KR20130087008A - 모르폴리노 피리미딘 및 치료에서의 이의 용도 - Google Patents

모르폴리노 피리미딘 및 치료에서의 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 피리미디닐 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 이의 제조 방법, 이를 포함하는 약학 조성물 및 치료에서의 이의 용도를 제공한다:
Figure pct00050

[식 중,
R2는

Description

모르폴리노 피리미딘 및 치료에서의 이의 용도{MORPHOLINO PYRIMIDINES AND THEIR USE IN THERAPY}
본 발명은 피리미디닐 화합물, 이의 제조 방법, 이를 포함하는 약학 조성물 및 치료에서의, 예를 들면 증식성 질환, 예컨대 암 및 특히 모세혈관확장성 운동실조증 돌연변이된 그리고 RAD-3 관련된 단백질 키나제 억제제(통상 ATR이라 칭함)에 의해 중재되는 질환의 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.
ATR(FRAP 관련 단백질 1; FRP1; MEC1; SCKL; SECKL1로도 공지됨) 단백질 키나제는 게놈의 보수 및 유지 및 이의 안정성에 관여하는 단백질의 PI3-키나제 유사 키나제(PIKK) 패밀리의 구성원이다(문헌[Cimprich K.A. and Cortez D. 2008, Nature Rev. Mol. Cell Biol. 9: 616-627)] 참조). 이 단백질은 DNA 손상, 스트레스 및 세포 주기 섭동에 대한 반응을 조정한다. 실제로 단백질의 패밀리 중 2개의 구성원인 ATM 및 ATR은 그 자체가 Chk1, BRCA1, p53과 같은 세포 주기 및 DNA 보수 기계의 구성요소를 인식하는 여러 다운스트림 기질을 공유한다(Lakin ND et al, 1999, Oncogene; Tibbets RS et al, 2000, Genes & Dev.). ATM 및 ATR의 기질이 공유되는 정도에 있는 경우, 신호절달 캐스케이드를 활성화하기 위한 방아쇠가 공유되지 않고 ATR는 주로 정지된 복제 분기점(Nyberg K.A. et al., 2002, Ann. Rev. Genet. 36: 617-656; Shechter D. et al. 2004, DNA Repair 3: 901-908) 및 자외선(UV) 방사선(Wright J.A. et al, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 23: 7445-7450) 또는 UV 모방제, 4-니트로퀴놀린-1-옥시드, 4NQO(Ikenaga M. et al. 1975, Basic Life Sci. 5b, 763-771)에 의해 형성되는 것과 같은 벌키한 DNA 손상 병소에 반응한다. 그러나, ATM에 의해 검출되는 이중 가닥 절단(DSB)은 단일 가닥 절단(SSB) 동원 ATR로 가공될 수 있고; 유사하게 ATR에 의해 검출되는 SSB는 DSB를 생성시켜, ATM을 활성화시킬 수 있다. 따라서 상당한 ATM과 ATR 사이에 상호작용이 존재한다.
ATR 단백질의 발현의 완전한 소실을 야기하는 ATR 유전자의 돌연변이는 드물고 일반적으로 실행가능하지 않다. 생존능력은 이형접합 또는 정상 하위 대립 인자 조건 하에 발생할 수 있다. ATR 유전자 돌연변이와 질환 사이의 유일한 명확한 연관이 성장 지연 및 소두증을 특징으로 하는 섹켈 증후군을 앓고 있는 몇몇 환자에서 존재한다(O'Driscoll M et al, 2003 Nature Genet. Vol3, 497-501). ATR의 정상 하위 대립 인자 생식선 돌연변이(섹켈 증후군)를 앓고 있는 환자로부터 얻은 세포는 야생형 세포와 비교하여 복제 스트레스의 존재 하의 취약 부위에서의 염색체 절단에 더 높은 감수성을 나타낸다(Casper 2004). ATR 경로의 방해는 게놈 불안정성을 야기한다. 섹켈 증후군을 앓고 있는 환자는 또한 암의 발병률 증가를 나타내어, 게놈 안정성의 유지에서의 이 질환에서의 ATR의 역할을 제시한다. 또한, ATR 유전자의 중복은 횡문근육종육종에서의 위험한 인자로 기재되어 있다(Smith L et al, 1998, Nature Genetics 19, 39-46). 암유전자 유발 종양형성은 ATM 기능 소실(loss-of-function)과 연관될 수 있고, 따라서 ATR 신호전달에 대한 의존성을 증가시킬 수 있다(Gilad 2010). 복제 스트레스의 증거는 또한 몇몇 종양 유형, 예컨대 대장암 및 난소암에서, 그리고 더 최근에는 교모세포종, 방광암, 전립선암 및 유방암에서 보고되어 있다(Gorgoulis et al., 2005; Bartkova et al. 2005a; Fan et al., 2006; Tort et al., 2006; Nuciforo et al., 2007; Bartkova et al., 2007a). G1 체크포인트의 손실은 또한 종양형성 동안 자주 관찰된다. G1 체크포인트 제어가 결핍된 종양 세포, 특히 p53 결핍증은 ATR 활성의 억제에 걸리기 쉽고, 조기 염색질 축합(PCC; premature chromatin condensation) 및 세포사를 발생시킨다(Ngheim et al, PNAS, 98, 9092-9097).
ATR은 세포를 복제하는 생존능력에 필수적이고 S상 동안 활성화되어 복제 개시점의 점화를 조절하고 손상된 복제 분기점을 보수한다(Shechter D et al, 2004, Nature cell Biology Vol 6(7) 648-655). 히드록시우레아(HU) 및 백금과 같은 임상학적으로 관련된 세포독성 물질에 대한 세포의 노출로 인해 복제 분기점에 대한 손상이 발생할 수 있다(O'Connell and Cimprich 2005; 118, 1-6). ATR은 대부분의 암 화학요법에 의해 활성화된다(Wilsker D et al, 2007, Mol. Cancer Ther. 6(4) 1406-1413). 광범위한 화학요법에 감작화되는 ATR 억제제의 능력의 생물학적 측정이 평가되었다. 세포 성장 검정에서의 화학요법학적 물질에 대한 종양 세포의 감작화가 보고되었고, 약한 ATR 억제제(예컨대, 카페인)가 세포독성 물질에 대해 종양 세포주를 어떻게 잘 감작화할지를 평가하기 위해 사용된다(Wilsker D.et al, 2007, Mol Cancer Ther. 6(4) 1406-1413; Sarkaria J.N. et al, 1999, Cancer Res. 59, 4375-4382). 또한, 암 세포에서의 ATR의 우선 부정적 형태(dominant negative form)를 사용하여 siRNA 또는 ATR 넉인(knock-in)에 의한 ATR 활성의 감소는 다수의 치료학적 또는 실험적 물질, 예컨대 항대사산물(5-FU, 겜시타빈(Gemcitabine), 히드록시우레아, 메토트렉세이트(Metotrexate), 토무덱스(Tomudex)), 알킬화제(시스플라틴(cisplatin), 미토마이신(Mitomycin) C, 시클로포스파미드, MMS) 또는 2중 가닥 손상 유도제(독소루비신(Doxorubicin), 이온화 방사선)(Cortez D. et al. 2001, Science, 294: 1713-1716; Collis S.J. et al, 2003, Cancer Res. 63: 1550-1554; Cliby W.A. et al, 1998, EMBO J. 2: 159-169)의 효과에 대한 종양 세포의 감작화를 발생시켜, ATR 억제제와 여러 세포독성 물질의 조합이 치료학적으로 유리할 수 있다는 것을 제시한다.
특이적 ATR 억제 화합물의 활성이 세포 주기 프로필이라는 것을 규명하기 위한 추가의 표현형 검정이 기재되어 있다(PJ Hurley, D Wilsker and F Bunz, Oncogene, 2007, 26, 2535-2542). ATR에서 결핍된 세포는 특히 세포독성 세포 공격(insult) 이후 결함 세포 주기 조절 및 명확한 특징적인 프로필을 갖는 것으로 보여진다. 더욱이, ATR 축의 조정에 반응하여 종양과 정상 조직 사이에 차별적 반응이 있는 것으로 제안되고 이는 ATR 억제제 분자에 의한 치료학적 중재에 대한 추가의 가능성을 제공한다(Rodriguez-Bravo V et al, Cancer Res., 2007, 67, 11648-11656).
ATR 특이적 표현형의 또 다른 강력한 이용성은 합성 치사율의 개념 및 G1 체크포인트 제어가 결핍된 종양 세포, 특히 p53 결핍증이 조기 염색질 축합(PCC) 및 세포사를 발생시키는 ATR 활성의 억제에 걸리기 쉽다는 관찰과 일치한다(Ngheim et al, PNAS, 98, 9092-9097). 이러한 상황에서, DNA의 S상 복제가 일어나지만 ATR 신호전달의 결여로부터 세포사를 발생시키는 중재하는 체크포인트에서의 실패로 인해 M상 개시 전에 완료되지 않는다. G2/M 체크포인트는 ATR과 관련하는 중요한 조절적인 제어이고(Brown E. J. and Baltimore D., 2003, Genes Dev. 17, 615-628), 이것은 이 체크포인트의 손상 및 PCC를 발생시키는 이의 다운스트림 파트너로의 ATR 신호전달의 방지이다. 결과적으로, 딸세포의 게놈이 손상되고 세포의 생존능력이 소실된다(Ngheim et al, PNAS, 98, 9092-9097).
따라서, ATR의 억제가 ATM 기능 또는 다른 S상 체크포인트에서 결함을 갖는 종양과 같은 적절한 유전학적 정황에서 미래의 암 치료(Collins I. and Garret M.D., 2005, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 366-373; Kaelin W.G. 2005, Nature Rev. Cancer, 5: 689-698)에 대한 효과적인 접근법일 수 있다는 것이 제안된다. 최근까지, ATR을 표적하는 물질에 대한 임상적인 선례가 없지만, 다운스트림 신호전달 축을 표적하는 물질, 즉 Chk1은 현재 임상적인 평가에 있다(검토를 위해, 문헌[Janetka J.W. et al. Curr Opin Drug Discov Devel, 2007, 10: 473-486] 참조). 그러나, ATR 키나제를 표적하는 억제제가 최근에 기재되어 있다(Reaper 2011, Charrier 2011).
요약하자면, ATR 억제제는 전리 방사선 또는 DNA 손상 유도 화학요법학적 물질에 대해 종양 세포를 감작화하는 가능성을 갖고, 선택적 종양 세포사를 유도할 뿐만 아니라 DNA 손상 반응에서의 결함을 갖는 종양 세포의 부분집합에서 합성 치사율을 유도할 가능성을 갖는다.
본 발명의 제1 양태에 따르면, 본 발명은 하기 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00001
[식 중,
R1은 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
R2는
Figure pct00002
이고;
n은 0 또는 1이고;
R2A, R2C, R2E 및 R2F는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
R2B 및 R2D는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
R2G는 -NHR7 및 -NCOR8로부터 선택되고;
R2H는 플루오로이고;
R3은 메틸이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이거나, R4 및 R5은 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리는 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이고;
R6은 수소이고;
R7은 수소 또는 메틸이고;
R8은 메틸이다].
본 발명의 제1 양태에 따르면, 본 발명은 하기 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다:
Figure pct00003
[식 중,
R1은 3-메틸모르폴린-4-일이고;
R2는
Figure pct00004
이고;
n은 0 또는 1이고;
R2A, R2C, R2E 및 R2F는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
R2B 및 R2D는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
R2G는 -N2, -NHMe 및 -NCOMe로부터 선택되고;
R2H는 플루오로이고;
R3은 메틸이고;
R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이거나, R4 및 R5는 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리는 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이고;
R6은 수소이다].
특정한 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 입체이성체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 모든 기하 이성체 및 광학 이성체 및 라세미체를 비롯하여 이의 혼합물을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 호변이체 및 이의 혼합물은 또한 본 발명의 일 양태를 형성한다. 용매화물 및 이의 혼합물은 또한 본 발명의 일 양태를 형성한다. 예를 들면, 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 적합한 용매화물은, 예를 들면 수화물, 예컨대 반수화물, 1수화물, 2수화물 또는 3수화물 또는 이의 대안적인 분량이다.
도 1은 EtOAc로부터 공기 중에 서서히 증발 건조함으로써 성장하고 분리되는 결정으로부터 얻은 실시예 2.02의 분자 구조의 투시도이다. 비대칭 단위는 2개의 결정학적으로 독특한 분자를 포함한다.
상기 정의된 특정한 화학식 (Ⅰ)의 화합물이 하나 이상의 비대칭 탄소 원자 또는 황 원자에 의해 광학적으로 활성인 형태 또는 라세미체 형태로 존재할 수 있는 한, 본 발명이 이의 정의 내에서 상기 언급된 활성을 보유하는 임의의 이러한 광학적으로 활성인 형태 또는 라세미체 형태를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 활성을 갖는 모든 이러한 입체이성체를 포괄한다. 추가로, 키랄 화합물(R,S)의 명칭에서 임의의 비라세미체(scalemic) 또는 라세미체 혼합물을 지칭하며 반면 (R) 및 (S)는 거울상이성체를 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 그 명칭에서 (R,S), (R) 또는 (S)의 부재시에, 그 명칭은 임의의 비라세미체 또는 라세미체 혼합물을 지칭하고, 여기서 비라세미체 혼합물은 임의의 상대 비율의 R 거울상이성체 및 S 거울상이성체를 포함하고 라세미체 혼합물은 50:50 비의 R 거울상이성체 및 S 거울상이성체를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 광학적으로 활성인 형태의 합성을 당해 분야에 널리 공지된 유기 화학의 표준 기술에 의해, 예를 들면 광학적으로 활성인 출발 물질로부터의 합성에 의해 또는 라세미체 형태의 분리에 의해 수행할 수 있다. 라세미체를 공지된 절차를 사용하여 개별적인 거울상이성체로 분리할 수 있다(예를 들면, 문헌[Advanced Organic Chemistry: 3rd Edition: author J March, p104-107] 참조). 적합한 절차는 라세미체 재료와 키랄 보조제와의 반응에 의한 부분입체이성체 유도체의 형성 및 이후 부분입체이성체의, 예를 들면 크로마토그래피에 의한 분리 및 이후 보조제 종의 분할을 포함한다. 유사하게, 이하에 기술되는 표준 실험실 기술을 이용하여 상기 언급된 활성을 평가할 수 있다.
본 발명은 하나 이상의 동위원소 치환을 갖는 화합물을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들면, H는 1H, 2H(D), 및 3H(T)를 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있고; C는 12C, 13C, 및 14C를 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있고; O는 16O 및 18O를 포함하는 임의의 동위원소 형태일 수 있고, 기타 이와 같다.
본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물 및 이의 염에 관한 것이다. 약학 조성물에 사용하기 위한 염은 약학적으로 허용되는 염이지만, 다른 염이 화학식 (Ⅰ)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염의 제조에서 유용할 수 있다. 본 발명의 약학적으로 허용되는 염은, 예를 들면 이러한 염을 형성하기에 충분히 염기성인 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 산 부가염을 포함할 수 있다. 이러한 산 부가염으로는 푸마레이트, 메탄설포네이트, 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 시트레이트 및 말레에이트 염 및 인산 및 황산에 의해 형성된 염을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 또한, 화학식 (Ⅰ)의 화합물이 충분히 산성인 경우, 염은 염기 염이고, 예로는 알칼리 금속염, 예를 들면 나트륨염 또는 칼륨염, 알칼리 토금속염, 예를 들면 칼슘염 또는 마그네슘염, 또는 유기 아민 염, 예를 들면 트리에틸아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 모르폴린, N-메틸피페리딘, N-에틸피페리딘, 디벤질아민 또는 아미노산, 예컨대 리신을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다.
화학식 (Ⅰ)의 화합물은 또한 생체내 가수분해성 에스테르로서 제공될 수 있다. 카복시 또는 히드록시 기를 포함하는 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 생체내 가수분해성 에스테르는, 예를 들면 모 산 또는 알콜을 생성시키는 인간 또는 동물 신체에서 분할되는 약학적으로 허용되는 에스테르이다. 예를 들면, 시험 동물에게 정맥 내로 시험 중인 화합물을 투여하고 이후 시험 동물의 체액을 검사함으로써 이러한 에스테르를 확인할 수 있다.
카복시에 적합한 약학적으로 허용되는 에스테르로는 C1 - 6알콕시메틸 에스테르, 예를 들면 메톡시메틸, C1 - 6알카노일옥시메틸 에스테르, 예를 들면 피발로일옥시메틸, 프탈리딜 에스테르, C3 - 8시클로알콕시카보닐옥시C1 - 6알킬 에스테르, 예를 들면 1-시클로헥실카보닐옥시에틸, 1,3-디옥솔렌-2-온일메틸 에스테르, 예를 들면 5-메틸-1,3-디옥솔렌-2-온일메틸, 및 C1 - 6알콕시카보닐옥시에틸 에스테르, 예를 들면 1-메톡시카보닐옥시에틸을 들 수 있고; 본 발명의 화합물에서 임의의 카복시 기에서 형성될 수 있다.
히드록시에 적합한 약학적으로 허용되는 에스테르로는 무기 에스테르, 예컨대 (포스포르아미드 사이클릭 에스테르를 포함하는) 포스페이트 에스테르 및 α-아실옥시알킬 에테르 및 에스테르 분해의 생체내 가수분해의 결과로서 모 히드록시 기(들)를 생성시키는 관련 화합물을 들 수 있다. α-아실옥시알킬 에테르의 예로는 아세트옥시메톡시 및 2,2-디메틸프로피오닐옥시메톡시를 들 수 있다. 히드록시에 대한 생체내 가수분해성 에스테르를 형성하는 기의 선택은 C1-10알카노일, 예를 들면 포밀, 아세틸, 벤조일, 페닐아세틸, 치환 벤조일 및 페닐아세틸; (알킬 카보네이트 에스테르를 생성시키는) C1-10알콕시카보닐, 예를 들면 에톡시카보닐; (카바메이트를 생성시키는) 디-C1-4알킬카바모일 및 N-(디-C1-4알킬아미노에틸)-N-C1-4알킬카바모일; 디-C1-4알킬아미노아세틸 및 카복시아세틸을 포함한다. 페닐아세틸 및 벤조일에 대한 고리 치환기의 예로는 고리 질소 원자로부터 메틸렌 연결 기를 통해 벤조일 고리의 3번 또는 4번 위치에 연결된 아미노메틸, C1 - 4알킬아미노메틸 및 디-(C1-4알킬)아미노메틸, 및 모르폴리노 또는 피페라지노를 들 수 있다. 다른 관심 있는 생체내 가수분해성 에스테르로는, 예를 들면 RAC(O)OC1- 6알킬-CO-(여기서, RA는, 예를 들면 벤질옥시-C1-4알킬, 또는 페닐임)를 들 수 있다. 이러한 에스테르에서의 페닐 기에 대한 적합한 치환기로는, 예를 들면 4-C1-4피페라지노-C1-4알킬, 피페라지노-C1-4알킬 및 모르폴리노-C1-4알킬을 들 수 있다.
화학식 (Ⅰ)의 화합물을 제공하기 위해 인간 또는 동물 신체에서 분해되는 프로드럭 형태의 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 또한 투여할 수 있다. 다양한 형태의 프로드럭이 당해 분야에 공지되어 있다. 이러한 프로드럭 유도체의 예에 대해 하기를 참조한다:
(a) Design of Prodrugs, edited by H. Bundgaard, (Elsevier, 1985) and Methods in Enzymology, Vol. 42, p. 309-396, edited by K. Widder, et al.(Academic Press, 1985);
(b) A Textbook of Drug Design 및 Development, edited by Krogsgaard-Larsen and H. Bundgaard, Chapter 5 "Design and Application of Prodrugs", by H. Bundgaard p. 113-191(1991);
(c) H. Bundgaard, Advanced Drug Delivery Reviews, 8, 1-38(1992);
(d) H. Bundgaard, et al., Journal of Pharmaceuticals Sciences, 77, 285(1988); 및
(e) N. Kakeya, et al., Chem Pharm Bull, 32, 692(1984).
이 규정에서, "Cp -q알킬"이라는 일반적 용어는 직쇄 알킬 기 및 분지쇄 알킬 기 둘 다를 포함한다. 그러나, 개별적인 알킬 기, 예컨대 "프로필"에 대한 언급은 직쇄 변형(즉, n-프로필 및 이소프로필)에만 특정적이고, 개별적인 분지쇄 알킬 기, 예컨대 "tert-부틸"에 대한 언급은 분지쇄 변형에만 특정적이다.
Cp -q알킬 및 다른 용어에서의 접두사 Cp -q(여기서, p 및 q는 정수임)는 그 기 내에 존재하는 탄소 원자의 범위를 나타내고, 예를 들면 C1 - 4알킬은 C1알킬(메틸), C2알킬(에틸), C3알킬(n-프로필 및 이소프로필로서의 프로필) 및 C4알킬(n-부틸, sec-부틸, 이소부틸 및 tert-부틸)를 포함한다.
용어 Cp -q알콕시는 -O-Cp -q알킬 기를 포함한다.
용어 Cp -q알카노일은 -C(O)알킬 기를 포함한다.
할로란 용어는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 포함한다.
"카보시클릴"는 3개 내지 6개의 고리 원자를 포함하는 포화, 불포화 또는 부분 포화 모노사이클릭 고리 시스템이고, 여기서 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다. "카보시클릴"은 "아릴", "Cp -q시클로알킬" 및 "Cp -q시클로알케닐"을 포함한다.
"아릴"은 방향족 모노사이클릭 카보시클릴 고리 시스템이다.
"Cp -q시클로알케닐"은 1개 이상의 C=C 결합을 포함하는 불포화 또는 부분 포화 모노사이클릭 카보시클릴 고리 시스템이고, 여기서 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다.
"Cp -q시클로알킬"은 포화 모노사이클릭 카보시클릴 고리 시스템이고, 여기서 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다.
"헤테로시클릴"은 3개 내지 6개의 고리 원자를 포함하는 포화, 불포화 또는 부분 포화 모노사이클릭 고리 시스템이고, 이 고리 원자 중 1개, 2개 또는 3개의 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되고, 고리는 탄소 또는 질소 연결될 수 있고, 고리 질소 또는 황 원자는 산화될 수 있고, 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다. "헤테로시클릴"은 "헤테로아릴", "시클로헤테로알킬" 및 "시클로헤테로알케닐"을 포함한다.
"헤테로아릴"은 특히 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 방향족 모노사이클릭 헤테로시클릴이고, 이 고리 원자 중 1개, 2개 또는 3개의 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되고, 고리 질소 또는 황은 산화될 수 있다.
"시클로헤테로알케닐"은 특히 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 불포화 또는 부분 포화 모노사이클릭 헤테로시클릴 고리 시스템이고, 이 고리 원자 중 1개, 2개 또는 3개의 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되고, 고리는 탄소 또는 질소 연결될 수 있고, 고리 질소 또는 황 원자는 산화될 수 있고, 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다.
"시클로헤테로알킬"은 특히 5개 또는 6개의 고리 원자를 갖는 포화 모노사이클릭 헤테로사이클릭 고리 시스템이고, 이 고리 원자 중 1개, 2개 또는 3개의 고리 원자는 질소, 황 또는 산소로부터 선택되고, 고리는 탄소 또는 질소 연결될 수 있고, 고리 질소 또는 황 원자는 산화될 수 있고, 고리 CH2 기는 C=O 기로 치환될 수 있다.
이러한 언급은 1개 초과의 작용기를 포함하는 기를 기술하기 위한 복합 용어가 사용되게 한다. 본원에서 달리 기재되지 않은 한, 이러한 용어는 당해 분야에서 이해되는 바대로 해석되어야 한다. 예를 들면, 카보시클릴Cp -q알킬은 카보시클릴로 치환된 Cp-q알킬을 포함하고, 헤테로시클릴Cp -q알킬은 헤테로시클릴로 치환된 Cp -q알킬을 포함하고, 비스(Cp-q알킬)아미노는 동일하거나 상이할 수 있는 2개의 Cp -q알킬 기로 치환된 아미노를 포함한다.
할로Cp -q알킬은 1개 이상의 할로 치환기, 특히 1개, 2개 또는 3개의 할로 치환기로 치환된 Cp -q알킬 기이다. 유사하게, 할로Cp -q알콕시와 같은 할로를 포함하는 다른 일반적 용어는 1개 이상의 할로 치환기, 특히 1개, 2개 또는 3개의 할로 치환기를 포함할 수 있다.
