ES2815927T3 - Composiciones que comprenden dos poblaciones diferentes de conjugados de polímero-agente activo - Google Patents
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Abstract
Una composición que comprende: una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la primera población está compuesto por uno omás poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; y una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la segunda población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 10 000 Daltons a 100 000 Daltons, en donde el agente activo es una proteína o péptido, y además en donde el agente activo en la primera población de conjugados de polímero-agente activo y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es la misma proteína o péptido.
Description
DESCRIPCIÓN
Composiciones que comprenden dos poblaciones diferentes de conjugados de polímero-agente activo
La presente invención se refiere generalmente a composiciones que comprenden dos poblaciones de conjugados de polímero-agente activo adecuados para proporcionar un perfil farmacocinético deseado cuando se administran a un paciente. Además, la invención se refiere a métodos para preparar las composiciones y preparaciones farmacéuticas que comprenden las composiciones.
Antecedentes de la invención
Los científicos y los médicos se enfrentan a una serie de desafíos en sus intentos de desarrollar agentes activos en formas adecuadas para el suministro a un paciente. Los agentes activos que son polipéptidos, por ejemplo, frecuentemente se suministran mediante inyección en lugar de por vía oral.
De esta forma, el polipéptido se introduce en la circulación sistémica sin exposición al entorno proteolítico del estómago.
Sin embargo, la inyección de polipéptidos tiene varios inconvenientes. Por ejemplo, muchos polipéptidos tienen una vida media relativamente corta, de esta manera se necesitan inyecciones repetidas, que frecuentemente son inconvenientes y dolorosas. Además, algunos polipéptidos pueden provocar una o más respuestas inmunes con la consecuencia de que el sistema inmunológico del paciente puede activarse para degradar el polipéptido. Por tanto, el suministro de agentes activos tales como polipéptidos es problemática frecuentemente incluso cuando estos agentes se administran por inyección.
Se ha logrado cierto éxito al abordar los problemas de suministrar agentes activos mediante inyección. Por ejemplo, la conjugación del agente activo con un polímero soluble en agua ha dado como resultado conjugados de polímero-agente activo que tienen inmunogenicidad y antigenicidad reducidas. Además, estos conjugados de polímero-agente activo frecuentemente tienen vidas medias considerablemente mayores en comparación con sus contrapartes no conjugadas como resultado de una disminución del aclaramiento a través del riñón y/o una disminución de la degradación enzimática en la circulación sistémica. Como resultado de tener una vida media mayor, el conjugado de polímero-agente activo requiere una dosificación menos frecuente, lo que a su vez reduce el número total de inyecciones dolorosas y visitas inconvenientes a un profesional de la salud. Además, los agentes activos que eran solo marginalmente solubles demuestran un aumento significativo en la solubilidad en agua cuando se conjugan con un polímero soluble en agua.
Debido a su seguridad documentada, así como también a su aprobación por parte de la FDA para uso tanto tópico como interno, el polietilenglicol se ha conjugado con agentes activos. Cuando un agente activo se conjuga con un polímero de polietilenglicol o "PEG", el agente activo conjugado se denomina convencionalmente "PEGilado". El éxito comercial de los agentes activos PEGilados tales como el interferón alfa-2a PEGilado PEGASYS® (Hoffmann-La Roche, Nutley, NJ), el interferón alfa-2b PEGilado PEG-INTRON® (Schering Corp., Kennilworth, NJ) y Ne UlASTA™ PEG-filgrastim (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA) demuestra que la administración de una forma conjugada de un agente activo puede tener ventajas significativas sobre la contraparte no conjugada. Los conjugados con moléculas pequeñas tales como diestearoilfosfatidiletanolamina (Zalipsky (1993) Bioconjug. Chem. 4(4):296- 299) y fluorouracilo (Ouchi y otros (1992) Drug Des. Discov.9(1):93-105) también se han preparado. Otros conjugados polímero-proteína/péptido se describen en Bowen y otros (Experimental Hematology, vol. 27, páginas 425-432), EP1333036 y WO 01/02017.
A pesar de estos éxitos, es un desafío frecuentemente proporcionar preparados farmacéuticos que contengan conjugados que sean farmacológicamente activos y tengan el equilibrio adecuado entre un inicio rápido y una acción sostenida. Por ejemplo, el interferón alfa-2a PEGilado de la marca PEGASYS® tiene solo alrededor del 7 % de actividad in vitro en comparación con la forma nativa de este interferón. Si bien el producto de interferón PEGilado resultante compensa la disminución de la actividad al tener una vida media más larga, no todos los productos farmacéuticos tendrán la flexibilidad de proporcionar simplemente una actividad sostenida. in vivo', muchos productos farmacéuticos proporcionarían idealmente tanto un inicio relativamente rápido además de una actividad sostenida in vivo. Por tanto, la presente invención busca resolver estas y otras necesidades en la técnica al proporcionar composiciones que contienen conjugado, con lo cual la administración de la composición a un paciente da como resultado un inicio relativamente rápido seguido de una actividad relativamente sostenida.
Resumen de la invención
En consecuencia, la invención proporciona una composición que comprende: una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la primera población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; y una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la segunda población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de aproximadamente 10 000 Daltons a aproximadamente 100000 Daltons, en donde el agente activo es una proteína o péptido y en donde además el agente
activo en la primera población de conjugados de polímero-agente activo y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es la misma proteína o péptido.
La invención proporciona también una composición de este tipo en donde cada polímero de la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 100 Daltons a menos de 120000 Daltons, y cada polímero de la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 100 Daltons a aproximadamente 120000 Daltons, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la primera población y el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la segunda población es de aproximadamente 2000 Daltons a aproximadamente 100000 Daltons.
Además, la invención proporciona una composición de este tipo en donde cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 100 Daltons hasta menos de 20 000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 100 Daltons a aproximadamente 120000 Daltons, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la primera población y el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la segunda población es de aproximadamente 2000 Daltons a aproximadamente 100000 Daltons.
La invención proporciona además una composición de este tipo en donde cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 100 Daltons hasta menos de 20 000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 20 000 Daltons a aproximadamente 100000 Daltons.
La invención también proporciona una composición de este tipo en donde cada polímero tanto en la primera como en la segunda población es un poli(etilenglicol).
Adicionalmente, la invención proporciona una composición de este tipo que comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable, que proporciona de esta manera una preparación farmacéutica.
También, la invención proporciona un método para preparar una mezcla, en donde el método comprende las etapas de: (i) proporcionar una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la primera población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; (ii) proporcionar una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la segunda población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; y (iii) combinar la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo, para formar de esta manera una mezcla de la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de aproximadamente 10 000 Daltons a aproximadamente 100 000 Daltons, en donde el agente activo es una proteína o péptido, y además en donde el agente activo en la primera población de conjugados de polímero-agente activo y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es la misma proteína o péptido.
Se describe también un método para proporcionar un comienzo inicial de la actividad y un comienzo retardado de la actividad, en donde el método comprende las etapas de: (i) administrar aun paciente una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tienen un peso molecular promedio en peso; y (ii) administrar a un paciente una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tiene un peso molecular promedio en peso mayor que el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la primera población.
En una modalidad de la invención, se proporciona una composición compuesta por dos poblaciones de conjugados de polímero-agente activo de acuerdo con las reivindicaciones. En la primera población, los conjugados están hechos de polímeros que tienen cada uno un peso molecular promedio en peso que es sustancialmente el mismo. De manera similar, los conjugados en la segunda población también se fabrican a partir de polímeros que tienen cada uno un peso molecular promedio en peso que es sustancialmente el mismo, pero diferente del peso molecular promedio en peso de los polímeros en la primera población.
Los conjugados en cualquier población dada pueden comprender conjugados unidos de forma simple (es decir, un solo polímero unido a un solo agente activo, o un "1-mer"), así como también conjugados de unión múltiple tales como dos polímeros unidos individualmente a un solo agente activo (o un "2-mer"), tres polímeros unidos individualmente a un solo agente activo (o un "3-mer"), y así sucesivamente. La presente descripción incluye conjugados en donde un solo polímero está unido a dos agentes activos. También se contemplan combinaciones de conjugados unidos de forma simple y múltiple. Aunque puede usarse cualquier polímero para formar un conjugado, se prefiere que el polímero sea un poli(etilenglicol). Además, el enlace conjugado que conecta el polímero al agente activo puede ser un o bien un enlace estable o un enlace liberable (por ejemplo, hidrolizable). Además, cada conjugado dentro de la composición puede tener un enlace estable o un enlace liberable, o la composición puede estar compuesta por una combinación en donde algunos conjugados en la mezcla tienen un enlace estable y otros conjugados en la composición tienen un enlace liberable.
También se describe en la presente descripción un método para preparar una composición. Aunque hay varios métodos disponibles para preparar las composiciones descritas en la presente descripción, un método ilustrativo comprende las etapas de: (i) proporcionar una primera población de conjugados de polímero-agente activo; (ii) proporcionar una segunda población de conjugados de polímero-agente activo; y (iii) combinar la primera y segunda poblaciones de conjugados de polímero-agente activo, para formar de esta manera una mezcla de la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo, en donde la primera y la segunda población son diferentes entre sí. Independientemente del enfoque que se usa en la preparación de las composiciones, se prefiere que se incluya una etapa de mezcla después de la etapa de combinación para proporcionar una composición sustancialmente homogénea. Ventajosamente, puede añadirse un excipiente farmacéuticamente aceptable a la composición, dando como resultado de esta manera una composición farmacéutica.
Como se explicará con más detalle más abajo, una ventaja de las composiciones descritas actualmente es la capacidad para proporcionar un perfil farmacocinético deseado tras la administración a un paciente. Por tanto, también se describe un método para proporcionar un comienzo inicial de la actividad y un comienzo retardado de la actividad, en donde el método comprende las etapas de: (i) administrar a un paciente una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tienen un peso molecular promedio en peso; y (ii) administrar a un paciente una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tiene un peso molecular promedio en peso mayor que el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la primera población. Típicamente, aunque no necesariamente, la administración tiene lugar de forma simultánea, tal como cuando la primera y la segunda población están presentes en una composición única, que se administra a un paciente.
Breve descripción de los dibujos
Las Figuras 1 y 2 son representaciones gráficas de los resultados aproximados y esperados de los recuentos de reticulocitos y los niveles de hemoglobina para los conjugados y las mezclas descritos en el Ejemplo 1 cuando se administran a un paciente.
Descripción detallada de la invención
Debe observarse que, como se usa en esta descripción y en las reivindicaciones, las formas singulares "un", "una" y "el/la" incluyen referentes plurales a menos que el contexto lo indique claramente de cualquier otra manera. Así, por ejemplo, la referencia a un "polímero" incluye un solo polímero, así como también dos o más polímeros iguales o diferentes, la referencia a un "conjugado" se refiere a un solo conjugado, así como también a dos o más del mismo o diferentes conjugados, la referencia a un "excipiente" incluye un solo excipiente, así como también dos o más excipientes iguales o diferentes, y similares.
En la descripción y reivindicación de la presente invención, la siguiente terminología se usará de acuerdo con las definiciones descritas más abajo.
