RU2180595C2 - Конъюгаты интерферона - Google Patents

Конъюгаты интерферона Download PDF

Info

Publication number
RU2180595C2
RU2180595C2 RU97108698/14A RU97108698A RU2180595C2 RU 2180595 C2 RU2180595 C2 RU 2180595C2 RU 97108698/14 A RU97108698/14 A RU 97108698/14A RU 97108698 A RU97108698 A RU 97108698A RU 2180595 C2 RU2180595 C2 RU 2180595C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
ifn
conjugate
peg
formula
activity
Prior art date
Application number
RU97108698/14A
Other languages
English (en)
Other versions
RU97108698A (ru
Inventor
Паскаль Себастиан БЕЙЛОН
Алисиа Валлейо ПАЛЛЕРОНИ
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2180595(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of RU97108698A publication Critical patent/RU97108698A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2180595C2 publication Critical patent/RU2180595C2/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к конъюгатам интерферона формулы I
Figure 00000001

где R и R', независимо друг от друга, обозначают низший алкил; Х обозначает NH или О; n и n' представляют собой целые числа, сумма которых составляет от 600 до 1500; и средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля в этом конъюгате составляет от 26000 до 66000 Да, и к способу получения конъюгата ПЭГ-α-IFN, обладающего антипролиферативной активностью, а также к способу лечения или профилактики иммуиомодуляторных заболеваний. Конъюгат ПЭГ-α-IFN обладает увеличенным периодом полураспада в кровотоке и временем нахождения в плазме, уменьшенной иммуногенностью, пониженным клиренсом и увеличенной антипролиферативной активностью, что сопровождается пониженной антивирусной активностью. 5 с. и 9 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл.

Description

Интерферон, в частности α2a-интерферон, представляет собой фармацевтически активный протеин, который обладает антивирусной и антипролиферативной активностью. Например, интерферон применяют для лечения лейкемического ретикулеза и саркомы Капоши, и он также проявляет активность в отношении гепатита. Для улучшения стабильности и растворимости и уменьшения иммуногенности фармацевтически активные протеины, такие, как интерферон, могут быть конъюгированы с полимером полиэтиленгликолем (ПЭГ).
Биологическая доступность терапий с использованием протеинов часто ограничена их коротким периодом полураспада в плазме, что препятствует достижению их максимального лечебного действия. В последние годы было подтверждено, что ПЭГ-конъюгированные биологические молекулы обладают полезными лечебными свойствами (Inada и др., J. Bioact. and Compatible Polimers 5, 343 (1990); Delgado и др., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, 249 (1992); Katre, Advanced Drug Delivery Systems 10, 91 (1993). Они обладают лучшей физической стабильностью и теплостойкостью, защищены (нечувствительны) от ферментативного разложения, имеют повышенную растворимость, более продолжительный период полураспада в кровотоке in vivo, пониженный клиренс и повышенную эффективность. Были опубликованы данные о том, что разветвленные ПЭГ-конъюгаты обладают более высоким значением рН и теплостойкостью и большей стабильностью по отношению к протеолитическому разложению по сравнению с линейными ПЭГ-конъюгатами (Monfardini и др., Bioconjugate Chem. 6, 62 (1995)). Другими свойствами ПЭГилированных протеинов являются пониженная иммуногенность и антигенность, а также пониженная токсичность. Другим эффектом ПЭГилирования определенных протеинов может быть снижение активности in vitro, сопровождаемое увеличением активности in vivo. Это было обнаружено, в частности, на G-CSF (колониестимулирующий фактор гранулоцитов) (Satake-Ishikawa и др., Cell Structure and Function 17, 157-160 (1992), на IL-2 (интерлейкин-2) (Katre и др. , Рrос. Natl. Acad. Sci. USA 84, 1487 (1987)), на TNF-α (фактор некроза опухоли) (Tsutsumi и др., Jpn. J. Cancer Res. 85, 9 (1994)), на IL-6 (интерлейкин-6) (Inoue и др., J. Lab. Clin. Med. 124, 529 (1994)) и на CD4-IgG (антиген Т-лимфоцитов-иммуноглобулин G) (Chamow и др., Bioconj. Chem. 5, 133 (1994)) и на других.
Было обнаружено, что в случае интерферона ПЭГилирование снижает антивирусную активность in vitro, но увеличивает антипролиферативную активность в отношении клеток опухоли человека. Однако новый ПЭГ-конъюгат интерферона по настоящему изобретению обладает неожиданными свойствами, заключающимися в том, что антипролиферативная активность ПЭГ-интерферона существенно выше не только таковой самого интерферона, но и других ПЭГ-конъюгатов интерферона. Хотя антипролиферативная активность конъюгата существенно увеличена по сравнению с активностью других ПЭГ-конъюгатов α-интерферона, однако в этом случае наблюдается аналогичное снижение антивирусной активности. Кроме того, ПЭГ-конъюгат α-интерферона по настоящему изобретению не обладает иммуногенностью, в результате чего фактически при его введении не образуются антитела. В противоположность этому другие ПЭГ-конъюгаты α-интерферона в определенной степени вызывают образование антител.
Следовательно, предметом изобретения является новый класс ПЭГ-производных α-интерферона (α-IFN). Конъюгат по настоящему изобретению, как описано ниже, включает ПЭГ, имеющий разветвленное строение. Разветвленный ПЭГ обладает тем преимуществом, что он имеет возможность присоединять две молекулы линейного ПЭГ в одной точке, удваивая таким образом массу присоединенного ПЭГ и не увеличивая количества точек ПЭГилирования.
По сравнению с немодифицированным α-IFN (т.е. α-IFN без присоединенного ПЭГ) конъюгат обладает увеличенным периодом полураспада в кровотоке и временем нахождения в плазме, уменьшенной иммуногенностью, пониженным клиренсом и увеличенной антипролиферативной активностью, что сопровождается пониженной антивирусной активностью in vitro. Конъюгат по настоящему изобретению по сравнению с другими конъюгатами ПЭГ-α-IFN обладает существенно более высокой антипролиферативной активностью, не связанной пропорциональной зависимостью с усилением или снижением других характеристик, и фактически не обладает иммуногенностью.
Физиологически активные виды конъюгата ПЭГ-α-IFN по настоящему изобретению имеют формулу:
Figure 00000003

