PL210198B1 - Immunogenna kompozycja, jej zastosowanie i sposób wytwarzania oraz zawierająca ją szczepionka przeciwko Streptococcus pneumoniae - Google Patents
Immunogenna kompozycja, jej zastosowanie i sposób wytwarzania oraz zawierająca ją szczepionka przeciwko Streptococcus pneumoniaeInfo
- Publication number
- PL210198B1 PL210198B1 PL361401A PL36140101A PL210198B1 PL 210198 B1 PL210198 B1 PL 210198B1 PL 361401 A PL361401 A PL 361401A PL 36140101 A PL36140101 A PL 36140101A PL 210198 B1 PL210198 B1 PL 210198B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- protein
- polysaccharide
- immunogenic composition
- pneumococcal
- composition according
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 88
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 113
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 113
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 101
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 81
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 59
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 42
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims abstract description 28
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 134
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 126
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 52
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 claims description 51
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 claims description 51
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 37
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 30
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims description 16
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 14
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 12
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 11
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 claims description 9
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 7
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 claims description 5
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 3
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 claims description 3
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 abstract description 5
- 101100453077 Botryococcus braunii HDR gene Proteins 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 124
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 33
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 14
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 14
- 230000008859 change Effects 0.000 description 12
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 12
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 10
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 10
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 9
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 8
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 8
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 8
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 8
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 7
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 7
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 7
- 230000003571 opsonizing effect Effects 0.000 description 7
- 229940031937 polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 7
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 7
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 7
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 108091016312 choline binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 6
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 6
- 101710099976 Photosystem I P700 chlorophyll a apoprotein A1 Proteins 0.000 description 5
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 5
- 210000003622 mature neutrocyte Anatomy 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 4
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 4
- 101710164918 Choline-binding protein Proteins 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 4
- 238000011795 OF1 mouse Methods 0.000 description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 4
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 description 4
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 3
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 229940124858 Streptococcus pneumoniae vaccine Drugs 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 229940124733 pneumococcal vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- -1 PRP polysaccharide Chemical class 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 2
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010031133 Transferrin-Binding Protein A Proteins 0.000 description 2
- 108010031127 Transferrin-Binding Protein B Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 230000001662 opsonic effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 2
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 2
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 2
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 2
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- PMTMAFAPLCGXGK-JMTMCXQRSA-N (15Z)-12-oxophyto-10,15-dienoic acid Chemical compound CC\C=C/C[C@H]1[C@@H](CCCCCCCC(O)=O)C=CC1=O PMTMAFAPLCGXGK-JMTMCXQRSA-N 0.000 description 1
- NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl-dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]azanium Chemical group OCC[N+](C)(C)C#P=O NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 101710105077 Agglutinin-1 Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101100420868 Anuroctonus phaiodactylus phtx gene Proteins 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710163595 Chaperone protein DnaK Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 101150036540 Copb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000759568 Corixa Species 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 239000001692 EU approved anti-caking agent Substances 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101000874355 Escherichia coli (strain K12) Outer membrane protein assembly factor BamA Proteins 0.000 description 1
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 1
- 101000597577 Gluconacetobacter diazotrophicus (strain ATCC 49037 / DSM 5601 / CCUG 37298 / CIP 103539 / LMG 7603 / PAl5) Outer membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 101100406392 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) omp26 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101710178376 Heat shock 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710152018 Heat shock cognate 70 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000873843 Homo sapiens Sorting and assembly machinery component 50 homolog Proteins 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101800000135 N-terminal protein Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- PMTMAFAPLCGXGK-UHFFFAOYSA-N OPDA Natural products CCC=CCC1C(CCCCCCCC(O)=O)C=CC1=O PMTMAFAPLCGXGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001028244 Onchocerca volvulus Fatty-acid and retinol-binding protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100028078 Oryza sativa subsp. japonica OPR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 101800001452 P1 proteinase Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 102100035853 Sorting and assembly machinery component 50 homolog Human genes 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000012870 ammonium sulfate precipitation Methods 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003497 anti-pneumococcal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate group Chemical group [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000008260 defense mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 101150002054 galE gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700039582 histidine triad Proteins 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 208000033447 immunodeficiency 67 Diseases 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000022760 infectious otitis media Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000003446 memory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000001237 metamyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229940031960 pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229960001973 pneumococcal vaccines Drugs 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000011435 rock Substances 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940031351 tetravalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 1
- 230000029069 type 2 immune response Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 210000002229 urogenital system Anatomy 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 150000003751 zinc Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/13—Poliovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest immunogenna kompozycja, jej zastosowanie i sposób wytwarzania oraz zawierająca ją szczepionka przeciwko Streptococcus pneumoniae. W szczególności niniejszy wynalazek dotyczy szczepionek obejmujących pneumokokowy antygen polisacharydowy w kombinacji z antygenem biał kowym ze Streptococcus pneumoniae i ewentualnie z adiuwantem indukującym Th1.
Streptococcus pneumoniae jest Gram-dodatnią bakterią odpowiedzialną za znaczną zachorowalność i śmiertelność (zwłaszcza u osób bardzo młodych i w podeszłym wieku), wywołującą inwazyjne choroby jak zapalenie płuc, bakteriemia i zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych oraz choroby związane z kolonizacją, jak ostre zapalenie ucha środkowego. Wskaźnik pneumokokowego zapalenia płuc w USA dla osób powyżej 60 roku życia jest szacowany na 3 do 8 na 100 000. W 20% przypadków prowadzi to do bakteriemii i innych objawów, jak zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych ze śmiertelnością bliską 30% nawet przy leczeniu antybiotykami.
Pneumokok posiada otoczkę z chemicznie połączonymi polisacharydami, które nadają swoistość serotypom. Znanych jest 90 serotypów pneumokokowych a otoczka jest główną determinantą zjadliwości, jako że otoczka nie tylko chroni wewnętrzną powierzchnię bakterii przed układem dopełniacza, ale jest sama słabo immunogenna. Polisacharydy są T-niezależnymi antygenami i nie mogą być przetwarzane i prezentowane na cząsteczkach MHC w celu oddziaływania z komórkami T. Mogą jednakże pobudzać układ odpornościowy przez alternatywny mechanizm, który dotyczy krzyżowego wiązania receptorów powierzchniowych na komórkach B.
W kilku doś wiadczeniach wykazano, że ochrona przeciw inwazyjnej chorobie pneumokokowej jest najsilniej związana z przeciwciałami swoistymi wobec otoczki i że ochrona jest swoista wobec serotypów.
Szczepionki uzyskane w oparciu o antygen polisacharydowy są dobrze znane w dziedzinie. Cztery, które były zarejestrowane do użytku u ludzi obejmują polisacharyd Vi z Salmonella typhi, polisacharyd PRP z Haemophilus influenzae, meningokokową szczepionkę tetrawalentną obejmująca serotypy A, C, W135 i Y oraz 23-walentną szczepionkę pneumokokową składającą się z polisacharydów odpowiadających serotypom 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F i 33 (składające się na co najmniej 90% pneumokokowych izolatów z krwi).
Ostatnie trzy szczepionki nadają ochronę przeciw bakteriom wywołującym zakażenia układu oddechowego z poważną zachorowalnością i śmiertelnością u niemowląt, chociaż szczepionki te nie były zarejestrowane do stosowania u dzieci poniżej drugiego roku życia, ponieważ nie były wystarczająco immunogenne w tej grupie wiekowej [Peltola i wsp. (1984), N. Engl. J. Med. 310:1561-1566]. Streptococcus pneumoniae jest najczęstszą przyczyną inwazyjnej choroby bakteryjnej i zapalenia ucha środkowego u niemowląt i dzieci młodszych. Podobnie ludzie w podeszłym wieku słabo odpowiadają na szczepionki pneumokokowe [Roghmann i wsp., (1987), J. Gerontol. 42:265-270], stąd podwyższona liczba przypadków bakteryjnego zapalenia płuc w tej populacji [Verghese i Berk, (1983) Medicine (Baltimore) 62:271-285].
Strategie opracowane w celu wyeliminowania tego braku immunogenności u niemowląt obejmują wiązanie polisacharydu do większych immunogennych białek, które pomagają biernym komórkom T i indukują pamięć immunologiczną wobec antygenu polisacharydowego, z którym są skoniugowane. Glikoproteinowe koniugowane szczepionki pneumokokowe są obecnie oceniane pod względem bezpieczeństwa, immunogenności i skuteczności w różnych grupach wiekowych.
23-walentna nieskoniugowana szczepionka pneumokokowa wykazała dużą różnorodność w skuteczności klinicznej, od 0% do 81% [Fedson i wsp. (1994) Arch Intern Med. 154:2531-2535)]. Skuteczność wydawała się być związana z grupą ryzyka, która była immunizowana, taką jak osoby w podeszłym wieku, z chorobą Hodgkina, po splenektomii, z anemią sierpowatą i agammaglobulinemiami [Fine i wsp. (1994) Arch Intern Med. 154:2666-2677), a także z objawami choroby. Szczepionka 23-walentna nie wykazywała ochrony wobec pneumokokowego zapalenia płuc (w pewnych grupach wysokiego ryzyka takich jak osoby w podeszłym wieku) i zapalenia ucha środkowego.
Dlatego istnieje potrzeba udoskonalenia kompozycji szczepionki pneumokokowej, zwłaszcza tej, która ma być bardziej skuteczna w ochronie i łagodzeniu objawów choroby pneumokokowej (zwłaszcza zapalenia płuc) u osób w podeszłym wieku i dzieci młodszych.
PL 210 198 B1
Niniejszy wynalazek dostarcza taką ulepszoną szczepionkę.
Niniejszy wynalazek dostarcza kompozycji immunogennej, obejmującej co najmniej jeden polisacharydowy antygen Streptococcus pneumoniae (korzystnie skoniugowany z białkiem nośnikowym) i co najmniej jeden antygen białkowy Streptococcus pneumoniae wybrany z grupy składającej się z rodziny biał ek z triadą polihistydynową (Pht; np. PhtA, PhtB, PhtD czy PhtE) lub ich skróconych albo immunologicznie funkcjonalnych odpowiedników, ewentualnie z adiuwantem, korzystnie adiuwantem Th1 (tj. adiuwantem pobudzającym dominującą immunologiczną odpowiedź Th1). Korzystnie zawarte są oba białko pneumokokowe i adiuwant Th1. Opisano także korzystne kompozycje obejmujące kombinacje każdego z każdym wyżej wymienionych białek pneumokokowych według wynalazku z innymi białkami pneumokokowymi.
W korzystnej postaci wykonania immunogenna kompozycja wedł ug wynalazku zawiera PhtD jako antygen białkowy Streptococcus pneumoniae. Również korzystnie immunogenna kompozycja według wynalazku ponadto zawiera Ply. Korzystniej antygen polisacharydowy w kompozycji według wynalazku jest prezentowany w postaci koniugatu polisacharyd-białko nośnikowe. Najkorzystniej białko nośnikowe jest wybrane z grupy składającej się z: toksoidu błoniczego, toksoidu tężcowego, CRM197, hemocyjaniny skałoczepu (KLH), białkowej pochodnej tuberkuliny (PPD) oraz białka D z H. influenzae.
W innej korzystnej postaci wykonania immunogenna kompozycja wedł ug wynalazku obejmuje co najmniej cztery pneumokokowe antygeny polisacharydowe z różnych serotypów.
Adiuwant stosowany korzystnie w kompozycji według wynalazku obejmuje sól glinu. W przypadku gdy adiuwant jest preferencyjnym induktorem odpowiedzi TH1, korzystnie obejmuje on co najmniej jeden z następujących: 3D-MPL, saponiny będącej czynnikiem pobudzającym układ immunologiczny lub immunostymulującego oligonukleotydu CpG. Również korzystnie adiuwant obejmuje nośnik wybrany z grupy zawierającej: emulsję olej w wodzie, liposomy oraz sól glinu.
Przedmiotem wynalazku jest ponadto zastosowanie immunogennej kompozycji według wynalazku jako leku oraz szczepionka ją obejmująca.
Kompozycje według wynalazku są szczególnie przydatne w leczeniu zapalenia płuc u osób w podeszłym wieku i u małych dzieci. Kolejnym przedmiotem wynalazku jest zatem zastosowanie pneumokokowego antygenu polisacharydowego w kombinacji z białkowym antygenem Streptococcus pneumoniae wybranym z grupy składającej się z PhtA, PhtD, PhtB i PhtE, oraz ewentualnie adiuwantem indukującym TH1 do wytwarzania leku do zapobiegania lub leczenia zapalenia płuc u pacjentów powyżej 55 roku życia lub zapalenia ucha środkowego u niemowląt i dzieci młodszych.
Wynalazek dotyczy także sposobu wytwarzania immunogennej kompozycji według wynalazku etapy, który obejmuje etapy:
wybierania jednego lub większej liczby pneumokokowych antygenów polisacharydowych; wybierania jednego lub większej liczby antygenów białkowych z grupy składającej się z: PhtA,
PhtD, PhtB i PhtE, oraz mieszania tych antygenów polisacharydowych i białkowych z odpowiednią zaróbką.
Polisacharydowe szczepionki pneumokokowe (skoniugowane lub nie) mogą nie być zdolne do ochrony przed zapaleniem płuc w starszej populacji, gdzie częstość występowania choroby jest bardzo wysoka. Kluczem mechanizmu obronnego przeciw pneumokokowi jest opsonofagocytoza (odpowiedź humoralna zależna od komórek B/neutrofili, wywoływana przez wytwarzanie przeciwciał wobec pneumokokowego polisacharydu, przy czym bakteria ostatecznie ulega fagocytozie), chociaż u osób w podeszłym wieku część mechanizmów zaangażowanych w opsonizację jest osłabiona, przykładowo przez wytwarzanie nadtlenku przez PMN (krwinki białe obojętnochłonne, ang. polymorphonuclear cells), wytwarzanie innych rodzajów reaktywnych tlenków, mobilizację PMN, apoptozę PMN, zniekształcanie PMN. U osób w podeszłym wieku może być również osłabiona odpowiedź związana z przeciwciałami.
Przeciwnie do normalnie przyjmowanego dogmatu, prawidłowy poziom przeciwciał przeciw otoczkowym polisacharydom może nie być skuteczny w całkowitym usuwaniu bakterii, jako że pneumokoki mogą dokonywać inwazji komórek gospodarza unikając tej części systemu immunologicznego.
Zaskakująco, twórcy niniejszego wynalazku wykazali, że jednoczesna stymulacja części układu immunologicznego zależnego od komórek (na przykład odporność zależna od komórek T) wraz z humoralną częścią ukł adu immunologicznego (zależ n ą od komórek B), synergizm (bą d ź współ praca) może przynieść efekt w postaci wzmocnienia oczyszczania gospodarza z pneumokoków. Jest to
PL 210 198 B1 ujawnienie, które ogólnie wspomoże zapobieganie (lub leczenie) zakażeń pneumokokowych, ale w szczególności będzie ważne w zapobieganiu (lub leczeniu) zapalenia płuc u osób w podeszłym wieku, u których szczepionki polisacharydowe nie wykazują skuteczności.
Bez zamiaru wiązania z jakąkolwiek teorią twórcy niniejszego wynalazku wykazali, że oba ramiona układu immunologicznego mogą współpracować jeśli pneumokokowy polisacharyd (korzystnie skoniugowany z białkiem nośnikowym) jest podawany z pneumokokowym białkiem wybranym z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE (białka, które mogą być przetwarzane i prezentowane w kontekście klasy II i MHC klasy I na powierzchni zakażonych komórek ssaków). Chociaż jedno lub więcej z tych białek pneumokokowych moż e samo uwolnić komórkowo-zależną odporność, twórcy wynalazku wykazali również, że obecność adiuwanta indukującego Th1 w kompozycji szczepionki pomaga tej części układu immunologicznego i zaskakująco zwiększa synergizm pomiędzy dwiema częściami układu odpornościowego.
