DE2918711C2

DE2918711C2 -

Info

Publication number: DE2918711C2
Application number: DE2918711A
Authority: DE
Inventors: Masaru Otani; Shuzo Satoi; Naoki Muto; Tetsu Saito; Tadashiro Fujii; Seiji Katsumata; Mitsuo Hayashi; Masaru Shizuoka Jp Ono
Original assignee: Toyo Jozo KK
Current assignee: Asahi Kasei Corp
Priority date: 1978-05-10
Filing date: 1979-05-09
Publication date: 1987-08-06
Also published as: CA1125203A; FR2425444B1; FR2425444A1; GB2020647B; NL192621C; DE2918711A1; US4291021A; NL192621B; IT7922536A0; NL7903601A; DE2954218C2; GB2020647A; IT1113372B; ES480405A1

Description

Die Erfindung betrifft neue Macrolid-Antibiotika und deren pharmakologisch verträgliche Salze, die eine ausgezeichnete antibakterielle und antimycoplasmale Wirkung gegen Mikroorganismen, wie Staphylococcus oder Mycoplasma, zeigen, ferner ein Verfahren zur Gewinnung dieser Antibiotika und diese Antibiotika enthaltende pharmazeutische Präparate.

Aus Bodenproben auf einer Kartoffelfarm in Unazuki-cho, Shimoshinkawa-gun (Distrikt), Präfektur Toyama (Japan) wurde ein zur Gattung der Mikromonospora gehörender Actinomyceten- Stamm gefunden, der als "Micromonospora species A 11725" bezeichnet worden ist. Dieser Stamm ist beim Institute of Fermentation Research, Agency of Industry and Technology, Japan, hinterlegt worden und hat die Bezeichnung "FERM-P Nr. 4488" erhalten. Nachdem die japanische Hinterlegungsstelle aufgrund des Budapester Vertrages als internationale Hinterlegungsstelle anerkannt worden ist, wurde der hinterlegte Stamm am 2. Mai 1985 von FERM als internationale Hinterlegung FERM BP-705 registriert.

Es wurde gefunden, daß dieser Mikroorganismen-Stamm Macrolid- Antibiotika zu erzeugen vermag.

Die erfindungsgemäßen Antibiotika sind Macrolid- Antibiotika mit einem aldehydgruppenfreien, 16-gliedrigen Lactonring, Desosamin als Aminozucker und 6-Desoxy-2,3-di- (O-methyl)-hexose oder 6-Desoxy-(2 oder 3)-O-methyl-hexose als Neutralzucker. Zu ihrer genauen Definition vergleiche die Patentansprüche 1 bis 3.

Aus dem beim Züchten des Micromonospora species A 11725 erhaltenen Medium hat man die Macrolid-Antibiotika A 11725 I, A 11725 II und A 11725 III beim fraktionierten Auftrennen erhalten.

Das Macrolid-Antibiotikum A 11725 I weist folgende Eigenschaften auf:

Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₇H₆₁NO₁₂; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums711 Schmelzpunkt:103 bis 107°C [α]_D:-40,0°C (C=1, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3440, 2960
2920, 2875
2845, 2780
1715, 1685
1650, 1645
1620, 1460
1375, 1355
1325, 1275
1255, 1230
1170, 1110
1080, 1045
980, 955
930, 885
855
830 cm^-1

Farbreaktion
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv;
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's Reaktion
und Eisen(III)-Chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser, Methanol,
Aceton, Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser

Das Macrolid-Antibiotikum A 11725 II weist folgende Eigenschaften auf:

Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₇H₆₁NO₁₃; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums:727; Schmelzpunkt:102 bis 106°C; [α]_D:- 31,0°C (C = 1, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3460, 2960
2930, 2880
2830, 2780
1715, 1690
1645, 1620
1455, 1375
1350, 1325
1270, 1255
1230, 1165
1110, 1075
1040, 980
955, 930
885, 855
830 cm^-1

Farbreaktion:
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's-Reaktion und Eisen (III)-Chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser; Methanol, Aceton und Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser

Das Macrolid-Antibiotikum A 11725 III weist die folgenden Eigenschaften auf:

Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₆H₅₉NO₁₁; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums681; Schmelzpunkt:99 bis 102°C; [α]_D:-2,3°C (C=1,0, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3600, 2970
2930, 2880
1710, 1675
1645, 1590
1460, 1380
1350, 1320
1275, 1230
1170, 1070
1050, 980
960, 930
835,
750 cm^-1

Farbreaktion:
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv,
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's-Reaktion und Eisen(III)- Chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser, Methanol, Aceton Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser und unlöslich in Hexan.