Конъюгат по настоящему изобретению имеет такие же области применения, что и α-IFN, например, в качестве антипролиферативного средства. В частности ПЭГ-конъюгаты α-интерферона по настоящему изобретению пригодны для лечения иммуномодуляторных нарушений, таких, как заболевания, относящиеся к опухоли, например, лейкемический ретикулез, хронический миелолейкоз (ХМЛ) и саркома Капоши, и инфекционных болезней с помощью такого же способа, который применят для лечения этих болезней α-интерфероном (в частности α2a-IFN). Однако конъюгат по настоящему изобретению обладает улучшенными свойствами, включающими лучшую стабильность, более высокую растворимость, увеличенный период полураспада в кровотоке и большее время нахождения в плазме. Кроме того, эти конъюгаты обладают антипролиферативной активностью, превосходящей таковую для α-IFN. Также было потверждено, что конъюгат проявляет неожиданное разделение антивирусного и антипролиферативного действия. Это свойство дает дополнительное преимущество в том случае, если необходимо усилить определенную активность конъюгата и в то же время уменьшить или устранить нежелательную активность. Например, если нежелательное побочное воздействие связано с антивирусной активностью, то устранение этой активности будет устранять это побочное воздействие, сохраняя при этом антипролиферативную активность. Таким образом, настоящее изобретение также включает фармацевтические композиции на основе соединений формулы I или их солей и способы их получения.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению, применяемые для лечения или предупреждения заболеваний, включают конъюгат интерферона общей формулы I и терапевтически инертный нетоксичный и терапевтически приемлемый носитель. Предназначенные для применения фармацевтические композиции могут быть приготовлены и дозированы в соответствии с принятой медицинской практикой с учетом подлежащего лечению заболевания, состояния конкретного пациента, места доставки конъюгата протеина, способа введения и других факторов, известных специалистам в данной области техники.
Конъюгат по настоящему изобретению представляет собой физиологически активный конъюгат ПЭГ-α-IFN имеющий формулу
Figure 00000004

