DE60208794T2

DE60208794T2 - 4'-substituierte nukleoside zur behandlung von hepatitis-c-virus-vermittelten erkrankungen

Info

Publication number: DE60208794T2
Application number: DE60208794T
Authority: DE
Inventors: Rene Robert Devos; John Christopher HOBBS; Wen-Rong Redwood City JIANG; Armstrong Joseph Menlo Park MARTIN; Herbert John MERRETT; Isabel St. Albans NAJERA; Nobuo Shimma; Takuo Odawara-shi TSUKUDA
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2001-06-12
Filing date: 2002-06-07
Publication date: 2006-08-31
Anticipated expiration: 2022-06-08
Also published as: ES2256494T3; HUP0401291A3; EP1404347A2; US8648054B2; BR0210350A; PT1404347E; MXPA03011192A; CA2449572C; ECSP034897A; NZ529695A; PE20030256A1; HK1065707A1; JO2399B1; US20030236216A1; CN100528173C; CZ20033543A3; DK1404347T3; US20120034184A1; JP2004536817A; IL159023A

Description

Die Erfindung bezieht sich auf Nucleosidderivate als Inhibitoren der HCV-Replikon-RNA-Replikation. Insbesondere betrifft die Erfindung die Verwendung von Purin- und Pyrimidinnucleosidderivativen als Inhibitoren der Subgenom-Hepatitis-C-Virus-(HCV-)-RNA-Replikation.
Das Hepatitis-C-Virus ist die führende Ursache von chronisches Lebererkrankung weltweit. Die Patienten, die mit HCV infiziert sind, sind hinsichtlich der Leberzirrhose und späteren Leberzellkarzinom gefährdet und daher ist HCV die Hauptindikation für Lebertransplantationen. Derzeit sind nur zwei zugelassene Therapien zur Behandlung der HCV-Infektion verfügbar (R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999, 19, 35). Diese sind die Interferon-α-Einzeltherapie und kürzlich die Kombinationstherapie des Nucleosidanalogons, Ribavirin (Virazole), mit Interferon-α.
Viele der Medikamente, die zur Behandlung von Virusinfektionen zugelassen sind, sind Nucleoside oder Nucleosidanaloga, und die meisten dieser Nucleosidanalogonmedikamente inhibieren die Virusreplikation, gefolgt von Umwandlung zu entsprechenden Triphosphaten durch die Inhibierung der Viruspolymeraseenzyme. Diese Umwandlung zu Triphosphat wird gewöhnlich durch zellulare Kinasen vermittelt und deshalb wird die direkte Bewertung von Nucleosiden als Inhibitoren der HCV-Replikation nur unter Verwendung eines Assays auf Zellbasis günstig durchgeführt. Für HCV mangelt es an der Verfügbarkeit eines echten Virusreplikationsassays auf Zellbasis oder Infektionstiermodells.
Das Hepatitis-C-Virus gehört zu der Familie der Flaviridae. Es ist ein RNA-Virus, wobei das RNA-Genom ein großes Polyprotein codiert, das nach dem Processing die notwendige Replikationsmaschinerie erzeugt, um die Synthese der Nachkommen-RNA sicherzustellen. Es wird angenommen, daß die meisten der Nichtstrukturproteine, die durch das HCV-RNA-Genom codiert werden, in die RNA-Replikation involviert sind. Lohmann et al. [V. Lohmann et al., Science, 1999, 285, 110–113] beschrieb die Konstruktion einer menschlichen Hepatomzellinie (Huh7-Zellinie), in die Subgenom-HCV-RNA-Moleküle eingeführt worden sind und die eine Replikation mit hoher Wirksamkeit zeigen. Es wird angenommen, daß der Mechanismus der RNA-Replikation in diesen Zellinien identisch mit der Replikation des Full-Length-HCV-RNA-Genoms in infizierten Hepatozyten ist. Die Subgenom-HCV-cDNA-Klone, die zur Isolation dieser Zellinien verwendet wurden, bildeten die Grundlage für die Entwicklung eines Assays auf Zellbasis zur Identifizierung von Nucleosidanalogoninhibitoren der HCV-Replikation.
JP 07126282 offenbart 4'-Alkyl-substituierte Thionucleosidderivate, die zur Behandlung von Heptatits-C-Virus-Infektionen verwendet werden können.
Es ist gezeigt worden, daß die Verbindungen der Formel I Inhibitoren der Subgenom-Hepatitis-C-Virus-Replikation in einer Hepatomzellinie sind. Diese Verbindungen sind als antivirale Medikamente zur Behandlung von HCV-Infektionen bei Menschen wirksam.
Die Erfindung betrifft die Verwendung von Verbindungen der Formel I
worin
R Wasserstoff oder -[P(O)(OH)-O]_nH ist und n 1, 2 oder 3 ist;
R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Alkoxy, Cyano, Azido, Hydroxyiminomethyl, Alkoxyiminomethyl, Halogen, Alkylcarbonylamino, Alkylaminocarbonyl, Azidoalkyl, Aminomethyl, Alkylaminomethyl, Dialkylaminomethyl oder Heterocyclyl ist;
R² Wasserstoff, Hydroxy, Amino, C_1-12-Alkyl, Hydroxyalkyl, Alkoxy, Halogen, Cyano oder Azido ist;
R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder
R³ und R⁴ zusammen =CH₂ oder =N-OH darstellen, oder
R³ und R⁴ beide Fluor darstellen;
B einen 9-Purinylrest B1 der Formel
darstellt, worin
R⁵ Wasserstoff, Hydroxy, C_1-12-Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, NHR⁸, Halogen oder SH ist;
R⁶ Hydroxy, NHR⁸, NHOR⁹, NHNR⁸, -NHC(O)OR^9' oder SH ist;
R⁷ Wasserstoff, Hydroxy, C_1-12-Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, NHR⁸, Halogen, SH oder Cyano ist;
R⁸ Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Hydroxyalkyl, Arylcarbonyl oder Alkylcarbonyl ist;
R⁹ Wasserstoff oder C_1-12-Alkyl ist;
R^9' C_1-12-Alkyl ist; oder
B einen 1-Pyrimidylrest B2 der Formel
darstellt, worin
Z O oder S ist;
R¹⁰ Hydroxy, NHR⁸, NHOR⁹, NHNR⁸, -NHC(O)OR^9' oder SH ist;
R¹¹ Wasserstoff, Alkyl, Hydroxy, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Halogenalkyl oder Halogen ist;
R⁸, R⁹ und R^9' wie oben definiert sind;
und von pharmazeutisch akzeptablen Salzen davon;
zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krankheiten, die durch den Hepatitis-C-Virus (HCV) hervorgerufen werden.
Bei den Verbindungen, worin R eine Phosphatgruppe -[P(O)(OH)-O]_nH darstellt, ist n vorzugsweise 1.
Der Ausdruck „Alkyl", wie hierin verwendet, gibt einen geraden oder verzweigtkettigen Kohlenwasserstoffrest an, der 1 bis 12 Kohlenstoffatome enthält. Vorzugsweise gibt der Ausdruck „Alkyl" einen geraden oder verzweigtkettigen Kohlenwasserstoffrest an, der 1 bis 7 Kohlenstoffatome enthält. Am stärksten bevorzugt sind Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, n-Butyl, Isobutyl, tert-Butyl oder Pentyl. Das Alkyl kann unsubstituiert oder substituiert sein. Die Substituenten werden aus ein oder mehreren von Cycloalkyl, Nitro, Amino, Alkylamino, Dialkylamino, Alkylcarbonyl und Cycloalkylcarbonyl ausgewählt.
Der Ausdruck „Cycloalkyl", wie hierin verwendet, gibt eine gegebenenfalls subsituierte Cycloalkylgruppe an, die 3 bis 7 Kohlenstoffatome enthält, beispielsweise Cyclopropyl, Cyclobutyl; Cyclopentyl, Cyclohexyl oder Cycloheptyl.
Der Ausdruck "Alkoxy", wie hierin verwendet, gibt eine gegebenenfalls substituierte gerade oder verzweigtkettige Alkyloxygruppe an, wobei der „Alkylteil" wie oben definiert ist, wie Methoxy, Ethoxy, n-Propyloxy, i-Propyloxy, n-Butyloxy, i-Butyloxy, tert-Butyloxy, Pentyloxy, Hexyloxy, Heptyloxy, einschließlich ihren Isomeren.
Der Ausdruck „Alkoxyalkyl", wie hierin verwendet, gibt eine Alkoxygruppe, wie oben definiert, an, die an eine Alkylgruppe, wie oben definiert, gebunden ist. Beispiele sind Methoxymethyl, Methoxyethyl, Methoxypropyl, Ethoxymethyl, Ethoxyethyl, Ethoxypropyl, Propyloxypropyl, Methoxybutyl, Ethoxybutyl, Propyloxybutyl, Butyloxybutyl, tert.-Butyloxybutyl, Methoxypentyl, Ethoxypentyl, Propyloxypentyl, einschließlich ihren Isomeren.
Der Ausdruck „Alkenyl", wie hierin verwendet, gibt einen unsubstituierten oder substituierten Kohlenwasserstoffrest an, der 2 bis 7 Kohlenstoffatome, vorzugsweise 2 bis 4 Kohlenstoffatome aufweist und eine oder zwei Olefindoppelbindungen, vorzugsweise eine Olefindoppelbindung aufweist. Beispiele sind Vinyl, 1-Propenyl, 2-Propenyl (Allyl) oder 2-Butenyl (Crotyl).
Der Ausdruck „Alkinyl", wie hierin verwendet, gibt einen unsubstituierten oder substituierten Kohlenwasserstoffrest an, der 2 bis 7 Kohlenstoffatome, vorzugsweise 2 bis 4 Kohlenstoffatome aufweist und eine oder, wo möglich, zwei Dreifachbindungen, vorzugsweise eine Dreifachbindung, aufweist. Beispiele sind Ethinyl, 1-Propinyl, 2-Propinyl, 1-Butinyl, 2-Butinyl oder 3-Butinyl.
Der Ausdruck „Hydroxyalkyl", wie hierin verwendet, gibt eine gerade oder verzweigtkettige Alkylgruppe, wie oben definiert, an, wobei 1, 2, 3 oder mehrere Wasserstoffatome durch eine Hydroxygruppe substituiert sind. Beispiele sind Hydroxymethyl, 1-Hydroxyethyl, 2-Hydroxyethyl, 1-Hydroxypropyl, 2-Hydroxypropyl, 3-Hydroxypropyl, Hydroxyisopropyl, Hydroxybutyl.
Der Ausdruck „Halogenalkyl", wie hierin verwendet, gibt eine gerade oder verzweigtkettige Alkylgruppe, wie oben definiert, an, wobei 1, 2, 3 oder mehrere Wasserstoffatome durch ein Halogen substituiert sind. Beispiele sind 1-Fluormethyl, 1-Chlormethyl, 1-Brommethyl, 1-Idmethyl, Trifluormethyl, Trichlormethyl, Tribrommethyl, Triiodmethyl, 1-Fhorethyl, 1-Chlorethyl, 1-Bromethyl, 1-Iodethyl, 2-Flurethyl, 2-Chlorethyl, 2-Bromethyl, 2-Iodethyl, 2,2-Dichlorethyl, 3-Brompropyl oder 2,2,2-Trifluorethyl.
Der Ausdruck „Alkylthio", wie hierin verwendet, gibt eine gerade oder verzweigtkettige (Alkyl)-S-Gruppe an, wobei der „Alkylteil" wie oben definiert ist. Beispiele sind Methylthio, Ethylthio, n-Propylthio, i-Propylthio, n-Butylthio, i-Butylthio oder tert-Butylthio.
Der Ausdruck „Aryl", wie hierin verwendet, gibt ein gegebenenfalls substituiertes Phenyl und Naphthyl an (beispielsweise 1-Naphthyl, 2-Naphthyl oder 3-Naphthyl). Geeignete Substituenten für Aryl können aus denen ausgewählt werden, die für Alkyl genannt werden, außerdem sind jedoch Halogen, Hydroxy und gegebenenfalls substituiertes Alkyl, Halogenalkyl, Alkenyl, Alkinyl und Aryloxy Substituenten, die zu der Auswahl hinzukommen können.
Der Ausdruck „Heterocyclyl", wie hierin verwendet, gibt ein gegebenenfalls substituiertes gesättigtes, teilweise ungesättigtes oder aromatisches, monocyclisches, bicyclisches oder tricyclisches heterocyclisches System an, welches ein oder mehrere Heteroatome enthält, ausgewählt aus Stickstoff, Sauerstoff und Schwefel, welches ebenso an eine gegebenenfalls substituierte gesättigte, teilweise ungesättigte oder aromatische, monocyclische, carbocyclische oder heterocyclische Verbindung anelliert sein kann.
Beispiele von geeigneten heterocyclischen Verbindungen sind Oxazolyl, Isoxazolyl, Furyl, Tetrahydrofuryl, 1,3-Dioxolanyl, Dihydropyranyl, 2-Thienyl, 3-Thienyl, Pyrazinyl, Isothiazolyl, Dihydrooxazolyl, Pyrimidinyl, Tetrazolyl, 1-Pyrrolidinyl, 2-Pyrrolidinyl, 3-Pyrrolidinyl, Pyrrolidinonyl, (N-Oxid)-pyridinyl, 1-Pyrrolyl, 2-Pyrrolyl, Triazolyl beispielsweise 1,2,3-Triazolyl oder 1,2,4-Triazolyl, 1-Pyrazolyl, 2-Pyrazolyl, 4-Pyrazolyl, Piperidinyl, Morpholinyl (beispielsweise 4-Morpholinyl), Thiomorpholinyl (beispielsweise 4-Thiomorpholinyl), Thiazolyl, Pyridinyl, Dihydrothiazolyl, Imidazolidinyl, Pyrazolinyl, Piperazinyl, 1-Imidazolyl, 2-Iimidazolyl, 4-Imidazolyl, Thiadiazolyl beispielsweise 1,2,3-Thiadiazolyl, 4-Methylpiperazinyl, 4-Hydroxypiperidin-1-yl.
Geeignete Substituenten für Heterocyclyl können aus denen ausgewählt werden, die für Alkyl genannt werden, außerdem sind jedoch gegebenenfalls substituiertes Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, eine Oxogruppe (=O) oder Aminosulfonyl Substituenten, die zu der Auswahl hinzukommen.
Der Ausdruck „Acyl" („Alkylcarbonyl"), wie hierin verwendet, gibt eine Gruppe der Formel C(=O)R an, worin R Wasserstoff, ein unsubstituierter oder substituierter gerader oder verzweigtkettiger Kohlenwasserstoffrest, der l bis 7 Kohlenstoffatome enthält, oder eine Phenylgruppe ist. Am stärksten bevorzugte Acylgruppen sind die, worin R Wasserstoff, ein unsubstituierter geradkettiger oder verzweigter Kohlenwasserstoffrest, der 1 bis 4 Kohlenstoffatome enthält, oder eine Phenylgruppe ist.
Der Ausdruck Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom oder Iod, vorzugsweise Fluor, Chlor, Brom.
Innerhalb der Erfindung stellt der Ausdruck „Z" O oder S, vorzugsweise O dar.
Bei der bildlichen Darstellung der Verbindungen, die in dieser Anmeldung angegeben werden, gibt eine dicke spitz zulaufende Linie (
) einen Substituenten an, der über der Ebene des Rings liegt, zu dem der asymmetrische Kohlenstoff gehört, und eine gepunktete Linie (
) einen Substituenten an, der unter der Ebene des Rings liegt, zu dem der asymmetrische Kohlenstoff gehört.
Die Verbindungen der Formel I zeigen Stereoisomerie. Diese Verbindungen können irgendein Isomer der Verbindung der Formel I oder Gemische aus diesen Isomeren sein. Die Verbindungen und Zwischenprodukte der vorliegenden Erfindung mit ein oder mehreren asymmetrischen Kohlenstoffatomen können als racemische Gemische aus Stereoisomeren, die getrennt werden können, erhalten werden.
Die Verbindungen der Formel I zeigen Tautomerie, was bedeutet, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen als zwei oder mehrere chemische Verbindungen existieren können, die zur leichten gegenseitigen Umwandlung fähig sind. In vielen Fällen bedeutet dies nur der Austausch eines Wasserstoffatoms zwischen zwei anderen Atomen, wobei eines davon eine kovalente Bindung bildet. Tautomere Verbindungen existieren in einem beweglichen Gleichgewicht miteinander, so daß Versuche, die separaten Substanzen herzustellen, normalerweise zur Bildung eines Gemisches führen, das alle chemischen und physikalischen Eigenschaften zeigt, die auf der Grundlage der Strukturen der Komponenten zu erwarten sind.
Der bekannteste Typ an Tautomerie ist das Involvieren von Carbonyl- oder Ketoverbindungen und ungesättigten Hydroxylverbindungen oder Enolen. Die strukturelle Veränderung ist die Verschiebung eines Wasserstoffatoms zwischen den Atomen von Kohlenstoff und Sauerstoff mit der Umlagerung von Bindungen. Beispielsweise ist in vielen aliphatischen Aldehyden und Ketonen, wie Acetaldehyd, die Ketoform die vorhenschende; in Phenolen ist die Enolform die Hauptkomponente.
Verbindungen der Formel I, die basisch sind, können pharmazeutisch akzeptable Salze mit anorganischen Säuren, wie Halogenwasserstoffsäuren (beispielsweise Salzsäure und Bromwasserstoffsäure), Schwefelsäure, Salpetersäure und Phosphorsäure, und mit organischen Säuren (beispielsweise mit Essigsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Maleinsäure, Äpfelsäure, Salicylsäure, Zitronensäure, Methansulfonsäure und p-Toluolsulfonsäure) bilden. Die Bildung und Isolation von diesen Salzen kann gemäß den Verfahren, die in der Technik bekannt sind, durchgeführt werden.
Bevorzugt ist die Verwendung von Verbindungen der Formel I, worin
R Wasserstoff ist;
R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxy, Hydroxymethyl, Cyano, Azido, Alkoxyiminomethyl, Alkylcarbonylamino, Alkylaminomethyl oder Dialkylaminomethyl ist;
R² Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy oder Halogen ist;
R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder
R³ und R⁴ Fluor darstellen;
B einen 9-Purinylrest B1 oder einen 1-Pyrimidylrest B2, wie oben definiert, darstellt.
Beispiele der bevorzugten Verbindungen werden nachstehend aufgelistet.
Eine besonders bevorzugte Gruppe von Verbindungen zur Behandlung von HCV sind die der Formel I-a
worin
R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxy, Hydroxymethyl, Cyano, Azido, Alkoxyiminomethyl, Alkylcarbonylamino, Alkylaminomethyl oder Dialkylaminomethyl ist;
R² Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy oder Halogen ist;
R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder
R³ und R⁴ Fluor darstellen;
und pharmazeutisch akzeptable Salze hiervon.
Beispiele von diesen besonders bevorzugten Verbindungen werden nachstehend aufgelistet.
Am stärksten bevorzugte Verbindungen zur Behandlung von HCV werden nachstehend aufgelistet:
Die Verbindungen der Formel I können durch verschiedene Verfahren, die in der Technik der organischen Chemie im allgemeinen und Nucleosidanalogonsynthese speziell bekannt sind, hergestellt werden. Die Ausgangsmaterialien für die Synthesen sind entweder ohne weiteres von kommerziellen Quellen erhältlich oder sind bekannt oder können selbst durch die allgemein bekannten Techniken hergestellt werden. Allgemeine Überblicke über die Herstellung von Nucleosidanaloga sind in den folgenden Veröffentlichungen enthalten:

A M Michelson „The Chemistry of Nucleosides and Nudeotides" Academic Press, New York 1963.
L Goodman „Basic Principles in Nucleic Acid Chemistry" Ed POPTs'O, Academic Press, New York 1974, Bd. 1, Kapitel 2.
„Synthetic Procedures in Nucleic acid Chemistry" Ed W W Zorbach und R S Tipson, Wiley, New York, 1973, Bd. 1 und 2.

