DE2223766A1 - Bis-biguanidsalze,Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung - Google Patents

Description

Bis-biguanidsalze, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung

Die Erfindung betrifft Bis-biguanidsalze, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung und zwar insbesondere als. Bakterizide in der Human- oder Veterinärmedizin.

Es ist bekannt, daß Bis-biguanide im allgemeinen bestimmte bakterizide Eigenschaften aufweisen. Insbesondere eine Verbindung, ljö-Bis-CN.-p-chlorphenyl-diguanido-NcJ-hexan, mit dem internationalen generic name "Chlorhexidine", hat in der Medizin eine verbreitete Verwendung als bakterizides Mittel und zwar im allgemeinen als Desinfektionsmittel gefunden. Allerdings zeigen die bisher bekannten Bis-biguanidbasen und die meisten ihrer Salze eine nur sehr geringe Wasserlöslichkeit, so daß ihre Anwendung als Desinfektionsmittel,, die ja bekanntlich

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meist in wässriger Lösung vorliegen, dadurch eingeschränkt wird.

Die Erfindung betrifft neue Bis-biguanidsalze mit ausgezeichneter Wasserlöslichkeit, die daher eine wesentlich günstigere Anwendung als Desinfektionsmittel und Bakterizide erlauben.

überraschenderweise wurde festgestellt, daß Salze bekannter bakterizidjwirksamer Bis-biguanidbasen mit als Sequestriermittel wirksamen Amino-carbonsäuren eine wesentlich stärkere bakterizide Aktivität aufweisen als bisher bekannte Salze der Biguanidbasen.

Als Biguanidbasen können insbesondere Verbindungen der allgemeinen Formel I

A-NH-C-NH-C-NH-X-NH-C-NH-C-NH -~A

η ι ι ι

NH NH NH NH

eingesetzt werden, in der A gleiche substituierte oder nicht substituierte Phenyl- oder Alkylphenylgruppen, wobei die Alkylgruppe 1 bis 3 C-Atome aufweisen kann, und in die als Substituent der Phenylgruppen ein oder mehrere Halogenatome oder Hydroxy-, Nitro-, Alkyl-, Alkoxy- oder Alkylthiogruppen eingetreten sein können und in der X eine Brückenfunktion durch einen Benzol-, Dialkoxybenzol- oder Cyclohexanring, durch Diphenylmethylen- oder PoIymethylenketten mit 1 bis 15 -CH₂- Gruppen, die gegebenenfalls

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durch ein oder mehrere Sauerstoffatome unterbrochen sein können und/oder gegebenenfalls durch einen oder mehrere Benzolringe unterbrochen oder endständig abgeschlossen sein können, oder in der X die Gruppe -NH-X-NH- (also X zusammen mit zwei Iminogruppen), die zu einem Piperazinylring geschlossen sind, bedeuten.

Bevorzugt verwendete Bis-biguanidbasen zur Herstellung der Salze sind:

l,2-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N₅)-äthan;

top-Bis-(N^-p-chlorpheny ldiguanido-N,-)-di-n-propyl-äther;

1,6-Bis- (Nj-ß-pheny läthy ldiguanido-N,-) -hexan; 1,6-Bis - (N^-pheny ldiguanido-N,-) -hexan; 1,6-Bis- (N₁^, M-dimethylpheny ldiguanido-N,-) -hexan; 1,6-Bis-(N^p-tolyldiguanido-N-)-hexan; ' 1,6-Bis-(N₁-p-hydroxyphenyldiguanido-Nj-)-hexan;' 1,6-Bis-(N^^-p-anisy ldiguanido-N,-)-hexan; 1,6-Bis- (N^-m-nitropheny ldiguanido-N,-) -hexan; l,3-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-Nc)-propan; 1,4-Bis- (N₁-p-chlorpheny ldiguanido-Nc-) -butan; l,5-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N₅)-pentan; 1,7-Bis-(N.-p-chlorphenyldiguanido-Nc)-heptan; 1,6-Bis-(N^-m-chlörpheny ldiguanido-N p.)-hexan; 1,6-Bis-(N^-2,5-diehlorphenyldiguanido-Nc)-hexan;

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1,6-Bis - (N₁ - 3, ¹I-di.chlorpheny Idiguanido-Nc)-hexan; 1,4-Bis- (ϊ^-phenyldiguanido-Nj-) -benzol; !,^-Bis-CN^-p-chlorphenyldiguanido'-Nf-)-benzol j 1,6-Bis- (N^-p-chlorphenyldiguanido-Nj-) -hexan; l,10-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N,-)-decan; 1,4-Bis-(Nj-o-chlorophenyldiguanido-Nc)-hexan; ¹J,4 ' -Bis- (N^phenyldiguanido-Nj-) -diphenylmethan; 4, I*' -Bis- (N₁-p-chlorphenyldiguanido-N_t-) -diphenylmethan; Co/LD'-Bis-CN^-p-chlorphenyldiguanido-NcJ-l^-di-n-propoxybenzolj 1,4-Bis-(N.-p-chlorphenylamidinoamino-N^)-piperazin; (nach anderer Nomenklatur Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-Nc>Ncbis-äthylen).

Bevorzugt werden eingesetzt:

1,6-Bis-(N.-p-chlorphenyldiguanido-NfJ-hexan (generic name "Chlorhexidine") und

1,4-Bis-(N^-p-chlorphenylamidinoamino-Nij)-piperazin (generic name "Picloxidine").

Zur Salzbildung werden von den als Sequestriermittel bekannten Amino-carbonsäuren insbesondere Verbindungen eingesetzt, die der allgemeinen Formel HOOC CH₂ N(R¹) Z R² (II) entsprechen, wobei R ein Wasserstoffatom, eine Alkyl-, Carboxy-

methyl-, Hydroxyäthyl- oder Hydroxypropylgruppe, R eine

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Carboxymethyl-, Hydroxyäthyl- oder Hydroxypropylgruppe und Z entweder die Gruppe -" CH₃.CH₃.N(R³) _n~, wobei R³ in der Defini tion R entspricht und η 0,1,2 oder 3 sein kann, oder in der Z die Gruppe

(III) in der R die bereits gegebene Bedeutung hat, bedeuten.

Entsprechende Amino-Carbonsäuren der allgemeinen Formel II sind beispielsweise:

1 2 " "5 Äthylendiamin-tetraessigsäure (EDTA) - η = 1 und R , R und R-^

bedeuten Carboxymethyl;

Ν,Ν'-Äthylendiamin-diessigsäure (EDDA) - η = 1, R¹ und R⁵ be—

ρ deuten Wasserstoffatome und R bedeutet Carboxymethyl;

N-Hydroxyäthyl>-äthylendiamin-triessigsäure (HEDTA) - η = 1,

R und R bedeuten Carboxymethyl und R^ bedeutet 2-Hydroxyäthyl;

NjN'-Dihydroxy-äthylendiamin-diessigsäure (HEDDA) - η - 1,· R¹

2 ^

und R bedeuten 2-Hydroxyäthyl und R^J bedeutet Carboxymethyl;

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Diäthylentriamin-pentaessigsäure (DTPA) - η = 2 und R , R² und beide R bedeuten Carboxymethyl;

1,2-Diaminocyclohexan-tetraessigsäure (CDTA) - R , R und R
bedeuten Carboxymethyl;

1 Nitrilotriessigsäure (NTA) - η = 0 und R und R bedeuten Carboxymethyl;

N-Hydroxyäthyl-iminodiessigsäure (HIMDA) - η = 0, R¹ = 2-Hydroxy-

äthyl und R bedeutet Carboxymethyl;

1 2 Ν,Ν-Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure (DAA) - η = 0 und R und R

bedeuten 2-Hydroxyäthyl;

Iminodiessigsäure (IMDA) - η = 0, R bedeutet Wasserstoff und

R bedeutet Carboxymethyl;

3-Hydroxypropyl-iminodiessigsäure (HPIMDA) - η = 0, R = 3-Hydr'oxy-

propyl und R bedeutet Carboxymethyl.

Meist werden EDTA, HEDTA₁ DTPA, NTA oder DAA und vorzugsweise HEDTA und DAA verwendet.