히드록시Cp -q알킬은 1개 이상의 히드록실 치환기, 특히 1개, 2개 또는 3개의 히드록시 치환기로 치환된 Cp -q알킬 기이다. 유사하게, 히드록시Cp -q알콕시와 같은 히드록시를 포함하는 다른 일반적 용어는 1개 이상, 특히 1개, 2개 또는 3개의 히드록시 치환기를 포함할 수 있다.
Cp -q알콕시Cp -q알킬은 1개 이상의 Cp -q알콕시 치환기, 특히 1개, 2개 또는 3개의 Cp -q알콕시 치환기로 치환된 Cp -q알킬 기이다. 유사하게, Cp -q알콕시Cp -q알콕시와 같은 Cp -q알콕시를 포함하는 다른 일반적 용어는 1개 이상의 Cp -q알콕시 치환기, 특히 1개, 2개 또는 3개의 Cp -q알콕시 치환기를 포함할 수 있다.
임의의 치환기가 "1개 또는 2개", "1개, 2개, 또는 3개" 또는 "1개, 2개, 3개 또는 4개"의 기 또는 치환기로부터 선택되는 경우, 이러한 정의는 특정한 기 중 하나로부터 선택되는 모든 치환기, 즉 동일한 모든 치환기 또는 특정한 기 중 2개 이상으로부터 선택되는 치환기, 즉 동일하지 않은 치환기를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 발명의 화합물을 컴퓨터 소프트웨어(ACD/Name 버전 10.06)의 도움으로 명명할 수 있다.
"증식성 질환(들)"은 암과 같은 악성 질환(들) 및 염증 질환, 폐쇄성 기도 질환, 면역 질환 또는 심혈관 질환과 같은 비악성 질환(들)을 포함한다.
임의의 R 기 또는 이 기에 대한 임의의 부분 또는 치환기에 대한 적합한 값은 하기를 포함한다:
C1 - 3알킬의 경우: 메틸, 에틸, 프로필 및 이소-프로필;
C1 - 6알킬의 경우: C1 - 3알킬, 부틸, 2-메틸프로필, tert-부틸, 펜틸, 2,2-디메틸프로필, 3-메틸부틸 및 헥실;
C3 - 6시클로알킬의 경우: 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실;
C3 - 6시클로알킬C1 - 3알킬의 경우: 시클로프로필메틸, 시클로프로필에틸, 시클로부틸메틸, 시클로펜틸메틸 및 시클로헥실메틸;
아릴의 경우: 페닐;
아릴C1 - 3알킬의 경우: 벤질 및 펜에틸;
카보시클릴의 경우: 아릴, 시클로헥세닐 및 C3 - 6시클로알킬;
할로의 경우: 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도;
C1 - 3알콕시의 경우: 메톡시, 에톡시, 프로폭시 및 이소프로폭시;
C1 - 6알콕시의 경우: C1 - 3알콕시, 부톡시, tert-부톡시, 펜틸옥시, 1-에틸프로폭시 및 헥실옥시;
C1 - 3알카노일의 경우: 아세틸 및 프로파노일;
C1 - 6알카노일의 경우: 아세틸, 프로파노일 및 2-메틸프로파노일;
헤테로아릴의 경우: 피리디닐, 이미다졸릴, 피리미디닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 푸라닐, 피리다지닐 및 피라지닐;
헤테로아릴C1 - 3알킬의 경우: 피롤릴메틸, 피롤릴에틸, 이미다졸릴메틸, 이미다졸릴에틸, 피라졸릴메틸, 피라졸릴에틸, 푸라닐메틸, 푸라닐에틸, 티에닐메틸, 티에닐에틸, 피리디닐메틸, 피리디닐에틸, 피라지닐메틸, 피라지닐에틸, 피리미디닐메틸, 피리미디닐에틸, 피리미디닐프로필, 피리미디닐부틸, 이미다졸릴프로필, 이미다졸릴부틸, 1,3,4-트리아졸릴프로필 및 옥사졸릴메틸;
헤테로시클릴의 경우: 헤테로아릴, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제티디닐, 모르폴리닐, 디하이드로-2H-피라닐, 테트라하이드로피리딘 및 테트라하이드로푸라닐;
포화 헤테로시클릴의 경우: 옥세타닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 아제티디닐, 모르폴리닐, 테트라하이드로피라닐 및 테트라하이드로푸라닐.
명세서에서 사용된 용어에 기재된 대한 예는 제한이 아니라는 것에 유의해야 한다.
A 고리, n, R1, R2, R4, R5, R6, R7 및 R8의 특정한 값은 하기와 같다. 이러한 값은 개별적으로 또는 적절한 경우 조합되어, 본 발명의 임의의 양태, 또는 이의 일부와 관련하여, 그리고 본원에서 한정된 정의, 특허청구범위 또는 실시양태 중 어느 하나와 관련하여 사용될 수 있다.
n
일 양태에서, n은 0이다.
다른 양태에서, n은 1이다.
R 1
일 양태에서, R1은 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택된다.
추가의 양태에서, R1은 3-메틸모르폴린-4-일이다.
추가의 양태에서, R1은
Figure pct00005
이다.
추가의 양태에서, R1은
Figure pct00006
이다.
R 2
일 양태에서, R2는
Figure pct00007
이다.
일 양태에서, R2는
Figure pct00008
이다.
일 양태에서, R2는
Figure pct00009
이다.
일 양태에서, R2는
Figure pct00010
이다.
R 2A
R2A는 수소이다.
R 2B
R2B는 수소이다.
R 2C
R2C는 수소이다.
R 2D
R2D는 수소이다.
R 2E
R2E는 수소이다.
R 2F
R2F는 수소이다.
R 2G
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -NHR7 및 -NHCOR8로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -NR7이다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -NCOR8이다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -N2, -NHMe 및 -NHCOMe로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -N2이다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -NMe이다.
본 발명의 일 양태에서, R2G는 -NCOMe이다.
R 4 및 R 5
본 발명의 일 양태에서, R4 및 R5는 수소이다.
본 발명의 일 양태에서, R4 및 R5는 메틸이다.
본 발명의 일 양태에서, R4 및 R5는 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성한다.
A 고리
본 발명의 일 양태에서, A 고리는 C3 - 6시클로알킬 또는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 옥세타닐, 테트라하이드로푸릴, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐 또는 피페리디닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필, 시클로펜틸, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필 또는 테트라하이드로피라닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 피페리디닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 테트라하이드로피라닐 고리이다.
다른 양태에서, A 고리는 시클로프로필 고리이다.
R 6
일 양태에서, R6은 수소이다.
R 7
일 양태에서, R7은 수소 또는 메틸이다.
일 양태에서, R7은 메틸이다.
일 양태에서, R7은 수소이다.
R 8
일 양태에서, R12는 메틸이다.
본 발명의 일 양태에서, 본 발명은
R1이 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
n이 0 또는 1이고;
R2A가 수소이고;
R2B가 수소이고;
R2C가 수소이고;
R2D가 수소이고;
R2E가 수소이고;
R2F가 수소이고;
R2G가 -NHR7 및 -NHCOR8로부터 선택되고;
R2H가 플루오로이고;
R3이 메틸이고;
R4 및 R5가 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리가 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이고;
R6이 수소이고;
R7이 수소 또는 메틸이고;
R8이 메틸인
화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은
R1이 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
n이 0 또는 1이고;
R2A가 수소이고;
R2B가 수소이고;
R2C가 수소이고;
R2D가 수소이고;
R2E가 수소이고;
R2F가 수소이고;
R2G가 -N2, -NHMe 및 -NHCOMe로부터 선택되고;
R2H가 플루오로이고;
R3이 메틸이고;
R4 및 R5가 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리가 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이고;
R6이 수소인
화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은
R1이 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
n이 0 또는 1이고;
R2A가 수소이고;
R2B가 수소이고;
R2C가 수소이고;
R2D가 수소이고;
R2E가 수소이고;
R2F가 수소이고;
R2G가 -NHR7 및 -NHCOR8로부터 선택되고;
R2H가 플루오로이고;
R3이 메틸이고;
R4 및 R5가 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리가 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 옥세타닐, 테트라하이드로푸릴, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐 또는 피페리디닐 고리이고;
R6이 수소이고;
R7이 수소 또는 메틸이고;
R8이 메틸인
화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은
R1이 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
n이 0 또는 1이고;
R2A가 수소이고;
R2B가 수소이고;
R2C가 수소이고;
R2D가 수소이고;
R2E가 수소이고;
R2F가 수소이고;
R2G가 -N2, -NHMe 및 -NHCOMe로부터 선택되고;
R2H가 플루오로이고;
R3이 메틸이고;
R4 및 R5가 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
A 고리가 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 옥세타닐, 테트라하이드로푸릴, 테트라하이드로피라닐, 아제티디닐, 피롤리디닐 또는 피페리디닐 고리이고;
R6이 수소인
화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다:
Figure pct00011
[식 중,
A 고리는 시클로프로필, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이고;
R2는
Figure pct00012
이고;
n은 0 또는 1이고;
R2A는 수소이고;
R2B는 수소이고;
R2C는 수소이고;
R2D는 수소이고;
R2E는 수소이고;
R2F는 수소이고;
R2G는 -NHR7 및 -NHCOR8로부터 선택되고;
R2H는 플루오로이고;
R3은 메틸 기이고;
R6은 수소이고;
R7은 수소 또는 메틸이고;
R8은 메틸이다].
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다:
Figure pct00013
[식 중,
A 고리는 시클로프로필, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이고;
R2는
Figure pct00014
이고;
n은 0 또는 1이고;
R2A는 수소이고;
R2B는 수소이고;
R2C는 수소이고;
R2D는 수소이고;
R2E는 수소이고;
R2F는 수소;
R2G는 -N2, -NHMe 및 -NHCOMe로부터 선택되고;
R2H는 플루오로이고;
R3 은 메틸 기이고;
R6은 수소이다].
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다:
Figure pct00015
[식 중,
A 고리는 시클로프로필, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리이고;
R2는
Figure pct00016
이고;
n은 0 또는 1이고;
R2A는 수소이고;
R2B는 수소이고;
R2C는 수소이고;
R2D는 수소이고;
R2E는 수소이고;
R2F는 수소이고;
R2G는 -NHR7이고;
R2H는 플루오로이고;
R3은 메틸 기이고;
R6은 수소이고;
R7은 수소이다].
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 하기 화학식 (Ia)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 부분집합을 제공한다:
Figure pct00017
[식 중,
A 고리는 시클로프로필 고리이고;
R2는
Figure pct00018
이고;
n은 0이고;
R2A는 수소이고;
R2B는 수소이고;
R2C는 수소이고;
R2D는 수소이고;
R2E는 수소이고;
R2F는 수소이고;
R2G는 -NR7이고;
R2H는 플루오로이고;
R3은 메틸 기이고;
R6은 수소이고;
R7은 메틸이다].
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 실시예 중 어느 하나로부터 선택되는 화합물, 또는 화합물의 조합, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[((R)-S-메틸설폰이미도일)메틸]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-c]피리딘;
N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((S)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((R)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((S)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 및
6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민
중 어느 하나로부터 선택되는 화합물, 또는 화합물의 조합, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[(R)-(S-메틸설폰이미도일)메틸]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(R)-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 및
N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S)-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민
중 어느 하나로부터 선택되는 화합물, 또는 화합물의 조합, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
마이크로파 반응기에서의 가열과 같은 적합한 조건 하에 N,N-디메틸포름아미드, 디메톡시에탄, 물 및 에탄올의 혼합물과 같은 적합한 용매 중의 적합한 Pd 촉매 및 포스핀 리간드의 존재 하에 화학식 (Ⅲa), 화학식 (Ⅲb) 또는 화학식 (Ⅲc)(여기서, X는 적합한 기(예컨대, 보론산 또는 에스테르)임)의 화합물의 반응에 의해 화학식 (Ⅱ)의 화합물(여기서, L2는 이탈 기(예컨대, 할로 또는 -SMe 등)임)로부터 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 제조할 수 있다. 대안적으로, N,N-디메틸포름아미드 또는 N,N-디메틸아세트아미드와 같은 적합한 용매 중의 NaH, Na2CO3, Cs2CO3 또는 K2CO3과 같은 적합한 염기와 함께 또는 디옥산과 같은 적합한 용매 중의 적합한 Pd 촉매 및 포스핀 리간드의 존재 하에 화학식 (Ⅲd)의 화합물과의 반응에 의해 화학식 (Ⅱ)의 화합물(여기서, L2는 이탈 기(예컨대, 할로 또는 -SMe 등)임)로부터 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 제조할 수 있다.
Figure pct00019
Figure pct00020
화학식 (Ⅰ)의 화합물을 당해 분야에 널리 공지된 조건을 사용하여 또 다른 화학식 (Ⅰ)의 화합물로 전환할 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
화학식 (Ⅲa), 화학식 (Ⅲb), 화학식 (Ⅲc) 및 화학식 (Ⅲd)의 화합물은 상업적으로 구입가능하거나 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
화학식 (Ⅱ)의 화합물을 상기 기재된 기술 또는 달리 문헌에 공지된 기술 중 어느 하나인 산화, 알킬화, 환원 아미노화 등과 같은 기술에 의해 또 다른 화학식 (Ⅱ)의 화합물로 전환할 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
화학식 (Ⅳ)의 화합물(여기서, PG는 적합한 보호기, 예컨대 트리플루오로아세트아미드임)과 화학식 (Ⅴ)의 화합물(여기서, A는 1개의 탄소가 O, N 또는 S로 임의로 치환될 수 있는 2원 내지 6원, 임의로 치환된, 알킬렌이고, L1은 이탈 기(예컨대, 할로, 토실, 메실 등)임)과의 반응, 및 적합한 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 또는 N,N-디메틸포름아미드 중의 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 또는 칼륨 tert-부톡시드의 존재 하의 보호기의 제거에 의해, 또는 적합한 상 이동제, 예컨대 테트라부틸암모늄 브로마이드와 함께 수성 수산화나트륨 용액 및 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 톨루엔을 사용함으로써 화학식 (Ⅱ)의 화합물(여기서, R6은 수소이고, R4 및 R5는 A 고리를 형성함)을 제조할 수 있다.
Figure pct00021
화학식 (Ⅳ)의 화합물(여기서, PG는 적합한 보호기, 예컨대 트리플루오로아세트아미드임)과 화학식 (Va)의 화합물(여기서, L1은 이탈 기(예컨대, 할로, 토실, 메실 등)임)과의 반응, 및 적합한 용매, 예컨대 테트라하이드로푸란 또는 N,N-디메틸포름아미드 중의 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 또는 칼륨 tert-부톡시드의 존재 하의 보호기의 제거에 의해 화학식 (Ⅱ)의 화합물(여기서, R6은 수소이고, R4 및 R5는 둘 다 메틸임)을 제조할 수 있다.
Figure pct00022
화학식 (VI)의 화합물과, 적합한 염기, 예컨대 산화마그네슘 및 촉매, 예컨대 로듐 아세테이트의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 DCM 중의 요오도벤젠 디아세테이트 및 트리플루오로아세트아미드로부터 인시추 제조될 수 있는 이미노이오단(VII)과의 반응에 의해 화학식 (Ⅳ)의 화합물(여기서, PG는 적합한 보호기, 예컨대 트리플루오로아세트아미드임)을 제조할 수 있다.
Figure pct00023
화학식 (Ⅳ)의 화합물(여기서, L2는 이탈 기(예컨대, 할로 또는 -SMe 등)임)을 마이크로파 반응기에서의 가열 및 트리플루오로아세트아미드 보호기의 제거와 같은 적합한 조건 하에 N,N-디메틸포름아미드, 디메톡시에탄, 물 및 에탄올의 혼합물과 같은 적합한 용매 중에 적합한 Pd 촉매 및 포스핀 리간드의 존재 하에 화학식 (Ⅲa), 화학식 (Ⅲb) 또는 화학식 (Ⅲc)의 화합물(여기서, X는 적합한 기(예컨대, 보론산 또는 에스테르)임)과 반응시킴으로써 화학식 (Ⅰ)의 화합물(여기서, R4, R5 및 R6은 수소임)을 제조할 수 있다. 대안적으로, 화학식 (Ⅳ)의 화합물(여기서, L2는 이탈 기(예컨대, 할로 또는 -SMe 등)임)을 적합한 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 또는 N,N-디메틸아세트아미드 중의 적합한 염기, 예컨대 NaH, Na2CO3, Cs2CO3 또는 K2CO3과 함께 또는 적합한 용매, 예컨대 디옥산 중의 적합한 Pd 촉매 및 포스핀 리간드의 존재 하에 화학식 (Ⅲd)의 화합물과 반응시키고 트리플루오로아세트아미드를 제거함으로써 화학식 (Ⅰ)의 화합물(여기서, R4, R5 및 R6은 수소임)을 제조할 수 있다.
당해 분야에 널리 공지된 조건을 이용하여 화학식 (VIII)의 화합물과 반응시킴으로써 화학식 (VI)의 화합물을 제조할 수 있다.
Figure pct00024
화학식 (IX)의 화합물(여기서, L4는 이탈 기(예컨대, 할로, 토실, 메실 등)임)을 임의로 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민 및 용매, 예컨대 N,N-디메틸포름아미드의 존재 하에 화학식 (X)의 화합물과 반응시킴으로써 화학식 (VIII)의 화합물을 제조할 수 있다.
Figure pct00025
화학식 (IX)의 화합물을 당해 분야에 널리 공지된 조건을 이용하여 화학식 (XI)의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
Figure pct00026
화학식 (XI)의 화합물을 당해 분야에 널리 공지된 조건을 이용하여 화학식 (XII)의 화합물과 반응시킴으로써 제조할 수 있다.
Figure pct00027

임의로 적합한 용매, 예컨대 DCM 중의 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민의 존재 하에 화학식 (XIII)의 화합물을 사이클릭 아민, 예컨대 모르폴린과 반응시킴으로써 화학식 (XII)의 화합물(여기서, R1은 N 연결 헤테로사이클, 예컨대 모르폴린임)을 제조할 수 있다. 화학식 (XIII)의 화합물을 적합한 용매, 예컨대 1,4-디옥산 중의 적합한 금속 촉매(예컨대, 팔라듐 또는 구리)의 존재 하에 적합한 유기금속 시약(예컨대, 보론산 R1B(OH)2 또는 붕산 에스테르 R1B(OR)2 등)과 반응시킴으로써 화학식 (XII)의 화합물(여기서, R1은 C 연결 헤테로사이클, 예컨대 디하이드로피란임)을 제조할 수 있다.
Figure pct00028
화학식 (XIII)의 화합물, 사이클릭 아민, 보론산 {R1B(OH)2} 및 붕산 에스테르 {R1B(OR)2}는 상업적으로 구입가능하거나 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
A 고리가 질소 원자를 포함하는 헤테로사이클릭 고리인 경우 질소 원자를 적절하게 보호할 수 있고(예를 들면, t-부톡시카바메이트 또는 벤질 기), 보호기를 제거할 수 있고, 필요한 경우 합성에서의 임의의 단계에서 질소 상에서 추가의 반응(예를 들면, 알킬화, 환원 아미노화 또는 아미드화)을 수행할 수 있는 것으로 이해될 수 있다.
본 발명의 화합물 내의 다양한 고리 치환기 중 특정한 고리 치환기는 표준 방향족 치환 반응에 의해 도입될 수 있거나 상기 언급된 공정 전에 또는 직후에 종래의 작용기 변경에 의해 생성될 수 있고, 그대로 본 발명의 공정 양태에 포함되는 것으로 이해될 것이다. 예를 들면, 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 표준 방향족 치환 반응에 의해 또는 종래의 작용기 변경에 의해 추가의 화학식 (Ⅰ)의 화합물로 전환할 수 있다. 이러한 반응 및 변경으로는, 예를 들면 방향족 치환 반응에 의한 치환기의 도입, 치환기의 환원, 치환기의 알킬화 및 치환기의 산화를 들 수 있다. 이러한 절차에 대한 시약 및 반응 조건은 화학 분야에 널리 공지되어 있다. 방향족 치환 반응의 특정한 예로는 농축 질산을 사용하여 니트로 기를 도입하는 것, 프리델 크라프트 조건 하에, 예를 들면 아실 할라이드 및 루이스 산(예컨대, 알루미늄 트리클로라이드)을 사용하여 아실 기를 도입하는 것; 프리델 크라프트 조건 하에 알킬 할라이드 및 루이스 산(예컨대, 알루미늄 트리클로라이드)을 사용하여 알킬 기를 도입하는 것; 및 할로겐 기를 도입하는 것을 들 수 있다. 변경의 특정한 예로는, 예를 들면 니켈 촉매에 의한 촉매 수소화 또는 가열과 동시의 염산의 존재 하의 철에 의한 처리에 의해 아미노 기로 니트로 기를 환원시키는 것; 알킬설피닐 또는 알킬설포닐로 알킬티오를 산화시키는 것을 들 수 있다.
또한, 본원에 언급된 반응 중 일부에서 이 화합물 내의 임의의 민감성 기를 보호하는 것이 필요할 수/바람직할 수 있는 것을 이해되어야 한다. 보호가 필요하거나 바람직한 경우 및 보호에 적합한 방법은 당해 분야의 당업자에게 공지되어 있다. 종래의 보호기를 표준 실행(예시를 위해, 문헌[T.W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley 및 Sons, 1991] 참조)에 따라 사용할 수 있다. 따라서, 반응물이 아미노, 카복시 또는 히드록시와 같은 기를 포함하는 경우, 본원에 언급된 반응 중 일부에서 기를 보호하는 것이 바람직할 수 있다.
아미노 또는 알킬아미노 기에 대한 적합한 보호기는, 예를 들면 아실 기, 예를 들면 알카노일 기, 예컨대 아세틸, 알콕시카보닐 기, 예를 들면 메톡시카보닐, 에톡시카보닐 또는 tert-부톡시카보닐 기, 아릴메톡시카보닐 기, 예를 들면 벤질옥시카보닐, 또는 아로일 기, 예를 들면 벤조일이다. 상기 보호기에 대한 탈보호 조건은 보호기의 선택에 따라 필연적으로 변한다. 따라서, 예를 들면 아실 기, 예컨대 알카노일 또는 알콕시카보닐 기 또는 아로일 기를, 예를 들면 수산화리튬 또는 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물과 같은 적합한 염기에 의한 가수분해에 의해 제거할 수 있다. 대안적으로, 아실 기, 예컨대 tert-부톡시카보닐 기를, 예를 들면 염산, 황산 또는 인산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 적합한 산에 의한 처리에 의해 제거할 수 있고, 아릴메톡시카보닐 기, 예컨대 벤질옥시카보닐 기를, 예를 들면 탄소상 팔라듐과 같은 촉매 위로의 수소화, 또는 붕산 트리스(트리플루오로아세테이트)와 같은 루이스 산에 의한 처리에 의해 제거할 수 있다. 1차 아미노 기에 대한 적합한 대안적인 보호기는, 예를 들면 알킬아민, 예를 들면 디메틸아미노프로필아민, 또는 히드라진에 의한 처리에 의해 제거될 수 있는 프탈로일 기이다.
히드록시 기에 대한 적합한 보호기는, 예를 들면 아실 기, 예를 들면 알카노일 기, 예컨대 아세틸, 아로일 기, 예를 들면 벤조일, 또는 아릴메틸 기, 예를 들면 벤질이다. 상기 보호기에 대한 탈보호 조건은 보호기의 선택에 따라 필연적으로 변한다. 따라서, 예를 들면 아실 기, 예컨대 알카노일 또는 아로일 기를, 예를 들면 수산화리튬 또는 수산화나트륨과 같은 알칼리 금속 수산화물과 같은 적합한 염기에 의한 가수분해에 의해 제거할 수 있다. 대안적으로, 아릴메틸 기, 예컨대 벤질 기를, 예를 들면 탄소상 팔라듐과 같은 촉매 위로의 수소화에 의해 제거할 수 있다.
카복시 기에 대한 적합한 보호기는, 예를 들면 에스테르화 기, 예를 들면 수산화나트륨과 같은 염기에 의한, 예를 들면 가수분해에 의해 제거될 수 있는, 예를 들면 메틸 또는 에틸 기, 또는, 예를 들면 트리플루오로아세트산과 같은 유기 산과 같은 산에 의한 처리에 의해 제거될 수 있는 tert-부틸 기, 또는, 예를 들면 탄소상 팔라듐과 같은 촉매 위로의, 예를 들면 수소화에 의해 제거될 수 있는 벤질 기이다.
화학 분야에 널리 공지된 종래의 기술을 이용하여 합성에서의 임의의 편리한 단계에서 보호기를 제거할 수 있다.
본원에 정의된 많은 중간체는 신규하고 이것은 본 발명의 추가의 특징으로서 제공된다.