Die Synthese von carbocyclischen Nucleosiden ist von L Agrofoglio et al., Tetrahedron, 1994, 50, 10611 besprochen worden.
Die Strategien, die für die Synthese von Verbindungen der Formel I verfügbar sind, umfassen:

1. Modifikation oder gegenseitige Umwandlung von vorgeformten Nucleosiden; oder
2. Konstruktion der heterocyclischen Base nach der Glykosylierung; oder
3. Kondensation eines geschützten Furanosederivats mit einer Pyrimidin- (B2) oder Purinbase (B1).

Diese Verfahren werden nachstehend weiter erläutert:
1. Modifikation oder gegenseitige Umwandlung von vorgeformten Nucleosiden.
Diese Verfahren umfassen einerseits die Modifikation des 9-Purinyl- oder 1-Pyrimidylrests oder andererseits die Modifikation der Kohlenhydrateinheit.
A. Modifikation der Purinyl- oder Pyrimidyleinheit:

a) Die Desaminierung von Aminopurin- oder Aminopyrimidinnucleosiden, wie von J. R. Tittensor und R. T. Walker European Polymer J., 1968, 4, 39 und H. Hayatsu, Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology 1976, Bd. 16, S. 75, beschrieben.
b) Die Umwandlung der 4-Hydroxygruppe von 4-Hydroxypyrimidinnucleosiden zu einer Austrittsgruppe und Verschiebung mit nucleophilen Reagenzien. Diese Austrittsgruppen umfassen Halogen, wie von J. Brokes und J. Beranek, Col. Czech. Chem. Comm., 1974, 39. 3100 beschrieben, oder 1,2,4-Triazol, wie von K. J. Divakar und C. B. Reece, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1982, 1171 beschrieben.
c) 5-Substitution von Pyrimidinnucleosiden ist durch die Verwendung von 5-Metalloderivaten, wie 5-Quecksilber oder 5-Palladium, erreicht worden, wie beispielsweise von D. E. Bergstrom und J. L. Ruth J. Amer. Chem. Soc., 1976, 98, 1587 beschrieben. Die Einführung von Fluor in die 5-Stellung von Pyrimidinnucleosiden kann mit Rea genzien, wie Trifluormethylhypofluorit, erreicht werden, wie von M. J. Robins, Ann New York Acad. Sci. 1975. 255, 104 beschrieben.
d) Modifizierte Purinnucleoside können aus den entsprechenden Purinnucleosidderivaten hergestellt werden, worin der 2-, 6- oder 8-Substituent eine geeignete Austrittsgruppe, wie Halogen oder Sulfonat oder 1,3,4-Triazol ist. 6-substituierte Purinnucleoside können durch die Behandlung der entsprechenden 6-Halogenpurin- oder 6-(1,2,4-Triazol-4-yl)-purinnucleosidderivate mit dem entsprechenden nucleophilen Reagens hergestellt werden, wie von V. Nair und A. J. Fassbender Tetrahedron, 1993, 49, 2169 und von V. Samano, R. W. Miles und M. J. Robins, J. Am. Chem. Soc., 1994, 116, 9331 beschrieben. Ebenso können 8-substituierte Purinnucleoside durch die Behandlung des entsprechenden 8-Halogenpurinnucleosids mit dem entsprechenden nucleophilen Reagens hergestellt werden, wie von L. Tai-Shun, C. Jia-Chong, I. Kimiko und A. C. Sartorelli, J. Med. Chem., 1985, 28, 1481; Nandanan et al., J. Med. Chem, 1999, 42, 1625; J. Jansons, Y. Maurinsh und M. Lidaks, Nucleosides Nucleotides, 1995, 14, 1709 beschrieben. Die Einführung eines 8-Cyanosubstituenten kann durch Verschiebung unter Verwendung eines Metallcyanids erreicht werden, wie von L-L. Gundersen, Acta. Chem. Scand. 1996, 50, 58 beschrieben. 2-Modifiziertes Purinnucleosid kann in einer ähnlichen Weise hergestellt werden, wie von T. Steinbrecher, C. Wamelung, F. Oesch und A. Seidl, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 404 beschrieben.
e) Wo der Substituent an der 2- oder 8-Stellung des Purinnucleosids über eine Knhlenstoff-Kohlenstoff-Bindung, beispielsweise Alkyl, verknüpft ist, dann können Metall-katalysierte Kreuzkopplungsverfahren verwendet werden, ausgehend von dem entsprechenden 2- oder 8-halogensubstituierten Purinnucleosidanalogon, wie von A. A. Van Aerschott, et al., J. Med. Chem, 1993, 36, 2938; V. Nair und G. S. Buenger, J. Am. Chem. Soc., 1989, 111 (22), 8502; C. Tu, C. Keane und B. E. Eaton Nucleosides Nucleotides, 1995, 14, 1631 beschrieben.

B. Modifikation der Kohlenhvdrateinheit:
Einführung von Schutzgruppen, die mit der weiteren Chemie kompatibel sind:

– Azid kann an der 4'-Stellung durch Behandlung des 4',5'-Didehydronucleosids mit Iodazid eingeführt werden, wie von H. Maag et al., J. Med. Chem, 1992, 35, 1440 veranschaulicht. Ein Alkoxid kann an der 4'-Stellung durch Behandlung des 4',5'-Didehydronucleosids mit Iod eingeführt werden, gefolgt von einem Alkohol und Blei(II)-carbonat wie von J. P. Verheyden und J. G. Moffatt, J. Am. Chem. Soc., 1975, 97 (15), 4386 veranschaulicht. Fluorid kann an der 4'-Stellung durch Behandlung des 4',5'-Didehydronucleosids mit Iod eingeführt werden, gefolgt von Silber(I)-fluorid, wie von G. R. Owen et al., J. Org. Chem., 1976, 41 (8), 3010 oder A. Maguire et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 1993, 1 (15), 1795 beschrieben. Eine 4'-Formylgruppe kann eingeführt und anschließend in einen breiten Bereich an Substituenten umgewandelt werden, einschließlich 4'-Halogenalkyl, 4'-Ethinyl, 4'-Oximinomethyl und 4'-Cyano, ist aber nicht darauf beschränkt, wie von M. Nomura et al., J. Med. Chem, 1999, 42, 2901 veranschaulicht.
– Die Modifikation von entweder dem 2'-Hydroxysubstituenten oder 3'-Hydroxysubstituenten in dem Nucleosidanalogon ist möglich.
– Die Umwandlung des 3-Hydroxy zu einer Austrittsgruppe, wie Halogen, durch die Umsetzung mit beispielsweise Triphenylphosphin und einem Tetrahalogenalkan, wie beispielsweise von L. De Napoli et al., Nucleosides Nucleotides, 1993, 12, 981 beschrieben, gefolgt von Reduktion, stellt die 3-Deoxyzuckerderivate bereit, wie von D. G. Norman und C. B. Reese, Synthesis 1983, 304 beschrieben.
– Derivatisierung der 3-Hydroxygruppe durch Umwandlung zu einer Triflatgruppe, gefolgt von Reduktion unter Verwendung von Natriumborhydrid, wie von S. A. Surzhykov et al., Nucleosides Nucleotides, 1994, 13 (10), 2283 beschrieben. Die direkte Einführung eines Fluorsubstituenten kann mit Fluorierungsmitteln, wie Diethylaminoschwefeltrifluorid, erreicht werden, wie von P. Herdewijn, A. Van Aerschot und L. Kerremans, Nucleosides Nucleotides, 1989, 8, 65 beschrieben.
– Die Umwandlung des Hydroxysubstituenten zu einer Austrittsgruppe, wie Halogen oder Sulfonat, ermöglicht ebenso den Austausch unter Verwendung der nucleophilen Reagenzien, wie Tetrabutylammoniumfluorid, Lithiumazid oder Metallcyaniden, wie von H. Hrebabecky, A. Holy und E. de Clercq, Collect. Czech. Chem. Comm. 1990, 55, 1800; K. E. B. Parkes und K. Taylor, Tet. Lett., 1988, 29, 2995; H. M. Pfundheller et al., Helv. Chim. Acta, 2000, 83, 128 veranschaulicht.
– Die Umsetzung von 2'-Ketonucleosiden mit Fluorierungsmitteln, wie Diethylaminoschwefeltrifluorid, kann verwendet werden, um 2',2'-Difluornucleoside herzustellen, wie von D. Bergstrom, E. Romo und P. Shum Nudeosides Nucleotides, 1987, 6, 53 beschrieben.

2. Konstruktion der heterocyclischen Base nach der Glykosylierung.

a) Die, die beispielsweise Furanosylaminderivate nutzen, wie von N. J. Cusack, B. J. Hildick, D. H. Robinson, P. W. Rugg und G. Shaw J. Chem. Soc. Perkin Trans., I 1973, 1720 oder G. Shaw, R. N. Warrener, M. H. Maguire und R. K. Ralph, J. Chem. Soc., 1958, 2294 beschrieben.
b) Die, die beispielsweise Furanosylharnstoffe zur Pyrimidinnucleosidsynthese nutzen, wie von J. Smejkal, J. Farkas, und F. Sorm, Coll. Czech. Chem. Comm., 1966, 31, 291 beschrieben.
c) die Herstellung von Purinnucleosiden aus Imidazolnuclensiden wird von L. B. Townsend, Chem. Rev., 1967, 67. 533 besprochen.

