DE60217698T2

DE60217698T2 - Behandlung chronischer gelenkentzündung unter verwendung eines antikörpers gegen das cd3 antigenkomplex

Info

Publication number: DE60217698T2
Application number: DE60217698T
Authority: DE
Inventors: Medical School John ISAACS; Herman Waldmann; Therapeutic Antibody Centre Geoffrey HALE
Original assignee: Oxford University Innovation Ltd
Current assignee: Oxford University Innovation Ltd
Priority date: 2001-09-26
Filing date: 2002-09-26
Publication date: 2007-10-25
Anticipated expiration: 2022-09-27
Also published as: EP2199307B1; EP2199307A1; US20050037004A1; ES2279884T3; GB2380127A; GB0123156D0; EP1432445A2; EP1803466B1; EP1803466A1; AU2008207338B2; AU2008207338A1; CA2461714A1; WO2003026692A2; PT1432445E; ES2389781T3; CA2461714C; JP4694784B2; EP1432445B1; AU2002329423B2; JP2005506331A

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Behandlung von chronischer Gelenkentzündung, insbesondere chronischer entzündlicher Synovitis, genauer gesagt rheumatoider Arthritis und verwandten Zuständen unter Verwendung von Antikörpern, die auf das CD3-Antigen zielen, wobei der Antikörper aus Fab oder F(ab')₂-Fragmenten besteht oder ein in der Fc-Region mutierter Antikörper ist, so dass die Bindung an Fc-Rezeptoren verhindert wird, und die Verwendung solcher Antikörper zur Herstellung eines Medikaments zur Verwendung in dieser Behandlung.
Hintergrund der Erfindung
Rheumatoide Arthritis ist eine chronische entzündliche Erkrankung, die die Gelenke oder andere Gewebe befällt und ein jährliches Auftreten von 1 bis 10 pro 10000 der erwachsenen Bevölkerung in den entwickelten Ländern und eine Verbreitung von ungefähr 1 % aufweist. Abgesehen von den Schmerzen und Leiden, die durch diesen Zustand hervorgerufen werden, hat die fortschreitende Natur der Erkrankung einen signifikanten Einfluss auf die Krankhaftigkeit und Sterblichkeit bei einem Standard-Mortalitätsverhältnis von bis zu 3,0. Die jährlichen Kosten der Erkrankung allein in den USA wurde auf gut einer Milliarde geschätzt (Brooks, The Lancet, 30. Januar 1993, Seite 286). Gegenwärtige Behandlungsmethoden der Erkrankung sind weit von zufriedenstellend entfernt, und Probleme schließen die Unvorhersagbarkeit der Response ein und die Tatsache, dass viele Medikamente nicht gut toleriert werden und/oder potenziell gefährliche Nebenwirkungen aufweisen. Es gibt eine Anzahl weiterer damit zusammenhängender „rheumatischer" Erkrankungen mit einer vergleichbaren Entzündung des Synovial-Gewebes, einschließlich ankylosierender Spondylitits, psoriatischer Arthritis und einigen Formen von Osteoarthritis, die auch unter dem Begriff chronischer Synovial-Entzündung betrachtet werden können.
WO 93/97899 betrifft die Behandlung von T-Zell-vermittelter Entzündung der Gelenke unter Verwendung eines Antikörpers, der das CD_w52-Antigen erkennt, allein oder in Kombination mit einem Anti-CD4-Antikörper. Insbesondere wird die Verwendung eines humanisierten monoklonalen Antikörpers, Campath-IH, zur Behandlung rheumatoider Arthritis beschrieben. Während eine solche Therapie die Hoffnung auf eine signifikante Verbesserung eröffnet, ist damit ein schwerer Mangel an systemischen T-Lymphozyten verbunden. Wenn die Spiegel von T-Lymphozyten des Patienten niedrig sind, und diese daher zumindest in der Theorie immun-unterdrückt und empfindlich gegen Infektionen sind, kehren die Krankheitssymptome zurück. Das Gleichgewicht zwischen Infektionsrisiko und therapeutischer Wirksamkeit macht die Verwendung von Campath-IH unattraktiv für Ärzte für chronische Zustände wie rheumatoide Arthritis. Andere haben auch die Verwendung von Anti-CD4-Antikörpern für die Behandlung chronischer Gelenkentzündung vorgeschlagen, bisher wurde jedoch noch nicht gezeigt, dass solche Antikörper in der Klinik adäquat wirksam sind.
Eine Diskussion des CD3-Antigen kann beispielsweise im Bericht des First International Workshop and Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens gefunden werden. Verschiedene gegen das CD3-Antigen gerichtete glykosylierte Antikörper sind auch in den Berichten dieser Serie von Workshops und Konferenzen beschrieben, insbesondere der dritten und vierten, publiziert von Oxford University Press. Anti-CD3-Antikörper sind daher schon seit etwa 20 Jahren bekannt, haben jedoch nur eine beschränkte Verwendung als immunsuppressive Mittel in beispielsweise der Behandlung von Abstoßungsepisoden im Anschluss an die Transplantation von renalen, hepatischen und kardiologischen Allografts, aufgrund der First-Dose-Reaktionen, die schwer sein können.
Es ist bekannt, dass monoklonale Anti-CD3-Antikörper zur Sensibilisierung von T-Zellen gegen sekundäre proliferative Stimuli wie IL1 (Interleukin 1) und IL2 (Interleukin 2) verwendet werden können. Zusätzlich sind bestimmte monoklonale CD3-Antikörper selbst mitogen für T-Zellen. Diese Eigenschaft ist Isotyp-abhängig und beruht auf der Wechselwirkung zwischen der CD3-Antikörper-Fc-Domäne mit Fc-Rezeptoren auf der Oberfläche von akzessorischen Zellen. Nager-CD3-Antikörper wurden zur Beeinflussung des immunologischen Status durch Unterdrückung, Erhöhung oder Umlenkungder T-Zell-Antworten gegen Antigene verwendet.
US 5,968,509 betrifft humanisierte monoklonale Antikörper, die gegen CD3 gerichtet sind, und beschreibt ihre Verwendung zur Kontrolle von Transplantat-Abstoßung und zur Behandlung von Lymphomen. US 5,585,097 betrifft verbesserte Anti-CD3-Antikörper des in US 5,968,509 beschriebenen Typs, insoweit sie nicht glykosyliert sind und daher verminderte Nebenwirkungen aufweisen, die mit der „First Dose Response" zusammenhängen, wenn sie in der Therapie verwendet werden.
Malfait et al., Arthritis and Rheumatism Vol. 44, Nr. 5, Mai 2001, Seiten 1215 bis 1224 betrifft die chronische rezidivierende Kollagen-induzierte Arthritis in DBA/1-Mäusen als Modell für den Test der Krankheitsmodifizierenden und remissionsinduzierenden Therapien. Eine untersuchte Therapie war die kombinierte Therapie von Anti-CD3-Antikörpern plus Anti-Tumor-Nekrosefaktor-Antikörper, die nach dem Auftreten von Symptomen gegeben wurden, wobei diese Therapie das Fortschreiten von Arthritis in der Maus für den Rest der Studienzeit von 56 Tagen blockierte.