생물학적 검정
ATR 키나제 억제제로서의 본 발명의 화합물의 효과를 측정하기 위해 하기 검정을 사용할 수 있다.
(a) 효소 검정 - ATR
생체외 효소 검정에서 사용하기 위한 ATR을 하기 완충제(25 mM HEPES(pH 7.4), 2 mM MgCl2, 250 mM NaCl, 0.5 mM EDTA, 0.1 mM Na3VO4, 10% v/v 글리세롤, 및 0.01% v/v Tween 20) 중에 포함된 ATR(Tibbetts RS et al, 1999, Genes Dev. 13:152-157)의 아미노산 400∼480으로 상승된 래빗 다중클론 항혈청에 의한 면역침강법에 의해 HeLa 핵 추출물(CIL Biotech, Mons, Belgium)로부터 얻는다. ATR 항체 복합체를 1 시간 동안 단백질 A-세파로오스 비드(Sigma, #P3476)에 의한 배양에 의해 그리고 이후 비드를 회수하기 위한 원심분리를 통해 핵 추출물로부터 분리한다. 96웰 플레이트의 웰 내에서, 10 ㎕의 ATR 함유 세파로오스 비드를 억제제의 존재 또는 부재에서 37℃에서 ATR 검정 완충제(50 mM HEPES(pH 7.4), 150 mM NaCl, 6 mM MgCl2, 4 mM MnCl2, 0.1 mM Na3VO4, 0.1 mM DTT, 및 10%(v/v) 글리세롤)에서 1 ㎍의 기질 글루타티온 S-트랜스퍼라제-p53N66(글루타티온 S-트랜스퍼라제에 융합된 p53의 NH2 말단 66개 아미노산은 이. 콜라이에서 발현됨)와 함께 항온처리한다. 온화한 진탕에 의한 10 분 후, ATP를 3 μM의 최종 농도로 첨가하고 반응을 37℃에서 추가 1 시간 동안 계속한다. 반응을 100 ㎕의 PBS의 첨가로 중단하고 반응물을 백색의 불투명 글루타티온 코팅 96웰 플레이트(NUNC #436033)로 옮기고 4℃에서 밤새 항온처리한다. 이 플레이트를 이후 PBS/0.05%(v/v) Tween 20으로 세척하고, 닦아내면서 건조하고, 포스포-세린 15 p53(16G78) 항체(Cell Signaling Technology, #9286)에 의해 표준 ELISA(효소-Linked ImmunoSorbent 검정) 기술로 분석한다. 인산화 글루타티온 S-트랜스퍼라제-p53N66 기질의 검출을 염소 항마우스 고추냉이 퍼옥시다제 접합 제2 항체(Pierce, #31430)와 조합하여 수행한다. 신호를 생성하기 위해 증강된 화학발광 용액(NEN, Boston, MA)을 사용하고 TopCount(Packard, Meriden, CT) 플레이트 판독기를 통해 화학발광 검출을 수행한다.
상기 화합물에 대한 IC50(효소 활성의 50%가 억제되는 농도로 취한 IC50) 값을 결정하기 위해 이후 생성된 계산된 효소 활성(%)(Activity Base, IDBS)을 사용한다.
(b) 세포 검정 - ATR
ATM 및 ATR은 DNA 손상에 대해 명확하고 중첩되는 반응을 갖는다. 이들은 함께 참여해야 하고 반응이 조직화되어야 한다. 경로 둘 다 전리 방사선에 의해 활성화될 수 있지만, ATR만이 UV에 의해 활성화된다. UV 치료가 고효율(high throughput) 세포 검정에서 사용하기에 실질적이지 않으므로, ATR DNA 손상 반응 경로를 활성화하기 위해 UV 모방 4NQ0(Sigma)을 선택한다.
ATR의 다운스트림 단백질 키나제인 Chk1은 DNA 손상 체크포인트 제어에서 중요한 역할을 한다. Chk1의 활성화는 (ATR에 의한 인산화/활성화에 대한 우선적 표적으로 생각되는) Ser317 및 Ser345의 인산화와 관련된다. 이 검정은 상기 화합물 및 UV 모방 4NQ0에 의한 치료 이후에 HT29 대장 선암종 세포에서의 Chk1(Ser 345)의 인산화의 감소를 측정한다. 100% DMSO 중에 희석하고 이후 추가로 Labcyte Echo Acoustic 분배 장치를 사용하여 검정 배지(EMEM, 10% FCS, 1% 글루타민)로 희석함으로써 상기 화합물 용량 범위를 생성한다. 세포를 40 ㎕ EMEM, 10% FCS, 1% 글루타민 중에 1 ㎖당 9×104개의 세포에서 384웰 Costar 플레이트 내에 플레이팅하고 24 시간 동안 성장시킨다. 상기 화합물의 첨가 이후에, 세포를 60 분 동안 항온처리한다. (100% DMSO 중에 제조된) 3 μM 4NQ0의 최종 농도를 이후 Labcyte Echo를 사용하여 첨가하고 세포를 추가로 60 분 동안 항온처리한다. 40 ㎕ 3.7% v/v 포름알데히드 용액을 20 분 동안 첨가함으로써 세포를 이후 고정한다. 고정의 제거 후, 세포를 PBS로 세척하고 0.1% TritonTM X-100을 포함하는 40 ㎕의 PBS 중에 투과화시킨다. 세포를 이후 세척하고 15 ㎕의 1차 항체 용액(pChk1 Ser345)을 첨가하고 플레이트를 4℃에서 밤새 항온처리한다. 1차 항체를 이후 세척하고, 20 ㎕의 2차 항체 용액(염소 항래빗 Alexa Fluor 488, Invitrogen) 및 1 μM Hoechst 33258(Invitrogen)을 실온에서 90 분 동안 첨가한다. 플레이트를 세척하고 40 ㎕의 PBS 중에 정치시킨다. 플레이트를 이후 ArrayScan Vti 장치에서 판독하여 염색 강도를 결정하고, 용량 반응을 얻고 이를 사용하여 상기 화합물에 대한 IC50 값을 결정한다.
(c) 세포 - SRB 검정
상기 화합물에 대한 상승작용 인자(PF50; potentiation factor)는 화학요법학적 물질이 ATR 억제제와 조합되어 사용될 때의 효과의 배수 증가의 측정치이다. 구체적으로, 화학요법학적 물질, 통상적으로 카보플라틴 및 관심 있는 ATR 억제제의 존재에서의 세포 성장의 IC50으로 상기 물질의 존재에서의 대조군 세포 성장의 IC50의 비율로서 이를 계산한다. 이 목적을 위해, HT29 세포를 80 ㎕의 용적으로 96웰 플레이트의 각각의 웰 내에서 검정의 시간에 걸쳐 지수 성장을 보장하기 위해 (통상적으로 1000∼1500개의 세포) 적절한 밀도로 시딩하고 37℃에서 밤새 항온처리한다. 이후, 상기 세포에 DMSO 비히클 중 어느 하나를 투여하거나, 고정된 농도(통상적으로 1, 0.3 및 0.1 μM)에서 시험 화합물에 의해 처리한다. 37℃에서 1 시간 항온처리 후, 상기 세포를 이의 공지된 감작성(카보플라틴에 대해 통상적으로 30∼0.001 ㎍/㎖)을 기준으로 화학요법학적 물질의 10 포인트 용량 반응으로 추가로 처리한다. 상기 세포를 정치시켜 37℃에서 5 일 동안 성장시키고, 이후 세포 성장을 설포로다민 B(SRB) 검정을 이용하여 검정한다(Skehan, P et al, 1990 New colorimetric cytotoxic assay for anticancer-drug screening. J. Natl. Cancer Inst. 82, 1107-1112.). 구체적으로, 배지를 제거하고 상기 세포를 100 ㎕의 얼음 냉각된 10%(w/v) 트리클로로아세트산으로 고정한다. 상기 플레이트를 이후 4℃에서 20 분 동안 항온처리한 후 물로 4회 세척한다. 각각의 웰을 이후 1% 아세트산 중의 100 ㎕의 0.4%(w/v) SRB로 20 분 동안 염색한 후 1% 아세트산으로 추가로 4회 염색한다. 상기 플레이트를 이후 실온에서 2 시간 동안 건조하고 100 ㎕의 트리스 염기(pH 8.5)를 각각의 웰로 첨가함으로써 염료를 가용화시킨다. 상기 플레이트를 진탕시킨 후 564 nm(OD564)에서의 광학 밀도를 측정한다. PF50을 계산하기 위해, 화학요법학적 물질의 용량 반응 곡선에 대해 얻은 OD564 값을 비히클만으로 처리된 세포로부터 얻은 값의 백분율로서 표현한다. 유사하게, ATR 억제제의 포함에 대한 대조군으로 작용하기 위해, 고정된 ATR 억제제 농도와 조합되어 시험되는 화학요법학적 물질로부터 얻은 값을 ATR 억제제만의 상응하는 농도로 처리된 세포로부터 얻은 값의 백분율로서 표현한다. 이러한 내부 제어 곡선으로부터, IC50 값을 계산하고 PF50을 상기 기재된 바대로 이 값의 비율로서 결정한다. 스스로 최소 성장 억제를 보이는 ATR 억제제의 농도에서 PF50 값을 사용하여 상기 화합물을 비교한다. IC50 값을 용량 반응, 4 매개변수 로지스틱 모델 #203을 사용하여 XLfit(IDBS, Surrey UK)에 의해 계산한다. 최대(max) 및 최소(min) 곡선 맞춤은 자유롭고 각각 100% 내지 0%로 고정되지 않는다.
하기 검정을 이용하여 mTOR 키나제 억제제로서의 본 발명의 화합물의 효과를 측정할 수 있다.
효소 - mTOR 키나제 검정( Echo )
재조합 mTOR에 의한 인산화를 억제하기 위한 시험 화합물의 능력을 결정하기 위해 검정은 AlphaScreen technology(Gray et al., Analytical Biochemistry, 2003, 313: 234-245)를 이용한다.
mTOR(EMBL 수탁 L34075호)의 아미노산 잔기 1362 내지 2549를 포함하는 mTOR의 C 말단 절두를 문헌[Vilella-Bach et al., Journal of Biochemistry, 1999, 274, 4266-4272]에 기재된 바대로 HEK293 세포에서 FLAG 태그 융합으로서 안정하게 발현시킨다. HEK293 FLAG 태그 mTOR(1362-2549) 안정한 세포주를 통상적으로 10% 열 불활성화 소 태아 혈청(FCS; Sigma, Poole, Dorset, UK, 카탈로그 F0392호), 1% L-글루타민(Gibco, 카탈로그 25030-024호) 및 2 ㎎/㎖ Geneticin(G418 설페이트; Invitrogen Limited, UK 카탈로그 10131-027호)을 포함하는 둘베코 변형 이글 성장 배지(DMEM; Invitrogen Limited, Paisley, UK 카탈로그 41966-029호) 중에 70-90%의 포화율(confluency)까지 5% CO2로 37℃에서 유지시킨다. 포유동물 HEK293 세포주 내에서의 발현 후, 표준 정제 기술을 이용하여 FLAG 항원결정부위를 사용하여 발현된 단백질을 정제한다.
시험 화합물을 DMSO 중의 10 mM 스톡 용액으로서 제조하고 필요한 바대로 DMSO 중에 희석하여 최종 검정 농도의 범위를 얻는다. 각각의 화합물 희석액의 액적(120 nl)을 Greiner 384웰 저용적(LV) 백색의 폴리스티렌 플레이트(Greiner Bio-one)의 웰로 Labcyte Echo 550을 사용하여 음향상으로 분배한다. 재조합 정제된 mTOR 효소, 2 mM 비오틴결합 펩티드 기질(Biotin-Ahx-Lys-Lys-Ala-Asn-Gln-Val-Phe-Leu-Gly-Phe-Thr-Tyr-Val-Ala-Pro-Ser-Val-Leu-Glu-Ser-Val-Lys-Glu-NH2; Bachem UK Ltd), ATP(20 mM) 및 [트리스-HCl (pH 7.4) 완충제(50 mM), EGTA(0.1 mM), 소 혈청 알부민(0.5 ㎎/㎖), DTT(1.25 mM) 및 염화망간(10 mM)을 포함하는] 완충제 용액의 12.12 ㎖ 혼합물을 실온에서 120 분 동안 항온처리한다.
시험 화합물 대신에 100% DMSO를 사용함으로써 최대 효소 활성에 상응하는 최대 신호를 생성하는 대조군 웰을 생성시킨다. LY294002(100 μM) 화합물을 첨가함으로써 완전 억제 효소에 상응하는 최소 신호를 생성하는 대조군 웰을 생성시킨다. 이 검정 용액을 실온에서 2 시간 항온처리한다.
p70 S6 키나제(T389) 1A5 단일클론 항체(Cell Signalling Technology, 카탈로그 9206B호) 및 AlphaScreen Streptavidin 도너를 포함하는 EDTA(150 mM), 소 혈청 알부민(BSA; 0.5 ㎎/㎖) 및 트리스-HCl (pH 7.4) 완충제(50 mM)의 5 ㎖의 혼합물을 첨가함으로써 각각의 반응을 중지시키고 단백질 A 억셉터 비드(각각 200 ng; Perkin Elmer, 카탈로그 6760617호)를 첨가하고 검정 플레이트를 암소에서 실온에서 밤새 정치시킨다. 680 nm에서의 레이저 광 여기로부터 생기는 생성된 신호를 Packard Envision 장치를 사용하여 판독한다.
인산화 비오틴결합 펩티드를 mTOR 매개 인산화의 결과로서 인시추로 형성한다. AlphaScreen Streptavidin 도너 비드와 관련된 인산화 비오틴결합 펩티드는 AlphaScreen 단백질 A 억셉터 비드와 관련된 p70 S6 키나제(T389) 1A5 단일클론 항체와 복합체를 형성한다. 680 nm에서의 레이저 광 여기시, 도너 비드:억셉터 비드 복합체는 측정될 수 있는 신호를 생성시킨다. 따라서, mTOR 키나제 활성의 존재는 검정 신호를 발생시킨다. mTOR 키나제 억제제의 존재시, 신호 강도가 감소한다. 소정의 시험 화합물에 대한 mTOR 효소 억제를 IC50 값으로서 표현한다.
세포 - 포스포 - Ser473 Akt 검정
이 검정은 레이저 주사에 의해 생성된 이미지의 특징을 신속히 정량화하는 데 사용될 수 있는 플레이트 판독기인 Acumen Explorer technology(Acumen Bioscience Limited)를 사용하여 평가할 수 있는 것처럼 Akt에서 세린 473의 인산화를 억제하는 시험 화합물의 능력을 결정한다.
MDA-MB-468 인간 유방 선암종 세포주(LGC Promochem, Teddington, Middlesex, UK, 카탈로그 HTB-132호)를 10% 열 불활성화 FCS 및 1% L-글루타민을 포함하는 DMEM 내에서 70∼90%의 포화 상태까지 5% CO2로 37℃에서 통상적으로 유지시킨다.
검정을 위해, 상기 세포를 표준 조직 배양 방법을 이용하여 "아큐타제(Accutase)"(Innovative Cell Technologies Inc., San Diego, CA, USA; 카탈로그 AT104호)를 사용하여 배양 플라스크로부터 분리하고 배지 중에 재현탁시켜 1 ㎖당 3.75×104개의 세포를 얻는다. 세포의 액적(40 ㎖)을 검정 384웰 플레이트(Greiner, 카탈로그 781091호)의 각각의 웰에 시딩하여 웰당 약 15000개의 세포의 밀도를 얻는다. 세포를 5% CO2로 37℃에서 밤새 항온처리하여 이들이 부착되게 한다.
2 일째에, 상기 세포를 시험 화합물로 처리하고 5% CO2로 37℃에서 2 시간 동안 항온처리한다. 시험 화합물을 DMSO 중의 10 mM 스톡 용액으로서 제조한다. 음파 분산 시스템(Labcyte Echo? Liquid Handling Systems(Labcyte Inc. 1190 Borregas Avenue, Sunnyvale, California 94089 USA)을 사용하여 화합물 투약을 수행한다. 최소 반응 대조군으로서, 각각의 플레이트는 100 mM LY294002(Calbiochem, Beeston, UK, 카탈로그 440202호)의 최종 농도를 갖는 웰을 포함한다. 최대 반응 대조군으로서, 웰은 시험 화합물 대신에 1% DMSO를 포함한다. 항온처리 후, 플레이트의 함량을 실온에서 1 시간 동안 1.6% 수성 포름알데히드 용액(Sigma, Poole, Dorset, UK, 카탈로그 F1635호)으로 처리하여 고정한다.
Tecan 플레이트 세척기(흡인 속도 10 mm/sec)를 사용하여 모든 후속 흡인 및 세척 단계를 수행한다. 고정 용액을 제거하고 플레이트의 내용물을 인산염 완충 식염수(PBS; 80 ㎖; Gibco, 카탈로그 10010015호)에 의해 세척한다. 플레이트의 내용물을 PBS 및 0.5% Tween-20의 혼합물로 이루어지는 세포 투과성 완충제의 액적(20 ㎖)으로 실온에서 10 분 동안 처리한다. '투과성' 완충제"를 제거하고 비특이 결합 자리를 PBS 및 0.05% Tween-20의 혼합물 중의 5% 건조된 탈지유['Marvel'(등록 상표); Premier Beverages, Stafford, GB]로 이루어지는 차단 완충제의 액적(20 ㎖)으로 실온에서 1 시간 동안 처리하여 차단한다. '차단' 완충제를 제거하고 상기 세포를 '차단' 완충제 중의 1:500 희석된 래빗 항 포스포-Akt(Ser473) 항체 용액(웰당 20 ㎖; Cell Signalling, Hitchin, Herts, U.K., 카탈로그 9277호)으로 실온에서 1 시간 동안 항온처리한다. 상기 세포를 PBS 및 0.05% Tween-20의 혼합물 중에 3회 세척한다. 후속하여, 상기 세포를 '차단' 완충제 중의 1:500 희석된 Alexafluor488 라벨링 염소 항-래빗 IgG(웰당 20 ㎖; Molecular Probes, Invitrogen Limited, Paisley, UK, 카탈로그 A11008호)로 실온에서 1 시간 동안 항온처리한다. 상기 세포를 PBS 및 0.05% Tween-20의 혼합물에 의해 3회 세척한다. PBS(50 ㎖)의 액적을 각각의 웰에 첨가하고 플레이트를 검정 플레이트 실러로 밀봉하고 형광 신호를 검출하고 분석한다.
각각의 화합물로 얻은 형광 용량 반응 데이터를 분석하고 Akt 중의 세린 473의 억제 정도를 IC50 값으로서 표현한다.
mTOR에 대해 감소된 활성을 보이는 화합물은 표적 효과를 개선할 수 있다.
화학식 (Ⅰ)의 화합물의 약물학적 특성이 예상되는 것과 같은 구조적인 변화에 의해 변할 수 있더라도, 일반적으로, 화학식 (Ⅰ)의 화합물이 보유한 활성이 하기 농도 또는 상기 시험 (a) 내지 (d) 중 하나 이상에서의 용량에서 입증될 수 있는 것으로 생각된다:
시험(a): 많은 화합물의 경우 10 μM 미만, 특히 0.001∼1 μM에서의 IC50 대 ATR 키나제
하기 실시예를 효소 검정 시험(a)에서 시험한다:
Figure pct00029
하기 실시예를 세포 검정 시험(b)에서 시험한다:
Figure pct00030
하기 실시예를 세포 SRB 검정 시험(c)에서 시험한다:
Figure pct00031
당해 분야에 공지된 기술에 의해 측정할 수 있고 치료학적 또는 예방학적 적용을 위한 화합물의 평가 또는 선택에서 사용될 수 있는 추가의 생물학적 또는 물리적 특성에 기초하여 추가로 화합물을 선택할 수 있다.
본 발명의 화합물은 약물학적 활성을 보유한다는 점에서 유리하다. 특히, 본 발명의 화합물은 ATR 키나제를 중재한다. 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 억제 특성은 본원에 제시된 시험 절차를 사용하여 그리고 실험 섹션에서 입증될 수 있다. 따라서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 ATR 키나제에 의해 중재되는 인간 및 비인간 동물에서의 병태/질환의 (치료학적 또는 예방학적) 치료에서 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 회합하여 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 조성물은 (예를 들면, 정제, 함당정제, 경질 또는 연질 캡슐, 수성 또는 유성 현탁액, 에멀션, 분산성 분말 또는 과립, 시럽 또는 엘릭시르제로서) 경구 용도를 위해, (예를 들면, 크림, 연고, 겔, 또는 수성 또는 유성 용액 또는 현탁액으로서) 국소 용도를 위해, (예를 들면, 미세하게 분쇄된 분말 또는 액체 에어로졸로서) 흡입에 의한 투여에 의해, (예를 들면, 미세하게 분쇄된 분말로서) 흡입법(insufflation)에 의한 투여를 위해 또는 (예를 들면, 정맥내, 피하, 복강내 또는 근육내 투약을 위한 무균 수성 또는 유성 용액으로서 또는 직장 투약을 위한 좌제로서) 비경구 투여를 위해 적합한 형태일 수 있다.
본 발명의 조성물을 당해 분야에 널리 공지된 종래의 약학 부형제를 사용하여 종래의 절차에 의해 얻을 수 있다. 따라서, 경구 용도에 의도된 조성물은, 예를 들면 하나 이상의 착색제, 감미료, 항료 및/또는 보존제를 포함할 수 있다.
단일 투약량을 생성하도록 하나 이상의 부형제와 배합되는 활성 성분의 양은 필연적으로 치료하고자 하는 숙주 및 특정한 투여 경로에 따라 변할 수 있다. 예를 들면, 인간에게 경구 투여하도록 의도되는 제제는 일반적으로, 예를 들면 1 ㎎ 내지 1 g의 활성 물질(더 적절하게는 1 내지 250 ㎎, 예를 들면 1 내지 100 ㎎)을 전체 조성물 중의 약 5 내지 약 98 중량% 범위일 수 있는 적절한 및 편리한 양의 부형제와 배합하여 포함할 수 있다.
화학식 (Ⅰ)의 화합물의 치료학적 또는 예방학적 목적을 위한 용량의 크기는 의약의 널리 공지된 원칙에 따라 질환 상태의 성질 및 중증도, 동물 또는 환자의 연령 및 성별 및 투여 경로에 따라 자연적으로 변할 수 있다.
치료학적 또는 예방학적 목적을 위한 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 사용시에, 분할 용량이 필요한 경우, 예를 들면 1 ㎎/㎏ 내지 100 ㎎/㎏ 체중 범위의 1일 용량을 받도록 일반적으로 투여한다. 일반적으로, 비경구 경로를 이용하는 경우 더 낮은 용량을 투여할 수 있다. 예를 들면, 정맥내 투여의 경우, 예를 들면 1 ㎎/㎏ 내지 25 ㎎/㎏ 체중 범위의 용량이 일반적으로 사용된다. 유사하게, 흡입에 의한 투여의 경우, 예를 들면 1 ㎎/㎏ 내지 25 ㎎/㎏ 체중 범위의 용량을 사용한다. 통상적으로, 단일 투약량 형태는 본 발명의 화합물을 약 10 ㎎ 내지 0.5 g 포함할 것이다.
본원에 언급된 바대로, ATR 키나제는 종양형성 및 다양한 다른 질환에서 역할을 갖는 것으로 공지되어 있다. 본 발명자들은 화학식 (Ⅰ)의 화합물이 ATR 키나제의 억제의 방식에 의해 얻어지는 것으로 생각되는 강력한 항종양 활성을 보유한다는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명의 화합물은 항종양 제제로서 중요하다. 특히, 본 발명의 화합물은 고체 및/또는 액체 종양 질환의 봉쇄 및/또는 치료에서 항증식제, 아폽토시스제 및/또는 항침습제로서 중요하다. 특히, 본 발명의 화합물은 ATR의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에 유용한 것으로 생각된다. 추가로, 본 발명의 화합물은 단독으로 또는 부분적으로 ATR에 의해 중재되는 종양의 예방 또는 치료에서 유용할 것으로 예상된다. 상기 화합물은 따라서 ATR 효소 억제 효과의 치료를 필요로 하는 온혈 동물에서 ATR 효소 억제 효과를 생성하기 위해 사용될 수 있다.
