ES2305435T3

ES2305435T3 - Inhibidores de la rho-quinasa.

Info

Publication number: ES2305435T3
Application number: ES03701278T
Authority: ES
Inventors: Dhanapalan Nagarathnam; Uday Khire; Davoud Asgari; Jianxing C/O Pfizer Discovery Tech. Cntr. Shao; Xiao-Gao Liu; Chunguang Wang; Barry Hart; Olaf Weber; Mark Lynch; Lei Zhang; Lei Wang
Original assignee: Bayer Healthcare AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 2002-01-10
Filing date: 2003-01-10
Publication date: 2008-11-01
Anticipated expiration: 2023-01-10
Also published as: EP1465900B1; AU2003202263A1; EP1465900A1; WO2003059913A1; US20070238741A1; JP2005523251A; US7648986B2; US20100216789A1; JP4505228B2; US20040014755A1; CA2472619A1; DE60320933D1

Abstract

un compuesto de Fórmula I (Ver fórmula) en la que X es -(CH2)x-, -O-(CH2)n-, -S-(CH2)n-, -NR7-CO-(CH2)n-, -NR7-SO2-(CH2)n-, -NR7-(CH2)n-, o -(O)C-NR7-, cada n es un número entero que es independientemente 0, 1, 2 ó 3, x es 0-3 p es 0-3 a y c son cada uno de ellos independientemente -CR5=, -N=, o -NR6-, en los que uno de a o c es -NR6-, y b es -CR5= o -N=; A es H, halógeno, -CO-OR8, -CO-R8, ciano, -OR8, -NR8R9, -CO-NR8R9, -NR8-CO-R9, -NR8-CO-OR9, -NR8-SO2-R9, -SR8, -SO2-R8, -SO2-NR8R9, NR8-CO-NHR9, o A es ciclohexilo o arilo C5 - 12 o heteroarilo C5 - 12 cada uno de ellos independiente y opcionalmente sustituido hasta tres veces por (i) alquilo C1 - C10 o alquenilo C2 - 10 cada uno de ellos opcionalmente sustituido con halógeno hasta perhalo; (ii) cicloalquilo C3-C10; (iii) arilo; (iv) heteroarilo; (v) halógeno; (vi) -COOR8; (vii) -CO-R8; (viii) ciano; (ix) -OR8; (x) -NR8R13; (xi) nitro; (xii) -CO-NR8R9; (xiii) -alquil C1 - 10 -NR8R9; (xiv) -NR8-COR12; (xv) -NR8-CO-OR9; (xvi) -NR8-SO2-R9; (xvii) -SR8; (xviii) -SO2-R8; (xix) -SO2-NR8R9; (xx) NR8-CO-NHR9; o (xxi) arilo o heteroarilo sustituido por halógeno, alquilo C1 - 10, alcoxi C1 - 10-fenilo, naftilo, -OR10, (Ver fórmula)

Description

Inhibidores de la Rho-quinasa.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a compuestos y sus derivados, su síntesis, y su uso como inhibidores de la Rho-quinasa. Estos compuestos de la presente invención son útiles para la inhibición de desarrollo tumoral, tratamiento de disfunción eréctil, y tratamiento de otras indicaciones mediadas por la Rho-quinasa, por ejemplo, enfermedad cardiaca coronaria.

Antecedentes

La patología de un número de enfermedades humanas y animales que incluyen hipertensión, disfunción eréctil, alteraciones circulatorias cerebrales coronarias, trastornos neurodegenerativos y cáncer se pueden ligar directamente a los cambios en el citoesqueleto de actina. Estas enfermedades plantean una necesidad médica seria que no se ha solucionado. El citoesqueleto de actina se compone de una malla de filamentos de actina y proteínas de unión a actina encontradas en todas las células eucarióticas. En las células del músculo liso el ensamblaje y desensamblaje del citoesqueleto de actina es la fuerza motora principal responsable de la contracción y relajación del músculo liso. En las células no musculares, las transposiciones dinámicas del citoesqueleto de actina son responsables de la regulación de la morfología celular, motilidad celular, formación de la fibra de esfuerzo de actina, adhesión celular y funciones celulares especializadas tales como retracción de neuritas, fagocitosis o citoquinesis (Van Aelst, et al. Genes Dev 1997, 11, 2295).

El citoesqueleto de actina se controla mediante una familia de proteínas que son un subconjunto de la superfamilia de Ras de las GTPasas. Este subconjunto consta actualmente de RhoA mediante E y RhoG (que se mencionan de manera colectiva Rho), Rac 1 y 2, Cdc42Hs y G25K e isoformas TC10 (Mackay, et al. J BiolChem1998, 273, 20685). Estas proteínas son proteínas de unión a GTP (guanidine nucleotides trifosfatos) con actividad de la GTPasa intrínseca. Actúan como desconexiones moleculares y ciclos entre GPD inactivos (guanidina nucleótido difosfato) unidos y estados de unión de GTP unidos. Usando manipulaciones bioquímicas y genéticas, ha sido posible asignar funciones para cada miembro de la familia. Tras la activación las proteínas Rho se controla la formación de de las fibras de esfuerzo de actina, y la formación de racimos de integrinas en los complejos de adhesión focales. Cuando se activan las proteínas de Rac se controla la formación de lamelopodios o perturbaciones de membranas en la superficie celular y Cdc42 controla la formación de filopodios. Conjuntamente esta familia de proteínas juega una parte crítica en el control de las funciones celulares clave que incluyen movimiento celular, guía axonal, citoquinesis, y cambios en la morfología celular, forma y polaridad.

Dependiendo del tipo de célula y la activación del receptor, las proteínas Rho pueden controlar diferentes respuestas biológicas. En las células de músculo liso, las proteínas Rho son responsables de la sensibilización de calcio durante la contracción del músculo liso. En las células de músculo no liso las Rho GTPasas son responsables de las respuestas celulares a agonista tal como ácido lisofosfatídico (LPA), trombina y tromboxano A2 (Fukata, et al. Trends Pharcol Sci 2001, 22, 32). La respuesta de agonistas se acopla mediante proteínas G heteroméricas G_{alpha12} o G_{alpha13} (Goetzl, et al. Cancer Res 1999, 59, 4732; Buhl, et al. J Biol Chem 1995, 270, 24631) mediante otros receptores pueden estar implicados. Tras la activación las Rho GTPasas activan numerosos efectoers cadena abajo incluyendo PIP5-quinasa, Rotequina, Rodofilina, PKN y las isoformas Rho quinasa ROCK-1/ROKbeta y ROCK-1/ROKalfa (Mackay y Hall J Biol Chem 1998,273,20685; Aspenstrom Curr Opin Cell Biol 1999,11, 95; Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44).

La Rho quinasa se identificó como una RhoA que interactúa con la proteína aislada de cerebro bovino (Matsui, et al. Embo J 1996, 15, 2208). Es un miembro de la familia de distrofia miotónica de la proteína quinasa y contiene un dominio de serina/treonina quinasa en el extremo amino, un dominio enrollado en espiral en la región central y un dominio de interacción de Rho en el extremo carboxi (Amano, et al. Exp Cell Res 2000, 261, 44). Su actividad quinasa se potencia tras la unión a RhoA unida a GTP y cuando se introduce en las células, se pueden reproducir muchas de las actividades de la RhoA activada. En las células de músculo liso la Rho quinasa media la sensibilización de calcio y contracción del músculo e inhibición de la Rho quinasa bloquea 5-HT y el agonista de fenilefrina indujeron la contracción muscular, la Rho quinasa la formación de fibras de esfuerzo y se requiere para la transformación celular mediada por RhoA (Sahai, et al. Curr Biol 1999, 9, 136). La Rho quinasa regula numerosas proteínas cadena abajo mediante la fosforilación, incluyendo la cadena ligera de miosina (Somlyo, et al. J Physiol (Lond) 2000, 522 Pt 2, 177), la subunidad que se une a la fosfatasa de la cadena ligera de miosina (Fukata, et al. J Cell Biol 1998, 141, 409) y LIM-quinasa 2 (Sumi, et al. J Biol Chem 2001, 276, 670).

La inhibición de la actividad de la Rho quinasa en modelos animales ha demostrado numerosos beneficios de los inhibidores de la Rho quinasa para el tratamiento de enfermedades humanas. Han aparecido varias patentes que reivindican (+)-trans-4-(1-aminoetil)-1-(piridin-4-ilaminocarbonil)ciclohexano diclorhidrato monohidrato (documentos WO-00078351, WO-00057913) e isoquinolinesulfonil monosustituido (documento EP-00187371) compuestos como inhibidores de la Rho quinasa con actividad en los modelos animales. Éstos incluyen modelos de enfermedades cardiovasculares tales como hipertensión (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990), aterosclerosis (Retzer, et al. FEBS Lett 2000, 466, 70), reestenosis (Eto, et al. Am J Physiol Heart Circ Physiol 2000, 278, H1744; Negoro, et al. Biochem Biophys Res Commun 1999, 262, 211), isquemia cerebral (Uehata, et al. Nature 1997, 389, 990; Seasholtz, et al. Circ Res 1999, 84, 1186; Hitomi, et al. Life Sci 2000, 67, 1929; Yamamoto, et al. J Cardiovasc Pharmacol 2000, 35, 203), vasoespasmo cerebral (Sato, et al. Circ Res 2000, 87, 195; Kim, et al. Neurosurgery 2000, 46, 440), disfunción eréctil del pene (Chitaley, et al. Nat Med 2001, 7, 119), trastornos del sistema nervioso central tal como degeneración neuronal y lésión de la médula espinal (Hara, et al. J Neurosurg 2000, 93, 94; Toshima, et al. Stroke 2000, 31, 2245) y en neoplasias donde la inhibición de la Rho quinasa se ha mostrado que inhibe el desarrollo de las células tumorales y metástasis (Itoh, et al. Nat Med 1999, 5, 221; Somlyo, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 652), angiogénesis (Uchida, et al. Biochem Biophys Res Commun 2000, 269, 633; Gingras, et al. Biochem J 2000, 348 Pt 2, 273), trastornos trombóticos arteriales tal como una agregación de plaquetas (Klages, et al. J Cell Biol 1999, 144, 745; Retzer, et al. Cell Signal 2000, 12, 645) y agregación de leucocitos (Kawaguchi, et al. Eur J Pharmacol 2000, 403, 203; Sanchez-Madrid, et al. Embo J 1999, 18, 501), asma (Setoguchi, et al. Br J Pharmacol 2001, 123, 111; Nakahara, et al. Eur J Pharmacol 2000, 389, 103), Regulación de la presión intra ocular (Honjo, et al. Invest Ophthalmol Vis Sci 2001, 42, 137) y resorción ósea (Chellaiah, et al. J Biol Chem 2000, 275, 11993; Zhang, et al. J Cell Sci 1995, 108, 2285).

La inhibición de la actividad de la Rho quinasa en los pacientes tiene beneficios para el control de vasosespasmos cerebrales e isquemia después de la hemorragia subaracnoidea (Pharma Japan 1995, 1470, 16).

Los documentos WO99/24440 y WO96/40142 describen compuestos detienopiridina para uso en el tratamiento de cáncer.

Sumario de la invención

Los compuestos y sus derivados presentados en esta invención son útiles como inhibidores de la Rho Quinasa y de esta manera tienen utilidades en el tratamiento de hipertensión, aterosclerosis, reestenosis, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, degeneración neuronal, lesión de la médula espinal, cánceres de mama, colon, próstata, ovarios, cerebro y pulmón y metástasis, trastornos trombóticos, asma, glaucoma y osteoporosis.

Además, los compuestos de la invención son útiles para tratar disfunción eréctil, es decir disfunción eréctil mediada por la Rho-quinasa. La disfunción eréctil se puede definir como una incapacidad de obtener una erección sostenida o adecuada para las relaciones sexuales, documentos WO 94/28902, U.S.P. 6.103.765 y U.S.P. 6.124.461.

