KR102207888B1

KR102207888B1 - 바이러스 감염증의 치료를 위한 거대환식 푸린

Info

Publication number: KR102207888B1
Application number: KR1020157002296A
Authority: KR
Inventors: 쟝-프랑수아 봉팡티; 제롬 미쉘 클로드 포틴; 필리프 뮐러; 프레드릭 마르크 모리스 더블릿; 피에르 쟝-마리 베르나르 라보이송; 에릭 피에르 알렉산드르 아르누
Original assignee: 얀센 사이언시즈 아일랜드 언리미티드 컴퍼니
Priority date: 2012-07-13
Filing date: 2013-07-12
Publication date: 2021-01-26
Also published as: UA113651C2; CN104703990A; ZA201500186B; BR112015000615A8; BR112015000615B1; EP2872515B1; HK1207062A1; MX360718B; WO2014009509A1; PT2872515T; CL2015000080A1; PH12015500073B1; CN104703990B; US20190330234A1; PH12015500073A1; MX2015000513A; EA201590215A1; EP2872515A1; HUE030685T2; KR20150036239A

Abstract

본 발명은 하기 화학식 (I)을 갖는 거대환식 푸린 유도체, 이의 제조방법, 약제 조성물, 및 바이러스 감염증을 치료하는데 이의 용도에 관한 것이다.

Description

바이러스 감염증의 치료를 위한 거대환식 푸린{MACROCYCLIC PURINES FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS}

본 발명은 거대환식 푸린 유도체, 이의 제조방법, 약제 조성물, 및 바이러스 감염증을 치료하는데 이의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 톨-유사-수용체 (TLR)의 조절 또는 길항(agonism)과 관련이 있는, 바이러스 감염증, 면역 또는 염증 질환의 치료에서 거대환식 푸린 유도체의 용도에 관한 것이다. 톨-유사 수용체는 보존 영역을 함유하는 세포질 신장 및 세포외 루신 풍부 도메인에 의해 특징되는 1차 막관통 단백질이다. 선천 면역 시스템은 특정 유형의 면역 세포의 세포 표면 상에서 발현되는 이러한 TLR을 통해 병원체-관련 분자 패턴을 인식할 수 있다. 외래 병원체의 인식은 포식 세포 상에서 사이토카인의 생산 및 동시-자극 분자들의 상향조절을 활성화시킨다. 이는 T 세포 거동의 조절을 초래한다.

대부분의 포유동물 종은 10개 내지 15개 유형의 톨-유사 수용체를 갖는 것으로 추정하고 있다. 13개의 TLR (TLR1에서 TLR13으로 명명됨)은 인간 및 마우스에서 함께 확인되었으며, 다른 포유동물 종들에서 이러한 TLR들의 여러 균등한 형태가 확인되었다. 그러나, 인간에서 발견된 특정 TLR의 균등물은 모든 포유동물에 존재하는 것은 아니다. 예를 들어, 인간에서 TLR10와 유사한 단백질에 대해 코딩하는 유전자는 마우스에 존재하지만, 과거 어느 시점에 레트로바이러스에 의해 손상된 것으로 나타난다. 한편, 마우스는 TLR 11, 12, 및 13을 발현시키는데, 이들 중 어떠한 것도 인간에게서 나타나지 않는다. 다른 포유동물은 인간에서 발견되지 않는 TLR들을 발현시킬 수 있다. 다른 비-포유동물 종은 타키푸구 복어(Takifugu pufferfish)에서 발견되는 TLR14에 의해 입증된 바와 같이, 포유동물과는 다른 TLR들을 가질 수 있다. 이는 인간 선천 면역의 모델로서 실험 동물을 사용하는 과정을 복잡하게 할 수 있다.

톨-유사 수용체에 대한 상세한 리뷰를 위해 학술지 논문[Hoffmann, J.A., Nature, 426, p33-38, 2003; Akira, S., Takeda, K., and Kaisho, T., Annual Rev. Immunology, 21, p335-376, 2003; Ulevitch, R. J., Nature Reviews: Immunology, 4, p512-520, 2004]이 참조된다.

톨-유사 수용체에 대한 활성을 나타내는 화합물은 WO 2006/117670호에서 푸린 유도체, WO 98/01448호 및 WO 99/28321호에서 아데닌 유도체, 및 WO 2009/067081호에서 피리미딘과 같이 종래에 기술되어 있다.

그러나, 종래 기술의 화합물과 비교하여 바람직한 선택성, 보다 높은 효능, 보다 높은 대사 안정성, 및 개선된 안전 프로파일을 갖는 신규한 톨-유사 수용체 조절제가 강력히 요구되고 있다.

특정의 바이러스 감염증의 치료에서, C형 간염 바이러스 (HCV)에 대한 경우와 같이, 인터페론 (IFN-알파)의 정기적인 주사가 투여될 수 있다. 보다 많은 정보를 위하여, 문헌[Fried et. al. Peginterferon-alfa plus ribavirin for chronic hepatitis C virus infection, N Engl J Med 2002; 347: 975-82]이 참조된다. 경구로 이용 가능한 소분자 IFN 유도물질은 감소된 면역원성 및 투여의 편리성의 잠재적인 장점을 제공한다. 이에 따라, 신규한 IFN 유도물질은 바이러스 감염증을 치료하기 위한 잠재적으로 효과적인 신규한 부류의 약물이다. 예를 들어, 항바이러스 효과를 갖는 소분자 IFN 유도물질의 문헌이 참조된다[De Clercq, E.; Descamps, J.; De Somer, P. Science 1978, 200, 563-565].

IFN-알파는 또한, 특정한 유형의 암의 치료에서 다른 약물과 병용하여 제공된다 [예를 들어, 문헌 [Eur. J. Cancer 46, 2849-57, 및 Cancer Res. 1992, 52, 1056] 참조]. TLR 7/8 작용제가 또한 Th1 반응을 현저하게 유도시키는 이의 능력으로 인하여, 백신 어주번트(vaccine adjuvant)로서 고려된다[예를 들어, 문헌 [Hum. Vaccines 2010, 6, 1-14, 및 Hum. Vaccines 2009, 5, 381-394] 참조].

본 발명에 따르면, 하기 화학식 (I)의 화합물, 및 이의 약제학적으로 허용 되는 염이 제공된다:

상기 식에서,

X는 산소, 질소, 황 또는

이며,

Y는 C₁ _- ₆알킬, C₁ _- ₄알콕시, 트리플루오로메틸 또는 할로겐으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된, 적어도 하나의 질소를 포함하는 방향족 고리 또는 헤테로사이클릭 고리를 나타내며,

Z는 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환된 C₁ _-10 포화되거나 불포화된 알킬을 나타내거나;

Z는 C_1-6알킬-NH-C(O)-C_1-6알킬- 또는 C_1-6알킬-NH-C(O)-C_1-6알킬-O-이거나;

Z는 C_1-10알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있거나,

Z는 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-을 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있거나,

Z는 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있다.

본 발명의 일부는 또한,

X가 O, N-C₁ _- ₄알킬, NH, S 또는

이며,

Y가 C_1-6알킬, C_1-4알콕시, 트리플루오로메틸, 할로겐, C(O)NH-C_1-6알킬, NH(CO)-C_1-6알킬, CN, NH-C_1-6알킬, N-(C_1-6알킬)₂, C(O)-C_1-6알킬 또는 OH로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된, 적어도 하나의 질소를 포함하는 방향족 고리 또는 헤테로사이클릭 고리를 나타내며,

Z가 알킬 또는 알킬하이드록실 또는 OH에 의해 임의로 치환된 C₁ _-10 포화되거나 불포화된 알킬을 나타내거나,

Z가 C₁ _- ₆알킬-NH-C(O)-C₁ _- ₆알킬- 또는 C₁ _- ₆알킬-NH-C(O)-C₁ _- ₆알킬-O-를 나타내거나,

Z가 C_1-6알킬-NCH₃-C(O)-C_1-6알킬- 또는 C_1-6알킬-NCH₃-C(O)-C_1-6알킬-O-를 나타내거나,

Z가 C_1-6알킬-C(O)-NH-C_1-6알킬- 또는 C_1-6알킬-C(O)-NH-C_1-6알킬-O-를 나타내거나,

Z가 C_1-6알킬-C(O)-NCH₃-C_1-6알킬- 또는 C_1-6알킬-C(O)-NCH₃-C_1-6알킬-O-를 나타내거나,

Z가 C_1-10알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬이 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실 또는 OH에 의해 임의로 치환될 수 있거나,

Z가 C_1-10알킬-NH-를 나타내되, 여기서 상기 알킬이 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실 또는 OH에 의해 임의로 치환될 수 있거나,

Z가 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-을 나타내되, 여기서 상기 알킬이 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실 또는 OH에 의해 임의로 치환될 수 있거나,

Z가 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬이 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실 또는 OH에 의해 임의로 치환될 수 있는, 화학식 (I)의 화합물이다.

본 발명에 따른 하기 화학식들 중 하나를 갖는 바람직한 화합물은

의 군으로부터 선택된다.

본 발명에 따른 다른 바람직한 화합물은 숫자 (표 1 및 2 각각에서 언급된 바와 같음) 32, 45, 60, 64, 65, 68, 75, 87, 90, 91 및 92를 갖는 화합물이다.

본 발명의 일부는 또한 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체를 포함하는 약제 조성물이다.

또한, 본 발명에 약제로서 사용하기 위한, 상기에 언급된 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약제 조성물이 속한다.

본 발명은 또한, TLR7의 조절이 관련되어 있는 장애의 치료에서 사용하기 위한, 상기에 언급된 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 용매화물 또는 다형체, 또는 약제 조성물에 관한 것이다.

용어 "알킬"은 특정된 수의 탄소 원자를 함유한 직쇄 또는 분지쇄의 대부분 포화된 (그러나, 본 발명에 따른 특정 화합물에서 불포화됨) 지방족 탄화수소를 지칭한다.

용어 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 지칭한다.

용어 "알콕시"는 예를 들어 메톡시 기 또는 에톡시 기와 같은 산소에 단일 결합된 알킬 (탄소 및 수소 사슬) 기를 지칭한다.

화학식 (I)의 화합물의 약제학적으로 허용 가능한 염은 이의 산부가염 및 염기 염을 포함한다. 적합한 산부가염은 비-독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 적합한 염기 염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다.

본 발명의 화합물은 또한 비용매화된 및 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 용어 "용매화물"은 본원에서 본 발명의 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 용매 분자, 예를 들어 에탄올을 포함하는 분자 복합물을 기술하기 위해 사용된다.

용어 "다형체"는 본 발명의 화합물이 하나가 넘는 형태 또는 결정 구조로 존재하는 능력을 지칭한다.

본 발명의 화합물은 토토머화(tautomerization)로 불리워지는 화학 반응에 의해 용이하게 상호 전환하는 유기 화합물의 이성질체로 지칭되는 소위 "토토머(tautomer)(들)" 형성물로 존재할 수 있다. 이러한 반응은 단일 결합과 인접한 이중 결합의 스위치(switch)에 의해 달성되는, 수소 원자 또는 프로톤의 형식상 이동(formal migration)을 초래한다.

본 발명의 화합물은 결정상 또는 비정질 제품으로서 투여될 수 있다. 이러한 것은 예를 들어 침전, 결정화, 냉동건조, 분무건조, 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해 고체 플러그(solid plug), 분말, 또는 필름으로서 얻어질 수 있다. 이러한 것은 단독으로 또는 하나 이상의 본 발명의 다른 화합물과 함께, 또는 하나 이상의 다른 약물과 함께 투여될 수 있다. 일반적으로, 이러한 것은 하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 결합한 제형으로서 투여될 것이다. 본원에서 용어 "부형제"는 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 구성성분을 기술하기 위해 사용된다. 부형제의 선택은 특정 투여 모드, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 및 투약 형태의 특성과 같은 인자에 거의 의존적이다.

본 발명의 화합물 또는 이의 임의의 하위그룹은 투여 목적을 위해 다양한 약제학적 형태로 제형화될 수 있다. 적절한 조성물로서, 약물을 전신 투여하기 위해 대개 이용되는 모든 조성물이 인용될 수 있다. 본 발명의 약제 조성물을 제조하기 위하여, 활성 성분으로서 유효량의 특정 화합물, 선택적으로 또한 염 형태는 약제학적으로 허용 가능한 담체와 친밀한 혼합으로 합쳐지는데, 이러한 담체는 투여를 위해 요망되는 제조물의 형태에 따라 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 이러한 약제 조성물은 바람직하게, 예를 들어, 경구, 직장, 또는 경피 투여를 위해 적합한 단위 투약 형태로 존재한다. 예를 들어, 조성물을 경구 투약 형태로 제조하는 경우에, 임의의 일반적인 약제학적 매질, 예를 들어 경구 액체 제조물, 예를 들어 현탁액, 시럽, 엘릭시르, 에멀젼, 및 용액의 경우에 물, 글리콜, 오일, 알코올 등, 또는 분말, 환제, 캡슐, 및 정제의 경우에 고체 담체, 예를 들어 전분, 당, 카올린, 희석제, 윤활제, 결합제, 붕해제, 등이 이용될 수 있다. 투여가 용이하기 때문에, 정제 및 캡슐은 가장 유리한 경구 투약 단위 형태를 나타내는데, 이러한 경우에 고체 약제학적 담체가 명백하게 이용된다. 또한, 사용하기 직전에 액체 형태로 전환될 수 있는 고체 형태 제조물이 포함된다. 경피 투여를 위해 적합한 조성물에서, 담체는 선택적으로 적은 비율의 임의 특성의 적합한 첨가제들과 조합된, 침투강화제 및/또는 적합한 습윤제를 선택적으로 포함하며, 이러한 첨가제는 피부에 상당한 유해 효과를 도입하지 않는다. 상기 첨가제는 피부에 대한 투여를 촉진시킬 수 있고/거나 요망되는 조성물을 제조하는데 도움을 줄 수 있다. 이러한 조성물은 다양한 방식으로, 예를 들어 경피 패치로서, 스폿-온(spot-on)으로서, 연고로서 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한, 흡입(inhalation) 또는 통기(inhalation) 방식으로 통해 투여하기 위해 당해 분야에서 이용되는 방법 및 제형을 이용하여 흡입 또는 통기를 통해 투여될 수 있다. 이에 따라, 일반적으로, 본 발명의 화합물은 용액, 현탁액 또는 건조 분말의 형태로 폐로 투여될 수 있다.

상술된 약제 조성물을 투여의 용이성 및 투약량의 균일성을 위해 단위 투약 형태로 제형화하는 것이 특히 유리하다. 본원에서 사용되는 단위 투약 형태는 단위 투약으로서 적합한 물리적으로 별개의 단위를 지칭하는데, 각 단위는 요망되는 약제학적 담체와 결합하여 요망되는 치료 효과를 형성시키기 위해 계산된 사전 결정된 양의 활성 성분을 함유한다. 이러한 단위 투약 형태의 예는 정제 (새김이 있는 정제(scored tablet) 또는 코팅된 정제를 포함), 캡슐, 환제, 분말 패킷(powder packet), 웨이퍼, 좌제, 주사 가능한 용액 또는 현탁액 등, 및 이의 분할된 복수물(segregated multiple)이다.

감염성 질환(infectious disease)의 치료에 숙련된 사람은 하기에 제시되는 시험 결과로부터 유효량을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로, 일일 유효량이 0.01 mg/kg 내지 50 mg/kg 체중, 더욱 바람직하게 0.1 mg/kg 내지 10 mg/kg 체중일 것이라는 것이 고려될 수 있다. 요망되는 용량을 종일 적절한 간격으로 2, 3, 4 또는 그 초과의 서브-용량으로서 투여하는 것이 적절할 수 있다. 상기 서브-용량은 예를 들어 단위 투약 형태 당 1 내지 1000 mg, 및 특히 5 내지 200 mg의 활성 성분을 함유한 단위 투약 형태로서 제형화될 수 있다.

투여의 정확한 투약량 및 횟수는 당업자에게 널리 알려진 바와 같이, 사용되는 화학식 (I)의 특정 화합물, 치료될 특정 증상, 치료될 증상의 중증도, 특정 환자의 연령, 체중 및 전반적인 신체적 상태, 뿐만 아니라 개체가 섭취하고 있을 수 있는 다른 약제에 의존적이다. 또한, 유효량이 치료되는 피검체의 반응에 따라 및/또는 본 발명의 화합물을 처방하는 의사의 평가에 따라 감소되거나 증가될 수 있다는 것은 분명하다. 이에 따라, 상기에 언급된 유효량 범위는 단지 가이드라인(guidline)으로서, 본 발명의 범위 또는 용도를 임의의 범위로 한정하도록 의도되지 않는다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 1

중간체 D1 의 합성

10℃에서, 3-브로모벤질아민 (11.9 g, 63.96 mmol)을 EtOH (100 mL) 중의 A1 (10 g, 60.91 mmol) 및 C1 (125 mg, 0.97 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 120 mL의 NaOH 1N을 적가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 소량의 차가운 EtOH로 세척하고, 건조시켜 12.74 g (75% 수율)의 중간체 D1을 수득하였다.