Szczegółowy opis wynalazku
Niniejszy wynalazek dostarcza ulepszoną szczepionkę w szczególności do zapobiegania i łagodzenia objawów zakażeń pneumokokowych u osób w podeszłym wieku i/lub niemowląt i dzieci młodszych.
W kontekście wynalazku pacjent jest traktowany jako osoba w podeszłym wieku, jeśli ukończył co najmniej 55 rok życia, typowo jest osobą powyżej 60 roku życia i bardziej ogólnie powyżej 65 rok życia.
Tak więc w jednym z wykonań według wynalazku dostarczana jest kompozycja szczepionki odpowiednia do stosowania u osób w podeszłym wieku i/lub niemowląt i dzieci młodszych, obejmująca co najmniej jeden z antygenów polisacharydowych Streptococcus pneumoniae i co najmniej jeden antygen (antygeny) białkowe Streptococcus pneumoniae, wybrane z grupy składającej się z: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE. Szczepionka może ewentualnie zawierać adiuwant Th1.
W drugim, korzystnym wykonaniu, niniejszy wynalazek dostarcza szczepionkę (odpowiednią w zapobieganiu zapaleniu płuc u osób w podeszłym wieku) obejmującą co najmniej jeden (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 lub 10) antygen (antygeny) polisacharydowy Streptococcus pneumoniae i co najmniej jeden antygen białkowy Streptococcus pneumoniae wybrany z grupy składającej się z: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE oraz korzystnie adiuwant Th1.
W powyż szych wykonaniach przedstawione są szczepionki korzystnie obejmujące kombinacje wyżej wymienionych białek pneumokokowych według wynalazku, każde z każdym, oraz z innymi białkami pneumokokowymi są również zobrazowane w opisie poniżej.
Pokazano, że taka szczepionka będzie również użyteczna w leczeniu zakażenia pneumokokowego (na przykład zapalenia ucha środkowego) w innych grupach wysokiego ryzyka w populacji, jak niemowlęta czy dzieci młodsze.
Antygeny polisacharydowe Streptococcus pneumoniae
Typowo szczepionka przeciw Streptococcus pneumoniae według wynalazku będzie obejmować antygeny polisacharydowe (korzystnie skoniugowane z białkiem nośnikowym), przy czym polisacharydy pochodzą od co najmniej czterech serotypów pneumokokowych. Korzystnie cztery serotypy obejmują 6B, 14, 19F i 23F. Bardziej korzystnie kompozycja zawiera co najmniej 7 serotypów, przykładowo te otrzymane z serotypów 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F i 23F. Jeszcze bardziej korzystnie kompozycja zawiera co najmniej 11 serotypów, przykładowo kompozycja w jednym z wykonań zawiera polisacharydy otoczkowe pochodzące od serotypów: 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F i 23F (korzystnie skoniugowane z białkiem nośnikowym). W korzystnym wykonaniu według wynalazku zawartych jest co najmniej 13 antygenów polisacharydowych (korzystnie skoniugowanych z białkiem nośnikowym), chociaż dalsze antygeny polisacharydowe, przykładowo 23 walentne (takie jak serotypy 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F i 33F) są również rozważane według wynalazku.
W przypadku szczepienia osób w podeszłym wieku (na przykład w celu zapobiegania zapaleniu płuc) korzystne jest zawarcie serotypów 8 i 12F (i bardziej korzystne równocześnie serotypów 15 i 22) w 11-walentnej kompozycji antygenowej, opisanej powyżej, z wytworzeniem 15-walentnej szczepionki, podczas gdy dla niemowląt i dzieci młodszych (których najbardziej dotyczy zapalenie ucha środkowego) serotypy 6A i 19A są korzystnie zawarte w uzyskiwanej szczepionce 13-walentnej.
Chociaż powyższe polisacharydy mogą być używane w ich natywnej formie o pełnej długości, należy rozumieć, że polisacharydy o zmniejszonym rozmiarze, które są wciąż immunogenne, mogą być również wykorzystywane (zobacz na przykład EP 497524 i 497525).
PL 210 198 B1
Do zapobiegania/łagodzenia objawów zapalenia płuc u osób w podeszłym wieku (+55 lat) oraz zapalenia ucha środkowego u niemowląt (do 18 miesiąca życia) i dzieci młodszych (typowo od 18 miesiąca życia do 5 roku życia) korzystnym wykonaniem według wynalazku jest połączenie licznych składników polisacharydowych Streptococcus pneumoniae opisanych tutaj, z białkiem Streptococcus pneumoniae wybranym z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE lub ich immunologicznie funkcjonalnym odpowiednikiem. Kombinacja białek pneumokokowych może być również być korzystnie wykorzystana jak to opisano poniżej.
Pneumokokowe białka według wynalazku
Dla celów niniejszego wynalazku „immunologicznie funkcjonalny odpowiednik jest definiowany jako peptyd obejmujący co najmniej jeden epitop ochronny z białka opisanego powyżej. Epitopy te są charakterystycznie prezentowane na powierzchni, wysoce konserwowane i mogą wywoływać u gospodarza bakteriobójczą odpowiedź związaną z przeciwciałami lub chronić go przed toksycznymi działaniami. Korzystnie, funkcjonalny odpowiednik ma co najmniej 15, a bardziej korzystnie 30 lub większą liczbę stycznych aminokwasów z białka według wynalazku. Najkorzystniej, fragmenty, delecje białka takie jak jego warianty z delecjami transbłonowymi (tzn. użycie zewnątrzbłonowych domen białek), fuzje, chemicznie lub genetycznie odtoksycznione pochodne i tym podobne mogą być wykorzystane pod warunkiem, że są zdolne do wzbudzenia zasadniczo takiej samej odpowiedzi immunologicznej jak białko natywne. Pozycję potencjalnych epitopów komórek B w sekwencji białka można z łatwością ustalić poprzez identyfikację peptydów, które są jednocześnie prezentowane na powierzchni i antygenowe, wykorzystując kombinację dwóch metod: przewidywanie struktury 2D i przewidywanie wykładnika antygenowego. Przewidywanie struktury 2D można wykonać przy użyciu programu PSIPRED (od David Jones, Brunei Bioinformatics Group, Dept. Biological Sciences, Brunel University, Uxbridge UB8 3PH, Wielka Brytania). Wykładnik antygenowy można obliczyć w oparciu o metodę Jameson i Wolf (CABIOS 4:181-186 [1988]).
Białka w rozwiązaniach według wynalazku są następującymi białkami, z których wszystkie są prezentowane na zewnętrznej powierzchni pneumokoka (mogą być rozpoznawane przez układ odpornościowy gospodarza podczas co najmniej części cyklu życia pneumokoka) lub są białkami wydzielanymi lub uwalnianymi przez pneumokoka.
Białko Streptococcus pneumoniae jest korzystnie wybierane z grupy obejmującej: białko z rodziny z triadą polihistydynową (Pht), białko z rodziny Lyt, białko wiążące cholinę, białka posiadające motyw LPXTG (gdzie X jest dowolnym aminokwasem), białka posiadające motyw sekwencji sygnałowej typu II LXXC (gdzie X jest dowolnym aminokwasem) oraz białka posiadające motyw sekwencji sygnałowej typu I. Korzystnymi przykładami w tych kategoriach (lub motywach) są następujące białka (lub ich skrócone lub immunologicznie funkcjonalne odpowiedniki):
Rodzina Pht (z triadą polihistydynową) obejmuje białka PhtA, PhtB, PhtD i PhtE. Rodzinę charakteryzuje sekwencja przyłączania lipidów, dwie domeny rozdzielone obszarem bogatym w prolinę i kilka histydynowych triad, zaangażowanych prawdopodobnie w wiązanie metalu lub nukleozydów, lub w aktywność enzymatyczną (3-5) obszary typu coiled-coil (superskręcone), konserwowany koniec N i heterologiczny koniec C. Jest obecna we wszystkich szczepach badanych pneumokoków. Homologiczne białka znaleziono także u innych paciorkowców i Neiseria. Korzystni przedstawiciele rodziny obejmują PhtA, PhtB i PhtD. Bardziej korzystnie obejmują PhtA lub PhtD. Jest zrozumiałe, jednak, że określenia Pht A, B, D i E dotyczą białek posiadających sekwencje ujawnione w pracach cytowanych poniżej jak również ich naturalnie występujących (i wytworzonych przez człowieka) wariantów, które posiadają sekwencję homologiczną w co najmniej 90% identyczną z białkami odniesienia. Korzystnie jest ona w 95% identyczna i bardziej korzystnie w 97% identyczna.
Odnośnie białek Pht, PhtA jest ujawnione w WO 98/18930 i określane także jako Sp36. Jak zauważono powyżej, jest to białko z rodziny białek z triadą polihistydynową i posiada motyw sekwencji sygnałowej typu II LXXC.
PhtD jest ujawnione w WO 00/37105 i określane także jako Sp036D. Jak zauważono powyżej, jest to także białko z rodziny białek z triadą polihistydynową i posiada motyw sekwencji sygnałowej typu II LXXC.
PhtB jest ujawnione w WO 00/37105 i określane także jako Sp036B. Innym członkiem rodziny PhtB jest Polipeptyd Degradujący C3 ujawniony w WO 00/17370. Białko to także pochodzi z rodziny białek z triadą polihistydynową i posiada motyw sekwencji sygnałowej typu II LXXC. Korzystnym immunologicznie funkcjonalnym odpowiednikiem jest białko Sp42 ujawnione w WO 98/18930. Ucięte Ph około 79 kD) jest ujawnione w WO 99/15675 i jest ono także uważane za przedstawiciela rodziny PhtX.
PL 210 198 B1
PthE jest ujawnione w WO 00/30299 i jest określane jako BVH-3.
Białka stosowane w niniejszym wynalazku są korzystnie wybrane z grupy PhtD i PthA lub z kombinacji obu tych białek
Korzystne kombinacie jednego lub większej liczby białek z innymi białkami pneumokokowymi
W szczepionce według wynalazku każde z powyższych białek (korzystnie zarówno PhtD jak i PthA) można także korzystnie łączyć z jednym lub większą liczbą białek pneumokokowych z następującej listy: pneumolizyna (także określana jako Ply; korzystnie odtoksyczniona przez traktowanie chemicznie lub przez mutację) [WO 96/05859, WO 90/06951, WO 99/03884], PsaA i jego warianty z delecjami transbłonowymi (Berry i Paton, Infect Immun 1996, Grudz.; 64(12):5255-62), PspA i jego warianty z delecjami transbłonowymi (patent USA 5804193, WO 92/14488, WO 99/53940) PspC i jego warianty z delecjami transbłonowymi (WO 97/09994, WO 99/53940), przedstawiciel rodziny białka wiążącego cholinę (Cbp) [np. CbpA i jego warianty z delecjami transbłonowymi (W097/41151; WO 99/51266)], dehydrogenaza gliceraldehydu-3-fosforanowego (Infect. Immun. 1996, 64:3544), HSP70 (WO 96/4092) PcpA (sanchez-Beato i wsp. FEMS Microbiol Lett 1998, 164:207-14) białko typu M (zgłoszenie patentowe SB nr EP 0837130) oraz adhezyna 18627 (zgłoszenie patentowe SB nr EP 0834568). Niniejszy wynalazek obejmuje także immunologicznie funkcjonalne odpowiedniki lub skrócone formy takich białek (jak określono powyżej).
Przedstawiciele rodziny białka wiążącego cholinę zostali pierwotnie zidentyfikowani jako białka pneumokokowe, które można oczyszczać przez chromatografię powinowactwa do choliny. Wszystkie białka wiążące cholinę są niekowalencyjnie związane z ugrupowaniami fosforylocholiny kwasu tejchowego ze ściany komórkowej oraz z kwasem lipotejchowym związanym z błonami. Strukturalnie posiadają one kilka wspólnych obszarów w całej rodzinie, chociaż właściwa natura białek (sekwencja aminokwasowa, długość itp.) może być różna. Zasadniczo, białka wiążące cholinę obejmują obszar na końcu N (N), obszary konserwowanych powtórzeń (R1 i/lub R2), obszar bogaty w prolinę (P) oraz konserwowany region wiążący cholinę (C) zbudowany z wielu powtórzeń, które obejmują średnio połowę białka. Stosowana w tym zgłoszeniu „rodzina białka wiążącego cholinę (Cbp) jest wybrana z grupy składającej się z białek wiążących cholinę jak określono w WO 97/41151, PbcA, SpsA, PspC, CbpA, CbpD i CbpG. CbpA jest ujawnione w WO 97/41151. CbpD i CbpG są ujawnione w WO 00/29434. PspC jest ujawnione w WO 97/09994. PbcA jest ujawnione w WO 98/21337. Korzystnie białka wiążące cholinę są wybrane z grupy składającej się z CbpA, PbcA, SpsA i PspC.
Jeśli Cbp jest dodatkowym wykorzystywanym białkiem może ono być skróconym Cbp, przy czym „Cbp jest określone powyżej a „skrócone odnosi się do białek, które straciły 50% lub więcej obszaru wiążącego cholinę (C). Korzystnie białka takie tracą cały obszar wiążący cholinę. Bardziej korzystnie takie skrócone białka straciły (i) obszar wiążący cholinę i (ii) także fragment połowy N terminalnej białka, przy czym pozostał co najmniej jeden powtórzony obszar (R1 lub R2). Jeszcze bardziej korzystnie skrócone białko posiada 2 obszary (R1 i R2). Przykładami takich korzystnych wykonań są NR1xR2 i R1xR2 jak zilustrowano w WO 99/51266 lub WO 99/51188, chociaż, inne białka wiążące cholinę, które straciły podobny obszar wiążący cholinę są także rozpatrywane w zakresie niniejszego wynalazku.
Białka chimerowe skrócone Cbp - skrócone Lyt (lub fuzje) mogą także być użyte w szczepionce według wynalazku. Korzystnie obejmują one NR1xR2 (lub R1xR2) z Cbp i fragment końca C (Cterm, tzn., który stracił domeny wiążące cholinę) z Lyt (np. LytCterm lub Sp91Cterm). Bardziej korzystnie Cbp jest wybrany z grupy złożonej z CbpA, PbcA, SpsA i PspC. Jeszcze bardziej korzystnie jest CbpA. Korzystnie Lyt jest LytC (określany również jako Sp91).
Także można użyć skrócone białka PspA lub PsaA, które straciły domenę wiążącą cholinę (C) i są wyrażane w fuzji z Lyt. Korzystnie Lyt jest LytC.
Korzystne kombinacie białek pneumokokowych dla celów niniejszego wynalazku
Korzystne połączenia białek według wynalazku są wybrane z 2 lub większej liczby (3 lub 4) różnych kategorii takich jak białka posiadające motyw sekwencji sygnałowej typu II LXXC (gdzie X jest dowolnym aminokwasem, np. rodzina z triadą histydynową (Pht)), białka wiążące cholinę (Cbp), białka posiadające motyw sekwencji sygnałowej typu I (np. Sp101), białka posiadające motyw LPXTG (gdzie X jest dowolnym aminokwasem, np. Sp128, Sp130), toksyny (np. Ply) itd. Korzystnymi przykładami w tych kategoriach (lub motywach) są białka wspomniane powyżej lub ich immunologicznie funkcjonalne odpowiedniki. Korzystnymi połączeniami kategorii są toksyna + Pht, toksyna + Cbp, Plit + Cbp i toksyna + Pht + Cbp.
PL 210 198 B1
Korzystnie pożyteczne połączenia zawierają ale nie wyłącznie PhtD + NR1xR2, PhtD + NR1xR2-Sp91Cterm białka chimerowe lub fuzyjne, PhtD + Ply, PhtD + Sp128, PhtD + PsaA, PhtD + PspA, PhtA + NR1xR2, PhtA + NR1xR2-Sp91 Cterm białka chimerowe lub fuzje, PhtA + Ply, PhtA + Sp128, PhtA + PsaA, PhtA + PspA, NR1xR2 + LytC, NR1xR2 + PspA, NR1xR2 + PsaA, NR1xR2 + Sp128, R1xR2 + LytC, R1xR2 + PspA, R1xR2 + PsaA, R1xR2 + Sp128, R1xR2 + PhtD, R1xR2 + PhtA. Korzystnie NR1xR2 (lub R1xR2) jest z CbpA lub PspC. Bardziej korzystnie jeśli jest z CbpA.
