SK167899A3 - PROCESS FOR PREPARING AQUEOUS PHYTASE-CONTAINING LIQUIDS AND USEì (54) THEREOF - Google Patents
PROCESS FOR PREPARING AQUEOUS PHYTASE-CONTAINING LIQUIDS AND USEì (54) THEREOF Download PDFInfo
- Publication number
- SK167899A3 SK167899A3 SK1678-99A SK167899A SK167899A3 SK 167899 A3 SK167899 A3 SK 167899A3 SK 167899 A SK167899 A SK 167899A SK 167899 A3 SK167899 A3 SK 167899A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- phytase
- granulate
- composition
- granules
- aqueous liquid
- Prior art date
Links
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 14
- 108010011619 6-Phytase Proteins 0.000 claims abstract description 122
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims abstract description 103
- 229940085127 phytase Drugs 0.000 claims abstract description 102
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 49
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 46
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 21
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims abstract description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 16
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims abstract description 15
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims abstract description 9
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 claims abstract description 9
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 75
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 75
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 75
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 34
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 34
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 22
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000005453 pelletization Methods 0.000 claims description 21
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 20
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 18
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 15
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 claims description 15
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 14
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 14
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 13
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 8
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 claims description 6
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 claims description 6
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 6
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 claims description 5
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 claims description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 claims description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims description 4
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 4
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical group OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims description 4
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 claims description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 3
- 239000006053 animal diet Substances 0.000 claims description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 3
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 2
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 claims description 2
- 241000499912 Trichoderma reesei Species 0.000 claims description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000828 canola oil Substances 0.000 claims description 2
- 235000019519 canola oil Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 claims description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 claims description 2
- 238000004042 decolorization Methods 0.000 claims description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 2
- 238000009478 high shear granulation Methods 0.000 claims description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 claims description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims 2
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 claims 1
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 claims 1
- -1 ammonium ions Chemical class 0.000 abstract description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 abstract description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 abstract description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 abstract description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 14
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 12
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 8
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 8
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 8
- 238000005563 spheronization Methods 0.000 description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 7
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 6
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 6
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 5
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N Inositol-hexakisphosphate Chemical compound OP(O)(=O)O[C@H]1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 4
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 4
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 4
- 235000002949 phytic acid Nutrition 0.000 description 4
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 3
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 3
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 3
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 3
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 239000004291 sulphur dioxide Substances 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 3
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 3
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 241000228195 Aspergillus ficuum Species 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 2
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 2
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 2
- IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N Phytic acid Natural products OP(O)(=O)OC1C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C(OP(O)(O)=O)C1OP(O)(O)=O IMQLKJBTEOYOSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 238000010793 Steam injection (oil industry) Methods 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000000433 anti-nutritional effect Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 2
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000000467 phytic acid Substances 0.000 description 2
- 229940068041 phytic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 description 2
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- 229920000856 Amylose Polymers 0.000 description 1
- 235000019890 Amylum Nutrition 0.000 description 1
- 235000019737 Animal fat Nutrition 0.000 description 1
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 1
- 101710152845 Arabinogalactan endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 241001370055 Aspergillus niger CBS 513.88 Species 0.000 description 1
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 description 1
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 1
- 108700038091 Beta-glucanases Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 description 1
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 239000004470 DL Methionine Substances 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 101710147028 Endo-beta-1,4-galactanase Proteins 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 1
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 1
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 235000019759 Maize starch Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- 239000006057 Non-nutritive feed additive Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283903 Ovis aries Species 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 102000006447 Phospholipases A2 Human genes 0.000 description 1
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 1
- 108010059820 Polygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 229910010413 TiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N alpha-D-glucose Chemical group OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-DVKNGEFBSA-N 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P ammonium molybdate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-][Mo]([O-])(=O)=O APUPEJJSWDHEBO-UHFFFAOYSA-P 0.000 description 1
- 239000011609 ammonium molybdate Substances 0.000 description 1
- 235000018660 ammonium molybdate Nutrition 0.000 description 1
- 229940010552 ammonium molybdate Drugs 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 230000003625 amylolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000004061 bleaching Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 108010089934 carbohydrase Proteins 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 108010093305 exopolygalacturonase Proteins 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 210000003746 feather Anatomy 0.000 description 1
- 239000002657 fibrous material Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- IBIRZFNPWYRWOG-UHFFFAOYSA-N phosphane;phosphoric acid Chemical compound P.OP(O)(O)=O IBIRZFNPWYRWOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 150000004760 silicates Chemical class 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- OECHMUONYSVUHV-UHFFFAOYSA-I tricalcium;carbonate;phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]C([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O OECHMUONYSVUHV-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/25—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by extrusion
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/14—Pretreatment of feeding-stuffs with enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/163—Sugars; Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/189—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/10—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by agglomeration; by granulation, e.g. making powders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/20—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by moulding, e.g. making cakes or briquettes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/10—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for ruminants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/40—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for carnivorous animals, e.g. cats or dogs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
- A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
- A23K50/80—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for aquatic animals, e.g. fish, crustaceans or molluscs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/98—Preparation of granular or free-flowing enzyme compositions
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Birds (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Insects & Arthropods (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Carbon And Carbon Compounds (AREA)
- Silicates, Zeolites, And Molecular Sieves (AREA)
Description
Tento vynález sa týka prípravy a prostriedkov s obsahom fytázových enzýmov a ich použitia na prípravu granulátov s kŕmnymi enzýmami v krmivách pre zvieratá.
Doterajší stav techniky
Použitie rôznych enzýmov ako je fytáza vo zvieracom, napr. dobytčom, krmive sa stáva obvyklejším. Tieto enzýmy sú tu zahrnuté na zvýšenie nutričného alebo minerálneho výťažku z potravy zužitkovaného zvieraťom a môžu tiež pomôcť pri trávení. Zvyčajne sa produkujú kulturováciou mokroorganizmov vo veľkokapacitných fermentoroch u priemyselných producentov enzýmov. Na záver fermentácie sa výsledný bujón zvyčajne podrobí sérii filtračných krokov na oddelenie biomasy (mikroorganizmov) od želaného enzýmu (v roztoku). Roztok enzýmu sa potom predáva ako kvapalina (často po pridaní rôznych stabilizátorov) alebo sa spracuje na suchý prostriedok.
Enzýmové kvapalné alebo suché prostriedky sa používajú v komerčnom rozsahu v priemysle krmív pre zvieratá. Kvapalné prostriedky sa môžu dodať ku krmivu po peletizácii na predídenie tepelnej inaktivácie enzýmu, ktorá by mohla nastať počas peletizačného procesu.
Suché prostriedky obvykle umožňujú peletizáciu parou, kde sa krmivo podrobí injektovaniu(niam) pary pred peletizáciou. V nasledujúcom peletizačnom kroku sa krmivo pretlačí cez matricu alebo dýzu a výsledné pásiky sa režú na vhodné pelety s rôznou dĺžkou. Počas tohto procesu môže teplota stúpnuť na 60 až 95 °C.
Fytázy sú enzýmy, ktoré (aspoň čiastočne) hydrolyzujú fytát (myo-inozitolhexakisfosforečnan) na myo-inozitol a anorganický fosforečnan. Tieto enzýmy sa našli v pšeničných otrubách, rastlinných semenách, zvieracích črevách a môžu byť produkované mikroorganizmami. Fytázy sa dodávajú do krmív zvierat, pretože ak sú schopné rozkladať fytázu, môžu zvýšiť dostupnosť fosforu a iných nutričných zložiek zvieraťu. Fytázy tiež zvyšujú stráviteľnosť vápnika.
Fosfor je základný prvok pe rast organizmu. Pre dobytok sa často krmivo obohacuje s anorganickým fosforom na získanie dobrého rastu u jednožalúdkových zvierat. Ale často toto nie je potrebné v krmivách pre prežúvavcov, pretože mikroorganizmy prítomné u prežúvavca produkujú enzýmy, ktoré katalyzujú konverziu fytázy na inozitol a anorganický fosforečnan. Rozloženie fytátu je často želateľné, pretože kyselina fytátová môže byť antinutričná, pretože viaže užitočné minerály ako je vápnik, zinok, horčík a železo, a môže tiež nepriaznivo reagovať s proteínmi, pričom zníži ich biodostupnosť pre zviera. Navyše môže fytáza tiež znižovať množstvo anorganického krmiva, ktoré je potrebné dodať a tak sa znižuje množstvo vylučovaného fosforu v hnojive, čo je lepšie pre životné prostredie.
Gény pre rôzne fytázové enzýmy sa klonovali a expresovali. EP-A-0,420,258 (Gist-Brocades) opisuje expresiu mikrobiálnych fytáz.
V neskoršej prihláške EP-A-0,684,313 (Hoffmann-La Roche) opisuje DNA sekvencie kódujúce rôzne polynukleotidy s fytázovou aktivitou.
EP-A-0,758,018 (Gist-Brocades) sa vzťahuje k spôsobom zlepšenia stability enzýmov, najmä na použitie ako krmiva pre zvieratá a týka sa fytáz.
WO-A-94/03612 (Alko) opisuje výrobu enzýmov degradujúcich fytázu v Trichoderma, zatiaľ čo WO-A-97/16076 (Novo Nordisk) opisuje prostriedky obsahujúce enzýmy na použitie vo výrobe krmív pre zvieratá s obsahom rôznych hydrofóbnych látok.
Krmivo pre zvieratá predstavuje jednu z najväčších cenových položiek pri chove dobytka alebo iných zvierat.
Navyše aditíva ako enzýmy, ako je fytáza, môžu výrazne zvýšiť cenu krmiva pre zvieratá. Jedným z cieľov tohto vynálezu je poskytnúť fytázové prostriedky, ktoré sa môžu lacnejšie vyrobiť. Toto sa môže dosiahnuť schopnosťou vyrobiť vysoko aktívne alebo vysoko koncentrované fytázové kompozície. Niekoľko faktorov, ktoré umožňujú podľa tejto prihlášky vyrobiť tieto vysoko aktívne prostriedky, budú diskutované neskôr.
Ďalšou výhodou schopnosti vyrobiť vysokoaktívne fytázové prostiedky, ktoré boli poznamenané prihlasovateľom, je to, že tieto prostriedky môžu vykázať významný nárast stability, najmä počas peletizačného procesu v príprave krmiva pre zvieratá (pelety) a tak sú pravdepodobnejšie schopné udržať vyššiu fytázovú aktivitu ako prostriedky doteraz známe zo stavu techniky.
Podstata vynálezu
V prvom aspekte tohto vynálezu sa poskytuje spôsob prípravy vodnej kvapaliny obsahujúcej fytázu, ktorý zahŕňa:
a) kultiváciu mikroorganizmu rodu Aspergillus alebo
Trichoderma s heterológnym fytázovým génom pod kontrolou glukoamylázového (pre Aspergillus) alebo celobiohydrolázového (pre Trichoderma) promótora, za podmienok, ktoré umožňujú rekombinantú expresiu fytázy, kde médium obsahuje ako potravu pre mikroorganizmus asimilovateľný zdroj uhlíka a asimilovateľný zdroj dusíka,
b) filtráciu vodného média na odstránenie mikroorganizmov za vzniku vodného filtrátu, a
c) podrobenie filtrátu z b) ultrafiltrácii za vzniku vodnej kvapaliny s koncentráciou fytázy aspoň 14000 FTU/g.
