DE2954593C2 - - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft den Mikroorganismus Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426. Dieser Mikroorganismus ergibt bei aerober Kultivierung einen Metaboliten, M.139603. Dabei handelt es sich um eine neue Verbindung der Formel C₃₅H₅₃O₈Na. Die Verbindung ist ein Natriumsalz. Es hat die folgende, inzwischen aufgeklärte, chemische Konstitution:
Diese chemische Verbindung weist folgende Charakteristiken auf:

• a) Molekularformel C₃₅H₅₃O₈Na, gemessen durch Massenspektrometrie, welche ein Molekularion, M⁺, mit der Masse 624,361 zeigt (berechnet für C₃₅H₅₃O₈Na=624,364), und durch Elementaranalyse: C=67,5, H=8,8% (berechnet für C₃₅H₅₃O₈Na-C=67,3, H=8,5%);
• b) Infrarotspektrum in Nujol-Mull, wie in Fig. 1 gezeigt, mit charakteristischen Absorptionen bei 3300, 1725, 1645, 1565 und 915 cm^-1;
• c) magnetisches Protonenresonanzspektrum in Deuteriochloroform wie in Fig. 2 gezeigt;
• d) Ultraviolettspektrum in Methanollösung zeigt eine charakteristische Absorption bei 234 nm (ε =12 900) und 272 nm (ε =10 800);
• e) Schmelzpunkt 176-178°C;
• f) [α ] =-82° (c=0,2 in Methanol);

Die Verbindung kann dadurch hergestellt werden, daß man einen M.139603-bildenden Stamm von Streptomyces longisporoflavus in einem wäßrigen Nährmedium, das eine assimilierbare Kohlenstoffquelle enthält, unter Schütteln und unter aeroben Bedingungen bei einer Temperatur zwischen 22 und 32°C kultiviert, das so erhaltene Fermentationsgemisch mit einem mit Wasser unmischbaren organischen Lösungsmittel durch herkömmliche Maßnahmen extrahiert und das Lösungsmittel eindampft, worauf man durch herkömmliche Maßnahmen ggf. das Natriumsalz, M.139603, in die "freie Säure" überführt und die "freie Säure" ggf. in ein anderes Alkalimetallsalz überführt.

Die Verbindungen sind dazu in der Lage, den Anteil an Methan, der bei der Fermentation im Rumen erzeugt wird, zu verringern und den Anteil an Propionsäure in der Rinderrumenflüssigkeit zu steigern, weshalb sie wachstumsfördernde Eigenschaften bei Wiederkäuern besitzen dürften, da es allgemein bekannt ist, daß andere chemische Verbindungen, welche den Anteil an Propionsäure in der Rumenflüssigkeit erhöhen, eine erhöhte Wachstumsgeschwindigkeit ergeben, wenn sie an Rinder oder Schafe verabreicht werden. Die neuen erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen außerdem eine antibakterielle Aktivität gegenüber grampositiven Organismen. Schließlich besitzen sie auch bei einem in vitro-Test eine Anticoccidienaktivität gegen Eimeria tenella.

Der erfindungsgemäße Mikroorganismus ist ohne Beschränkung von der National Collection of Industrial Bacteria, Ministry of Agriculture, Fisheries and Food, Torry Research Station, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 8DG, Scotland, erhältlich. Er weist die folgende Beschreibung auf:

[Die verwendeten Medien wurden gemäß den Rezepten für das "International Streptomyces Project" (ISP) hergestellt und sind von Shirling E. G. & Gottlieb D. (International Journal of Systematic Bacteriology, 16 (3), 313-340, 1966) beschrie­ ben.]