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Die erfindungsgemäßen Salze entstehen als Reaktionsprodukt aus der Umsetzung der Säuregruppierungen der Aminocarbonsäuren · und der basischen Funktionen der Bis-biguanide und können daher nicht nur als Salze, sondern auch als Sequestriermittel aufgefaßt werden. Die Salze können die Ausgangsverbindungen, also Säure und Base, in wechselnden Mengen enthalten, da die meist polybasischen Säuren und die meist polyaciden Basen sich in verschiedenen stöchiometrischen Verhältnissen umsetzen können» Im allgemeinen reagieren die basischen Bis-biguanide als zweisäurige Basen, daß heißt also, daß jeweils eine basische Punktion in den symmetrischen Hälften des Moleküls reagiert, während die Aminocarbonsäuren vorzugsweise als monobasische oder als dibasische Säuren, daß heißt also, daß entweder "eine oder zwei Säuregruppen in Punktion treten, reagieren. - - „ ■

So reagiert beispielsweise das bevorzugt eingesetzte Bis-biguanid Chlorhexidin als zweisäurige Base, während die bevorzugt verwendete Aminocarbonsäure HEDTA entweder in mono- oder dibasischer Umsetzung reagiert, so daß sich überwiegend nur Chlorhexidinmono-HEDTA-at, wobei HEDTA als zweibasische Säure 'reagiert., und Chlorhexidin-di-HEDTA-at bilden, wobei im letzteren Falle HEDTA als monobasische Säure fungiert.

Durch Umsetzung der verschiedenen Bis-biguanide und Aminocarbonsäuren lassen sich zahlreiche Salze herstellen. Bevor" zugt verwendet werden beispielsweise folgende Salze:

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Mono-chlorhexidin-äthylendiamin-tetraacetat (Abk.: Chlorhex/

EDTA);

Mono-chlorhexidin-nitrilotriacetat (Abk.: Chlorhex/NTA); Tri-chlorhexidin-di-l diäthylentriamin-pentaacetatlfAbk.:

3 Chlorhex/2 DTPA);

Mono-chlorhexidin-di-j Ν,Ν-dihydroxyäthyl-aminoacetat J (Abk.:

Chlorhex/2 DAA);

Mono-picloxidin-äthylendiamin-tetraacetat (Abk.: Pic/EDTA);

Mono-picloxidin-nitrilotriacetat (Abk.: Pic/NTA); Mono-picloxidin-di-[Ν,Ν-dihydroxyäthyl-aminoacetatJ(Abk.:

Pic/2 DAA);

Mono-picloxidin-diäthylentriamin-pentaacetat (Abk.: Pic/DTPA);

Mono- IJ.,6-bis-(N^-p-methylthiophenyldiguanido-Nc)-hexanJ-N-

hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat (Abk.: Methiohex/HEDTA);

Mono-chlorhexidin-N-hydroxyäthyl-äthylen-diamin-triacetat (Abk.: Chlorhex/HEDTA);

Mono-chlorhexidin-di-[N-hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetatJ

(Abk.: Chlorhex/2 HEDTA).

Die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze können in an sich bekannter Weise hergestellt werden, indem sie beispielsweise durch direkte Umsetzung einer Säure und einer Base oder indem sie durch doppelte Umsetzung mit einem anderen Salz der Säure und einem anderen Salz der Base gewonnen werden.

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Wenn die Umsetzung durch direkte Reaktion eines Bis-biguanids oder dessen Salzes in wässrigem Milieu mit einer geeigneten Aminocarbonsäure oder deren Salz erfolgt, wird die Umsetzung vorzugsweise in Gegenwart eines gut mit Wasser mischbaren Lösungsmittels durchgeführt, da die Aminocarbonsäuren und deren Salze zwar im allgemeinen gut· wasserlöslich sind, die Bisbiguanide und deren Salze hingegen im allgemeinen nur schlecht wasserlöslich sind. Geeignete Lösungsmittel sind Alkanole und zwar insbesondere Methanol und Äthanol, so daß die Umsetzung vorzugsweise in wässrigem Methanol oder wässrigem Äthanol durchgeführt wird.

Zur Umsetzung können sowohl das Bis-biguanid als auch die Aminocarbonsäure in dem wässrigen Alkohol gelöst werden, gegebenenfalls kann auch das Bis-biguanid in Alkohol gelöst und mit der wässrigen Lösung der Aminocarbonsäure vermischt werden.

Die doppelte Umsetzung von Salzen der Bis-biguanide und der Aminocarbonsäuren wird vorzugsweise unter Verwendung von Salzen organischer Säuren wie beispielsweise dem Diacetat, der Bisbiguanide und unter Verwendung von Alkalisalzen^iie beispielsweise den Natriumsalzen_?der Aminocarbonsäuren durchgeführt. Die Verwendung von mineralsauren Salzen der Bis-biguanide sollte vermieden werdeny da diese Salze sehr wenig wasserlöslich sind.

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- ίο -

Die gebildeten Salze können in an sich bekannter Weise isoliert werden. Für bestimmte Anwendungszwecke ist die Isolierung nicht notwendig, da die hergestellten Lösungen als solche verwendet werden können.·

Die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze sind als Sequestriermittel verwendbar. Ihre besondere Verwendbarkeit ist allerdings in der Tatsache begründet, daß sie hervorragende antibakterielle Eigenschaften aufweisen. Es ist zwar bekannt, daß die Salze von Bis-biguanidbasen antibakterielle Aktivitäten zeigen; die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze weisen aber eine wesentlich höhere antibakterielle Aktivität in verschiedener Hinsicht auf. So kann beispielsweise das Aktivitätsspektrum der Bis-biguanide bei einer bestimmten Konzentration verbreitert werden, daß,heißt, daß bei einer vorgegebenen Konzentration bisher bekannte Bisbiguanidsalze gegen eine bestimmte Bakterienart unwirksam sind, während die entsprechenden erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze bei Anwendung in entsprechender Konzentration, berechnet auf die Bis-biguanidbase, eine hervorragende Wirksamkeit zeigen. Außerdem kann beispielsweise die zur Abtötung einer Bakterienkultur benötigte Menge eines Bis-biguanidsalzes gegebenenfalls durch Verwendung der erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze wesentlich herabgesetzt werden. Außerdem erweisen sich die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze im Vergleich zu allen bekannten Salzen

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der Bis-biguanidbasen als wesentlich besser wasserlöslich, so daß sehr viel stärker konzentrierte Lösungen hergestellt werden können.

Vorzugsweise werden die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze vor der Anwendung in einen geeigneten Träger eingebracht. Natürlich dürfen die verwendeten Träger auf keinen Fall schädliche oder toxische Eigenwirkungen haben. Die Auswahl.geeigneter Trägermedien und die Verarbeitung der erfindungsgemäßen Bisbiguanidsalze liegt im Bereich des Könnens eines pharmazeutischen Technologen.

Die Art des Trägers und die Art, der Verwendung der erfindungsgemäßen Salze hängt davon ab, zu welchem Zweck die Verbindungen eingesetzt werden sollen; die wichtigste Verwendung der Verbindungen ist die als Desinfektionsmittel und zwar insbesondere in Kliniken. Desinfektionsmittel werden meist in Lösung verwendet, wobei als Träger beispielsweise Wasser eingesetzt werden kann. Die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze können aber nicht nur in der Medizin, sondern auch auf allen Gebieten angewendet werden, in denen bakterizide Verbindungen benötigt werden, wie beispielsweise im Futtermittelhandel oder zur Konservierung.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können nicht nur als Desinfektionsmittel für unbelebte Gegenstände wie Bettücher, Wände,

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Tische, Töpfe, etc.; also Einrichtungs- und Ausrüstungsgegenstände verwendet werden, sondern eignen sich auch als Antiseptika zur Behandlung von Menschen und Tieren. Die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze können zu diesem Zweck oral, perlingual, äußerlich oder rektal angewendet werden; als Träger wird in diesen Fällen vorzugsweise verwendet:

a) für Tabletten, lackierte Tabletten, Sublingualtabletten oder

Pillen meist, verdaubarer Grundmassen; für Kapseln oder Cachets verdaubare Steckkapseln, für Pulver pulverförmige feste verdaubare Träger und für Sirupe, Lösungen, Suspensionen oder Elixire verdaubare flüssige Medien;

b) für Salben, Pasten, Gele, Lotions, Bäder, Vaselinesalben, Waschlotions, Cremes, Lösungen, Emulsionen oder Puder die entsprechenden festen oder flüssigen Trägermedien;

c) für Suppositorien geeignete Suppositoriengrundmassen.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können zur Verwendung als Antiseptika gegebenenfalls auch in anderer Form appliziert werden.

