CN104593348A - 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 - Google Patents
具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104593348A CN104593348A CN201510017264.2A CN201510017264A CN104593348A CN 104593348 A CN104593348 A CN 104593348A CN 201510017264 A CN201510017264 A CN 201510017264A CN 104593348 A CN104593348 A CN 104593348A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fix
- analogue
- chemical group
- polypeptide
- molecular weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 title description 10
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 title 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 title 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 claims abstract description 69
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 claims abstract description 48
- 230000004087 circulation Effects 0.000 claims abstract description 16
- IZSRJDGCGRAUAR-WISUUJSJSA-N keto-D-fructuronic acid Chemical class OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C(O)=O IZSRJDGCGRAUAR-WISUUJSJSA-N 0.000 claims description 165
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 80
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 80
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 80
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 51
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 claims description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 35
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 34
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 claims description 31
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 29
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 25
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 22
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 21
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000006176 redox buffer Substances 0.000 claims description 18
- 238000013459 approach Methods 0.000 claims description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 7
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 6
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 claims description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 4
- 230000035602 clotting Effects 0.000 claims description 4
- 239000001654 beetroot red Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 21
- 238000002347 injection Methods 0.000 abstract description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 abstract description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 52
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 41
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 40
- XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N Phosphine Chemical compound P XYFCBTPGUUZFHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 30
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 30
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 27
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 27
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 26
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 25
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 20
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 17
- 229910000073 phosphorus hydride Inorganic materials 0.000 description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 15
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 15
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 12
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 12
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 12
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 11
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 description 11
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 10
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 10
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 10
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 10
- 102000017278 Glutaredoxin Human genes 0.000 description 9
- 108050005205 Glutaredoxin Proteins 0.000 description 9
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 9
- XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N N-acetyl-L-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(C)=O XUYPXLNMDZIRQH-LURJTMIESA-N 0.000 description 8
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 8
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 7
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 7
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 7
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical compound SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 7
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 7
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 7
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 7
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical group OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 6
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 6
- 229940009662 edetate Drugs 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 6
- 229960002885 histidine Drugs 0.000 description 6
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 6
- 239000003352 sequestering agent Substances 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 6
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical class 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 5
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 5
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 5
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 4
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108050005433 Glutaredoxin-2 Proteins 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 4
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 4
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 4
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 4
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 4
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 4
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 4
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 4
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100037642 Elongation factor G, mitochondrial Human genes 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 3
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 3
- 101000880344 Homo sapiens Elongation factor G, mitochondrial Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- QEFRNWWLZKMPFJ-YGVKFDHGSA-N L-methionine S-oxide Chemical compound CS(=O)CC[C@H](N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-YGVKFDHGSA-N 0.000 description 3
- 102000006010 Protein Disulfide-Isomerase Human genes 0.000 description 3
- 108020005067 RNA Splice Sites Proteins 0.000 description 3
- 101100226845 Strongylocentrotus purpuratus EGF2 gene Proteins 0.000 description 3
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 3
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 3
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 3
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 3
- 108020003519 protein disulfide isomerase Proteins 0.000 description 3
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010066925 sleep-promoting factor B Proteins 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzenesulfonic acid Chemical compound NC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 HVBSAKJJOYLTQU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 2
- 108091029865 Exogenous DNA Proteins 0.000 description 2
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 2
- 101710171252 Glutaredoxin-1 Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 2
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 description 2
- PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N L-N-acetyl-Cysteine Chemical compound CC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PWKSKIMOESPYIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 241001415846 Procellariidae Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006035 Tryptophane Substances 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical compound NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N divinyl sulfone Chemical compound C=CS(=O)(=O)C=C AFOSIXZFDONLBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 108010068906 gamma-glutamylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 2
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N inositol Chemical compound OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 2
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 description 2
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N o-cresol Chemical compound CC1=CC=CC=C1O QWVGKYWNOKOFNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000620 organic polymer Polymers 0.000 description 2
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 2
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 2
- APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M sodium docusate Chemical compound [Na+].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC APSBXTVYXVQYAB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960004799 tryptophan Drugs 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 2
- RITKHVBHSGLULN-CRCLSJGQSA-N γ-glutamylcysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](CS)C(O)=O RITKHVBHSGLULN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N (2E,4E)-2,4-hexadien-1-ol Chemical compound C\C=C\C=C\CO MEIRRNXMZYDVDW-MQQKCMAXSA-N 0.000 description 1
