SK284458B6 - Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok - Google Patents

Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok Download PDF

Info

Publication number
SK284458B6
SK284458B6 SK673-97A SK67397A SK284458B6 SK 284458 B6 SK284458 B6 SK 284458B6 SK 67397 A SK67397 A SK 67397A SK 284458 B6 SK284458 B6 SK 284458B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
conjugate
interferon
peg
formula
ifnα2a
Prior art date
Application number
SK673-97A
Other languages
English (en)
Other versions
SK67397A3 (en
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Alicia Vallejo Palleroni
Original Assignee
F.Hoffmann-La Roche Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SK284458(B6) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by F.Hoffmann-La Roche Ag filed Critical F.Hoffmann-La Roche Ag
Publication of SK67397A3 publication Critical patent/SK67397A3/sk
Publication of SK284458B6 publication Critical patent/SK284458B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNalfa všeobecného vzorca (I), v ktorom R a R' znamenajú na sebe nezávisle C1-C6 alkylovú skupinu, X skupinu NH alebo atóm kyslíka, n a n' sú čísla, ktorých súčet je 600 až 1 500, priemerná molekulová hmotnosť jednotiek polyetylénglykolu v konjugáte je 26000 až 66000 Daltonov, spôsob jeho prípravy a jeho použitie. Opísaný konjugát PEG-IFNalfa je farmaceuticky aktívny proteín s antivírusovým a antiproliferatívnym účinkom a je vhodný na výrobu farmaceutických prostriedkov.ŕ

Description

Vynález sa týka fyziologicky aktívneho pegylovaného konjugátu interferónu a (konjugátu PEG-IFNa). Interferón, najmä interferón a 2a je farmaceutický aktívny proteín s antivírusovým a antiproliferatívnym účinkom. Interferón sa napríklad používa na liečbu vlasových buniek leukémie a sarkómu Kaposi a pôsobí tiež proti hepatitíde. Pre zlepšenie stálosti a rozpustnosti a pre zníženie imunogenicity sa farmaceutický aktívne proteíny, ako interferón, môžu konjugovať na polymér polyetylénglykol (PEG).
Doterajší stav techniky'
Biologická dostupnosť proteínových liečiv je často obmedzovaná ich krátkym polčasom životnosti v plazme, čo bráni dosiahnutiu ich maximálnej klinickej schopnosti. V posledných rokoch sa ukázalo, že biomolekuly konjugované na PEG majú klinicky užitočné vlastnosti [Inada a kol. J. Bioact. And Compatible Polymers 5, str. 343 (1990), Delgado a kol., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, str. 249 (1992), Katre, Advanced Drug Delivery Systems 10, str. 91 (1993)]. Medzi tieto vlastnosti patrí fyzikálna tepelná stálosť, ochrana proti náchylnosti na enzymatickú degradáciu, zvýšená rozpustnosť, dlhší cirkulačný polčas životnosti in vivo, znížené vymiznutie a zlepšená potencia. Uvádza sa, že rozvetvené konjugáty PEG majú zväčšenú stálosť k hodnote pH a tepelnú stálosť a väčšiu stabilitu proti proteolytickej digescii ako lineárne PEG konjugáty. [Monfardini a kol., Bioconjugate Chem. 6, str. 62 (1995)]. Inými vlastnosťami proteínov PEG sú znížená imunogenecita aj znížená toxicita. Iným účinkom PEGylácie určitých proteínov môže byť znížená aktivita in vitro, sprevádzaná zlepšenou aktivitou in vivo. To bolo pozorované napríklad v prípade G-CSF [Satake-Ishikawa a kol., Celí Structure and Function 17, str. 157 až 160 (1992)] IL-2 [Katre a kol. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94, str. 1487 (1987.)] TNF-a
Tsutsumi a kol., Jpn. J. Cancer. Res. 85, str. 9, (1994)], IL-6 [Inoue a kol., J. Lab. Clin. Med. 124, str. 529 (1994)] a CD4-IgG [Chamow a kol., Bioconj. Chem. 5, str. 133 (1994)].
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa všeobecného vzorca (I)
ROCH2CH2(OCH2CH2)n—O-O—NH (CH2)4 (i)
L ROCH2CH2;O0H2CH5)n'—O—C—N'íť^—,Ffta O O kde znamená R a R’ od seba nezávisle C>-C13 alkylovú skupinu, X skupinu NH alebo atóm kyslíka (X je najmenej jedna funkčná skupinu v molekule IFNa zvolenej zo skupiny zahŕňajúcej NH2 alebo OH), n a n’ sú čísla, ktorých súčet je 600 až 1500 a priemerná molekulová hmotnosť jednotiek polyetylénglykolu v konjugáte je 26 000 až 66 000 Daltonov. Konjugát všeobecného vzorca (I) má rozvetvenú štruktúru, pričom dva podiely PEG sú viazané na proteín jednoduchou väzbou.
S prekvapením sa totiž zistilo, že v prípade interferónu znižuje PEGylácia protivírusovú aktivitu in vitro, ale zvyšuje antiproliferatívnu aktivitu v ľudských nádorových bunkách. Ale nový konjugát PEG interferónu podľa vynálezu má prekvapivé vlastnosti v tom, že antiproliferatívna aktivita PEG interferónu je značne vyššia ako nielen samotného interferónu, ale aj iných PEG interferónových konjugátov. Napriek tomu, že je antiproliferatívna aktivita konjugátu značne zvýšená v porovnaní s inými PEG interferón-α konjugátmi, je zníženie protivírusovej aktivity podobné. Okrem toho PEG interferón-α konjugát podľa vynálezu je, neimunogenický, nevyvoláva domnele žiadne tvorenie protilátok. Na rozdiel od toho iné PEG interferón-a konjugáty vyvolávajú obmedzenú tvorbu protilátok.
Vynález sa teda týka novej triedy PEG derivátov interferónu a (IFNa). Konjugát podľa vynálezu má rozvetvenú štruktúru PEG, ako je to ďalej uvedené. Rozvetvený PEG má tú prednosť, že dovoľuje pripojenie dvoch lineárnych molekúl PEG na osamotenom mieste, čím zdvojnásobuje hmotu pripojeného PEG bez niekoľkonásobných miest PEGylácie.
V porovnaní s nemodifikovaným IFNa (teda IFNa bez pripojeného PEG) má konjugát zvýšený cirkulačný polčas životnosti a čas zdržania v plazme, zníženú imonogenicitu, znížené vymiznutie a zvýšenú antiproliferatívnu aktivitu so sprievodnou zníženou protivírusovou aktivitou in vitro. V porovnaní s inými konjugátmi PEG-IFNa má konjugát podľa vynálezu značne väčšiu antiproliferatívnu aktivitu, neúmernú so zlepšením alebo znížením, ktoré sa vyskytuje v jeho iných vlastnostiach a domnele žiadnu imunogenicitu.
Druhy fyziologicky aktívneho konjugátu PEG-IFNa podľa vynálezu má uvedený všeobecný vzorec.