Bedingungen für die Inkubation- ca. 25°C
- Tageslicht. ISP1Trypton-Hefe (aber mit zugesetztem Agar).  5 Tage- Dünn, etwas feucht, samtig, bräunlich. - Unterseite ungefärbt. 13 Tage- Dünn, samtig, etwas körnig, bräunlich. - Unterseite ungefärbt. ISP2Hefeextrakt/Malzextrakt-Agar.  5 Tage- Dünn, samtig, hellgrau. - Unterseite sehr blaß, gelbbraun. 13 Tage- Sauber, erhaben und gerunzelt, samtig, hellgelb/ braun/grau. - Unterseite rehbraun. ISP3Hafermehl-Agar.  5 Tage- Spärlich bis dünn, samtig, hellgelb/grau. - Unterseite nicht sichtbar. 13 Tage- Dünn, etwas erhaben, samtig, hellgrau. - Unterseite nicht sichtbar. ISP4Anorganische Salze/Stärke-Agar.  5 Tage- Dünn, bräunlich, etwas körnig. - Unterseite ungefärbt. 13 Tage- Dünn, etwas feucht, rehbraun. - Unterseite mehr oder weniger ungefärbt. ISP5Glycerin/Asparagin-Agar.  5 Tage- Dünn, etwas körnig, bräunlich. - Unterseite ungefärbt. 13 Tage- Dünn, samtig, hellgrau. - Unterseite ungefärbt. ISP7Tyrosin-Agar.  5 Tage- Spärlich bis dünn, etwas körnig, samtig, bräunlich/grau. - Unterseite ungefärbt. 13 Tage- Dünn, samtig, etwas erhaben, rehbraun. - Unterseite rehbraun/grau.

Bei ISP7 wird beim Altern die Kultur im allgemeinen röt­ lichbraun, zeigt aber einige Bereiche dunklerer Färbung zu­ sammen mit stärkerer Sporulation.

Allgemein
Es werden keine Melanine gebildet. An der Unterseite werden keine Pigmente gebildet. Es werden keine löslichen Pigmente gebildet. Die Sporen werden in offenen und dichten Spiralen erzeugt, die oftmals von der Hauptachse durch ein gerades Stück ge­ trennt sind, das "Hyphen" oder u. U. Sporenketten trägt. Die Sporen selbst sind durch das normale Mikroskop schwierig zu sehen, da sie sehr dicht miteinander verbunden sind. Die Sporenwandungen (E. M. auf 4% Uranylacetatpräparat) sind glatt.

Die dem Natriumsalz, M.139603, entsprechende "freie Säure" kann dadurch erhalten werden, daß man eine Lösung von M.139603 ansäuert und die saure Lösung mit einem mit Was­ ser unmischbaren organischen Lösungsmittel extrahiert. An­ dere Alkalimetallsalze können dadurch erhalten werden, daß man eine Lösung der "freien Säure" mit einem entsprechenden Alkalimetallhydroxid, wie z. B. Lithiumhydroxid, Kalium­ hydroxid, Caesiumhydroxid oder Rubidiumhydroxid, behandelt. Wenn Natriumhydroxid verwendet wird, dann wird M.139603 regeneriert, was demonstriert, daß durch diese Reaktionen keine strukturellen Änderungen entstehen.

Wie oben bereits festgestellt, besitzen die Verbindungen die Wirkung, daß sie den Anteil an Propionsäure in der Ru­ menflüssigkeit und insbesondere den Anteil an Propionsäure auf Kosten von Methan und/oder Essigsäure steigern. Dies ist bekanntermaßen ein nützlicher Effekt bei der Wieder­ käuerernährung, da Propionsäure ein wesentlich wirksamerer Vorläufer für Glucose ist, aus welcher das Tier seine Ener­ gie und sein Wachstum bezieht, als dies bei Essigsäure der Fall ist. Der Teil der Tiernahrung, der in Methan überführt wird, geht ganz einfach durch die Bildung von Blähungen ver­ loren. Somit ist also die Änderung des Rumenstoffwechsels, der durch diese Verbindungen erreicht wird, ein äußerst nützlicher Effekt. Es ist anzunehmen, daß hier­ durch die Wachstumsgeschwindigkeit und die Nahrungsausnut­ zung bei Wiederkäuern erhöht werden.