"PEG", "polietilenglicol" y "poli(etilenglicol)" como se usan en la presente descripción, pretenden abarcar cualquier poli(óxido de etileno) soluble en agua. Típicamente, los PEG para usar de acuerdo con la invención comprenden la siguiente estructura O(CH2CH2O)m-" donde (m) es de 2 a 4000. Como se usa en la presente, PEG también incluye "-CH2CH2-O(CH2CH2O)m-CH2CH2-" y "-(CH2CH2O)m-", que depende de si los oxígenos terminales se han desplazado o no. Cuando el PEG comprende además un resto espaciador (que se describirá con mayor detalle más abajo), los átomos que comprenden el resto espaciador, cuando se unen covalentemente a un segmento de polímero soluble en agua, no dan como resultado la formación de un enlace oxígeno-oxígeno (es decir, un enlace "-O-O-" o peróxido). A lo largo de la descripción y las reivindicaciones, debe recordarse que el término "PEG" incluye estructuras que tienen varios grupos terminales o de "bloqueo de extremos", etcétera. El término "PEG" también significa un polímero que contiene una mayoría, es decir, más del 50 %, de -CH2CH2O- subunidades monoméricas. Con respecto a las formas específicas, el PEG puede tomar cualquier número de una variedad de pesos moleculares, así como también estructuras o geometrías tales como "ramificado", "lineal", "bifurcado", "multifuncional" y similares, que se describirán con mayor detalle más abajo.
Los términos "de extremo bloqueado" o "bloqueado terminalmente" se usan indistintamente en la presente descripción para referirse a un terminal o punto final de un polímero que tiene un resto de bloqueo de extremos. Típicamente, aunque no necesariamente, el resto de bloqueo de extremos comprende un grupo hidroxi o alcoxi C1-20. Por tanto, los ejemplos de restos de bloqueo de extremos incluyen alcoxi (por ejemplo, metoxi, etoxi y benciloxi), así como también arilo, heteroarilo, ciclo, heterociclo y similares. Además, se prevén formas saturadas, insaturadas, sustituidas y no sustituidas de cada uno de los anteriores. Además, el grupo de bloqueo de extremos también puede ser un silano. El grupo de bloqueo de extremos también puede comprender ventajosamente un marcador detectable. Cuando el polímero tiene un grupo de bloqueo de extremos que comprende un marcador detectable, la cantidad o ubicación del polímero y/o el resto (por ejemplo, agente activo) al que está acoplado el polímero puede determinarse mediante el uso de un detector adecuado. Dichos marcadores incluyen, sin limitación, fluorescentes, quimioluminiscentes, restos usados en el marcaje enzimático, colorimétricos (por ejemplo, tintes), iones metálicos, restos radiactivos y similares. Los detectores adecuados incluyen fotómetros, películas, espectrómetros y similares.
De origen no natural "con respecto a un polímero o segmento de polímero soluble en agua significa un polímero que en su totalidad no se encuentra en la naturaleza. Sin embargo, un polímero de origen no natural o un segmento de polímero soluble en agua puede contener una o más subunidades o porciones de una subunidad de origen natural, siempre que la estructura general del polímero no se encuentre en la naturaleza.
El término "soluble en agua" como en un "segmento de polímero soluble en agua" y "polímero soluble en agua" es cualquier segmento o polímero que sea soluble en agua a temperatura ambiente. Típicamente, un polímero o segmento soluble en agua transmitirá al menos aproximadamente el 75 %, con mayor preferencia al menos aproximadamente el 95 % de la luz, transmitida por la misma solución después de la filtración. En base al peso, un polímero soluble en agua o un segmento del mismo será preferentemente al menos aproximadamente un 35 % (en peso) soluble en agua, con mayor preferencia al menos aproximadamente un 50 % (en peso) soluble en agua, aún con mayor preferencia aproximadamente un 70 %. (en peso) soluble en agua, y aún con mayor preferencia aproximadamente 85 % (en peso) soluble en agua. Sin embargo, se prefiere más que el polímero o segmento soluble en agua sea aproximadamente 95 % (en peso) soluble en agua o completamente soluble en agua.
"Masa molecular" en el contexto de un polímero soluble en agua, de origen no natural de la invención, tal como el PEG, se refiere al peso molecular promedio en peso de un polímero, típicamente determinado por cromatografía de exclusión por tamaño, técnicas de dispersión de luz o determinación de velocidad intrínseca en 1,2,4-triclorobenceno. Un enfoque denominado MALDI por los expertos en la técnica puede determinar la masa real de un polímero. Los polímeros de la invención son típicamente polidispersos, que poseen valores bajos de polidispersidad de preferentemente menos de aproximadamente 1,2, con mayor preferencia menos de aproximadamente 1,15, aún con mayor preferencia menos de aproximadamente 1,10, aún con mayor preferencia menos de aproximadamente 1,05 y con la máxima preferencia menos de aproximadamente 1,03.
Como se usa en la presente, el término "ácido carboxílico" como en un derivado de "ácido carboxílico" es un resto que O
tiene un grupo funcional _c - o h Parn^'®n representado como "-COOH" o -C(O) OH], A menos que el contexto lo indique
claramente de cualquier otra manera, el término ácido carboxílico incluye no solo la forma ácida, sino también los ésteres correspondientes y las formas protegidas. Se hace referencia a Greene y otros Protecting Groups in Organic Synthesis Tercera edición, Wiley, Nueva York, 1999 con respecto a los grupos protectores adecuados para ácidos carboxílicos y otros grupos funcionales.
El término "reactivo" o "activado" cuando se usa junto con un grupo funcional particular, se refiere a un grupo funcional reactivo que reacciona fácilmente con un electrófilo o nucleófilo en otra molécula. Esto es por el contrario con aquellos grupos que requieren catalizadores fuertes o condiciones de reacción muy poco prácticas para reaccionar (es decir, un grupo "no reactivo" o "inerte").
Como se usa en la presente, el término "grupo funcional" o cualquier sinónimo del mismo pretende abarcar formas protegidas del mismo.
El término "espaciador" o "resto espaciador" se usa en la presente descripción para referirse a un átomo o una colección de átomos usados opcionalmente para unir un resto a otro. Los restos espaciadores de la invención pueden ser hidrolíticamente estables o pueden incluir un enlace fisiológicamente hidrolizable o enzimáticamente degradable.
"Electrófilo" se refiere a un ion o átomo o colección de átomos, que pueden ser iónicos, que tienen un centro electrofílico, es decir, un centro que busca electrones, capaz de reaccionar con un nucleófilo.
"Nucleófilo" se refiere a un ion o átomo o colección de átomos que pueden ser iónicos, que tienen un centro nucleofílico, es decir, un centro que busca un centro electrofílico o con un electrófilo.
Un enlace "fisiológicamente escindible" o "hidrolizable" o "degradable" es un enlace relativamente débil que reacciona con el agua (es decir, se hidroliza) en condiciones fisiológicas. La tendencia de un enlace a hidrolizarse en agua dependerá no sólo del tipo general de enlace que conecta los dos átomos centrales, sino también de los sustituyentes unidos a estos átomos centrales. Los enlaces débiles o hidrolíticamente inestables apropiados incluyen, pero no se limitan a, éster de carboxilato, éster de fosfato, anhídridos, acetales, cetales, éter de aciloxialquilo, iminas, ortoésteres, péptidos y oligonucleótidos.
Un "enlace enzimáticamente degradable" significa un enlace que se somete a degradación por una o más enzimas.
Un enlace o enlace "hidrolíticamente estable" se refiere a un enlace químico, típicamente un enlace covalente, que es sustancialmente estable en agua, es decir, no sufre hidrólisis en condiciones fisiológicas en ningún grado apreciable durante un período de tiempo prolongado. Los ejemplos de enlaces hidrolíticamente estables incluyen, pero no se limitan a los siguientes: enlaces carbono-carbono (por ejemplo, en cadenas alifáticas), éteres, amidas, uretanos y similares. Generalmente, un enlace hidrolíticamente estable es uno que exhibe una velocidad de hidrólisis de menos de
aproximadamente 1-2 % por día en condiciones fisiológicas. Las velocidades de hidrólisis de enlaces químicos representativos pueden encontrarse en la mayoría de los libros de texto de química estándar.
Los términos "agente activo", "agente biológicamente activo" y "agente farmacológicamente activo" se usan indistintamente en la presente descripción y se definen para incluir cualquier agente, fármaco, compuesto, composición de materia o mezcla que proporcione algún efecto farmacológico, frecuentemente beneficioso, que pueda demostrarse in vivo o in vitro. Esto incluye alimentos, suplementos alimenticios, nutrientes, nutracéuticos, fármacos, proteínas, vacunas, anticuerpos, vitaminas y otros agentes beneficiosos. Como se usa en la presente, estos términos incluyen además cualquier sustancia fisiológica o farmacológicamente activa que produzca un efecto localizado o sistémico en un paciente.
"Excipiente farmacéuticamente aceptable" o "portador farmacéuticamente aceptable" se refiere aun excipiente que puede incluirse en las composiciones de la invención y que no provoca efectos toxicológicos adversos significativos al paciente.
"Cantidad farmacológicamente efectiva", "cantidad fisiológicamente efectiva" y "cantidad terapéuticamente efectiva" se usan indistintamente en la presente descripción para referirse a la cantidad de un conjugado de polímero-agente activo, típicamente presente en una preparación farmacéutica, que se necesita para proporcionar un nivel deseado de agente activo y/o conjugado en el torrente sanguíneo o en un tejido diana. La cantidad exacta dependerá de numerosos factores, por ejemplo, el agente activo particular, los componentes y las características físicas de la preparación farmacéutica, la población de pacientes prevista, las consideraciones del paciente y similares, y puede determinarse fácilmente por el experto en la técnica, basado en la información proporcionada en la presente descripción y disponible en la literatura relevante.
"Multifuncional" en el contexto de un polímero de la invención significa un polímero que tiene 3 o más grupos funcionales contenidos en el mismo, donde los grupos funcionales pueden ser iguales o diferentes. Los polímeros multifuncionales de la invención contendrán típicamente de aproximadamente 3-100 grupos funcionales, o de 3-50 grupos funcionales, o de 3-25 grupos funcionales, o de 3-15 grupos funcionales, o de 3 a 10 grupos funcionales, o contendrán 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 grupos funcionales dentro del polímero. Un polímero "difuncional" significa un polímero que tiene dos grupos funcionales contenidos en él, iguales (es decir, homodifuncionales) o diferentes (es decir, heterodifuncionales).
"Ramificado", en referencia a la geometría o estructura general de un polímero, se refiere a un polímero que tiene 2 o más" brazos "de polímero. Un polímero ramificado puede poseer 2 brazos de polímero, 3 brazos de polímero, 4 brazos de polímero, 6 brazos de polímero, 8 brazos de polímero o más. Un tipo particular de polímero altamente ramificado es un polímero dendrítico o dendrímero, que, para los fines de la invención, se considera que posee una estructura distinta de la de un polímero ramificado.
Un "dendrímero" o polímero dendrítico es un polímero monodisperso de tamaño globular en el que todos los enlaces emergen radialmente desde un punto focal central o núcleo con un patrón de ramificación regular y con unidades repetidas que cada una contribuye un punto de ramificación. Los dendrímeros muestran ciertas propiedades de estado dendrítico, como la encapsulación del núcleo, lo que los hace únicos de otros tipos de polímeros.
El término "paciente" se refiere a un organismo vivo que padece o es propenso a una afección que puede prevenirse o tratarse mediante la administración de un conjugado como se proporciona en la presente descripción, e incluye tanto humanos como animales.
"Opcional" y "opcionalmente" significa que la circunstancia descrita subsecuentemente puede o no ocurrir, y que la descripción incluye casos donde la circunstancia ocurre y casos donde no lo hace.
Volviendo a la primera modalidad de la invención, se proporciona una composición de acuerdo con las reivindicaciones que comprende dos poblaciones diferentes de conjugados de polímero-agente activo. Por el contrario de las composiciones que contienen conjugado descritas anteriormente, las composiciones de población mixta descritas en la presente descripción proporcionan un comienzo relativamente rápido de la acción farmacológica además de una duración relativamente larga de la acción farmacológica cuando se administran a un paciente. En particular, al proporcionar un comienzo relativamente rápido de la acción farmacológica, las composiciones descritas actualmente se mejoran con respecto a las composiciones conjugadas descritas anteriormente, que tradicionalmente solo han proporcionado una duración relativamente larga de la acción farmacológica.