Szczególnie korzystne połączenie białek pneumokokowych obejmuje Ply (lub jego skrócony czy immunologicznie funkcjonalny odpowiednik) + PhtD (lub jego skrócony czy też immunologicznie funkcjonalny odpowiednik) + NR1xR2 (lub R1xR2). Korzystnie NR1xR2 (lub R1xR2) jest z CbpA lub PspC. Bardziej korzystnie jest z CbpA.
Bez zamiaru wiązania z jakąkolwiek teorią białko pneumokokowe (lub połączenia opisane powyżej) w kompozycji według wynalazku może pomóc indukować odpowiedź zależną od komórek T wobec choroby pneumokokowej - wymaganą zwłaszcza w ochronie przeciw zapaleniu płuc - współdziałającą z humoralną częścią układu odpornościowego w zapobieganiu inwazji pneumokoków i stymulowaniu procesu opsonofagocytozy. Dalszą korzyścią włączenia antygenu białkowego jest prezentacja dalszych antygenów wobec procesu opsonofagocytozy.
Zatem w wykonaniu według wynalazku dostarczana jest szczepionka przeciw Streptococcus pneumoniae obejmująca pneumokokową skoniugowaną szczepionkę polisacharydową obejmującą antygeny polisacharydowe pochodzące co najmniej od czterech serotypów, korzystniej co najmniej 7 serotypów, bardziej korzystnie 11 serotypów i co najmniej z jednym, ale korzystnie z 2, 3 lub 4 biał kami Streptococcus pneumoniae wybranymi z grupy obejmującej PhtA, PhtD, PhtB i PhtE (lub połączeń pneumokokowych białek jak opisano powyżej). Korzystnie jednym z białek jest PhtA (lub jego immunologicznie funkcjonalny odpowiednik). Bardziej korzystnie jedno z białek stanowi PhtD (lub jego immunologicznie funkcjonalny odpowiednik).
Jak wspomniano powyżej, problemem związanym z polisacharydowym podejściem do szczepionki jest fakt, że polisacharydy per se są słabymi immunogenami. Aby ominąć ten problem, polisacharydy mogą być skoniugowane z białkami nośnikowymi, które pomagają biernym komórkom T. Korzystne jest zatem, aby polisacharydy wykorzystywane według wynalazku były połączone z takimi białkami nośnikowymi. Przykłady takich nośników stosowanych obecnie powszechnie do wytwarzania immunogenów polisacharydowych obejmują toksoid błoniczy i tężcowy (odpowiednio DT, DT CRJVI197 i TT) hemocjaninę skał oczepu (KLH), OMPC z N. meningitidis oraz oczyszczona biał kowa pochodna tuberkuliny (PPD).
Korzystnym nośnikiem dla kompozycji immunogennych (lub szczepionek) opartych na pneumokokowym polisacharydzie jest białko D z Haemophilus influenzae (EP 594610-B) lub jego fragmenty. Fragmenty odpowiednie do zastosowania obejmują epitopy komórek T pomocniczych. W szczególności fragment białka D korzystnie będzie zawierał 1/3 końca N z białka. Nośnik z białka D jest zaskakująco przydatny jako nośnik w szczepionkach, w których skoniugowanych jest wiele polisacharydowych antygenów pneumokokowych. Zazwyczaj może wystąpić supresja epitopu jeśli ten sam nośnik jest stosowany dla każdego polisacharydu. Zaskakująco, twórcy niniejszego wynalazku ujawnili, że białko D jest szczególnie stosowne do zminimalizowania skutków takiej supresji epitopu w szczepionkach kombinowanych. Jeden lub większą liczbę połączonych pneumokokowych polisacharydów można korzystnie skoniugować z białkiem D, a korzystnie wszystkie antygeny są skoniugowane z białkiem D w takiej kombinowanej szczepionce.
Dalszym korzystnym nośnikiem dla polisacharydu pneumokokowego jest samo białko pneumokokowe (jak określono powyżej w rozdziale „Pneumokokowe białka według wynalazku).
Polisacharydy można łączyć z białkiem nośnikowym znaną metodą (przykładowo, podaną przez Likhite, w opisie patentowym USA nr 4372945 i Armor i wsp., w patencie USA 4474757). Korzystnie, przeprowadzana jest CDAP (WO 95/08348).
Korzystnie stosunek (wagowo:wagowy) białko:polisacharyd w koniugantach wynosi 0,3:1 do 1:1, bardziej korzystnie 0,6:1 do 0,8:1 i najkorzystniej 0,7:1.
Szczepionki według wynalazku korzystnie zawierają adiuwanty. Stosowne adiuwanty obejmują sole glinu, takie jak żel wodorotlenku glinu (alum) lub fosforan glinu, lecz także sole wapnia, magnezu, żelaza lub cynku lub mogą być nierozpuszczalnymi zawiesinami acetylowanej tyrozyny lub acetylowanych cukrów, kationowo i anionowo derywatyzowane polisacharydy lub polifosfazeny.
PL 210 198 B1
Korzystnie adiuwant jest wybrany jako uprzywilejowany induktor odpowiedzi typu Th1 w celu wzmocnienia części odpowiedzi immunologicznej za pośrednictwem komórek.
Adiuwanty Th1 według wynalazku
Wysokie poziomy cytokin typu Th1 przyczyniają się do indukcji komórkowej odpowiedzi immunologicznej na dany antygen, podczas gdy wysokie poziomy cytokin typu Th2 przyczyniają się do indukcji humoralnej odpowiedzi immunologicznej na dany antygen.
Ważne jest, aby pamiętać, że rozróżnienie odpowiedzi immunologicznej Th1 i Th2 nie jest całkowite. W rzeczywistości osobnik będzie utrzymywał odpowiedź immunologiczną, która jest opisana jako głównie Th1 lub głównie Th2. Chociaż, często wygodnie jest rozpatrywać rodziny cytokin w znaczeniu opisanym dla mysich klonów komórek T CD4 +ve przez Mosmann i Coffman (Mosmann, T.R. i Coffman, R.L. (1989) Th1 and Th2 cells: different patterns of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Reyieyw of Immunology, 7, str. 145-173). Tradycyjnie, odpowiedzi typu
Th1 są związane z wytwarzaniem przez limfocyty T INF-γ i cytokin IL-2. Inne cytokiny, takie jak IL-12, często bezpośrednio związane z indukcją odpowiedzi immunologicznych typu Th1 nie są wytwarzane przez komórki T. Dla kontrastu odpowiedzi typu Th2 są związane z wydzielaniem IL-4, IL-5, IL-6, IL-10. Stosowne systemy adiuwanta, które pobudzają głównie odpowiedź Th1 obejmują: monofosforylolipid A lub jego pochodną w szczególności 3-de-O-acylowany monofosforylolipid A (3D-MPL) (opis jego wytwarzania przedstawiono w GB 222021 A) oraz kombinację monofosforylolipidu A, w szczególności 3-de-O-acylowanego monofosforylolipidu A, z solą glinu (przykładowo fosforanu glinu lub wodorotlenku glinu) lub emulsją olej w wodzie. W takich kombinacjach, antygen i 3D-MPL znajdują się w tych samych określonych strukturach, co pozwala na skuteczniejsze dostarczanie sygnałów antygenowych i immunostymulujących. Badania pokazały, że 3D-MPL są zdolne dodatkowo do wzmacniania immunogenności antygenu zaadsorbowanego na alumie [Thoelen i wsp. Vaccine (1998) 16:708-14; EP 689454-B1].
System wzmacniający wymaga kombinacji lipidu monofosforylowego A i pochodnej saponinowej, w szczególności kombinacji QS21 i 3D-MPL jak ujawniono w WO 94/00153 lub kompozycji mniej reaktywnej gdzie QS21 jest wyciszany cholesterolem, jak ujawniono w WO 96/33739.
Szczególnie silny preparat adiuwanta wymagający QS21, 3D-MPL i tokoferolu w emulsji woda w oleju opisano w WO 95/17210 i jest on korzystnym preparatem.
Korzystnie szczepionka dodatkowo obejmuje saponinę, bardziej korzystnie QS21. Preparat może także obejmować emulsję olej w wodzie i tokoferol (WO 95/17210).
Niniejszy wynalazek dostarcza także sposobu wytwarzania preparatów szczepionki obejmujący mieszanie białka według niniejszego wynalazku z farmaceutycznie dopuszczoną zaróbką taką jak 3D-MPL.
Korzystnymi induktorami odpowiedzi Th1 są także oligonukleotydy zawierające niemetylowane CpG (WO 96/02555) i są one odpowiednie do zastosowania według niniejszego wynalazku.
Szczególnie korzystne kompozycje według wynalazku obejmują jeden lub większą liczbę skoniugowanych polisacharydów pneumokokowych, jedno lub większą liczbę białek pneumokokowych oraz adiuwanta Th1. Bez zamiaru wiązania z jakąkolwiek teorią indukcja odpowiedzi komórkowej poprzez białko pneumokokowe (jak opisano powyżej) oraz współdziałanie pomiędzy dwoma ramionami układu immunologicznego mogą być wspomagane przez zastosowanie adiuwanta Th1, w wyniku czego uzyskiwana jest szczególnie skuteczna szczepionka ogólnie przeciw pneumokokowej chorobie, a w szczególności przeciw pneumokokowemu zapaleniu płuc u osób w podeszłym wieku.
W dalszym aspekcie według niniejszego wynalazku dostarczany jest immunogen lub szczepionka jak tu opisano do zastosowania w medycynie.
Niniejszym opisano sposób zapobiegania lub łagodzenia objawów zapalenia płuc u starszych ludzi (+55 lat) obejmujący podawanie bezpiecznej i skutecznej ilości szczepionki, jak tu opisano, obejmującej antygen polisacharydowy Streptococcus pneumoniae i białko pneumokokowe wybrane z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE i ewentualnie adiuwanta Th1, dla omawianych starszych pacjentów.
Niniejszym opisano również sposób zapobiegania lub łagodzenia objawów zapalenia ucha środkowego u niemowląt (do 18 miesiąca) lub dzieci młodszych (typowo 18 miesięcy do 5 roku życia) obejmujący podawanie bezpiecznej i skutecznej ilości szczepionki obejmującej antygen polisacharydowy Streptococcus pneumoniae i antygen białkowy Streptococcus pneumoniae wybrany z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE, oraz ewentualnie adiuwanta Th1, dla omawianych niemowląt lub dzieci młodszych.
PL 210 198 B1
Korzystnie w sposobach tych, jak opisano powyżej, antygen polisacharydowy jest obecny jako koniugat polisacharydu z białkiem.
Preparaty szczepionki według wynalazku
Preparaty szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być wykorzystane do ochrony lub leczenia ssaków wrażliwych na zakażenie, za pomocą zastosowania wyżej wymienionej szczepionki drogą systemową lub śluzówkową. Zastosowania te mogą obejmować iniekcje drogą domięśniową, dootrzewnową śródskórną lub podskórną; lub podawanie na śluzówki jamy ustnej/przewodu pokarmowego oraz układu oddechowego i moczowo-płciowego. Donosowe podawanie szczepionek w leczeniu zapalenia płuc lub zapaleniu ucha środkowego jest bardziej korzystne (jako że zapobieganie nosogardłowemu nosicielstwu pneumokoków może być bardziej efektywne, osłabiając w ten sposób zakażenie na jego najwcześniejszym etapie). Chociaż szczepionka według wynalazku może być podawana w pojedynczej dawce, jej składniki mogą również być podawane jednocześnie w tym samym czasie lub w różnym czasie (na przykład polisacharydy pneumokokowe mogą być podawane osobno w tym samym czasie lub 1-2 tygodnie po podaniu białka bakteryjnego, będącego składnikiem szczepionki dla optymalnej koordynacji odpowiedzi immunologicznych, odnoszących się do każdej z nich). Przy jednoczesnym podawaniu może być obecny dowolny adiuwant Th1 w jakimkolwiek lub we wszystkich różnych podawaniach, jednakże jest korzystnie jeśli jest obecny w kombinacji z bakteryjną komponentą białkową szczepionki. Dodatkowo do pojedynczej drogi podania, mogą być wykorzystywane 2 różne drogi podania. Na przykład, każdy z wirusowych antygenów może być podawany ID (śródskórnie), podczas gdy białka bakteryjne mogą być podawane IM (domięśniowo) lub IN (donosowo). Polisacharydy mogą być podawane IM (lub ID) i białka bakteryjne mogą być podawane IN (lub ID). Dodatkowo, szczepionki według wynalazku mogą być podawane IM w pierwszych dawkach i IN w dawkach przypominających.
Ilość koniugowanego antygenu w każdej dawce szczepionki jest wybierana na podstawie ilości indukującej odpowiedź immuno-ochronną bez znaczących objawów niepożądanych w typowych szczepionkach. Taka ilość jest różna zależnie od swoistego immunogenu, który jest stosowany i od sposobu w jaki jest on prezentowany. Ogólnie oczekuje się, że każda dawka będzie zawierać 0,1-100 μg polisacharydu, korzystnie 0,1-50 μg, korzystniej 0,1-10 μg, z czego 1-5 μg jest najbardziej korzystnym zakresem.
Zawartość antygenów białkowych w szczepionce będzie typowo w zakresie 1-100 μg, korzystnie 5-50 μg, najbardziej typowo 5-25 μg.
Optymalna ilość składników dla danej szczepionki może być sprawdzona w standardowych badaniach związanych z obserwacjami odpowiednich odpowiedzi immunologicznych u badanych osobników. Po początkowym szczepieniu osobniki mogą otrzymać jedną lub kilka przypominających immunizacji, odpowiednio rozłożonych w czasie.
Preparat szczepionki jest ogólnie opisany w Vaccine Design („The subunit and adjuvant approach (wyd. Powell M.F. & Newmann M.J.) (1995) Plenum Press New York). Hermetyzacja wewnątrz liposomów jest opisana przez Fullertona, patent USA 4235877.
Chociaż szczepionki według niniejszego wynalazku mogą być podawane każdą drogą, śródskórne (ID) podawanie opisanych szczepionek stanowi jedno z wykonań według niniejszego wynalazku. Skóra ludzka obejmuje zewnętrzny rogowy naskórek, nazywany warstwą rogową naskórka, która przykrywa naskórek. Pod tym naskórkiem jest warstwa nazywana skórą właściwą, która przykrywa z kolei tkanki podskórne. Naukowcy wykazali, że taka śródskórna iniekcja szczepionki, zwłaszcza w warstwę skóry właściwej, pobudza odpowiedź immunologiczną, która również może być związana z licznymi dodatkowymi korzyściami. Szczepienie śródskórne opisanymi tutaj szczepionkami stanowi korzystną cechę dla rozwiązań według niniejszego wynalazku.
Konwencjonalna technika iniekcji śródskórnej, „procedura mantoux, obejmuje etapy czyszczenia skóry, następnie naciągania jej jedną ręką i umieszczania końca wąskiej igły (rozmiar 26-31) zwróconej do góry pod kątem 10-15°. Kiedy skos igły zostaje umieszczony, światło igły jest opuszczane i dalej wysuwane naprzód podczas, gdy dostarczany lekki nacisk podnosi ją ponad skórę. Płyn jest następnie wstrzykiwany bardzo powoli i w ten sposób tworzy pęcherzyk lub wypukłość na powierzchni skóry, następnie powoli wycofuje się igłę.