- QWWVBNODQCWBAZ-WHFBIAKZSA-N (2r)-2-amino-3-[(2r)-2-carboxy-2-(methylamino)ethyl]sulfanylpropanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CSC[C@H](N)C(O)=O QWWVBNODQCWBAZ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- BUVCJVSDXCCEOY-LURJTMIESA-N (2s)-5-(diaminomethylideneamino)-2-(ethylamino)pentanoic acid Chemical compound CCN[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N BUVCJVSDXCCEOY-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- 229940058015 1,3-butylene glycol Drugs 0.000 description 1
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 1-chlorobutan-2-ol Chemical compound CCC(O)CCl VNBFUGOVQMFIRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 2,2,2-trifluoroethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CC(F)(F)F XGMDYIYCKWMWLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- YKMDNKRCCODWMG-UHFFFAOYSA-N 2,5-dinitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]([O-])=O YKMDNKRCCODWMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OIQOAYVCKAHSEJ-UHFFFAOYSA-N 2-[2,3-bis(2-hydroxyethoxy)propoxy]ethanol;hexadecanoic acid;octadecanoic acid Chemical compound OCCOCC(OCCO)COCCO.CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O OIQOAYVCKAHSEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethoxy]ethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO IEQAICDLOKRSRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 2-[hydroxymethyl(methyl)amino]acetic acid Chemical compound OCN(C)CC(O)=O GBHSCKFAHCEEAZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-methylpropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)(C)CO UXFQFBNBSPQBJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 2-methylthioethanol Chemical compound CSCCO WBBPRCNXBQTYLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 2-nitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O SLAMLWHELXOEJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034042 Alcohol dehydrogenase 1C Human genes 0.000 description 1
- KHOITXIGCFIULA-UHFFFAOYSA-N Alophen Chemical compound C1=CC(OC(=O)C)=CC=C1C(C=1N=CC=CC=1)C1=CC=C(OC(C)=O)C=C1 KHOITXIGCFIULA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 229920000945 Amylopectin Polymers 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000212384 Bifora Species 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N Bronopol Chemical compound OCC(Br)(CO)[N+]([O-])=O LVDKZNITIUWNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFEJOCABYMQXPD-RGMNGODLSA-N C(CC)N[C@@H](CCO)C(=O)O.NC(=N)N Chemical compound C(CC)N[C@@H](CCO)C(=O)O.NC(=N)N OFEJOCABYMQXPD-RGMNGODLSA-N 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036086 Chromosome Duplication Diseases 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- 101000796894 Coturnix japonica Alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 206010011469 Crying Diseases 0.000 description 1
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 101500011075 Diploptera punctata Allatostatin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101500011077 Diploptera punctata Allatostatin-9 Proteins 0.000 description 1
- 230000010777 Disulfide Reduction Effects 0.000 description 1
- SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N Dodecane Natural products CCCCCCCCCCCC SNRUBQQJIBEYMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101900351457 Escherichia coli Glutaredoxin 2 Proteins 0.000 description 1
- KGWDUNBJIMUFAP-KVVVOXFISA-N Ethanolamine Oleate Chemical compound NCCO.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O KGWDUNBJIMUFAP-KVVVOXFISA-N 0.000 description 1
- 108010048049 Factor IXa Proteins 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-UHFFFAOYSA-N Fusicsaeure Natural products C12C(O)CC3C(=C(CCC=C(C)C)C(O)=O)C(OC(C)=O)CC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1C IECPWNUMDGFDKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101710171268 Glutaredoxin-3 Proteins 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 229920003114 HPC-L Polymers 0.000 description 1
- 229920003115 HPC-SL Polymers 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000780463 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1C Proteins 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000801742 Homo sapiens Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 1
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101150108210 IX gene Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 101150042441 K gene Proteins 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N L-ethionine Chemical compound CCSCC[C@H](N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000511739 Melampyrum Species 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 101100300839 Mus musculus Rai14 gene Proteins 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002201 Oxidized cellulose Polymers 0.000 description 1
- 101710157860 Oxydoreductase Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000833020 Padilla Species 0.000 description 1
- 108010047620 Phytohemagglutinins Proteins 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002562 Polyethylene Glycol 3350 Polymers 0.000 description 1
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N Propylene oxide Chemical compound CC1CO1 GOOHAUXETOMSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016227 Protein disulphide isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108050004742 Protein disulphide isomerases Proteins 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N S-methylcysteine Chemical compound CSC[C@H](N)C(O)=O IDIDJDIHTAOVLG-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 101000924393 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Vacuolar aminopeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000040739 Secretory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091058545 Secretory proteins Proteins 0.000 description 1
- 108050000761 Serpin Proteins 0.000 description 1
- 102000008847 Serpin Human genes 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical group [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004288 Sodium dehydroacetate Substances 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020005038 Terminator Codon Proteins 0.000 description 1
- 108700007696 Tetrahydrofolate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N Tetrakis(2-hydroxypropyl)ethylenediamine Chemical compound CC(O)CN(CC(C)O)CCN(CC(C)O)CC(C)O NSOXQYCFHDMMGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 102100033598 Triosephosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N [1-[2,3-dihydroxypropoxy(hydroxy)phosphoryl]oxy-3-hexadecanoyloxypropan-2-yl] (9e,12e)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCC(O)CO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\C\C=C\CCCCC ATBOMIWRCZXYSZ-XZBBILGWSA-N 0.000 description 1
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 150000001243 acetic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001320 aldopentoses Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005907 alkyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N alpha-glycerophosphate Natural products OCC(O)COP(O)(O)=O AWUCVROLDVIAJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003453 ammonium sulfate precipitation method Methods 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 125000005428 anthryl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C3C(*)=C([H])C([H])=C([H])C3=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- 229960004217 benzyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003168 bronopol Drugs 0.000 description 1
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- DWKPZOZZBLWFJX-UHFFFAOYSA-L calcium;1,4-bis(2-ethylhexoxy)-1,4-dioxobutane-2-sulfonate Chemical compound [Ca+2].CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC.CCCCC(CC)COC(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C(=O)OCC(CC)CCCC DWKPZOZZBLWFJX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 150000001733 carboxylic acid esters Chemical class 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- 229960002242 chlorocresol Drugs 0.000 description 1
- 238000011098 chromatofocusing Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005336 cracking Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- VLYUGYAKYZETRF-UHFFFAOYSA-N dihydrolipoamide Chemical compound NC(=O)CCCCC(S)CCS VLYUGYAKYZETRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRKQOINLCJTGBK-UHFFFAOYSA-N dihydroxidosulfur Chemical group OSO HRKQOINLCJTGBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- PZQQAVOXDFHIKI-UHFFFAOYSA-N dimethylazanium;propane-1-sulfonate Chemical compound C[NH2+]C.CCCS([O-])(=O)=O PZQQAVOXDFHIKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960000878 docusate sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004403 ethyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043351 ethyl-p-hydroxybenzoate Drugs 0.000 description 1
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002187 fatty acyl carnitines Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 125000003983 fluorenyl group Chemical group C1(=CC=CC=2C3=CC=CC=C3CC12)* 0.000 description 1
- 235000010855 food raising agent Nutrition 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N framycetin Chemical compound N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O2)N)O[C@@H]1CO PGBHMTALBVVCIT-VCIWKGPPSA-N 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 229940048400 fucidin Drugs 0.000 description 1