Ventajosamente, las composiciones descritas actualmente proporcionan un comienzo de la acción relativamente rápido y una duración de la acción relativamente larga al proporcionar dos poblaciones diferentes de conjugado de polímeroagente activo. Por tanto, las composiciones comprenden una primera población de conjugados de polímero-agente activo y una segunda población de conjugados de polímero-agente activo de acuerdo con las reivindicaciones. Además de cualquier otra diferencia, el peso molecular promedio en peso del polímero asociado con la primera población es diferente del peso molecular promedio en peso en la segunda población de conjugados de polímero-agente activo.
Debido a que el peso molecular promedio en peso asociado con los polímeros en cada población no es el mismo, el peso molecular promedio en peso del polímero asociado con una población será necesariamente menor con relación al peso molecular promedio en peso del polímero asociado con la otra población. En aras de la consistencia y claridad en la
descripción de la invención, los conjugados de agente activo asociados con el peso molecular promedio en peso relativamente más bajo se denominarán típicamente la "primera población", mientras que los conjugados de agente activo asociados con el peso molecular relativamente más alto El peso molecular promedio en peso se denominará típicamente como la "segunda población". Debe recordarse, sin embargo, que los términos "primero" y "segundo" sólo sirven para identificar y distinguir a las diferentes poblaciones entre sí y que no se debe atribuir ningún otro significado o valor. En consecuencia, es perfectamente aceptable referirse a la población de conjugados de polímero-agente activo asociados con el peso molecular promedio en peso relativamente bajo como la "segunda población" y a la población con el peso molecular promedio en peso relativamente alto como la "primera población".
Sin desear estar ligado a la teoría, se cree que la diferencia en el peso molecular promedio en peso asociado con la primera y la segunda población proporciona las acciones combinadas deseadas de comienzo relativamente rápido y larga duración. En particular, se cree que la población de conjugados que tienen los polímeros de menor peso molecular proporciona un comienzo relativamente rápido no asociado con la población de conjugados que tienen los polímeros de mayor peso molecular. Por tanto, al proporcionar una mezcla de cada población, las composiciones descritas en la presente descripción dan como resultado (tras la administración a un paciente) un perfil farmacocinético que tiene un comienzo relativamente rápido, así como también una duración relativamente larga.
Tanto la primera como la segunda población están compuestas por conjugados de polímero-agente activo. Un conjugado de polímero-agente activo está compuesto por al menos un polímero y al menos un agente activo.
Los agentes adecuados pueden seleccionarse entre, por ejemplo, hipnóticos y sedantes, energizantes psíquicos, tranquilizantes, fármacos respiratorios, anticonvulsivos, relajantes musculares, agentes antiparkinsonianos (por ejemplo, antagonistas de la dopamina), analgésicos, antiinflamatorios, fármacos contra la ansiedad (por ejemplo, ansiolíticos), supresores del apetito, agentes antimigraña, contractantes musculares, antiinfecciosos (por ejemplo, antibióticos, antivirales, antifúngicos y vacunas) antiartríticos, antipalúdicos, antieméticos, anepilépticos, broncodilatadores, citocinas, factores de crecimiento, agentes anticancerígenos, agentes antitrombóticos, antihipertensivos, fármacos cardiovasculares, antiarrítmicos, antioxicantes, agentes contra el asma, agentes hormonales (que incluyen los anticonceptivos), simpaticomiméticos, diuréticos, agentes reguladores de lípidos, agentes antiandrogénicos, antiparasitarios, anticoagulantes, neoplastias, antineoplásicos, hipoglucémicos, agentes y suplementos nutricionales, suplementos de crecimiento, agentes de diagnóstico, agentes antienteritis, anticuerpos, agentes de diagnóstico y agentes de contraste.
El agente activo se limita a péptidos o proteínas. Preferentemente, un agente activo para acoplarse a un polímero como se describe en la presente descripción posee un grupo amino nativo, o alternativamente, se modifica para contener al menos un grupo amino reactivo adecuado para conjugar a un polímero descrito en la presente descripción.
Los ejemplos de agentes activos adecuados específicos para la unión covalente incluyen pero no se limitan a la aspariginasa, la antida, la becaplermina, las calcitoninas, la cianovirina, la denileucina diftitox, la eritropoyetina (EPO), los agonistas de EPO (por ejemplo, péptidos de aproximadamente 10-40 aminoácidos de longitud y que comprenden una secuencia central particular), la domasa alfa, la proteína estimulante de la eritropoyesis (NESP), los factores de la coagulación tales como el Factor V, el Factor VII, el Factor Vila, el Factor VIII, el Factor IX, el Factor X, el Factor XII, el Factor XIII, el Factor von Willebrand, la ceredasa, la cerezima, la glucosidasa alfa, el colágeno, la ciclosporina, las defensinas alfa, las defensinas beta, la exedina-4, el Factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF), la trombopoyetina (TPO), el inhibidor de proteinasa alfa-1, la elcatonina, el Factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GMCSF), el fibrinógeno, el filgrastim, las hormonas del crecimiento, la hormona del crecimiento humano (hGH), la hormona liberadora de la hormona del crecimiento (GHRH), el GRO-beta, el anticuerpo GRO-beta, las proteínas morfogénicas óseas tal como la proteína morfogénica ósea-2, la proteína morfogénica ósea-6, la OP-1, el Factor de crecimiento de fibroblastos ácido, el Factor de crecimiento de fibroblastos básico, el ligando CD-40, la albúmina de suero humano, los interferones tales como el interferón alfa, el interferón beta, el interferón gamma, el interferón omega, el interferón tau, el interferón consenso, las interleucinas y los receptores de interleucina tales como el receptor de la interleucina-1, la interleucina-2, las proteínas de fusión de interleucina-2, el antagonista del receptor de interleucina-1, la interleucina-3, la interleucina-4, el receptor de interleucina-4, la interleucina-6, la interleucina-8, la interleucina-12, el receptor de interleucina-13, el receptor de interleucina-17, la lactoferrina y los fragmentos de lactoferrina, la hormona liberadora de hormona luteinizante (LHRH), la insulina, la proinsulina, los análogos de insulina (por ejemplo, la insulina monoacilada como se describe en la patente de Estados Unidos núm. 5,922,675), la amilina, el péptido C, la somatostatina, el octreótido, la vasopresina, la hormona estimulante del folículo (FSH), la vacuna contra la influenza, el factor de crecimiento similar a la insulina (IGF), la insulinotropina, el Factor estimulante de colonias de macrófagos (M-CSF), los activadores del plasminógeno como alteplasa, la uroquinasa, la reteplasa, la estreptoquinasa, la pamiteplasa, la lanoteplasa y la teneteplasa, el Factor de crecimiento nervioso (NGF), la osteoprotegerina, el Factor de crecimiento derivado de plaquetas, los Factores de crecimiento de los tejidos, el Factor de crecimiento transformante 1, el Factor de crecimiento del endotelio vascular, el Factor inhibidor de leucemia, el Factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), el Factor de crecimiento glial (GGF), los receptores de células T, las/(los) moléculas/antígenos de c D, el Factor de necrosis tumoral (TNF), la proteína quimioatrayente de monocitos 1, los Factores de crecimiento endotelial, la hormona paratiroidea (PTH), el péptido similar al glucagón, la somatotropina, latimosina 1 alfa, la rasburicasa, el inhibidor Ilb/IIIa de latimosina 1 alfa, la timosina 10 beta, la timosina 9 beta, la timosina 4 beta, la antitripsina alfa-1, los compuestos de fosfodiesterasa (PDE), el VLA-4 (antígeno 4 muy tardío), los inhibidores VLA-4, los bifosponatos, el anticuerpo del virus respiratorio
sincitial, el gen regulador de transmembrana de la fibrosis quística (CFTR), la desoxirribonucleasa (Dnasa), la proteína bactericida/incrementadora de la permeabilidad (BPI) y el anticuerpo anti-CMV. Los anticuerpos monoclonales ilustrativos incluyen el etanercept (una proteína de fusión dimérica que consiste de la porción extracelular de unión al ligando del receptor de TNF humano de 75 kD unido a la porción Fc de la IgG1), abciximab, adalimumab, afelimomab, alemtuzumab, anticuerpo contra linfocitos B, atlizumab, basiliximab, bevacizumab, biciromab, bertilimumab, CDP-571, CDP-860, CDP-870, cetuximab, clenoliximab, daclizumab, eculizumab, edrecolomab, efalizumab, epratuzumab, fontolizumab, gavilimomab, ozogamicina gemtuzumab, ibritumomab tiuxetan, infliximab, inolimomab, keliximab, labetuzumab, lerdelimumab, olizumab, lym-1 radiomarcado, metelimumab, mepolizumab, mitumomab, muromonad-CD3, nebacumab, natalizumab, odulimomab, omalizumab, oregovomab, palivizumab, pemtumomab, pexelizumab, rhuMAb-VEGF, rituximab, satumomab pendetida, sevirumab, siplizumab, tositumomab, I131tositumomab, trastuzumab, tuvirumab, visilizumab, tacrina, memantina, rivastigmina, galantamina, donepezil, levetiracetam, repaglinida, atorvastatina, alefacept, vardenafil, sildenafil y valaciclovir.
Los péptidos o las proteínas preferidos para acoplarse a un polímero como se describe en la presente descripción incluyen la EPO (eritropoyetina), IFN-a, IFN-|3, IFN consenso, Factor VIII, Factor IX, GCSF, GMCSF, hGH, insulina, FSH y PTH.
Se pretende que los agentes biológicamente activos ilustrativos anteriores abarquen, cuando sea aplicable, isómeros y formas de sal farmacéuticamente aceptables de los mismos. En referencia a los péptidos y las proteínas, la invención pretende abarcar formas sintéticas, recombinantes, nativas, glicosiladas y no glicosiladas, así como también fragmentos biológicamente activos de los mismos.
Los agentes activos particularmente preferidos para la presente invención incluyen EPO (eritropoyetina) o cualquier agente farmacológicamente activo que tenga actividad agonista eritropoyética. Los agentes activos que tienen actividad de eritropoyetina incluyen los descritos, por ejemplo, en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos Núm.
2002/0081734, la publicación internacional Núm. WO 96/40749 y las patentes de Estados Unidos Núms. 5,106,954, 6,642,353, 6,048,971, 5,986,047 y 5,888,772. La determinación de si cualquier agente activo dado tendrá actividad agonista eritropoyética puede lograrse mediante el uso de experimentación de rutina. Por ejemplo, como se explica en la publicación de solicitud de patente de Estados Unidos Núm. 2002/0081734, la determinación de la actividad agonista eritropoyética puede lograrse al medir el crecimiento (si lo hay) de la línea celular humana dependiente de EPO, TF-1, cultivada en medio RPMI 1640 que contiene suero fetal de ternera al 10 % cuando el agente activo propuesto se pone en contacto con las células. Ver Kitamura y otros (1989) Blood 73:375-380. Los agentes activos que inducen la proliferación de estas células son agentes que tienen actividad eritropoyética. Por supuesto, también pueden usarse otros métodos para determinar si un agente activo tiene actividad agonista eritropoyética.
La eritropoyetina (o cualquier agente activo peptídico que tenga actividad agonista eritropoyética) se produce preferentemente de manera recombinante, aunque otros métodos (particularmente para péptidos de menor tamaño) tales como las técnicas sintéticas en fase sólida como se describe en, por ejemplo, Merrifield (1963) J. Am. Chem. Soc. 85:2149, también puede usarse. Se prefiere particularmente que el agente activo usado de acuerdo con la presente invención sea la eritropoyetina recombinante humana.