Zistilo sa, že tento spôsob poskytuje najmä vysokú koncentráciu fytázy vo výslednej vodnej kompozícii. Toto dovoľuje prípravu iných fytázových kompozícií tiež pri vysokých úrovniach aktivity, čo znamená, že spôsob je nielen lacnejší (na jednotku enzýmovej aktivity), ale tiež sa zistilo, že koncentrovanejší prostriedok s obsahom fytázy je stabilnejší ako ich menej koncentrované náprotivky.
Mikroorganizmy sú výhodne z druhov Aspergillus niger, Aspergillus oryzae alebo Trichoderma reesei. Pre organizmy Aspergillus je fytázový gén vhodne pod glukoamylázového (alebo amyloglukozidázového, AG) kontrolou promótora.
Pre organizmy Trichoderma celobiohydrolázový promótor.
sa uprednostňuje použiť
Asimilovateľný zdroj uhlíka môže obsahovať glukózu a/alebo maltodextrín a/alebo asimilovateľný zdroj dusíka môže obsahovať amóniové ióny. Glukóza a amóniové ióny môžu byť ako jediné asimilovateľné uhlíkové alebo dusíkové zdroje vo vodnom médiu. To znamená, že sa neuvažuje použitie zložitých uhlíkových alebo dusíkových zdrojov. Amóniové ióny sa môžu poskytnúť buď ako amónium alebo amóniová soľ. Uprednostňované amóniové soli zahŕňajú dusičnan amónny, síran amónny alebo fosforečnan amónny.
Výhodne sa zdroj uhlíka a/alebo dusíka dodáva do kultivačného média počas fermentačného procesu. Rýchlosť dodávania oboch zdrojov môže byť v podstate taká istá ako ich spotreba mikroorganizmami. Potom sa môže uhlíkový a/alebo dusíkový zdroj podávať kontinuálnym alebo spojitým spôsobom. Zdroje uhlíka a dusíka sa môžu dodávať oddelene alebo v tej istej dávke.
Výsledná vodná kvapalina môže mať koncentráciu fytázy aspoň 16000 a možno ešte 18000 alebo viac FTU/g.
Použitím týchto zvláštnych organizmov za týchto podmienok bude filtrát relatívne koncentrovaný. To umožňuje, že sa môže podrobiť ultrafiltrácii. V niektorých spôsoboch v stave techniky výsledný filtrát obsahuje príliš veľa zvyškov a iných látok na umožnenie ultrafiltrácie (zanášače filtrov). Avšak v spôsobe podľa vynálezu je filtrát relatívne čistý, čo umožňuje, aby sa filtrát podrobil ultrafiltrácii bez ďalšieho spracovania a ultrafiltráciou sa dá získať obzvlášť vysoko koncentrovaná vodná kompozícia.
Spôsoby v stave techniky zahŕňali možnosť podrobenia buď filtrátu alebo vodnej kompozície buď kryštalizácii a/alebo krokom na odstraňovanie farby, napríklad filtrácii na aktívnom uhlí. Avšak obidva tieto dodatočné kroky (ktoré môžu zvýšiť cenu výroby fytázy) môžu byť podľa tohto vynálezu vynechané.
Výhodne mikroorganizmy neobsahujú alebo aspoň neexpresujú glukoamylázový gén. To znamená, že mikroorganizmy môžu venovať viac energie na výrobu fytázy.
Mikroorganizmy môžu obsahovať viacnásobné kópie fytázového génu. Zistilo sa, že to zvyšuje produkčné hladiny fytázy, pretože je tu viac fytázových génov na expresiu.
Vodná kompozícia môže byť v podstate bez taka-amylázy.
V spôsobe podľa vynálezu sa uprednostňuje, že (v podstate) všetky uhlíkové a/alebo dusíkové zdroje sa skonzumujú mikroorganizmami pred filtráciou v kroku b) . Toto sa dosiahne pokračovaním fermentácie počas určitého času po poslednom dodaní uhlíkových a/alebo dusíkových zdrojov. Alternatívne môže pokračovať fermentácia za štádiom, keď sa dodali všetky uhlíkové a/alebo dusíkové zdroje. Výhodou tohto, ako bude zrejmé, je to, že vodná kompozícia môže byť potom (v podstate) bez uhlíkových a/alebo dusíkových zdrojov (napr. glukózy a/alebo amóniových iónov). Opäť sa takto môže získať čistejšia vodná kvapalina, ktorá môže obsahovať niekoľko vedľajších produktov. Znížením množstva vedľajších produktov sa môže minimalizovať množstvo krokov spracovania, ktoré sa vyžadujú buď schopnosť použiť vodnú kvapalinu alebo na možností získania želanej vysokej fytázovej aktivity.
Najvýhodnejším organizmom je Aspergillus niger. Tiež je výhodné, ak je fytáza expresovaná v mikroorganizme s glukoamylázovou signálnou sekvenciou.
Výsledná kvapalina s obsahom fytázy sa môže potom použiť na rôzne účely, hoci jej aplikácia v krmivách pre zvieratá sa tu špecificky uvažuje. Druhý aspekt tohto vynálezu sa týka tejto vodnej kvapaliny, ktorá je pripraviteľná spôsobom podľa prvého aspektu, a obsahuje fytázu v koncentrácii aspoň 14000 FTU/g.
V opise fytáza znamená nie iba prírodné pôsobiace fytázové enzýmy, ale hocijaký enzým, ktorý má fytázovú aktivitu, napríklad schopnosť katalyzovať reakciu umožňujúcu odstránenie alebo uvoľnenie anorganického fosforu (fosforečnan) z myo-inozitolfosforečnanov. Výhodne bude fytáza patriť k triede EC 3.1.3.8. Výhodne je samotnou fytázou hubovitá fytáza odvodená od druhov Aspergillus alebo Tri choderma.
Vynález tiež môže poskytnúť spôsoby prípravy fytázových prostriedkov vo forme granulátov, ktoré využívajú jedlé uhľohydrátové polyméry ako nosiče. Nosič môže byť vo forme častíc alebo vo forme prášku. Vodná kvapalina s obsahom fytázy, ako je roztok alebo suspenzia, sa môže zmiešať s tuhým nosičom a absorbovať sa do nosiča. Počas alebo po zmiešaní sa kvalina s obsahom fytázy a nosič spracujú do granulátu, ktorý sa potom môže vysušiť. Použitie uhľohydrátového nosiča umožňuje absorpciu veľkého množstva kompozície (a teda aj fytázy). Zmes sa môže použiť na vytvorenie plastickej pasty alebo alebo neelastického cesta, ktoré sa môžu ľahko spracovať na granuly, napríklad sú extrudovateľné. Vhodne je nosič nevláknitý, čo umožňuje ľahšiu granuláciu: vláknité materiály môžu brániť granulácii extrúziou.
Množstvo dokumentov zo stavu techniky odkazuje na pelety s obsahom rôznych enzýmov, ale tieto sa používajú ako detergenty, často v pracích prostriedkoch. Oproti tomu táto prihláška nachádza použitie v krmivách pre zvieratá a z toho dôvodu sú granuláty podľa tohto vynálezu jedlé (zvieratami) a výhodne tiež stráviteľné. Preto teda nebude prekvapujúce, že granule a kompozície podľa vynálezu sú bez mydla, detergentov a bielidiel alebo bieliacich zlúčenín, zeolitov, spojív, plnív (TiO2, kaolín, silikáty, mastenec atď.) a iných.
Jedlý uhľohydrátový polymér má byť zvolený tak, aby bol jedlý pre zvieratá, pre ktoré je krmivo zamýšľané, a výhodne aj dobre stráviteľné. Polymér výhodne obsahuje glukózu (napr. polymér s obsahom glukózy), alebo (CfiH10O5)n jednotky. Výhodne uhľohydrátový polymér obsahuje α-D-glukopyranózové jednotky, amylózu (lineárny (1-4) α-D-glukánový polymér a/alebo amylopektín (rozvetvený D-glukán s a-D-(l->4) a a-D-(l->6) väzbami). Uprednostňovaným uhľohydrátovým polymérom je škrob. Iné vhodné polyméry obsahujúce glukózu, ktoré sa môžu použiť namiesto alebo navyše ku škrobu zahŕňajú a-glukány, β-glukány, pektín (ako je protopektín) a glykogén. Deriváty týchto uhľohydrátových polymérov, také ako étery alebo estery, sú tiež uvažované, hoci želatinovanému škrobu sa často vyhýba. Výhodne je uhľohydrátový polymér nerozpustný vo vode.
V tu opísaných príkladoch sa používa kukuričný, zemiakový a ryžový škrob. Avšak rovnocenne sa využíva aj škrob získaný z iných (napr. rastlín ako je zelenina alebo obilie) zdrojov takých ako tapioka, maniok, pšenica, kukurica, ságo, raž, ovos, jačmeň, batáta, cirok alebo merantový škrob. Podobne sa používajú podľa vynálezu prírodné aj modifikované (napr. dextrín) typy škrobu. Výhodne uhľohydráty (napr. škrob) obsahujú malé alebo nijaké množstvo proteínu, napr. menej ako 5 % (hmotn./hmotn.) , ako je menej ako 2 % (hmotn./hmotn.) , výhodne menej ako 1 % (hmotn./hmotn.).
Aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) tuhého nosiča môže obsahovať uhľohydrátový polymér (ako škrob). Výhodne však najmenej aspoň 30 % (hmotn./hmotn.) tuhého nosiča obsahuje uhľohydráty, optimálne aspoň 40 % (hmotn./hmotn.). Výhodne je hlavnou zložkou tuhého nosiča uhľohydrát (napr. škrob), napríklad viac ako 50 % (hmotn./hmotn.) , výhodne aspoň 60 % (hmotn./hmotn.), vhodne aspoň 70 % (hmotn./hmotn.) a optimálne aspoň 80 % (hmotn./hmotn.). Toto hmotnostné percento je vztiahnuté na celkovú hmotnosť neenzýmových zložiek v konečnom suchom granulate.