- 239000001530 fumaric acid Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 125000003976 glyceryl group Chemical group [H]C([*])([H])C(O[H])([H])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 1
- 210000003547 hepatic macrophage Anatomy 0.000 description 1
- ICJBPZBRDLONIF-UHFFFAOYSA-N hexane-1,1,1,2,2,3-hexol Chemical compound CCCC(O)C(O)(O)C(O)(O)O ICJBPZBRDLONIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960002661 human antihemophilic factor Drugs 0.000 description 1
- 229960000027 human factor ix Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N hygromycin A Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](C(=O)C)O[C@@H]1Oc1ccc(\C=C(/C)C(=O)N[C@@H]2[C@@H]([C@H]3OCO[C@H]3[C@@H](O)[C@@H]2O)O)cc1O YQYJSBFKSSDGFO-FWAVGLHBSA-N 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 125000000400 lauroyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N lauryl glucoside Chemical compound CCCCCCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O PYIDGJJWBIBVIA-UYTYNIKBSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N lipoamide Chemical compound NC(=O)CCCCC1CCSS1 FCCDDURTIIUXBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006011 modification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 125000001280 n-hexyl group Chemical group C(CCCCC)* 0.000 description 1
- 125000000740 n-pentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000004123 n-propyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 238000012803 optimization experiment Methods 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 229940107304 oxidized cellulose Drugs 0.000 description 1
- 125000006353 oxyethylene group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 1
- JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N pentaethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCOCCO JLFNLZLINWHATN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 229940067626 phosphatidylinositols Drugs 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- NFIYTPYOYDDLGO-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;sodium Chemical compound [Na].OP(O)(O)=O NFIYTPYOYDDLGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000001885 phytohemagglutinin Effects 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940093916 potassium phosphate Drugs 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N propylene glycol Substances CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000006318 protein oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 125000001725 pyrenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 125000002914 sec-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M sodium cholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 NRHMKIHPTBHXPF-TUJRSCDTSA-M 0.000 description 1
- 235000019259 sodium dehydroacetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079839 sodium dehydroacetate Drugs 0.000 description 1
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 1
- OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M sodium glycocholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(=O)NCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 OABYVIYXWMZFFJ-ZUHYDKSRSA-M 0.000 description 1
- BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M sodium octanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCC([O-])=O BYKRNSHANADUFY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011008 sodium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M sodium;(1e)-1-(6-methyl-2,4-dioxopyran-3-ylidene)ethanolate Chemical compound [Na+].C\C([O-])=C1/C(=O)OC(C)=CC1=O DSOWAKKSGYUMTF-GZOLSCHFSA-M 0.000 description 1
- HJHVQCXHVMGZNC-JCJNLNMISA-M sodium;(2z)-2-[(3r,4s,5s,8s,9s,10s,11r,13r,14s,16s)-16-acetyloxy-3,11-dihydroxy-4,8,10,14-tetramethyl-2,3,4,5,6,7,9,11,12,13,15,16-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-ylidene]-6-methylhept-5-enoate Chemical compound [Na+].O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C([O-])=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C HJHVQCXHVMGZNC-JCJNLNMISA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000003408 sphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 230000003019 stabilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000003153 stable transfection Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 229950000244 sulfanilic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012745 toughening agent Substances 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108010036927 trypsin-like serine protease Proteins 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 229940045136 urea Drugs 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及FIX类似物,与天然FIX相比,其激活前在血流中的循环时间延长(患者注射一周后,FIX的活性仍至少为注射后初始活性峰值的5%)。本发明所要求保护的FIX类似物包含一个***型氨基酸残基,此氨基酸残基与化学基团结合而进一步被修饰,所述化学基团增加FIX类似物的分子量。
Description
本申请是国际申请日为2007年5月24日、国际申请号为PCT/EP2007/055031、进入国家阶段的申请号为200780019090.7、发明名称为“具有延长的体内半寿期的因子IX类似物”的PCT申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及凝血因子IX(FIX)类似物及衍生物,与天然的因子IX相比,它们在血流中的循环时间延长。
背景技术
因子IXa(FIXa)是胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶,在止血过程中发挥重要作用,它是凝血因子X酶复合物的组成部分,产生大部分的因子Xa,因子Xa在凝血过程中参与凝血酶的形成(见综述(Hoffman和Monroe,III 2001))。先天性因子IXa缺乏导致X-连锁出血性疾病-血友病B,男性发病率约为1∶100,000。目前,血友病B的治疗主要是使用重组或血浆凝血因子IX的替代疗法。然而,目前的观点正由传统的按需治疗转变为预防性治疗。当前的预防性治疗需要每周多次给药,但要达到最佳的血浆浓度和药效,最好每天注射一次。但考虑到每天给药的实用性和经济限制,目前尚不能用于患者的治疗。因而,显然需要一种长效的重组因子IX药物。
WO 2006005058涉及因子IX的一部分与一种或多种分子量为5-150kDa的水溶性聚合物的结合体。WO 2006018204涉及修饰的维生素K依赖性多肽,包括修饰的激活肽。WO 2004101740涉及嵌合蛋白,至少包括一种凝血因子和部分免疫球蛋白恒定区。WO2005001025涉及嵌合单体-二聚体杂交蛋白,其中该蛋白的第一条多肽链包括部分免疫球蛋白恒定区和生物活性分子,第二条多肽链包括不含生物活性分子的部分免疫球蛋白恒定区。US 2006040856涉及因子IX和聚乙二醇的结合,聚乙二醇通过完整的糖基连接起来并连接到多肽和修饰基上。
SE 9501285A公开了使用一种混合物在体外合成具有适当折叠和二硫化物交联的生物活性蛋白的方法,该混合物包括蛋白二硫化物氧化还原酶(如蛋白二硫化物异构酶(PDI)),谷氧还蛋白和氧化还原体系。参考文献主要是关于参与分子内二硫键形成的半胱氨酸残基。
WO 2006/134173涉及至少包含一个非天然半胱氨酸残基的重组工程化蛋白的选择性还原和衍生方法,重组蛋白包括因子IX多肽在内。
本发明的目的是提供修饰的FIX类似物或衍生物,与天然FIX相比,它们在血流中的循环时间延长,但仍能维持足够的生物活性参与凝血。
发明内容
一方面,本发明涉及循环半寿期延长的FIX类似物,其中在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合(conjugate)化学基团的半胱氨酸残基残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点为第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415位。
在优选实施方案中,FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点为第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80或84位。
在另一优选实施方案中,FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点为第87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141或142位。
在另一优选实施方案中,FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点为第185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415位。
在另一优选实施方案中,FIX类似物在位点146-180的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
可以理解,由于位点146-180相当于FIX的活性肽,该活性肽在FIX激活时被释放(remove),那么,对于这样一种FIX类似物,其中在选自位点146-180的天然氨基酸残基中至少有一个被半胱氨酸残基取代,所述半胱氨酸残基结合了使FIX多肽的分子量增加的化学基团,在类似物激活后,所述化学基团将不存在于类似物中。
在另一优选实施方案中,FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点选自第155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177位。
在另一优选实施方案中,FIX类似物在下列位点的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加,所述位点选自第160、161、162、163、164、165和166位。
在另一优选实施方案中,FIX类似物的氨基酸残基E162被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
另一方面,本发明涉及循环半寿期延长的FIX类似物,其C-末端T415后至少附加一个半胱氨酸残基,该半胱氨酸残基与化学基团结合,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
在本发明优选实施方案中,与非天然半胱氨酸残基结合的化学基团是聚乙二醇(PEG)。在进一步的优选实验方案中,聚乙二醇的平均分子量是500-100,000,例如1000-75,000或2,000-60,000。
优选的FIX类似物,其循环半寿期至少是野生型FIX半寿期的1.5倍。
在进行凝血实验时,本发明优选的FIX类似物,其生物活性至少是野生型FIX的20%。
另一方面,本发明涉及FIX类似物的制备方法,包括以下步骤:a)选择性还原工程化(engineered)FIX多肽,该多肽在下列位点至少包含一个非天然半胱氨酸,所述位点选自第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415位,所述非天然半胱氨酸残基通过二硫键与低分子量的硫醇(thiol)(RS-CYS)结合,方法是使结合低分子量硫醇的FIX和含有氧化还原缓冲体系的混合物反应;b)同时或其后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
在优选实施方案中,制备方法包含氧化还原缓冲体系(redoxbuffer),氧化还原缓冲体系包括含有还原型和氧化型谷胱甘肽的混合物。在进一步的优选实施方案中,氧化还原缓冲体系还包括谷氧还蛋白。
另一方面,本发明涉及FIX类似物的制备方法,包括以下步骤:a)选择性还原工程化FIX多肽,该多肽在下列位点至少包含一个非天然半胱氨酸,所述位点选自第44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415位,所述非天然半胱氨酸残基通过二硫键与低分子量的硫醇(RS-CYS)结合,方法是使结合低分子量硫醇的FIX和含有三芳基膦-3,3’,3”-三磺酸化合物的混合物反应;b)同时或其后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
在本发明的方法的优选实施方案中,化学基团选自聚乙二醇(PEG),尤其是平均分子量为500-100,000的PEG,例如1000-75,000或2,000-60,000。
本发明的另一个方面涉及治疗血友病患者的药物制剂,其中包含有效治疗剂量的本发明的FIX类似物的和药学上可接受的载体。
本发明的另一个方面涉及血友病患者的治疗方法,其中包括给予患者有效治疗剂量的本发明的FIX类似物及药学上可接受的载体。
在优选实施方案中,治疗方法包括每周至少一次治疗。在另一优选实施方案中,治疗方法包括每周只进行一次的治疗。
具体实施方式
FIX是维生素K依赖性凝血因子,结构类似于因子VII、凝血素、因子X和蛋白C。其循环酶原的血浆半寿期约为18-30小时,由415个氨基酸组成,分为四个明显的结构域,包括N-末端富含γ-羧基谷氨酸(Gla)结构域,两个EGF结构域和C-末端胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶结构域。FIX的激活是通过Arg145-Ala146和Arg180-Val181位氨基酸的限制性酶切,释放含有35个氨基酸残基的片段,所谓的激活肽(Schmidt和Bajaj 2003)。激活肽高度糖基化,包括两个N-连接多糖和高达四个的O-连接多糖。
共价修饰,例如聚乙二醇化或脂连接(lipid attachment),已经成功地用于几个蛋白质为基础的制药学中,改进药物的药代动力学和药效学。通过天然或工程化半胱氨酸残基进行的结合,提供了位点特异性的修饰方法,主要是由于蛋白表面缺乏这种半胱氨酸残基和硫醇进行的化学反应具有高度选择性。然而,实际上,这种方法通常是复杂的,原因是加入的半胱氨酸残基与低分子量(LMW)硫醇组成的混合二硫化物如半胱氨酸和谷胱甘肽会抑制随后的修饰反应。
因此,就需要一种方法,其中半胱氨酸残基和低分子量硫醇组成的混合二硫化物能够在保护天然二硫键的情况下被化学还原。
已经从哺乳动物细胞中分离、表达出人因子IX基因(K.Kurachi和E.W.Davie.编码人因子IX的cDNA的分离与特征描述。PNAS.79(21 I):6461-6464,1982;K.H.Choo,K.G.Gould,D.J.Rees,和G.G.Brownlee;人抗血友病因子IX基因的分子克隆,Nature 299(5879):178-180,1982;R.J.Kaufman,L.C.Wasley,B.C.Furie,B.Furie,和C.B.Shoemaker;中国大鼠卵巢细胞中合成的重组γ-羧基因子IX的表达、纯化和特征描述.J.Biol.Chem.261(21):9622-9628,1986.),并从cDNA中推导出氨基酸序列。
目前FIX用于血友病B的治疗通常包括每周两次注射,例如在拔牙或手术前做辅助注射。FIX在血循环中以无活性酶原形式存在,只有出血时才转变成有活性的FIXa。因此,FIX预防性治疗的方法是例如每周注射一次,增加患者血液中FIX的循环时间。这样,患者体内就总会有一定水平的FIX酶原,在任何时候都可以被激活,保证正常的凝血过程。
本发明的FIX类似物,其修饰方法是用半胱氨酸残基取代FIX中的一个或多个天然氨基酸残基。
识别FIX中适于加入半胱氨酸残基的位点:
要修饰的氨基酸残基位点优选来自相对侧链表面可接触性大于50%的氨基酸残基库。重链和EGF2结构域的表面可接触性从发表的晶体学数据库中计算而来(1PFX,Hopfher等,1999),而EGF1结构域表面可接触性的计算是基于猪FIXa晶体结构的同源模型(1PFX,Brandstetter等,1995)。另外,激活肽中的氨基酸残基(155-177位残基),尚无其结构信息的,也被认为是重要的。最近的出版物指出,激活肽这部分片段可以被删除,而不影响FIX的生活活性(Begbie等,2005)。表1中列出了人类FIX中所有相关的氨基酸残基位点。
表1.位点特异性修饰的FIX相关位点。‘ASA1’(以表示)是所有氨基酸残基的可接触位点,‘ASA2’(以表示)是侧链的可接触位点,‘Rel.ASA’是侧链的部分可接触位点。序列按照糜蛋白酶进行编号,与猪FIXa晶体结构的编号(1PFX.pdb)相同。标记有星号(*)或负号(-)侧链,被认为在与FVIIa/TF复合物(Chen,C.W.等,Thromb Haemost.2002;88:74-82.)或FVIIIa(Autin,L.等,J.Thromb.Haem.2005,3:2044-56)的连接中有重要作用。
本发明的FIX类似物较野生型FIX的循环半寿期长。循环半寿期可用技术人员采用已知的方法测量,如McCarthy等,Thromb Haemost.2002May;87(5):824-30中讲述的方法。
在优选实施方案中,用同样的实验或模型测量时,本发明FIX类似物的循环半寿期至少是野生型FIX的1.5倍,例如至少1.6倍、1.7倍、1.8倍、1.9倍、2.0倍、2.2倍、2.4倍。
此外,本发明的FIX类似物保持了足够的体内凝血生物活性。生物活性可用技术人员已知的方法测量,如McCarthy等,ThrombHaemost.2002May;87(5):824-30中讲述的方法。
在优选实施方案中,用同样的实验测量时,本发明FIX类似物的凝血活性至少是野生型FIX的15%,例如至少20%、25%、30%、35%、40%、50%、60%、70%。
突变,表达和纯化
FIX类似物可用重组核苷酸技术制备。通常,克隆的人核苷酸序列经过修饰,编码所需的FIX类似物,然后与表达载体连接、转化或转染宿主细胞。优选高等真核细胞,尤其是培养的哺乳动物细胞,作为宿主细胞。
氨基酸序列的改变方法有很多种。核苷酸序列修饰可采用位点特异性突变方法。位点特异性突变技术在本领域是众所周知的,例如,在Zoller和Smith(DNA 3:479-488,1984)或“重叠延伸剪接技术”,Horton等,Gene 77,1989,pp.61-68中都有描述。因此,利用FIX的核苷酸序列和氨基酸序列可以进行改变。同样,利用特异性引物,采用多聚酶链反应制备DNA的程序也是本领域技术人员所熟知的(参考PCR Protocols,1990,Academic Press,San Diego,California,USA)。
编码本发明的FIX类似物的核酸构建体可源自基因组或cDNA,例如,按照标准技术,构建基因组或cDNA文库,用合成的寡核苷酸探针采用杂交方法筛选编码FIX全长或部分片段的DNA序列(参考Sambrook等,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,2nd.Ed.ColdSpring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,New York,1989)。
编码FIX多肽类似物的核酸体也可用已建立的标准方法合成,例如,Beaucage和Caruthers,Tetrahedron Letters 22(1981),1859-1869中讲述的亚磷酰胺(phosphoamidite)法,或Matthes等,EMBO Journal 3(1984),801-805中讲述的方法。按照亚磷酰胺法,寡核苷酸可以在例如DNA自动合成仪中合成,纯化,退火,连接,并克隆到适当的载体上。编码人FIX多肽的DNA序列也可以用特异性引物采用多聚酶链反应合成,例如US 4,683,202,Saiki等,Science 239(1988),487-491或Sambrook等(同上)中讲述的方法。
此外,核酸构建体也可以是混合的合成和基因组核苷酸片段、混合的合成和cDNA核苷酸片段或混合的基因组和cDNA核苷酸片段,方法是按照标准技术,连接合成的、基因组或cDNA来源的核苷酸片段,这些核苷酸片段可以是FIX核苷酸序列全长的各个不同部分。
编码FIX多肽的DNA序列通常被***到重组载体中,重组载体可以是任何载体,也可以是方便用于DNA重组程序的载体,载体的选自通常取决于诱导的宿主细胞。因而,载体可以是具有自我复制功能的,即独立于染色体之外的DNA,其复制不依赖于染色体的复制,例如质粒。另外一种载体是导入宿主细胞后,整合到宿主细胞染色体DNA中,随着染色体复制而复制。
载体优选表达载体,其中编码FIX类似物的DNA序列与载体中用于DNA转录的附加区段可操作连接。通常,表达载体来自质粒或病毒DNA,或两者均有。术语“可操作连接”指的是,排列核苷酸区段,使其功能达到共同目的,例如启动子启动转录,转录合成编码多肽的DNA序列。
用于表达FIX类似物的表达载体,包括启动克隆基因或cDNA转录的启动子。启动子可以是在宿主细胞中具有转录活性的任何DNA序列,也可以是来自宿主细胞中编码同源或异源性蛋白的基因。
在哺乳动物细胞中启动编码FIX类似物DNA转录的合适启动子是SV40启动子(Subramani等,Mol.Cell Biol.1(1981),854-864)、MT-1(金属硫蛋白基因)启动子(Palmiter等,Science 222(1983),809-814)、CMV启动子(Boshart等,Cell 41:521-530,1985)或腺病毒2主要晚期启动子(Kaufman和Sharp,Mol.Cell.Biol,2:1304-1319,1982)。
必要的话,编码FIX类似物的DNA序列可以可操作地连接到合适的终止子上,如人生长激素终止子(Palmiter等,Science 222,1983,pp.809-814)或TPI1终止子(Alber和Kawasaki,J.Mol.Appl.Gen.1,1982,pp.419-434)或ADH3终止子(McKnight等,The EMBO J.4,1985,pp.2093-2099)。表达载体也可以含有RNA剪接位点,位于启动子下游,FIX序列***位点的上游。优选的RNA剪接位点源自腺病毒和/或免疫球蛋白基因。表达载体也含有多聚腺苷酸信号,位于***位点的下游。优选的多聚腺苷酸信号包括:SV40(Kaufman和Sharp,ibid.)的早期或晚期多聚腺苷酸信号,腺病毒5Elb区的多聚腺苷酸信号,人生长激素基因终止子(DeNoto等,Nucl.Acids Res.9:3719-3730,1981)或人FIX基因的多聚腺苷酸信号。表达载体也可能含有病毒的非编码先导序列,位于启动子和RNA剪接位点之间,例如腺病毒2的三联先导序列;也可能含有增强子,例如SV40增强子。
为了能使本发明的FIX类似物进入宿主细胞的分泌途径,分泌信号序列(也可称为先导序列,信号肽序列或前序列)也应存在于重组载体中。分泌信号序列按正确的读码框架连接到编码FIX类似物的DNA序列上。分泌信号序列通常位于编码多肽的DNA序列的5′端。分泌信号序列通常和编码的蛋白有关,或者来自编码另一种分泌蛋白的基因。
连接编码FIX类似物的DNA序列、启动子和终止子、分泌信号序列,并将其***含有必要复制信息的适当载体中的程序,是本领域的技术人员所熟知的(参见例如Sambrook等,Molecular Cloning:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York,1989)。
转染哺乳动物细胞并表达DNA序列的方法在下列文献中有讲述,如Kaufman和Sharp,J.Mol.Biol.159(1982),601-621;Southern和Berg,J.Mol.Appl.Genet.1(1982),327-341;Loyter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 79(1982),422-426;Wigler等,Cell 14(1978),725;Corsaro和Pearson,Somatic Cell Genetics 7(1981),603,Graham和vander Eb,Virology 52(1973),456;Neumann等,EMBO J.1(1982),841-845.
克隆的DNA序列导入培养的哺乳动物细胞的方法,包括磷酸钙介导的转染(Wigler等,Cell 14:725-732,1978;Corsaro和Pearson,Somatic Cell Genetics 7:603-616,1981;Graham和Van der Eb,Virology52d:456-467,1973)或电穿孔法(Neumann等,EMBO J.1:841-845,1982)。为了识别并筛选表达外源性DNA的细胞,含有筛选表型(筛选标志物)的基因通常和目的基因或cDNA一起导入宿主细胞。优选的筛选标志物包括抗药性基因,如抗新霉素、匀霉素和甲氨蝶呤。筛选标志物可以扩增。优选的可扩增的筛选标志物是二氢叶酸还原酶(DHFR)序列。Thilly对筛选标志物进行了综述(Mammalian CellTechnology,Butterworth Publishers,Stoneham,MA,引入本文作为参考)。本领域的技术人员能够很容易的挑选适当的筛选标志物。
筛选标志物可以用独立的质粒与目的基因同时导入宿主细胞中,也可以和目的基因使用相同的质粒导入宿主细胞。本领域的技术人员熟知这种结构类型(例如Levinson和Simonsen,U.S.4,713,339)。在导入细胞的混合物中添加额外的DNA也是有利的,被称为“载体DNA”。
表达外源性DNA的细胞在适当的培养基中生长1-2天,开始表达目的基因。本文中的术语“适当的培养基”是指含有营养成分和其它细胞生长、FIX类似物表达所需成分的培养基。培养基通常含有碳源、氮源、必须氨基酸、必须的糖、维生素、盐、磷脂、蛋白质和生长因子。然后用药物筛选稳定表达筛选标志物的生长细胞。对于转染了可扩增筛选标志物的细胞,可以加大药物浓度,以筛选拷贝数增加的克隆序列,从而增加表达量。筛选稳定转染的细胞克隆用于FIX类似物的表达。
本发明中使用的哺乳动物细胞系,包括:COS-1细胞系(ATCCCRL 1650),幼仓鼠肾细胞系(BHK)和293细胞系(ATCC CRL 1573;Graham等,J.Gen.Virol.36:59-72,1977)。优选的BHK细胞系是tk-ts13 BHK细胞系(Waechter和Baserga,Proc.Natl.Acad.Sci.USA79:1106-1110,1982,引入本文作为参考)和下文中提到的BHK 570细胞系。BHK 570细胞系已经被列入ATCC库中,12301 Parklawn Dr.,Rockville,Md.20852,在ATCC中的编号为CRL 10314。tk-ts13 BHK细胞系在ATCC中的编号是CRL 1632。此外,其它多种细胞系也可以用于本发明中,包括:鼠Hep I(大鼠肝细胞瘤;ATCC CRL 1600),鼠Hep II(大鼠肝细胞瘤;ATCC CRL 1548),TCMK(ATCC CCL 139),人肺癌细胞(ATCC HB 8065),NCTC 1469(ATCC CCL 9.1),CHO(ATCC CCL 61)和CHO-DUKX细胞系(Urlaub和Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220,1980)。
本发明的FIX类似物存在于细胞培养基中,可用本领域中已知的多种方法纯化,但并不局限于这些方法,包括:层析法(例如,离子交换层析、亲和层析、疏水层析、层析聚焦和过滤层析法),电泳法(例如等电聚焦(IEF)),溶解度分离法(例如,硫酸铵沉淀法)或萃取法(参见蛋白纯化.J.-C.Janson和Lars Ryden编,VCH Publishers,New York,1989)。优选的是,将FIX类似物过抗FIX抗体柱的亲和层析法。其它纯化方法包括常规化学纯化法,例如高效液相色谱法。其它纯化法为本领域所知,可用于本文中新型FIX多肽的纯化。
要达到治疗目的,FIX类似物的纯化至少达到约90-95%的均一性(homogeneity),优选的是至少约98%均一性。纯化率可以用凝胶电泳和氨基末端氨基酸测序测定。
选择性还原
考虑到上述半胱氨酸巯基基团介导的化学结合的困难性(所述巯基基团不参与重组技术制备的蛋白质分子内二硫键形成),本发明使用氧化还原混合缓冲体系(例如,硫醇-二硫化物聚合氧化还原催化剂)或三芳基膦选择性还原低分子量硫醇和工程化蛋白组成的混合二硫键,该工程化蛋白至少包括一个非天然半胱氨酸,例如,含有工程化或天然半胱氨酸的凝血因子或丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶家族蛋白。混合二硫化物经选择性还原后,产生的游离半胱氨酸可通过本领域的技术人员所知道的蛋白质巯基偶联化学进行结合修饰。
工程化或天然半胱氨酸介导的化学结合可以靶向蛋白修饰,产生单一同源性产物。然而,如果半胱氨酸与低分子量硫醇结合后,导致蛋白质分子内二硫键不稳定,那么该措施就不可行。本发明可以选择性去除低分子量硫醇部分,产生游离的半胱氨酸,用于随后的化学修饰。
因此,本发明涉及选择性还原工程化FIX的方法,工程化FIX即至少包含一个非天然半胱氨酸的FIX,该FIX包含一个或多个半胱氨酸部分(moiety),通过二硫键与低分子量硫醇(RS-Cys)结合,该半胱氨酸部分不参与活性蛋白分子内二硫键(Cys-S-S-Cys)的形成,此方法可以使结合低分子量硫醇的蛋白与包含氧化还原缓冲体系的混合物反应。
另外,本发明涉及选择性还原工程化FIX的方法,工程化FIX即至少包含一个非天然半胱氨酸的FIX,该FIX包含一个或多个半胱氨酸部分,通过二硫键与低分子量硫醇(RS-Cys)结合,该半胱氨酸部分不参与活性蛋白分子内二硫键(Cys-S-S-Cys)的形成,此方法可以使结合低分子量硫醇的蛋白与包含三芳基膦还原剂的混合物反应。
术语“选择性还原”指的是,大部分通过二硫键与低分子量硫醇结合的半胱氨酸部分,如60%、80%、90%或更多,经还原后释放含有巯基的半胱氨酸部分,其易于和其它基团结合,而大部分其它二硫键(主要是分子内二硫键),如60%、80%、90%或更多,受到保护,这样,工程化蛋白就基本上保持其生物活性。
(A)氧化还原缓冲体系
如上所述,本发明提供了至少包括一个非天然半胱氨酸残基的工程化蛋白(例如,凝血因子或丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶家族蛋白)的选择性还原方法。涉及的蛋白包括一个或多个半胱氨酸部分,其经二硫键与低分子量硫醇(RS-Cys)结合,该半胱氨酸部分不参与活性蛋白分子内二硫键(Cys-S-S-Cys)形成,此方法包括使结合低分子量硫醇的蛋白与包含氧化还原缓冲体系的混合物反应。
本文中术语“氧化还原缓冲体系”一词的意思是,硫醇/二硫化物氧化还原对比例合适,足以还原以破坏蛋白-低分子量硫醇组成的混合二硫化物(RS-Cys),并足以氧化以保护蛋白中天然二硫键的完整性。
优选地,氧化还原缓冲体系包括低分子量硫醇/二硫化物氧化还原对。术语“低分子量”指的是,氧化还原对中硫醇形式的分子量最多为500g/mol。这些氧化还原对选自:(i)还原型和氧化型谷胱甘肽,(ii)还原型和氧化型γ-谷氨酰半胱氨酸,(iii)还原型和氧化型半胱氨酰甘氨酸,(iv)还原型和氧化型半胱氨酸,(v)还原型和氧化型N-乙酰半胱氨酸,(vi)半胱胺,(vii)二氢硫辛酰胺/硫辛酰胺,优选(i)还原型和氧化型谷胱甘肽。
最佳的氧化还原条件可以用本领域技术人员所知的蛋白氧化还原滴定来确定,参见Gilbert(1995)。
在实施方案中,氧化还原缓冲体系包含还原型和氧化型谷胱甘肽氧化还原对,还原型谷胱甘肽浓度为0-100mM,还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比率是2-200。
在另一实施方案中,氧化还原缓冲体系包含还原型和氧化型谷胱甘肽氧化还原对,还原型谷胱甘肽浓度为0-100mM,如0.01-50mM,氧化型谷胱甘肽的浓度是0-5mM,如0.001-5mM。对于因子IX多肽,还原型谷胱甘肽的浓度优选为0-5mM,如0.01-2mM,氧化型谷胱甘肽的浓度为0.001-2mM,如0.001-0.200mM。
由于根据反应动力学,谷胱甘肽和其它低分子量硫醇通常是弱还原剂/氧化剂,混合物中最好含有硫醇/二硫化物氧化还原催化剂,与氧化还原缓冲体系一起作用,提高反应速率。
混合物里的硫醇/二硫化物氧化还原催化剂包括二巯基型和单巯基型谷氧还蛋白。谷氧还蛋白及其功能在Fernandes等(2004)中有讲述。有用的谷氧还蛋白选自埃希氏菌属的Grx1、Grx2或Grx3(Holmgren等,1995),啤酒酵母的Grx1p、Grx2p、Grx3p、Grx4p和Grx5p(Luikenhuis等,1998;Rodriguez-Manzaneque等,1999;Grant,2001),人类的Grx1和Grx2(Padilla等,1995;Lundberg等,2001)及其各种变异体。变异体包括,但不局限于这些,二巯基型谷氧还蛋白,其C-末端CXXC结构域的半胱氨酸残基被另一种氨基酸残基通常是丝氨酸残基取代(参见Yang等,1998)。
氧化还原催化剂(尤其是谷氧还蛋白)优选的使用浓度为0.001-20μM。
混合物里最好不要包含蛋白质二硫化物异构酶(PDI)。
氧化还原缓冲体系也可包括其它一些成分,例如盐,pH缓冲体系等,本发明的方法可以在任何温度下实施,这些温度适于所涉及的蛋白,例如,-5℃至50℃,例如0℃至37℃,当然,选用何种温度取决于蛋白在该温度下的稳定性。
(B)三芳基膦还原剂
如上所述,本发明提供了至少包括一个非天然半胱氨酸残基的工程化蛋白(例如凝血因子或丝氨酸蛋白酶胰蛋白酶家族蛋白)的选择性还原方法。涉及的蛋白包括一个或多个半胱氨酸部分,其经二硫键与低分子量硫醇(RS-Cys)结合,该半胱氨酸部分不参与活性蛋白分子内二硫键(Cys-S-S-Cys)的形成,此方法包括使结合低分子量硫醇的蛋白与三芳基膦还原剂反应。
术语“三芳基膦还原剂”指的是任选被一个或多个取代基取代的三芳基膦。
三芳基膦还原剂的芳基基团优选自苯基、萘基、1,2,3,4-四氢化萘基、蒽基、苯蒽基、芘基、苯芘基、芴基、占吨基,尤其是苯基,在当前挑选出的实施方案中,三个芳基基团是相同的。在当前最有意义的实施方案中,三芳基膦的三个芳基基团都来自苯基。芳基基团尤其是苯基中的取代基,通常选自磺酸、羧酸、C1-6-烷基、C1-6-烷氧基、C1-6-烷氧基-C1-6-烷基、C3-6-亚烷基(alkylene)(含有两个相邻芳基碳原子的环)或C2-6-亚烷基氧基(含有两个相邻芳基碳原子的环)或C1-4-亚烷基-氧基-C1-4-亚烷基(含有两个相邻芳基碳原子的环)。
在当前最有意义的实施方案中,至少有一个芳基(如苯基)存在至少一个取代基,这些取代基选自磺酸和羧酸,尤其是磺酸;取代基最好位于磷原子键的间位。
优选地,三个芳基基团都含磺酸取代基,而且至少有一个取代基位于磷原子键的对位,尤其是氧取代基。
目前认为芳基基团还原剂不存在位于磷原子键邻位的取代基。
术语“C1-6-烷基”指的是含有1-6个碳原子的直链或支链饱和烃残基。尤其是甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基等。同样地,“C1-4-烷基”指的是含有1-4个碳原子的直链或支链饱和烃残基。“C1-6-亚烷基”、“C2-6-亚烷基”等分别为“C1-6-烷基”、“C2-6-烷基”的二元基团。
适当的三芳基膦还原剂在还原性和空间位阻之间存在着较好的平衡。三芳基膦的化学性质是,切开蛋白质-低分子量硫醇组成的混合二硫化物(RS-Cys),而保护天然蛋白二硫键的完整性。有意义的化合物是三芳基膦三磺酸,例如三苯基膦-3,3’,3”-三磺酸及其类似物。举例说明,三芳基膦还原剂选自三苯基膦-3,3’,3”-三磺酸及其类似物,如下列9-11化合物中之一。
三芳基膦还原剂优选使用浓度为0.001-100mM,如0.01-50mM或0.1-25mM。
在一项有意义的实施方案中,三芳基膦还原剂固定在载体上。这有利于还原剂与蛋白质分离。通常,三芳基膦还原剂,如9-11化合物,用本领域技术人员已知的方法固定,如在其中一个芳基基团中引入一个连接基。三芳基膦还原剂12就是还原剂1的一个连接变异体。
反应温度通常是0-40℃,如室温,反应时间为5秒钟-几天,随具体情况而定。反应之后进行高效液相色谱分析,确定是否发生转变。溶剂优选水溶液,含有DMSO或DMF等助溶剂。溶剂也可含有盐,如钙盐。
结合(conjugation)
上述选择性还原方法的一个重要目的就是释放半胱氨酸基团,用于化学基团(如非多肽部分)的连接(结合)。
因此,在一项重要的实施方案中,在选择性还原的同时或随后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
应当理解,至少一个选择性还原的半胱氨酸残基与化学基团的结合可以与选择性还原同时进行,也可以随后进行,同时进行就是在含有氧化还原缓冲体系的混合物中加入一种或多种参与结合反应的试剂,随后进行就是在选择性还原蛋白经纯化或分离后。
在一个实施方案中,化学基团是延长作用基(protractor group),即该基团结合到蛋白质(如因子IX多肽)上后,能够相比较未修饰的蛋白或多肽而言延长蛋白或多肽的循环半寿期。延长作用的特定原理可能是,使多肽序列变大,隐蔽多肽酶或抗体识别的位点,或使多糖分子变大,将其隐蔽,不被肝细胞或巨嗜细胞表面的多糖特异性受体识别,防止或减少它们的清除。
在本发明的实施方案中,延长作用基选自:
(a)有机带电小分子(15-1,000Da),可包括一个或多个羧酸,磺酸胺,磷酸或其结合。
