DE60106409T2

DE60106409T2 - 3-aminopyrazole als inhibitoren von cyclinabhängigen kinasen

Info

Publication number: DE60106409T2
Application number: DE60106409T
Authority: DE
Inventors: E. Mark SALVATI; David Spencer KIMBALL
Original assignee: Bristol Myers Squibb Co
Current assignee: Bristol Myers Squibb Co
Priority date: 2000-02-07
Filing date: 2001-01-23
Publication date: 2006-02-02
Anticipated expiration: 2021-01-24
Also published as: JP2003522174A; EP1268472B1; CA2399274A1; ATE279410T1; US6482842B2; ES2228905T3; AU2001229727B2; AU2972701A; DE60106409D1; WO2001057034A1; PT1268472E; US20030018058A1; DK1268472T3; US6610724B2; EP1268472A1; US20010047019A1

Description

Die vorliegende Erfindung richtet sich auf Verbindungen der Formel
und zwar
N,N-[(Z)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin;
N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid;
N-(Z)-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid; und
N,N-[(E)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin und pharmazeutisch verträgliche Salze davon.
WO9614843 offenbart 3-Aminopyrazole als Kinase-Inhibitoren zur Behandlung von Krebs.
Die Verbindungen der Formel I sind Proteinkinase-Inhibitoren und sie sind zur Behandlung von proliferativen Krankheiten, zum Beispiel Krebs, Entzündungen und Arthritis nützlich. Sie können auch zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit und von kardiovaskulären Krankheiten nützlich sein.
Die vorliegende Erfindung stellt Verbindungen der Formel I, Arzneimittel, die diese Verbindungen verwenden, und Verfahren zur Verwendung dieser Verbindungen bereit.
Geeignete Beispiele für Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen mit anorganischen oder organischen Säuren sind Hydrochloride, Hydrobromide, Sulfate, Phosphate. Salze, die für pharmazeutische Verwendungen ungeeignet sind, aber, zum Beispiel, zum Isolieren oder Reinigen der freien Verbindungen I oder deren pharmazeutisch verträglichen Salze angewendet werden können, sind auch eingeschlossen.
Alle Stereoisomere der erfindungsgemäßen Verbindungen sind entweder im Gemisch oder in reiner oder im wesentlichen reiner Form eingeschlossen. Die Definition der erfindungsgemäßen Verbindungen umfasst alle möglichen Stereoisomere und die Gemische davon. Sie umfasst ganz besonders die racemischen Formen und die isolierten optischen Isomere mit der spezifischen Aktivität. Die racemischen Formen können durch physikalische Verfahren, wie zum Beispiel fraktionierte Kristallisation, Trennung oder Kristalisation von diastereomeren Derivaten oder Trennung durch chirale Säulenchromatographie, gespalten werden. Die einzelnen optischen Isomere können aus den Racematen nach üblichen Verfahren, wie zum Beispiel Salzbildung mit einer optisch aktiven Säure und anschließende Kristallisation, erhalten werden.
Alle Konfigurationsisomere der erfindungsgemäßen Verbindungen sind entweder im Gemisch oder in reiner oder im wesentlichen reiner Form eingeschlossen. Die Definition der erfindungsgemäßen Verbindungen umfasst ganz besonders sowohl cis(Z)- und trans(E)-Alkenisomere, als auch cis- und trans-Isomere von Cycloalkyl- oder Heterocycloalkylringen.
Außerdem ist es bezüglich der Zielverbindung I selbstverständlich, dass die Verbindung tautomere Isomere einschließt. Das heißt, die Verbindung der Formel I kann in jeder der nachstehenden Formen
in einem Gleichgewichtsstadium vorhanden sein.
Es sollte klar sein, dass Solvate (z. B. Hydrate) der Verbindungen der Formel I auch im Schutzbereich der vorliegenden Erfindung sind. Verfahren zur Solvatation sind allgemein im Fachgebiet bekannt. Demgemäß können die erfindungsgemäßen Verbindungen in der freien oder der Hydratform vorliegen und sie können nach Verfahren erhalten werden, die durch die nachstehenden Schemata veranschaulicht sind.
