HU227992B1 - Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them - Google Patents

Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them Download PDF

Info

Publication number
HU227992B1
HU227992B1 HU9700959A HUP9700959A HU227992B1 HU 227992 B1 HU227992 B1 HU 227992B1 HU 9700959 A HU9700959 A HU 9700959A HU P9700959 A HUP9700959 A HU P9700959A HU 227992 B1 HU227992 B1 HU 227992B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
conjugate
peg
formula
activity
ifnα
Prior art date
Application number
HU9700959A
Other languages
English (en)
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Alicia Vallejo Palleroni
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=21790006&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=HU227992(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of HU9700959D0 publication Critical patent/HU9700959D0/hu
Publication of HUP9700959A2 publication Critical patent/HUP9700959A2/hu
Publication of HUP9700959A3 publication Critical patent/HUP9700959A3/hu
Publication of HU227992B1 publication Critical patent/HU227992B1/hu

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/555—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Interferon konjugátnmokf eljárás előállításukra, azokat tar talxnazó gyógyászati készítmények és alkalmazásuk
165/1134 * ♦ 4 »'C..K * * *<« * * *** ·»*:♦♦
Az interferon - különösen az interferonba · vírusellenes és búr jánzá se llen.es hatással rendelkező, gyógyászati lag aktív fehérje. ?·.: interferon pl. szőrös sejtleukémia és Kaposi-szarkóma kezelésére alkalmazható, valamint hepatitis ellen is hatékony. A stabilitás és oldhatóság javítása, vala mint az immunogenicitás csökkentése céljából gyógyászatilag aktív fehérjéket - pl. interferont ~ polimer polietiléngllkolhoz (PEG) konjágálhatnak.
A fehérjék gyógyászati biológiai értékesülését gyakran ; rövid plazma felezési idő korlátozza és· ez megakadályozza a maximális klinikai potenciál elérését. Az utóbbi években a BEG-hez konjugált biomolekulák klinikailag hatásos tulajdonságokat mutattak (Tnada et al.: u. Bioaot. and Compatibie Polymers 5, 343 (1990;; Delgado et al.: Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 9, 249 (1992;; Katre, Advanced Drug Delivery Systems 10, 91 (1993; ] .. E tulajdonságok közé tartozik a jobb fizikai és hővel szemben mutatott stabilitás, az enzimes lebomlásra való hajlammal szembeni vé delem, a megnövekedett oldhatóság,· a hosszabb in vivő keringési felezési idő, a csökkent clearance és a hetásnövekedés, Egyes jelentések szerint az eiágazóiáncű PEG konjugátárnoknak ph-vai, hővel és proteoiitikns lebontással szemben mutatott stabilitása, nagyobb, mint a lineáris PEG konjugátumoké [Monfardini et al.: Biccenjugate Chem, 6, 62 (1995)].
Az EP-A 0 400 472 sz, európai közrebocsátás'! iratban le irt eiágazóiáncű PEG-lEEa kenjugáturnékat oly módon állítják elő, hogy a triklőr-s-triazin két klőratomját helyettesítik. Az eljárás azonban komoly hátrányokkal jár (pl. a fehérjemódosítás specifikusságának hiánya, sok enzim inaktiválása é a közbenső termékek toxieitása). A Mcnfartíini C. et al,; A κ5:
branched raonometh-oxypolí (ethylene glycol) fór protein modiiíoatíon, Biccenj ugate Chemistry, Vol, 6, Mo. 1, 62-69. (1995.
január 1.) közleményben elágazoiáncű PEG-származékok, előállításuk és enzim-módosításra való felhasználásuk került ismertetésre. Bár az enzimek és az interferonok egyaránt a fehérjék osztályába tartoznak, biológiai aktivitásuk teljesen eltérő. A szakember az enzimek szakirodaimában leírt ismeretekből nem szerezhetett útmutatást as interferona területen való alkalmazásra, azaz a találmány szerinti PSG-lFMa konjugátumok előállítására.
A BÉG fehérjék további tulajdonságai a csökkentett immunogenícitás és antígenicitás, valamint a kisebb toxicitás. Bizonyos fehérjék FEGírezesének további hatása lehet a csökkentett in vitro aktivitás, amely fokozott ín vivő aktivitással jár együtt. Ezt megfigyeltek G-CSF [Satake-lshíkawa et al.: Ceil Structure and Function 217, 157-160 (1992)], 1L-2 [Katre et al.: Proc, Natl, Acad. Sci. USA 84, 1487 (1987)], TNF-α [Tsutsumi et al,: Jpn. J. Cancer Kés. 8 5, 9 (1994)], IL-6 (Inoue et al.: J. Láb. Clin. Med, 124, 529 (1994)] és CD4-IgG [Chamow et al.: Sioconj, Chem. 5, 133 (1994)] és más fehérjék esetében.
Találmányunk tárgya interferon konjugátumok, eljárás előállításukra, azokat tartalmazó gyógyászati készítmények és alkalmazásuk.
Azt találtuk, hogy interferon esetében a BEGíiezés az in vitro víruséilenes aktivitást csökkenti, azonban a burjánzásellenes aktivitást növeli humán tumor sejtekben. A találmányunk szerinti új BÉG-interferon konjugátumok azonban meglepő módon azzal a tulajdonsággal rendelkeznek, hogy a FSG-ínterférőn búrjánzáseilenes aktivitása nem csupán az interferoné***Χ Φ Φ 4 nál, hanem más PEG-interferon kenjugáturnékénál is sokkal nagyobb. Annak ellenére, hogy a konjugátum búrjánzásellenes aktivitása más PEG-interreróna konjugátumokénái sokkal erősebb, a vírusellenes hatás csökkenése hasonló. Erén túlmenően a találmányunk szerinti PEG interferont? konjugátum nem-immunogén, antitest képződést gyakorlatilag nem idéz elő. Ezrei szemben más PEG interferont konjugátumok antitest képződést váltanak ki .
Találmányunk az .interferont (ΣΕΕα) PEG származékainak új osztályára vonatkozik. A találmányunk szerinti konjugátum az alábbiakban bemutatott módon elágazó PEG szerkezetű. Az elágazőláneú PEG előnye, hogy egyetlen helyhez 2 lineáris PEG molekula csatlakozik, és ezáltal a megkötött PEG tömege megkétszereződik anélkül, hogy többszörös PEGÜezési helyekre lenne szükség.
A találmányunk szerinti eiágazóiáncú PEG interferont konjugátum a módosítatlan. IFNt.-val (azaz hozzá kapcsolt PEG-et nem tartalmazó IFhO; összehasonlítva nagyobb keringési felezési idővel és plazma tartózkodási idővel, csökkentett immunogenícitással, kisebb ciearancel és nagyobb búrjanzáseiienes aktivitással rendelkezik, s ezzel egyidejűleg az in vltro viruselienes hatás csökken. A találmányunk szerinti konjugátum - más FEG-ΐΡΝα konjugátumokkal összehasonlítva - sokkal nagyobb burján-sáséi lenes aktivitást mutat, ez a hatásnövekedés az egyéb jellemzők terén bekövetkezett hatásfokozódásokkai vagy hatáscsökkenésekkel nem. arányos és a találmányunk szerinti konjugátumok immunogenícitást gyakorlatilag nem mutatnak.
A találmányunk szerinti fiziológiailag aktiv PEG-IPEa konjugátum species az (1; általános képletnek felel meg.
«.<»♦ ·> V * * « * **»*
5· * * *
A találmányunk szerinti konjugátumok felhasználási területe az IFba alkalmazásával megegyezik (pl. húrjánzáseilenes alkalmazás). A találmányunk szerinti PEG interferonra kor;jugátumok különösen immunomodulációs rendellenességek, pl. neopiáziás betegségek, mint pl. szőrös sejtleukómia, CML és Kaposi-szarkőma, valamint fertőzéses betegségek kezelésére használhatók, az IFEct-hoz (különösen IFNraPa) hasonlóan. A találmányunk szerinti konjugátumok azonban javított tulajdonságokkal rendelkeznek, beleértve a nagyobb stabilitást, nagyobb oldhatóságot, fokozott keringési felezési időt és a plazma tartózkodási időt. Szén túlmenően a találmányunk szerinti konjugátumok feurjánzáselienes hatása az IFHa aktivitását felülmúlja. A konjugátum esetében - mint már említettük a vírusellenes és búrjánzáselienes hatás meglepő módon szétválik. E tulajdonság különös előnye, hogy a konjugátum valamely kívánt aktivitását fokozza, miközben a nemkívánatos aktivitást csökkenti vagy megszűnteti. Így pl. ha egy nemkívánatos hatás a vírusellenes aktivitással párosul, ezen aktivitás megszüntetése a mellékhatást a burjánzásellenes aktivitás megtartása mellett kiküszöböli.
Ennek megfelelően találmányunk tárgya továbbá hatóanyagként valamely (I) általános képletű vegyüietet vagy sóját tartalmazó gyógyászati készítmény és eljárás ennek előállítására .
A találmány szerinti, betegségek kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyászati készítmények valamely (!) általános képletű interferon konjugátumot és inért gyógyászatilag alkalmas nem-toxikus hordozóanyagokat tartalmaznak. A találmányunk szerinti gyógyászati készítmények kikészítése és adagolása a GláP (Good Medícal Practíoe) előírásainak megfelelően, a kezelendő betegséget, a beteg állapotát, a protein konΛ* «»Χ« Φ» jugátum hatáski fejtéssnek helyét, az adagolás módját, valamint a gyakorló szakember által ismert más tényezőket figyelembevéve történik.
Találmányunk tárgya (!) általános képletű fiziológiailag aktív PEG-IFNö. kongugátárnok (mely képletben.
R és R! jelentése egymástól függetlenül kis szénatomézáinű alkilcsoport;
X jelentése ~bH~ vagy -0- (X az IFXa-moiakuIában levő funkcionális amino- vagy hidroziicsoportok közül legalább az egyik};
n és n! egész szám és összegük 600-1500;
a konjngátumban levő polietiléngiikol egysegek átlagos molekulatömege kb, 26 000 dalion és kb. 66 000 halton közötti érték) .
A PEG-lFNa” kifejezésen pegilezett interferona értendő ,
Az (I) általános képletű konjugátumok elágazó szerkezetűek, mivel a fehérjéhez egyetlen kötésen keresztül két PEG egység kapcsolódik·.
Az n és n' számok összegét oly módon választjuk meg, hogy az (1} általános képletű konjugátum fiziológiai aktivitása a módosítatlan ΙΕΝα. megfelelő aktivitásával egyenértékű, annál nagyobb, vagy kisebb legyen. Az n és n? számok azonosak vagy különbözőek lehetnek; n és n’ a PEG-ben levő etilénglikői egységek számát jelenti. Egyetlen OCH2CH2 csoportból álló EEG egység molekulatömege kb. 4 4 halton. A konjugátum. molekulatömege (az !EG<x molekulatömegét kizárva.) n és n' értékétől függ. Az (!) általános képletű konjugátumhan n és n! összege 600-1500 és ez olyan konjogátumnak felel meg, amelyben a PEG egységek átlagos molekulatömege kb. 26 000-66 000 halton, előnyösen 'kb. 35 000-45 000 daiton, különösen előnyösen kb.
000-45 000 daiton; a legelőnyösebb átlagos molekulatömeg 40 000 dalion, n és ni összege előnyösen 300-1200, különösen 350-100Ö, különösen előnyösen kb. 910. n és n! értéke külön-külön 420 vagy 520,- vagy mindkettő értéke 420 vagy 520f vagy mindkettő értéke 955, n és n! aránya előnyösen kb, 0,5-1,5, különösen előnyösen kb, 0,8 és kb. 1,2 közötti érték. A fenti számokkal kapcsolatban megadott kb kifejezés azt jelenti, hogy a szokásos analitikai módszerekkel meghatározott számok környezetében levő ésszerű tartományról van szó.
Előnyösek azok a találmányunk szerinti konjugátumok, amelyekben IFNa jelentése IENa2a; továbbá amelyekben R és R’ jelentése metalcsoport; továbbá amelyekben X jelentése -NH-; továbbá amelyekben n és n! azonos vagy különböző és jelentésük 92.0 vagy 520. A fenti összes értelmezéseknek megfelelő konjugátum különösen előnyös.
R. és Ri jelentése bármely kis szénatomszámű alkilcsoport, azaz 1-6 szénatomos egyenes- vagy eiágazóisncű alkilcsoport (pi. metil-, etil-, ízopropílesöpört stb.). Előnyös a metiiesoport. A két REG csoportban levő R és R* azonos vagy különböző jelentésű lehet.
Az ΙΕΝ-α {Interferona) és IFhoda speciese kifejezésen bármely szokásos forrásból (pl. szövetek, fehérje szintézis, természetes vagy rekombináns sejtekkel végzett sejttenyésztés) származó természetes vagy rekombináns, előnyösen humán fehérjék értendők. A fenti definíció IFNa aktivitást mutató bármely fehérjét (pl. muteinek vagy másképpen mödositott fehérjék) magábanfoglai. Az IFEo; természetes vagy reko>mbináns forrásokból történő előállítása és izolálása jól ismert [Festka, Arch. Biochem. Biophys, 221, 1 (1983)}. Sgv előnyös *