In den Zeichnungen sind die Infrarot-, Ultraviolett- und kernmagnetischen Resonanz-Spektren der vorgenannten Verbindungen dargestellt. Es zeigen:

Fig. 1 und Fig. 2 die IR-Spektren der Macrolid-Antibiotika A 11725 I und II;

Fig. 3 und Fig. 4 die UV-Spektren der Macrolid-Antibiotika A 11725 I und II;

Fig. 5 und Fig. 6 die NMR-Spektren der Macrolid-Antibiotika A 11725 I und II;

Fig. 7 das UV-Spektrum des Macrolid-Antibiotikums A 11725 III;

Fig. 8 das IR-Spektrum des Macrolid-Antibiotikums A 11725 III;

Fig. 9 das NMR-Spektrum des Macrolid-Antibiotikums A 11725 III

Die physikalisch-chemischen Eigenschaften dieser Macrolid- Antibiotika sind in der nachstehenden Tabelle I angegeben.

Aus den verschiedensten Eigenschaften wird geschlossen, daß die Antibiotika zur Gruppe von basischen Macrolid-Antibiotika gehören, die noch nicht bekannt gewesen sind.

Für die Macrolid-Antibiotika konnten nachträglich die nachstehenden Strukturformeln sichergestellt werden:

A 11725 I

A 11725 II

A 11725 III

Tabelle I

Die Macrolid-Antibiotika vorliegender Erfindung zeigen antibakterielle und antimycoplasmale Spektren, wie aus der nachstehenden Tabelle II ersichtlich, wobei die Agarverdünnungsmethode angewandt worden ist.

Demzufolge bilden einen weiteren Gegenstand vorliegender Erfindung pharmazeutische Präparate, die durch einen Gehalt an mindestens einem Macrolid-Antibiotikum A 11725 I, II oder III pharmakologisch verträglichem oder dessen Salz gekennzeichnet sind.

Die Salze lassen sich üblicherweise mit Mineralsäuren oder organischen Säuren, beispielsweise mit Weinsäure, Citronensäure, Bernsteinsäure oder dergleichen, herstellen.

Die Macrolid-Antibiotika vorliegender Erfindung können oral in Form von Tabletten oder Pulvern oder auch mittels einer intravenösen Injektion verabreicht werden. Als Tagesdosis bei Erwachsenen werden etwa 400 bis 2000 mg Antibiotikum als wirksam gegen Infektionen der Atemwege angesehen, die durch grampositive Mikroorganismen, wie Staphylokokken, verursacht worden sind. Bei Toxizitätsmessungen hat man bei Mäusen einen LD₅₀-Wert von 2000 mg oder höher bei oraler Verabreichung gefunden. Demzufolge lassen sich die erfindungsgemäßen Macrolid-Antibiotika als Futtersatzmittel und zur Therapie von Tieren verwenden.

Tabelle II

Mindesthemmkonzentration

Die Macrolid-Antibiotika nach vorliegender Erfindung lassen sich auf biologischem Wege durch Züchten des Micromonospora species A 11725 gewinnen. Dieser Mikroorganismus hat die nachstehenden mikrobiologischen Eigenschaften.

I. Morphologische Eigenschaften

Das Mycelsubstrat wächst in die Länge, verläuft wellenförmig, ist einfach verzweigt und weist einen Durchmesser von 0,6 bis 0,8 µm auf. Es wird keine Zerteilung des Mycels beobachtet. Es bildet sich eine Spore an der Spitze eines jeden kurzen Sporenträgers, der aus dem Mycelstubstrat wächst. Diese Spore ist kugelförmig bis oval mit einer Größe von 1,0 bis 1,5 µm, hat dornartige Vorsprünge, was den Sporen ein konfettiartiges Aussehen verleiht. Auf einem Agarmedium kann manchmal je nach dessen Zusammensetzung ein nicht ausgewachsenes Luftmycel gebildet werden, oder es kann sich auch eine schwarze Sporenschicht auf der Oberfläche der Kolonie bilden.