Schema I
XI ist eine Verbindung der Formel I
Wie in Schema I veranschaulicht ist, kann eine Verbindung der Formel III durch Behandeln einer Lösung von 5-Nitro-3-pyrazolcarbonsäure (II) in absolutem Alkohol mit H₂SO₄ hergestellt werden, wobei der Ester erzeugt wird. Die Verbindung der Formel IV kann durch Behandeln der Nitroverbindung III mit einem Reduktionsmittel, wie Wasserstoff, in Gegenwart eines Katalysators, wie Palladium auf Holzkohle, oder mit einem Metall als Reduktionsmittel, wie Zinn oder Eisen, hergestellt werden. Die Aminogruppe und eines der Stickstoffatome des Pyrazolrings werden durch Behandeln einer Verbindung der Formel IV mit Di-tert-Butyldicarbonat oder einem vergleichbaren Carbamylierungsmittel und einer Base, wie Pyridin, geschützt. Die Verbindung der Formel V kann mit Lithiumaluminiumhydrid oder einem vergleichbaren Reduktionsmittel reduziert werden, wobei der Alkohol VI erhalten wird, welcher durch Mangandioxid oder ein vergleichbares Oxidationsmittel oxidiert werden kann, wobei ein Aldehyd der Formel VII erhalten wird. Der Aldehyd der Formel VII kann mit einem Phosphonatester und einer Base, wie Kalium-t-butoxid, umgesetzt werden, wobei ein Olefin der Formel VIII bereitgestellt wird. Das Olefin der Formel VIII kann entweder cis(Z), trans(E) oder ein Gemisch der beiden Isomere sein. In dem Fall, dass die Verbindung der Formel VIII ein einzelnes Isomer ist, kann sie mit deren geometrischem Olefinisomer durch Behandeln mit einem Mittel, wie ultraviolettem Licht (UV) und Aceton, ins Gleichgewicht gebracht werden. In dem typischen veranschaulichten Fall wird das E-Alkenisomer VIII mit dem Z-Alkenisomer IX wechselseitig umgewandelt. Bei einer Verbindung der Formel IX kann durch Behandeln mit einer Säure, wie Trifluoressigsäure oder Salzsäure, in einem Lösungsmittel, wie Dioxan, die Schutzgruppe entfernt werden, wobei das freie Amin X erhalten wird, welches mit einem Acylierungsmittel, wie einem Isocyanat, Säureanhydrid, Säurecholorid oder dergleichen, umgesetzt werden kann, wobei eine Verbindung der Formel XI erhalten wird.
Schema II
XV und XVI sind Verbindungen der Formel I
Gemäß Schema II kann eine Lösung von 5-Ethylcarboxylat-3-aminopyrazol IV und einer Base, wie Pyridin, mit einem Säurechlorid, wie 2-Methylbutanoylchlorid, umgesetzt werden, wobei die Verbindung der Formel XII erhalten wird. Die Behandlung einer Verbindung der Formel XII mit einem Reduktionsmittel, wie Lithiumaluminiumhydrid (LAH) in Tetrahydrofuran (THF), liefert den Alkohol der Formel XIII, welcher durch ein Oxidationsmittel, wie Mangandioxid in Aceton, oxidiert werden kann, wobei ein Aldehyd der Formel XIV erhalten wird. Aldehyde der Formel XIV können mit einem Phosphonatester in Gegenwart einer Base, wie Kalium-tert-butoxid, behandelt werden, wobei Verbindungen der Formel XV erhalten werden. Analog zu Schema I können Verbindungen der Formel XV mit ultraviolettem Licht und Aceton behandelt werden, wobei eine Verbindung der Formel XVI erhalten wird.
Die Ausgangsverbindungen der Schemata I und II sind im Handel erhältlich oder können nach Verfahren hergestellt werden, die zu üblichem Fachwissen gehören.
Verbindungen der Formel I zur erfindungsgemäßen Verwendung sind:
N,N-[(Z)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin;
N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid;
N-(Z)-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid; und
N,N-[(E)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen haben pharmakologische Eigenschaften; die Verbindungen der Formel I sind insbesondere Inhibitoren von Proteinkinasen, wie der cyclinabhängigen Kinasen (cdks), zum Beispiel cdc2 (cdk1), cdk2 und cdk4. Es wird erwartet, dass die neuen Verbindungen der Formel 1 in der Therapie von proliferativen Erkrankungen, wie Krebs, Infektionen, Arthritis, Alzheimer-Krankheit und von kardiovaskulären Erkrankungen nützlich sind. Die Verbindungen können auch zur Behandlung von topischen und systemischen Pilzinfektionen nützlich sein.