β*
V
4>
** ίίΓΝα az IFNaSa
- ismert módszerekkel nyerhető (Pestka, «' ί : *’♦ *♦*« Κ* X# «« «
X *<*·*
Sci. Ám. 249, 22 11902; ; EP 42 339] ..
Á ta.iáimányunk szerinti .(!} általános képletü fiziológiailag aktív konjugátum IENö. aktivitással rendelkezik. Ezen a kifejezésen az irodalomból ismert különböző tesztek szerint meghatározott bánoely ismert IPNa aktivitás bármely része vagy többszöröse értendő. A találmányunk szerinti konjngátumok iFNa aktivitással rendelkeznek, amely tumorsej lekkel szemben kifejtett burjánzáséilenes aktivitással és vírussal fertőzött sejteken mutatott vírusellenes hatással igazoltató.
Fentiek az ΙΕΒα. ismert aktivi tásai. A taiálmánvunk szerinti konjugatumok fenti hatásai az irodalomból ismert tesztekkel határozhatók meg, ni. az alábbiakban ismertetett módon:
Rubinstein et el.: tó. véről. 31, 7 55 11981.;; Bőrben et al. :
Ganz. Rés. 42, 4 24« «19321 ..
f a.ia.iményun.k tárgyát képezik az olyan Π; általános kémlett konjugátumok, amelyek a módosibatian ΙΕΝα-ηάΙ nagyobb burjánzáséi lenes aktivitást és kisebb viraseiienes aótivrtásF mu t a tna k.
Az ÓI; általános képletö kenjugátumokat oly módon állíthatjuk elő, hogy IFho-t a PEG-t 1dr oxi leseper Írtak összekötő csoporttal történő teaserélésével aktivált PEG-hez ionvaiens kötéssel kapcsolunk. A reagens a ili; általános képletnek felel meg és a EEG íkülönösen a ili; általános képletü E-man Ölte t ο χ 1 - Ρ E G} b - h 1 dr ο x i - s ζ u kei n lm i ö - é s z t e r - s z á r m a z é k a. Ez a reagens szokásos módszerekkel, állítható elő íMonfardlni et al, sápra). A kötődés amid- vagy észter kötésen keresztül tör. ár. 4 Λ * « # fcénik. Egy -sionyös konjugátumban a kötődés amidkö-tésen .keresztül játszódik le :X jelentése -NE- ) ..
Ta1 ármányunk tárgya továbbá eljárás ΪΕΚα burjánzáséi lenes aktivitásának tokozására az IFNa vírusellenes hatásának egyidejű csökkentése mellett oly nődön, hogy ΙΕΝα-t a fenti módon egy Πΐί általános képletű reagenshez kötünk és ily siódon PEG-Írd kenjugátünet képezünk.
X az láda azon kötődési helyét jelenti, amelyen keresztül & (ii) általános képletű PEG reagens az lEda-hoz kovalens kötéssel kapcsoiőöik. A (fi) általános képletű reagensek primer aminocsoporthoz (XK - áh.) kapcsolódnak, pl, lizin vagy az láda N-végcsoportja esetében. X (il) általános képlete reagensek hidroxiIcsoporthoz (XH - Oh) as kapcsolódhatnak.
á találmányunk szerinti eljárást az I. reakoiösémán tüntetjük lei.
A (II; általános képterű reagensben (PEGP-dHuj a iizenhez összesen z 'mono-metoxi PEG lm~PXŰ) lánc kapcsolódik, egy-egy az a- és s-amiaocAoporton. karbamát (uretán) káreseten keresztül és a lizín fcarboxiiesoportját szukoznimihil-észter aktiválja, kot a (11) általános képleté (PEÖP-dHS) vegyüíetet az R helyén kis szénatomszámü alkilcsoportot és a megfelelő n értéket tartalmazó reagensekre adaptált ismert eljárásokkal iPionfardini et al, supra) állítjuk elő. A reagenst a Shearwater Polymers Inc. íhuntsviIle, Aiahama) cégtől szereztük be. X kapott PEG átlagos molekulatömege előnyösen kb. ló- 000 halton, amely a EEGx-GHS reagensben kb. te 00G halton PEG össztömegnek felel meg ímás molekulatömegeket oly módon nyer* * « X ·♦».« *<
hetünk, hogy a (IX) általános képletű reagens előállításánál a szokásos módszerek alkalmazása soréi;, a PEG--S.1kohol kiindulási anyag n értékét változtatjuk).
A. íXX) általános képletű reagenst szokásos módszerekkel konjugáijuk az lüha-hoz. A (Ili általános képletű reagens primer módon az IFNíx (pl. IFfkxza) egy vagy több primer aminacsoportjával reagál (pl. az h-végcsoport és a üzin oldalláncok) és ily módon az IfXg és a lop polimer lánca kozott amidkótes arakul ki. A FSGllezésí reakció a PEG2-NH3 és az I'-'le adott esetben jelenlevő szabad hidroxiiosoportjai (pl. szerin esetében) is lejátszódhat észter kétes kialakítása közben, A reakciómechanizmust a fentiekben, mutatjuk be. ii r sarc re les r rímén ye k m egv ál ászt áss; a. s za kömbe r kö t e le z d t uóá s á hoz tart szik és az alábbiakban részletesen ismertetésre kerülnek. A FEG~reagens és az IFha összekapcsolását enyhén óázérus körülmények kőzett, ad.acscny hőmérsékleten, az (I) általános reptető konjugátum képződéséhez vezető nukleofil hsiyettesitésnek megfelelő körülmények között végezzük el. A fenti rearolömeohanizmusban ezt is bemutatjuk.
A reagensnek az IFha-hoz történő kapcsolását szokásos módszerekkel végezhetják el. Találmányunk szerint bármely kiválasztott molekula tömegű ütőét alkalmazhatók, A reakciókörülményeket oly módon választhatjuk meg, kegy az igényelt ioné agarumban egy reagens kapcsotódjék. Azt az (t; általános köptető kenjrgátrmot, amelyhez csak egyetlen íil' általános képletű reagens kapcsolódik, a. irodáéi táti an ItNa-tcl és az egynél több kapcsolódó reagens molekulát tartalmazó kongugáturnéktól szokásos módszerekkel választhatjuk el. A konjugáturnékat különböző tisztítási módszerekkel (pl. kationcseréio kromatográfia) választhatjuk szét a molekulatömegek különbözőségének hatékony kihasználása útján, A kátioncserélő kromatográfiával kapott frakciók tartalmát a molekulatömeg alapján szokásos módszerekkel (pl. tömegspektroszköpia# SDS-PAGE vagy a molekulaegys-égek molekulatömeg alapján történő szétválasztására ismert más módszerek alapján) azonosíthatjuk. Ezután azonosítjuk azt az (I) általános képletü konjugátumot tartalmazó frakciót, amelyet, a módosítatlan Ι.ΕΝα-tői és az egynél több kapcsolódó reagenst tartalmazó konjogátúrnőktől mentesre tisztítottunk, A (II) általános képlete reagensekből továbbá savas hidrolíziskor reagensenként egy lizin szabadul fel# tehát a lizínek száma jelzi a fehérjéhez kapcsolódó PEGek számát és ily módon a konjugátumhoz kapcsolódó reagens molekulák száma megállapítható.
Találmányunk további részleteit az alábbi példákban ismertetjük. A példákban IFN«2a~t alkalmazunk. A példákban bemutatott módszerek segítségével a PEG-hez más IFd speciesek is konjagaIhatok,
A. rajzok ismertetése .1. ábra; A PEG2~-IEbaaa tumorellenes hatását szdrtelenített egereken vizsgáljuk, amelyekbe szubkutáns úton humán renális A4P3 sejteket fecskendeztünk. Az összes állat a -33. vizsgálati napon szubkutáns úton 2xlö6 humán renális A498 sejt ímplant át úrnőt. kap. A 0. vizsgálati napon a PEG-IFNaza * ♦ kezelést megkezdjük, A PEG2-zPba2a. megadott mennyiségét 130, SO,. 120 megy 300 pg) négy héten ár, belesre egyszer, a tenorral· ellentétes oldalon szubkutáns ütőn fecskendezzük be.
2. ábra: Az iFKaza tumoreiien.es hatását ezőrt-elenitett egereken vizsgáljuk, amelyekbe szebkuiáns úton humán renáiis A«93 sejteket fecskendez tünk. Az. összes állat a -3.3. vizsgálati napon szubkutáns úton 2xilb humán renáiis AáOá sejt impiantátumot kap. A 0. vizsgálati napon az IFOula kezelést megkezdj O.k, Az IFÓaza. megadott mennyiségét (10, 20, 3 0 vagy 100 ng) négy héten át, hetente háromszor, a tumorral ellentétes oldalon szubkutáns úton feoskendezzhk be.
.3. ábra: A PSG2-IFha2a funorelienes aktivitását szűrteienizefz egereken vizsgái juh, amelyekbe szubkutáns úton humán renáiis AC'Hb sejteket .fecskendeztünk. Az összes állat a vizsgálat -25, napján szubkutáns impiantátum alakjában 2x10' humán renáiis AC'mb sejtet kap. A üFG2-lPAü2a· kezei est a vizsgálat 0. napján kezdjük meg. A PE32-la'Noia megadott mennyiséget 030, 60, 120 vagy 306 ggl ©t héten át, hetente egyszer, sznbkutáns úton a tumorral ellentétes oldalon fecskendezzük be.
3. ábra;: Az lFöo.2a tumoreilenes aktivitását szórtéleni tett egereken vizsgáljuk, amelyekbe szubkutáns úton humán renáiis ACRN sejteket fecskendezthnk. Az összes áriát a vizsgákat -25. napján szubkutáns iíspiantátum alakjában 2x10 humán renáirs AChb sejtet kap. Az ilbkrka kezelést a vizsgákat 0. napján kezdjük meg. Az i'FNéla megadott mennyiségét (10,
20, 30 vagy /.Oh gg> ©f héten át, hetente háromszer, ♦ ♦♦ fcX * .♦ »:♦ * * szubkutáns úton a tumorral ellentétes oldalon fecskendezzük be.
.5. ábra: A PEGz- libái a tumoréi lenes: aktivitását szőr telesített egereken határozzak seg, amelyekbe előzetesen szabkutáns úton humán renáils Gáli sejteket implantáitunk. Az összes állat a vizsgálat -15. napján szabkutáns ixzplantátum alakjában Perlő' banán renáils Gtöz sejtet kap. A PEGP-IFNaPa kezelést a 0. napon kezdjük néz. A PEG2-IFNötPa megadott meny nyiségét (30, 60., Izö vagy 3Ő0 ag; öt héten át, hetente egyszer, szabkatána ötön a tumorral ellentétes oldalon fecskendez züt he.
6. ábra: Az ifbaza tumor ellenes aktivitását szár seienzfetr egereken hatazozzot meg., amelyekbe előzetesen szánkatáns hton barnán renáils Gáak sejteket implantáitank. Az összes állat a vizsgálat -lö, napján szahkatáns impiantátum alakjában Pxa.b barnán renáils előz sejtet kap. Az IFbnPa kezelést a 0, napon kezoduk meg. Az IFbo.za megadott meny·· nyiségét 0-0, Pö, 4ő vagy 100 pg; bt héten át, hetente három szór, sznokatáns úton a humorral ellentétes oldalon fecskendezzük ne.
1. példa (11 általános képleta konjagátum. előállítása
Anyagok
Az interberontíba-t ismert móoszerekkei állítjuk eiö í Pestka, zuprab, a baj általános képletü pori éti láng! rkni :PhG; reagenst a Sheataafer Polymers Inc. Ginntsville, Alá; nézted. vásároltuk. A Fraotogeld EMb GM ő50 i5} gyantát íré♦ X * ;··zecskenagyság; 25-4&: μη) az EC Eeperat1ons (Gíbbstown MA.; cégből, szereztük be, A koncentrált (löx)· foszfáttal pufféról! konyhase-oldatot (PBS, pH '7,5: a BioKhittaker (balkersviile, HD: cégtől vásároltuk. A nátr lijn-dodecii-íiauril.;-szulfát/poiiakriladö cél elektroforézls (SBE-PAGE; elözsőntöft géleket és elektroforézis egységeket a KOVEX (San Dlego, CA) cégtől szereztek :e. A PEG konjugátnrioknak az SES-PAGE-r történő fehér jeszrnezésére szolgáló koncentrált gyors színezéket a foton Research Inc. Ckecion, MA) cégtől szereztek be. A LAL eccotoxiü assay kit-eh a Associates of Cape Cod. Inon (hoods colé, HAJ cégtől vásároltuk, A többi felhasznait reagens a beszerezhető legmagasabb ziénőségnek felel cég. A jugniáris kanoulezett patkányokat és a. E2F-) egereket a Charles Elver Cahoratorl.es (hiipington, AA; cég száilicotta.
Kisér 1 eti elgárá.sok
A. Az il) általános képletű koojugácur: kos Mennyiségek ,o en tor z eno e toa rz zz a sa
208 cg (5,2 μοδίί (11) általános képletű reagenst {átlagos se 1 ekul atőneg 4 0 000 dal tón) 50 ng i2, h uraől) IPba-hoz adunk 10 n! iné PH borátfoan (pH 3,0). A végső fehérje : reagens nőlarány 1 : 2.. A. reakciőelegyet 4 C~on z őrén át keverjük. A reakciót oly nódon állítják le, hogy a pM-t légévé t te 1 4 , 5 - re á 11.11 g u k be,
A reakciőelegyet vízzel őö-szeresre hígítjuk, 0,2 μ szűrőn átszűrjük és 21) nlkperc áradást sebességgel 100 ni 25. 2d 5 erű Eractegel EME CM 050 iSj~ei tóhtvtt fennen oszlopra visszük fel. Az oszlopot előzetesen 10 mM asriiőniuo-aoetát♦ 4 « « tsi · pH d/Sí kiegyensúlyoztuk, Az oszlop effluenst 280 ne miiéit i UV abszorpcióval követjük nyojsos. At oszlopot a kiegyensúlyozó pufferrel eddig sossuk, ízig az UV abszorpció az alapvonalra visszatér. Az egynél több iii; általános képlete reagenst tartalmazó PEG-fFN kenj ugátuzio kai 40 oll ansr on bor ~ -aoetáttal ipn 4,5; és az {!> általános képlete kenj agátumt 0.12 M nátríen-kioridóal 40 sál anztónitn-acetát pufferben ele áljuk. Az oszlopon véradó módosítatlan IFN-i a fenti mórét. készített 0, 5 A n.át .rima- klór idea I eluáljuk, Az oszlopot .l,ö 11 nátrinrs~k.1 orickin 1, majd a kiegyensúlyozó pufferrel tör iénö átmosással regeneráljak. Az (1; általános képlete kenje gátnnot tarts ina zó frakciókat öss negyéé f júk, majd ΥΚΙΑ meaúrránnal felszerelt Amisen keverÖS: segfkoncentrátorban kb.