Konjugát podľa vynálezu má rovnaké použitie ako IFNa, napríklad antiproliferatívne využitie. Konjugáty PEG interferón-α podľa vynálezu sa hodia na liečbu imunomodulatorných ochorení, ako sú neoplastické ochorenia, napríklad leukémia vlasových buniek, CML a sarkóm Kaposi a infekčné ochorenia; na liečbu týchto chorôb sa rovnako používa IFNa (osobitne INFa2a). Ale konjugát podľa vynálezu má zlepšené vlastnosti vrátane vynikajúcej stálosti, väčšej rozpustnosti, zvýšený cirkulačný polčas životnosti a čas rezidencie v plazme. Okrem toho majú tieto konjugáty antiproliferatívnu aktivitu podstatne väčšiu ako IFNa. Tiež, ako to už bolo uvedené, má konjugát prekvapujúcu disociáciu protivírusových a antiproliferatívnych javov. Táto vlastnosť sa prídavné hodí na zvýšenie žiaducej aktivity konjugátu pri znižovaní alebo eliminovaní nežiaducej aktivity. Keď je napríklad nežiaduci vedľajší účinok spojený s protivírusovým pôsobením, eliminácia tohto pôsobenia by eliminovala vedľajší účinok pri zachovaní antiproliferatívnej aktivity. Vynález teda preto zahŕňa tiež farmaceutické prostriedky na báze zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo ich solí a spôsoby ich výroby.
Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu, používané na zvládnutie alebo prevenciu chorôb, zahŕňajú interferónový konjugát všeobecného vzorca (I) a terapeuticky inertný, netoxický a terapeuticky prijateľný nosič. Používané farmaceutické prostriedky môžu byť formulované a dávkované spôsobom konzistentným s dobrou lekárskou praxou pri uvážení liečeného ochorenia, stavu individuálneho pacienta, miesta podania proteínového konjugátu, spôsobu podania a iných činiteľov známych z praxe.
SK 284458 Β6
Navrhovaným konjugátom je fyziologicky aktívny konjugát PEG IFNa všeobecného vzorca (I), skôr definovaný.
Čísla n a n' sú zvolené tak, že výsledný konjugát všeobecného vzorca (I) má fyziologickú aktivitu IFNa, ktorá môže predstavovať rovnakú, väčšiu alebo zlomok zodpovedajúcej aktivity nemodifikovaného IFNa. Čísla n a n' môžu byť rovnaké alebo rozdielne a predstavujú počet jednotiek etylénglykolu v PEG. Samotná jednotka PEG OCH2CH2 má molekulovú hmotnosť približne 44 Daltonov. Molekulová hmotnosť konjugátu (s vylúčením molekulovej hmotnosti IFNa) závisí od čísel n a n'. Súčet čísel n a n1 pre konjugát všeobecného vzorca (I) je 600 až 1500, čo produkuje konjugát s celkovou strednou molekulovou hmotnosťou jednotiek PEG 26 000 až 66 000, výhodne približne 35 000 až 45 000 a najmä približne 39 000 až 45 000 Daltonov, pričom osobitne výhodná je molekulová hmotnosť 40 000 Daltonov. Výhodným súčtom čísel n a n' je približne 800 až 1200, pričom stredný súčet je približne 850 až 1000 a výhodným súčtom je 910. Každé z čísel n a n' môže byť jednotlivo 420 alebo 520, alebo môžu byť obidve 420 alebo 520, alebo môžu byť obidve 455. Výhodný pomer čísel n k n'je približne 0,5 až 1,5 a osobitne výhodný je pomer približne 0,8 až 1,2. Molekulová hmotnosť „približne“ určité číslo znamená, že je v rozumnom rozmedzí takého čísla určeného obvyklými analytickými technikami.
Výhodným konjugátom všeobecného vzorca (I), kde IFNa je IFNa2a, je konjugát kde symboly R a R' znamenajú mctylovú skupinu, konjugát, kde X je NH a konjugát kde čísla n a n' sú každé samotné alebo obidve buď 420 alebo 520. Taký konjugát majúci všetky uvedené vlastnosti je osobitne výhodný.
Symboly R a R' môžu znamenať ktorúkoľvek nižšiu alkylovú skupinu, čím sa rozumie alkylová skupina s 1 až 6 atómami uhlíka, ako je napríklad skupina metylová, etylová a izopropylová. Zahrnuté sú rozvetvené alkyly. Výhodnou alkylovou skupinou je skupina metylová. Pokiaľ ide o dve skupiny PEG vo vzorci (I) môžu byť symboly R a R' rovnaké alebo rozdielne.
IFNa (interferónom a) a jeho druhom IFNa2a je mienený prírodný rekombinantný proteín, výhodne ľudský, ktorý je získaný z bežného zdroja, ako sú tkanivá, syntézy proteínov, kultivácia buniek s prírodnými alebo rekombinantnými bunkami. Zahrnutý je každý proteín majúci aktivitu IFNa, ako sú muteíny alebo inak modifikované proteíny. Získavanie a izolácia IFNa z prírodných alebo rekombinantných zdrojov sú dobre známe [Pestka, Árch. Biochem. Biophys. 221, str. 1 (1983)]. Výhodným IFNa je IFNa2a, ktorý, ako je to uvedené, sa získava známymi spôsobmi [Pestka, Sci. Am. 249, str. 36 (1983), európsky patentový spis číslo 43980)].
Fyziologicky aktívny konjugát všeobecného vzorca (I) má aktivitu IFNa, ktorou sa rozumie zlomok alebo násobok ktorejkoľvek známej aktivity IFNa tak, ako je zistená rôznymi skúškami známymi v odbore. Konjugáty podľa vynálezu majú najmä aktivitu IFNa, ako je ukázaná antiproliferatívnym pôsobením proti nádorovým bunkám a protivírusovým pôsobením proti bunkám, ktoré sú infikované vírusom. To sú známe aktivity IFNa. Taká aktivita v konjugáte môže byť zistená skúškami dobre v odbore známymi, napríklad ďalej opísanými skúškami [napríklad Rubinstein a kol. J. Virol. 37, str. 755 (1981), Borden a kol., Canc. Res. 42, str. 4948 (1982)]. Vynález sa týka konjugátu všeobecného vzorca (I), ktorý má väčšie antiproliferatívne pô sobenie a menšie protivirusové pôsobenie ako nemodifikovaný IFNa.
Konjugát všeobecného vzorca (I) je vytvorený kovalentnou väzbou IFNa na PEG, ktorý bol aktivovaný nahradením hydroxylu PEG väzbovou skupinou, tvoriacou reakčné činidlo, ktorým je derivát PEG esteru N-hydroxysukcínimidu (najmä monometoxy PEG) všeobecného vzorca (II). Reakčné činidlo je možné získať bežnými spôsobmi (Mont-fardini a kol.). Väzbou je amidová alebo esterová väzba. Pri výhodnom konjugáte je väzbou amidová väzba (X je NH). Súčasťou vynálezu je spôsob zvyšovania antiproliferatívnej aktivity IFNa pri znižovaní protivírusovej aktivity IFNa viazaním IFNa, ako je to opísané, na reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) na vytvorenie konjugátu PEG-IFN.
X znamená miesto pripojenia na IFNa, v ktorom je reakčné činidlo PEG všeobecného vzorca (II) kovalentne viazané na IFNa. Reakčné činidlá sa pripojujú k primárnym amínovým skupinám (XH = NH2), napríklad na lyzin alebo na N-zakončenie IFNa. Reakčné činidlá sa môžu pripojovať tiež na hydroxylovú skupinu (XH = OH) napríklad na serín.