Das oben beschriebene murine Modell ist sehr abhängig von einem Antigen-angetriebenen Stimulus zur Provokation der T-Zell-Reaktivität. Es wurden keine solchen auslösenden Antigene für humane rheumatoide Arthritis, ankylosierende Spondylitis oder psoriatische Arthropathie identifiziert. In Abwesenheit von Indikatoren dafür, dass die murine Erkrankung vergleichbar ist mit den Human-Synovialstörungen, ist es daher nicht möglich, von den Daten auf den therapeutischen Nutzen auf rheumatoide Arthritis und die verwandten inflammatorischen Synovial-Erkrankungen beim Menschen zu extrapolieren. US-Patent 5,183,657 betrifft eine pharmazeutische Zusammensetzung, welche einen Antikörper gegen Human-α-Tumornekrosefaktor und einen Anti-Lymphozyten-Antikörper im Gemisch mit einem oder mehr pharmazeutisch verträglichen Trägern, Exzipienten oder Verdünnern umfasst. Der Anti-Lymphozyten-Antikörper ist bevorzugt ein monoklonaler Antikörper wie Orthoclone OKT3^®.
WO00/05268 betrifft einen Hybrid-Human/Nager-IgG-Antikörper gegen CD3, der von Säugerzell-Expressionssystemen in erhöhten Ausbeuten exprimiert werden kann. Der Antikörper kann nicht glykosyliert sein.
CA 2224256 offenbart die therapeutische Verwendung von F(ab')₂-Fragmenten aus einem monoklonalen Anti-CD3-Antikörper für die Behandlung von offenkundig diabetischen NOD-Mäusen.
Friend et al., Transplantation, Band 68, Nr. 11, 15. Dezember 1999, Seiten 1632 bis 1637 offenbart die therapeutische Verwendung einer nicht glykosylierten Version eines monoklonalen Anti-CD3-Antikörpers bei der Renal-Transplantat-Abstossung.
Zusammenfassung der Erfindung
Entsprechend einem Aspekt ist die vorliegende Erfindung auf die Verwendung eines Anti-CD3-Antikörpers zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von chronischer Gelenkentzündung gerichtet, wobei der Antikörper aus Fab oder F(ab')₂-Fragmenten besteht oder ein in der Fc-Region mutierter Antikörper ist, so dass die Bindung an Fc-Rezeptoren verhindert wird.
Die hier verwendeten folgenden Begriffe haben die hier angegebenen Definitionen:
„CD3" bedeutet Cluster-Bezeichnung 3; (Cluster Designation 3);
„nicht glykosyliert" bedeutet hier einen Antikörper, der seine Haupt-Glykosylierungsstelle durch eine Mutation an Position 297 von Asparagin zu Alanin verloren hat;
„First Dose Reaktion" bedeutet eine Cytokin-Freisetzungsreaktion, welche dafür bekannt ist, dass sie der First-Dose-Gabe von CD3-Antikörpern folgt, und häufig mit einer signifikanten Krankheitsempfindung und Unwohlsein des Patienten zusammenhängt;
„Affinität" in Bezug auf einen Antikörper bedeutet die Fähigkeit jedes der Bindungsarme des Antikörpers zur Bindung an seine Liganden (das Antigen).
Die Behandlung unter Verwendung eines Anti-CD3-Antikörpers hat den Hauptvorteil, dass nur eine Kurzzeitbehandlung erforderlich ist, um einen anhaltenden Langzeitnutzen bereitzustellen. Beispielsweise kann die Behandlung während einer Zeit von bis zu 2 Wochen, beispielsweise 1 bis 5 Tagen, ohne erneute anschließende Gabe während mindestens 6 Monaten durchgeführt werden. Diese Behandlung stellt einen langanhaltenden Langzeitnutzen für den Patienten während einer langen Zeit von mindestens 6 Monaten bereit, und in vielen Fällen sehr viel länger, beispielsweise bis zu 24 Monaten oder mehr.
Die erfindungsgemäße Verwendung eines Anti-CD3-Antikörpers hat auch den Vorteil, dass sie nicht in einen Mangel an T-Lymphozyten resultiert, wie im Fall mit Campath IH.
Die erfindungsgemäße Therapie mit einem Anti-CD3-Antikörper sollte auf solche Weise durchgeführt werden, dass die mit Anti-CD3-Antikörpern verbundenen First-Dose-Reaktionen vermieden oder mindestens auf ein solches Niveau reduziert werden, das von Patienten toleriert werden kann. First-Dose-Reaktionen werden durch Modifikation des Antikörpers und gegebenenfalls durch Gabe des Antikörpers gemeinsam mit einer weiteren Substanz reduziert, die die Reaktion abschwächt.
Beispiele für die Modifikationen des Antikörpers, die die First-Dose-Reaktionen vermindern können, sind die Verwendung von Fab- oder F(ab')₂-Fragmenten und weitere Mutationen in der Fc-Region des Antikörpers, die so ausgelegt sind, dass sie die Bindung an Fc-Rezeptoren verhindern.
Beispiele für Substanzen, die die First-Dose-Reaktionen vermindern können, wenn sie gemeinsam mit einem Anti-CD3-Antikörper gegeben werden können, sind Prophylaxe mit Steroiden und Antihistaminika.
Der Anti-CD3-Antikörper kann mit weiteren therapeutischen Mitteln zur Behandlung chronischer Gelenkentzündungen gegeben werden, und der Antikörper kann gemeinsam mit solchen Mitteln als Teil einer Gesamt-Therapie für die Erkrankung verwendet werden. Beispiele für solche weiteren therapeutischen Mittel schließen Steroide und Anti-TNF-Antikörper ein. Zahlreiche Therapien für chronische Gelenkentzündungen sind immunsuppressiv, und diese können auch wirksam sein bei der Verminderung der First-Dose-Reaktion gegen den Anti-CD3-Antikörper. Es kann auch eine Zeitspanne zwischen der Gabe des Anti-CD3-Antikörpers und der vom Patienten wahrgenommenen therapeutischen günstigen Wirkung liegen, und diese Zeitverschiebung kann bis zu Wochen dauern. Die Verwendung des Anti-CD3-Antikörpers als Teil einer Gesamtstrategie gemeinsam mit weiteren therapeutischen Mitteln kann bei der Abschwächung der Symptome der Erkrankung während dieser Zeitverschiebung helfen.
Detaillierte Beschreibung der Erfindung
WO00/05268 offenbart die vollständige Sequenz des bevorzugten chimären Anti-CD3-Antikörpers, der teilweise humanisiert ist, und der geeignet ist für die erfindungsgemäße Verwendung.
Bevorzugte Antikörper für die Verwendung in der vorliegenden Methode sind ein oder mehr humanisierte monoklonale Antikörpern, nicht glykosylierte Antikörper und Antikörper, die die CDRs aufweisen, welche in den Antikörpern OKT3 und YTH12.5.14.2 enthalten sind.