Con respecto al polímero, puede usarse cualquier polímero de acuerdo con las reivindicaciones siempre que el polímero no sea antigénico ni inmunogénico. En particular, con respecto a los agentes activos relativamente grandes (por ejemplo, las proteínas), se prefiere que el polímero en el conjugado sea soluble en agua. Con respecto a los agentes activos relativamente pequeños (típicamente agentes activos no peptídicos), el polímero en el conjugado puede ser soluble en agua o no. Con respecto al polímero asociado con los conjugados, el polímero es típicamente no peptídico. Aunque preferentemente un poli(etilenglicol), un polímero adecuado para usar en la presente descripción puede ser, por ejemplo, otros poli(alquilenglicoles)solubles en agua, copolímeros de etilenglicol y propilenglicol y similares. También se describen polímeros de poli (alcohol olefínico), poli(vinilpirrolidona), poli(hidroxialquilmetacrilamida), poli(hidroxialquilmetacrilato), poli(sacáridos), poli(a-hidroxiácido), poli(alcohol vinílico), polifosfaceno, polioxazolina, poli(N-acriloilmorfolina), tal como se describió en la Patente de Estados Unidos Núm. 5.629.384, y los copolímeros, los terpolímeros, los bloques no aleatorios y los polímeros de bloques aleatorios de cualquiera de los anteriores.
Además, aunque los polímeros usados en los conjugados de la primera población son preferentemente del mismo tipo (por ejemplo, lineales, ramificados, bifurcados, etcétera) que los polímeros usados en la segunda población, las composiciones incluyen casos en donde los polímeros de cada población son diferentes. Por ejemplo, puede usarse un polímero de tipo poli(etilenglicol) para cada una de la primera y la segunda población de conjugados. Además, puede usarse un polímero de tipo polímero de poli (etilenglicol) para una población, mientras que puede usarse un copolímero de etilenglicol y propilenglicol para la otra población en la composición.
Adicionalmente, el polímero es frecuentemente lineal, pero puede estar en otras formas (por ejemplo, ramificado, bifurcado y similares) como se describirá con más detalle más abajo. En el contexto de estar presente dentro de una estructura general, un segmento de polímero soluble en agua tiene de 1 a aproximadamente 300 terminales.
Además de las formas del polímero descritas anteriormente, el polímero también puede tener uno o más enlaces débiles o degradables. Por ejemplo, puede prepararse el poli(etilenglicol) ("PEG") con enlaces éster en el polímero que están sujetos a hidrólisis. Como se muestra más abajo, esta hidrólisis da como resultado la escisión del polímero en fragmentos
de menor peso molecular:
-PEG -C O 2-PEG- H:0 ------- ► -PEG -C O 2H HO-PEG-
Otros enlaces hidrolíticamente degradables, útiles como enlace degradable dentro del polímero, incluyen enlaces carbonato; enlaces imina que resultan, por ejemplo, de la reacción de una amina y un aldehído (ver, por ejemplo, Ouchi y otros (1997) Polymer Preprints 38(l):582-3); enlaces éster de fosfato formados, por ejemplo, al reaccionar un alcohol con un grupo fosfato; enlaces hidrazona que se forman típicamente por la reacción de una hidrazida y un aldehído; enlaces acetal que se forman típicamente por la reacción entre un aldehído y un alcohol; enlaces ortoéster que se forman, por ejemplo, por la reacción entre un formiato y un alcohol; enlaces amida formados por un grupo amina, por ejemplo, en un extremo de un polímero tal como el PEG, y un grupo carboxilo de otra cadena de PEG; enlaces uretano formados a partir de la reacción de, por ejemplo, un PEG con un grupo isocianato terminal y un alcohol PEG; enlaces peptídicos formados por un grupo amina, por ejemplo, en un extremo de un polímero tal como el PEG, y un grupo carboxilo de un péptido; y enlaces de oligonucleótidos formados por, por ejemplo, un grupo fosforamidita, por ejemplo, en el extremo de un polímero, y un grupo hidroxilo 5' de un oligonucleótido.
El polímero es típicamente biocompatible y no inmunogénico. Con respecto a la biocompatibilidad, una sustancia se considera biocompatible si los efectos beneficiosos asociados con el uso de la sustancia sola o con otra sustancia (por ejemplo, un agente activo) en relación con los tejidos vivos (por ejemplo, la administración a un paciente) superan cualquier efecto perjudicial según la evaluación de un médico, por ejemplo, un médico. Con respecto a la no inmunogenicidad, una sustancia se considera no inmunogénica si el uso de la sustancia sola o con otra sustancia en relación con los tejidos vivos no produce una respuesta inmune (por ejemplo, la formación de anticuerpos) o, si se produce una respuesta inmune, que dicha respuesta no se considera clínicamente significativa o importante según la evaluación de un médico.
Debido a su solubilidad en agua, la falta de inmunogenicidad y la biocompatibilidad, el poli(etilenglicol) es un polímero preferido para usar en cada una de las poblaciones de conjugado de polímero-agente activo de las composiciones descritas en la presente descripción. Estructuralmente, el poli(etilenglicol) es un polímero lineal terminado en cada extremo con grupos hidroxilo:
en donde (m') es un número entero positivo que representa el número de monómeros repetidos (típicamente de aproximadamente 2 a aproximadamente 4000). Convenientemente, el poli(etilenglicol) puede abreviarse como "PEG" y siempre que se presente una estructura en donde aparezca "PEG", se asumirá que se aplica la siguiente estructura:
-C H 2C H 2C M C H 2C H 2O V -C H 2C H 2-
en donde (m') es como se definió previamente.
Además, el polímero puede tener uno o más extremos terminales bloqueados con un grupo relativamente inerte, tal como un grupo alcoxi. Así, por ejemplo, el poli(etilenglicol) lineal mostrado anteriormente puede poseer un terminal que tenga un grupo metoxi relativamente inerte. La estructura de "metoxi-poli(etilenglicol)" se da más abajo:
donde (m') es como se definió previamente.
También son posibles otros grupos de bloqueo de extremos distintos de alquilo. Los restos de bloqueo de extremos ilustrativos incluyen los seleccionados del grupo que consiste en alquiloxi, alquiloxi sustituido, alqueniloxi, alqueniloxi sustituido, alquiniloxi, alquiniloxi sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido e hidroxi. Los grupos de bloqueo de extremos preferidos se seleccionan del grupo que consiste en alquiloxi (por ejemplo, metoxi) e hidroxi.
Como se indicó anteriormente, las composiciones de la invención comprenden primera y la segunda población de conjugados. Los conjugados de cualquier población dada pueden prepararse mediante el uso de cualquier técnica conocida por los expertos en la técnica. Típicamente, sin embargo, se permite que un polímero reaccione con un agente activo en condiciones adecuadas para la conjugación. Aunque los polímeros descritos anteriormente pueden reaccionar con ciertos agentes activos, frecuentemente se usa un reactivo polimérico que comprende el polímero unido a un grupo reactivo. El uso de tales reactivos poliméricos proporciona un medio fácil para unir un polímero a un agente activo, para formar de esta manera un conjugado de polímero-agente activo.
Los reactivos poliméricos representativos y los métodos para conjugar estos reactivos poliméricos a un agente activo se conocen en la técnica y se describen con más detalle en Zalipsky y otros," Use of Functionalized Poly(Ethylene Glycols)
for Modification of Polypeptides" en Polyethylene Glycol Chemistry: Biotechnical and Biomedical Applications, J. M. Harris, Plenus Press, Nueva York (1992) y en Zalipsky (1995) Advanced Drug Reviews 16:157-182. Convenientemente, muchos reactivos poliméricos están disponibles comercialmente en Nektar Therapeutics (Huntsville, AL). Estos y otros reactivos poliméricos se describen con más detalle más abajo.
El grupo reactivo del reactivo polimérico puede ser cualquier grupo adecuado para reaccionar con un agente activo. Generalmente, el grupo reactivo comprende un grupo electrofílico o nucleofílico que permite la unión covalente del agente activo en condiciones de acoplamiento covalente. Ejemplos de tales grupos reactivos asociados con el reactivo polimérico incluyen, pero no se limitan a, aquellos seleccionados del grupo que consiste en hidroxilo (-OH), éster, ortoéster, carbonato, acetal, aldehído, aldehído hidratado, cetona, cetona hidratada, tiona, hidrato de tiona, hemiacetal, hemiacetal sustituido con azufre, cetal, alquenilo, acrilato, metacrilato, acrilamida, sulfona, amina, hidrazida, tiol, hidrato detiol, ácido carboxílico,
isocianato, isotiocianato, maleimida
succinimida 
benzotriazol 
vinilsulfona, cloroetilsulfona, ditiopiridina, vinilpiridina, yodoacetamida, epóxido, glioxales, dionas, mesilatos, tosilatos, tiosulfonato, tresilato, silano y formas protegidas o activadas de los mismos.
Con respecto al agente activo, los grupos preferidos que proporcionan puntos de unión covalentes para un grupo reactivo de un reactivo polimérico incluyen amino (preferentemente un grupo amino primario), ácido carboxílico y tiol. Cuando el agente activo es un péptido, el extremo N del péptido puede proporcionar un grupo amino adecuado mientras que el extremo C del péptido puede proporcionar un grupo carboxilo adecuado para reaccionar con un reactivo polimérico. Un grupo amino adecuado también puede asociarse con el grupo amino de una cadena lateral de cualquier residuo o residuos de lisina en el péptido. La cadena lateral de un residuo de histidina en un péptido puede ser útil como punto de unión. De manera similar, puede usarse un grupo tiol de la cadena lateral de un péptido que contiene cisteína. Además, también pueden usarse otros grupos asociados con restos de carbohidratos (como en, por ejemplo, formas glicosiladas de algunos péptidos) de agentes activos para formar conjugados con un reactivo polimérico.
Los reactivos poliméricos ilustrativos se describen con más detalle más abajo.
Los reactivos poliméricos ilustrativos incluyen aquellos reactivos poliméricos en donde el grupo reactivo es un electrófilo. Dichos reactivos poliméricos "activados electrofílicamente" son reactivos a las aminas (como en un residuo de lisina) que se encuentran en algunos agentes activos. Los ejemplos no limitantes de reactivos poliméricos específicos útiles para formar enlaces covalentes con aminas disponibles asociadas con algunos agentes activos incluyen mPEG-succinimidil propionato (como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,672,662), mPEG-succinimidil butanoato (como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,672,662), carbonato de mPEG-benzotriazol (como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,650,234), mPEG-propionaldehído (como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,824,784) y mPEG-acetaldehído (como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,990,237), todos los que están disponibles en Nektar Therapeutics (Huntsville, AL).
Como referencia, se muestran ejemplos de cada derivado más abajo:
propionato de succinimidilo-mPEG; butanoato de succinimidilo-mPEG;
carbonato de benzotriazol-mPEG; propionaldehído-mPEG; y
(OCH2CH3)
H3C -(0CH2CH2)n-0-CH2-CH
(OCH2CH3)
acetal dietil acetaldehído-mPEG.
en donde (n) representa el número de veces que se repite el monómero de óxido de etileno.
Los reactivos poliméricos que contienen cetona, hidrato de cetona, hemiacetal y cetal (así como también sus correspondientes formas sustituidas con azufre) también son útiles para reacciones de conjugación con aminas. Un beneficio particular de estos derivados poliméricos es su estabilidad relativa (al menos en comparación con las formas de aldehído correspondientes) que permite una conjugación más específica y dirigida.