ROCHŕlHztOCHzCHíJn —O—C—NH
ROCIIjOHjtOCHjCHj), roch2ch2(och2ch2)„._o—c—rÍH
II O
R'OCH2CH2(OCH2CH2)„— o—c—fíh
Reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) (PEG2-NHS), kde celkom dva reťazce monometoxy PEG (m-PEG) sú viazané na lyzin, jeden na a-aminoskupinu a druhý na epsilon-aminoskupinu karbamátovými (uretanovými) väzbami a majúce lyzínkarboxylovú skupinu aktivovanú na sukcínimidylester, je možné získať bežnými spôsobmi, podľa známych postupov (Montfardini a kol.) aplikovateľnými na reakčné činidlo s R ako nižšou alkylovou skupinou a s požadovaným číslom n. Reakčné činidlo je obchodným produktom spoločnosti Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Alabama). Získaná výhodná stredná molekulová hmotnosť PEG je približne 40 000 Daltonov v PEG2-NHS (iné molekulové hmotnosti je možné získať menením čísla n pri východiskových materiáloch PEG-alkoholu pre reakčné činidlo všeobecného vzorca (II), bežnými spôsobmi).
Reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) môže byť konjugovanc na IFNa bežnými spôsobmi. Špecificky reaguje reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) prednostne s aspoň jednou primárnou aminoskupinou IFNa (napríklad N-zakončenie a lyzinové postranné reťazce) (napríklad IFNa2a) na vytvorenie amidovej väzby medzi IFNa a polymérovou kostrou PEG. PEGylačná reakcia môže tiež prebehnúť medzi PEG2-NHS a prípadnými voľnými hydroxylovými skupinami (napríklad serínom) IFNa na vytvorenie esterovej väzby. Reakčný mechanizmus je uvedený skôr. Podmienky reakcie sú pre pracovníka v odbore bežné a podrobne sú opísané ďalej. Reakčné činidlo PEG sa kom binuje s IFNa za mierne zásaditých podmienok pri nízkej teplote za podmienok vhodných na nukleofilnú substitúciu, ktorá vytvorí konjugát všeobecného vzorca (I), ako to objasňuje uvedený reakčný mechanizmus.
Pripojovanie reakčných činidiel k IFNa je možné vykonávať obvyklými spôsobmi. Použiť je možné PEG akejkoľvek zvolenej molekulovej hmotnosti podľa vynálezu. Podmienky reakcie je možné voliť na zaistenie navrhovaného konjugátu s jedným pripojeným reakčným činidlom. Konjugát všeobecného vzorca (I), ktorý má pripojené jedno reakčné činidlo všeobecného vzorca (II), sa oddelí od nemodifikovaného IFNa a konjugáty majúce pripojenú viacej ako jednu molekulu reakčného činidla sa oddelia bežnými spôsobmi. Na oddeľovanie konjugátov rozdielom nábojov sa dajú použiť čistiace metódy, ako je katexová chromatografia, ktorá účinne oddeľuje konjugáty na základe ich rôznej molekulovej hmotnosti. Obsah frakcii, získaných katexovou chromatografiou, môže byť identifikovaný molekulovou hmotnosťou pomocou obvyklých metód, napríklad hmotovou spektroskopiou, SDS-PAGE, alebo inými známymi metódami oddeľovania molekulových entít podľa molekulovej hmotnosti. Podľa toho je potom identifikovaná frakcia, ktorá obsahuje konjugát všeobecného vzorca (I) vyčistený od nemodifikovaného IFNa a od konjugátov majúcich pripojených viacej ako jedno reakčné činidlo. Okrem toho reakčné činidlá všeobecného vzorca (II) uvoľňujú jeden lyzín na reakčné činidlo pri kyselinovej hydrolýze, takže počet lyzínov v hydrolýze indikuje počet PEG pripojených k proteínu, a preto je možné overiť počet molekúl reakčného činidla pripojených ku konjugátu.
Vynález bližšie objasňujú, žiadnym spôsobom však neobmedzujú, nasledujúce príklady praktického rozpracovania pomocou priložených obrázkov.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Na obr. 1 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky A498. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 105 ľudských obličkových buniek A498 v študijnom dni -33. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 4 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3. A neošetrená kontrola B ošetrenie 30 pg PEG-IFNa2a C ošetrenie 60 pg PEG-IFNa2a D ošetrenie 120 pg PEG-IFNa2a E ošetrenie 300 pq PEG-IFNa2a
Na obr. 2 je znázornené protinádorové pôsobenie PEGIFNa2a u myši, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky A498. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 106 ľudských obličkových buniek A498 v študijnom dni -33. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 4 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3. A neošetrená kontrola B ošetrenie 10 pg PEG-IFNa2a C ošetrenie 20 pg PEG-IFNa2a D ošetrenie 40 pg PEG-IFNa2a E ošetrenie 100 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 3 je znázornené protinádorové pôsobenie PEGIFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky ACHN. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 106 ľudských obličkových buniek ACHN v študijnom dni -25. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 5 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3.
A neošetrená kontrola
B ošetrenie 30 pg PEG-IFNa2a C ošetrenie 60 pg PEG-IFNa2a D ošetrenie 120 pgPEG-IFNa2a E ošetrenie 300 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 4 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky ACHN. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 106 ľudských obličkových buniek ACHN v študijnom dni -25. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 5 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3. A neošetrená kontrola
B ošetrenie 10 pg PEG-IFNa2a
C ošetrenie 20 pgPEG-IFNa2a
D ošetrenie 40 pg PEG-IFNa2a E ošetrenie 100 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 5 jc znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky G402. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 106 ľudských obličkových buniek G402 v študijnom dni -45. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNa2a. Vyznačené množstvo (30, 60, 120 alebo 300 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru raz týždne počas 5 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3. A neošetrená kontrola
B ošetrenie 30 pg PEG-IFNa2a C ošetrenie 60 pg PEG-IFNa2a D ošetrenie 120 pg PEG-IFNa2a E ošetrenie 300 pg PEG-IFNa2a
Na obr. 6 je znázornené protinádorové pôsobenie PEG-IFNa2a u myší, ktorým boli implantované subkutánne ľudské obličkové bunky G402. Všetky zvieratá dostali subkutánny implant 2 x 106 ľudských obličkových buniek G402 v študijnom dni -45. V študijnom dni 0 sa začalo s ošetrovaním PEG-IFNoc2a. Vyznačené množstvo (10, 20, 40 alebo 100 pg) PEG-IFNa2a sa aplikovalo subkutánne pod protiľahlý bok nádoru trikrát týždne počas 5 týždňov. Na osi x je počet dní a na osi y objem nádoru v cm3. A neošetrená kontrola
B ošetrenie 10 pq PEG-IFNa2a C ošetrenie 20 pq PEG-IFNa2a D ošetrenie 40 μμ PEG-IFNa2a E ošetrenie 100 pgPEG-IFNoc2a
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Príprava konjugátu všeobecného vzorca (I) Materiály
Interferón-a2a sa pripraví známymi spôsobmi (Pestka). Polyetylénglykol (PEG) reakčné činidlo II je obchodný produkt spoločnosti Shearwater Polymers, Inc. (Huntsville, Ala). Živica Fracto-gélR EMD CM 650 (S) s časticami s veľkosťou 25 až 40 pm je obchodný produkt spoločnosti EM Separations (Gibbstown, MA). Solanka (PBS) tlmená koncentrovaným fosfátom (10X), pH 7,3 je obchodný pro dukt spoločnosti BioWhittaker (Walkersville, MD). Vopred naliate elektroforézne sodnododecyl(lauryl)sulfátpolyakrylové gély (SDS-PAGE) a elektroforézne jednotky sú obchodné produkty spoločnosti NOVEX (San Diego, CA). Koncentrované rýchle farbivo (Fast Stain) na proteínové farbenie konjugátov PEG na SDS-PAGE je obchodný produkt spoločnosti Zoion Research, Inc. (Newton, MA). Testovací súbor endotoxínu LAL je obchodný produkt spoločnosti Associates of Cápe Cod, Inc. (Woods Hole, MA). Všetky ostatné použité reakčné činidlá majú najvyššiu dosiahnuteľnú kvalitu. Hrdelne kanylované potkany a myši BDF-1 dodávajú Charles River Laboratories (Wilmington, MA).