Diese Verbindungen werden vorzugsweise oral an die Tiere als Er­ gänzung zu deren normaler Nahrung verabreicht, d. h. also in Mischung mit einer gewöhnlichen festen Nahrung, in Nah­ rungswürfeln oder in Salzlecksteinen, als Lösung im Trink­ wasser oder, bei jungen Tieren, wie z. B. Lämmern oder Käl­ bern, als Lösung in Vollmilch oder Magermilch. Die Verbindungen werden in die Nahrung, die Nah­ rungswürfel, die Salzlecksteine, das Trinkwasser, die Voll­ milch oder die Magermilch in einem solchen Ausmaß einver­ leibt, daß jedes behandelte Tier 0,01 mg/kg Körpergewicht bis 30 mg/kg Körpergewicht je Tag, vorzugsweise 0,01 mg/kg bis 10 mg/kg je Tag, der Verbindung er­ hält.

Die Verbindungen können alternativ oral an Tiere in Form von intraruminalen Pellets oder Pillen mit langsamer Wirkstoff­ abgabe verabreicht werden, so daß das Tier eine ähnliche Menge je Tag der Verbindung aufnimmt.

Die Tiere können die Verbindungen während praktisch ihrer ganzen Wachstumsperiode oder nur während eines Teils ihrer Wachstumsperiode erhalten, beispielsweise während einer frühen Periode und/oder während einer Periode vor dem Schlachten. Die Zunahme der Wachstumsgeschwindigkeit, die dadurch erreicht wird, ermög­ licht es, Tiere auf Fleisch zu züchten, so daß sie in einer kürzeren Wachstumszeit auf Marktgewicht oder Schlachtge­ wicht als normal gebracht werden können. Das Verfahren er­ möglicht es jedoch auch, schwerere Tiere am Ende einer nor­ malen Wachstumsperiode zu erzielen. Die verbesserte Nahrungs­ ausnützung, die durch das Verfahren erreicht wird, ermöglicht es, daß die behandelten Tiere ein bestimm­ tes Gewicht erreichen, während sie weniger Nahrung als unbehandelte Tiere, die auf das gleiche Gewicht gezüchtet werden, verbrauchen. Bei optimalen Wachstumsförderungskon­ zentrationen wurden keinerlei Anzeichen irgendwelcher gif­ tigen Wirkungen durch die Verbindungen be­ obachtet.

Wie oben bereits festgestellt, besitzen die Verbindungen eine Aktivität gegen Coccidien. Diese wird durch einen Gewebskulturtest bei Hühnernierenzellen, die mit Sporozoiten von Eimeria tenella beimpft werden, durch das Standardtestverfahren, das in Journal of Parasito­ logy, Bd. 58, S. 664-668 (1972) beschrieben ist, demon­ striert. Bei diesem Test verhindert M.139603 das Wachstum der Sporozoiten bei einer Konzentration von 0,001 ppm. Außerdem zeigt M.139603 toxische Wirkungen bei den Gastzel­ len nur bei einer Konzentration von 10,33 ppm.

Die Verbindung M.139603 besitzt außerdem grampositive anti­ bakterielle Eigenschaften. Beispielsweise konnte gezeigt werden, daß sie das Wachstum von Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Clostridium welchii und Coryne­ bacterium acne bei einer Konzentration von 10 µg/ml ver­ hindert, weshalb sie als Wachstumsförderer bei Nichtwieder­ käuern, wie z. B. Geflügel und Schweinen, verwendet werden kann.

Die Verwendung der Erfindung wird durch die folgenden Beispiele näher er­ läutert:

Beispiel 1

Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426 wurde in einen 500-ml-Erlen­ mayerkolben auf Typton/Hefe-Agar gezüchtet, der folgendes enthielt:

Trypton - "Oxoid" L42 (Warenzeichen)0,5% G/V Hefeextrakt - "Oxoid" L21 (Warenzeichen)0,3% G/V

und der vorher in einem Autoklaven während 20 min bei Nor­ maltemperatur vorsterilisiert worden war. Der pH des Mediums betrug annähernd 7,0. Der Kolben wurde 120 h lang auf einem Rotationsschüttler bei 25°C geschüttelt.