3. Kondensation eines geschützten Furanosederivats mit einem Purin- oder Pyrimidinderivat.
Die Kondensationsreaktion eines geschützten Furanosederivats mit einem geeigneten Purin- oder Pyrimidinderivat kann unter Verwendung von Standardverfahren durchgeführt werden, einschließlich der Verwendung eines Lewis-Säurekatalysators, wie Quecksilberbromid oder Zinn(IV)-chlorid oder Trimethylsilyltrifluormethansulfonat, in Lösungsmitteln, wie Acetonitril, 1,2-Dichlorethan, Dichlormethan, Chloroform oder Toluol, bei reduzierter, Umgebungs- oder erhöhter Temperatur. Beispiele für die Kondensationsreaktion einer geschützten Furanose:

– mit Schwermetallderivaten von Purin- oder Pyrimidinderivaten (beispielsweise Chlorquecksilberderivate) werden von J Davoll und B. A. Lowry, J. Am. Chem. Soc., 1951, 73, 1650; J. J. Fox, N. Yung, J. Davoll und G. B. Brown, J. Am. Chem. Soc., 1956, 78, 2117 beschrieben;
– mit Alkoxypyrimidinen werden von K. A. Watanabe, D. H. Hollenberg und J. J. Fox., Carbohydrates. Nucleosides and Nucleotides. 1974, 1, 1 beschrieben;
– mit Silylderivaten von Purinen oder Pyrimidinen werden von U. Niedballa und H. Vorbruggen, J. Org. Chem, 1976, 41, 2084; U. Niedballa und H. Vorbruggen, J. Org. Chem., 1974, 39, 3672, A. J. Hubbard, A. S. Jones und R. T. Walker, Nucleic Acids Res., 1984, 12, 6827 beschrieben.

Außerdem

– ist die Fusion von voracylierten Zuckern mit Purinen unter Vakuum in Gegenwart von p-Toluolsulfonsäure von T. Simadate, Y. Ishudo und T. Sato, Chem. Abs., 1962, 56, 11 692 und W. Pfleiderer, R. K. Robins, Chem. Ber. 1965, 98, 1511 beschrieben worden;
– sind die Kondensationsreaktionen von K. A. Watanabe, D. H. Hollenberg and J. J. Fox, Carbohydrates Nucleosides and Nucleotides, 1974, 1, 1 beschrieben worden.