Experimentálne postupy
A. Príprava konjugátu všeobecného vzorca (I) v malom meradle
Do 50 mg (2,6 pmol) IFNa v 10 ml 100 mM borátu s hodnotou pH 8,0 sa pridá 208 mg (5,2 pmol) reakčného činidla všeobecného vzorca (II) (so strednou molekulovou hmotnosťou 40 000 Daltonov). Konečný pomer proteínu k reakčnému činidlu je 1 : 2. Reakčná zmes sa mieša počas dvoch hodín pri teplote 4 °C. Reakcia sa ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ľadovou kyselinou octovou.
Reakčná zmes sa zriedi 50-násobne vodou, sfiltruje sa cez filter 0,2 pm a aplikuje sa na stĺpec Amicon naplnený 100 ml (3,2 x 13 cm) Fractogélu EMD CM 650(S) nízkou prietokovou rýchlosťou 20 ml/min. Stĺpec sa vopred uvedie do rovnovážneho stavu 10 mM amóniumacetátom s hodnotou pH 4,5. Výtok stĺpca sa monitoruje absorpciou ultrafialového svetla pri 280 nm. Stĺpec sa potom premýva vyvažovacím tlmivým roztokom, kým sa absorbancia ultrafialového svetla nevráti na základnú úroveň. Konjugáty PEG-IFN majúce pripojené viacej ako jedno reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) (oligoméry PEG-IFN) sa zriedia 40 mM amóniumacetátom s hodnotou pH 4,5 a konjugát všeobecného vzorca (I) sa eluuje roztokom 0,12 M chloridu sodného v 40 mM amóniumacetátovom tlmivom roztoku. Nemodifikovaný IFN zvyšný v stĺpci sa eluuje roztokom 0,5 M chloridu sodného v rovnakom tlmivom roztoku. Stĺpec sa regeneruje prepláchnutím 1,0 M NaCl s následným premytím vyvažovacím tlmivým roztokom. Frakcie konjugátu všeobecného vzorca (I) sa skoncentrujú v koncentrátom miešaných buniek Amicon vybaveným membránou YM10 na koncentráciu približne 1 mg/ml.
Katexová živica Fractogél CM 650(S) použitá na čistenie účinne adsorbuje PEG a nemodifikovaný IFN. Adsorpčná schopnosť závisí od stupňa PEGylácie. Konjugáty sú viazané menej pevne ako nemodifikovaný IFN. Oligoméry PEG-IFN sa eluujú 40 mM amóniumacetátom, zatiaľ čo konjugát všeobecného vzorca (I) sa eluuje roztokom 0,12 M chloridu sodného. Nemodifikovaný IFN sa eluuje roztokom 0,5 M chloridu sodného. Všetky prípravky obsahujú < 5 EU/mg endotoxínov. Výsledný prípravok obsahuje > 99 % konjugátu všeobecného vzorca (I) a neobsahuje nemodifikovaný IFN.
B. Príprava konjugátu všeobecného vzorca (I) vo veľkom meradle
V 63 ml I mM HC1 pri teplote 4 °C sa rozpustí 6240 miligramov (156 pmol) reakčného činidla všeobecného vzorca (II) (stredná molekulová hmotnosť 40 000 Daltonov) a rýchío sa pridá do 125 ml roztoku obsahujúceho 1000 mg (52 pmoí) interferónu v 50 mM borátovom tlmivom roztoku, pH 9,0. Konečný pomer proteínu k reakčnému činidlu je 1:3a konečná koncentrácia proteínu v re akčnej zmesi je 5,3 mg/ml. Reakčná zmes sa mieša počas dvoch hodín pri teplote 4 °C. Reakcia sa ukončí nastavením hodnoty pH na 4,5 ľadovou kyselinou octovou.
Reakčná zmes sa zriedi 10-násobnc vodou a aplikuje sa na stĺpec naplnený 600 ml Fractogélu EMD CM 650(M) vopred uvedeným do rovnovážneho stavu 20 mM acetátom sodným s hodnotou pH 4,5 s lineárnou prietokovou rýchlosťou 1,3 cm/min. Stĺpec sa premyje vyvažovacím tlmivým roztokom nasledovaným 10 mM NaCl na odstránenie nadbytku reakčného činidla, vedľajších produktov reakcie a oligomérov PEG-IFN. Konjugát všeobecného vzorca (I) sa eluuje vyvažovacím tlmivým roztokom obsahujúcim 200 mM NaCl. Nemodifikovaný interferón ešte adsorbovaný v stĺpci sa odstráni premytím 0,75 M NaCl vo vyvažovacom tlmivom roztoku. Konjugát všeobecného vzorca (I), ktorý bol eluovaný pri 0,3 - 0,5 mg/ml sa ďalej koncentruje a diafiltruje do tlmivého roztoku konečného prostriedku, 20 mM acetátu sodného, pH 5,0, obsahujúceho 150 mM NaCl. Celkový výťažok konjugátu všeobecného vzorca (I) je 40 až 45%.
Vyčistený PEG-IFN z prípravy vo veľkom meradle sa skladá z >99 % konjugátu všeobecného vzorca (I). Priemerná molekulová hmotnosť konjugátu všeobecného vzorca (I) v tomto príklade je 62 000 Daltonov vrátane molekulovej hmotnosti IFNa2a, ktorá je 19 241 Daltonov a priemernej molekulovej hmotnosti reakčného činidla, ktorá je 40 000 až 45 000, približne 43 000 Daltonov.
Príklad 2
Charakterizácia konjugátu všeobecného vzorca (I) Stanovenie proteínu
Koncentrácie proteínu sa zisťujú pomocou hodnoty A28o 1,0 pre roztok 1 mg/ml IFNa a2a.
Analýza ADS-PAGE
Konjugát sa analyzuje gélovou elektroforézou pri použití systému nátriumdodecyl (lauryl) sulfát/polyakrylamid (8 až 16 %) za redukčných podmienok spôsobom, ktorý opísal Laemmli (Náture 227, str. 680 (1970)). SDS-PAGE obsahujúci konjugáty PEG sa vyfarbia na proteín farbivom Fast Stain (Zoion Research, Inc.) podľa inštrukcií výrobcu.