Der Antikörper OKT3 wird in Veröffentlichungen diskutiert wie Chatenoud et al., Transplantation, 1991, 51, 334 und the New England Journal of Medicine, 1985, 313, 339, und auch im europäischen Patent Nr. 0 018 795 und US-Patent Nr. 4,361,539. Der Antikörper YTH12.5.14.2 (im folgenden als YTH12.5 bezeichnet) wird in Veröffentlichungen wie Cobbold, S. P. & Waldmann, H. 1984 Nature 308, 460-462 und Clark et al., European J. Immunol., 1989, 19, 381-388 diskutiert, und veränderte YTH12.5-Antikörper sind der Gegenstand von US 5,968,509 und dessen Äquivalenten, wobei diese Anmeldung im Detail die in diesem Antikörper vorhandenen CDRs beschreibt. Während die vorliegende Erfindung nicht auf die Verwendung eines bestimmten Anti-CD3-Antikörpers beschränkt ist, haben die erfindungsgemäßen Antikörper mindestens eine CDR, die aus den folgenden Aminosäuresequenzen ausgewählt wird:

(a) Ser-Phe-Pro-Met-Ala (SEQUENZ ID NR. 1),
(b) Thr-Ile-Ser-Thr-Ser-Gly-Gly-Arg-Thr-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Val-Lys-Gly (SEQUENZ ID NR. 2),
(c) Phe-Arg-Gln-Tyr-Ser-Gly-Gly-Phe-Asp-Tyr (SEQUENZ ID NR. 3).
(d) Thr-Leu-Ser-Ser-Gly-Asn-Ile-Glu-Asn-Asn-Tyr-Val-His (SEQUENZ ID NR. 4),
(e) Asp-Asp-Asp-Lys-Arg-Pro-Asp (SEQUENZ ID NR. 5),
(f) His-Ser-Tyr-Val-Ser-Ser-Phe-Asn-Val (SEQUENZ ID NR. 6),

Der Begriff „konservativ modifizierte Varianten" ist auf dem Fachgebiet gut bekannt und bedeutet Varianten, die Änderungen enthalten, welche im wesentlichen ohne Effekt auf die Antikörper-Antigen-Affinität sind.
Die CDRs sind innerhalb Gerüstregionen der schweren Kette für (a), (b) und (c) angeordnet und der leichten Kette für variable Domänen (d), (e) und (f). Der Antikörper umfasst auch eine konstante Domäne.
In einer bevorzugten Ausführungsform hat der nicht glykosylierte Antikörper drei CDRs, die den obigen Aminosäuresequenzen (a), (b) und (c) oder konservativ modifizierten Varianten davon entspricht, und/oder drei CDRs, die den Aminosäuresequenzen (d), (e) und (f) oder konservativ modifizierten Varianten davon entsprechen, wobei die CDRs (a), (b) und (c) der schweren Kette von größter Bedeutung sind.
Ein bevorzugter nicht glykosylierter Antikörper für die vorliegende Verwendung oder Verfahren, welcher eine Bindungsaffinität für das CD3-Antigen aufweist, hat daher mindestens eine schwere Kette mit mindestens einer CDR und insbesondere drei CDRs, die ausgewählt werden aus Aminosäuresequenzen ID NR. 1 bis 6 (a bis f) und konservativ modifizierten Varianten davon.
Wenn ein nicht glykosylierter Antikörper gemäß der Erfindung bevorzugt CDRs wie vorstehend beschrieben enthält, enthält er günstigerweise beide oder mehr der spezifizierten CDRs der schweren Ketten und eine oder mehr der spezifizierten CDRs der leichten Kette. Die CDRs (a), (b) und (c) sind in der schweren Kette in der Sequenz: Gerüstregion 1/(a)/Gerüstregion 2/(b)/Gerüstregion 3/(c)/Gerüstregion 4 in der Richtung Leader → konstante Domäne (N-terminal nach C-terminal) angeordnet, und die CDRs (d), (e) und (f) sind in der leichten Kette in der Sequenz: Gerüstregion 1/(d)/Gerüstregion 2/(e)/Gerüstregion 3/(f)/Gerüstregion 3 in der Richtung Leader → konstante Domäne angeordnet. Es ist daher bevorzugt, dass, wenn alle drei vorhanden sind, die CDRs der schweren Kette in der Sequenz (a), (b), (c) in der Richtung Leader → konstante Domäne angeordnet sind, und die CDRs der leichten Kette in der Sequenz (d), (e), (f) in der Richtung Leader → konstante Domäne angeordnet sind.
Es sollte aber gewürdigt werden, dass die nicht glykosylierten Antikörper für die erfindungsgemäße Verwendung von den vorstehend beschriebenen CDRs ziemlich verschiedene CDRs enthalten können, und dass, sogar wenn dies nicht der Fall ist, es möglich sein kann, schwere Ketten und insbesondere leichte Ketten zu haben, die nur eine der beiden CDRs (a), (b) und (c) bzw. (d), (e) und (f) enthalten. Obwohl die Anwesenheit aller oben definierten sechs CDRs daher nicht notwendigerweise in einem erfindungsgemäßen nicht glykosylierten Antikörper erforderlich ist, werden alle sechs CDRs am häufigsten in den bevorzugtesten Antikörpern vorliegen.
Ein besonders bevorzugter nicht glykosylierter Antikörper hat daher eine schwere Kette mit drei CDRs, umfassend die Aminosäuresequenzen (a), (b) und (c) oder konservativ modifizierte Varianten davon, und eine leichte Kette mit drei CDRs, die die Aminosäuresequenzen (d), (e) und (f) oder konservativ modifizierte Varianten davon umfassen, wobei die CDRs der schweren Kette in der Reihenfolge (a), (b), (c) in Richtung der konstanten Leader-Region angeordnet sind, und die CDRs der leichten Kette in der Reihenfolge (d), (e), (f) in Richtung der konstanten Leader-Region angeordnet sind.
Die CDRs können verschiedenen Ursprung zur variablen Gerüstregion und/oder konstanten Region haben, und da beide CDRs üblicherweise aus Ratten oder Mäusen stammen, ist es vorteilhaft, eine Antiglobulin-Antwort im Menschen zu vermeiden, obwohl die Erfindung sich auf Antikörper mit solchen Regionen aus Ratten oder Mäusen erstreckt.
Normalerweise haben die CDRs entweder denselben Ursprung wie die variable Gerüstregion oder einen unterschiedlichen Ursprung wie die konstante Region, beispielsweise ein teilweise humaner chimärer Antikörper, oder noch üblicher habensind die CDRs einen von der variablen Gerüstregion verschiedenen Ursprung.
