基

DIC N,N'-二異丙基碳二醯亞胺

DIPEA N,N-二異丙基乙胺

DMEM杜貝可氏改良伊格氏培養基

DMF 二甲基甲醯胺

DMS 二甲亞碸

EDT 乙二硫醇

FA 甲酸

FBS 胎牛血清

Fmoc 芴甲氧基羰基

HATU O-(7-氮雜苯并***-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸

HBSS 漢克氏平衡鹽溶液

HBTU 2-(1H-苯并***-1-基)-1,1,3,3-四甲基-脲六氟磷酸

HEPES2-[4-(2-羥基乙基)哌嗪-1-基]乙磺酸

HOBt 1-羥基苯并***

HOSu N-羥基琥珀醯亞胺

HPLC 高效液相層析

HTRF 均性時差性螢光

IBMX 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤

LC/MS液相層析/質譜

Mmt 單甲氧基三苯甲基

Palm 棕梠醯基

PBS 磷酸鹽緩衝食鹽水

PEG 聚乙二醇

PK 藥物動力學

RP-HPLC 逆相高效液相層析

Stea 硬脂醯基

TFA 三氟乙酸

Trt 三苯甲基

UV 紫外線

γE γ-麩胺酸

胜肽性化合物的一般性合成材料

使用不同Rink-醯胺樹脂(4-(2’,4’-二甲氧基苯基-Fmoc-胺基甲基)-苯氧基乙醯胺基-正白胺醯基胺基甲基樹脂(Merck Biosciences)；4-[(2,4-二甲氧基苯基)(Fmoc-胺基)甲基]苯氧基乙醯胺基甲基樹脂(Agilent Technologies)供合成帶有負載範圍為0.2-0.7mmol/g的胜肽醯胺。

經Fmoc保護的天然胺基酸是得自於Protein Technologies Inc.、Senn Chemicals、Merck Biosciences、Novabiochem、Iris Biotech、Bachem、Chem-Impex International或MATRIX Innovation。在整個合成中使用下列標準胺基酸：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-L-Asn(Trt)-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Ile-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-L-Met-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Pro-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Trp(Boc)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Val-OH。

此外，由如上相同供應商購得下列特殊胺基酸：Fmoc-L-Lys(ivDde)-OH、Fmoc-L-Lys(Mmt)-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH、Boc-L-His(Boc)-OH(獲得如甲苯溶劑合物)與Boc-L-His(Trt)-OH。

例如在Prelude Peptide Synthesizer(Protein Technologies Inc)或類似的自動合成儀上使用標準Fmoc化學以及HBTU/DIPEA活化實施固相胜肽合成。DMF用作為溶劑。脫除保護：20%哌啶/DMF歷時2 x 2.5min。洗滌：7 x DMF。偶合2：5：10 200mM AA/500mM HBTU/2M DIPEA於DMF中，2 x歷時20min。洗滌：5 x DMF。

在Lys側鏈經修飾的情況下，在對應位置中使用Fmoc-L-Lys(ivDde)-OH或Fmoc-L-Lys(Mmt)-OH。在合成完成之後，依據經修改的文獻程序(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)移除ivDde基團，使用DMF中的4%水合肼。藉由以二氯甲烷中的1% TFA重複處理來移除Mmt基團。藉由以所要酸的N-羥基琥珀醯亞胺酯或使用使用偶合劑(像是HBTU/DIPEA或HOBt/DIC)處理樹脂來實施之後的醯化。

使用金氏切割混合物(由82.5% TFA、5%苯酚、5%水、5%硫代苯甲醚、2.5% EDT構成)將所有已合成的胜肽從樹脂切下。接著在二乙基醚或二異丙基醚中沉澱粗製胜肽、離心並冷凍乾燥。藉由分析型HPLC分析胜肽且透過ESI質譜來檢核。粗製胜肽是藉由習知製備型RP-HPLC純化程序來予以純化。

或者，藉由手動合成程序來合成胜肽：0.3g經乾燥Rink醯胺MBHA樹脂(0.66mmol/g)放入裝有聚丙烯過濾膜的聚乙烯容器中。在DCM(15ml)中歷時1小時並在DMF(15ml)中歷時1小時使樹脂膨大。樹脂上的Fmoc基團是藉由以20%(v/v)哌啶/DMF溶液處理兩次歷時5分鐘及15分鐘而脫除保護基。以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌樹脂。針對Fmoc由固體撐體移除的構形使用Kaiser測試(定量法)。將乾燥DMF中的C-端Fmoc-胺基酸(對應於樹脂負載為5當量過量)添加至脫除保護的樹脂並且以5當量過量的DMF中之DIC與HOBT起始偶合。反應混合物中各個反應物的濃度為約0.4M。在轉子上於室溫下旋轉混合物歷時2h。過濾樹脂並且以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌。胜肽樹脂等分試樣在偶合完成後的Kaiser測試為陰性(樹脂上無色)。在第一個胺基酸附接之後，使用乙酸酐/吡啶/DCM(1：8：8)將樹脂中的未反應胺基基團(若有的話)加蓋歷時20分，以避免任何的序列刪除。在加蓋之後，以DCM/DMF/DCM/DMF(個別6/6/6/6次)洗滌樹脂。藉由以20%(v/v)哌啶/DMF溶液處理兩次歷時5分鐘與15分鐘，將附接C-端胺基酸胜肽基樹脂上的Fmoc基團脫除保護。以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌樹脂。對胜肽樹脂等份式樣在Fmoc-脫除保護完成後的Kaiser測試為陽性。