Die Verbindungen der Formel I sind insbesondere bei der Behandlung einer Vielfalt von Krebserkrankungen, einschließlich (aber nicht eingeschränkt auf) der folgenden, nützlich:

– Karzinom, einschließlich das der Blase, Brust, des Dickdarms, der Niere, Leber, Lunge, des Eierstocks, der Bauchspeicheldrüse, des Magens, Gebärmutterhalses, der Schilddrüse, Prostata und der Haut;
– hämatopoietische Tumoren lymphoider Herkunft, einschließlich akute lymphozytische Leukämie, B-Zellen-Lymphom und Burkitt's-Lymphom;
– hämatopoietische Tumoren myeloider Herkunft, einschließlich akute und chronische myelogene Leukämien und promyelozytische Leukämie;
– Tumoren mesenchymalen Ursprungs, einschließlich Fibrosarkom und Rhabdomyosarkom; und
– andere Tumoren, einschließlich Melanom, Seminom, Teratokarzinom, Osteosarkom, Neuroblastom und Gliom.

Infolge der Schlüsselfunktion von cdks bei der Regulierung der Zellproliferation im allgemeinen, könnten Inhibitoren als reversible Zytostatika wirken, was bei der Behandlung eines jeden Krankheitsprozesses, der eine abnormale Zellproliferation aufweist, z. B. bei Neurofibromatosis, Atherosklerose, pulmonale Fibrose, Arthritis, Psoriasis, Glomerulonephritis, Restenose nach Angioplastie oder vaskulärem chirurgischen Eingriff, hypertropher Narbenbildung, entzündlicher Darmerkrankung, Transplantationsabstoßung, Angiogenese und endotoxischem Schock, nützlich sein kann.
Verbindungen der Formel I können auch zur Behandlung der Alzheimer-Krankheit nützlich sein, wie durch Befunde in jüngerer Zeit, dass cdks bei der Phosphorylierung von Tau-Protein beteiligt ist (J. Biochem, 117, 741–749 (1995)), nahegelegt wurde.
Verbindungen der Formel I können auch als Inhibitoren für andere Proteinkinasen, z. B. Proteinkinase C, her 2, rafl, MEK1, MAP-Kinase, EGF-Rezeptor, PDGF-Rezeptor, IGF-Rezeptor, P13-Kinase, weel-Kinase, Src, Abl, VEGF und ICK, wirken und deshalb zur Behandlung von Krankheiten, welche mit anderen Proteinkinasen in Zusammenhang stehen, wirksam sein.
Verbindungen der Formel I verursachen oder hemmen auch die Apoptose, einen physiologischen Zelltodverlauf, welcher für normale Entwicklung und Homöostase kritisch ist. Veränderungen der apoptotischen Wege tragen zur Pathogenese verschiedener menschlicher Krankheiten bei. Verbindungen der Formel I, zur Modulation von Apoptose, können zur Behandlung verschiedener menschlicher Krankheiten mit Anomalien in der Apoptose, einschließlich Krebs (besonders, aber nicht eingeschränkt auf Follikellymphome, Karzinome mit p53-Mutationen, Hormon-abhängigen Tumoren der Brust, Prostata und des Eierstocks und prekanzerogenen Veränderungen, wie familiäre Polypose), viralen Infektionen (einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf Herpesvirus, Poxvirus, Epstein-Barr-Virus, Sindbis-Virus und Adenovirus), Autoimmunkrankheiten (einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf systemischen Lupus erythematosus, immunvermittelte Glomerulonephritis, rheumatoide Arthritis, Psoriasis, entzündliche Darmkrankheiten und autoimmuner Diabetes mellitus), neurodegenerativen Störungen (einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf die Alzheimer-Krankheit, AIDS-verwandte Demenz, Parkinson-Krankheit, amyotrophische Lateralsklerose, Retinitis pigmentosa, spinale Muskelatrophie und zerebrale Degeneration), AIDS, myelodysplastischen Syndromen, aplastischer Anämie, ischämischem Schaden verbunden mit Myokardinfarkten, Schlaganfall und Reperfusionsschaden, Arrhythmie, Atherosklerose, Toxin-induzierten oder Alkohol-induzierten Leberkrankheiten, hämatologischen Krankheiten (einschließlich, aber nicht eingeschränkt auf chronische Anämie und aplastische Anämie), degenerativen Krankheiten des Muskelskelettsystems (einschließlich aber nicht eingeschränkt auf Osteoporose und Arthiritis), Aspirin-sensitiver Rhinosinusitis, zystischer Fibrose, multipler Sklerose, Nierenkrankheiten und Krebsschmerzen nützlich sein.