ng/m koncentrációra: öetöményif jú.k.
A tisztításhoz felhasznált Fraetogel 6Ö01S1 tat ioncserélő gyanta hatékonyan s-egköti a FHő-i és a módositaflan ibh-t. Az adszorpolö erőssége a PSUiiesés mértékétől függ. A hcnjngátun kevésbé szorosan kötődik, mint a módosítstlan IFN A FES-IHF oiigomereket 40 rak azzeénium-aeetáttal , és az (lő általános képleté konj:ugáfumot lg 12 M nátrium-klór óddal elváljak. A módosítatlan IFkU-f 0,5 M ná iriom~kloriddai eluáljuk Az összes kOíspozició <ő SU/ng endotozint tartalmaz, A kapott konpozioió sva i {1} általános képleté kenjugatumot tártál” máz és nődetitatlan 1211-tőr mentes.
b . Az r 10 __ á 11aIárioe .képleté konjngátum. nagy mennyiségekben történő elóállitása <»·» » ♦
s. ♦'♦'·»
624 0 ing (155 gmóll (II) általános képletü reagenst iát-tagos mólókulatómeg 4 0 000 öaitonj 63 ni 1 mh sósa-h^n 3 :'C-on oldunk és 1000 ng (52 pmól) interferon 50 mM boráf-püfferrel (pH 9,0) képezett oldatát (125 ni; gyorsan hozzáadjuk, A végső fehérje- : reagens arány 1 : 5 és a reakcióelegy végső koncentrációja 5,5 mg/ni. A reakcióelegyet 2 érán át 4 X-on keverjük. A reakciót oly .sódon állítjuk le, hogy a pH-·: jégecettel 4,5-re állítjuk be.
A reakcióelegyet vízzel 16-szeresre hígítjuk, majd 600 al Fractogel EMD Cd 650(Hb~el töltött oszlopra visszük fel, 1,3 cm/perc lineáris sebességgel. Az oszlopot 20 nM nátríum-aoetáttal (X XS: előzetesen egyensúlyba hoztuk. Az oszlopot előbb ki egyens úlyozó: putfetreX majd 15 mt; nátrium-kloriddal izossuk, a fölös mennyiségű reagens, a melléktermékek és FFe-lrF oligomerek el távoli zása céljából. Az (I) általános képletü konjogá iuzíot 206: rét nátr.ru;n~zioridot tartalmazó kiegyensúlyozó pufíerrel eiuáijnk. Az oszlopon maradó nódosd.tatian interferont 0,05 M nátrium-ki.oridot tartalmazó kiegyensúlyozó putterrel iórrénő mosassad távolítjuk el. Az ezuált X) általános képletü kong ugat úrnőt (0,5-5,5 mg/ml; továbbtOményítjük és diaszűréssel végső kompozícióvá alakítjuk 026 mM nátrinm-aoetát, pH 5,0, 156 ;mk nátrium-kiorbiot tartalmaz}.. Az (1) általános képlett konjugátum. összkitermelése
ÓÖ.....Jó z„
A nagy mennyiségben történő előállítás során nyert no.·· ti tott. FEG-lFb >93 ( (I) általános képletü konj ugátumből áll.
A példa szerint előállított (1) általános képletü konjugátum **♦ >1 átlagos molektl&tömege 62 000 dalion,. «mely magáhanfogia.1 ja az IFNízzs. 19 241 átlagos molekulatömegét és a reagens 43 000 - 45 000 dúc 43 000) átlagos nolekülatömegét2. példa általános képletű konjngátun jellemzése
Fehérje meghatározás A .í'enerje koncénéráélókat oly nődén határosnak rác, hogy
I mg/ml IFdíx2a oldathoz 1,0 ksa érteket alkalmazunk.
SDS~FAGE analízis
A konjugátumot nátr lum-dedeci 1 lauril) -sz'allat/poiiak·-ríiamiő {8-16 p gél eiektroforézissel, redukáló kotΌ.lmÍnyek kőzett, taemmii méószerévei ídature, 227, Oku ;1970)1 elemeztők. A. 8FG-kenj agát unokát tartalmazó SDS-PAGS-t a fehérje színezése eéljáhól gyors színezőanyag felhasználásával; a gyártó cég ókoron Feseatoh Inc. > instrukciói alapjáé fest jók mse.,
Fedőtoxir· s z intek mégha tárezá s a
Az endotoxin szinteket LAh módszerrel, a. gyártó eég instrukciói slagját, határozzuk meg. Az összes készítmény <5 E u / e η o t ο xIn t t a r t au.maz.
3. példa
A.z ; 1 i általános képletű kenj ugátnmok in vi tro hroaktrvitásai
Vitáséi lenes aktivitás, szarvasmarha vese sej fékén .Az h-dula és az LA. céida szerint előáll, itott (I; általános kápiefd konjngátom in vitro vírusellenes aktivitását sejttenyészet hioassay segítségével, vesioslarls stematifis:
vírussal {Rabinstein. et al# supra; fertőzött;. Madin-Darby szarvasmarha vesesejtek íMBEK) felhasználásával határozzuk meg. A vírusellenes aktivitást, valamint a megfelelő maradék aktivitás értékeket a kiindulási 1FN hatásának százalékában az 1. Táblázatban tüntetjük fel.
1. Táblázat
Vírusellenes aktivitás
Minták REG t ípu s Teljes AEG tömeg (kBa; tíz fajlagos UÖOO- aktivitás silóét (E/mg; Maradék aktivi tás(
tóduló 2 , G, z tód iöé
(tó álfa- Eiága- •u 0 1 tó 40 x
dános képlet ü koniu- ·' gátum zoz sózz íö'
in vitro bura á.nzi seileues· aktivitás humán tumorsegtekbeu
Az ín vitro barjánzáseilenes aktivitást humán bandi
íBúrkitt-féle d. .Xuztó Guíiű; í seétekben, Bcrderr és tsai által, leírt
módon határoz Zük tón. Humán Bandi te é.ekei 10· % magzati
szarvasmarha szérummal és 2 tói oiutauinnal {Grand isiand
Biologicals, Grand island, BT; kiegészített Rudi 1540-ben stacioner szuszpenzió tenyészetekben tartunk, A sejteket soreeneiés alapján mikopiazma-mentesnek találtuk. Sej teker tóxlOM 100 pl táptalajban mikrotiter lemezek (Costar, MA; mér védéséi hoz adunk. A mélyedésekhez 100 μ.1 térfogatban különböző koncentrációkban tó'b'-f és az 1A. példa szerint érdélütött Ui űitsisrrr· képletű kon j agátum.ot adunk. A lemezeket 37 'C-on 5 1 széndioxidban 72 órán át ükénél j uk.
A sejteket összegyűjtésük előtt 16 órával 0,25 uCi/méiyeöés H-fimidinneI (New England Nuciear Boston, MA) puizáijukn A sejteket üvegszűrőkon összegyűjtjük és folyadék szóintiiiáoiós számlálón megszámláljuk. Az eredményeket az alábbi képüt segX szegöve1-os gátlásként fejezzük ki.
.-os gátlás - ( (A-3)/A í x 103, ahol
A - cpm a kontrol1-tenyészetben (csak táptarajban inkubált sez re.<; ;
B - cpm a kísérleti táptalajban.
A adóiakat négyszeres ismétlésben vizsgáljuk és a srandard szórás minden esetben 2b '(-nát kisebb. A. kísérletek.
során legalább 2 esetben összehasonlítha tó eredményeket kané IBI és S: konjugátum búr jánzáselienes úszását a 7.
rsi.uazsu.zmtn '..un tét, prk Xeu. !. .io-\:V . az erermenyek áru., mu.eu.. j s.·. <
hogy az Π) álla kanos képleta koujugátuKi az IBtk--el összeba sonütva 23~szor erősebb búrjánzáselienes hatással rendelkezik.
2. Táblázat
In vitro búrjánzásellenes hatás humán baudi.(Búrkitt-féle iimfóxaa; sej tvonaiakban
mur i anzásai lenes hatás ieSÖ Aktivitás-
(ng/ml; növekedés
IPW2a 0,. H Íz
(I) általános képletű kong ugá tűm G,u 32 2 x
. oélda
Far na kok 1 ne ti ka
Nőstény ápragne Danley patkányokba (átlagos testtömeg z40-220 gj sebészeti tton 'uuqaláris kanna leket illés ztunk tus. Az át.latokat kniön-küiöo. tartunk ketrecekben- a patkányok táplálékot és vizet ad. 'Holtam kapnak és 12 órás világos-sétét eiHasokat alkalmazunk. Az étkezés után i~6 érával a iugulárls kannátokét PnS-ei áteblitják. A 0,15--2,2 ml PBS-ei történő átöblités utáni napon 2x10’ egység lEkke-f (0,2-0,4 ma PBO-beH , majd 0.,15-0,.2: ol PBS-t fecskendeznnk be abból a óéiból, hogy a gyógyszer teljes mennyiségét az állatka bemossuk. Ennek megfelelően minden állat ?x;k ΙΕΝσ egység/kg testtömeg· kg det ezt kap.
Vérmintákat 0, 15 és 30 pere elteltével, illetve I, 3, n, 12 ás 24 érával u:: IBP vagy az ki; általános képletű konjagátnm befecskendezése után vesszük le. Minden időpontban az első 0,11-0,2 ml vér elöntése után 0,5 ml vér alignct mintát vesztuuk ie, a ingniáris kannűibe illesztett friss fecskendő segitségével. ó. mintákat szobahőmérsékleten szérum elválasztó csövekbe töltjük. A megfelelő időpontoknak megfelelő; minták összegyűjtése után. & csöveket hűtött Eppendorf centrifugában ii 000 x g mellett 10 percen át centrifugáljuk. Az elválasztott szérumot 1,5 mi-es mikrofuga csövekbe visszük át és a nioasssy elvégzéséig -SO C-on fagyasztva tároljuk. .0 szérum mintákat megfelelően hígítjuk és a városéilenes aktivitást minden időpontban a leírt módon meghatározzuk. Az (1) általános képletű konjugátum és az Inba terminális felezési idejét az idő kontra aktivitás görbéből meghatározzuk és a 3. Táblázatban a plazma tartózkodási idővel együtt feltüntetjük.
3. Táblázat
Termá.nális f elezési, idő : f-.,-0 és átlagos plazma tartózkodási ido
Mi nt a f/j (őrá.) Plazma tartózkodási ide (óra)
IFNaza 2,1 1,0
( I i á 11 a i á no s 1 'ép i o t r fonj u gátam i.i 1 5, 0 20,0
A terminális t·/ értéket lóg lineáris regresszióvai
becsüljük meg.
5. példa immunogeni ci. tá s
Normái B&F-l egerekbe (csoportonként 10 állat) íntraperitoneáiisan hetente 5^ alkalommal·, naponta; egyszer, 300 Ott egység víruséi lenes aktivitású ruier.bozö interferon készifmé.¾ φ
* **·* nyékét fecskendezünk. Néhány egérbe az IFNa2a olyan aggregált formáját fecskendezzük, amely a monomer formánál rrnmunogénebb, Az utolsó injekció beadása után 19 nappal vérmintákat veszünk és a. szérumban az antitestek semlegesítését értékeij ük.
A 3. Táblázatból látható, hogy az zFNaza-val kezeit egerek semlegesítő antitesteket termeinek és ez a válasz az térferon-aggregátárnokkái kezeit egerek esetében sokkal nagyobb. A találmányunk szerinti konjugátumokkai kezeit állatok többségének vérében antitestek nem voltak kimutathatóak.
.Táblázat saru η o g' e n i t á s
Fezelés An 11t es t o k ; 1 ö o ám 11
Átlagos Tartomány
IFNaka 230Ö 217-8533
1 Fka2a. aggregátumok 42.667 6 Ü Ü u — I 5 ü Ó ΰ 0
(I; általános képletü
kon bugásom 0 0-1,133
'isi :::: interferon Semlegesítő Egység/mi
0, néIda
............·:·.................
In vivő tumorellenes aktivitás
Az U; általános képletö konjugétnm (PEez-TFNaza} és módosífat.iar lFA«2a in vivő tumorellenes hatását egerekbe szabmutáns úton impiantáít különböző humán tumorsejtek nagyságának csökkentésével határozzuk meg. Az eredményekét az 1-3. ábrán tüntetjük lei.
Módszer
Atimikns szőrteienífett egerek (Kar lan} bal· hátsó Gidaiét alá szubkutáns ütőn 2x10' humán renális A49S sejtet ; 1.. ér 2. ábra), humán renális ACHh sejtet (3. ás 4. ábra), illetve humán renális G402 sejtet (5. és 2.. ábra) implantálunk. A tumorok 3-2 hét alatt s tahi 1 izá.lödnak. A tesztnél a 0,05-0,5 c®’ méretű: tumor ókat értékeljük. Az egerek heti .30, 611, 120 vagy 300 pg Psszdőzisban PEGz-IEhaza-t vagy módos 1 ta t ián. lFN<x2a-t kapnak. .Az egereket a PEG2-1.FEg2a~vai hetente egyszer (hétfőn.): 30, 60, 120 vagy 300 ag kezelésenkenti dózisban kezeljük, Az egereket a módositatian 1 ;Ule2a~va 1 1.0, 2 0, 4 0 vagy
100 ug kezelésenkénti dózisokban hetente háromszor {hétfőn, szerdán és pénteken! kezeljük. A kezelés időtartama a tumor aggreuszivitásától függően 4-5 hót. g tumor tér ingató t minden hétlön a kezelés előtt mérjük.
Eredmények
A PhG2-iEkef2a az A498 tumor nagyságát a módositatian
IENa2a-vai. összehasonlítva minden heti dózis szinten, a kezelés megkezdése utáni 7., 1.4.,, 21. és 20. napon kifejezetten erőteljesebben csókkénti (1. és 2. ábra). A kezelést négy héten át végezzük. A kezelés abbahagyása után 7 nappal renden csoportban 3 egeret ieöiünk. A PEG2-1FMa2a~vaI kezeit három egérben maradék tumort nem találtunk. Ezzel szemben a módos!.ratlan 1 Fhkrza-va 1 kezelt 3 egérben a maradék A 493 tumor tömege 1,28 y, 0,62 g, illetve 1,60 g. A kontroll egerekben az A 493 tumorok tömege 2,32 g, 2,37 g, illetve 1,94 g. A négyhetes kezelési időszak után S0: nappal 7 egérben a humor je24 lenlétét tapintással megvizsgáljuk. Azt találtuk, hogy mind a ? egér tapintás alapján tamorszövettői őszies.
A PEG£~tFN«.2a az ACHb tumor nagyságát a módosítatlan LFNala-val összehasonlítva 60, 220 és 300 ug dózisban a 14., 21., 23. és 35. napon szignifikánsan erősebb mértékben csökkenti (3. és 4. ábra;.
n FSG2-IFNaPa. a G402: tzssor nagyságát a móöosi tat lan 1bNa2a-vaI összeha.soniiva. 60 és 120 ug heti dóziőszintén a 14 napos, 21 napos, 22 napos és 55 napos kezelés során szignifikánsan erősebben csökkenti.

