DE3037342A1 - N-sulfoalkylanilinderivate und ihre verwendung - Google Patents

N-sulfoalkylanilinderivate und ihre verwendung

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DE3037342A1
DE3037342A1 DE19803037342 DE3037342A DE3037342A1 DE 3037342 A1 DE3037342 A1 DE 3037342A1 DE 19803037342 DE19803037342 DE 19803037342 DE 3037342 A DE3037342 A DE 3037342A DE 3037342 A1 DE3037342 A1 DE 3037342A1
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Masanobu Maeda
Yuko Kumamotoshi Murao
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Dojindo Laboratory and Co Ltd
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Description

N-SuIfoalkylanilinderivate und ihre Verwendung;
Die Erfindung betrifft N-SuIfoalkylanilinderivate der allgemeinen Formel (i) sowie ihre Salze gemäß den vorstellenden Patentansprüchen.
Die vorstehend umrissenen erfindungsgemäßen Verbindungen sind neu und in der Literatur bisher nicht genannt. Sie sind verwendbar als farbstoffbildende Substanzen bei der Bestimmung von Wasserstoffperoxiden, bei der1 eine Peroxidase oder eine als Peroxidase wirkende Substanz als Katalysator wirkt oder v.v einem solchen einen Beitrag stellt.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch ein Gemisch zur Peroxidbestimmung, das Verbindungen gemäß Anspruch 1 enthüll., sowie ein Verfahren zur Peroxidbestimmung unter Einsatz eines solchen Gemisches. Der hier verwendete Ausdruck "Pe.roxid" umfaßt Substanzen, die einen Peroxidationseffekt ausüben, wie Wasserstoffperoxid oder ein Lipidpei"oxid. Insbesondere bezieht sich die Erfindung auf ein Gemisch zur Bestimmung eines Peroxids, wie Wasserstoffperoxid oder Lipidperoxid, bei dem eine Peroxidase oder eine Substanz mit Peroxidationseffokt wie Peroxidase als Katalysator wirkt oder zu einem solchen beiträgt, sowie auf ein Verfahren zur Bestimmung eines Peroxids, bei dem ein solches Gemisch zum Einsatz gelangt.
Die Spezifizität von enzymatischen Analysen, wie sie bei der klinischen Untersuchung angewandt werden, wird in neuerer Zeit sehr hoch eingeschätzt und findet weitverbreitete Anwendung. Beispielsweise können Glukose, Harnsäure und Cholesterin in Körperflüssigkeiten bestimmt werden, indem man das Wasserstoffperoxid bestimmt, das gebildet wird, wenn Glukose, Harnsäur« und Cholesterin in Körperflüssigkeiten mit Enzymen, wie Glykoseoxidase, Uricase und Cholesterinoxidase, oxidiert
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werden. Im Fall von beispielsweise Harnsäure wird diese mit Ifr.i.oase unter Bildung von Wasserstoff gemäß der folgenden Formel oxidiert:
O H
. J· Nx ^ O uricase -^^' v ^ +O2 + 2H2O
NH
Weiterhin ziehen Lipidperoxide in lebenden Körpergeweberi und Kö'i'perfliissigkeiten die Aufmerksamkeit als Ursache für !erkrankungen auf sich, die Alterserscheinungen und retrograde Metaiiiorphosen. zur Folge haben. Außerdem ist in neuerer Zeit der Verdacht aufgekommen, daß·in Nahrungsmitteln enthaltenes Wasserstoffperoxid carcinogen wirkt. Folglich hat sich die Notwendigkeit, Wasserstoffperoxid, das durch Oxidase in lebenden Körpern gebildet wird, Lipidperoxid in lebenden Körpern und in Nahrungsmitteln enthaltenes Wasserstoffperoxid bestimmen zu können, in neuerer Zeit ständig verstärkt.