Rink醯胺MBHA樹脂上之目標序列中的其餘胺基酸接序是使用Fmoc AA/DIC/HOBt方法利用對應於樹脂負載於DMF中5當量過量來進行偶合。反應混合物中各個反應物的濃度為約0.4M。在轉子上於室溫下旋轉混合物歷時2h。過濾樹脂並以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌。在每一偶合步驟以及Fmoc脫除保護步驟之後，進行Kaiser測試以確認反應完成。

在線性序列完成之後，用作為分支點或修飾點的離胺酸的ε-胺基基團是藉由使用DMF中之2.5%水合肼歷時15分鐘2次脫除保護並以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌。在DMF中，使用Fmoc-Glu(OH)-OtBu以DIC/HOBtz方法(相對於樹脂負載5當量過量)將麩胺酸的γ-羧基端附接至Lys的ε-胺基基團。在轉子上於室溫下旋轉混合物歷時2h。過濾樹脂並以DMF/DCM/DMF(個別6x30ml)洗滌。麩胺酸上的Fmoc基團是藉由以20%(v/v)哌啶/DMF溶液處理兩次歷時5及15分鐘(個別25ml)而脫除保護。以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌樹脂。對胜肽樹脂等分試樣的Kaiser測試在Fmoc-脫除保護完成之後為陽性。

若側鏈分支又再含有一個γ-麩胺酸，於DMF中以DIC/HOBt方法(相對於樹脂負載5當量過量)使用第二個Fmoc-Glu(OH)-OtBu用以附接至γ-麩胺酸的游離胺基基團。在轉子上於室溫下旋轉混合物歷時2h。過濾樹脂並以DMF/DCM/DMF(個別6x30ml)洗滌。γ-麩胺酸上的Fmoc基團是藉由以20%(v/v)哌啶/DMF溶液處理兩次歷時5及15分鐘(25mL)而脫除保護。以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌樹脂。對胜肽樹脂等分試樣的Kaiser測試在Fmoc-脫除保護完成之後為陽性。

棕櫚酸&硬脂酸附接至麩胺酸的側鏈：

向γ-麩胺酸的游離胺基基團添加溶解於DMF中的棕櫚酸或硬脂酸(5當量)，並藉由添加DMF中的DIC(5當量)及HOBt(5當量)來起始偶合。以DMF/DCM/DMF(個別6：6：6次)洗滌樹脂。

從樹脂最終切割下胜肽：

就由手動合成所合成的胜肽基樹脂是以DMC(6x10ml)、MeOH(6x10ml)及醚(6x10ml)來洗滌，並在真空烘乾箱中乾燥過夜。自固體撐體切下胜肽是藉由以試劑混合物(80.0% TFA/5%硫代苯甲醚/5%苯酚/2.5% EDT、2.5% DMS與5% DCM)在室溫下處理胜肽-樹脂歷時3h而達成。藉由過濾收集切割混合物並以TFA(2ml)與DCM(2 x 5ml)洗滌樹脂。在氮氣下將過量TFA及DCM濃縮至少量且添加少量DCM(5-10ml)至殘餘物中並在氮氣下蒸發。重複程序3-4次以移除大部分的揮發性不純物。將殘餘物冷卻至0℃並添加無水醚以將胜肽沉澱。將沉澱胜肽離心並移除上清液醚且添加新鮮醚至胜肽中和再離心。粗製樣品經製備型HPLC純化並冷凍乾燥。透過LCMS確認胜肽身分。

分析型HPLC/UPLC

方法A：在210-225nm下偵測

管柱：在50℃下Waters ACQUITY UPLC® CSH^TM C18 1.7μm(150 x 2.1mm)

溶劑：H₂O+0.5%TFA：ACN+0.35%TFA(流速0.5ml/min)

梯度：80：20(0min)至80：20(3min)至25：75(23min)至2：98(23.5min)至2：98(30.5min)至80：20(31min)至80：20(37min)