Claims (14)

  1. Szabadalmi igénypontok
    1. (I) általános képletű fiziológiailag aktív PEG-IFNa kong ugátumok (mely képletben
    R éa R! jelentése egymástól függetlenül 1-6 szénatomos alki1-csoport;
    X jelentése -NH- vagy ~C~ ;
    n és n’ egész számot képvisel és összegük 600-1500; és a konjugátumban a polietiiéngilkol egységek átlagos molekula tömege 26 000 daiton és 66 000 daiton közötti érték),
  2. 2, Az 1. igénypont szerinti konjugátum, amelyben a poli etiléngllkol egységek molekulatömege 35 000 és 45 000 daiton közötti érték.
  3. 3. A 2. igénypont szerinti konjugátum, etiléngllkol egységek molekulatömege 40 000
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti konjugátum, jelöntése metilesöpört <
  5. 5. Az 1. igénypont szerinti konjugátum., lentése -NH- csoport>
  6. 6. Az 1. igénypont szerinti konjugátum,
    IFRa IF0a2a.
    amelyben a poriba lton >
    amelyben R és R amelyben X jeamelyben az
  7. 7. Az 1. igénypont szerinti konjugátum, amelyben n és n . ísv o ik értékének?/összege 850-1000.
  8. 8, Az 1. igénypont szerinti konjugátum, amelyben R és R jelentése metilesöpört; X jelentése -OH- ; az IFNet IFN«2a és n és n’ közül az egyik vagy mindkettő értéke 420.
    R és R*
  9. 9. Az 1. igénypont szerinti konjugátum, amelyben jelentése reetilesöpört; X jelentése -NH~ ; az IFNa IrWa; és n és n! közöl az egyik vagy mindkettő értéke 520.
  10. 10. Az I. igénypont szerinti konjugátum, amely az IFha-nái nagyobb burjánzásellenes aktivitással és az IFNa-nái kisebb vírusellenes hatással rendelkezik.
  11. 11.. Eljárás ez IFKa-vai összehasonlítva nagyobb burjánzáseilenes aktivitással és az IFNa-val összehasonlítva kisebb vírusellenes aktivitással rendelkező FFG-lFNa konjugátum előállítására, azzal jellemezve, hogy valamely 11) általános képletű reagenst kovalens kötéssel IFNa-hoz kapcsolva a fenti tulajdonságokkal rendelkező PEG-IFFa konjugátumot képezünk.
  12. 12. Gyógyászati készítmények, azzal j e I 1 a m e z v e , hogy az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti PEG-IFXa konjugátumot és ínért gyógyászati hordozóanyagot tartalmaznak.
  13. 13« Gyógyászati készítmények, ímmunomodulácíős rendellenességek (pl. neopláziás betegségek) vagy fertőzésen betegségek kezelésére, azzal jellemezve, hogy az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti PEG-IFNn konjugátumot és inért gyógyászati hordozóanyagot tartalmaznak,
  14. 14. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti PEG-IFha konjngátumok felhasználása betegségek kezelésére vagy megelőzésére szolgáló gyógyászati készítmények előállítására.
HU9700959A 1996-05-31 1997-05-28 Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them HU227992B1 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1883496P 1996-05-31 1996-05-31