II. Wachstum auf verschiedenen Medien

Aus der nachstehenden Tabelle III sind die Ergebnisse von Beobachtungen ersichtlich, die nach einer 20-tägigen Züchtung bei 30°C auf verschiedenen Medien bei den gezüchteten Produkten gemacht worden sind. Die Angabe der Farben erfolgt nach der Farbklassifikation gemäß dem "Color Harmony Manual", 4. Auflage, 1958, Container Corporation of America.

III Physiologische Eigenschaften

1) Assimilierbarkeit von Kohlenstoffquellen:
assimilierbar:D-Arabinose, D-Glucose, D-Fructose, D-Mannose, Sacharose, Trehalose, Stärke; schwach assimilierbar:L-Arabinose, D-Cellobiose, D-Ribose; nicht assimilierbar:D-Galactose, β-Lactose, a-Melibiose, D-Melezitose, L-Rhamnose, Raffinose, L-Sorbose, D-Xylose, Glycerin, Salicin, Dulcit, Inosit, D-Mannit, D-Sorbit, Cellulose. (Da die genannten Mikroorganismen nur schlecht auf einem Pridham-Gottlied-Agar-Medium mit einem Gehalt an D-Glucose gezüchtet werden können, wird ein Medium mit einem Gehalt von 0,5% Hefeextrakt und 1,5% Agar als Grundmedium verwendet.)
2) Wachstumstemperatur:15 bis 45°C; 3) Gelatineverflüssigung:Verflüssigung im Glucose-Pepton- Gelatine-Medium; 4) Stärkehydrolyse:Hydrolyse auf Stärke-anorganisches- Salz-Agar-Medium; 5) Magermilch:peptonisiert und coaguliert; 6) Erzeugung von
Melanoid-Pigmenten:nicht erzeugt auf Tyrosin-Agar und Pepton-Hefe-Eisen-Agar; 7) Salzbeständigkeit (nach der Methode gemäß Inter. J. System. Bacteriol. 21, 240-247, 1971):

8) Zersetzung von Cellulose:nicht zersetzt; 9) Erzeugung von Nitrit
(unter Verwendung eines
organischen Mediums gemäß
Inter. J. System.
Bacteriol.
21, 240-247, 1971:nicht erzeugt.

Wie aus dem Vorstehenden hervorgeht, weist der Stamm A 11725 Sporen auf, die jeweils an der Spitze des Sporenträgers einzeln wachsen, der aus dem verzweigten Mycelsubstrat erzeugt wird. Der Stamm erzeugt praktisch kein Luftmycel und ist ein bei mittlerer Temperatur wachsender Mikroorganismus. Aus diesem Grunde gehört dieser Mikroorganismus zur Gattung Micromonospora.

Die antibiotisch wirkenden Substanzen A 11725 I bis III können durch Züchten des vorgenannten Stammes, der als Micromonospora species A 11725 bezeichnet worden ist, in einem Medium gewonnen werden, das die üblicherweise zur Züchtigung von Mikroorganismen unter aeroben Bedingungen verwendeten Bestandteile enthält.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Gewinnung der Macrolid- Antibiotika A 11725 I, II und III
ist demgemäß dadurch gekennzeichnet, daß man den Stamm Micronospora sp. FERM BP-705 unter aeroben Bedingungen in einem Medium mit mindestens einer assimilierbaren Kohlenstoffquelle und mindestens einer assimilierbaren Stickstoffquelle züchtet, die Mikroorganismenzellen und andere Festsubstanzen durch Filtrieren oder Zentrifugieren entfernt, dann das Filtrat unter Verwendung eines organischen Lösungsmittels, das die Macrolid-Antibiotika A 11725 I, II und III löst und mit Wasser kaum mischbar ist, einer Extraktion unterwirft, den Lösungsmittelextrakt durch Eindampfen unter vermindertem Druck auf ein Hundertstel bis auf ein Zweihundertstel seines ursprünglichen Volumens einengt, dann mittels Säure auf einen pH-Wert von 1,0 bis 3,0 einstellt, die wäßrige Schicht abtrennt, mittels einer alkalischen Lösung auf einen pH-Wert von 7,8 bis 9,0 einstellt, erneut einer Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel unterwirft, durch Konzentrieren dieses Extraktes durch Abdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck bis zur Trockene ein Rohprodukt, das die Macrolid- Antibiotika A 11725 I, II und III enthält, erhält, das Rohprodukt mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Silicagel oder mittels Gegenstromverteilung fraktioniert, jede Fraktion der Dünnschichtchromatographie zur Bestimmung der darin enthaltenen Substanzen unterwirft, die Fraktionen mit einem Gehalt an reinem Macrolid-Antibiotikum A 11725 I, II und III sammelt und unter vermindertem Druck zur Trockene eindampft.