(b)中性亲水性小分子(15-1,000Da),如环状糊精,或任选含有支链的聚乙烯链。
(c)疏水性小分子,如脂肪酸或胆汁酸及其衍生物。
(d)平均分子量为2,000-60,000Da的聚乙二醇。
(e)定义明确的精密(precision)聚合物,如分子量精确为700-20,000Da的树状分子,更优选的是分子量为700-10,000Da。
(f)基本上无免疫原性多肽,如清蛋白或抗体或任选含有Fc片段的抗体的部分。
(g)大分子有机聚合物,如右旋糖酐。
在本发明的另一实施方案中,延长作用基选自树状分子或聚亚烷基氧化物(PAO),包括:聚亚烷基二醇(PAG),如聚乙二醇(PEG)和聚丙二醇(PPG),含支链的PEGs,聚乙烯醇(PVA),聚羧酸脂,聚乙烯吡咯酮,聚乙烯-顺丁烯二酸酐,聚苯乙烯-顺丁烯二酸酐和右旋糖酐,右旋糖酐包括羧甲基葡聚糖。在本发明的一项有意义的实施方案中,延长作用基是PEG基团。
术语“支链聚合物”或“树状聚合物”、“树状分子”或“树状结构”指的是有些含有支链的单体聚合而成的有机聚合物。
在本发明的实施方案中,延长作用基选自由血清蛋白配体组成的基团,这些配体包括结合到白蛋白上的化合物,如脂肪酸,C5-C24脂肪酸,脂肪族二元酸(如C5-C24)。其它延长作用基包括有机小分子或中性取代基,有机小分子含有在生理条件下电荷能发生改变的部分,例如羧酸或胺,中性取代基能防止多糖的特异性识别,如较小的烃基取代基(例如C1-C5烷基)。在一项实施方案中,延长作用基是白蛋白。
在一项实施方案中,化学基团是非多肽。
在一项有意义的实施方案中,化学基团是聚乙二醇(PEG),尤其是平均分子量为500-100,000的PEG,如1,000-75,000或2,000-60,000。
结合反应可以按照WO 02/077218 A1或WO 01/58935 A2中公开的方法进行。
PEG可以用作与蛋白结合的化学基团。术语“聚乙二醇”或“PEG”指的是,聚乙二醇化合物及其衍生物,含或不含偶合剂,偶合或激活一些基团(如硫醇、三氟甲磺酸、三氟乙磺酸、氮丙环、环氧乙烷、硫代吡啶、乙烯砜,优选马来酰亚胺)。化合物如马来酰亚胺基单甲氧PEG就是本发明中一种有活性的PEG化合物。
PEG是合适的聚合物分子,因为与多糖如右旋糖酐相比,它所含的具有交叉反应的基团很少。尤其是,单功能的PEG,如单甲氧基聚乙二醇(mPEG)很有意义,因为它的结合化学反应相对简单(只有一个反应基参与多肽表面基团的结合反应)。因此,交叉反应减少,目的多肽结合产物的同源性更大,聚合物分子与多肽的反应也更容易控制。
为了使聚合物分子结合到多肽上,活化型的聚合物分子含有羟基末端,即反应活性基。有商业化的活化聚合物分子,如Shearwater公司,Huntsville,Ala.,USA或PolyMASC Pharmaceuticals plc,UK公司提供的活化聚合物分子。或者,可以用本领域已知的传统方法激活聚合物分子,如WO 90/13540中公开的方法。本发明中使用的线型或支链活化聚合物分子在Shearwater公司1997和2000的目录(具有生物功能的聚合物用作研究和药物,聚乙二醇及其衍生物,仅作参考)中有讲述。活化PEG聚合物包括下列线型PEGs:NHS-PEG(如SPA-PEG、SSPA-PEG、SBA-PEG、SS-PEG、SSA-PEG、SC-PEG、SG-PEG和SCM-PEG),和NOR-PEG),BTC-PEG、EPOX-PEG、NCO-PEG、NPC-PEG、CDI-PEG、ALD-PEG、TRES-PEG、VS-PEG、IODO-PEG和MAL-PEG;和支链PEGs,如PEG2-NHS,以及U.S.Pat.No.5,932,462和U.S.Pat.No.5,643,575中公开的PEGs,这两种出版物仅供参考。此外,下列出版物,仅供参考,也公开了有用的聚合物分子和/或PEG化的化学物:U.S.Pat.No.5,824,778、U.S.Pat.No.5,476,653、WO97/32607、EP 229,108、EP 402,378、U.S.Pat.No.4,902,502、U.S.Pat.No.5,281,698、U.S.Pat.No.5,122,614、U.S.Pat.No.5,219,564、WO92/16555、WO 94/04193、WO 94/14758、WO 94/17039、WO 94/18247、WO 94/28024、WO 95/00162、WO 95/11924、WO 95/13090、WO95/33490、WO 96/00080、WO 97/18832、WO 98/41562、WO 98/48837、WO 99/32134、WO 99/32139、WO 99/32140、WO 96/40791、WO98/32466、WO 95/06058、EP 439 508、WO 97/03106、WO 96/21469、WO 95/13312、EP 921 131、U.S.Pat.No.5,736,625、WO 98/05363、EP 809 996、U.S.Pat.No.5,629,384、WO 96/41813、WO 96/07670、U.S.Pat.No.5,473,034、U.S.Pat.No.5,516,673、EP 605 963、U.S.Pat.No.5,382,657、EP 510 356、EP 400 472、EP 183 503和EP 154 316。
多肽和活化聚合物分子可用传统方法结合,如下面参考文献中讲述的方法(这些参考文献也讲述了聚合物分子活化方法):R.F.Taylor,(1991),“蛋白固定化,基础和应用”,Marcel Dekker,N.Y.;S.S.Wong,(1992),“蛋白质偶合(conjugation)和交联化学”,CRC Press,Boca Raton;G.T.Hermanson等,(1993),“固定化亲和配体技术”,Academic Press,N.Y.。技术人员知道活化方法和/或结合化学反应取决于多肽的附加基团(如上所述)和聚合物的功能基团(如,胺、羟基、羧基、乙醛基、巯基、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、乙烯砜或卤代乙酸)。聚乙二醇化可用于多肽表面附加基团(即这些附加基团暴露于多肽表面)的共价修饰,或一个或多个特异的附加基团,如N-末端氨基酸(U.S.Pat.No.5,985,265)的共价修饰。此外,结合可以一步完成,也可以分步完成(如WO 99/55377中所述)。
应当理解,聚乙二醇化的目的是产生最佳的分子,包括PEG分子的数量、大小、形式(无论是线型还是支链型)以及多肽中PEG分子的结合位置。考虑到所要到达的效果,要选择分子量合适的聚合物。例如,如果结合反应的主要目的是产生高分子和较大的结合物(如减少肾清除率),那么就可以将一个或一些高分子聚合物结合起来,或者将大量的低分子聚合物结合到一起。在实施方案中,使用几个低分子聚合物。这种情况也适用于大量的抗原决定簇需要隐蔽时。在这种情况下,要用到分子量约5,000Da的聚合物2-8个,如3-6个。在下面的例子中,要达到延长多肽体内半寿期的效果,使用大量低分子聚合物(如4-6个MW为5,000的聚合物)比使用少数几个高分子聚合物((如1-3个MW为12,000-20,000的聚合物)更有利,即使这两种情况产生的多肽总的分子量相同或相近。据人们所知,与单个高分子聚合物相比,大量低分子聚合物可以使多肽的直径或表观大小变大,至少当聚合物相对均匀地分步于多肽表面时是这样的。
进一步发现,当本发明的大部分结合物的表观大小(也叫“表观分子量”或“表观质量”)至少为约50kDa,如约55kDa、60kDa、66kDa时,产生的结果更好。原因是,当结合物的表观大小足够大时,就基本消除其肾清除率。在本文中,蛋白结合物或因子IX多肽的“表观大小”可用SDS-PAGE电泳测定。
此外,据报道,聚合物结合过多会导致化学基团(如非多肽)结合蛋白(如因子IX多肽)的活性丢失(如下所述)。解决此问题的方法是,去除位于功能位点的附加基团或者在结合前可逆地封闭功能位点,使得结合时功能位点被封闭。特异地说,就是用辅助分子如丝氨酸蛋白酶抑制剂封闭蛋白的功能位点后,再将蛋白和化学基团(如非多肽)结合。优选地,辅助分子能特异性识别蛋白的功能位点,例如受体或抑制剂的活性部位,从而保护催化三元体周围的区域(位于催化三联体原子位的氨基酸残基)。
辅助分子也可以是抗体,尤其是识别蛋白(如因子IX多肽)的单克隆抗体。尤其是,辅助分子为中和性单克隆抗体。
优选的是,蛋白在与化学基团结合前先与辅助分子结合。(使用和混合二硫化物还原反应中相同的辅助分子(如抑制物)更有利)。这样就能确保蛋白的功能位点受到屏蔽或保护,不能用于化学基团(如非多肽)如聚合物的结合。
与辅助分子结合后,化学基团就可以和至少有一部分功能位点受到保护的蛋白结合。
制剂和给药方式
本发明的其中一方面涉及药物制剂,包括FIX类似物的干燥剂型,为何医生或患者在使用之前要加溶剂和/或稀释剂。“干燥剂型”指的是流体药物或制剂经冷冻干燥(即冻干法,参见Williams和Polli(1984)J.Parenteral Sci.Technol.38:48-59),喷雾干燥(参见Masters(1991)inSpray-Drying Handbook(5th ed;Longman Scientific and Technical,Essez,U.K.),pp.491-676;Broadhead等(1992)Drug Devel.Ind.Pharm.18:1169-1206;and Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.11:12-20),或空气干燥(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology 25:459-470;和Roser(1991)Biopharm.4:47-53)。
本发明的另一方面涉及药物制剂,包括FIX类似物的水溶液和缓冲体系,其中,FIX类似物的浓度为0.01mg/ml或以上,其中该制剂的pH值为约2.0-10.0。
在本发明的另一实施方案中,缓冲体系选自乙酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、双甘氨肽、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、二氢磷酸钠、磷酸氢二钠、磷酸钠、三羟甲基氨基甲烷、N-二(羟乙基)甘氨酸、三(羟甲基)甲基甘氨酸(tricine)、苹果酸、琥珀酸盐、顺丁烯二酸、反丁烯二酸、酒石酸、天冬氨酸或它们的混合物。每种特异的缓冲体系都可以组成本发明的一项实施方案。
在本发明的另一实施方案中,制剂包括配药学上可接受的防腐剂。防腐剂选自:苯酚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯乙醇、苯甲醇、氯丁醇、硫柳汞、溴硝醇、苯甲酸、咪脲、氯己定、脱氢醋酸钠、氯化甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、氯化苄乙铵、3p-氯化苯氧丙烷-1,2-二醇,及其混合物。在本发明的实施方案中,防腐剂的浓度分别为0.1mg/ml-20mg/ml、0.1mg/ml-5mg/ml、5mg/ml-10mg/ml、10mg/ml-20mg/ml。每种特异的防腐剂都能组成本发明的一项实施方案。药物组合物里使用防腐剂是技术人员熟知的。为方便,可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995。
在本发明的另一实施方案中,制剂包括等张溶剂(isotonic agent)。等张溶剂选自盐、糖或糖醇、氨基酸(L-甘氨酸、L-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、醛醇(如丙三醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇)、聚乙二醇(如PEG400)及其混合物。单糖、双糖、或多糖、或水溶性葡聚糖,例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、戊醛糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、右旋糖酐、支链淀粉、糊精、环式糊精、可溶淀粉、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素等也可以使用。在实施方案中,添加的糖是蔗糖。糖醇是至少含有一个羟基的C4-C8烃,例如甘露醇、山梨醇、纤维醇、半乳糖醇、己六醇、木糖醇和***糖醇。在实施方案中,添加的糖醇是甘露醇。上面提到的糖或糖醇可以单独或联合使用。使用的量没有明确限制,只要糖或糖醇溶于流体中,并且不会对本发明的方法产生的稳定效果起反作用。在实施方案中,糖或糖醇的浓度约为1mg/ml-150mg/ml。在本发明的进一步实施方案中,等张溶剂的浓度分别为1mg/ml-50mg/ml、1mg/ml-7mg/ml、8mg/ml-24mg/ml、25mg/ml-50mg/ml。每种特异的等张溶剂都能组成本发明的一项实施方案。药物组合物里使用等张溶剂是技术人员熟知的。为方便,可以参考Remington:TheScience and Practice of Pharmacy,19th edition,1995。
在本发明的另一实施方案中,制剂包括螯合剂。螯合剂选自乙二胺四乙酸盐(EDTA)、柠檬酸、天冬氨酸及其混合物。在本发明的实施方案中,螯合剂的浓度分别为0.1mg/ml-5mg/ml、0.1mg/ml-2mg/ml、2mg/ml-5mg/ml。每种特异的螯合剂都能组成本发明的一项实施方案。药物组合物里使用螯合剂是技术人员熟知的。为方便,可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19thedition,1995。
在本发明的实施方案中,制剂包括稳定剂。药物组合物里使用稳定剂是技术人员熟知的。为方便,可以参考Remington:The Science andPractice of Pharmacy,19th edition,1995。
本发明的药物组合物里还包括一定量的氨基酸基(amino acidbase),能够减少药物储存时多肽聚集体的形成。“氨基酸基”指的是单个氨基酸或氨基酸的组合,这些氨基酸可以是游离基(base)形态,也可以是盐形态。如果是氨基酸的组合,所有的氨基酸都可以是游离基形态或者盐形态,或者一部分氨基酸是游离基形态,而其它氨基酸是盐形态。在一个实施方案中,本发明使用的氨基酸是侧链带电荷的氨基酸,如精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷氨酸。一些特殊氨基酸(如甘氨酸、蛋氨酸、组氨酸、咪唑氨基酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸和它们的混合物)的立体异构体(即左旋、右旋,或外消旋异构体)或异构体的组合也可以用在本发明的药物组合物里,只要这些特殊氨基酸以游离基形态或盐形态存在。在实施方案中,使用的是左旋立体异构体。本发明也可以使用这些氨基酸的类似物。“氨基酸类似物”指的是天然氨基酸的衍生物,这些天然氨基酸能够减少本发明的流体药物组合物在储存过程中多肽聚集体的形成。合适的精氨酸类似物包括胍氨酸,鸟氨酸,N-乙基左旋精氨酸,合适的蛋氨酸类似物包括乙硫氨酸,丁硫氨酸,合适的半胱氨酸类似物包括S-甲基左旋半胱氨酸。和其它氨基酸一起,这些氨基酸类似物以游离基形态或盐形态被添加到药物组合物里。在本发明的实施方案中,所使用的氨基酸或氨基酸类似物的浓度,足以防止或延迟蛋白的聚集。
在本发明的实施方案中,如果治疗作用的多肽至少包括一个易于被氧化的蛋氨酸残基,那么添加蛋氨酸(或其它含硫氨基酸或其类似物)就可以抑制蛋氨酸残基氧化成蛋氨酸亚砜。“抑制”指的是,随着时间的延长,使蛋氨酸氧化产物的积聚最少。抑制蛋氨酸氧化能更持久地保持多肽的分子形态。也可以使用蛋氨酸的立体异构体(如左旋、右旋或外消旋异构体)或它们的组合。使用的量应当足以抑制蛋氨酸残基的氧化,使产生的蛋氨酸亚砜的量达到管理机构的要求。一般来说,这意味着药物组合物里蛋氨酸亚砜的含量不超过约10%-30%。通常,添加的蛋氨酸和蛋氨酸残基的比率约为1∶1-1000∶1,如10∶1-约100∶1就能达到要求。
在本发明的实施方案中,制剂包括稳定剂,稳定剂选自高分子聚合物或低分子化合物。在本发明的实施方案中,稳定剂选自聚乙二醇(如PEG3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯酮、羧基-氧化纤维素或它们的衍生物(如羟丙基纤维素、HPC-SL、HPC-L和羟丙基甲基纤维素)、环式糊精,含硫物质如硫代甘油、巯基乙酸、甲基硫代乙醇和各种盐(如氯化钠)。每种特异的稳定剂都能组成本发明的一项实施方案。
药物组合物也包括稳定剂,进一步提高具有治疗作用的活性多肽的稳定性。本发明使用的稳定剂包括蛋氨酸和EDTA,但不局限于这些,防止多肽的蛋氨酸残基被氧化,也包括非离子型表面活性剂,防止在冻融或机械剪切过程中多肽发生聚集。
在本发明的实施方案中,制剂包括表面活性剂。表面活性剂可以是去垢剂、乙氧基蓖麻油、聚乙二醇甘油酯、乙酰基甘油一酯、山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯嵌段共聚物(如泊洛沙姆,包括F68、泊洛沙姆188和407,Triton X-100)、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯和聚乙烯的烷基和烷氧基衍生物(吐温如吐温-20,吐温-40,吐温-80和Brij-35)、甘油一酯或其乙氧基化衍生物、甘油二酯或其聚氧乙烯衍生物、乙醇、甘油、植物凝血素和磷脂(如磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和鞘磷脂)、磷脂衍生物(如二棕榈酰磷脂酸)和溶血磷脂(如棕榈酰溶血磷脂酰-L-丝氨酸和1-酰基-磷脂酰乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸)和溶血磷脂、卵磷脂的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物,如溶血卵磷脂,二棕榈酰磷脂酰胆碱的十二酰和十四酰衍生物,和极性基团的修饰,如胆碱,乙醇胺,磷脂酸,丝氨酸,苏氨酸,甘油,肌醇,和带正电荷的DODAC,DOTMA,DCP,BISHOP,溶血磷脂酰丝氨酸,溶血磷脂酰苏氨酸,甘油磷脂(如脑磷脂),甘油糖脂(如半乳糖吡喃糖苷),神经鞘糖脂(如神经酰胺,神经节苷脂),十二烷基磷脂酰胆碱,鸡蛋溶血卵磷脂,梭链孢酸衍生物(如牛磺二氢褐霉酸钠等),长链脂肪酸及其C6-C12盐(如油酸和辛酸),酰基肉碱及其衍生物,赖氨酸、精氨酸或组氨酸的Nα-酰基衍生物,或赖氨酸、精氨酸的侧链酰基衍生物,二肽的Nα-酰基衍生物,二肽包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸和中性或酸性氨基酸的任一组合,三肽的Nα-酰基衍生物,三肽包括中性氨基酸和两个带电荷氨基酸的任一组合,DSS(琥珀辛酯钠,CAS登录号为[577-11-7];琥珀辛酯钙,CAS登录号为[128-49-4];琥珀辛酯钾,CAS登录号为[7491-09-0]),SDS(十二烷基磺酸钠),辛酸钠,胆汁酸及其衍生物,胆汁酸及其盐和甘氨酸或牛磺酸结合物,胆烷酸,胆酸钠,脱氧胆酸钠,牛黄胆酸钠,甘胆酸钠,N-十六烷基-N,N-二甲基-3-氨基-1-丙磺酸盐,单价阴离子表面活性剂(烷基-烷基-磺酸盐),两性离子表面活性剂(如N-烷基-N,N-二甲胺-1-丙磺酸盐,3-胆氨-1-丙基二甲胺-1-丙磺酸盐),阳离子表面活性剂(季铵)(如十六烷基-三甲基溴化铵,十六烷基吡啶氯化物),非离子型表面活性剂(如十二烷基β-D-喃葡萄糖)和聚氧乙烯聚氧丙烯乙二胺共聚物(如Tetronic’s),泊洛沙胺(poloxamines)是四功能化合物的嵌段共聚体,是由环氧丙烯和环氧乙烯连续连接到乙二胺上组成的,或者表面活性剂可选自咪唑啉的衍生物,或者它们的混合物。每种特异的表面活性剂都能组成本发明的一项实施方案。
药物组合物里使用表面活性剂是技术人员熟知的。为方便,可以参考Remington:The Science and Practice of Pharmacy,19th edition,1995。
其它成分也可以用于本发明的药物制剂里,包括润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、疏松剂、增强剂、螯合剂、金属离子、油质物、蛋白质(如人血清白蛋白、胶质蛋白等)和两性离子(如三甲铵乙内酯、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。当然,这些添加剂不能对本发明药物制剂总的稳定性起反作用。
胃肠道外给药方式包括:皮下注射、肌肉注射、腹膜内注射或静脉注射,可以使用钢笔型注射器注射,也可以使用输液器注射。另外一种胃肠道外给药方式是,FIX化合物的溶液或悬液通过鼻腔或肺喷雾给药。含有FIX化合物的药物也适用于经皮肤给药,如无针注射或离子导入疗法,或经粘膜给药,如经口腔粘膜给药。
定义
“因子IX”或“FIX”在本文中指的是人血浆因子IX糖蛋白,它是内原性凝血途径的一员,是凝血过程必需的。应当理解,该定义包括天然和重组形式的人血浆因子IX糖蛋白。除非另有规定或说明,这里所说的因子IX是指任何在凝血过程中发挥正常作用的有功能的人因子IX蛋白分子,包括任何片段,类似物及其衍生物等。
“天然FIX”指的是SEQ ID NO:1中给出的人FIX分子全长。根据SEQ ID NO:1对氨基酸残基位置进行编号,氮末端的第一个氨基酸残基编号为1,依次类推。