중간체 E1 의 합성

N-브로모숙신이미드 (7.56 g, 42.47 mmol)를 15℃의 온도를 유지하면서 THF (100 mL) 중의 D1 (10.7 g, 38.61 mmol)의 현탁액에 조금씩 첨가하고, 이후에 반응 혼합물을 15℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 NaHCO₃ 및 EtOAc의 수용액에 부었다. 층들을 디켄팅하고, 분리하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 CH₃CN에 용해시키고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 7.5 g (55% 수율)의 중간체 E1의 일부를 수득하였다. 여액을 증발시키고, 실리카 겔 (불규칙한 SiOH 20-45㎛; 이동상 (99% CH₂Cl₂, 1% CH₃OH) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 2.8 g (20% 수율)의 제2 배치의 중간체 E1을 수득하였다.

중간체 F1의 합성

우레아 (14 g, 233.1 mmol) 중의 E1 (8.3 g, 23.31 mmol)의 혼합물을 160℃에서 4시간 동안 가열하였다. 우레아 (14 g, 233.1 mmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 160℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하였다. 여액을 분쇄하고, 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하, 60℃에서 건조시켜 9.25 g (99% 수율)의 중간체 F1을 수득하였다.

중간체 G1의 합성

건조 DMF (40 mL) 중의 F1 (3 g, 7.52 mmol), 4-브로모-1-부텐 (2.29 mL, 22.55 mmol), K₂CO₃ (3.11 g, 22.55 mmol)의 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40㎛, 50g, CH₂Cl₂/CH₃OH: 98-2) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 1.95 g (57% 수율)의 중간체 G1을 수득하였다.

중간체 H1의 합성

실온에서, 소듐 메톡사이드 (CH₃OH 중의 30 중량% 용액) (8.4 mL, 45.24 mmol)를 CH₃OH (100 mL) 중의 G1 (4.1 g, 9.05 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물에 부었다. 수층을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 3.8 g (100% 수율)의 중간체 H1을 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 I1의 합성

반응을 병행하여 2회 수행하였다.

디옥산 (2*17.5 mL) 중의 H1 (2*1.75 g, 8.66 mmol), 알릴트리-N-부틸주석 (2*1.32 mL, 8.66 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (2*500 mg, 0.87 mmol)의 혼합물을 140℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, KF 수용액 (1g/100mL)에 부었다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. EtOAc를 첨가하고, 혼합물을 셀라이트(celite^®)의 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 EtOAc로 세척하였다. 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40㎛, 120g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 98.5/1.5/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 1.76 g (56% 수율)의 중간체 I1을 수득하였다.

중간체 J1의 합성

I1 (950 mg, 2.6 mmol)을 CH₂Cl₂ 추가 건조물(extra dry) (760 mL)에 첨가하고, N₂를 용액을 통해 30분 동안 버블링하여 얻어진 혼합물을 탈기시켰다. Grubbs 촉매 제2 세대 (222 mg, 0.26 mmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 흐름 하에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40㎛, 10g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 98.5/1.5/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 바로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 280 mg의 중간체 I1 및 200 mg (23% 수율)의 중간체 J1 (두 개의 이성질체 E 및 Z의 혼합물로서)을 수득하였다.

최종 화합물 1의 합성

HCl 6N (2 mL) 및 디옥산 (5 mL) 중의 J1 (200 mg, 0.59 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc (15mL)로 세척하고, 이후에 혼합물을 0℃에서 K₂CO₃로 염기화시키고 (침전물이 나타남), EtOAc 및 CH₃OH로 여러 차례 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 CH₃CN으로부터 재결정화하고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 108 mg (56% 수율)의 화합물 1 (이성질체 E/Z 55/45의 혼합물)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 2

중간체 K1의 합성

CH₃OH (30 mL) 중의 J1 (130 mg, 0.39 mmol), Pd/C (10%) (20 mg, 0.02 mmol)의 혼합물을 H₂의 대기압 하에서 4시간 동안 수소화하였다. 촉매를 셀라이트를 통한 여과에 의해 제거하였다. 셀라이트를 CH₃OH로 추출하였다. 여액을 증발시켜 126 mg (96% 수율)의 중간체 K1을 수득하였고, 이를 이러한 상태로 다음 단계에서 사용하였다.

최종 화합물 2의 합성

실온에서, HCl 6N (1 mL) 및 디옥산 (2 mL) 중의 K1 (110 mg, 0.32 mmol)의 혼합물을 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 얼음에 붓고, NaOH 3N으로 중화시켰다. 침전물을 여과하고, 물, EtOH로 세척하고, 이후에 디에틸에테르로 세척하고, 건조시켜 79 mg (75% 수율)의 화합물 2를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 3

중간체 M1의 합성

DMF (75 mL) 중의 L1 (3.0 g, 32.23 mmol), 5-브로모-1-펜텐 (4.8 g, 32.23 mmol) 및 K₂CO₃ (5.34 g, 38.67 mmol)를 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 4.6 g (89% 수율)의 중간체 M1를 수득하였고, 이를 이러한 상태로 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 N1 의 합성

N₂ 흐름 하에서, 소듐 (1.42 g, 62.03 mmol)을 실온에서 EtOH (80 mL)에 용해시켰다. EtOH (20 mL) 중의 M1 (2.0 g, 12.41 mmol), E1 (4.42 g, 12.41 mmol)을 적가하고, 얻어진 혼합물을 N₂ 흐름 하, 90℃에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (불규칙한 SiOH 20-45㎛; 이동상 (0.5% NH₄OH, 94% CH₂Cl₂, 6% CH₃OH) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 3.15 g (53% 수율)의 중간체 N1을 수득하였다.

중간체 O1의 합성

디옥산 (4 mL) 중의 N1 (0.50 g, 1.04 mmol), 알릴트리-N-부틸주석 (0.32 mL, 1.04 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (120 mg, 0.10 mmol)의 혼합물을 140℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, KF 수용액 (5 g/100 mL)에 부었다. 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. EtOAc를 첨가하고, 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (불규칙한 SiOH 15-40㎛; 이동상 (0.5% NH₄OH, 95% CH₂Cl₂, 5% CH₃OH) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 300 mg (65% 수율)의 중간체 O1을 수득하였다.

중간체 P1의 합성

O1 (1.80 g, 4.06 mmol)을 CH₂Cl₂ 추가 건조물 (1080 mL)에 첨가하고, N₂를 용액을 통해 30분 동안 버블링하여 얻어진 혼합물을 탈기시켰다. Grubbs 촉매 제2 세대 (346 mg, 0.41 mmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 하, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40㎛, 120g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 96/4/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 1.47 g의 미정제 생성물을 수득하였다. 잔류물을 (X-Bridge-C18 5㎛ 30*150mm) 상에서 이동상 (80% NH₄HCO₃ 0.5% pH10 완충제, 20% CH₃CN에서 0% NH₄HCO₃ 0.5% pH10 완충제, 100% CH₃CN로의 구배)을 이용하여 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 83 mg (5% 수율)의 중간체 P1 (두 이성질체 E 및 Z의 혼합물로서) 및 800 mg의 중간체 O1을 수득하였다.

최종 화합물 3의 합성

HCl 6N (2 mL) 및 디옥산 (2 mL) 중의 P1 (40 mg, 0.10 mmol)을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 혼합물을 K₂CO₃로 염기화하고, EtOAc 및 CH₃OH로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 12 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 90/10/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 23 mg을 수득하였다. 화합물을 디에틸에테르에 용해시키고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 15 mg (40% 수율)의 화합물 3 (두 이성질체 E/Z 70/30의 혼합물로서)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 4

중간체 Q1의 합성

CH₃OH (5 mL) 중의 P1 (70 mg, 0.17 mmol), Pd/C 10% (18 mg, 0.02 mmol)의 혼합물을 H₂의 대기압 하에서 4시간 동안 수소화시켰다. 셀라이트 패드를 통한 여과에 의해 촉매를 제거하였다. 셀라이트를 CH₃OH로 세척하고, 여액을 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 10 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 96/4/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 50 mg (71% 수율)의 중간체 Q1을 수득하였다.

최종 화합물 4의 합성

HCl 6N (1 mL) 및 디옥산 (1 mL) 중의 Q1 (50 mg, 0.12 mmol)을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 디옥산으로 세척하고, 건조시켜 38 mg (71% 수율)의 화합물 4 (1HCl, 1H₂O)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 5

중간체 S1의 합성

10℃에서, EtOH (30 mL) 중의 R1 (7.70 g, 34.79 mmol)을 EtOH (25 mL) 중의 A1 (5.44 g, 33.14 mmol), C1 (68 mg, 0.53 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 60 mL의 NaOH 1N을 적가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂ (3 회)로 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (불규칙한 SiOH 20-45 ㎛; 이동상 (0.1% NH₄OH, 98% CH₂Cl₂, 2% CH₃OH) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 5.1 g (49% 수율)의 중간체 S1을 수득하였다.

중간체 T1의 합성

10℃에서, N₂ 흐름 하에, N-브로모숙신이미드 (2.90 g, 16.33 mmol)를 THF (100 mL) 중의 S1 (5.1 g, 16.33 mmol)의 혼합물에 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 10℃에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 물 및 EtOAc 중의 NaHCO₃ 10%의 용액에 부었다. 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH 99-1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 3.75 g (59% 수율)의 중간체 T1을 수득하였다.

중간체 U1의 합성

벤조일 이소시아네이트 (7.05 g, 47.92 mmol)를 실온에서 교반하면서 CH₃CN (80 mL) 중의 T1 (3.75 g, 9.58 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 2-프로판올/25% 수성 NH₃ 1:1 (200 mL)에 용해시키고, 얻어진 용액을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 얻어진 혼합물을 물에 붓고, 묽은 HCl로 중화시키고, EtOAc로 추출하였다. 층들을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트를 EtOAc로 세척하였다. 여액을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 98/2/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 1.70 g (33% 수율)의 중간체 U1을 수득하였다.

중간체 V1의 합성

NH₄OH 25% (160 mL) 및 iPrOH (160 mL) 중의 U1 (1.6 g, 2.97 mmol)의 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. iPrOH를 증발시키고, 물을 첨가하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 침전물은 2 상 사이에 나타났다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 880 mg (68% 수율)의 중간체 V1을 수득하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 680 mg의 중간체 U1을 수득하였다.

중간체 W1의 합성

DMF (20 mL) 중의 V1 (520 mg, 1.20 mmol), 3차-부틸 N-(3-브로모프로필)카바메이트 (570 mg, 2.40 mmol) 및 K₂CO₃ (496 mg, 3.59 mmol)의 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후에, 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 물, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 800 mg (>100% 수율)의 중간체 W1을 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 X1의 합성

NaOH 30% (15 mL) 및 EtOH (15 mL) 중의 W1 (0.60 g, 1.01 mmol), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (11.5 mg, 0.05 mmol)의 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 절반 정도로 농축시켰다. HCl 3N으로 pH를 5로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (2 회)로 추출하였다. 합한 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 500 mg (98% 수율)의 중간체 X1을 수득하였다.

중간체 Y1의 합성

0℃에서, 디옥산 중의 HCl 4N (1.25 mL, 4.99 mmol)을 디옥산 (2.5 mL) 중의 X1 (0.50 g, 1 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조될 때까지 증발시켜 450 mg (>100% 수율)의 중간체 Y1을 수득하였다. 미정제 화합물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

최종 화합물 5의 합성

1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (520 mg, 2.72 mmol) 및 1-하이드록시벤조트리아졸 (367 mg, 2.72 mmol)을 DMF (270 mL) 중의 Y1 (370 mg, 0.91 mmol), 디이소프로필에틸아민 (0.78 mL, 4.53 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂-CH₃OH (90-10)에 용해시키고, 물로 세척하였다. 침전물은 경사분리 깔대기(decantation funnel)에서 나타났다. 침전물을 여과하여 103 mg을 수득하였다. 이러한 침전물을 뜨거운 EtOH에 용해시키고, 환류 하에 1시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 미정제물을 (X-Bridge-C18 5 ㎛ 30*150 mm) 상에서 이동상 (75% NH₄HCO₃ 0.5% pH10 완충제, 25% CH₃OH에서 0% NH₄HCO₃ 0.5% pH10 완충제, 100% CH₃OH로의 구배)을 이용하여 역상으로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 8 mg (순수물) 및 50 mg (미정제물)을 수득하였다. 미정제물을 (X-Bridge-C18 5 ㎛ 30*150 mm) 상에서 이동상 (90% 트리플루오로아세트산 0.05%, 10% CH₃OH에서 0% 트리플루오로아세트산 0.05%, 100% CH₃OH로의 구배)을 이용하여 역상으로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 20 mg을 수득하였다. 2개의 분획 (8 mg 및 20 mg)을 합하고, 디옥산 및 CH₃CN에 용해시키고, 디옥산 중의 0.50 mL의 HCl 4N을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 28 mg (7% 수율)의 화합물 5 (HCl 염)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 6

중간체 B2의 합성

디메틸아민 (수중 40% 용액) (100 mL) 중의 에틸 글리콜레이트 (10.0 g, 96.06 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 EtOH에 용해시키고, 다시 농축하였다. 이러한 사이클을 3회 수행하여 9.75 g (98% 수율)의 중간체 B2를 수득하였다.

중간체 D2 의 합성

N₂ 흐름 하, 0℃에서, NaH (2.16 g, 54.13 mmol)를 실온에서 DMF (36 mL) 중의 B2 (4.09 g, 39.69 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 6-클로로니코니트릴 C2 (5.0 g, 36.09 mmol)를 첨가하고(발열), 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. NaHCO₃ (150 mL)의 10% 수용액을 첨가하고, 이후에 염수 용액을 첨가하였다. 수층을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 7.0 g (95% 수율)의 중간체 D2를 수득하였다.

중간체 E2 의 합성

Pd/C 10% (2.0 g)를 MeOH (140 mL) 중의 D2 (7.0 g, 34.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 H₂ 분위기 (1 atm) 하, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. Pd/C 10% (1.5 g, 0.04 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 동일한 조건 하에서 4시간 동안 교반하였다. 촉매를 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 셀라이트를 CH₃OH로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 이러한 분획을 정제하기 전에 다른 배치와 합하였다.

잔류물을 실리카 겔 (15-40㎛, 120 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 92/8/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 감압 하에 농축시켜 2.2 g (27% 수율)의 중간체 E2를 수득하였다.

중간체 G2 의 합성

EtOH (10 mL) 중의 E2 (2.2 g, 10.51 mmol)를 10℃에서 EtOH (10 mL) 중의 F2 (1.64 g, 10.01 mmol) 및 아닐린 하이드로클로라이드 (20 mg, 0.16 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. NaOH 1M (25 mL)의 수용액을 10℃에서 용액에 적가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 소량의 차가운 EtOH로 세척하고, 진공 하에서 건조시켜 2.25 g (75% 수율)의 중간체 G2를 수득하였다. G2를 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 H2 의 합성

THF (50 mL) 중의 N-브로모숙신이미드 (1.47 g, 8.24 mmol)의 용액을 0℃에서 THF (80 mL) 중의 G2 (2.25 g, 7.49 mmol)의 용액에 25분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이후에 실온에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, NaHCO₃의 포화 수용액으로 세척하고, 이후에 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 미정제 화합물을 CH₃CN으로부터 결정화시키고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 0.79 g (27% 수율)의 중간체 H2를 수득하였다. 여액을 증발시키고, 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 50 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 97/3/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 0.71 g (25% 수율)의 중간체 H2를 수득하였다.

중간체 I2 의 합성

우레아 (13.3 g, 221.51 mmol) 중의 H2 (1.4 g, 3.69 mmol)의 혼합물을 160℃에서 6시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하였다. 여액을 분쇄하고, 여과하고, 물로 세척하고, 진공 하, 60℃에서 건조시켜 1.05 g (67% 수율)의 중간체 I2를 수득하였다.

중간체 K2 의 합성

DMF (20 mL) 중의 I2 (1.23 g, 2.91 mmol), 3차-부틸-N-(3-브로모프로필)카바메이트 J2 (1.04 g, 4.37 mmol), K₂CO₃ (604 mg, 4.37 mmol)의 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 0.97 g (57% 수율)의 중간체 K2를 수득하였다.

중간체 L2 의 합성

실온에서, 소듐 (446 mg, 19.42 mmol)을 MeOH (30 mL)에 첨가하였다. 혼합물을 소듐이 용액 중에 존재할 때까지(발열) 교반하였다. K2 (750 mg, 1.29 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 N₂ 흐름 하, 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, pH를 5 내지 6으로 조정하였다. 수층을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 0.54 g (83% 수율)의 중간체 L2를 수득하였다.