Als Züchtungsmedium kann man entweder ein festes oder ein flüssiges Medium verwenden. Zur Gewinnung im großen Maßstab, wie in der Industrie, wird ein flüssiges Medium, insbesondere ein wäßriges Medium, bevorzugt. In diesen Medien lassen sich als Kohlenstoffquelle Glucose, Stärke, Glycerin, Saccharose, Melassen, Dextrin u. dgl., verwenden. Als Stickstoffquelle sind Pepton, Fleischextrakt, Sojabohnenpulver und hydrolysiertes Casein geeignet. Jedoch können auch Baumwollsaatrückstände, Maisquellwasser, Nitrate und Ammoniumsalze verwendet werden. Des weiteren kann man auch andere anorganische Verbindungen mit verwenden, die als Kationen beispielsweise Natrium, Kalium, Magnesium, Calcium, Kobalt, Mangan oder Eisen, und/oder als Anionen beispielsweise Chlorid, Sulfat, Phosphat oder Acetat enthalten. Des weiteren kann zur Beschleunigung des Wachstums der Mikroorganismen getrocknete Hefe oder Hefeextrakt verwendet werden. Zur Einstellung des pH-Wertes des Mediums kann Calciumcarbonat zugegeben werden. Um ein Schäumen während des Züchtens zu unterdrücken, kann man außerdem eine geeignete Menge eines Schaumunterdrückungsmittels, wie Silicone, tierische oder pflanzliche Öle u. dgl., zusetzen. Ein besonders bevorzugtes Medium nach vorliegender Erfindung enthält Glucose, Dextrin, entfettetes Sojabohnenpulver, Calciumcarbonat und Kobaltchlorid.

Die Züchtung kann unter den für die Gewinnung von antibiotischen Substanzen üblicherweise angewendeten Bedingungen durchgeführt werden. Die Züchtungstemperatur kann im Bereich von 20 bis 37°C, vorzugsweise von 26 bis 30°C, liegen. Je nach den Züchtungsbedingungen variiert die Dauer der Züchtung, die im allgemeinen 4 bis 5 Tage beträgt.

Vom Standpunkt einer großtechnischen Gewinnung ist es zweckmäßig, die Züchtung unter Belüftung mittels eines Rührers in einem Gärtank durchzuführen.

Als organische Lösungsmittel für die Extraktion können beispielsweise chlorierte Kohlenwasserstoffe, wie Chloroform, Dichloräthylen, Trichloräthylen u. dgl., oder aliphatische Säureester, wie Äthylacetat, Butylacetat, Amylacetat u. dgl., verwendet werden.

Das durch Einengen erhaltene Konzentrat wird dann beispielsweise mit Chlorwassersäure, Schwefelsäure oder Essigsäure, auf einen pH-Wert von 1,0 bis 3,0 eingestellt. Natriumhydroxid-, Kaliumhydroxid- oder Ammoniaklösung eignen sich zur Einstellung auf einen pH-Wert von 7,8 bis 9,0.