Die pharmazeutischen Zubereitungen oder die isolierten Salze enthalten die beiden Reaktionspartner, also das Bis-biguanid und die Aminocarbonsäure in den entsprechenden stöchiometrischen

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Mengen, so daß beispielsweise ein Salz aus Chlbrhex/HEDTA die Reaktionspartner in den molaren Mengen von 1:1 und ein Salz aus Chlorhex/2 HEDTA die Reaktionspartner in den molaren Mengen von 1:2 enthält. Gegebenenfalls können aber auch Zubereitungen hergestellt werden, die.einen der Reaktionspartner im "Überschuß", daß heißt also eine zusätzliche Menge entweder des freien Bis-biguanid oder der freien Aminocarbonsäure enthalten; in einigen Fällen scheint ein Überschuß, insbesondere an Aminocarbonsäuren, günstig zu wirken und die bakteriziden Eigenschaften zu verbessern. Bei Verwendung von Aminocarbonsäuren in einem Überschuß von 1/2 Mol je Mol des Bis-biguanid werden besonders günstige Resultate erhalten.

Die erfindungsgemäßen Bis-biguanid-aminocarboxylate sind alle bakterizidttiochwirksam; sie unterscheiden sich allerdings in der Wasserlöslichkeit. Einige wenige Salze wie beispielsweise Chlorhex/EDTA sind nur schlecht wasserlöslich, so daß sich nur schwierig reinwässrige Lösungen herstellen lassen, die ausreichend große Mengen der bakteriziden Verbindungen, enthalten, ohne daß ein Lösungsvermittler mit verwendet werden muß. Die vorliegende Erfindung betrifft also nicht flüssige wässrige Mischungen mit einem Gehalt an sequestriermittelhaltigen Mischungen, die keinen Lösungsvermittler enthalten, und in denen die Mischungen ohne Hilfe eines Lösungsvermittlers nicht in Wasser mit einer Konzentration von größer als 1.000 ppm gelöst werden können.

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Die erfindungsgemäßen Verbindungen werden daher vorzugsweise in Form flüssiger wässriger Konzentrate verarbeitet, in denen verhältnismäßig große Mengen der Verbindungen, daß heißt aleo Mengen von mehr als 1 Gew.?, gelöst vorliegen. Diese Konzentrate enthalten vorzugsweise einen Lösungsvermittler für die Verbindungen, und zwar werden als Lösungsvermittler mit besonders günstiger Wirkung quarternäre Ammoniumverbindungen eingesetzt, da diese selbst bestimmte bakterizide Eigenschaften und Detergenzieneigenschaften aufweisen und die so hergestellten Konzentrate mit Gehalt an den beiden Verbindungstypen einen gewissen Synergismus zeigen*

Von den zahlreichen quarternären Ammoniumverbindungen (Quats) sind insbesondere folgende Verbindungen brauchbar:

Verbindungen der allgemeinen Formel IV

CH,

(IV)

1 2 Y-N-Y^

CH,

in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen, eine Di-isobutyl-phenoxy-äthoxyäthyl- oder eine Di-isobutyl-cresoxy-äthoxy-

äthylgruppe und Y eine Aralkyl- und zwar vorzugsweise eine

Benzylgruppe bedeuten, wobei Y gegebenenfalls am aromatischen

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Kern substituiert sein kann. Bevorzugt werden Verbindungen mit dem "Benzalkonium"-Cation, daß in der Literatur als ein Alkyldimethyl-benzyl-ammonium beschrieben wird, wobei die Alkylgruppe eine Kokosalkylgruppe, daß heißt also eine Mischung aus Alkylgruppen in der Kettenlänge von C₁Q^-C₁Q ^w*^{e be}i^sPi^elswei^se Lauryl* Myristyl-Gruppen etc. bedeutet; entsprechende Verbindungen sind unter den Handelsnamen Hyamine LOX und Hyamine 1622 in den USA erhältlich (die Verbindungen werden als Di-isobutyl-cresoxyäthoxyäthyl-dimethyl-benzyl-ammonium bzw. Di-isobutyl~phenoxy- ' äthoxyäthyl-dimethyl-benzyl-ämmonium beschrieben). Bevorzugt werden auch Myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium-Verbindungen und Verbindungen der allgemeinen Formel V

CH

verwendet, in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 18 C-Atomen oder eine Alkylbenzylgruppe, in der die Alkylgruppe 8 bis 20 C-Atome aufweist, bedeutet. Bevorzugt verwendete Verbindungen sind Cetyl-trirnethyl-ammonium-Verbindungen wie beispielsweise das unter dem generic name "Cetrimide" bekannte Bromid.

Weiterhin sind Verbindungen verwendbar, deren Kation die allgemeine Formel VI aufweist

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CH₃

L I Y-N- CH-

(VI)

Ii c
in der Y und Y gleich oder verschieden sein können und jeweils eine Alkylgruppe mit etwa 8 bis 18 C-Atomen bedeuten, und zwar insbesondere Verbindungen mit dem Didecyldimethyl-ammonium- und dem Dioctyl-dimethyl-ammonium-Kation.

Geeignete Verbindungen sind ferner solche mit einem Kation der allgemeinen Formel VII

Y⁷-

is

(VII)

in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen bedeutet und

7 R
Y und Y gleich oder verschieden sein können und jeweils eine hydroxysubstituierte Alkyl- oder Hydroxyalkoxyalkylgruppe bedeuten, und zwar insbesondere Alkyl-dihydroxyäthyl-benzylammonium-Verbindungen, in denen die Alkylgruppe beispielsweise als Kokosalkylgruppe vorliegt.

Weiterhin sind verwendbar Verbindungen mit dem Kation der allgemeinen Formel VIII

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(VIII)

in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen bedeutet,·insbesondere Verbindungen mit dem Cetylpyridiumkation.

Bevorzugt werden Verbindungen verwendet» in denen das quartäre. Ammoniumkation als Benzalkonium, Myristyl-dimethyl-benzylammonium, Cetyl-trimethyl-ammonium oder Kokosalkyl-dihydroxyäthyl-benzyl-ammonium vorliegt.

Die mit den jeweiligen quarternären Ammoniumkationen verbunden Anionen scheinen keine Beeinflussung auszuüben; meist werden die Hydroxide, Chloride und Bromide bevorzugt.

Die Mengen, in denen die quartäre Ammoniumverbindung als Lösungsvermittler eingesetzt wird, hängen von dem jeweils verwendeten quarternären Ammoniumsalz, dem Bis-biguanid-Anteil und dem Aminocarbonsäureanteil der erfindungsgemäßen Salze ab. Quarternäre Ammoniumverbindungen mit ausgeprägten lösungsvermittelnden Eigenschaften wie beispielsweise Cetrimide (Cetyl-trimethylammoniumbromid) können die erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze in solchen Mengen in Lösung bringen, daß sich eine 20 gew.^ige wässrige Lösung der Wirkstoffe ergibt, und daß der Lösungsvermittler etwa gleiche Gewichtsmengen der Verbindungen löslich macht, wobei bei niedrigeren Konzentrationen; der erfindungsgemäßen Salze diese quarternäre Verbindung beispielsweise mehr als ihr eigenes Gewicht in Lösung überführt. Quarterhäre Verbindungeil,

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eingegangen am.

mit weniger stark ausgeprägten Eigenschaften können zur Herstellung von etwa 5 #igen Lösungen der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden, wobei bei diesen Konzentrationen die quarternären Verbindungen ungefähr nur 1/10 ihres eigenen Gewichtes an erfindungsgemäßen Salzen in Lösung überführen.

Im folgenden werden einige Beispiele der maximal in Lösung zu bringenden Menge verschiedener erfindungsgemäßer Bis-biguanidsalze unter Verwendung verschiedener quarternärer Ammoniumverbindungen angegeben, wobei die Prozentangaben sich auf das Gewicht der fertigen Konzentratlösung beziehen und die so hergestellten Konzentrate stabil sind:

18 % Cetrimide lösen 27 % Chlorhex/HEDTA; 30 % Benzalkonium-chlorid lösen 15 % Chlorhex/HEDTA; 20 % Benzalkonium-bromid lösen'20 % Chlorhex/HEDTA;

30 % Dodecyl-dimethyl-ammoniumäthosulfat lösen 30 % Chlorhex/HEDTA;

20 % Cetrimide lösen 30 % Chlorhex/NTA; 25 % Cetrimide lösen 5 % Chlorhex/EDTA; 20 % Cetrimide lösen 30 % (3 Chlorhex/2 DTPA).