Publications (4)

Publication Number Publication Date
HU9700959D0 HU9700959D0 (en) 1997-07-28
HUP9700959A2 HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
HUP9700959A3 HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
HU227992B1 true HU227992B1 (en) 2012-08-28

Family

ID=21790006

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9700959A HU227992B1 (en) 1996-05-31 1997-05-28 Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them

Country Status (48)

Country Link
US (1) US7201897B2 (hu)
EP (1) EP0809996B1 (hu)
JP (1) JP2980569B2 (hu)
KR (1) KR100254097B1 (hu)
CN (1) CN1088721C (hu)
AR (1) AR008378A1 (hu)
AT (1) ATE235920T1 (hu)
AU (1) AU725195B2 (hu)
BG (1) BG62273B1 (hu)
BR (1) BR9703421A (hu)
CA (1) CA2203480C (hu)
CO (1) CO4950528A1 (hu)
CY (2) CY2433B1 (hu)
CZ (1) CZ292775B6 (hu)
DE (3) DE69720320T2 (hu)
DK (1) DK0809996T3 (hu)
EG (1) EG24292A (hu)
ES (1) ES2110386T3 (hu)
GR (1) GR970300063T1 (hu)
HK (1) HK1005225A1 (hu)
HR (1) HRP970298B1 (hu)
HU (1) HU227992B1 (hu)
IL (1) IL120902A (hu)
IS (1) IS1988B (hu)
LU (1) LU91029I2 (hu)
MA (1) MA24193A1 (hu)
MY (1) MY117909A (hu)
NL (1) NL300127I2 (hu)
NO (1) NO322964B1 (hu)
NZ (1) NZ314903A (hu)
OA (1) OA10488A (hu)
PA (1) PA8431001A1 (hu)
PL (1) PL186949B1 (hu)
PT (1) PT809996E (hu)
RS (1) RS49533B (hu)
RU (1) RU2180595C2 (hu)
SA (1) SA97180030B1 (hu)
SG (1) SG55314A1 (hu)
SI (1) SI0809996T1 (hu)
SK (1) SK284458B6 (hu)
SV (1) SV1997000049A (hu)
TJ (1) TJ328B (hu)
TN (1) TNSN97091A1 (hu)
TR (1) TR199700358A3 (hu)
TW (1) TW517067B (hu)
UA (1) UA56989C2 (hu)
UY (1) UY24572A1 (hu)
ZA (1) ZA974583B (hu)