본원에 언급된 바대로, ATR 키나제의 억제제는 증식성 질환, 예컨대 암 및 특히 고체 종양, 예컨대 암종 및 육종 및 백혈병 및 임파구성 악성종양의 치료 및 특히, 예를 들면 유방암, 결장직장암, (소세포 폐암, 비소세포 폐암 및 기관지폐포암을 비롯한) 폐암 및 전립선암, 및 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암 및 외음부암, 및 [만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 임파구성 백혈병(ALL) 및 만성 골수성 백혈병(CML)을 비롯한] 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종의 치료에 치료학적으로 중요해야 한다.
환자에서의 암의 치료에서 따라서 유용한 함암 효과로는 항종양 효과, 반응 속도, 질환 진행에의 시간 및 생존율을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 본 발명의 치료 방법의 항종양 효과로는 종양 성장의 억제, 종양 성장 지연, 종양의 퇴행, 종양의 수축, 치료 중단시 종양의 재성장에 대한 시간 증가, 질환 진행의 속도 감소를 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 함암 효과는 예방학적 치료 및 기왕 질환의 치료를 포함한다.
ATR 키나제 억제제, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 또한 혈액학적 악성종양, 예컨대 백혈병, 다발성 골수종, 림프종, 예컨대 호치킨 질환, (맨틀 세포 림프종을 비롯한) 비호치킨 림프종, 및 골수이형성 증후군, 및 또한 고체 종양 및 이의 전이, 예컨대 유방암, 폐암(비소세포 폐암(NSCL), 소세포 폐암(SCLC), 편평 세포 암종), 자궁내막암, 중추 신경계의 종양, 예컨대 신경교종, 배아이형성 신경상피종, 다형성 교모세포종, 혼합 신경교종, 수모세포종, 망막아세포종, 신경아세포종, 배아세포종 및 기형종, 위장관의 암, 예컨대 위암, 식도암, 간세포 (간) 암종, 담관암, 대장 및 직장 암종, 소장의 암, 췌장암, 피부암, 예컨대 흑색종(특히 전이성 흑색종), 갑상선 암, (신세포 암종, 청정 세포 및 신호산성과립세포종을 비롯한) 두경부의 암 및 침샘, 전립선, 고환, 난소, 자궁경부, 자궁, 외음부, 방광, 신장의 암, 편평 세포 암종, 육종, 예컨대 골육종육종, 연골육종, 평활근육종, 연조직 육종, 유잉 육종, 위장관 기질 종양(GIST), 카포시 육종, 및 소아 암, 예컨대 횡문근육종육종 및 신경아세포종을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는 암을 앓고 있는 환자를 치료하는 데 유용할 수 있다.
본 발명의 화합물 및 ATR 키나제 억제제, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 투여 또는 사용을 포함하는 치료 방법은 폐암, 전립선암, 흑색종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 신장암, 위암, 육종, 두경부암, 중추 신경계의 종양 및 이의 전이를 앓고 있는 환자의 치료, 및 또한 급성 골수성 백혈병을 앓고 있는 환자의 치료에 특히 유용할 것을 기대된다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 약제로서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 항증식성 효과의 생성에서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 아폽토시스 효과의 생성에서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 봉쇄에서의 항침습제 및/또는 증식성 질환, 예컨대 암의 치료로서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 항증식성 효과의 생성에서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 항증식성 효과의 생성에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 아폽토시스 효과의 생성에서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 아폽토시스 생성에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 봉쇄에서의 항침습제 및/또는 증식성 질환, 예컨대 암의 치료로서 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 상기 동물에게 투여하는 것을 포함하는 항증식성 효과의 생성의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 항증식성 효과를 생성하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 상기 동물에게 투여하는 것을 포함하는 봉쇄에서의 항침습 효과의 생성 및/또는 고체 종양 질환의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 봉쇄에서의 항침습 효과를 생성하고/하거나 고체 종양 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 사람과 같은 온혈 동물에서 증식성 질환, 예컨대 암의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 유효량의 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 상기 동물에게 투여하는 것을 포함하는 증식성 질환, 예컨대 암의 예방 또는 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 증식성 질환, 예컨대 암을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 ATR 키나제의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 ATR 키나제의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 상기 동물에게 투여하는 것을 포함하는 ATR 키나제의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 ATR 키나제 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 상기 양태의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 ATR 키나제 억제 효과를 제공하는 데 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 또한 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 ATR 키나제 억제 효과를 제공하기 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 암, 염증 질환, 폐쇄성 기도 질환, 면역 질환 또는 심혈관 질환의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 고체 종양, 예컨대 암종 및 육종 및 백혈병 및 임파구성 악성종양의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유방암, 결장직장, (소세포 폐암, 비소세포 폐암 및 기관지폐포암을 비롯한) 폐암 및 전립선암의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암, 외음부암, (ALL, CLL 및 CML을 비롯한) 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 자궁내막암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암, 외음부암, (ALL, CLL 및 CML을 비롯한) 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 폐암, 전립선암, 흑색종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 신장암, 위암, 육종, 두경부암, 중추 신경계의 종양 및 이의 전이의 치료, 및 또한 급성 골수성 백혈병의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 암, 염증 질환, 폐쇄성 기도 질환, 면역 질환 또는 심혈관 질환의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 고체 종양, 예컨대 암종 및 육종 및 백혈병 및 임파구성 악성종양의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유방암, 결장직장암, (소세포 폐암, 비소세포 폐암 및 기관지폐포암을 비롯한) 폐암 및 전립선암의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암, 외음부암, (ALL, CLL 및 CML을 비롯한) 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 폐암, 전립선암, 흑색종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 신장암, 위암, 육종, 두경부암, 중추 신경계의 종양 및 이의 전이의 치료, 및 또한 급성 골수성 백혈병의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 암, 염증 질환, 폐쇄성 기도 질환, 면역 질환 또는 심혈관 질환의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 암, 염증 질환, 폐쇄성 기도 질환, 면역 질환 또는 심혈관 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 고체 종양, 예컨대 암종 및 육종 및 백혈병 및 임파구성 악성종양의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 고체 종양, 예컨대 암종 및 육종 및 백혈병 및 임파구성 악성종양을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 유방암, 결장직장암, (소세포 폐암, 비소세포 폐암 및 기관지폐포암을 비롯한) 폐암 및 전립선암의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 유방암, 결장직장암, (소세포 폐암, 비소세포 폐암 및 기관지폐포암을 비롯한) 폐암 및 전립선암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암, 외음부암, (ALL, CLL 및 CML을 비롯한) 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 담관암, 뼈암, 방광암, 두경부암, 신장암, 간암, 위장관 조직의 암, 식도암, 난소암, 췌장암, 피부암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 자궁경부암, 외음부암, (ALL, CLL 및 CML을 비롯한) 백혈병, 다발성 골수종 및 림프종을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명의 추가의 특징에 따르면, 본 발명은 유효량의 본원에 정의된 바와 같은 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는 폐암, 전립선암, 흑색종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 신장암, 위암, 육종, 두경부암, 중추 신경계의 종양 및 이의 전이 및 급성 골수성 백혈병의 치료를 필요로 하는 사람과 같은 온혈 동물에서 폐암, 전립선암, 흑색종, 난소암, 유방암, 자궁내막암, 신장암, 위암, 육종, 두경부암, 중추 신경계의 종양 및 이의 전이 및 급성 골수성 백혈병을 치료하는 방법을 제공한다.
본원에 언급된 바대로, 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 생체내 효과는 화학식 (Ⅰ)의 화합물의 투여 후 인간 또는 동물 신체 내에 형성된 하나 이상의 대사산물에 의해 부분적으로 발휘될 수 있다.
본 발명은 추가로 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 화학식 (Ⅰ)의 화합물을 포함하는 약학 조성물 또는 제제를 동시에 또는 연속하여 또는 종양학 질환의 제어에서의 사용의 또 다른 치료와의 복합 제제로서 투여될 수 있는 병용 치료에 관한 것이다.
특히, 본원에 정의된 치료는 단독 치료로서 적용될 수 있거나, 본 발명의 화합물 이외에, 종래의 수술 또는 방사선요법치료 또는 화학요법을 수반할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 또한 암의 치료를 위해 기존의 치료학적 물질과 병행하여 사용될 수 있다.
병용하여 사용되는 적합한 물질은 하기와 같다:
(ⅰ) 의학적 종양학에 사용되는 바와 같은 항증식성/항신생물 약물 및 이의 복합제, 예컨대 알킬화제(예를 들면, 시스플라틴, 카보플라틴, 시클로포스파미드, 질소 머스타드, 멜팔란, 클로람부실, 부설판 및 니트로소우레아); 항대사물질(예를 들면, 5-플루오로우라실 및 테가푸르와 같은 플루오로피리미딘, 랄티트렉세드, 메토트렉세이트, 시토신 아라비노시드, 히드록시우레아 및 겜시타빈과 같은 항엽산제); 항종양 항생제(예를 들면, 안트라사이클린, 예컨대 아드리아마이신, 블레오마이신, 독소루비신, 다우노마이신, 에피루비신, 이다루비신, 미토마이신-C, 닥티로마이신 및 미트라마이신); 항유사분열제(예를 들면, 빈카 알칼로이드, 예컨대 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신 및 비노렐빈 및 탁소이드, 예컨대 타클리탁셀 및 탁소테레); 및 토포이소머라제 억제제(예를 들면, 에피포도필로톡신, 예컨대 에토포시드 및 테니포시드, 암사크린, 토포테칸 및 캄프토테신);
(ⅱ) 세포 증식 억제제, 예컨대 항에스트로겐(예를 들면, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 드롤록시펜 및 요오독시펜), 에스트로겐 수용체 하향 조절제(예를 들면, fulvestrant), 항안드로겐(예를 들면, 비칼루타미드, 플루타미드, 닐루타미드 및 시프로테론 아세테이트), LHRH 길항제 또는 LHRH 작용제(예를 들면, 고세렐린, 류프로렐린 및 부세렐린), 프로게스토겐(예를 들면, 메게스트롤 아세테이트), 아로마타제 억제제(예를 들면, 아나스트로졸, 레트라졸, 보라졸 및 엑세메스탄), 및 5α-리덕타제 억제제, 예컨대 피나스테리드;
(ⅲ) 항침습제(예를 들면, c-Src 키나제 패밀리 억제제, 예컨대 4-(6-클로로-2,3-메틸렌디옥시아닐리노)-7-[2-(4-메틸피페라진-1-일)에톡시]-5-테트라하이드로피란-4-일옥시퀴나졸린(AZD0530; 국제 특허 출원 WO 제01/94341호) 및 N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-{6-[4-(2-히드록시에틸)피페라진-1-일]-2-메틸피리미딘-4-일아미노}티아졸-5-카르복스아미드(다사티닙, BMS-354825; J. Med. Chem., 2004, 47, 6658-6661) 및 보수티닙(SKI-606) 및 메탈로프로테이나제 억제제, 예컨대 마리마스타트 및 우로키나제 플라스미노겐 활성제 수용체 기능의 억제제);
(ⅳ) 성장 인자 작용 억제제:, 예를 들면 상기 억제제는 성장 인자 항체 및 성장 인자 수용체 항체(예를 들면, 항-erbB2 항체 트라스투주맙(trastuzumab)[Herceptin™] 및 항-erbB1 항체 세툭시맙(cetuximab)[C225])를 포함하며; 이러한 억제제는 또한, 예를 들면 티로신 키나제 억제제, 예를 들면 표피 성장 인자 패밀리의 억제제(예를 들면, EGFR 패밀리 티로신 키나제 억제제, 예컨대 N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴리노프로폭시)퀴나졸린-4-아민(게피티닙, ZD1839), N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민(에를로티닙, OSI-774) 및 6-아크릴아미도-N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(3-모르폴리노프로폭시)-퀴나졸린-4-아민(CI 1033) 및 erbB2 티로신 키나제 억제제, 예컨대 라파티닙); 간세포 성장 인자 패밀리의 억제제; 혈소판 유래 성장 인자 패밀리의 억제제, 예컨대 이마티닙; 세린/트레오닌 키나제의 억제제(예를 들면, Ras/Raf 신호전달 억제제, 예컨대 파르네실 트랜스퍼라제 억제제, 예를 들면 소라페닙(BAY 43-9006)) 및 MEK 및/또는 AKT 키나제를 통한 세포 신호전달의 억제제;
(ⅴ) 항혈관형성제, 예컨대 혈관 내피 성장 인자의 효과를 억제하는 것[예를 들면 항혈관 내피 세포 성장 인자 항체 베바시주맙(Avastin™) 및 VEGF 수용체 티로신 키나제 억제제, 예컨대 4-(4-브로모-2-플루오로아닐리노)-6-메톡시-7-(1-메틸피페리딘-4-일메톡시)퀴나졸린(ZD6474; WO 제01/32651호에서의 실시예 2), 4-(4-플루오로-2-메틸인돌-5-일옥시)-6-메톡시-7-(3-피롤리딘-1-일프로폭시)퀴나졸린(AZD2171; WO 제00/47212호에서의 실시예 240), 바탈라닙(PTK787; WO 제98/35985호) 및 SU11248(수니티닙; WO 제01/60814호), 및 다른 기전에 의하여 작용되는 화합물(예를 들면, 리노마이드, 인테그린 αvβ3 작용 및 혈관생성억제인자의 억제제)];
(ⅵ) 혈관 손상제, 예컨대 콤브레타스타틴 A4 및 국제 특허 출원 WO 제99/02166호, WO 제00/40529호, WO 제00/41669호, WO 제01/92224호, WO 제02/04434호 및 WO 제02/08213호에 개시된 화합물;
(ⅶ) 안티센스 요법, 예를 들면 상기 제시된 표적에 대한 것, 예컨대 ISIS 2503, 항-ras 안티센스;
(ⅷ) 비정상 유전자를 대체하는 접근법, 예컨대 비정상 p53 또는 비정상 BRCA1 또는 BRCA2, GDEPT(유전자 지향된 효소 프로드럭 요법) 접근법, 예컨대 시토신 데아미나제, 티미딘 키나제 또는 박테리아성 니트로리덕타제 효소를 사용한 것 및, 화학요법 또는 방사선요법에 대한 환자 내성을 증가시키기 위한 접근법, 예컨대 다중약물 내성 유전자 치료를 비롯한 유전자 치료 접근법; 및
(ⅸ) 환자 종양 세포의 면역원성을 증가시키기 위한 생체외 및 생체내 접근법, 예컨대 시토킨을 사용한 전달감염, 예컨대 인터류킨 2, 인터류킨 4 또는 과립구 대식구 집락 자극 인자, T 세포 무반응을 감소시키기 위한 접근법, 전달감염된 면역 세포, 예컨대 시토킨 전달감염된 수지상 세포를 사용한 접근법, 시토킨 전달감염된 종양 세포주를 사용한 접근법 및 항이디오타입 항체를 사용한 접근법을 비롯한 면역요법 접근법.
본 발명의 추가의 양태에 따르면, 본 발명은 암 치료와 병행하여 사용하기 위한 또는 전리 방사선 또는 화학요법제에 의한 치료를 위해 종양 세포를 강화하기 위한 약제의 제조에서의 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 암의 치료를 위해 전리 방사선 또는 화학요법제와 조합된 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
본 발명을 이제 하기 예시적인 실시예에 대한 참조로 추가로 설명한다.
달리 기재되지 않은 한, 출발 물질은 상업적으로 구입가능하다. 모든 용매 및 상업용 시약은 실험실 등급이고 승인받은 대로 사용하였다.
일반적인 실험
본 발명은 하기 실시예에 이제 예시하고 있다. 일반적으로,
(ⅰ) 반대의 의미로 명시하지 않는 한, 조작을 실온(RT), 즉 17 내지 25℃ 범위에서 불활성 가스, 예컨대 N2 또는 Ar의 분위기 하에 수행한다;
(ⅱ) 일반적으로, 반응의 과정에 일반적으로 질량 분광계(LCMS)에 커플링된 분석적 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 및/또는 박층 크로마토그래피(TLC)가 후행한다. 주어진 반응 시간은 반드시 최소로 얻을 수 있는 것이 아니다;
(ⅲ) 필요한 경우, 유기 용액을 무수 MgSO4 또는 Na2SO4, 상에서 건조하고, (xⅲ)에 기재된 바와 같이 SCX를 이용하여 또는 전이 상 분리 기술을 이용하여 후처리 절차를 수행하고, 진공에서 회전식 증발에 의해서 또는 지네박(Genevac) HT-4/EZ-2 또는 바이오타지(Biotage) V10에서 증발을 수행한다;
(ⅳ) 수율이 존재할 경우, 이는 반드시 최대로 얻을 수 있는 것은 아니고, 필요한 경우, 다량의 반응 생성물이 필요한 경우 반응을 반복한다;
(ⅴ) 일반적으로, 화학식 (Ⅰ)의 최종 생성물의 구조는 핵자기 공명(NMR) 및/또는 질량 스펙트럼 기술에 의하여 확인하며; 전기분사 질량 스펙트럼 데이터를 포지티브 이온 데이터 및 네가티브 이온 데이터 둘 다를 얻는 Waters ZMD 또는 Waters ZQ LC/질량 분광계를 사용하여 얻고, 일반적으로, 모 구조와 관련된 이온만을 기록한다; 양성자 NMR 화학 이동 값을 300 MHz의 장 강도에서 조작되는 Bruker DPX300 분광계, 400 MHz에서 조작되는 Bruker DRX400, 500 MHz에서 조작되는 Bruker DRX500 또는 700 MHz에서 조작되는 Bruker AV700을 사용하여 델타 스케일에서 측정한다. 달리 기재되지 않은 한, NMR 스펙트럼을 d6-디메틸설포시드 중의 400 MHz에서 얻었다. 하기 약어를 사용하였다: s, 일중항; d, 이중항; t, 삼중항; q, 사중항; m, 다중항; br, broad; qn, 오중항;
(ⅵ) 달리 기재되지 않은 한, 비대칭 탄소 및/또는 황 원자를 포함하는 화합물을 분리하지 않았다;
(ⅶ) 중간체가 반드시 완전히 정제되지 않지만 이의 구조는 완전히 정제되고, 순도를 TLC, 분석적 HPLC, 및/또는 NMR 분석 및/또는 질량 분광광도법에 의해 평가하였다;
(ⅷ) 달리 기재되지 않은 한, 이스코 콤비 플래시 컴패니온(Isco Combi Flash Companion) 시스템 또는 유사한 시스템을 사용하여 수동으로 또는 자동으로 Merck Kieselgel 실리카(Art. 9385) 상에서 또는 역상 실리카(Fluka 실리카 겔 90 C18) 상에서 또는 실리사이클(Silicycle) 카트리지(40∼63 ㎛ 실리카, 4 내지 330 g 중량) 상에서 또는 Grace resolv 카트리지(4∼120 g) 상에서 또는 RediSep Rf 1.5 Flash 칼럼 상에서 또는 RediSep Rf 고성능 Gold Flash 칼럼(150∼415 g 중량) 상에서 또는 RediSep Rf Gold C18 Reversed-phase 칼럼(20∼40 ㎛ 실리카) 상에서 플래시 칼럼 크로마토그래피(FCC; flash column chromatography)를 수행한다;
(ⅸ) 예를 들면, 용매 A로서 0.1∼5% 포름산 또는 1∼5% 수성 수산화암모늄(d=0.88) 및 용매 B로서 아세토니트릴 또는 MeOH:MeCN 3:1을 포함하는 용리제로서의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 C18 역상 실리카 상에서, 예를 들면 Waters 'Xterra' 또는 'XBridge' 분취용 역상 칼럼(5 ㎛ 실리카, 19 ㎜의 직경, 100 ㎜의 길이) 상에서 또는 Phenomenex "Gemini" 또는 'AXIA' 분취용 역상 칼럼(5 ㎛ 실리카, 110A, 21.1 ㎜의 직경, 100 ㎜의 길이) 상에서 분취용 역상 HPLC(RP HPLC)을 수행하고; 통상적인 절차는 하기와 같다: 각각 85:15(또는 적절한 바의 대안적인 비)의 용매 A 및 용매 B의 혼합물로부터 용매 A 및 용매 B의 5:95 혼합물로의 1 분당 25 ㎖에서의 9.5 분 동안의 용매 농도구배;
(ⅹ) 하기 분석적 HPLC 방법을 사용한다; 일반적으로, 역상 실리카를 약 1 ㎖/분의 유속으로 사용하고, 전기분사 질량 분광광도법에 의해 및 254 nm의 파장에서의 UV 흡광도에 의해 검출을 한다. 용리제로서의 점감적으로 극성인 혼합물, 예를 들면 용매 A로서의 (0.1% 포름산 또는 0.1% 암모니아를 포함하는) 물 및 용매 B로서의 아세토니트릴의 점감적으로 극성인 혼합물 또는 MeOH:MeCN 3:1을 사용하여 C18 역상 실리카 상에서, Phenomenex "Gemini" 분취용 역상 칼럼(5 ㎛ 실리카, 110 A, 2 ㎜의 직경, 50 ㎜의 길이) 상에서 분석적 HPLC를 수행한다. 통상적인 분석적 HPLC 방법은 하기와 같다: 각각 95:5의 용매 A 및 용매 B의 혼합물로부터 용매 A 및 용매 B의 5:95 혼합물로의 1 분당 대략 1 ㎖에서의 4 분 동안의 용매 농도구배;
(xi) 특정한 화합물을 산 부가염, 예를 들면 모노-하이드로클로라이드 염 또는 디-하이드로클로라이드 염으로서 얻는 경우, 염의 화학량론은 화합물 내의 염기성 기의 수 및 성질에 기초하고, 염의 정확한 화학량론은 일반적으로, 예를 들면 원소 분석 데이터에 의해 결정되지 않는다;
(xⅱ) 반응이 마이크로파의 사용을 의미하는 경우, 하기 마이크로파 반응기 중 하나를 사용한다: Biotage Initiator, Personal Chemistry Emrys Optimizer, Personal Chemistry Smithcreator 또는 CEM Explorer;
(xⅲ) Isolute SPE 플래시 SCX-2 또는 SCX-3 칼럼(International Sorbent Technology Limited, Mid Glamorgan, UK)을 사용하여 강한 양이온 교환(SCX) 크로마토그래피에 의해 화합물을 정제한다;
(xⅳ) 하기 분취용 키랄 HPLC 방법을 사용한다; 일반적으로 10∼350 ㎖/분의 유속 및 254 nm의 통상적인 파장에서 UV 흡광도를 검출한다. 0.5∼100 ㎖의 주입 용적 및 10∼150 분의 실행 시간 및 25∼35℃의 통상적인 오븐 온도로 이소헥산 또는 헵탄과 임의로 혼합된 적합한 용매 혼합물, 예컨대 MeOH, EtOH 또는 iPA 중에 약 1∼100 ㎎/㎖의 샘플 농도를 사용한다;
(xv) 하기 분석적 키랄 HPLC 방법을 사용한다; 일반적으로 1 ㎖/분의 유속 및 254 nm의 통상적인 파장에서 UV 흡광도를 검출한다. 약 10 ㎕의 주입 용적 및 10∼60 분의 실행 시간 및 25∼35℃의 통상적인 오븐 온도로 적합한 용매, 예컨대 EtOH 중에 약 1 ㎎/㎖의 샘플 농도를 사용한다;
(xⅵ) 하기 분취용 키랄 SFC(초임계 유체 크로마토그래피) 방법을 사용한다; 일반적으로 약 70 ㎖/분의 유속 및 검출 254 nm의 통상적인 파장에서 UV 흡광도를 검출한다. 약 0.5 ㎖의 주입 용적 및 10∼150 분의 실행 시간 및 25∼35℃의 통상적인 오븐 온도로 적합한 용매, 예컨대 MeOH 중에 약 100 ㎎/㎖의 샘플 농도를 사용한다;
(xⅷ) 일반적으로 실시예는 ACD Name 버젼 10.06을 사용하여 명명하고, 중간체 화합물은 CambridgeSoft에 의해 ChemDraw Ultra 11.0.2의 "Structure 내지 Name" 부분을 사용하여 명명한다;
상기 언급된 것 이외에, 하기 약어를 사용한다:
Figure pct00032
실시예 1.01
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 메틸 ]피리미딘-2-일}-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘
Figure pct00033
(R)-3-메틸-4-(6-((R)-S-메틸설폰이미도일메틸)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(98 ㎎, 0.18 mmol)을 MeOH(10 ㎖) 및 DCM(10 ㎖) 중에 용해시키고 50℃로 가열하였다. 그 후 수산화나트륨, 2 M 수용액(0.159 ㎖, 0.32 mmol)을 첨가하고 5 시간 동안 계속해서 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 DME:물:MeCN 2:1:1(4 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 Et2O(1 ㎖)로 미분하여 표제 화합물(34.6 ㎎, 49%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.40 (3H, d), 3.17 (3H, s), 3.39 (1H, tt), 3.62 (1H, td), 3.77 (1H, dd), 3.85 (1H, d), 4.08 (1H, dd), 4.18 (1H, d), 4.37 - 4.48 (2H, q), 4.51 (1H, s), 6.59 (1H, s), 7.35 (1H, t), 7.46 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.42 (1H, d), 10.16 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 387.19.