Für die Bestimmung von Peroxiden wird gewöhnlich ein Gemisch eingesetzt, das eine Substanz enthält, die enzymatisch oder nicht-enzymatisch pex-oxidierend wirkt (wie Peroxidase, ein Übergangsmetallion, wie Eisenionen, oder eine Substanz mit" ähnlicher Wirkung) sowie eine Substanz, die sich in Gegenwart von Peroxiden verändert (beispielsweise in ihrer Farbe). A3s letztere, d.h. als sogenannte farbstoffbildende Substanz, deren Farbe verändert wird, können folgende Verbindungen verwendet werden:
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1 ) Monoamine, wie Anilin und seine Derivate (z.B. N,N-l)iiiiet!iy I anilin) und Toluidin und seine Derivate (z.B. N, N-Din tJiy 1 toluidin),
2) Diamine, wie Phenylendiamin und seine Derivate, llenzid.tn und Dianisidin,
3) Phenole, wie Phenol an sich und seine Derivate, Kresol und Naphthol,
k) Farbstoffe, wie 2,6-Dichlorphenol-indophenol, und
5) Ti-iphenylmethane, wie Leuko-Malachitgrün und Leuko-Phenolphthalein.
Diese können entweder allein oder in Kombination mit einem Farbbildner, wie 4-Aminoantipyrin oder 2-Methy!benzo thiazolinonhydrazon, verwendet werden.
Optimale pH-Wertverteilungen der enzymatischen Aktivitäten von Enzymen, die die zu bestimmende Substanz- im Lebenden Körper oxidativ zersetzen, sind breit. Gewöhnlich liegt der optimale pfl-Wert im Bereich von 5 bis 9· Beispielsweise beträgt der optimale pH-Wert für Glykoseoxidase, üricase und Cholesterin 5,6, Sf5 bzw. 6,5-8,0. Diese farbstoi'fbildenden Substanzen, insbesondere Monoamine und Diamine, weisen jedoch bei diesen Tür die enzymatische Wirksamkeit optimalen pH-Werten eine extrem niedx-ige Wasserlösiichkeit auf. Deshalb wird bei der bisher üblichen Bereitung· der Lösungen dieser farbstoffbildenden Substanzen die Dispersion durch Zusatz eines grenzflächenaktiven Mittels verbessert, oder ihre Ausfällung wird durch Zusatz eines organischen Lösungsmittels unterbunden. Selbst wenn jedoch" diese Methoden angewandt werden, ändert sich die Konzentrationder wäßrigen Lösung mit der Zeit, und Zuverlässigkeit und Genauigkeit der Bestimmung sind gering. Es ist auch zu befürchten, daß das grenzflächenaktive Mittel und das organische
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Lösungsmittel, die zugefügt worden sind, einen schädlichen Kinl'luß auf die enzymatische Reaktion haben. Die Genauigkeit kann erhöht werden, indem man die wäßrige Lösung der farbstoffbildenden Substanz erst zum Zeitpunkt ihrer Verwendung bereitet. Diese Technik ist jedoch deshalb nachteilig, weil diese Arbeitsweise kompliziert und unwirtschaftlich ist.
Die erwähnten Monoamine und Diamine sind bei Umgebungstemperatur viskose Flüssigkeiten, und außerdem sind Phenol und Kresol, die einen Schmelzpunkt in der Nähe von 10 bis ^O C haben, bei liaumtemperatur manchmal schon fest. Deshalb ist es ziemlich schwierig, eine gegebene Menge dieser Verbindungen genau abzuwiegen, und die Bereitung der Reaktionsmittellösungen ist mühevoll.
Nach intensiven Untersuchungen dahingehend, die aufgezeigten . .Schwierigkeiten dtirch Auffinden einer farbstoff bildenden Substanz zu überwinden, die durch Oxidation mit einem Farbentwickler, wie ^--Aminoantipyrin oder 3-Methylbenzothiazolinonhydrazon, kondensiert werden kann, um einen stabilen Bestimmungswert zu ergeben, und von der eine Lösung leicht bereitet werden kann, wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß die Verbindungen der angegebenen Formel (i) ausgezeichnet sind. Lösungen dieser Vei'bindungen können leicht hergestellt werden, da sie über einen weiten pH-Wertbereich hochgradig wasserlöslich und bei Umgebungstemperatur fest sind. Außerdem wurde erfindungsgemäß festgestellt, daß, wenn so bereitete wäßrige Lösungen oxidativ mit 'f-Aminoantipyrin in Gegenwart einer Peroxidase kondensiert werden, ein Farbstoff vom Indophenoltyp der folgenden Formel (il) gebildet wird, daß die Farbe ziemlich empfindlich entwickelt wird und daß eine ausgezeichnete Farbstabilität für lange Zeit bes Lehfc.