También se conocen versiones ramificadas de polímeros activados electrofílicamente, tales como "mPEG2-N-hidroxisuccinimida" y "mPEG2-aldehído", como se muestra más abajo:
en donde (n) representa el número de veces que se repite el monómero de óxido de etileno.
Nuevamente, los reactivos tales como "mPEG2-N-hidroxisuccinimida" y "mPEG2-aldehído" están disponibles en Nektar Therapeutics (Huntsville, AL).
Pueden emplearse reacciones de acoplamiento convencionales mediante el uso de condiciones de reacción conocidas para conjugar el reactivo polimérico con el agente activo. Dichas reacciones y condiciones se explican en la literatura relevante, así como también en muchos de los artículos, patentes y publicaciones de patentes citados en la presente descripción.
Un enfoque típico es una reacción de aminación reductora usada, por ejemplo, para conjugar aminas primarias con un polímero funcionalizado con una cetona o aldehído. En este enfoque, la amina primaria de un agente activo reacciona con el grupo carbonilo del aldehído o cetona, para formar de esta manera una base de Schiff. La base de Schiff, a su vez, puede convertirse de forma reductora en presencia de borohidruro de sodio para formar un conjugado estable. A pH más bajos, son posibles las reacciones selectivas en el extremo N-terminal. De esta manera, son posibles conjugados específicos (por ejemplo, conjugados que tienen de uno a tres polímeros solubles en agua unidos covalentemente).
Se encuentran disponibles otros reactivos poliméricos que reaccionan con grupos de un agente activo distinto de la amina. Por ejemplo, si el reactivo polimérico se funcionaliza en los extremos o "activado" con un grupo hidroxilo, puede formarse un enlace éster haciendo reaccionar el reactivo polimérico terminado en hidroxi con un agente activo que contiene un grupo ácido carboxílico. Además, si el reactivo polimérico se funcionaliza con un grupo tiol, se formará un enlace tioéster entre el tiol del reactivo polimérico y el agente activo que contiene el grupo ácido carboxílico.
Los reactivos poliméricos adicionales incluyen aquellos que contienen un resto hidrazida. Dichos reactivos poliméricos que contienen hidrazida también son útiles para la conjugación a cualquier grupo carboxilo disponible de un agente activo. Un ejemplo de dicho reactivo polimérico incluye un reactivo polimérico que tiene la siguiente estructura:
en donde POLI es un polímero.
Se conocen reactivos poliméricos que reaccionan con grupos tiol (como en un residuo de cisteína) de un agente activo. Los ejemplos no limitantes de reactivos poliméricos específicos útiles para formar enlaces covalentes con grupos tiol
disponibles asociados con algunos agentes activos incluyen un reactivo polimérico de N-maleimidilo como se describe en la Patente de Estados Unidos Núm. 5,739,208 y en la Publicación de Patente Internacional Núm. WO 01/62827. Los PEG selectivos de sulfhidrilo ilustrativos para usar en esta modalidad particular de la invención incluyen maleimida bifurcada de mPEG [mPEG (MAL)2], maleimida bifurcada de mPEG2 [mPEG2 (MAL)2], maleimida de mPEG (mPEG-MAL) y maleimida mPEG2 (mPEG2-MAL), todos los que están disponibles en Nektar Therapeutics, (Huntsville, AL).
Las estructuras de estos PEGS activados son las siguientes:
mPEG-CONHCH[CH2CONH(CH2CH20)2CH2CH2-MALj2:
mPEG2-lis¡na -NH-CH[CH2CONH (CF^CPhOhCPhCFh-MALh;
mPEG-MAL; y
mPEG2- Usina -NH-CH2CH2NHC(0)CH2CH2MAL.
respectivamente, en donde mPEG es PEG monometoxi, lisina es el aminoácido lisina y MAL significa maleimida, es decir,
Los reactivos poliméricos adicionales llamados convencionalmente polímeros "selectivos de tiol" son adecuados para reaccionar con grupos tiol y se describen en la Publicación Internacional Núm. WO 04/63250.
Aunque el reactivo polimérico (y, por extensión, el polímero en el conjugado de polímero-agente activo resultante) usado para formar los conjugados en ambas poblaciones puede tener casi cualquier peso molecular promedio en peso (siempre que los polímeros asociados con cada población tengan un peso molecular promedio en peso diferente), el peso molecular promedio en peso estará típicamente en uno o más de los siguientes intervalos: de aproximadamente 50 Daltons a aproximadamente 130 000 Daltons; de aproximadamente 100 Daltons a aproximadamente 100 000 Daltons; de aproximadamente 500 Daltons a aproximadamente 80 000 Daltons; de aproximadamente 1000 Daltons a aproximadamente 50 000 Daltons; de aproximadamente 2000 Daltons a aproximadamente 25 000 Daltons; y de aproximadamente 5000 Daltons a aproximadamente 20000 Daltons.
Los pesos moleculares promedio en peso ilustrativos incluyen aproximadamente 100 Daltons, aproximadamente 200 Daltons, aproximadamente 300 Daltons, aproximadamente 400 Daltons, aproximadamente 500 Daltons, aproximadamente 600 Daltons, aproximadamente 700 Daltons, aproximadamente 750 Daltons, aproximadamente 800 Daltons, aproximadamente 900 Daltons, aproximadamente 1000 Daltons, aproximadamente 2000 Daltons, aproximadamente 2500 Daltons, aproximadamente 3000 Daltons, aproximadamente 4000 Daltons, aproximadamente 5000 Daltons, aproximadamente 6000 Daltons, aproximadamente 7000 Daltons, aproximadamente 7500 Daltons, aproximadamente 8000 Daltons, aproximadamente 9000 Daltons, aproximadamente 10000 Daltons, aproximadamente 11 000 Daltons, aproximadamente 12000 Daltons, aproximadamente 12500 Daltons, aproximadamente 15000 Daltons, aproximadamente 20 000 Daltons, aproximadamente 25 000 Daltons, aproximadamente 30 000 Daltons, aproximadamente 40 000 Daltons, aproximadamente 50 000 Daltons, aproximadamente 60 000 Daltons, aproximadamente 70 000 Daltons, aproximadamente 75 000 Daltons, aproximadamente 80 000 Daltons, aproximadamente 85 000 Daltons, aproximadamente 90 000 Daltons, aproximadamente 100 000 Daltons y aproximadamente 120000 Daltons.
Aunque se han descrito muchos ejemplos de reactivos poliméricos, se encuentran disponibles reactivos poliméricos adicionales para formar conjugados de polímero-agente activo. Por tanto, la invención no se limita a conjugados de polímero-agente activo formados a partir de los reactivos poliméricos descritos actualmente. Además, la invención no está limitada con respecto a ningún peso molecular promedio en peso específico, ya que es posible un amplio intervalo de pesos moleculares.
Para formar cada población de conjugados de polímero-agente activo, se deja a un reactivo polimérico adecuado entrar en contacto con un agente activo. Los expertos en la técnica conocen o pueden determinar mediante experimentación de rutina si cualquier reactivo polimérico dado es adecuado para formar un conjugado con un agente activo específico. Por ejemplo, los agentes activos que tienen uno o más grupos amina reaccionarán con reactivos poliméricos que contienen un grupo electrofílico, como se discutió anteriormente. Además, puede simplemente ponerse en contacto un reactivo polimérico propuesto con el agente activo y determinar si se ha efectuado la conjugación al pasar la mezcla de reacción a través de una columna de exclusión por tamaño; los conjugados relativamente grandes, compuestos por polímero y agente activo, eluirán antes que el reactivo polimérico no conjugado y el agente activo.
Tener seleccionado un reactivo polimérico y un agente activo para formar una población deseada de conjugados, el reactivo polimérico se añade típicamente al agente activo en una cantidad equimolar (con respecto al número deseado de grupos adecuados para la reacción con el grupo reactivo) o en una cantidad molar en exceso. Por ejemplo, el reactivo polimérico puede añadirse al agente activo objetivo en una relación molar de aproximadamente 1:1 (polímero: agente activo), 1,5:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 8:1, 10:1, 20:1 o 40:1.
Se deja que la reacción de conjugación proceda hasta que sustancialmente no se produzca más conjugación, lo que generalmente puede determinarse al monitorear el progreso de la reacción a lo largo del tiempo. El progreso de la reacción puede monitorearse al extraer alícuotas de la mezcla de reacción en varios puntos de tiempo y analizar la mezcla de reacción mediante la SDS-PAGE, la espectrometría de masas MALDI-TOF, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) o cualquier otro método analítico adecuado. Una vez que se alcanza una meseta con respecto a la cantidad de conjugado formado o la cantidad de reactivo polimérico no conjugado restante, se supone que la reacción está completa.
Típicamente, la reacción de conjugación tarda entre minutos y varias horas (por ejemplo, entre 5 minutos y 24 horas o más). La población resultante de conjugados de polímero-agente activo se purifica preferentemente, pero no necesariamente, para separar el exceso de reactivos, reactivos no conjugados (por ejemplo, agente activo), especies no deseadas de conjugado múltiple y reactivo polimérico libre o sin reaccionar. La población resultante también puede caracterizarse adicionalmente mediante el uso de métodos analíticos tales como MALDI, electroforesis capilar, electroforesis en gel y/o cromatografía.
Las condiciones de la reacción de conjugación pueden modificarse para proporcionar el resultado deseado. Por ejemplo, ajustar el pH del medio de la reacción frecuentemente influye en la reactividad entre el reactivo polimérico y el agente activo, de manera que puede ajustarse el número de polímeros que se unen al agente activo. Por ejemplo, un reactivo polimérico que contiene aldehído puede reaccionar con un determinado péptido a un pH de 7,5, de manera que la especie predominante es un conjugado que tiene tres polímeros unidos individualmente a un único agente activo. Sin embargo, la conjugación del mismo péptido y reactivo polimérico que contiene aldehído a un pH de 6,5 puede dar como resultado predominantemente un único polímero unido al péptido. Tal selectividad puede determinarse por un experto en la técnica llevando a cabo cualquier reacción de conjugación dada en un intervalo de condiciones (por ejemplo, un intervalo de condiciones de pH) y determinar qué condiciones proporcionan un resultado deseado (por ejemplo, el número deseado de polímeros unidos al número deseado de agentes activos).
Con respecto a cualquier población dada de conjugados de polímero-agente activo, los conjugados pueden purificarse para obtener/aislar diferentes especies conjugadas. Alternativamente, y con mayor preferencia para polímeros de menor peso molecular (por ejemplo, menos de aproximadamente 20 000 Daltons, con mayor preferencia menos de aproximadamente 10000 Daltons), la población de conjugados de polímero-agente activo puede purificarse para obtener la distribución de polímeros por agente activo. Por ejemplo, cada población puede purificarse para obtener un promedio de uno a cinco PEG por agente activo (por ejemplo, proteína), típicamente un promedio de aproximadamente uno a tres PEG por agente activo (por ejemplo, proteína). La estrategia para la purificación de la mezcla de reacción conjugada final dependerá de varios factores, que incluyen, por ejemplo, el peso molecular del reactivo polimérico empleado, el agente activo particular, el régimen de dosificación deseado y la actividad residual y las propiedades de los conjugados individuales in vivo.
Aunque se prefiere tener un solo polímero unido a un solo agente activo, son posibles otros conjugados que tienen uno o más polímeros unidos a uno o más agentes activos. Además, cada población dentro de la composición puede tener polímeros numerados de manera diferente unidos a los agentes activos numerados de manera diferente (por ejemplo, una composición que comprende una primera población que tiene una mezcla de polímeros unidos de forma simple y doblemente unidos a un agente activo, y una segunda población que tiene sustancialmente solo un polímero unido individualmente a un solo agente activo). En la Tabla 1 se proporcionan los conjugados adecuados ilustrativos para cualquier población de la composición.