La invención proporciona compuestos de fórmula I

1

en la que X es -(CH_{2})_{x}-, -O-(CH_{2})_{n}-, -S-(CH_{2})_{n}-, -NR_{7}-CO-(CH_{2})_{n}-, -NR_{7}-SO_{2}-(CH_{2})_{n}-, -NR_{7}-(CH_{2})_{n}-, o -(O)C-NR_{7}-,

cada n es un número entero que es independientemente 0, 1, 2 ó 3,

x es 0-3

p es 0-3

a y c son cada uno de ellos independientemente -CR_{5}=, -N=, o -NR_{6}-, en los que uno de a o c es -NR_{6}-, y b es -CR_{5}= o -N=;

A es H, halógeno, -CO-OR_{8}, -CO-R_{8}, ciano, -OR_{8}, -NR_{8}R_{9}, -CO-NR_{8}R_{9}, -NR_{8}-CO-R_{9}, -NR_{8}-CO-OR_{9}, -NR_{8}-SO_{2}-R_{9}, -SR_{8}, -SO_{2}-R_{8}, -SO_{2}-NR_{8}R_{9}, NR_{8}-CO-NHR_{9}, o

A es un resto de 3-20 átomos, preferentemente 5-15 átomos, cíclico o policíclico, por ejemplo, que contiene 1-4 anillos, que opcionalmente contienen 1-3 átomos de N, O o S por anillo, y puede opcionalmente ser arilo o heteroarilo. A puede opcionalmente estras sustituido hasta 3 veces por (i) alquilo C_{1}-C_{10} o alquenilo C_{2}-C_{10}, cada uno opcionalmente sustituido con halógeno hasta perhalo; (ii) cicloalquilo C_{3}-C_{10}; (iii) arilo opcionalmente sustituido; (iv) heteroarilo opcionalmente sustituido; (v) halógeno; (vi) -CO-OR_{8}; (vii) -CO-R_{8}; (viii) ciano; (ix) -OR_{8}, (x) -NR_{8}R_{13}; (xi) nitro; (xii) -CO-NR_{8}R_{9}; (xiii) alquil-C_{1-10}-NR_{8}R_{9}; (xiv) -NR_{8}-CO-R_{12}; (xv) -NR_{8}-COOR_{9}; (xvi) -NR_{8}-SO_{2}-R_{9}; (xvii) -SR_{8}; (xviii) -SO_{2}-R_{8}; (xix) -SO2-NR8R9; o (xx) NR_{8}-CO-NHR_{9};

El anillo B representa un anillo heterocíclico condensado de 5- ó 6-miembros que contiene 1-2 átomos de O, N, y/o átomos de S y 1-5 átomos de C.

R_{1}, y R_{6}-R_{11} son cada uno de ellos independientemente H y alquilo C_{1-6},

R_{2}-R_{5} son cada uno de ellos independientemente (i) alquilo C_{1-10} o alquenilo C_{2-10}- cada uno de ellos opcionalmente sustituido por amino, N alquil inferior amino, N,N-dialquil inferior amino, N-alquil inferior amino, hidroxi, ciano, -COOR_{10}, -COR_{14}, -OCOR_{14}, -OR_{10}, heteroarilo C_{5-10}, heteroariloxi C_{5-10}, heteroaril C_{5-10}-alquiloxi C_{1-10}, o halógeno hasta un perhalo; (ii) cicloalquilo C_{3}-C_{10}, en los que 1-3 átomos de carbono están opcional e independientemente sustituidos por O, N o S; (iii) cicloalquenilo C_{3-10}; (iv) particularmente heterociclilo C_{5-10} parcialmente insaturado; (v) arilo; (vi) heteroarilo; (vii) halógeno; (viii) -CO-OR_{10}; (ix) -OCOR_{10}; (x) -CCO_{2}R_{10}; (xi) -CHO; (xii) ciano; (xiii) -OR_{16}; (xiv) -NR_{10}R_{15}; (xv) nitro; (xvi) -CO-NR_{10}R_{11}; (xvii) -NR_{10}-CO-R_{12}; (xviii) -NR_{10}-CO-OR_{11}; (xix) -NR_{10}-SO_{2}-R_{12}; (xx) -SR_{16}; (xxi) -SOR_{16}; (xxii) -SO_{2}-R_{16}; (xxiii)-SO_{2}-NR_{10}R_{11}; (xxiv) NR_{10}-CO-NHR_{11}; (xxv) amidino; (xxvi) guanidino; (xxvii) sulfo; (xxviii) -B(OH)2; (xxix) -OCON(R_{10})_{2}; o (xxx) -NR_{10}CON(R_{10})_{2};

R_{12} es H, alquilo C_{1-6} o arilo C_{5-10},

R_{13} es H, alquilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6},

R_{14} es alquilo inferior o fenilo;

R_{15} es alquilo inferior, halógeno, amino, N-alquil inferior amino, N,N-dialquil inferior lamino, N-alcanoil inferior lamino, OH, CN, COOR_{10}, -COR_{14} o -OCOR_{14};

R_{16} es hidrógeno, alquilo C_{ 1-6} opcionalmente sustituido por halógeno, hasta perhalo, o heteroarilo C_{5-10}; y

Con la condición de que A no sea hidrógeno cuando x sea 0;

-X-A no es CH3 cuando B representa un anillo condensado a tieno[3,2b], y b y c son -CR_{5}=, y a es NH;

y A no es fenilo cuando X es NH, B forma un anillo condensado imidazo, y -a-b-c- es -CR_{5}=N-NR_{6}- o -NR_{6}=N-CR_{5}-.

En la fórmula I, los grupos arillo o heteroarilo adecuados, por ejemplo, para A, incluyen, pero no se limitan a, anillos aromáticos de 5-12 átomos de carbono o sistemas de anillo que contienen 1-3 anillos, al menos uno de los cuales es aromático, en los que uno o más, por ejemplo, 1-4 átomos de carbono en uno o más de los de los anillos se puede reemplazar por átomos de oxígeno, nitrógeno o de azufre. Típicamente cada anillo tiene 3-7 átomos. Por ejemplo, arilo o heteroarilo pueden ser 2- o 3-furilo, 2- o 3-tienilo, 2- o 4-triazinilo, 1-, 2- o 3-pirrolilo, 1-, 2-, 4- o 5-imidazolilo, 1-, 3-, 4- o 5-pirazolilo, 2-, 4- o 5- oxazolilo, 3-, 4- o 5-isoxazolilo, 2-, 4- o 5-tiazolilo, 3-, 4- o 5- isotiazolilo, 2-, 3- o 4-piridilo, 2-, 4-, 5- o 6-pirimidinilo, 1,2,3-triazol-1-, -4- o 5-ilo, 1,2,4-triazol-1-, -3- o B5-ilo, 1- o 5-tetrazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4- o 5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o 5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-3- o 5-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4- o 5-ilo, 2-, 3-, 4-, 5- o 6-2H-thiopiranilo, 2-, 3- o. 4-4H-thiopiranilo, 3- o 4-piridazinilo, pirazinilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzofurilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzotienilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7- indolilo, 1-, 2-, 4- o 5-benzimidazolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzopirazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7- benzoxazolilo, 3-, 4-, 5- 6- o 7-benzisoxazolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7- benzotiazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzisotiazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzo-1,3- oxadiazolilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8-quinolinilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- isoquinolinilo, 1-, 2-, 3-, 4- o 9-carbazolilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- o 9- acridinilo, o 2-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8- quinazolinilo, o adicionalmente opcionalmente fenilo sustituido, 2- o 3-tienilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 3-pirrilo, 3-pirazolilo, 2-tiazolilo o 5-tiazolilo, etc.

Los restos A preferidos incluyen ciclohexilo; o arilo C_{5-12} o heteroarilo C_{5-12} cada uno de ellos independientemente opcionalmente sustituido hasta tres veces por (i) alquilo C_{1-C10} o alquenilo C_{2-10} cada uno de ellos opcionalmente sustituido con halógeno hasta perhalo; (ii) cicloalquilo C_{3}-C_{10}; (iii) arilo C_{5-12} opcionalmente sustituido por átomos de halógeno 1-3; (iv) heteroarilo C _{5-12}; (v) halógeno; (vi) -COOR_{8}; (vii) -CO-R_{8}; (viii) ciano; (ix) -OR_{8}; (x) -NR_{8}R_{13}; (xi) nitro; (xii) -CO-NR_{8}R_{9}; (xiii) -alquil C_{1-10} -NR_{8}R_{9}; (xiv) -NR_{8}-COR_{12}; (xv) -NR_{8}-CO-OR_{9}; (xvi) -NR_{8}-SO_{2}-R_{9}; (xvii) -SR_{8}; (xviii) -SO_{2}-R_{8}; (xix) -SO_{2}-NR_{8}R_{9}, o (xx) NR_{8}-CO-NHR_{9}.

Además los restos A preferidos incluyen fenilo, piridilo, pirimidinilo, oxazolilo, furilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, isoxazolilo y pirazinilo, cada uno de ellos independientemente sustituidos hasta tres veces por halógeno, alquilo C_{1-10}, alcoxi C_{1-10}-fenilo, naftilo, -OR_{10},

2

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3

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5

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así como

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6

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7

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8

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en las que cada Z independientemente es halógeno, hidroxi, hidroxi-alquilo-C_{1-10}, -CN, -NO_{2}, alcoxi C_{1-10}-carboxilo, -NR_{10}-COR_{11}, o -NR_{10}-CO-OR_{11}, así como OR_{10},

y es 0-3, más preferiblemente 1-3,

y R_{4} es como se ha descrito anteriormente.

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Los restos A preferidos adicionalmente incluyen

9

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10

así como

11

en las que R_{15} es H; fenilo opcionalmente sustituido por alquilo C_{1-10}, alcoxi C_{1-10}, alquil C_{1-10}- carboxilo, o halógen; benzilo; pirimidilo o piridilol; y R_{16} es H, fenilo, -COOR_{10},

12

La presente invención también se refiere a sales farmacéuticamente aceptables de fórmula I. Sales farmacéuticamente aceptables adecuadas se conocen bien en la técnica e incluyen sales básicas Las sales farmacéuticamente aceptables son bien conocidas por los expertos en la técnica e incluyen sales de ácidos inorgánicos y orgánicos, tales como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido metanosulfónico, ácido sulfónico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido oxálico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido benzoico, ácido salicílico, ácido fenilacético, y ácido mandélico. Además las sales farmacéuticamente aceptables incluyen sales de ácidos de bases inorgánicas, tales como las sales que contienen cationes alcalinos (por ejemplo, Li^{+}, Na^{+} o K^{+}), cationes de tierras alcalinas (por ejemplo, Mg^{+}, Ca^{+} o Ba^{+}), el catión amonio, así como sales de ácidos de bases orgánicas, incluyendo alifáticas y aromáticas amonio sustituidas, y cationes de amonio cuaternarios, tales como los que provienen de protonación o peralquilación de trietilamina, N,N-dietilamina, N,N- diciclohexilamina, piridina, N,N-dimetilaminopiridina (DMAP), 1,4-diazabiclo[2.2.2]octano (DABCO), 1,5-diazabiciclo[4.3.0]non-5-eno (DBN) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (DBU).

Un número de compuestos de Fórmula I poseen átomos de carbono asimétricos y pueden por lo tanto existir en formas racémicas y ópticamente activas. Los procedimientos de separación de las mezclas enantioméricas y diastereoméricas son bien conocidos por los expertos en la técnica. La presente invención abarca cualquier forma racémica aislada u ópticamente activa de los compuestos descritos en la Fórmula I que posee actividad inhibidora Rho-quinasa.

La invención también incluye composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmula I, y un vehículo fisiológicamente aceptable.

La invención además abarca el tratamiento de indicaciones mediadas por la Rho-quinasa, mediante la administración de un compuesto de Fórmula I, o una composición farmacéutica que contiene un compuesto de Fórmula I. De este modo, la invención abarca el tratamiento de enfermedades cardioavsculares tales como, hipertensión, aterosclerosis, reestenosis e isquemia cerebral, o trastornos del sistema de nervioso central de vasoespasmos tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal, disfunción eréctil, por ejemplo, en pacientes que no tienen respuesta activa a los inhibidores de PDE-5, y cáncer (por ejemplo, crecimiento tumoral) mediado por la Rho-quinasa, mediante la administración, por ejemplo, a un huésped en necesidad del mismo, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I. Cánceres y tumores mediados por la Rho-quinasa incluyen cánceres de la mama, colon, próstata, ovarios, cerebro y pulmón y sus metástasis.

Un numero de compuestos de Fórmula I poseen carbonos asimétricos y pueden por lo tanto existir en formas racémicas y ópticamente activas. Los procedimientos de separación de las mezclas enantioméricas y diastereoméricas son bien conocidos por los expertos en la técnica. La presente invención abarca cualquier forma racémica aislada u ópticamente activa de los compuestos descritos en la Fórmula I que posee actividad inhibidora Rho-quinasa.

La invención también incluye composiciones farmacéuticas que incluyen un compuesto de Fórmula I, un vehículo fisiológicamente aceptable.

La invención además abarca el tratamiento de indicaciones mediadas por la Rho-quinasa, mediante la administración de un compuesto de Fórmula I, o una composición farmacéutica que contiene un compuesto de Fórmula I. De este modo la invención abarca el tratamiento de enfermedades cardiovasculares tales como hipertensión, aterosclerosis, reestenosis e isquemia cerebral, o trastornos del sistema de nervioso central de vasoespasmos tales como degeneración neuronal y lesión de la médula espinal, disfunción eréctil, por ejemplo, en pacientes que no tienen respuesta activa a los inhibidores de PDE-5, y cáncer (por ejemplo, crecimiento tumoral) mediado por la Rho-quinasa, mediante la administración, por ejemplo, a un huésped en necesidad del mismo, de una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I. Cánceres y tumores mediados por la Rho-quinasa incluyen cánceres de la mama, colon, próstata, ovarios, cerebro y pulmón y sus metástasis.