출발 물질로서 사용된 (R)-3-메틸-4-(6-((R)-S-메틸설폰이미도일메틸)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) (R)-3-메틸모르폴린(7.18 g, 71.01 mmol) 및 트리에틸아민(12.87 ㎖, 92.31 mmol)을 DCM(100 ㎖) 중의 메틸 2,4-디클로로피리미딘-6-카복실레이트(14.70 g, 71.01 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 물(100 ㎖)을 첨가하고, 층을 분리하고 DCM(3×75 ㎖)으로 추출하였다. 합한 유기물을 MgSO4 상에서 건조하고, 진공에서 농축시키고 잔류물을 Et2O로 미분하여 (R)-메틸 2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-카복실레이트(14.77 g, 77%)를 생성시켰다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.35 (3H, d), 3.34 (1H, td), 3.55 (1H, td), 3.70 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.97 (3H, s), 4.03 (1H, dd), 4.12 (1H, br s), 4.37 (1H, br s), 7.15 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 272.43.
리커를 실리카 상에서 농축시키고 이소헥산 중의 20 내지 40% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 합하고 증발시켜 (R)-메틸 2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-카복실레이트(1.659 g, 9%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.35 (3H, d), 3.33 (1H, td), 3.55 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.80 (1H, d), 3.97 (3H, s), 4.03 (1H, dd), 4.12 (1H, br s), 4.36 (1H, br s), 7.15 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 272.43.
(b) THF(18 ㎖, 36.00 mmol) 중의 2 M 리튬 보로하이드리드를 질소 하에 0℃에서 20 분의 기간 동안 THF(200 ㎖) 중의 (R)-메틸 2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-카복실레이트(16.28 g, 59.92 mmol)에 적하하였다. 생성된 용액을 0℃에서 30 분 동안 교반하고 그 후 RT로 가온하고 추가로 18 시간 동안 교반하였다. 물(200 ㎖)을 첨가하고 THF를 증발시켰다. 수성 층을 EtOAc(2×100 ㎖)로 추출하고 유기 상을 합하고, MgSO4 상에서 건조하고 그 후 증발시켜 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메탄올(14.54 g, 100%)을 얻었고, 이것을 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, d), 2.65 (1H, br s), 3.25 - 3.32 (1H, m), 3.51 - 3.57 (1H, m), 3.67 - 3.70 (1H, m), 3.78 (1H, d), 3.98 - 4.09 (2H, m), 4.32 (1H, br s), 4.59 (2H, s), 6.44 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 244.40.
(c) 메탄설포닐 클로라이드(4.62 ㎖, 59.67 mmol)를 25℃에서 5 분의 기간 동안 DCM(250 ㎖) 중의 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메탄올(14.54 g, 59.67 mmol) 및 트리에틸아민(8.32 ㎖, 59.67 mmol)에 적하하였다. 생성된 용액을 25℃에서 90 분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 물(100 ㎖)로 급냉시키고 DCM(2×100 ㎖)으로 추출하였다. 유기 상을 합하고, MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켜 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메틸 메탄설포네이트(20.14 g, 105%)을 얻었고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 3.13 (3H, s), 3.27 - 3.34 (1H, m), 3.51 - 3.57 (1H, m), 3.66 - 3.70 (1H, m), 3.79 (1H, d), 3.99 - 4.03 (2H, m), 4.34 (1H, br s), 5.09 (2H, d), 6.52 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 322.83.
대안적으로, 이 단계를 하기와 같이 수행할 수 있다:
Huber 360 가열기/냉각기가 부착된 3 ℓ 고정 반응 용기 내에서, 질소 분위기 하에, 트리에틸아민(0.120 L, 858.88 mmol)을 20℃(3℃ 발열 관찰)에서 DCM(7.5 vol)(1.2 L) 중의 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메탄올(161 g, 660.68 mmol)의 교반된 용액에 한꺼번에 첨가하였다. 상기 혼합물을 5℃로 냉각시키고 그 후 내부 온도가 15℃를 초과하도록 허용하지 않으면서 메탄설포닐 클로라이드(0.062 L, 792.81 mmol)를 15 분 동안 적하하였다. 상기 반응 혼합물을 15℃에서 2 시간 동안 교반하고 그 후 질소 분위기 하에 RT에서 밤새 (교반하지 않고) 유지시켰다. 물(1.6 L, 10 vol)을 첨가하고 수성 층을 분리하고 그 후 DCM(2×1.6 L, 2×10 vol)으로 추출하였다. 유기물을 합하고, 50% 염수/물(1.6 L, 10 vol)로 세척하고, 황산마그네슘 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켜 대략 2/3의 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메틸 메탄설포네이트와 1/3의 (R)-4-(2-클로로-6-(클로로메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(216 g)의 혼합물 얻었고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다.
(d) 요오드화리튬(17.57 g, 131.27 mmol)을 디옥산(300 ㎖) 중의 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메틸 메탄설포네이트(19.2 g, 59.67 mmol)에 첨가하고 질소 하에 2 시간 동안 100℃로 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물(200 ㎖)로 급냉시키고 EtOAc(3×200 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 합하고 2 M 아황산수소나트륨 용액(400 ㎖), 물(400 ㎖), 염수(400 ㎖)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 Et2O로 미분하여 (R)-4-(2-클로로-6-(요오도메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(13.89 g, 66%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, d), 3.28 (1H, td), 3.54 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 3.98 - 4.02 (2H, m), 4.21 (2H, s), 4.29 (1H, br s), 6.41 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+ 354.31.
모액을 농축시키고 Et2O로 미분하여 (R)-4-(2-클로로-6-(요오도메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(2.46 g, 12%)의 추가의 덩어리를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, d), 3.28 (1H, td), 3.54 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 3.98 - 4.02 (2H, m), 4.21 (2H, s), 4.30 (1H, s), 6.41 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 354.31.
대안적으로, 이 단계를 하기와 같이 수행할 수 있다:
(R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메틸 메탄설포네이트(80 g, 248.62 mmol) 및 요오드화리튬(83 g, 621.54 mmol)을 디옥산(300 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 107℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 물(250 ㎖)로 급냉시키고, EtOAc(3×250 ㎖)로 추출하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중에 용해시키고 Et2O를 첨가하고, 혼합물을 실리카(4 인치)를 통해 통과시키고 Et2O로 용리시켰다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 그 후 잔류물을 Et2O로 미분하여 고체를 얻었고, 이것을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 (R)-4-(2-클로로-6-(요오도메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(75 g, 86%)을 얻었다; m/z: (ESI+) MH+, 354.27.
(e) (R)-4-(2-클로로-6-(요오도메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(17.0 g, 48.08 mmol)을 DMF(150 ㎖) 중에 용해시키고, 여기에 나트륨 메탄티올레이트(3.37 g, 48.08 mmol)를 첨가하고 반응물을 25℃에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 물(50 ㎖)로 급냉시키고 그 후 Et2O(3×50 ㎖)로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 이소헥산 중의 50 내지 100% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(12.63 g, 96%)을 얻었다; m/z: (ES+) MH+, 274.35.
대안적으로, (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
3 ℓ 고정 용기 내에서, 나트륨 티오메톡시드(물 중의 21%)(216 g, 646.69 mmol)를 RT에서 5 분 동안 MeCN(1 L) 중의 대략 2/3의 (R)-(2-클로로-6-(3-메틸모르폴리노)피리미딘-4-일)메틸 메탄설포네이트와 1/3의 (R)-4-(2-클로로-6-(클로로메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(130.2 g, 431 mmol) 및 요오드화나트륨(1.762 ㎖, 43.11 mmol)의 혼합물의 교반된 용액에 적하하였다(온도는 첨가 동안 20℃로부터 18℃로 하강하고 그 후 다음 5 분 내에 30℃로 상승한다). 상기 반응 혼합물을 16 시간 동안 교반하고 그 후 EtOAc(2 L)로 희석시키고, 연속하여 물(750 ㎖) 및 포화 염수(1 L)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(108 g, 91%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.20 (3H, d), 2.07 (3H, s), 3.11 - 3.26 (1H, m), 3.44 (1H, td), 3.53 (2H, s), 3.59 (1H, dd), 3.71 (1H, d), 3.92 (1H, dd), 3.92 - 4.04 (1H, br s), 4.33 (1H, s), 6.77 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 274.36.
(f) (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(12.63 g, 46.13 mmol)을 DCM(100 ㎖) 중에 용해시키고, 여기에 mCPBA(7.96 g, 46.13 mmol)를 일 분획으로 첨가하고 반응 혼합물을 25℃에서 10 분 동안 교반하였다. mCPBA(0.180 g)의 추가의 분액을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 Na2CO3 용액(50 ㎖)으로 급냉시키고 DCM(3×50 ㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 Et2O(200 ㎖)를 포함하는 비커 및 실험실 필름으로 덮인 시스템에 위치한 150 ㎖ 원뿔 플라스크 내에서 DCM(80 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 3 일 동안 정치시켰다. 얻은 결정을 추출하고, 파쇄하고 Et2O로 음파처리하였다. 결정화 절차를 반복하여 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린을 백색의 침상(3.87 g, 29%)으로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 2.62 (3H, s), 3.30 (1H, td), 3.53 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.76 (2H, dd), 3.95 (1H, d), 4.00 (1H, dd), 4.02 (1H, s), 4.32 (1H, s), 6.42 (1H, s).
제1 증기 확산으로부터 남은 리커를 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린을 오렌지색의 검(5.70 g, 43%)으로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 2.62 (3H, d), 3.29 (1H, td), 3.54 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.73 - 3.82 (2H, m), 3.94 (1H, dd), 4.00 (2H, dd), 4.33 (1H, s), 6.42 (1H, s).
대안적으로, 이 단계를 하기와 같이 수행할 수 있다:
나트륨 메타-페리오데이트(64.7 g, 302.69 mmol)를 물(500 ㎖), EtOAc(1000 ㎖) 및 MeOH(500 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(82.87 g, 302.69 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 메타중아황산나트륨(50 g)을 첨가하고 상기 혼합물을 30 분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 부분적으로 증발시켜 MeOH를 제거하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 수성 층을 DCM(3×500 ㎖)으로 세척하였다. 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 합하고 DCM(400 ㎖) 중에 용해시키고 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM(400 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 4개의 450 ㎖ 병에 분할하였다. 알루미늄 호일 캡을 각각의 병의 상부에 위치시키고 각각의 캡에 수개의 구멍을 만들었다. 병을 Et2O(1000 ㎖)를 포함하는 큰 접시에 쌍으로 위치시키고, 그 후 덮고 제2 유리 접시로 밀봉하고 11 일 동안 정치시켰다. 생성된 백색의 침상을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하였다. 결정을 DCM(200 ㎖) 중에 용해시키고 450 ㎖ 병에 위치시켰다. 알루미늄 호일 캡을 병의 상부에 위치시키고 캡에 수개의 구멍을 만들었다. 병을 Et2O(1500 ㎖)를 포함하는 큰 접시에 위치시키고, 그 후 덮고 제2 유리 접시로 밀봉하고 6 일 동안 정치시켰다. 생성된 결정을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(16.53 g, 19%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 2.61 (3H, s), 3.29 (1H, td), 3.53 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.76 (2H, dd), 3.95 (1H, d), 3.99 (1H, dd), 4.02 (1H, s), 4.31 (1H, s), 6.41 (1H, s). Chiral HPLC: (HP1100 시스템 5, 헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AD-H (250 ㎜×4.6 ㎜)) Rf, 12.192 98.2%.
제1 증기 확산으로부터의 여액을 진공에서 농축시켜 (R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린과 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린의 대략 5:2 혼합물(54.7 g, 62%)을 얻었다.
대안적으로, 이 단계를 하기와 같이 수행할 수 있다:
나트륨 메타-페리오데이트(2.87 g, 13.44 mmol)를 물(10.00 ㎖), EtOAc(20 ㎖) 및 MeOH(10.00 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-(메틸티오메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(3.68 g, 13.44 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 생성된 용액을 20℃에서 16 시간 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 DCM(60 ㎖)으로 희석시키고 그 후 추출하였다. DCM 층을 분리하고 수성 층을 DCM(3×40 ㎖)으로 세척하였다. 유기물을 합하고, MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-(메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(2.72 g, 70%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.22 (3H, d), 2.64 (3H, d), 3.14 - 3.26 (1H, m), 3.45 (1H, td), 3.59 (1H, dd), 3.73 (1H, d), 3.88 - 3.96 (2H, m), 4.00 (1H, d), 4.07 (1H, dt), 4.33 (1H, s), 6.81 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 290.43.
(3R)-4-(2-클로로-6-(메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(2.7 g, 9.32 mmol)을 용리제로서의 이소헥산:EtOH:TEA의 50:50:0.1 혼합물로 등용매로 용리시키면서 Merck 100 ㎜ 20 ㎛ Chiralpak AD 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 (R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.38 g, 51%) 및 제2 용리 화합물로서의 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.27 g, 47 %)을 얻었다.
(R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.29 (3H, dd), 2.56 (3H, s), 3.15 - 3.33 (1H, m), 3.46 (1H, tt), 3.55 - 3.83 (3H, m), 3.85 - 4.06 (3H, m), 4.31 (1H, s), 6.37 (1H, s). Chiral HPLC: (HP1100 시스템 6, 이소헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AD(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 7.197 > 99%.
(R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.28 (3H, d), 2.58 (3H, s), 3.26 (1H, td), 3.48 (1H, td), 3.62 (1H, dt), 3.77 (2H, dd), 3.88 - 4.13 (3H, m), 4.28 (1H, s), 6.37 (1H, s). Chiral HPLC: (HP1100 시스템 6, 이소헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AD(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 16.897 > 99%.
(g) 요오도벤젠 디아세테이트(18.98 g, 58.94 mmol)를 공기 하에서 DCM(589 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(17.08 g, 58.94 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(13.33 g, 117.88 mmol), 산화마그네슘(9.50 g, 235.76 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.651 g, 1.47 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 추가로 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(13.33 g, 117.88 mmol), 산화마그네슘(9.50 g, 235.76 mmol), 요오도벤젠 디아세테이트(18.98 g, 58.94 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.651 g, 1.47 mmol)를 첨가하고 상기 현탁액을 20℃에서 3 일 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 실리카 겔(100 g)을 여액에 첨가하고 상기 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 분말을 이소헥산 중의 20% 내지 50% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-(R)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(19.39 g, 82%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.22 (3H, d), 3.17 - 3.27 (1H, m), 3.44 (1H, td), 3.59 (1H, dd), 3.62 (3H, s), 3.74 (1H, d), 3.95 (1H, dd), 4.04 (1H, br s), 4.28 (1H, s), 5.08 (2H, q), 6.96 (1H, s); m/z: (ESI+) MH+, 401.12 및 403.13.
(h) 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(8.10 ㎎, 0.01 mmol)을 RT에서 DME:물 4:1(5 ㎖) 중의 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-(R)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(185 ㎎, 0.46 mmol), 2 M 수성 Na2CO3 용액(0.277 ㎖, 0.55 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(193 ㎎, 0.48 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 90℃에서 1 시간 동안 교반하고, 추출하고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 (R)-3-메틸-4-(6-((R)-S-메틸설폰이미도일메틸)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(102 ㎎, 41%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 3.21 - 3.38 (1H, m), 3.42 (3H, d), 3.45 - 3.57 (1H, m), 3.61 - 3.70 (1H, m), 3.78 (1H, d), 4.01 (1H, dd), 3.90 - 4.15 (1H, br s), 4.30 (1H, s), 4.64 (1H, dd), 4.84 (1H, dd), 6.49 (1H, d); m/z: (ESI+) MH+, 541.35
출발 물질로서 사용된 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 3 ℓ 고정 용기에 3-클로로벤조퍼옥소산(324 g, 1444.67 mmol)을 질소 하에 20℃에서 1 시간의 기간 동안 DME(750 ㎖) 및 헵탄(1500 ㎖) 중의 1H-피롤로[2,3-b]피리딘(150 g, 1244.33 mmol)에 분획식으로 충전하였다. 생성된 슬러리를 20℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과에 의해 수집하고, DME/헵탄(1/2 5 vol)(750 ㎖)으로 세척하고 진공 하에 40℃에서 건조하여 크림색의 고체로서 1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드 3-클로로벤조에이트(353 g, 97%)를 얻었고, 이것을 추가로 정제하지 않고 사용하였다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.59 (1H, d), 7.07 (1H, dd), 7.45 (1H, d), 7.55 (1H, t), 7.65 (1H, dd), 7.70 (1H, ddd), 7.87 - 7.93 (2H, m), 8.13 (1H, d), 12.42 (1H, s), 13.32 (1H, s).
(b) 2 M 탄산칼륨 용액(910 ㎖, 1819.39 mmol)을 pH를 10으로 조정하면서 20℃에서 1 시간의 기간 동안 물(4.2 vol)(1481 ㎖) 중의 교반된 1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드 3-클로로벤조에이트(352.6 g, 1212.93 mmol)의 슬러리에 적하하였다. 생성된 슬러리에 20℃에서 1 시간 동안 교반된 물(2 vol)(705 ㎖)을 충전하였다. 슬러리를 1 시간 동안 0℃로 냉각시키고 슬러리를 추출하고, 고체를 물(3 vol 1050 ㎖)로 세척하고 진공 오븐 내에서 40℃에서 P2O5 상에서 밤새 건조하여 1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드(118 g, 73%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.58 (1H, d), 7.06 (1H, dd), 7.45 (1H, d), 7.64 (1H, d), 8.13 (1H, d), 12.44 (1H, s); m/z: (ES+)(MH+MeCN)+, 176.03.
(c) 질소 분위기 하에 3 ℓ 고정 용기에 메탄설폰산 무수물(363 g, 2042.71 mmol)을 질소 하에 30 분의 기간 동안 0℃로 냉각된 DMF(10 vol)(1370 ㎖) 중의 1H-피롤로[2,3-b]피리딘 7-옥시드(137 g, 1021.36 mmol), 및 테트라메틸암모늄 브로마이드(236 g, 1532.03 mmol)에 분획식으로 충전하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 물(20 vol, 2740 ㎖)로 급냉시키고 반응 혼합물을 50% 수산화나트륨(대략 200 ㎖)으로 pH 7로 조정하였다. 물(40 vol, 5480 ㎖)을 충전하고 상기 혼합물을 30 분 동안 10℃로 냉각시켰다. 고체를 추출하고, 물(20 vol, 2740 ㎖)로 세척하고 고체를 DCM/메탄올(4:1, 2000 ㎖) 중에 용해시키고, MgSO4 상에서 건조하고 증발시켜 연갈색의 고체를 얻었다. 고체를 뜨거운 메탄올(2000 ㎖) 중에 채우고 용액이 불투명해질 때까지 물을 적하하고 밤새 정치시켰다. 고체를 추출하고 버리고, 용액을 증발시키고 고체를 MeCN(4000 ㎖)으로부터 재결정하였다. 고체를 추출하고 MeCN으로 세척하여 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(68.4 g, 34%)을 핑크색의 고체로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.40 - 6.45 (1H, m), 7.33 (1H, d), 7.57 - 7.63 (1H, m), 8.09 (1H, t), 12.02 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 198.92. 미정제 모액을 용리제로서의 (26%에서 46%까지의 MeCN으로 시작하여) (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 Companion RF(역상 C18, 415 g 컬럼)로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(5.4 g, 3%)을 핑크색의 고체로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.43 (1H, dd), 7.33 (1H, d), 7.55 - 7.66 (1H, m), 8.09 (1H, d), 12.03 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 199.22.
(d) 수산화나트륨(31.4 ㎖, 188.35 mmol)을 RT에서 DCM(250 ㎖) 중의 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(10.03 g, 50.91 mmol), 토실 클로라이드(19.41 g, 101.81 mmol) 및 테트라부틸암모늄 수소설페이트(0.519 g, 1.53 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl의 첨가를 통해 급냉시키고, 유기 층을 제거하고 수성 층을 DCM(3×25 ㎖)으로 추가로 추출하였다. 합한 유기물을 염수(100 ㎖)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조하고 그 후 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 이소헥산 중의 0 내지 20% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 4-브로모-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(14.50 g, 81%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 2.38 (3H, s), 6.64 (1H, d), 7.28 (2H, d), 7.36 (1H, d), 7.78 (1H, d), 8.06 (2H, d), 8.22 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 353.23.
(e) 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센디클로로팔라듐(Ⅱ)(3.37 g, 4.13 mmol)을 RT에서 무수 DMF(300 ㎖) 중의 4-브로모-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(14.5 g, 41.28 mmol), 비스(피나콜라토)디붕산(20.97 g, 82.57 mmol) 및 아세트산칼륨(12.16 g, 123.85 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 생성된 혼합물을 질소 하에 90℃에서 24 시간 동안 교반하였다. RT로 냉각시킨 후, 수성 층이 pH 10이 될 때까지 1 N 수성 NaOH를 첨가하였다. 수성 층을 DCM(1 ℓ)으로 세척하고, 1 N 수성 HCl로 pH 4로 조심스럽게 산성화시키고, 그 후 DCM(3×300 ㎖)으로 추출하였다. 유기 층을 감압 하에 농축시켜 암갈색의 고체를 얻었다. 고체를 디에틸 에테르로 미분하고, 추출하고 건조하여 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(7.058 g, 43%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.36 (12H, s), 2.35 (3H, s), 7.01 (1H, d), 7.22 (2H, d), 7.52 (1H, d), 7.74 (1H, d), 8.03 (2H, m), 8.42 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 399.40. 모액을 진공에서 농축시키고 잔류물을 이소헥산 중에 미분하고, 추출하고 건조하여 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(3.173 g, 19%)의 추가로 샘플을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.36 (12H, s), 2.35 (3H, s), 7.01 (1H, d), 7.23 (2H, d), 7.52 (1H, d), 7.74 (1H, d), 8.03 (2H, d), 8.42 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 399.40.
실시예 2.01 및 실시예 2.02
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘 , 및
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 피롤로[2,3-b]피리딘
Figure pct00034
(3R)-3-메틸-4-(6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(1.67 g, 2.95 mmol)을 DME:물 4:1(60 ㎖) 중에 용해시키고 50℃로 가열하였다. 수산화나트륨, 2 M 수용액(2.58 ㎖, 5.16 mmol)을 그 후 첨가하고 18 시간 동안 계속해서 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 2 M HCl(약 2 ㎖)로 pH 5로 산성화시켰다. 상기 반응 혼합물을 증발 건조시키고 잔류물을 EtOAc(250 ㎖) 중에 용해시키고, 물(200 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 실리카 겔(10 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (TEA로 변경된) EtOH/MeOH(1:1) 중의 50% 이소헥산으로 등용매로 용리시키면서 Merck 50 ㎜, 20 ㎛ ChiralCel OJ 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발 건조시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(0.538g, 44%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.51 (3H, m), 1.70 - 1.82 (1H, m), 3.11 (3H, s), 3.28 (1H, m, 물 피크로 나타나지 않음), 3.48 - 3.60 (1H, m), 3.68 (1H, dd), 3.75 - 3.87 (2H, m), 4.02 (1H, dd), 4.19 (1H, d), 4.60 (1H, s), 7.01 (1H, s), 7.23 (1H, dd), 7.51 - 7.67 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.34 (1H, d), 11.76 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.12. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 9.013 > 99%. 결정을 성장시키고 EtOAc로부터 공기 중에서 느리게 증발시켜 건조하여 분리하였다. 이 결정을 사용하여 X-Ray 회절(하기 참조)에 의해 도 1에 도시된 구조를 얻었다. 실시예 2.02: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(326 ㎎, 0.79 mmol)을 DCM(3 ㎖) 중에 용해시켰다. 실리카 겔(0.5 g)을 첨가하고 상기 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시키고 잔류물을 EtOAc/n-헵탄으로부터 결정하여 백색의 결정 고체로서의 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(256 ㎎, 79%) 및 제2 용리 화합물로서의 표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(0.441 g, 36%)을 얻었다.
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.39 - 1.60 (3H, m), 1.71 - 1.81 (1H, m), 3.10 (3H, d), 3.21 - 3.29 (1H, m), 3.52 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.80 (2H, t), 4.01 (1H, dd), 4.19 (1H, d), 4.59 (1H, s), 7.01 (1H, s), 7.23 (1H, dd), 7.54 - 7.62 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.34 (1H, d), 11.75 (1H, s). DSC(Mettler-Toledo DSC 820, 구멍이 난 알루미늄 팬 내에서 30℃로부터 350℃로 분당 10℃의 가열 속도로 샘플을 실행하였다) 피크, 224.11℃.