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können auch in Kombination mit bekannten Behandlungen gegen Krebs nützlich sein, wie einer Bestrahlungstherapie oder mit zytostatischen und zytotoxischen Mitteln, wie zum Beispiel, aber nicht eingeschränkt auf, DNA-interaktiven Mitteln, wie Cisplatin oder Doxorubicin; Inhibitoren von Farnesylproteintransferase, wie den in der anhängigen U.S. Anmeldung Nr. 08/802,329 beschriebenen Substanzen, Topoisomerase II-Inhibitoren, wie Etoposid; Topoisomerase I-Inhibitoren, wie CPT-11 oder Topotecan; Tubulin stabilisierenden Mitteln, wie Paclitaxel, Docetaxel oder den Epothilonen; Hormonmitteln, wie Tamoxifen; Thymidilatsynthaseinhibitoren, wie 5-Fluoruracil; und Antimetaboliten, wie Methoxtrexat; antiangiogenen Mitteln, wie Angiostatin oder Endostatin; und Kinase-Inhibitoren, wie her2-spezifischen Antikörpern.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel I können auch in Kombination mit Modulatoren zur p53-Transaktivierung nützlich sein. Außerdem können die Verbindungen der Formel I zur Behandlung der durch Chemotherapie hervorgerufenen Alopecia, durch Chemotherapie hervorgerufenen Thrombozytopenie, durch Chemotherapie hervorgerufenen Leukopenie oder Mukositis verwendet werden. Bei der Behandlung von durch Chemotherapie hervorgerufener Alopecia wird die Verbindung der Formel I vorzugsweise topisch in Form eines Medikaments, wie eines Gels, einer Lösung, Dispersion oder Paste, angewendet.
Wenn sie in einer festgesetzten Dosis formuliert werden, verwenden die Kombinationsprodukte die erfindungsgemäßen Verbindungen in dem nachstehend beschriebenen Dosisbereich und das andere pharmazeutisch wirksame Mittel in dem zugelassenen Dosisbereich. Der cdc2-Inhibitor Olomucin, zum Beispiel, reagiert synergistisch mit bekannten zytotoxischen Mitteln bei dem Hervorrufen von Apoptose (J. Cell sci., 108,2897 (1995)). Verbindungen der Formel I können aufeinanderfolgend mit bekannten Antikrebsmitteln oder zytotoxischen Mitteln verwendet werden, wenn eine Kombinationsformulierung ungeeignet ist.
cdc2/Cyclin-B1-Kinase-Test
Die cdc2/Cyclin-B1-Kinaseaktivität wurde durch Prüfung der Aufnahme von ³²P in Histon HI bestimmt. Die Umsetzung bestand aus 50 ng in Baculovirus exprimierten GST-cdc2, 75 ng in Baculovirus exprimierten GST-Cyclin B1, 1 μg Histon HI (Boehringer Mannheim), 0,2 μ Ci, ³²P γ-ATP und 25 μM ATP in Kinasepuffer (50 mM Tris, pH 8,0, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA, 0,5 mM DTT). Die Umsetzung wurde 30 Minuten bei 30°C inkubiert und dann durch Zugabe von kalter Trichloressigsäure (TCA) auf eine Endkonzentration von 15 % gestoppt und 20 Minuten auf Eis inkubiert. Die Umsetzung wurde auf GF/C-Unifilterplatten (Packard) unter Verwendung eines Packard Filtermate Universal-Sammlers gesammelt und die Filter auf einem Packard Top Count Flüssigkeits-Szintillationszähler mit 96 Vertiefungen (D.R. Marshak, M.T. Vanderberg, Y.S. Bae, LJ. Yu, J. of Cellular Biochemistry, 45, 391–400 (1991), hier als Bezugnahme aufgenommen) gezählt.