Stanovenie endotoxínových hladín
Endotoxínové hladiny sa stanovia metódou LAL podľa inštrukcií výrobcu. Všetky prostriedky obsahujú < 5 EU/mg endotoxínov.
Príklad 3
Biologické aktivity konjugátu všeobecného vzorca (I) in vitro
Protivírusové pôsobenie v bunkách hovädzích obličiek
Protivírusové pôsobenie IFNa2a a konjugátu všeobecného vzorca (I) pripraveného podľa príkladu 1A in vitro sa určuje biotestom v bunkovej kultúre, ktorá používa bunky Madin-Darby hovädzích obličiek (MDBK) vyvolávajúcich reakciu vezikulámym vírusom stomatitis (Rubinstein a kol). Protivírusové pôsobenie je uvedené v tabuľke I spolu so zodpovedajúcimi zvyškovými aktivitami ako percento východiskového IFN.
Tabuľka I
Protivírusové pôsobenie
vzorky Typ PEG Celková PEG hmotnosť (kDa) i Lyz. modifik. Špecifické pôsobenie (J/mg) Zvyšková aktivita (4)
IFHa2a - 2,00x10® 100
Konjugát rozvetvený 40 1 1,40X107 7
všeob. vz. I
In vitro antiproliferatívne pôsobenie v ľudských nádorových bunkách
Antiproliferatívne pôsobenie in vitro sa testuje v ľudských bunkách Daudi (Burkittova Lymphoma), ako ich opísal Borden a kol. Ľudské bunky Daudi sa získajú v podobe kultúry stacionárnej suspenzie v RPMI 1540 doplnenom 10 % teľacieho zárodočného séra a 2 mM glutamínu (Grand Island Biologicals, Grand Island, NY). Bunky sa testujú a zistí sa, že sú prosté mycoplazmy. Do jamiek mikrotitrových doštičiek sa pridajú bunky (2 x 104) (Costar, MA) v 100 μΐ média. Do jamiek sa pridajú rôzne koncentrácie IFN a konjugátu všeobecného vzorca (I) pripraveného podľa príkladu 1A v objeme 100 μΐ. Doštičky sa inkubujú 72 hodín pri teplote 37 °C v 5 % oxide uhličitom. Pred zberom buniek sa bunky 16 hodín pulzujú s 0,25 pCi/jamka 3H-tymidínu (New England Nuclear, Boston, MA). Bunky sa zoberú na sklenených filtroch a sčítajú sa v kvapalinovom scintilačnom počítači. Výsledky sa vyjadria ako percento inhibície vypočítané zo vzorca:
% inhibície = [(A-B)/A] x 100, kde
A = cpm v kontrolnej kultúre (bunky inkubované v samotnom médiu)
B = cpm v experimentálnej kultúre
Priebeh vzoriek je štvornásobný a stredná smerodajná odchýlka je vo všetkých prípadoch menej ako 20 % priemeru. Pokusy prebiehajú najmenej dvakrát s porovnateľnými výsledkami.
Antiproliferatívne pôsobenie (IC50) a IFN konjugátu je uvedené v tabuľke II. Údaje ukazujú, že antiproliferatívne pôsobenie konjugátu všeobecného vzorca (I) má 28-násobné zvýšenie v porovnaní s IFN.
Tabuľka II
In vitro antiproliferatívne pôsobenie v ľudských bunkových radoch Daudi (Burkittova Lymphoma)
Vzorka Antiproliferatívne pôsobenie zvýšenie aktivity
IC50 (ng/ml)
IPNa2a 0,56 lx
Konjugát všeob. vz. I 0,02 20X
Príklad 4
Farmakokinetika
Samice potkanov Sprague Dawley, chirurgicky vybavené hrdelnou kanylou s priemernou hmotnosťou 240 až 260 g sa správajú voľne jednotlivo v klietkach s neobmedzeným prístupom k vode a potrave pri 12-hodinovom cykle svetla a tmy. V priebehu 4 až 6 hodín po nástupe sa hrdelné kanyly vypláchnu PBS. Nasledujúci deň po vypláchnutí 0,15 až 0,2 ml PBS, sa injektuje 2 x 106 jednotiek IFNa v 0,2 až 0,4 ml PBS, s následnou injekciou 0,15 až 0,2 ml PBS na zaistenie, že sa všetka droga dostala do zvieraťa. Týmto spôsobom dostalo každé zviera dávku 8 x x 106 jednotiek IFNa na kg telesnej hmotnosti.
Vzorky krvi sa odoberú po 5, 15 a 30 minútach a 1, 3, 5, 12 a 24 hodinách po injekcii IFN a konjugátu všeobecného vzorca (I). V každom časovom okamihu, po odobraní prvých 0,15 až 0,2 ml krvi sa odoberie kanylou 0,5 ml krvi pomocou čerstvej injekčnej striekačky. Vzorky sa vyprázdnia do sérum separujúcich skúmaviek pri teplote miestnosti. Len čo sa zhromaždia všetky vzorky zo všetkých časových okamihov, skúmavky sa odstred’ujú 10 minút pri 14 000 x g v chladenej odstredivke Eppendorf. Separované sérum sa premiestni do 1,5 ml mikroskúmaviek a zmrazí sa na -80 °C, než sa pripraví na biotest. Vzorky séra sa príslušne zriedia a opísaným spôsobom sa stanoví protivírusové pôsobení v každom časovom okamihu. Z vynesenej závislosti aktivity od času sa stanoví konečný polčas konjugátu všeobecného vzorca (I) a IFNa a výsledky sú zostavené do tabuľky (III), ktorá obsahuje tiež rezidenčné časy v plazme.
Tabuľka III
Konečné polčasy (t1/2) a stredný rezidenčný čas v plazme
Vzorka tl/2 Rezidenčný čas v plazme (hodín)
IFNa2a 2,1 1,0
Konjugát všeob. vz. I 15,0 20,0
Konečný tjy2 sa urči log lineárnou regresiou.
Príklad 5
Imunogenicita
Normálnym myšiam BDF-1 (desiatim na skupinu) sa injektujú intraperitoneálne raz denne päťkrát týždne rôzne interferónové prostriedky majúce 300 000 jednotiek protivírusovej aktivity. Niektorým myšiam sa injektuje agregovaná forma IFNa2a, ktorá je viacej imunogenická ako monoméma forma. Krvné vzorky sa odoberú 19 dní po poslednej injekcii a sérum sa vyhodnotí na neutralizujúce protilátky.
Ako vyplýva z tabuľky IV, produkovali myši s injekciou IFNa2a neutralizujúce protilátky a táto reakcia je silne zvýraznená u myší s injekciou interferónových agregátov. U väčšiny zvierat s injekciou konjugátu podľa vynálezu nie sú zistiteľné žiadne protilátky.
Tabuľka IV
Imunogenicita
Ošetrenie Protilátky (INU/ral)*
priemer rozsah
IFNa2a 2400 217 až 8533
Agregáty IFNa2a 42667 8000 až 768000
Konjugát všeobec. vz. I 0 o až 1133
* Počet jednotiek neutralizujúcich interferón na ml
Príklad 6
Protinádorovc pôsobenie in vivo
Protinádorové pôsobenie konjugátu všeobecného vzorca (I) (PEG2-IFNa2a) a nemodifíkovaného IFNa2a in vivo sa vyhodnocuje stanovením ich schopnosti zmenšovať rozmery rôznych ľudských nádorových buniek implantovaných do myší. Výsledky sú patmé z obr. 1 až 6.