Ostatnio zostały opisane przyrządy, które są zaprojektowane specyficznie do podawania środków płynnych do lub przez skórę, na przykład przyrządy opisane w WO 99/34850 i EP 1092444, również przyrządy wstrzykujące opisane na przykład w WO 01/13977; patent USA 5480381, patent USA
PL 210 198 B1
5599302, patent USA 5334144, patent USA 5993412, patent USA 5649912, patent USA 5569189, patent USA 5704911, patent USA 5383851, patent USA 5893397, patent USA 5466220, patent USA 5339163, patent USA 5312335, patent USA 5503627, patent USA 5064413, patent USA 5520,639, patent USA 4596556, patent USA 4790824, patent USA 4941880, patent USA 4940460, WO 97/37705 i WO 97/13537. Alternatywne metody podawania śródskórnego preparatów szczepionki mogą obejmować konwencjonalne strzykawki i igły lub przyrządy zaprojektowane do balistycznego dostarczania stałych szczepionek (WO 99/27961), lub plastry przezskórne (WO 97/48440; WO 98/28037); lub stosowane na powierzchni skóry (śródskórne lub przezskórne podawanie WO 98/20734; WO 98/28037).
Kiedy szczepionki według wynalazku są podawane doskórnie lub bardziej specyficznie do warstwy skóry właściwej, szczepionka znajduje się w małej objętości płynu, w szczególności w objętości pomiędzy około 0,05 ml i 0,2 ml.
Zawartość antygenów w skórnych lub śródskórnych szczepionkach według wynalazku może być podobna do konwencjonalnych dawek ustalonych dla domięśniowych szczepionek (zobacz powyżej). Jednakże jest cechą szczepionek skórnych lub śródskórnych, że mogą być wytwarzane „w niskiej dawce. Zatem antygeny białkowe w szczepionkach „o niskiej dawce są korzystnie obecne w tak małej ilości jak 0,1 do 10 μg, korzystnie 0,1 do 5 μg na dawkę, a antygeny polisacharydowe (korzystniej koniugowane) mogą być obecne w zakresie 0,01-1 μg, korzystniej pomiędzy 0,01 a 0,5 μg polisacharydu na dawkę.
Użyty tu termin „śródskórne podawanie oznacza podawanie szczepionki w obszar skóry właściwej. Jednakże szczepionka nie musi być koniecznie podawana wybiórczo do warstwy skóry właściwej. Skóra właściwa jest warstwą w skórze zlokalizowaną pomiędzy około 1,0 i 2,0 mm od powierzchni skóry ludzkiej, ale istnieje pewna różnorodność pomiędzy osobnikami i pomiędzy różnymi częściami ciała. Ogólnie można się spodziewać, że osiągnie się warstwę skóry właściwej na wysokości 1,5 mm poniżej powierzchni skóry. Skóra właściwa jest zlokalizowana pomiędzy warstwą rogową naskórka i naskórkiem na powierzchni a warstwą podskórną poniżej. Zależnie od sposobu podawania szczepionka może być ostatecznie umieszczona jedynie lub przede wszystkim w skórze właściwej lub może być ostatecznie dystrybuowana w naskórku i w skórze właściwej.
Niniejszy wynalazek rozważa również kombinację szczepionek, które chronią przeciwko różnym patogenom. Wiele pediatrycznych szczepionek jest obecnie dostępnych jako szczepionki kombinowane, aby w ten sposób ograniczyć liczbę iniekcji, które dzieci muszą otrzymać. Zatem w pediatrycznych szczepionkach inne antygeny z innych patogenów mogą być uwzględnione w szczepionkach według wynalazku. Na przykład, szczepionki według wynalazku mogą być formułowane z (lub podawane osobno, ale w tym samym czasie) dobrze znaną trzywalentną kombinowaną szczepionką obejmującą toksoid błoniczy (DT), toksoid tężcowy (TT) i komponenty krztuścowe [typowo odtoksyczniony toksoid krztuścowy (PT) i włóknista hemaglutynina (FHA) z dowolną pertaktyną (PRN) i/lub aglutyniną 1+2], na przykład handlowa szczepionka INFANRIX-DTPa™ (SmithKlineBeecham Biologicals), zawierająca antygeny DT, TT, PT, FHA i PRN, lub ze składnikami całej komórki krztuścowej, na przykład handlowy Tritarix firmy SmithKlineBeecham Biologicals. Kombinowana szczepionka może również obejmować inny antygen, taki jak powierzchniowy antygen wirusa zapalenia wątroby typu B (HbsAg), antygeny wirusa Polio (na przykład inaktywowany trzywalentny wirus Polio - IPV), białka błony zewnętrznej Moraxella catarrhalis, białka nietypowalne (bezotoczkowe) H. influenzae, białka błony zewnętrznej N. meningitidis B.
Przykłady korzystnych antygenów białkowych Moraxella catarrhalis, które mogą być zawarte w kombinowanej szczepionce (zwłaszcza do zapobiegania zapaleniu ucha środkowego) to: OMP106
[WO 97/41731 (Antex) i WO 96/34960 (PMC)]; OMP21; LbpA i/lub LbpB [WO 98/55606 (PMCP]; TbpA i/lub TbpB [WO 97/13785 i WO 97/32980 (PMC)]; CopB (Helminen ME i wsp. (1993) Infect. Immun. 61: 2003-2010]; UspA1 i/lub UspA2 [WO 93/03761 (University of Texas)]; OmpCD; HasR (PCT/EP99/03824; PilQ (PCT/EP99/03823); OMP85 (PCT/EPOO/01468); lipo06 (GB 9917977.2); lipo10 (GB 9918208.1); lipo11 (GB 9918302.2); lipo18 (GB 9918038.2); P6 (PCT/EP99/03038); D15 (PCT/EP99/03822); OmpA1 (PCT/EP99/06781); Hly3 (PCT/EP99/03257) i OmpE. Przykłady antygenów nietypowalnych Haemophilus influenzae, które mogą być zawarte w kombinacji szczepionki (zwłaszcza do zapobiegania zapaleniu ucha środkowego) obejmują: białko fimbrynowe [(US 5766608 - Ohio State Research Foundation)] i fuzje obejmujące jego peptydy [na przykład fuzje peptydu LBl(f);
PL 210 198 B1
US 5843464 (OSU) lub WO 99/64067]; OMP26 [WO 97/01638 (Cortecs)]; P6 [EP 281673 (State University of New York)]; TbpA i/lub TbpB; Hia; Hsf; Hin47; Hif; Hmw1; Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15 (WO 94/12641); białko D (EP 594610); P2 i P5 (WO 94/26304).
Inne rozważane kombinacje to pneumokokowe PS i białko według wynalazku w kombinacji z antygenami wirusowymi, na przykład z wirusem grypy (atenuowanym, rozszczepionym lub podzielonym na jednostki [na przykład powierzchniowe glikoproteiny neuraminidazy (NA) i hemaglutynina (HA). Zobacz, na przykład, Chaloupka I. i wsp., Eur, Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1996, 15: 121-127], RSV (np. antygeny F i G lub fuzje F/G, zobacz np. Schmidt A. C. i wsp., J Virol, Maj 2001, str. 45944603), PIV3 (np. białka HN i F, zobacz Schmidt i wsp., powyżej). Varicella (np. atenuowana, glikoproteiny I-V, itd.) oraz każda (lub wszystkie) komponenty MMR (odra, świnka, różyczka).
Korzystna pediatryczna kombinacja szczepionki rozważana według wynalazku dla ogólnego leczenia i zapobiegania zapaleniu ucha środkowego obejmuje: jeden lub więcej antygen(ów) polisacharydowych Streptococcus pneumoniae (korzystnie skoniugowane z białkiem D), jedno lub więcej białek pneumokokowych wybranych z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE (lub ich immunologicznie funkcjonalne odpowiedniki) i jeden lub więcej powierzchniowo prezentowanych antygenów z Moraxella catarrhalis i/lub nietypowalnych Haemophilus influenzae. Białko D może być korzystnie używane jako białko nośnikowe dla polisacharydów pneumokokowych, aby pokonać problemy supresji epitopów (jak wspomniano powyżej) i ponieważ samo jest immunogenem zdolnym do ochrony za pośrednictwem komórek B przed nietypowalnym H. influenzae (ntHi). Antygeny Moraxella catarrhalis i nietypowalnych Haemophilus influenzae mogą być zawarte w szczepionce w formie podjednostki lub mogą być dodane jako antygeny obecne na powierzchni pęcherzyków (bąbelków) błony zewnętrznej pochodzących od bakterii.
Korzystnie kompozycje antygenowe (i szczepionki) opisane tutaj wcześniej są liofilizowane do czasu, w którym będą użyte, kiedy to są na poczekaniu odtwarzane w rozpuszczalniku. Bardziej korzystnie są one liofilizowane w obecności 3D-MPL i są na poczekaniu odtwarzane w roztworze soli fizjologicznej. Alternatywnie, białko i polisacharyd mogą być przechowywane osobno w zestawie szczepionkowym (albo jedna albo obie komponenty są liofilizowane), komponenty są odtwarzane i albo mieszane przed użyciem, albo podawane osobno pacjentowi. Adiuwant Th1 (korzystnie 3D-MPL) może być obecny albo w jednej albo w dwóch komponentach.
Liofilizacja szczepionek jest dobrze znana w dziedzinie wynalazku. Typowo płynna szczepionka jest osuszana w formie zamrożonej w obecności czynników zapobiegających zbrylaniu na przykład cukrów, takich jak sacharoza lub laktoza (obecnych w początkowym stężeniu 10-200 mg/ml). Typowo liofilizacja składa się z serii etapów, na przykład cykl rozpoczyna się w 69°C, stopniowo temperatura jest obniżana do -24°C w ciągu 3 godzin, następnie utrzymywana przez 18 godzin, następnie stopniowo podwyższana do -16°C w ciągu 1 godziny, następnie temperatura ta jest utrzymywana przez 6 godzin, następnie stopniowo podwyższana do +34°C w ciągu 3 godzin i ostatecznie ta temperatura jest utrzymywana przez 9 godzin.
Liofilizowanie kompozycji daje w rezultacie bardziej stabilną kompozycję (na przykład zabezpiecza to przed zniszczeniem antygenów polisacharydowych). Metoda ta jest również zadziwiająco odpowiedzialna za wyższe miano przeciwciał przeciw polisacharydom pneumokokowym. Wykazano, że było to szczególnie korzystne dla koniugatów PS 6B. Innym aspektem wynalazku jest zatem liofilizowana antygenowa kompozycja obejmująca koniugat PS 6B z adiuwantem 3D-MPL (korzystnie pozbawionym adiuwantów na bazie glinu) i pneumokokowe białko wybrane z grupy obejmującej: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE.
Przykłady
P r z y k ł a d 1
Polisacharyd otoczkowy S. pneumoniae
11-walentna szczepionka - kandydat zawiera polisacharydy otoczkowe serotypów 1,3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F i 23F, które wytworzono zasadniczo jak opisano w EP 72513. Każdy polisacharyd jest aktywowany i derywatyzowany przy użyciu reakcji chemicznej z CDAP (WO 95/08348) i koniugowany z białkiem nośnikowym. Wszystkie polisacharydy są koniugowane w ich natywnej formie, z wyjątkiem serotypu 3, (którego rozmiar był zredukowany, aby obniżyć jego lepkość).
Białko nośnikowe:
Wybrane białko nośnikowe jest zrekombinowanym białkiem D (PD) nietypowalnego Haemophilus influenzae wyrażonym w E. coli.
PL 210 198 B1
Ekspresja białka D
Białko D z Haemophilus influenzae
Konstrukt genetyczny do ekspresji białka D
Materiały wyjściowe
DNA kodujący białko D
Białko D jest silnie konserwowane u H. influenzae wszystkich serotypów i szczepów nietypowalnych. Wektor pHIC348 zawierający sekwencję DNA kodującą cały gen białka D otrzymano od dr A. Forsgrena, Department of Medical Microbiology, University of Lund, Malmo General Hospital, Malmo, Szwecja. Sekwencja DNA białka D była opublikowana przez Janson i wsp. (1991) Infect. Immun. 59:119-125.
Wektor ekspresyjny pMG1
Wektor ekspresyjny pMG1 jest pochodną pBR322 (Gross i wsp., 1985), do którego wprowadzono elementy kontroli transkrypcji i translacji dla wstawianych obcych genów pochodzące z bakteriofagaλ (Shatzman i wsp., 1983). Dodatkowo, gen nadający oporność na ampicylinę wymieniono na gen nadający oporność na kanamycynę.
Szczep E. coli ARS 8
Szczep E. coli ARS 8 wytworzono przez transdukcję N99 roztworem podstawowym faga P1 hodowanego pierwotnie na szczepie pochodnym SA500 (gal::TN10, lambdaKil- cI857 AH1). Szczepy N99 i SA500 są szczepami pochodzącymi z laboratorium dr Martina Rosenberga w National Institute of Health.
Wektor ekspresyjny pMG1
Do wytworzenia białka D, DNA kodujący białko sklonowano w wektorze ekspresyjnym pMG 1. Plazmid ten wykorzystuje sekwencje sygnałowe z DNA faga lambda w celu kierowania transkrypcją i translacją wprowadzonych obcych genów. Wektor zawiera starter PL, operator OL i dwa miejsca wykorzystywane (NutL i NutR) do zmniejszenia efektów polarności transkrypcji, kiedy dostarczone jest białko N (Gross i wsp., 1985). Wektory zawierające starter PL są wprowadzane do lizogenicznej E. coli jako gospodarza dla stabilizacji plazmidu. Szczepy lizogenicznego gospodarza zawierają DNA faga lambda, defektywnego w procesie replikacji, w postaci zintegrowanej z genomem (Shatzman i wsp., 1983). Chromosomalny DNA faga lambda kieruje syntezą białka represora cl, który wiąże się z operatorem OL z wektora i uniemożliwia wiązanie się polimerazy RNA do startera PL i tym samym transkrypcję wstawionego genu. Gen cl ze szczepu ekspresyjnego AR58 zawiera wrażliwe na temperaturę przesunięcie tak, że PL kierujący transkrypcją można regulować zmianą temperatury, tzn. podniesienie temperatury hodowli inaktywuje represor i rozpoczyna się synteza obcego białka. Taki system ekspresji pozwala na kontrolowanie syntezy obcych białek w szczególności tych, które mogą być toksyczne dla komórki (Shimataka i Rosenberg, 1981).
Szczep E. coli AR58
Lizogeniczny szczep E. coli AR58 używany do wytwarzania białka D będącego nośnikiem jest pochodną standardu NIH E. coli K12 szczep N99 (F su galK2, lacZ thr). Zawiera on defektywnego lizogennego faga lambda (gal::TN10 lambdaKil cI857 ΔΗ1). Fenotyp Kil zapobiega wyłączaniu syntezy makrocząsteczek gospodarza. Mutacja cI857 nadaje wrażliwość na temperaturę receptorowi cl. Delecja ΔΗΙ usuwa prawy operon faga lambda oraz loci gospodarza bio, uvr3 i ch1A. Szczep AR58 wytworzono przez transdukcję N99 roztworem podstawowym faga P1 hodowanego pierwotnie na szczepie pochodnym SA500 (gal::TN10, lambdaKil cI857 ΔΗΙ). Wprowadzenie defektywnego lizogenu do N99 selekcjonowano tetracykliną na podstawie obecności transpozonu TN10 kodującego oporność na tetracyklinę w przylegającym genie galE.
Konstrukcja wektora pMGMDPPrD
Wektor pMG1 zawierający gen kodujący niestrukturalne białko S1 wirusa grypy (pMGNS1) wykorzystano do konstrukcji pMGMDPPrD. Gen białka D amplifikowano przy użyciu PCR na matrycy wektora pHIC348 (Janson i wsp., 1991) stosując startery zawierające miejsca restrykcyjne Ncol i Xbal odpowiednio na końcach 5' i 3'. Fragment NcoI/XbaI wprowadzono do pMGNS1 pomiędzy Ncol i Xbal wytwarzając w ten sposób białko zawierające na końcu N 81 aminokwasów z białka NS1, a za nimi białko PD. Wektor oznaczono jako pMGNS1PrD.