Los compuestos se pueden administrar por vía oral, tópica, parenteral, mediante inhalación o pulverización, vaginal, rectal o sublingual en formulaciones de dosificación unitaria. El término "administración mediante inyección" incluye inyecciones intravenosa, intraarticular, intramuscular, subcutánea y parenteral., así como el uso de técnicas de infusión. La administración térmica puede incluir aplicación tópica o transdérmica. Uno o más compuestos pueden estar presentes en asociación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables no tóxicas y si se desea otros ingredientes activos.

Las composiciones concebidas para uso oral se pueden preparar de acuerdo con cualquier procedimiento conocido en la técnica para la fabricación de composiciones farmacéuticas. Tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados entre el grupo constituido por diluyentes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar preparaciones apetitosas. Los comprimidos contienen el ingrediente activo mezclado con excipientes farmacéuticamente aceptables no tóxicos que son adecuados para la fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, diluyentes inertes, como carbonato de calcio, carbonato sódico, lactosa, fosfato de calcio o fosfato sódico; agentes de granulación y disgregación, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes ligantes, por ejemplo, almidón, gelatina o goma arábiga y agentes lubricantes, por ejemplo, estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos pueden estar sin recubrir o pueden estar recubiertos por técnicas conocidas para retardar la disgregación y absorción en el tracto gastrointestinal y, proporcionar por lo tanto una acción sostenida durante un período mayor. Por ejemplo, se puede emplear un material de retraso en el tiempo tal como monoestearato de glicerilo o distearato de glicerilo. Los compuestos también se pueden preparar en forma sólida de liberación rápida.

Las formulaciones para uso oral también se pueden presentar como cápsulas de gelatina duras, en las que el ingrediente activo está mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de gelatina blandas, en las que el ingrediente activo está mezclado con agua o un medio oleoso, por ejemplo, aceite de cacahuete o parafina líquida o aceite de oliva.

También se pueden usar las suspensiones acuosas que contienen los materiales activos mezclados con excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa sódica, metilcelulosa, hidropropilmetilcelulosa, alginato sódico, polivinilpirrolidona, goma tragacanto y goma arábiga; agentes dispersantes o humectantes pueden ser un fosfátido de origen natural, por ejemplo, lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo, estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenooxicetanol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y un hexitol como monooleato de polioxietilensorbitano, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de polietilensorbitano. Las suspensiones acuosas pueden contener también uno o más conservantes, por ejemplo, etil, o n-propil p-hidroxibenzoato, uno o más agentes colorantes, uno o más agentes aromatizantes, y uno o más agentes edulcorantes, como sacarosa o sacarina.

Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua proporcionan el ingrediente activo mezclado con un agente dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más conservantes. Agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes de suspensión adecuados se ejemplifican por los ya citados anteriormente. También pueden estar presentes excipientes adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y colorantes.

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Los compuestos también pueden estar presentes en la forma de formulaciones líquidas no acuosas, por ejemplo suspensiones oleosas que se pueden formular suspendiendo los ingredientes activos en un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de maní, aceite de oliva, aceite de sésamo o aceite de cacahuete, o en un aceite mineral como parafina líquida. Las suspensiones oleosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo, cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Pueden añadirse agentes edulcorantes, como los descritos anteriormente, y agentes aromatizantes, para proporcionar preparaciones orales apetitosas. Estas composiciones pueden conservarse mediante la adición de un antioxidante como ácido ascórbico.

Los compuestos de la invención también se pueden administrar por vía transdérmica usando los procedimientos bien conocidos en la técnica (véase, por ejemplo: Chien; "Transdermal Controlled Systemic Medications"; Marcel Dekker, Inc.; 1987. Lipp et al. documento WO94/04157 3 marzo de 94). Por ejemplo, una solución o suspensión de un compuesto de Fórmula I en un disolvente volátil adecuado que opcionalmente contiene agentes potenciadores de penetración se pueden combinar con aditivos adicionales conocidos por los expertos en la técnica, tales como materiales de matriz y bactericidas. Después de la esterilización, la mezcla resultante se puede formular siguiendo procedimientos conocidos en las formas de dosificación. Además, tras el tratamiento con agentes emulsionantes y agua, una solución o suspensión de un compuesto de Fórmula I se puede formular en una loción o ungüento.

Los disolventes adecuados para el procesamiento de sistemas de administración transdérmica son conocidos por los expertos en la técnica, e incluyen alcoholes inferiores tales como etanol o alcohol isopropílico, cetonas inferiores tal como acetona, ésteres de ácidos carboxílicos inferiores tal como acetato de etilo, éteres polares tal como tetrahidrofurano, hidrocarburos inferiores tales como hexano, ciclohexano o benceno, o hidrocarburos halogenados tales como diclorometano, cloroformo, triclorotrifluoroetano, o triclorofluoroetano. Los disolventes adecuados también pueden incluir mezclas de uno o más materiales seleccionados entre alcoholes inferiores, cetonas inferiores, ésteres de ácidos carboxílicos inferiores, éteres polares, hidrocarburos inferiores, hidrocarburos halogenados.

Los materiales potenciadores de la penetración adecuados para el sistema de administración transdérmica son conocidos por los expertos en la técnica, e incluyen, por ejemplo alcoholes monohidroxílicos o polihidroxílicos tales como etanol, propilen glicol o alcohol bencílico, alcoholes grasos C_{8}-C_{18} saturados o no saturados tales como alcohol laúrico o alcohol cetílico, ácidos grasos C_{8}-C_{18} saturados o no saturados tal como ácido esteárico, ésteres grasos saturados o no saturados con hasta 24 carbonos tales como ésteres de metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, sec-butilo, isobutilo, tercbutilo o monoglicerina de ácido acético, ácido caprónico, ácido laúrico, ácido miristínico, ácido esteárico, o ácido palmítico, o diésteres de ácidos dicarboxílicos saturados y no saturados de hasta 24 carbonos tales como adipato de diisopropílico, adipato diisopropílico, sebacato diisopropílico, maleato diisopropílico, o fumarato diisopropílico. Los materiales potenciadores de la penetración adicionales incluyen derivados de fosfatidilo tales como lecitina o cefalina, terpenos, amidas, cetonas, ureas y sus derivados, y éteres tales como dimetil isosórbido y dietileneglicol monoetil éter. Las formulaciones potenciadoras de la penetración adecuados también pueden incluir las mezclas de uno o más materiales seleccionados entre alcoholes monohidroxílicos o polihidroxílicos, alcoholes grasos C_{8}-C_{18} saturados o no saturados, ácidos grasos C_{8}-C_{18} saturados o no saturados, ésteres grasos saturados o no saturados con hasta 24 carbonos, diésteres de ácidos dicarboxílicos saturados o no saturados con un total de hasta 24 carbonos, derivados de fosfatidilo, terpenos, amidas, cetonas, ureas y sus derivados, y éteres.

Los materiales de unión adecuados para los sistemas de administración transdérmica son conocidos por los expertos en la técnica e incluyen poliacrilatos, siliconas, poliuretanos, polímeros de bloque, copolímeros de estirenobutadieno, y gomas naturales y sintéticas. Éteres de celulosa, polietilenos derivatizados, y silicatos también se pueden usar como componentes de matriz. Se pueden añadir aditivos adicionales, tales como resinas o aceites viscosos para incrementar la viscosidad de la matriz.

Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden estar en forma de emulsiones aceite en agua. La fase oleosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuete, o un aceite mineral, por ejemplo, parafina líquida o mezclas de los mismos. Los agentes de emulsión adecuados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo, goma arábiga, o goma tragacanto, fosfátidos de origen natural, por ejemplo, soja, lecitina y ésteres o ésteres parciales derivados de ácidos grasos y hexitol, anhídridos, por ejemplo monooleato de sorbitano, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilensorbitano. Las emulsiones también pueden contener también edulcorantes y aromatizantes.

Los jarabes y elixires se pueden formular con agentes edulcorantes, por ejemplo, glicerol, propilenglicol, sorbitol o sacarosa. Tales formulaciones pueden contener además un emoliente, un conservante y agentes aromatizantes y colorantes.

Los compuestos también se pueden administrar en forma de supositorios para administración rectal o vaginal del fármaco. Estas composiciones se pueden preparar mezclando el fármaco con un excipiente no irritante adecuado que sea sólido a temperaturas normales, pero líquido a la temperatura del recto o de la vagina y que por tanto se fundirá en el recto o vagina para liberar el fármaco. Tales materiales incluyen manteca de cacao y polietilenglicoles.

Además, para el tratamiento de la disfunción eréctil, las presentes composiciones farmacéuticas pueden tomar cualquier forma que sea adecuada para la administración al pene o bien mediante inyección al cuerpo cavernoso o administración transuretral, o aplicarse por vía tópica al meato de la uretra. En el caso de inyección en el cuerpo cavernoso, la composición farmacéutica es adecuada en la forma de una solución salina. Preferiblemente, la composición farmacéutica está en una forma adecuada para la administración transuretral, y en este caso la composición está típicamente en la forma de una solución, una pomada, o un supositorio. Típicamente, la composición farmacéutica se administra 1 a 50 minutos, preferiblemente 10 a 20 minutos, antes de que comience la relación sexual.

Para todos los regímenes de uso descritos en el presente documento para los compuestos de Fórmula I, el régimen de dosificación oral diario preferiblemente estará preferiblemente entre 0,01 y 200 mg/Kg de peso total corporal. La dosificación diaria para la administración mediante inyección, incluyendo intravenosa, intramuscular, subcutánea y parenteral, y uso de técnicas de infusión preferiblemente estarán entre 0,01 y 200 mg/Kg de peso total corporal. El régimen de dosificación diaria vaginal preferiblemente estará entre 0,01 y 200 mg/Kg de peso total corporal. El régimen de dosificación diaria por vía tópica estará preferiblemente entre 0,01 y 200 mg administrada entre una y cuatro veces al día. La concentración transdérmica será preferiblemente de manera que requiera mantener una dosis diaria entre 0,1 y 200 mg/Kg. El régimen de dosificación por inhalación diaria estará preferiblemente entre 0,01 y 10 mg/Kg de peso total corporal.

Los expertos en la técnica apreciarán que un procedimiento particular de administración dependerá de una diversidad de factores, todos los cuales se consideran rutinariamente cuando se administran los compuestos terapéuticos. Sin embargo, también se entenderá que el nivel de dosis específico para cualquier paciente dado dependerá de una diversidad de factores, incluyendo, la actividad la actividad del compuesto específico empleado, la edad del paciente, el peso corporal del paciente, la salud general del paciente, el género del paciente, la dieta del paciente, tiempo de administración, vía de administración, velocidad de excreción, combinaciones de fármaco, y gravedad de la afección que se está sometiendo a terapia. Además los expertos en la técnica apreciarán que el curso de tratamiento, es decir, el modo de tratamiento y el número de dosis diarias de un compuesto de Fórmula I o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo proporcionan durante un número definido de días, se puede determinar por los expertos en la técnica usando ensayos de tratamiento convencionales.

Los compuestos y composiciones presentes muestran la actividad inhibidora de la Rho-quinasa, y de este modo son útiles para tratar las indicaciones enumeradas anteriormente, por ejemplo, las indicaciones mediadas por la Rho-quinasa. Mediante las indicaciones mediadas por la Rho-quinasa se quiere decir enfermedades o afecciones cuya progresión procede, al menos en parte, mediante la ruta Rho.

La actividad inhibidora de la Rho-quinasa, por ejemplo, inhibición de ROCK-1, se puede evaluar como sigue:

El dominio quinasa de ROCK-1, los aminoácidos 27-530, se aísla como una proteína de fusión de la glutatión S-transferasa a partir de las células de insecto Sf9. La proteína se purifica parcialmente mediante la purificación de afinidad por glutatión S-efarosa 4B (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ). Las reacciones se llevan a cabo en placas de 96 pocillos en un volumen total de 100 \mul que contienen 50 mM N-[2-Hidorietil]piperaxina-N'-[2-ácido etanosulfónico] pH 7,5, 5 mM MgCl_{2}, 1 mM de ditiotreitol, 6 \muM de ATP, 0,2 \muCi [^{33}P] ATP (NEN, Boston, MA), 1 mg de proteína básica de mielina y 0,1 mg ROCK-1. Los compuestos de ensayo se disuelven en100% de dimetilsulfóxido, diluido hasta la concentración apropiada y se añadieron a la reacción. La concentración final de dimetilsulfóxido no excedió de 0,5%. La reacción se desarrolla durante una hora a temperatura ambiente. La reacción se detiene cuando la adición de 7 ml de 1 N HCL, se transfieren a membranas P30 y la cantidad de [33P]ATP, como cuentas por minuto (c.p.m.) se incorporan en el sustrato adecuado, proteína básica de mielina, se lee en un Lector BetaPlate (Packard Instrument Co., Meriden, CT.). (Todos los reactivos se compraron en Sigma Chemical Co., St. Louis, MO salvo que se establezca de otra manera). El porcentaje de inhibición se mide mediante la cantidad de incorporación de la radiactividad en la presencia del compuesto de ensayo cuando se compara con la cantidad de incorporación en la ausencia del compuesto de ensayo.