In allen Fällen läßt sich die maximale Löslichkeit eines bestimmten Bis-biguanidsalzes unter Verwendung eines bestimmten Quats in einfachen Versuchen bestimmen.

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Wie bereits ausgeführt, werden quarternäre Ammoniumverbindungen insbesondere deshalb als Lösungsvermittler verwendet, da sie nicht nur selbst bakterizide Eigenschaften aufweisen, sondern da ein Synergismus zwischen den quarternären Verbindungen und den erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalzen zu bestehen scheint. Die bakterizide Aktivität ist größer und in einigen. Fällen beträchtlich größer, als sich aus der Summe der Wirksamkeiten der beiden Komponenten ergibt.

Antiseptika und Desinfektionsmittel können in einfacher Weise durch Vermischen der Salze mit dem Träger und gegebenenfalls einem Überschuß an Bis-biguanid bzw. Aminocarbonsäüre und/oder quarternären Ammoniumverbindungen hergestellt werden. Die erfindungsgemäßen Salze brauchen nicht unbedingt aus der Umsetzungslösung isoliert zu werden, sondern die Umsetzungslösung kann bereits als wässriger Träger Verwendung finden.

In einfachster Weise kann die Herstellung von Desinfektionsmitteln oder Antiseptika daher erfolgen, indem das Bis-biguanid und die Aminocarbonsäüre in Wasser oder wässrigem Alkanol gelöst werden und diese Lösung dann gegebenenfalls mit einer quarternären Ammoniumverbindung versetzt wird.

Da die quarternären Ammoniumverbindungen zur Salzbildung mit den Aminocarbonsäuren befähigt sind, kann gegebenenfalls auch

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das Bis-biguanid in Wasser oder wässrigem Alkanol gelöst werden, woran anschließend das Salz einer quarternären Ammoniumverbindung und einer Aminocarbonsäure zugegeben wird. Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern. In den ersten Beispielen ist die Herstellung der erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze beschrieben.

Beispiel 1 MoncK chlorhexidine)-mono-(äthylendiamin-tetraacetat)

0,625 g (0,001 Mol) Chlorhexidine-diacetat wurden in 25 ml destilliertem Wasser gelöst und zu einer Lösung von 0,336 g (0,001 Mol) Dinatrium-äthylendiamin-tetraacetat in 10 ml destillierten Wassers zugegeben. Dabei bildete sich ein feiner weißer Niederschlag, der abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet wurde. Mono-(chlorhexidine)-mono-(äthylendiamin-tetraacetat) wies einen Schmelzpunkt von 235 C auf. Das Salz enthält ein Mol Chlorhexidine und ein Mol EDTA.

Um festzustellen, daß sich tatsächlich eih Salz gebildet hatte, wurden Vergleichsversuche gegen die möglicherweise vorliegenden Mischungen durchgeführt. Chemisch ließ sich nachweisen, daß die ausgefallene Verbindung weder Natrium- noch Acetationen, sondern Chlorhexidine- und EDTA-ionen enthielt. Der Schmelzpunkt des Chlorhexidine beträgt 127°C, der Schmelzpunkt von EDTA liegt

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bei 242 C und ein Mischschmelzpunkt gleicher Anteile der Verbindungen ergab einen Wert von 215 C.

DSC-Analysen (differential scanning calorimeter) ergaben ebenfalls, daß ein Salz vorlag.

Die Wasserlöslichkeit dieses Salzes ist verhältnismäßig gering und liegt bei etwa Q,02 Gew.$ in Wasser von 20⁰C. Zur genaueren Bestimmung der Löslichkeit'wurden Proben des Salzes mit einem Gewicht von 0,01, 0,02 und 0,03 g in Bechergläsern ausgewogen und mit 100 g destillierten Wassers versetzt. Diese Mischungen wurden dann unter Rühren auf 100°C erhitzt, die Lösungen mit Wasser wieder auf 100 g aufgefüllt, um Verdunstungsverluste auszugleichen, und dann auf Raumtemperatur abgekühlt. Anschließend wurde ein kleiner Impfkristall des Salzes zugefügt und nach 2h Stunden die Mischungen auf vollständige Löslichkeit geprüft. Als vollständige Löslichkeit wurde der Versuch bezeichnet, bei dem kein sichtbarer Rückstand hinterblieb. Bei dieser Art der Bestimmung wurde die Wasserlöslichkeit mit einem Wert von 0,02 Gew. bei 20⁰C festgestellt. .

Beispiel 2 . . . .

Mono-Cchlorhexidi ne) -mono-(hydroxy'ithyl-äthyiendiamin-triacetat)

Methode A

2,66 g Chlorhexidine-base und 1,^O g Hydroxyäthyl-äthylendiamintriessigsäure wurden unter Erwärmen zusammen in 50 ml destillierten Wasser gelöst. In der Lösung lagen die Säure und die Base in etwa äquimolaren Mengen vor. Die Lösung wurde dann abgekühlt, wobei nach ein paar Stunden ein weißer Niederschlag ausfiel. Der Niederschlag wurde abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Der pH-Wert der Mutterlauge betrug 7j3. Der Schmelzpunkt des Mono-(chlorhexidine)-mono-(hydroxyäthy1-äthylendiamin-triaeetat) betrug 173°C; unter Anwendung der in Beispiel 1 beschriebenen Methode wurde die Wasserlöslichkeit zu 0,2 Gevi.% bei 20°C bestimmt.

Methode B

25 ml einer 0,01 M-Lösung von Chlorhexidine in Methanol (entsprechend 0,1263 g Chlorhexidine) wurden zu einer Lösung von 0,0695 g HEDTA in 35 ml destillierten Wassers zugesetzt. Die die Säure und die Base in etwa äquimolaren Mengen enthaltende Lösung wurde auf dem Wasserbad zur Hälfte eingeengt und dann langsam abgekühlt. Nach etwa 2-stündigem Stehen wurde die Kristallisation durch-Kratzen mit einem Glasstab eingeleitet;; der ausfallende Niederschlag wurde abfiltriert und getrocknet.

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Methode C

1 g Chlorhexidine-diacetat wurde in 25 ml mit Methylalkohol vergälltem Industriesprit gelöst und mit einer Lösung von 0,^448 g HEDTA in 3,2 ml 1 N NAOH und 5 ml destillierten Wassers gelöst. Aus der die Säure und die Base in äquimolaren Mengen enthaltenden Lösung fiel beim Stehen ein Niederschlag aus, der abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet wurde.

Die DSC-Analyse ergab, daß in jedem Fall eine Salzbildung eingetreten war. Diese Tatsache ergab sich auch aus dem Vergleich der Schmelzpunkte:

Schmelzpunkte · ■

HEDTA	156°C
Chlorhexidine	. 127°C
Salz nach Methoden A und B	173°C
Salz nach Methode C	177°C

physikalische Mischung aus Säure und Base

Beispiel 3 Mono-(chlorhexidine)-di-Chydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat)

1,33 g Chlorhexidine und 1,^2 g HEDTA wurden zusammen unter Erwärmen in 25 ml destilliertem V/asser gelöst, so daß das molare

Verhältnis von Rase zn Säure 2:1 betrug. Die Lösung wurde dann

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abgekühlt, wobei sich ein weißer Niederschlag bildete, der abfiltriert, gewaschen und getrocknet wurde. Der pH-Wert der Mutterlauge betrug 6,1. Mono-(chlorhexidine)-di-(hydroxyäthyläthylendiamin-triacetat) wies einen Schmelzpunkt von 172⁰C und bei Bestimmung in der in Beispiel 1 beschriebenen Methode eine Wasserlöslichkeit von 0,3 Gew.% bei 20⁰C auf.

Beispiel Mono-(chlorhexidine)-mono-(nitrilotriacetat)

25 ml einer 0,04 M-Lösung von Chlorhexidine-diacetat in destilliertem Wasser wurden zu 25 ml einer 0,04 M-Lösung von Dinatriumnitrilotriacetat in destilliertem Wasser zugesetzt. Die Lösung enthielt also die Säure und die Base in äquimolaren Mengen. Ein sich bildender feiner öliger Niederschlag verfestigte sich beim Stehen, dieser Niederschlag wurde dann abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet. Mono-(chlorhexidine)-mono-(nitrilotriacetat) ergab eine Wasserlöslichkeit von 0,3 Gew. bei 20⁰C, wenn die Bestimmung nach der in Beispiel 1 beschriebenen Methode durchgeführt wurde.