Na bazie konstruktu opisanego powyżej wytworzono końcowy konstrukt do wytwarzania białka D. Z pMGNS1PrD usunięto fragment BamHI/BamHI. Taka hydroliza DNA usuwa region kodujący NS1 z wyjątkiem pierwszych trzech reszt na końcu N. Po ponownej ligacji wektora wytworzono gen kodujący fuzję białkową o następującej sekwencji na końcu N:
PL 210 198 B1
---MDP SSHSSNMANT--NS1 Białko D
Białko D nie zawiera peptydu liderowego lub cysteiny na końcu N, do której normalnie dołączone są łańcuchy lipidowe. Białko nie jest zatem ani wydzielane do peryplazmy, ani lipidowane i pozostaje w cytoplazmie w formie rozpuszczalnej.
Końcowy konstrukt pMG-MDPPrD wprowadzono do szczepu gospodarza AR58 za pomocą szoku cieplnego w 37°C. Bakterie zwierające plazmid selekcjonowano w obecności kanamycyny. Obecność wprowadzonego DNA kodującego białko D wykazano poprzez trawienie wyizolowanego DNA plazmidowego za pomocą wybranych endonukleaz. Zrekombinowany szczep E. coli określono jako ECD4.
Ekspresja genu białka D znajduje się pod kontrolą startera PI/operatora OI, faga lambda. Szczep gospodarza AR58 zawiera w genomie gen kodujący temperaturo-wrażliwy cl, który blokuje ekspresję z PL faga lambda w niskiej temperaturze dzięki wiązaniu do OL. Kiedy podniesiona jest temperatura cl jest uwalniany z OL i wytwarzane jest białko D. Po zakończeniu fermentacji komórki są zagęszczane i mrożone.
Ekstrakcję z zebranych komórek i oczyszczanie białka D prowadzono w następujący sposób. Zamrożona hodowla komórek jest rozmrażana i zawieszana w roztworze do otwierania komórek (bufor cytrynianowy pH 6,0) do końcowego OD650=60. Zawiesina jest przepuszczana dwukrotnie przez homogenizator wysokociśnieniowy przy P = 1000 barów. Homogenat hodowli komórkowej jest klarowany przez wirowanie i resztki komórkowe są usuwane przez filtrację. W pierwszym etapie oczyszczania przefiltrowany lizat jest nanoszony na kolumnę do chromatografii kationowymiennej (SP Sepharose Fast Flow). PD wiąże się ze złożem żelowym dzięki oddziaływaniom jonowym i jest wymywane za pomocą skokowo wzrastającej siły jonowej buforu do wymywania.
W drugim etapie oczyszczania zanieczyszczenia są zatrzymywane na złożu anionowymiennym (Q Sepharose Fast Flow). PD nie wiąże się z żelem i może być zbierane z eluatu.
W obu etapach z chromatografią kolumnową zbieranie frakcji jest monitorowane przez OD. Eluat z anionowymiennej chromatografii kolumnowej zawierający białko D jest zatężany przez ultrawirowanie.
Roztwór zawierający białko D po ultrawirowaniu jest ostatecznie przepuszczany przez membranę 0,2 μm.
Chemia:
Chemia aktywacji i sprzęgania
Warunki aktywacji i sprzęgania są specyficzne dla każdego polisacharydu. Są one podane w tabeli 1. Natywny polisacharyd (z wyjątkiem PS3) rozpuszczano w 2M NaCl lub w wodzie do zastrzyków. Optymalne stężenie polisacharydu było oceniane dla wszystkich serotypów.
CDAP (CDAP/PS w stosunku 0,75 mg/ml PS) dodawano do roztworu polisacharydowego z roztworu podstawowego 100 mg/ml. 1,5 min później dodawano 0,2 M trietyloaminę do uzyskania określonego pH aktywacji. Aktywację polisacharydu prowadzono w tym pH przez 2 min w 25°C. Białko D (ilość zależna od stosunku PS/PD) dodawano do aktywowanego polisacharydu i reakcję sprzęgania prowadzono w określonym pH przez 1 godzinę. Reakcje wygaszano glicyną przez 30 min w 25°C i przez noc w 4°C.
Koniuganty oczyszczano poprzez filtrację na żelu przy użyciu kolumny do filtracji ze złożem Sephacryl 500HR gel zrównoważonej 0,2 M NaCl.
We frakcjach wymywanych określano zawartość węglowodanów i białka. Koniugaty zbierano w pule i filtrowano sterylnie na 0,22 μm membranach do sterylizacji. W preparatach białka określano stosunki PS/białka.
Charakterystyka:
Każdy koniugat charakteryzowano i jego dane umieszczono w tabeli 2. Zawartość polisacharydów ^g/ml) mierzono testem Rezorcynolowym, a zawartość białka ^g/ml) testem Lowrego. Końcowy stosunek PS/PD (w/w) określano przy pomocy stosunku stężeń. Zawartość pozostałej DMAP (ngYg PS):
Aktywacja polisacharydu przy użyciu CDAP wprowadza grupę cyjanianową do polisacharydu i uwalniana jest DMAP (4-dimetyloamino-pirydyna). Zawartość pozostałej DAMP określano specyficznym testem opracowanych w SB.
PL 210 198 B1
Zawartość wolnego polisacharydu (%):
Zawartość wolnego polisacharydu z koniugatów trzymanych w 4°C lub przechowywanych 7 dni w 37°C określano w supernatancie uzyskanym po inkubacji z przeciwciałami α-PD i wytrącaniu siarczanem amonu, oraz po których następowało wirowanie.
Do określenia ilości wolnego polisacharydu w supernatancie stosowano test ELISA α-PS/a-PS. Brak koniugatu także kontrolowano testem ELISA α-PD/a-PS. Zredukowanie ilości wolnego polisacharydu prowadziło do uzyskania ulepszonej szczepionki skoniugowanej.
Antygenowość:
Antygenowość niektórych koniugatów analizowano w teście kanapkowym ELISA, gdzie wychwytywanie i wykrywanie przeciwciał prowadzono odpowiednio z α-PS i α-PD. Zawartość wolnego białka (%):
Poziom „wolnego pozostałego białka D określono przy użyciu sposobu z traktowaniem próbki SDS. Koniugaty grzano przez 10 min w 100°C w obecności 0,1% SDS i nastrzykiwano na kolumnę filtracyjną SEC-HPLC gel (TSK 3000-PWXL). Ponieważ białko D jest dimerem, istnieje ryzyko przeszacowania poziomu „wolnego białka D z powodu rozdysocjowania struktury przez SDS.
Masa cząsteczkowa (Kav):
Masę cząsteczkową oznaczano na kolumnie filtracyjnej SEC-HPLC gel (TSK 5000-PWXL). Stabilność:
Stabilność koniugatów trzymanych w 4°C lub przechowywanych 7 dni w 37°C w mierzono na kolumnie filtracyjnej HPLC-SEC gel (TSK 6000-PWXL).
Charakterystykę 11-walentnych przedstawiono w tabeli 2.
Koniugaty białkowe można adsorbować na fosforanie glinu i zbierać w pule w celu wytworzenia ostatecznej szczepionki.
Wnioski:
Wytworzono immunogenne koniugaty, które przedstawiono jako komponenty obiecującej szczepionki. Znaleziono odpowiednie warunki CDAP do uzyskania końcowego produktu skoniugowanego polisacharydu pneumokokowego dla każdego z 11 składników.
T a b e l a 1
Specyficzne warunki aktywacji/sprzęgania/wygaszania koniugatów PS S. pneumoniae-białko D.
Serotyp | 1 | 3 ^płynne) | 4 | 5 | 6B | 7F |
Stężenie PS (mg/ml) | 2,0 | 3,0 | 2,0 | 7,5 | 5,4 | 3,0 |
Rozpuszczanie PS | NaCl 2M | NaCl 2M | H2O | H2O | NaCl 2M | NaCl 2M |
Stężenie PD (mg/ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
Początkowy stosunek PS/PD (w/w) | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 |
Stężenie CDAP (mg/mg PS) | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 |
pHa-pHc-pHq | 9,0/9,0 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 | 9,5/9,5 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 |
Serotyp | 9V | 14 | 18C | 19F | 23F |
Stężenie PS (mg/ml) | 2,5 | 2,5 | 2,0 | 4,0 | 3,3 |
Rozpuszczanie PS | NaCl 2M | NaCl 2M | H2O | NaCl 2M | NaCl 2M |
Stężenie PD (mg/ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
Początkowy stosunek PS/PD (w/w) | 1/0,75 | 1/0,75 | 1/1 | 1/0,5 | 1/1 |
Stężenie CDAP (mg/mg PS) | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 |
pHa-pHc-pHq | 8,5/8,5 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 | 10/9,5 /9,0 | 9,0/9,0 /9,0 |
PL 210 198 B1
T a b e l a 2
Specyfikacja 11-walentnej pneumokokowej szczepionki PS-PD (pierwsze numery kodu serii wskazują serotyp)
Kryteria | D01PDJ227 | D03PDJ236 | D4PDJ228 | D5PDJ235 | D6PDJ209 | |
Stosunek PS/Prot (w/w) | 1/0,66 | 1/1,09 | 1/0,86 | 1/0,86 | 1/0,69 | |
Zawartość czystego polisach. (%) < 10% | 1 | 1 | 7 | 9 | 0 | |
Zawartość czystego polisach. (%) < 15% | 8 | < 1 | 19 | 21 | 9 | |
Zawartość DMAP (ng/gg PS) <0,5 ng/gg PS | 0,2 | 0,6 | 0,4 | 1,2 | 0,3 | |
Masa cząsteczkowa (Kav) | 0,18 | 0,13 | 0,12 | 0,11 | 0,13 | |
Stabilność | bez zmian | bez zmian | bez zmian | bez zmian | bez zmian | |
D07PDJ225 | D09PDJ222 | D14PDJ202 | D18PDJ221 | D19PDJ206 | D23PDJ212 | |
Stosunek PS/Prot (w/w) | 1/0,58 | 1/0,80 | 1/0,68 | 1/0,62 | 1/0,45 | 1/0,74 |
Zawartość czystego polisach. (%) < 10% | 1 | < 1 | < 1 | 4 | 4 | 0 |
Zawartość czystego polisach. (%) < 15% | 8 | 0,3 | 3 | 21 | 10 | 12 |
Zawartość DMAP (ng/gg PS) <0,5 ng/gg PS | 0,1 | 0,6 | 0,3 | 0,2 | 0,1 | 0,9 |
Masa cząsteczkowa (Kav) | 0,14 | 0,14 | 0,17 | 0,10 | 0,12 | 0,12 |
Stabilność | bez zmian | bez zmian | bez zmian | bez zmian | bez zmian | bez zmian |
P r z y k ł a d 2
Korzystny wpływ dodania jednego lub większej liczby białek pneumokokowych według wynalazku +/- 3D-MPL na skuteczność ochronną skoniugowanej z PD 11-walentnej polisacharydowej szczepionki przeciwko pneumokokowej kolonizacji płuc u myszy
Odczyty immunologiczne
Oznaczanie swoistego wobec białka pneumokokowego IgG z osocza w teście ELIS A
Płytki do oznaczeń immunologicznych typu Maxisorp Nunc opłaszczano przez 2 godz. w 37°C
100 μΐ/studzienkę 2 μg/ml białka rozcieńczonego w PBS. Płytki płukano 3-krotnie buforem 0,9% NaCl, 0,05% Tween 20. Następnie dodawano serię 2-krotnych rozcieńczeń (w PBS/0,05%) Tween 20, 100 gl na studzienkę) surowicy anty-białko jako odnośnika do krzywej wzorcowej (zaczynając od 670 ng/ml IgG) i próbki surowicy (zaczynając od rozcieńczenia 1/10) inkubowano przez 30 min w 20°C mieszając. Po płukaniu, jak opisano wcześniej, inkubowano skoniugowane z peroksydazą kozie antymysie IgG (Jackson) rozcieńczone 5000x w PBS/0,05% Tween 20 (100 μl/studzienkę) przez 30 min w 20°C mieszając. Po płukaniu, płytki są inkubowane przez 15 min w temp. pokojowej z 100 gl/studzienkę buforu wywołującego (OPDA 0,4 mg/ml i 0,05%) H2O2 w 100 mM buforze cytrynianowym pH 4,5). Wywoływanie jest hamowane przez dodanie 50 μl/studzienkę 1N HCl. Gęstości optyczne są odczytywane przy 490 i 620 nm przy użyciu urządzenia do odczytów immunologicznych Emax (Molecular Devices). Miano przeciwciał oblicza się metodą 4 parametrów matematycznych przy użyciu oprogramowania SoftMaxPro.
Test opsonofagocytozy
Celem tego testu jest powtarzalny pomiar pojemności opsonizacyjnej badanych próbek surowicy przeciwko serotypom Streptococcus pneumoniae 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F lub 23F przy użyciu metody zaadaptowanej z opublikowanej standaryzowanej metody według CDC (Steiner i wsp., Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 4: 415, 1997).
Test ten odtwarza in vitro to, co dzieje się in vivo w pierwotnym mechanizmie usuwania dokonujących inwazji Streptococcus pneumoniae lub pneumokoków. To jest opsonizację pneumokoków, następnie fagocytozę, a następnie zabicie. „Fagocytoza jest procesem, dzięki któremu komórki po16
PL 210 198 B1 chłaniają materiał i zamykają go w wakuoli (fagosomie) w cytoplazmie. Pneumokoki są zabijane po sfagocytowaniu przez zdrowe ssacze fagocyty. „Opsonizacja jest procesem, dzięki któremu wzmacniana jest fagocytoza poprzez umiejscowienie opsonin, np. przeciwciała i komplementu na antygenie.
W literaturze opisywano szereg testów opsonofagocytozy. Wystandaryzowana metoda według CDC była testowana w zespołach wielu laboratoriów (Steiner i wsp., ICAAC, Sierpień 16-20, 2000, Toronto). Ten ostatni test został zaadoptowany w SB, ponieważ dostarczał on podstawę do porównywania z innymi laboratoriami, wykorzystywał odczynniki i kontrole, które są ogólnie dostępne i podawał wyniki jako miano (rozcieńczenie) surowicy zdolne do zabicia 50% żywych pneumokoków, jednostkę powszechnie stosowaną w tego typu testach. Rzeczywiście, pokazano, że zaadaptowany test może dawać wyniki odpowiadające całkiem dobrze wynikom pochodzącym z 4 innych laboratoriów (Steiner i wsp., ICAAC, Sierpień 16-20, 2000, Toronto).
Komórką fagocytującą stosowaną w teście jest linia komórkowa HL60, która pochodziła od osobnika z białaczką promielocytową i została wyprowadzona jako stała linia komórkowa przez Collins i wsp., 1977 (Nature, 270:347-9). Linia komórkowa składa się z niezróżnicowanych komórek krwiotwórczych, to jest 85% komórek blastycznych i promielocytów, 6% mielocytów i 9% komórek zróżnicowanych. Związki polarne mogą indukować różnicowanie tych komórek w dwie różne linie. N,N-dimetyloformamid indukuje różnicowanie granulocytarne dające komórki o różnokształtnych jądrach (44% mielocytów i metamielocytów i 53% wstęgowych i posegmentowanych komórek PMN).
W Wersji A2 testu, surowice do badania są inaktywowane cieplnie i przygotowywanych jest 8 dwukrotnych seryjnych rozcieńczeń, zaczynając od %, w 96-studzienkowych mikropłytkach w pożywce HBSS zawierającej 0,3% BSA. Końcowa objętość rozcieńczonej surowicy w każdej studzience wynosi 25 gl.
Cztery objętości komórek HL60 przy 107 komórek/ml (5 lub 6 dni po zróżnicowaniu formamidem dimetylowym), 2 objętości bakterii S. pneumoniae (w odpowiednim rozcieńczeniu) i 1 objętość komplementu z młodego królika są mieszane przed użyciem i 25 gl mieszaniny jest dodawane do każdej studzienki 96-studzienkowych mikropłytek zawierających rozcieńczone surowice. Dla serotypu 1 i 6B ilość komplementu jest zwiększona do 12,5% stężenia końcowego, co daje Wersję A3 testu.
Po dwugodzinnej inkubacji w 37°C w orbitalnej wytrząsarce, płytka jest umieszczana na lodzie w celu zahamowania reakcji opsonofagocytozy.