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- 7 - 3037347
H2°2 + H?Gv\ ^N\^° Λ_^ pi Peroxidase
(D
(ID
Hie Verbindungen (l) nach der Erfindung· sind somit i'arbs to ΓΓ-bildende Substanzen mit hoher Reaktionsfähigkeit gegenüber 'Ί- Aminoanbipyrin. Außerdem sind sie wasserlöslich, und die gebildeten wäßrigen Lösungen sind äußerst stabil. Weiterhin weisendie durch oxidative Kondensation dieser Verbindungen mit 4-Aminoantipyrin gebildeten Farbstoffe eine ausgezeichnete Karbstabilität auf. Folglich können neue, nützliche Verbindungen mit den genannten ausgezeichneten Eigenschaften übex' einen weiten ßei-eich eingesetzt werden.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (l") nacJi der Krl'indun/·; können beispielsweise durch Umsetzen eines Anilinderivafes der allgemeinen Formel (l'Ij):
(III),
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in Her R , R- und R, die vorstehend für Formel (l) angegebene liedeutung haben, mit Natriumbronäthansulf onat, Propansultone oder ßutansultone (Sultone sind bestimmte innere Ester von Ilydröxysulf onsäure) erhalten werden, um. das an das Stickstoffatom gebiandene Wasserstoffatom zu ersetzen.
Tinter den N-SuIfoalkylanilinderivateri werden Verbindungen, bei cienen der SuIfoallcylrest ein Kohlenstoffatom aufweist, wie N-SuIfomethylanilinderivate, duz-ch Umsetzen der Anilinderivate der allgemeinen Formel (ill) mit Natriumhydroxymethansulfonat erhallen. Sie sind jedoch als farbstoffbildende Substanz unbrauchbar, da ihre wäßrigen Lösungen unter sauren Bedingungen leicht hydrolysiert werden.
N-SuIToalkylanilinderivate mit 5 oder mehr Kohlenstoffatomen haben eine geringere Spezifizität als färbstoffbildende Substanzen als die Verbindungen nach der Erfindung (mit 2 bis J| Kohlenstoffatomen), auch hat ihre Herstellung wirtschaftliche Nachteile.
Aufgrund dieser Gesichtspunkte sind die Verbindungen nach der Erfindung, d.h. N-SuIfoalkylanilinderivate mit 2 bis k Kohlenstoffatomen, als farbstoffbildende Substanzen am geeignetsten.
Konkrete Beispiele für Verbindungen der allgemeinen Formel (i) nach der Erfindung sowie die Schmelzpunkte und maximalen Wellenlängen λ (nm) der damit durch oxidative Kondensation
max
mit ^-Aminoantipyrin gebildeten Farbstoffe sind in Tabelle 1 angegeben. Die maximale Absorptionswellenlänge in der Tabelle ist die maximale Wellenlänge bei einem pH-Fert, wie er für die Bestimmung angewendet wird, aber dies zeigt nicht den optimalen pll-Wert an, bei dem die maximale Absorption erreicht wird.
Seblstverständlich ist die Erfindung nicht auf die in Tabelle T angegebenen Substanzen beschränkt, sondern sie umfaßt alle
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N-SuIfoalkylanilinderivate, bei denen das an das Anilinstickstoffatom gebundene Wasserstoffatom durch eine SuIfoalkylgruppe mit 2 bis k Kohlenstoffatomen substituiert dsl-.