Beispiel Gewinnung der Macrolid-Antibiotika A 11725 I, II und III

In einen 500 ml fassenden Erlenmeyer-Kolben werden 100 ml eines Mediums vom pH 7,0 gegeben, das 1% Dextrin, 1% Glucose, 0,5% hydrolysiertes Casein, 0,5% Hefeextrakt und 0,1% Calciumcarbonat enthält. Dann wird das Medium durch 20minütiges Erhitzen auf 120°C sterilisiert. Zehn Ampullen werden mit diesem Medium befüllt und dann wird jeweils eine Platinöse voll Züchtungsbouillon von Micromonospora species A 11725 überimpft, der auf einem Schrägagar gezüchtet worden ist. Die Ampullen werden 120 Stunden bei 30°C geschüttelt. Dann werden die Impfkulturen in ein Gärgefäß, welches 20 Liter eines heißsterilisierten Mediums der gleichen Zusammensetzung wie vorstehend beschrieben, überführt, und die Züchtung erfolgt 72 Stunden bei 30°C unter aseptischer Belüftung von 20 Litern je Minute und unter Rühren mit 300 UpM. Anschließend werden 10 Liter des erhaltenen Züchtungsmediums in einen 250 Liter-Gärtank überführt, der 200 Liter eines hitzesterilisierten Mediums vom pH 7,2 mit einem Gehalt von 5% Dextrin, 0,5% Glucose, 3% entfetteten Sojabohnenpulvers und 0,2% Calciumcarbonat enthält. Die Züchtung wird 120 Stunden bei 30°C unter Rühren mit 250 UpM und unter aseptischer Belüftung von 100 Litern je Minute durchgeführt. Man erhält 190 Liter Produktlösung.

Die vorgenannten 190 Liter Produktlösung werden filtriert, um Mikroorganismenzellen und andere Feststoffe zu entfernen. Man erhält 160 Liter Filtrat, das mit der gleichen Menge Äthylacetat extrahiert wird, so daß man 160 Liter Äthylacetatlösung mit einem Gehalt an den gewünschten Verbindungen erhält. Diese Lösung wird auf 50 Liter unter vermindertem Druck eingeengt, das Konzentrat wird mit 20 Litern wäßriger Chlorwasserstoffsäure vom pH 2,5 vermischt. Dadurch werden die Substanzen in die wäßrige Schicht überführt. Anschließend wird die wäßrige Chlorwasserstofflösung mit konzentriertem Ammoniak auf pH 8,5 eingestellt und einer Extraktion mit 20 Litern Chloroform unterworfen. Die Chloroformschicht wird zur Trockne eingedampft. Man erhält 8,5 g Rohprodukt.

Diese 8,5 g Rohprodukt werden in 50 ml Chloroform gelöst. Die erhaltene Lösung wird an einer Silicalgelsäule (3 cm x 55 cm) adsorbiert, die zuvor mit Chloroform gefüllt worden ist. Anschließend wird mit einem Lösungsmittelgemisch aus Chloroform, Methanol und 28prozentigem Ammoniak im Verhältnis 20 : 1 : 0,1 entwickelt und dabei 15 ml-Fraktionen aufgefangen. Die in jeder Fraktion enthaltene Verbindung wird durch ihre antibakterielle Wirkung unter Verwendung von Bacillus subtilis und durch Dünnschichtchromatographie unter Verwendung eines Gemisches aus Chloroform, Methanol und 7prozentigem Ammoniak im Verhältnis 40 : 12 : 20 als Entwicklungsmittel (untere Schicht) nachgewiesen. Die Fraktionen mit der jeweils gleichen Verbindung werden gesammelt.

Die Fraktionen von Nr. 61 bis Nr. 78 enthalten nur die als Macrolid-Antibiotikum A 11725 I identifizierte Substanz. Diese Fraktionen werden zur Trockne eingedampft. Man erhält 1,2 g des Macrolid-Antibiotikums A 11725 I.

Die Fraktionen Nr. 126 bis 160 enthalten nur die als Macrolid- Antibiotikum A 11725 II identifizierte Substanz. Diese Fraktionen werden ebenfalls zur Trockne eingedampft, und man erhält 1,7 g des Macrolid-Antibiotikums A 11725 II.

Die Fraktionen Nr. 241 bis 320 enthalten nur die als Macrolid- Antibiotikum A 11725 III identifizierte Substanz. Diese Fraktionen werden ebenfalls zur Trockne eingedampft, und man erhält 0,2 g des Macrolid-Antibiotikums A 11725 III.

Claims

1. Macrolid-Antibiotikum A 11725 I mit den folgenden Eigenschaften: Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₇H₆₁NO₁₂; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums:711 Schmelzpunkt:103 bis 107°C [α]_D:-40,0°C (C=1, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3440, 2960
2920, 2875
2845, 2780
1715, 1685
1650, 1645
1620, 1460
1375, 1355
1325, 1275
1255, 1230
1170, 1110
1080, 1045
980, 955
930, 885
855,
830 cm^-1Farbreaktion:
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv;
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's Reaktion
und Eisen(III)-Chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser, Methanol,
Aceton, Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser;
und dessen pharmakologisch verträgliche Salze.