視情況使用質量分析儀：LCT Premier，電噴霧正離子模式

方法B：在210-225nm下偵測

管柱：Aries prep XBC 18(4.6 x250mm，3.6μm)，溫度：25℃

溶劑：H₂O+0.1%TFA：ACN+0.1%TFA(流速1ml/min)

梯度：以2%緩衝液B校正管柱並藉由梯度2%至70%緩衝液B在15分鐘期間溶離

一般製備型HPLC純化程序

在Äkta Purifier System上或在Jasco半製備型HPLC System或Agilent 1100 HPLC系統上純化粗製胜肽。取決於待純化粗製胜肽的數量，使用不同尺寸以及不同流速的製備型RP-C18-HPLC管柱。採用乙腈+0.1% TFA(B)及水+0.1% TFA(A)作為溶離劑。收集含有產物的溶離份並冷凍乾燥而獲得純化產物，通常為TFA鹽。

艾塞那肽-4衍生物的溶解度與穩定性測試

在測試胜肽批料的溶解度與穩定性之前，測定其純度(HPLC-UV)。

關於溶解度測試，目標濃度為10mg純化合物/ml。因此，從固體樣品製備於不同緩衝系統中的溶液，其濃度依據先前測定的純度%為10mg/mL化合物。在輕柔攪動上清液2小時之後進行HPLC-UV，上清液是藉由在4500rpm下離心20min而獲得。

接著藉由0.2μL注射劑與使用胜肽濃度為1.2mg/mL於DMSO中之原液(依據純度%)所得UV峰面積比較來決定溶解度(注射範圍自0.2-2μL的各種體積)。這個分析也作為穩定性測試的起始點(t0)。

關於穩定性測試，將溶解度所得之等份試樣上清液儲存在40℃下歷時7天。在時間過程之後，在4500rpm下離心樣品歷時20分鐘並使用HPLC-UV分析0.2μL的上清液。

關於測定胜肽餘量，比較在t0與t7時的目標化合物峰面積，遵循下列等式得到「剩餘胜肽%」

剩餘胜肽%=[(峰面積胜肽t7)x 100]/峰面積胜肽t0。

穩定性表示為「剩餘胜肽%」。

使用方法B作為HPLC/UPLC方法，在214nm下偵測。

GLP-1受體、昇糖素以及GIP受體效力的活體外細胞分析

化合物對於受體的激動作用是藉由功能分析測量穩定表現人類GLP-1、GIP或昇糖素受體之HEK-293細胞株的cAMP反應來決定。

細胞的cAMP含量是基於HTRF(均性時差性螢光)使用來自Cisbio Corp.的套組(cat.no.62AM4PEC)測定。關於製備，將細胞分至T175培養瓶中並在培養基(DMEM/10% FBS)中生長過夜至接近匯聚。接著移除培養基並以無鈣與鎂的PBS洗滌細胞，然後以accutase(Sigma-Aldrich cat.no.A6964)進行蛋白酶處理。洗滌脫離的細胞並再懸浮於分析緩衝液(1 x HBSS；20mM HEPES,0.1% BSA,2mM IBMX)中且測定細胞密度。接著將它們稀釋至400000細胞/ml並將25μl-等分試樣分配於96孔盤的孔中。關於測量，將25μl於分析緩衝液中的測試化合物添加至孔，然後在室溫下培育30分鐘。在添加稀釋於溶解緩衝液(套組組分)中的HTRF試劑之後，培育盤1小時，接著在665/620nm下測量螢光比率。激動劑的活體外效力是藉由測定產生50%最大活化反應的濃度(EC50)來進行量化。

在小鼠與豬中用於量化艾塞那肽-4衍生物的生物分析篩選方法

小鼠皮下(s.c.)給藥1mg/kg。在施用之後0.25、0.5、1、2、4、8、16及24小時犧牲小鼠並收集血液樣品。在蛋白質沉澱之後經由液相層析質譜(LC/MS)分析血漿樣品。使用WinonLin第5.2.1版(非單室模式)計算PK參數及半衰期。

雌性哥廷根迷你豬皮下(s.c.)給藥0.1mg/kg。在施用之後0.25、0.5、1、2、4、8、24、32、48、56及72小時收集血液樣品。在蛋白質沉澱之後經由液相層析質譜(LC/MS)分析血漿樣品。使用WinonLin第5.2.1版(非單室模式)計算PK參數及半衰期。