Postup: Atymickým myšiam (Harlan) sa do ľavého zadného boku implantuje 2 x 106 ľudských obličkových buniek A498 (obr. 1 a 2), ľudských obličkových buniek ACHN (obr. 3 a 4) alebo ľudských obličkových buniek G402 (obr. 5 a 6). Na vyvinutie nádorov, ako je to vyznačené, sa myši ponechajú 3 až 6 týždňov. Kritérium na prevzatie do štúdie je veľkosť 0,05 až 0,50 cm3. Myši dostanú celkové týždenné dávky PEG2-IFNa2a alebo nemodifikovaného JFNa2a v rozsahu 30, 60, 120 alebo 300 ug. V prí páde PEG2-IFNa2a sa myši ošetrovali raz týždenne (v pondelok) 30, 60, 120 alebo 300 pg PEG2-IFNa2a na jedno ošetrenie. V prípade nemodifikovaného IFNa2a sa myši ošetrovali trikrát týždne (v pondelok, v stredu a v piatok) 10, 20, 40 alebo 100 pg PEG2-IFNa2a na jedno ošetrenie. Ošetrovanie trvalo 4 až 5 týždňov v závislosti od agresivity nádoru. Každý pondelok sa pred ošetrením merali objemy nádorov.
Výsledky: PEG2-IFNa2a má výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru A498 v porovnaní s nemodifikovaným IFNa2a pri všetkých týždenných testovaných dávkach po 7, 14, 21 a 28 dňoch od začatia testu (obr. 1 a 2). Test trval štyri týždne. 7 dní po ošetrení sa test prerušil a 3 myši z každej skupiny boli usmrtené. U troch myší, ošetrených PEG2-IFNa2a, nebol pozorovaný zvyšný nádor. U myší, ošetrených nemodifikovaným IFNaža, vážili nádory A498 1,28 g, 0,62 g a 1,60 g u každé z troch myší. Hmotnosť nádorov A498 troch kontrolných myší bola 2,32 g, 2,37 a 1,94 g. Po 80 dňoch na konci štvortýždennej periódy ošetrovania sa existencia nádorov zisťovala palpáciou u siedmich myší. Všetkých sedem myší bolo bez nádorového tkaniva.
PEG2-IFNa2a má výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru ACHN v porovnaní s nemodifikovaným IFN«2a pri všetkých týždenných testovaných dávkach 60, 120 a 300 pg po 14, 21 a 28 a 35 dňoch od začatia testu (obr. 3 a 4)·
PEG2-IFNa2a má výrazné zmenšovanie veľkosti nádoru G402 v porovnaní s nemodifikovaným IFNa2a pri týždenných testovaných dávkach 60 a 120 pg po 14, 21 a 28 a 35 dňoch od začatia testu (obr. 5 a 6).
Priemyselná využiteľnosť
Fyziologicky aktívny konjugát PEG-IFNa2a má výhodnú kombináciu vlastnosti, z ktorých vyniká potlačovanie rastu ľudských nádorových buniek in vivo a hodí sa preto na výrobu farmaceutických prostriedkov.
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (2)

1. Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu a všeobecného vzorca (I)
O
FlOCH2CHs(OCH2CH2)n—O—C —NH
L
R'OCH2CH2(OCH2CH2)n'—O—C——*
O O (D
3. Konjugát podľa nároku 2 všeobecného vzorca (I) s molekulovou hmotnosťou polyetylénglykolových jednotiek 40 000 Daltonov.
4. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde znamená R a R' metylovú skupinu.
5. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde X znamená NH-skupinu.
6. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), pričom interferón a je interferón a2a.
7. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde stredný súčet čísiel n a n' je 850 až 1000.
8. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde znamená R a R' metylovú skupinu, X NH-skupinu, interferón a je interferón a2a a jedno alebo obidve čísla n a n' sú 420.
9. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), kde znamená R a R' metylovú skupinu, X NH-skupinu, interferón a je interferón a2a a jedno alebo obidve čísla n a n' sú 520.
10. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I) majú väčší antiproliferatívny účinok a menšie antivírusové pôsobenie ako interferón a.
11. Spôsob prípravy fyziologicky aktívneho pegylovaného konjugátu interferónu a podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I), majúceho väčší antiproliferatívny účinok a menšie antivírusové pôsobenie ako interferón a, vyznačujúci sa tým, že sa kovalentne viaže reakčné činidlo všeobecného vzorca (II) fiOCHiCHjJOCHjCHaJn-O-^-íí
ROCH^fOC^CHJr^o-c-N^ero-Nl
CD kde R, R', n a n' majú význam uvedený v nároku 1, na interferón a.
12. Farmaceutický prostriedok vyznačuj úci sa t ý m , že obsahuje fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu a podľa nároku 1 až 10 všeobecného vzorca (I) a terapeuticky inertný nosič.
13. Farmaceutický prostriedok na liečenie alebo profylaxiu imunomodulačných ochorení, ako sú neoplastické choroby alebo infekčné choroby, vyznačuj úci sa t ý m , že obsahuje fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu a podľa nároku 1 až 10 všeobecného vzorca (I) a terapeuticky inertný nosič.
14. Použitie pegylovaného konjugátu interferónu a podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10 na výrobu liečiva na liečenie alebo profylaxiu imunomodulačných ochorení.
15. Pegylovaný konjugát interferónu a podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10 na použitie ako liečivo.
16. Pegylovaný konjugát interferónu a podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 10 na použitie na liečenie alebo profylaxiu imunomodulačných ochorení.
kde znamená R a R' od seba nezávisle CrC,, alkylovú skupinu, X skupinu NH alebo atóm kyslíka, n a n' sú čísla, ktorých súčet je 600 až 1500 a priemerná molekulová hmotnosť jednotiek polyetylénglykolu v konjugáte je 26 000 až 66 000 Daltonov.
2. Konjugát podľa nároku 1 všeobecného vzorca (I) s molekulovou hmotnosťou polyetylénglykolových jednotiek 35 000 až 45 000 Daltonov.