Sie sind ausgezeichnet wasserlöslich, und ihre Lösungen sind höchst stabil. Die durch oxidative Kondensation der N-SuI[O-alkylaniline, bei denen der Substituent in ^-Stellung ein
anderes Radikal als Halogen ist, mit 4-Aminoantipyrin gebildeten Farbstoffe haben eine geringe farbstoff entwickelnde Kinpfindlichkeit.
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Tabelle 1
Substanz
C2H5 H
C2H5 C2H5
CHz-SOJTa 3 b
H H H
CHi-SO7H 3 fa
C3H5SO3H
C,HrS0,H
3 6 3
3 6 3
CHz-SO-Ca
3"6ow3°el/2
3 6 3<a
3H6SO3Cal/2
C-Hz-SO-Na
3 ο 3
0,Hj-SO Ji a
3 ο 3
0,Hz-SOJIa
3 ο 3
C-H.SO-Na
3 b 3
-Si-
3-CH3 3-CH3 3-CH3 4-CH3
2-CH3 2-OCH, 2-OH 3-OCH, 3-OCH, 3-CH,
H 5-CH,
H 5-CH,
(decomp
broad
195-200
252-254
260
245-250
190-200
200-210
250-260
I45-I5O
225-230
120-122
263-264
160-163
max (nm)
550
562
535
535
552 .
527
530
535
542
525 525 620
CaJ -J CjO
Die maximale Absorptionswellenlänge eines Kondensationsprodukt.es aus dem in bekannter Weise verwendeten Phenol mit h—Arnirioantipyrin beträgt 500 nm, und die mit N,N-Diäthylanilin 5?ΛΎ nm. Andererseits reicht die Absorptionswellenlänge von Bilirubin inKörperflüssigkeiten und hämolysiertem Blut über einen weilen Bereich vom Ultraviolettbereich bis etwa 500 nm. Deshalb kenn bei den Bestimmungen leicht ein positiver Fehler gemacht werden. Um folglich diesen Einfluß auszuschalten, ist es not. wund if; daß die maximale Absorptionswellenlänge größer als 500 nm is L. Die maximalen Absorptionswellenlängen der Kondensationsprodukte von N-SuIfoalkylanilinderivaten der allgemeinen Formel (l) nach der Erfindung mit ^-Aminoantipyrin liegen beträchtlich über 530 nm, und deshalb werden sie vom Bilirubin in Körperflüssigkeiten und hämolysiertem Blut nicht gestört. Unter den N-Suli'oalkylanilinderivaten der allgemeinen Formel (i) sind die, bei. denen die 3- und 5-Stel!]ungen des Benzolringes mit niederen Alkyl- oder Alkoxyradikalen besetzt sind, für klinische Untersuchungen nützlich, weil ihre maximalen Absorptionswellenlängen bei etwa 6θΟ nm liegen (beispielsweise N,N-Disulfopropyl-3»5-dimethylanilin: 620 nm; und Ν,Ν-Disulfopropyl-3,5-dimethoxyanilin: 580 nm).
Alle Verbindungen der allgemeinen Formel (i) nach der Erfindung sind bei Umgebungstemperatur fest, und deshalb können sie zusammen mit anderen notwendigen Bestandteilen in Form von festen Präparaten, wie Tabletten oder gefriergetrockneten Produkten, eingesetzt werden.
Die Farbstabilitäten von typischen Verbindungen der allgemeinen Formel (j) bei Änderung des pH-Wertes sind in Tabelle 2 angegeben.