표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.40 - 1.58 (3H, m), 1.70 - 1.80 (1H, m), 3.10 (3H, d), 3.23 - 3.27 (1H, m), 3.51 (1H, dt), 3.66 (1H, dd), 3.80 (2H, d), 4.01 (1H, dd), 4.21 (1H, d), 4.56 (1H, s), 6.99 (1H, s), 7.22 (1H, dd), 7.54 - 7.61 (1H, m), 7.94 (1H, d), 8.33 (1H, d), 11.75 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.12. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 15.685 > 99%. 실시예 2.01: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(66.5 ㎎)을 EtOH/물로부터 결정화로 정제하여 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(0.050 g)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.40 (3H, d), 1.59 (2H, s), 1.81 (2H, s), 2.41 (1H, s), 3.16 (3H, s), 3.39 (1H, td), 3.59 - 3.67 (1H, m), 3.77 (1H, dd), 3.86 (1H, d), 4.07 (1H, dd), 4.17 (1H, d), 4.54 (1H, s), 6.91 (1H, s), 7.34 (1H, t), 7.43 (1H, t), 8.05 (1H, d), 8.41 (1H, d), 9.14 (1H, s).
제1 용리된 화합물(도 1에 도시된 구조)로부터의 결정에서의 X- Ray 회절
결정 데이터
C20H24N6O2S
Mr = 412.52 V = 1026.4 (2) Å3
삼사정계, P1 Z = 2
a = 10.1755 (13)Å Mo Kα 방사선, λ = 0.71073Å
b = 10.4411 (13)Å μ = 0.19 ㎜-1
c = 11.2879 (14)Å T = 200 K
α = 95.528 (2)˚ 0.20×0.10×0.05 ㎜
β = 108.796 (2)˚
γ = 111.292 (2)˚
데이터 수집
Bruker APEX-II CCD 회절계 14550 독립적인 반사
Absorption correction: Multi-scan
I > 2σ(I)를 갖는 9935 반사
Tmin = 0.964, Tmax = 0.991 Rint = 0.024 18381 측정 반사
세분할
R[F2 > 2σ(F2)] = 0.056 구속된 H 원자 매개변수
wR(F2) = 0.147 Δmax = 0.31 e Å-3
S = 1.02 Δmin = -0.38 e
Å-3
14550 반사
절대 구조: Flack H D (1983), Acta Cryst.A39, 876-881
Flack parameter: 0.03 (5)
527 매개변수
3 구속
출발 물질로서 사용된 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 요오도벤젠 디아세테이트(6.54 g, 20.29 mmol)를 공기 하에서 DCM(169 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(5.88 g, 20.29 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(4.59 g, 40.58 mmol), 산화마그네슘(3.27 g, 81.16 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.224 g, 0.51 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 3 일 동안 교반하였다. 추가로 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.15 g, 10.15 mmol), 산화마그네슘(0.818 g, 20.29 mmol), 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.056 g, 0.13 mmol) 및 요오도벤젠 디아세테이트(1.64 g, 5.07 mmol)를 첨가하고 상기 현탁액을 RT에서 추가로 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 실리카 겔(3 g)을 여액에 첨가하고 그 후 혼합물을 증발시켰다. 생성된 분말을 이소헥산 중의 20% 내지 50% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 이소헥산/메틸 tert-부틸에테르로 미분하여 고체를 얻었고, 이것을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(6.64 g, 82%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 3.28 (1H, dd), 3.43 (3H, d), 3.46 - 3.59 (1H, m), 3.62 - 3.71 (1H, m), 3.79 (1H, d), 3.90 - 4.50 (2H, br s), 4.21 (1H, s), 4.66 (1H, dd), 4.86 (1H, dd), 6.50 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 401.01, 402.93.
(b) 수산화나트륨(Sigma-Aldrich 415413, d = 1.515 g/㎖, 50 ㎖ 50% 용액, 937.57 mmol)을 톨루엔(500 ㎖) 중의 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(5.2 g, 12.97 mmol), 1,2-디브로모에탄(4.47 ㎖, 51.90 mmol) 및 테트라부틸암모늄 수소설페이트(0.441 g, 1.30 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 24 시간 동안 교반하였다. 추가로 1,2-디브로모에탄(1.00 ㎖, 11.60 mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 RT에서 추가로 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc(500 ㎖)로 희석시키고, 물(750 ㎖) 및 포화 염수(100 ㎖)로 연속하여 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM(100 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.383 g, 32%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, d), 1.39 - 1.48 (2H, m), 1.69 - 1.77 (2H, m), 3.12 (3H, s), 3.22 - 3.36 (1H, m), 3.54 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 3.90 - 4.10 (1H, br s), 4.00 (1H, dd), 4.33 (1H, br s), 6.79 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 331.08, 333.00.
대안적으로, 이 단계를 하기와 같이 수행할 수 있다:
수산화나트륨(Sigma-Aldrich 415413, d = 1.515 g/㎖, 217 ㎖ 50% 용액, 4059.84 mmol)을 질소 하에 20℃에서 메틸 THF(1000 ㎖) 중의 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(27.12 g, 67.66 mmol), 1,2-디브로모에탄(23.32 ㎖, 270.66 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(3.70 g, 6.77 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 추가로 1,2-디브로모에탄(23.32 ㎖, 270.66 mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 20℃에서 추가로 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 메틸 THF(1000 ㎖)로 희석시키고 수성 층을 분리하였다. 유기 층을 추가로 EtOAc(1000 ㎖)로 희석시키고 물(1500 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(14.80 g, 66%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.21 (3H, d), 1.39 (3H, m), 1.62 - 1.71 (1H, m), 3.01 (3H, s), 3.43 (1H, tt), 3.58 (1H, dd), 3.72 (1H, d), 3.82 (1H, d), 3.93 (1H, dd), 4.01 (1H, s), 4.38 (1H, s), 6.96 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 331.46 및 333.43.
(d) 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(0.073 g, 0.10 mmol)을 질소 하에 DME:물 4:1(100 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.383 g, 4.18 mmol), 2 M 수성 탄산나트륨 용액(2.508 ㎖, 5.02 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(1.665 g, 4.18 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고 EtOAc(400 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(300 ㎖) 및 포화 염수(75 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 실리카 겔(30 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(2.174 g, 92%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.37 (3H, d), 1.56 (2H, m), 1.83 (2H, q), 2.37 (4H, s), 3.16 (3H, s), 3.36 (1H, td), 3.60 (1H, td), 3.74 (1H, dd), 3.85 (1H, d), 4.01 - 4.19 (2H, m), 4.49 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.28 (2H, d, CDCL3 피크로 나타나지 않음), 7.44 (1H, t), 7.82 (1H, d), 8.02 - 8.11 (3H, m), 8.52 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 567.11.
대안적으로, 실시예 2.01 및 실시예 2.02를 하기와 같이 제조할 수 있다:
수산화나트륨, 2 M 수용액(9.95 ㎖, 19.90 mmol)을 DME(100 ㎖)/물(25.00 ㎖) 중의 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(6.44 g, 11.37 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 추가로 NaOH, 2 M 수용액(18 ㎖, 36.00 mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 50℃에서 추가로 3 일 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 pH 5로 2 M HCl(약 22 ㎖)로 산성화시켰다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 DCM(250 ㎖) 중에 용해시키고 물(200 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 대략 50 ㎖ 용적으로 증발시켰다. 용액을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(2.440 g, 52%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, d), 1.42 (1H, dd), 1.47 - 1.58 (2H, m), 1.68 - 1.80 (1H, m), 3.10 (3H, s), 3.24 - 3.31 (1H, m), 3.51 (1H, t), 3.66 (1H, dd), 3.80 (1H, d), 3.83 - 3.88 (1H, m), 4.00 (1H, dd), 4.20 (1H, s), 4.57 (1H, s), 6.99 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.53 - 7.63 (1H, m), 7.94 (1H, d), 8.34 (1H, t), 11.80 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.47.
별도 실험에서, NaOH, 2 M 수용액(7.60 ㎖, 15.19 mmol)을 DME(100 ㎖)/물(25.00 ㎖) 중의 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(4.92 g, 8.68 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 pH 5로 2 M HCl(약 5 ㎖)로 산성화시켰다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 DCM(250 ㎖) 중에 용해시키고 물(200 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 대략 50 ㎖ 용적으로 증발시켰다. 생성된 용액을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(2.160 g, 60%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.41 - 1.59 (3H, m), 1.76 (1H, dt), 3.10 (3H, d), 3.31 (1H, d), 3.52 (1H, t), 3.67 (1H, dd), 3.80 (2H, d), 4.01 (1H, dd), 4.21 (1H, d), 4.58 (1H, s), 7.00 (1H, d), 7.22 (1H, dd), 7.54 - 7.63 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.33 (1H, d), 11.75 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.19.
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘의 2개의 샘플을 합하고(4.56 g, 11.05 mmol), 용리제로서의 (TEA로 변경된) EtOH/MeOH(1:1) 중의 50% 이소헥산으로 등용매로 용리시키면서 Merck 100mm ChiralCel OJ 컬럼(1550g) 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 제1 용리 화합물을 포함하는 분획을 합하고, 증발시켰다. 잔류물을 DCM(50 ㎖) 중에 용해시키고 실리카(20 g) 상에서 진공에서 농축시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(1.789 g, 39%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, d), 1.43 (1H, dd), 1.46 - 1.58 (2H, m), 1.69 - 1.77 (1H, m), 3.10 (3H, s), 3.27 (1H, td), 3.51 (1H, td), 3.66 (1H, dd), 3.80 (1H, d), 3.85 (1H, s), 4.01 (1H, dd), 4.19 (1H, d), 4.59 (1H, s), 6.99 (1H, s), 7.22 (1H, dd), 7.54 - 7.63 (1H, m), 7.94 (1H, d), 8.33 (1H, d), 11.80 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.50. Chiral HPLC: (Kronlab prep 시스템, 헥산/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 9.684 99.4%.
제2 용리 화합물을 포함하는 분획을 합하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM(50 ㎖) 중에 용해시키고 실리카 겔(20 g) 상에서 진공에서 농축시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카[AP-실리카/알루미나] 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(2.85 g, 62%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, d), 1.38 - 1.46 (1H, dd), 1.51 (2H, m), 1.72 - 1.81 (1H, m), 3.10 (3H, s), 3.26 (1H, td), 3.51 (1H, td), 3.66 (1H, dd), 3.80 (1H, d), 3.84 (1H, s), 3.94 - 4.04 (1H, dd), 4.21 (1H, d), 4.56 (1H, s), 6.99 (1H, s), 7.22 (1H, dd), 7.53 - 7.63 (1H, m), 7.94 (1H, d), 8.33 (1H, d), 11.80 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.53. Chiral HPLC: (Kronlab prep 시스템, 헥산/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 18.287 99.3%.
실시예 2.02를 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(2.59 ㎎, 3.69 μμmol)을 RT에서 DME:물 4:1(5 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(63 ㎎, 0.15 mmol), 2 M 수성 Na2CO3 용액(0.089 ㎖, 0.18 mmol) 및 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(58.8 ㎎, 0.15 mmol)에 일 분획으로 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 90℃에서 4 시간 동안 교반하였다. 수산화나트륨, 2 M 수용액(0.131 ㎖, 0.26 mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 50℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 pH 7로 2 M HCl로 산성화시켰다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 이소헥산 및 Et2O로 미분하여 고체를 얻었고, 이것을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 표제 화합물(44.0 ㎎, 71%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.40 - 1.61 (3H, m), 1.70 - 1.81 (1H, m), 3.10 (3H, d), 3.53 (1H, dd), 3.68 (1H, dd), 3.77 - 3.87 (2H, m), 4.02 (1H, dd), 4.19 (1H, d), 4.58 (1H, s), 7.01 (1H, d), 7.23 (1H, dd), 7.55 - 7.61 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.34 (1H, d), 11.75 (1H, s).; m/z: (ES+) MH+, 413.19. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 9.023 88.0%, 15.796 12.0%.
출발 물질로서 사용된 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
수산화나트륨(Sigma-Aldrich 415413, d = 1.515 g/㎖, 155 ㎖ 50% 용액, 2902.66 mmol)을 질소 하에 20℃에서 메틸 THF(1000 ㎖) 중의 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-(R)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(19.39 g, 48.38 mmol), 1,2-디브로모에탄(16.68 ㎖, 193.51 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(2.65 g, 4.84 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 메틸 THF(1000 ㎖)로 희석시키고 수성 층을 분리하였다. 유기 층을 추가로 EtOAc(1000 ㎖)로 희석시키고 그 후 물(1500 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(6.88 g, 43%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, d), 1.43 (2H, q), 1.72 (2H, q), 2.35 (1H, s), 3.09 (3H, s), 3.29 (1H, td), 3.53 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 4.00 (2H, dd), 4.32 (1H, s), 6.79 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 331.18 및 333.15.
실시예 2.02를 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
2 M NaOH 용액(14.86 ㎖, 29.72 mmol)을 DME:물 4:1(134 ㎖) 중의 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(8.42 g, 14.86 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 RT에서 4 일 동안 교반하였다. 별도 실험에서, 2 M NaOH 용액(7.06 ㎖, 14.12 mmol)을 DME:물 4:1(63.5 ㎖) 중의 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(4 g, 7.06 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 2 절차로부터 얻은 반응 혼합물을 합하고 그 후 2 M HCl로 중화시켰다. 상기 혼합물을 역상 실리카 겔(40 g) 상에서 증발시키고 생성된 분말을 1% 암모니아와 함께 물 중의 20% 내지 60% ACN의 농도구배로 용리시키면서 역상 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 표제 화합물(7.05 g, 78 %)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, t), 1.39 - 1.6 (3H, m), 1.7 - 1.8 (1H, m), 3.10 (3H, s), 3.26 (1H, d), 3.52 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.80 (2H, t), 3.97 - 4.02 (1H, m), 4.19 (1H, d), 4.59 (1H, s), 7.00 (1H, s), 7.22 (1H, dd), 7.53 - 7.61 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.33 (1H, d), 11.75 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.08.
출발 물질로서 사용된 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) DME(212 ㎖) 중의 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(21.15 g, 53.11 mmol)의 용액을 DME:물 4:1(55 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(12.55 g, 37.93 mmol)의 용액에 첨가하였다. 2 M 수성 탄산나트륨 용액(22.76 ㎖, 45.52 mmol) 및 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(0.666 g, 0.95 mmol)을 첨가하였다. 생성된 용액을 질소 하에 90℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc(400 ㎖)로 희석시키고, 물(400 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM(100 ㎖) 중에 용해시키고 일 분획을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(8.42 g, 39 %)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.36 (3H, d), 1.52 (2H, dd), 1.80 (2H, dd), 2.24 - 2.46 (3H, s), 3.10 (3H, s), 3.36 (1H, td), 3.60 (1H, td), 3.74 (1H, dd), 3.84 (1H, d), 3.99 - 4.18 (2H, m), 4.47 (1H, s), 6.91 (1H, s), 7.23 - 7.3 (3H, m, CDCl3이 나타나지 않음), 7.45 (1H, d), 7.81 (1H, d), 8.08 (3H, dd), 8.51 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 567.4.
재료의 나머지를 증발시키고 잔류물을 DCM(500 ㎖) 중에 용해시키고 실리카(100 g) 상에서 진공에서 농축시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(4.00 g, 19 %)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.19 - 1.31 (3H, m), 1.37 - 1.58 (3H, m), 1.75 (1H, ddd), 2.34 (3H, s), 3.04 (3H, d), 3.2 - 3.27 (1H, m), 3.46 - 3.54 (1H, m), 3.65 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 3.82 (1H, s), 3.99 (1H, dd), 4.16 (1H, d), 4.54 (1H, s), 7.04 (1H, s), 7.42 (2H, d), 7.54 (1H, d), 8.01 (3H, dd), 8.10 (1H, d), 8.49 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 567.00.
실시예 2.02를 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
2 M NaOH 용액(0.2 ㎖, 0.40 mmol)을 DME:물 4:1(4 ㎖) 중의 (3R)-3-메틸-4-(6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)-2-(1-토실-1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일)피리미딘-4-일)모르폴린(0.107 g, 0.19 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 50℃에서 18 시간 동안 교반하고 그 후 추가로 2 M NaOH 용액(0.2 ㎖, 0.40 mmol)을 첨가하고 용액을 50℃에서 3 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 증발 건조시키고 잔류물을 DCM(10 ㎖) 중에 용해시키고, 그 후 물(10 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 용리제로서의 (0.1% 포름산을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC(Waters SunFire 컬럼, 5 실리카, 19 ㎜ 직경, 100 ㎜ 길이)로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발 건조시켜 표제 화합물(0.026 g, 30%)을 포름산염으로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.38 - 1.47 (1H, m), 1.47 - 1.57 (2H, m), 1.75 (1H, dd), 3.11 (1H, s), 3.28 (1H, dd), 3.52 (1H, dd), 3.67 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.98 - 4.04 (1H, m), 4.18 (1H, s), 4.58 (1H, s), 7.00 (1H, s), 7.22 (1H, d), 7.59 (1H, d), 7.95 (1H, d), 8.34 (1H, d), 8.41 (3H, s), 11.83 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.11.
실시예 2.02를 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(0.061 g, 0.09 mmol)을 질소 하에 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.15 g, 3.48 mmol), 2 M 탄산나트륨 용액(6.95 ㎖, 13.90 mmol) 및 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일보론산(1.877 g, 3.48 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 85℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc(200 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(200 ㎖) 및 포화 염수(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 실리카 겔(10 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물(0.660 g, 46%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.39 (3H, d), 1.53 - 1.61 (2H, m), 1.78 - 1.84 (2H, m), 2.43 (1H, s), 3.16 (3H, s), 3.39 (1H, td), 3.63 (1H, td), 3.77 (1H, dd), 3.86 (1H, d), 4.07 (1H, dd), 4.17 (1H, d), 4.53 (1H, s), 6.92 (1H, s), 7.34 (1H, dd), 7.41 - 7.47 (1H, m), 8.06 (1H, d), 8.43 (1H, d), 9.60 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.12. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/EtOH/MeOH/TEA 50/25/25/0.1로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 8.113 98.9%.
출발 물질로서 사용된 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일보론산을 하기와 같이 제조할 수 있다:
THF(10 ㎖) 중의 4-브로모-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(0.944 g, 4.79 mmol)을 질소 하에 20℃에서 THF(10 ㎖) 중의 수소화나트륨(0.240 g, 5.99 mmol)에 적하하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 10 분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 -78℃로 냉각시키고 헥산 중의 n-부틸리튬(2.396 ㎖, 5.99 mmol)을 10 분 동안 적하하고 -78℃에서 10 분 동안 교반하였다. 트리이소프로필 보레이트(3.32 ㎖, 14.37 mmol)를 2 분 동안 적하하고 반응 혼합물을 1.5 시간 동안 RT로 가온하였다. 상기 반응 혼합물을 물(10 ㎖)로 급냉시키고 C18 실리카 겔(10 g)을 첨가하고 상기 혼합물을 진공에서 농축시켰다. 생성된 고체를 물 중의 5 내지 40% 아세토니트릴의 농도구배로 용리시키면서 역상 플래시 실리카 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 1H-피롤로[2,3-b]피리딘-4-일보론산(0.590 g, 76 %)을 얻었다; m/z: (ES+) MH+, 162.88.
실시예 2.02를 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘(대략 10 g, 25 mmol)을 MTBE(500 ㎖) 중에 현탁시키고 환류에서 2 시간 동안 교반하였다. 현탁액을 천천히 냉각시키고 RT에서 밤새 교반하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 표제 화합물(7.12 g)을 백색의 결정 고체로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.44 (1H, dd), 1.47 - 1.58 (2H, m), 1.76 (1H, dt), 3.11 (3H, s), 3.26 (1H, dd), 3.52 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.85 (1H, d), 4.02 (1H, dd), 4.20 (1H, d), 4.59 (1H, s), 7.00 (1H, s), 7.23 (1H, dd), 7.57 - 7.62 (1H, m), 7.95 (1H, d), 8.34 (1H, d), 11.81 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.12. Mpt.(Buchi Melting Point B-545) 222℃. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 7, 헵탄/(EtOH/MeOH 50/50)/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 9.836 99.8%.
실시예 2.03 및 실시예 2.04
N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 )시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H-벤 즈이미다 졸-2-아민
Figure pct00035
탄산세슘(942 ㎎, 2.89 mmol)을 DMA(10 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(319 ㎎, 0.96 mmol) 및 N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(284 ㎎, 1.93 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 45 시간 동안 교반하였다. N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(284 ㎎, 1.93 mmol), 탄산세슘(942 ㎎, 2.89 mmol) 및 나트륨 메탄설피네이트(98 ㎎, 0.96 mmol)의 추가의 분획을 첨가하고 상기 현탁액을 80℃에서 70 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc(250 ㎖) 중에 용해시키고, 연속하여 물(250 ㎖) 및 포화 염수(75 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 실리카 겔(5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (Et3N으로 변경된) IPA 중의 70% 이소헥산으로 등용매로 용리시키면서 Merck 50 ㎜, 20 ㎛ Chiralpak AS 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(166 ㎎, 39%) 및 제2 용리 화합물로서의 표제 화합물: N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(123 ㎎, 29%)을 얻었다.
표제 화합물: N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.47 (2H, dq), 1.55 - 1.66 (1H, m), 1.69 - 1.89 (1H, m), 3.01 (3H, s), 3.04 (3H, d), 3.30 - 3.39 (1H, m), 3.52 (1H, td), 3.66 (1H, dd), 3.80 (1H, d), 3.95 (1H, s), 4.01 (1H, dd), 4.09 (1H, d), 4.51 (1H, s), 6.77 (1H, s), 6.97 (1H, t), 7.08 (1H, t), 7.25 (1H, d), 8.08 (1H, d), 8.67 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 442.09. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 12.219 > 99%.
표제 화합물: N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.33 (3H, t), 1.45 - 1.61 (2H, m), 1.61 - 1.68 (1H, m), 1.80 - 1.89 (1H, m), 3.07 (3H, s), 3.09 (3H, d), 3.39 (1H, dd), 3.58 (1H, td), 3.72 (1H, dd), 3.86 (1H, d), 4.01 (1H, s), 4.06 (1H, dd), 4.15 (1H, d), 4.55 (1H, s), 6.82 (1H, s), 7.03 (1H, t), 7.14 (1H, t), 7.31 (1H, d), 8.14 (1H, d), 8.73 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 442.09. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 25.093 > 99%.
실시예 2.03을 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
(3R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(179 ㎎, 0.54 mmol), N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(159 ㎎, 1.08 mmol) 및 탄산세슘(529 ㎎, 1.62 mmol)을 DMA(2 ㎖) 중에 현탁시키고 마이크로파 관에 밀봉하였다. 상기 반응 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 90 분 동안 80℃로 가열하고 그 후 RT로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 고체(55.0 ㎎)를 얻었다. 추가의 절차에서: (R)-4-(2-클로로-6-(1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(89 ㎎, 0.27 mmol), N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(79 ㎎, 0.54 mmol) 및 탄산세슘(263 ㎎, 0.81 mmol)을 DMA(2 ㎖) 중에 현탁시키고 마이크로파 관에 밀봉하였다. 상기 반응 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 5 시간 동안 80℃로 가열하고 그 후 RT로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물을 추출하고, 이전 절차로부터 얻은 고체와 합하고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (0.1% 포름산을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 다시 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 표제 화합물(38.4 ㎎, 32%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.52 (3H, m), 1.72 - 1.86 (1H, m), 3.02 (3H, s), 3.03 (3H, d), 3.26 - 3.33 (1H, m), 3.52 (1H, t), 3.66 (1H, d), 3.80 (1H, d), 4.01 (2H, m), 4.12 (1H, s, 메탄올 피크가 나타나지 않음), 4.51 (1H, s), 6.77 (1H, s), 6.98 (1H, t), 7.09 (1H, t), 7.25 (1H, d), 8.08 (1H, d), 8.71 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 442.16. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 이소헥산/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 11.984 97.9%.