중간체 M2 의 합성

0℃에서, 디옥산 중의 HCl 4M (2.68 mL, 10.73 mmol)을 디옥산 (20 mL) 중의 L2 (0.54 g, 1.07 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조될 때까지 증발시켜 0.74 g (>100% 수율)을 수득하였다. 미정제 화합물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

최종 화합물 6의 합성

1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (675 mg, 3.52 mmol) 및 하이드록시벤조트리아졸 (476 mg, 3.52 mmol)을 DMF (360 mL) 중의 M2 (500 mg, 1.17 mmol), 디이소프로필에틸아민 (1.01 mL, 5.87 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 물에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켰다. 잔류물을 (X-Bridge-C18 5 ㎛ 30*150 mm) 상에서, 이동상 (90% 트리플루오로아세트산 0.05%, 10% MeOH에서 0% 트리플루오로아세트산 0.05%, 100% MeOH까지의 구배)을 이용하여 역상 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 75 mg의 화합물 6 및 100 mg (미정제 침전물)을 수득하였다. 순수한 분획 (75 mg)을 디옥산 및 CH₃CN에 용해시키고, 디옥산 중의 1mL의 HCl 4N을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 57 mg (12% 수율)의 화합물 6 (HCl 염)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 7

중간체 O2의 합성

4-브로모-1-부텐 (8.6 mL, 84.17 mmol)을 CH₃CN (75 mL) 중의 N2 (15 g, 56.11 mmol), K₂CO₃ (23.3 g, 168.33 mmol), 테트라부틸암모늄 브로마이드 (1.81 g, 5.61 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 환류 하에 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 용매를 증발시켰다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 120 g, 헵탄/EtOAc: 93-7) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 14.8 g (82% 수율)의 중간체 O2를 수득하였다.

중간체 P2의 합성

0℃에서, HCl 1N (120 mL, 119.47 mmol)을 Et₂O (250 mL) 중의 O2 (19.2 g, 59.74 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이후에 실온에서 12시간 동안 격렬하게 교반하였다. 얻어진 층들을 디켄팅하였다. K₂CO₃ (분말)로 수층을 pH 8까지 염기화하고, 이후에 Et₂O (3 회)로 추출하였다. 수층을 K₂CO₃로 포화시키고, 이후에 다시 CH₂Cl₂ (2 회)로 추출하였다. 유기층들을 합하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 7.9 g (84% 수율)의 중간체 P2로 수득하였다.

중간체 Q2의 합성

N₂ 흐름 하에서, LiAlH₄ (4.4 g, 114.50 mmol)를 10℃에서 THF (150 mL)에 현탁시켰다. THF (150 mL) 중의 P2 (9 g, 57.25 mmol)를 적가하였다. 반응을 실온으로 가온시키고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응을 -10℃로 냉각시키고, 물 (5 mL), NaOH 3N (5 mL) 및 다시 물 (14 mL)을 첨가하여 켄칭시켰다. 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 THF로 세척하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 EtOAc에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 5.3 g (80 % 수율)의 중간체 Q2를 수득하였다.

중간체 R2의 합성

0℃에서, 3차-부틸디메틸실릴 클로라이드 (1.31 g, 8.68 mmol)를 CH₂Cl₂ (30 mL) 중의 Q2 (1.0 g, 8.68 mmol), Et₃N (1.33 mL, 9.55 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (106 mg, 0.87 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 1.70 g (85% 수율)의 중간체 R2를 수득하였다.

중간체 S2의 합성

트리플루오로-아세트산 (210 mL) 중의 4,6-디하이드록시-2-메틸티오피리미딘 (50 g, 316.09 mmol)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 5℃로 냉각시키고, 이후에 발연 HNO₃ (19.5 mL, 426.73 mmol)을 5℃에서 적가하였다. 첨가하는 동안에 온도를 10 내지 15℃에서 유지시켰다. 얼음욕을 제거하고, 온도가 20℃에 도달할 때에, 격렬한 발열 반응이 일어났다 (5초 안에 20℃에서 45℃로). 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물과 얼음의 혼합물에 부었다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하였다. 침전물을 진공 하, 50℃에서 건조시켜 42 g (65% 수율)의 중간체 S2를 수득하였다. 이러한 중간체를 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 T2의 합성

N,N-디메틸아닐린 (76.7 mL, 0.61 mol)을 0℃에서 POCl₃ (93.7 mL, 1.01 mol)에 적가하였다. S2 (41 g, 201.79 mmol)를 0℃에서 조금씩 첨가하고, 이후에 혼합물을 2시간 동안 100℃로 가온시켰다. 용액을 진공 하에 농축하고, 잔류 POCl₃을 톨루엔과의 공비 증발 (3회)에 의해 제거하였다. 얻어진 오일을 CH₂Cl₂-헵탄 (70-30)의 용액에 용해시키고, SiO₂의 유리 필터를 통해 여과하였다. 여액을 농축하고, 잔류물을 (불규칙한 SiOH 20-45 ㎛ 1000 g DAVISIL) 상에서 이동상 (80% 헵탄, 20% CH₂Cl₂)을 이용하여 분취용 LC(preparative LC)로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 37.8 g (78% 수율)의 중간체 T2를 수득하였다.

중간체 U2의 합성

iPrOH 중의 NH₃ 2M의 용액 (115 mL, 229.31 mmol)을 THF (360 mL) 중의 T2 (36.7 g, 152.87 mmol) 및 Et₃N (23.4 mL, 168.16 mmol)의 용액에 적가하였다 (온도는 첨가하는 동안에 얼음물 욕으로 실온으로 유지시켰다). 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조될 때까지 증발시켰다. 물 및 EtOAc를 잔류물에 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수층을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 34.5 g (100% 수율)의 중간체 U2를 수득하였다.

중간체 V2의 합성

에틸 클로로포르메이트 (13.5 mL, 138.90 mmol)를 THF (1300 mL) 중의 U2 (39.8 g, 126.27 mmol) 및 Et₃N (26.5 mL, 189.40 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 용매를 감압 하에 일부 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂ 및 물에 용해시켰다. 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 (불규칙한 SiOH 20-45 ㎛ 1000 g DAVISIL) 상에서 이동상 (85% 헵탄, 15% AcOEt에서 80% 헵탄, 20% AcOEt로의 구배)을 이용하여 분취용 LC로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 35 g (95% 수율)의 중간체 V2를 수득하였다.

중간체 X2의 합성

아세톤 (200 mL) 중의 V2 (5.0 g, 17.08 mmol), W2 (2.85 g, 17.08 mmol), K₂CO₃ (3.54 g, 25.6 mmol) 및 NaI (2.56 g, 17.08 mmol)의 혼합물을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 220 g, CH₂Cl₂/헵탄 50-50) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 7.4 g (100% 수율)의 중간체 X2를 수득하였다.

중간체 Y2의 합성

THF (100 mL) 중 물 (100 mL) 중의 X2 (7.20 g, 17.03 mmol) 및 NH₃ 30%의 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 물에 현탁시키고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기상을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 증발시켜 7.1 g (100% 수율)의 중간체 Y2 (황색 오일)를 수득하였다. 이러한 중간체를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 Z2의 합성

CH₂Cl₂ (20 mL) 중의 3-클로로퍼옥시벤조산 (2.44 g, 9.91 mmol)을 실온에서 CH₂Cl₂ (100 mL) 중의 Y2 (2.0 g, 4.96 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (5 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 NaHCO₃의 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 2.70 g (>100% 수율)의 중간체 Z2를 수득하였다. 이러한 중간체를 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 A3의 합성

CH₃CN (70 mL) 중의 Z2 (2.16 g, 4.96 mmol), R2 (1.70 g, 7.44 mmol) 및 Et₃N (1.04 mL, 7.44 mmol)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 90 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/99.5-0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 1.10 g (38% 수율)의 중간체 A3을 수득하였다.

중간체 B3의 합성

A3 (1.05 g, 1.80 mmol)을 CH₂Cl₂ 추가 건조물 (230 mL)에 첨가하고, N₂를 용액을 통해 30분 동안 버블링시켜 얻어진 혼합물을 탈기시켰다. Grubbs 촉매 제2 세대 (153 mg, 0.18 mmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 흐름 하, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛ 300 g MERCK) 상에서 이동상 (80% 헵탄, 20% AcOEt)을 이용하여 분취용 LC로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 0.70 g (70% 수율)의 중간체 B3을 수득하였다.

최종 화합물 7의 합성

Fe (385 mg, 6.90 mmol)를 AcOH (6.8 mL) 및 물 (1.36 mL) 중의 B3 (640 mg, 1.15 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 40분 동안 0 내지 400 W 범위의 파워 출력(power output)을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator)를 이용하여 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 셀라이트 패드 상에서 여과하고, AcOH로 린싱하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 톨루엔 (2회)과 함께 건조될 때까지 동시 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 90-10-0.5에 용해시켰다. 침전물을 여과하고 (침전물 (1.0g)은 기대되는 화합물을 함유함), 여액을 증발시키고, 크로마토그래피로 정제하였다.

(여액의) 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 90-10-0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 증발시켜 52 mg의 분획 1을 수득하였다.

이전에 얻어진 침전물을 크로마토그래피로 정제하였다 (화합물 및 SiO₂를 용리 전에 혼합하였다). 잔류물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 25 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 90-10-0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 80 mg의 분획 2를 수득하였다.

분획 1 및 분획 2를 합하고, 이후에 CH₃CN으로부터 고형화하여 95 mg (23% 수율)의 화합물 7 (3.5%의 Z 이성질체를 갖는 E 이성질체)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 8

중간체 C3의 합성

아세톤 (60 mL) 중의 V2 (1.7 g, 5.8 mmol), 3-메톡시벤질 클로라이드 (0.93 mL, 6.4 mmol), K₂CO₃ (2 g, 14.5 mmol) 및 소듐 요오다이드 (0.87 g, 5.8 mmol)를 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Merck, 이동상 헵탄/CH₂Cl₂ 70/30)로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 1.4 g (58% 수율)의 중간체 C3을 수득하였다.

중간체 D3의 합성

C3 (1.4 g, 3.4 mmol)을 실온에서 16시간 동안 물 (30 mL) 및 THF (30 mL) 중의 NH₃ 30%에서 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔류물을 EtOH (2회)와의 공비 증발에 의해 건조시켜 1.3 g (97% 수율)을 수득하였다. 미정제 생성물을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 E3의 합성

3-클로로퍼옥시벤조산 (2.04 g, 8.3 mmol)을 실온에서 CH₂Cl₂ (80 mL) 중의 D3 (1.3 g, 3.3 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (2.61 g, 16.52 mmol)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 NaHCO₃의 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 1.4 g (100% 수율)의 중간체 E3을 수득하였다.

중간체 F3의 합성

CH₃CN (65 mL) 중의 E3 (1.4 g, 3.3 mmol), 4-아미노-1-부탄올 (0.45 mL, 3 mmol) 및 K₂CO₃ (414 mg, 4.9 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1시간 30분 동안 교반하였다. 염을 여과하고, 물을 여액에 첨가하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Merck, 이동상 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 98/2/0.1)로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하여 1.2 g (84% 수율)의 중간체 F3을 수득하였다.

중간체 G3 의 합성

Fe (1.54 g, 27.6 mmol)를 AcOH (24 mL) 및 물 (8.6 mL) 중의 F3 (1.2 g, 2.76 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하고, 잔류물을 EtOAc 및 물로 희석시켰다. 혼합물을 셀라이트 패드 상에서 여과하고, EtOAc로 린싱하였다. 층들을 분리하고, 유기층을 NaHCO₃의 포화수용액 (2회)으로 세척하고, 이후에 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하였다. 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (90/10/0.5) 중에서 실리카 겔 컬럼 (15-40 ㎛, 40 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하였다. 이러한 분획을 CH₃CN/디이소프로필에테르로부터 고형화하여 0.70 g (71% 수율)의 중간체 G3을 수득하였다.

중간체 H3의 합성

N₂ 흐름 하, -60℃에서, BBr₃ (5.6 mL, 5.6 mmol)을 CH₂Cl₂ (40 mL) 중의 G3 (400 mg, 1.1 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 N₂ 흐름 하에, -60℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 1mL의 CH₃OH를 0℃에서 적가하였다. 이후에, 혼합물을 수중 K₂CO₃의 포화용액에 부었다. 혼합물을 CH₂Cl₂/MeOH의 용액으로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (90/10/0.5) 중에서 실리카 겔 컬럼 (15-40 ㎛, 40 g) 상에서 크로마그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 농축하였다. 잔류물을 CH₃CN/디이소프로필에테르로부터 고형화시켜 265 mg (69% 수율)의 중간체 H3을 수득하였다.

최종 화합물 8의 합성

N₂ 흐름 하, 실온에서, THF (5 mL) 중의 디이소프로필아조디카복실레이트 (0.27 mL, 1.36 mmol)의 용액을 THF (50 mL) 중의 H3 (235 mg, 0.68 mmol), PPh₃ (358 mg, 1.36 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물에 붓고, EtOAc를 첨가하였다. 혼합물을 수중 NaHCO₃10%의 수용액으로 염기화시키고, 이후에 유기층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (95/5/0.1) 중에서 실리카 겔 컬럼 (15-40 ㎛, 40 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 증발시켰다. 잔류물을 CH₃CN/디이소프로필에테르로부터 고형화하여 75 mg (34% 수율)의 화합물 8을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 9

중간체 J3의 합성

N₂ 흐름 하, 0℃에서, NaH (3.28 g, 82 mmol)를 DMF (80 mL) 중의 B2 (7.32 g, 71 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, I3 (10 g, 54.6 mmol)을 첨가하고 (발열), 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. NaHCO₃ (150 mL)의 10% 수용액을 첨가하고, 이후에 염수 (150 mL)를 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 잔류물을 소량의 AcOEt에 용해시키고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 중간체 J3 (9.04 g, 81% 수율)을 수득하였다.

중간체 K3의 합성

N₂ 흐름 하, 0℃에서, BH₃/THF (110 mL, 39 mmol)를 THF (60 mL) 중의 J3 (9.0 g, 43.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이후에 HCl 2M으로 켄칭시키고, 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂-CH₃OH-NH₄OH 90-10-1에 용해시켰다. 침전물을 여과하고 (미네랄), 여액을 농축하였다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 330 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 96/4/0.5에서 90/10/0.5로) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 중간체 K3 (6.2 g, 73% 수율)을 수득하였다.

중간체 L3의 합성

EtOH (30 mL) 중의 K3 (6.2 g, 29.5 mmol)을 10℃에서 EtOH (25 mL) 중의 F2 (4.6 g, 28 mmol) 및 아닐린 하이드로클로라이드 (56 mg, 0.43 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. NaOH 1M (25 mL)의 수용액을 10℃에서 용액에 적가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 소량의 차가운 EtOH로 세척하고, 진공 하에 건조시켰다. 모 층(mother layer)들을 농축하고, 제2 침전물을 CH₂Cl₂에서 얻고, 여과하고, 진공 하에 건조시켰다. 두 배치를 합하여 중간체 L3 (2.44 g, 29% 수율)을 수득하였다.

중간체 M3의 합성

THF (15 mL) 중의 NBS (0.326 g, 1.83 mmol)의 용액을 25분에 걸쳐 0℃에서 THF (15 mL) 중의 L3 (0.5 g, 1.67 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이후에 실온에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, NaHCO₃의 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켰다. 이러한 정제 화합물을 CH₃CN으로부터 고형화하였다. 침전물을 여과하고, 건조시켜 중간체 M3 (216 mg, 34% 수율)을 수득하였다.

중간체 N3의 합성

우레아 (4.9 g, 82.28 mmol) 중의 M3 (1.04 g, 2.74 mmol)의 혼합물을 160℃에서 4시간 동안 가열하였다. 우레아 (3 g, 2.64 mmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 160℃에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물을 첨가하였다. 여액을 분쇄하고, 여과하고, 물로 세척하고, 60℃에서 진공 하에 건조시켜 중간체 N3을 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 O3의 합성

DMF (30 mL) 중의 N3 (미정제물), J2 (1.557 g, 6.54 mmol), K₂CO₃ (904 mg, 6.54 mmol)의 혼합물을 50℃에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켰다. 잔류물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛ 300 g Merck) 상에서 이동상 (0.3% NH₄OH, 97% CH₂Cl₂, 3% MeOH)을 이용하여 분취용 LC로 정제하여 중간체 O3 (280 mg, 11% 수율)을 수득하였다.

중간체 P3 의 합성

실온에서, Na (167 mg, 7.25 mmol)를 MeOH (11 mL)에 첨가하였다. Na가 용액 중에 존재할 때까지 (발열) 혼합물을 교반하였다. O3 (280 mg, 0.48 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 N₂ 흐름 하, 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, (HCl 1N로) pH를 5 내지 6으로 조정하였다. 수층을 EtOAc로 추출하였다. 수성상을 K₂CO₃ 분말로 포화시키고, AcOEt로 추출하였다. 합한 유기상들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 중간체 P3 (140 mg, 58% 수율)을 수득하였다.