La actividad inhibidora también se puede evaluar mediante la medición de formación de fibras de esfuerzo, realizada esencialmente como se describe por Ridley, A.J., y A. Hall, Cell 70: 389-399 (1992). Fibrosarcoma humano HT1080 (CCL-121, Colección Americaan de Cultivos Tipo, Manassas, VA) se siembran las placas sobre cubreobjetos de vidrio de 22 X 22 mm nº 1 en placas de cultivos de tejidos de seis pocillos (Costar) a 2,5 X 10^{4} células/pocillo en medio de Tagle modificado de Delbeco (DMEM, Gibco) complementado con 10% se suero fetal bovino. Las células se mantienen en una atmósfera humidificada, 5% de CO_{2} a 37ºC. Después de 24 horas el medio de cultivo se retira y se reemplaza con medio sin 10% de suero fetal bovino y las células se cultivaron durante 48 horas adicionales. Los compuestos de ensayo se disuelven en 100% de dimetilsulfóxido, se diluyen hasta la concentración apropiada y se añaden al medio de cultivo 60 minutos antes de la inducción de la formación de fibras de esfuerzo. La concentración final de dimetilsulfóxido no excedieron en 0,25%. La formación de las fibras de esfuerzo se induce mediante la adición de de ácido lisofosfatídico (1-oleoil-2-hidroxi-sn-glicerol-3-fosfato, Avanti Polar-Lipids, Alabaster, Al) hasta una concentración final de 10 \muM en Medio de Tagle modificado de Delbeco que contenía 0,1% de albúmina sérica bovina sin ácido graso durante 15 minutos a 37ºC. Se fijan las células con 4% de paraformaldehído (Poly Scientific, Bay Shore, NJ) en solución salina tamponada con fosfato (PBS) durante 15 minutos. Después las células se lavan 3 veces en PBS y después se permeabilizan usando una solución que contiene 40 mM de piperazina-N-N'bis[ácido 2-etanosulfónico], 50 mM de N-[2-hidroxietil]piperaxina-N'-[ácido 2-etanosulfónico], 0,1% de Triton X-100, 75 mM NaCl, mM MgCl_{2}, 0,5 mM de EGTA, pH 7,2 durante 2 minutos a temperatura ambiente. Las células se lavan 3 veces durante 5 minutos cada vez en PBS y después las fibras de esfuerzo de actina se tiñen usando 10 unidades/ml de rodamina faloidina (Molecular Probes, Eugene, OR) en PBS durante 60 minutos a temperatura ambiente. Las células se lavan 3 veces con PBS y los cubre objetos se montan sobre portaobjetos de vidrio. El porcentaje de las células positivas de las fibras de esfuerzo sobre cada portaobjetos se determina visualmente usando un microscopio Nikon Labphoto-2. Al menos 100 células se contaron por cubreobjetos y se realizaron los experimentos por duplicado. El porcentaje de inhibición se mide mediante recuento del número de células positivas de fibras de esfuerzo en la ausencia del compuesto de
ensayo.

Usando los protocolos anteriores, todos los compuestos descritos en el presente documento se determinan para que tengan actividad inhibidora de la Rho-quinasa.

Los compuestos de la invención se pueden preparar de acuerdo con procedimientos químicos de rutina, convencionales, y/o como se describe más adelante, a partir de materiales de partida que están o bien comercialmente disponibles o se pueden producir de acuerdo a procedimientos químicos de rutina, convencionales. Los procedimientos generales para la preparación de los compuestos se proporcionan más adelante, y la preparación de los compuestos se ilustra específicamente en los ejemplos.

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Abreviaturas y acrónimos

Cuando se usan las siguientes abreviaturas en el presente documento, tienen los siguientes significados:

Ac_{2}O: anhídrido acético

Anhi: anhídrido

n-BuOH: n-butanol

t-BuOH: t-butanol

CD_{3}OD: metanol-d4

Celite®: agente de filtro de tierra de diatomeas, ® Celite Corp.

CH_{2}Cl_{2}: Cloruro de metileno

CI-MS: espectroscopía de masas de ionización química

conc: concentrado

dec: descomposición

DME: dimetoxietano

DMF: N,N-dimetilformamida

DMSO: dimetilsulfóxido

ELSD: detector evaporativo de dispersion de luz

EtOAc: Acetato de etilo

EtOH: etanol (100%)

Et_{2}O: dietil éter

Et_{3}N: trietilamina

HPLC ES-MS: cromatografía líquida de alta resolución-espectroscopia de masas por electropulverización

NMM: 4-metilmorfolina

Ph_{3}P: trifenilfosfina

Pd(dppf)Cl_{2}: [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]dicloropaladio (II)

Pd(PPh_{3})_{4}: tetrakis(trifenilfosfina)paladio (0)

Pd(OAc)_{2}: acetato de paladio

P(O)Cl_{3}: oxicloruro de fósforo

TA: tiempo de retención (HPLC0

rt: temperatura ambiente

THF: tetrahidrofurano

TFA: ácido trifluoroacético

TLC: cromatografía en capa fina

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Procedimientos generales de preparación

Procedimiento general A

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Una mezcla de los compuestos 1 y 2, y acetato de potasio en THF/agua se agita a temperatura ambiente durante toda una noche. Se añade agua a la mezcla dando como resultado la formación de un precipitado. Se lava el precipitado con agua, se filtra, y se seca a alto vacío produciendo 3.

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Procedimiento general B

14

Una mezcla del compuesto 3, etilen glicol dimetil éter/agua, ácido aril borónico y bicarbonato de sodio se desgasifica con argón durante 15 minutos y se añade Pd(dppf)_{2}Cl_{2}. La mezcla se calienta a reflujo durante toda una noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se añade a la mezcla CH_{2}Cl_{2} y H_{2}O. Se separan las fases orgánica y acuosa y la fase acuosa se extrae con y CH_{2}Cl_{2}, y se secan las fases orgánicas combinadas sobre sulfato sódico anhidro. El disolvente orgánico se retira a presión reducida y se purifica el producto bruto mediante cromatografía en gel de sílice de HPLC produciendo el compuesto 4.

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Procedimiento general C

15

Una mezcla del compuesto 3 y un fenol, amina N-sustituida, o anilina N-sustituida (A-X-H. donde X es O o NR^{8}) se calienta a 140ºC durante 2 horas. Se enfría la mezcla hasta temperatura ambiente y se trata con éter formando precipitado o purificando mediante cromatografía en columna de gel de sílice. Se filtra el precipitado, se lava con éter varias veces, y se seca a alto vacío proporcionando el producto.

Procedimiento general D

16

Un aminoéster heterocíclico de Fórmula 6 se acila con un cloruro de ácido o anhídrido aromático, en una base tal como piridina. El producto éster amida se convierte al ácido de amida de Fórmula 7 mediante hidrólisis, o si R'' es metilo, mediante la acción de tribromuro de boro. La conversión del ácido en la amida de Fórmula 8 se lleva a cabo mediante reacción de 7 con amoniaco en presencia de catalizador tal como DMAP y EDC. La ciclación a 9 se puede llevar a cabo calentando la diamida 8 en presencia de una base tal como hidróxido de sodio. El intermedio de cloro de Fórmula 10 se forma mediante tratamiento de 9 con un agente clorante tal como tal como oxicloruro de fósforo.

Procedimiento general E

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17

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Una amina cianoheterocíclica de Fórmula 10 se puede convertir directamente en los compuestos de Fórmula 4 mediante calentamiento con un reactivo Vilsmeier, preparado in situ mediante tratamiento de N,N-dimetil amida con un oxicloruro de fósforo o cloruro de oxalilo y similares.

Sin elaboración adicional, se cree que los expertos en la técnica pueden, usando la descripción precedente, utilizar la presente invención hasta su grado mayor. Por lo tanto, las siguientes realizaciones específicas preferidas se consideran meramente ilustrativos, y no limitantes del resto de la descripción de ninguna manera en absoluto.

En los ejemplos anteriores y que siguen, todas las temperaturas se establecen sin corregir en grados Celsius; y, salvo que se indique de otra manera, todas las partes y porcentajes están en peso.

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Ejemplos Ejemplo 1 Preparación de 2-(5-cloro-2-tienil)-N-(1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina

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Etapa 1

Preparación de 2,3-diclorotieno[3,2-d]pirimidina

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Una solución de tienoilenurea (6,0 g) y N,N-dimetilanilina (2,9 ml) en oxicloruro de fósforo (35 ml) se calentó a 125ºC (baño de aceite) durante 22 h en argón. La solución se enfrió hasta 50ºC y se vertió en agua fría (0ºC, 8,0 ml) mientras se agitaba vigorosamente. Se filtró el precipitado, se lavó con agua, y se disolvió en EtOAc. Se filtró la solución orgánica, se lavó con agua, y se seca la fase orgánica sobre MgSO_{4}, se filtró y se concentró produciendo un precipitado de color amarillo (4,5 g, 61% de rendimiento).

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Etapa 2

Preparación de 4-(N-5-aminoindazol)-2-cloro-tieno[3,2-d]pirimidina

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Una mezcla del compuesto de la etapa 1 (4,0 g, 19,5 mmol), 5-aminoindazol (3,2 g, 23,4 mmol), y acetato de potasio (2,5 g, 25,4 mmol) en THF/agua (100 ml/50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. El THF se retiró a presión reducida y el resto se repartió entre EtOAc y agua. La fase orgánica se lavó con NH_{4}Cl acuoso, se secó cobre MgSO_{4}, se filtró. El filtrado se vertió en una columna de gel de sílice y se eluyó con EtOAc. El disolvente se concentró mediante rotavapor y se obtuvo un precipitado de color gris (3,9 g, 65% de rendimiento). Rf = 0,28 (EtOAc/hexanos, 1/1).

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Etapa 3

Preparación de 2-(5-cloro-2-tienil)-N-(1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]-pirimidin-4-amina

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Una mezcla del compuesto de la etapa 2 (6.,9 g, 23 mmol), ácido 5-clorotienil borónico (3,7 g, 23 mmol) y bicarbonato de sodio (5,8 g, 69 mmol) en DME/H2O (3/1, 300 ml) se purgó con Ar durante 1 h. Se añadió Pd(dppf)Cl_{2} (1,8 g, 2,3 mmol) y la mezcla se calentó a reflujo durante 48 h. Se retiró el disolvente mediante rotavapor y se purificó el producto bruto mediante cromatografía en gel de sílice produciendo un sólido de color amarillo (3,5 g, 40% de rendimiento). Rf = 0,20 (EtOAc/hexano, 1/1). ^{1}H RMN (metanol-d4) \delta 8,05 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,89 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,68-7,59 (m, 2H), 7,50 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,29 (1H, d, J = 3 Hz), 6,95 (d, 1H, J = 3 Hz).

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Ejemplos 2-55

Usando un procedimiento análogo al descrito para el ejemplo 1 y haciendo reaccionar 4-(N-5-aminoindazol)-2-clorotieno[3,2-d]pirimidina y el ácido borónico o éster apropiado, se obtuvieron los compuestos descritos en la Tabla 1 a continuación.

TABLA 1

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1) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 378,4, Rf = 0,39 (50% EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (DMSO): \delta 13,1 (s, ^{1}H), 9,8 (s, 1H), 8,3-8,4 (m, 2H), 8,2 (d, J = 5,7 Hz, ^{1}H), 8,1 (s, 2H), 7,5-7,7 (m, 5H)

2) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 421,4, Rf = 0,25 (50% EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 8,7 (m, 1H), 8,4 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,2-8,3 (m, 7H), 7,6-7,7 (m, 4H)

3) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 450,4, Rf = 0,50 (1/1, EtOAc/Hex).

4) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 438,4, Rf = 0,40 (1/1, EtOAc/Hex).