Conjugados ilustrativos que tienen un número de polímeros para un número de agentes activos
Tabla 1
Conjugados que tienen un número ilustrativos de polímeros para un número de agentes activos
Si se desea, puede aislarse cualquier población dada de conjugados que tengan diferentes pesos moleculares (debido al número de polímeros unidos) mediante el uso de la cromatografía u otras técnicas de separación sin resina (por ejemplo, diafiltración, membranas, etcétera). Es decir, la cromatografía de filtración en gel, así como también otras técnicas, pueden usarse para fraccionar relaciones de polímero a agente activo numeradas de manera diferente (por ejemplo, 1-mer, 2-mer, 3-mer, etcétera, en donde "1-mer" indica un polímero a agente activo, "2-mer" indica dos polímeros a agente activo, y así sucesivamente) sobre la base de sus diferentes pesos moleculares (donde la diferencia corresponde esencialmente al peso molecular promedio de los segmentos de polímero soluble en agua). Por ejemplo, en una reacción ilustrativa en la que una proteína de 100 000 Daltons se conjuga aleatoriamente con un ácido alcanoico de PEG que tiene un peso molecular de aproximadamente 20 000 Daltons, la mezcla de reacción resultante probablemente contendrá proteína no modificada (PM Daltons), proteína mono-PEGilada (PM 120000 Daltons), proteína di-PEGilada (PM 140 000 Daltons), etcétera. Si bien este enfoque puede usarse para separar PEG y otros conjugados de polímero-agente activo que tienen diferentes pesos moleculares, este enfoque generalmente es inefectivo para separar isómeros de posición que tienen diferentes sitios de unión al polímero dentro de la proteína. Por ejemplo, puede usarse la cromatografía de filtración en gel para separar entre sí mezclas de PEG 1-mers, 2-mers, 3-mers, etcétera, aunque cada una de las composiciones de PEG-mer recuperadas puede contener PEG unidos a diferentes grupos amino reactivos (por ejemplo, 8 grupos amino de residuos de lisina) dentro del agente activo.
Las columnas de filtración en gel adecuadas para llevar a cabo este tipo de separación incluyen las columnas Superdex™ y Sephadex™ disponibles de Amersham Biosciences (Piscataway, NJ). La selección de una columna en particular dependerá del intervalo de fraccionamiento deseado. La elución se lleva a cabo generalmente mediante el uso de un tampón adecuado, tal como fosfato, acetato o similar. Las fracciones recolectadas pueden analizarse mediante varios métodos diferentes, por ejemplo, (i) densidad óptica (OD) a 280 nm para el contenido de proteína, (ii) ensayos basados en colorantes de proteínas mediante el uso de un estándar como la albúmina de suero bovino (BSA), (iii) prueba de yodo para el contenido de PEG [Sims y otros (1980) Anal. Biochem, 107:60-631, y (iv) electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (SDS PAGE), seguida de tinción con yoduro de bario para PEG y Coomassie u otro colorante para el péptido. También pueden usarse otras técnicas de separación conocidas por los expertos en la técnica.
La separación de los isómeros de posición se lleva a cabo mediante la cromatografía de fase inversa mediante el uso de una columna C18 de cromatografía líquida de alta resolución en fase inversa (RP-HPLC) (Amersham Biosciences o Vydac) o mediante la cromatografía de intercambio iónico mediante el uso de una columna de intercambio iónico, por ejemplo, una columna Sepharose™ de intercambio iónico disponible en Amersham Biosciences. Cualquiera de los enfoques puede usarse para separar isómeros de polímero-agente activo que tienen el mismo peso molecular (isómeros de posición).
Como se indicó anteriormente, las composiciones descritas en la presente descripción comprenden dos poblaciones diferentes de conjugados de polímero-agente activo en donde la diferencia entre las dos poblaciones reside en el peso molecular promedio en peso del polímero. Como resultado, las composiciones de la presente invención pueden formarse mediante un método de acuerdo con las reivindicaciones, que comprende: (a) preparar una primera población de conjugados formados al reaccionar un reactivo polimérico que tiene un cierto peso molecular promedio en peso; (b) preparar una segunda población de conjugados formados al reaccionar un reactivo polimérico que tiene un peso molecular promedio en peso diferente del peso molecular promedio en peso del reactivo polimérico usado en la etapa (a); y (c) combinar la primera y la segunda población para formar una composición.
Las composiciones de la invención también pueden prepararse en un enfoque sintético de "un solo recipiente". En este enfoque, los conjugados se forman al combinar un agente activo y dos reactivos poliméricos, que tienen cada reactivo polimérico un peso molecular promedio en peso diferente. Típicamente, en este enfoque, el grupo reactivo de cada reactivo polimérico será exactamente el mismo. Además, el polímero de cada reactivo polimérico será típicamente el mismo (por ejemplo, un PEG), pero cada uno tendrá un peso molecular promedio en peso diferente.
Independientemente del enfoque que se use en su formación, puede llevarse a cabo una etapa opcional de mezclar la composición para formar una mezcla sustancialmente homogénea mediante el uso de técnicas convencionales. Con respecto al enfoque que implica la formación separada de dos poblaciones diferentes, se prefiere incluir la etapa opcional de mezclar la primera y la segunda población de agentes poliméricos activos para formar una mezcla sustancialmente homogénea.
El peso molecular promedio en peso específico del polímero asociado con cada población para un propósito dado (es decir, comienzo rápido o acción sostenida) será conocido por un experto en la técnica o puede determinarse sin experimentación indebida. Por ejemplo, un tamaño de polímero apropiado para la primera población de conjugados de polímero-agente activo puede determinarse al formar una serie de conjugados, cada uno con pesos moleculares promedio en peso relativamente pequeños (por ejemplo, 500, 750, 1000, 2000, 3000, 4000 y 5000 Daltons), y luego determinar (mediante, por ejemplo, la administración a un sujeto de prueba animal) cual proporcionará un comienzo de acción rápida deseado (por ejemplo, de 12 horas a 2 días). De manera similar, las series de conjugados que tienen cada uno pesos moleculares promedio en peso relativamente grandes (por ejemplo, 10000, 20 000, 30000, 40 000, 50000, 100000 y 120 000 Daltons), y luego determinar (mediante, por ejemplo, la administración a un sujeto de prueba animal) cual proporcionará una actividad sostenida deseada (por ejemplo, de 4 días a varias semanas). La combinación necesaria requerida para proporcionar tanto un comienzo rápido como una acción sostenida puede determinarse mediante la selección (i) la población conjugada formada a partir de uno de los polímeros de peso molecular promedio en peso relativamente pequeño que se encontró para proporcionar el comienzo rápido deseado, y (ii) la población conjugada formada a partir de uno de los polímeros de peso molecular promedio en peso relativamente grande que se encontró para proporcionar la acción sostenida deseada.
Los pesos moleculares promedio en peso ilustrativos incluyen los siguientes: cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 50 Daltons a menos de 30000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 5000 Daltons a menos de aproximadamente 130000 Daltons (en donde el peso molecular promedio en peso de los polímeros asociados con cada población es diferente); cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 100 Daltons a menos de 20 000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 20000 Daltons a aproximadamente 100000 Daltons; cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 1000 Daltons a aproximadamente 15000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de aproximadamente 25000 Daltons a aproximadamente 50000 Daltons; cada polímero en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 2500 Daltons a aproximadamente 10000 Daltons, y cada polímero en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 30000 Daltons a aproximadamente 40000 Daltons; y cada polímero de la primera población tiene un peso molecular promedio en peso de aproximadamente 5000 Daltons, y cada polímero de la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de aproximadamente 30 000 Daltons a aproximadamente 40 000 Daltons.
Además, debido a que los pesos moleculares promedio en peso asociados con cada una de las diferentes poblaciones son diferentes, es posible caracterizar numéricamente esta diferencia. Por ejemplo, la diferencia absoluta entre un conjugado de polímero-agente activo de 5000 Daltons y un conjugado de polímero-agente activo de 30 000 Daltons es de 25 000 Daltons. Las diferencias absolutas ilustrativas entre el peso molecular promedio en peso de los polímeros en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los polímeros en la segunda población incluyen lo siguiente: de aproximadamente 2000 a aproximadamente 100 000; de aproximadamente 10000 a aproximadamente 100000; de aproximadamente 20 000 a aproximadamente 100 000; de aproximadamente 30 000 a aproximadamente 100 000; de aproximadamente 20 000 a aproximadamente 40 000; y de aproximadamente 25 000 a aproximadamente 35 000. Se reconocerá que la diferencia absoluta se usa para negar el efecto de realizar el cálculo y obtener un resultado que tenga un valor negativo.
Cada población de la composición también se asociará con una relación molar. Las relaciones molares ilustrativas entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo incluyen las siguientes: de aproximadamente 1000:1 a aproximadamente 100:1; de aproximadamente 100:1 a aproximadamente 10:1; de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1:1; de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 1:10; de aproximadamente 1:10 a aproximadamente 1:100; y de aproximadamente 1:100 a aproximadamente 1:1000.
Ventajosamente, la relación específica entre la primera y la segunda poblaciones puede ajustarse para proporcionar el perfil farmacocinético deseado. Por ejemplo, una composición que comprende una relación inicial 1:1 de la primera población a la segunda población puede prepararse y administrarse a un sujeto de prueba, que luego se monitorea por la
actividad farmacológica a lo largo del tiempo. Si la indicación clínica se abordara mejor al proporcionar un comienzo más rápido, podría aumentarse la población que comprende el polímero más pequeño en el conjugado. Además, si la indicación clínica se abordara mejor al proporcionar una acción más sostenida, podría aumentarse la población que comprende el polímero más grande en el conjugado. En otro enfoque, podría proporcionarse una serie de composiciones, cada una con una relación única de cada población, y administrarse por separado a un paciente diferente. Cada paciente puede monitorearse a lo largo del tiempo y puede determinarse la mejor relación mediante la selección de la composición dada al paciente que mostró la mejor respuesta farmacológica general (según lo que se muestra por un comienzo suficientemente rápido y una actividad sostenida). Estos y otros enfoques pueden usarse para optimizar la mejor relación entre las poblaciones para cualquier aplicación determinada.
Con respecto a los conjugados de polímero-agente activo destinados al suministro subcutáneo y al suministro transdérmico, la invención actual tiene una aplicabilidad particular. Esto se debe a que el suministro subcutáneo y el suministro transdérmico se influencian, entre otras cosas, por el tamaño del agente terapéutico, ya que cualquier agente debe viajar a través de varias capas de piel para llegar a la circulación general. Como resultado, el aumento del tamaño de una molécula da como resultado un aumento concomitante del tiempo de circulación sistémica para el suministro subcutáneo y transdérmico. Por lo tanto, las composiciones proporcionadas en la presente descripción pueden proporcionar un comienzo de acción relativamente rápido mediante el empleo de un polímero relativamente pequeño asociado con una primera población de conjugados (para proporcionar conjugados relativamente pequeños) que pueden viajar mejor a través de las capas dérmicas, así como también una duración de acción más prolongada al emplear un polímero relativamente grande asociado con una segunda población de conjugados (para proporcionar conjugados relativamente grandes) que requiere más tiempo para viajar a través de las capas dérmicas.
La presente invención también incluye la composición como se proporciona en la presente descripción en combinación con un excipiente farmacéutico. Por tanto, el método para preparar las composiciones en la presente descripción incluye la etapa opcional de añadir un excipiente farmacéuticamente aceptable. Generalmente, la propia composición estará en forma sólida (por ejemplo, un precipitado), que puede combinarse con un excipiente farmacéutico adecuado que puede estar o bien en forma sólida o líquida. Por ejemplo, las composiciones (y las correspondientes preparaciones farmacéuticas) pueden proporcionarse en forma liofilizada o en solución.