Der Inhalt des Kolbens wurde dann dazu verwendet, weitere 10 ähnliche Kolben zu beimpfen, von denen jeder 200 ml des folgenden Mediums enthielt:

Glucosesirup3,0% G/V Calciumcarbonat0,25% G/V Natriumchlorid0,5% G/V Magnesiumsulfat-heptahydrat0,05% G/V Spurenelementekonzentrat0,1% V/V Bakteriologisches Pepton
("Oxoid" L37 - Warenzeichen)0,1% G/V Rinderextraktpulver
("Oxoid" L29, "Lab Lemco" - Warenzeichen)0,5% G/V Entsalztes Wasserauf 100

Der pH wurde auf 7,2 eingestellt, und das Medium wurde in einem Autoklaven während 20 min bei 120°C vorsterilisiert. Die beimpften Kolben wurden bei 25°C 120 st auf einem Rotations­ schüttler geschüttelt, und der Inhalt der Kolben wurde dann zusammengeschüttet und durch sorgfältige Zugabe von 0,1 n Salzsäure auf pH 3 eingestellt. Das Medium wurde 2mal mit 600 ml Ethylacetat extrahiert, die Extrakte wur­ den vereinigt und über Natriumsulfat getrocknet, und das Lösungsmittel wurde abgedampft, wobei ein öliger Rückstand (290 mg) erhalten wurde.

Der Ethylacetatextrakt wurde durch präparative Dünnschicht­ chromatografie auf zwei Silicaplatten ("Kieselgel" 60F-254 - Warenzeichen, 20×20 cm, 2 mm dick) unter Verwendung von Ethylacetat als Eluiermittel gereinigt. Die Ban­ de bei R _F =0,39 (annähernd) wurde von den Platten abge­ kratzt und mit Ethylacetat extrahiert, worauf das Lösungsmittel abgedampft wurde, so daß 21 mg eines viskosen Gummis erhalten wurden. Dieser zeigte in vitro eine antibakterielle Aktivität gegen S. aureus. Diese aktive Fraktion wurde weiter durch präparative Dünnschichtchromatografie auf Sili­ cagelplatten ("Kieselgel" 60F-254, 20×20 cm, 0,25 mm dick) unter Verwendung eines Gemischs aus Diethylether, Me­ thanol und Ameisensäure im Vol.-Verhältnis von 95 : 4 : 1 ge­ reinigt. Die Bande bei R _F =0,55 (annähernd) wurde von der Platte abgekratzt und mit Ethylacetat extrahiert, wobei nach Abdampfen des Lösungsmittels 9 mg eines viskosen Gummis zurückblieben. Der Gummi wurde in das Natriumsalz, M.139603, überführt, indem eine Chloroformlösung mit einer Lösung von 0,1 m Natriumhydroxid geschüttelt wurde. Die Chloroformschicht wurde abgetrennt und über Natriumsulfat getrocknet. Das Lösungsmittel wurde abgedampft, wobei 8 mg M.139603 als weißer Feststoff erhalten wurden, Fp 129-132°C. Das Infrarotspektrum (Fig. 1) zeigte die folgenden Maxima: 3300, 1725, 1645, 1565 und 915 cm^-1. Elementaranalyse: Ge­ funden C=67,5, H=8,8%; berechnet für C₃₅H₅₃O₈Na C=67,3, H=8,5. Massenspektrum: M⁺=624,361, berechnet für C₃₅H₅₃O₈. Na=624,364. R _F =0,39 (Dünnschichtchromatografie auf 60F-254-Platten mit einer Dicke von 0,25 mm, entwickelt mit Ethylacetat, sichtbar gemacht als brauner Fleck nach Bespritzen mit 3 n Schwefelsäure und Erhitzen auf 100°C. Das magnetische Protonenresonanzspektrum in Deu­ teriochloroform ist in Fig. 2 angegeben.