Die DSC-Analyse bestätigte die Salzbildung, die sich auch durch Vergleich der Schmelzpunkte feststellen ließ:

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Schmelzpunkte

NTA , 225°C

Chlorhexidine 127°C

Salz 176°C

physikalische Mischung aus.NTA

und Chlorhexidine 129 C

Beispiel 5 Tri-(chlorhexidine)-di-(diäthylen-triamin-pentaacetat)

0,69 g Diäthylentriamin-pentaessigsäure wurden unter Erwärmen in 100 ml destillierten Wassers gelöst. In dieser Lösung wurden 1>33 g Chlorhexidine unter Erwärmen und Rühren gelöst, so daß das molare Verhältnis von Base zu Säure 3:2 betrug. Beim Abkühlen schied sich ein öl aus, das aber sich nach 2-tägigem Stehen bei . Raumtemperatur zu weißen Kristallen verfestigte. Die Kristalle wurden aus Wasser umkristallisiert und dann bei 100 C zum konstanten Gewicht getrocknet. Tri-(chlorhexidine)-di-(diäthylentriamin-pentaacetat) wies einen Schmelzpunkt von 157⁰C und eine Wasserlöslichkeit bei Messung nach der in Beispiel 1 beschriebenen Methode von 0,2 Gew.% bei 20⁰C auf.

2 09 85 1 /123 6;

Beispiel 6 Mono-(chlorhexidine)-di-(dihydroxyäthy1-aminoacetat)

100 ml einer 2 #igen Lösung von Chlorhexidine-diacetat in destilliertem Wasser wurden zu einer Lösung von 1,23¹I g des Mononatriumsalzes der Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure (entsprechend 1,0432 g Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure) in destilliertem Wasser zugesetzt, so daß das molare Verhältnis von Chlorhexidinekationen zu Dihydroxyäthyl-aminoacetatanionen 1:2 betrug. Der sich bildende Niederschlag wurde abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Mono-(chlorhexidine)-di-(dihydroxyäthylaminoacetat) wies bei Bestimmung nach der in Beispiel 1 beschriebenen Methode eine Wasserlöslichkeit von 0,2 Gew.% bei 20⁰C auf.

Die DSC-Analyse bestätigte die Salzbildung, die sich auch bei Vergleich der Schmelzpunkte ergab:

Schmelzpunkte	18O°C
Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure	12?°C
Chlorhexidine	86°C
Salz	107°C
physikalische Mischung aus Säure und Base

2Θ38 51/123 6

Beispiel 7 Mono-(picloxidine)-mono-(äthylendiamin-tetraacetat)

25 ml einer 0,02 M-Lösung des Dinatrium-äthylendiamin-tetraacetat in destilliertem Wasser wurden mit 25 ml einer 0,02 M-Lösung von Picloxidine-diacetat in destilliertem Wasser versetzt, so daß
das Picloxidine-kation und das EDTA-anion in äquimolaren Mengen vorlagen. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet. Mono-(piclöxidine)-mono-(äthylen· diamin-tetraacetat) wies bei Durchführung der in Beispiel 1 beschriebenen Methode eine Wasserlöslichkeit von unter 0,01 Gew.% bei 20°C auf. Die DSC-Analyse bestätigte die Salzbildung, wie
sich auch durch Vergleich der Schmelzpunkte ergibt:

Schmelzpunkte

EDTA

Piclöxidine 219°C

Salz 23O°C

physikalische Mischung 2l8°C

Beispiel 8 ' ■

Mono- [l ,6-.biS"(N _:.-p-methylthiophenylguanido-N _c-)-hexan] -mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat)

Äquirnolare 'Mengen der Biguanidbase und der Hydroxyäthyl-äthylehdiarnin-triesfdgijiiure wurden in destilliertem Wasser gelöst. Die

209851/123 6

Lösung wurde dann fast zur Trockne eingeengt, worauf sich beim Stehen Kristalle bildeten. Die Kristalle wurden abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Bei Messung gemäß der in Beispiel 1 beschriebenen Methode ergab sich eine Wasserlöslichkeit des Mono-jj., 6-bis- (N₁-p-methylthiopheny lguanido-N,-) -hexanj-mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) von 0,2 Gew.% bei 20⁰C.

Die DSC-Analyse bestätigte die Salzbildung, wie sich dies auch durch Vergleich der Schmelzpunkte feststellen ließ, da der Schmelzpunkt des Salzes 25¹I⁰C, der Schmelzpunkt der Biguanidbase 251°C,.der Schmelzpunkt von HEDTA 156°C und der Mischschmelzpunkt einer physikalischen Mischung aus Säure und Base 226°C betrug.

Beispiel 9 Mono-(pieloxidine)-mono-(nitrilotriacetat)

25 ml einer 0,04 M-Lösung von Picloxidine-diacetat in destilliertem Wasser wurden zu 25 ml einer 0,04 M-Lösung von Dinatriumnitrilotriacetat in destilliertem Wasser zugesetzt, so daß das molare Verhältnis von Picloxidinekationen und Nitrilotriacetatanionen gleich war. Der sich bildende Niederschlag wurde abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet-. Bei Durchführung der Bestimmung gemäß Beispiel 1 wurde für Mono-

209851/1236

(picloxidine)-mono-(nitrilotriacetat) eine Wasserlöslichkeit von 0,2 Gew.% bei 20⁰C festgestellt.

Auch die DSC-Analyse bestätigte die Salzbildung. Ein Vergleich der Schmelzpunkte ergab folgende Werte:

Schmelzpunkte

NTA 225°C .

Picloxidine 219°C

Salz 220⁰C

physikalische Mischung aus

Base und Säure . 201 C

Beispiel 10 Mono-(pieloxidine)-di-(dihydroxyäthyl~aminoacetat)

100 ml einer 2 %igen Lösung von Pieloxidine-diacetat in destilliertem Wasser wurden zu einer Lösung von 1,178 g des Mononatriumsalzes der Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure in destilliertem Wasser zugesetzt (entsprechend 0,993 g Dihydroxyäthyl-aminoessigsäure). Das Verhältnis von Picloxidinekationen zu Dihydroxyäthyl-aminoacetatanionen lag also zwischen 1:1 und 1:2. Der sich bildende Niederschlag wurde abfiltriert, gewaschen und getrocknet. Das . gebildete Mono-CpicloxidineJ-di-idihydroxyäthyl-aminoacetat) wies bei Messung gemäß der in Beispiel 1 beschriebenen Methode

2 09 851/1236

eine Wasserlöalichkeit von 0,2 Gew.% bei 20⁰C auf.

Die Salzbildung wurde durch die DSC-Analyse und durch die Schmelzpunkte bestätigt:

Schmelzpunkte	18O°C
Dihydroxyäthylaminoessigsäure	219°C
Picloxidine	227°C
Salz	165°C
physikalische Mischung aus Säure und Base

Beispiel 11 Mono-(picloxidine)-mono-(diäthylentriamin-pentaacetat)

25 ml einer Ο,ΟΊ M-Lösung von Dinatrium-diäthylentriamin-pentaacetat in destilliertem Wasser wurden mit 25 ml einer 0,0*1 M-Lösung von Picloxidine-diacetat in destilliertem Wasser versetzt. Die Picloxidinekationen und die DTPA-Anionen lagen also in äquimolaren Mengen vor. Der sich bildende Miederschlag wurde abfiltriert, mit destilliertem Wasser gewaschen und getrocknet. Mono-(picloxidine)-mono-(diäthylentriamin-pentaacetat) ergab bei Messung nach der in Beispiel 1 beschriebenen Methode eine Wasserlöslichkeit von 0,2 Gew.% bei 20⁰C.

2 0 9 8 51/1236

am U^P

Die Salzbildung wurde durch Vergleich der Schmelzpunkte bestätigt:

Schmelzpunkte

DTPA 215°C

Picloxidine 219°C

Salz 190⁰C

physikalische Mischung aus

DTPA und Base 192 C

In den folgenden Beispielen ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen als Bakterizide in Desinfektionsmitteln ohne Zusatz von Quats beschrieben.