术语“类似物”指的是含有SEQ ID NO:1中氨基酸序列的因子FIX,其中母蛋白的一个或多个氨基酸残基被其他氨基酸残基取代,或一个或多个氨基酸残基被去除,或一个或多个氨基酸残基***母蛋白中,或一个或多个氨基酸残基加入母蛋白中。这个增加可能发生在母蛋白的N-末端、C-末端或两者都有。这种定义下的“类似物”,其活化型仍具有FIX的活性。在实施方案中,变异体的氨基酸序列与SEQID NO:1中氨基酸序列的同一性分别达到70%,80%,90%和95%。本文中提及的特异位置均指与SEQ ID NO:1中相应的位置。
除非另有说明,因子IX结构域包括以下氨基酸残基:谷氨酸结构域,包括从残基Tyr1到残基Lys43的区域;EGF1结构域,包括从残基Gln44到残基Leu84的区域;EGF2结构域,包括从残基Asp85到残基Arg145的区域;激活肽结构域,包括从残基Ala146到残基Arg180的区域;蛋白酶结构域,包括从残基Val181到残基Thr414的区域。轻链是指包括谷氨酸结构域,EGF1和EGF2结构域在内的区域,而重链是指蛋白酶结构域。
“FIX半寿期”是指因子IX在血循环中的半寿期,是本领域的技术人员采用已知的标准程序,根据药代动力学,对人或动物如老鼠进行测量得到的。
“FIX活性”或“FIX的生物活性”的定义为,在血液凝固中发挥作用的能力,包括在活化血小板表面与FVIIIa相互作用,激活FX成FXa,并促进血凝块形成。这种活性可以在体外通过凝血实验测定,如McCarthy等,Thromb Haemost.2002May;87(5):824-30中讲述的方法,也可以用其它本领域的技术人员已知的方法测定。
“延长型FIX”是指FIX化合物,与天然的人FIX相比,其给药后在患者体内的循环时间延长。
术语“***型氨基酸残基”包括两种,一种是取代天然FIX分子中天然氨基酸残基的***型氨基酸残基,该氨基酸残基通常不会出现在该位点;另一种是在天然人FIX分子中新***的氨基酸残基。这个新***的氨基酸残基可以在两个原氨基酸残基中间,也可以在天然FIX分子的N-末端或C-末端。
术语“聚乙二醇化FIX”指的是结合PEG分子的FIX。“半胱氨酸聚乙二醇化FIX”指的是含有与FIX分子中外源性半胱氨酸残基巯基结合的PEG分子的FIX。
本文用到的氨基酸取代的术语如下:第一个字母代表出现在人FVIII中的天然氨基酸残基。后面的数字代表氨基酸残基在人FIX中的位置。第二个字母代表取代天然氨基酸残基的不同氨基酸残基。如E162C,指的是人FIX第162位的赖氨酸残基被半胱氨酸残基取代。
在本文中,使用三个字母或一个字母的氨基酸残基传统简称形式,如表2所示。除非有特别说明,本文所提到的氨基酸残基都指左旋氨基酸残基。此外,除非另有说明多肽氨基酸残基序列的左右两端分别是指N-末端和C-末端。
表2:氨基酸残基的简称:
术语“低分子量硫醇-结合(RS-Cys)形式”和类似的术语指的是所涉及的蛋白质中半胱氨酸残基的巯基与含巯基的化合物结合,其中该化合物的分子量小于500Da。这类化合物包括谷胱苷肽,γ-谷氨酰半胱氨酸,半胱氨酰甘氨酸,半胱氨酸,N-乙酰半胱氨酸,半胱胺等。
术语“活化型”指的是能够发挥所需作用的蛋白质形态,例如催化剂(酶),酶原,或辅助因子等。“活化型”有时也被称为“正确折叠形态”。
蛋白质通常是“工程化”多肽,与天然蛋白相比至少包含一个非天然半胱氨酸残基。这种“工程化”多肽优先采用重组技术制备,这种技术是本领域的技术人员所熟知的,参见WO 02/077218 A1和WO01/58935 A2。
本文引用的所有参考资料包括出版物,专利申请和专利的全部内容均通过引用结合到本文中,正如每一份参考资料均单独并特别的通过引用结合并在本文中列出其全部内容。
本文使用的所有标题和副标题都只为方便,无论如何都不应被理解为限制发明。
本文提供的任何以及所有实例或者示例性语言(例如,“如”)只是为了更好地阐述本发明,除非另有声明,并不限制发明的范围。本说明书中的语言不应理解为指明任何对本发明的实施非常必要的未声明要素。
本文引用并整合专利文献只是为了方便,并不反映任何针对专利文献合法性、专利性或执行性的观点。
本发明包括附属权利要求中所列主题的所有修改版和等价物,是法律所允许的。
本发明的实施方案:
1.循环半寿期延长的FIX类似物,其中在位点44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
2.实施方案1的FIX类似物,其中在位点44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80或84的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
3.实施方案1的FIX类似物,其中在位点87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141或142的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
4.实施方案1的FIX类似物,其中在位点185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
5.实施方案1的FIX类似物,其中在位点146-180的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
6.实施方案1的FIX类似物,其中在选自位点155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176或177的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
7.实施方案1的FIX类似物,其中在选自位点160、161、162、163、164、165和166的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
8.实施方案7的FIX类似物,其中E162位的氨基酸残基被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
9.循环半寿期延长的FIX类似物,其中至少一个半胱氨酸残基附加在C-末端T415上,该半胱氨酸残基与化学基团结合,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
10.上述任一实施方案的FIX类似物,其中化学基团选自聚乙二醇(PEG)。
11.实施方案10的FIX类似物,其中聚乙二醇的平均分子量为500-100,000,例如1000-75,000或2,000-60,000。
12.上述任一实施方案的FIX类似物,其中类似物的循环半寿期至少为野生型FIX的1.5倍。
13.上述任一实施方案的FIX类似物,用凝血实验测定时,其中类似物的生物活性至少为野生型的20%。
14.一种制备上述任一实施方案的FIX类似物的方法,包括:a)选择性还原工程化FIX多肽,该多肽在选自44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415之一的位点至少包括一个非天然半胱氨酸残基,其通过二硫键与低分子量硫醇(RS-CYS)结合,方法是使低分子量硫醇结合的FIX与包含氧化还原缓冲体系的混合物反应;b)与之同时或随后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
15.实施方案14的方法,其中氧化还原缓冲体系包括含有还原型和氧化型谷胱甘肽和谷氧还蛋白的混合物。
16.一种制备实施方案1-13中任一方案的FIX类似物的方法,包括:a)选择性还原工程化FIX多肽,该多肽在选自44、46、47、50、53、57、66、67、68、70、72、74、80、84、87、89、90、91、94、100、101、102、103、104、105、106、108、113、116、119、120、121、123、125、129、138、140、141、142、146-180、185、186、188、189、201、202、203、224、225、228、239、240、241、243、247、249、252、257、260、261、262、263、265、277、280、314、316、318、321、341、372、374、391、392、406、410、413或415之一的位点至少包括一个非天然半胱氨酸残基,其通过二硫键与低分子量硫醇(RS-CYS)结合,方法是使低分子量硫醇结合的FIX与包含三芳基膦3,3’,3”-三磺酸化合物的混合物反应;b)与之同时或随后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
17.实施方案14-16的方法,其中化学基团选自聚乙二醇(PEG).
18.实施方案17的方法,其中化学基团是聚乙二醇,尤其是平均分子量为500-100,000,例如1000-75,000或2,000-60,000的PEG。
19.用于血友病患者治疗的药物制剂,包含有效治疗剂量的实施方案1-13的FIX类似物和药学上可接受的载体。
20.一种治疗血友病患者的方法,包括给予患者有效治疗剂量的实施方案1-13中任一方案的FIX类似物和药学上可接受的载体。
21.实施方案20的方法,其中治疗包括每周至少一次的治疗。
22.实施方案21的方法,其中治疗包括每周只进行一次的治疗。
实施例
下面实例中使用的氨基酸残基取代的术语如下:第一个字母代表天然出现在SEQ ID NO:1所列位置里氨基酸残基。随后的数字代表此氨基酸残基在SEQ ID NO:1中的位置。第二个字母代表取代天然氨基酸残基的不同氨基酸残基。例如因子IX E162C,指的是SEQ ID No:1中162位的谷氨酸残基被半胱氨酸残基取代
原料-还原型和氧化型谷胱甘肽(分别是GSH和GSSG)购自Sigma公司。PEG5k-马来酰亚胺(2E2M0H01),PEG20k-马来酰亚胺(2E2M0P01),PEG40k-马来酰亚胺(2D3Y0T01)购自Nektar Therapeutics(Huntsville,AL)公司。其它所有化学物都是分析等级或更好的。
浓度测定-储存液中GSSG的浓度根据248nm处的吸光度测定,消光系数为381M-1cm-1(Chau和Nelson,1991)。GSH的浓度用Ellman’s试剂(5,5’-二硫双(2-硝基苯甲酸))测定,消光系数为14150M-1cm-1,14150M-1cm-1是2-硝基-5-硝基苯甲酸在412nm处的摩尔消光系数(Riddles等,1979)。
谷氧还蛋白的克隆和表达-编码埃希氏菌属大肠杆菌谷氧还蛋白2序列(Grx2)的DNA用耐热高保真PCR***(罗氏诊断公司,Indianapolis,IN),按照厂商的说明进行PCR扩增,其引物对oHOJ98-f/oHOJ98含有侧面NdeI和XhoI两个限制性酶切位点(引物序列在表1中列出)。PCR反应的基因组模板DNA按照标准程序从E.coli中提取而来(Grimberg等,1989)。纯化的PCR产物用NdeI和XhoI酶切,然后与pET-24a(+)(Novagen)连接构建pHOJ294。由于载体含有终止密码子,基因扩增的延长反应从3’载体端开始,编码的C-末端含有LEHHHHHH亲和标签。DNA测序识别正确的克隆。
基因表达时,294质粒被导入化学感受态细胞BL21(DE3)(Stratagene,La Jolla,CA)。培养过夜的新鲜转化菌株接种到500ml、含30μg/ml卡那霉素的TB培养基(Sambrook等,1989)中,初始OD600为0.02。在三角瓶中,37℃,230rpm培养至对数生长中期(OD600 3-4),温度降低至25℃,0.1mM的异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。过夜培养,离心收集细胞,50ml细菌裂解液(50mM磷酸钾,300mM氯化钠,pH 8.0)重悬细胞,反复三次冻融裂解细胞。细菌裂解液平衡20ml Ni-NTA琼脂糖凝胶柱(Qiagen GmbH,Hilden,Germany),然后将细菌裂解产物过琼脂糖凝胶柱,5ml/min。细菌裂解液流洗,含0-200m线性梯度咪唑的细菌裂解液洗脱结合蛋白。收集处于峰值的部分,20mM二硫苏糖醇处理20分钟,50mM Tris-HCl,2mM EDTA,pH 8.0溶液中透析。-80℃储存,SDS-PAGE电泳判断其纯度大于90%。280nm处吸光度计算浓度,消光系数为21740M-1cm-1。
构建编码因子IX和因子IX E162C和因子IX 416C突变体的DNA-
分别编码因子IX E162C和因子IX 416C的质粒pHOJ338和pHOJ358的构建方法是,使用定点突变试剂盒,引物对oHOJ137-f/oHOJ137-r和oHOJ155-f/oHOJ155-r(见表1)作为模板,按照厂商的说明书(Stratagene,La Jolla,CA)进行构建。DNA测序识别所有正确的克隆序列。
因子IX及其突变体的纯化-因子IX及其突变体按照Arruda等(2001)Blood,97,130-138中讲述的方法纯化,此外,收集合有因子IX的片段(Cys突变体),50mM HEPES,100mM NaCl,10mM CaCl2,pH7.0溶液中透析,-80℃储存。
PEG-马来酰亚胺修饰FIX Cys突变体-选择性还原步骤包括:4.8mg FIX Cys突变体,在含0.5mM GSH,20μM GSSG,和10μMGrx2,总体积为4.4ml的50mM HEPES,100mM NaCl,10mM CaCl2,pH 7.0缓冲液中,30℃孵育5小时。随后,加入终浓度为0.8mM的PEG5k-马来酰亚胺,PEG20k-马来酰亚胺或PEG40k-马来酰亚胺(溶于水中)选择性修饰生成的游离硫醇。室温,15分钟,烷化硫醇和0.5mM半胱氨酸发生退火反应。加入含过量钙离子(终浓度20mM)的EDTA,将所有物质加入经缓冲液A(50mM HEPES,100mM NaCl,1mM EDTA,pH 7.0)平衡的1ml HiTrap Q FF(Amersham Biosciences,GE Healthcare)柱中,捕获FIX Cys突变体。缓冲液A流洗,缓冲液B加入安装在HiTrap柱前面的HiLoad Superdex 200 16/60pg柱(Amersham Biosciences)中,洗脱结合蛋白(10mM GlyGly,150mMNaCl,10mM CaCl2,0.01%Tween 80,pH 7.0)。流速1ml/min,分离聚乙二醇化和非聚乙二醇化的蛋白,并测定280nm处的吸光度。峰值处含聚乙二醇化的FIX Cys突变体,收集,-80℃储存。
表1
用于质粒构建的DNA寡核苷酸
参考文献
Begbie M.E.,Mamdani A.,Gataiance S.,Eltringham-Smith L.J.,Bhakta V.,Hortelano G.,和Sheffield W.P.(2005)活化肽结构域在控制血友病B小鼠血液中因子IX水平中的重要作用,Thromb Haemost94,1138-1147。
Brandstetter H,Bauer M,Huber R,Lollar P,Bode W(1995)凝血因子IXa的X射线结构:与Xase活性和血友病B有关的活性位点和模块结构,PNAS 92,9796-9800。
Chau,M.H.和Nelson,J.W.(1991).通过高效液相色谱直接测量谷胱甘肽和二硫代苏糖醇之间的平衡,FEBS Lett.291,296-298。
Fernandes,A.P.和Holmgren,A.(2004)谷氧还蛋白:谷胱甘肽依赖型氧化还原酶,其功能远超简单的硫氧还蛋白备份***,Antioxid.Redox.Signal.,6,63-74。
Gilbert,H.F.(1995),硫醇/二硫化物交换平衡和二硫键稳定性,Methods Enzymol.251,8-28。
Grant,C.(2001),小型综述:谷胱甘肽/谷氧还蛋白和硫氧还蛋白***在酵母生长和应激反应中的作用,Mol.Microbiol.39,533-541。
Grimberg,J.,Maguire,S.,和Belluscio,L.(1989),制备质粒和染色体大肠杆菌DNA的简单方法,Nucleic Acids Res 17,8893。
Holmgren,A.,F.(1995),谷氧还蛋白,Method Enzymol.252,283-292。
Hoffman,C.S.和Winston,F.(1987),10分钟DNA制备,有效释放用于转化大肠杆菌的自体质粒,Gene 57,267-272。
Hoffman M.和Monroe D.M.,III(2001)基于细胞的止血模型,Thromb Haemost 85,958-965。
Hopfner K.P.,Lang A.,Karcher A.,Sichler K.,Kopetzki E.,Brandstetter H.,Huber R.,Bode W.,Engh R.A.(1999)凝血因子IXa:Tyr99的松弛构象阻断底物结合,Structure with Folding&design.7,989-96。
Loferer,H.,Wunderlich,M.,Hennecke,H.,和Glockshuber,R.(1995),与胞质硫氧还蛋白细胞,暴露于周质的细菌硫氧还蛋白样蛋白具有氧化还原特性,J.Biol.Chem.270,26178-26183。
Luikenhuis,S.,Perrone,G.,Dawes,I.W.,和Grant,C.M.(1998).酿酒酵母含有两个谷氧还蛋白基因,其为抗活性氧所需,Mol.Biol.Cell9,1081-1091。
Lundberg,M.,Johansson,C.,Chandra,J.,Enoksson,M.,Jacobsson,G.,Ljung,J.,Johansson,M.,和Holmgren,A.(2001).具有线粒体和核同种型的新的人谷氧还蛋白(Grx2)的克隆和表达,J Biol Chem 276,26269-26275。
McCarthy等(2002),在动脉内和皮下施用给狗和猕猴之后重组因子IX的药代动力学,Thromb Haemost,87(5):824-30。
Rodriguez-Manzaneque,M.T.,Ros,J.,Cabiscol,E.,Sorribas,A.,和Herrero,E.(1999),Grx5谷氧还蛋白在酿酒酵母抗蛋白氧化损伤中起关键作用,Mol Cell Biol 19,8180-8190。
Oe,T.,Ohyagi,T.,Naganuma,A.(1998)通过高效液相色谱用荧光检测测定γ-谷氨酰谷胱甘肽和其它低分子量硫醇化合物,J.Chrom.B,708,285-289。
Ostergaard,H.,Tachibana,C.,和Winther,J.R.(2004).在真核细胞胞液中监测二硫键形成,J Cell Biol 166,337-345。
Padilla,C.A.,Martinez-Galisteo,E.,Barcena,J.A.,Spyrou,G.,和Holmgren,A.(1995),从胎盘纯化人谷氧还蛋白,其氨基酸序列、结构比较和cDNA克隆,Eur J Biochem 227,27-34。
Riddles,P.W.,Blakeley,R.L.,和Zerner,B.(1979),Ellman试剂:5,5′-二硫代二(2-硝基安息香酸),重新检查,Anal.Biochem.94,75-81。
Sambrook,J.,Fritsch,E.F.,和Maniatis,T.(1989),分子克隆实验指南.(冷泉港,NY:冷泉港实验室)。
Schmidt A.E.和Bajaj S.P.(2003)因子IX和因子IXa的结构功能关系,Trends Cardiovasc Med 13,39-45。
Takahashi,N.和Creighton,T.E.(1996),大肠杆菌硫氧还蛋白活性位点半胱氨酸残基的反应性和离子化,Biochemistry 35,8342-8353。
Wang,E.C.W.,Hung,S.-H.,Cahoon,M.,Hedstrom,L.(1997)Cys191-Cys220二硫键在胰蛋白酶中的作用:工程化底物特异性的新目标,Protein Engineering,10,405-411。
Vlamis-Gardikas,A.,Aslund,F.,Spyrou,G.,Bergman,T.,和Holmgren,A.(1997).来自大肠杆菌的非典型谷氧还蛋白-谷氧还蛋白2的克隆、过表达和表征,J.Biol.Chem.272,11236-11243。
Yang,Y.,Jao,S.,Nanduri,S.,Starke,D.W.,Mieyal,J.J.,和Qin,J.(1998).人硫醇转移酶(谷氧还蛋白)C7S,C25S,C78S,C82S突变体的反应性,其谷胱甘酰混合二硫化物中间体反映催化特异性,Biochemistry 37,17145-17156。
Claims (14)
1.循环半寿期延长的FIX类似物,其中在位点146-180的天然氨基酸残基中至少有一个被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
2.权利要求1的FIX类似物,其中E162位的氨基酸残基被结合化学基团的半胱氨酸残基取代,所述化学基团使得FIX多肽的分子量增加。
3. 上述任一权利要求的FIX类似物,其中化学基团选自聚乙二醇(PEG)。
4. 权利要求3的FIX类似物,其中聚乙二醇的平均分子量为500-100,000,例如1000-75,000或2,000-60,000。
5. 上述任一权利要求的FIX类似物,其中类似物的循环半寿期至少为野生型FIX的1.5倍。
6. 上述任一权利要求的FIX类似物,当用凝血实验测定时,其中类似物的生物活性至少为野生型FIX的20%。