Množstvo kvapaliny obsahujúcej fytázu, ktoré sa môže absorbovať do nosiča, je zvyčajne obmedzené množstvom vody, ktorá sa môže absorbovať. Pre prírodný granulovaný škrob toto môže byť v rozmedzí 25 až 30 % (hmotn./hmotn.) , bez použitia zvýšených teplôt (ktoré zapríčiňujú napučanie škrobu). V praxi percento enzýmovej kvapaliny dodávanej k uhľohydrátu bude často väčšie ako toto, pretože kvapalina s obsahom enzýmu bude zvyčajne obsahovať výrazné množstvo tuhých látok. Roztok fytázy môže obsahovať okolo 25 % (hmotn./hmotn.) tuhých látok ako výsledok toho, že uhľohydrát (napr. škrob) a fytázová roztok sa môžu zmiešať v pomere uhľohydrát:fytázový roztok 0,5:1 až 2:1, napr. 1,2:1 až 1,6:1, pri pomere 60 % (hmotn./hmotn.):40 % (hmotn./hmotn.). Výhodne je množstvo kvapaliny dodanej k tuhému nosiču také, že (v podstate) všetka voda v (vodnej) kvapaline je absorbovaná uhľohydrátom prítomnom v tuhom nosiči.
Pri zvýšených teplotách škroby a iné uhľohydrátové polyméry môžu absorbovať väčšie množstvo vody pri napučaní. Z toho dôvodu je želateľné, aby uhľohydrátový polymér bol schopný absorbovať vodu (alebo vodné kvapaliny obsahujúce enzým). Napríklad obilný škrob môže absorbovať trikrát väčšie množstvo vody ako je jeho hmotnosť pri 60 °C a desaťkrát viac pri 70 °C. Použitie zvýšených teplôt na absorbciu väčšieho množstva kvapaliny s obsahom enzýmu je teda uvažované v tomto vynáleze a naozaj je výhodný špeciálne, ak sa jedná o termostabilné fytázové enzýmy. Pre tieto enzýmy sa preto zmiešanie tuhého nosiča a kvapaliny prevádza pri zvýšených teplotách (napr. nad teplotou okolia), takých ako nad 30 °C., výhodne nad 40 °C a optimálne nad 50 °C. Alternatívne alebo navyše sa môže kvapalina dodávať s touto teplotou.
Avšak vo všeobecnosti sú uprednostňované podmienky, keď nenastáva napúčanie pri nižších (napr. izbovej) teplotách na minimalizovanie straty aktivity, čo vyplýva z nestability (citlivé na teplo) fytáz pri vyšších teplotách. Výhodne je teplota počas zmiešavania enzýmu a kvapaliny od 20 do 25 °C.
Mechanické spracovanie použité v tomto vynáleze na vytvorenie zmesi kvapaliny s obsahom fytázy a tuhého nosiča na granuly (inými slovami granulácia) môžu používať známe techniky často používané pri výrobe potravinárskych, kŕmnych a enzýmových prostriedkov. Toto môže zahŕňať expanziu, extrúziu, sferonizáciu, peletizáciu, vysokošmykovú granuláciu, bubnovú granuláciu, aglomeráciu vo fluidnom lôžku alebo ich kombináciu. Tieto procesy sú zvyčajne charakterizované vstupom mechanickej energie, ako je pohon skrutky, rotácia zmiešavacieho mechanizmu, tlak rolovacieho mechanizmu peletizačného stroja, pohyb častíc rotáciou spodnej platne aglomerátora s fluidným lôžkom alebo pohyb častíc v prúde plynu alebo ich kombinácia. Tieto procesy umožňujú, aby sa zmiešal tuhý nosič (napr. vo forme prášku) s kvapalinou obsahujúcou fytázu (vodný roztok alebo suspenzia) a tak sa následne granuloval.
Už v ďalšom uskutočnení vynálezu, granulát (napr. aglomerát) sa vytvára sprejovaním alebo poťahovaním kvapaliny s obsahom fytázy na nosič, ako je v aglomerátore s fluidným lôžkom. Tu výsledné granuly môžu zahŕňať aglomerát, ktorý sa môže vyprodukovať v aglomerátore s fluidným lôžkom.
Výhodne zmiešavanie kvapaliny s obsahom fytázy a tuhého nosiča navyše zahŕňa miesenie zmesi. Toto zlepšuje plasticitu zmesi na uľahčenie granulácie (napr. extrúzie).
Ak sa granulát vytvára extrúziou, toto sa výhodne uskutočňuje pri nízkom tlaku. To môže poskytnúť tú výhodu, že teplota extrudovanej zmesi nebude alebo bude iba málo vzrastať. Nízkotlaková extrúzia zahŕňa napr. extrúziu vo Fuji Paudal bubnovom alebo piestovom extrudéri. Výhodne výsledkom extrúzie nie je teplota extrudovaného materiálu vyššia ako 40 °C. Extrúzia môže prirodzene produkovať granuly (granuly sa môžu odlomiť po prejdení dýzy) alebo sa môže použiť rezačka.
I
Výhodne budú mať granuly obsah vody od 3 0 do 4 0 %, napr. od 33 do 37 %. Obsah enzýmu je výhodne od 3 do 10 %, napr. 5 do 9 %.
Získané granuly sa môžu podrobiť zaobľovaniu (napr. sferonizácii) v sferonizéri, napr. v MARUMERISER™ stroji a/alebo spevňovaniu. Granuly sa môžu sferonizovať pred sušením, pretože to môže znížiť tvorbu prachu v konečnom granuláte a/alebo to môže uľahčiť hocijaké poťahovanie granulátu.
Granuly sa môžu potom sušiť v sušičke s fluidným lôžkom alebo v prípade aglomerácie vo fluidnom lôžku sa môže bezprostredne sušiť (v aglomerátore) za získania (suchej tuhej látky) granulátov. Iné známe metódy sušenia granúl v potravinárskom, krmovinárskom a enzýmovom priemysle môže použiť odborník. Výhodne je granulát schopný toku.
Výhodne sa sušenie uskutočňuje pri teplote od 25 do 60 ’C, napr. 30 až 50 °C. Sušenie tu môže trvať od 10 minút do niekoľkých hodín, ako je od 15 do 30 minút. DÍžka požadovaného času bude samozrejme závisieť na množstve sušených granúl, ale vodítkom je od 1 do 2 sekúnd na kg granúl.
Po sušení granúl má výsledný granulát výhodne obsah vody od 3 do 10 %, napr. od 5 do 9 %.
Potiahnutie sa môže aplikovať na granulát na dodanie dalších (napr. priaznivých) charakteristík alebo vlastností, ako je malý obsah prachu, farba, ochrana enzýmu pred okolným prostredím, rôzne enzýmové aktivity alebo ich kombinácia. Granuly sa môžu potiahnuť s tukom, voskom, polymérom, soľou, olejom a/alebo krémom alebo potiahnutím (napr. kvapalným), ktoré obsahuje (druhý) enzým alebo ich kombináciu. Bude zrejmé, že ak je želaných viacero vrstiev (rôznych) poťahov, potom sa môžu aplikovať. Na aplikáciu poťahu(ov) na granuláty je známych veľa spôsobov, ktoré zahŕňajú použitie fluidizovaného lôžka, vysokošmykového granulátora, mixérového granulátora alebo mixéru Nauta.
V inom uskutočnení sa môžu zaviesť dodatočné zložky do granulátu napr. ako spracovateľské pomocné látky na ďalšie zlepšenie stability peletizácie a/alebo skladovacej stability granulátu. Množstvo takých výhodných aditív je diskutované nižšie.
Soli môžu byť začlenené do granulátu (napr. s tuhým nosičom alebo kvapalinou). Výhodne (ako je navrhnuté v EP-A-0, 758, 018) sa môže anorganická soľ(i) dodať na zlepšenie spracovateľskej stability a skladovacej stability suchého fytázového prostriedku. Výhodné anorganické soli zahŕňajú dvojmocné katióny ako je zinok, horčík a vápnik. Najvýhodnejším aniónom je síran.
Výhodne (ako je navrhnuté v EP-A-0, 758, 018) sa môže anorganická soľ(i) dodať na zlepšenie spracovateľskej stability alebo skladovacej stability suchého enzýmového prostriedku. Výhodné anorganické soli sú vo vode rozpustné. Môžu zahŕňať dvojmocné katióny ako je zinok (najmä), horčík a vápnik. Najvýhodnejším aniónom je síran, hoci aj iné anióny, ktoré sú výsledkom rozpustnosti vo vode, sa môžu použiť. Soli sa môžu dodať (napr. k zmesi) v tuhej forme. Avšak soľ(i) sa môže rozpustič vo vode alebo v kvapline s obsahom enzýmu pred zmiešaním s tuhým nosičom. Vhodne sa soľ poskytuje v množstve, ktoré je aspoň 15 % (hmotn./hmotn. vztiahnuté na enzým), ako je aspoň 30 %. Ale môže to byť tak veľa ako je aspoň 60 % alebo dokonca 70 % (znovu hmotn./hmotn. vztiahnuté na enzým). Tieto množstvá sa môžu aplikoval buď do granúl alebo do granulátu. Granulát môže preto obsahovať menej ako 12 % (hmotn./hmotn.) soli, napr. od 2,5 do 7,5 %, napr. od 4 do 6 %.
Ak sa soľ dodáva vo vode, potom môže byť v množstve od 5 do 30 % (hmotn./hmotn.), ako je od 15 do 25 %.
Ďalšie zlepšenie stability peletizácie sa môže získať zavedením hydrofóbnych, gélotvorných alebo pomaly sa rozpúšťajúcich (napr. vo vode) zlúčenín. Tieto sa môžu dodať v množstve od 1 do 10 %, ako je od 2 do 8 % a výhodne od 4 do 6 % hmotn. (vztiahnuté na hmotnosť vody a zložiek tuhého nosiča). Vhodné látky zahŕňajú deriváty celulózy, ako je HPMC (hydroxypropylmetylcelulóza), CMC (karboxymetylcelulóza), HEC (hydroxyetylcelulóza), polyvinylalkoholy (PVA) a/alebo jedlé oleje. Jedlé oleje, ako je sojový olej alebo kanolový, olej sa môžu dodať (napr. k zmesi, ktorá sa má granulovač) ako pomocná látka, hoci spravidla hydrofóbne látky (napr. palmový olej) nie sú výhodne prítomné.
Výhodne majú granuly relatívne úzku distribúciu veľkosti (napr. sú monodisperzné). Toto môže uľahčovať homogénnu distribúciu fytázy v granulách a/alebo enzýmového granulátu v krmive pre zvieratá. Spôsob podľa vynálezu smeruje k výrobe granulátov s úzkou distribúciou veľkosti. Avšak, ak je to potrebné, môže sa zahrnúť dodatočný krok v spôsobe na dalšie zúženie distribúcii veľkosti granúl, napr. skríning. Distribúcia veľkosti granulátu je vhodne medzi 100 gm a 2000 gm, výhodne medzi 200 gm a 1800 gm a optimálne medzi 300 gm a 1600 gm. Granule môžu mať nerovnomerný (ale výhodne rovnomerný) tvar, napríklad približne guľatý.