Die bevorzugten vorstehend diskutierten CDRs werden aus einem CD3-Antikörper aus Ratten erhalten. Dementsprechend ist die variable Domänen-Gerüstregion günstigerweise von solchen eines Nagers abgeleitet, obwohl sie verschiedene Formen annehmen kann, beispielsweise einer Ratte oder Maus, und bevorzugt von denen menschlichen Ursprungs abgeleitet ist. Eine Möglichkeit ist, dass der Antikörper eine variable Domänen-Gerüstregion aufweist, der der im YTH12.5-Hybridom entspricht, obgleich die konstante Region bevorzugt menschlichen Ursprungs ist oder von solchen menschlichen Ursprungs abgeleitet ist. Der erfindungsgemäße Antikörper liegt bevorzugt in humanisierter Form vor, sowohl was die variable Domänen-Gerüstregion und, wie im folgenden diskutiert, die konstante Region betrifft, oder anderen nicht-immunogenen Formen.
Dementsprechend umfasst die Erfindung weiter die Verwendung eines nicht glykosylierten Antikörpers, der eine Bindungsaffinität für das Human-CD3-Antigen aufweist und in dem die variable Domänen-Gerüstregionen und/oder die konstante Region menschlichen Ursprungs sind oder von solchen menschlichen Ursprungs abgeleitet sind. Bestimmte variable Human-Domänen-Gerüstsequenzen sind für das Pfropfen der bevorzugten CDR-Sequenzen bevorzugt, da die 3-dimensionale Konformation der CDRs in solchen Sequenzen besser beibehalten wird, und der Antikörper einen hohen Grad an Bindungsaffinität für das Antigen behalten wird. Wünschenswerte Eigenschaften in solchen variablen Domänen-Gerüsten sind die Gegenwart von Schlüsselaminosäuren, die die Struktur der CDR-Schleifen aufrechterhalten, um die Affinität und Spezifität des Antikörpers für das CD3-Antigen zu gewährleisten, wobei der Lambda-Typ für die leichte Kette bevorzugt ist.
Variable Human-Gerüstregionen, die besonders geeignet sind für die Verwendung mit den obigen CDRs, wurden zuvor in US 5,968,509 identifiziert. Die variablen (V) Gerüstregionen der schweren Kette sind solche, die vom Human-VH-Typ III-Gen VH26.D.J, codiert werden, welches aus der B-Zell-Hybridom-Zell-Linie 18/2 stammt (Genbank Code: Huminghat. Dersimonian et al., Journal of Immunology, 139, 2496 bis 2591). Die variable Gerüstregionen der leichten Kette sind solche des Human-VLλ-Typ VI-Gens SUT (Swissprot code; LV6CSHum, Solomon et al. In Glenner et al (Herausgeber), Amyloidos's, Plenum Press N.Y., 1986, Seite 449).
Eine der bevorzugteren CDRs der schweren Kette des Ratten-Anti-CD3-Antikörpers sind daher in einem variablen Human-Domänen-Gerüst vorhanden, welches die folgende Aminosäuresequenz aufweist, die in der Richtung Leader → (Pfeil) konstante Region gelesen wird, wobei CDR eine CDR (a), (b) oder (c) wie vorstehend definiert bedeutet, eine konservativ modifizierte Variante davon oder eine alternative CDR:
In einem nicht glykosylierten Antikörper, der alle drei bevorzugten CDRs enthält, umfasst die variable Region der schweren Kette die folgende Sequenz:
In gleicher Weise sind daher eine oder mehr bevorzugte CDRs der leichten Kette des Ratten-CD3-Antikörpers bevorzugt in einem variablen Human-Domänen-Gerüst vorhanden, welches die folgende Aminosäuresequenz gelesen in der Richtung Leader → konstante Region aufweist, wobei CDR eine CDR (d), (e) und (t), wie zuvor definiert, eine konservativ modifizierte Variante davon oder eine alternative CDR bedeutet:
In einem nicht glykosylierten Antikörper, der alle drei bevorzugten CDRs der variablen Region der leichten Kette enthält, umfasst die folgende Sequenz:
Die variablen Domänen, die beispielsweise eine oder mehr bevorzugte CDRs wie oben beschrieben umfassen, bevorzugt in der humanisierten Form, welche von Human-Antikörpern abgeleitete variable Gerüstregionen aufweist, sind an geeignete konstante Domänen gebunden.
Die konstanten Regionen der leichten und schweren Kette können auf Antikörpern verschiedener Typen als geeigneter Gegenstand des Antikörpers, der ein IgG-Antikörper ist, basieren, sie sind aber bevorzugt menschlichen Ursprungs oder von solchen menschlichen Ursprungs abgeleitet, obwohl sie auch aus Ratten oder Mäusen stammen können oder von solchen aus Ratten oder Mäusen abgeleitet sein können. Für die leichte Kette ist die konstante Region bevorzugt vom Lambda-Typ, und für die schwere Kette ist sie bevorzugt von einem IgG-Isotyp, insbesondere IgGI, in geeigneter Weise modifiziert, um die Nicht- Glykosylierung zu bewirken. Es ist bekannt, dass alle konstanten Human-Regionen des IgG-Isotyps am Asparaginrest im Position 297 glykosyliert sind, was einen Teil des N-Glykosylierungsmotivs Asparagin 297-X298-Serin 299 oder Threonin 299 bildet, wobei X der Rest einer beliebigen Aminosäure mit Ausnahme von Prolin ist. Der erfindungsgemäße Antikörper kann so durch Ersatz von Asparagin 297 in einer solchen konstanten Region durch eine andere Aminosäure deglykosyliert werden, die nicht glykosyliert werden kann. Ein beliebiger anderer Aminosäurerest kann potenziell verwendet werden, Alanin ist jedoch am meisten bevorzugt. Alternativ kann die Glykosylierung an Asparagin 297 verhindert werden, indem einer der anderen Reste des Motivs verändert wird, z.B. durch Ersetzen von Rest 298 durch Prolin oder von Rest 299 durch eine beliebige Aminosäure außer Serin oder Threonin. Techniken für die Durchführung dieser gerichteten Mutagenese sind Fachleuten gut bekannt und können beispielsweise durchgeführt werden unter Verwendung eines Kits für die gerichtete Mutagenese wie beispielsweise das, das kommerziell von Amersham erhältlich ist. Das Verfahren wird im folgenden weiter beispielhaft verdeutlicht.
Es ist gut im Stand der Technik bekannt, dass das Ersetzen einer Aminosäure in einer CDR durch eine andere Aminosäure mit ähnlichen Eigenschaften, beispielsweise das Ersetzen eines Glutaminsäurerestes durch einen Asparaginsäurerest, die Eigenschaft oder Struktur des Peptids oder Proteins nicht wesentlich ändern kann, in dem die Substitution oder die Substitutionen durchgeführt wurden, Daher schließen die nicht glykosylierten Antikörper für die erfindungsgemäße Verwendung solche Antikörper ein, die die bevorzugten CDRs enthalten, jedoch mit einer spezifizierten Aminosäuresequenz, in der eine solche Substitution oder solche Substitutionen aufgetreten sind, ohne dass die Bindungsaffinität und Spezifität der CDRs wesentlich geändert wurde. Alternativ können Weglassungen in der Aminosäuresequenz der CDRs durchgeführt werden, oder die Sequenzen können an einen oder beiden des N- und C-Terminus verlängert werden, während sie ihre Aktivität noch beibehalten.