SK673-97A 1996-05-31 1997-05-28 Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok SK284458B6 (sk)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK67397A3 SK67397A3 (en) 1997-12-10
SK284458B6 true SK284458B6 (sk) 2005-04-01

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK673-97A SK284458B6 (sk) 1996-05-31 1997-05-28 Fyziologicky aktívny pegylovaný konjugát interferónu alfa, jeho použitie, spôsob jeho prípravy a farmaceutický prostriedok

Country Status (48)

Country Link
US (1) US7201897B2 (sk)
EP (1) EP0809996B1 (sk)
JP (1) JP2980569B2 (sk)
KR (1) KR100254097B1 (sk)
CN (1) CN1088721C (sk)
AR (1) AR008378A1 (sk)
AT (1) ATE235920T1 (sk)
AU (1) AU725195B2 (sk)
BG (1) BG62273B1 (sk)
BR (1) BR9703421A (sk)
CA (1) CA2203480C (sk)
CO (1) CO4950528A1 (sk)
CY (2) CY2433B1 (sk)
CZ (1) CZ292775B6 (sk)
DE (3) DE69720320T2 (sk)
DK (1) DK0809996T3 (sk)
EG (1) EG24292A (sk)
ES (1) ES2110386T3 (sk)
GR (1) GR970300063T1 (sk)
HK (1) HK1005225A1 (sk)
HR (1) HRP970298B1 (sk)
HU (1) HU227992B1 (sk)
IL (1) IL120902A (sk)
IS (1) IS1988B (sk)
LU (1) LU91029I2 (sk)
MA (1) MA24193A1 (sk)
MY (1) MY117909A (sk)
NL (1) NL300127I2 (sk)
NO (1) NO322964B1 (sk)
NZ (1) NZ314903A (sk)
OA (1) OA10488A (sk)
PA (1) PA8431001A1 (sk)
PL (1) PL186949B1 (sk)
PT (1) PT809996E (sk)
RS (1) RS49533B (sk)
RU (1) RU2180595C2 (sk)
SA (1) SA97180030B1 (sk)
SG (1) SG55314A1 (sk)
SI (1) SI0809996T1 (sk)
SK (1) SK284458B6 (sk)
SV (1) SV1997000049A (sk)
TJ (1) TJ328B (sk)
TN (1) TNSN97091A1 (sk)
TR (1) TR199700358A3 (sk)
TW (1) TW517067B (sk)
UA (1) UA56989C2 (sk)
UY (1) UY24572A1 (sk)
ZA (1) ZA974583B (sk)

Families Citing this family (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
JP2000507917A (ja) 1995-11-02 2000-06-27 シェーリング コーポレイション 持続的低用量サイトカイン注入治療
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
HU228877B1 (en) * 1998-03-26 2013-06-28 Merck Sharp & Dohme Formulations for stabilization of peg-interferon alpha conjugates and method for preparation such formulations
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
DK1421956T3 (da) * 1998-04-28 2007-10-01 Applied Research Systems Polyol-IFN-beta-konjugater
TWI277424B (en) 1998-05-15 2007-04-01 Schering Corp Combination therapy for eradicating detectable NCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
AU767131B2 (en) * 1998-06-08 2003-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of PEG-IFN-alpha and ribavirin for the treatment of chronic hepatitis C
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
PE20010027A1 (es) 1999-04-08 2001-02-05 Schering Corp Uso de interferon alfa pegilado en pacientes con melanoma
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
BR0009642A (pt) * 1999-04-08 2002-01-08 Schering Corp Terapia de leucemia mielocìtica crÈnica
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
ATE435033T1 (de) 2000-01-10 2009-07-15 Maxygen Holdings Ltd G-csf konjugate
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
EP1251866A1 (en) * 2000-01-24 2002-10-30 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
RU2278123C2 (ru) 2000-02-11 2006-06-20 Максиджен Холдингз Лтд. Молекулы, подобные фактору vii или viia
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6924270B2 (en) 2000-04-20 2005-08-02 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic hepatitis C infection
WO2002002627A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Zymogenetics, Inc. Interferon-like protein zcyto21
WO2002060978A1 (fr) 2001-01-30 2002-08-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Polyalkylene glycols ramifies
BR0207576A (pt) 2001-02-27 2004-04-27 Maxygen Aps Variante glicosilada de um polipeptìdeo de interferon beta precursor (ifnb), processos de aumentar a glicosilação in vivo de uma molécula de ifnb precursora, de produzir uma molécula de ifnb glicosilada, para preparar uma variante conjugada e de tratar um mamìfero com esclerose múltiplam composição farmacêutica, molécula de ifnb variante, sequência de nucleotìdeo, vetor de expressão, célula hospedeira de glicosilação conjugado, e, uso de um conjugado
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2003062290A1 (en) 2002-01-16 2003-07-31 Biocompatibles Uk Limited Polymer conjugates
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
UA86744C2 (en) 2002-06-21 2009-05-25 Ново Нордиск Хэлс Кеа Аг Pegylated factor vii glycoforms
AU2003258518B2 (en) 2002-07-24 2007-01-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
IL166506A0 (en) * 2002-09-11 2006-01-15 Fresenius Kabi De Gmbh Hasylated polypeptides especially hasylated erythropoietin
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
EP1400533A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
ES2314238T3 (es) 2002-10-08 2009-03-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugados de oligosacaridos farmaceuticamente activos.
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
BR0316324A (pt) * 2002-11-18 2005-09-27 Maxygen Inc Polipeptìdeos e conjugados de interferon-alfa
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
DE602004029173D1 (de) 2003-10-10 2010-10-28 Novo Nordisk As Il-21-derivate
EP2641611A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
JP2007519422A (ja) 2004-02-02 2007-07-19 アンブレツクス・インコーポレイテツド 修飾されたヒト四螺旋バンドルポリペプチド及びそれらの使用
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
CN101659704A (zh) 2004-03-11 2010-03-03 弗雷泽纽斯卡比德国有限公司 通过还原氨基化制备的羟烷基淀粉和蛋白质的偶联物
MXPA06013412A (es) 2004-05-19 2007-01-23 Maxygen Inc Polipeptidos de interferon-alfa y conjugados.
MXPA06014684A (es) 2004-06-18 2007-02-12 Ambrx Inc Novedosos polipeptidos de enlace antigeno y sus usos.
US20060029573A1 (en) * 2004-06-30 2006-02-09 Chun Shen Pegylated interferon alpha-1b
JP4971160B2 (ja) 2004-08-12 2012-07-11 シェーリング コーポレイション 安定するｐｅｇ化インターフェロン処方物
BRPI0519430A2 (pt) 2004-12-22 2009-02-10 Ambrx Inc hormânio do crescimento humano modificado
EP1861125A2 (en) * 2005-03-23 2007-12-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an hgh moiety and peg derivatives
AU2006299901A1 (en) 2005-05-18 2007-04-19 Maxygen, Inc. Evolved interferon-alpha polypeptides
EP2360170A3 (en) 2005-06-17 2012-03-28 Novo Nordisk Health Care AG Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprinsing at least one non-native cysteine
WO2007002233A2 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon- alpha analogs and interferon tau
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
EP2339014B1 (en) 2005-11-16 2015-05-27 Ambrx, Inc. Methods and compositions comprising non-natural amino acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种***的药物及其应用
AU2007250739A1 (en) 2006-05-16 2007-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection
US20090252720A1 (en) 2006-05-24 2009-10-08 Novo Nordisk Health Care Ag Prolonged FIX Analogues and Derivatives
NZ574721A (en) 2006-09-08 2012-02-24 Ambrx Inc Hybrid suppressor trna for vertebrate cells
EP2069396B1 (en) 2006-09-08 2015-10-21 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their uses
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
ATE459659T1 (de) * 2006-11-07 2010-03-15 Dsm Ip Assets Bv Carbamat, thiocarbamat oder carbamid mit einer biomolekularen gruppierung
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
BRPI0809583B1 (pt) 2007-03-30 2022-02-22 Ambrx, Inc Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
PL2186830T3 (pl) 2007-09-04 2012-09-28 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferon alfa 2b zmodyfikowany glikolem polietylenowym, jego wytwarzanie i zastosowanie
EP2196475B1 (en) 2007-09-04 2012-06-06 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. INTERFERON ALPHA 2a MODIFIED BY POLYETHYLENE GLYCOL, ITS SYNTHESIS PROCESS AND APPLICATION
NZ603812A (en) 2007-11-20 2014-06-27 Ambrx Inc Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
CN107033233A (zh) * 2008-01-18 2017-08-11 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 非糖基化蛋白质的纯化
US8906847B2 (en) * 2008-02-01 2014-12-09 Ascendis Pharma A/S Prodrug comprising a drug linker conjugate
SG188143A1 (en) 2008-02-08 2013-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
WO2009121210A1 (zh) 2008-04-03 2009-10-08 厦门伯赛基因转录技术有限公司 双链聚乙二醇修饰的生长激素及其制备方法和应用
JP6112766B2 (ja) * 2008-04-29 2017-04-12 アセンディス ファーマ グロウス ディスオーダーズ ディヴィジョン エー／エス Ｐｅｇ化された組換えヒト成長ホルモン化合物
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
EA020766B1 (ru) 2008-07-08 2015-01-30 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Ингибиторы пролиферации и активации переносчика сигнала и активатора транскрипции (stats)
NZ591235A (en) 2008-07-23 2012-07-27 Ambrx Inc Modified bovine g-csf polypeptides comprising non natural amino acid and their uses treating infections such as mastitis
PL2342223T3 (pl) 2008-09-26 2017-09-29 Ambrx, Inc. Zmodyfikowane polipeptydy zwierzęcej erytropoetyny i ich zastosowania
TR201802361T4 (tr) 2008-09-26 2018-03-21 Ambrx Inc Doğal olmayan amino asit replikasyonuna bağımlı mikroorganizmalar ve aşılar.