Families Citing this family (134)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5951974A (en) * 1993-11-10 1999-09-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates
JP2000507917A (ja) 1995-11-02 2000-06-27 シェーリング コーポレイション 持続的低用量サイトカイン注入治療
US5908621A (en) 1995-11-02 1999-06-01 Schering Corporation Polyethylene glycol modified interferon therapy
US5985263A (en) * 1997-12-19 1999-11-16 Enzon, Inc. Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates
US5981709A (en) * 1997-12-19 1999-11-09 Enzon, Inc. α-interferon-polymer-conjugates having enhanced biological activity and methods of preparing the same
HU228877B1 (en) * 1998-03-26 2013-06-28 Merck Sharp & Dohme Formulations for stabilization of peg-interferon alpha conjugates and method for preparation such formulations
US6180096B1 (en) 1998-03-26 2001-01-30 Schering Corporation Formulations for protection of peg-interferon alpha conjugates
DK1421956T3 (da) * 1998-04-28 2007-10-01 Applied Research Systems Polyol-IFN-beta-konjugater
TWI277424B (en) 1998-05-15 2007-04-01 Schering Corp Combination therapy for eradicating detectable NCV-RNA in antiviral treatment naive patients having chronic hepatitis C infection
AU767131B2 (en) * 1998-06-08 2003-10-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of PEG-IFN-alpha and ribavirin for the treatment of chronic hepatitis C
US6277830B1 (en) * 1998-10-16 2001-08-21 Schering Corporation 5′-amino acid esters of ribavirin and the use of same to treat hepatitis C with interferon
IL129299A0 (en) * 1999-03-31 2000-02-17 Mor Research Applic Ltd Monoclonal antibodies antigens and diagnosis of malignant diseases
PE20010027A1 (es) 1999-04-08 2001-02-05 Schering Corp Uso de interferon alfa pegilado en pacientes con melanoma
US6362162B1 (en) 1999-04-08 2002-03-26 Schering Corporation CML Therapy
US6923966B2 (en) 1999-04-08 2005-08-02 Schering Corporation Melanoma therapy
BR0009642A (pt) * 1999-04-08 2002-01-08 Schering Corp Terapia de leucemia mielocìtica crÈnica
US6605273B2 (en) 1999-04-08 2003-08-12 Schering Corporation Renal cell carcinoma treatment
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US6313143B1 (en) * 1999-12-16 2001-11-06 Hoffmann-La Roche Inc. Substituted pyrroles
ATE435033T1 (de) 2000-01-10 2009-07-15 Maxygen Holdings Ltd G-csf konjugate
EP1908477A3 (en) * 2000-01-24 2008-06-11 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
EP1251866A1 (en) * 2000-01-24 2002-10-30 Schering Corporation Combination of temozolomide and pegylated interferon-alpha for treating cancer
RU2278123C2 (ru) 2000-02-11 2006-06-20 Максиджен Холдингз Лтд. Молекулы, подобные фактору vii или viia
US6476062B2 (en) 2000-03-30 2002-11-05 Schering Corporation Chemokine receptor antagonists
US6777387B2 (en) 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
US6924270B2 (en) 2000-04-20 2005-08-02 Schering Corporation Ribavirin-interferon alfa combination therapy for eradicating detectable HCV-RNA in patients having chronic hepatitis C infection
WO2002002627A2 (en) 2000-06-30 2002-01-10 Zymogenetics, Inc. Interferon-like protein zcyto21
WO2002060978A1 (fr) 2001-01-30 2002-08-08 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Polyalkylene glycols ramifies
BR0207576A (pt) 2001-02-27 2004-04-27 Maxygen Aps Variante glicosilada de um polipeptìdeo de interferon beta precursor (ifnb), processos de aumentar a glicosilação in vivo de uma molécula de ifnb precursora, de produzir uma molécula de ifnb glicosilada, para preparar uma variante conjugada e de tratar um mamìfero com esclerose múltiplam composição farmacêutica, molécula de ifnb variante, sequência de nucleotìdeo, vetor de expressão, célula hospedeira de glicosilação conjugado, e, uso de um conjugado
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2003062290A1 (en) 2002-01-16 2003-07-31 Biocompatibles Uk Limited Polymer conjugates
KR100888371B1 (ko) * 2002-01-17 2009-03-13 동아제약주식회사 가지 달린 고분자 유도체와 인터페론 결합체를 포함하는 항바이러스제
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
UA86744C2 (en) 2002-06-21 2009-05-25 Ново Нордиск Хэлс Кеа Аг Pegylated factor vii glycoforms
AU2003258518B2 (en) 2002-07-24 2007-01-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Polyalkylene glycol acid additives
IL166506A0 (en) * 2002-09-11 2006-01-15 Fresenius Kabi De Gmbh Hasylated polypeptides especially hasylated erythropoietin
EP1681303B1 (en) * 2002-09-11 2013-09-04 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
EP1400533A1 (en) * 2002-09-11 2004-03-24 Fresenius Kabi Deutschland GmbH HASylated polypeptides, especially HASylated erythropoietin
ES2314238T3 (es) 2002-10-08 2009-03-16 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugados de oligosacaridos farmaceuticamente activos.
US7314613B2 (en) 2002-11-18 2008-01-01 Maxygen, Inc. Interferon-alpha polypeptides and conjugates
BR0316324A (pt) * 2002-11-18 2005-09-27 Maxygen Inc Polipeptìdeos e conjugados de interferon-alfa
GB0301014D0 (en) * 2003-01-16 2003-02-19 Biocompatibles Ltd Conjugation reactions
CA2458085A1 (en) 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
DE602004029173D1 (de) 2003-10-10 2010-10-28 Novo Nordisk As Il-21-derivate
EP2641611A3 (en) 2003-10-17 2013-12-18 Novo Nordisk A/S Combination therapy
JP2007519422A (ja) 2004-02-02 2007-07-19 アンブレツクス・インコーポレイテツド 修飾されたヒト四螺旋バンドルポリペプチド及びそれらの使用
CN100355784C (zh) * 2004-02-12 2007-12-19 江苏恒瑞医药股份有限公司 聚乙二醇修饰α－干扰素1b的制备方法
CN101659704A (zh) 2004-03-11 2010-03-03 弗雷泽纽斯卡比德国有限公司 通过还原氨基化制备的羟烷基淀粉和蛋白质的偶联物
MXPA06013412A (es) 2004-05-19 2007-01-23 Maxygen Inc Polipeptidos de interferon-alfa y conjugados.
MXPA06014684A (es) 2004-06-18 2007-02-12 Ambrx Inc Novedosos polipeptidos de enlace antigeno y sus usos.
US20060029573A1 (en) * 2004-06-30 2006-02-09 Chun Shen Pegylated interferon alpha-1b
JP4971160B2 (ja) 2004-08-12 2012-07-11 シェーリング コーポレイション 安定するｐｅｇ化インターフェロン処方物
BRPI0519430A2 (pt) 2004-12-22 2009-02-10 Ambrx Inc hormânio do crescimento humano modificado
EP1861125A2 (en) * 2005-03-23 2007-12-05 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an hgh moiety and peg derivatives
AU2006299901A1 (en) 2005-05-18 2007-04-19 Maxygen, Inc. Evolved interferon-alpha polypeptides
EP2360170A3 (en) 2005-06-17 2012-03-28 Novo Nordisk Health Care AG Selective reduction and derivatization of engineered proteins comprinsing at least one non-native cysteine
WO2007002233A2 (en) * 2005-06-20 2007-01-04 Pepgen Corporation Low-toxicity, long-circulating chimeras of human interferon- alpha analogs and interferon tau
JP4261531B2 (ja) 2005-09-06 2009-04-30 株式会社Ｎｒｌファーマ ラクトフェリン複合体及びその製造方法
EP2339014B1 (en) 2005-11-16 2015-05-27 Ambrx, Inc. Methods and compositions comprising non-natural amino acids
CN101002944B (zh) * 2006-01-17 2012-07-25 中国科学院过程工程研究所 支链聚乙二醇-干扰素结合物及其制备方法
CN101002945B (zh) 2006-01-20 2012-09-05 清华大学 一种用于肿瘤治疗的新型复合物
CN100475270C (zh) 2006-01-20 2009-04-08 清华大学 一种***的药物及其应用
AU2007250739A1 (en) 2006-05-16 2007-11-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Pharmaceutical composition for treating or preventing HCV infection
US20090252720A1 (en) 2006-05-24 2009-10-08 Novo Nordisk Health Care Ag Prolonged FIX Analogues and Derivatives
NZ574721A (en) 2006-09-08 2012-02-24 Ambrx Inc Hybrid suppressor trna for vertebrate cells
EP2069396B1 (en) 2006-09-08 2015-10-21 Ambrx, Inc. Modified human plasma polypeptide or fc scaffolds and their uses
CN1966547B (zh) * 2006-11-06 2011-11-09 中国药科大学 双链结构的聚乙二醇衍生物的制备及其与药物分子的结合
ATE459659T1 (de) * 2006-11-07 2010-03-15 Dsm Ip Assets Bv Carbamat, thiocarbamat oder carbamid mit einer biomolekularen gruppierung
KR101079993B1 (ko) 2006-11-17 2011-11-04 동아제약주식회사 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체
CN101219219B (zh) 2007-01-10 2013-02-13 北京普罗吉生物科技发展有限公司 包含血管抑素或其片段的复合物、其制备方法及应用
JP5515224B2 (ja) 2007-02-28 2014-06-11 日油株式会社 多分岐鎖ポリオキシアルキレン誘導体
BRPI0809583B1 (pt) 2007-03-30 2022-02-22 Ambrx, Inc Polipeptídeo fgf-21 modificado, composição compreendendo o mesmo, método para produzir o referido polipetídeo fgf-21 e célula compreendendo um polinucleotídeo
CL2008002399A1 (es) * 2007-08-16 2009-01-02 Pharmaessentia Corp Conjugado sustancialmente puro que posee una porcion polimerica, una porcion proteica (interferon alfa 2b) y un ligante alifatico de 1 a 10 atomos de carbono, util en el tratamiento de las hepatitis b o c.
PL2186830T3 (pl) 2007-09-04 2012-09-28 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferon alfa 2b zmodyfikowany glikolem polietylenowym, jego wytwarzanie i zastosowanie
EP2196475B1 (en) 2007-09-04 2012-06-06 Biosteed Gene Expression Tech. CO., LTD. INTERFERON ALPHA 2a MODIFIED BY POLYETHYLENE GLYCOL, ITS SYNTHESIS PROCESS AND APPLICATION
NZ603812A (en) 2007-11-20 2014-06-27 Ambrx Inc Modified insulin polypeptides and their uses
EP2070950A1 (en) 2007-12-14 2009-06-17 Fresenius Kabi Deutschland GmbH Hydroxyalkyl starch derivatives and process for their preparation
CN107033233A (zh) * 2008-01-18 2017-08-11 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 非糖基化蛋白质的纯化
US8906847B2 (en) * 2008-02-01 2014-12-09 Ascendis Pharma A/S Prodrug comprising a drug linker conjugate
SG188143A1 (en) 2008-02-08 2013-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
WO2009121210A1 (zh) 2008-04-03 2009-10-08 厦门伯赛基因转录技术有限公司 双链聚乙二醇修饰的生长激素及其制备方法和应用
JP6112766B2 (ja) * 2008-04-29 2017-04-12 アセンディス ファーマ グロウス ディスオーダーズ ディヴィジョン エー／エス Ｐｅｇ化された組換えヒト成長ホルモン化合物
TW201010692A (en) 2008-06-19 2010-03-16 Public Univ Corp Nagoya City Univ Pharmaceutical composition for treatment or prevention of hbv infection
EA020766B1 (ru) 2008-07-08 2015-01-30 Борд Оф Риджентс, Дзе Юниверсити Оф Техас Систем Ингибиторы пролиферации и активации переносчика сигнала и активатора транскрипции (stats)
NZ591235A (en) 2008-07-23 2012-07-27 Ambrx Inc Modified bovine g-csf polypeptides comprising non natural amino acid and their uses treating infections such as mastitis
PL2342223T3 (pl) 2008-09-26 2017-09-29 Ambrx, Inc. Zmodyfikowane polipeptydy zwierzęcej erytropoetyny i ich zastosowania
TR201802361T4 (tr) 2008-09-26 2018-03-21 Ambrx Inc Doğal olmayan amino asit replikasyonuna bağımlı mikroorganizmalar ve aşılar.
IT1399351B1 (it) 2009-06-16 2013-04-16 Fidia Farmaceutici Procedimento per la sintesi di coniugati di glicosamminoglicani (gag) con molecole biologicamente attive, coniugati polimerici e usi relativi
WO2011014882A1 (en) 2009-07-31 2011-02-03 Medtronic, Inc. CONTINUOUS SUBCUTANEOUS ADMINISTRATION OF INTERFERON-α TO HEPATITIS C INFECTED PATIENTS
EA201200650A1 (ru) 2009-10-30 2012-12-28 Бёрингер Ингельхайм Интернациональ Гмбх Курсы комбинированного лечения вируса гепатита с, включающие bi201335, интерферон-альфа и рибавирин
CN104017063A (zh) 2009-12-21 2014-09-03 Ambrx公司 经过修饰的猪促生长素多肽和其用途
NZ600361A (en) 2009-12-21 2014-06-27 Ambrx Inc Modified bovine somatotropin polypeptides and their uses
JP6148013B2 (ja) 2010-03-05 2017-06-14 リグショスピタレト 補体活性化のキメラ抑制分子
EP2569331A1 (en) 2010-05-10 2013-03-20 Perseid Therapeutics LLC Polypeptide inhibitors of vla4
EP2585065A1 (en) 2010-06-24 2013-05-01 Panmed Ltd. Treatment of hepatitis c virus related diseases using hydroxychloroquine or a combination of hydroxychloroquine and an anti-viral agent
RU2447083C1 (ru) * 2010-07-20 2012-04-10 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ
CA2805564A1 (en) 2010-08-05 2012-02-09 Stefan Jenewein Anti-mhc antibody anti-viral cytokine fusion protein
US9567386B2 (en) 2010-08-17 2017-02-14 Ambrx, Inc. Therapeutic uses of modified relaxin polypeptides
MY162837A (en) 2010-08-17 2017-07-31 Ambrx Inc Modified relaxin polypeptides and their uses
AR083006A1 (es) 2010-09-23 2013-01-23 Lilly Co Eli Formulaciones para el factor estimulante de colonias de granulocitos (g-csf) bovino y variantes de las mismas
WO2012146630A1 (en) 2011-04-29 2012-11-01 F. Hoffmann-La Roche Ag N-terminal acylated polypeptides, methods for their production and uses thereof
CN102229667A (zh) * 2011-06-03 2011-11-02 北京伟嘉人生物技术有限公司 一种聚乙二醇修饰的猪α-干扰素及其制备方法和应用
CN103930440A (zh) 2011-07-01 2014-07-16 拜耳知识产权有限责任公司 松弛素融合多肽及其用途
EA201490399A1 (ru) 2011-08-03 2014-06-30 Ситерис Иммунотерапия hcv (вируса гепатита c)
WO2013137869A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy for treating hcv infection in an hcv-hiv coinfected patient population
JP2015512900A (ja) 2012-03-28 2015-04-30 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 特別な患者の遺伝子亜型分集団のｈｃｖ感染症を治療するための併用療法
EP2859017B1 (en) 2012-06-08 2019-02-20 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
DK2863955T3 (en) 2012-06-26 2017-01-23 Sutro Biopharma Inc MODIFIED FC PROTEINS, INCLUDING LOCATION-SPECIFIC NON-NATURAL AMINO ACID RESIDUES, CONJUGATES THEREOF, METHODS OF PRODUCING ITS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF
EP3584255B1 (en) 2012-08-31 2022-02-16 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising an azido group
EA022617B1 (ru) * 2013-03-28 2016-02-29 Илья Александрович МАРКОВ Монопегилированный интерферон-альфа разветвленной структуры и фармацевтическая композиция для приготовления лекарственного средства, обладающего активностью интерферона-альфа
EA023323B1 (ru) * 2013-03-28 2016-05-31 Илья Александрович МАРКОВ Разветвленный ацилазидный пегилирующий агент, способ его получения и способ получения пегилированного интерферона
EA021610B1 (ru) * 2013-03-28 2015-07-30 Илья Александрович МАРКОВ Жидкое противовирусное лекарственное средство
US9764039B2 (en) 2013-07-10 2017-09-19 Sutro Biopharma, Inc. Antibodies comprising multiple site-specific non-natural amino acid residues, methods of their preparation and methods of their use
US9840493B2 (en) 2013-10-11 2017-12-12 Sutro Biopharma, Inc. Modified amino acids comprising tetrazine functional groups, methods of preparation, and methods of their use
EP2907512A1 (en) 2014-02-14 2015-08-19 Commissariat A L'energie Atomique Et Aux Energies Alternatives Inhibitors of MMP-12 as antiviral Agents
RU2554761C1 (ru) * 2014-05-13 2015-06-27 Закрытое акционерное общество "Сибирский центр фармакологии и биотехнологии" Противоэнтеровирусное и иммуностимулирующее средство
UY36370A (es) 2014-10-24 2016-04-29 Bristol Myers Squibb Company Una Corporación Del Estado De Delaware Polipéptidos fgf-21 modificados y sus usos
HRP20231732T1 (hr) 2014-11-06 2024-03-15 Pharmaessentia Corporation Režim doziranja pegiliranog interferona
HRP20211734T8 (hr) 2014-11-21 2022-03-04 Ascendis Pharma Endocrinology Division A/S Dozni oblici dugodjelujućeg hormona rasta
BR112018009009A8 (pt) 2015-11-03 2019-02-26 Hoffmann La Roche terapia combinada de um inibidor de formação de capsídeo hbv e um interferon
CN106749608B (zh) * 2015-11-18 2021-10-15 石药集团中奇制药技术（石家庄）有限公司 干扰素α缀合物
WO2018087345A1 (en) 2016-11-14 2018-05-17 F. Hoffmann-La Roche Ag COMBINATION THERAPY OF AN HBsAg INHIBITOR, A NUCLEOS(T)IDE ANALOGUE AND AN INTERFERON
ES2963839T3 (es) 2017-02-08 2024-04-02 Bristol Myers Squibb Co Polipéptidos de relaxina modificados que comprenden un potenciador farmacocinético y usos de los mismos
RU2678332C1 (ru) 2017-09-08 2019-01-28 Общество с ограниченной ответственностью "Саентифик Фьючер Менеджмент" (ООО "СФМ") Пегилированный интерферон лямбда, обладающий высокой биодоступностью при пероральном применении, и способ его получения
HRP20240016T1 (hr) 2018-09-11 2024-03-29 Ambrx, Inc. Konjugati polipeptida interleukina-2 i njihove uporabe
CN113366015A (zh) 2018-10-19 2021-09-07 Ambrx公司 白细胞介素-10多肽缀合物、其二聚体及其用途
BR112021015832A2 (pt) 2019-02-12 2022-01-18 Ambrx Inc Composições que contêm conjugados de anticorpo-agonista de tlr, métodos e usos dos mesmos
WO2021183832A1 (en) 2020-03-11 2021-09-16 Ambrx, Inc. Interleukin-2 polypeptide conjugates and methods of use thereof
AU2021327396A1 (en) 2020-08-20 2023-03-23 Ambrx, Inc. Antibody-TLR agonist conjugates, methods and uses thereof
AU2022249223A1 (en) 2021-04-03 2023-10-12 Ambrx, Inc. Anti-her2 antibody-drug conjugates and uses thereof