Iný vhodný enzým (y) môže byť zahrnutý v krmivách pre zvieratá, ktoré zahŕňajú krmivá pre domáce zvieratá. Funkcia týchto enzýmov spočíva často v zlepšení konverznej rýchlosti potravy, napríklad znížením viskozity alebo znížením antinutričného účinku určitých zložiek krmiva. Krmivové enzýmy sa tiež môžu použiť na zníženie množstva zlúčenín, ktoré sú škodlivé pre životné prostredie v hnojive. Uprednostňované enzýmy pre tieto účely sú: karbohydrázy, ako sú amylolytické enzýmy a enzýmy degradujúce steny rastlinných buniek, ktoré zahŕňajú celulázy ako sú β-glukanázy, hemicelulózy ako sú xylanázy alebo galaktanázy, peptidázy, galaktozidázy, pektinázy, esterázy, proteázy, výhodne s neutrálnym a/alebo kyslým optimom pH, a lipázy, výhodne fosfolipázy ako sú cicavčie pankreatické fosfolipázy A2. Výhodne enzým nezahŕňa enzýmy degradujúce škrob (napr. amylázy). V niektorých uskutočneniach môžu byt proteázy vylúčené, pretože môžu zapríčiniť poškodenie, ak sú strávené. Ak je enzýmom taký enzým, ktorý degraduje steny rastlinných buniek, napr. celulázy a najmä hemicelulózu ako xylanáza, potom konečný granulát môže mať enzýmovú aktivitu v rozsahu od 3000 do 100000, výhodne 5000 až 80000 a optimálne 8000 až 70000 EXU/g. Ak je enzýmom celuláza, ako je β-glukonáza, potom konečný granulát môže mať enzýmovú aktivitu od 1000 do 10000 a optimálne od 1 500 do 7000 BGU/g.
Granuly môžu obsahovať od 5 do 20, napr. od 7 do 15 % enzýmu(ov). Enzým môže byť prirodzene sa vyskytujúci alebo rekombinantný.
Výhodný spôsob podľa vynálezu preto zahŕňa:
a. zmiešanie vodnej kvapaliny s obsahom fytázy a tuhého nosiča, ktorý obsahuje aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) jedlého uhľohydrátového polyméru, napr. zmiešanie tuhého nosiča s vodnou kvapalinou s obsahom enzýmu;
b. prípadné miesenie výslednej zmesi;
c. granuláciu, napr. mechanickým spracovaním, zmesi na získanie granúl obsahujúcich enzým, napr. s použitím granulátora alebo extrúziou;
d. prípadne sferonizáciu granúl;
e. sušenie granúl na získanie granulátu s obsahom enzýmu.
Počas celého procesu sa musí dodržiavať maximálna teplota, ktorej je enzým(y) vystavený, pod 80 °C.
Granuláty podľa vynálezu sú vhodné na použitie vo výrobe krmív pre zvieratá. Vo svojom rozsahu tento aspekt vynálezu pokrýva granulát obsahujúci fytázu a jedlý uhľohydrátový polymér, pričom granulát má enzýmovú aktivitu aspoň 6000 FTU/g. V týchto procesoch sa granuláty zmiešajú s krmivovými látkami, buď ako také alebo ako časti premixu. Charakteristiky granulátov podľa vynálezu umožňujú ich použitie ako zložiek zmesi, ktorá je vhodná ako krmivo pre zvieratá, najmä ak sa zmes kontinuálne spracováva a následne peletizuje. Vysušené granuly môžu byť viditeľné alebo rozlíšiteľné v takých peletách.
Potom tretí aspekt tohto vynálezu sa týka spôsobu prípravy krmív pre zvieratá alebo premixov alebo prekurzorov krmív pre zvieratá, spôsob zahŕňa zmiešanie kompozície z druhého aspektu vynálezu s jednou alebo viacerými látkami krmiva pre zvieratá (napr. semien) alebo so zložkami. Toto sa môže potom sterilizovať, napr. podrobiť tepelnému spracovaniu. Výsledná kompozícia sa potom výhodne spracuje na pelety.
Štvrtý aspekt vynálezu sa týka kompozície obsahujúcej granulát z druhého aspektu, ktorý je výhodne jedlou krmivovou kompozíciou ako je krmivo pre zvieratá. Táto kompozícia je výhodne vo forme peliet (môže byť 1 až 5, napr. 2 až 4, vysušené granuly na peletu).
Výhodne kompozícia obsahuje od 0,05 do 2,0, ako je 0,3 až 1,0, optimálne 0,4 až 0,6 FTU/g fytázy. Xylanáza môže byť prítomná od 0,5 do 50, napr. od 1 do 40 EXU/g. Alternatívne alebo navyše celuláza môže byť prítomná od 0,1 do 1,0, napr. od 0,2 do 0,4 BGU/g.
Kompozícia môže mať obsah vody od 10 do 20 %, napr. od 12 do 15 %. Množstvo enzýmu(ov) je vhodne od 0,0005 do 0,0012 %, tak ako aspoň 5 ppm.
Piaty aspekt sa týka spôsobu podpory rastu zvierat, spôsob zahŕňa kŕmenie zvierat s diétou, ktorá obsahuje kompozíciu z druhého aspektu alebo kompozíciu zo štvrtého aspektu. Tu môže diéta zvierat zahŕňať buď samotný granulát alebo granulát prítomný v krmive.
Šiesty aspekt tohto vynálezu sa týka použitia kompozícií v alebo ako zložky krmiva pre zvieratá alebo použitia vo zvieracej diéte.
Siedmy aspekt tohto vynálezu sa tiež týka použitia kompozície obsahujúcej aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) jedlého uhľohydrátového polyméru ako nosiča pre fytázu na zlepšenie stability peletizácie fytázy.
Vhodné zvieratá zahŕňajú farmárske zvieratá (ošípané, hydina, dobytok), neprežúvavce alebo jednožalúdkové zvieratá (ošípané, kurence, hydina, morské zvieratá ako sú ryby), prežúvavce (dobytok, napr. kravy, ovce, kozy, vysoká zver, teľatá, jahňatá). Hydina zahŕňa kurence, sliepky a husy.
Výhodné znaky a charakteristiky jedného aspektu podľa vynálezu sú rovnocenne aplikovateľné na druhý mutatis mutandis.
Nasledujúce príklady sú prítomné len ako ilustrácia vynálezu a nie sú zamýšľané alebo konštruované ako limitujúce.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Fermentácia A. niger CBS 513.88
Príprava hubovitých spór Aspergillus niger sa uskutočnila pomocou nasledujúcich štandardných techník.
Spóry a následne bunky s preniesli cez sériu dávkových fermentácií v Erlenmeyerových bankách do 10 1 fermentora. Po raste v dávke kultúry sa obsah tohto fermentora použil ako inokulum na konečnú 500 1 dávkovú fermentáciu.
Použité médiá obsahujú: 91 g/1 kukuričného škrobu (BDH Chemicals), amónium 38 g/1 glukózy.H20, 0,6 g/1 MgSO4.7H2O, 0,6 g/1 KCl, 0,2 g/1 FeSO4.7H2O a 12 g/1 KNO3. pH sa udržiavalo na
4,6 + 0,3 pomocou automatickej titrácie buď so 4 N NaOH alebo 4 N H2SO4.
Bunky rástli pri 28 ’C pri automaticky kontrolovanej koncentrácii rozpusteného kyslíka pri 25 % nasýtenosti vzduchu. Produkcia fytázy dosiahla maximálnu úroveň 5 - 10
U/ml po 10 dňoch fermentácie.
Fermentácia sa opakovala s použitím síranu amónneho namiesto kukuričného škrobu (na získanie ekvivalentného asimilovateľného obsahu dusíka).
Príklad 2
Čistenie a charakterizácia fytázy: skúška fytázovej aktivity
100 μΐ bujónového filtrátu (ak je to potrebné zriedeného) alebo supernatantu alebo 100 μΐ demineralizovanej vody na porovnanie sa dodalo k inkubačnej zmesi s nasledujúcim zložením:
- 0,25 M tlmivý roztok octanu sodného pH 5,5 alebo
- glycínový HCI tlmivý roztok, pH 2,5
- 1 mM kyselina fytová, sodná soľ
- demineralizovaná voda do 900 μΐ.
Výsledná zmes sa inkubovala počas 30 minút pri 37 ’C.
Reakcia sa zastavila dodaním 1 ml 10 % TCA (kyselina trichlóroctová). Po skončení reakcie sa dodali 2 ml reagentu (3,66 g FeSO4.7H2O v 50 ml roztoku molybdénanu amónneho (2,5 g (NH4) 6Mo7024.4H2O a 8 ml H2SO4, zriedené na 2 50 ml s demineralizovanou vodou)).
Spektrometricky sa merala intenzita modrej farby pri 750 nm. Merania indikujú množstvo fosforečnenu vzhľadom na kalibračnú krivku fosforečnanu v rozsahu 0-1 mmol/1.
Príklad 3
A. Expresia fytázy v A. niger CBS 513.86 transormovaného s expresnými vektormi obsahujúcimi A. ficuum fytázový gén fúzovaný do promótora a/alebo signálnych sekvencii A. niger amyloglukozidázového (AG) génu
Na získanie nadexpresie fytázy v A. niger sa odvodila expresná kazeta, v ktorej bol A. ficuum fytázový gén pod kontrolou A. niger amyloglukozidázového (AG) promótora v kombinácii so signálnou sekvenciou. Pre dlhšiu vodiacu sekvenciu sa fúzovala AG promótorová sekvencia s fytázovou kódujúcou sekvenciou zahŕňajúcou fytázovú vodiacu sekvenciu, ktorá sa fúzovala s fytázovým génovým fragmentom kódujúcim zrälý proteín (pozri ako odkaz príklad 10 z EP-A-0,420,358).
B. Expresia fytázového génu pod kontrolou AG promótora v A. niger
Kmeň A. niger CBS 513.88 (uložený 10. októbra 1988) sa transformoval s 10 μ<3 DNA fragmentom známymi metódami (napr. pozri príklad 9 z EP-A-0,420,358). Jednotlivé A. niger transformanty z každej expresnej kazety sa izolovali a spóry sa naniesli v pásoch na selektívne acetamidové agarové platne. Spóry z každého transformantu sa zozbierali z buniek, ktoré rástli 3 dni pri 37 °C na 0,4 % zemiakovo-dextrózových (Oxoid, Anglicko) agarových platniach. Produkcia fytázy sa testovala v trepačkových bankách za nasledujúcich podmienok:
Približne 1 X 10® spór sa inokulovalo v 100 ml prekultivačného média obsahujúceho (na liter) 1 g KH2PO4, 30 g maltózy, 5 g kvasinkového extraktu, 10 g kazeínového hydrolyzátu, 0,5 g MgSO4.7H2O a 30 g Tween 80. pH sa upravilo na 5,5.
Po raste cez noc pri 34 °C v rotačnej trepačke sa inokuloval 1 ml rastovej kultúry v 100 ml hlavnej kultúry obsahujúcej (na liter) : 2 g KH2PO4, 70 g maltodextrínu (maldex MDOj, Amylum), 12,5 g kvasinkového extraktu, 25 g kazeínového hydrolyzátu, 2 g K2SO4, 5 g MgSO4.7H2O, 0,03 g ZnCl2, 0,02 g CaCl2, 0,05 g MnSO4.4H2O a FeSO4. pH sa upravilo na 5,6.