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Tabelle 2
Vei-bindung ( j[ ) pH-Wert
max 5 7 9
Krfindung: N-Äthyl-N-sulfopropyl- QR qQ Q7
3-methylanilin (55O nm) * yy y'
N.N.Disulfopropyl-S.S-dimetlioxyanilin (58O nm)
Stand der Phenol (505 nm) 62 98 99
Ι22ΪΪ22£λ Ν,Ν-Dimethylanilin
( nm) yy y<i ^y
Tn der vorstehenden Tabelle zeigen die Farbstabilitätsvrerte das Verhältnis ($) von 1) einer Absorbanz eines Gemisches aus einer Probe und einer Reagenzlösung, das bei Raumtemperatur 6O Minuten lang stehengelassen wird, zu 2) einer Absorbanz (als 100 "/0) , die erhalten wird, nachdem man die Lösung nur 5 Minuten stehenläßt. Die Bestimmungsmethode der Absorbanz und Zusammensetzung und Herstellungsverfahren der Probe und der farbstoffentwickelnden Reagenzlösung, wie sie für die Bestimmung verwendet werden, sind wie folgt:
Des L iinmungs verfahr en:
20 ul einer Probe werden mit 3 ml Reagenzlösung gemischt, und die Absorbanz der Lösung bei maximaler Absorptionswellen-
länge (k ) wurde bestimmt. ^ v *- max/
Pi1Ob e :
Wasserstoffperoxidlösungi H„00; 2 mmol/l J {e agenz 1 ö s ung:
200 Einheiten Peroxidase, 0,1 xnmol ^-Aminoantipyrin und 0,5 mniol einer färbst off bildenden Substanz werden in 100 ml Pufferlösung mit verändertem pH-Wert zur Gewinnung· der Reagenzlösung gelöst.
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Die unter Verwendung· von typischen Verbindungen nacli der Erfindung und von Verbindungen des ,Standes der Technik erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengestellt, woratus hervorgeht, daß die Verbindungen nach der Erfindung, über ο inen brei hen pTI-iVertbereich eine ausgezeichnete Farbstabi Li I.;i C ergeben. Jm Falle, daß Phenol oder Dimethylanilin in den Pufferlösungen zu lösen sind, werden sie vor der Zugabe vsu den Pufferlösungen in Methanol gelost. Wenn anderersei La dio Verbindungen nach der Erfindung eingesetzt worden, ist <?s unnötig, ein grenzflächenaktives Mittel oder ein orgaiiisolios Lösungsmittel zu verwenden, und die Bereitung der UeagenK-lösung isb höchst einfach. Die Ergebnisse von Iypischen farbstoffbildenden Substanzen nach der Erfindung sind in Tabelle .'.' angegeben. Es ist f estziihalten, daß auch die nicht in Tabelle 2 gezeigten farbstoff fbildenden Verbindungen nach <iai Erfindung, d.h. andere N-SuIfoalkylanilinderivai. e (j) als die in Tabelle 2 angegebenen, weitgehend gleichartig wirken.
Bei der praktischen Anwendung der Bestirntnungs verb indungen und der Bes timmungstnethode nach der Erfindung wird eine Kombi na I..ion einer farbstoffbildenden Substanz (l) mit a) einer Substanz, die oxidierend wirkt, und b) einem Farbentwickler angewandt.. Als Substanz a) können i'eroxidase und ein übergangsme la Ll lon, vit> das Eisenion, genannt werden.. /Is Farbentwickler b) können h- Aminoantipyrin und 3-Me Lhylbenzothiazolinonhyd razori genannt werden. Es ist jedoch festzuhalten, daß dies ! ed i ;■I i.<-li Heispiele sind, die die Erfindung in keiner Weise einschränken.
J)Ie folgenden Beispiele erläutern die Erfindung' im einzelnem, bedeuten jedoch keinerlei Einschränkung des Krfinrtungsbe.ro 1 ches. i<;s können zahlreiche Modifikationen vorgenommen werden, ohne daß der Bereich der Erfindung verlassen wird»
Die Beispiele 1 bis 3 erläutern Verfahren zur Herstellung <l«r Verbindungen der Erfindung, während die Beispiele Ί bin (' Verfahren zum Bestimmen von Peroxiden unter -Verwendung von Verbindungen nach der Erfindung erläutern.
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I ie i s pi el 1
('»7<- ί'. (θ,05 mol) N-Ätliyl-3-inethylanilin werden zu ^O ml wasserfreiem Äthanol zugesetzt. Dann werden 6,3 g (0,Ö5 mal) 1 ,3-Propansu.ltone zugesetzt, und das Gemisch wird 3 Stunden lan tv unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen wird die lieakiionslösurie; mit Natriumhydroxid neutralisiert und dann mit einer wäßrigen Lösung von 5»5 S (O»O25 mol) Calciumchlorid versetzt, um weiße Kristalle auszufallen. Die Kristalle werden abfiltriert und aus Wasser umkristallisiert, wobei 8,8 g Calciumsalz von N-Äthyl-N-sulfopropyl-3-methylanilin (Verbindung E in Tabelle i) erhalten werden. Ausbeute 62,8 fo.