Beispiel 12

Festes gemäß Beispiel 3 hergestelltes Mono-(chlorhexidine)-di-(hydroxyathyl-athylendiamin-triacetat) wurde in hartem Standardwasser gemäß W.H.0.-Vorschrift gelöst, so daß sich Lösungen mit einem Gehalt an 400, 6OO, 8OO, 1.200,-1.600, 2.000 und 2.500 ppm der Verbindung ergaben.

Bakteriologische Versuche

Diese Lösungen wurden auf ihre bakterizide Aktivität gemäß dem britischen Standard Nr. 3286: i960 (Beschreibung in "Method for

209851 / 1 236,

laboratory evaluation of disinfectant activity of quaternary ammonium compounds by suspension test procedure", British Standard Institution, British Standards House, 2 Park Street, Londen, S.W. 1 London, I960) ausgetestet. Da zahlreiche antibakterielle Mischungen gegen gram-negative Bakterien weniger wirksam als gegen gram-positive Bakterien sind und die bakterizide Aktivität in Gegenwart von hartem Wasser und/oder organischer Materie wie beispielsweise Blutserum herabgesetzt wird, ist der gegen Pseudomonas pyocyanea, einem hochgradig resistenten gram-negativen Bakterium, in Gegenwart von hartem Wasser durchgeführte Test besonders verschärft.

Die wesentlichen Testbedingungen sind wie folgt:

(i) Nährmedium Nährbrühe Nr. 2 enthält:

Lab-lemco (proteinhaltiges Material) 10 g

Pepton 10 g

Natriumchlorid 5g

destilliertes Wasser ad 1.000 ml

Die Lösung wird 15 Minuten bei 121°C autoclaviert. Der pH-Wert beträgt etwa 7>4.

209851/1236

^efn»^g!^nam-^-^^223766

Inaktivator

Nährbrühe mit Zusatz von IO % Lubrol W. (Handelsmarke eines

Kondensationsproduktes eines langkettigen Fettalkohols und

Äthylenoxid).

Hartes Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift)

10 J&ige Lösung von CaCl₃.6H₃O (Gewicht/Volumen) 17,5 ml 10 %ige Lösung von Mg 30^.7HpO (Gewicht/Volumen) 5,0 ml destilliertes Wasser . 3.300 ml

Diese Lösung wird bei 121⁰C 15 Minuten autοclaviert. Desinfektionszeit 5 Minuten.

Temperatur 22°C.

Testkeim Pseudomohas aeruginosa (Pseudomonas pyocyanea) N.C. T.C. Nr. 6'

Zugesetzte organische Materie 10 % Rinderserum.

(ii) Zubereituhg der Kultur

Eine Agarkultur der Keime wurde in der Nährbrühe hergestellt und Zk Stunden bei 37°C inkubiert. Ee wurden tägliche Subkulturen

209851/1236

weitergezüchtet und die Kulturen sswischen der 3. und 7· Generation für den Test verwendet. Die Nährbrühenkultur von Pseudomonas pyocyanea wurde vor der Verwendung aseptisch filtriert oder es wurde die Brühe aufgeschüttelt, 15 Minuten zum Absetzen hingestellt und die überstehende Flüssigkeit für den Test verwendet.

Verdünnung der Kultur

Ein Teil der Nährbrühenkultur wurde mit 2*f Teilen des harten Standardwassers verdünnt, in dem ¹J ml der Kulturbrühe zu 96 ml des harten Standardwassers zugesetzt wurden. Die durehschnittliehe Keimzahl beträgt in dieser Verdünnung 5 x 10 Keime je ml,

Testmethode

Eine Serie von Doppelverdünnungen der zu untersuchenden antibakteriellen Mischungen wurde in hartem Standardwasser hergestellt und jeweils 2,5 ml in ein steriles Reagenzglas eingefüllt. (Unter einer Serie von Doppelverdünnungen wird verstanden, daß beispielsweise, wenn eine Verbindung bei einer Konzentration von 500 ppm geprüft werden soll, eine Lösung mit einer Konzentration von 1.000 ppm hergestellt werden muß, da das Volumen dieser Lösung noch einmal auf das Doppelte verdünnt wird.) Jedes Reagenzglas mit der zu untersuchenden antibakteriell wirksamen

ι Lösung wurde dann zum Nullzeitpunkt des Testes mit 2,5 ml der verdünnten Bakterienkultur versetzt, wobei die Gesamtmischung , so eingestellt war, daß sie eine Härte von 300 ppm aufwies. Nach 5 Minuten wurde 1 ml der Mischung aus jedem Reagenzglas

209851/1236

- 35 - ' 2225766

in ein steriles Reagenzglas mit 9 ml Inaktivator übertragen. 1 ml dieser Mischung wurde dann auf eine Agarplatte übertragen und ein weiterer ml wurde in ein zweites Reagenzglas mit 9 ml des Inaktivators überführt. Entsprechend wurde wiederum 1 ml der Mischung nach zweiter Behandlung mit dem Inaktivator auf eine Agarplatte und ein weiterer ml in ein drittes Reagenzglas mit 9 ml des Inaktivators übertragen. Der Inaktivator hebt die Wirkung des antibakteriellen Mittels auf, so daß jedes noch vorhandene lebende Bakterium eine Kolonie auf der Agarplatte bilden kann. Nach 48-stündiger Inkubation bei 37 C wird die Anzahl der Kolonien auf jeder Platte ausgezählt, mit dem entsprechenden Verdünnungsfaktor multipliziert und die Resultate werden als Anzahl überlebender Keime je Million eingeimpfter Bakterien ausgedrückt. Als- Bezug wird eine Kultur ohne antibakteriell wirksamen Zusatz v_e.r wendet > diese ergibt unverdünnt eine.Keimzahl von etwa 2,5x10' Bakterien je ml.

Kontrollversuche wurden unter Verwendung von Chlorhexidine-dihydrochlorid und Chlorhexidine-digluconat durchgeführt, um die Überlegenheit der erfindungsgemäßen Verbindungen aufzuzeigen, und um als Standards für die Testbedingungen, und für die Resistenz der Keime zu dienen.

Resultate

In der folgenden Tabelle I sind die Resultate als Anzahl der überlebenden Keime unmittelbar nach Zugabe des Inaktivators, ' bezogen auf je eine:'Million eingeimpfter Bakterien", -aufgeführt. ■

209 85 T/12 3 6 ' '

Tabelle 1

Konzentration der Verbindung in ppm 200 300 l|00 600 800 1000 1250

Bakterizid

Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA) 21.818 2.909

Chlorhexidinedihydrochlorid (Kontrolle)

u/c u/c

Chlorhexidinedigluconat (Kontrolle) u/c

u/c u/c

—unlöslichu/c 3.627

u/c - Anzahl der überlebenden Keime zu groß zum Auszählen.

Die Resultate zeigen deutlich, daß Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA) in wesentlich geringeren Mengen als Chlorhexidine-dihydrochlorid oder Chlorhexidine-digluconat verwendet werden muß, um eine gegebene Menge von Pseudomonas pyocyanea abzutöten.

Beispiel 13

Festes, gemäß Beispiel 2 hergestelltes, Mono-(chlorhexidine)-mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamintriacetat) wurde unter Verwendung von hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) zu Lösungen mit einem Gehalt an 400, 800, 1.200, 1.600 und 2.000 ppm verarbeitet.

209851 / 1 236

Bakteriologische Prüfung

Diese Lösungen wurden wie in Beispiel 12 beschrieben auf ihre bakterizide Aktivität geprüft. Als Kontrollversuche wurden in gleichen Konzentrationen Chlorhexidine-diglueonat-Lösungen verwendet. Die Resultate sind in Tabelle II zusammengestellt.

Tabelle II

Konzentration der

Verbindung in ppm 200 400 600 800 1000

Bakterizid Mono-(chlorhexidine)-

mono-(HEDTA) 390 0 0 0 0

Chlorhexidine-

digluconat (Kontrolle) — — 300 5Ü0 26

Aus der Tabelle ergibt sich, daß die bakteriziden Eigenschaften von Mono-(chlorhexidine)-mono-(HEDTA) wesentlich ausgeprägter als die von Chlorhexidine-digluconat sind.