Beispiel 2

Das Vermögen von M.139603, die Bildung von Methan im Rumen von Wiederkäuern zu inhibieren und den Anteil des Propionats auf Kosten des Acetats (Ac/Pr) in den gebildeten flüchtigen Fettsäuren (VFA) zu erhöhen, wird wie folgt demonstriert:

Rumenflüssigkeit wird in der üblichen Weise von zwei Stieren gesammelt, die mit der gleichen Heu- und Konzentrat-Nahrung gefüttert werden. Die Probenzeit wird so weit wie möglich standardisiert, und die Flüssigkeit von den beiden Tieren wird auf einer 50/50-Basis vereinigt. Große teilchenförmige Stoffe werden durch Filtrieren der gesammelten Flüssigkeit durch vier Schichten eines Muslin-Tuchs entfernt. Das Fil­ trat wird dann im Verhältnis von 1 Volumen Filtrat zu 3 Volumina künstlicher Rumenflüssigkeit verdünnt (hergestellt nach der Vorschrift von G. L. Bales et al., Journal of Diary Science, 1976, Bd. 59, S. 1850, wobei jedoch die Essigsäure weggelassen wird), und der pH des Gemisches wird mit gesättigter wäßriger Natriumcarbonatlösung auf 6,9-7,0 einge­ stellt. Proben von 50 ml dieses Gemisches werden in konische 100 ml-Kolben, die 0,5 g getrocknetes gemahlenes Heu ent­ halten, abgegeben, und jeder Kolben wird dazu verwendet, eine Testverbindung bei einer bestimmten Konzentration zu testen.

Die Testverbindung wird dem konischen Kolben als Lösung in Ethanol zugegeben, der Kolben wird mit Kohlendioxidgas ge­ spült, mit einer Suba-Dichtung zugestöpselt und 15-16 st bei 39°C inkubiert. Nach 1 st wird eine Nadel mit einer engen Bohrung durch die Suba-Dichtung eingeführt, um den Gasdruck wegzunehmen, worauf die Nadel 30 min vor Beendigung der Inkubation herausgezogen wird. Die Fermentation wird dann abgebrochen, indem der Kolben in Eis gestellt wird, und nach einer Kühlzeit von 15 min wird das Gas über der Flüssigkeit durch Gaschromatografie auf Methan analysiert. Die Kolbeninhalte werden dann durch einen vorher getrockne­ ten gesinterten Glastrichter filtriert. Drei Proben des Fil­ trats werden durch Gaschromatografie auf VFA analysiert, und durch Vergleich mit den vor der Inkubation bestimmten VFA-Werten netto die VFA (Acetat und Propionat), die wäh­ rend der Inkubation gebildet werden, bestimmt.

Es wurden die folgenden Resultate erhalten, ausgedrückt als % von Vergleichswerten, die erhalten werden, wenn keine Testverbindung verwendet wird. Monensin, ein bekannter Wachs­ tumsförderer, der aufgrund eines Effekts auf den Rumen wirkt, ist als positiver Vergleich beigeschlossen.

Beispiel 3

Steptomyces longisporoflavus NCIB 11426 wurde auf Schräg­ kulturen auf ISP-7-Agar (45 ml) 7 Tage lang bei 30°C ge­ züchtet. Drei Schrägkulturen wurden einzeln in drei Kolben mit 100 ml sterilem Wasser gekratzt, und die so erhaltenen Suspensionen wurden dazu verwendet, drei 2 l-Kolben zu be­ impfen, von denen jeder 1 l des folgenden Mediums enthielt:

Glycerin3,0% G/V Bakteriologisches Pepton
("Oxoid" L37 - Warenzeichen)2,0% G/V KH₂PO₄0,024% G/V MgSO₄ · 7 H₂O0,02% G/V Spurenelementekonzentrat0,1% V/V Kreide0,1% G/V Entsalztes Wasserauf 1 l

welches in einem Autoklaven bei Normaldruck während 1/2 st vorsterilisiert worden war, wobei der pH annähernd 6,7 be­ trug.