где R и R', независимо друг от друга, обозначают низший алкил; Х обозначает NH или О (X обозначает по крайней мере одну из функциональных групп в молекуле α-IFN, выбранную из NH2 или ОН); n и n' представляют собой целые числа, сумма которых составляет от 600 до 1500; и средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля в этом конъюгате составляет от приблизительно 26000 Да до приблизительно 66000 Да. Конъюгат формулы I имеет разветвленное строение, в котором два фрагмента ПЭГ присоединены к протеину через простую связь.
Числа n и n' выбирают таким образом, чтобы образовавшийся конъюгат формулы I обладал физиологической активностью α-IFN, причем эта активность может быть такой же, более высокой или представлять собой часть соответствующей активности немодифицированного α-IFN. Числа n и n' (причем n и n' могут быть одинаковыми или разными) обозначают количество звеньев этиленгликоля в ПЭГ. Одно звено ПЭГ, ОСН2СН2, имеет молекулярную массу приблизительно 44 Да. Молекулярная масса конъюгата (за исключением молекулярной массы α-IFN) зависит от чисел n и n'. Сумма n и n' для конъюгата формулы I составляет от 600 до 1500, что приводит к получению конъюгата, имеющего общую среднюю молекулярную массу звеньев ПЭГ от приблизительно 26000 до 66000 Да и предпочтительно от приблизительно 35000 до 45000 Да, в частности от приблизительно 39000 до 40000 Да, причем особенно предпочтительна молекулярная масса 40000 Да. Предпочтительная сумма n и n' составляет от приблизительно 800 до 1200, причем средняя сумма составляет от приблизительно 850 до 1000, а предпочтительной суммой является приблизительно 910. Каждое из чисел n и n' по отдельности может быть равно 420 или 520, или оба могут быть равны 420 или 520, или оба могут быть равны 455. Предпочтительное отношение n к n' может составлять от приблизительно 0,5 до 1,5, причем наиболее предпочтительное отношение составляет от приблизительно 0,8 до приблизительно 1,2. Понятие "приблизительно" в отношении некоторого значения молекулярной массы означает, что она находится в статистически приемлемой области этого значения, определяемого стандартными аналитическими методами.
Также предпочтительным является конъюгат формулы I, в котором α-IFN представляет собой α2a-IFN, конъюгат, в котором R и R' обозначают метил, конъюгат, в котором Х обозначает NH, и конъюгат, в котором n и n' каждый или оба вместе равны либо 420, либо 520. Такой конъюгат, обладающий всеми вышеуказанными характеристиками, является особенно предпочтительным.
R и R' могут обозначать любой низший алкил, представляющий собой алкильную группу, имеющую от 1 до 6 атомов углерода, такой, как метил, этил, изопропил и т. д. Эта группа также включает разветвленные алкилы. Предпочтительным алкилом является метил. В двух группах ПЭГ формулы I R и R' могут быть одинаковыми или различными.
Под α-IFN (α-интерферон) и его разновидностями α2a-IFN понимают природный или рекомбинантный протеин, предпочтительно человеческий, получаемый из любого обычного источника, такого, как ткани, путем химического синтеза протеина из культуры клеток с использованием нативных и рекомбинантных клеток. Под объем настоящего изобретения подпадает любой протеин, обладающий активностью α-IFN в том числе мутеины или модифицированные каким-либо другим образом протеины. Методика получения и выделения α-IFN из природных или рекомбинантых источников хорошо известна (Pestka, Arch. Biochem. Biophys. 221, 1 (1983)). Предпочтительным α-IFN, как указано выше, является α2a-IFN, получаемый известными способами (Pestka, Sci. Am. 249, 36 (1983); Европейский патент 43980)).
Физиологически активный конъюгат формулы I обладает активностью α-IFN, под которой понимают любую частичную или усиленную известную активность α-IFN, определяемую различными способами, известными в данной области техники. В частности конъюгаты по настоящему изобретению обладают активностью α-IFN, а именно, как установлено, антипролиферативным действием в отношении клеток опухоли и антивирусной активностью в отношении клеток, зараженных вирусом. Эти виды активности являются известными активностями, свойствеными α-IFN. Такая активность конъюгата может быть определена способами, хорошо известными в данной области техники, например, описанными ниже способами (см. , также у Rubinstein и др., J. Virol. 37, 755 (1981); Borden и др., Cane. Res. 42, 4948 (1982)). Одним из предметов настоящего изобретения является конъюгат формулы I, обладающий более высокой антипролиферативной активностью и меньшей антивирусной активностью по сравнению с немодифицированным α-IFN.
Конъюгат формулы I получают путем ковалентного связывания α-IFN с ПЭГ, который может быть активирован замещением гидроксильной группы ПЭГ на связывающую группу с образованием реагента, представляющего собой производное ПЭГ в виде N-гидроксисукцинимидного эфира (в частности монометокси-ПЭГ) формулы II. Реагент может быть получен традиционными методами (Monfardini и др. , см. выше). Связывание происходит через амидную или эфирную связь. В предпочтительном конъюгате связывание происходит через амидную связь (X обозначает NH). Одним из предметов настоящего изобретения является способ усиления антипролиферативной активности α-IFN при одновременном снижении антивирусной активности α-IFN путем связывания α-IFN, как описано выше, с реагентом формулы II с получением конъюгата ПЭГ-IFN.
Х обозначает место присоединения на α-IFN, посредством которого ПЭГ-реагент формулы II ковалентно связывается с α-IFN. Реагенты присоединяются к первичным аминогруппам (ХН = NH2), например, лизина, или к N-концам α-IFN. Реагенты также могут быть присоединены к гидроксилу (ХН = ОН), например, серина (см. схему 1 в конце описания).
Реагент формулы II (ПЭГ2-NHS), в котором в целом две цепи монометокси-ПЭГ (м-ПЭГ) связаны с лизином, каждая с α- и ε-аминогруппами, через карбаматные (уретановые) связи и который содержит карбоксильную группу лизина, активированную до сукцинимидилового эфира, может быть получен обычными методами в соответствии с известными способами (Monfardini и др., см. выше), применимыми к реагенту, в котором R обозначает низший алкил и с требуемым значением n. Такой реагент поставляется, например, фирмой Shearwater Polymers, Inc. (Хантсвилл, шт. Алабама). Предпочтительная средняя молекулярная масса получаемого ПЭГ составляет приблизительно 20000 Да, что обеспечивает общую массу ПЭГ в ПЭГ2-NHS приблизительно 40000 Да (полимеры с другими молекулярными массами могут быть получены традиционными методами путем изменения значения n в исходных материалах для реагента формулы II, представляющих собой спиртовой ПЭГ).
Реагент формулы II может быть конъюгирован с α-IFN традиционными способами. В частности реагент формулы II сначала подвергают взаимодействию с одной или несколькими первичными аминогруппами (например, с N-концевыми группами или с боковыми цепями лизина) α-IFN (например, α2a-IFN) для образования амидной связи между α-IFN и полимерной основой ПЭГ. Реакция ПЭГилирования также может происходить между ПЭГ2-NHS и свободными (если они присутствуют) гидроксильными группами (например, серина) α-IFN с образованием сложноэфирной связи. Механизм реакции приведен выше. Условия реакции являются обычными для специалистов в данной области техники и более подробно приведены ниже. ПЭГ-реагент объединяют с α-IFN в среднещелочных условиях при низкой температуре и в условиях, пригодных для нуклеофильного замещения, что приводит к получению конъюгата формулы I. Это также показано выше на схеме реакции.
Присоединение реагентов к α-IFN может быть осуществлено традиционными методами. Могут быть использованы ПЭГ по настоящему изобретению с любыми выбранными молекулярными массами. Условия реакции могут быть выбраны таким образом, чтобы обеспечить получение конъюгата по изобретению с одним присоединенным реагентом. Конъюгат формулы I, к которому присоединен один реагент формулы II, отделяют от немодифицированного α-IFN и от конъюгатов, имеющих более одной присоединенной молекулы реагента, традиционными способами.
Для разделения конъюгатов на основе различия в зарядах могут применяться методы очистки, такие, как катионообменная хроматография, которая позволяет эффективно разделять конъюгаты на основе их различных молекулярных масс. Содержание фракций, получаемых в результате катионообменной хроматографии, может быть определено по молекулярной массе с использованием принятых способов, например, с помощью масс-спектроскопии, электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ПААГ-ДСН) или других известных методов, применяемых для разделения молекулярных энантиомеров по молекулярной массе. Затем соответственно определяют фракцию, которая содержит конъюгат формулы I, очищенный от немодифицированного α-IFN и от конъюгатов, имеющих более одного присоединенного реагента. Кроме того, реагенты формулы II при кислотном гидролизе высвобождают по одной молекуле лизина