Beispiel 14

Festes, gemäß Beispiel 4 hergestelltes, Mono-(chlorhexidine)-mono-(nitrilo-triacetat) wurde unter Verwendung von hartem Standardwasser (W.H.0«-Vorschrift) zu Lösungen mit einem Gehalt an 400, 800, 1.200, 1.600 und 2.000 ppm gelöst,

20-9851/1236-

2723766

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen wurden gemäß der in Beispiel 12 beschriebenen
Weise auf ihre bakterizide Aktivität geprüft. Als Kontrolle wurde eine Lösung mit gleicher Konzentration an Chlorhexidinedigluconat verwendet. Die Resultate sind in der Tabelle III aufgeführt.

Tabelle III

Konzentration der

Verbindungen in ppm 200 400 600 800 1000

Bakterizid

Mono-(chlorhexidine)-

mono-(nitrilotriacetat) 10.000 235 Q 0 .

Chlorhexidine-

digluconat (Kontrolle) -- — 300 5^0

Aus der Tabelle ergibt sich, daß Mono-(chlorhexidine)-mono-(nitrilotriacetat) im Vergleich zu Chlorhexidine-digluconat wesentlich stärker bakterizid wirkt.

Beispiel 15

Festes, gemäß Beispiel 5 hergestelltes Tri-(chlorhexidine)-di-(diäthylentriamin-pentaacetat) wurde unter Verwendung von

0 9 8 51/12 3

hartem Standardwasser zu Lösungen mit einem Gehalt an ¹IOO, 800, 1.200, 1.600 und 2.000 ppm gelöst.

Bakteriologische Untersuchungen

Diese Lösungen wurden gemäß der in Beispiel 12 beschriebenen Weise auf ihre bakteriologische Aktivität geprüft, wobei als Kontrollverbindungen Chlorhexidine-digluconat in gleichen Konzentrationen verwendet wurde. Die Resultate sind in Tabelle IV aufgeführt. '

Konzentration der
Verbindungen in ppm

Tabelle IV

200

4 00

600

800

1000

Bakterizid

Tri-(chlorhexidine)-di-(DTPA)

Chlorhexidinedigluconat (Kontrolle)

u/c

2636

133

u/c

0' 318

Aus der Tabelle ergibt sich, daß Tri-(chlorhexidine)-di-(diäthylentriamin-pentaacetat) wesentlich stärkere bakterizide Eigenschaften hat.

Beispiel 16

Festes, gemäß Beispiel 6 hergestelltes, Mono-(chlorhexidine)-di-(hydroxyäthyl--aminoacetat) wurde unter Verwendung von hartem

20985 1 / 123G.

Standardwasser (W.H.O.-Vorschrift) zu Lösungen mit einem Gehalt an 800, 1.200,· 1.600 und 2.000 ppm gelöst.

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen wurden gemäß der in Beispiel 12 beschriebenen Weise auf ihre bakterizide Aktivität geprüft, wobei als Kontrolle Chlorhexidine-digluconat in gleichen Konzentrationen verwendet wurde. Die Resultate sind in Tabelle V zusammengestellt.

Tabelle V

Konzentration der

Verbindungen in ppm 400 600 800 1000

Bakterizid

Mono-(chlorhexidine)-

di-(hydroxyäthylaminoacetat) 600 35 0 0

Chlorhexidinedigluconat (Kontrolle) - 1200 520 308

Aus der Tabelle ergibt sich,¹ daß Mono-(chlorhexidine)-di-(hydroxyäthyl-aminoacetat) wesentlich stärker bakterizid wirkt, als Chlorhexidine-digluconat.

Beispiel 17

Festes, gemäß Beispiel 9 hergestelltes, Mono-(picloxidine)· mono-(nitrilotriacetat) wurde unter Verwendung von hartem

209851/1236

Standardwasser (W.H.O.-Vorschrift) zu Lösungen mit einem Gehalt an 1.600 und 2.000 ppm gelöst.

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen wurden wie in Beispiel 12 beschrieben auf ihre bakterizide Aktivität untersucht.'Die Resultate sind in Tabelle VI aufgeführt.

Tabelle VI

Konzentration der Mono-(chlorhexidine)- ·

mono-(NTA) in ppm 80Q 1000 ■

überlebende Keime je ml/1 Million Keime 10000 1900

Diese Resultate zeigen, daß Mono-(chlorhexidine)-inoao-(nitrilotriacetat) eine bakterizidtairksame Verbindung ist.

Beispiel 18

Mono-(picloxidine)-mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) wurde in hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) zu Lösungen mit einem Gehalt an 1.600 und 2.000 ppm gelöst.

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen wurden in der in Beispiel 12 beschriebenen Weise auf ihre bakterizide Aktivität geprüft. Die Resultate sind in Tabelle VII aufgeführt.

2Q03S1/1236

β ν:

en am u.cyL· 22237B6

Tabelle VII

Konzentration von Mono-

(picloxidine)-mono-(HEETA) in ppm 800 1000

überlebende Keime je ml/1 Million Keime 5400 640

Aus der Tabelle ergibt sich, daß Mono-(picloxidine)-mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) bakterizid wirksam ist,

In den folgenden Beispielen ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Bis-biguanidsalze in Desinfektionsmitteln unter Zusatz von quarternären Ammoniumverbindungen beschrieben.

Beispiel 19 Herstellung der Lösung

14,3 g Chlorhexidine, 20,4 g Cetyltriinethyl-ammoniumbromid und 7,8 g Hydroxyäthyl-äthylendiamin-triessigsäure (HEDTA) wurden
unter Rühren in 57,5 g Wasser umgesetzt, bis eine klare Lösung entstanden war, die in allen Konzentrationen mit Wasser verdünnbar war und eine Mischung aus Mono-(chlorhexidine)-mono-(hydroxyathy1-äthylendiamin-triacetat) und Cetyl-trimethyl-ammoniumbromid enthielt.

Bakteriologische Untersuchungen (antiseptischer Test)

Die hergestellte Lösung wurde gemäß eino*r Modifikation des British Standard Specification 2HS2 auf ihre bakterizide Aktivität untersucht

2 0 9 8 5 1/12 3 6

verschärfter Test besteht darin, daß, wie bereits ausgeführt, das hochgradig resistente gram-negative Bakterium Pseudomonas pyocyanea in Gegenwart von hartem Wasser und organischem Material als Testkeim verwendet wird. Die Testbedingungen sind wie folgt:

(i) Nährbrühe Wie in Beispiel 12 wurde Nährbrühe Nr. 2 verwendet.

Inaktivator .

Nährbrühe mit Zusatz von 0,5 % Lecithin ex ovo (Lecithin aus Eigelb, einer Verbindung aus Cholin, Glycerin, Phosphorsäure und verschiedenen Fettsäuren) und 2 % Lubrol W (Handelsmarke eines wasserfreien Kondensationsproduktes aus einem langkettigen Pettalkohol und Äthylenoxid). Der pH-Wert wird, falls
notwendig, auf 7>2 eingestellt.

Testkeim

Pseudomonas aeruginosa (pyocyanea) N.C..T.C. Nr. 67*19 auf Nähr· agar gehalten.

209851/1236

(ii) Herstellung der Kultur

Eine Agarkultur der Testkeime wird in der Nährbrühe angelegt und 24 Stunden bei 37°C inkubiert. Es werden tägliche Subkulturen weitergezüchtet, und die Kulturen zwischen der dritten und siebenten Generation für den Test verwendet. Die Nährbrühenkultur von Pseudomonas pyocyanea wird vor der Verwendung aseptisch filtriert oder geschüttelt, 15 Minuten zum Absetzen hingestellt und die überstehende Flüssigkeit für den Versuch benutzt.

Kulturverdünnung

Ein Teil der Nährbrühenkultur wird mit 2k Teilen destillierten Wassers oder k ml der Kultur + 96 ml destillierten Wassers verdünnt. In dieser Verdünnung beträgt die durchschnittliche Keimzahl 5 x 10' Keime je ml.