Los excipientes ilustrativos incluyen, sin limitación, los seleccionados del grupo que consiste en carbohidratos, sales inorgánicas, agentes antimicrobianos, antioxidantes, tensioactivos, tampones, ácidos, bases y sus combinaciones.
Un carbohidrato tal como un azúcar, un azúcar derivatizado tal como un alditol, ácido aldónico, un azúcar esterificada y/o un polímero de azúcar puede estar presente como excipiente. Los excipientes de carbohidratos específicos incluyen, por ejemplo: monosacáridos, tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares; disacáridos, tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa y similares; polisacáridos, tales como rafinosa, melezitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles, tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol, sorbitol (glucitol), piranosil sorbitol, mioinositol y similares.
El excipiente también puede incluir una sal inorgánica o tampón tal como el ácido cítrico, el cloruro de sodio, el cloruro de potasio, el sulfato de sodio, el nitrato de potasio, el fosfato de sodio monobásico, el fosfato de sodio dibásico y sus combinaciones.
La preparación también puede incluir un agente antimicrobiano para prevenir o disuadir el crecimiento microbiano. Los ejemplos no limitantes de agentes antimicrobianos adecuados para la presente invención incluyen el cloruro de benzalconio, el cloruro de bencetonio, el alcohol bencílico, el cloruro de cetilpiridinio, el clorobutanol, el fenol, el alcohol feniletílico, el nitrato fenilmercúrico, el timersol y sus combinaciones.
También puede estar presente un antioxidante en la preparación. Los antioxidantes se usan para prevenir la oxidación, para evitar de esta manera el deterioro del conjugado u otros componentes de la preparación. Los antioxidantes adecuados para usaren la presente invención incluyen, por ejemplo, el palmitato de ascorbilo, el hidroxianisol butilado, el hidroxitolueno butilado, el ácido hipofosforoso, el monotioglicerol, el galato de propilo, el bisulfito de sodio, el formaldehído sulfoxilato de sodio, metabisulfito de sodio y sus combinaciones.
Puede estar presente un tensioactivo como excipiente. Los tensioactivos ilustrativos incluyen: los polisorbatos, tales como el "Tween 20" y el "Tween 80", y los plurónicos tales como F68 y F88 (ambos disponibles de BASF, Mount Olive, Nueva Jersey); los ésteres de sorbitán; los lípidos, tales como los fosfolípidos tales como la lecitina y otras fosfatidilcolinas, las fosfatidiletanolaminas (aunque preferentemente no en forma liposomal), los ácidos grasos y ésteres grasos; los esteroides, como el colesterol; y los agentes quelantes, tales como el EDTA, el zinc y otros cationes adecuados.
Pueden estar presentes ácidos o bases como excipiente en la preparación. Los ejemplos no limitantes de ácidos que pueden usarse incluyen aquellos ácidos seleccionados del grupo que consiste en ácido clorhídrico, ácido acético, ácido fosfórico, ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido fórmico, ácido tricloroacético, ácido nítrico, ácido perclórico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido fumárico y sus combinaciones. Los ejemplos de bases adecuadas incluyen, sin limitación, las bases seleccionadas del grupo que consiste en hidróxido de sodio, acetato de sodio, hidróxido de amonio, hidróxido de potasio, acetato de amonio, acetato de potasio, fosfato de sodio, fosfato de potasio, citrato de sodio, formiato de sodio,
sulfato de sodio, sulfato de potasio, fumarato de potasio y sus combinaciones.
Las preparaciones farmacéuticas abarcan todo tipo de formulaciones y en particular aquellas que son adecuadas para la inyección, por ejemplo, polvos que pueden reconstituirse, así como también suspensiones y soluciones. La cantidad de conjugado (es decir, el conjugado formado entre el agente activo y el polímero descrito en la presente descripción) en la composición variará en dependencia de varios factores, pero será óptimamente una dosis terapéuticamente efectiva cuando la composición se almacene en contenedor de dosis unitaria (por ejemplo, un vial). Además, la preparación farmacéutica puede almacenarse en una jeringa. Puede determinarse experimentalmente una dosis terapéuticamente efectiva mediante la administración repetida de cantidades crecientes del conjugado para determinar qué cantidad produce un punto final clínicamente deseado.
La cantidad de cualquier excipiente individual en la composición variará en dependencia de la actividad del excipiente y las necesidades particulares de la composición. Típicamente, la cantidad óptima de cualquier excipiente individual se determina mediante la experimentación de rutina, es decir, mediante la preparación de composiciones que contienen cantidades variables del excipiente (que van de bajas a altas), examinar la estabilidad y otros parámetros y luego determinar el intervalo en el que el rendimiento óptimo se logra sin efectos adversos significativos.
Generalmente, sin embargo, el excipiente estará presente en la composición en una cantidad de aproximadamente 1 % a aproximadamente 99 % en peso, preferentemente de aproximadamente 5 %-98 % en peso, con mayor preferencia de aproximadamente 15-95 % en peso del excipiente, con concentraciones inferiores al 30 % en peso como más preferidas.
Estos excipientes farmacéuticos anteriores junto con otros excipientes se describen en "Remington: "The Science & Practice of Pharmacy", 19na edición, Williams & Williams, (1995), "Physician's Desk Reference", 52da edición, Medical Economics, Montvale, NJ (1998) y Kibbe, A.H., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3ra edición, American Pharmaceutical Association, Washington, D.C., 2000.
Las preparaciones farmacéuticas descritas en la presente descripción se administran típicamente, aunque no necesariamente, mediante inyección y, por lo tanto, generalmente son soluciones o suspensiones líquidas inmediatamente antes de la administración. La preparación farmacéutica también puede tomar otras formas tales como jarabes, cremas, geles, ungüentos, tabletas, polvos y similares. También se incluyen otros modos de administración, tales como pulmonar, rectal, transdérmico, transmucosal, oral, intratecal, subcutáneo, intraarterial, etcétera. Ventajosamente, la preparación farmacéutica (así como también la composición) puede proporcionarse en forma de dosis unitaria. Además, la preparación farmacéutica (así como también la composición) puede usarse en un vial (por ejemplo, un vial de vidrio o un vial de plástico) o en una jeringa para proporcionar una jeringa precargada.
Como se describió anteriormente, la preparación farmacéutica puede inyectarse por vía parenteral mediante inyección intravenosa, o menos preferentemente mediante inyección intramuscular o subcutánea. Los tipos de formulación adecuados para la administración parenteral incluyen soluciones listas para inyectarse, polvos secos para combinar con un solvente antes de su uso, suspensiones listas para inyectarse, composiciones secas insolubles para su combinación con un vehículo antes del uso y emulsiones y concentrados líquidos para su dilución antes de la administración, entre otros. Típicamente, la preparación se proporciona en forma seca (por ejemplo, forma liofilizada) para almacenar y se reconstituye con un diluyente líquido adecuado. Los diluyentes líquidos preferidos se seleccionan del grupo que consiste en agua bacteriostática para inyección, dextrosa al 5 % en agua, solución salina tamponada con fosfato, solución de Ringer, solución salina, agua estéril, agua desionizada y sus combinaciones.
También se describe en la presente descripción un método para proporcionar un comienzo inicial de actividad y un comienzo retardado de la actividad, en donde el método comprende las etapas de: (i) administrar a un paciente una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tienen un peso molecular promedio en peso; y (ii) administrar a un paciente una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo está compuesto por uno o más polímeros que tiene un peso molecular promedio en peso mayor que el peso molecular promedio en peso de uno o más polímeros en la primera población. Típicamente, la primera y la segunda población se administran simultáneamente. La administración simultánea se efectúa convenientemente al administrar una preparación farmacéutica como se describe en la presente descripción. Sin embargo, es posible administrar también la primera y la segunda población en serie, una tras otra, o después de un retraso para determinar, por ejemplo, si el paciente responde a la terapia.
En algunas circunstancias, puede ser conveniente administrar las poblaciones mixtas de conjugados de polímero-agente activo solo como una dosis inicial con administraciones subsecuentes limitadas, por ejemplo, a la segunda población de conjugados de polímero de agente activo asociados con el peso molecular promedio en peso más alto. Así, por ejemplo, una composición de la invención puede usarse por el personal médico de emergencia de forma urgente, mientras que el mantenimiento de los niveles terapéuticos del agente polimérico activo puede lograrse al administrar solo una población de polímero-agente activo de forma rutinaria.
La invención también proporciona una composición de acuerdo con las reivindicaciones para usar como medicamento. En la presente descripción se describe un método para administrar la composición tal como se proporciona en la presente descripción a un paciente que padece una afección que responde al tratamiento con conjugados de polímero-agente
activo. El método comprende administrar, generalmente mediante inyección, una cantidad terapéuticamente efectiva de los conjugados de polímero-agente activo (preferentemente proporcionados como parte de una preparación farmacéutica). El método de administración puede usarse para tratar cualquier afección que pueda remediarse o prevenirse mediante la administración de las composiciones particulares de polímero-agente activo. Los expertos en la técnica apreciarán qué afecciones puede tratar de manera efectiva un conjugado de polímero-agente activo específico. La dosis real que se va a administrar variará dependiendo de la edad, el peso y el estado general del sujeto, así como también de la gravedad de la afección que se esté tratando, el criterio del profesional sanitario y el conjugado que se esté administrando. Se conocen las cantidades terapéuticamente efectivas para los expertos en la técnica y/o se describen en los textos de referencia y la literatura pertinentes. Generalmente, una cantidad terapéuticamente efectiva variará de aproximadamente 0,001 mg a 100 mg, preferentemente en dosis de 0,01 mg/día a 75 mg/día, y con mayor preferencia en dosis de 0,10 mg/día a 50 mg/día.
La dosis unitaria de cualquier conjugado dado (de nuevo, preferentemente se proporciona como parte de una preparación farmacéutica) puede administrarse en una variedad de programas de dosificación en dependencia del criterio del médico, las necesidades del paciente, etcétera. El programa de dosificación específico será conocido por los expertos en la técnica o puede determinarse experimentalmente mediante el uso de métodos de rutina. Los esquemas de dosificación ilustrativos incluyen, sin limitación, la administración cinco veces al día, cuatro veces al día, tres veces al día, dos veces al día, una vez al día, tres veces a la semana, dos veces a la semana, una vez a la semana, dos veces al mes, una vez al mes y cualquiera de sus combinaciones. Una vez que se ha alcanzado el punto clínico final, se detiene la dosificación de la composición.
Cuando los conjugados incluyen polímeros que pueden escindirse del agente terapéutico, una ventaja de las composiciones es la capacidad de que los polímeros relativamente grandes se eliminen del cuerpo como resultado de la disminución de tamaño tras la escisión del polímero del resto del conjugado. De manera óptima, la escisión de cada polímero se facilita mediante el uso de enlaces fisiológicamente escindibles y/o enzimáticamente degradables tales como enlaces que contienen uretano, amida, carbonato o éster. De esta forma, la eliminación del conjugado (mediante la escisión de polímeros individuales) puede modularse mediante la selección del tamaño molecular del polímero y el tipo de grupo funcional que proporcionaría las propiedades de eliminación deseadas. Un experto en la técnica puede determinar el tamaño molecular adecuado del polímero, así como también el grupo funcional escindible. Por ejemplo, un experto en la técnica, mediante el uso de la experimentación de rutina, puede determinar un tamaño molecular apropiado y un grupo funcional escindible mediante la preparación primero de una variedad de conjugados con diferentes pesos de polímero y grupos funcionales escindibles, y luego obtener el perfil de eliminación (por ejemplo, mediante el muestreo periódico de sangre u orina) administrar el derivado del polímero a un paciente y tomar muestras periódicas de sangre y/u orina. Una vez que se han obtenido una serie de perfiles de eliminación para cada conjugado analizado, puede identificarse un conjugado adecuado.