на молекулу реагента, так что количество молекул лизина при гидролизе показывает количество групп ПЭГ, присоединенных к протеину, и таким образом может быть подтверждено количество молекул реагента, присоединенных к конъюгату.
Ниже изобртение проиллюстрировано на примерах, которые не ограничивают его объем. В этих примерах использован α2a-IFN. Другие виды α-IFN также могут быть конъюгированы с ПЭГ способами, приведенными в примерах.
Описание чертежей
Фиг. 1: Противоопухолевая активность ПЭГ2-α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии А498. Всем животным за 33 дня до начала эксперимента (день-33) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии А498. Обработку с помощью ПЭГ2-α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (30, 60, 120 или 300 мкг) ПЭГ2-α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 1 раз в неделю в течение 4-недельного периода.
Фиг. 2: Противоопухолевая активность α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии А498. Всем животным за 33 дня до начала эксперимента (день-33) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии А498. Обработку с помощью α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (10, 20, 40 или 100 мкг) α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 3 раза в неделю в течение 4-недельного периода.
Фиг. 3: Противоопухолевая активность ПЭГ2-α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии ACHN. Всем животным за 25 дней до начала эксперимента (день-25) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии ACHN. Обработку с помощью ПЭГ2-α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (30, 60, 120 или 300 мкг) ПЭГ2-α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 1 раз в неделю в течение 5-недельного периода.
Фиг. 4: Противоопухолевая активность α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии ACHN. Всем животным за 25 дней до начала эксперимента (день-25) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии ACHN. Обработку с помощью α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (10, 20, 40 или 100 мкг) α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 3 раза в неделю в течение 5-недельного периода.
Фиг. 5: Противоопухолевая активность ПЭГ2-α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии G402. Всем животным за 45 дней до начала эксперимента (день-45) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии G402. Обработку с помощью ПЭГ2-α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (30, 60, 120 или 300 мкг) ПЭГ2-α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 1 раз в неделю в течение 5-недельного периода.
Фиг. 6: Противоопухолевая активность α2a-IFN, изученная на лишенных шерсти мышах, которым подкожно имплантировали почечные клетки человека линии G402. Всем животным за 45 дней до начала эксперимента (день-45) подкожно вводили имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии G402. Обработку с помощью α2a-IFN начинали в день 0 эксперимента. Указанные количества (10, 20, 40 или 100 мкг) α2a-IFN вводили подкожно в противоположный относительно опухоли бок, 3 раза в неделю в течение 5-недельного периода.
Пример 1
Получение конъюгата формулы I
Материалы
α2a-Интерферон получали известными способами (Pestka, см. выше). Полиэтиленгликолевый (ПЭГ) реагент формулы II был приобретен у фирмы Shearwater Polymers, Inc. (Хантсвилл, шт. Алабама). Смола Fractogel® EMD CM 650(S) с размером частиц 25-40 мкм поставляется фирмой ЕМ Separations (Гиббстаун, МА). Концентрированный (10Х) забуференный фосфатом физиологический раствор (ЗФР), рН 7,3, был приобретен у фирмы BioWhittaker (Уолкерсвилл, MD). Наборы гелей для электрофореза в полиакриламидном геле в присутствии додецил-(лаурил)-сульфата натрия (ПААГ-ДСН) и приборы для электрофореза были приобретены у фирмы NOVEX (Сан Диего, шт. Калифорния). Концентрированный краситель Fast Stain для окрашивания протеина ПЭГ-конъюгатов при электрофорезе в ПААГ-ДСН был приобретен у фирмы Zoion Research, Inc. (Ньютон, МА). Набор для определения эндотоксина в тесте с использованием лизата амебоцитов (LAL-тест) был приобретен у фирмы Associates of Cape Cod, Inc. (Вудс Хол, МА). Все другие применяемые реагенты были наиболее высокого доступного качества. Крысы с канюлями, имплантированными в яремную вену, и мыши линии BDF-1 были приобретены у фирмы Charles River Laboratories (Вилмингтон, МА).
Методика эксперимента
А. Маломасштабное получение конъюгата формулы I
208 мг (5,2 мкмоля) реагента формулы II (средняя молекулярная масса 40000 Да) добавляли к 50 мг (2,6 мкмоля) α-IFN в 10 мл 100 мМ боратного буфера, рН 8,0. Конечное молярное соотношение протеин:реагент составляло 1: 2. Реакционную смесь перемешивали при 4oС в течение 2 часов. Реакцию прекращали путем доведения рН до 4,5 с помощью ледяной уксусной кислоты.
Реакционную смесь 50-кратно разбавляли водой, фильтровали через фильтр с размером пор 0,2 мкм и вносили в колонку типа Amicon, заполненную 100 мл (3,2х13 см) смолы Fractogel EMD CM 650(S) при скорости потока 20 мл/мин. Колонку предварительно уравновешивали с помощью 10 мМ ацетата аммония, рН 4,5. Выходящий из колонки продукт анализировали с помощью УФ-абсорбции при 280 нм. Затем колонку промывали уравновешивающим буфером до тех пор, пока УФ-абсорбция не возвращалась к базовому уровню. Конъюгаты ПЭГ-IFN, имеющие более одного присоединенного реагента формулы II (олигомеры ПЭГ-IFN), элюировали с помощью 40 мМ ацетата аммония, рН 4,5, а конъюгат формулы I элюировали с помощью 0,12 М NaCl в 40 мМ аммоний-ацетатном буфере. Оставшийся на колонке немодифицированный IFN элюировали с помощью 0,5 М NaCl в таком же буфере. Колонку регенерировали, промывая 1,0 М NaCl, с последующей промывкой уравновешивающим буфером. Объединенные фракции конъюгатов формулы I концентрировали с использованием вакуумного фильтра для перемешанных клеток типа Amicon, снабженного мембраной типа YM10, до концентрации приблизительно 1 мг/мл.
Примененная для очистки катионообменная смола Fractogel CM 650(S) эффективно адсорбировала ПЭГ и немодифицированный IFN. Интенсивность адсорбции зависела от степени ПЭГилирования. Конъюгаты связывались менее сильно по сравнению с немодифицированным IFN. Олигомеры ПЭГ-IFN элюировали с помощью 40 мМ ацетата аммония, в то время как конъюгат формулы I элюировали с помощью 0,12 М NaCl. Немодифицированный IFN элюировали с помощью 0,5 М NaCl. Все препараты содержали <5 ЭЕ (эндотоксиновых единиц)/мг эндотоксинов. Образовавшийся препарат содержал >99% конъюгата формулы I и был лишен немодифицированного IFN.
Б. Крупномасштабное получение конъюгата формулы I
6240 мг (156 мкмолей) реагента формулы II (средняя молекулярная масса 40000 Да) растворяли при 4oС в 63 мл 1 мМ НС1 и быстро добавляли к 125 мл раствора, содержащего 1000 мг (52 мкмоля) интерферона в 50 мМ боратном буфере, рН 9,0. Конечное отношение протеин/реагент составляло 1:3, а конечная концентрация протеина в реакционной смеси была равна 5,3 мг/мл. Реакционную смесь перемешивали при 4oС в течение 2 часов. Реакцию прекращали путем доведения рН до 4,5 с помощью ледяной уксусной кислоты.
Реакционную смесь 10-кратно разбавляли водой и наносили на колонку, заполненную 600 мл смолы Fractogel EMD CM 650 (М) и предварительно уравновешенную 20 мМ натрий-ацетатным буфером, рН 4,5, при линейной скорости 1,3 см/мин. Колонку промывали уравновешивающим буфером, а затем 10 мМ NaCl для удаления избытка реагента, побочных продуктов реакции и олигомеров ПЭГ-IFN. Конъюгат формулы I элюировали с помощью уравновешивающего буфера, содержащего 200 мМ NaCl. Немодифицированный интерферон, еще сохранившийся на колонке, удаляли, промывая 0,75 М NaCl в уравновешивающем буфере. Конъюгат формулы I, который элюировали при концентрации 0,3-0,5 мг/мл, затем концентрировали и для окончательного приготовления лекарственного средства фильтровали путем диализа в 20 мМ натрий-ацетатном буфере, рН 5,0, содержащем 150 мМ NaCl. Общий выход конъюгата формулы I составлял 40-45%.
Очищенный ПЭГ-IFN из препарата при крупномасшабном способе получения состоит более чем на 99% из конъюгата формулы I. Средняя молекулярная масса конъюгата формулы I из этого примера составляет 62000 Да, включая молекулярную массу α2a-IFN, которая равна 19241 Да, и среднюю молекулярную массу реагента, которая находится в интервале между 40000 Да и 45000 Да, составляя приблизительно 43000 Да.