5) HPCL/EM: (M + H)^{+} 420,4 m/z, Rf= 0,33 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (DMSO): \delta 13,0 (s, 1H), 9,6 (s, 1H), 8,7 (s, 1H), 8,4 (d, J = 8,7, 1H), 8,3 (s, 1H), 8,2 (d, J = 5,7,1H), 8,0 (s, 1H), 7,8-7,4 (m, 10H)

6) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 378,4, Rf = 0,62 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (DMSO y CH2Cl2): \delta 12,9 (s, 1H), 9,7 (s, 1H), 8,3-8,4 (m, 3H), 8,0-8,1 (m, 4H), 7,3-7,7 (m, 3H)

7) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 421,4, Rf = 0,24 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 9,1 (s, 1H), 8,7 (m, 1H), 8,6 (dd, 1H), 8,4-8,5 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 8,3 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,1 (m, 1H), 8,0 (m, 2H), 7,9 (m, 1H), 7,6-7,7 (m, 2H), 7,6 (d, J = 5,1, 1H)

8) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 438,4, Rf = 0,41 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 8,3-8,4 (.. J = 8,4Hz, 2H), 8,3 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,1 (s, 1H), 7,8-7,9 (d, J = 8,4Hz, 2H), 7,6-7,8 (m, 4H), 7,5-7,6 (d, J = 5,4, 1H), 7,2-7,3 (m, 2H)

9) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 454,4, Rf = 0,33 (1/1, EtOAc/Hex),

10) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 454,5, Rf = 0,40 (1/1, EtOAc/Hex).

11) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 454,4, Rf = 0,42 (1/1, EtOAc/Hex).

12) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 488,4, Rf = 0,43 (1/1, EtOAc/Hex).

13) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 465,4, Rf = 0,36 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 8,6 (t, J = 1,8Hz, 1H), 8,4 (d, J = 8,7, 2H), 8,3 (m, 2H), 8,1-8,2 (m, 3H), 8,0 (d, J = 10,5, 2H), 7,7-7,8 (m, 3H), 7,5-7,6 (d, J = 5,4Hz, 1H)

14) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 468,4, Rf = 0,38 (1/1, EtOAc/Hex).

15) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 480,4, Rf = 0,37 (1/1, EtOAc/Hex).

16) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 480,4, Rf = 0,30 (1/1, EtOAc/Hex),

17) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 470,5, Rf = 0,36 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 8,3-8,4 (m, 2H, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,1 (s, 1H), 7,9-8,0 (m, 2H), 7,8-7,9 (m, 1H), 7,7-7,8 (m, 4H), 7,4-7,6 (m, 6H)

18) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 477,5, Rf = 0,13 (1/1, EtOAc/Hex).

19) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 462,5, Rf = 0,33 (1/1, EtOAc/Hex).

20) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 479,3, Rf = 0,39 (1/1, EtOAc/Hex).

21) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 434,4. Tiempo de retención (HPLC): Rt = 4,73, ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 8,1-8,4 (m, 6H), 7,4-7,7 (m, 7H)

22) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 465,3. Tiempo de retención (HPLC, CH3CN/H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,79

23) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 426,4. Tiempo de retención (HPLC): Rt = 2,55

24) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 480,4. Tiempo de retención (HPLC): Rt = 2,31

25) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 421,4, Rf = 0,13 (1/1, EtOAc/Hex), ^{1}H RMN (CD_{3}OD): \delta 9,0 (s,1H), 8,8 (s, 1H), 8,7 (t, J = 1,8Hz, 1H), 8,5-8,6 (m, 1H), 8,4 (m, 1H), 8,3 (d, J = 6,0Hz, 1H), 8,1 (m, 1H), 8,0 (m, 1H), 7,6-7,9 (m, 4H), 7,5-7,6 (d, J = 5,7Hz, 2H)

26) Rf = 0,33 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5), ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,2 (1H, s), 8,2 (1H, s), 8,1 (1H, s), 8,0 (1H, dd, J = 1,8,6,0

Hz), 7,9-7,8 (1H, m), 7,8-7,7 (1H, d, J = 9,3 Hz), 7,7-7,6 (2H, m), 7,6-7,5 (1H, m), 7,4 (1H, dd, J = 5,4, 2,1 Hz), 7,4-7,3 (1H, m).

27) Rf = 0,33 (CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5), ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 9,1 (1H, d, J = 2,4 Hz), 8,6 (1H, dd, J = 2,4,8,7 Hz), 8,1-8,0 (2H, m), 8,0-7,9 (1H, d, J = 5,4 Hz), 7,7 (1H, dd, J = 2,2, 8,7 Hz), 7,6 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,42 (1H, d, J = 5,4 Hz), 6,8 (1H, d, J = 9,3 Hz).

28) Rf = 0,47 (Hexano/EtOAc = 1/1), ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 9,7 (1H, d, J = 1,4 Hz), 9,2 (1H, d, J = 8,7 Hz), 8,24-8,20 (2H, m), 8,1 (1H, d, J = 2,2 Hz), 7,8 (1H, d, J = 2,8 Hz), 7,71 (1H, d, J = 1,4 Hz), 7,66-7,56 (4H, m), 7,21-7,19 (2H, m), 709-7,07 (1H, m).

29) Rf = 0,28 (Hexano/EtOAc,1/2), ^{1}H RMN (CD_{3}OD) \delta 8,60 (2H, d, J = 5,7 Hz), 8,53 (2H, dd, J = 1,5, 6,9 Hz), 8,15 (1H, d, J = 1,0 Hz), 8,10 (1H, d, J = 2,2 Hz), 8,01 (1H, d, J = 5,4 Hz), 7,88 (2H, dd, J = 1,8, 6,6 Hz), 7,79 (2H, dd, J = 1,8, 4,5 Hz), 7,74 (1H, dd, J = 2,1, 9,0 Hz), 7,76 (1H, d, J = 8,7 Hz), 7,48 (1H, d, J = 6,5 Hz).

30) Rf = 0,38 (Hexano/EtOAc, 1/1), ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 13,08 (1H, s), 9,02 (1H, s), 8,40 (2H, dd, J = 2,4, 5,7 Hz), 8,15 (1H, d, J = 6,0 Hz), 8,18,-8,09 (2H, m), 7,68 (1H, dd, J = 2,1, 9,3 Hz), 7,60 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,46 (1H, d, J = 5,7 Hz), 7,29 (2H, t, J = 7,2 Hz)

31) ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 11,01 (1H, s), 9,34 (1H, s), 8,72 (1H, d, J = 5,7 Hz), 8,18 (1H, s), 8,12 (1H, J = 6,6 Hz), 7,97-7,90 (4H, m), 7,87 (1H, s), 7,56 (1H, d, J = 3,0 Hz), 7,47 (1H, d, J = 6,0 Hz), 7,36-7,34 (1H, m)

32) Rf = 0,42 (Hexano/EtOAc, 1/1), (CD_{3}OD) \delta 8,91 (1H, d, J = 6,3 Hz), 8,37 (1H, d, J = 6,3 Hz), 8,30 (1H, dd, J = 1,2, 9,0 Hz), 8,25 (1H, dd, J = 1,5, 6,3 Hz), 8,20 (1H, d, J = 0,60 Hz), 8,12 (1H, d, J = 1,0 Hz), 7,86 (1H, t, J = 6,2 Hz), 7,80 (1H, s), 7,80-7,78 (1H, m), 7,76 (1H, d, J = 1,8 Hz), 7,71 (1H, d, J = 6,0 Hz), 7,65-7,62 (1H, m), 7,54-7,46 (2H, m).

33) HPCL/EM: (M + H) m/z 462, Rf = 0,28 (EtOAc/Hexanos 10:90).

34) Purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente, EtOAc en hexanos desde 20% a 70%); Rf = 0,22 (EtOAc/hexanos, 1/1); (3,18 g, 68 % de rendimiento); EMCL m/z 374 (M + H)+; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 13,0 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 8,3 (d, 2H), 8,1 (m, 3H), 7,62 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,4 (d, 1H), 6,94 (d, 2H), 3,78 (s, 3H).

35) Purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente, EtOAc en hexanos desde 20% a 70%) (2,8 g, 70% de rendimiento); EMCL m/z 344 (M + H)+; Rf = 0,24 (EtOAc/hexanos, 1/1); ^{1}H RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta 8,35 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,7 (d, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,46 (s, 4H).

36) Purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente, EtOAc en hexanos desde 10% a 70%); Rf = 0,19 (EtOAc/hexanos, 3/2); (55 mg, 15% de rendimiento); EMCL m/z 429 (M + H)+; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 13,07 (s, 1H), 9,65 (s, 1H), 8,24 (d, 2H), 8,1 (m, 2H), 7,66 (d, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,4 (d, 1H), 3,73 (s, 4H), 3,21 (4H).

37) Purificado mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente, EtOAc en hexanos desde 10% a 50%); Rf = 0,3 (EtOAc/hexanos, 1/1); (194 mg, 70% de rendimiento); EMCL m/z 420 (M + H)+; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 13,1 (s, 1H), 9,8 (s, 1H), 8,44 (d, 2H), 8,15 (m, 3H), 7,8 (m, 5H), 7,6 (d, 1H), 7,47 (m, 3H), 7,36 (m, 1H).

38) El producto bruto 7e se purificó mediante filtración y se lavó con metanol; Rf = 0,16 (MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 5/95); (0,36 g, 61% de rendimiento); EMCL m/z 401 (M + H)+; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 13,09 (s, 1H), 9,97 (s, 1H), 9,17 (s, 1H), 8,42 (d, 1H), 8,3 (s, 1H), 8,18 (m, 2H), 8,14 (s, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,62 (d, 1H), 7,49 (d, 1H).

39) Se usó ácido borónico protegido por N-BOC en la etapa 3; se retiró el grupo BOC mediante TFA en CH_{2}Cl_{2} a temperatura ambiente, Se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (gradiente, EtOAc en hexanos desde 10% a 75%); (45 mg, 19% de rendimiento); EMCL m/z 528 (M + M)+).

40) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 428,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 3,27.

41) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 380,1, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 3,26

42) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 388,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% e TFA): Rt = 2,52.

43) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 362,1, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,69.

44) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 374,1, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,43.

45) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 358,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,46.

46) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 358,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,50.

47) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 372,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,61.

48) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 370,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,67.

49) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 400,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,81.

50) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 386,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,73.

51) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 386,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,79.

52) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 374,2, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,06.

53) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 374,3, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H2O/0,1% de TFA): Rt = 2,17.

54) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (montaje en seco, gradiente desde 20% a 75% EtOAc/Hex) produciendo el producto, HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 412,1, Tiempo de retención (HPCL/EM, CH3CN/
H_{2}O/0,1% de TFA): Rt = 3,28, HPCL/EM: (M + H)^{+} 412,1 m/z, ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): 13,12 (s, 1H, NH); 9,95 (s, 1H, NH); 8,71(s, 1H); 8,66 (d, 1H); 8,21 (d, 1H); 8,16 (s,1H); 8,07 (s,1H); 7,85 (s, 1H); 7,74 (t, 1H); 7,65 (d, 1H); 7,60 (s, 1H); 7,55 (d, 1H).

55) El residuo se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente desde 35-50% EtoAc/Hexano) produciendo el producto bruto, HPCL/EM: (M + H)^{+} 427, Rf = 0,64 (EtOAc/Hexanos, 80/20), ^{1}H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta = 8,23 (d, 2H), 8,16-8,14 (m, 1H), 8,08 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,73 (dd, 1H), 7,61 (d, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,01 (d, 2H), 3,32-3,23 (m, 4H), 1,72-1,60 (m, 6H).

56) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 426,4, Tiempo de retención (HPLC): Rt = 2,55, Rf = 0,68 en (EtOAc/Hex, 80/20), ^{1}H-RMN (300 MHz, DMSO d6) \delta = 8,17-7,43 (m, 13H).

57) HPCL/EM: (M + H)^{+} m/z 421,4, Rf = 0,46 en (MeOH/EtOAc, 07/93), 1H-RMN (300 MHz, CD_{3}OD) \delta = 7,5-6,25 (m, 14H).

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Ejemplo 59 Preparación de 4-(N-5-aminoindazol)-2-(4-fenol)-tieno[3,2-d]pirimidina

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30

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A una suspensión de (N-5-aminoindazol)-2-(4-metoxifenil)tieno[3,2-d]-pirimidina(Ejemplo 35, 0,86 g, 2,3 mmol) en CH_{2}Cl_{2} anhidro se añadió BBr_{3} a -78ºC. La mezcla se agitó durante toda una noche y se calentó hasta temperatura ambiente. La reacción se enfrió hasta 78ºC y se trató con NH_{4}Cl acuoso lentamente formando un precipitado. El disolvente se concentró mediante rotavapor y se evaporó conjuntamente con tolueno. El residuo se trató con disolvente mixto de MeOH y CH_{2}Cl_{2}, y después se filtró. Se añadió el filtrado se añadió a 6 g de gel de sílice y se retiró el disolvente mediante un rotavapor. Se vertió el residuo sobre una columna de gel de sílice y se eluyó con una fase móvil de gradiente que contiene EtOAc y hexano produciendo el producto (0,42 g, 1,17 mmol, 51% de rendimiento). CL/EM m/z 360 (M + H)^{+}, ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 13,15 (s, 1H), 9,8 (s, 1H), 9,7 (s, 1H), 8,2 (d, 2H), 8,1 (d, 3H), 7,7 (dd, 1H), 7,6 (dd, 1H), 7,4 (d, 1H), 6,8 (d, 2H); p. de f. 297-299ºC,

Ejemplo 60 Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-2-{4-[2-(4-morfolinil)etoxi]-fenil}tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina

31

A una mezcla de (Ejemplo 56, 62 mg, 0,17 g), CsCO_{3} (100 mg, 0,3 mmol) en acetona (3 ml) se añadió N-(2-bromoetilen)-morfolina (34 mg en 1 ml de acetona). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se filtró. El filtrado se añadió a 0,4 g de gel de sílice y se retiró el disolvente mediante rotavapor. El resto se vertió sobre una columna de gel de sílice y se eluyó con un gradiente de EtOAc en hexano (desde 50 % a 100%) produciendo un precipitado de color blanco (30 mg, 37% de rendimiento). Rf = 0.18 (MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 5/95). HPCL/EM: m/z 473 (M + H)+; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 13,07 (s, 1H), 9,71 (s, 1H), 8,30 (d, 2H), 8,09 (m, 3H), 7,70 (d, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,43 (d, 1H), 7,02 (d, 2H), 4,14 (t, 2H), 3,57 (t, 4H), 2,68 (t, 2H), 2,46 (t, 4H).