7. 一种制备上述任一权利要求的FIX类似物的方法,包括:a)选择性还原工程化FIX多肽,该多肽在选自146-180的位点至少包括一个非天然半胱氨酸,其通过二硫键与低分子量硫醇(RS-CYS)结合,方法是使低分子量硫醇结合的FIX与包含氧化还原缓冲体系的混合物反应;b)与之同时或随后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
8. 一种制备权利要求1-6中任一权项的FIX类似物的方法,其包括:a)选择性还原工程化FIX多肽,该多肽在选自146-180的位点至少包括一个非天然半胱氨酸,其通过二硫键与低分子量硫醇(RS-CYS)结合,方法是使低分子量硫醇结合的FIX与包含三芳基膦-3,3’,3’’-三磺酸化合物的混合物反应;b)与之同时或随后,将至少一个选择性还原的半胱氨酸(HS-Cys)部分与化学基团结合。
9. 权利要求7-8的方法,其中化学基团选自聚乙二醇(PEG)。
10. 权利要求9的方法,其中化学基团是聚乙二醇,尤其是平均分子量为500-100,000,例如1000-75,000或2,000-60,000的PEG。
11. 一种治疗血友病患者的药物制剂,其包含有效治疗剂量的权利要求1-6的FIX类似物和药学上可接受的载体。
12. 有效治疗剂量的权利要求1-6中任一项FIX类似物和药学上可接受的载体在制备治疗血友病患者的药物中的用途。
13. 权利要求12的用途,其中治疗包括每周至少一次的治疗。
14. 权利要求13的用途,其中治疗包括每周只进行一次的治疗。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP06114492.9 | 2006-05-24 | ||
EP06114492 | 2006-05-24 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2007800190907A Division CN101484576A (zh) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104593348A true CN104593348A (zh) | 2015-05-06 |
Family
ID=37441780
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510017264.2A Withdrawn CN104593348A (zh) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 |
CNA2007800190907A Pending CN101484576A (zh) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA2007800190907A Pending CN101484576A (zh) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20090252720A1 (zh) |
EP (2) | EP2213733A3 (zh) |
JP (2) | JP2009537609A (zh) |
KR (1) | KR20090013816A (zh) |
CN (2) | CN104593348A (zh) |
AU (1) | AU2007253264A1 (zh) |
BR (1) | BRPI0712008A2 (zh) |
CA (1) | CA2653154A1 (zh) |
MX (1) | MX2008014685A (zh) |
RU (1) | RU2008145084A (zh) |
WO (1) | WO2007135182A2 (zh) |
Families Citing this family (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7173003B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-02-06 | Neose Technologies, Inc. | Granulocyte colony stimulating factor: remodeling and glycoconjugation of G-CSF |
US8008252B2 (en) | 2001-10-10 | 2011-08-30 | Novo Nordisk A/S | Factor VII: remodeling and glycoconjugation of Factor VII |
US7214660B2 (en) | 2001-10-10 | 2007-05-08 | Neose Technologies, Inc. | Erythropoietin: remodeling and glycoconjugation of erythropoietin |
US7157277B2 (en) * | 2001-11-28 | 2007-01-02 | Neose Technologies, Inc. | Factor VIII remodeling and glycoconjugation of Factor VIII |
US7795210B2 (en) | 2001-10-10 | 2010-09-14 | Novo Nordisk A/S | Protein remodeling methods and proteins/peptides produced by the methods |
DE60336555D1 (de) | 2002-06-21 | 2011-05-12 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Pegylierte glykoformen von faktor vii |
KR20060003862A (ko) | 2003-03-14 | 2006-01-11 | 네오스 테크놀로지스, 인크. | 수용성분기폴리머 및 그 접합체 |
MXPA05010773A (es) | 2003-04-09 | 2005-12-12 | Neose Technologies Inc | Metodos de glicopegilacion y proteinas/peptidos producidos por los metodos. |
US8791070B2 (en) | 2003-04-09 | 2014-07-29 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated factor IX |
EP1624847B1 (en) | 2003-05-09 | 2012-01-04 | BioGeneriX AG | Compositions and methods for the preparation of human growth hormone glycosylation mutants |
WO2005012484A2 (en) | 2003-07-25 | 2005-02-10 | Neose Technologies, Inc. | Antibody-toxin conjugates |
US8633157B2 (en) | 2003-11-24 | 2014-01-21 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin |
US7842661B2 (en) | 2003-11-24 | 2010-11-30 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated erythropoietin formulations |
US20080305992A1 (en) | 2003-11-24 | 2008-12-11 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated erythropoietin |
US20060040856A1 (en) | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
US7956032B2 (en) | 2003-12-03 | 2011-06-07 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
BRPI0506741A (pt) | 2004-01-08 | 2007-05-15 | Neose Technologies Inc | glicosilação de peptìdeos ligados a o |
US20080300173A1 (en) | 2004-07-13 | 2008-12-04 | Defrees Shawn | Branched Peg Remodeling and Glycosylation of Glucagon-Like Peptides-1 [Glp-1] |
US8268967B2 (en) | 2004-09-10 | 2012-09-18 | Novo Nordisk A/S | Glycopegylated interferon α |
JP5948627B2 (ja) | 2004-10-29 | 2016-07-20 | レイショファーム ゲーエムベーハー | 線維芽細胞成長因子(fgf)のリモデリングと糖質ペグ化 |
EP1858543B1 (en) | 2005-01-10 | 2013-11-27 | BioGeneriX AG | Glycopegylated granulocyte colony stimulating factor |
US20070154992A1 (en) | 2005-04-08 | 2007-07-05 | Neose Technologies, Inc. | Compositions and methods for the preparation of protease resistant human growth hormone glycosylation mutants |
JP5216580B2 (ja) | 2005-05-25 | 2013-06-19 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | グリコペグ化第ix因子 |
EP1893632B1 (en) * | 2005-06-17 | 2015-08-12 | Novo Nordisk Health Care AG | Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine |
US20070105755A1 (en) | 2005-10-26 | 2007-05-10 | Neose Technologies, Inc. | One pot desialylation and glycopegylation of therapeutic peptides |
US20090048440A1 (en) | 2005-11-03 | 2009-02-19 | Neose Technologies, Inc. | Nucleotide Sugar Purification Using Membranes |
US8383388B2 (en) | 2006-06-19 | 2013-02-26 | Catalyst Biosciences, Inc. | Modified coagulation factor IX polypeptides and use thereof for treatment |
CN101516388B (zh) | 2006-07-21 | 2012-10-31 | 诺和诺德公司 | 通过o-联糖基化序列的肽的糖基化 |
EP2054521A4 (en) | 2006-10-03 | 2012-12-19 | Novo Nordisk As | METHODS OF PURIFYING CONJUGATES OF POLYPEPTIDES |
RS52845B (en) | 2007-04-03 | 2013-12-31 | Biogenerix Ag | TREATMENT PROCEDURES USING GLYCOPEGILATED G-CSF |
US9493499B2 (en) | 2007-06-12 | 2016-11-15 | Novo Nordisk A/S | Process for the production of purified cytidinemonophosphate-sialic acid-polyalkylene oxide (CMP-SA-PEG) as modified nucleotide sugars via anion exchange chromatography |
US8207112B2 (en) | 2007-08-29 | 2012-06-26 | Biogenerix Ag | Liquid formulation of G-CSF conjugate |
EP2257311B1 (en) | 2008-02-27 | 2014-04-16 | Novo Nordisk A/S | Conjugated factor viii molecules |
JP2011517950A (ja) * | 2008-04-16 | 2011-06-23 | バイエル・ヘルスケア・エルエルシー | 第ix因子の部位特異的修飾 |
CN102046205A (zh) * | 2008-04-24 | 2011-05-04 | 凯尔特药物Peg有限公司 | 具有延长的半衰期的因子ix缀合物 |
DK2337849T3 (en) | 2008-09-15 | 2018-10-01 | Uniqure Biopharma B V | FACTOR IX POLYPEPTIME MUTANT, APPLICATIONS THEREOF AND METHOD OF PRODUCING THEREOF |
KR20230156435A (ko) | 2010-07-09 | 2023-11-14 | 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. | 인자 ix 폴리펩티드 및 이들의 사용 방법 |
TWI595004B (zh) | 2010-11-03 | 2017-08-11 | 介控生化科技公司 | 經修飾之第九因子多胜肽及其用途 |
WO2014052490A1 (en) | 2012-09-25 | 2014-04-03 | Biogen Idec Ma Inc. | Methods of using fix polypeptides |
EP2968498A4 (en) | 2013-03-15 | 2016-09-07 | Biogen Ma Inc | PREPARATIONS CONTAINING FACTOR IX POLYPEPTIDE |
GB201420139D0 (en) | 2014-11-12 | 2014-12-24 | Ucl Business Plc | Factor IX gene therapy |
US10494661B2 (en) | 2015-01-27 | 2019-12-03 | Bgi Shenzhen | Stabilizer for preserving biological samples |
JP7181855B2 (ja) * | 2016-07-27 | 2022-12-01 | ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィア | 第ix因子の機能を調節するための組成物及び方法 |
US11491212B1 (en) | 2017-09-27 | 2022-11-08 | Catalyst Biosciences, Inc. | Subcutaneous administration of modified factor IX polypeptides and treatment of hemophilia B |
AU2018366110A1 (en) | 2017-11-07 | 2020-06-04 | Rani Therapeutics, Llc | Clotting factor preparations for delivery into tissue of the intestinal tract using a swallowable drug delivery device |
US10842885B2 (en) | 2018-08-20 | 2020-11-24 | Ucl Business Ltd | Factor IX encoding nucleotides |
CN112175088B (zh) | 2019-07-02 | 2023-03-28 | 江苏晟斯生物制药有限公司 | 改进的fix融合蛋白、缀合物及其应用 |
WO2021154414A2 (en) | 2020-01-29 | 2021-08-05 | Catalyst Biosciences, Inc. | Gene therapy for hemophilia b with a chimeric aav capsid vector encoding modified factor ix polypeptides |
Family Cites Families (72)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4713339A (en) | 1983-01-19 | 1987-12-15 | Genentech, Inc. | Polycistronic expression vector construction |
EP0154316B1 (en) | 1984-03-06 | 1989-09-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified lymphokine and production thereof |
GB8430252D0 (en) | 1984-11-30 | 1985-01-09 | Beecham Group Plc | Compounds |
US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
JP2524586B2 (ja) | 1985-06-26 | 1996-08-14 | シタス コーポレイション | ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化 |
US4847325A (en) | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
GB8824591D0 (en) | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
ATE135370T1 (de) | 1988-12-22 | 1996-03-15 | Kirin Amgen Inc | Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor |
US4902502A (en) | 1989-01-23 | 1990-02-20 | Cetus Corporation | Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate |
EP0893439B1 (en) | 1989-04-19 | 2005-07-27 | Enzon, Inc. | A process for forming a modified polypeptide comprising a polypeptide and a polyalkylene oxide |
US5122614A (en) | 1989-04-19 | 1992-06-16 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
US5166322A (en) * | 1989-04-21 | 1992-11-24 | Genetics Institute | Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof |
ATE136315T1 (de) | 1989-05-27 | 1996-04-15 | Sumitomo Pharma | Verfahren für die herstellung von polyethylenglykolderivate und modifizierte proteine. |
US5219564A (en) | 1990-07-06 | 1993-06-15 | Enzon, Inc. | Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon |
US5766897A (en) * | 1990-06-21 | 1998-06-16 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Cysteine-pegylated proteins |