중간체 Q3 의 합성

0℃에서, HCl (디옥산 중 4M) (0.7 mL, 2.78 mmol)을 디옥산 (5 mL) 중의 P3 (140 mg, 2.78 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켜 중간체 Q3을 수득하였다. 미정제 화합물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

최종 화합물 9의 합성

1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드 (318 mg, 1.66 mmol) 및 하이드록시벤조트리아졸 (224 mg, 1.66 mmol)을 DMF (170 mL) 중의 Q3 (미정제물), 디이소프로필에틸아민 (0.476 mL, 2.76 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 물에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 물로 세척하고, 건조시켰다. 미정제 화합물을 (X-Bridge-C18 5㎛ 30*150mm) 상에서 이동상 (90% NH₄HCO₃ 0.5%, 10% CH₃CN에서 0% NH₄HCO₃ 0.5%, 100% CH₃CN로의 구배)을 이용하여 역상으로 정제하여 최종 화합물 9 (37 mg, 18% 수율)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 10

최종 화합물 10의 합성:

CH₃OH/THF 50/50 (10 mL) 중의 화합물 7 (100 mg, 0.27 mmol), Pd/C (10%) (14.5 mg, 0.014 mmol)의 혼합물을 H₂의 대기압 하에서 4시간 동안 수소화하였다. 필터 (chromafil Xtra 0.45㎛)를 통한 여과에 의해 촉매를 제거하였다. 여액을 농축하였다. 이러한 분획을 CH₃CN으로부터 고형화하고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 최종 화합물 10 (81 mg, 81% 수율)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 11

중간체 R3 의 합성

N₂ 흐름 하, 0℃에서, NaH (705 mg, 17.6 mmol)를 DMF (30 mL) 중의 1,4-부탄디올 (3.2 g, 35.26 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이후에 E3 (2.5 g, 5.87 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 얼음을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (15-40㎛, 80g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 97/3/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 중간체 R3 (1.78 g, 70% 수율)을 수득하였다.

중간체 S3 의 합성

철 분말 (2.27 g, 40.65 mmol)을 AcOH (35 mL) 및 물 (11 mL) 중의 R3 (1.77 g, 4.07 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석시키고, 수중 K₂CO₃ 10%로 염기화하였다. EtOAc 및 CH₃OH를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 CH₂Cl₂/CH₃OH (80/20)로 세척하였다. 여액을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 분획을 CH₃CN에 용해시키고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 중간체 S3 (1.2 g, 82% 수율)을 수득하였다.

중간체 T3 의 합성

N₂ 흐름 하, -60℃에서, BBr₃ (13.6 mL, 13.6 mmol)을 CH₂Cl₂ (40 mL) 중의 S3 (980 mg, 2.727mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 N₂ 흐름 하, -60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 5시간 동안 교반하였다. 5 mL의 CH₃OH를 -60℃에서 적가하였다. 이후에, 혼합물을 K₂CO₃의 포화용액에 부었다. 혼합물을 CH₂Cl₂/CH₃OH로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 중간체 T3 (0.55 g, 49% 수율)을 수득하였고, 이를 임의의 추가 정제 없이 다음 단게에서 바로 사용하였다.

최종 화합물 11의 합성

DMF (71 mL) 중의 T3 (537 mg, 1.32 mmol), K₂CO₃ (182 mg, 1.32 mmol)의 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반하였다. 미정제 혼합물을 여과하고, 여액을 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 소량의 DMF에 용해시키고, 5 g의 SiO₂ 35-70㎛를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 건조될 때까지 증발시키고, 50 g 크로마토그래피 컬럼의 상단에 올려놓고, CH₂Cl₂-CH₃OH-NH₄OH 95-5-0.5에서 90-10-0.5로의 구배로 용리하였다. 기대되는 화합물을 함유한 분획들을 합하고, 감압 하에 농축하였다. 고형물을 CH₃CN로부터 결정화하고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 최종 화합물 11 (33 mg, 8% 수율)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 12

중간체 V3 의 합성

아세톤 (60 mL) 중의 V2 (1.4 g, 4.8 mmol), U3 (1.44 g, 4.8 mmol), K₂CO₃ (1.65 g, 12 mmol) 및 NaI (0.72 g, 4.8 mmol)를 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Merck, 이동상 헵탄/CH₂Cl₂ 85/15)로 정제하여 중간체 V3 (2.3 g, 94% 수율)을 수득하였다.

중간체 W3 의 합성

V3 (2.3 g, 4.5 mmol)를 NH₃ (수 중 30%) (40 mL) 및 THF (40 mL) 중에서 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 EtOH (2회)의 공비 증발에 의해 건조시켰다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Merck, 이동상 헵탄/AcOEt 85/15)로 정제하여 중간체 W3 (1.25 g, 56% 수율)을 수득하였다.

중간체 X3 의 합성

3-클로로퍼옥시벤조산 (2.04 g, 8.2 mmol)을 실온에서 CH₂Cl₂ (70 mL) 중의 W3 (1.3 g, 3.3 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (5 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 두 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층을 NaHCO₃의 포화 수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제 생성물을 임의의 추가 정제 없이 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 Z3 의 합성

N₂ 흐름 하, 0℃에서, NaH (457 mg, 11.4 mmol)를 THF (100 mL) 중의 Y3 (2.1 ml, 22.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이후에 X3 (2 g, 3.8 mmol)을 0℃에서 용액 상태로 20 mL의 THF에 첨가하였다. 혼합물을 5℃에서 15분 동안 교반하였다. 얼음을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40㎛, 80g) 상에서 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (98/2/0.1) 중에서 크로마토그래피로 정제하여 중간체 Z3 (1 g, 48% 수율)을 수득하였다.

중간체 A4의 합성

테트라부틸암모늄 플루오라이드 (0.653 mL, 0.65 mmol)를 실온에서 THF (10 mL) 중의 Z3 (0.3 g, 0.544 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물에 부었다. 유기층을 분리하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 중간체 A4 (220 mg, 92% 수율)를 수득하였다.

중간체 B4의 합성

N₂ 흐름 하, 실온에서, THF (10 mL) 중의 디-3차-부틸 아조디카복실레이트 (0.72 ml, 3.2 mmol)의 용액을 THF (120 mL) 중의 A4 (0.7 g, 1.6 mmol) 및 PPh₃ (0.84 g, 3.2 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물에 붓고, EtOAc를 첨가하였다. 혼합물을 NaHCO₃의 10% 수용액으로 염기화시키고, 이후에 유기층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 건조될 때까지 증발시켜 중간체 B4 (60 mg, 9% 수율)로 수득하였다.

최종 화합물 12의 합성

철 분말 (80 mg, 1.43 mmol)을 AcOH (1.3 mL) 및 물 (0.5 mL) 중의 B4 (60 mg, 0.143 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH 90/10 및 물로 희석시켰다. 수층을 K₂CO₃로 포화시키고, CH₂Cl₂/MeOH 90/10로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40㎛, 40 g) 상에서 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (90/10/0.5) 중에서 크로마토그래피로 정제하였다. CH₃CN/디이소프로필에테르로부터 결정화하여 최종 화합물 12 (14 mg, 29% 수율)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 13

중간체 C4 의 합성

4-펜텐-1-올 (75 mL) 중의 Z2 (2.12 g, 4.87 mmol) 및 NEt₃ (677 ㎕, 4.87 mmol)의 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 90 g Merck, 이동상 구배: 헵탄/CH₂Cl₂ 50/50에서 0/100)로 정제하여 중간체 C4 (1.6 g, 66% 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 D4 의 합성

Grubbs 촉매 제2 세대 (41 mg, 48.47 mmol)를 실온에서 CH₂Cl₂ (150 mL) 중의 C4 (208 mg, 0.47 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (Silicycle^®로부터의 Ru 스캐빈져(scavenger)) (298 mg, 0.388 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 용액을 셀라이트로 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 90 g Merck, 이동상 구배: 헵탄/AcOEt 100/0에서 70/30로)로 정제하였다. 기대되는 생성물을 함유한 분획들을 모으고, 일부 증발시키고, 침전물을 여과하여 736 mg의 중간체 D4 (73% 수율, 6%의 Z 이성질체 함유)를 수득하였다. 297 mg의 이러한 배치를 분취용 LC (안정성 실리카 5㎛ 150x30.0mm, 이동상 구배: 헵탄/AcOEt 85/15에서 0/100로)로 정제하여 195 mg의 중간체 D4를 백색 고체로서 수득하였다(순수한 이성질체 E). 이성질체 E의 순도를 분석적 역상 크로마토그래피 (컬럼 Nucleodur Sphinx 150X4.6mm, 이동상: 구배 70% MeOH, 30% HCOOH 0.1%에서 100% MeOH로)로 체크하였다. 순수한 E 이성질체의 이러한 배치를 다음 단계에서 사용하였다.

최종 화합물 16의 합성

철 분말 (158 mg, 2.83 mmol)을 AcOH (8 mL) 및 물 (741 ㎕) 중의 D4 (195 mg, 0.47 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 0 내지 400 W 범위의 파워 출력을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator EXP 60)를 이용하여 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 셀라이트 패드 상에서 여과하고 DMF (250 mL)로 린싱하였다. 여액을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH (80:20) 중에서 분쇄하였다. 침전물을 여과하고, CH₂Cl₂/MeOH (80:20)로 린싱하였다. 얻어진 황색 고체를 DMF 중에 용해시키고, 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH (90:10) 중에서 분쇄하였다. 침전물을 여과하여 최종 화합물 16을 백색 고체 (17 mg, 10% 수율)로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 14

중간체 E4 의 합성

3-부텐-1-올 (68 mL) 중의 Z2 (3.8 g, 5.06 mmol) 및 NEt₃ (844 ㎕, 6.07 mmol)의 용액을 실온에서 20시간 동안 교반하고, 이후에 30℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에서 제거하여 5 g의 황색 오일을 수득하였다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 120 g Grace, 이동상 구배: 헵탄/CH₂Cl₂ 50/50에서 10/90로)로 정제하였다. 기대되는 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 하에 제거하여 2.2 g의 중간체 E4를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 F4 및 G4 의 합성:

E4 (1.34 g, 3.14 mmol)를 건조 CH₂Cl₂ (1 L)에 첨가하고, 30분 동안 용액을 통한 N₂ 버블링에 의해 얻어진 혼합물을 탈기시켰다. Grubbs 촉매 제2 세대 (134 mg, 0.157 mmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (0.965 g, 1.25 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 용액을 셀라이트 상에서 여과하였다. 여액을 진공 하에서 증발시켜 1.89 g의 갈색 고형물을 수득하였다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 50 g Merck, 이동상 구배: 헵탄/AcOEt 100/0에서 80/20로)로 정제하였다. 기대되는 생성물을 함유한 분획들을 일부 증발시키고(AcOEt), 생성물을 침전시키고, 여과하여 162 mg의 중간체 F4 (13% 수율, E 이성질체)를 황색 고체로서 수득하였다. 기대되는 생성물을 함유한 다른 분획들을 합하고, 용매를 진공 하에서 제거하여 244 mg의 백색 고형물 (F4 (E 이성질체) 및 G4 (Z 이성질체)의 혼합물)을 수득하였다.

동일한 반응을 병행하여 895 mg의 E4로부터 출발하여 수행하였다. 이러한 반응으로부터, 110 mg의 F4의 배치를 분리하였다 (13% 수율, 이성질체 E). 184 mg의 제2 배치를 수득하였다 (F4 (E 이성질체) 및 G4 (Z 이성질체)의 혼합물).

E 및 Z 이성질체의 혼합물을 함유한 두 배치를 합하고 (428 mg), 분취용 LC (안정성 실리카 5㎛ 150x30.0mm, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH 100/0에서 98/2로)로 정제하여 175 mg의 F4 (14% 수율, 이성질체 E)를 황색 고체로서, 및 130 mg의 G4 (10% 수율, 이성질체 Z)를 백색 고체로서 수득하였다.

전체적으로, 447 mg의 중간체 F4 (E 이성질체) 및 130 mg의 중간체 G4 (Z 이성질체)를 수득하였다.

최종 화합물 15의 합성:

철 (93 mg, 1.67 mmol)을 아세트산 (5 mL) 및 증류수 (330 ㎕) 중의 F4 (111 mg, 0.278 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 0 내지 400 W 범위의 파워 출력을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator EXP 60)를 이용하여 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 진공 하에서 농축하고, AcOH/H₂O (50:50) 중에서 분쇄하였다. 침전물을 여과하여, 회색 고형물을 수득하고, 이를 DMF 중에서 용해시키고, 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 여액을 감압 하에 농축하여 백색-갈색 고형물을 수득하였다. 이러한 고형물을 AcOH/H₂O (50:50) 중에서 분쇄시키고, 침전물을 여과하여 40 mg의 최종 화합물 15 (45% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 17의 합성:

철 (109 mg, 1.95 mmol)을 아세트산 (6 mL) 및 증류수 (390 ㎕) 중의 G4 (130 mg, 0.325 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 1시간 30분 동안 0 내지 400W 범위의 파워 출력을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator EXP 60)를 이용하여 100℃에서 가열하였다. 혼합물을 진공하에 농축하고, AcOH/H₂O (50:50)의 용액 중에서 분쇄하였다. 침전물을 여과하여 회색 고형물을 수득하였고, 이를 AcOH/H₂O (50:50) 중에서 분쇄하였고, 침전물을 여과하고, DMF 중에 용해시켰다. 혼합물을 셀라이트 패드 상에서 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하여 백색 고형물을 수득하였다. 이러한 고형물을 AcOH/H₂O (50:50)의 차가운 용액 중에서 분쇄하고, 침전물을 여과하여 18 mg의 최종 화합물 17 (17% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 15

중간체 I4 의 합성:

CH₃CN (120 mL) 중의 X3 (4 g, 7.61 mmol), H4 (1.1 g, 9.13 mmol) 및 K₂CO₃ (1.3 g, 9.13 mmol)의 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 미정제물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 98/2/0.1 중에서 실리카 겔 (15-40 ㎛; 120 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하여 2.7 g (63% 수율)의 중간체 I4를 수득하였다.

중간체 J4 의 합성:

테트라부틸암모늄 플루오라이드 (5.6 mL, 5.56 mmol)를 실온에서 THF (125 mL) 중의 I4 (2.6 g, 4.64 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물에 부었다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에서 증발시켰다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 이동상: CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 96/4/0.1)로 정제하여 1.82 g의 중간체 J4를 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 K4 의 합성:

CH₃CN (60 ml) 중의 J4 (1.82 g, 4.08 mmol), Cs₂CO₃ (1.47 g, 4.49 mmol), 알릴 브로마이드 (0.39 mL, 4.49 mmol)의 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하고, 이후에 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물에 붓고, EtOAc를 첨가하였다. 혼합물을 수중 NaHCO₃ 10%의 수용액으로 염기화하였다. 유기층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 건조될 때까지 증발시켜 1.94 g의 중간체 K4를 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 L4 의 합성:

Grubbs 촉매 제2 세대 (100 mg, 0.117 mmol)를 실온에서 CH₂Cl₂ (225 mL) 중의 K4 (570 mg, 1.17 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 36시간 동안 교반하였다.

SiliaBond^® DMT (1.8 g)를 반응 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 CH₂Cl₂로 세척하였다. 여액을 감압 하에 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 40 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH 97.5/2.5/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켰다. 건조 고형물을 (AMINO 6㎛ 150x21.2mm) 상에서 이동상 (80% CO₂, 20% MeOH)을 이용하여 아키랄(achiral) SFC에 의해 다시 정제하여 182 mg (34% 수율)의 중간체 L4 (E 이성질체)를 수득하였다.

최종 화합물 18의 합성:

철 (200 mg, 3.58 mmol)을 아세트산 (4.3 mL) 및 증류수 (0.85 mL) 중의 L4 (182 mg, 0.40 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 6.5 mL의 아세트산을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하고, 이후에 80℃에서 2시간 동안 교반하였다.

미정제물을 (X-Bridge-C18 5㎛ 30*150mm) 상에서 이동상 (구배 90% 포름산 0.1%, 10% CH₃CN에서 0% 포름산 0.1%, 100% CH₃CN로)을 이용하여 역상으로 정제하여 44 mg (29% 수율)의 최종 화합물 18을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 16

중간체 M4 의 합성:

알릴 알코올 (14 mL) 중의 X3 (1.4 g, 2.66 mmol) 및 NEt₃ (0.44 mL, 0.46 mmol)의 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. CH₂Cl₂ 및 H₂O를 첨가하고, 혼합물을 디켄팅하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 감압 하에 농축하였다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Merck, 이동상 헵탄/AcOEt 85/15)로 정제하여 500 mg (37% 수율)의 중간체 M4를 수득하였다.

중간체 N4 의 합성:

테트라부틸암모늄 플루오라이드 (4.5 mL, 4.5 mmol)를 실온에서 THF (90 mL) 중의 M4 (1.9 g, 3.77 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물에 부었다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Merck, 이동상 헵탄/AcOEt 70/30)로 정제하여 900 mg (61% 수율)의 중간체 N4를 수득하였다.

중간체 O4 의 합성:

CH₃CN (100 mL) 중의 N4 (2.5 g, 6.42 mmol), Cs₂CO₃ (3.14 g, 9.63 mmol), 알릴 브로마이드 (0.83 mL, 9.63 mmol)의 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 얼음-물에 붓고, EtOAc를 첨가하였다. 혼합물을 NaHCO₃의 포화수용액으로 염기화시켰다. 이후에, 유기층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 미정제 화합물을 헵탄/AcOEt 80/20 중에서 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하여 1.47 g (53% 수율)의 중간체 O4를 수득하였다.