Ejemplo 61 Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-N-(5-{4-[(2-piridinilamino)metil]fenil}-1-benzotien-7-il)amina

32

Etapa 1

Preparación de ácido 4-[(2-piridinilamino)metil]fenilborónico

33

Una mezcla de ácido 4-formilfenilborónico (1 g, 6,67 mmol) y 2-piridinilamina (2,51 g, 26,7 mmol) en dicloroetano (25 ml) se agitó en argón a temperatura ambiente. A esta mezcla se añadió NaB(OAc)_{3} (1,84 g, 8,67 mmol). La mezcla de reacción se inactivo con H_{2}O después de 3 h. Se retiró el disolvente a presión reducida y se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó con agua. Después se secó la fase orgánica y se concentró a vacío. Después el producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna (gradiente desde 20% a 80% EtOAc/hexano) proporcionando el producto en forma de un líquido incoloro (0,39 g, 30%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 229,1 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = 4.54 min, ^{1}H NMR (CD_{3}OD): 7,90 (1H, d); 7,59 (2H, s); 7,43 (1H, m); 7,30(2H, d); 6,55 (2H, m); 4,47 (2H).

Etapa 2

Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-N-(5-{4-[(2-piridinilamino)metil]-fenil}-1-benzotien-7-il)amina

34

A una mezcla de N-(2-clorotieno[3,2-d]pirimidin-4-il)-N-(1H-indazol-5-il)amina (50 mg, 0,16 mmol), Na_{2}CO_{3} (ac) (2 M, 1,0 ml) en butanol/tolueno (1: 1, 4 ml) se burbujeó una corriente de argón durante 15 min. A la mezcla se añadió ácido 4-[(2-piridinilamino)metil]fenilborónico (0,15 g, 0,66 mmol) y tetrakis(trifenilfosfina) paladio(O) (0,06 g, 0,08 mmol) de una sola vez. La mezcla de reacción resultante se calentó a reflujo durante 24 h. Tras el enfriamiento, la solución se concentró, se recogió en EtOAc y se lavó con agua. Las fases orgánicas se secaron sobre sulfato sódico anhidro y se concentraron a vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente desde 20% a 80% EtOAc/hexano) proporcionando el producto (25 mg). HPCL/EM: (M + H)^{+} 450.1 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = min, ^{1}H RMN (CD_{3}OD): 8,31 (2H, d); 8,11 (1H, s); 8,05 (1H, s); 7,96(1H, d); 7,91 (1H, d); 7,71(1H, d); 7,58 (1H, d); 7,47(4H, m); 6,61(2H, m); 4,55 (2H, s).

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Ejemplo 62

35

Etapa 1

Preparación de metil 3-[(2-quinoxalinilcarbonil)amino]-2-thiofenecarboxilato

36

A una solución de 3-amino-2-tiofenilcarboxilato de metilo (0,82 g, 5,2 mmol) y cloruro de 2-quinoxalincarbonilo a 0ºC se añadió piridina (1 ml) gota a gota. La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. Se retiró el disolvente a presión reducida y el residuo se disolvió en EtOAc, se lavó con NH_{4}Cl saturado, y NaHCO_{3}. Después la fase orgánica se secó y se concentró a vacío. Se uso el producto bruto directamente en la siguiente etapa sin posterior purificación.

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Etapa 2

Preparación de ácido 3-[(2-quinoxalinilcarbonil)amino]-2-tiofencarboxílico

37

3-[(2-Quinoxalinilcarbonil)amino]-2-tiofenilcarboxilato de metilo (0,5 g, 1,6 mmol) se disolvió en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) a 0ºC y BBr_{3} (4,8 ml, 1M solución en CH_{2}Cl_{2}) se añadió gota a gota. La solución se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. La reacción se inactivó con NH_{4}Cl a 0ºC. La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} y se separó. La fase orgánica resultante se trató lentamente con HCl dil hasta que la solución se hizo básica. La mezcla se concentró y se volvió a disolver en EtOAc. Esta solución se lavó con agua, Se retiró el disolvente a presión reducida y se volvió a cristalizar en metanol proporcionando el producto deseado (0,2 g, 42%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 300,1 m/z, Tiempo de retención (CL-EM) = 2,65 min, ^{1}H RMN (DMSO-D6): 13,75 (s, 1H, ancho); 12,43 (s, 1H); 9,61 (s, 1H); 8,26 (m, 2H); 8,17 (m, 1H); 8,07 (m, 2H); 7,99(d, 1H).

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Etapa 3

Preparación de N-[2-(aminocarbonil)-3-tienil]-2-quinoxalincarboxamida

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38

Una mezcla de ácido 3-[(2-quinoxalinilcarbonil)amino]-2-tiofencarboxílico (0,70 g, 2,3 mmol), clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDC, 2,24 g, 11,5 mmol), y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP, 1,43 g, 11,5 mmol) en CH_{2}Cl_{2} (100 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A la mezcla de reacción se añadió amoniaco acuoso (40%, 5 ml), y se continuó la agitación durante otras 12 h. Se evaporó el disolvente hasta sequedad y el sólido resultante se lavó con solución saturada de NH_{4}Cl (3x), solución de NaHCO_{3} y H_{2}O. Se evaporó la fase orgánica hasta sequedad dando como resultado un polvo de color blanco (0,32 g, 46%).

HPCL/EM: (M + H)^{+} 299,4 m/z

Tiempo de retención (CL-EM) = 2,74 min.

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Etapa 4

Preparación de 2-(2-quinoxalinil)tienor[3,2-d]pirimidin-4-ol

39

A una solución de N-[2-(aminocarbonil)-3-tienil]-2-quinoxalinecarboxamida (0,24 g, 0,8 mmol) en etanol (15 ml) se añadió NaOH acuoso (1,0 M, 2,4 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura de reflujo durante toda una noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se retiró el disolvente a presión reducida. El residuo se disolvió en agua y se acidificó con HCl. Se filtró el precipitado de color blanco y se lavó abundantemente con agua proporcionando un producto en forma polvo de color amarillo (0,17g, 77%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 281,1 m/z Tiempo de retención (CL-EM) = 2,78 min, ^{1}H RMN (DMSO-D6): 12,65 (s, 1H, ancho); 9,77 (s, 1H); 8,32 (d, 1H); 8,28 (m, 1H); 8,23 (m, 1H); 8,01 (m, 2H); 7,63 (d, 1H).

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Etapa 5

Preparación de 2-(4-clorotieno[3,2-d]pirimidin-2-il)quinoxalina

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40

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Una solución de 2-(2-quinoxalinil)tieno[3,2-d]pirimidin-4-ol (150 mg, 0,54 mmol) en POCl_{3} (5 ml) se calentó a reflujo y se mantuvo a reflujo durante toda una noche. Después de enfriar hasta temperatura ambiente, se retiró el exceso de POCl_{3} a presión reducida proporcionar el producto bruto que se usó en la siguiente etapa sin purificación posterior.

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Etapa 6

Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-2-(2-quinoxalinil)tieno[3,2-d]-pirimidin-4-amina

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41

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Procedimiento Bg9 similar al Ejemplo 1, etapa 2, 2-(4-clorotieno[3,2-d]pirimidin-2-il)quinoxalina y 5-aminoindoazol se dejó que reaccionaran en THF. Después de la retirada del disolvente, se purificó el producto bruto a través de una columna de (gradiente desde 20% a 80% EtOAc/hexano) produciendo el producto. HPCL/EM: (M + H)^{+} 396.1 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = 2,42 min.

Utilizando el procedimiento descrito anteriormente para el ejemplo 62 y usando los materiales de partida apropiados, se prepararon los siguientes ejemplos mostrados a continuación en la Tabla 2.

TABLA 2

42

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Ejemplo 66 Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-2-(3-metoxifenil)-5-metilfuro[2,3-d]-pirimidin-4-amina

44

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Etapa 1

Preparación de 2-amino-4-metil-3-furonitrilo

45

A una mezcla de malononitrilo (0,96 g, 14,6 mmol), acetol (1,08 g, 14,6 mmol) en metanol (10 ml) a 0ºC se añadió gota a gota, trietilamina (2,0 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. Después de retirar el disolvente a presión reducida el producto bruto se lavó con isopropanol frío proporcionando el producto en forma de un polvo de color blanco (0,54 g, 30%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 123,3 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = 1,81 min. ^{1}H RMN (CD_{3}OD): 6,58(s, 1H,); 1,95 (s, 3H).

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Etapa 2

Preparación de 4-cloro-2-(3-metoxifenil)-5-metilfuro[2,3-d]-pirimidina

46

Se preparó el reactivo Vilsmeier mediante agitación de 3-metoxi-N,N-dimetilbenzamida (1,17 g, 7,9 mmol) y POCl_{3} (3,0 g, 19,7 mmol) a 0ºC durante 30 minutos. A este reactivo se añadió 2-amino-4-metil-3-furonitrilo (1,0 g, 6,6 mmol) y dicloroetano seco (5,0 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta 40ºC y se agitó a esta temperatura durante 18 h. Después la mezcla se vertió en agua con hielo. Después de ajustar el pH de la solución hasta 9 mediante tratamiento con solución de NaHCO_{3}, la solución se extrajo con diclorometano. Después la fase orgánica se secó y se concentró. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (10/90, acetato de etilo/hexano). HPCL/EM: (M + H)^{+} 275.1 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = 3,99 min. ^{1}H RMN (DMSO-D6): 8,10 (s, 1H,); 7,98 (d, 1H); 7,86 (m, 1H); 7,49 (t, 1H); 7,15 (m, 1H); 3,85 (s, 3H).

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Etapa 3

Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-2-(3-metoxifenil)-5-metilfuro[2,3-d]pirimidin-4-amina

47

Una mezcla de 4-cloro-2-(3-metoxifenil)-5-metilfuro[2,3-d]pirimidina y 5-aminoindazol en butanol (2,0 ml) se calentó hasta 100ºC durante toda una noche. Después de la retirada del disolvente, el producto bruto se purificó mediante columna (gradiente desde 20% a 80% acetato de etilo/hexano) proporcionando el producto Bay 59-8843 (15,2 mg). HPCL/EM: (M + H)^{+} 372,4 m/z. Tiempo de retención (CL-EM) = 2,53 min, ^{1}H RMN (DMSO-D6): 13,10 (s, 1H, NH); 8,70 (s, 1H, NH); 8,11 (s, 2H); 7,90 (m, 2H); 7,75(m, 2H); 7,63(d, 1H); 7,41 (t, 1H); 7,05 (m, 1H); 3,80 (s, 3H).

Utilizando un procedimiento similar al descrito anteriormente y sustituyendo el 4-cloro-2-sustituido fenil 5-metilfluro[2,3 mL]pirimidina se prepararon los siguientes compuestos

TABLA 3

48

Ejemplo 71 Preparación de 3-(4-(1H-indazol-5-ilamino)-5-metilfuro[2,3-d]pirimidin-2-il]fenol

49

A una solución de N-(1H-indazol-5-il)-2-(3-metoxifenil)-5-metilfuro[2,3-d]pirimidin-4-amina (50,0 mg, 0,13
mmol) en CH_{2}Cl_{2} (20 ml) enfriada hasta -78ºC se añadió BBr_{3} (0,7 ml, 2,83 mmol, 1M solución en CH_{2}Cl_{2}) gota a gota. La mezcla se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda una noche. La reacción se inactivó con agua y se separaron las fases orgánica y acuosa. La fase orgánica se secó y se concentró a presión reducida. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente desde 20% a 80% EtOAc/hexano) produciendo el producto (8,4 mg, 17,5%), HPCL/EM: (M + H)^{+} 358,1 m/z, Tiempo de retención (CL-EM) = 3,01 min, ^{1}H RMN (DMSO-D6): 8,54 (s, NH); 8,11 (d, 1H); 8,07 (s, 1H); 7,75 (m, 3H); 7,60 (d, 1H); 7,47 (d, 1H); 7,20 (t, 1H); 6,83 (m, 1H).