Die drei 2 l-Kolben wurden 3 Tage auf einem Rotationsschüttler bei 30°C geschüttelt. Die Inhalte der drei Kolben wurden dann vereinigt und dazu verwendet, einen Fermentator aus rostfreiem Stahl, der 30 l eines sterilisierten Mediums der folgenden Zusammensetzung enthielt, zu beimpfen:

Glycerin3,0% G/V Sojamehl BSP 701,0% G/V Kreide0,25% G/V Cerelose3,0% G/V NaCl0,5% G/V MgSO₄ · 7 H₂O0,05% G/V Spurenelementekonzentrat0,1% V/V Destilliertes Wasserauf 30 l

Der Inhalt des Fermentators wurde 70 st bei 30°C gerührt, wobei eine Turbine mit 4 flachen Schaufeln verwendet wurde, die mit 350 U/m lief. Dabei wurde mit einer Geschwindigkeit von 15 l/min belüftet. Dem Gemisch waren vor der Behandlung im Autoklaven 30 ml "Silcolapse" (Warenzeichen), ein Sili­ con-Antischäummittel, zugegeben worden. Der pH der Ernte war 7,9, und das erhaltene Fermentationsgemisch (22 l) wurde mit einem gleichen Volumen Ethylacetat gemischt und ge­ schüttelt. Nach 30 min wurde das Gemisch in einer Zentrifuge getrennt, worauf der Ethylacetatextrakt (annähernd 18 l) über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und filtriert wurde. Das Filtrat wurde unter vermindertem Druck konzentriert, wobei 10,7 g eines öligen Rückstands erhalten wur­ den.

M.139603 wurde aus dem obigen Konzentrat durch das folgende Verfahren erhalten:

Der ölige Rückstand (10,7 g) wurde in dem geringsten Volumen Ethylacetat aufgelöst, und die erhaltene Lösung wurde auf die Oberseite einer Kolonne von neutralem Aluminiumoxid (Woelm N, 200 g, 18 cm×4 cm), die mit Ethylacetat vorbereitet worden war, aufgegeben. Die Kolonne wurde zunächst mit Ethylacetat, dann mit einem 50 : 50-Volumengemisch aus Ethylacetat und Methanol und schließlich mit Methanol elu­ iert. Es wurden die folgenden Fraktionen gesammelt, nach­ dem die Lösungsmittelfront aus der Kolonne ausgetreten war:

Von den Fraktionen 7-11 konnte durch Dünnschichtchromatografie auf Silicagel und bei Entwicklung mit 20% V/V Aceton in Petrolether (Kp 60-80°C) gezeigt werden, daß sie M.139603 (R _F ∼0,22) enthielten, weshalb sie vereinigt und eingedampft wurden, wobei 840 mg eines viskosen Gummis ent­ standen, der weiter durch präparative Dünnschichtchromatografie auf Silica ("Kieselgel 60F250" - Warenzeichen, 40 cm×20 cm, 2 mm dick) unter Verwendung eines Gemischs aus 20% V/V Aceton und Petrolether (Kp 60-80°C) als Eluiermittel gereinigt wurde. Die im UV sichtbare Bande bei R _F ∼0,22 (annähernd) wurde von den beiden Platten abge­ kratzt und mit Ethylacetat extrahiert, und der Extrakt wur­ de zur Trockene eingedampft, wobei 240 mg eines viskosen Gummis erhalten wurden, der bei Zusatz von Petrolether (Kp 60-80°C) kristallisierte. Das Material wurde aus Petrol­ ether (Kp 60-80°C) umkristallisiert, wobei M.139603 in Form farbloser Kristalle erhalten wurde, die nach dem Abfiltrieren und Trocknen 210 mg wogen und einen Fp von 176-178°C aufwiesen. Das UV-Spektrum in Ethanol zeigte Absorptionen bei 234 nm (ε=12900) und 272 nm (ε=10800). Das IR-Spektrum und das magnetische Kernresonanzspektrum waren mit denjenigen des Produkts von Beispiel 1 identisch.