Parte experimental
La práctica de la invención empleará, a menos que se indique de otra manera, técnicas convencionales de síntesis orgánica y similares, que son entendidas por un experto en la técnica y se explican en la bibliografía. Se han realizado esfuerzos para garantizar la precisión con respecto a los números usados (por ejemplo, cantidades, temperatura, etcétera), pero deben tenerse en cuenta algunos errores y desviaciones experimentales. Cada uno de los siguientes ejemplos proféticos proporciona beneficios inesperados sobre la técnica anterior.
Ejemplo 1
Se prepara una primera población de un conjugado lineal de rhEPO conjugado con mono-PEG de acuerdo con el Ejemplo 8 en el documento EP 1333 036. El peso molecular promedio en peso de la porción polimérica del conjugado en esta primera composición es de 5000 Daltons.
Se prepara una segunda población de un conjugado lineal de rhEPO conjugado con mono-PEG de acuerdo con el Ejemplo 8 en el documento EP 1133036 excepto que el peso molecular promedio en peso de la porción polimérica del conjugado en esta segunda composición es 30000 Daltons.
A continuación, se combinan y mezclan bien la primera y la segunda población.
Cada una de la primera población, segunda población y mezcla combinada se administra a ratas siguiendo el protocolo descrito en el Ejemplo 11 del documento EP 1333036. Brevemente, cada una de la primera y la segunda población y la mezcla combinada se diluye a 2,5 pg/ml (asumir una relación 1:1: del primer conjugado de población al segundo conjugado de población para la mezcla combinada) con solución salina fisiológica que contiene 0,05 % de albúmina de suero de rata y Tween 20 al 0,05 %. Cada una de la primera y la segunda población y la mezcla combinada se administra a un grupo separado de ratas mediante una sola inyección en la cola a 2 ml/kg.
Se obtienen muestras de sangre de cada rata (mediante la extracción de sangre de la vena de la cola) de cada grupo los días 1, 2, 4, 5, 7, 10, 15, 21, 29 y 35 después de la administración. Cada muestra de sangre se analiza para determinar el recuento de reticulocitos y el nivel de hemoglobina. Los promedios aproximados y esperados para cada grupo se
proporcionan en las Figuras 1 (recuento de reticulocitos) y 2 (nivel de hemoglobina).
Como puede verse en las Figuras 1 y 2, la mezcla de conjugados combinados de EPO-PEG proporciona un comienzo de acción relativamente más rápido junto con una acción relativamente sostenida en comparación con cualquiera de las poblaciones administradas solas.
Ejemplo 2
Una primera composición que comprende una sola población de conjugados de interferón (un solo polímero unido a un solo interferón), en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente pequeño (por ejemplo, aproximadamente 5000 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente rápido (por ejemplo, alrededor de cinco horas) como se evidencia a través de su Tmáx (es decir, la cantidad de tiempo después de la administración para que el agente alcance su concentración máxima).
Una segunda composición que comprende una sola población de conjugados de interferón (un solo polímero unido a un solo interferón), en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente grande (por ejemplo, aproximadamente 40 000 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente largo (por ejemplo, alrededor de 96 horas) como se evidencia a través de su Tmáx.
Cada una de las dos poblaciones de interferón polimérico se combina y mezcla bien para formar una composición única compuesta por las diferentes poblaciones. Tras la administración a un paciente por vía subcutánea, se espera que la composición única proporcione niveles relativamente altos de un conjugado de interferón-PEG rápidamente (para alcanzar de esta manera la concentración terapéutica mínima con relativa rapidez) así como también los niveles sostenidos a lo largo del tiempo (para mantener de esta manera las concentraciones por encima de la concentración terapéutica mínima a lo largo del tiempo).
Ejemplo 3
Una primera composición que comprende una sola población de conjugados de G-CSF (por ejemplo, Filgrastim), en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente pequeño (por ejemplo, aproximadamente 5000 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente rápido como se evidencia a través de su Tmáx (es decir, la cantidad de tiempo después de la administración para que el agente alcance su concentración máxima).
Una segunda composición que comprende una sola población de conjugados de G-CSF (por ejemplo, Filgrastim), en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente grande (por ejemplo, aproximadamente 20000 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente prolongado como se evidencia a través de su Tmáx.
Cada una de las dos poblaciones de polímero G-CSF se combinan y mezclan bien para formar una única composición compuesta por las diferentes poblaciones. Tras la administración a un paciente por vía subcutánea, se espera que la composición única proporcione niveles relativamente altos de un conjugado de G-CSF-PEG rápidamente, así como también los niveles sostenidos a lo largo del tiempo, hasta que el recuento absoluto de neutrófilos posterior al punto más bajo vuelva a la normalidad.
Ejemplo 4
Una primera composición que comprende una única población de conjugados de insulina, en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente pequeño (por ejemplo, aproximadamente 750 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente rápido como se evidencia a través de su Tmáx (es decir, la cantidad de tiempo después de la administración para que el agente alcance su concentración máxima).
Una segunda composición que comprende una sola población de conjugados de insulina, en donde el polímero (un PEG) tiene un peso molecular promedio en peso relativamente grande (por ejemplo, aproximadamente 5000 Daltons), se encuentra que tiene un comienzo relativamente prolongado como se evidencia a través de su Tmáx.
Cada una de las dos poblaciones de polímero de insulina se combina y mezcla bien para formar una composición única compuesta por las diferentes poblaciones. Tras la administración a un paciente por vía subcutánea, se espera que la composición única proporcione niveles relativamente altos de un conjugado de insulina-PEG rápidamente, así como también niveles sostenidos a lo largo del tiempo.
Claims (48)
1. Una composición que comprende:
una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la primera población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; y una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímero-agente activo en la segunda población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso,
en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 10000 Daltons a 100000 Daltons,
en donde el agente activo es una proteína o péptido, y además en donde el agente activo en la primera población de conjugados de polímero-agente activo y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es la misma proteína o péptido.
2. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 100 Daltons a menos de 120 000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 100 Daltons a 120000 Daltons.
3. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 100 Daltons a menos de 20 000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 100 Daltons a 120000 Daltons.
4. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 100 Daltons a menos de 20 000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 20000 Daltons a 100000 Daltons.
5. La composición de acuerdo con la reivindicación 4, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 1000 Daltons a 15000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 25 000 Daltons a 50000 Daltons.
6. La composición de acuerdo con la reivindicación 5, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 2500 Daltons a 10000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de más de 30 000 Daltons a 40000 Daltons.
7. La composición de acuerdo con la reivindicación 6, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera población tiene un peso molecular promedio en peso de 5000 Daltons y cada poli(óxido de alquileno) en la segunda población tiene un peso molecular promedio en peso en el intervalo de 30000 Daltons a 40000 Daltons.
8. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 20000 Daltons a 100000 Daltons.
9. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 30000 Daltons a 100000 Daltons.
10. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 20000 Daltons a 40000 Daltons.
11. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 25000 Daltons a 35000 Daltons.
12. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 1000:1 a 100:1.
13. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 100:1 a 10:1.
14. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 10:1 a 1:1.
15. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 1:1 a 1:10.
16. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 1:10 a 1:100.
17. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la relación molar entre la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es de 1:100 a 1:1000.
18. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada poli(óxido de alquileno) es un poli(etilenglicol).
19. La composición de acuerdo con la reivindicación 18, en donde cada poli(etilenglicol) se bloquea terminalmente con un resto de bloqueo de extremos.
20. La composición de acuerdo con la reivindicación 19, en donde cada resto de bloqueo de extremos se selecciona independientemente del grupo que consiste en alcoxi, alcoxi sustituido, alqueniloxi, alqueniloxi sustituido, alquiniloxi, alquiniloxi sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido e hidroxi.
21. La composición de acuerdo con la reivindicación 20, en donde cada resto de bloqueo de extremos es alcoxi.
22. La composición de acuerdo con la reivindicación 21, en donde cada alcoxi es metoxi.
23. La composición de acuerdo con la reivindicación 20, en donde cada resto de bloqueo de extremos es hidroxi.
24. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada poli(óxido de alquileno) en la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo tiene independientemente una estructura seleccionada del grupo que consiste en homopolímero, copolímero alterno, copolímero aleatorio, copolímero de bloque, tripolímero alterno, tripolímero aleatorio y tripolímero de bloque.
25. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de los conjugados de polímero-agente activo en la primera población comprende un único poli(óxido de alquileno) unido a un único agente activo.
26. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de los conjugados de polímero-agente activo en la segunda población comprende un único poli(óxido de alquileno) unido a un único agente activo.
27. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde cada uno de los conjugados de polímero-agente activo tanto en la primera como en la segunda población comprende un único poli(óxido de alquileno) unido a un único agente activo.
28. La composición de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el poli(óxido de alquileno) es un poli(etilenglicol).
29. La composición de acuerdo con la reivindicación 28, en donde el poli(etilenglicol) es lineal.
30. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente activo es la eritropoyetina.
31. La composición de acuerdo con la reivindicación 30, en donde la eritropoyetina se obtiene de manera recombinante.
32. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente activo es un péptido.
33. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el agente activo es una proteína.
34. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además un excipiente farmacéuticamente aceptable.
35. La composición de acuerdo con la reivindicación 34, en donde el excipiente es un azúcar.
36. La composición de acuerdo con la reivindicación 34, en forma liofilizada.
37. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, que comprende además un diluyente líquido.
38. La composición de acuerdo con la reivindicación 37, en donde el diluyente líquido se selecciona del grupo que consiste en agua bacteriostática para inyección, dextrosa al 5% en agua, solución salina tamponada con fosfato,
solución de Ringer, solución salina, agua estéril, agua desionizada y sus combinaciones.
39. La composición de acuerdo con la reivindicación 1, en forma de dosis unitaria.
40. La composición de acuerdo con la reivindicación 34, almacenada en un vial de vidrio.
41. Un método para preparar una mezcla, en donde el método comprende las etapas de:
( i) proporcionar una primera población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímeroagente activo en la primera población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso;
( i i ) proporcionar una segunda población de conjugados de polímero-agente activo, cada conjugado de polímeroagente activo en la segunda población está compuesto por uno o más poli(óxidos de alquileno) que tienen un peso molecular promedio en peso; y
( i i i ) combinar la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo, para formar de esta manera una mezcla de la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo, en donde la diferencia absoluta entre el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la primera población y el peso molecular promedio en peso de los poli(óxidos de alquileno) en la segunda población es de 10000 Daltons a 100000 Daltons,
en donde el agente activo es una proteína o péptido, y además en donde el agente activo en la primera población de conjugados de polímero-agente activo y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo es la misma proteína o péptido.
42. El método de la reivindicación 41, que comprende además la etapa de mezclar la primera y la segunda población de conjugados de polímero-agente activo para formar una mezcla sustancialmente homogénea.
43. El método de la reivindicación 42, que comprende además la etapa de añadir un excipiente farmacéuticamente aceptable.
44. El método de la reivindicación 43, en donde el excipiente es un azúcar.
45. El método de la reivindicación 44, que comprende además la etapa de liofilización de la mezcla.
46. La composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 40 para usar como medicamento.
47. La composición para usar de acuerdo con la reivindicación 46, en donde el medicamento se administra mediante inyección.
48. Un gel que comprende la composición de la reivindicación 1.
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