Ejemplo 72 Preparación de N-{3-[4-(1H-indazol-5-ilamino)tieno[3,2-d]pirimidin-2 il}isonicotinamida

50

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Etapa 1

Preparación de 2-(3-aminophenil)-N-(1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]-pirimidin-4-amina

51

2-Cloro-N-(1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina (10 mmol, 1 equivalente) se suspendió en dimetil etilen glicol (60 ml) y solución de Na_{2}CO_{3} (2M, 10 ml) y se purgó con argón durante 20 min. A esta suspensión se añadieron ácido 3-aminofenil borónico (25 mmol, 2,5 eq) y Pd(PPh_{3})_{4} 2,5 mmol, 0,25 eq). La mezcla de reacción se calentó a reflujo en AR a 100ºC durante 48 h. Se retiró el disolvente por evaporación a vacío. Se recogió el residuo en THF (100 ml) más EtOAc/agua. (100 ml, 1:1): Se evaporó la fase orgánica hasta sequedad. El residuo se separó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-5% de MeOH en CH_{2}Cl_{2}). El producto se obtuvo en forma de un polvo de color amarillo (2,04 g, 57%). (M + H)^{+} = 359, Tiempo de retención (CL-EM) = 1,93.

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Etapa 2

Preparación de 2-(3-aminofenil)-N-(1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina

52

A una solución fría del producto de la etapa 1 (3,35 mmol, 1 eq) en piridina seca (50 ml) se añadió anhídrido isonicotínico (6,7 mmol, 2 eq) en dos partes. Se formó un precipitado inmediatamente después de la adición. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 h y se vertió en hielo y se continuó la agitación. Se recogió el sólido mediante filtración y se lavó con agua. Este producto bruto se purificó además mediante cromatografía en columna de gel de sílice (0-4% Me-OH/CH_{2}Cl_{2}) produciendo un sólido de color amarillo claro (0,8 g, 50%). (M + H)^{+}
= 464, Tiempo de retención (CL-EM)=2,12.

Ejemplo 73

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53

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Preparación de N-(1H-indazol-5-il)-N-[2-(2-naftilamino)tieno[3,2-d]pirimidin-4-il]amina

A una solución de 2-cloro-N-(1-H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina (0,166 mmol) en n-BuOH (1,5 ml) se añadió 2-aminonaftileno ( 0,5 mmol, 3 equivalentes) y se agitó a 100ºC durante dos días. Se recogió el sólido resultante en un embudo, se lavó con isopropanol y éter proporcionando un producto cristalino se color gris claro (74%). (M + H)^{+} = 409, Tiempo de retención (CL-EM) = 2,56.

Utilizando este procedimiento y sustituyendo los materiales de partida apropiados, también se prepararon los compuestos mostrados en la tabla 5.

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54

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TABLA 5

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55

Ejemplo 77 Preparación de 2-(1,1'-bifenil-3-il)-N-(3-metil-1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]-pirimidin-4-amina

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56

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Etapa 1

Preparación de 3-metil-5-nitro-1H-indazol

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57

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Una solución de 2-fluoro-5-nitroacetofenona (1,57 g, 8,6 mmol) en etilen glicol (50 ml) se añadió hidrazina (0,29 g, 9,0 mmol) se agitó durante 2 h a temperatura ambiente y después se calentó a 165ºC durante 24 h. La mezcla de reacción se enfrió hasta temperatura ambiente, se vertió sobre EtOAc (100 ml), y se extrajo sobre H_{2}O (2 X 100 ml). Se secaron las fases orgánicas sobre Na_{2}SO_{4} y se retiró el disolvente a vacío. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice produciendo un sólido de color amarillo (0,8 g, 53%) Rf = 0,2 (EtOAc/hexano, 1/3). ^{1}H RMN CDCl_{3} \delta 8,63 (s, 1H), 8,23 (d, 2H, J = 3 Hz), 7,46 (d, 1H, J = 3 Hz), 2,60 (s, 3H).

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Etapa 2

Preparación de 3-metil-1H-indazol-5-amina

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58

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A una solución agitada del compuesto preparado en la etapa 1 (0,8 g, 4 mmol) en metanol se añadió catalizador de Pd/C (0,1 g) La mezcla de reacción resultante se agitó en una atmósfera de hidrógeno (1 atm (101,33 kPa)) a temperatura ambiente durante toda una noche. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a vacío produciendo el producto bruto (0,7 g) en forma de un sólido de color amarillo claro que no se purificó adicionalmente. Rf = 0,50 (EtOAc/hexano, 1/1). ^{1}H RMN CDCl_{3} \delta 7.20 (s, 1H), 6,90-6,80 (m, 2H), 2,41 (s, 3H).

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Etapa 3

Preparación de 2-cloro-N-(3-metil-1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]-pirimidin-4-amina

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59

Una mezcla del compuesto de la etapa 2 (0,7 g, 4,8 mmol), Ejemplo 1, etapa 1, (0,98 g, 4,8 mmol) y acetato de potasio (0,66 g, 6,7 mmol) en THF/H_{2}O (75 ml, 2/1) se agitó a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla se extrajo con EtOAc, se lavó con salmuera, y se secó sobre NaSO_{4}. Se filtró el disolvente y se evaporó hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice produciendo un sólido de color amarillo (1,2 g, 80% de rendimiento). Rf = 0,3 (EtOAc/hexano, 1/1). ^{1}H RMN (Metanol-d_{4}) \delta 7.95-7,80 (m, 2H), 7,63-7,50 (m, 2H), 7,19 (d, 1H, J = 3 Hz), 2,40 (s, 3H).

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Etapa 4

Preparación de 2-(1,1'-bifenil-3-il)-N-(3-metil-1H-indazol-5-il)tieno[3,2-d]pirimidin-4-amina

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60

Se siguió un procedimiento análogo al ejemplo 1, etapa 3. Una mezcla del producto de la etapa 3 (0,4 g, 1,3 mmol), ácido 3-fenilfenilborónico, (0,3 g, 1,5 mmol) y bicarbonato de sodio (0,33 g, 3,9 mmol) en DME/H_{2}O (3/1, 56 ml) se purgó con Ar durante 1 h, y se añadió Pd(dppf)Cl_{2}. la solución se calentó a reflujo durante 48 h a 100ºC. Después de retirar el disolvente a vacío, el producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice produciendo un sólido de color blanco (0,35 g, 65%). Rf = 0,2 (EtOAc/hexano, 1/1). ^{1}H RMN (Metanol-d_{4}) \delta 8,69 (s, 1H), 8,35 (d, 1H, J = 3 Hz), 8,25 (s, 1H), 8,00 (d, 1H, J = 3 Hz), 7,70-7,60 (m, 4H), 7,51-7,31 (m, 6H), 2,42 (s, 3H).

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Ejemplo 78 Preparación de 2-(1-benzotien-2-il)-N-(1H-indazol-5-il)period[2,3-d]pirimidin-4-amina

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61

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Etapa 1

Preparación de ácido 2-[(1-benzotien-2-ilcarbonil)amino]nicotínico

62

A una solución de ácido 2-aminonicotínico (91,1 g, 80 mmol), trietilamina (2,7 ml, 19,1 mmol) y acetona/H_{2}O (3:1, 100 ml) se añadió cloruro de 1-benzotiofeno-2-carbonilo (2,04 g, 10,4 mmol) a 0ºC. la solución resultante se dejó calentar hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda una noche. Se retiró el disolvente volátil a presión reducida y la solución acuosa se acidificó con HCl (conc.). Se filtró el filtrado resultante después se lavó con EtOAc y se secó a presión reducida produciendo el producto. (1,2 g, 52%). RMN (DMSO): 11,7 (1H, ancho), 8,60 (1H, m); 8,36 (1H, s); 8,25 (1H, d); 8,07 (1H, d); 8,02 (1H,d); 7,51 (2H, m); 7,36 (1H, m).

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Etapa 2

Preparación de 2-[(1-benzotien-2-ilcarbonil)amino]nicotinamide

63

Una mezcla de ácido 2-[(1-benzotien-2-ilcarbonil)amino]nicotínico (1,2 g, 4,0 mmol), EDC (2,3 g, 12,0 mmol) y DMAP (1,46 g, 12,0 mmol) en diclorometano anhidro (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. A esta mezcla se añadió 40% de amoniaco acuoso (4,0 ml), y la solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. Se retiró el disolvente a vacío y el sólido resultante se lavó con solución saturada de NH_{4}Cl, solución de NaHCO_{3}, y agua. Se secó el sólido produciendo un polvo de color blanco (0,92 g, 77%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 298,15 m/z Tiempo de retención (CL-EM) = 2.44 min, ^{1}H RMN (DMSO-D6): 12,25 (1H, s); 8,54 (1H, m); 8,21 (1H, s); 8,18 (1H, d); 8,07 (2H, m); 7,52 (2H, m); 7,32 (1H, m).

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Etapa 3

Preparación de 2-(1-benzotien-2-il)pirido[2,3-d]pirimidin-4-ol

64

A una solución de 2-[(1-benzotien-2-ilcarbonil)amino]nicotinamide (0.3 g, 1.0 mmol) en etanol (20 ml) se añadió NaOH (10 N, 0,3 ml, 3,0 mmol). La solución resultante se calentó a reflujo durante toda una noche. Tras enfriamiento hasta temperatura ambiente se retiró el disolvente a presión reducida. El residuo se disolvió en un exceso de agua y se acidificó con HCl. Se filtró el precipitado resultante y se lavó con agua produciendo el producto en forma de un polvo de color amarillo (0,16g, 57%). HPCL/EM: (M + H)^{+} 280.0 m/z; Tiempo de retención (CL-EM) = 2,66 min; ^{1}H RMN (DMSO-D6): 13,17 (1H, s); 8,94 (1H, m); 8,61 (1H, s); 8,50 (1H, d); 8,08 (1H, d); 7,97 (1H, d); 7,52 (3H, m).

Etapa 4

Preparación de 2-(1-benzotien-2-il)-4-cloropirido[2,3-d]pirimidina

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65

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A una suspensión de 2-(1-benzotien-2-il)pirido[2,3-d]pirimidin-4-ol (150 mg, 0,54 mmol) en cloroformo (10 ml) se añadió cloruro de tionilo (0,47 ml, 6,4 mmol) y una cantidad catalítica de DMF. La reacción se calentó a reflujo durante 4 h y se dejó enfriar hasta temperatura ambiente. Se retiró el disolvente a presión reducida y el producto resultante (18,2 mg, 12%) se usó directamente en la siguiente etapa sin purificación adicional. HPCL/EM: (M + H)^{+} 298,2 m/z; Tiempo de retención (EMCL) = 3,76 min; ^{1}H RMN (DMSO-D6): 9,24 (1H, m); 8,73 (1H, d); 8,55 (1H, s); 8,10 (2H, t); 7,86 (1H, m); 7,50 (2H, m).

Etapa 5

Preparación de N-[2-(1-benzotien-2-il)pirido[2,3-d]pirimidin-4-il]-N-(1H-indazol-5-il)amina

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66

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Una mezcla de 2-(1-benzotien-2-il)-4-cloropirido[2,3-d]pirimidina (18,2 mg, 0,06 mmol), 5-aminoindazol (40 mg, 0,3 mmol) y carbonato de potasio (83 mg, 0,6 mmol) en dioxano (20 ml) se calentó hasta 100ºC y se continuó durante 24 h. Después de retirar el disolvente, se purificó el producto bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (gradiente desde 20% a 80% EtOAc/hexano) proporcionando el producto (1,0 mg, 4,0%); HPCL/EM: (M + H)^{+} 395,2 m/z; Tiempo de retención (CL-EM) = 2,75 min.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Se prepararon los siguientes compuestos de manera análoga

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Intermedios

Intermedio A

Preparación de ácido tieno[3,2-c]piridin-2-ilborónico

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115

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Etapa 1

Preparación de 2,2-dimetoxi-N-(3-tienilmetil)ethanamina

116

A 3-tiophenecarboxaldehído (8,75 ml) enfriado hasta 0ºC se añadió aminoacetaldehído dimetilacetal (14,2 ml). Se agitó la solución transparente a temperatura ambiente durante 60 h. Se diluyó la solución con etanol y se hidrógeno a 56 psi en presencia de 10% de Pd/C (5 g) durante toda una noche. Se retiró el catalizador por filtración y se lavó con MeOH. Se retiró el disolvente mediante rotavapor y se evaporó conjuntamente con tolueno produciendo un aceite (19 g, 94% de rendimiento).