cdk2/Cyclin-E-Kinase-Test
Die cdk2/Cyclin-E-Kinase-Wirkung wurde durch Überwachen der Aufnahme von ³²P in das Retinoblastomaprotein bestimmt. Die Umsetzung bestand aus 2,5 ng in Baculovirus exprimierten GST-cdk2/Cyclin E, 500 ng bakteriell hergestelltem GST-Retinoblastomaprotein (Aminosäuren 776–928), 0,2 μ Ci ³²P γ-ATP und 25 μM ATP in Kinasepuffer (50 mM Hepes, pH 8,0, 10 mM MgCl₂, 5 mM EGTA, 2 mM DTT). Die Umsetzung wurde 30 Minuten bei 30°C inkubiert und dann durch Zugabe von kalter Trichloressigsäure (TCA) auf eine Endkonzentration von 15 % gestoppt und 20 Minuten auf Eis inkubiert. Die Umsetzung wurde auf GF/C-Unifilterplatten (Packard) unter Verwendung eines Packard Filtermate Universal-Sammlers gesammelt und die Filter wurden auf einem Packard Top Count Flüssigkeits-Szintillationszähler mit 96 Vertiefungen gezählt.
cdk4/Cyclin-D1-Kinaseaktivität
Die cdk4/Cyclin-D1-Kinaseaktivität wurde durch Überwachen der Aufnahme von ³²P in das Retinoblastomaprotein bestimmt. Die Umsetzung bestand aus 165 ng in Baculovirus exprimierten GST-cdk4, 282 ng bakteriell exprimiertem S-Tag-Cyclin D1, 500 ng bakteriell hergestelltem GST-Retinoblastomaprotein (Aminosäuren 776–928), 0,2 μ Ci ³²Pγ-ATP und 25 μM ATP in Kinasepuffer (50 mM Hepes, pH 8,0, 10 mM MgCl₂, 5 mM EGTA, 2 mM DTT). Die Umsetzung wurde 1 Stunde bei 30°C inkubiert und dann durch Zugabe von kalter Trichloressigsäure (TCA) auf eine Endkonzentration von 15 % gestoppt und 20 Minuten auf Eis inkubiert. Die Umsetzung wurde auf GF/C-Unifilterplatten (Packard) unter Verwendung eines Packard Filtermate Universal-Sammlers gesammelt und die Filter auf einem Packard Top Count Flüssigkeits-Szintillationszähler mit 96 Vertiefungen (K.G. Coleman, B.S. Wautlet, D. Morissey, J.G. Mulheron, S. Sedman, P. Brinkley, S. Price, K.R. Wedster (1997); Identification of CDK4 Sequences involved in cyclin D, and p16 binding. J. Biol. Chem. 272, 30: 18869–18874, hier als Bezugnahme eingeschlossen) gezählt.
Die nachstehenden Beispiele und Verfahren beschreiben die Art und das Verfahren zur Herstellung und Verwendung der Erfindung und sie dienen zur Erläuterung und nicht als Einschränkung. Es sollte selbstverständlich sein, dass es andere Ausführungsformen geben kann, welche innerhalb des Wesens der Erfindung unter den Schutzbereich der Erfindung fallen, der durch die hier beigefügten Ansprüche definiert ist.
Beispiel 1 N,N-[(Z)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin (XI)
A. Herstellung von 5-Nitro-3-pyrazolethylcarboxylat (III)
Eine Lösung von 10 g 5-Nitro-3-pyrazolcarbonsäure wurde in 50 ml absolutem Ethanol und 2 ml H₂SO₄ unter Rückfluss erwärmt. Ein Dean Stark-Abscheider wurde verwendet, um das azeotrop erzeugte Wasser zu entfernen. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, wobei ein weißer Feststoff erhalten wurde, welcher ohne weitere Reinigung bei dem nächsten Schritt verwendet wurde.
B. Herstellung von 5-Carboxyethyl-3-aminopyrazol (IV)
Zu einer Parr-Bombe wurden 300 mg Pd/C (10 %), 3 g III und 125 ml absoluter Ethanol zugegeben. Die Hydrierung wurde 4 Stunden bei 30 psi durchgeführt, der Katalysator durch Filtrieren durch einen Celite-Kuchen entfernt und der Kuchen mit 30 ml Ethanol gewaschen. Zu der Ethanollösung wurde 1 ml HCl zugegeben, das Lösungsmittel unter Vakuum zur Trockene eingedampft und das Produkt ohne weitere Reinigung bei dem nächsten Schritt verwendet.