小鼠中的胃排空與腸通過

使用體重介於20與30g的雌性NMRI-小鼠。使小鼠適應豢養環境歷時至少一週。

小鼠禁食過夜，同時一直維持水可取得。在研究當天，將小鼠秤重、單隻裝籠並允許取用500mg飼料歷時30min，同時移除水。在30min餵食期結束時，移除剩餘的飼料並秤重。60min後，經由灌食將有色、非熱量食團引入胃中。測試化合物/參考化合物或其媒劑(在對照組中)經皮下投與，以在當有色食團投與時達到Cmax。又30min後，犧牲動物並準備胃與小腸。將填滿的胃秤重、清空，小心地清潔並乾燥且再秤重。計得胃內容物表示胃排空的程度。在不強加施力的情況下將小腸拉直並測量長度。接著測量從腸的胃起端到行進至最遠的小腸內容物食團的距離。以後者距離與小腸總長度的百分比關係提供腸通過。

雌性小鼠與雄性小鼠可得到相比擬的數據。

使用Everstat 6.0藉由單因子ANOVA，接著使用Dunnett氏或Newman-Keul氏作為事後檢定來進行統計分析。在p<0.05程度下，差異性被認為是有統計學顯著性。Dunnett氏檢定作為事後檢定僅被應用於比較媒劑對照。Newman-Keul氏檢定應用於所有成對比較(亦即相對媒劑與參考組)。

小鼠之飼料攝取的自動評估

使用體重介於20與30g的雌性NMRI-小鼠。小鼠適應豢養環境歷時至少一週，且在評估裝置中適應單籠歷時至少一天，同時記錄基礎數據。在研究當天，在接近關燈期(12h關燈)皮下投與測試產物並在之後直接開始評估飼料消耗。評估包括連續監控22小時(每30分鐘)。可在數天內重複這個程序。評估限制為22小時的實際原因是容許對動物再秤重，重新裝填飼料與水，並且在程序之間投與藥物。結果可評估為在22小時內的累積數據或分成30min間隔。

雌性與雄性小鼠可獲得相比擬的數據。

用Everstat 6.0對重複測量值藉由雙因子ANOVA以及Dunnett氏事後分析來進行統計分析。在p<0.05程度下，差異性被認為是有統計學顯著性。

在皮下處理之後，在雌性飲食引起的肥胖(DIO)C57BL/6小鼠中對於血糖與體重的急性以及慢性效用

C57BL/6 Harlan小鼠按組別以12h光/暗週期豢養於無特定病原屏障設施中，可自由取用水與標準或高脂飲食。在預先餵養高脂飲食後，將小鼠分層為處理組(n=8)，以使得各組有類似的平均體重。可自由取用標準飼料的年齡相配組納入作為標準對照組。在實驗之前，小鼠皮下(s.c.)注射媒劑溶液並秤重歷時3天以使得它們適應程序。

1)在餵食雌性DIO小鼠中對血糖的急性效用：分別在第一次投與(s.c.)媒劑(磷酸鹽緩衝溶液)或艾塞那肽-4衍生物(溶解於磷酸鹽緩衝液中)之前取得起始血液樣品。投與體積為5mL/kg。動物可取用水及其在實驗期間的對應飲食。在t=0h、t=1h、t=2h、t=3h、t=4h、t=6h以及t=24h測量血糖位準(方法：Accu-Check血糖儀)。在沒有麻醉的情況下藉由尾部切口進行血液採樣。

2)在雌性DIO小鼠中對體重的慢性效用：小鼠每天一次(在晚上小時s.c.)或每天兩次(在早晨與在晚上s.c.)分別在光期開始與結束時利用媒劑或艾塞那肽-4衍生物處理歷時4週。每天記錄體重。在處理開始前兩天與第26天，藉由核磁共振(NMR)來測量總脂肪質量。

使用Everstat 6.0藉由重複量測值雙因子ANOVA與Dunnett氏事後分析(葡萄糖型態)，還有單因子ANOVA接著Dunnett氏事後檢定(體重、體脂)來進行統計分析。在p<0.05程度下，與經媒劑處理DIO對照小鼠的差異性被認為是有統計學顯著性。

4週處理在雌性糖尿病dbdb-小鼠中對於葡萄糖、HbA1c以及口服葡萄糖耐受性的效用

使用帶有平均非禁食葡萄糖數值為14.5mmol/l以及體重為37-40g的8週大雌性糖尿病dbdb-小鼠。小鼠被個別標記並使小鼠適應豢養環境歷時至少一週。

在研究開始前7天，測量非禁食葡萄糖以及HbA1c的基線值，研究開始前5天，依據其HbA1c數值將小鼠分派成數組與數個鼠籠(每個鼠籠5隻小鼠，每組10隻小鼠)以確保組別間的較低與較高值平均分布(分層)。