Bevorzugte nicht glykosylierte Antikörper gemäß der vorliegenden Erfindung sind solche, bei denen die Affinitätskonstante für das Antigen 105 Mol^-1 oder mehr beträgt, beispielsweise bis zu 10¹² Mol^-1. Liganden mit unterschiedlichen Affinitäten können für verschiedene Anwendungen geeignet sein, so dass beispielsweise eine Affinität von 10⁶, 10⁷ oder 10⁸ Mol^-1 oder mehr in einigen Fällen geeignet sein kann. Antikörper mit einer Affinität im Bereich von 10⁶ bis 10⁸ Mol^-1 werden jedoch häufig geeignet sind. Günstigerweise zeigen die Antikörper auch keine wesentliche Bindungsaffinität für andere Antigene. Bindungsaffinitäten des Antikörpers und die Antikörperspezifität kann durch Assay-Verfahren getestet werden, wie die im folgenden Beispielbereich beschrieben (Effector Cell Retargetting Assay), oder durch Techniken wie ELISA und andere Immunoassays.
Erfindungsgemäße Antikörper sind nicht glykosylierte IgG-CD3-Antikörper, die eine „Y"-förmige Konfiguration haben, die zwei identische leichte und zwei identische schwere Ketten aufweisen kann, und sind daher bivalent, wobei jede Antigen-Bindungsstelle eine Affinität für das CD3-Antigen aufweist. Alternativ ist die Erfindung auch anwendbar auf Antikörper, in denen nur einer der Arme des Antikörpers eine Bindungsaffinität für das CD3-Antigen aufweist. Solche Antikörper können verschiedene Formen annehmen. So kann der andere Arm des Antikörpers eine Bindungsaffinität für ein anderes Antigen als CD3 aufweisen, so dass der Antikörper ein bispezifischer Antikörper ist, beispielsweise wie in US-Patent Nr. 4,474,893 und den europäischen Patentanmeldungen Nrn. 87907123.1 und 87907124.9 beschrieben. Alternativ kann der Antikörper nur einen Arm aufweisen, der eine Bindungsaffinität zeigt, wobei ein solcher Antikörper „monovalent" genannt wird.
Monovalente Antikörper (oder Antikörper-Fragmente) können auf einer Anzahl von verschiedenen Wegen hergestellt werden, Glennie und Stevenson (Nature, 295, 712-713, (1982)) beschreiben ein Verfahren zur Herstellung von monovalenten Antikörpern durch Enzymverdauung. Stevenson et al. beschreiben einen zweiten Weg zur Herstellung monovalenter Antikörper, bei dem enzymatisch hergestellte Fab'- und Fe- Fragmente chemisch vernetzt werden (Anticancer Drug Design, 3, 219-230 (1989)). Bei diesen Verfahren haben die resultierenden monovalenten Antikörper einen ihrer Fab'-Arme verloren. Ein drittes Verfahren zur Herstellung monovalenter Antikörper ist im europäischen Patent Nr. 131424 beschrieben. Bei diesem Weg wird die „Y"-Form des Antikörpers beibehalten, aber nur eine der zwei Fab'-Domänen bindet an das Antigen. Dies wird erreicht, in dem in das Hybridom ein Gen eingeführt wird, das für eine irrelevante leichte Kette codiert, welche mit der schweren Kette des Antikörpers so kombiniert wird, dass eine Mischung von Produkten gebildet wird, in der der monovalente Antikörper derjenige von Interesse ist.
Bevorzugter werden aber die monovalenten nicht glykosylierten CD3-Antikörper für die erfindungsgemäße Verwendung durch das folgende Verfahren hergestellt. Dieses beinhaltet die Einführung eines Gens in ein geeignetes Expressions-System, beispielsweise ein Zell-System wie nachfolgend beschrieben, gemeinsam mit Genen, die für die schweren und leichten Ketten kodieren, wobei das Gen für eine abgestumpfte schwere Kette codiert, in der die variable Region-Domäne und erste konstante Region-Domäne der schweren Kette fehlen, und wobei dem Gen das Exon für jede dieser Domänen fehlt. Dies resultiert in der Herstellung einer Mischung von (a) Antikörpern, die vollständige bivalence Antikörper sind, durch das Zell-System, (b) Antikörper-Fragmenten, die nur aus zwei abgestumpften schweren Ketten bestehen (d.h. ein Fc-Fragment) und (c) Fragmenten von Antikörpern, die monovalent für das CD3-Antigen sind und aus einer abgestumpften schweren Kette und einer leichten Kette in Verbindung mit der normalen schweren Kette bestehen. Ein solches Antikörper-Fragment (c) ist monovalent, da es nur einen Fab'-Arm aufweist. Die Herstellung eines monovalenten Antikörpers in Form eines solchen Fragments durch dieses Verfahren ist aus einer Anzahl von Gründen bevorzugt. So kann das resultierende Antikörper-Fragment leicht aus einer vom Zell-System gebildeten Mischung aus Antikörpern isoliert werden, beispielsweise kann es einfach auf der Basis des Molekulargewichts abtrennbar sein. Dies ist in der Methode nach dem europäischen Patent Nr. 131424 nicht möglich, bei dem der monovalente gebildete Antikörper gleiche Eigenschaften wie ein bivalenter Antikörper hinsichtlich der Größe und des äußeren Aussehens hat.
Zusätzlich verwendet die Herstellung eines monovalenten Antikörper-Fragments durch das neue Verfahren Bedingungen, die leichter kontrolliert werden können, und ist daher nicht so zufällig wie ein Verfahren mit Enzym-Verdauunglchemischer Kopplungs, welches die Abtrennung eines komplexen Reaktionsproduktes erfordert, mit dem zusätzlichen Vorteil, dass die verwendete Zell-Linie fortgesetzt monovalente Antikörper-Fragmente produziert, ohne dass kontinuierliche Syntheseverfahren notwendig sind, die sie bei der Enzym-Verdauungs-/chemischen Kupplungs-Prozedur erforderlich sind.
Nicht glykosylierte Antikörper für die Verwendung oder für das Verfahren können im allgemeinen synthetisch in einer Anzahl Wege hergestellt werden. Am bequemsten werden jedoch geeignete Genkonstrukte für die konstanten und variablen Regionen der schweren und leichten Ketten, die im Antikörper vorliegen, separat erhalten und dann in ein geeignetes Expressions-System insertiert.
Gene, die für die variablen Domänen eines Liganden der gewünschten Struktur kodieren, können hergestellt und bequem an Gene gebunden werden, die für die konstanten Domänen eines Antikörpers kodieren, welche einer gerichteten Mutagenese („site directed mutagenesis") unterzogen wurden. Diese konstanten Gene können aus Hybridom-cDNA oder aus chromosomaler DNA erhalten werden und haben eine Mutagenese (site directed) erlitten, um die nicht glykosylierten konstanten Regionen zu bilden. Für die variablen Regionen kodierende Gene können auch durch Gen-Synthese-Techniken erhalten werden, die in der Identifizierung der hier enthaltenen CDRs verwendet wurden. Geeignete Klonierungsvehikel für die DNA können verschiedene Typen sein.