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
WO2011014882A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. CONTINUOUS SUBCUTANEOUS ADMINISTRATION OF INTERFERON-α TO HEPATITIS C INFECTED PATIENTS
EA201200650A1 (ru) 2009-10-30 2012-12-28 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин
CN104017063A (zh) 2009-12-21 2014-09-03 Ambrx公司 经过修饰的猪促生长素多肽和其用途
NZ600361A (en) 2009-12-21 2014-06-27 Ambrx Inc Modified bovine somatotropin polypeptides and their uses
JP6148013B2 (ja) 2010-03-05 2017-06-14 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
EP2569331A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptide inhibitors of vla4
EP2585065A1 (en) 2010-06-24 2013-05-01 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
MY162837A (en) 2010-08-17 2017-07-31 Ambrx Inc Modified relaxin polypeptides and their uses
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
CN103930440A (zh) 2011-07-01 2014-07-16 拜耳知识产权有限责任公司 松弛素融合多肽及其用途
EA201490399A1 (ru) 2011-08-03 2014-06-30 Ситерис Иммунотерапия hcv (вируса гепатита c)
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
EP3584255B1 (en) 2012-08-31 2022-02-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
UY36370A (es) 2014-10-24 2016-04-29 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Polipéptidos fgf-21 modificados y sus usos
HRP20231732T1 (hr) 2014-11-06 2024-03-15 Pharmaessentia Corporation Režim doziranja pegiliranog interferona
HRP20211734T8 (hr) 2014-11-21 2022-03-04 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Dozni oblici dugodjelujućeg hormona rasta
BR112018009009A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Hoffmann La Roche terapia combinada de um inibidor de formação de capsídeo hbv e um interferon
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
ES2963839T3 (es) 2017-02-08 2024-04-02 Bristol Myers Squibb Co Polipéptidos de relaxina modificados que comprenden un potenciador farmacocinético y usos de los mismos
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
HRP20240016T1 (hr) 2018-09-11 2024-03-29 Ambrx, Inc. Konjugati polipeptida interleukina-2 i njihove uporabe
CN113366015A (zh) 2018-10-19 2021-09-07 Ambrx公司 白细胞介素-10多肽缀合物、其二聚体及其用途
BR112021015832A2 (pt) 2019-02-12 2022-01-18 Ambrx Inc Composições que contêm conjugados de anticorpo-agonista de tlr, métodos e usos dos mesmos
WO2021183832A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
AU2021327396A1 (en) 2020-08-20 2023-03-23 Ambrx, Inc. Antibody-TLR agonist conjugates, methods and uses thereof
AU2022249223A1 (en) 2021-04-03 2023-10-12 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4609546A (en) 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
WO1984004745A1 (en) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Novel polypeptides and their use
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JP2524586B2 (ja) 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ATE136315T1 (de) * 1989-05-27 1996-04-15 Sumitomo Pharma Verfahren für die herstellung von polyethylenglykolderivate und modifizierte proteine.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
DK0730470T3 (da) * 1993-11-10 2002-06-03 Enzon Inc Forbedrede interferonpolymerkonjugater
AU1916295A (en) * 1994-02-08 1995-08-29 Amgen, Inc. Oral delivery of chemically modified proteins
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
KR970074791A (ko) 1997-12-10
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
YU17597A (sh) 1999-07-28
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
NO972480D0 (no) 1997-05-30
IS1988B (is) 2005-02-15
BR9703421A (pt) 1998-09-15
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
EG24292A (en) 2009-01-08
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
US7201897B2 (en) 2007-04-10
DE809996T1 (de) 1998-04-09
TW517067B (en) 2003-01-11
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
CA2203480C (en) 2009-06-30
NZ314903A (en) 1998-10-28
NL300127I1 (sk) 2003-07-01
IS4491A (is) 1997-12-01
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
CY2433B1 (en) 2004-11-12
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
SG55314A1 (en) 1998-12-21
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
TJ328B (en) 2001-12-24
SV1997000049A (es) 1998-07-09
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
AU725195B2 (en) 2000-10-05
OA10488A (fr) 2002-04-11
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
UY24572A1 (es) 2000-12-29
AU2372397A (en) 1997-12-04
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
CN1088721C (zh) 2002-08-07
MY117909A (en) 2004-08-30
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
IL120902A0 (en) 1997-09-30
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
BG101540A (en) 1998-02-27
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
TJ97000465A (en) 1998-12-25
NO972480L (no) 1997-12-01
AR008378A1 (es) 2000-01-19
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
IL120902A (en) 2004-06-20
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
HU227992B1 (en) 2012-08-28
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
NO322964B1 (no) 2006-12-18
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
ZA974583B (en) 1998-11-17
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
PT809996E (pt) 2003-06-30
CN1167777A (zh) 1997-12-17
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
RS49533B (sr) 2006-12-15
SK67397A3 (en) 1997-12-10
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
MX9704012A (es) 1997-11-29
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
PL320251A1 (en) 1997-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP0809996B1 (en) Interferon conjugates
TWI232882B (en) Poly-IFN-beta conjugates
JP3747070B2 (ja) 改良型インターフェロン−ポリマーコンジュゲート
KR100689212B1 (ko) Ｇｃｓｆ 결합체
US20060029573A1 (en) Pegylated interferon alpha-1b
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
US8454947B1 (en) PEG-interferon lambda 1 conjugates
RU2447083C1 (ru) НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
RU2488598C2 (ru) Гормон роста, модифицированный двухцепочечным полиэтиленгликолем, способ его получения и применение
JP2009536963A (ja) ポリエチレングリコール−インターフェロンα結合体
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
KR100888371B1 (ko) 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
EP1369429A1 (en) GCSF conjugates

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20170528