藉由在早晨與下午每天兩次皮下投與來處理小鼠歷時4週。在研究第21天由尾巴頂端獲得血液樣品供HbA1c之用，而在第4週中評估口服葡萄糖耐受性。

口服葡萄糖耐受性試驗是在早晨沒有先前額外化合物投與的情況下完成，主要是評估長期處理以及較少急性化合物投與的效用。小鼠在口服葡萄糖投與之前禁食歷時4小時(2g/kg，t=0min)。在葡萄糖投與之前以及在15、30、60、90、120與180min抽取血液樣品。在最後一次血液取樣之後恢復餵食。結果表示為相對於基線的變化，葡萄糖以mmol/l計而HbA1c以%計。

使用Everstat第6.0版基於SAS藉由單因子ANOVA，接著Dunnett氏事後檢定相對於媒劑對照來進行統計分析。在p<0.05程度下，差異性被認為有統計學顯著性。

在非禁食雌性糖尿病dbdb-小鼠中的葡萄糖降低

使用平均非禁食葡萄糖數值為20-22mmol/l而體重為42g +/- 0.6g(SEM)的雌性糖尿病dbdb-小鼠。小鼠被個別標記並使小鼠適應豢養環境歷時至少一週。

在研究開始前3-5天，依據小鼠非禁食葡萄糖數值將小鼠分派成數組與數個鼠籠(每個鼠籠4隻小鼠，每組8隻小鼠)以確保組別間的較低與較高值平均分布(分層)。在研究當天，將小鼠秤重並給藥(t=0)。就在化合物投與之前移除飼料，但水保持可取用，且在尾部切割處取出第一個血液樣品(基線)。在30、60、90、120、240、360以及480min時在尾部切割處取得更多血液樣品。

使用Everstat第6.0版基於SAS藉由雙因子ANOVA對重複測量值，接著Dunnett氏事後檢定相對於媒劑對照來進行統計分析。在p<0.05程度下，差異性被認為有統計學顯著性。

實例

本發明將藉由下列實例進一步說明。

實例1：合成SEQ ID NO：7

如方法中所述，在經乾燥Rink-醯胺MBHA樹脂(0.66mmol/g)上進行手動合成程序。以DIC/HOBt-活化來實施Fmoc-合成策略。在位置14使用Fmoc-Lys(ivDde)-OH以及在位置1使用Boc-His(Boc)-OH。依據經修飾文獻程序(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)使用於DMF中的4%水合肼從樹脂上的胜肽切下ivDde-基團。使用金氏混合物將胜肽從樹脂切下(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。經由製備型HPLC使用乙腈/水梯度(兩種緩衝液均有0.1% TFA)來純化粗產物。經純化的胜肽是藉由LCMS(方法B)進行分析。

在峰下發現之滯留時間14.29min之質量訊號的反卷積揭示胜肽質量為4649.20，其與預期值4649.29相符。

實例2：合成SEQ ID NO：8

如方法中所述，在經乾燥Rink醯胺MBHA Resin(0.66mmol/g)上進行手動合成程序。以DIC/HOBT-活化來實施Fmoc-合成策略。在位置14使用Fmoc-Lys(ivDde)-OH以及在位置1使用Boc-His(Boc)-OH。依據經修改的文獻程序(S.R.Chhabra et al.,Tetrahedron Lett.39,(1998),1603)使用4%於DMF中的水合肼從樹脂上的胜肽切下ivDde-基團。使用金氏混合物將胜肽從樹脂切下(D.S.King,C.G.Fields,G.B.Fields,Int.J.Peptide Protein Res.36,1990,255-266)。經由製備型HPLC使用乙腈/水梯度(兩種緩衝液均有0.1% TFA)來純化粗產物。經純化的胜肽是藉由LCMS(方法B)進行分析。

在峰下發現之滯留時間14.05min之質量訊號的反卷積揭示胜肽質量為4634.80，其與預期值4635.27相符。

以類似的方式合成表3中所列示的胜肽並進行特徵鑑定。

以類似的方式可合成表4中的下列胜肽。

實例3：穩定性及溶解度

胜肽性化合物的溶解度及穩定性是如方法中所述來進行評估。結果提供於表5中。

實例4：關於GLP-1、昇糖素及GIP受體的活體外數據

胜肽性化合物對於GLP-1、昇糖素及GIP受體的效力是藉由將表現人類昇糖素受體(h昇糖素R)、人類GIP受體(hGIP-R)或人類GLP-1受體(hGLP-1 R)之細胞暴露於濃度遞增的列示化合物並如方法中所述測量形成的cAMP來進行測定。