중간체 P4 및 Q4 의 합성:

건조 디클로로에탄 (220 mL) 중의 O4 (400 mg, 0.93 mol) 및 헥산 (186 ㎕, 0.19 mmol) 중의 클로로사이클로헥실보란 1 M 용액의 용액을 N₂ 흐름 하, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 0.033 당량의 Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (20 mg, 0.031 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후에, 튜브를 개방하고, 0.033 당량의 Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (20mg, 0.031 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 튜브를 개방하고, 0.033 당량의 Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (20mg, 0.031 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (1.43g, 0.745 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 농축하였다. 미정제 생성물을 먼저 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Merck, 이동상 헵탄/AcOEt 80/20)로 정제하고 이후에 (AMINO 6㎛ 150x21.2mm) 상에서 이동상 (83% CO₂, 17% MeOH)을 이용하여 아키랄 SFC로 정제하여 55 mg (15%)의 중간체 P4 (이성질체 E) 및 80 mg (21% 수율)의 중간체 Q4 (이성질체 Z)를 수득하였다.

최종 화합물 23의 합성:

철 (264 mg, 4.73 mmol)을 아세트산 (10 mL) 및 증류수 (2 mL) 중의 P4 (190 mg, 0.47 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH 90/10 및 물로 희석시켰다. 혼합물을 K₂CO₃로 포화시키고, CH₂Cl₂/MeOH 90/10으로 추출하였다. 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH(90/10/0.5) 중에서 실리카 겔 (15-40 ㎛, 40 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하여 40 mg (26% 수율)의 최종 화합물 23을 수득하였다.

최종 화합물 22의 합성:

철 (334 mg, 5.98 mmol)을 아세트산 (12 mL) 및 물 (2.5 mL) 중의 Q4 (240 mg, 0.6 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 CH₂Cl₂/MeOH 90/10 및 물로 희석시켰다. 혼합물을 K₂CO₃로 포화시키고, CH₂Cl₂/MeOH 90/10로 추출하였다. 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에서 농축하였다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH (90/10/0.5) 중에서 실리카 겔 (15-40 ㎛, 40 g) 상에서 크로마토그래피로 정제하여 70 mg (36% 수율)의 최종 화합물 22를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 17

중간체 T4 의 합성:

0℃에서, NaH (695 mg, 17.36 mmol)를 THF (70 mL) 중의 S4 (1.52 g, 8.68 mmol)에 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 이후에 0℃에서 THF (45 mL) 중의 R4 (4.6 g, 17.36 mmol)에 적가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반하였다. 매우 적은 양의 얼음을 첨가하고, 기대되는 화합물을 AcOEt로 추출하였다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 (15-40 ㎛; 220 g) 상에서 헵탄/AcOEt 80/20 내지 60/40 중에서 크로마토그래피로 정제하여 1.44 g (23% 수율)의 중간체 T4를 수득하였다.

중간체 U4 의 합성:

아세톤 (25 mL) 중의 V2 (1 g, 3.42 mmol), T4 (1.35 g, 3.76 mmol), K₂CO₃ (1.18 g, 8.54 mmol) 및 NaI (512 mg, 3.42 mmol)의 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 침전물을 여과하고, 아세톤으로 세척하고, 여액을 감압 하에서 농축하였다. 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼 (15-41 ㎛; 40 g) 상에서 헵탄/AcOEt 80/20 중에서 크로마토그래피로 정제하여 1.4 g (72% 수율)의 중간체 U4를 수득하였다.

중간체 V4 의 합성:

U4 (1.5 g, 2.63 mmol)를 물 (30 mL) 및 THF (30 mL) 중의 NH₃ 30% 중에서 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 하에 농축하고, 잔류물을 EtOH (2회)와의 공비 증류에 의해 건조시켰다. 미정제 생성물 (1.3 g, 89% 수율)을 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 W4 의 합성:

실온에서, 파라-톨루엔 설폰산 일수화물 (81 mg, 0.47 mmol)을 MeOH (26 mL) 및 물 (2.60 mL) 중의 V4 (2.60 g, 4.72 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 이후에 60℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 수중 K₂CO₃ 10%로 염기화하였다. 유기층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 2 g (90% 수율)의 중간체 W4를 수득하였다.

중간체 X4의 합성:

CH₂Cl₂ (40 mL) 중의 메타-클로로퍼옥시벤조산 (951 mg, 3.86 mmol)을 실온에서 CH₂Cl₂ (10 mL) 중의 W4 (1.80 g, 3.86 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (2 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 두 층을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH: 95/5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 1.4 g (75% 수율)의 중간체 X4를 수득하였다.

중간체 Y4의 합성:

N₂ 흐름 하, 0℃에서, tBuOK (577 mg, 5.14 mmol)를 THF (418 mL) 중의 X4 (1.24 g, 2.57 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (15-40㎛, 50g, CH₂Cl₂/CH₃OH 98/2) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 85 mg (7% 수율)의 중간체 Y4를 수득하였다.

최종 화합물 24의 합성:

철 (68 mg, 1.22 mmol)을 아세트산 (2.2 mL) 및 물 (0.24 mL) 중의 Y4 (85 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, AcOH로 세척하고, 여액을 감압 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 DMF에 용해시키고, 2 g의 SiO₂ 63-200 ㎛를 첨가하였다. 얻어진 현탁액을 건조될 때까지 증발시키고, 25 g 정제 카트리지의 상단 상에 올려놓았다.

정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 25 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 31 mg을 수득하였다. 화합물을 CH₃CN으로부터 고형화하고, 침전물을 여과하고, 건조시켜 22 mg (32% 수율)의 최종 화합물 24를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 18

중간체 A5의 합성:

0℃에서, 디이소프로필아조디카복실레이트 (20.4 mL; 102.5 mmol)를 THF (500 mL) 중의 V2 (20 g; 68.33 mmol), Z4 (12.2 g; 68.33 mmol) 및 PPh₃ (27 g; 102.5 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 330 g, CH₂Cl₂/헵탄 70/30) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 12 g (39% 수율)의 중간체 A5를 수득하였다.

중간체 B5의 합성:

물 중의 NH₃ 30% (100 mL) 및 THF (100 mL) 중의 A5 (5.4 g; 11.92 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.3시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 톨루엔에 용해시키고, 농축하여 (이러한 공정을 2회 반복함) 5.15 g의 중간체 B5를 수득하였다.

중간체 C5의 합성:

0℃에서, CH₂Cl₂ (20 mL) 중의 3-클로로퍼벤조산 (2.93 g; 11.86 mmol)을 CH₂Cl₂ (100 mL) 중의 B5 (5.14 g; 11.86 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (2 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 2 층을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층을 NaHCO₃ 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 6.7 g의 중간체 C5 (설폰 유사체 함유)를 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 D5의 합성:

알릴 알코올 (47.6 mL) 중의 C5 (5.6 g; 12.46 mmol), NEt₃ (2.6 mL; 18.69 mmol)의 혼합물을 100℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 330 g, 헵탄/AcOEt 80/20) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 3.45 g의 중간체 D5 (62% 수율)를 수득하였다.

중간체 E5 및 F5의 합성:

실험을 2 g의 D5의 네 개의 배치에서 수행하였다.

Grubbs 촉매 제2 세대 (1.54 g; 1.80 mmol)를 CH₂Cl₂ 추가 건조물 (3470 mL) 중의 D5 (8 g; 18.04 mmol)의 혼합물에 3차례 (3*514 mg) (t = 0, t = 12 h, t = 24 h에) 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (24 g; 14.43 mmol)를 첨가하고, 이후에 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 고형물을 여과하고, 용매를 증발시켜 8.2 g을 수득하였다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 330 g, CH₂Cl₂/MeOH 99.5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시키고, 여과하고, CH₂Cl₂/디이소프로필에테르 중의 고형물을 건조시켜 4.55 g의 E5 및 F5의 혼합물을 수득하였다. 두 이성질체를 아키랄 SFC (정지상: Chiralpak IA 5 ㎛ 250*20 mm), 이동상: 70% CO₂, 30% MeOH)로 분리하여 4.07 g의 중간체 E5 (이성질체 E, 54% 수율) 및 187 mg의 중간체 F5 (이성질체 Z, 2.5% 수율)를 수득하였다.

최종 화합물 84의 합성:

실온에서, TiCl₃ (5.5 mL; 6.45 mmol)를 THF (20 mL) 중의 F5 (134 mg; 0.32 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 0℃에서, 혼합물을 K₂CO₃ 분말로 염기화하였다. 얻어진 탁한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트를 AcOEt/CH₃OH 8/2의 용액으로 세척하였다. 여액을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 182 mg의 미정제 화합물을 수득하였다. MeOH를 첨가하고, 고체가 나타났으며, 이를 여과하고, 90℃에서 진공 하에 건조시켜 66 mg의 최종 화합물 84 (60% 수율)를 수득하였다.

최종 화합물 32의 합성:

실온에서, TiCl₃ (60 mL; 69.811 mmol)을 THF (130 mL) 중의 E5 (1.45 g; 3.49 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 0℃에서, 혼합물을 K₂CO₃ 분말로 염기화하였다. 얻어진 탁한 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트를 AcOEt/CH₃OH 8/2의 용액으로 세척하였다. 여액을 일부 증발시키고, 백색 고형물을 여과하고, 진공 하에서 건조시킨 후에 1.1 g의 미정제 화합물을 수득하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (정지상: 건조물 로딩 220 g + 10 g 15-40 ㎛ Grace), 이동상: 0.5% NH₄OH, 97% CH₂Cl₂, 3% MeOH에서 0.5% NH₄OH, 90% CH₂Cl₂, 10% MeOH로)로 정제하고, 용매를 증발시키고, 진공 하에 건조시킨 후에 730 mg의 최종 화합물 32 (62% 수율)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 19

중간체 H5의 합성:

중간체 G5를 중간체 P4에 대해 기술된 절차를 이용하여 합성하였다.

CH₃OH/THF (50/50)(20 mL) 중의 G5 (250 mg, 0.60 mmol), PtO₂ (25 mg)의 혼합물을 30분 동안 H₂의 대기압 하에서 수소화하였다. 촉매를 여과로 제거하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 (불규칙 15-40 ㎛ 30 g Merck), 이동상 (80% 헵탄, 20% AcOEt) 상에서 분취용 LC로 정제하였다. 얻어진 화합물을 (2-에틸피리딘 6㎛ 150x30mm) 상에서 이동상 (70% CO₂, 30% CH₃OH)을 이용하여 아키랄 SFC로 추가로 정제하여 113 mg의 중간체 H5 (45% 수율)를 수득하였다.

최종 화합물 38의 합성:

철 (147 mg; 2.63 mmol)을 아세트산 (7m L) 및 물 (1.5 mL) 중의 H5 (110 mg; 0.26 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서, 6시간 동안 50℃에서 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축하고, 잔류물을 DMF/THF의 혼합물에 용해시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 증발시켰다. 미정제 생성물을 아세트산/물로 희석시키고, 침전물을 여과하고, CH₃OH로 세척하고, 건조시켜 55 mg의 최종 화합물 38 (61% 수율)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 20

중간체 I5의 합성:

반응을 15 g의 V2의 두 배치에서 수행하였다.

여기에는 15 g의 한 배치에 대한 프로토콜이다:

NH₃ (이소프로판올 중 2M) (51 mL; 102 mmol)를 실온에서 2시간 동안에 THF (250 mL) 중의 V2 (15 g; 51.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 두 배치를 혼합하였다. 현탁액을 건조될 때까지 농축하였다. 고형물을 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 유기층을 물 (1회)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 28.5 g의 중간체 I5 (100% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 J5의 합성:

반응을 14 g의 I5의 두 배치에서 수행하였다.

여기에는 14 g의 한 배치에 대한 프로토콜이다:

CH₂Cl₂ (500 mL) 중의 메타-클로로퍼벤조산 (9.58 g; 40.0 mmol)의 용액을 실온에서 CH₂Cl₂ (2 L) 중의 I5 (14 g; 33.3 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하여 18 g의 분획 1을 수득하였다. Na₂S₂O₃의 10% 수용액 및 NaHCO₃의 포화 수용액을 여액에 첨가하였다. 층들을 분리하고, 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 중에 제거하여 14 g의 중간체 J5를 황색 고체로서 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 반응 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 K5의 합성:

알릴 알코올 (120 mL) 중의 J5 (6 g; 20.7 mmol) 및 NEt₃ (3.2 mL; 22.8 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중에 제거하여 황색 고형물을 수득하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 120 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc, 100/0에서 85/15로)로 정제하여 4 g의 중간체 K5를 엷은 황색 고형물 (68% 수율)로서 수득하였다.

중간체 M5 의 합성:

아세톤 (250 mL) 중의 L5 (5.2 g; 32.2 mmol) 및 K₂CO₃ (11.1 g; 80.5 mmol)의 현탁액에 4-브로모-1-부텐 (4.1 mL; 40.2 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. 4-브로모-1-부텐 (4.1 mL; 40.2 mmol) 및 NaI (0.965 g; 6.43 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 5일 동안 가열하였고, 그러한 동안에 TLC로 관찰하여 완전한 전환을 달성하기 위하여 4-브로모-1-부텐 (2x4.1 mL; 80.4 mmol), K₂CO₃ (2x2.22 g; 32.2 mmol), 및 NaI (3.86 g; 25.7 mmol)의 연속적인 첨가를 수행하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 진공 중에 농축하여 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 (불규칙한 SiOH 20-45 ㎛, 450 g Matrex) 상에서 이동상 (0.7% NH₄OH, 85% 헵탄, 15% iPrOH)을 이용하여 분취용 LC로 정제하여 3.6 g의 중간체 M5를 오렌지 오일 (62% 수율)로서 수득하였다.

중간체 N5의 합성:

반응을 3 배치로 수행하였다.

한 배치에 대한 통상적인 절차:

질소 하에서, 건조 THF (20 mL) 중의 K5 (667 mg; 2.35 mmol), M5 (633 mg; 3.53 mmol), PPh₃ (926 mg; 3.53 mmol) 및 디-3차-부틸아조디카복실레이트 (813 mg; 3.53 mmol)의 용액을 0 내지 400 W 범위의 파워 출력을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator EXP 60)를 이용하여 130℃에서 1시간 동안 가열하였다.

3 배치를 합하고, 진공 하에 증발시켜 9.8 g의 갈색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 (불규칙한 SiOH 20-45 ㎛ 450 g Matrex), 이동상 (구배 60% 헵탄, 40% AcOEt에서 50% 헵탄, 50% AcOEt까지) 상에서 분취용 LC로 정제하여 1.1 g의 중간체 N5 (22% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 O5 및 P5의 합성:

건조 디클로로에탄 (452 mL) 중의 N5 (950 mg; 1.35 mmol) 및 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1 M) (270 ㎕; 270 μmol)의 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (35 mg; 56.2 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 추가 촉매 (35 mg; 56.2 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 24시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (57 mg; 90.9 mmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (3.11 g; 1.62 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, 이후에 진한 고형물을 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켰다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, Merck 90 g; 이동상 구배: 헵탄/iPrOH 90/10에서 65/35로)로 정제하여 0.12 g의 중간체 O5 (13% 수율), 0.47 g의 중간체 O5 및 P5의 혼합물 (52% 수율) 및 28 mg의 중간체 P5 (3% 수율)를 수득하였다.

중간체 O5 및 P5의 혼합물을 분취용 LC (안정성 실리카 5 ㎛ 150x30.0 mm, 이동상 구배: 헵탄/AcOEt 85/15에서 0/100으로)로 추가로 정제하여 120 mg의 중간체 O5 및 224 mg의 중간체 P5를 수득하였다.

전체 수율: 54% (E-이성질체 O5: 28%, Z-이성질체 P5: 26%).

최종 화합물 39의 합성:

아세트산 (4.3 mL) 및 물 (0.4 mL) 중의 O5 (240 mg; 0.355 mmol) 및 철 (119 mg; 2.13 mmol)의 혼합물을 0 내지 400 W 범위의 파워 출력을 갖는 하나의 단일 모드 마이크로파 (Biotage Initiator EXP 60)를 이용하여 100℃에서 1시간 동안 가열하였다. 용매를 진공 중에 제거하고, 잔류물을 DMF에 용해시켰다. 혼합물을 셀라이트로 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. SiliaBond^® 이미다졸 (Silicycle^®로부터의 Fe 스캐빈져) (3.67 g; 4.25 mmol)을 DMF (50 mL) 중의 분획 1에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 셀라이트로 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 100 mg의 분획 2를 수득하였다. 분획 2를 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 25 g Merck, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 95/5/0.5에서 85/15/1.5까지)로 정제하여 9 mg의 최종 화합물 39를 백색 고형물 (7% 수율)로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 21

중간체 Q5의 합성:

반응을 20 g의 중간체 J5의 세 배치에서 수행하였다.

여기에는 20 g의 한 배치에 대한 프로토콜이다:

3-부텐-1-올 (500 mL) 중의 J5 (20 g; 69.1 mmol) 및 NEt₃ (11.5 mL; 83.0 mmol)의 용액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중에 제거하여 황색 고형물을 수득하였다. 합한 3개의 반응물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 750 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 80/20으로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 39 g의 중간체 Q5 (63% 수율)를 수득하였다.