Mycélium rástlo počas aspoň 140 hodín. Produkcia fytázy sa merala ako je opísané v príklade 2. Fermentácia sa opakovala s použitím ekvivalentného množstva glukózy a síranu amónneho ako zdrojov uhlíka a dusíka. Bujóny sa filtrovali za získania filtrátu, ktorý sa oddelil od biomasy. Použitím expresnej kazety PFYT3 (AG-promótorový/fytázový vodič) sa získalo maximum fytázovej aktivity 280 U/ml.
Príklad 4
Čistenie fytázy z filtrátu
Čistenie na získanie vysoko čistej fytázy bolo nasledujúce:
1. Katiónovýmenná chromatografia pri pH 4,9
2. Katiónovýmenná chromatografia pri pH 3,8
3. Aniónovýmenná chromatografia pri pH 6,3
4. Ultrafiltrácia
1. Fytázový filtrát sa 20 krát zriedil s vodou a pH sa upravilo na 4,9. Tento materiál prešiel cez rýchlo prietočnú kolónu S Sepharose, zrovnovážnenou s 20 mM kyselinou citrónovou/t1mivým roztokom NaOH s pH 4,9. Nenaviazaný metriál, s fytázou, sa zachytil a použil na nasledujúci krok.
2. pH 4,9 materiálu sa zmenilo na 3,8 a fytáza sa naviazala v rýchlo prietočnej kolóne S Sepharose zrovnovážnenej s 2 mM kyselinou citrónovou/t1mivým roztokom NaOH s pH 3,8. Fytáza sa eluovala z kolóny s 20 mM NaPO«, 50 mM tlmi vým roztokom NaCl s pH 7,6.
I
3. Združené fytázové frakcie z druhého katióno-výmenného kroku sa upravili na pH 6,3 a fytáza sa naviazala v rýchlo prietočnej kolóne Q Sepharose zrovnovážnenej s 10 mM tlmivým roztokom s pH 6,3. Fytáza sa eluovala s použitím gradientu do 1 M NaCl v tom istom tlmivom roztoku.
| Sumárne výsledky čistenia | |
| Vzorka | Faktor čistenia |
| Počiatočný filtrát | 1 |
| Po katiónomeniči s pH 4,9 | 1,07 |
| Po katiónomeniči s pH 3.8 | 1,2 |
| Po aniónomeniči | 1,46 |
Konečný (podrobený aniónovéj výmene) produkt obsahujúci 10 mg proteínu/ml sa koncentroval 10 krát ultrafiltráciou s použitím Amicon Stirred Celí (2L modul) s membránou Kalle E35 pri 3 bar.
onečná koncentrácia pre čistenú fytázu dosiahla 280-300 g/1 (28-30 %) . So špecifickou aktivitou 100 FTU/mg proteínu, čo je fytázová aktivita 28000 - 30000 FTU/g.
Príklad 5
Testy stability vysokoaktívnej fytázy
Na demonštráciu, že vyššia enzýmová koncentrácia (v granulách vyrobených s použitím kvapaliny s vysokoaktívnou fytázou) dáva vyššiu stabilitu peletizácie, sa vyrobili granuláty so vzrastajúcou enzýmovou koncentráciou a testovala sa stabilita peletizácie týchto vzoriek.
Porovnávacia vzorka A: Príprava granulátu na báze nízko aktívneho enzýmového granulátu z kukuričného škrobu miešaním, miesením, extrúziou, sferonizáciou a sušením.
Zmes sa pripravila zmiešaním a miesením 73 % (hmotn./hmotn.) kukuričného škrobu a 4 % (hmotn./hmotn.) nízkokoncentračného ultrafiltrátu fytázy a 23 % (hmotn./hmotn.) vody. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudera Nica E-220 na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa sferonizoval vo Fuji Paudal Marumeriser™ počas 2 minút za získania okrúhlych častíc s priemerným priemerom 600 μπι. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom Glatt GPCG 1.1. Konečná aktivita granulátu bola 610 FTU/g.
Porovnávacia vzorka B: Príprava granulátu na báze stredne aktívneho enzýmového granulátu z kukuričného škrobu miešaním, miesením, extrúziou, sferonizáciou a sušením.
Zmes sa pripravila zmiešaním a miesením 70 % (hmotn./hmotn.) kukuričného škrobu a 17 % ultrafiltrátu (hmotn./hmotn.) fytázy a 13 % (hmotn./hmotn.) vody. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudéra Nica E-220 na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa sferonizoval vo Fuji Paudal Marumeriser™ počas 2 minút za získania okrúhlych častíc s priemerným priemerom 600 μτη. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom Glatt GPCG 1.1. Konečná aktivita granulátu bola 4170 FTU/g.
Vzorka C: Príprava granulátu na báze vysoko aktívneho enzýmového granulátu z kukuričného škrobu miešaním, miesením, extrúziou, sferonizáciou a sušením.
Zmes sa pripravila zmiešaním a miesením 67 % (hmotn./hmotn.) kukuričného škrobu a 30 % ultrafiltrátu (hmotn./hmotn.) fytázy pripraveného v príklade 4 (ale zriedeného na 18 400 FTU/g) a 3 % (hmotn./hmotn.) vody. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudéra Nica E-220 na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa sferonizoval vo Fuji Paudal Marumeriser™ počas 2 minút za získania okrúhlych častíc s priemerným priemerom 600 μπι. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom Glatt GPCG 1.1. Konečná aktivita granulátu bola 6830 FTU/g. Porovnanie stability peletizácie
Rôzne enzýmové granuláty sa následne umiestnili do peletizačného pokusu a porovnávala sa ich stabilita peletizácie. Peletizačný pokus pozostával z miešania enzýmových granulátov s krmvivovým premixom pri 1500, 320 a
200 ppm. Tieto zmesi sa predspracovali s injektovaním pary za zvýšenia teploty na 75 °C, potom sa zmesi peletizovali v peletizačnom stroji za získania peliet krmiva pri teplote 82 °C, ktoré sa následne sušili. Tento typ spôobu je typický pre krmovinársky priemysel na získanie peliet krmiva.
Tabuľka 1 sumarizuje výsledky peletizačných pokusov. Je zrejmé, že dve granuly s najvyššou enzýmovou koncentráciou mali vyššiu stabilitu peletizácie.
Tabuľka 1
Výsledky peletizačných testov
| Číslo | Aktivita | Teplota | Teplota | Výťažok enzýmu |
| vzorky | granulátu | zmesi | peliet | po peletizácii |
| vo FTU/g | (°C) | (°C) | (%) | |
| Porov. (A) | 610 | 75 | 82 | < 17 |
| Porov. (B) | 4,170 | 75 | 82 | 37 |
| (C) | 6,830 | 75 | 82 | 48 |
Príklad 6
Príprava enzýmového granulátu na báze zemiakového škrobu s obsahom sójového oleja a za pridania MgSO4 zmiešaním, miesením, peletizáciou a sušením
Do zmiešavača/miesiča sa dodalo 30 kg zemiakového škrobu a 2,5 kg sójového oleja a miešalo sa. Následne sa dodal fytázový ultrafiltrát odvodený od Aspergillus (16 840 FTU/g) s obsahom MgSO4.7H2O (3,5 kg MgSO4.7H2O so rozupustilo v 14 kg ultrafíltrátu). Produkt sa dokonale miesil v miesiči, potom extrudoval a sušil v sušičke s fluidným lôžkom ako v príklade
1. Výsledkom bol produkt s 5870 FTU/g.
Príklad 7
Príprava enzýmového granulátu na báze ryžového škrobu zmiešaním, miesením, sferonizáciou a sušením
Zmes sa pripravila zmiešaním a miesením 62 % (hmotn./hmotn.) bryžového škrobu a 38 % (hmotn./hmotn.) toho istého fytázového ultrafíltrátu použitého v príklade 6. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudéra Fuji Paudal na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa potom sferonizoval v sferonizéri MARUMERISER™ počas 1 minúty na získanie okrúhlych častíc s priemerným priemerom 785 pm. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom ako v príklade 1. Konečná aktivita granulátu bola 7280 FTU/g.
Príklad 8
Príprava enzýmového granulátu na báze kukuričného škrobu obsahujúceho prídavok HPMC zmiešaním, miesením, extrúziou, sferonizáciou a sušením
Enzýmový prípravok sa získal miesením zmesi 54 % (hmotn./hmotn.) kukuričného škrobu, 5 % HPMC (hydroxypropylmetylcellulóza) a 41 % (hmotn./hmotn.) fytázového ultrafiltrátu použitého v príklade 6. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudéra Fuji Paudal na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa potom sferonizoval v sferonizéri MARUMERISER™ počas 1 minúty na získanie okrúhlych častíc s priemerným priemerom 780 μπι. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom počas 20 minút pri teplote lôžka 40 °C a vstupnej teplote 75 °C. Takto získaný suchý enzýmový granulát mal aktivitu 8470 FTU/g.
Príklad 9
Príprava enzýmového granulátu na báze kukuričného škrobu obsahujúceho prídavok HEC zmiešaním, miesením, extrúziou, sferonizáciou a sušením
Enzýmový prípravok sa získal zmiešaním a miesením 54 % (hmotn./hmotn.) kukuričného škrobu, 5 % HEC (hydroxyetylcelulóza) a 41 % (hmotn./hmotn.) toho istého fytázového ultrafiltrátu použitého v príklade 6. Táto zmes sa extrudovala s použitím bubnového extrudéra Fuji Paudal na získanie mokrého extrudátu, ktorý sa potom sferonizoval v sferonizéri MARUMERISER™ počas 1 minúty na získanie okrúhlych častíc s priemerným priemerom 780 μπ\. Tieto častice sa následne sušili v sušičke s fluidným lôžkom počas 20 minút pri teplote lôžka 40 °C a vstupnej teplote 75 °C. Takto získaný suchý enzýmový granulát mal aktivitu 8410 FTU/g.
Príklad 10
Použil sa ultrafiltrát s 18000 FTU/g, odvodený od ultrafiltrátu z príkladu 4, a zriedil sa.
Vzorky
Aktivity troch pripravených vzoriek boli 610 (A, porovnávacia), 4170 (B, porovnávacia) a 6830 (C) FTU/g. Takto sa získali aktivity troch krmív 1,153, 1,685 a 1,745 FTU/g.
150 g prvej vzorky sa zmiešalo s 20 kg krmiva ako je opísané nižšie. Potom sa premix zmiešal s 80 kg krmiva a rozdelil sa na dve časti ako krmivo na dva pokusy pri dvoch rôznych teplotách. Druhá vzorka predstavovala 153,6 g v 20 kg krmiva. Táto 20,153 g vzorka sa rozdelila do dvoch rovnakých častí s hmotnosťou 10,076 kg. Každá časť sa potom zmiešala s 230 kg krmiva na získanie krmiva pre tieto testy.