IClementaranalyse (f;o) von C „H „NO.SCa ,„:
Berechnet: C = 52,15 H "= 6,56 N = 5,07 Gefunden: C = 52,27 H = 6,57 N = 5,08
IK-Ab s or pt-ions Charakteristiken (cm" ):
l>-CNa; (1280), U-SO _ (1070), ^aromatischer Ring (i600)
[>ei spiel 2
Eine gemischte Lösung aus 12 g N-Äthylanilin, 12 g 1,3-l5i'opansultone und 30 tnl Methanol wird 3 Stunden lang unter Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen wird das Gemisch neutralisiert, um (JaI ciumchloridsalz-Kristalle auszufällen. Nach Reinigung mit Wasser werden 12,5 g des Calciumsalzes von N-Äthyl-N-sulfopropylanilin (Verbindung B in Tabelle 1) erhalten. Ausbeute: ^l8,0 A
El.einentaranalyse (<!,) für C H ^NO-SCa ,:
"JIe rechne b: C = 50,36 H = 6,15 N = 5,3^ CJe runden: C = 49,98 II = 6,10 N = 5,29
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] li-.'-bsorptionscharakteristiken (cm" ):
V-OK= (1280), tf-SO- (1O6O), V-aromatischer Hing (i(>00).
Beispiel 3
Kine gemischte Lösung von 10 g 2-Meth.oxyan.ilin, 10 g 1,'5-Propansultone und 30 ml Methanol wird 2 Stunden lang untor liückfluß erhitzt. Nach Abkühlen wird das Gemisch mit Natriumhydroxid neutralisiert. Die Lösung wird eingeengt. Mach Abkühlen werden die gebildeten Kristalle abfiltriert und aus Wasser/Methanol umkristallisiert, wobei 6,9 g des Natriuinsalze.s von N-SuIfopropyl-2-methoxyanilin (Verbindung ] in Tabelle i) erhalten werden. Ausbeute: 31 »9 ','ά.
Elementaranalyse (/&) für C H-NO^SNa:
Berechnet: C = 44f9'l· H = 5,28 N = 5, 2h Gefunden: C = 45,31 II = 5,32 N = 5,28
lil-Absorptionscharakteristiken (cm ):
μ-NfI- (3550), 1/-S0 (1O5O), !/-aromatischer Hing (1OOO).
Beispiel
400 Einheiten Glukoseoxidase, 200 Einheiten Peroxidase, 30 mg 4-Aminoantipyrin und 100 mg Natrium-N-äthyl -N-sulf opropylani.lin werden in 100 ml 0, 1-ni-Essigsäure (Pufferlösung, pH 5 , ύ ) ii'el. ös t:, um eine farbentwickelnde Lösung zu erhalten.
IUl Serum werden in ein Reagenzglas gegeben, 3,0 ml der
obigen farbentwickelnden Lösung werden zugesetzt, und es wird bei 37 C umgesetzt. Danach wird unter Anwendung der Ergebnisse einer Blindprobe als Vergleich die Absorbanz bestimmt. Die Glukosekonzentration in dem Sex-urn w:i rd unter Zugrundelegung einer Kalibrierkiirve berechnet, die zuvor nach bekannter Methode erstellt worden ist.
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S Iandardlösung: Glukose 200 mg/dl !empfindlichkeit : 0,5α6
Hejspiel 5
0,3 €', Essigsäure, hO mg Aminoantipyrin, 5 mg Ainmoniumeisen(ll)-sulE'al; und 100 rag Natrium-N-äthyl-N-sulfopropyl-3-me (hylanilin werden in 100 ml Wasser gelöst, um eine färbentwickelnde I üs im/; zu bereiten.