중간체 S5 의 합성:

아세톤 (690 mL) 중의 Q5 (12.8 g; 43.2 mmol), R5 (16.1 g; 77.8 mmol), K₂CO₃ (14.9 g; 108 mmol) 및 NaI (6.48 g; 43.2 mmol)를 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 혼합물을 75℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 다른 배치 (67.46 mmol의 Q5와의 반응)와 합하여 분취용 LC (2개의 연속적인 크로마토그래피, 불규칙한 SiOH, 15-40 ㎛, 220 g Grace, 액체 주입, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 50/50으로)로 정제하여 1.97 g의 분획 2를 갈색 고체로서, 및 10.7 g의 분획 3을 갈색 고체로서 수득하였다.

두 분획을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 희석시켰다. 헵탄을 첨가하고, 혼합물을 진공 중에 일부 증발시켜 엷은 갈색 침전물을 수득하였고, 이를 여과하여 11.26 g의 중간체 S5를 오프-화이트(off-white) 고형물 (59% 수율)로서 수득하였다.

중간체 T5 및 U5 의 합성:

이러한 반응을 각각 2.75 g 및 1.51 g의 중간체 S5를 사용하는 2 배치에서 수행하였다.

1 배치에 대한 통상적인 절차:

15분 동안 N₂ 버블링에 의해 탈기된 건조 디클로로에탄 (908 mL) 중의 S5 (1.51 g; 3.40 mmol) 및 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M) (0.679 mL; 0.679 mmol)의 용액을 N₂ 분위기 하, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (213 mg; 0.340 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (4.45 g; 2.72 mmol)를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 2 배치를 합하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 중에 증발시켜 4.2 g의 갈색 고형물을 수득하였다. 고형물을 분취용 LC (규칙적인 SiOH, 30 ㎛, 200 g Interchim, 이동상 구배: CH₂Cl₂/AcOEt 100/0에서 25/75로)로 정제하여 2.5 g의 분획 1 및 1.3 g의 중간체 T5 (32%, E 이성질체)를 수득하였다. 분획 1을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 이후에 헵탄을 첨가하였다. CH₂Cl₂를 진공 중에 일부 증발시키고, 얻어진 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 1.52 g의 중간체 U5 (38% 수율, Z 이성질체)를 수득하였다.

최종 화합물 45의 합성:

이러한 반응을 각각 0.5 g, 3개의 1 g, 및 2개의 1.45 g의 중간체 U5를 이용한 5 배치에서 수행하였다.

이는 1.45 g의 2 배치에 대한 절차이다.

N₂ 분위기 하에서, U5 (1.45 g; 3.48 mmol)를 70℃에서 가열된 아세트산 (193 mL) 및 물 (19 mL)의 용액에 조금씩 첨가하였다. 완전한 용해 후에, 철 (1.17 g; 20.9 mmol)을 한번에 첨가하고, 혼합물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 2 배치를 합하고, 셀라이트 패드를 통해 뜨거운 상태로 여과하고, 셀라이트를 뜨거운 아세트산으로 린싱하였다. 얻어진 여액을 농축하여 갈색 잔류물을 수득하고, 이를 MeOH에 용해시키고, 초음파 처리하고, 가열하여 황색 침전물을 수득하고, 이를 여과하여 분획 1을 황색 고체로서 수득하였다. 분획 1을 아세트산 (30 mL)에 용해시키고, 일부 용해될 때까지 초음파 처리하였다. 물을 첨가하고 (700 mL), 얻어진 혼합물을 1시간 동안 초음파 처리하고, 0℃ (얼음욕)로 냉각시켜 침전물을 수득하고, 이를 여과하여 (유리 프릿 n°5) 오프-화이트 고형물을 수득하였다. 고형물을 MeOH에 용해시키고, 3개의 다른 배치 (0.5 g 및 2개의 1 g의 U5로 얻어짐)와 혼합하였다. 얻어진 혼합물을 초음파처리하고, 가열하고, 0℃ (얼음욕)로 냉각시키고, 얻어진 고형물을 여과하여 (유리 프릿 n°4) 3.5 g의 분획 2를 오프-화이트 고체로서 수득하였다. 분획 2를 마지막 배치 (1 g의 U5로 얻어짐)와 혼합하고, DMSO (280 mL)를 첨가하고, 혼합물을 완전히 용해될 때까지 100℃에서 가열하였다. 얻어진 용액을 여과하고, 여액을 물 (1.7 L)에 첨가하였다. 얻어진 침전물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하여 4.1 g의 분획 3을 오프-화이트 고체로서 수득하였다.

분획 3을 EtOH에 용해시키고, 45℃에서 2시간 동안 초음파 처리하였다. 얻어진 혼합물을 바로 여과하여 (유리 프릿 n°4) 3.63 g의 분획 4를 오프-화이트 고체로서 수득하였다. 분획 4를 MeOH (180 mL)에 용해시키고, 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 뜨거운 상태로 여과하여 3.47 g의 최종 화합물 45를 오프-화이트 고형물 (54% 수율)로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 22

중간체 W5 의 합성:

이러한 반응을 각각 0.2 g, 1.5 g, 및 4 g의 중간체 V5을 사용하는 3 배치에서 수행하였다.

이는 4 g 배치에 대한 절차이다.

V5 (4 g; 15.8 mmol), NaOH (2.52 g; 63.1 mmol) 및 3-부텐-1-올 (100 mL)을 90℃에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 분획 1을 갈색 오일로서 수득하였다. 분획 1을 두 개의 다른 배치와 합하여 분획 2를 수득하였다. 분획 2를 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 97/3/0.03에서 80/20/2로)로 정제하여 3.88 g의 중간체 W5를 오렌지색 고형물 (60% 수율)로서 수득하였다.

중간체 X5 의 합성:

HCl (수중 1M) (2 mL)을 실온에서 MeOH (160 mL) 중의 W5 (3.88 g; 13.4 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 얻어진 혼합물을 60℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이후에, HCl (수중 3 M) (2 mL)을 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 64시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 중에 농축하고, 얻어진 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 여과하고, 감압 하에 건조시켜 2.72 g의 중간체 X5를 엷은 갈색 고형물 (84% 수율)로서 수득하였다. 화합물을 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 Y5 의 합성:

W2 (2.34 g; 14.0 mmol)를 DMF (40 mL) 중의 X5 (2.62 g; 12.8 mmol) 및 K₂CO₃ (3.9 g; 28.1 mmol)의 교반된 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 70℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, MeOH로 희석시키고, 셀라이트 패드 상에서 여과하였다. 얻어진 여액을 진공 중에 농축하여 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 100/0/0에서 80/20/2로)로 정제하여 4.6 g의 오렌지 색의 고형물을 수득하였다. 고형물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 건조물 로딩, 이동상 구배: 헵탄/CH₂Cl₂/MeOH 100/0/0에서 0/90/10로)로 정제하여 3 g의 중간체 Y5를 엷은 오렌지 색의 고체로서 수득하였다. 화합물을 다음 단계에서 이러한 상태로 사용하였다.

최종 화합물 52의 합성:

이러한 반응을 250 mg의 중간체 Y5의 2 배치에서 수행하였다.

이는 250 mg의 1 배치에 대한 절차를 보고한 것이다.

슈랭크 플라스크(schlenk flask)에서, Y5 (250 mg; 0.745 mmol)를 건조 디클로로에탄 (250 mL)에 용해시키고, 20분 동안 용액을 통한 N₂ 버블링에 의해 용액을 탈기시켰다. 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M), (150 ㎕; 150 μmol)을 첨가하고, 얻어진 용액을 70℃에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (23 mg; 37.3 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 촉매 (23 mg; 37.3 μmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 교반하였다. 촉매 (9 mg; 14.9 μmol)를 다시 첨가하고, 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (1.19 g; 0.716 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 2 배치를 혼합하고, 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 얻어진 여액을 농축하여 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Merck, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 100/0/0에서 80/20/0.2로)로 정제하여 155 mg의 최종 화합물 52를 오프-화이트 고체 (E/Z 혼합물, 34% 수율)로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 23

중간체 A6의 합성:

아세톤 (150 mL) 중의 K5 (3.0 g; 10.6 mmol), Z5 (2.5 g; 11.7 mmol), K₂CO₃ (2.93 g; 21.2 mmol) 및 NaI (1.6 g; 10.6 mmol)를 75℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하고, 여액을 감압 하에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 90 g Merck, 이동상 구배: 헵탄/CH₂Cl₂/EtOAc 100/0/0에서 0/90/10로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 4.4 g의 중간체 A6 (90% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 B6 및 C6 의 합성:

본 반응은 1.5 g의 2 배치 및 1.2 g의 중간체 A6의 1 배치로 수행하였다.

하기는 1.5 g의 1 배치에 대한 절차를 기술한 것이다.

A6 (1.5 g; 3.27 mmol)을 건조 CH₂Cl₂ (900 mL)에 첨가하고, 30분 동안 용액을 통한 N₂ 버블링에 의해 얻어진 혼합물을 탈기시켰다. Grubbs 촉매 제2 세대 (92 mg; 108 μmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 촉매 (92 mg; 108 μmol)를 다시 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 촉매 (92 mg; 108 μmol)를 한번에 첨가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하, 실온에서 48시간 동안 교반하였다.

3 배치를 혼합하고, SiliaBond^® DMT (12 g; 7.31 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 갈색 고체로서 수득하였다. 분획 1을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 70 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 80/20로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 분획 2 및 분획 3을 수득하였다. 분획 2를 뜨거운 EtOH/아세톤에 용해시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 이후에, 침전물을 여과하고, 20 mL의 EtOH로 세척하고 (3회), 진공 중에 건조시켜 800 mg의 중간체 B6 (E/Z 혼합물)을 황색 고체로서 수득하였다.

분획 3을 뜨거운 EtOH/아세톤에 용해시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 이후에, 침전물을 여과하고, 15 mL의 EtOH로 세척하고 (3회), 진공 중에 건조시켜 300 mg의 중간체 B6 (E/Z 혼합물)을 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 B6 (100 mg)의 일부를 아키랄 SFC (정지상: AMINO 6㎛ 150x21.2 mm, 이동상: CO₂/MeOH; 75/25)로 정제하여 78 mg의 중간체 C6 (E 이성질체)을 황색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 57의 합성:

아세트산 (10 mL) 및 물 (1 mL) 중의 B6 (150 mg; 348 μmol) 및 철 (117 mg; 2.09 mmol)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 DMF에 용해시켰다. SiliaBond^® 이미다졸 (3.6 g; 4.17 mmol)을 첨가하고, 반응을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 중에 증발시켰다. 잔류물을 아세트산 및 물 (30:70)에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 분획 2를 수득하였다. 분획 2를 MeOH에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 분획 3을 수득하였다. 분획 3을 실리카 겔 패드 (이동상: DMF)를 통해 여과하고, 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 분획 4를 수득하였다. 분획 4를 DMF에 용해시켰다. SiliaBond^® 이미다졸 (3.6 g; 4.17 mmol)을 첨가하고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용액을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 5를 수득하였다. 분획 5를 아세트산 및 물 (70:30)에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 진공 하에 건조시켜 분획 6을 수득하였다. 분획 6을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 10 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 97/3/0.1에서 80/20/3으로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 35 mg의 분획 7을 백색 고체로서 수득하였다. 분획 7을 물에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, EtOH 및 Et₂O로 세척하고 (2회), 진공 하에 건조시켜 26 mg의 최종 화합물 57을 백색 고체 (21% 수율)로서 수득하였다.

중간체 D6 의 합성:

THF/MeOH (50/50) (60 mL) 중의 B6 (300 mg; 695 μmol), 윌킨슨 촉매(Wilkinson's catalyst) (64 mg; 69.5 μmol)의 혼합물을 7 bar 압력 하, 실온에서 20시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 갈색 고형물을 수득하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 25 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 80/20로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 305 mg의 중간체 D (정량 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 56의 합성:

아세트산 (30 mL) 및 물 (3 mL) 중의 D6 (250 mg; 577 μmol) 및 철 (193 mg; 3.46 mmol)의 혼합물을 120℃에서 6시간 동안 교반하고, 이후에 140℃에서 2시간 도안 교반하였다. 혼합물을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 DMF에 용해시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 2를 수득하였다. 분획 2를 AcOH 및 물 (30:70)에 용해시켰다. 용액을 CH₂Cl₂/MeOH (9:1) (2회)로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 분획 3을 수득하였다. 분획 3을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 12 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 97/3/0.1에서 80/20/3로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 90 mg의 최종 화합물 56 (44% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 60의 합성:

아세트산 (10 mL) 및 물 (1 mL) 중의 C6 (70 mg; 162 μmol) 및 철 (54 mg; 974 μmol)의 혼합물을 120℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공 중에 증발시켜 분획 1을 수득하였다. 분획 1을 DMF에 용해시키고, 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 분획 2를 수득하였다. 분획 2를 AcOH 및 물 (30:70)에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, EtOH로 세척하고, 이후에 Et₂O로 세척하고(2 회), 진공 하에 건조시켜 46 mg의 최종 화합물 60 (80% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 24

중간체 E6 의 합성:

중간체 E6 (E 및 Z 이성질체의 혼합물, 90 mg, 17% 수율)을 중간체 T5 및 U5에 대해 기술된 절차를 이용하여 합성하였다.

중간체 F6의 합성:

THF (7 mL) 및 MeOH (7 mL) 중의 E6 (90 mg; 216 μmol) 및 윌킨슨 촉매 (20 mg; 21.6 μmol)의 용액을 10분 동안 N₂ 버블링에 의해 탈기시켰다. 혼합물을 5 bar 압력 하, 실온에서 16시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 10분 동안 N₂ 버블링에 의해 탈기시키고, 윌킨슨 촉매 (40 mg; 43.2 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 10 bar 압력 하, 실온에서 16 시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 10분 동안 N₂ 버블링에 의해 탈기시키고, 윌킨슨 촉매 (20 mg; 21.6 μmol)를 첨가하였다. 혼합물을 10 bar 압력 하, 실온에서 16시간 동안 수소화하였다. 혼합물을 셀라이트 상에서 여과하고, 여액을 진공 중에 농축시켜 140 mg의 녹색 오일을 수득하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 4 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 80/20로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 60 mg의 중간체 F6 (66% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

최종 화합물 58의 합성:

아세트산 (4.2 mL) 및 물 (0.21 mL) 중의 F6 (76 mg; 0.182 mmol) 및 철 (81 mg; 1.45 mmol)의 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반하고, 이후에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켰다. 미정제 화합물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 25 g Merck, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₃aq 97/3/0.3에서 85/15/1.5로)로 정제하여 21 mg의 최종 화합물 58 (34% 수율)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 25

중간체 I6 의 합성:

0℃에서 THF (500 mL) 중의 G6 (21.11 g; 95.0 mmol)의 용액에 리튬 알루미늄 하이드라이드 비스(THF) (톨루엔 중 1M) (190 mmol; 190 mL)를 적가하였다. 용액을 0℃에서 1시간 30분 동안 교반하고, 이후에 실온에서 1시간 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 7.5 mL의 물을 조심스럽게 적가하고 이후에 7.5 mL의 수성 NaOH (5%) 및 최종적으로 15 mL의 물을 조심스럽게 적가하여 켄칭하였다. 30분의 추가 교반 후에, 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 EtOAc로 세척하고, 여액을 진공 하에 증발시켜 19.64 g (99% 수율)의 중간체 H6을 투명한 황색 오일로서 수득하였다.

SOCl₂ (73 mL; 1.01 mol)를 0℃에서 CH₂Cl₂ (450 mL) 중의 H6 (19.6 g; 101 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 톨루엔과의 공비 증류 (2회)로 건조시켜 23.6 g의 갈색 오일을 수득하였다. 갈색 오일을 CH₂Cl₂ 중에 용해시키고, 2 x 100 mL의 수성 NaOH 5%로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 증발시켜 20.5 g의 갈색 오일을 수득하였다. 미정제물을 분취용 LC (정지상: 불규칙한 SiOH 20-45㎛ 450g Matrex), 이동상: 구배 50% 헵탄, 50% CH₂Cl₂에서 0% 헵탄, 100% CH₂Cl₂로)로 정제하여 중간체 I6 (4.77 g; 22% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 J6 의 합성:

I6 (2.7 g; 12.7 mmol)을 아세톤 (180 mL) 중의 K5 (3 g; 10.6 mmol), K₂CO₃ (2.93 g; 21.2 mmol) 및 NaI (1.59 g; 10.6 mmol)의 용액에 첨가하고, 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응을 다른 배치 (200 mg의 K5)와 합하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 진공 중에서 농축하여 황색 고형물을 수득하였다. 고형물을 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 침전물을 여과하고, 여액을 진공 중에 농축하여 4.14 g의 황색 오일을 수득하였다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 120 g Grace, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc 100/0/에서 50/50로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 3.83 g의 황색 오일을 수득하였고, 이를 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 95/5로)로 다시 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 2.3 g (44% 수율)의 중간체 J6을 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 K6 및 L6 의 합성:

반응을 2 배치에서 수행하였다.