Pri treťom pokuse sa zmiešalo 96 g granulátu s 20 kg krmiva a rozdelilo do dvoch častí s hmotnosťou 10,048 g. Každá časť sa potom zmiešala s 230 kg krmiva na získanie krmiva na tieto testy. Rýchlosť peletizácie bola 600 kg/h.
Krmvivová zmes pozostávala z:
Kukurice
Pšenice
Sójovžch bôbov (zohriate)
Sóje (hrubá múka)
Tapioky (65 % škrob)
Živočíšnej múčky (56,5/10,9) Rybacej múčky (70,6 % re)
Múčky z peria, hydr.
Sójového oleja/kukuričného oleja Živočíšneho tuku Vit./Min. premixu (kukurice) Uhličitanu vápenatého Hydrogénfosforečnanu vápenatého
Soli
L-Lyzínu HCI
20,00 % 30,00 % 10,00 % 18,20 %
6,97 %
4,00 % 1,00 %
1,00%
1,30 % 4,00 % 1,00 %
0,85
1,05 %
0,26 %
0,16%
DL-Metionínu
0,21
Tri zmesi sa potom peletizovali. Krmivo sa dodalo do kondicionéra, kde sa ku krmivu priamo dodala para. Teplota vzrástla na 75 °C. Následne krmivo vyšlo z peletizéra, kde sa pretláčalo cez dýzovú platňu 65 mm hrubú s 5 mm otvormi.
Teplota,krmiva v tomto bode vzrástla o 4 °C. na 79 °C.
Aktivita troch krmív bola 10,11 (A), 10,04 (B) a 9,81 (C) .
Výsledky týchto testov na zvyškovú aktivitu boli: 63 (A), (B) a 72 % (C) pre pôvodné vzorky so 610, 4170 a 6830 FTU/g. Toto ukazuje, že pri podobných aktivitách (B a C) , prípravok s najvyššou aktivitou (C, 6830 FTU/g, podľa vynálezu) poskytol oveľa vyššiu stabilitu peletizácie. Táto bola o 6 % vyššia ako pre (porovnávaciu) vzorku B, pričom iba o 3 % vzrástla (od A do B) pri veľmi vysokom náraste aktivity (610 až 4170 FTU/g).
Claims (35)
1. Spôsob prípravy vodnej kvapaliny obsahujúcej fytázu, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa:
a) kultiváciu mikroorganizmov vo vodnom médiu rodu Aspergillus alebo Trichoderma s heterológnym fytázovým génom pod kontrolou glukoamylázového (pre Aspergillus) alebo celobiohydrolázového (pre Trichoderma) promótora, za podmienok umožňujúcich rekombinantnú expresiu fytázy, kde médium obsahuje ako potravu pre mikroorganizmus asimilovateľný uhlíkový zdroj alebo asimilovateľný dusíkový zdroj;
b) filtráciu vodného média na odstránenie mikroorganizmov za získania vodného filtrátu; a
c) podrobenie filtrátu z b) ultrafiltrácii za získania vodnej kvapaliny s koncentráciou fytázy aspoň 14000 FTU/g.
2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že mikroorganizmom je Aspergillus niger, Aspergilus oryzae alebo Trichoderma reesei.
3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že mikroorganizmus nemá alebo neexpresuje glukoamylázový (AG) gén.
4. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že mikroorganizmus má viacnásobné kópie fytázového génu.
5. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že vodná kvapalina je v podstate bez taka-amylázy.
6. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že v podstate všetky uhlíkové a dusíkové zdroje v médiu sa skonzumujú mikroorganizmami pred filtráciou v b).
7. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že vodná kvapalina je bez uhlíkových a/alebo dusíkových zdrojov.
8. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že fytáza je expresovaná v mikroorganizme s glukoamylázovou signálnou sekvenciou.
9. Spôsob podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že ani vodný filtrát alebo vodná kvaplina sa nepodrobia kryštalizácii a/alebo kroku odfarbovania.
10. Spôsob podľa niektorého vyznačujúci sa tým, že fytázovú aktivitu 18000 FTU/g alebo viac, z predchádzajúcich nárokov, výsledná vodná kvapalina má
11. Vodná kvapalina pripraviteľná spôsobom podľa niektorého z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že obsahuje fytázu v koncentrácii aspoň 14000 FTU/g.
12. Vodná kvapalina podľa nároku 11, vyznačujúca sa tým, že je odvodená od kultivačného média, v ktorom bola fytáza expresovaná.
13. Spôsob prípravy granulátu s obsahom fytázy, ktorý je vhodný na použitie v krmive pre zvieratá, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa spracovanie tuhého nosiča obsahujúceho aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) jedlého uhľohydrátového polyméru a vodnú kvapalinu podľa nároku 11 alebo 12 na získanie granúl s obsahom fytázy.
14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa zmiešanie vodnej kvapaliny a nosiča a miesenie výslednej zmesi.
15. Spôsob podľa nároku 14, vyznačujúci sa tým, že granuly sú následne sušené.
16. Spôsob podľa nároku 13 alebo 14, vyznačujúci sa tým, že obsahuj e:
a) zmiešanie vodnej kvapaliny obsahujúcej fytázu s tuhým nosičom;
b) mechanické spracovanie zmesi získanej v a) za získania granúl s obsahom enzýmu;
c) sušenie granúl obsahujúcich enzým získaných v b).
17. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že spracovanie zahŕňa extrúziu, peletizáciu, vysokošmykovú granuláciu, expanziu, aglomeráciu vo fluidnom lôžku alebo ich kombináciu.
18. Granulát obsahujúci fytázu, vyznačujúci sa tým, že je pripraviteľný podľa niektorého z nárokov 13 až 17.
19. Granulát, vyznačujúci sa tým, že obsahuje vysušené granuly vytvorené z fytázy a tuhého nosiča, ktorý obsahuje aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) jedlého uhľohydrátového polyméru.
20. Granulát podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že granuly obsahujú aspoň jeden dvojmocný katión.
21. Granulát podľa nároku 19 alebo 20, vyznačujúci sa tým, že granuly obsahujú jednu alebo viacero hydrofóbnych, gelotvorných alebo vo vode nerozpustných zlúčenín.
22. Granulát podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že hydrofóbna, gelotvorná alebo vo vode nerozpustná zlúčenina zahŕňa derivátizovanú celulózu, polyvinyalkohol (PVA) alebo jedlý olej.
23. Granulát podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že derivátizovanou celulózou je hydroxypropylmetylcelulóza, karboxymetylcelulóza alebo hydroxyetylcelulóza a/alebo jedlý olej je sójový olej alebo kanolový olej.
sa tým, že nosič obsahuje škrob.
27. Granulát podľa niektorého z nárokov 19 až 26, vyznačujúci sa tým, že fytázou je hubovitá fytáza.
28. Kompozícia podľa niektorého z nárokov 19 až 27, vyznačujúca sa tým, že hubovitá fytáza je odvodená od druhov Aspergillus alebo Trichoderma.
29. Spôsob prípravy krmiva pre zvieratá, premixu alebo prekurzoru krmiva pre zvieratá, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa zmiešanie granulátu s obsahom fytázy podľa niektorého z nárokov 19 až 28 s jednou alebo viacerými látkami(ou) alebo zložkami(ou) krmiva pre zvieratá.
30. Spôsob podľa nároku 29, vyznačujúci sa tým, že zmes krmivovej látky(ok) a kompozícia alebo granulát je spracovaný s parou, peletizovaný a prípadne sušený.
31. Kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje granulát podľa niektorého z nárokov 19 až 28 a/alebo granulát s obsahom fytázy s aktivitou aspoň 6000 FTU/g.
32. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že je jedlou krmivovou kompozíciou.
33. Kompozícia podľa nároku 32, vyznačujúca sa tým, že je krmivom pre zvieratá.
34. Kompozícia podľa nároku 32 alebo 33, vyznačujúca sa tým, že obsahuje pelety jednej alebo viacerých krmivových látok alebo zložiek zmiešaných s granulátom podľa niektorého z nárokov 19 až 27.
35. Kompozícia podľa niektorého z nárokov 31 až 34, vyznačujúca sa tým, že je krmivom pre zvieratá alebo premixom alebo prekurzorom krmiva pre zvieratá, ktoré je pripraviteľné spôsobom podľa nároku 29 alebo 30.
36. Spôsob podpory rastu zvieraťa, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie zvieraťu diéty, ktorá obsahuje granulát podľa niektorého z nárokov 19 až 27 alebo kompozíciu podľa niektorého z nárokov 31 až 35.
37. Použitie granulátu podľa niektorého z nárokov 19 až 27 alebo jeho zložky, v krmive pre zvieratá alebo v zvieracej diéte.