Beispiel 4

40 mg M. 139603 wurden in einem Gemisch aus 10 ml Aceton und 2 ml Wasser aufgelöst, 1 ml 2 n Salzsäure wurde zugege­ ben, und das Gemisch wurde 5 min heftig gerührt. 20 ml destilliertes Wasser wurden zugegeben, und das Gemisch wurde 2mal in 10 ml Dichloromethan extrahiert. Die organische Schicht wurde abgetrennt und mit 2 n Salzsäure und dann mit destilliertem Wasser gewaschen. Die Dichloromethanschicht wurde dann konzentriert, wobei 33 mg eines viskosen Gummis, der M.139603 entsprechenden "freien Säure", erhalten wurden. Elementaranalyse: Gefunden C=69,5, H=9,1; berechnet für C₃₅H₅₄O₈ C=69,8, H=9,0; IR-Spektrum in Nujol-Mull, wie in Fig. 3 gezeigt, enthielt charakteristische Absorptionen bei 3500, 1765, 1685, 1650, 1575 cm^-1. Das magnetische Pro­ tonenresonanzspektrum in Deuteriochloroform ist in Fig. 4 gezeigt.

Beispiel 5

30 mg der M.139603 entsprechenden "freien Säure" wurden in einem Gemisch aus 7 ml Tetrahydrofuran und 1 ml Wasser auf­ gelöst. 2 ml eines 2n-Alkalimetallhydroxids, XOH, wurden dem wäßrigen Tetrahydrofurangemisch zugegeben, das dann 10 min heftig gerührt wurde. 10 ml Wasser wurden zugesetzt, und die Lösung wurde 2mal in 15 ml Ether extrahiert. Die Ether­ extrakte wurden vereinigt und eingedampft, wobei das dem Natriumsalz M.139603 entsprechende Alkalimetallsalz erhalten wurde.

Wenn X für Kalium stand, dann wurde das Kaliumsalz erzeugt, Fp 146-150°C, Molekularformel C₃₅H₅₃O₈ . K, ermittelt durch Massenspektrometrie, welche ein Molekularion, M⁺, mit einer Masse von 640,335 zeigt (berechnet für C₃₅H₅₃O₈ . K= 640,338), und durch Elementaranalyse: Gefunden C=65,7%, H=8,5; berechnet für C₃₅H₅₃O₈ . K C=65,6%, H=8,3%).

Wenn X für Rubidium steht, dann wird das Rubidiumsalz gebildet, Fp 95-120°C, Molekularformel C₃₅H₅₃O₈ . Rb, ermittelt durch Massenspektrometrie, welche ein Molekularion, M⁺, mit einer Masse von 686,279 (berechnet für C₃₅H₅₃O₈ . Rb= 686,286) zeigt.

Beispiel 6

Das Vermögen von M.139603, den Anteil an Propionat auf Kosten von Acetat in der Rumenflüssigkeit eines Schafs zu er­ höhen, wurde wie folgt demonstriert:

23 Schafe wurden einzeln gehalten und mit der gleichen Nahrung von 1 kg getrockneten Graswürfeln je Tier und je Tag, aufgeteilt in zwei Portionen je Tag, gefüttert. Die Tiere wurden willkürlich wie folgt zusammengefaßt: 13 als negativer Vergleich, 5 als positiver Vergleich unter Verwendung von Nonensin, einem bekannten Rumenmanipulator, und 5 für die Dosierung mit M.139603. Die behandelten Tiere erhielten Monensin oder M.139603 oral in einer Rate von 0,5 mg/kg an einem jeden von vier aufeinanderfolgenden Tagen. Proben der Rumenflüssigkeit wurden durch Magenkanülen 6 st nach der Be­ handlung am 4. Tag gesammelt. Die Rumenflüssigkeitsproben wurden dann gemäß der Vorschrift von Beispiel 2 auf Acetat und Propionat analysiert. Die erhaltenen Resultate sind wie folgt:

Das Ansprechen im Hinblick auf Acetat durch M.139603 ist bei p <0,02 gegenüber dem positiven Vergleich, Monensin, bemerkenswert, und das Ansprechen im Hinblick auf Propionat durch M.139603 ist bei p <0,001 gegenüber dem positiven Vergleich, Monensin, bemerkenswert.

Claims (1)

1. Streptomyces longisporoflavus NCIB 11426.