EP0513332A4 (en) | 1990-11-14 | 1993-03-17 | Cargill, Incorporated | Conjugates of poly(vinylsaccharide) with proteins for the stabilization of proteins |
JPH06506217A (ja) | 1991-03-18 | 1994-07-14 | エンゾン,インコーポレーテッド | ポリペプチドまたはグリコポリペプチドとポリマーとのヒドラジン含有結合体 |
US5595732A (en) | 1991-03-25 | 1997-01-21 | Hoffmann-La Roche Inc. | Polyethylene-protein conjugates |
US5281698A (en) | 1991-07-23 | 1994-01-25 | Cetus Oncology Corporation | Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation |
ZA933926B (en) | 1992-06-17 | 1994-01-03 | Amgen Inc | Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules |
WO1994004193A1 (en) | 1992-08-21 | 1994-03-03 | Enzon, Inc. | Novel attachment of polyalkylene oxides to bio-effecting substances |
US5382657A (en) | 1992-08-26 | 1995-01-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Peg-interferon conjugates |
NZ250375A (en) | 1992-12-09 | 1995-07-26 | Ortho Pharma Corp | Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives |
US5298643A (en) | 1992-12-22 | 1994-03-29 | Enzon, Inc. | Aryl imidate activated polyalkylene oxides |
US5349001A (en) | 1993-01-19 | 1994-09-20 | Enzon, Inc. | Cyclic imide thione activated polyalkylene oxides |
US5321095A (en) | 1993-02-02 | 1994-06-14 | Enzon, Inc. | Azlactone activated polyalkylene oxides |
IL104734A0 (en) | 1993-02-15 | 1993-06-10 | Univ Bar Ilan | Bioactive conjugates of cellulose with amino compounds |
WO1994028024A1 (en) | 1993-06-01 | 1994-12-08 | Enzon, Inc. | Carbohydrate-modified polymer conjugates with erythropoietic activity |
US5621039A (en) * | 1993-06-08 | 1997-04-15 | Hallahan; Terrence W. | Factor IX- polymeric conjugates |
WO1995000162A1 (en) | 1993-06-21 | 1995-01-05 | Enzon, Inc. | Site specific synthesis of conjugated peptides |
GB9317618D0 (en) | 1993-08-24 | 1993-10-06 | Royal Free Hosp School Med | Polymer modifications |
US5643575A (en) | 1993-10-27 | 1997-07-01 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5919455A (en) | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5951974A (en) | 1993-11-10 | 1999-09-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates |
ES2174915T3 (es) | 1993-11-10 | 2002-11-16 | Enzon Inc | Productos de conjugacion mejorados de un interferon con un polimero. |
US5446090A (en) | 1993-11-12 | 1995-08-29 | Shearwater Polymers, Inc. | Isolatable, water soluble, and hydrolytically stable active sulfones of poly(ethylene glycol) and related polymers for modification of surfaces and molecules |
US5473034A (en) | 1994-03-18 | 1995-12-05 | Hyogo Prefectural Government | Method for producing protein-synthetic polymer conjugate and said conjugate produced thereby |
US5629384A (en) | 1994-05-17 | 1997-05-13 | Consiglio Nazionale Delle Ricerche | Polymers of N-acryloylmorpholine activated at one end and conjugates with bioactive materials and surfaces |
AU2826495A (en) | 1994-06-02 | 1996-01-04 | Enzon, Inc. | Method of solubilizing substantially water insoluble materials |
US5730990A (en) | 1994-06-24 | 1998-03-24 | Enzon, Inc. | Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates |
US5650234A (en) | 1994-09-09 | 1997-07-22 | Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. | Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces |
US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
CA2204726A1 (en) | 1994-11-09 | 1996-12-27 | Robin E. Offord | Functionalized polymers for site-specific attachment |
US5738846A (en) | 1994-11-10 | 1998-04-14 | Enzon, Inc. | Interferon polymer conjugates and process for preparing the same |
US5932462A (en) | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
WO1996040791A1 (en) | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Novo Nordisk A/S | Modification of polypeptides |
US5672662A (en) | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
US5747639A (en) | 1996-03-06 | 1998-05-05 | Amgen Boulder Inc. | Use of hydrophobic interaction chromatography to purify polyethylene glycols |
TW517067B (en) | 1996-05-31 | 2003-01-11 | Hoffmann La Roche | Interferon conjugates |
KR20000029673A (ko) | 1996-08-02 | 2000-05-25 | 오르토-맥네일 파마슈티칼, 인코퍼레이티드 | 단일의공유결합된n-말단수용성폴리머를갖는폴리펩티드 |
EP0921817B1 (en) | 1997-01-29 | 2001-03-28 | PolyMASC Pharmaceuticals plc | Pegylation process |
CA2288992C (en) | 1997-04-30 | 2012-06-12 | Enzon, Inc. | Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof |
CA2263795C (en) | 1997-06-06 | 2008-02-19 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Chemically modified polypeptides |
US5981709A (en) | 1997-12-19 | 1999-11-09 | Enzon, Inc. | α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same |
US5985263A (en) | 1997-12-19 | 1999-11-16 | Enzon, Inc. | Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates |
ES2224649T3 (es) | 1998-04-28 | 2005-03-01 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Conjugados de poliol-ifn-beta. |
JP2002534119A (ja) * | 1999-01-14 | 2002-10-15 | ボルダー バイオテクノロジー, インコーポレイテッド | 自由システイン残基を有するタンパク質の生産方法 |
ES2325877T3 (es) | 2000-02-11 | 2009-09-23 | Bayer Healthcare Llc | Moleculas de tipo factor vii o viia. |
ATE367398T1 (de) * | 2000-05-16 | 2007-08-15 | Bolder Biotechnology Inc | Verfahren zur rückfaltung von proteinen mit freien cysteinresten |
CA2441580A1 (en) | 2001-03-22 | 2002-10-03 | Novo Nordisk Health Care Ag | Coagulation factor vii derivatives |
US7235638B2 (en) * | 2001-03-22 | 2007-06-26 | Novo Nordisk Healthcare A/G | Coagulation factor VII derivatives |
EP1596887B1 (en) * | 2003-02-26 | 2022-03-23 | Nektar Therapeutics | Polymer-factor viii moiety conjugates |
ES2558102T3 (es) | 2003-05-06 | 2016-02-02 | Biogen Hemophilia Inc. | Proteínas quiméricas del factor de coagulación para el tratamiento de un trastorno hemostático |
TWI353991B (en) | 2003-05-06 | 2011-12-11 | Syntonix Pharmaceuticals Inc | Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids |
US20060040856A1 (en) | 2003-12-03 | 2006-02-23 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated factor IX |
MXPA06015234A (es) * | 2004-06-30 | 2007-11-22 | Nektar Therapeutics Al Corp | Conjugados de fraccion polimero-factor ix. |
ATE469216T1 (de) | 2004-08-17 | 2010-06-15 | Csl Behring Gmbh | Modifizierte vitamin-k-abhängige polypeptide |
LT3130601T (lt) * | 2004-11-12 | 2020-09-10 | Bayer Healthcare Llc | Į vietą nukreipta fviii modifikacija |
JP2008534559A (ja) * | 2005-04-01 | 2008-08-28 | ノボ ノルディスク ヘルス ケア アクチェンゲゼルシャフト | 血液凝固fviii類似体 |
JP5216580B2 (ja) * | 2005-05-25 | 2013-06-19 | ノヴォ ノルディスク アー/エス | グリコペグ化第ix因子 |
EP1893632B1 (en) | 2005-06-17 | 2015-08-12 | Novo Nordisk Health Care AG | Selective reduction and derivatization of engineered factor vii proteins comprising at least one non-native cysteine |
US7700734B2 (en) * | 2007-01-09 | 2010-04-20 | Shu-Wha Lin | Recombinant human factor IX and use thereof |
-
2007
- 2007-05-24 AU AU2007253264A patent/AU2007253264A1/en not_active Abandoned
- 2007-05-24 EP EP10156328A patent/EP2213733A3/en not_active Withdrawn
- 2007-05-24 MX MX2008014685A patent/MX2008014685A/es unknown
- 2007-05-24 CN CN201510017264.2A patent/CN104593348A/zh not_active Withdrawn
- 2007-05-24 JP JP2009511525A patent/JP2009537609A/ja not_active Withdrawn
- 2007-05-24 KR KR1020087029651A patent/KR20090013816A/ko not_active Application Discontinuation
- 2007-05-24 CN CNA2007800190907A patent/CN101484576A/zh active Pending
- 2007-05-24 RU RU2008145084/13A patent/RU2008145084A/ru unknown
- 2007-05-24 EP EP07765281A patent/EP2029738A2/en not_active Withdrawn
- 2007-05-24 CA CA002653154A patent/CA2653154A1/en not_active Abandoned
- 2007-05-24 WO PCT/EP2007/055031 patent/WO2007135182A2/en active Application Filing
- 2007-05-24 US US12/302,167 patent/US20090252720A1/en not_active Abandoned
- 2007-05-24 BR BRPI0712008-7A patent/BRPI0712008A2/pt not_active IP Right Cessation
-
2014
- 2014-01-24 JP JP2014011267A patent/JP2014129354A/ja not_active Withdrawn
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
MX2008014685A (es) | 2008-11-27 |
KR20090013816A (ko) | 2009-02-05 |
JP2009537609A (ja) | 2009-10-29 |
CA2653154A1 (en) | 2007-11-29 |
RU2008145084A (ru) | 2010-06-27 |
WO2007135182A3 (en) | 2008-04-03 |
AU2007253264A1 (en) | 2007-11-29 |
WO2007135182A2 (en) | 2007-11-29 |
EP2213733A3 (en) | 2010-12-29 |
CN101484576A (zh) | 2009-07-15 |
EP2029738A2 (en) | 2009-03-04 |
BRPI0712008A2 (pt) | 2012-01-10 |
JP2014129354A (ja) | 2014-07-10 |
EP2213733A2 (en) | 2010-08-04 |
US20090252720A1 (en) | 2009-10-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104593348A (zh) | 具有延长的体内半寿期的因子ix类似物 | |
JP5290753B2 (ja) | 二量体及び多量体FVIIa化合物 | |
RU2396347C2 (ru) | Модифицированные витамин к-зависимые полипептиды | |
AU2010290077C1 (en) | Coagulation factor IX compositions and methods of making and using same | |
JP5335422B2 (ja) | 少なくとも1つの非天然のシステインを含んでいる操作されたタンパク質の選択的な還元および誘導体化 | |
US20080227691A1 (en) | Blood Coagulation FVIII Analogues | |
US20090176967A1 (en) | Conjugation of FVII | |
US20120164130A1 (en) | Modified Factor IX Polypeptides and Uses Thereof | |
JP2011517950A (ja) | 第ix因子の部位特異的修飾 | |
US20110183906A1 (en) | Factor ix conjugates with extended half-lives | |
US20060234935A1 (en) | Mutants of the factor VII epidermal growth factor domain | |
EP3417881A1 (en) | Blood coagulation factor vii and viia derivatives, conjugates and complexes comprising the same, and use thereof | |
US20070207960A1 (en) | Mutants of the factor VII epidermal growth factor domain |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication | ||
WW01 | Invention patent application withdrawn after publication |
Application publication date: 20150506 |