Diese Verfahren führten oftmals zu Gemischen aus anomeren Nucleosidderivaten, die durch allgemein bekannte Standardtechniken abgetrennt werden können, wie Umkristallisierung, Säulenchromatographie, Hochleistungsflüssigchromatographie oder überkritische Flüssigchromatographie.
Die Purinderivate und Pyrimidinderivate für die obigen Kondensationsreaktionen können kommerziell erhalten werden oder können durch in der Technik bekannte Verfahren hergestellt werden.
Die Herstellung von Purinderivaten wird von G. Shaw in „Comprehensive Heterocyclic Chemistry" Hrsg. Pergamon Press Bd. 5 Kapitel 4.09, S. 499 und „Comprehensive Heterocyclic Chemistry II" Hrsg. Pergamon Press, Bd. 7, Kapitel 7.11, S. 397, besprochen.
Die Herstellung von Pyrimidinderivaten wird von D. J. Brown in „The Chemistry of Heterocyclic Compound – The Pyrimidines" 1962 und Supplement 1,1970, Hrsg. John Wiley and Sons, New York, von D. J. Brown in „Comprehensive Heterocyclic Chemistry" Hrsg. Pergamon Press Bd. 5 Kapitel 4.09, S. 499 und von K. Unheim und T. Benneche in „Comprehensive Heterocyclic Chemistry II" Hrsg. Pergamon Press Bd. 6 Kapitel 6.02, S. 93, besprochen.
Furanosederivate können aus kommerziell erhältlichen Kohlenhydratausgangsmaterialien, wie die D-Formen von Ribose, Arabinose, Xylose oder Lyxose, hergestellt werden, gefolgt von der Einführung von Schutzgruppen, die mit der Chemie kompatibel sind.
4-Substituierte Furanosen mit dem Substituenten, der ein Kohlenstoff enthält, das an die 4-Stellung der Furanose gebunden ist, beispielsweise Alkyl, Alkenyl, Alkinyl, Halogenalkyl, Acyl, Alkoxycarbonyl, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Cyano, Oximinomethyl, Alkoxyiminomethyl, Alkylaminocarbonyl und Acyl, können aus der entsprechenden 4-Formylfuranose hergestellt werden. Die Herstellung einer solchen 4-Formylfuranose wird von H. Ohrui et al., J. Med. Chem., 2000, 43, 5416 beschrieben. 4-Halogenalkylfuranosen können aus den entsprechenden 4-Hydroxymethylfuranosen hergestellt werden (beispielsweise K. Kitano et al., Tetrahedron, 1997, 53 (39), 13315). 4-Methylfuranosen können durch das Verfahren hergestellt werden, das von T. Waga et al., Biosci. Biotech. Biochem. 1993, 19 (7), 408 beschrieben wird.
2,2-Difluorfuranosederivate können aus D-Glukose oder D-Mannose hergestellt werden, wie von R. Fernandez, M. I. Mateu, R. Echarri und S. Castillon Tetrahedron, 1998, 54, 3523 beschrieben.
Die vorgeformten Nucleosidderivate sind entweder kommerziell erhältlich oder werden gemäß den oben beschriebenen Verfahren synthetisiert.
Die oben erläuterten Verfahren werden nachstehend ausführlicher beschrieben:
Die Verbindungen der Formel I, worin R¹ N₃ ist, R² und R³ Hydroxy sind und B B2 ist, können gemäß dem Reaktionsschema A hergestellt werden: Schema A
worin Ac Acetyl ist, Bz Benzoyl ist und R¹¹ wie oben definiert ist.
Die Verbindungen der Formel II können unter Verwendung eines Gemisches aus Triphenylphosphin, Iod und Pyridin iodiert werden, wie von H. Maag et al., J. Med. Chem., 1992, 35, 1440 veranschaulicht. Die Acetonidschutzgruppe kann durch die Behandlung mit einer Säure, beispielsweise Essigsäure, entfernt werden, wie von J. P. Verheyden et al., J. Org. Chem., 1970, 35 (7), 2319 beschreiben, um Nucleoside der Formel III zu erhalten. Nach dem Schutz der 2'- und 3'-Hydroxyle mit Essigsäureanhydrid und Pyridin ergaben die Beseitigung von Wasserstoffiodid mit beispielsweise Silber(I)-fluorid in Pyridin und die Entfernung der Acetylschutzgruppen mit methanolischem Ammoniak, wie von J. P. Verheyden et al., J. Org. Chem., 1974, 39 (24), 3573 beschrieben, 4',5'-Didehydronucleoside der Formel V. Die Addition von Iodazid an die Doppelbindung kann durch die Behandlung von V mit einem Gemisch aus Iodchlorid und Natriumazid in N,N-Dimethylformamid erreicht werden, wie von H. Maag et al., J. Med. Chem., 1992, 35, 1440 beschrieben, um Nucleoside der Formel VI zu erhalten. Der Schutz von Hydroxygruppen in VI kann durch die Behandlung von VI mit Benzoylchlorid in Pyridin erreicht werden, was Nucleoside der Formel VII ergab, die dann zu 5'-Benzoylnucleosiden der Formel VIII durch die Behandlung mit meta-Chlorperbenzoesäure in Dichlormethan umgewandelt werden kann, die dann mit einer Base, beispielsweise Natriummethoxid, in Methanol entschützt werden kann, um Nucleoside der Formel IX zu erhalten, wie insgesamt von H. Maag et al., J. Med. Chem., 1992, 35, 1440 be schrieben. In dem Fall, wo B2 in der Verbindung der Formel VIII Uracil oder 5'-substituiertes Uracil ist, kann nach dem Schutz der 3'-Hydroxygruppe mit Essigsäureanhydrid und Pyridin die Umwandlung zu dem entsprechenden Cytidin der Formel XII durch das Verfahren erreicht werden, das von A. D. Borthwick et al., J. Med. Chem., 1990, 33 (1), 179 beschrieben wird, wobei die Nucleoside der Formel X mit 4-Chlorphenyldichlorphosphat und Triazol behandelt werden können, um 4-Triazolylnucleoside der Formel XI zu erhalten, gefolgt von der Behandlung von Nucleosiden XI mit wässerigem Ammoniak, was 5-substituierte Cytidine der Formel XII ergab.
Die Verbindungen der Formel I, worin R¹ -C≡CH, -CH=CHCl, -CH=N-OH, -CN ist, R² und R³ Hydroxy sind und B B1 oder B2 ist, können gemäß Reaktionsschema B hergestellt werden.
Schema B
Die Verbindungen der Formel XIII können mit tert-Butyldimethylsilylchlorid (TBSCl) und Imidazol silyliert werden, um die Tri-tert-butyldimethylsilyl-Verbindungen der Formel XIV zu erhalten. Der 5'-tert-Butyldimethylsilylether kann unter Verwendung von 80%iger Essigsäure entschützt werden, um 5-Hydroxynucleoside XV zu erhalten, die dann zu den 5'-Formylnucleosiden XVI unter Verwendung eines Gemisches aus 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimidhydrochlorid (EDAC) und Dimethylsulfoxid (DMSO) in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise Benzol, oxidiert werden können. Die Alkylierung von XVI mit Formaldehyd und Natriumhydro xid ergibt die 4'-Hydroxymethyl-Verbindungen XVII, die zu den 4'-Dihydroxymethyl-Verbindungen XVIII reduziert werden können. Die selektive Schützung des Hydroxymethyls an der α-Seite des Nucleosids mit Tritylchlorid in Pyridin ergibt die 4'-Trityl-Verbindungen XIX, gefolgt vom Schutz des Hydroxymethyls an der β-Seite des Nucleosids mit tert-Butyldimethylsilylchlorid (TBSCl) und Imidazol ergibt Verbindungen der Formel XX. Die Entschützung der Tritylgruppe mit Bromcatecholboran ergibt die 4'-Hydroxymethyl-Verbindung XXI, die mit Trifluormethansulfonsäureanhydrid und Dimethylsulfoxid oxidiert werden kann, um die 4'-Formyl-Verbindung der Formel XXII zu erhalten.
Der Aldehyd der Formel XXII kann als Ausgangsmaterial für einen breiten Bereich an 4'-substituierten Nucleosiden verwendet werden, wie in Schema C angegeben:
Schema C
Die Behandlung des Aldehyds XXII mit Hydroxylaminhydrochlorid und Pyridin ergibt das 4'-Hydroxyimin der Formel XXIII. Wasser wird aus der Verbindung XXIII entfernt, um 4'-Cyano-Verbindungen der Formel XXIV zu erhalten. Die Behandlung der 4'-Formyl-Verbindungen der Formel XXII mit Chlormethylphosphoniumchlorid und Butyllithium ergibt die 4'-(2-Chlorethenyl)-Verbindungen XXVI. Die Behandlung der Verbindungen XXVI mit Butyllithium führt zur Beseitigung von Hydrogenchlorid, um die 4'-Ethinyl-Verbindungen der Formel XXVII zu erhalten.
Die Entfernung der Silylschutzgruppen aus den Tri-tert-butyldimethylsilylchlorid-geschützten Verbindungen XXIII, XXVII und XXIV können mit einer Fluoridquelle, wie Ammoniumflourid in Methanol oder Tetrabutylammoniumfluorid, absorbiert auf Siliciumdioxid, in Tetrahydrofuran durchgeführt werden, um die jeweiligen 4'-substituierten Nucleoside XXV, XXVIII und XXIX zu erhalten.
Geeignet geschützte 4'-substituierte Uridine (beispielsweise XXIV und XXVII) können zu den entsprechenden 4'-substituierten Cytidinen gemäß dem Reaktionsschema D umgewandelt werden.
Schema D
Die Tri-tert-butyldimethylsilyl-(TBS-)-geschützten Uridine der Formel XXX können mit Triisopropylbenzolsulfonylchlorid, Triethylamin und Dimethylaminopyridin behandelt werden, um die 4-Triazolylnucleoside XXXI zu erhalten. Die 4-Triazolyl-Verbindungen XXXI können zu den 4-Amino-Verbindungen XXXII mit wässerigem Ammoniak umgewandelt werden. Die Entschützung der Silylgruppen mit einem Gemisch aus Methanol und Salzsäure in Dioxan ergibt die Cytidinderivate XXXIII.
Die Verbindungen der Formel I, worin R¹ Alkoxy ist, R² und R³ Wasserstoff sind und B ein 9-Purinylrest B1 oder ein 1-Pyrimidylrest B2 ist, kann gemäß den Verfahren hergestellt werden, die von J. P. Verheyden et al. US-Patent Nr. 3 910 885 beschrieben werden.
Die Verbindungen der Formel I, worin R¹ Trifluormethyl, Methyl oder Ethinyl ist, können, wie in Reaktionsschema E angegeben, hergestellt werden: Schema E
beispielsweise durch Verknüpfung des entsprechenden geschützten 4'-substituierten Ribofuranosids XXXIV mit einer silylierten Base in Gegenwart einer Lewis-Säure, beispielsweise Trimethylsilyltrifluormethansulfonat (TMSOTf) oder Zinntetrachlorid, in einem geeigneten Lösungsmittel, beispielsweise Acetonitril oder 1,2-Dichlorethan, um die Verbindung der Formel XXXV zu erhalten. Die Schutzgruppen können durch die Behandlung von XXXV mit einer Base, beispielsweise Natriummethoxid, in verträglichem Lösungsmittel, beispielsweise Methanol, entfernt werden, um die Verbindungen der Formel XXXVI zu erhalten.