Пример 2
Характеристика конъюгата формулы I
Определение протеина
Концентрации протеина определяли, используя значение А280, равное 1, для раствора с концентрацией α2a-IFN 1 мг/мл.
Анализ с использованием ПААГ-ДСН
Конъюгат анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (8-16%) в присутствии додецил-(лаурил-) сульфата натрия в восстановительных условиях в соответствии с методами Laemmli (Nature 227, 680 (1970)). ПААГ-ДСН-гели, содержащие ПЭГ-конъюгаты, окрашивали для определения протеина, используя краситель Fast Stain (фирма Zoion Research, Inc.), в соответствии с инструкциями производителя.
Определение уровней эндотоксина
Уровни эндотоксина определяли, используя LAL-тест в соответствии с инструкциями производителя. Все препараты содержали <5 ЭЕ/мг эндотоксинов.
Пример 3
Биологические активности in vitro конъюгата формулы I
Антивирусная активность в бычьих почечных клетках
Антивирусную активность in vitro α2a-IFN и конъюгата формулы I, полученного по описанной в примере 1.А методике, определяли с помощью биологического анализа культуры клеток, используя бычьи почечные клетки линии Madin-Darby (MDBK), зараженные вирусом везикулярного стоматита (Rubinstein и др. , см. выше). Показатели антивирусных активностей приведены в таблице 1 наряду с соответствующими остаточными активностями в процентах по отношению к исходному IFN.
Антипролиферативная активность in vitro на клетках опухоли человека
Антипролиферативную активность in vitro определяли на человеческих клетках линии Daudi (лимфома Беркитта), как описано у Borden и др. Человеческие клетки линии Daudi поддерживали в виде стационарных суспензионных культур в среде RPMI 1540, дополненной 10%-ной фетальной бычьей сывороткой и 2 мМ глутамином (Grand Island Biologicals, Гранд Исланд, шт. Нью-Йорк). Клетки подвергали скринингу и было обнаружено, что они лишены микоплазмы. Клетки (2х104) добавляли в лунки планшетов для микротитрования (Costar, MA) с 100 мкл среды. Различные концентрации IFN и конъюгата формулы I, полученного по описанной в примере 1.А методике, добавляли в лунки объемом 100 мкл. Планшеты инкубировали при 37oС в 5% СО2 в течение 72 часов. За 16 часов до сбора клеток их обрабатывали 3Н-тимидином (New England Nuclear, Бостон, MA) в дозе 0,25 мкКи/лунку. Клетки собирали на стеклянные фильтры и измеряли радиоактивность с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика. Результаты выражали в виде % ингибирования, вычисляемого по формуле:
% ингибирования = [(А-В)/А]х100,
где А обозначает количество импульсов в минуту в контрольной культуре (клетки, инкубированные в чистой среде);
В обозначает количество импульсов в минуту в экспериментальной культуре.
Опыты проводили в четырех повторностях, а стандартное отклонение во всех случаях составляло менее 20% от среднего значения. Эксперименты повторяли по крайней мере дважды, получая сопоставимые результаты.
Антипролиферативные активности (IC50) IFN и конъюгата формулы I приведены в таблице 2. Данные показывают, что существует 28-кратное увеличение антипролиферативной активности конъюгата формулы I по сравнению с таковой у IFN.
Пример 4
Фармакокинетика
Самок крыс линии Sprague Dawley со средней массой тела 240-260 г, которым хирургическим путем имплантировали канюли в яремные вены, размещали каждую по отдельности, обеспечивая свободный доступ к пище и воде, и содержали при 12-часовом светотемневом цикле. Через 4-6 часов после введения канюли, находящиеся в яремных венах, заливали ЗФР. На следующий день после введения в канюли 0,15-0,2 мл ЗФР крысам инъецировали 2х106 единиц α-IFN в 0,2-0,4 мл ЗФР, а затем вновь инъецировали 0,15-0,2 мл ЗФР, чтобы гарантированно обеспечить поступление всего количества лекарства в организм животного. Таким образом, каждое животное получало дозу 8х106 единиц α-IFN/кг массы тела.
Через 5, 15 и 30 минут, а также через 1, 3, 5, 12 и 24 часа после инъекции IFN и конъюгата формулы I отбирали образцы крови. После отбрасывания первой порции крови объемом 0,15-0,2 мл через яремную канюлю каждый раз отбирали аликвоту крови объемом 0,5 мл, используя новый шприц. При комнатной температуре образцы помещали в пробирки для отделения сыворотки. Сразу после того, как все образцы в рассматриваемый момент времени были собраны, пробирки центрифугировали при 14000xg в течение 10 минут в центрифуге Эппендорфа с охлаждением. Отделенную сыворотку переносили в микроцентрифужные пробирки объемом 1,5 мл и замораживали при -80oС до проведения биологического анализа. Образцы сыворотки соответствующим образом разбавляли и для каждого момента времени определяли антивирусную активность, как описано ранее. Из графика зависимости активности от времени определяли окончательный период полураспада конъюгата формулы I и α-IFN, эти данные приведены в таблице 3, в которой также указано время его нахождения в плазме.
Окончательный период t1/2 определяли методом линейной регрессии в логарифмическом масштабе.
Пример 5
Иммуногенность
Нормальным мышам линии BDF-1 (десять особей в группе) внутрибрюшинно инъецировали один раз в день пять раз в неделю различные препараты интерферона, содержащие 300000 единиц антивирусной активности. Некоторым мышам также инъецировали составную форму α2a-IFN, которая является более иммуногенной, чем мономерная форма. Образцы крови брали на 19 день после последней инъекции и анализировали сыворотку на наличие нейтрализующих антител.
Как видно из таблицы 4, мыши, которым инъецировали α2a-IFN, вырабатывали нейтрализующие антитела, и эта реакция была сильно увеличена у мышей, которым инъецировали составные формы интерферона. У большинства животных, которым инъецировали конъюгат по настоящему изобретению, не было обнаружено антител.
Пример 6
Противоопухолевая активность in vivo
Противоопухолевую активность in vivo конъюгата формулы I (ПЭГ2-α2a-IFN) и немодифицированного α2a-IFN оценивали путем определения их способности уменьшать размер различных человеческих клеток опухоли, подкожно имплантированных мышам. Результаты показаны на фиг. 1-6.
Методика: Лишенным шерсти мышам (линии Harlan), у которых отсутствовала вилочковая железа, подкожно вводили в заднюю часть левого бока имплантат, содержащий 2х106 почечных клеток человека линии А498 (фиг. 1 и 2), почечных клеток человека линии ACNH (фиг. 3 и 4) или почечных клеток человека линии G402 (фиг. 5 и 6). В течение 3-6 недель опухолям давали оформиться, как указано далее. Критерий размера, приемлемого для исследования, составлял от 0,05 до 0,5 см3. Мышам вводили совокупные ежедневные дозы ПЭГ2-α2a-IFN или немодифицированного α2a-IFN, составляющие 30, 60, 120 или 300 мкг. В случае ПЭГ2-α2a-IFN мышей обрабатывали один раз в неделю (в понедельник), используя по 30, 60, 120 или 300 мкг ПЭГ2-α2a-IFN на обработку. В случае немодифицированного α2a-IFN мышей обрабатывали три раза в неделю (в понедельник, среду и пятницу), используя по 10, 20, 40 или 100 мкг α2a-IFN на обработку. Продолжительность обработки составляла 4-5 недель в зависимости от интенсивности роста (агрессивности) опухоли. Объемы опухоли измеряли каждый понедельник до обработок.
Результаты: ПЭГ2-α2a-IFN привел к заметному уменьшению размера опухоли, вызванной клетками А498, по сравнению с немодифицированным α2a-IFN при всех исследованных уровнях еженедельных доз на 7 день, 14 день, 21 день и 28 день после начала обработки (фиг. 1 и 2). Обработку продолжали в течение 4 недель. Через семь дней после прекращения обработки трех мышей в каждой группе умервщляли. У трех мышей, подвергавшихся обработке ПЭГ2-α2a-IFN, не обнаружили остатков опухоли. У мышей, подвергавшихся обработке немодифицированным α2a-IFN, масса опухоли, вызванной клетками А498, составила 1,28 г, 0,62 г и 1,60 г соответственно у каждой из трех мышей. Масса опухоли, вызванной клетками А498, составила 2,32 г, 2,37 г и 1,94 г у каждой из трех мышей в контроле. На 80 день после окончания четырехнедельного периода обработки наличие опухоли определяли пальпацией семи мышей. При пальпации у всех семи мышей не обнаружили наличия опухолевой ткани.
ПЭГ2-α2a-IFN привел к значительному уменьшению размера опухоли, вызванной клетками ACNH, по сравнению с немодифицированным α2a-IFN при уровнях еженедельных доз 60, 120 и 300 мкг на 14 день, 21 день, 28 день и 35 день (фиг. 3 и 4).
ПЭГ2-α2a-IFN привел к значительному уменьшению размера опухоли, вызванной клетками G402, по сравнению с немодифицированным α2a-IFN при уровнях еженедельных доз 60 и 120 мкг на 14 день, 21 день, 28 день и 35 день (фиг. 5 и 6).