結果顯示於表6中：

實例5：比對測試

相對於在位置14中具有一個「非官能化」胺基酸且除此之外具有相同胺基酸序列的對應化合物，已測試在此位置中包含官能化胺基酸之本發明艾塞那肽-4衍生物的篩選。參考對化合物及對GLP-1、昇糖素與GIP受體的對應EC50值(以pM標明)提供於表7中。如所示，本發明艾塞那肽-4衍生物相比於在位置14中帶有「非官能化」胺基酸的化合物顯示優越的活性。此外，相對於在位置27中如原有艾塞那肽-4具有離胺酸殘基且除此之外具有相同胺基酸序列的對應化合物，已測試在此位置中包含Aib之本發明艾塞那肽-4衍生物的篩選。參考對化合物及對GLP-1、昇糖素與GIP受體的對應EC50值(以pM標明)提供於表8中。如所示，本發明艾塞那肽-4衍生物相比於如同在原有艾塞那肽-4中在位置27處帶有Lys的對應衍生物顯示對GIP受體的活性減低。

表7.在位置14中包含非官能化胺基酸的艾塞那肽-4衍生物vs.在位置14中包含官能化胺基酸以及除此以外相同胺基酸序列的艾塞那肽-4衍生物的比較。對GLP-1、昇糖素及GIP受體的EC50值以pM標明(K=離胺酸，Nle=正白胺酸，L=白胺酸，γE-x53=(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-，γE-x70=(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-，Ac=乙酸，γE-γE-x53=(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-)

實例6：藥物動力學測試

如方法中所述測定藥物動力學型態。計算出的T_1/2以及Cmax值顯示於表9中。

實例7：在bid皮下處理之後，在雌性飲食引起的肥胖(DIO)C57BL/6小鼠中SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8對於血糖與體重的急性以及慢性效用 1)葡萄糖型態

在血液取樣以確定血糖基線位準之後，餵養飲食引起的肥胖雌性C57BL/6小鼠經皮下投與50μg/kg的SEQ ID NO：7、50μg/kg的SEQ ID NO：8或磷酸鹽緩衝溶液(標準或高脂飲食的媒劑對照)。在預定時間點，取得更多血液樣品來測量血糖並產生24h的血糖型態。

SEQ ID NO：7與SEQ ID NO：8證實，相較於DIO對照小鼠，在化合物給藥後時間點t=1、2、3、4、6與24h顯著降低血糖(p<0.0001，雙因子ANOVA-RM，事後Dunnett氏檢定，平均值±SEM)(參見圖4)。

2)體重

雌性肥胖C57BL/6小鼠每天兩次以50μg/kg SEQ ID NO：7、50μg/kg SEQ ID NO：8或媒劑皮下處理歷時4週。每天記錄體重，並在4週處理開始之前以及4週處理之後測定體脂含量。

以50μg/kg SEQ ID NO：7處理顯示當相較於媒劑DIO對照小鼠於第7天開始在每日體重方面有統計學顯著下降，並持續到研究結束(研究結束為p>0.0001)。以50μg/kg SEQ ID NO：8處理顯示當相較於媒劑DIO對照小鼠於第5天開始在每日體重方面顯著下降，並持續到研究結束(研究結束為p>0.0001，表10，圖1與2)。這些變化是因為體脂降低，如體脂含量的絕對變化所示(表10，圖3)。

實例8：在qd皮下處理之後，在雌性飲食引起的肥胖(DIO)C57BL/6小鼠中SEQ ID NO：15對於血糖與體重的急性以及慢性效用 1)葡萄糖型態

在血液取樣以確定血糖基線位準之後，餵養飲食引起的肥胖雌性C57BL/6小鼠每天一次經皮下被投與50μg/kg的SEQ ID NO：15或磷酸鹽緩衝溶液(標準或高脂飲食的媒劑對照)。在預定時間點，取得更多血液樣品來測量血糖並產生24h的血糖型態。SEQ ID NO：15證實相較於DIO對照小鼠，在化合物給藥後時間點t=1、2、3、4、6及24h顯著降低血糖(p<0.001，2-W-ANOVA-RM，事後Dunnett氏檢定，平均值±SEM)(參見圖5)。

2)體重

雌性肥胖C57BL/6小鼠每天一次以50μg/kg SEQ ID NO：15或媒劑皮下處理歷時4週。每天記錄體重，並在4週處理開始之前與4週處理之後測定體脂含量。

以50μg/kg SEQ ID NO：15處理顯示當相較於媒劑DIO對照小鼠於第4天開始在每日體重方面有統計學顯著下降，並持續到研究結束(研究結束為p>0.001，表11，圖6)。這些變化是因為體脂降低，如體脂含量的絕對變化所示(表11，圖7)。

<110> 賽諾菲公司Sanofi

<120> 作為胜肽性雙重GLP-1/昇糖素受體激動劑之艾塞那肽-4衍生物

<130> DE2014/029

<150> EP14305501.0

<151> 2014-04-07

<160> 25

<170> PatentIn第3.5版

<210> 1

<211> 39

<212> PRT

<213> 吉拉毒蜥

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 1

<210> 2

<211> 30

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> MOD_RES

<222> (30)..(30)