Die Verfahren zur Monophosphorylierung von organischen Verbindungen, einschließlich Nucleosiden, ist von L A Slotin, Synthesis, 1977, 737 besprochen worden. Kürzlich sind andere Nucleosidphosphorylierungsverfahren beschrieben worden: M Uchiyama et al J. Org. Chem., 1993, 58, 373; R Caputo et al., Synlett., 1997, 739 und M Taktakishvili und V Nair Tet. Lett. 2000, 41, 7173. Andere Verfahren zur Monophosphorylierung, die für Nucleoside nützlich sein können, werden von C E McKenna und J Schmidhauser, J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1979,739 und J K Stowell und T S Widlanski Tet. Lett., 1995, 1825 beschrieben. Die Synthese von Di- und Triphosphatderivaten wird in K H Scheit, Nudeotide Analogues, 1980, Wiley Interscience und von K Burgess und D Cook Chemical Reviews, 2000, 100, 2047 besprochen.
Die folgenden Beispiele stellen Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel I dar:
Beispiel 1 Herstellung von Verbindung 1 gemäß dem Verfahren der Schemen 1 und 1a Schema 1
1.1. Verbindung (i)
Die Verbindung (i) wurde von Lancaster (Kat. Nr.: 206-647-7, CAS 362-43-6) gekauft.
1.2. Verbindung (ii)
Triphenylphosphin (1,57 g, 6,0 mmol) und Iod (1,52 g, 6,0 mmol) wurden zu der Verbindung (i) (1,14 g, 4,0 mmol) in Dioxan (20 ml), enthaltend Pyridin (0,65 mmol, 8,0 mmol), zugegeben. Das Gemisch wurde über Nacht gerührt und mit Methanol (1 ml) gequencht. Das Lösungsmittel wurde in Vakuum eingedampft. Der Rest wurde in Ethylacetat (200 ml) gelöst, mit Wasser (100 ml), 10% wässerigem Natriumthiosulfat (100 ml), Salzlösung (100 ml) gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde durch Flashchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 1 : 1 Ethylacetat/Benzin gereinigt, wodurch die Verbindung (ii) als farbloses Öl erhalten wurde, das sich langsam zu einem farblosen wachsartigen Feststoff (1,5 g) verfestigte, Massenspektrum (CI) m/z 395 [M + H]⁺.
1.3. Verbindung (iii)
Die Verbindung (iii) wurde aus Verbindung (ii) hergestellt, wie von J. P. Verheyden et al., J. Org. Chem., 1970, 35 (7), 2319 beschrieben.
1.4. Verbindung (iv)
Die Verbindung (iv) wurde aus Verbindung (iii) hergestellt, wie von J. P. Verheyden et al., J. Org. Chem., 1974, 39 (24), 3573 beschrieben.
1.5. Verbindung (v)
Die Verbindung (v) wurde aus Verbindung (iv) hergestellt, wie von H. Maag et al., J. Med. Chem., 1992, 35, 1440–1451 beschrieben.
1.6. Verbindung (vi)
Zu einer Lösung aus Verbindung (v) (482 mg, 0,80 mmol) in Dichlormethan, gesättigt mit Wasser (10 ml), wurde 55%ige Metachlorperbenzoesäure (1,0 g, 4,95 mmol) zugegeben. Das Gemisch wurde für 2 h gerührt. Zusätzliche Metachlorperbenzoesäure (0,50 g) wurde zugegeben und das Gemisch wurde für weitere 3 h gerührt. Ethylacetat (100 ml) wurde zugegeben und die Lösung mit 10%iger Natriummetabisulfitlösung (50 ml) gewaschen, gefolgt von gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (50 ml). Das Ethylacetat wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde der Flashchromatographie unter Elution mit 1 : 1 Ethylacetat/Benzin unterzogen, wodurch die Verbindung (vi) als farbloses Glas (200 mg) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 535 [M + H + CH₃CN]⁺.
1.7. Verbindung (vii)
Zu einer Lösung aus Verbindung (vi) (170 mg, 0,35 mmol) in Methanol (2 ml) wurde eine Lösung aus Natriummethoxid in Methanol (0,5 M, 0,5 ml) zugegeben. Die Lösung wurde für 2 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde mit Ionenaustauschharz neutralisiert (Amberlite IRC 50(H⁺), Aldrich, Kar. Nr. 42, 883–3) und für 10 min gerührt. Das Harz wurde durch Filtration entfernt. Das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft und der Rest wurde der Flashchromatographie unter Elution mit 1 : 1 Ethylaceat/Aceton unterzogen, wodurch ein farbloses Öl erhalten wurde. Die Zerreibung mit Ethylacetat ergab die Verbindung (vii) als farblosen Feststoff (35 mg); Massenspektrum (CI) m/z 286 [M + H]⁺.
Die Umwandlung des Azidouridinderivats zu dem entsprechenden Azidocytidinderivat (Verbindung 1) und ihrem Hydrochloridsalz wird in Schema 1a angegeben.
Schema 1a
1.8. Verbindung (viii)
Zu einer Lösung von Verbindung (vi) (460 mg, 0,93 mmol) in Pyridin (3 ml) wurde Essigsäureanhydrid (1 ml) zugegeben und das Gemisch wurde für 4 h gerührt. Ethylacetat (100 ml) wurde zugegeben und das Gemisch wurde mit 2 N HCl (50 ml) gewaschen, gefolgt von gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (50 ml). Die Lösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde der Flashchromatographie unter Elution mit 1 : 1 Ethylacetat/Benzin unterzogen, wodurch die Verbindung (viii) als farbloser Gummi (350 mg) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 536 [M + H]⁺.
1.9. Verbindung 1
Zu einer Lösung aus Verbindung (viii) (1,5 g, 2,8 mmol) in Pyridin (20 ml) wurde 1,2,4-Triazol (0,97 g, 14 mmol) zugegeben. 4-Chlorphenyldichlorphosphat (1,36 ml, 8,4 mmol) wurde dann tropfenweise unter Rühren zugegeben. Das Gemisch wurde für 16 h gerührt. Ethylacetat (300 ml) wurde zugegeben und das Gemisch wurde mit gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung (200 ml) gewaschen. Die Lösung wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde der Flashchromatographie unter Elution mit 2 : 1 Ethylacetat/Benzin unterzogen, wodurch ein gelber Schaum (850 mg) erhalten wurde. Der Schaum wurde mit Dioxan (8 ml) behandelt, gefolgt von wässeriger Ammoniaklösung (16 ml) und für 16 h gerührt. Das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft und der Rest wurde der Flashchromatographie unter Elution mit 90 : 18 : 3 : 2 Dichlormethan/Methanol/Essigsäure/Wasser unterzogen, wodurch die Verbindung 1 als hellgelbbrauner Schaum (350 mg) erhalten wurde; Massenspektrum (FAB) m/z 285 [M + H]⁺.
1.10. Hydrochlorid von Verbindung 1
Die Verbindung 1 (0,40 g) wurde in Methanol gelöst und mit einer Lösung aus Hydrogenchlorid in Ethylacetat behandelt. Das Produkt wurde als mikrokristalliner Feststoff abgetrennt und wurde durch Filtration gesammelt und im Vakuum getrocknet, wodurch das Hydrochloridsalz der Verbindung 1 (0,22 g) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 285 [M + H]⁺.
Beispiel 2 Herstellung der Verbindung 2 gemäß dem Verfahren von Schema 2
2.1. Verbindung (ix)
Die Verbindung (ix) wurde aus Verbindung (xiv) hergestellt, siehe Beispiel 3, wie von M. Nomura et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 2901–2908 beschrieben.
2.2. Verbindung (x)
Ein Gemisch aus (ix) (600 mg, 0,98 mmol) und Hydroxylaminhydrochlorid (140 mg, 1,95 mmol) in Pyridin wurde bei Raumtemperatur für 2 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft und der Rest wurde zwischen Ethylacetat (30 ml) und Wasser (30 ml) geteilt. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (x) als weißer Schaum (615 mg) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 630 [M + H]⁺.
2.3. Verbindung (xi)
Ein Gemisch aus Verbindung (x) (550 mg, 0,87 mmol) und Natriumacetat (720 mg, 5,25 mmol) wurde in Essigsäureanhydrid suspendiert, dann bei 130°C für 3 h erhitzt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft und der Rest zwischen Ethylacetat (30 ml) und gesättigtem Natriumbicarbonat (30 ml) geteilt. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde durch Flashsäulenchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 1 : 2 Diethylether/Hexan gereinigt. Die Produkt-enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (xi) als farbloser Feststoff (285 mg) erhalten wurde. Massenspektrum (ESI) m/z 612 [M + H]⁺.
2.4. Verbindung (xii)
4-Chlorphenyl-dichlorphosphat (160 μl, 0,98 mmol) wurde tropfenweise zu einer Lösung aus Verbindung (xi) (200 mg, 0,33 mmol) und 1,2,4-Triazol (115 mg, 1,63 mmol) in wasserfreiem Pyridin (5 ml) zugegeben, dann bei Raumtemperatur für 16 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft und der Rest zwischen Ethylacetat (30 ml) und 2 M Salzsäure (30 ml) geteilt. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt, mit gesättigtem Natriumbicarbonat (30 ml) gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat wurde im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde durch Flashsäulenchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 1 : 1 Diethylether/Hexan gereinigt, gefolgt von 2 : 1 Diethylether/Hexan. Die Produktenthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wodurch (xii) als cremartiger Feststoff (65 mg) erhalten wurde. Massenspektrum (ESI) m/z 663 [M + H]⁺.
2.5. Verbindung (xiii)
Eine Lösung aus Verbindung (xii) (60 mg, 0,09 mmol) und wässerigem Ammoniak (2 ml) in Acetonitril wurde bei Raumtemperatur für 16 h gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde im Vakuum eingedampft und der Rest zwischen Ethylacetat (10 ml) und 2 M Salzsäure (10 ml) geteilt. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt und über Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (xiii) als hellgelber Feststoff (45 mg) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 611 [M + H]⁺.