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Etapa 2

Preparación de N-(2,2-dimetoxietil)-4-metil-N-(3-tienilmetil)-benzenosulfonamida

117

A una solución del compuesto preparado en la etapa 1, (19 g, 95 mmol) en EtOAc (50 ml) a 15ºC se añadió trietilamina (12 ml, 85,5 mmol), seguido de cloruro de p-toluenesulfonilo (16,3 g, 85,5 mmol). Después de completarse la adición, la solución se agitó a temperatura ambiente durante toda una noche. La mezcla de reacción se diluyó con EtOAc y se lavó con agua tres veces, HCl (1,0 M), y con solución saturada de Na_{2}CO_{3}. La solución se secó sobre MgSO_{4}, se filtró, y se concentró proporcionando un precipitado (31 g, 87 mmol, 91% de rendimiento). Rf = 0,16 (EtOAc/hexano, 1/9).

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Etapa 3

Preparación de tieno[3,2-c]piridina

118

A una solución del compuesto de la etapa 2 (31 g, 0,087 mol) en dioxano (80 ml) se añadió HCl concentrado (45 ml). La solución se calentó a temperatura de reflujo durante toda una noche. La mezcla se enfrió hasta temperatura ambiente y se lavó con CH_{2}Cl_{2}. La fase acuosa se basificó con NH_{4}OH acuoso mientras se enfría con hielo y se extrae con CH_{2}Cl_{2}. Los lavados orgánicos se combinaron y se evaporaron hasta sequedad. Es residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (25% EtOAc en hexanos) produciendo un precipitado de color blanco. El precipitado se disolvió con CH_{2}Cl_{2}, se secó sobre MgSO_{4}, se filtró, y se concentró proporcionando 5,97 g de precipitado de color blanco (50% de rendimiento).

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Etapa 4

Preparación de

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119

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A una solución de (0,3 g) en THF (15 ml) se añadió n-BuLi (1,4 ml, 1,6 M en hexano) a -78ºC. La solución se agitó a -78ºC durante 70 min y se añadió borato de triisopropilo (0,52 ml, 2,27 mmol). La solución se agitó durante 30 min adicionales a -78ºC, y después a temperatura ambiente durante 30 min. Se concentró el disolvente a presión reducida y se usó el producto bruto sin purificación.

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Intermedio B

Preparación de ácido 4-(4-morfolinil)fenilborónico

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Etapa 1

Preparación de 4-(4-bromofenil)morfolina

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Una solución de 1-bromo-4-yodobenceno (5,0 g, 18 mmol), morfolina (1,85 ml, 21 mmol), terc-butóxido de sodio (2,4 g, 25 mmol), 18-corona-6 (6,6 g, 25 mmol) en THF (150 ml) se purgó con Ar durante 20 min, después se añadieron BINAP (0,11 g, 0,18 mmol) y Pd2(dba)_{3} (0,16 g, 0,18 mmol). La mezcla se volvió oscura después de agitar a temperatura ambiente durante toda una noche. Se concentró el disolvente a presión reducida y el residuo se disolvió en dietil éter y se lavó con agua. Se mezcló la fase orgánica con gel de sílice, y se evaporó el disolvente hasta sequedad. El residuo se purificó mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EtOAc en hexanos 5%) hasta un precipitado de color blanco (250 mg, 5% de rendimiento). ^{1}H RMN (CDCl_{3}): 7,3 (d, 2H), 6,85 (d, 4H), 3,1 (d, 4H).

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Etapa 2

Preparación de ácido 4-(4-morfolinil)fenilborónico

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122

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A una solución del compuesto preparado en la etapa 1 (0,3 g) en THF (15 ml) se añadió n-BuLi (0,74 ml, 2 M en pentano) a -78ºC. Después de 1 h se añadió borato de triisopropilo (0,86 ml) a -78ºC. La solución se calentó lentamente desde -78ºC hasta temperatura ambiente y se agitó durante toda una noche. A la solución se añadió NH_{4}Cl acuoso, se formó un precipitado de color blanco, y se añadió EtOAc. Se separó la solución orgánica, se concentró y se evaporó conjuntamente con tolueno. El residuo se lavó dos veces con THF y se filtró. El filtrado se concentró y se secó a alto vacío proporcionando 0,25 g de precipitado de color amarillo claro. CL/EM m/z 208 (M + H)^{+}.

Los ejemplos precedentes se pueden repetir con un éxito similar mediante la sustitución de los reactivos descritos genéricamente o específicamente y/o condiciones operativas de esta invención para los usados en los ejemplos precedentes.

Claims

1. un compuesto de Fórmula I

123

cada n es un número entero que es independientemente 0, 1, 2 ó 3,

x es 0-3

p es 0-3

A es ciclohexilo o arilo C_{5-12} o heteroarilo C_{5-12} cada uno de ellos independiente y opcionalmente sustituido hasta tres veces por (i) alquilo C_{1-C10} o alquenilo C_{2-10} cada uno de ellos opcionalmente sustituido con halógeno hasta perhalo; (ii) cicloalquilo C_{3}-C_{10}; (iii) arilo; (iv) heteroarilo; (v) halógeno; (vi) -COOR_{8}; (vii) -CO-R_{8}; (viii) ciano; (ix) -OR_{8}; (x) -NR_{8}R_{13}; (xi) nitro; (xii) -CO-NR_{8}R_{9}; (xiii) -alquil C_{1-10} -NR_{8}R_{9}; (xiv) -NR_{8}-COR_{12}; (xv) -NR_{8}-CO-OR_{9}; (xvi) -NR_{8}-SO_{2}-R_{9}; (xvii) -SR_{8}; (xviii) -SO_{2}-R_{8}; (xix) -SO_{2}-NR_{8}R_{9}; (xx) NR_{8}-CO-NHR_{9}; o (xxi) arilo o heteroarilo sustituido por halógeno, alquilo C_{1-10}, alcoxi C_{1-10}-fenilo, naftilo, -OR_{10},

124

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o

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en las que cada Z independientemente es halógeno, hidroxi, hidroxi-alquilo-C_{1-10}, -CN, -NO_{2}, alcoxi C_{1-10}-carboxilo, -NR_{10}-COR_{11}, o -NR_{10}-CO-OR_{11};

Y es 0-3;

R_{2}-R_{5} son cada uno de ellos independientemente (i) alquilo C_{1-10} o alquenilo C_{2-10}- cada uno de ellos opcionalmente sustituido por amino, N alquil inferior amino, N,N-dialquil inferior amino, N-alquil inferior amino, hidroxi, ciano, -COOR_{10}, -COR_{14}, -OCOR_{14}, -OR_{10}, heteroarilo C_{5-10}, heteroariloxi C_{5-10}, heteroaril C_{5-10}-alquiloxi C_{1-10}, o halógeno hasta un perhalo; (ii) cicloalquilo C_{3}- C_{10}, en el que 1-3 átomos de carbono están opcional e independientemente sustituidos por O, N o S; (iii) cicloalquenilo C_{3-10}; (iv) heterociclilo C_{5-10} parcialmente insaturado; (v) arilo; (vi) heteroarilo; (vii) halógeno; (viii) -CO-OR_{10}; (ix) -OCOR_{10}; (x) -OCO_{2}R_{10}; (xi) -CHO; (xii) ciano; (xiii) -OR_{16}; (xiv) -NR_{10}R_{15}; (xv) nitro; (xvi) -CO-NR_{10}R_{11}; (xvii) -NR_{10}-CO-R_{12}; (xviii) -NR_{10}-CO-OR_{11}; (xix) -NR_{10}-SO_{2}-R_{12}; (xx)
-SR_{16}; (xxi) -SOR_{16}; (xxii) -SO_{2}-R_{16}; (xxiii)-SO_{2}-NR_{10}R_{11}; (xxiv) NR_{10}-CO-NHR_{11}; (xxv) amidino; (xxvi) guanidino; (xxvii) sulfo; (xxviii) -B(OH)2; (xxix) -OCON(R_{10})_{2}; o (xxx) -NR_{10}CON(R_{10})_{2};

R_{12} es H, alquilo C_{1-6} o arilo C_{5-10},

R_{13} es H, alquilo C_{1-6} o alcoxi C_{1-6},

R_{14} es alquilo inferior o fenilo;

R_{16} es hidrógeno, alquilo C_{ 1-6} opcionalmente sustituido por halógeno, hasta perhalo, o heteroarilo C_{5-10};

o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,

con la condición de que A no sea hidrógeno cuando x es 0;

-X-A no sea CH_{3} cuando B represente un anillo tieno[3,2b]condensado, y b y c sean -CR_{5}=, y a es NH;

y A no sea fenilo cuando X sea NH, B forma un anillo condensado imidazo, y -a-b-c- es -CR_{5}=N-NR_{6}- o -NR_{6}=N-CR_{5}-.

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2. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, en el que A es 2- o 3-furilo, 2- o 3-tienilo, 2- o 4-triazinilo, 1-, 2- o 3-pirrolilo, 1-, 2-, 4- o 5-imidazolilo, 1-, 3-, 4- o 5-pirazolilo, 2-, 4- o 5- oxazolilo, 3-, 4- o 5-isoxazolilo, 2-, 4- o 5-tiazolilo, 3-, 4- o 5- isotiazolilo, 2-, 3- o 4-piridilo, 2-, 4-, 5- o 6-pirimidinilo, 1,2,3-triazol-1-, -4- o 5-ilo, 1,2,4-triazol-1-, -3- o B5-ilo, 1- o 5-tetrazolilo, 1,2,3-oxadiazol-4- o 5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o 5-ilo, 1,2,4-oxadiazol-3- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-2- o 5-ilo, 1,3,4-tiadiazol-3- o 5-ilo, 1,2,3-tiadiazol-4- o 5-ilo, 2-, 3-, 4-, 5- o 6-2H- thiopiranilo, 2-, 3- o. 4-4H-thiopiranilo, 3- o 4-piridazinilo, pirazinilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzofurilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzotienilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7- indolilo, 1-, 2-, 4- o 5-benzimidazolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7-benzopirazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7- benzoxazolilo, 3-, 4-, 5- 6- o 7-benzisoxazolilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- o 7- benzotiazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzisotiazolilo, 2-, 4-, 5-, 6- o 7-benzo-1,3- oxadiazolilo, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8-quinolinilo, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- isoquinolinilo, 1-, 2-, 3-, 4- o 9-carbazolilo, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8- o 9- acridinilo, o 2-, 4-, 5-, 6-, 7- o 8- quinazolinilo, o adicional y opcionalmente fenilo sustituido, 2- o 3-tienilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 3-pirrilo, 3-pirazolilo, 2-tiazolilo o 5-tiazolilo.

3. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el que A es fenilo, piridilo, pirimidinilo, oxazolilo, furilo, tienilo, pirrolilo, imidazolilo, isoxazolilo o pirazinilo, cada uno de ellos sustituido independientemente hasta tres veces por halógeno, alquilo C_{1-10}, alcoxi C_{1-10}fenilo, naftilo, -OR_{10},

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o

137

en las que cada Z independientemente es halógeno, hidroxi, hidroxi-alquilo C_{1-10}, -CN,-NO_{2},alcoxi C_{1-10}-carboxilo, -NR_{10}-COR_{11}, o -NR_{10}-CO-OR_{11}, e y es 0-3.

4. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 en el que A es

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139

en la que R_{15} es H; fenilo opcionalmente sustituido por alquilo C_{1-10}, alcoxi C_{1-10}, alquil C_{1-10}- carboxilo, o halógen; benzilo; pirimidilo o piridilol; y R_{16} es H, fenilo, -COOR_{10},

140

5. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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en la que Ar1 es

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6. Un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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7. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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en la que R' es 5-metilo y R'' es H o 4-oximetilo, o R' es 5,6 dimetilo y R'' es H o 3-oximetilo.

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8. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

155

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9. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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1000

en la que Ar es 3-aminofenilo, 3-isonicotinamido-fenilo, 5-(1H-indolil)amino, o 4-fenoxianilino.

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10. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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157

o

1570

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11. El compuesto de acuerdo con la reivindicación 1, de la Fórmula

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12. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 para la fabricación de una composición farmacéutica para tratar una indicación mediada por la Rho-quinasa.

13. Uso de un compuesto de la reivindicación 5 para la fabricación de una composición farmacéutica para tratar una indicación mediada por la Rho-quinasa.

14. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 1 para la fabricación de una composición farmacéutica para tratar hipertensión, aterosclerosis, reestenosis, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, degeneración neuronal, lesión de la médula espinal, cáncer de mama, colon, próstata, ovarios, cerebro o pulmón, trastornos trombóticos, asma, glaucoma, osteoporosis o disfunción eréctil.

15. Uso de un compuesto de acuerdo con la reivindicación 5 para la fabricación de una composición farmacéutica para tratar hipertensión, aterosclerosis, reestenosis, isquemia cerebral, vasoespasmo cerebral, degeneración neuronal, lesión de la médula espinal, cáncer de mama, colon, próstata, ovarios, cerebro o pulmón, trastornos trombóticos, asma, glaucoma, osteoporosis o disfunción eréctil.