C. Herstellung von 5-Carboxyethyl-1,3-bis[1,1-dimethyl(ethyl)oxycarbonyl]-3-aminopyrazol
Zu einer Lösung von IV in 50 ml wasserfreiem Pyridin wurden 10,9 g Di-tert-butyldicarbonat zugegeben. Die Umsetzung wurde 12 Stunden auf 95°C erwärmt und dann der Überschuss an Pyridin unter Vakuum entfernt. Der Gummi wurde in 50 ml Pyridin aufgenommen und 11 g Di-tert-butyldicarbonat zugegeben. Die Umsetzung wurde 1,5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, der orange / braune Gummi über Nacht unter hohem Vakuum getrocknet und ohne weitere Reinigung bei dem nächsten Schritt verwendet.
D. Herstellung von 5-Hydroxymethyl-3-[1,1-dimethyl(ethyl)oxycarbonyl]aminopyrazol (VI)
Eine Lösung von 4,46 g V in 100 ml trockenem THF unter einem N₂-Strom wurde in einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Während die Temperatur bei 0°C gehalten wurde, wurden zu der THF- Lösung innerhalb von 60 Minuten 37,69 ml 1 M LiAlH₄ in THF zugegeben. Nach 2-stündigem Rühren bei 0°C wurde die Lösung über 300 g zuerstoßenes Eis gegossen. Als das Eis geschmolzen war, wurde die Lösung durch Zugabe von HCl auf pH 7 gebracht. Die wässrige Schicht wurde filtriert, um Aluminiumsalze zu entfernen, und das Filtrat wurde dreimal mit 200 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde gesammelt, über MgSO₄ getrocknet und zu einem orangefarbenen Feststoff eingedampft. Der Feststoff wurde durch Silikagelchromatographie gereinigt, wobei insgesamt 1,7 g des Alkohols (63 %) bereitgestellt wurden.
E. Herstellung von 5-Carboxaldehyd-3-[1,1-dimethyl(ethyl)oxycarbonyl]aminopyrazol (VII)
Eine Lösung von 1,7 g VI, 2,08 g MnO₂ in 30 ml Aceton wurde 24 Stunden unter Rückfluss erwärmt. Es wurden weitere 500 mg MnO₂ zugegeben und die Umsetzung weitere 3 Stunden unter Rückfluss erwärmt. Das Gemisch wurde durch einen Celite-Kuchen filtriert und der Kuchen mit einem Überschuss von Aceton gewaschen. Das Lösungsmittel wurde entfernt, wobei ein brauner Feststoff erhalten wurde, welcher durch Kristallisation aus Dichlormethan gereinigt wurde, wobei 960 mg (57 %) des gewünschten Produkts in reiner Form bereitgestellt wurden.
F. Herstellung von N,N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]1,1-dimethyl(ethyl)oxycarbonylamin (VIII)
Eine Lösung von (5-t-Butyloxazol-2-yl)methylphosphonsäurediethylester (0,88 g) in 10 ml wasserfreiem THF unter N₂ wurde auf 0°C gekühlt und 1,4 g Kalium-tert-butoxid zugegeben. Die Umsetzung wurde 30 Minuten bei 0°C gerührt und dann wurde die Anion-Lösung in eine Lösung von 960 mg VII, gelöst in 35 ml wasserfreiem THF unter N₂, eingespritzt. Die Umsetzung wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt und dann eine weitere Portion der Anion-Lösung (230 mg des Phosphonsäureethylesters gemischt mit 368 mg Kalium-tert-butoxid, wie vorstehend) zugegeben und die Umsetzung über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter Vakuum entfernt, wobei ein orangefarbener Feststoff erhalten wurde und das gewünschte Produkt wurde durch Silikagelchrömatographie gereinigt, wobei 1,2 g (93 %) des gewünschten Produkts als gelbbrauner Feststoff erhalten wurde. (M+H)⁺ = 333, HPLC RT = 4,17 min (YMC S5 ODS-Säule, 4,6 × 50 mm; 10–90 % MeOH/H₂O-Gradient, +0,1 % TFA; 4 ml/min, 220 nM Nachweis).