Die Expression dieser Gene durch Kultur eines Zell-Systems zur Herstellung eines funktionalen CD3-Liganden wird am bequemsten durch Transformation eines geeigneten prokaryotischen oder insbesondere eukaryotischen Zell-Systems, insbesondere einer unsterblichen Säugerzell-Linie wie einer Myelom-Zell-Linie, beispielsweise YB2/3.01/Ag20 (im folgenden als YO bezeichnet) Ratten-Myelom-Zellen oder Eizellen des chinesischen Hamsters bewirkt (obwohl die Verwendung von Pflanzenzellen ebenfalls von Interesse ist), mit Expressionsvektoren, welche DNA beinhalten, die für die verschiedenen Antikörper-Regionen kodiert, und anschließendes Kultivieren des transformierten Zell-Systems zur Bildung des gewünschten Antikörpers. Solche allgemeinen Techniken der Anwendung für die Herstellung von Liganden gemäß der vorliegenden Erfindung sind in dem umfangreichen Gebiet der Gentechnik gut bekannt und sind in Publikationen wie „Molecular Cloning" von Sambrook, Fritsch und Maniatis, Cold Spring Harbour Laboratory Press, 1989 (zweite Auflage) beschrieben. Die Techniken werden weiter durch die hier enthaltenen Beispiele illustriert.
Antikörper für die erfindungsgemäße Verwendung können für die Gabe an Patienten formuliert werden durch Gabe des Antikörpers gemeinsam mit einem physiologisch verträglichen Verdünner oder Träger. Die Antikörper werden bevorzugt in einer injizierbaren Form gemeinsam mit einem solchen Verdünner oder Träger gegeben, der steril und pyrogenfrei ist. Die einem Patienten zu verabreichende Antikörper-Dosis hängt ab vom Zustand des Patienten und liegt im Ermessen des verantwortlichen Arztes. Beispielsweise können einzelne Dosen von etwa 1 bis 40 mg täglich, bevorzugt 10 bis 30 mg täglich verwendet werden. Die Gesamtdosis während einer Zeit von beispielsweise bis zu 10 Tagen kann im Bereich von etwa 50 bis 100 mg, bevorzugt etwa 60 bis 80 mg liegen.
Der therapeutische Nutzen der Therapie entsprechend der Erfindung kann beurteilt werden mit Hilfe einer Verminderung der lokalen/systemischen Entzündung mit einer gleichzeitigen Verminderung der Schmerzen und einer Verbesserung der funktionellen Fähigkeiten und Lebensqualität. Dies kann gemessen werden durch EULAR- oder ACR-Response-Kriterien (siehe Van Gestel et al., Arthritis Rheum., 1996; 39 : 34-40 und Felson et al. Arthritis Rheum., 1995; 3S : 727-35).
Die Erfindung wird durch die folgenden Beispiele verdeutlicht.
Beispiel 1 – Herstellung von Antikörper
Ein chimäre Form des nicht glykosylierten CD3-Antikörpers wurde unter Verwendung eines PCR-Aufbaus zur Bindung der variablen Region der leichten Kette des Ratten-CD3 an die konstante Region des Human-Lambda unter Verwendung von Primern hergestellt, die die Restriktions-Enzymstellen HindIII und EcoRI einführen, um das Klonieren in den Celltech-Expressionsvektor PEE12 durchzuführen (siehe Bebbington et al. (1992) Biotechnology 10,169). Die Primer-Sequenzen, die das Klonieren der chimären Form der leichten Kette von CD3 in PEE12 ermöglichen, sind wie folgt:
HindIII-Primer GAC TAC AAG CTT ACA CAG GAC CTC ACC ATG CGA TGG [SEQUENZ ID NR 17]
EcoRI-Primer GAT GCT GAA TTC TGC AGC TCT AGT CTC CCG TGG TGG [SEQUENZ ID NR 18]
Das Endkonstrukt wurde sequenziert und in PEE12 kloniert, der bereits die nicht glykosylierte schwere Kette des humanisierten CD3 enthielt, und dies wurde in die Myelom-Zell-Linie N50 (ECACC Nr. 851 10503 – Galfre and Milstein (1981) Enzymology 73 (B) 3-46) durch Elektroporation transfiziert. Die resultierenden Klone wurden unter Verwendung von ELISA für Human-IgGI und die leichte Kette von Human-Lambda hinsichtlich Antikörper-Produktion und auf dem FACS hinsichtlich der Bindung an Human-I-Zell-Klon-Jurkat-Zell-Linie gescreent. Der ELISA verwendet Anti-Human-IgFc aus Ziegen (Sigma 12136) als Abfangantikörper und biotinyliertes Anti-Human-IgG aus Schafen (Amersham RPN 1003) oder die biotinylierte leichte Kette von Anti-Human-Lambda aus Ziegen (Amersham RPN 1188) als Detektor-Antikörper (siehe Routledge et al. Eur. 1. Immunol (1991) 21 : 2717-2725).
Nach einer Transfektion exprimierten 16 Klone 60 μg/ml bis 100 μg/ml, die Transfektanten wurden dann durch Klonieren mit begrenzender Verdünnung kloniert, und einige davon verbesserten sich auf 1 20 μg/ml. Diese blieben in der Langzeitkultur in der Produktion von Antikörpern in großem Maßstab ohne Probleme mit dem Zell-Wachstum stabil.
Beispiel 2
Ein nicht glykosylierter divalenter Anti-CD3-Antikörper, welcher eine humanisierte schwere Kette, eine leichte variable Kette aus Ratten, enthaltend CDRs entsprechend der Sequenz derer aus dem YTH12.5 Ratten-Antikörper, und eine humanisierte Lambda-Region wie in Beispiel 1 von PCT/GB99/02380 beschrieben (siehe Beispiel 1 oben) aufwies, wurde in einem wässrigen Träger, d.h. normaler Kochsalzlösung, in einer Dosis von 70 mg während 5 Tagen vier Patienten verabreicht.
Patient 1
Der Patient war eine 50 Jahre alte Frau mit einer 5jährigen Geschichte sero-positiver rheumatoider Arthritis. Es gab keine zusätzlichen artikulären Manifestationen, sie hatte jedoch auch Felty's Syndrom. Vorherige Therapien schlossen Sulphasalazin und Cyclosporin A ein. Bei der Aufnahme in die Studie nahm sie Methotrexat 20 mg pro Woche und Prednisolon 20 mg pro Tag. Sie war durch ihre Erkrankung schwer behindert und hatte ihren Arbeitsplatz als Zahnarzthelferin verloren. Sie war unfähig, sich selbst anzuziehen oder ihre Haare zu waschen. Sie fand es schwierig, von einem Stuhl aufzustehen oder ins Bett oder aus dem Bett zu kommen. Sie war unfähig, ihr eigenes Fleisch zu schneiden oder einen Milchkarton zu öffnen. Baden war schwierig, genauso wie sich bücken. Sie war unfähig, Dinge wie Wasserhähne oder Gläser zu greifen, und unfähig, allein einzukaufen.