Claims (11)

1. Физиологически активный конъюгат ПЭГ-α-IFN, имеющий формулу
Figure 00000005

где R и R' независимо друг от друга обозначают низший алкил;
Х обозначает NH или О;
n и n' представляют собой целые числа, сумма которых составляет от 600 до 1500,
и средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля в этом конъюгате составляет от 26000 до 66000 Да.
2. Конъюгат по п. 1, в котором молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет от 35000 до 45000 Да.
3. Конъюгат по п. 2, в котором молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет 40000 Да.
4. Конъюгат по п. 1, в котором R и R' обозначают метил.
5. Конъюгат по п. 1, в котором Х обозначает NH.
6. Конъюгат по п. 1, в котором α-IFN представляет собой α2a-IFN.
7. Конъюгат по п. 1, в котором средняя сумма n и n' составляет от 850 до 1000.
8. Конъюгат по п. 1, в котором R и R' обозначают метил, Х обозначает NH, α-IFN представляет собой α-2a-IFN и один или оба n и n' равны 420.
9. Конъюгат по п. 1, в котором R и R' обозначают метил, Х обозначает NH, α-IFN представляет собой α-2a-IFN и один или оба n и n' равны 520.
10. Конъюгат по п. 1, обладающий антипролиферативной активностью, превосходящую таковую у α-IFN и сниженной антивирусной активностью в сравнении с α-IFN.
11. Способ получения конъюгата ПЭГ-α-IFN, обладающего антипролиферативной активностью, превосходящей таковую y α-IFN и сниженной антивирусной активностью в сравнении с α-IFN, заключающийся в том, что ковалентно связывают реагент формулы II
Figure 00000006

c α-IFN с получением конъюгата ПЭГ-α-IFN.
12. Фармацевтическая композиция, обладающая антипролиферативной и антивирусной активностью, содержащая конъюгат ПЭГ-α-IFN по любому из пп. 1-10 и терапевтически инертный носитель.
13. Фармацевтическая композиция для лечения или профилактики иммуномодуляторных нарушений, таких, как заболевания, относящиеся к опухоли, и инфекционных болезней, содержащая конъюгат ПЭГ-α-IFN по любому из пп. 1-10 и терапевтически инертный носитель.
14. Способ лечения или профилактики иммуномодуляторных заболеваний, включающий введение конъюгата ПЭГ-α-IFN по любому из пп. 1-10.
RU97108698/14A 1996-05-31 1997-05-30 Конъюгаты интерферона RU2180595C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31
US60/018.834 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU97108698A RU97108698A (ru) 1999-05-10
RU2180595C2 true RU2180595C2 (ru) 2002-03-20

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU97108698/14A RU2180595C2 (ru) 1996-05-31 1997-05-30 Конъюгаты интерферона

Country Status (48)

Country Link
US (1) US7201897B2 (ru)
EP (1) EP0809996B1 (ru)
JP (1) JP2980569B2 (ru)
KR (1) KR100254097B1 (ru)
CN (1) CN1088721C (ru)
AR (1) AR008378A1 (ru)
AT (1) ATE235920T1 (ru)
AU (1) AU725195B2 (ru)
BG (1) BG62273B1 (ru)
BR (1) BR9703421A (ru)
CA (1) CA2203480C (ru)
CO (1) CO4950528A1 (ru)
CY (2) CY2433B1 (ru)
CZ (1) CZ292775B6 (ru)
DE (3) DE69720320T2 (ru)
DK (1) DK0809996T3 (ru)
EG (1) EG24292A (ru)
ES (1) ES2110386T3 (ru)
GR (1) GR970300063T1 (ru)
HK (1) HK1005225A1 (ru)
HR (1) HRP970298B1 (ru)
HU (1) HU227992B1 (ru)
IL (1) IL120902A (ru)
IS (1) IS1988B (ru)
LU (1) LU91029I2 (ru)
MA (1) MA24193A1 (ru)
MY (1) MY117909A (ru)
NL (1) NL300127I2 (ru)
NO (1) NO322964B1 (ru)
NZ (1) NZ314903A (ru)
OA (1) OA10488A (ru)
PA (1) PA8431001A1 (ru)
PL (1) PL186949B1 (ru)
PT (1) PT809996E (ru)
RS (1) RS49533B (ru)
RU (1) RU2180595C2 (ru)
SA (1) SA97180030B1 (ru)
SG (1) SG55314A1 (ru)
SI (1) SI0809996T1 (ru)
SK (1) SK284458B6 (ru)
SV (1) SV1997000049A (ru)
TJ (1) TJ328B (ru)
TN (1) TNSN97091A1 (ru)
TR (1) TR199700358A2 (ru)
TW (1) TW517067B (ru)
UA (1) UA56989C2 (ru)
UY (1) UY24572A1 (ru)
ZA (1) ZA974583B (ru)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2012011836A1 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Closed Joint Stock Company "Biocad" The new stable polyethylene glycol conjugate of interferon alpha, represented by one positional isomer
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
RU2676324C2 (ru) * 2008-02-01 2018-12-28 Асцендис Фарма Ас Пролекарство, содержащее саморасщепляемый линкер