■Ί,O ml Isopropanol werden zu 200 pl einer Probe zugesetzl'. Das (3emJ sch v/lrri zweimal in Intervallen von 5 Sekunden mit einem Mix«ν fjerührt und dann bei 2000 UpM 10 Minuten lan/j zentrifu- i: i'--T'v.. 3,0 !al der ί i'b ο rs lallenden Flüssigkeit werden in ein i!ea;;;eri5sc.las gegeben und mit 1,0 ml der Reagenzli5sung versetzt. Naoh Umsetzen bei 37 C i^ird unter Anwenduuig: der Ergebnisse einer Πlindprobe als Vergleich die Absorbanz der Probe zu 5 50 nm beshiimnl-. Die f.ipidperoxidkonzentration in dem Serum VM.rr1 tinI er Zugrundelegung- einer Kalibrierkurve berechne l·, die i1 nach bekannter Methode erstellt worden ist.
;-ι I anclardJ.ösiinß·: ter I,;. -Dutylhydroperoxid 12 lOmpfindlicbkeifc : 0,
Jieispiel f>
(Bestimmung von kasserstoffperoxid in Nahrungsmitteln)
ELne Probe wird fein zerkleinert. k0 g davon werden mit 60 bis i-0 ml Wasser versetzt, und das Ganze wird 5 bis 10 Minuten lang homogenisiert. Die so behandelte Probe wird in einen 250-ml-Meßkolben übergeführt, indem sie mit Wasser hineingespült wird. Dann wird noch bis zu einem Gesamtvolumen von 250 ml Wasser zugesetzt. Das Gemisch wird zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wird abfiltriert, um eine Probenlösung zu erhalten.
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20 mg 4-Aminoantipyrin, 5 mg Ammoniume is en (Tl ) -sulfat und 100 mg Natrium-N,N-disulfopropyl-3 f 5-dimethyl anil in werden in 0, 1 -m-Phosphatpufferlösung (pH-7) gelöst, um eine nea(<;'enzlösun^ zu erhalten.
Die Pi'obenlösung (200 Ul) wird in ein Reagenzglas ü"eC'ebeu. 30 ml der lieagenzlösung werden zugesetzt. Die Absorbanz wi.i-d unter Anwendung der Ergebnisse einer Blindprobe als Vergleich zu 620 mti bestimmt. Die Wasserstoffperoxidkonzentrat.ion in dem Nahrungsmittel wird unter Zugrundelegung einer Kalibrierkurve berechnet, die zuvor nach bekannter· Methode erstell (; worden ist.
Standardlösung: Wasserstoffperoxid 1,32 mg/dl Empfindlichkeit: 0,151.
130029/030 2

Claims (1)

  1. Patentansprüche
    Wasserlösliche N-SuIfoalkylanilinderivate der allgemeinen Formel
    R1 ^ P==*
    in der R ein Wasserstoffatom, eine niedere Alkylgruppe oder SuIfoalkylgxmppe mit Z bis h Kohlenstoffatomen, Rp eine SuIfoalkylgruppe mit 2 bis k Kohlenstoffatomen, R„ ein Wasserstoffatom, eine Alkoxygruppe, Hydroxylgruppe oder niedere Alkylgruppe und R. ein Wasserstoffatoni, eine Alkoxygruppe oder eine niedere Alkylgruppe ist, sowie ihre Salze.
    130029/0302
    MÜNCHEN: TELEFON (Οθβ) 22Β56 KABEL: PROPINDUS- TELEX O5 24 24
    TELEFON (O3O) 8313088 ROPINDUS . TELEX O1 84067
    ί?. (ietnisch zur- Peroxidbestimniung, enthaltend ein N--SuI Γο-alkylanilinderivat nach Anspruch 1 als farbstot'fbildende Substanz.
    .'3. Verfahren zur Bestimmung1 von Peroxiden, dadurch gekennzeichnet, daß man als farbstoffbildende Substanz ein N-SuIfoalkylanilinderivat nach Anspruch 1 einsetzt.
    130029/0302
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