Aglykosyl-anti-CD3 wurde während 5 Tagen gegeben. 30 mg wurden am ersten Tag verabreicht, und dann 10 mg an den folgenden 4 Tagen. Es wurde keine Prä-Medikation gegeben. Die erste Infusion hatte Nebenwirkungen wie Erbrechen und Übelkeit, das Fieber erreichte 40,5°C und war begleitet von Hypotension und Durchfall. Ein Plasmaexpander wurde gegeben. Diese Symptome dauerten 36 Stunden an, und die zweite Infusion wurde um 24 Stunden verschoben. Bei der zweiten Infusion trat bereits ein Besserung der Schmerzen und Entzündung der betroffenen Gelenke auf. Die folgenden 4 Infusionen wurden ohne Komplikationen gegeben.
Ihre rheumatoide Arthritis flackerte am Tag 43 auf und wurde mit einer einzelnen Dosis intramuskuläres Depomedron behandelt. Die antirheumatoide Basis-Medikation wurde während der Anti-CD3-Behandlung fortgesetzt. Diese Patientin erhält die Therapie nun seit 21 Monaten. Sie benötigte keine zusätzlichen Medikation für ihre rheumatoide Arthritis und fühlt sich jetzt viel besser als am Anfang. Die Erkrankung ist nicht in Remission, sie kann aber nun ein relativ normales Leben führen und viele Aufgaben selbst erfüllen, zu denen sie früher unfähig war. Die Anzahl der schmerzhaften und empfindlichen Gelenke ist deutlich reduziert, genau wie der Gesamtwert. Vor der Therapie war der CRP konsistent zwischen 100 und 200 mg/L. Er reicht nun von 40 bis 60 mg/L. Die Lymphozytenzahl ist im normalen Bereich.
Patient 2
Der Patient war ein 62 Jahre alter Mann mit einer 30jährigen Geschichte sero-positiver nodularer rheumatoider Arthritis. Vorherige Therapien schlossen intramuskuläres Gold, Penicillamin und Methotrexat ein. Er hatte nie orale Steroide erhalten. Zum Zeitpunkt des Eintritts in die Studie nahm er Methotrexat 25 mg intramuskulär einmal wöchentlich und Cyclosporin A 150 mg täglich, Er war weniger behindert als Patient 1, beschrieb aber einige Schwierigkeiten bei der Mehrzahl der täglichen Aufgaben. Ihm wurde eine Behandlung von 10 mg Antikörper am Tag 1 und dann 20 mg an den nachfolgenden 4 Tagen verschrieben. Der Plan war, die erste Dosis langsam zu infundieren. Er wurde angewiesen, Cyclosporin A zu stoppen, Methotrexat aber während der Therapie fortzusetzen.
Am Tag 1 entwickelte Rigor sich nach 1 Stunde und nach 8 Stunden hatte er Durchfall und Erbrechen, was für 12 Stunden anhielt und mit einem geringen Blutdruckabfall einherging. Diese Symptome wurden mit Hydrocortison und Pethidin behandelt. Am Tag entwickelte er ein weit verbreitetes makulöses Exanthem, und dies dauerte für einige Wochen an. Das volle Behandlungsschema wurde während der angestrebten Zeitdauer gegeben. Es gab keine akuten Nebenwirkungen an Tagen 2 bis 5.
Anders als Patient 1 gab es keinen akuten Nutzen der Behandlung, und am Tag 22 verschlechterte sich die Erkrankung, was eine intramuskuläre Dosis Methylprednisolon erforderte. Die Gelenkschmerzen waren unempfindlich gegen Behandlung mit parenteralen Steroiden. Am Tag 42 wurde mit Sulphasalazin, 1 g bd begonnen, sowie mit Prednisolon 7,5 mg täglich. Intramuskuläres Methotrexat wurde fortgesetzt. Die Sulphasalazin-Therapie wurde ungefähr am Tag 150 wegen Kopfschmerzen abgebrochen, und er erhielt eine einzelne intramuskuläre Injektion von 80 mg Triamcinolon. Von diesem Punkt an verbesserte sich die Erkrankung wesentlich. Er beschrieb ein vollständiges Verschwinden der Symptome und eine Fähigkeit, ein normales Leben zu führen, ohne empfindliche oder geschwollene Gelenke. Der CRP vor der Behandlung variierte zwischen 70 bis 90 mg/L. 18 Monate nach der Behandlung ist er normalerweise innerhalb des normalen Bereichs (< 10 mg/L) oder marginal erhöht. Der Rheumafaktor-Titer fiel ebenfalls von 1 : 1 280 auf 1 40. Verglichen mit vor dem Anti-CD3 nimmt er nun auch Prednisolon 7,5 mg pro Tag, lässt aber die Dosis dieser Medikation gegenwärtig auslaufen. Darüber hinaus war Prednisolon nicht besonders effektiv, als es am Tag 42 begonnen wurde.
Patient 3
Der Patient war ein älterer Herr, der gegen alle Standard-Rheuma-Therapien resistent war und der ebenfalls an ischämischer Herzerkrankung und chronischer obstruktiver Lungenerkrankung litt. Er war schwer behindert. Der Plan war wie bei Patient zwei, jedoch Prämedikation am Tag 1 mit Methylprednisolon.
Tag 1 mit Methylprednisolon-Prämedikation ergab keine Reaktion. Am Tag 2 ohne Prämedikation entwickelte der Patient schweren Durchfall und Atemnot. Die Infusion wurde abgebrochen, nachdem ungefähr ¼ infundiert worden war, und es wurden keine weiteren Infusionen gegeben. Es gibt keine Kurzzeit- oder Langzeitnachweise einer Wirksamkeit (nun am Tag ungefähr 300).
Patient 4
Der Patient war eine 58 Jahre alte Frau mit sero-positiver rheumatoider Arthritis von 30 Jahren Dauer. Sie hatte zuvor Penicillamin, Sulphasalazin, Cyclosporin A, Hydroxychloroquin, Methotrexat, Leflunomid versucht, was alles versagt hatte. Zusätzlich zu rheumatoider Arthritis litt sie auch unter durch Diät kontrolliertem Diabetes und möglicher Angina. Die einzige Therapie, die sie für die rheumatoide Arthritis bei der Zulassung nahm, war Prednisolon 2,5 mg täglich. Sie war durch ihre Erkrankung deutlich behindert und benötigte Hilfe beim Anziehen und war auch in ihrer Mobilität beschränkt. Sie verließ kaum das Haus. Sie konnte Treppen steigen und mühte sich mit Waschen und Anziehen ab. Die Therapie wurde geplant als 10 mg Antikörper an den Tagen 1 bis 3 und 20 mg an den Tagen 4 bis 5. Der ersten Dosis gingen 50 mg eines löslichen TNF-Rezeptor-Human-IgGI-Fusionsproteins als Prophylaxe gegen eine First-Dose-Reaktion voraus. Während der ersten Infusion entwickelte sie Bronchospasmen mit einigen Brustschmerzen. Sie wurde sehr ängstlich und entwickelte eine periphere Cyanose. Der Blutdruck erreichte 225/100 mmHg. Diese Reaktion wurde mit vernebeltem Salbutamol und intravenösem Hydrocortison behandelt. Sie entwickelte anschließend Rigor. Die Temperatur erreichte während der Infusion 39°C. Bei der zweiten Infusion erhielt sie eine Prämedikation von Methylprednisolon und die Infusion war unkompliziert, genauso wie die dritte Infusion. Am Tag 4 wachte sie mit Atemlosigkeit und Enge in der Brust auf und entwickelte anschließend ein mildes Herzversagen mit einem ischämischen EKG. Das anschließende Echokardiogramm zeigte mäßige Mitralregurgitation mit einem dilatierten linken Vorhof. Es gab auch eine milde Aorten-Regurgitation mit einem leicht dilatierten linken Ventrikel. Das Herzenzymprofil war normal während der Tage der Infusion, und es gab auch keine Anzeichen für einen Myokardinfarkt zum Zeitpunkt von Anti-CD3. Trotz der klinischen Verbesserung ihrer RA-Aktivität (möglicherweise sekundär zur TNFR-Ig-Prämedikation) erhielt sie keine Infusion 4 und 5.