G. Herstellung von N,N-[(Z)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]1,1-dimethyl(ethyl)oxycarbonylamin (IX)
In eine ummantelte 400 Watt Hanovia-Quecksilberlampe wurden 312 mg VIII in 20 ml Aceton eingebracht und die Umsetzung 24 Stunden bestrahlt, wobei 82 % des gewünschten Z-Isomers erhalten wurden. Das Lösungsmittel wurde entfernt und das rohe Material bei dem nächsten Schritt verwendet.
H. Herstellung von 3-Amino-5-[(Z)-5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl-vinyl]-2-yl-pyrazol (X)
Zu einer 0°C Lösung von Trifluoressigsäure (2 ml) wurde 1,26 g IX zugegeben, die Umsetzung wurde auf Raumtemperatur erwärmen gelassen und 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Das Lösungsmittel wurde entfernt und der gelbe Rückstand über Nacht unter hohem Vakuum getrocknet, wobei das gewünschte Produkt mit 84%-iger Ausbeute erhalten wurde. Das gewünschte Produkt wurde ohne weitere Reinigung bei dem nächsten Schritt verwendet.
I. Herstellung von N,N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin (XI)
232 mg rohes Olefin X wurde in 1 ml trockenem Pyridin aufgenommen und im Vakuum zur Trockene eingedampft. Das Öl wurde mit trockenem Acetonitril zusammen eingedampft, wobei ein hellgelber Feststoff erhalten wurde. Der Feststoff wurde in 15 ml Chloroform und 1,3 ml Triethylamin aufgenommen. Zu der Lösung wurden 383 mg 2,6-Difluorphenylisocyanat zugegeben und die Umsetzung über Nacht unter einem Trocknungsrohr unter Rückfluss erwärmt. Das erhaltene Produkt wurde durch HPLC unter Verwendung einer YMC S5(ODS 20 × 100 mm)-Säule gereinigt, wobei 89 mg reines Produkt erhalten wurden. (M+H)+ = 388, HPLC RT = 4,22 min (YMC S5 ODS-Säule, 4,6 × 50 mm; 10–90 % MeOH/H₂O-Gradient, +0,1 % TFA; 4 ml/min, 220 nM Nachweis).
Beispiel 2 N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl]vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid (XV)
A. Herstellung von 5-Carboxymethyl-3-(2-methyl(ethyl)carbonylamino)pyrazol (XII)
Eine Lösung von 398 mg 5-Carboxymethyl-3-aminopyrazol (hergestellt, wie vorstehend für das Ethylanalog beschrieben, unter Verwendung von MeOH statt EtOH bei der Veresterung) und 440 ml Pyridin in 5 ml wasserfreiem Dioxan wurde auf 0°C gekühlt. Zu der Lösung wurden langsam 621 ml 2-Methylpropanoylchlorid zugegeben. Die Umsetzung wurde 2 Stunden bei Raumtempratur gerührt, mit 25 ml Chloroform verdünnt und einmal mit 15 ml 1 M HCl und dann mit 15 ml gesättigtem NaHCO₃ extrahiert. Die organische Schicht wurde isoliert, über MgSO₄ getrocknet und das Lösungsmittel unter Vakuum entfernt. Das Produkt wurde ohne weitere Reinigung bei dem nächsten Schritt verwendet.
B. Herstellung von 5-Hydroxymethyl-3-(2-methyl(ethyl)carbonylamino)pyrazol (XIII)
Eine Lösung von 787 mg rohem XII in 10 ml trockenem THF wurde in einem Eisbad auf 0°C gekühlt. Zu dem Gemisch wurden 14 ml 1 M LiAlH₄ in THF zugegeben, wobei die Temperatur auf 0°C gehalten wurde. Die Umsetzung wurde 6,5 Stunden bei 0°C gerührt und dann wurde die Lösung über 100 g zerstoßenes Eis gegossen. Als das Eis geschmolzen war, wurde die Lösung durch Zugabe von HCl auf pH 7 gebracht. Die wässrige Schicht wurde filtriert, um Aluminiumsalze zu entfernen, und das Filtrat dreimal mit 75 ml Ethylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde gesammelt, über MgSO₄ getrocknet und zu einem orangefarbenen Feststoff eingedampft. Der Feststoff wurde an Silikagel gereinigt, wobei 79 mg des Alkohols (15 %) erhalten wurden.