Szacowane są jednostki tworzące kolonie (CFU) w każdej studzience poprzez inkubację przez noc w 37°C. „Miano opsonowe (OT) jest zdefiniowane jako odwrotność rozcieńczenia surowicy zdolnego do zredukowania do co najmniej 50% liczby bakterii S. pneumoniae w studzienkach (tj. 50%) zabicia). % zabicia jest obliczany na podstawie następującego wzoru:
% zabicia = (średnia CFU studzienki kontrolnej - CFU próbki)/ średnia CFU studzienki kontrolnej x 100
Pneumokokowa prowokacja donosowa u myszy OF1
Siedem jednotygodniowych samic myszy OF1 szczepiono donosowo pod narkozą 5.105 CFU zaadaptowanymi dla myszy serotypami S. pneumoniae 2, 4 lub 6B. Usuwano płuca 6 godz. po prowokacji i homogenizowano (Ultramax, 24000 rpm, 4°C) w pożywce Todd Hewith Broth (THB, Gibco). Seryjne 10-krotne rozcieńczenia homogenatów płuc wysiewano na szalki Petriego zawierające ekstrakt drożdżowy uzupełniony agarem THB i umieszczano na noc w 37°C. Pneumokokowe zapalenie płuc jest określane jako liczba CFU/mysz, wyrażona jako średnia ważona logarytmiczna. Granica wykrywalności wynosi 2,14 log CFU/mysz.
P r z y k ł a d 2A
Wpływ adiuwanta 3D-MPL na anty-białkową odpowiedź immunologiczną
W niniejszym przykładzie możemy oszacować wpływ dodania adiuwanta 3D-MPL na odpowiedź immunologiczną przeciwko białku według wynalazku.
Grupy po 10, 6 tygodniowych samic myszy Balb/c immunizowano domięśniowo w dniu 0, 14 i 21 1 gg białka zawartego w A: 100 gg AIPO4 lub B: 100 gg AIPO4 + 5 gg 3D-MPL (3-de-O-acetylowany lipid monofosforylowy A). ELISA IgG jest mierzone w surowicy post III.
Dla dowolnego antygenu, najlepsze odpowiedzi immunologiczne są indukowane u zwierząt zaszczepionych preparatami uzupełnionymi w 3D-MPL.
P r z y k ł a d 2B
Korzystny wpływ dodania białka według wynalazku +/- adiuwanta 3D-MPL na skuteczność ochronną skoniugowanej z PD 11-walentnej polisacharydowej szczepionki przeciw pneumokokowej kolonizacji płuc u myszy OF1 prowokowanych donosowo serotypem 2, 4 lub 6B.
PL 210 198 B1
W niniejszym przykładzie możemy oszacować skuteczność profilaktyczną szczepionki zawierającej koniugat 11-walentnego polisacharydu z białkiem D, białkiem według wynalazku i adiuwantami AIPO4 + 3D-MPL w porównaniu z klasycznie adsorbowanym na AIPO4 preparatem koniugatu 11-walentnego polisacharydu z białkiem D.
Grupy po 12, 4 tygodniowych samic myszy OF1 immunizowano podskórnie w dniu 0 i 14 preparatami zawierającymi A: 50 μg AIPO4; B: 0,1 μg PS/serotyp skoniugowanej z PD 11-walentnej polisacharydowej szczepionki + 50 μg AIPO4; lub C: 0,1 μg PS/serotyp skoniugowanej z PD 11-walentnej polisacharydowej szczepionki + 10 μg białka według wynalazku + 50 μg AIPO4 + 5 μg 3D-MPL (dostarczonego przez Ribi Immunochem). Prowokację wykonano w 21 dniu jak opisano.
Jak można wykazać za pomocą tej metody, znacząca ochrona jest nadawana przez 11-walentną polisacharydową szczepionkę skoniugowaną uzupełnioną białkiem według wynalazku i adiuwantem z AIPO4 + 3D-MPL. Przeciwnie, nie zaobserwowano znaczącej ochrony u zwierząt immunizowanych preparatem skoniugowanego 11-walentnego polisacharydu/AlPO4. Wynik ten może dowodzić tego, że dodanie białka według wynalazku i adiuwanta 3D-MPL wzmacnia skuteczność 11-walentnej polisacharydowej szczepionki skoniugowanej przeciw zapaleniu płuc.
P r z y k ł a d 2C
Korelacje immunologiczne ochrony pokazanej w przykładzie 2B
W celu ustalenia korelacji immunologicznych ochrony nadawanej w przykładzie 2B przez 11-walentną polisacharydową szczepionkę skoniugowaną uzupełnioną białkiem według wynalazku i 3D-MPL, można zmierzyć jak, opisano poniżej, odpowiedzi przeciwciał serologicznych przed prowokacją na polisacharyd 2, 4 lub 6B i na białko według wynalazku.
Miana przeciwciał są następnie porównywane z liczbą kolonii bakterii liczonych w płucach odpowiednich zwierząt zbieranych 6 godz. po prowokacji. R2 są obliczane jako Log/Log liniowej regresji.
Obliczony R2 może wskazywać na brak korelacji pomiędzy humoralnymi odpowiedziami immunologicznymi i ochroną dla obu antygenów. Miana przeciwciała anty-6B (lub 2 lub 4) nie różnią się znacząco w grupach immunizowanych 11-walentną szczepionką skoniugowaną lub tą samą szczepionką uzupełnioną białkiem według wynalazku i 3D-MPL. Zatem ulepszenie ochrony widoczne dla preparatu C nie zależy jedynie od wyższej odpowiedzi przeciwciał na polisacharyd 6B (lub 2 lub 4).
Biorąc to wszystko razem pod uwagę, wyniki mogą sugerować, że ochrona nie odbywa się za pośrednictwem samych humoralnych odpowiedzi immunologicznych, lecz raczej także dzięki odporności komórkowej indukowanej przez antygen białkowy (korzystnie w obecności 3D-MPL). Może dać to dodatkowe poparcie dla dodawania antygenu(ów) białkowego i mocnego adiuwanta(ów) do pneumokokowej skoniugowanej szczepionki polisacharydowej dla koordynowania obydwu części układu immunologicznego w celu optymalnej ochrony.
P r z y k ł a d 3
Współpraca obu ramion układu odpornościowego u myszy immunizowanej aktywnie białkiem według wynalazku i immunizowanej biernie przeciwciałami przeciw PS pneumokokowemu.
P r z y k ł a d 3A
Określenie stężenia biernie podawanych przeciwciał przeciw polisacharydowi 6B (anty-PS) chroniących przed zapaleniem płuc.
Metoda
Grupy szczepionkowe: Cztery grupy 16 myszy były biernie immunizowane (i.p.) pierwszego dnia 100 μl nie rozcieńczonej szczurzej surowicy odpornościowej przeciw-polisacharydowi zgodnie z grupami wyszczególnionymi poniżej (ogółem 64 myszy).
Grupa | Specyficzność | Stężenie IgG w surowicy odpornościowej |
G1 | a-PS-6B | 5 pg/ml |
G2 | a-PS-6B | 2 pg/ml |
G3 | a-PS-6B | 0,75 pg/m |
G4 | Kontrola | 0 pg/ml |
Zwierzęta: 64 mysie samce CD-1 z Charles River, Kanada, ważące w przybliżeniu 35 g (w przybliżeniu w wieku 10 tygodni).
PL 210 198 B1
Znieczulenie: Myszy znieczulano izofluranem (3%) wraz z O2 (1 L/min).
Organizm: S. pneumoniae N1387 (serotyp 6) był zbierany z płytek z agarem tryptozowosojowym (TSA) uzupełnianym 5% krwią końską i zawieszany w 6 ml PBS. Tuż przed zakażeniem 1 ml zawiesiny bakteryjnej rozcieńczano w 9 ml rozpuszczonego i schłodzonego agaru odżywczego (nutrient agar, BBL) i trzymano w 41 °C. Mysz otrzymywała około 6,0 log10 cfu/mysz w objętości 50 gl.
Zakażenie: Dnia 0 mysz była znieczulana, jak opisano powyżej, i zakażana S. pneumoniae N1387 (50 gl schłodzonej zawiesiny bakteryjnej) przez dooskrzelowe zakropienie poprzez niechirurgiczną intubację dotchawiczą. Metodę tę opisali Woodnut i Berry (Antimicrob. Ag. Chemotherap. 43: 29 (1999)).
Próbki: Trzeciego dnia po zakażeniu, 8 myszy na grupę poświęcano przez przedawkowanie CO2, płuca wycinano i homogenizowano w 1 ml PBS. Dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia przygotowano w PBS aby policzyć żyjące bakterie. Próbki (20 gl) w trzech powtórzeniach inokulowano na płytki z TSA uzupełnionym 5% krwi końskiej i przed oceną inkubowano przez noc w 37°C. Dalsze mysie grupy poświęcano 7 dnia, a próbki przygotowywano jak wyżej.
Wyniki
Stężenie IgG (gg/ml) w szczurzej surowicy | Liczba bakterii (log10 cfu/płuca) w dniach po zakażeniu | |
3 | 8 | |
5 | 6,7±0,7 (1/7) | 7,2±0,7 (5/8) |
2 | 6,5±0,7 (1/7) | 6,9±1,8 (4/7) |
0,75 | 7,7±0,5 (5/8) | 4,8±1,4 (2/8) |
0 | 6,7±1,5 (3/6) | 6,3±1,5 (3/9) |
W nawiasach podano liczby zwierząt, które zmarły przed czasem pobrania próbki.
Wniosek: Ogólnie nie było znaczącej różnicy w liczbach baterii izolowanych w różnych grupach, którymi się zajmowano. To wskazuje, że niemożliwa do zmierzenia ochrona była dostarczana przez przeciwciała skierowane przeciw polisacharydom w stężeniach dochodzących do i równych 5 gg/ml.
Jest to podobne do tego, co obserwowano w niektórych badaniach klinicznych u ludzi, gdzie przeciwciała przeciw-polisacharydowe w niektórych populacjach są niewystarczające do ochrony przed pneumokokowym zapaleniem płuc.
P r z y k ł a d 3B
Określenie ochrony przed zapaleniem płuc, którą daje aktywne podawanie białka według wynalazku z lub bez adiuwanta i synergizmu z suboptymalnymi przeciwciałami anty-PS.
Metoda
Zwierzęta: 128 mysich samców CD-1 (w wieku 6 tygodni podczas immunizacji, w wieku 10 tygodni podczas zakażenia) z Charles River, St. Constant, Quebec, Kanada. Zwierzęta ważyły około 20 g w 6 tygodniu i 38 g w 10 tygodniu.
Immunizacje: Sześć grup po 16 myszy jest immunizowanych 100 gg szczepionki podskórną iniekcją w dniach 22 i 14, jak wyszczególniono poniżej (ogółem 128 myszy). 3D-MPL jest otrzymywane z Ribi/Corixa.
Dnia -1, specyficzne grupy (patrz tabela poniżej) są biernie immunizowane (i.p. 100 gl) w stężeniu 4,26 gg/ml (4 ml z 5 pg/ml + 1,3 ml z 2 gg/ml) mysich przeciwciał przeciw-polisacharydowych.
Grupa | Iniekcja Objętość Aktywna | Dni podawania szczepionki, 22,-14 (Dawka gg) | Iniekcja Objętość Bierna | Bierne IgG (1 dzień) |
1-1 | 100 gl s.c. | Białko/AlPO4 (10/50) | Żaden | |
1-2 | 100 gl s.c. | Białko/MPL/AlPO4 (10/5/50) | Żaden | |
1-3 | 100 gl s.c. | Białko/AlPO4 (10/50) | 100 gl i.p. | α-PS |
1-4 | 100 gl s.c. | Białko/MPL/AlPO4 (10/5/50) | 100 gl i.p. | α-PS |
1-5 | 100 gl s.c. | MPL/AlPO4 (5/50) | 100 gl i.p. | α-PS |
1-6 | 100 gl s.c. | MPL/AlPO4 (5/50) | Żaden |
PL 210 198 B1
Zakażenie: Dnia 0, myszy są poddawane znieczuleniu (3% izofluran plus 1 l/min O2). Zawiesiny bakteryjne są przygotowywane przez zbieranie S. pneumoniae N1387 (serotyp 6) z agaru tryptozowo-sojowego (TSA) uzupełnionego 5% krwią końską i zawieszanie w 6 ml PBS. Dziesięciokrotne rozcieńczenie (1 ml plus 9 ml) jest przygotowywane w rozpuszczonym i schłodzonym agarze odżywczym (trzymanym w 41°C) tuż przed zakażeniem. Myszy są zakażane przez dooskrzelowe zakropienie przez intubację dotchawiczą i otrzymują około 6,0 log10 cfu/mysz w objętości 50 gl. Metodę tę opisali Woodnut i Berry (Antimicrob. Ag. Chemotherap. 43: 29 (1999)).
Próbki: W 72 po zakażeniu, 8 myszy na grupę poświęcano przez przedawkowanie CO2, płuca wycinano i homogenizowano w 1 ml PBS. Dziesięciokrotne seryjne rozcieńczenia są przygotowywane w PBS aby policzyć żyjące bakterie. Próbki (20 gl) w trzech powtórzeniach inokulowano na płytki z TSA uzupełnionym 5% krwi końskiej i przed oceną inkubowano przez noc w 37°C. Dalsze mysie grupy są poświęcane 8 dnia po zakażeniu, a próbki przygotowywano jak wyżej.
Analiza danych
Uzyskaną miarą dla porównania leczenia jest liczba bakterii w płucach dnia 3 i 7 po zakażeniu. Wyniki mogą być przedstawiane jako średnie grupowe ze standardowymi odchyleniami. Analiza statystyczna powinna być wykonywana przy użyciu testu t-Studenta, gdzie wartość P < 0,05 jest uznawana jako znacząca.
Jak przedstawiono powyżej, można wykazać, że same przeciwciała przeciw polisacharydom (grupa 1-5) nie dostarczają ochrony przeciw pneumokokom rosnącym w płucach. Pneumokokowe białko z adiuwantem AlPO4 (grupal-1) może również nie nadawać ochrony, ale może ją nadawać w lepszym stopniu, kiedy białko jest połączone z 3D-MPL (grupa 1-2).
Najbardziej znaczącą ochronę można zaobserwować w grupach z występującymi równocześnie przeciwciałem przeciw-polisacharydowym i białkiem, zwłaszcza w grupie mającej wszystkie trzy elementy, białko, 3D-MPL i biernie podawane przeciwciało przeciw-polisacharydowe (grupa 1-4). Ten wniosek może być również poparty wskaźnikiem śmiertelności. Grupy 1-3, a zwłaszcza 1-4 miały mniej zgonów w porównaniu z innymi grupami.
Wniosek:
Jako, że doświadczenie wykonano z biernie immunizowanymi zwierzętami, efekt synergistyczny także aktywnie immunizowanych białkiem (+/- MPL) nie może być związany ze wzrostem poziomu przeciwciał przeciwko antygenowi polisacharydowemu.
Znaczącą ochronę przeciw pneumokokowemu zapaleniu płuc można zobaczyć w grupach immunizowanych jednocześnie białkiem i biernym podaniem przeciwciała przeciw-polisacharydowego, szczególnie jeśli 3D-MPL jest również obecny, co wskazuje na synergizm tej kombinacji.
Jeśli immunizacja przeciw-polisacharydowa jest prowadzona czynnie (korzystnie z koniugowanym polisacharydem), efekt ten będzie nawet bardziej zaznaczony, jako efekt pamięci komórek B, a stałe poziomy przeciwciała anty-PS w trakcie doświadczenia będą przyczyniać się do współpracy w odpowiedzi immunologicznej.
P r z y k ł a d 4
Sposób określania synergizmu przez korelację z ochroną
Podstawowym mechanizmem ochrony, używanym przez organizm ludzki do usuwania zakaźnych pneumokoków jest przeciwciało pośredniczące w opsonofagocytozie (Bruyn i wsp. Clin Infect Dis. 14:251 (1992)). Podczas gdy kilka metod ELISA ustalono do mierzenia stężenia przeciwciała wobec otoczkowego polisacharydu jako skorelowanego z ochroną stało się oczywiste, że test opsonofagocytozy in vitro jest lepiej skorelowany z ochroną (Musher i wsp. J. Infect. Dis. 182: 158 (2000)).