Family Cites Families (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4609546A (en) 1982-06-24 1986-09-02 Japan Chemical Research Co., Ltd. Long-acting composition
WO1984004745A1 (en) 1983-05-31 1984-12-06 Takeda Chemical Industries Ltd Novel polypeptides and their use
US4681848A (en) 1982-09-22 1987-07-21 Takeda Chemical Industries, Ltd. Novel peptide and use thereof
GB8430252D0 (en) * 1984-11-30 1985-01-09 Beecham Group Plc Compounds
US4766106A (en) 1985-06-26 1988-08-23 Cetus Corporation Solubilization of proteins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
JP2524586B2 (ja) 1985-06-26 1996-08-14 シタス コーポレイション ポリマ−接合を利用する医薬組成物用蛋白質の可溶化
DE3719046A1 (de) 1987-06-06 1988-12-15 Basf Ag Verwendung von salzen von sulfonamidcarbonsaeuren als korrosionsinhibitoren in waessrigen systemen
US5122614A (en) 1989-04-19 1992-06-16 Enzon, Inc. Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides
US5145773A (en) * 1989-05-25 1992-09-08 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Method to detect sensitivity to alpha-interferon therapy
ATE136315T1 (de) * 1989-05-27 1996-04-15 Sumitomo Pharma Verfahren für die herstellung von polyethylenglykolderivate und modifizierte proteine.
US5238915A (en) 1991-02-08 1993-08-24 Wakunaga Seiyaku K.K. Aromatic composition and method for controlling aroma
US5595732A (en) 1991-03-25 1997-01-21 Hoffmann-La Roche Inc. Polyethylene-protein conjugates
GB9111967D0 (en) 1991-06-04 1991-07-24 Erba Carlo Spa 2,5'-nucleotide analogs as antiviral agents
US5281698A (en) * 1991-07-23 1994-01-25 Cetus Oncology Corporation Preparation of an activated polymer ester for protein conjugation
ZA933926B (en) 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US5382657A (en) * 1992-08-26 1995-01-17 Hoffmann-La Roche Inc. Peg-interferon conjugates
US5359030A (en) 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5919455A (en) 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
DK0730470T3 (da) * 1993-11-10 2002-06-03 Enzon Inc Forbedrede interferonpolymerkonjugater
AU1916295A (en) * 1994-02-08 1995-08-29 Amgen, Inc. Oral delivery of chemically modified proteins
US5824784A (en) * 1994-10-12 1998-10-20 Amgen Inc. N-terminally chemically modified protein compositions and methods
US5738846A (en) * 1994-11-10 1998-04-14 Enzon, Inc. Interferon polymer conjugates and process for preparing the same
US5932462A (en) 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
CA2458085A1 (en) * 2003-03-21 2004-09-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Transcriptional activity assay