2.6. Verbindung 2
Tetrabutylammoniumfluorid (1 M Lösung in THF, 0,3 ml) wurde zu einer gerührten Lösung aus Verbindung (xiii) (40 mg, 0,06 mmol) in trockenem Tetrahydrofuran (10 ml) zugegeben und bei Raumtemperatur für 2 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfung im Vakuum entfernt. Der Rest wurde mit Pyridin (1 ml) behandelt, gefolgt von Essigsäureanhydrid (0,3 ml) und für 4 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen im Vakuum entfernt. Der Rest wurde mit Ethylacetat (50 ml) behandelt und mit verdünnter Salzsäure (30 ml) gewaschen, gefolgt von einer 5%igen wässerigen Natriumbicarbonatlösung. Das Ethylacetat wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde der Flashsäulenchromatographie unter Elution mit Ethylacetat unterzogen, wodurch ein Öl erhalten wurde. Das Öl wurde in Methanol (1 ml) gelöst und mit Natriummethoxid (0,5 M Lösung in Methanol, 0,05 ml) behandelt und bei Raumtemperatur für 3 h stehengelassen. Das Gemisch wurde mit Ionenaustauschharz (Amberlite IRC50 (H⁺)) neutralisiert. Das Harz wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde in Wasser gelöst und gefriergetrocknet, wodurch die Verbindung 2 als amorpher Feststoff (7 mg) erhalten wurde.
2.7. Das entsprechende 4'-Cyanouridin kann durch die Entschützung der Verbindung (xi) hergestellt werden.
Die Entschützung kann folgendermaßen durchgeführt werden:
Die Verbindung (xi) (50 mg, 82 μmol) wurde in Tetrahydrofuran gelöst, mit Tetrabutylammoniumfluorid auf Siliciumdioxid behandelt, dann für 16 h bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde durch Hyflo Super Cel (Fluka, Kat. Nr. 56678) filtriert, im Vakuum eingedampft, dann durch Flashsäulenchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit Dichlormethan/Methanol/Essigsäure/Wasser (240 : 24 : 3 : 2), gefolgt von Dichlormethan/Methanol/Essigsäure/Wasser (90 : 18 : 3 : 2) gereinigt. Die Produkt-enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und eingedampft. Der Rest wurde in Methanol/Wasser (5 : 1) gelöst, mit Duolite C225 Ionenaustauschharz (H⁺-Form, BDH, Kat. Nr. 56678) behandelt und für 15 min gerührt. Das Harz wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum auf geringes Volumen eingedampft. Das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und im Vakuum getrocknet, wodurch 4'-Cyanouridin als weißer kristalliner Feststoff (15 mg) erhalten wurde; Massenspektrum m/z (ESI) 270 [M + H]⁺.
Beispiel 3 Herstellung von Verbindung 3 gemäß dem Verfahren von Schema 3
3.1. Verbindung (xiv)
Diese Verbindung wurde hergestellt, wie von M. Nomura et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 2901–2908 beschrieben.
3.2. Verbindung (xv)
Tritylchlorid (3,2 g; 11,5 mmol) wurde zu einer Lösung aus Verbindung (xiv) (3,0 g, 6,0 mmol) in Pyridin (20 ml) zugegeben und bei Raumtemperatur für 16 h gerührt. Das Lösungsmittel wurde im Vakuum eingedampft und der Rest zwischen Ethylacetat (50 ml) und 2 M Salzsäure (50 ml) getrennt. Die Ethylacetatschicht wurde abgetrennt, mit Salzlösung (50 ml) gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Das Rohmaterial wurde durch Flashchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 2 : 1 Diethylether/Hexan gereinigt. Die Produkt-enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (xv) als weißer Feststoff (2,75 g) erhalten wurde; Massenspektrum (ESI) m/z 767 [M + H]⁺.
3.3. Verbindung (xvi)
tert-Butyldimethylsilylchlorid (0,67 g, 4,4 mmol) und Imidazol (0,91 g, 13,3 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung aus Verbindung (xv) (2,75 g, 3,7 mmol) in Dimethylformamid (20 ml) zugegeben. Die Reaktion wurde auf 45°C für 16 h erhitzt. Zusätzliches tert-Butyldimethylsilylchlorid (0,67 g, 4,4 mmol) und Imidazol (0,91 g, 13,3 mmol) wurden zugegeben und das Gemisch wurde auf 60°C für 4 h erhitzt. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfung im Vakuum entfernt und der Rest wurde zwischen Ethylacetat und Salzlösung geteilt. Das Ethylacetat wurde abgetrennt und mit mehr Salzlösung gewaschen und über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der restliche farblose Schaum wurde durch Flashsäulenchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 1 : 2 Diethylether/Hexan gereinigt. Die Produkt-enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (xvi) als weißer Feststoff (3,1 g) erhalten wurde.
3.4. Verbindung (xvii)
Bromcatecholboran (355 mg, 1,77 mmol) wurde zu einer gerührten Lösung aus Verbindung (xvi) (1,5 g, 1,77 mmol) in trockenem Dichlormethan (50 ml) unter Stickstoffatmosphäre bei 0°C zugegeben. Die Reaktion wurde für 15 min gerührt, mit Dichlormethan (50 ml) verdünnt, dann mit gesättigtem Natriumbicarbonat (100 ml) und Salzlösung (100 ml) gewaschen. Das Dichlormethan wurde über wasserfreiem Magnesiumsulfat getrocknet. Das Magnesiumsulfat wurde durch Filtration entfernt und das Filtrat im Vakuum eingedampft. Der Rest wurde durch Flashsäulenchromatographie auf Kieselgel unter Elution mit 1 : 1 Diethylether/Hexan gereinigt. Die Produkt-enthaltenden Fraktionen wurden vereinigt und im Vakuum eingedampft, wodurch die Verbindung (xvii) als weißer Feststoff (930 mg) erhalten wurde.
3.5. Verbindung 3
Wurde aus Verbindung (xvii) hergestellt, wie von M. Nomura et al., J. Med. Chem., 1999, 42, 2901–2908 beschrieben.
Weitere Verbindungen können gemäß den Verfahren, die in der Technik beschrieben sind, hergestellt werden, beispielsweise:
Zusätzliche Verbindungen der Formel I können analog zu den Verfahren, die in der nachstehend aufgelisteten Technik beschrieben sind, hergestellt werden:
Das folgende Assayverfahren zeigt die Fähigkeit der Verbindungen der Formel I zur Inhibierung der HCV-RNA-Replikation und deshalb ihre mögliche Nützlichkeit zur Behandlung von HCV-Infektionen.
Renilla-luciferase-Assay
Dieser Assay basiert auf der Idee der Verwendung eines Reporters als einfache Ablesung für das intrazelluläre HCV-Replikon-RNA-Niveau. Für diesen Zweck wurde das Renilla-luciferase-Gen in den ersten offenen Ableserahmen eines Replikonkonstrukts NK5.1 eingeführt (Krieger et al., Virol. 75: 4614), direkt nach der IRES-Element-Sequenz (Eintrittsstelle für Ribosom innerhalb der mRNA), und mit dem Neomycinphosphotransferasegen (NPTII-Gen) über ein selbstspaltendes Peptid 2A aus dem Maul- und Klauenseuche-Virus fusioniert (Ryan & Drew, EMBO Vol 13: 928–933). Nach der in vitro-Transkription wurde die RNA zu menschlichen Hepatom-Huh7-Zellen elektroporiert, und G418-resistente Kolonien wurden isoliert und ausgebreitet. Es wurde gezeigt, daß die stabil ausgewählte Zellinie 2209–23 replikative HCV-Subgenom-RNA enthielt und die Aktivität von Renilla luciferase, die durch das Replikon ausgedrückt wird, ihr RNA-Niveau in den Zellen wiederspiegelt.
Für das Assayverfahren wurden Renilla-Luciferase-HCV-Replikonzellen (2209–23), die in Dulbecco's MEM (GibcoBRL Kat Nr. 31966-021) mit 5% fetalem Kalbsserum (FKS, GibcoBRL Kat. Nr. 10106-169) kultiviert wurden, auf einer 96-Lochplatte bei 5000 Zellen pro Loch plattiert und über Nacht inkubiert. 24 Stunden später wurden unterschiedliche Verdünnungen von chemischen Verbindungen in dem Wachstumsmedium zu den Zellen zugegeben, die dann weiter bei 37°C für drei Tage inkubiert wurden. Der Assay wurde in zweifachen Platten durchgeführt, eine in Deckweiß und eine in transparent, um die Aktivität und Zytotoxizität einer chemischen Verbindung parallel zu messen, um sicherzustellen, daß die gesehene Aktivität nicht aufgrund der Reduktion der Zellproliferation erfolgt.
Am Ende der Inkubationszeit wurden die Zellen in weißen Platten geerntet und die Luciferaseaktivität wurde unter Verwendung des Dual-Luciferase-Reporterassaysystems gemessen (Promega Kat Nr. E1960). Alle Reagenzien, die in dem folgenden Absatz beschrieben werden, wurden in den Kit des Herstellers einbezogen, und man folgte den Anweisungen des Herstellers zur Herstellung der Reagenzien. Kurz gesagt, die Zellen wurden zweimal mit 200 μl Phosphat-gepufferter Kochsalzlösung (pH 7,0) (PBS) pro Loch gewaschen und mit 25 μl von 1 × passiven Lysepuffer vor der Inkubation bei Raumtemperatur für 20 min lysiert. Einhundert Mikroliter des LAR-II-Reagens wurden zu jedem Loch zugegeben. Die Platte wurde dann in den LB-96V-Mikroplattenluminometer (MicroLumatPlus, Berthold) gegeben, und 100 μl Stop & Glo-Reagens wurden in jedes Loch durch die Maschine injiziert und das Signal unter Verwendung eines 2-Sekunden-Verzögerungs-10-Sekunden-Meßprogramms gemessen. IC50, die Konzentration des Medikaments, das zur Verringerung des Replikonniveaus um 50% in bezug auf den unbehandelten Zellkontrollwert erforderlich ist, kann aus dem Diagramm der prozentualen Verringerung der Luciferaseaktivität gg. die Medikamentenkonzentration berechnet werden. Die Ergebnisse werden nachstehend zusammengestellt.