<223> 醯胺化C-端

<400> 2

<210> 3

<211> 29

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

<210> 4

<211> 31

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (20)..(20)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基)

<400> 4

<210> 5

<211> 42

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

<210> 6

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 6

<210> 7

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

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<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 7

<210> 8

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人工多胜

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<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

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<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 8

<210> 9

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 9

<210> 10

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

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<221> MOD_RES

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<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 10

<210> 11

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

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<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

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<221> MOD_RES

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<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 11

<210> 12

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

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<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 12

<210> 13

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

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<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 13

<210> 14

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

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<221> MOD_RES

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<221> MOD_RES

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<223> Xaa為D-Ala

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<221> MOD_RES

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<223> 醯胺化C-端

<400> 14

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<212> PRT

<213> 人工序列

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<223> 人工多胜

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<220>

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<223> Xaa為Aib

<220>

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<223> 醯胺化C-端

<400> 15

<210> 16

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<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

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<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 16

<210> 17

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 17

<210> 18

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys([2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 18

<210> 19

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<223> Lys在胺基側鏈基團處經官能化如Lys((2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-(17-羧基-十七醯基)胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 19

<210> 20

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 20

<210> 21

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 21

<210> 22

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (14)..(14)

<220>

<221> MOD_RES

<222> (29)..(29)

<223> Xaa為D-Ala

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 22

<210> 23

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 23

<210> 24

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (27)..(27)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 24

<210> 25

<211> 39

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 人工多胜

<220>

<221> MOD_RES

<222> (2)..(2)

<223> Xaa為Aib

<220>

<221> MOD_RES

<222> (39)..(39)