한 배치에 대한 통상적인 절차:

건조 디클로로에탄 (564 mL) 중의 J6 (940 mg; 2.05 mmol) 및 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M) (409 ㎕; 409 μmol)의 용액을 80℃ 및 N₂ 분위기 하에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (85 mg; 136 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 추가 촉매 (85 mg; 136 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 추가 촉매 (85 mg; 136 μmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 2 배치를 합하고, SiliaBond^® 디아민 (Silicycle^®로부터의 Ru 스캐빈져) (2.48 g; 3.97 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 여액을 진공 중에 농축하여 1.75 g의 검정색 오일을 수득하였다. 이러한 배치를 다른 하나 (0.48 mmol 스케일)와 합하여 2.03 g의 검정색 오일을 수득하였다. 검정색 오일을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 50 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAc 100/0에서 98/2로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 70 mg의 분획 1 (중간체 K6, Z 이성질체), 160 mg의 분획 2 (중간체 K6 및 L6 (75/25)의 혼합물) 및 116 mg의 분획 3 (중간체 K6 및 L6 (94/6)의 혼합물)을 수득하였다. 분획 2를 아키랄 SFC (정지상: 아미노 6 ㎛ 150x21.2 mm, 이동상: 85% CO₂, 15% MeOH)로 정제하여 45 mg의 중간체 L6 (4% 수율, E 이성질체)을 황색 오일로서, 그리고 176 mg의 중간체 K6 (16% 수율, Z 이성질체)을 백색 오일로서 수득하였다(전체 수율: 27%).

최종 화합물 65의 합성:

철 (182 mg; 3.26 mmol)을 아세트산 (10 mL) 및 물 (480 ㎕) 중의 K6 (176 mg; 0.408 mmol)의 용액에 첨가하였다. 혼합물을 70℃에서 1시간 동안 교반하고, 이후에 건조될 때까지 진공 중에서 농축하였다. DMF를 첨가하고, 혼합물을 가열하고, 셀라이트를 통해 뜨거운 상태로 여과하고, 셀라이트를 DMF로 린싱하였다. SiliaBond^® 이미다졸 (5.63 g; 26.6 mmol)을 여액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 셀라이트를 DMF로 린싱하고, 여액을 진공 중에 농축하였다. 잔류물을 아세트산 (1 mL)에 용해시키고, 이후에 물을 첨가하고, 혼합물을 0℃로 냉각시켜, 침전을 야기시켰다. 침전물을 여과하여 오프-화이트 고형물을 수득하였다. 고형물을 EtOH에 용해시키고, 80℃로 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 침전물을 여과하여 50 mg의 백색 고형물을 수득하였다. 고형물을 진공 중에서 밤새 건조시키고, 이후에 뜨거운 DMF에 용해시키고, SiliaBond^® 이미다졸 (2 g; 2.32 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 셀라이트를 DMF로 린싱하고, 여액을 진공 중에 농축하여 44 mg의 최종 화합물 65 (30% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 75의 합성:

최종 화합물 75 (11 mg, 30% 수율)를 45 mg의 중간체 L6로부터 출발하여, 최종 화합물 65에 대해 기술된 절차를 이용하여 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 26

중간체 N6 및 O6 의 합성:

DMF (50 mL) 중의 R5 (8.7 g; 47.6 mmol)를 실온 및 N₂ 분위기 하에서 1시간에 걸쳐 DMF (50 mL) 중의 M6 (5 g; 26.5 mmol) 및 K₂CO₃ (14.6 g; 106 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 증발시키고, 물/EtOAc를 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수층을 EtOAc (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 물 (2회)로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 진공 중에 건조시켜 갈색 고형물을 수득하였다. 고형물을 다른 배치 (1mmole 스케일)와 함께 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 150 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/EtOAC 100/0에서 90/10로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 2.11 g의 중간체 N6 (24% 수율)을 오렌지색 고체로서, 그리고 2.64 g의 제2 분획 (N6 및 O6 (83/17)의 혼합물)을 수득하였다.

중간체 P6 의 합성:

반응을 오토클레이브에서 수행하였다.

NH₃ (이소프로판올 중 7M) (40 mL) 중의 N6 (1.9 g; 5.65 mmol)의 용액을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 침전물을 Et₂O로 세척하고, 진공 중에 건조시켜 1.42 g의 중간체 P6 (79% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.

중간체 Q6 의 합성:

3-부텐-1-올 (29 mL) 중의 P6 (1.42 g; 4.48 mmol) 및 NaH (오일 중 60%) (412 mg; 10.3 mmol)의 용액을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 중에 제거하여 갈색 고형물을 수득하였다. 고형물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 50 g Merck, 이동상: CH₂Cl₂/MeOH 95/5)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 1.26 g의 갈색 고형물을 수득하였다. 고형물을 Et₂O 중에 용해시켜 침전을 야기시키고, 침전물을 여과하고, 진공 중에 건조시켜 920 mg의 중간체 Q6 (58% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

최종 화합물 78 및 79의 합성:

디클로로에탄 (430 mL) 중의 Q6 (460 mg; 1.31 mmol) 및 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M) (261 ㎕; 261 μmol)의 용액을 N₂ 분위기 하, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (82 mg; 131 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 8시간 동안 교반하였다. 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M) (261 ㎕; 261 μmol)을 첨가하고, 혼합물을 N₂ 분위기 하, 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (82 mg; 131 μmol)를 첨가하고, 혼합물을 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. SiliaBond^® DMT (3.48 g; 2.08 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 640 mg의 검정색 고형물을 수득하였다. 고형물을 다른 배치 (1.3 mmole 스케일)와 함께 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Grace, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH 100/0에서 90/10로)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하여 463 mg의 갈색 고형물을 수득하였다. 고형물을 아키랄 SFC (정지상: AMINO 6 ㎛ 150x21.2 mm, 이동상: 82% CO₂, 18% MeOH(0.3% iPrNH₂))로 정제하여 36 mg의 최종 화합물 78 (E 이성질체, 4% 수율)을 백색 고형물 및 침전물로서 수득하였다. 이러한 침전물을 분취용 LC (정지상: 구형 베어 실리카 5 ㎛ 150x30.0 mm, 이동상 구배: 헵탄/EtOAc/MeOH (10% NH₃) 71/28/1에서 0/80/20로)로 정제하여 10 mg의 최종 화합물 79 (Z 이성질체, 1% 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 27

중간체 T6 의 합성:

아세톤 (240 mL) 중의 V2 (7.04 g; 24.04 mmol), R6 (5.16 g; 24.04 mmol), K₂CO₃ (4.98 g; 36.06 mmol) 및 NaI (3.6 g; 24.04 mmol)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 아세톤으로 린싱하였다. 여액을 증발시켜 18.7 g을 수득하였다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂에 용해시켰다. 침전물을 여과로 제거하고, 여액을 진공 중에 농축하였다. 미정제 화합물을 분취용 LC (정지상: 불규칙한 SiOH 20-45 ㎛ 450 g Matrex), 이동상: 75% 헵탄, 25% AcOEt)로 정제하여 7.4 g의 중간체 T6 (65% 수율)을 수득하였다.

중간체 U6 의 합성:

NH₃ (30%) (110 mL) 및 THF (110 mL) 중의 수용액 중의 T6 (7.25 g, 15.396mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하였다. 잔류물을 톨루엔에 용해시키고, 농축하였다 (본 공정을 2회 반복하였다). 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 7.5 g의 중간체 U6을 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 반응 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 V6 의 합성:

0℃에서, CH₂Cl₂ (25 mL) 중의 메타-클로로퍼옥시벤조산 (1.36 g, 5.54 mmol)을 CH₂Cl₂ (25 mL) 중의 U6 (2.5 g, 5.54 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (2 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 2 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 NaHCO₃의 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 4.0 g의 중간체 V6을 황색 고체로서 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 X6 의 합성:

W6 (28 mL) 중의 V6 (2.58 g, 5.52 mmol) 및 NEt₃ (1.53 mL, 11.04 mmol)의 혼합물을 100℃에서 2.5 시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기층을 HCl 0.5N (6 회)으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 분취용 LC (정지상: 불규칙한 SiOH 20-45 ㎛ 450 g Matrex), 이동상: 98% CH₂Cl₂, 2% iPrOH)로 정제하여 1.3 g의 중간체 X6 (41% 수율)을 수득하였다.

중간체 Y6 의 합성:

0℃에서, TFA (1.72 mL, 22.47 mmol)를 CH₂Cl₂ (25 mL) 중의 X6 (1.30 g, 2.25 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 물을 첨가하였다. 혼합물을 수중 K₂CO₃ 10%로 염기화시키고, CH₂Cl₂로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 1.1 g의 중간체 Y6을 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 Z6 의 합성:

0℃에서, LiOH 일수화물 (289 mg, 6.89 mmol)을 THF/물 (50/50) (10 mL) 중의 Y6 (1.1 g, 2.3 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 물을 첨가하고, 혼합물을 pH 2-3이 될 때까지 HCl 3N으로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 0.85 g의 중간체 Z6 (80% 수율)을 수득하였다.

중간체 A7의 합성:

1-에틸-3-[3-디메틸아미노프로필]카보디이미드 하이드로클로라이드 (941 mg, 4.91 mmol) 및 하이드록시벤조트리아졸 (663 mg, 4.91 mmol)을 DMF (380 mL) 중의 Z6 (760 mg, 1.64 mmol), 디이소프로필에틸아민 (1.41 mL, 8.18 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 물로 세척하고, 이후에 염수로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 40 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 99/1/0.1) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 0.61 g의 중간체 A7 (84% 수율)을 수득하였다.

최종 화합물 80의 합성:

철 (1.4 g; 25.09 mmol)을 아세트산 (14.4 mL) 및 물 (1.47 mL) 중의 A7 (560 mg; 1.25 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 6시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 아세트산으로 세척하고, 이후에 여액을 감압 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 4 g의 SiO₂ 60-200 ㎛와 함께 DMF에 용해시키고, 얻어진 현탁액을 건조될 때까지 증발시키고, 25 g 컬럼 크로마토그래피의 상단에 올려놓았다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 25 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시키고, 이후에 CH₃OH에 용해시켰다. 얻어진 침전물을 여과하고, 건조시켜 152 mg 최종 화합물 80을 자유 염기(33% 수율)로서 수득하였다. 하이드로클로라이드 염을 10 당량의 디옥산 중 HCl 4N로 제조하고, 이를 CH₃OH 중의 화합물의 현탁액에 첨가하였다. 침전물을 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 이후에 진공 하에 건조시켜 109 mg 최종 화합물 80을 HCl 염으로서 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 28

중간체 C7 의 합성:

아세톤 (220 mL) 중의 V2 (7.5 g; 25.6 mmol), B7 (7.25 g; 28.2 mmol), K₂CO₃ (8.85g; 64 mmol) 및 NaI (3.85 g; 25.6 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여액을 진공 중에 증발시켜 황색 오일을 수득하였다. 미정제물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 120 g Merck, 이동상 구배: CH₂Cl₂/헵탄 70/30)로 정제하였다. 생성물을 함유한 분획들을 합하고, 용매를 진공 중에 제거하였다. 생성물을 디이소프로필에테르로부터 재결정화하여 11.4 g의 중간체 C7 (95% 수율)을 수득하였다.

중간체 D7 의 합성:

THF (170 mL) 중의 C7 (11.3 g; 24.1 mmol) 및 NH₃ (H₂O 중의 30%) (170 mL) 중의 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 용매들의 혼합물을 진공 중에 제거하고, 잔류물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 디켄팅하고, MgSO₄로 건조시키고, 감압 하에 농축하였다. 잔류물을 디이소프로필에테르에 용해시키고, 침전물을 여과하고, 공기-건조시켜 10.5 g의 중간체 D7 (97% 수율)을 수득하였다.

중간체 E7 의 합성:

메타클로로퍼벤조산 (6.33 g; 26 mmol)을 실온에서 CH₂Cl₂ (300 mL) 중의 D7 (10.5 g; 23.3 mmol)의 용액에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (4 당량)의 10% 수용액 및 NaHCO₃의 수용액을 첨가하였다. 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에 제거하여 10.8 g의 중간체 E7 (99% 수율)을 수득하였다.

중간체 G7 의 합성:

E7 (3.5 g; 7.54 mmol)을 NEt₃ (1.15 mL; 8.3 mmol) 및 F7 (13.2g; 75.3 mmol)의 용액에 조금씩 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 물 및 CH₂Cl₂를 첨가하고, 유기층을 디켄팅하고, MgSO₄로 건조시키고, 농축하였다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g merck, (MeOH/CH₂Cl₂, 0.5/99.5)로 정제하여 중간체 G7a (3.6 g)를 수득하였다.

CH₂Cl₂ (120 mL) 중의 G7a (3.6 g; 6.2 mmol)의 용액에 실온에서 트리플루오로아세트산 (9.5 mL; 41.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석시키고, NaHCO₃의 포화수용액으로 처리하였다. 층들을 분리하고, 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 미정제 생성물을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 40 g Grace, 건조물 로딩, 이동상 구배: CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 98/2/0.1)로 정제하여 1.7 g의 중간체 G7 (57% 수율)을 수득하였다.

중간체 H7 의 합성:

철 (2.8 g; 50.3 mmol)을 아세트산 (12 mL) 및 물 (3 mL) 중의 G7 (4 g; 8.4 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 격렬하게 교반하였다. 반응 혼합물을 CH₂Cl₂로 희석시키고, 셀라이트 패드로 여과하고, 여액을 진공 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂/MeOH (90/10)의 혼합물에 용해시키고, 침전물을 여과하였다. 여액을 분취용 LC (불규칙한 SiOH 15-40 ㎛, 80 g Grace, 이동상 CH₂Cl₂/MeOH 98/2)로 정제하였다. 생성물을 디이소프로필에테르로 결정화하여 2.1 g의 중간체 H7 (62.5% 수율)을 수득하였다.

중간체 I7 의 합성:

0℃에서, LiOH 일수화물 (157 mg, 3.75 mmol)을 THF/H₂O (50/50) (10 mL) 중의 H7 (0.5 g, 1.25mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 물을 첨가하고, 혼합물을 pH 2-3이 될 때까지 HCl 3N으로 산성화하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 460 mg의 중간체 I7 (99% 수율)을 수득하였다. 미정제 화합물을 다음 반응 단계에서 바로 사용하였다.

최종 화합물 85의 합성:

3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 (1 g, 1.5.3 mmol) 및 1-하이드록시벤조트리아졸 (720 mg, 5.3 mmol)을 DMF (400 mL) 중의 I7 (660 mg, 1.77 mmol), 디이소프로필에틸아민 (1.5 mL, 8.86 mmol)의 혼합물에 서서히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 용매를 건조될 때까지 증발시켰다. 잔류물을 CH₂Cl₂로 용해시키고, 물로 세척하고, 이후에 염수로 세척하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 47 mg의 최종 화합물 85 (7.5% 수율)를 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 29

중간체 J7 의 합성:

0℃에서, 디이소프로필아조디카복실레이트 (0.9 mL; 4.541 mmol)를 THF (45 mL) 중의 Q5 (0.9 g; 3.028 mmol), Z4 (0.54 g; 3.028 mmol) 및 PPh₃ (1.19 g; 4.541 mmol) 의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. EtOAc 및 물을 첨가하였다. 층들을 디켄팅하였다. 유기층을 물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제 화합물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 120 g, 헵탄-EtOAc 85-15에서 70/30로) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시키고, 디이소프로필에테르로 결정화한 후에 중간체 J7 (520 mg, 38% 수율)을 수득하였다.

중간체 K7 의 합성:

Grubbs 촉매 제2 세대 (91 mg; 0.107 mmol)를 CH₂Cl₂ (205 mL) 중의 J7 (0.488 g; 1.067 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 7시간 동안 교반하였다. 7시간 후에, SiliaBond^® DMT (1.42 g; 0.853 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, CH₂Cl₂로 세척하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 다른 배치 (0.12 mmole 스케일)와 함께 실리카 겔 (15-40 ㎛, 40 g, CH₂Cl₂/MeOH 99.75/0.25) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 분획 1을 수득하고, 이후에 이를 아키랄 SFC (정지상: Chiralpak IA 5 ㎛ 250*20 mm, 이동상: 70% CO₂, 30% MeOH)로 정제하여 240 mg의 중간체 K7 (E 이성질체, 52% 수율)을 수득하였다.