2. Macrolid-Antibiotikum A 11725 II mit folgenden Eigenschaften: Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₇H₆₁NO₁₃; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums:727; Schmelzpunkt:102 bis 106°C; [α]_D:-31,0°C (C = 1, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3460, 2960
2930, 2880
2830, 2780
1715, 1690
1645, 1620
1455, 1375
1350, 1325
1270, 1255
1230, 1165
1110, 1075
1040, 980
955, 930
885, 855
830 cm^-1Farbreaktion:
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's-Reaktion und Eisen- III-chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser; Methanol, Aceton Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser;
und dessen pharmakologisch verträgliche Salze.

3. Macrolid-Antibiotikum A 11725 III mit den folgenden Eigenschaften: Aussehen:weißes Pulver; Summenformel:C₃₆H₅₉NO₁₁; Molekulargewicht aufgrund des Massenspektrums:681; Schmelzpunkt:99 bis 102°C; [α]_D:-2,3°C (C = 1,0, Methanol); Infrarot-Absorptionsspektrum mit Absorptionsbanden
bei Wellenlängen von etwa:3600, 2970
2930, 2880
1710, 1675
1645, 1590
1460, 1380
1350, 1320
1275, 1230
1170, 1070
1050, 980
960, 930
835,
750 cm^-1

4. Verfahren zur Gewinnung der Macrolid-Antibiotika A 11725 I, II und III nach den Ansprüchen 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß man den Stamm Micronospora sp. FERM BP-705 unter aeroben Bedingungen in einem Medium mit mindestens einer assimilierbaren Kohlenstoffquelle und mindestens einer assimilierbaren Stickstoffquelle züchtet, die Mikroorganismenzellen und andere Festsubstanzen durch Filtrieren oder Zentrifugieren entfernt, dann das Filtrat unter Verwendung eines organischen Lösungsmittels, das die Macrolid-Antibiotika A 11725 I, II und III löst und mit Wasser kaum mischbar ist, einer Extraktion unterwirft, den Lösungsmittelextrakt durch Eindampfen unter vermindertem Druck auf ein Hundertstel bis auf ein Zweihundertstel seines ursprünglichen Volumens einengt, dann mittels Säure auf einen pH-Wert von 1,0 bis 3,0 einstellt, die wäßrige Schicht abtrennt, mittels einer alkalischen Lösung auf einen pH-Wert von 7,8 bis 9,0 einstellt, erneut einer Extraktion mit einem organischen Lösungsmittel unterwirft, durch Konzentrieren dieses Extraktes durch Abdampfen des Lösungsmittels unter vermindertem Druck bis zur Trockene ein Rohprodukt, das die Macrolid-Antibiotika A 11725 I, II und III enthält, erhält, das Rohprodukt mittels Säulenchromatographie unter Verwendung von Silicagel oder mittels Gegenstromverteilung fraktioniert, jede Fraktion der Dünnschichtchromatographie zur Bestimmung der darin enthaltenen Substanzen unterwirft, die Fraktionen mit einem Gehalt an reinem Macrolid-Antibiotikum A 11725 I, II und III sammelt und unter vermindertem Druck zur Trockene eindampft.
Farbreaktion:
Entfärbung einer wäßrigen Kaliumpermanganatlösung ist positiv;
Ninhydrin-Reaktion, Sakaguchi's-Reaktion und Eisen(III)- Chlorid-Reaktion sind negativ;
saure oder basische Natur: basisch;
Löslichkeit: löslich in angesäuertem Wasser, Methanol, Aceton Äthylacetat und Benzol,
schwerlöslich in alkalisch eingestelltem Wasser und unlöslich in Hexan;
und dessen pharmakologisch verträgliche Salze.

5. Pharmazeutische Präparate, gekennzeichnet durch einen Gehalt an mindestens einem Macrolid-Antibiotikum oder dessen pharmakologisch verträglichem Salz nach den Ansprüchen 1 bis 3.