Also Published As

Publication number Publication date
KR970074791A (ko) 1997-12-10
HUP9700959A2 (hu) 1998-03-02
YU17597A (sh) 1999-07-28
HUP9700959A3 (en) 1998-03-30
SI0809996T1 (en) 2003-08-31
CZ167997A3 (en) 1997-12-17
NL300127I2 (nl) 2003-09-01
CZ292775B6 (cs) 2003-12-17
NO972480D0 (no) 1997-05-30
IS1988B (is) 2005-02-15
BR9703421A (pt) 1998-09-15
DE69720320D1 (de) 2003-05-08
JPH1067800A (ja) 1998-03-10
EG24292A (en) 2009-01-08
BG62273B1 (bg) 1999-07-30
US7201897B2 (en) 2007-04-10
DE809996T1 (de) 1998-04-09
TW517067B (en) 2003-01-11
DE10399018I1 (de) 2003-10-23
CA2203480C (en) 2009-06-30
NZ314903A (en) 1998-10-28
NL300127I1 (hu) 2003-07-01
IS4491A (is) 1997-12-01
SA97180030B1 (ar) 2005-11-12
CY2433B1 (en) 2004-11-12
RU2180595C2 (ru) 2002-03-20
SG55314A1 (en) 1998-12-21
US20040030101A1 (en) 2004-02-12
PA8431001A1 (es) 2000-05-24
TJ328B (en) 2001-12-24
SV1997000049A (es) 1998-07-09
CA2203480A1 (en) 1997-11-30
CY2005006I2 (el) 2009-11-04
HU9700959D0 (en) 1997-07-28
AU725195B2 (en) 2000-10-05
OA10488A (fr) 2002-04-11
ES2110386T1 (es) 1998-02-16
UY24572A1 (es) 2000-12-29
AU2372397A (en) 1997-12-04
ES2110386T3 (es) 2003-10-01
KR100254097B1 (ko) 2000-05-01
CN1088721C (zh) 2002-08-07
MY117909A (en) 2004-08-30
UA56989C2 (uk) 2003-06-16
LU91029I2 (fr) 2004-01-23
CY2005006I1 (el) 2009-11-04
IL120902A0 (en) 1997-09-30
CO4950528A1 (es) 2000-09-01
EP0809996B1 (en) 2003-04-02
DE69720320T2 (de) 2004-06-03
BG101540A (en) 1998-02-27
PL186949B1 (pl) 2004-04-30
TJ97000465A (en) 1998-12-25
NO972480L (no) 1997-12-01
AR008378A1 (es) 2000-01-19
HK1005225A1 (en) 1998-12-31
IL120902A (en) 2004-06-20
MA24193A1 (fr) 1997-12-31
GR970300063T1 (en) 1998-01-30
NO322964B1 (no) 2006-12-18
HRP970298A2 (en) 1998-04-30
ZA974583B (en) 1998-11-17
JP2980569B2 (ja) 1999-11-22
PT809996E (pt) 2003-06-30
CN1167777A (zh) 1997-12-17
HRP970298B1 (en) 2003-08-31
DK0809996T3 (da) 2003-07-21
EP0809996A3 (en) 1999-04-14
ATE235920T1 (de) 2003-04-15
RS49533B (sr) 2006-12-15
SK67397A3 (en) 1997-12-10
EP0809996A2 (en) 1997-12-03
MX9704012A (es) 1997-11-29
SK284458B6 (sk) 2005-04-01
TR199700358A2 (xx) 1997-12-21
TNSN97091A1 (fr) 2005-03-15
TR199700358A3 (tr) 1997-12-21
PL320251A1 (en) 1997-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU227992B1 (en) Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them
HUT75533A (en) Improved interferon polymer conjugates
KR100689212B1 (ko) Ｇｃｓｆ 결합체
JP2989002B2 (ja) 化学修飾顆粒球コロニー刺激因子
TWI232882B (en) Poly-IFN-beta conjugates
US8784849B2 (en) Hydroxyapatite-targeting poly(ethylene glycol) and related polymers
ATE67505T1 (de) Tetrapyrrolverbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zubereitungen.
JP2010500390A (ja) Ｇ−ｃｓｆ部位特異的モノコンジュゲート
NZ248590A (en) Lyophilized polyethylene oxide modified proteinaceous compositions with cyclodextrin
HU228916B1 (en) Polyethylen-glycol/carbamate oxydase conjugates and pharmaceutical compositions containing thereof
WO1996028475A1 (fr) Facteur de croissance des hepatocytes modifie a l&#39;aide de polyethylene glycol
JPH05504566A (ja) 生物学的活性を有するペプチドを使用した創傷処置方法
US8530417B2 (en) Y-shaped polyethylene glycol modified G-CSF, the preparation and use thereof
JPH05503940A (ja) 新規インスリン組成物
EP0325270A2 (en) Anticancer conjugates
JP2003521483A (ja) ヒトラクトフェリンの第１カチオンクラスターの抗菌活性
JPS6253934A (ja) 新規のプロドラツグ及びその製法
JP5798628B2 (ja) ウシ顆粒球コロニー刺激因子のための製剤およびその変異体
EA006368B1 (ru) Химически модифицированные конъюгаты прогенипоэтина
JP2002080395A (ja) 心筋傷害処置剤
JPH04103538A (ja) 制癌剤副作用抑制剤
MXPA97004012A (en) Conjugados de interfe
JPS5813523A (ja) 抗腫瘍作用を有する医薬組成物