Nach etwa 2 Wochen entwickelte sie schwere Gelenkschmerzen, und der anschließende Verlauf war ziemlich ähnlich mit Patient 2 für die Kurzzeit. Die Gelenksymptome waren resistent gegen parenterale Steroide, und schließlich begann sie mit Prednisolon 20 mg täglich am Tag 35. Sie wurde kürzlich am Tag 90 gesehen. Sie nimmt nun Prednisolon 10 mg pro Tag. Ihr CRP lag zwischen 100 bis 200 vor der Behandlung, unmittelbar nach der Behandlung fiel er auf 30 mg pro Liter am Tag 7 (was die gleichzeitige TNF-alpha-Blockade reflektieren kann). Der CRP ist anschließend auf Spiegel ähnlich wie am Beginn geklettert. Sie entwickelte eine Lymphozytose, die zunächst am Tag 23 auftrat, sich aber schließlich wieder zurück entwickelte.
Vier Patienten wurden so mit Aglykosyl-anti-CD3 behandelt. Zwei davon vollendeten die Therapie (70 mg Antikörper insgesamt) und scheinen eine gute Langzeitantwort entwickelt zu haben. Patient 3 erhielt weniger als 15 mg, aufgeteilt in zwei Infusionen, und es gab keine offensichtlichen günstigen Wirkungen. Patient 4 erhielt 25 bis 30 mg über drei Dosen. Nach drei Monaten gibt es keinen Hinweis auf eine therapeutische Wirksamkeit, die Überwachung wird jedoch fortgesetzt. Sequenz-Liste

Claims

Verwendung eines Anti-CD3-Antikörpers zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von chronischer Gelenkentzündung, wobei der Antikörper aus Fab oder F(ab')₂-Fragmenten besteht oder ein in der Fc-Region mutierter Antikörper ist, so dass die Bindung an Fc-Rezeptoren verhindert wird.
Verwendung nach Anspruch 1, wobei der Anti-CD3-Antikörper ein nicht glykosylierter IgG-Antikörper ist.
Verwendung nach Anspruch 2, wobei der nicht glykosylierte Antikörper eine Bindungsaffinität für den Human-CD3-Antigen-Komplex aufweist.
Verwendung nach Anspruch 2 oder 3, wobei der nicht glykosylierte Antikörper variable Domänen-Rahmenregionen aufweist, die aus der Ratte oder Maus stammen oder von solchen aus der Ratte oder Maus abgeleitet sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 4, wobei der nicht glykosylierte Antikörper CDRs aufweist, die einen unterschiedlichen Ursprung hat als die variable Rahmenregion.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2, 3 oder 5, wobei der nicht glykosylierte Antikörper variable Domänen-Rahmenregionen aufweist, die von Menschen stammen oder von solchen aus aus Menschen abgeleitet sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 6, wobei der nicht glykosylierte Antikörper konstante Domänen aufweist, die aus Ratten oder Mäusen stammen oder von solchen aus Ratten oder Mäusen abgeleitet sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 7, wobei der nicht glykosylierte Antikörper CDRs mit unterschiedlichem Ursprung als der der konstanten Region aufweist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 6 oder 8, wobei der nicht glykosylierte Antikörper konstante Domänen aufweist, die aus Menschen stammen oder von solchen aus Menschenen abgeleitet sind.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 9, wobei der nicht glykosylierte Antikörper eine konstante Region aufweist, die ein IgG-Isotyp ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 10, wobei nur einer der Arme des nicht glykosylierten Antikörpers eine Affinität für das CD3-Antigen aufweist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 11, wobei der nicht glykosylierte Antikörper monovalent ist.
Verwendung nach einem der Ansprüche 2 bis 12, wobei der nicht glykosylierte Antikörper eine Hälfte aufweist, die aus einer vollständigen schweren Kette und leichten Kette besteht, und eine weitere Hälfte, die aus einer ähnlichen, jedoch abgestumpften schweren Kette besteht, der die Bindungsstelle für die leichte Kette fehlt.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei der Antikörper in Form einer pharmazeutischen Zusammensetzung vorliegt, die einen physiologisch verträglichen Verdünner oder Träger umfasst.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Medikament zur Verwendung in einem Verfahren dient, bei dem der Antikörper während einer Periode von bis zu 2 Wochen ohne nachfolgende erneute Gabe nach dieser Periode während wenigstens 6 Monaten gegeben wird.
Verwendung nach Anspruch 15, wobei der Antikörper während einer Zeit von 1 bis 5 Tagen gegeben wird.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei der Antikörper gemeinsam mit einer Substanz verabreicht wird, die die First-Dose-Response vermindert.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Medikament zur Behandlung von chronischer entzündlicher Synovitis vorgesehen ist.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Medikament zur Behandlung von rheumatoider Arthritis vorgesehen ist.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Medikament zur Verwendung in einer Behandlung vorgesehen ist, die dadurch charakterisiert ist, dass sie in einer verminderten lokalen und systemischen Entzündung resultiert.
Verwendung nach Anspruch 20, wobei die Behandlung dadurch charakterisiert ist, dass die lokale und systemische Entzündung im wesentlichen rückgängig gemacht wird.
Verwendung nach Anspruch 15 oder 1 6, wobei das Medikament zur Verwendung in einem Verfahren dient, in dem der Antikörper einem erwachsenen Menschen mit einer Gesamtdosis von 50 bis 100 mg verabreicht wird.
Verwendung nach einem der vorstehenden Ansprüche, wobei das Medikament zur Verwendung in einem Verfahren vorgesehen ist, bei dem der Antikörper in Verbindung mit einem weiteren therapeutischen Mittel zur Behandlung von chronischer Gelenkentzündung verabreicht wird.
Verwendung nach Anspruch 23, wobei das weitere therapeutische Mittel ein Steroid oder ein Anti-TNF-Antikörper ist.