Families Citing this family (128)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
JP2000507917A (ja) 1995-11-02 2000-06-27 シェーリング コーポレイション 持続的低用量サイトカイン注入治療
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
EP1066059B1 (en) * 1998-03-26 2005-06-15 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
CN1187094C (zh) * 1998-04-28 2005-02-02 应用研究***Ars股份公司 多元醇干扰素β偶联物
JP5281726B2 (ja) 1998-05-15 2013-09-04 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーション 慢性Ｃ型肝炎感染を有する、抗ウイルス処置を受けていない患者における、リバビリンおよびインターフェロンαを含む併用療法
TR200003635T2 (tr) * 1998-06-08 2001-04-20 F.Hoffmann-La Roche Ag Peg-IFN-ALFA ve ribavirinin kronik hepatit C tedavisinde kullanılması.
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
HUP0200731A3 (en) * 1999-04-08 2002-09-30 Schering Corp Use of pegylated interferon alpha in chronic myeloid leukemia (cml) therapy
BR0009646A (pt) 1999-04-08 2002-02-05 Schering Corp Terapia de melanoma
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
CN1188172C (zh) 2000-01-10 2005-02-09 马克西根控股公司 G－csf偶联物
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
US20020009428A1 (en) * 2000-01-24 2002-01-24 Zaknoen Sara L. Combination therapy for cancer
RU2278123C2 (ru) 2000-02-11 2006-06-20 Максиджен Холдингз Лтд. Молекулы, подобные фактору vii или viia
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
AU2001255495A1 (en) 2000-04-20 2001-11-07 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable hcv-rnain patients having chronic hepatitis c infection
EP1294888B1 (en) 2000-06-30 2007-04-25 ZymoGenetics, Inc. Interferon-like protein zcyto21
ATE471956T1 (de) 2001-01-30 2010-07-15 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Verzweigte polyalkylenglykole
MXPA03007619A (es) 2001-02-27 2003-12-04 Maxygen Aps Nuevas moleculas similares a interferon beta.
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
ATE371680T1 (de) * 2002-01-16 2007-09-15 Biocompatibles Uk Ltd Polymerkonjugate
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
AU2003240439B2 (en) 2002-06-21 2009-05-21 Novo Nordisk Health Care Ag Pegylated factor VII glycoforms
KR100608415B1 (ko) 2002-07-24 2006-08-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 폴리알킬렌 글리콜산 첨가제
WO2004024776A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-25 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Method of producing hydroxyalkyl starch derivatives
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
EP1400533A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
AU2003273413A1 (en) 2002-10-08 2004-05-04 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Pharmaceutically active oligosaccharide conjugates
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
CA2504267A1 (en) * 2002-11-18 2004-06-03 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
ATE481420T1 (de) 2003-10-10 2010-10-15 Novo Nordisk As Il-21-derivate
ES2428358T3 (es) 2003-10-17 2013-11-07 Novo Nordisk A/S Terapia de combinación
AU2005211385B2 (en) 2004-02-02 2008-12-11 Ambrx, Inc. Modified human growth hormone polypeptides and their uses
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
WO2005092928A1 (en) 2004-03-11 2005-10-06 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein, prepared by reductive amination
MXPA06013412A (es) 2004-05-19 2007-01-23 Maxygen Inc Polipeptidos de interferon-alfa y conjugados.
WO2006009901A2 (en) 2004-06-18 2006-01-26 Ambrx, Inc. Novel antigen-binding polypeptides and their uses
JP2008509889A (ja) * 2004-06-30 2008-04-03 イージェン コーポレーション ペグ化インターフェロンα−１ｂ
DE602005022895D1 (de) 2004-08-12 2010-09-23 Schering Corp Stabile pegylierte interferon-formulierung
ATE542920T1 (de) 2004-12-22 2012-02-15 Ambrx Inc Modifiziertes menschliches wachstumshormon
US20060233740A1 (en) * 2005-03-23 2006-10-19 Bossard Mary J Conjugates of an hGH moiety and a polymer
JP2008545393A (ja) 2005-05-18 2008-12-18 マキシジェン， インコーポレイテッド 進歩したインターフェロンαポリペプチド
WO2006134173A2 (en) 2005-06-17 2006-12-21 Novo Nordisk Health Care Ag Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprising at least one non-native cysteine
EP1901777A2 (en) * 2005-06-20 2008-03-26 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon-alpha analogs and interferon tau
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
US20090018029A1 (en) 2005-11-16 2009-01-15 Ambrx, Inc. Methods and Compositions Comprising Non-Natural Amino Acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种***的药物及其应用
JPWO2007132882A1 (ja) 2006-05-16 2009-09-24 財団法人 東京都医学研究機構 Ｈｃｖ感染症を治療または予防するための医薬組成物
CN104593348A (zh) 2006-05-24 2015-05-06 诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物
SG174781A1 (en) 2006-09-08 2011-10-28 Ambrx Inc Hybrid suppressor trna for vertebrate cells
AU2007292903B2 (en) 2006-09-08 2012-03-29 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or Fc scaffolds and their uses
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
US9458256B2 (en) * 2006-11-07 2016-10-04 Dsm Ip Assets B.V. Carbamate, thiocarbamate or carbamide comprising a biomolecular moiety
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
KR101476472B1 (ko) 2007-03-30 2015-01-05 암브룩스, 인코포레이티드 변형된 ｆｇｆ-21 폴리펩티드 및 그 용도
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
ES2382124T3 (es) 2007-09-04 2012-06-05 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. Interferón alfa 2b modificado con polietilenglicol y método de preparación y aplicaciones de este
DK2196475T3 (da) 2007-09-04 2012-09-17 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferon alfa 2a, som er modificeret med polyethylenglycol, fremgangsmåde til syntese deraf samt anvendelse deraf
NZ584825A (en) 2007-11-20 2013-03-28 Ambrx Inc Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
CA2711375C (en) * 2008-01-18 2019-04-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Purification of not-glycosylated polypeptides
JP5702150B2 (ja) 2008-02-08 2015-04-15 アンブルックス, インコーポレイテッドAmbrx, Inc. 修飾されているレプチンポリペプチドおよびそれらの使用
MX2010010953A (es) 2008-04-03 2011-04-21 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Hormona de crecimiento modificada con glicol de polietileno de doble cadena, metodo de preparacion y aplicación del a misma.
US9272048B2 (en) 2008-04-29 2016-03-01 Ascendis Pharma Growth Disorders Division A/S PEGylated recombinant human growth hormone compounds
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
EP2307367B1 (en) 2008-07-08 2014-09-24 Board of Regents, The University of Texas System Novel inhibitors of proliferation and activation of signal transducer and activator of transcription (stats)
JP5680534B2 (ja) 2008-07-23 2015-03-04 イーライ リリー アンド カンパニー 修飾されているウシｇ−ｃｓｆポリペプチドおよびそれらの使用
PL2342223T3 (pl) 2008-09-26 2017-09-29 Ambrx, Inc. Zmodyfikowane polipeptydy zwierzęcej erytropoetyny i ich zastosowania
AU2009296267B2 (en) 2008-09-26 2013-10-31 Ambrx, Inc. Non-natural amino acid replication-dependent microorganisms and vaccines
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
WO2011014882A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. CONTINUOUS SUBCUTANEOUS ADMINISTRATION OF INTERFERON-α TO HEPATITIS C INFECTED PATIENTS
KR20120106942A (ko) 2009-10-30 2012-09-27 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 Ｂｉ２０１３３５, 인터페론 알파 및 리바비린을 포함하는 ｈｃｖ 병용 치료요법을 위한 투여 용법
CN104017063A (zh) 2009-12-21 2014-09-03 Ambrx公司 经过修饰的猪促生长素多肽和其用途
CN107674121A (zh) 2009-12-21 2018-02-09 Ambrx 公司 经过修饰的牛促生长素多肽和其用途
JP6148013B2 (ja) 2010-03-05 2017-06-14 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
US20120135912A1 (en) 2010-05-10 2012-05-31 Perseid Therapeutics Llc Polypeptide inhibitors of vla4
EP2585065A1 (en) 2010-06-24 2013-05-01 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
JP2013541937A (ja) 2010-08-05 2013-11-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 抗ｍｈｃ抗体−抗ウイルス性サイトカイン融合タンパク質
MX346786B (es) 2010-08-17 2017-03-31 Ambrx Inc Polipeptidos de relaxina modificados y sus usos.
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
MX2014000031A (es) 2011-07-01 2014-07-09 Bayer Ip Gmbh Polipeptidos de fusion de relaxina y usos de los mismos.
BR112014002365A2 (pt) 2011-08-03 2017-02-21 Cytheris interleucina-7 (il-7)
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
AU2013270684B2 (en) 2012-06-08 2018-04-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
EP4074728A1 (en) 2012-08-31 2022-10-19 Sutro Biopharma, Inc. Modified peptides comprising an azido group
ES2865473T3 (es) 2013-07-10 2021-10-15 Sutro Biopharma Inc Anticuerpos que comprenden múltiples residuos de aminoácidos no naturales sitio-específicos, métodos para su preparación y métodos de uso
WO2015054658A1 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
KR102637699B1 (ko) 2014-10-24 2024-02-19 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 변형된 fgf-21 폴리펩티드 및 그의 용도
PL3215193T3 (pl) * 2014-11-06 2024-03-18 Pharmaessentia Corporation Reżim podawania pegylowanego interferonu
JP6668468B2 (ja) 2015-11-03 2020-03-18 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｈｂｖキャプシドアセンブリ阻害剤とインターフェロンの併用療法
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
SG11201907209QA (en) 2017-02-08 2019-09-27 Bristol Myers Squibb Co Modified relaxin polypeptides comprising a pharmacokinetic enhancer and uses thereof
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
PL3849614T3 (pl) 2018-09-11 2024-04-22 Ambrx, Inc. Koniugaty polipeptydu interleukiny-2 i ich zastosowania
CN113366015A (zh) 2018-10-19 2021-09-07 Ambrx公司 白细胞介素-10多肽缀合物、其二聚体及其用途
EP3923991A1 (en) 2019-02-12 2021-12-22 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods and uses of antibody-tlr agonist conjugates
AU2021233909A1 (en) 2020-03-11 2022-09-29 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
KR20230073200A (ko) 2020-08-20 2023-05-25 암브룩스, 인코포레이티드 항체-tlr 작용제 접합체, 그 방법 및 용도
JP2024512775A (ja) 2021-04-03 2024-03-19 アンブルックス，インコーポレイテッド 抗ｈｅｒ２抗体薬物コンジュゲート及びその使用