최종 화합물 86의 합성:

철 (0.52 g; 9.315 mmol)을 아세트산 (5.4 mL) 및 물 (550 ㎕) 중의 K7 (0.2 g; 0.466 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, AcOH로 세척하고, 이후에 여액을 농축하였다. 미정제 화합물을 5 g의 SiO₂ 60-200 ㎛와 함께 DMF에 용해시키고, 얻어진 현탁액을 건조될 때까지 증발시키고, 25 g 컬럼 크로마토그래피의 상단에 올려놓았다. 정제를 실리카 겔 (15-40 ㎛, 25 g, CH₂Cl₂ _/CH₃OH/NH4OH: 95/5/0.5에서 90/10/0.5로) 상에서 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조상태로 증발시켰다. 이러한 배치를 CH₃OH로부터 결정화하고, 침전물을 여과하고, 진공 하, 90℃에서 건조시켜 최종 화합물 86 (68 mg, 41% 수율)을 수득하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 30

중간체 M7 의 합성:

아세톤 (370 mL) 중의 V2 (10.0 g; 34.16 mmol), L7 (6.85 g; 34.16 mmol), NaI (5.12 g; 34.16 mmol) 및 K₂CO₃ (7.08 g; 51.24 mmol)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 침전물을 여과하고, 아세톤으로 린싱하였다. 여액을 감압 하에 농축하였다. 미정제 화합물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 침전물 (잔류 중간체 V2)을 여과하고, 소량의 CH₂Cl₂로 세척하고, 여액을 농축하여 16.8 g의 중간체 M7을 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

중간체 N7 의 합성:

물 (30%) (100 mL) 및 THF (100 mL) 중의 NH₃ 중의 M7 (16.8 g, 36.77 mmol)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물로 희석시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켜 15.7 g의 중간체 N7 (98% 수율)을 수득하였다.

중간체 O7 의 합성:

0℃에서, CH₂Cl₂ (100 mL) 중의 3-클로로퍼옥시벤조산 (8.8 g, 35.66 mmol)을 CH₂Cl₂ (100 mL) 중의 N7 (15.6 g, 35.66 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. Na₂S₂O₃ (2 당량)의 수용액을 혼합물에 첨가하였다. 두 층들을 분리하고, 수층을 CH₂Cl₂ (2회)로 추출하였다. 합한 유기층들을 NaHCO₃의 포화수용액으로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하여 16 g의 중간체 O7을 황색 오일 (99% 수율)로서 수득하였다.

중간체 P7 의 합성:

알릴 알코올 (90 mL) 및 NEt₃ (4.9 mL, 35.285 mmol) 중의 O7 (8.0 g, 17.642 mmol)의 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조될 때까지 증발시키고, 실리카 겔 (15-40 ㎛, 120 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 99.5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 6.3 g의 중간체 P7 (80% 수율)을 수득하였다.

중간체 Q7 및 R7 의 합성:

용매를 통해 N₂를 버블링함으로써 용매를 탈기시켰다. 반응을 2개의 동일한 부분의 750 mg의 P7로 분할하였다:

건조 디클로로에탄 (330 mL) 중의 P7 (750 mg; 1.676 mol) 및 클로로디사이클로헥실보란 (헥산 중 1M) (335 ㎕; 0.335 μmol)의 용액을 80℃ 및 N₂ 분위기 하에서 1시간 동안 교반하였다. 0.033 당량의 Grubbs-Hoveyda 촉매 제2 세대 (35 mg; 56μmol)를 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이후에, 튜브를 개방하고, 0.033 당량의 촉매 (35 mg; 56 μmol)를 다시 첨가하고, 혼합물을 시일링된 튜브에서 120℃에서 1시간 동안 교반하였다 (이러한 순서는 2회 반복함). SiliaBond^® DMT (1.72 g; 0.894 mmol)를 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 셀라이트를 CH₂Cl₂로 세척하고, 여액을 증발시켰다. 화합물을 CH₂Cl₂에 용해시키고, 침전물을 여과하였다 (0.82 g, 분획 1). 여액을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 80 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 99.5/0.5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켰다 (0.11 g, 분획 2). 분획 1 및 2를 합하고 (0.93 g), 아키랄 SFC (정지상: AMINO 6㎛ 150x21.2mm, 이동상: 80% CO₂, 20% MeOH)로 정제하여 0.25 g의 중간체 R7 (18% 수율, 이성질체 E) 및 0.566 g의 중간체 Q7 (40% 수율, 이성질체 Z)을 수득하였다.

최종 화합물 87의 합성:

0℃에서, TiCl₃ (10.2 mL; 11.923 mmol)을 THF (30 mL) 중의 R7 (250 mg; 0.596 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 4시간 동안 교반하고, 이후에 실온에서 밤새 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 K₂CO₃로 염기화하였다. 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하였다. 셀라이트를 EtOAc/CH₃OH 70/30으로 세척하였다. 층들을 디켄팅하고, 유기층을 건조될 때까지 증발시켰다. 미정제 화합물을 DMF에 용해시키고, 이후에 2 g의 SiO₂를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 건조될 때까지 증발시켰다. 정제를 실리카 겔 (고체 증착물) (15-40 ㎛, 25 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 95/5/0.5) 상에 플래시 크로마토그래피에 의해 수행하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시키고, CH₃CN으로부터의 재결정화 후에 20 mg의 최종 화합물 87 (17% 수율)을 수득하였다.

최종 화합물 88의 합성:

최종 화합물 88을 중간체 Q7 (250 mg, 0.596 mmol)로부터 최종 화합물 87에 대해 기술된 절차로 수득하여 9 mg (4% 수율)을 얻었다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 31

중간체 S7 의 합성:

0℃에서, 알릴아민 (1.46 mL, 19.407 mmol)을 THF (100 mL) 중의 Q7 (8.0 g, 17.642 mmol) 및 NEt₃ (4.905 mL, 35.285 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 층들을 디켄팅하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과하고, 용매를 증발시켰다. 미정제물을 실리카 겔 (15-40 ㎛, 120 g, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 99.5/0.5) 상에서 플래시 크로마토그래피로 정제하였다. 순수한 분획들을 모으고, 건조될 때까지 증발시켜 5.8 g의 중간체 S7 (74% 수율)을 수득하였다.

중간체 T7 및 U7 의 합성:

중간체 T7 및 U7을 중간체 Q7 및 R7에 대해 기술된 방법으로 합성하였다.

최종 화합물 89 및 90의 합성:

최종 화합물 89 및 90을 최종 화합물 87 및 88에 대해 기술된 방법으로 합성하였다.

최종 생성물 제조의 전체 반응식: 방법 32

중간체 V7 의 합성:

THF/MeOH (50/50) (30mL) 중의 Q7 (200 mg, 0.477 mmol) 및 윌킨슨 촉매 (88.2 mg, 0.0954 mmol)의 혼합물을 8 bar 압력의 H₂ 하, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 혼합물을 건조될 때까지 증발시켜 0.30 g의 중간체 V7을 수득하였고, 이를 다음 단계에서 바로 사용하였다.

최종 화합물 91의 합성:

최종 화합물 91을 최종 화합물 87 및 88에 대해 기술된 방법으로 합성하였다.

LCMS 방법:

일반적인 절차 VDR2 (방법 V300xV30xx . olp 에 대해)

LC 측정을 탈기기(degasser)가 구비된 바이너리 펌프, 오토샘플러, 다이오드-어래이 검출기(DAD) 및 하기의 개개 방법에서 특정된 바와 같은 컬럼을 포함하는 UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) Acquity (Waters) 시스템을 이용하여 수행하였으며, 컬럼을 40℃의 온도에서 유지시켰다. 컬럼으로부터의 흐름을 MS 검출기로 유도하였다. MS 검출기를 전기분무 이온화 소스와 함께 구성하였다. 모세관 니들 전압은 3 kV이며, Quattro (Waters로부터의 삼중 4극 질량 분석계) 상에서 소스 온도는 130℃에서 유지되었다, 질소를 네불라이저 가스로서 사용하였다. 데이타 획득을 Waters-Micromass MassLynx-Openlynx 데이타 시스템으로 수행하였다.

방법 V3014V3001

일반적인 절차 VDR2 이외에, 역상 UPLC를 0.35 ml/분의 유량으로 Waters HSS (High Strength Silica) T3 컬럼 (1.8 ㎛, 2.1 x 100 mm) 상에서 수행하였다. 두 개의 이동상 (이동상 A: 95 % 7 mM 암모늄 아세테이트 / 5 % 아세토니트릴; 이동상 B: 100 % 아세토니트릴)을 이용하여 99 % A (0.5분 동안 유지)에서 4.5분에 15 % A 및 85 % B의 구배 조건으로 진행시키고, 그리고 2분 동안 유지하고 0.5분에 다시 초기 조건으로 돌아가고, 1.5분 동안 유지시켰다. 2 ㎕의 주입 부피를 사용하였다. 콘 전압은 양성 및 음성 이온화 모드의 경우에 20 V이었다. 질량 스펙트럼을 0.1초의 스캔간 지연을 이용하여 0.2초 단위로 100 내지 1000 사이에서 스캐닝함으로써 획득하였다.

방법 V3018V3001

일반적인 절차 VDR2 이외에, 역상 UPLC를 0.343 ml/분의 유량으로 Waters Acquity BEH (브릿징된 에틸실록신/실리카 하이브리드) C18 컬럼 (1.7 ㎛, 2.1 x 100 mm) 상에서 수행하였다. 두 이동상 (이동상 A: 95 % 7 mM 암모늄 아세테이트/ 5 % 아세토니트릴; 이동상 B: 100 % 아세토니트릴)을 사용하여 84.2 % A 및 15.8 % B (0.49분 동안 유지)에서 2.18분에 10.5 % A 및 89.5 % B로의 구배 조건으로 진행시키고, 1.94분 동안 유지시키고, 0.73분에 다시 초기 조건으로 진행시키고, 0.73분 동안 유지시켰다. 2 ㎕의 주입 부피를 사용하였다. 콘 전압은 양성 및 음성 이온화 모드의 경우에 20 V이었다. 질량 스펙트럼을 0.1초의 스캔간 지연을 이용하여 0.2초 단위로 100 내지 1000 사이에서 스캐닝함으로써 획득하였다.

표 1. 화학식 (I)의 화합물

화학식 (I)의 화합물의 생물학적 활성

생물학적 검정의 설명

TLR7 및 TLR8 활성의 평가

인간 TLR7 및 TLR8을 활성화시키는 화합물의 능력을 TLR7 또는 TLR8 발현 벡터 및 NFκB-luc 리포터 작제물로 일시적으로 트랜스펙션된 HEK293 세포를 사용하여 세포 리포터 검정으로 평가하였다. 간단하게, HEK293 세포를 배양 배지 (10% FCS 및 2 mM 글루타민이 공급된 DMEM)에서 성장시켰다. 10 cm 디시에서 세포를 트랜스펙션시키기 위하여, 세포를 트립신-EDTA로 분리시키고, CMV-TLR7 또는 TLR8 플라스미드 (750 ng), NFκB-luc 플라스미드 (375 ng) 및 트랜스펙션 시약(transfection reagent)의 혼합물로 트랜스펙션시키고, 습한 5% CO₂ 분위기에서 37℃에서 48시간 동안 인큐베이션시켰다. 이후에, 트랜스펙션된 세포를 트립신-EDTA로 분리시키고, PBS 중에서 세척하고, 배지에 167 x 10⁵ 세포/mL의 밀도로 재현탁시켰다. 이후에, 30 마이크로리터의 세포를 384-웰 플레이트에서 각 웰에 분배하였으며, 이러한 웰에는 4% DMSO 중의 10 ㎕의 화합물이 이미 존재한다. 37℃, 5% CO₂에서 6시간 동안 인큐베이션한 후에, 각 웰에 15 ㎕의 Steady Lite Plus 기질 (Perkin Elmer)을 첨가하고 ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 영상장치 (Perkin Elmer) 상에서 판독을 수행하여 루시페라제 활성을 측정하였다. 용량 반응 곡선을 4회 수행된 측정으로부터 생성시켰다. 가장 낮은 유효 농도 (LEC) 수치는 검정의 표준 편차 보다 적어도 두 배 높은 효과를 유도하는 농도로서 정의되는 것으로서, 이를 각 화합물에 대해 측정하였다.

병행하여, 유사한 희석 계열(dilution series)의 화합물을 사용하였고 (4% DMSO 중의 10 ㎕의 화합물), 웰 당 30 ㎕의 세포를 NFκB-luc 리포터 작제물 (1.67 x 10⁵ 세포/mL) 단독으로 트랜스펙션시켰다. 37℃, 5% CO₂에서 인큐베이션하고 6시간 후에, 각 웰에 15 ㎕의 Steady Lite Plus 기질 (Perkin Elmer)을 첨가하고 판독을 ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 영상장치 (Perkin Elmer) 상에서 수행하여 루시페라제 활성을 측정하였다. 카운터스크린 데이타(Counterscreen data)를 LEC로서 보고하였다.

인간 PBMC 에서 인터페론 생산의 측정

인간 TLR7의 활성화는 인간 혈액에 존재하는 플라스마사이토이드 수지상 세포에 의한 인테페론의 강력한 생산을 초래한다. 인테페론을 유발시키기는 화합물의 능력을 말초혈 단핵 세포 (PBMC)로부터 컨디셔닝된 배지에서의 인터페론의 결정에 의해 평가하였다. 샘플 중에 인터페론의 존재를, 인터페론-자극화된 반응 요소 (ISRE)-luc 리포터 작제물을 안정적으로 발현시키는 인터페론 리포터 세포주를 사용하여 결정하였다. 서열 GAAACTGAAACT를 갖는 ISRE 요소는 STAT1-STAT2-IRF9 전사 인자에 대한 반응성이 매우 높은데, 이는 IFN 수용체에 대한 IFN-I의 결합 시에 활성화된다. 간단하게, PBMC를 표준 Ficoll 원심분리 프로토콜을 이용하여 적어도 두 개의 도너(donor)의 버피 코트(buffy coat)로부터 제조하였다. 단리된 PBMC를 10% 인간 AB 혈청이 공급된 RPMI 배지에 재현탁시키고, 2 x 10⁵ 세포/웰을 화합물 (70 ㎕ 전체 부피)을 함유한 384-웰 플레이트에 분배시켰다. 화합물과 함께 PBMC를 밤새 인큐베이션시킨 후에, 10 ㎕의 상청액을 (하루 전에 플레이팅된) 30 ㎕ 중의 5 x 10³ HEK-ISRE-luc 세포/웰을 함유한 384-웰 플레이트로 전사시켰다. 24시간의 인큐베이션 후에, 40 ㎕/well Steady Lite Plus 기질 (Perkin Elmer)을 사용하여 루시페라제 활성을 검정하여 ISRE 요소의 활성을 측정하고, ViewLux ultraHTS 마이크로플레이트 영상장치 (Perkin Elmer)로 측정하였다. HEK-ISRE-luc 세포에 대한 각 화합물의 자극화 활성을 LEC로서 보고하였다. 또한, LEC는 규정된 양의 PBMC 배양 배지의 전사 시에 ISRE 활성도를 나타내는 것이다. 재조합 인터페론 알파-2a (로페론-A)를 표준 대조군 화합물로서 사용하였다.

HEK293 TLR8-NFκB-luc 상에서 표 2의 화합물에 대한 LEC 값은 화합물 6의 경우에 >10 μM, 화합물 39의 경우에 20.46 μM, 화합물 40의 경우에 >19.49 μM, 화합물 41의 경우에 11.16 μM, 화합물 44의 경우에 >10 μM, 화합물 47의 경우에 5.48 μM, 화합물 63의 경우에 >10 μM, 화합물 75의 경우에 0.27 μM, 및 다른 모든 화합물의 경우에 >25 μM이었다.

HEK293 NFκB-luc 상에서 표 2의 화합물에 대한 LEC 값은 가장 높은 시험된 농도 보다 더욱 높았다 (화합물 6, 44 및 63의 경우에 > 10 μM, 및 다른 모든 화합물의 경우에 > 25 μM).

표 2. 화학식 (I)의 화합물

n은 수행된 실험의 횟수를 나타낸다.

Claims

하기 화학식 (I)을 갖는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:

상기 식에서,
n은 1 내지 3의 정수이고,
X는 산소, 질소, 황 또는
이며,
Y는 C_1-6알킬, C_1-4알콕시, 트리플루오로메틸 또는 할로겐으로부터 독립적으로 선택된 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환된, 적어도 하나의 질소를 포함하는 방향족 고리 또는 헤테로사이클릭 고리를 나타내며,
Z는 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환된 C_1-10 포화되거나 불포화된 알킬을 나타내거나;
Z는 C_1-6알킬-NH-C(O)-C_1-6알킬- 또는 C_1-6알킬-NH-C(O)-C_1-6알킬-O-이거나;
Z는 C_1-10알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있거나,
Z는 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-을 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있거나,
Z는 C_1-6알킬-O-C_1-6알킬-O-를 나타내되, 여기서 상기 알킬은 불포화되거나 포화되고 알킬 또는 알킬하이드록실에 의해 임의로 치환될 수 있다.
제1항에 있어서,

의 군으로부터 선택된 화학식들 중 하나를 갖는 화합물.
하나 이상의 약제학적으로 허용 가능한 부형제, 희석제 또는 담체와 함께, 제1항 또는 제2항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는, TLR7의 조절이 관련된 장애로서, 바이러스 감염증, 면역 질환 또는 염증성 질환의 치료용 약제 조성물.
제1항 또는 제2항에 따른 화학식 (I)의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물을 포함하는, TLR7의 조절이 관련된 장애로서, 바이러스 감염증, 면역 질환 또는 염증성 질환의 치료용 약제.
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