C. Herstellung von 5-Carboxaldehyd-3-(2-methyl(ethyl)carbonylamino)pyrazol (XIV)
Eine Lösung von 79 mg XIII und 150 mg MnO₂ in 10 ml Aceton wurde 20 Stunden unter Rückfluss erwärmt. Das Gemisch wurde durch einen Celite-Kuchen filtriert und der Kuchen mit einem Überschuss an Aceton gewaschen. Das Lösungsmittel wurde entfernt, wobei ein brauner Feststoff erhalten wurde, welcher durch Silikagel gereinigt wurde, wobei 58 mg (75 %) des gewünschten Produkts in reiner Form erhalten wurden.
D. Herstellung von N-(E)-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)inyl)pyrazol-3-yl (methyl)propanamid (XV)
Eine Lösung von 110 mg (5-t-Butyloxazol-2-yl)methylphosphonsäurediethylester in 1 ml wasserfreiem THF wurde unter N₂ auf 0°C gekühlt und 800 ml einer 1 M THF-Lösung von Kalium-tert-butoxid zugegeben. Die Umsetzung wurde 30 Minuten bei 0°C gerührt und dann wurde die Anionlösung in eine Lösung von 29 mg XIV in 1 ml wasserfreiem THF unter N₂ eingespritzt. Die Umsetzung wurde über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Lösung wurde auf Silikagel eingedampft und das Produkt durch Silikagelchromatographie isoliert, wobei 16,6 mg (35 %) des gewünschten Produkts als gelbbrauner Feststoff erhalten wurden. (M+H)⁺ = 303, HPLC RT = 3,51 min (YMC S5 ODC-Säule, 4,6 × 50 mm; 10–90 % MeOH/H₂O-Gradient, +0,1 % TFA; 4 ml/min, 220 nM Nachweis).
Beispiel 3 N-(Z)-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]2-(methyl)propanamid (XVI)
Eine Lösung von 32 mg XV (in Beispiel 2 beschrieben) in 700 μl Aceton wurde in einem Glasrohr 3 Tage mit einer UV-Lampe bestrahlt, wobei eine 97%-ige Umwandlung zu dem E-Olefinisomer erhalten wurde. Das Produkt wurde durch Silikagelchromatographie gereinigt, wobei 21 mg des gewünschten Produkts erhalten wurden. (M+H)⁺ = 303, HPLC RT = 3,72 min (YMC S5 ODC-Säule, 4,6 × 50 mm; 10–90 % MeOH/H₂O-Gradient, +0,1 % TFA; 4 ml/min, 220 nM Nachweis).
Beispiel 4 N,N-[(E)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl)-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl)]2,6-difluorphenylaminocarbonylamin (XVII)
Die vorstehende Verbindung wurde nach Verfahren analog zu denen in Beispiel 1 hergestellt. (M+H)⁺ = 388, HPLC RT = 3,62 min (YMC S5 ODC-Säule, 4,6 × 50 mm; 10–90 % MeOH/H₂O-Gradient, +0,1 % TFA; 4 ml/min, 220 nM Nachweis).

Claims

Verbindung, ausgewählt aus: N,N-[(Z)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]-2,6-difluorphenylaminocarbonylamin; N-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]-2-methyl)propanamid; N-(Z)-[5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]-2-(methyl)propanamid; und N,N-[(E)-5-(2-(5-(1,1-Dimethyl(ethyl))-oxazol-2-yl)vinyl)pyrazol-3-yl]-2,6-difluorphenylaminocarbonylamin und pharmazeutisch verträgliche Salze davon.
Arzneimittel, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Arzneimittel, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 in Verbindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und einem in festgelegter Dosierung formulierten Mittel gegen Krebs.
Arzneimittel, umfassend eine Verbindung nach Anspruch 1 in Verbindung mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger und einem in festgelegter Dosierung formulierten Modulator zur p53-Transaktivierung.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Modulation von Apoptose.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung von Proteinkinasen.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung cyclinabhängiger Kinasen.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Hemmung von cdk2.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung proliferativer Erkrankungen.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Krebs.
Arzneimittel nach Anspruch 3 zur Behandlung proliferativer Erkrankungen.
Arzneimittel nach Anspruch 3 zur Behandlung von Krebs.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung einer mit cyclinabhängiger Kinase verbundenen Störung.
Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 für die Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von durch Chemotherapie hervorgerufener Alopecia, durch Chemotherapie hervorgerufener Thrombozytopenie, durch Chemotherapie hervorgerufener Leukopenie oder Mukositis.