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4609546A (en) 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
WO1984004745A1 (en) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Novel polypeptides and their use
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
EP0229108B1 (en) 1985-06-26 1990-12-27 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ATE136315T1 (de) * 1989-05-27 1996-04-15 Sumitomo Pharma Verfahren für die herstellung von polyethylenglykolderivate und modifizierte proteine.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
DK0730470T3 (da) * 1993-11-10 2002-06-03 Enzon Inc Forbedrede interferonpolymerkonjugater
WO1995021629A1 (en) * 1994-02-08 1995-08-17 Amgen Inc. Oral delivery of chemically modified proteins
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
МАШКОВСКИЙ М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1985, ч.2, с.386. *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2676324C2 (ru) * 2008-02-01 2018-12-28 Асцендис Фарма Ас Пролекарство, содержащее саморасщепляемый линкер
WO2012011836A1 (en) * 2010-07-20 2012-01-26 Closed Joint Stock Company "Biocad" The new stable polyethylene glycol conjugate of interferon alpha, represented by one positional isomer
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона

Also Published As

Publication number Publication date
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
TW517067B (en) 2003-01-11
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
IS4491A (is) 1997-12-01
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
SG55314A1 (en) 1998-12-21
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
DE809996T1 (de) 1998-04-09
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
AU725195B2 (en) 2000-10-05
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
YU17597A (sh) 1999-07-28
HU227992B1 (en) 2012-08-28
PL320251A1 (en) 1997-12-08
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
OA10488A (fr) 2002-04-11
TJ97000465A (en) 1998-12-25
ZA974583B (en) 1998-11-17
CN1088721C (zh) 2002-08-07
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
SV1997000049A (es) 1998-07-09
NO322964B1 (no) 2006-12-18
TJ328B (en) 2001-12-24
AU2372397A (en) 1997-12-04
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
RS49533B (sr) 2006-12-15
SK67397A3 (en) 1997-12-10
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
UY24572A1 (es) 2000-12-29
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
BG101540A (en) 1998-02-27
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
US7201897B2 (en) 2007-04-10
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
PT809996E (pt) 2003-06-30
CY2433B1 (en) 2004-11-12
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
NZ314903A (en) 1998-10-28
NL300127I1 (ru) 2003-07-01
EG24292A (en) 2009-01-08
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
IL120902A (en) 2004-06-20
CA2203480C (en) 2009-06-30
IL120902A0 (en) 1997-09-30
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
MX9704012A (es) 1997-11-29
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
NO972480L (no) 1997-12-01
KR970074791A (ko) 1997-12-10
AR008378A1 (es) 2000-01-19
BR9703421A (pt) 1998-09-15
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
NO972480D0 (no) 1997-05-30
CN1167777A (zh) 1997-12-17
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
IS1988B (is) 2005-02-15
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
MY117909A (en) 2004-08-30
UA56989C2 (ru) 2003-06-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2180595C2 (ru) Конъюгаты интерферона
JP2989002B2 (ja) 化学修飾顆粒球コロニー刺激因子
TWI232882B (en) Poly-IFN-beta conjugates
JP2859105B2 (ja) インターフエロン抱合体
CA2361766C (en) Gcsf conjugates
JP5334347B2 (ja) 化学的に修飾した新規なエリスロポエチン刺激タンパク質組成物および方法
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
KR0184858B1 (ko) 폴리믹신 복합체
CN103228792A (zh) PEG-干扰素λ1结合物
JPH0585942A (ja) インターフエロン−ヒアルロン酸及び／又はその塩の結合体
US20040204566A1 (en) Chemically-modified G-CSF
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
CA2311684C (en) Chemically-modified g-csf
BRPI0804889B1 (pt) Processo de produção de conjugados de interferon com óxidos de polialquilenos e seus usos