출발 물질로서 사용된 N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민을 하기와 같이 제조할 수 있다:
2-클로로-1H-벤조[d]이미다졸(20 g, 131.08 mmol)을 메틸아민(260 ㎖, 131.08 mmol)과 고압 오토클레이브 PV10832(Hastelloy 450 ㎖)에 충전하고 이의 트롤리 상에서 밀봉하고 생성된 용액을 고압 블라스트 셀 60 내에서 16 시간 동안 160℃로 가열하였다. 오토클레이브 내의 압력이 11 bar에 도달하였다. 상기 용매를 감압 하에 제거하여 갈색의 오일을 얻었다. EtOH를 첨가하고 상기 용매를 다시 제거하여 갈색의 발포체를 얻었다. 발포체를 최소의 뜨거운 아세톤 중에 용해시켰다. 이것을 그 후 냉각시켰다. 생성된 고체를 추출하여 N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(9.91 g, 51%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.83 (3H, s), 6.87 - 7.00 (2H, m), 7.05 - 7.25 (2H, m), 7.49 (1H, s).
실시예 2.05 및 실시예 2.06
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H-인돌 및 4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H-인돌
Figure pct00036
디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(8.49 ㎎, 0.01 mmol)을 DME:물 4:1(8.575 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(400 ㎎, 1.21 mmol), 2 M 수성 탄산나트륨 용액(0.725 ㎖, 1.45 mmol) 및 1H-인돌-4-일보론산(234 ㎎, 1.45 mmol)에 일 분획으로 첨가하고 상기 혼합물을 마이크로파 관에 밀봉하였다. 상기 반응 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 1 시간 동안 110℃로 가열하고 그 후 RT로 냉각시켰다. 상기 혼합물을 EtOAc(50 ㎖)로 희석시키고 연속하여 물(50 ㎖) 및 포화 염수(50 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 증발시키고 잔류물을 DCM 중의 0 내지 100% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 헥산:EtOH:TEA의 50:50:0.1 혼합물로 등용매로 용리시키면서 20 ㎛ Chiralpak IA (50 ㎜×250 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌(43.8 ㎎, 24%) 및 제 용리 화합물로서 표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌(93.5 ㎎, 52 %)을 얻었다.
표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.33 (3H, d), 1.49 (1H, dd), 1.52 - 1.63 (2H, m), 1.75 - 1.84 (1H, m), 3.16 (3H, s), 3.53 - 3.62 (1H, m), 3.72 (1H, dd), 3.79 - 3.89 (2H, m), 4.06 (1H, dd), 4.23 (1H, d), 4.65 (1H, s), 6.96 (1H, s), 7.25 (1H, t), 7.37 (1H, s), 7.50 (1H, t), 7.59 (1H, d), 8.09 - 8.13 (1H, m), 11.27 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 412.24. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키면서 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 8.690 > 99%.
표제 화합물: 4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.41 - 1.46 (1H, m), 1.50 (2H, td), 1.75 (1H, dd), 3.11 (3H, s), 3.52 (1H, dd), 3.64 - 3.70 (1H, m), 3.73 - 3.83 (2H, m), 4.01 (1H, d), 4.20 (1H, d), 4.56 (1H, s), 6.89 (1H, s), 7.19 (1H, t), 7.32 (1H, s), 7.44 (1H, s), 7.53 (1H, d), 8.04 - 8.08 (1H, m), 11.22 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 412.24. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키면서 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 36.980 > 99%.
실시예 2.06을 또한 하기와 같이 제조할 수 있다:
디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(1.994 ㎎, 2.84 μmol)을 DME:물 4:1(2.015 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.094 g, 0.28 mmol), 2 M 수성 탄산나트륨 용액(0.170 ㎖, 0.34 mmol) 및 1H-인돌-4-일보론산(0.055 g, 0.34 mmol)을 일 분획으로 첨가하고 마이크로파 관에 밀봉하였다. 상기 반응 혼합물을 마이크로파 반응기 내에서 1 시간 동안 110℃로 가열하고 그 후 RT로 냉각시켰다. 냉각된 반응 혼합물을 PS-Thiol 카트리지를 통해 통과시키고 그 후 (0.1% 포름산을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 용리시키면서 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 그 후 SCX 컬럼을 사용하여 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 원하는 생성물을 2 M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용리시키고 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물(0.075 g, 64%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, d), 1.39 - 1.56 (3H, m), 1.69 - 1.78 (1H, m), 3.10 (3H, d), 3.52 (1H, td), 3.66 (1H, dd), 3.72 - 3.83 (2H, m), 4.00 (1H, dd), 4.20 (1H, d), 4.57 (1H, s), 6.89 (1H, d), 7.18 (1H, t), 7.31 (1H, t), 7.43 (1H, t), 7.53 (1H, d), 8.05 (1H, dd), 11.21 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 412.55. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 5 ㎛ Chiralpak AS-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 4.511 > 99%.
출발 물질로서 사용된 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 요오도벤젠 디아세테이트(78 g, 243.29 mmol)를 공기 하에서 DCM(2433 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(70.5 g, 243.29 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(55.0 g, 486.57 mmol), 산화마그네슘(39.2 g, 973.15 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(2.69 g, 6.08 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 추가로 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(13.75 g, 121.64 mmol), 산화마그네슘(9.81 g, 243.29 mmol), 요오도벤젠 디아세테이트(19.59 g, 60.82 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.672 g, 1.52 mmol)를 첨가하고 상기 현탁액을 20℃에서 1 일 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 실리카 겔(200 g)을 여액에 첨가하고 상기 용매를 진공에서 제거하였다. 생성된 분말을 헵탄 중의 20% 내지 50% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 농축시키고 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하여 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 S:R 이성체의 7:1 혼합물(26.14 g, 27%)로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 3.28 (1H, dd), 3.42 (3H, d), 3.46 - 3.57 (1H, m), 3.61 - 3.70 (1H, m), 3.79 (1H, d), 4.02 (1H, dd), 4.65 (1H, d), 4.85 (1H, dd), 6.49 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 400.94 및 402.85. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/EtOH 50/50로 용리시키는 5 ㎛ Chiralpak AD-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 4.367 12.5%, 6.053 87.5%. 모액을 진공에서 농축시켜 무색의 검을 생성시켰다. 검을 이소헥산으로 미분하여 고체를 얻었고, 이것을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 R:S 이성체의 2.8:1 혼합물(47.1 g, 48%)로서 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.33 (3H, d), 3.31 (1H, t), 3.42 (3H, d), 3.47 - 3.57 (1H, m), 3.62 - 3.70 (1H, m), 3.79 (1H, d), 4.02 (1H, dd), 4.65 (1H, dd), 4.86 (1H, dd), 6.49 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 400.94 및 402.86. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/EtOH 50/50으로 용리시키면서 5 ㎛ Chiralpak AD-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 4.365 73.5%, 6.067 26.4%.
(b) 수산화세슘 수화물(0.390 g, 3.43 mmol)을 질소 하에 20℃에서 메틸 THF(2 ㎖) 중의 N-[({2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}메틸)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.209 g, 0.69 mmol), 1,2-디브로모에탄(0.236 ㎖, 2.74 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(0.037 g, 0.07 mmol)의 S:R 이성체의 7:1 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 16 시간 동안 교반하였다. 추가로 1,2-디브로모에탄(0.236 ㎖, 2.74 mmol)을 첨가하고 상기 혼합물을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 세슘 히드록시드-수화물(0.390 g, 3.43 mmol)의 제2 분획을 첨가하고 상기 혼합물을 1 주일 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 실리카 겔(5 g)을 여액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시키고 생성된 분말을 그 후 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.099 g, 44%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.31 (3H, t), 1.43 (2H, h), 1.67 - 1.75 (2H, m), 2.33 (1H, s), 3.09 (3H, s), 3.29 (1H, td), 3.53 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.78 (1H, d), 4.00 (2H, dd + broad s), 4.33 (1H, s), 6.78 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 331.04 및 332.99. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 5 ㎛ Chiralpak AD-H (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 5.948 89.5%.
실시예 2.07 및 실시예 2.08
1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00037
탄산세슘(1.773 g, 5.44 mmol)을 DMA(9.07 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.3g, 0.91 mmol) 및 1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.121 g, 0.91 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 3 일 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 EtOAc(500 ㎖) 중에 용해시키고, 혼합물을 그 후 연속하여 물(400 ㎖) 및 포화 염수(100 ㎖)로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(4×500 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 합하고 그 후 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM(100 ㎖) 중에 용해시키고 생성된 용액을 DCM 중의 0 내지 15% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 헥산:IPA:AcOH:TEA의 50:50:0.2:0.1 혼합물로 등용매로 용리시키면서 20 ㎛ Chiralpak IA (50 ㎜×250 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리된 표제 화합물(0.045 g, 23%) 및 제2 용리된 표제 화합물(0.030 g, 15%)을 얻었다.
제1 용리된 표제 화합물; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.40 - 1.49 (2H, m), 1.50 - 1.58 (1H, m), 1.71 - 1.84 (1H, m), 3.02 (3H, s), 3.52 (1H, t), 3.67 (1H, d), 3.80 (1H, d), 3.93 (1H, s), 4.01 (1H, d), 4.09 (1H, s), 4.48 (1H, s), 6.87 (1H, s), 6.97 (1H, dd), 7.07 (1H, dd), 7.18 (1H, d), 7.65 (2H, s), 8.08 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 428.10. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 3, 헥산/IPA/AcOH/TEA 50/50/0.2/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak IA(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 5.653 93.8%.
제2 용리된 표제 화합물; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.44 (2H, s), 1.50 - 1.58 (1H, m), 1.72 - 1.82 (1H, m), 3.01 (3H, s), 3.47 - 3.57 (1H, m), 3.63 - 3.70 (1H, m), 3.78 (1H, s), 3.94 (1H, s), 3.97 - 4.05 (1H, m), 4.04 - 4.13 (1H, m), 4.43 - 4.55 (1H, m), 6.88 (1H, s), 6.98 (1H, d), 7.07 (1H, s), 7.18 (1H, d), 7.66 (2H, s), 8.07 (1H, d).; m/z: (ES+) MH+, 428.10. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헥산/IPA/AcOH/TEA 50/50/0.2/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak IA(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 7.031 96.9%.
실시예 2.09 및 실시예 2.10
4- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 4-플 루오 로-N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00038
탄산세슘(1.891 g, 5.80 mmol)을 DMA(20.15 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.64 g, 1.93 mmol) 및 7-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.639 g, 3.87 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 45 시간 동안 교반하였다. 7-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.639 g, 3.87 mmol), 탄산세슘(1.891 g, 5.80 mmol) 및 나트륨 메탄설피네이트(0.197 g, 1.93 mmol)의 추가의 분획을 첨가하고 상기 현탁액을 80℃에서 추가로 70 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 여액을 EtOAc(250 ㎖)로 희석하고 그 후 연속하여 물(250 ㎖) 및 포화 염수(75 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 바로 실리카(5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 헥산:IPA:AcOH:TEA의 50:50:0.2:0.1 혼합물로 용리시키면서 20 ㎛ Chiralpak IA (50 ㎜×250 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 Chiral HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 표제 화합물(0.138 g, 16%) 및 제2 표제 화합물(0.183 g, 21%)을 얻었다.
제1 용리 표제 화합물; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.50 (2H, dd), 1.60 (1H, d), 1.80 (1H, s), 3.01 (3H, s), 3.06 (3H, d), 3.33 (1H, d), 3.51 (1H, d), 3.66 (1H, d), 3.80 (1H, d), 3.99 (1H, s), 4.02 (1H, s), 4.08 (1H, s), 4.50 (1H, s), 6.79 (1H, s), 6.96 (2H, dd), 7.92 (1H, d), 8.79 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 460.08. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 10.697 > 99%.
제2 표제 화합물; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.50 (2H, d), 1.59 (1H, d), 1.79 (1H, s), 3.02 (3H, s), 3.06 (3H, d), 3.33 (1H, d), 3.52 (1H, t), 3.67 (1H, d), 3.80 (1H, d), 3.98 (1H, s), 4.01 (1H, d), 4.08 (1H, s), 4.50 (1H, s), 6.79 (1H, s), 6.96 (2H, dd), 7.92 (1H, d), 8.79 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 460.08. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헵탄/IPA/TEA 70/30/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak AS (250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 18.427 99.8%.
출발 물질로서 사용된 7-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 3-플루오로벤젠-1,2-디아민(0.600 g, 4.76 mmol)을 THF(14.82 ㎖) 중에 용해시키고 1,1'-카보닐디이미다졸(0.848 g, 5.23 mmol)을 RT에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT에서 밤새 교반하고 그 후 50℃에서 24 시간 동안 가열하였다. 상기 혼합물을 RT로 냉각시키고 MeOH 중의 암모니아(1.5 ㎖)를 첨가하고 상기 혼합물을 30 분 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 물(40 ㎖)로 희석하고 생성된 갈색의 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고 그 후 진공에서 건조하여 4-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-2 (3H)-온(0.700 g, 97%)을 얻었고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.81 (2H, ddd), 6.88 - 6.95 (1H, m), 10.82 (1H, s), 11.08 (1H, s); m/z: (ES-) M-H-, 151.19.
(b) 옥시염화인(14.11 ㎖, 151.39 mmol) 중의 4-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-2 (3H)-온(0.7 g, 4.60 mmol)의 용액을 100℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고 과량의 옥시염화인을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 포화 중탄산나트륨 용액(10 ㎖)으로 천천히(주의 발열) 중화시키고, 혼합물을 그 후 EtOAc(3×20 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 염수로 세척하고 그 후 Na2SO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켜 2-클로로-7-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸(0.740 g, 94 %)을 얻었고, 이것을 추가로 정제하지 않고 다음 단계에서 사용하였다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 7.01 - 7.11 (1H, m), 7.23 (1H, td), 7.32 (1H, s), 13.59 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 171.20.
(c) 2-클로로-7-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸(1.7 g, 9.97 mmol)을 메틸아민(40% EtOH 용액, 50 ㎖, 9.97 mmol)과 함께 고압 오토클레이브 PV10832(Parr 160 ㎖)에 충전하고 이의 트롤리 상에서 밀봉하고 생성된 용액을 고압 블라스트 셀 60 내에서 16 시간 동안 160℃로 가열하였다. 오토클레이브 내의 압력이 13 bar에 도달하였다. 상기 혼합물을 증발시키고 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고 그 후 SCX 컬럼에 첨가하였다. 상기 컬럼을 MeOH 중의 7 N 암모니아로 용리시키고 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 갈색의 오일을 남겼다. 오일을 DCM 중의 5 내지 20% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 7-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(1.230 g, 75 %)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.88 (3H, d), 6.54 (1H, bs), 6.67 - 6.73 (1H, m), 6.81 (1H, dd), 6.95 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 166.00.
실시예 2.11
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-(S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 피롤로[2,3-c]피리딘
Figure pct00039
Tert-부틸 4-(4-((R)-3-메틸모르폴리노)-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-2-일)-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카복실레이트(0.223 g, 0.44 mmol)를 TFA(5 ㎖) 및 DCM(5.00 ㎖)에 첨가하였다. 생성된 용액을 RT에서 1 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 Et2O로 미분하여 고체를 얻었고, 이것을 여과에 의해 수집하고 진공 하에 건조하여 표제 화합물(0.086 g, 48%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.29 (3H, d), 1.40 - 1.60 (3H, m), 1.76 (1H, d), 3.11 (3H, s), 3.12 - 3.21 (1H, m), 3.53 (1H, t), 3.68 (1H, d), 3.80 (2H, d), 4.01 (1H, d), 4.20 (1H, s), 4.58 (1H, s), 6.95 (1H, d), 7.28 (1H, s), 7.71 (1H, s), 8.83 (1H, s), 9.08 (1H, s), 11.75 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 413.16.
출발 물질로서 사용된 tert-부틸 4-(4-((R)-3-메틸모르폴리노)-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-2-일)-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카복실레이트를 하기와 같이 제조할 수 있다:
1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센디클로로팔라듐(Ⅱ)(0.906 g, 1.25 mmol)을 질소 하에 디옥산(100 ㎖) 중의 tert-부틸 4-브로모-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카복실레이트(1.24 g, 4.17 mmol), 아세트산칼륨(2.87 g, 29.21 mmol) 및 비스(피나콜라토)디붕산(4.73 g, 18.63 mmol)에 첨가하였다. 생성된 용액을 환류에서 3 일 동안 교반하여 boc 대 de-boc 생성물의 대략 2:1 혼합물을 얻었다. 이 혼합물에 질소 하에 디클로로비스(트리페닐포스핀)팔라듐(Ⅱ)(0.017 g, 0.02 mmol), (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.318 g, 0.96 mmol), 2 M 수성 탄산나트륨 용액(0.577 ㎖, 1.15 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 90℃에서 6 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고, EtOAc(400 ㎖)로 희석시키고, 그 후 연속하여 물(300 ㎖) 및 포화 염수(75 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 바로 실리카(30 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 tert-부틸 4-(4-((R)-3-메틸모르폴리노)-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-2-일)-1H-피롤로[2,3-c]피리딘-1-카복실레이트(0.227 g, 46%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 1.40 - 1.61 (3H, m), 1.68(9H, s), 1.76 (1H, dd), 3.09 (3H, d), 3.24 (1H, m), 3.52 (1H, t), 3.67 (1H, dd), 3.79 (2H, d), 4.00 (1H, dd), 4.19 (1H, s), 4.56 (1H, s), 7.00 (1H, d), 7.57 (1H, d), 8.00 (1H, d), 9.25 (1H, s), 9.37 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 513.19.
실시예 3.01 및 실시예 3.02
N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((R)-S-메 틸설폰이 미도일)에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민
Figure pct00040
탄산세슘(3.19 g, 9.79 mmol)을 DMA(10 ㎖) 중의 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.7 g, 1.63 mmol) 및 N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.360 g, 2.45 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발 건조시키고 잔류물을 용리제로서의 (Et3N로 변경된) 이소헥산 중의 20% EtOH로 등용매로 용리시키면서 Merck 50 ㎜, 20 ㎛ ChiralCel OJ 컬럼 상에서 분취용 Chiral HPLC에 의해 정제하였다. 제1 용리 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM(20 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 실리카(1 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물: N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(66.3 ㎎, 36%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.76 (6H, d), 2.78 (3H, d), 3.03 (3H, d), 3.33 - 3.41 (1H, m), 3.47 - 3.58 (1H, m), 3.68 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.89 (1H, s), 4.02 (1H, dd), 4.12 (1H, d), 4.53 (1H, s), 6.80 (1H, s), 6.98 (1H, dd), 7.08 (1H, t), 7.24 (1H, d), 8.10 (1H, d), 8.69 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 444.18. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 5, 이소헥산/EtOH/TEA 80/20/0.1로 용리시키는 20 ㎛ ChiralCel OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 21.886 > 99%.
제2 용리 화합물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM(20 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 실리카 겔(1 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 표제 화합물: N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(62.4 ㎎, 34%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.31 (3H, d), 1.76 (6H, d), 2.78 (3H, d), 3.03 (3H, d), 3.33 - 3.39 (1H, m), 3.54 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.88 (1H, s), 4.02 (1H, dd), 4.12 (1H, d), 4.53 (1H, s), 6.80 (1H, s), 6.92 - 7.01 (1H, m), 7.08 (1H, td), 7.24 (1H, d), 8.10 (1H, d), 8.69 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 444.15. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 5, 이소헥산/EtOH/TEA 80/20/0.1로 용리시키는 20 ㎛ ChiralCel OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 34.353 99.4%.
출발 물질로서 사용된 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) (3R)-4-(2-클로로-6-(메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.75 g, 6.04 mmol)을 DMF(34.6 ㎖) 중에 용해시키고, 여기에 NaH(0.604 g, 15.10 mmol)를 천천히 첨가하고 반응 혼합물을 RT에서 5 분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 메틸 요오다이드(0.944 ㎖, 15.10 mmol)를 신속히 첨가하고 상기 혼합물을 1 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 포화 NH4Cl 용액(50 ㎖)으로 급냉시키고, DCM(3×50 ㎖)으로 추출하고 합한 유기 층을 상 분리 컬럼을 통해 통과시키고 그 후 증발시켜 황색의 검을 얻었다. 물(50 ㎖)을 이 검에 첨가하고 상기 혼합물을 EtOAc(3×50 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0 내지 3% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(2-(메틸설피닐)프로판-2-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.693 g, 88%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.19 (3H, d), 1.49 (6H, dd), 2.17 (3H, t), 3.19 (1H, dd), 3.37 - 3.48 (1H, m), 3.57 (1H, dd), 3.71 (1H, d), 3.92 (1H, d), 4.03 (1H, s), 4.41 (1H, s), 6.70 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 318.09 및 320.04.
(b) 요오도벤젠 디아세테이트(1.716 g, 5.33 mmol)를 DCM(100 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(2-(메틸설피닐)프로판-2-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.693 g, 5.33 mmol), 산화마그네슘(0.859 g, 21.31 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.204 g, 10.65 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.059 g, 0.13 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 Celite를 통해 추출하고 그 후 실리카(15 g) 상에서 진공에서 농축시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 10% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.700 g, 31%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.20 (3H, dd), 1.83 (6H, d), 3.20 (1H, dd), 3.41 (1H, dddd), 3.56 (1H, d), 3.59 (3H, d), 3.72 (1H, d), 3.94 (1H, dd), 4.07 (1H, s), 4.45 (1H, s), 6.93 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 429.4 및 431.5.
실시예 4.01 및 실시예 4.02
N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[4-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 테트라히드로 -2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 테트라히드로 -2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00041
탄산세슘(2.076 g, 6.37 mmol)을 DMA(20 ㎖) 중의 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.00 g, 2.12 mmol), 나트륨 메탄설피네이트(0.217 g, 2.12 mmol) 및 N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.313 g, 2.12 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc(100 ㎖) 중에 용해시키고 연속하여 물(100 ㎖), 이어서 포화 염수(10 ㎖)로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc(2×100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 합하고, MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 (Et3N으로 변경된) EtOH 중의 50% 헥산으로 등용매로 ChiralCel OD 컬럼 상에서 분취용 Chiral HPLC에 의해 정제하였다. 처음에 용리된 이성체 1을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM(10 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 실리카(0.5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 이성체 1(58.0 ㎎, 36%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.31 (3H, d), 2.19 - 2.35 (2H, m), 2.65 - 2.75 (5H, m), 3.02 (2H, d), 3.24 (2H, dd), 3.33 - 3.39 (1H, m), 3.56 (1H, td), 3.71 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.87 - 3.97 (2H, m), 4.03 (1H, dd), 4.06 (1H, s), 4.16 (1H, d), 4.53 (1H, s), 6.90 (1H, s), 6.99 (1H, td), 7.09 (1H, td), 7.26 (1H, dd), 8.06 (1H, d), 8.39 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 486.53. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 8.874 > 99%.
두번째로 용리된 이성체 2를 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM(10 ㎖) 중에 용해시키고 그 후 실리카 겔(0.5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0 내지 7% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 이성체 2(71.8 ㎎, 44%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 2.19 - 2.36 (2H, m), 2.61 - 2.76 (5H, m), 3.02 (3H, d), 3.18 - 3.27 (2H, m), 3.36 (1H, dd), 3.56 (1H, td), 3.71 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.93 (2H, dd), 4.00 - 4.08 (2H, m), 4.17 (1H, d), 4.52 (1H, s), 6.91 (1H, s), 6.99 (1H, td), 7.09 (1H, td), 7.26 (1H, d), 8.06 (1H, d), 8.39 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 486.57. Chiral HPLC: (HP1100 시스템 4, 헥산/EtOH/TEA 50/50/0.1로 용리시키는 20 ㎛ Chiralpak OJ(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 12.742 > 99%.
출발 물질로서 사용된 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 수산화나트륨(50% w/w)(20.04 ㎖, 379.60 mmol)을 메틸 THF(20.05 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(2.2 g, 7.59 mmol), 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄(3.79 ㎖, 30.37 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(0.415 g, 0.76 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 90 분 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 메틸 THF(50 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(50 ㎖) 및 포화 염수(5 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 실리카(30 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(4-(메틸설피닐)테트라히드로-2H-피란-4-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.360 g, 50%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.84 - 1.96 (1H, m), 2.02 (1H, td), 2.09 (3H, d), 2.27 - 2.45 (2H, m), 3.14 (1H, d), 3.10 - 3.26 (3H, m), 3.24 (1H, d), 3.33 - 3.41 (1H, m), 3.45 (1H, td), 3.60 (1H, dd), 3.71 (1H, d), 3.78 - 3.87 (1H, m), 3.87 - 3.97 (2H, m), 4.07 (1H, d), 4.32 - 4.48 (1H, m), 6.76 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 360.11 및 362.06.