Für den Zytotoxizitätsassay wurde das WST-1-Reagens von Roche Diagnostic (Kat Nr. 1644807) verwendet. Zehn Mikroliter des WST-1-Reagens wurden zu jedem Loch zugegeben, einschließlich den Löchern, die die Medien allein als Blindwert enthalten. Die Zellen wurden für 1 bis 1,5 Stunden bei 37°C inkubiert, und der OD-Wert wurde durch einen 96-Lochplatten-Leser bei 450 nm gemessen (Referenzfilter bei 650 nm). Erneut kann CC50, die Konzentration des Medikaments, das zur Verringerung der Zellproliferation um 50% in bezug auf den unbehandelten Zellkontrollwert erforderlich ist, aus dem Diagramm der prozentualen Verringerung des WST-1-Werts gg. die Medikamentenkonzentration berechnet werden.
Wie in der obigen Tabelle gezeigt, können die Verbindungen der Formel I möglicherweise als antivirale Medikamente zur Behandlung von HCV-Infektionen bei Menschen wirksam sein.
Die aktive Verbindung oder ihr Salz kann in Kombination mit einem anderen antiviralen Mittel, wie Antihepatitismittel, einschließlich denen von Formel I, verabreicht werden. Wenn die aktive Verbindung oder ihr Salz in Kombination mit einem anderen antiviralen Mittel verabreicht wird, kann die Aktivität über der Elternverbindung erhöht werden. Dies kann leicht durch Herstellen der Verbindung und Testen ihrer Anti-HCV-Aktivität gemäß dem hierin beschriebenen Verfahren bewertet werden.
Die Verabreichung der aktiven Verbindung kann von kontinuierlich (intravenöse Infusion) bis mehreren oralen Verabreichungen pro Tag (beispielsweise Q. I. D) reichen und kann orale, topische, parenterale, intramuskuläre, intravenöse, subkutane, transdermale (die ein Durchdringungsverstärkungsmittel umfassen kann), bukkale und Zäpfchenverabreichung unter anderen Verabreichungsweisen umfassen.
Die 4'-substituierten Nucleosidderivate sowie ihre pharmazeutisch nutzbaren Salze können als Medikamente in Form von irgendeiner pharmazeutischen Formulierung verwendet werden. Die pharmazeutische Formulierung kann enteral, entweder oral, beispielsweise in Form von Tabletten, Tabletten in Hüllenform, Dragees, harten und weichen Gelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen, Sirups oder Suspensionen, oder rektal, beispielsweise in Form von Zäpfchen. verabreicht werden. Sie können ebenso parenteral (intramuskulär, intravenös, subkutan oder intrasternale Injektions- oder Infusionstechniken), beispielsweise in Form von Injektionslösungen, nasal, beispielsweise in Form von Nasensprays oder Inhalationsspray, topisch und so weiter verabreicht werden.
Zur Herstellung von pharmazeutischen Präparaten können die 4'-substituierten Nucleosidderivate sowie ihre pharmazeutisch nutzbaren Salze mit einem therapeutisch inerten, anorganischen oder organischen Trägerstoff zur Herstellung von Tabletten, Tabletten in Hüllenform, Dragees, harten und weichen Gelatinekapseln, Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen formuliert werden.
Die Verbindungen der Formel I können in Beimischung mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger formuliert werden. Beispielsweise können die erfindungsgemäßen Verbindungen oral als pharmakologisch akzeptable Salze verabreicht werden. Da die erfindungsgemäßen Verbindungen meistens wasserlöslich sind, können sie intravenös in physiologischer Kochsalzlösung verabreicht werden (beispielsweise gepuffert auf einen pH von etwa 7.2 bis 7,5). Konventionelle Puffer, wie Phosphate, Bicarbonate oder Zitrate, können für diesen Zweck verwendet werden. Natürlich kann ein Fachmann die Formulierungen innerhalb der Lehren der Beschreibung modifizieren, um zahlreiche Formulierungen für eine spezielle Verabreichungsweise bereitzustellen, ohne die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen instabil zu machen oder ihre therapeutische Wirkung zu gefährden. Insbesondere kann die Modifikation der vorliegenden Verbindungen, sie beispielsweise in Wasser oder anderen Vehikeln löslicher zu machen, leicht durch geringe Modifikationen erreicht werden (Salzformulierung, Veresterung usw.), die dem Fachmann allgemein bekannt sind. Es ist dem Fachmann ebenso allgemein bekannt, die Verabreichungsweise und das Dosierungsregime einer speziellen Verbindung zu modifizieren, um die Pharmakokinetiken der vorliegenden Verbindungen hinsichtlich der maximalen vorteilhaften Wirkung bei Patienten zu managen.
Für parenterale Formulierungen wird der Träger normalerweise steriles Wasser oder wässerige Natriumchloridlösung umfassen, obwohl andere Bestandteile, einschließlich denen, die die Dispersion unterstützen, einbezogen werden können. Natürlich müssen, wo steriles Wasser verwendet und steril gehalten werden soll, die Zusammensetzungen und Träger ebenso sterilisiert werden. Injizierbare Suspensionen können ebenso hergestellt werden, wobei in dem Fall geeignete flüssige Träger, Suspendiermittel und dergleichen eingesetzt werden können.
Geeignete Trägerstoffe für Tabletten, Tabletten in Hüllenform, Dragees und harte Gelatinekapseln sind beispielsweise Lactose, Maisstärke und Derivate davon, Talk und Stearinsäure oder ihre Salze.
Wenn gewünscht, können die Tabletten oder Kapseln durch Standardtechniken darmlöslich oder nachhaltig wirkend sein.
Geeignete Trägerstoffe für weiche Gelatinekapseln sind beispielsweise Pflanzenöle. Wachse, Fette, halbfeste und flüssige Polyole.
Geeignete Trägerstoffe für Injektionslösungen sind beispielsweise Wasser, Kochsalzlösung, Alkohole, Polyole, Glycerine oder Pflanzenöle.
Geeignete Trägerstoffe für Zäpfchen sind beispielsweise natürliche und gehärtete Öle, Wachse, Fette, halbfeste oder flüssige Polyole.
Geeignete Trägerstoffe für Lösungen und Sirups zur enteralen Verwendung sind beispielsweise Wasser, Polyole, Saccharose, Invertzucker und Glukose.
Die pharmazeutischen Präparate der vorliegenden Erfindung können ebenso als nachhaltig wirkende Formulierungen oder andere geeignete Formulierungen bereitgestellt werden.
Die pharmazeutischen Präparate können ebenso Konservierungsmittel, Löslichmacher, Stabilisatoren, Benetzungsmittel, Emulgatoren, Süßungsmittel, Farbmittel, Aromastoffe, Salze zur Einstellung des osmotischen Drucks, Puffer, Maskierungsmittel oder Antioxidationsmittel enthalten.
Die pharmazeutischen Präparate können ebenso andere therapeutisch wirksame Mittel, die in der Technik bekannt sind, enthalten.
Die Dosierung kann innerhalb breiter Grenzen variieren und wird natürlich auf die einzelnen Erfordernisse in jedem speziellen Fall eingestellt. Zur oralen Verabreichung sollte eine tägliche Dosis zwischen 0.01 und 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag in der Einzeltherapie und/oder in der Kombinationstherapie geeignet sein. Eine bevorzugte tägliche Dosierung beträgt zwischen 0,1 und 500 mg/kg Körpergewicht, stärker bevorzugt 0,1 und 100 mg/kg Körpergewicht und am stärksten bevorzugt 1,0 und 100 mg/kg Körpergewicht pro Tag. Ein typisches Präparat wird 5% bis 95% Wirkstoff (Gewicht/Gewicht) enthalten. Die tägliche Dosis kann als eine Einzeldosis oder in geteilten Dosierungen, typischerweise zwischen 1 und 5 Dosierungen pro Tag, verabreicht werden.
Die Nucleosidderivate oder die Medikamente davon können in der Einzeltherapie oder der Kombinationsthe rapie verwendet werden, d. h. die Behandlung kann zusammen mit der Verabreichung von einer oder mehreren zusätzlichen therapeutisch wirksamen Substanz(en), beispielsweise einem Immunsystemmodulator, wie ein Interferon, Interleukin, Tumor-Nekrose-Faktor oder koloniestimulierender Faktor; ein antivirales Mittel oder ein entzündungshemmendes Mittel erfolgen. Wenn die Behandlung die Kombinationstherapie ist, kann diese Verabreichung in bezug auf die der 4'-substituierten Nucleosidderivate gleichzeitig oder aufeinanderfolgend erfolgen. Die gleichzeitige Verabreichung, wie hierin verwendet, umfaßt daher die gleichzeitige Verabreichung der Mittel oder zu unterschiedlichen Zeiten.
Es ist selbstverständlich, daß eine Bezugnahme auf eine Behandlung hierin die Prophylaxe sowie die Behandlung von bestehenden Zuständen umfasst, und daß die Behandlung von Tieren die Behandlung von Menschen sowie anderen Säugern umfaßt. Außerdem umfaßt die Behandlung einer Hepatitis-C-Virus-Infektion (HCV-Infektion), wie hierin verwendet, ebenso die Behandlung oder Prophylaxe einer Krankheit oder eines Zustandes, der mit der Hepatitis-C-Virus-Infektion (HCV-Infektion) in Verbindung steht oder dadurch hervorgerufen wird, oder der klinischen Symptome davon.
In der vorliegenden Beschreibung bedeutet „umfaßt" „umfaßt oder bestehend aus" und „umfassend" bedeutet „einschließlich oder bestehend aus".
Die in der vorhergehenden Beschreibung offenbarten Merkmale oder die folgenden Ansprüche oder die beiliegenden Zeichnungen, ausgedrückt in ihren speziellen Formen oder hinsichtlich eines Mittels zur Durchführung der offenbarten Funktion, oder ein Verfahren oder Prozeß zur Erreichung des offenbarten Ergebnisses können, wenn geeignet, separat oder in irgendeiner Kombination dieser Merkmale zur Realisierung der Erfindung in ihren diversen Formen genutzt werden.