<223> 醯胺化C-端

<400> 25

Claims

一種具有式(I)的胜肽性化合物，H₂N-His-Aib-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-X14-Asp-Glu-Gln-Arg-Ala-Lys-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Aib-X28-X29-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-R¹ (I)X14代表具有官能化-NH₂側鏈基團的胺基酸殘基，選自由Lys、Orn、Dab或Dap組成之群，其中-NH₂側鏈基團經-Z-C(O)-R⁵官能化，其中Z代表呈所有立體異構形式的連接子，且R⁵是包含至多50個碳原子以及選自N與O之雜原子的部分，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹為NH₂或OH，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1之化合物，其中R¹為NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至2中任一項之化合物，其中相較於天然昇糖素對昇糖素受體，該胜肽性化合物具有至少0.09%的相對活性。
如請求項1至3中任一項之化合物，其中相較於GLP-1(7-36)醯胺對GLP-1受體，該胜肽性化合物對GLP-1受體展現至少0.1%的相對活性。
如請求項1至4中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經基團-Z-C(O)R⁵官能化，其中Z代表選自γE、γE-γE、AEEAc-AEEAc-γE及AEEAc-AEEAc-AEEAc的基團，以及R⁵代表選自十五醯基、十七醯基或16-羧基-十六醯基的基團。
如請求項1至5中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經基團-Z-C(O)R⁵官能化，其中Z代表選自γE、γE-γE、AEEAc-AEEAc-γE及AEEAc-AEEAc-AEEAc的基團，以及R⁵代表選自十五醯基或十七醯基的基團。
如請求項1至6中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至7中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Ser，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至8中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Lys，X29代表選自D-Ala與Gly的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至9中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表D-Ala，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至10中任一項之化合物，其中X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基-、(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、(2-{2-[2-(2-{2-[(4S)-4-羧基-4-十八醯基胺基-丁醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基胺基]-乙氧基}-乙氧基)-乙醯基、[2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十八醯基胺基-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基胺基}-乙氧基)-乙氧基]-乙醯基-官能化，X28代表選自Ala、Lys與Ser的胺基酸殘基，X29代表Gly，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至11中任一項之化合物，其中 X14代表Lys，其中-NH₂側鏈基團經(S)-4-羧基-4-((S)-4-羧基-4-十六醯基胺基-丁醯基胺基)-丁醯基-官能化，X28代表Ala，X29代表選自Gly與D-Ala的胺基酸殘基，R¹代表NH₂，或其鹽或溶劑合物。
如請求項1至12中任一項之化合物，其選自SEQ ID NO：6-19之化合物，及其鹽或溶劑合物。
如請求項1至12中任一項之化合物，其選自SEQ ID NO：6-18之化合物，及其鹽或溶劑合物。
如請求項1至14中任一項之化合物，其用於醫學中，尤其用於人類醫學中。
如請求項15之化合物，其在醫藥組成物中作為活性劑並與至少一種醫藥上可接受載劑一起使用。
如請求項15或16之化合物，其與至少一額外治療活性劑一起使用，其中該額外治療活性劑是選自以下系列：胰島素與胰島素衍生物、GLP-1、GLP-1類似物與GLP-1受體激動劑、聚合物結合的GLP-1與GLP-1類似物、雙重GLP1/昇糖素激動劑、雙重GLP1/GIP激動劑、PYY3-36或其類似物、胰多肽(PP)或其類似物、昇糖素受體激動劑、GIP受體激動劑或拮抗劑、飢餓素拮抗劑或反向激動劑、類爪蟾肽(Xenin)及其類似物、DDP4抑制劑、SGLT2抑制劑、雙重SGLT2/SGLT1抑制劑、雙胍類、噻唑烷二酮類、雙重PPAR激動劑、磺醯脲類、美格列奈類(Meglitinides)、α-葡萄糖苷酶抑制劑、兔胰澱素(Amylin)及兔胰澱素類似物、GPR119激動劑、GPR40激動劑、GPR120激動劑、GPP142激動劑、全身性或低可吸收性TGR5激動劑、塞克洛瑟(Cycloset)、11-β-HSD的抑制劑、葡萄糖激酶的活化劑、DGAT的抑制劑、蛋白質酪胺酸磷酸酶1的抑制劑、葡萄糖-6-磷酸酶的抑制劑、果糖-1,6-二磷酸酶的抑制劑、肝醣磷酸酶的抑制劑、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶的抑制劑、肝醣合成酶激酶的抑制劑、丙酮酸去氫酶激酶的抑制劑、α2-拮抗劑、CCR-2拮抗劑、葡萄糖運輸蛋白-4的調節劑、生長抑制素受體3激動劑、HMG-CoA-還原酶抑制劑、纖維酸類、菸鹼酸及其衍生物、菸鹼酸受體1激動劑、PPAR-α、γ或α/γ)激動劑或調節劑、PPAR-δ激動劑、ACAT抑制劑、膽固醇吸收抑制劑、膽酸結合物質、IBAT抑制劑、MTP抑制劑、PCSK9的調節劑、依據肝臟選擇性甲狀腺素受體β激動劑的LDL受體-調高劑、HDL-升高化合物、脂肪代謝調節劑、PLA2抑制劑、ApoA-I促進劑、甲狀腺素受體激動劑、膽固醇合成抑制劑、ω-3脂肪酸及其衍生物、治療肥胖症的活性物質(諸如***(Sibutramine)、特索芬辛(Tesofensine)、羅氏鮮(Orlistat))、CB-1受體拮抗劑、MCH-1拮抗劑、MC4受體激動劑與部分激動劑、NPY5或NPY2拮抗劑、NPY4激動劑、β-3-激動劑、瘦素或瘦素擬似物、5HT2c受體的激動劑、或布普品(bupropione)/那曲酮(naltrexone)(CONTRAVE)、布普品/唑尼沙胺(zonisamide)(EMPATIC)、布普品/芬特明(phentermine)或普蘭林肽/美曲普汀(metreleptin)的組合、QNEXA(芬特明+托比拉邁)、脂肪酶抑制劑、血管新生抑制劑、H3拮抗劑、AgRP抑制劑、三單胺吸收抑制劑(正腎上腺素與乙醯膽鹼)、MetAP2抑制劑、鈣離子通道阻斷劑地爾硫卓的鼻調配物、對抗纖維母細胞生長因子受體4生成的反義物、抑制素靶定肽-1、影響高血壓、慢性心臟衰竭或動脈粥樣硬化的藥物，諸如血管收縮素II受體拮抗劑、ACE抑制劑、ECE抑制劑、利尿劑、β-阻斷劑、鈣拮抗劑、中樞作用性高血壓藥、α-2-腎上腺素受體的拮抗劑、中性胜肽內切酶的抑制劑、血小板聚集抑制劑。
如請求項15至17中任一項之化合物，其用於治療葡萄糖耐受不良、胰島素抗性、前糖尿病、禁食葡萄糖增加、高血糖症、第2型糖尿病、高血壓、血脂異常、動脈硬化症、冠心病、周邊動脈疾病、中風或此等個別疾病構成要素之任何組合。
如請求項15至17中任一項之化合物，其用於控制食慾、進食以及熱量攝入、增加能量消耗、預防增重、促使減重、減少體重過重以及治療肥胖症(包括病態肥胖症)。
如請求項15至17中任一項之化合物，其用於治療或預防高血糖症、第2型糖尿病、肥胖症。
如請求項15至17中任一項之化合物，其用於同時治療糖尿病與肥胖症。
一種醫藥組成物，包含至少一種如請求項1至14中任一項之化合物或其任一者之生理學上可接受的鹽或溶劑合物。