38. Použitie kompozície obsahujúcej aspoň 15 % (hmotn./hmotn.) jedlého uhľohydrátového polyméru ako nosiča fytázy na zlepšenie stability peletizácie fytázy.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4861197P | 1997-06-04 | 1997-06-04 | |
| EP97201641 | 1997-06-04 | ||
| PCT/EP1998/003328 WO1998055599A2 (en) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | High-activity phytase granulate |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK167899A3 true SK167899A3 (en) | 2000-09-12 |
Family
ID=26146545
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1678-99A SK167899A3 (en) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | PROCESS FOR PREPARING AQUEOUS PHYTASE-CONTAINING LIQUIDS AND USEì (54) THEREOF |
| SK1676-99A SK167699A3 (en) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | Carbohydrate-based enzyme granulates |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1676-99A SK167699A3 (en) | 1997-06-04 | 1998-06-04 | Carbohydrate-based enzyme granulates |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (3) | EP0986313B1 (sk) |
| JP (2) | JP2002502255A (sk) |
| KR (1) | KR20050042790A (sk) |
| CN (2) | CN1226936C (sk) |
| AT (2) | ATE266721T1 (sk) |
| AU (2) | AU741828B2 (sk) |
| BR (2) | BR9809915B1 (sk) |
| CA (2) | CA2292953C (sk) |
| CZ (2) | CZ299636B6 (sk) |
| DE (2) | DE69823820T2 (sk) |
| DK (2) | DK0990026T3 (sk) |
| ES (2) | ES2221181T3 (sk) |
| GB (2) | GB2340834B (sk) |
| HK (2) | HK1022718A1 (sk) |
| HU (1) | HUP0002899A2 (sk) |
| ID (2) | ID24116A (sk) |
| IL (4) | IL133280A0 (sk) |
| NO (2) | NO995994D0 (sk) |
| NZ (2) | NZ501408A (sk) |
| PL (2) | PL202955B1 (sk) |
| PT (2) | PT990026E (sk) |
| RU (3) | RU2275052C2 (sk) |
| SK (2) | SK167899A3 (sk) |
| TR (2) | TR199903015T2 (sk) |
| WO (2) | WO1998055599A2 (sk) |
Families Citing this family (94)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6699704B1 (en) | 1994-04-25 | 2004-03-02 | Roche Vitamins Inc. | Heat tolerant phytases |
| ES2565163T3 (es) | 1996-10-28 | 2016-03-31 | General Mills, Inc. | Imbibición y encapsulación de partículas de liberación controlada y producto encapsulado |
| CA2231948C (en) | 1997-03-25 | 2010-05-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Modified phytases |
| TW409035B (en) | 1997-06-04 | 2000-10-21 | Gist Brocades Bv | Starch-based enzyme granulates |
| NZ330940A (en) | 1997-07-24 | 2000-02-28 | F | Production of consensus phytases from fungal origin using computer programmes |
| NZ505299A (en) * | 1997-12-19 | 2002-04-26 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Use pf phytase to preventing or treating mastitis |
| PE20000601A1 (es) | 1998-03-23 | 2000-07-25 | Gen Mills Inc | Encapsulado de componentes en productos comestibles |
| US6451572B1 (en) | 1998-06-25 | 2002-09-17 | Cornell Research Foundation, Inc. | Overexpression of phytase genes in yeast systems |
| EP0969089A1 (en) * | 1998-06-29 | 2000-01-05 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Phytase formulation |
| EP1119345B1 (en) | 1998-10-09 | 2009-04-29 | General Mills, Inc. | Encapsulation of sensitive liquid components into a matrix to obtain discrete shelf-stable particles |
| DE19859385A1 (de) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von enzymhaltigen Granulaten |
| JP2002536005A (ja) | 1999-02-10 | 2002-10-29 | デーエスエム・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 飼料酵素含有粒状物 |
| DE19922753A1 (de) | 1999-05-18 | 2000-11-23 | Basf Ag | Enzym-Instantformulierungen für die Tierernährung |
| DE19929257A1 (de) * | 1999-06-25 | 2000-12-28 | Basf Ag | Polymerbeschichtete, granulierte enzymhaltige Futtermittelzusätze und Verfahren zu deren Herstellung |
| IL133851A (en) * | 1999-12-31 | 2002-12-01 | Smoler Feed Additives And Tech | Dietary supplement for animals |
| JP2003531608A (ja) * | 2000-05-04 | 2003-10-28 | デーエスエム・ナムローゼ・フェンノートシャップ | 酵素顆粒の製造方法 |
| WO2001089317A2 (en) * | 2000-05-25 | 2001-11-29 | Diversa Corporation | Dietary aids and methods of use thereof |
| LU90594B1 (de) | 2000-06-09 | 2001-12-10 | Iee Sarl | Beleuchtetes Schaltelement |
| US6468568B1 (en) | 2000-06-16 | 2002-10-22 | General Mills, Inc. | Oligosaccharide encapsulated mineral and vitamin ingredients |
| US6436453B1 (en) | 2000-06-16 | 2002-08-20 | General Mills, Inc. | Production of oil encapsulated minerals and vitamins in a glassy matrix |
| DE10048868A1 (de) | 2000-10-02 | 2002-04-11 | Basf Ag | Verfahren und Vorrichtung zur Einmischung von Zusatzstoffen während der Konditionierung von Tierfutter |
| US7320876B2 (en) | 2001-10-31 | 2008-01-22 | Phytex, Llc | Phytase-containing animal food and method |
| WO2003059087A1 (en) | 2002-01-15 | 2003-07-24 | Basf Ag | Granulates containing feed-enzymes |
| RU2346462C2 (ru) | 2002-01-15 | 2009-02-20 | Басф Акциенгезелльшафт | Грануляты, содержащие пищевые ферменты |
| CA2925807C (en) | 2002-09-13 | 2020-09-15 | Cornell Research Foundation, Inc. | Using mutations to improve aspergillus phytases |
| EP1638678B1 (de) | 2003-06-11 | 2011-09-28 | Glatt Ingenieurtechnik GmbH | Enzym-granulat-herstellungsverfahren und erhältliche enzym-granulate |
| EP1713348B1 (en) * | 2004-01-30 | 2008-05-28 | Basf Se | Granules containing stabilized phytase formulations |
| DE05785170T1 (de) * | 2004-09-27 | 2008-07-31 | Novozymes A/S | Enyzmgranulat |
| DK1695633T3 (da) | 2005-02-24 | 2010-05-10 | Ipc Process Ct Gmbh & Co | Granulat til fremstilling af dyrefoderpellets |
| DE102005043325A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Enzymhaltige Granulate für Futtermittel |
| DE102005043327A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Verfahren zur Herstellung von festen Enzymgranulaten für Futtermittel |
| DE102005043324A1 (de) * | 2005-09-12 | 2007-03-15 | Basf Ag | Phytasehaltiges Enzymgranulat II |
| US7803413B2 (en) | 2005-10-31 | 2010-09-28 | General Mills Ip Holdings Ii, Llc. | Encapsulation of readily oxidizable components |
| DE102005056668A1 (de) | 2005-11-28 | 2007-05-31 | Basf Ag | Fermentative Herstellung organischer Verbindungen |
| US7919297B2 (en) | 2006-02-21 | 2011-04-05 | Cornell Research Foundation, Inc. | Mutants of Aspergillus niger PhyA phytase and Aspergillus fumigatus phytase |
| US8540984B2 (en) | 2006-08-03 | 2013-09-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Phytases with improved thermal stability |
| CA2691883A1 (en) | 2007-07-06 | 2009-01-15 | Basf Se | Method for the production of an aqueous glucose solution |
| FR2918844B1 (fr) * | 2007-07-20 | 2012-11-02 | Adisseo France Sas | Composition thermoresistante pour animaux comprenant un melange enzymatique |
| JP2009207366A (ja) * | 2008-02-29 | 2009-09-17 | Kao Corp | ペットフード |
| BRPI0912774A2 (pt) * | 2008-05-19 | 2017-05-23 | Nestec Sa | métodos para reduzir absorção de lipídio por um animal |
| JP5527723B2 (ja) * | 2008-07-10 | 2014-06-25 | 独立行政法人農業・食品産業技術総合研究機構 | 植物細胞壁成分から変換されたα−グルカンを保持する菌体の製造方法 |
| EP2863758B1 (en) | 2012-06-20 | 2019-11-06 | Danisco US Inc. | Sandwich granule |
| CN104869841A (zh) | 2012-12-21 | 2015-08-26 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽和编码它的多核苷酸 |
| EP2799531A1 (de) | 2013-05-03 | 2014-11-05 | Clariant Produkte (Deutschland) GmbH | Einsatz von Phosphatasen zur enzymatischen Entschleimung von Triglyceriden |
| BR102013016609A2 (pt) * | 2013-06-27 | 2016-08-30 | Unicamp | ração enriquecida para aquicultura |
| EP3058055A1 (en) | 2013-10-15 | 2016-08-24 | Danisco US Inc. | Clay granule |
| WO2015073772A1 (en) | 2013-11-14 | 2015-05-21 | Danisco Us Inc. | Stable enzymes by glycation reduction |
| US20170246222A1 (en) | 2014-10-08 | 2017-08-31 | Novozymes A/S | Bacillus Strains with Fast Germination and Antimicrobial Activity against Clostridium |
| WO2016060935A2 (en) | 2014-10-08 | 2016-04-21 | Novozymes A/S | Compositions and methods of improving the digestibility of animal feed |
| MX2017007127A (es) | 2014-12-19 | 2017-08-18 | Novozymes As | Composiciones que comprenden polipeptidos que tienen actividad xilanasa y polipeptidos que tienen actividad arabinofuranosidasa. |
| WO2016118840A1 (en) | 2015-01-23 | 2016-07-28 | Novozymes A/S | Bacillus strains improving health and performance of production animals |
| DK3261653T3 (da) | 2015-01-23 | 2019-12-16 | Novozymes As | Bacillus subtilis-underart |
| AU2016209132B2 (en) | 2015-01-23 | 2021-07-01 | Novozymes A/S | Bacillus strains improving health and performance of production animals |
| DK3316699T3 (da) | 2015-07-02 | 2021-11-22 | Dsm Ip Assets Bv | Dyrefodersammensætninger med GH25 lysozym og 4-fytase og anvendelser deraf |
| MX2017016500A (es) | 2015-07-02 | 2018-03-12 | Novozymes As | Composiciones de pienso para animales y uso de las mismas. |
| WO2017001703A1 (en) | 2015-07-02 | 2017-01-05 | Novozymes A/S | Methods of improving animal performance |
| GB201604750D0 (en) * | 2016-03-21 | 2016-05-04 | Huvepharma Eood | Enzyme comositions |
| WO2017202966A1 (en) | 2016-05-24 | 2017-11-30 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same |
| CN109196098A (zh) | 2016-05-24 | 2019-01-11 | 诺维信公司 | 包含具有半乳聚糖酶活性的多肽和具有β-半乳糖苷酶活性的多肽的组合物 |
| BR112018073890A2 (pt) | 2016-05-24 | 2019-02-26 | Novozymes As | composição, grânulo, aditivo de ração para animal, ração para animal, formulação líquida, uso da composição, do grânulo, do aditivo de ração para animal ou da formulação líquida, polipeptídeo isolado, métodos para liberar galactose de material à base de planta, para melhorar um ou mais parâmetros de desempenho de um animal e para produzir o polipeptídeo, polinucleotídeo, construto de ácido nucleico ou vetor de expressão, e, célula hospedeira recombinante. |
| EP3462904A1 (en) | 2016-05-24 | 2019-04-10 | Novozymes A/S | Polypeptides having alpha-galactosidase activity and polynucleotides encoding same |
| PE20190564A1 (es) | 2016-07-08 | 2019-04-22 | Novozymes As | Variantes de xilanasa y polinucleotidos que las codifican |
| WO2018007153A1 (en) | 2016-07-08 | 2018-01-11 | Novozymes A/S | Polypeptides having xylanase activity and polynucleotides encoding same |
| US11499144B2 (en) | 2017-06-22 | 2022-11-15 | Novozymes A/S | Xylanase variants and polynucleotides encoding same |
| CN111050565A (zh) | 2017-09-01 | 2020-04-21 | 诺维信公司 | 包含具有蛋白酶活性的多肽的动物饲料添加剂及其用途 |