Claims

Verwendung von Verbindungen der Formel I
worin R Wasserstoff oder -[P(O)(OH)-O]_nH ist und n 1, 2 oder 3 ist; R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxycarbonyl, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Alkoxy, Cyano, Azido, Hydroxyiminomethyl, Alkoxyiminomethyl, Halogen, Alkylcarbonylamino, Alkylaminocarbonyl, Azidoalkyl, Aminomethyl, Alkylaminomethyl, Dialkylaminomethyl oder Heterocyclyl ist; R² Wasserstoff, Hydroxy, Amino, C_1-12-Alkyl, Hydroxyalkyl, Alkoxy, Halogen, Cyano oder Azido ist; R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder R³ und R⁴ zusammen =CH₂ oder =N-OH darstellen, oder R³ und R⁴ beide Fluor darstellen; B einen 9-Purinylrest B1 der Formel
darstellt, worin R⁵ Wasserstoff, Hydroxy, C_1-12-Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, NHR⁸, Halogen oder SH ist; R⁶ Hydroxy, NHR⁸, NHOR⁹, NHNR⁸, -NHC(O)OR^9' oder SH ist; R⁷ Wasserstoff, Hydroxy, C_1-12-Alkyl, Alkoxy, Alkylthio, NHR⁸, Halogen, SH oder Cyano ist; R⁸ Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Hydroxyalkyl, Arylcarbonyl oder Alkylcarbonyl ist; R⁹ Wasserstoff oder C_1-12-Alkyl ist; R^9' C_1-12-Alkyl ist; oder B einen 1-Pyrimidylrest B2 der Formel
darstellt, worin Z O oder S ist; R¹⁰ Hydroxy, NHR⁸, NHOR⁹, NHNR⁸, -NNC(O)OR^9' oder SH ist; R¹¹ Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Hydroxy, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Halogenalkyl oder Halogen ist; R⁸, R⁹ und R^9' wie oben definiert sind; und von pharmazeutisch akzeptablen Salzen davon; zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krankheiten, die durch den Hepatitis C-Virus (HCV) hervorgerufen werden.
Verwendung nach Anspruch 1 von Verbindungen der Formel I
worin R Wasserstoff ist; R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxy, Hydroxymethyl, Cyano, Azido, Alkoxyiminomethyl, Alkylcarbonylamino, Alkylaminomethyl oder Dialkylaminomethyl ist; R² Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy oder Halogen ist; R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder R³ und R⁴ Fluor darstellen; und B einen 9-Purinylrest B1 oder einen 1-Pyrimidylrest B2 wie in Anspruch 1 definiert, darstellt.
Verwendung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2 von Verbindungen der Formel
worin R¹ C_1-12-Alkyl, C_2-7-Alkenyl, C_2-7-Alkinyl, Halogenalkyl, Alkylcarbonyl, Alkoxy, Hydroxymethyl, Cyano, Azido, Alkoxyiminomethyl, Alkylcarbonylamino, Alkylaminomethyl oder Dialkylaminomethyl ist; R² Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy oder Halogen ist; R³ und R⁴ Wasserstoff, Hydroxy, Alkoxy, Halogen oder Hydroxyalkyl sind, vorausgesetzt, daß mindestens einer von R³ und R⁴ Wasserstoff ist; oder R³ und R⁴ Fluor darstellen; R¹¹ Wasserstoff, C_1-12-Alkyl, Hydroxy, Hydroxyalkyl, Alkoxyalkyl, Halogenalkyl oder Halogen ist; und pharmazeutisch akzeptablen Salzen hiervon.
Verwendung von Verbindungen nach Anspruch 3, wobei die Verbindungen 4'-C-Ethinylcytidinhydrochlorid (1 : 1); 4'-C-Ethoxycytidin; 4'-C-Acetylcytidin sind.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 3, wobei die Verbindung 4'-C-Azidocytidin ist.
Verwendung einer pharmazeutischen Zusammensetzung auf der Basis einer pharmazeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der Formel I oder I-a oder eines pharmazeutisch akzeptablen Salzes davon, wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von Krankheiten, die durch den Hepatitis C-Virus (HCV) hervorgerufen werden.