Białka pneumokokowe dostarczają ochrony przeciw pneumokokowemu zakażeniu za pomocą mechanizmów różniących od opsonofagocytozy, w której pośredniczą przeciwciała. W Przykładzie 2, czynna immunizacja zarówno koniugatem jak i białkiem może pokazać synergistyczny efekt, który nie może być wyjaśniony różnicami w stężeniach przeciwciał dopóki są one takie same w obu grupach. W ten sposób pozostała ochrona, którą można obserwować musi pochodzić od synergistycznego efektu. Podobnie ponieważ przeciwciało jest dodawane biernie, taki sam wniosek można wysnuć z przykładu 3.
W wielu przypadkach białka pneumokokowe są połączone z powierzchnią i oczekuje się, że same mają pewną aktywność opsonizacyjną. W tym wypadku możliwe jest rozróżnienie mechanizmu ochronnego przez ilościowy pomiar zdolności opsonizacyjnej białka przeciw-pneumokokowego, które może być wykorzystane do oceny względnego udziału aktywności opsonizacyjnej w stosunku do innych synergistycznych mechanizmów ochrony.
PL 210 198 B1
W mysim płucnym modelu kolonizacji, względna ochrona każdej szczepionki może być oceniana na podstawie oczyszczania płuc z bakterii. Lub alternatywnie, skuteczność szczepionki może być oceniana na podstawie wskaźników przypadków, jak to jest zazwyczaj określane dla szczepionek.
% ochrony=(CFU/płuco kontrolne-CFU/pł uco szczepione)/(CFU/płuco kontrolne) % skuteczności=(przypadki kontrolne - przypadki szczepione)/(przypadki kontrolne)
Aby określić część ochrony lub skuteczności, która jest wynikiem efektu synergistycznego, przedmiotem określenia jest, której części skuteczności można oczekiwać na podstawie współczynnika mian opsonizacyjnych.
Powyżej w przykładzie 3, % ochrony przez kombinację jest zależny od synergizmu pomiędzy komponentami białko/przeciwciało jako, że ani samo białko ani samo przeciwciało przeciw-polisacharydowe nie nadają wystarczającej ochrony.
Możliwa jest ilościowa ocena ochrony efektu synergistycznego na podstawie względnej aktywności opsonizacyjnej. Jeśli aktywność opsonizacyjna nadawana przez przeciwciała przeciw otoczce polisacharydowej stanowią X, a aktywność opsonizacyjna nadawana przez przeciwciała przeciw pneumolcokowemu białku stanowi Y, wówczas ogólna aktywność opsonizacyjna może być przedstawiona jako X + Y, a względna część aktywności opsonizacyjnej białka jako Y/X + Y. Jest to porównane z względną skutecznością ochronnej szczepionki, przy czym część przeciw-polisacharydowa szczepionki nadaje skuteczność ochronną A%, a skuteczność ochronna szczepionki polisacharydowej wraz z białkiem stanowi B%. Dodatkowa skuteczność, za którą nie może odpowiadać aktywność opsonizacyjna jest określana jako pozostała aktywność ochronna(synergizm) = B% - A% - B%*(Y/X+Y)
Przykład ten nie ma celu ograniczenia sposobów oceny efektu synergizmu. Jeśli tylko inne korelujące z ochroną zostaną wykryte, mogą być wykorzystane do oceny tego synergistycznego efektu.
Claims (16)
1. Immunogenna kompozycja, znamienna tym, że obejmuje co najmniej jeden antygen polisacharydowy Streptococcus pneumoniae i co najmniej jeden antygen białkowy Streptococcus pneumoniae wybrany z grupy składającej się z: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE lub ich immunologicznie funkcjonalnych odpowiedników.
2. Immunogenna kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że antygen białkowy Streptococcus pneumoniae stanowi PhtD.
3. Immunogenna kompozycja według zastrz. 2, znamienna tym, że ponadto zawiera Ply.
4. Immunogenna kompozycja według jednego z zastrz. 1 do 3, znamienna tym, że antygen polisacharydowy jest prezentowany w postaci koniugatu polisacharyd-białko nośnikowe.
5. Immunogenna kompozycja według zastrz. 4, znamienna tym, że białko nośnikowe jest wybrane z grupy składającej się z: toksoidu błoniczego, toksoidu tężcowego, CRM197, hemocyjaniny skałoczepu (KLH), białkowej pochodnej tuberkuliny (PPD) oraz białka D z H. influenzae.
6. Immunogenna kompozycja według jednego z zastrz. 1 do 5, znamienna tym, że obejmuje co najmniej cztery pneumokokowe antygeny polisacharydowe z różnych serotypów.
7. Immunogenna kompozycja według jednego z zastrz. 1 do 6, znamienna tym, że dodatkowo obejmuje adiuwant.
8. Immunogenna kompozycja według zastrz. 7, znamienna tym, że adiuwant obejmuje sól glinu.
9. Immunogenna kompozycja według zastrz. 7, znamienna tym, że adiuwant jest preferencyjnym induktorem odpowiedzi Th1.
10. Immunogenna kompozycja według zastrz. 9, znamienna tym, że adiuwant obejmuje co najmniej jeden z następujących: 3D-MPL, saponiny będącej czynnikiem pobudzającym układ immunologiczny lub immunostymulującego oligonukleotydu CpG.
11. Immunogenna kompozycja według zastrz. 10, znamienna tym, że adiuwant obejmuje nośnik wybrany z grupy zawierającej: emulsję olej w wodzie, liposomy oraz sól glinu.
12. Immunogenna kompozycja określona w jednym z zastrz. 1-11 do zastosowania jako lek.
13. Szczepionka, znamienna tym, że obejmuje immunogenna kompozycję określoną w jednym z zastrz. 1-11.
PL 210 198 B1
14. Zastosowanie pneumokokowego antygenu polisacharydowego w kombinacji z białkowym antygenem Streptococcus pneumoniae wybranym z grupy składającej się z PhtA, PhtD, PhtB i PhtE, oraz ewentualnie adiuwantem indukującym Th1 do wytwarzania leku do zapobiegania lub leczenia zapalenia płuc u pacjentów powyżej 55 roku życia.
15. Zastosowanie pneumokokowego antygenu polisacharydowego w kombinacji z antygenem białkowym Streptococcus pneumoniae wybranym z grupy składającej się z: PhtA, PhtD, PhtB i PhtE, i ewentualnie z adiuwantem indukującym Th1, do wytwarzania leku do zapobiegania i leczenia zapalenia ucha środkowego u niemowląt i dzieci młodszych.
16. Sposób wytwarzania immunogennej kompozycji określonej w jednym z zastrz. 1 - 11, znamienny tym, że obejmuje etapy:
wybierania jednego lub większej liczby pneumokokowych antygenów polisacharydowych; wybierania jednego lub większej liczby antygenów białkowych z grupy składającej się z: PhtA,
PhtD, PhtB i PhtE, oraz mieszania tych antygenów polisacharydowych i białkowych z odpowiednią zaróbką.
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0022742.1A GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-09-15 | Vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
PL361401A1 PL361401A1 (pl) | 2004-10-04 |
PL210198B1 true PL210198B1 (pl) | 2011-12-30 |
Family
ID=9899575
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL361395A PL209247B1 (pl) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Immunogenna kompozycja, zawierająca ją szczepionka, zastosowanie szczepionki oraz sposób wytwarzania szczepionki |
PL361401A PL210198B1 (pl) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Immunogenna kompozycja, jej zastosowanie i sposób wytwarzania oraz zawierająca ją szczepionka przeciwko Streptococcus pneumoniae |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PL361395A PL209247B1 (pl) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Immunogenna kompozycja, zawierająca ją szczepionka, zastosowanie szczepionki oraz sposób wytwarzania szczepionki |
Country Status (25)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US20040081662A1 (pl) |
EP (6) | EP1317280B1 (pl) |
JP (3) | JP4880184B2 (pl) |
KR (5) | KR101268790B1 (pl) |
CN (3) | CN101502648B (pl) |
AT (1) | ATE516815T1 (pl) |
AU (4) | AU3819302A (pl) |
BR (2) | BR0113821A (pl) |
CA (2) | CA2422002C (pl) |
CY (1) | CY1111915T1 (pl) |
CZ (2) | CZ305343B6 (pl) |
DK (1) | DK1317279T3 (pl) |
ES (4) | ES2545876T3 (pl) |
GB (1) | GB0022742D0 (pl) |
HK (1) | HK1057698A1 (pl) |
HU (2) | HUP0301092A3 (pl) |
IL (4) | IL154607A0 (pl) |
MX (2) | MXPA03002265A (pl) |
NO (2) | NO337730B1 (pl) |
NZ (2) | NZ524287A (pl) |
PL (2) | PL209247B1 (pl) |
PT (1) | PT1317279E (pl) |
SI (1) | SI1317279T1 (pl) |
WO (2) | WO2002022167A2 (pl) |
ZA (2) | ZA200301526B (pl) |
Families Citing this family (72)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7078042B2 (en) * | 1995-09-15 | 2006-07-18 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein C (PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor |
US7135560B1 (en) | 1997-07-02 | 2006-11-14 | Sanofi Pasteur Limited | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
US6800744B1 (en) | 1997-07-02 | 2004-10-05 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
US7128918B1 (en) * | 1998-12-23 | 2006-10-31 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
TWI281403B (en) * | 1999-03-19 | 2007-05-21 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
US7074415B2 (en) * | 2000-06-20 | 2006-07-11 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
EP1456231A2 (en) | 2001-12-20 | 2004-09-15 | Shire Biochem Inc. | Streptococcus antigens |
EP2275125A3 (en) * | 2002-04-02 | 2011-03-09 | Ben Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines |
US8691243B2 (en) | 2002-04-02 | 2014-04-08 | Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Protein-based Streptococcus pneumoniae vaccine |
EP1549338B1 (en) | 2002-10-11 | 2010-12-22 | Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. | Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages |
GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
US8229903B2 (en) * | 2002-12-19 | 2012-07-24 | International Business Machines Corporation | Suggesting data interpretations and patterns for updating policy documents |
ES2383175T3 (es) * | 2003-01-30 | 2012-06-18 | Novartis Ag | Vacunas inyectables contra múltiples serogrupos de meningococos |
NZ541969A (en) | 2003-03-13 | 2008-01-31 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Purifying pneumolysin from Streptococcus pneumoniae in a single chromatographic step by binding it to a hydrophobic interaction column in the presence of detergent and high salt |
EP1477802A1 (en) * | 2003-05-16 | 2004-11-17 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Method for selecting and producing vaccine components and vaccines based thereon |
CN103357002A (zh) | 2003-10-02 | 2013-10-23 | 诺华疫苗和诊断有限公司 | 多种脑膜炎球菌血清群的液体疫苗 |
GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
WO2006034320A2 (en) * | 2004-09-21 | 2006-03-30 | Sanofi Pasteur, Inc. | Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine |
AU2011253684B8 (en) * | 2005-04-08 | 2013-07-11 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
TWI445545B (zh) | 2005-04-08 | 2014-07-21 | Wyeth Corp | 多價肺炎球菌多醣-蛋白質共軛物組合物 |
GB0522765D0 (en) | 2005-11-08 | 2005-12-14 | Chiron Srl | Combination vaccine manufacture |
GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
CA2633772C (en) | 2005-12-22 | 2015-09-15 | Ralph Leon Biemans | Pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine |
AU2006336520B2 (en) * | 2005-12-28 | 2011-09-15 | The Uab Research Foundation | Pneumococcal serotypes |
US8808707B1 (en) | 2006-05-08 | 2014-08-19 | Wyeth Llc | Pneumococcal dosing regimen |
BRPI0715975A2 (pt) * | 2006-08-17 | 2014-03-18 | Uab Res Foudation | Fragmento imunogênico de pcpa, composição,recipiente, métodos de gerar anticorpos específicos para pcpa em um indivíduo, de prevenir ou reduzir portador nasal pneumocócico em um indivíduo, e de reduzir o risco de uma infecção pneumocócica em um indivíduo, e, polipeptídeo isolado |
DK2148697T3 (da) * | 2007-05-24 | 2012-12-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Lyofiliseret CPG indeholdende WT-1-sammensætning |
BRPI0813307C1 (pt) | 2007-06-26 | 2021-05-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | composição imunogênica, vacina, e, processo para fabricar a vacina |
GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
US20160228500A9 (en) * | 2007-07-23 | 2016-08-11 | Martina Ochs | Immunogenic Polypeptides and Monoclonal Antibodies |
BRPI0814127A2 (pt) | 2007-07-23 | 2015-02-03 | Sanofi Pasteur Ltd | Polipeptídeos imunegênicos e anticorpos monoclonais |
GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
CA2699225A1 (en) * | 2007-09-14 | 2009-03-19 | Katholieke Universiteit Leuven | Streptococcus pneumoniae vaccines |
EP2235531B1 (en) * | 2008-02-01 | 2015-01-14 | Sanofi Pasteur Limited | Assay for diagnosing streptococcus pneumoniae |
MX2010009738A (es) | 2008-03-03 | 2010-09-30 | Irm Llc | Compuestos y composiciones como moduladores de la actividad de tlr. |
CN102438649A (zh) | 2009-03-24 | 2012-05-02 | 诺华有限公司 | 脑膜炎球菌h因子结合蛋白和肺炎球菌结合糖的组合物 |
TR201802380T4 (tr) | 2009-06-10 | 2018-03-21 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Benzonaftiridin içeren aşılar. |
TWI445708B (zh) | 2009-09-02 | 2014-07-21 | Irm Llc | 作為tlr活性調節劑之化合物及組合物 |
US9950062B2 (en) | 2009-09-02 | 2018-04-24 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compounds and compositions as TLR activity modulators |
CN102695523A (zh) | 2009-09-10 | 2012-09-26 | 诺华有限公司 | 针对呼吸道疾病的组合疫苗 |
CN101690810B (zh) * | 2009-10-21 | 2011-08-17 | 辽宁益康生物股份有限公司 | 一种鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感四联灭活疫苗佐剂及其制备方法 |
WO2011057148A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-12 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators |
EP2512478B1 (en) | 2009-12-15 | 2017-04-19 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Homogeneous suspension of immunopotentiating compounds and uses thereof |
WO2011075822A1 (en) | 2009-12-22 | 2011-06-30 | Sanofi Pasteur Limited | Immunogenic compositions and related methods |
AU2010335970B2 (en) * | 2009-12-22 | 2016-11-03 | Sanofi Pasteur Limited | Immunogenic compositions |
GB201003922D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
GB201003920D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method of treatment |
JP5848748B2 (ja) | 2010-03-23 | 2016-01-27 | アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーIrm,Llc | 感染症、炎症、呼吸器疾患などの処置に使用するtlr2アゴニストとしての化合物(システインベースのリポペプチド)および組成物 |
WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
CA2819758A1 (en) * | 2010-12-03 | 2012-06-07 | Sanofi Pasteur Limited | Composition for immunization against streptococcus pneumoniae |
MX339058B (es) * | 2011-05-17 | 2016-05-09 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacuna contra streptococcus pneumoniae. |
EP2822586A1 (en) | 2012-03-07 | 2015-01-14 | Novartis AG | Adjuvanted formulations of streptococcus pneumoniae antigens |
JP2014000016A (ja) * | 2012-06-15 | 2014-01-09 | National Agriculture & Food Research Organization | 豚丹毒菌の新規な抗原タンパク質、その遺伝子、及び組換えベクターとその利用 |
RU2510281C2 (ru) * | 2012-06-22 | 2014-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Эпитоп" (ООО "Эпитоп") | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА |
KR20150058571A (ko) * | 2012-10-17 | 2015-05-28 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 면역원성 조성물 |
GB201218660D0 (en) | 2012-10-17 | 2012-11-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
CN104870193B (zh) | 2013-01-01 | 2017-12-22 | 爱克发印艺公司 | (乙烯、乙烯醇缩醛)共聚物和它们在平版印刷版前体中的用途 |
EP2950819B1 (en) | 2013-02-01 | 2018-03-28 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Intradermal delivery of immunological compositions comprising toll-like receptor agonists |
US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
US20150344530A1 (en) * | 2014-05-29 | 2015-12-03 | Subhash V. Kapre | Synthetic Peptides as Carriers for Conjugation with Polysaccharides |
US9815886B2 (en) | 2014-10-28 | 2017-11-14 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
BR112018068753A2 (pt) | 2016-03-16 | 2019-01-22 | Agfa Nv | método para processar uma chapa de impressão litográfica |
WO2018124959A2 (en) * | 2016-12-28 | 2018-07-05 | Henriques Normark Birgitta | Microparticles from streptococcus pneumoniae as vaccine antigens |
US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
AU2018280272C1 (en) | 2017-06-10 | 2021-05-06 | Inventprise, Inc. | Multivalent conjugate vaccines with bivalent or multivalent conjugate polysaccharides that provide improved immunogenicity and avidity |
US10729763B2 (en) | 2017-06-10 | 2020-08-04 | Inventprise, Llc | Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds |
JP7362667B2 (ja) | 2018-02-12 | 2023-10-17 | イニミューン・コーポレーション | Toll様受容体リガンド |
WO2020183420A1 (en) * | 2019-03-13 | 2020-09-17 | St. Jude Children's Research Hospital | Vaccine compositions and methods for reducing transmission of streptococcus pneumoniae |
EP3778253A1 (en) | 2019-08-13 | 2021-02-17 | Agfa Nv | Method for processing a lithographic printing plate |
EP4240841A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-09-13 | Eligo Bioscience | Phage-derived particles for in situ delivery of dna payload into c. acnes population |
Family Cites Families (94)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
US4372945A (en) | 1979-11-13 | 1983-02-08 | Likhite Vilas V | Antigen compounds |
IL61904A (en) | 1981-01-13 | 1985-07-31 | Yeda Res & Dev | Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same |
BE889979A (fr) | 1981-08-14 | 1982-02-15 | Smith Kline Rit | Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation |
US5360897A (en) * | 1981-08-31 | 1994-11-01 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad |
US4761283A (en) * | 1983-07-05 | 1988-08-02 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
US4882317A (en) * | 1984-05-10 | 1989-11-21 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency |
US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
US4709017A (en) | 1985-06-07 | 1987-11-24 | President And Fellows Of Harvard College | Modified toxic vaccines |
US5173294A (en) | 1986-11-18 | 1992-12-22 | Research Foundation Of State University Of New York | Dna probe for the identification of haemophilus influenzae |
US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
US5006914A (en) * | 1988-12-02 | 1991-04-09 | Advanced Technology Materials, Inc. | Single crystal semiconductor substrate articles and semiconductor devices comprising same |
HUT58804A (en) * | 1988-12-16 | 1992-03-30 | James Cleland Paton | Process for producing pneumolysine mutants and pneumococcus vaccines |
US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
CA2059692C (en) * | 1991-01-28 | 2004-11-16 | Peter J. Kniskern | Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine |
CA2059693C (en) | 1991-01-28 | 2003-08-19 | Peter J. Kniskern | Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae |
US5476929A (en) | 1991-02-15 | 1995-12-19 | Uab Research Foundation | Structural gene of pneumococcal protein |
US5980909A (en) * | 1991-02-15 | 1999-11-09 | Uab Research Foundation | Epitopic regions of pneumococcal surface protein A |
US6592876B1 (en) | 1993-04-20 | 2003-07-15 | Uab Research Foundation | Pneumococcal genes, portions thereof, expression products therefrom, and uses of such genes, portions and products |
DE69226167T2 (de) | 1991-02-15 | 1998-11-12 | The Uab Research Foundation, Birmingham, Alabama | Strukturgen von pneumokokken-protein |
US5552146A (en) | 1991-08-15 | 1996-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis |
GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
US5371197A (en) * | 1991-09-24 | 1994-12-06 | Merck & Co., Inc. | Protein-dimeric polysaccharide conjugate vaccine |
ATE188508T1 (de) | 1992-06-18 | 2000-01-15 | Harvard College | Impfstoffe gegen diphtherietoxin |
PL170980B1 (pl) | 1992-06-25 | 1997-02-28 | Smithkline Beecham Biolog | Szczepionka PL PL PL PL PL PL PL |
US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
AU5128593A (en) * | 1992-09-16 | 1994-04-12 | University Of Tennessee Research Corporation, The | Antigen of hybrid m protein and carrier for group a streptococcal vaccine |
US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
GB9224584D0 (en) | 1992-11-23 | 1993-01-13 | Connaught Lab | Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases |
ATE204762T1 (de) | 1993-03-23 | 2001-09-15 | Smithkline Beecham Biolog | 3-0-deazylierte monophosphoryl lipid a enthaltende impfstoff-zusammensetzungen |
DK0699076T3 (da) | 1993-05-18 | 2003-03-03 | Univ Ohio State Res Found | Vaccine mod mellemørebetændelse |
DE69433341T2 (de) | 1993-09-22 | 2004-04-15 | Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine | Verfahren zur aktivierung von löslichem kohlenhydraten durch verwendung von neuen cyanylierungsreagenzien, zur herstellung von immunogenischen konstrukten |
GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
US5866135A (en) * | 1994-04-21 | 1999-02-02 | North American Vaccine, Inc. | Group A streptococcal polysaccharide immunogenic compositions and methods |
US5917017A (en) | 1994-06-08 | 1999-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain |
WO1996002555A1 (en) | 1994-07-15 | 1996-02-01 | The University Of Iowa Research Foundation | Immunomodulatory oligonucleotides |
US5565204A (en) | 1994-08-24 | 1996-10-15 | American Cyanamid Company | Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections |
US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
US6440425B1 (en) | 1995-05-01 | 2002-08-27 | Aventis Pasteur Limited | High molecular weight major outer membrane protein of moraxella |
US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
US5843464A (en) | 1995-06-02 | 1998-12-01 | The Ohio State University | Synthetic chimeric fimbrin peptides |
CN1192241A (zh) | 1995-06-07 | 1998-09-02 | 生化疫苗公司 | Hsp70家族的链球菌热休克蛋白 |
GB9513074D0 (en) | 1995-06-27 | 1995-08-30 | Cortecs Ltd | Novel anigen |
US6290970B1 (en) | 1995-10-11 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Transferrin receptor protein of Moraxella |
US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
US6090576A (en) | 1996-03-08 | 2000-07-18 | Connaught Laboratories Limited | DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella |
GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
AU732520B2 (en) * | 1996-05-01 | 2001-04-26 | Rockefeller University, The | Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines |
US6245335B1 (en) * | 1996-05-01 | 2001-06-12 | The Rockefeller University | Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines |
US5744417A (en) | 1996-05-02 | 1998-04-28 | Lyondell Petrochemical Company | Supported catalyst |
US7341727B1 (en) | 1996-05-03 | 2008-03-11 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same |
AU3399197A (en) | 1996-06-18 | 1998-01-07 | Alza Corporation | Device for enhancing transdermal agent delivery or sampling |
EP0956289A4 (en) | 1996-08-16 | 2004-10-13 | Smithkline Beecham Corp | NOVEL PROKARYOTA POLYNUCLEOTIDES AND POLYPEPTIDES AND USES THEREOF |
US5882871A (en) | 1996-09-24 | 1999-03-16 | Smithkline Beecham Corporation | Saliva binding protein |
US5882896A (en) | 1996-09-24 | 1999-03-16 | Smithkline Beecham Corporation | M protein |
ATE348887T1 (de) * | 1996-10-31 | 2007-01-15 | Human Genome Sciences Inc | Streptococcus pneumoniae antigene und impfstoffe |
CA2269636A1 (en) | 1996-11-12 | 1998-05-22 | The Regents Of The University Of Minnesota | C3 binding protein of streptococcus pneumoniae |
US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
CA2271167C (en) | 1996-12-20 | 2007-01-09 | Alza Corporation | Device and method for enhancing transdermal agent flux |
DE19708537A1 (de) | 1997-03-03 | 1998-09-10 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Neues Oberflächenprotein (SpsA-Protein) von Streptococcus pneumoniae etc. |
FR2763244B1 (fr) * | 1997-05-14 | 2003-08-01 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale multivalente a porteur mixte |
US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
NZ501911A (en) | 1997-06-03 | 2001-12-21 | Connaught Lab | Lactoferrin receptor genes (Lbp1, Lbp2 and/or ORF3) of Moraxella to be used in diagnosis or treatment of Moraxella related diseases such conjunctivitis, sinusitis or urogenital infections |
WO1999003884A2 (en) * | 1997-07-21 | 1999-01-28 | North American Vaccine, Inc. | Modified immunogenic pneumolysin, compositions and their use as vaccines |
CA2305016A1 (en) * | 1997-09-24 | 1999-04-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Human complement c3-degrading proteinase from streptococcus pneumoniae |
US6224880B1 (en) * | 1997-09-24 | 2001-05-01 | Merck & Co., Inc. | Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines |
EP0916726A1 (en) * | 1997-11-13 | 1999-05-19 | Rijksuniversiteit te Groningen | Attaching substances to micro-organisms |
EP1035867A1 (en) | 1997-12-02 | 2000-09-20 | Powderject Vaccines, Inc. | Transdermal delivery of particulate vaccine compositions |
IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
US6709658B1 (en) * | 1998-02-12 | 2004-03-23 | Wyeth Holdings Corporation | Pneumococcal vaccines formulated with interleukin-12 |
HUP0102617A3 (en) | 1998-04-07 | 2006-04-28 | Medimmune Inc Gaithersburg | Derivatives of pneumococcal choline binding proteins for vaccines |
AU3479699A (en) * | 1998-04-07 | 1999-10-25 | St. Jude Children's Research Hospital | A polypeptide comprising the amino acid of an n-terminal choline binding proteina truncate, vaccine derived therefrom and uses thereof |
AU770378B2 (en) | 1998-04-23 | 2004-02-19 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein C(PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor |
GB9812613D0 (en) | 1998-06-11 | 1998-08-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
AU6060899A (en) | 1998-09-24 | 2000-04-10 | American Cyanamid Company | Human complement c3-degrading polypeptide from (streptococcus pneumoniae) |
GB2359228A (en) | 1998-11-17 | 2001-08-15 | Schlumberger Technology Corp | Transmitting information over a communication link |
AU2027400A (en) | 1998-11-19 | 2000-06-05 | St. Jude Children's Research Hospital | Identification and characterization of novel pneumococcal choline binding proteins, cbpg and cbpd, and diagnostic and therapeutic uses thereof |
ES2322306T3 (es) * | 1998-12-21 | 2009-06-18 | Medimmune, Inc. | Proteinas de streptpcpccus pneumoniae y fragmentos inmunogenicos para vacunas. |
EP1034792A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Intranasal delivery of pneumococcal polysaccharide vaccines |
TWI281403B (en) * | 1999-03-19 | 2007-05-21 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
CA2379327A1 (en) * | 1999-06-10 | 2000-12-21 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein combination vaccine |
WO2000076540A2 (en) | 1999-06-10 | 2000-12-21 | Med Immune, Inc. | Streptococcus pneumoniae proteins and vaccines |
US6319224B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-11-20 | Bioject Medical Technologies Inc. | Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans |
US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
-
2000
- 2000-09-15 GB GBGB0022742.1A patent/GB0022742D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-09-12 SI SI200131001T patent/SI1317279T1/sl unknown
- 2001-09-12 BR BR0113821-9A patent/BR0113821A/pt active Pending
- 2001-09-12 EP EP01984627.8A patent/EP1317280B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 EP EP09173889.8A patent/EP2140878B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 HU HU0301092A patent/HUP0301092A3/hu unknown
- 2001-09-12 AU AU3819302A patent/AU3819302A/xx active Pending
- 2001-09-12 ES ES01984627.8T patent/ES2545876T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 US US10/380,563 patent/US20040081662A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-12 KR KR1020117026231A patent/KR101268790B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 WO PCT/EP2001/010568 patent/WO2002022167A2/en active Search and Examination
- 2001-09-12 ES ES01984626T patent/ES2368902T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 MX MXPA03002265A patent/MXPA03002265A/es active IP Right Grant
- 2001-09-12 WO PCT/EP2001/010570 patent/WO2002022168A2/en active Application Filing
- 2001-09-12 JP JP2002526417A patent/JP4880184B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 CN CN2009101285337A patent/CN101502648B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 DK DK01984626.0T patent/DK1317279T3/da active
- 2001-09-12 JP JP2002526416A patent/JP4903975B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 HU HU0301043A patent/HUP0301043A3/hu not_active Application Discontinuation
- 2001-09-12 EP EP10178332.2A patent/EP2314313B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 AT AT01984626T patent/ATE516815T1/de active
- 2001-09-12 MX MXPA03002264A patent/MXPA03002264A/es active IP Right Grant
- 2001-09-12 PL PL361395A patent/PL209247B1/pl unknown
- 2001-09-12 ES ES09173889.8T patent/ES2551097T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 KR KR10-2003-7003732A patent/KR20030031188A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-09-12 BR BR0113822-7A patent/BR0113822A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 CA CA2422002A patent/CA2422002C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 KR KR1020087020661A patent/KR100991916B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 KR KR1020037003731A patent/KR100805991B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 CA CA2421998A patent/CA2421998C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 NZ NZ524287A patent/NZ524287A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 CN CNB018157467A patent/CN100486642C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 AU AU2002220548A patent/AU2002220548B2/en not_active Ceased
- 2001-09-12 KR KR1020107014638A patent/KR20100091241A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-09-12 EP EP01984626A patent/EP1317279B1/en not_active Revoked
- 2001-09-12 EP EP10179135A patent/EP2305298A1/en not_active Withdrawn
- 2001-09-12 AU AU2054802A patent/AU2054802A/xx active Pending
- 2001-09-12 IL IL15460701A patent/IL154607A0/xx unknown
- 2001-09-12 EP EP10179133A patent/EP2305297A1/en not_active Ceased
- 2001-09-12 CZ CZ2003-757A patent/CZ305343B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 CZ CZ2003-756A patent/CZ305324B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 IL IL15460801A patent/IL154608A0/xx unknown
- 2001-09-12 PT PT01984626T patent/PT1317279E/pt unknown
- 2001-09-12 US US10/380,575 patent/US20060051361A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-12 PL PL361401A patent/PL210198B1/pl unknown
- 2001-09-12 AU AU2002238193A patent/AU2002238193B2/en not_active Ceased
- 2001-09-12 NZ NZ524286A patent/NZ524286A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 ES ES10178332.2T patent/ES2659400T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 CN CNB018157483A patent/CN1253205C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-02-24 IL IL154607A patent/IL154607A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-02-24 IL IL154608A patent/IL154608A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-02-25 ZA ZA200301526A patent/ZA200301526B/en unknown
- 2003-02-25 ZA ZA200301524A patent/ZA200301524B/en unknown
- 2003-03-14 NO NO20031184A patent/NO337730B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-03-14 NO NO20031183A patent/NO336186B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-11-19 HK HK03108447.9A patent/HK1057698A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-05-07 US US11/745,006 patent/US20080081050A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-08-13 US US12/855,734 patent/US20110008419A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-09-12 JP JP2011198277A patent/JP2012006969A/ja active Pending
- 2011-10-06 CY CY20111100958T patent/CY1111915T1/el unknown
-
2013
- 2013-12-10 US US14/101,995 patent/US20140099339A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR100805991B1 (ko) | 백신 | |
JP5551579B2 (ja) | ワクチン | |
AU2002220548A1 (en) | Vaccine against streptococcus penumoniae | |
AU2002238193A1 (en) | Vaccine against streptococcus pneumoniae | |
MXPA01009455A (en) | Vaccine |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RECP | Rectifications of patent specification |