| BR112020003854A2 (pt) | 2017-09-01 | 2020-09-08 | Novozymes A/S | aditivo de ração animal, formulação líquida, ração animal, métodos para melhoria de um ou mais parâmetros de desempenho de um animal, para preparação de uma ração animal, para o tratamento de proteínas, para aumento da digestibilidade e/ou solubilidade de proteína, para melhoria do valor nutricional de uma ração animal, para produção de um polipeptídeo, e, uso do aditivo de ração animal e da formulação líquida. |
| KR102006938B1 (ko) * | 2017-09-07 | 2019-08-02 | 주식회사 알파벳 | 기호성 및 보존안정성이 개선된 반려동물용 사료의 제조방법 |
| WO2019096903A1 (en) | 2017-11-20 | 2019-05-23 | Novozymes A/S | New galactanases (ec 3.2.1.89) for use in soy processing |
| US20210068438A1 (en) | 2017-12-14 | 2021-03-11 | Dsm Ip Assets B.V. | Granulate comprising an enzyme, a carrier and a vegetable oil |
| BR112020012498A2 (pt) | 2017-12-20 | 2020-11-24 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| EP3727025A1 (en) | 2017-12-20 | 2020-10-28 | DSM IP Assets B.V. | Animal feed compositions comprising muramidase and uses thereof |
| MX2020006694A (es) | 2018-01-11 | 2020-09-03 | Novozymes As | Composiciones de pienso para animales y usos de las mismas. |
| WO2019152791A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Novozymes A/S | Management of pathogenic lawsonia |
| BR112020018166A2 (pt) | 2018-03-05 | 2021-02-02 | Novozymes A/S | composição de ração para ruminantes compreendendo uma muramidase |
| WO2019207053A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-10-31 | Novozymes A/S | Animal feed compositions and uses thereof |
| CN112566502A (zh) | 2018-08-31 | 2021-03-26 | 诺维信公司 | 具有蛋白酶活性的多肽以及编码它们的多核苷酸 |
| AU2019338224A1 (en) | 2018-09-11 | 2021-03-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
| US20210337828A1 (en) | 2018-09-11 | 2021-11-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
| AU2019339615A1 (en) | 2018-09-11 | 2021-03-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed composition comprising muramidase and use thereof |
| EP3849337A1 (en) | 2018-09-11 | 2021-07-21 | DSM IP Assets B.V. | Animal feed composition and use thereof |
| BR112021004501A2 (pt) | 2018-09-11 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composição de ração animal e uso da mesma |
| US20220040271A1 (en) | 2018-09-17 | 2022-02-10 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions and uses thereof |
| EP3852546A1 (en) | 2018-09-17 | 2021-07-28 | DSM IP Assets B.V. | Animal feed compositions and uses thereof |
| BR112021004833A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| BR112021004812A2 (pt) | 2018-09-17 | 2021-06-08 | Dsm Ip Assets B.V. | composições de ração animal e usos das mesmas |
| CN113226049A (zh) | 2018-12-05 | 2021-08-06 | 诺维信公司 | 酶颗粒的用途 |
| WO2020182602A1 (en) | 2019-03-11 | 2020-09-17 | Novozymes A/S | Fibrous maize-based animal feed with gh30 glucuronoxylan hydrolase |
| WO2021078839A1 (en) | 2019-10-22 | 2021-04-29 | Novozymes A/S | Animal feed composition |
| US20230276828A1 (en) | 2020-05-18 | 2023-09-07 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions |
| WO2021233937A1 (en) | 2020-05-18 | 2021-11-25 | Dsm Ip Assets B.V. | Animal feed compositions |
| JP2023537982A (ja) | 2020-08-13 | 2023-09-06 | ノボザイムス アクティーゼルスカブ | フィターゼ変異体及びそれをコードするポリヌクレオチド |
| US20230363419A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-11-16 | Novozymes A/S | Enzymatic Feed Preservation |
| AU2021360228A1 (en) | 2020-10-15 | 2023-05-04 | Dsm Ip Assets B.V. | Methods of modulating gastrointestinal metabolites |
| WO2023110957A1 (en) | 2021-12-15 | 2023-06-22 | Dsm Ip Assets B.V. | Methods and uses for improving egg production and egg quality involving administering feed comprising muramidase (ec 3.2.1.17) |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1501782A (fr) * | 1965-08-06 | 1967-11-18 | Quaker Oats Co | Aliments à base de viande et ayant l'aspect d'une viande persillée, qui sont destinés à des animaux familiers, et procédé de préparation de ces aliments |
| US3661786A (en) * | 1970-01-27 | 1972-05-09 | Procter & Gamble | Detergent compositions containing stabilized alpha-amylase |
| JPS5988088A (ja) * | 1982-11-12 | 1984-05-21 | Nagase Seikagaku Kogyo Kk | 酵素含有顆粒剤の製造方法 |
| DE3344104A1 (de) * | 1983-12-07 | 1985-06-13 | Henkel KGaA, 4000 Düsseldorf | Zur verwendung in pulverfoermigen waschmitteln geeignete enzymzubereitung |
| JPS6192570A (ja) * | 1984-10-12 | 1986-05-10 | Showa Denko Kk | 酵素造粒法 |
| FI77359C (fi) * | 1986-08-22 | 1989-03-10 | Suomen Sokeri Oy | Foderfix och foerfarande foer framstaellning av densamma. |
| DK435687D0 (da) * | 1987-08-21 | 1987-08-21 | Novo Industri As | Enzymholdigt granulat og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| US5010008A (en) * | 1988-12-12 | 1991-04-23 | Enzyme Bio-Systems Ltd. | Stable liquid enzyme concentrate and process for its production |
| CZ289014B6 (cs) * | 1989-09-27 | 2001-10-17 | Dsm N. V. | Vyčiątěná a izolovaná sekvence DNA kódující fungální fytázu, konstrukt pro expresi, vektory a transformované hostitelské buňky a způsob produkce fytázy |
| JPH03280839A (ja) * | 1990-03-30 | 1991-12-11 | Nippon Soda Co Ltd | 反芻動物用飼料添加剤 |
| JPH04271785A (ja) * | 1991-02-28 | 1992-09-28 | Kao Corp | 酵素固形製剤及びその製造方法 |
| CA2141431A1 (en) * | 1992-07-31 | 1994-02-17 | Helena K. M. Nevalainen | Recombinant cells, dna constructs, vectors and methods for expressing phytate degrading enzymes in desired ratios |
| DE4422433A1 (de) * | 1994-06-28 | 1996-01-04 | Cognis Bio Umwelt | Mehrenzymgranulat |
| GB9416841D0 (en) * | 1994-08-19 | 1994-10-12 | Finnfeeds Int Ltd | An enzyme feed additive and animal feed including it |
| EP0758018B1 (en) * | 1995-07-28 | 2004-06-09 | Basf Aktiengesellschaft | Salt-stabilized enzyme preparations |
| CN1135265C (zh) * | 1996-04-12 | 2004-01-21 | 诺沃奇梅兹有限公司 | 含酶颗粒及其生产方法 |
| DE19619219A1 (de) * | 1996-05-13 | 1997-12-04 | Hoechst Ag | Enzym-Vorgranulat für Tierfuttermittel-Granulate |
| DE19651446A1 (de) * | 1996-12-11 | 1998-06-18 | Henkel Kgaa | Umhüllte Enzymzubereitung mit verbesserter Löslichkeit |
-
1998
- 1998-06-04 ID IDW991521A patent/ID24116A/id unknown
- 1998-06-04 PT PT98934912T patent/PT990026E/pt unknown
- 1998-06-04 JP JP50151099A patent/JP2002502255A/ja active Pending
- 1998-06-04 ES ES98934912T patent/ES2221181T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 AT AT98934912T patent/ATE266721T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 SK SK1678-99A patent/SK167899A3/sk unknown
- 1998-06-04 CA CA002292953A patent/CA2292953C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 CZ CZ0433499A patent/CZ299636B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 BR BRPI9809915-9A patent/BR9809915B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 KR KR1020057002771A patent/KR20050042790A/ko not_active Application Discontinuation
- 1998-06-04 AT AT98934911T patent/ATE338469T1/de active
- 1998-06-04 PL PL337457A patent/PL202955B1/pl unknown
- 1998-06-04 CA CA002292955A patent/CA2292955C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 CN CNB988071207A patent/CN1226936C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 ES ES98934911T patent/ES2272005T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 IL IL13328098A patent/IL133280A0/xx active IP Right Grant
- 1998-06-04 EP EP98934911A patent/EP0986313B1/en not_active Revoked
- 1998-06-04 RU RU2000100316/13A patent/RU2275052C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 GB GB9928686A patent/GB2340834B/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 TR TR1999/03015T patent/TR199903015T2/xx unknown
- 1998-06-04 BR BRPI9809919-1A patent/BR9809919B1/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 IL IL13328198A patent/IL133281A0/xx active IP Right Grant
- 1998-06-04 DK DK98934912T patent/DK0990026T3/da active
- 1998-06-04 DK DK98934911T patent/DK0986313T3/da active
- 1998-06-04 GB GB9928690A patent/GB2341077B/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 RU RU2000100315/13A patent/RU2251301C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 CN CNB988071045A patent/CN1315397C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-04 WO PCT/EP1998/003328 patent/WO1998055599A2/en active IP Right Grant
- 1998-06-04 HU HU0002899A patent/HUP0002899A2/hu unknown
- 1998-06-04 TR TR1999/03010T patent/TR199903010T2/xx unknown
- 1998-06-04 JP JP50150999A patent/JP2002502254A/ja active Pending
- 1998-06-04 PL PL98337464A patent/PL194079B1/pl unknown
- 1998-06-04 EP EP04007382A patent/EP1457560A1/en not_active Withdrawn
- 1998-06-04 WO PCT/EP1998/003327 patent/WO1998054980A2/en active IP Right Grant
- 1998-06-04 NZ NZ501408A patent/NZ501408A/en unknown
- 1998-06-04 PT PT98934911T patent/PT986313E/pt unknown
- 1998-06-04 NZ NZ501409A patent/NZ501409A/en unknown
- 1998-06-04 DE DE69823820T patent/DE69823820T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 EP EP98934912A patent/EP0990026B1/en not_active Revoked
- 1998-06-04 AU AU84358/98A patent/AU741828B2/en not_active Ceased
- 1998-06-04 AU AU84357/98A patent/AU740970B2/en not_active Ceased
- 1998-06-04 CZ CZ0433599A patent/CZ299459B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-06-04 DE DE69835815T patent/DE69835815T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-04 ID IDW991518A patent/ID24680A/id unknown
- 1998-06-04 SK SK1676-99A patent/SK167699A3/sk unknown
-
1999
- 1999-12-02 IL IL133281A patent/IL133281A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-02 IL IL133280A patent/IL133280A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-06 NO NO995994A patent/NO995994D0/no not_active Application Discontinuation
- 1999-12-06 NO NO995993A patent/NO995993L/no not_active Application Discontinuation
-
2000
- 2000-03-13 HK HK00101530A patent/HK1022718A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-03-22 HK HK00101759A patent/HK1022606A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-08-31 RU RU2005127265/13A patent/RU2005127265A/ru not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0990026B1 (en) | High-activity phytase granulate | |
| US20050054065A1 (en) | High-activity phytase compositions | |
| EP1713348B1 (en) | Granules containing stabilized phytase formulations | |
| TWI223002B (en) | High-concentration phytase compositions | |
| MXPA99011240A (en) | High-activity phytase compositions | |
| MXPA99011241A (en) | Carbohydrate-based enzyme granulates |