(b) 요오도벤젠 디아세테이트(0.788 g, 2.45 mmol)를 DCM(20 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(4-(메틸설피닐)테트라히드로-2H-피란-4-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(0.88 g, 2.45 mmol), 산화마그네슘(0.394 g, 9.78 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.553 g, 4.89 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.027 g, 0.06 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 Celite를 통해 추출하고 그 후 진공에서 실리카(50 g) 상에서 농축시켰다. 생성된 분말을 이소헥산 중의 20% 내지 60% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.018 g, 88%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.34 (3H, dd), 2.49 (1H, td), 2.63 (2H, ddd), 2.75 - 2.82 (1H, m), 3.26 (3H, d), 3.29 - 3.41 (3H, m), 3.49 (1H, s), 3.51 - 3.60 (1H, m), 3.63 - 3.73 (1H, m), 3.80 (1H, d), 3.98 - 4.11 (4H, m), 6.68 (1H, d); m/z: (ES-) M-H-, 469.04 및 471.03.
실시예 4.03
4-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[4-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 테트라히드로 -2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-인돌
Figure pct00042
탈기된 DME:물(4:1)(2.5 ㎖) 중의 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-(S)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(50 ㎎, 0.11 mmol), 1H-인돌-4-일보론산(17.09 ㎎, 0.11 mmol), 4,4'-디-tert-부틸bi페닐(5.66 ㎎, 0.02 mmol) 및 탄산칼륨(29.3 ㎎, 0.21 mmol)의 용액을 질소 하에 비스(디-tert-부틸(4-디메틸아미노페닐)포스핀)디클로로팔라듐(Ⅱ)(A-Phos)(7.52 ㎎, 10.62 μmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 2 시간 동안 교반하고 그 후 55℃에서 20 시간 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 용리제로서의 (1% NH3을 포함하는) 물 및 MeCN의 점감적으로 극성인 혼합물을 사용하여 분취용 HPLC에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 표제 화합물(20.80 ㎎, 43%)을 얻었다; 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) 1.28 (3H, d), 2.19 - 2.36 (2H, m), 2.72 (3H, d), 2.84 (2H, t), 3.18 (1H, t), 3.20 - 3.29 (2H, m), 3.56 (1H, td), 3.71 (1H, dd), 3.81 (2H, d), 3.95 (2H, t), 4.03 (1H, dd), 4.29 (1H, d), 4.59 (1H, s), 6.87 (1H, d), 7.20 (1H, t), 7.27 (1H, t), 7.41 - 7.49 (1H, m), 7.54 (1H, dd), 8.11 (1H, dd), 11.24 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 456.54.
출발 물질로서 사용된 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-(S)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 1-브로모-2-(2-브로모에톡시)에탄(2.323 ㎖, 18.63 mmol)을 메틸 THF(12.34 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-((S)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.8 g, 6.21 mmol), 수산화나트륨(16.40 ㎖, 310.58 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(0.340 g, 0.62 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 메틸 THF(50 ㎖)로 희석시키고, 그 후 물(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 실리카(5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-(4-((S)-메틸설피닐)테트라히드로-2H-피란-4-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.461 g, 65%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.34 (3H, d), 1.84 - 1.94 (1H, m), 2.10 (3H, s), 2.24 - 2.37 (2H, m), 2.44 (1H, ddd), 3.30 (1H, td), 3.41 (1H, ddd), 3.51 - 3.64 (2H, m), 3.65 - 3.73 (1H, m), 3.75 - 3.82 (1H, m), 3.90 - 4.08 (4H, m), 4.36 (1H, s), 6.46 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 360.15 및 362.11.
(b) 요오도벤젠 디아세테이트(1.437 g, 4.46 mmol)를 DCM(20.29 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-(4-((S)-메틸설피닐)테트라히드로-2H-피란-4-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.46 g, 4.06 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.459 g, 4.06 mmol), 로듐(Ⅱ)아세테이트 이합체(0.045 g, 0.10 mmol) 및 산화마그네슘(0.654 g, 16.23 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 48 시간 동안 교반하였다. 추가로 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.459 g, 4.06 mmol), 산화마그네슘(0.654 g, 16.23 mmol), 요오도벤젠 디아세테이트(1.437 g, 4.46 mmol) 및 로듐(Ⅱ)아세테이트 이합체(0.045 g, 0.10 mmol)를 첨가하고 상기 현탁액을 RT에서 추가로 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고 그 후 실리카(5 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 이소헥산 중의 20% 내지 100% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 N-[(4-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}테트라히드로-2H-피란-4-일)(메틸)옥시도-λ6-(S)-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.421 g, 74%)를 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.20 (3H, d), 2.19 - 2.31 (2H, m), 2.72 - 2.84 (2H, m), 3.11 - 3.28 (3H, m), 3.40 - 3.45 (1H, m), 3.46 (3H, s), 3.53 - 3.61 (1H, m), 3.74 (1H, d), 3.94 (3H, d), 4.12 (1H, s), 4.47 (1H, s), 7.05 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 471.04 및 473.00.
실시예 5.01 및 실시예 5.02
4- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3-메 틸 모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 4- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00043
탄산세슘(2.74 g, 8.41 mmol)을 DMA(8 ㎖) 중의 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.600 g, 1.40 mmol), 나트륨 메탄설피네이트(0.143 g, 1.40 mmol) 및 7-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.347 g, 2.10 mmol)의 R:S 이성체의 대략 4.3:1 혼합물에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하고, EtOAc(100 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(100 ㎖), 물(100 ㎖), 및 포화 염수(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 헵탄/(EtOH/MeOH 50/50)/TEA 75/25/0.1로 등용매로 용리시키면서 Merck 50 ㎜, 20 ㎛ Chiracel OJ 컬럼 상에서 분취용 키랄 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: 4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(278 ㎎, 43%) 및 제2 용리 화합물로서의 4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(96 ㎎, 15%)을 얻었다.
표제 화합물: 4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.77 (6H, d), 2.79 (3H, s), 3.05 (3H, d), 3.35 (1H, dd), 3.47 - 3.59 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.93 (1H, s), 4.03 (1H, dd), 4.12 (1H, d), 4.53 (1H, s), 6.83 (1H, s), 6.90 - 7.01 (2H, m), 7.92 - 7.96 (1H, m), 8.81 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.53. Chiral HPLC:(헵탄/(EtOH/MeOH 50/50)/TEA 75/25/0.1로 용리시키는 Gilson prep, 50 ㎜ 20 ㎛ ChiralCel OJ 컬럼) Rf, 10.163 > 99%.
4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.33 (3H, d), 1.79 (6H, d), 2.83 (3H, s), 3.09 (3H, d), 3.38 (1H, dd), 3.59 (1H, td), 3.73 (1H, dd), 3.86 (1H, d), 3.97 (1H, s), 4.06 (1H, dd), 4.16 (1H, d), 4.59 (1H, s), 6.88 (1H, s), 6.94 - 7.05 (2H, m), 7.94 - 8.02 (1H, m), 8.86 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.53. Chiral HPLC:(Gilson prep, 헵탄/(EtOH/MeOH 50/50)/TEA 75/25/0.1로 용리시키는 50 ㎜ 20 ㎛ ChiralCel OJ 컬럼) Rf, 14.239 > 99%.
출발 물질로서 사용된 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드를 하기와 같이 제조하였다:
(a) 메틸 요오다이드(4.70 ㎖, 75.09 mmol)를 메틸 THF(110 ㎖) 중의 (R)-4-(2-클로로-6-((R)-메틸설피닐메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(5.44 g, 18.77 mmol), 테트라옥틸암모늄 브로마이드(1.026 g, 1.88 mmol) 및 수산화나트륨(49.6 ㎖, 938.64 mmol)에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 물(250 ㎖)로 희석시켰다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 실리카 겔(10 g) 상에서 증발시켰다. 생성된 분말을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 (R)-4-(2-클로로-6-(2-((R)-메틸설피닐)프로판-2-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(3.10 g, 52%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 1.32 (3H, t), 1.59 (3H, s), 1.64 (3H, s), 2.23 (3H, d), 3.22 - 3.36 (1H, m), 3.48 - 3.59 (1H, m), 3.69 (1H, dd), 3.73 - 3.81 (1H, m), 4.00 (1H, dd), 4.05 (1H, d), 4.31 (1H, s), 6.45 (1H, d); m/z: (ES+) MH+, 318.02 및 319.98.
(b) 요오도벤젠 디아세테이트(2.77 g, 8.59 mmol)를 DCM(72 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(2-(메틸설피닐)프로판-2-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.03 g, 3.24 mmol), (3R)-4-(2-클로로-6-(2-((R)-메틸설피닐)프로판-2-일)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.7 g, 5.35 mmol), 산화마그네슘(1.385 g, 34.36 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.942 g, 17.18 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.095 g, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 RT에서 70 시간 동안 교반하였다. 추가로 산화마그네슘(0.69g, 17.18 mmol), 요오도벤젠 디아세테이트(1.38 g, 4.30 mmol), 2,2,2-트리플루오로아세트아미드(0.97 g, 8.59 mmol) 및 로듐(Ⅱ) 아세테이트 이합체(0.048 g, 0.105 mmol)를 첨가하고 상기 혼합물을 RT에서 18 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 Celite를 통해 추출하고 그 후 진공에서 농축시켰다. 잔류물을 헵탄 중의 20% 내지 50% EtOAc의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드의 R:S의 대략 4.3:1 혼합물(1.705 g, 46%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.18 (3H, d), 1.83 (6H, s), 3.20 - 3.24 (1H, m), 3.36 - 3.48 (1H, m), 3.53 - 3.65 (4H, m), 3.68 - 3.79 (1H, m), 3.94 (1H, dd), 4.03 - 4.07 (1H, m), 4.43 - 4.47 (1H, m), 6.94 (1H, s); m/z: (ES-) M-H-, 427.26.
실시예 5.03, 실시예 5.04, 실시예 5.05 및 실시예 5.06
6- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3-메 틸 모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민, 5- 플루오로 -N-메틸-1-{4-[1- 메틸 -1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민, 5- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((S)-S-메 틸설폰 이미도일)에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤 즈이미다 졸-2-아민 및 6- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[1- 메틸 -1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 )에틸]-6-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00044
탄산세슘(5.01 g, 15.39 mmol)을 DMA(16 ㎖) 중의 N-[(2-{2-클로로-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-4-일}프로판-2-일)(메틸)옥시도-λ6-설파닐리덴]-2,2,2-트리플루오로아세트아미드(1.10 g, 2.56 mmol)의 R:S 이성체의 대략 4.3:1 혼합물, 나트륨 메탄설피네이트(0.262 g, 2.56 mmol) 및 6-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.720 g, 4.36 mmol)에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc(100 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(100 ㎖), 물(100 ㎖), 및 포화 염수(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 그 후 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 용리제로서의 CO2/MeOH + 0.5 N,NDMEA 90/10으로 용리시키면서 5 ㎛ Chiracel OJ-H SFC(250 ㎜×10 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 SFC로 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(198 ㎎, 17%) 및 제4 용리 화합물로서의 표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(61 ㎎, 5%)을 얻었다.
표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.32 (3H, d), 1.77 (6H, d), 2.78 (3H, s), 3.02 (3H, d), 3.33 - 3.40 (1H, m), 3.55 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.83 (1H, d), 3.92 (1H, s), 3.97 - 4.15 (2H, m), 4.53 (1H, d), 6.84 (1H, s), 6.91 - 6.95 (1H, m), 7.21 (1H, dd), 7.89 (1H, dd), 8.66 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.51. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 5.56 98.9%.
표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.77 (6H, d), 2.78 (3H, s), 3.03 (3H, d), 3.32 -3.36 (1H, m), 3.54 (1H, td), 3.68 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.91 (1H, s), 3.97 - 4.15 (2H, m), 4.53 (1H, d), 6.72 - 6.84 (2H, m), 7.04 (1H, dd), 8.06 (1H, dd), 8.86 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.53. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 10.29 96.3%.
제2 용리 화합물 및 제3 용리 화합물을 포함하는 분획을 용리제로서의 CO2/MeOH/N,NDMEA 85/15/0.5로 용리시키면서 5 ㎛ ChiralCel OD-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 SFC로 정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 제2 용리 화합물로서의 표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(106 ㎎, 9%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.30 (3H, d), 1.76 (6H, d), 2.78 (3H, s), 3.03 (3H, d), 3.31 - 3.39 (1H, m), 3.54 (1H, td), 3.69 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.92 (1H, s), 3.97 - 4.18 (2H, m), 4.52 (1H, d), 6.73 - 6.84 (2H, m), 7.04 (1H, dd), 8.07 (1H, dd), 8.86 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.53. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 85/15/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OD-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 10.94 98.9%.
제1 용리 화합물을 포함하는 분획을 용리제로서의 CO2/MeOH/N,NDMEA 85/15/0.5로 용리시키면서 5 ㎛ ChiralCel OD-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 SFC로 재정제하였다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시켜 표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(12 ㎎, 1%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.14 (3H, d), 1.58 (6H, d), 2.60 (3H, s), 2.83 (3H, d), 3.16 - 3.25 (1H, m), 3.35 (1H, td), 3.50 (1H, dd), 3.64 (1H, d), 3.72 (1H, s), 3.79 - 3.98 (2H, m), 4.34 (1H, d), 6.65 (1H, s), 6.69 - 6.77 (1H, m), 7.03 (1H, dd), 7.71 (1H, dd), 8.48 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 462.53. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 85/15/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OD-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 7.47 88.4%.
출발 물질로서 사용된 6-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민을 하기와 같이 제조할 수 있다:
(a) 4-플루오로벤젠-1,2-디아민(2 g, 15.86 mmol)을 THF(49.4 ㎖) 중에 용해시키고 1,1'-카보닐디이미다졸(2.83 g, 17.44 mmol)을 RT에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 RT에서 밤새 교반하였다. 여기에 농축 암모니아 용액(1.5 ㎖)을 첨가하고 상기 혼합물을 30 분 동안 교반하고 그 후 물(100 ㎖)로 희석시켰다. 생성된 고체를 여과에 의해 수집하고, 물로 세척하고, 이어서 Et2O로 세척하고 그 후 진공에서 건조하여 5-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-2 (3H)-온(1.250 g, 52%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6.66 - 6.79 (2H, m), 6.81 - 6.94 (1H, m), 10.64 (1H, s), 10.76 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 151.19.
(b) 옥시염화인(25.2 ㎖, 270.34 mmol) 중의 5-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸-2 (3H)-온(1.25 g, 8.22 mmol)의 용액을 100℃에서 18 시간 동안 가열하였다. 상기 반응 혼합물을 RT로 냉각시키고 과량의 POCl3을 진공에서 증발시켰다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액(10 ㎖)으로 중화시키고 EtOAc(3×20 ㎖)로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고 그 후 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 감압 하에 농축시켜 2-클로로-6-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸(1.146 g, 82%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 7.09 (1H, ddd), 7.36 (1H, dd), 7.53 (1H, dd); m/z: (ES+) MH+, 171.34.
(c) 2-클로로-6-플루오로-1H-벤조[d]이미다졸(1.146 g, 6.72 mmol)을 메틸아민 40% EtOH 용액(50 ㎖, 6.72 mmol)과 함께 고압 오토클레이브 PV10832(Parr 160 ㎖)에 충전하고 이의 트롤리 상에서 밀봉하고 생성된 용액을 고압 블라스트 셀 60 내에서 16 시간 동안 160℃로 가열하였다. 오토클레이브 내의 압력이 13 bar에 도달하였다. 상기 반응 혼합물을 증발시키고 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고 SCX 컬럼에 첨가하였다. 원하는 생성물을 7M NH3/MeOH를 사용하여 컬럼으로부터 용리시켰다. 생성물을 포함하는 분획을 증발시키고 잔류물을 DCM 중의 0 내지 10% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시켜 6-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(0.707 g, 64%)을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 2.27 (3H, d), 6.38 - 6.44 (2H, m), 6.67 (1H, dd), 6.79 - 6.84 (1H, m); m/z: (ES+) MH+, 166.31.
실시예 5.07, 실시예 5.08, 실시예 5.09 및 실시예 5.10
6- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 5- 플루오로 -N-메틸-1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((R)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 5- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3-메 틸모르폴 린-4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민 및 6- 플루오로 -N- 메틸 -1-{4-[(3R)-3- 메틸모르폴린 -4-일]-6-[1-((S)-S- 메틸설폰이미도일 ) 시클로프로필 ]피리미딘-2-일}-1H- 벤즈이미다졸 -2-아민
Figure pct00045
탄산세슘(9.28 g, 28.47 mmol)을 DMA(23 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.57 g, 4.75 mmol), 나트륨 메탄설피네이트(0.484 g, 4.75 mmol) 및 6-플루오로-N-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-2-아민(1.332 g, 8.07 mmol)의 R:S 이성체의 대략 4:1 혼합물에 첨가하였다. 생성된 현탁액을 80℃에서 5 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 추출하였다. 상기 반응 혼합물을 EtOAc(100 ㎖)로 희석시키고, 연속하여 물(100 ㎖), 물(100 ㎖), 및 포화 염수(100 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발시키고 잔류물을 그 후 용리제로서의 CO2/MeOH/N,N DMEA 90/10/0.5를 사용하여 5 ㎛ ChiralCel OJ-H (20 ㎜×250 ㎜) 컬럼 상에서 분취용 키랄 SFC로 정제하였다. 원하는 화합물을 포함하는 분획을 증발시켜 제1 용리 화합물로서의 표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(225 ㎎, 10%) 및 제2 용리 화합물로서의 표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(142 ㎎, 7%) 및 제3 용리 화합물로서의 표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(36.5 ㎎, 2%) 및 제4 용리 화합물로서의 표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민(80 ㎎, 4%)을 얻었다.
표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.31 (3H, d), 1.4 - 1.54 (2H, m), 1.57 - 1.64 (1H, m), 1.77 - 1.82 (1H, m), 3.00 - 3.04 (6H, m), 3.33- 3.37 (1H, m), 3.53 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.93 - 4.13 (3H, m), 4.49 - 4.51 (1H, m), 6.80 (1H, s), 6.93 (1H, ddd), 7.22 (1H, dd), 7.87 (1H, dd), 8.64 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 460.50. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 7.70 99.9%.
표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.50 (3H, d), 1.61 - 1.77 (2H, m), 1.76 - 1.89 (1H, m), 1.94 - 2.06 (1H, m), 3.24 (3H, s), 3.27 (3H, d), 3.52 - 3.56 (1H, m), 3.75 (1H, td), 3.89 (1H, dd), 4.03 (1H, d), 4.15 - 4.37 (3H, m), 4.70 - 4.74 (1H, m), 6.94 - 7.06 (2H, m), 7.27 (1H, dd), 8.28 (1H, dd), 9.07 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 460.50. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 10.59 99.8%.
표제 화합물: 6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.31 (3H, d), 1.44 - 1.54 (2H, m), 1.57 - 1.64 (1H, m), 1.77 - 1.82 (1H, m), 3.00 - 3.04 (6H, m), 3.33 - 3.37 (1H, m), 3.53 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.81 (1H, d), 3.93 - 4.13 (3H, m), 4.49 - 4.51 (1H, m), 6.80 (1H, s), 6.93 (1H, ddd), 7.22 (1H, dd), 7.87 (1H, dd), 8.64 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 460.50. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 12.72 97.4%.
표제 화합물: 5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 1.27 (3H, d), 1.43 - 1.51 (2H, m), 1.55 - 1.63 (1H, m), 1.72 - 1.83 (1H, m), 3.03 (3H, s), 3.06 (3H, d), 3.28 - 3.37 (1H, m), 3.52 (1H, td), 3.67 (1H, dd), 3.79 (1H, d), 3.93 - 4.14 (3H, m), 4.46 - 4.49 (1H, m), 6.72 - 6.82 (2H, m), 7.05 (1H, dd), 8.05 (1H, dd), 8.84 (1H, q); m/z: (ES+) MH+, 460.50. 키랄 SFC:(Berger Minigram, CO2/MeOH/N,NDMEA 90/10/0.5로 용리시키는 5 ㎛ ChiralCel OJ-H(250 ㎜×4.6 ㎜) 컬럼) Rf, 25.03 99.5%.
출발 물질로서 사용된(3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린의 R:S 이성체의 4:1 혼합물을 하기와 같이 제조하였다:
수산화나트륨(50%, 80 ㎖, 1496.99 mmol)을 질소 하에 20℃에서 메틸 THF(500 ㎖) 중의 (3R)-4-(2-클로로-6-(S-메틸설폰이미도일메틸)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(10 g, 24.95 mmol), 1,2-디브로모에탄(8.60 ㎖, 99.80 mmol) 및 테트라옥틸암모늄 브로마이드(1.364 g, 2.49 mmol)의 R:S 이성체의 대략 4:1 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20℃에서 24 시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 메틸 THF(500 ㎖)로 희석시키고 수성 층을 분리하였다. 상기 혼합물을 추가로 EtOAc(1000 ㎖)로 희석시키고 물(1500 ㎖)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조하고, 추출하고 증발시켰다. 잔류물을 DCM 중의 0% 내지 5% MeOH의 농도구배로 용리시키면서 실리카 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 순수한 분획을 증발 건조시켜 (3R)-4-(2-클로로-6-(1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필)피리미딘-4-일)-3-메틸모르폴린(1.570 g, 19%)의 R:S 이성체의 대략 4:1 혼합물을 얻었다; 1H NMR (400 MHz, DMSO-"d6) 1.18 (3H, d), 1.25 - 1.50 (3H, m), 1.59 - 1.71 (1H, m), 3.01 (3H, s), 3.19 (1H, t), 3.39 - 3.46 (1H, m), 3.52 - 3.61 (1H, m), 3.72 (1H, d), 3.86 (1H, s), 3.93 (1H, dd), 4.01 - 4.05 (1H, m), 4.38 (1H, s), 6.95 (1H, s); m/z: (ES+) MH+, 331.39.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 (Ⅰ)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00046

    [식 중,
    R1은 모르폴린-4-일 및 3-메틸모르폴린-4-일로부터 선택되고;
    R2는
    Figure pct00047
    이고;
    n은 0 또는 1이고;
    R2A, R2C, R2E 및 R2F는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
    R2B 및 R2D는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이고;
    R2G는 -NHR7 및 -NCOR8로부터 선택되고;
    R2H는 플루오로이고;
    R3은 메틸이고;
    R4 및 R5는 각각 독립적으로 수소 또는 메틸이거나, R4 및 R5은 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고;
    A 고리는 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리이고;
    R6은 수소이고;
    R7은 수소 또는 메틸이고;
    R8은 메틸이다].
  2. 제1항에 있어서, R4 및 R5은 이들이 결합된 원자와 함께 A 고리를 형성하고, A 고리는 C3 - 6시클로알킬 또는 O 및 N으로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 포함하는 포화 4원 내지 6원 헤테로사이클릭 고리인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, A 고리는 시클로프로필, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐 고리인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2A는 수소이고; R2B는 수소이고; R2C는 수소이고; R2D는 수소이고; R2E는 수소이고; R2F는 수소인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R1은 3-메틸모르폴린-4-일인 화합물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물은 하기 화학식 (Ia)의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00048
    .
  7. 제6항에 있어서,
    A 고리는 시클로프로필 고리이고;
    R2는
    Figure pct00049
    이고;
    n은 0 또는 1이고;
    R2A는 수소이고;
    R2B는 수소이고;
    R2C는 수소이고;
    R2D는 수소이고;
    R2E는 수소이고;
    R2F는 수소이고;
    R2G는 -NHR7이고;
    R2H는 플루오로이고;
    R3은 메틸 기이고;
    R6은 수소이고;
    R7은 수소 또는 메틸인
    화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  8. 제1항에 있어서, 화학식 (Ⅰ)의 화합물은
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[((R)-S-메틸설폰이미도일)메틸]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-b]피리딘;
    N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
    1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-(S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-피롤로[2,3-c]피리딘;
    N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((S)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((R)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[4-((S)-S-메틸설폰이미도일)테트라하이드로-2H-피란-4-일]피리미딘-2-일}-1H-인돌;
    4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    4-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((R)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    5-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    6-플루오로-N-메틸-1-{4-[1-메틸-1-((S)-S-메틸설폰이미도일)에틸]-6-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((R)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민;
    5-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민; 및
    6-플루오로-N-메틸-1-{4-[(3R)-3-메틸모르폴린-4-일]-6-[1-((S)-S-메틸설폰이미도일)시클로프로필]피리미딘-2-일}-1H-벤즈이미다졸-2-아민
    중 어느 하나로부터 선택되는 것인
    화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  9. 암의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 약학적으로 허용되는 보조제, 희석제 또는 담체와 회합하여 포함하는 약학 조성물.
  11. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암의 치료 방법.
  12. ATR 키나제의 억제에 민감한 종양의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에서의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화학식 (Ⅰ)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도.
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