Testmethode

Eine Doppelverdünnungsreihe der zu prüfenden antibakteriellen Mischung wurde mit destilliertem Wasser angefertigt, anschließend wurden jeweils 2,5 ml in sterile Reagenzgläser eingefüllt. Zum Nullzeitpunkt der Versuche wurden dann 2,5 ml der verdünnten Bakterienkultursuspensionen mit einem Gehalt an 20 % Rinder-

20985 1/1236

serum in jedes Reagenzglas mit der Verdünnung der antibakteriell wirksamen Lösung eingefüllt. Nach 5 Minuten wurde aus jedem Reaganzglas mit einer Platinöse, entsprechend etwa 0,01 ml, ein Teil der Mischung in 10 ml des mit dem Inaktivator versetzten Nährmediums in -eine Reihe von neuen sterilen Reagenz-' gläsern übergeimpft. Nach insgesamt 10 Minuten wurde ein weiterer Teil mit Hilfe der öse in weitere Reagenzgläser mit Inaktivator und Nährmedium übergeimpft. Durch den Inaktivator wird die Wirkung des antibakteriellen Mittels aufgehoben, so daß die Bakterien wieder wachsen können. Sämtliche mit Hilfe der öse beimpften Reagenzgläser wurden 48 Stunden bei 37°C inkubiert und dann auf das resultierende Bakterienwachstum geprüft. Das Resultat wurde als positiv bewertet, wenn Wachstum stattgefunden hatte, und als negativ, wenn kein Wachstum stattgefunden hatte. Die niedrigste Konzentration des antibakte~ riellen Mittels, das nach einem 5-minütigen Kontakt ein negatives Resultat ergibt, das durch den 10-minütigen Kontakt bestä·* tigt wird, wird, als Abtötungsverdünnung des Bakterizide bezeichnet. Der Inhalt der Reagenzgläser mit negativem Resultat wurde in Nährbrühe zur Subkultur gebracht, um sicherzustellen, daß die Bakterien tatsächlich abgetötet wurden, und daß nicht nur eine Bakteriestase stattgefunden hatte*

Die Ergebnisse sind als minimale Konzentration ausgedrückt, die in 5 Minuten bei 22⁰C zu einer 100 %-igen Abtötung führt.

Der Durchschnitt verschiedener Versuche mit Benzalkonium-chlQrid

- 46 - 2273766

B.P.C. ergab beispielsweise folgende Werte:

Verdünnung Überimpfung in Minuten

5 ' .10

1-666 = 1.500 ppm - >

1-1000 - 1.000 ppm +

1-1333 = 750 ppm + - .

1-2000 = 500 ppm + +

Die eine 100 #-ige Abtötung bewirkende Konzentration beträgt 1500 ppm. Auf Grund statistischer Schwankungen können die genauen Konzentrationen zwischen etwa 1000 und 1500 ppm liegen, daraus ergibt sich, daß auch die Abtötungskonzentrationen in den folgenden Versuchen statistischen Schwankungen dieser Größenordnung unterworfen sind.

Da sich die Konzentrationen der verschiedenen Salze entsprechend den Beispielen und ausgedrückt als ppm organische Gesamtverbindung, d. h. Bis-biguanid + quaternäre Ammoniumverbindung + Aminocarbonsäure bestimmen lassen und daher die relativen Mengen der einzelnen Komponenten bekannt sind, läßt sich aus den Resultaten der antiseptischen Tests die AbtotungsVerdünnung für Bis-biguanid-salze und/oder quaternäre Ammoniumverbindungen berechnen.

Ergebnisse

Die Ergebnisse der Versuche sind in der Tabelle VIII aufgeführt.

Als Kontrollverbindungen sind die Abtötungsverdünnungen'für Chlorhexidine-digluconat und für ein typisches quaternäres Ammoniumsalz mit einem Sequestriermittel, nämlich Mono-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-mono (HEDTA) mit aufgeführt«

Tabelle VIII
Abtötungsverdünnungen

Bakterizid (a) ppm Bis- (b) ppm Quat (c) ppm ppm orgabigüanid (Cation + Säure nische Ver-

Anion) bindung

Mischung aus

Beispiel 19 60 90 30 l80

Chlorhexidin

²⁰° - «0 350

Sequestriermittel - 1060 HHO 1500 (Kontrolle)

Aus der Tabelle ergibt sich, daß die erfindungsgemäßen Antiseptika wesentlich stärker bakterizid wirken als Chlorhexidinedigluconat und als die Quatverbindung.

209851/1236

Beispiel 20:

42,i» g einer 29,2 Gew.#-igen Lösung von Benzalkoniumhydroxid wurden zu 4,38 g Äthylendiamin-tetraessigsäure (EDTA) zugegeben. Die Mischung wurde dann auf
ein Gesamtvolumen von 97 ml verdünnt und mit 0,¹J g festem
Chlorhexidine versetzt. Diese Mischung bildete eine klare,
wässrige Lösung.

Beispiel 21;

Eine Lösung aus 12,6 g Chlorhexidine, 18,8 g Cetyl-trimethylammoniumbromid und 9,2 g Hydroxyäthyl-äthylendiamin-triessigsäure in 300 g Wasser wurde auf 60°C erwärmt und unter Rühren mit 8 Teilen Glycerin vermischt. Dabei wurde eine vollständig gelatinierte Mischung erhalten, die beispielsweise zum Auftragen auf die Haut geeignet ist.

Beispiel 22:

Aus 17,6 g Chlorhexidine, 18,2 g Cetyl-trimethyl-ammoniumbromid und 11,2 g Hydroxyäthyl-äthylendiamin-triessigsäure wurden in 53 g Wasser eine klare, wässrige Lösung hergestellt.

Bakteriologische Untersuchungen

Diese Lösung wurde, wie in Beispiel 19 beschrieben, auf ihre

209851 /1236

■- 49

bakterizide Wirksamkeit untersucht. Die Resultate sind in Tabelle IX aufgeführt.

Tabelle IX AbtötungsVerdünnung

Bakterizid a) ppm Bis- b)ppm Quat c)ppm ppm organische biguanid-Base Säure Verbindungen

Mischung aus

Beispiel 22

a) 75 75 ^5 195

Bei Vergleich dieser Resultate mit den in Tabelle VIII aufgeführten Resultaten für Chlorhexidine-digluconat und dem Quat-Sequestrat ergibt sich deutlich, daß die erfindungsgeinäßen Verbindungen wesentlich bessere bakterizide Wirkungen aufweisen.

Beispiel 23:

15 g des Di~(myristyl-dimethyl*benzyl)-ammoniumsalzes der HEDTA und 8 g Chlorhexidine wurden in 77 g Wasser unter Erzielung einer klaren Lösung gelöst.

Bakteriologische Untersuchungen

Diese Lösung wurde gemäß Beispiel 19 ausgetestet₃ wobei die in

209851/1236

Tabelle X aufgeführten Resultate erhalten wurden.

Tabelle X

Abt öt ungsVerdünnung

Bakterizid (a)ppm Bis- (b) ppm Quat (c)ppm ppm organische biguanid- Säure Verbindungen

Base · (a)+(b)+(c)

Mischung aus

Beispiel 23 53 71 29 153

Im Vergleich zu Chlorhexidine-digluconat und dem Quat-Sequestrat aus Tabelle VIII ergibt sich hier die deutliche Überlegenheit der erfindungsgemäßen Mischung.

Beispiel 2k

367*5 S (1 Mol) Myristyl-dimethyl-benzyl-ammoniumchlorid wurden in einer möglichst geringen Menge Isopropylalkohol gelöst. Unter Rühren wurde diese Lösung mit einer gesättigten Lösung von 56 g (1 Mol) Kaliumhydroxid in absoluten Äthanol versetzt. Nach ein paar Stunden fiel ein Niederschlag von Kaliumchlorid aus, der abfiltriert und mit Isopropylalkohol gewaschen wurde. Die Waschflüssigkeit wurde wieder mit der Mutterlauge vereinigt, die eine alkoholische.Lösung von Myristyl-dimethyl-benzyl-ammoniumhydroxid ist. Diese Lösung wurde in 10 gleiche Teile geteilt, die jeweils 0,1 Mol, entsprechend 3^;J ₃9 ß» des quaternär en Animo-

2 0 9 8 5 1/12 3 6

niumhydroxids enthielten. .

Zur Herstellung einer 15 Gew.$-igen wässrigen Lösung des Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-salzes der EDTA wurden 1Ί,6 g (0,05 Mol) feste Äthylendiamin-tetraessigsäure in warmem Wasser gelöst und dann mit einem aliquoten Teil der wie beschrieben hergestellten Lösung des Myristyl-dimethyl-benzyl-ammoniumhydroxid vermischt. Diese Lösung enthält nach dem Verdünnen auf 318 ml 47,7 g (0,05 Mol) des Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-Salzes der EDTA. . .

100 ml dieser 15 ^-igen Lösung mit einem Gehalt an 15 g Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-äthylen-diamin-tetraacetat, entsprechend 10,4*1 g des Quatkations und 4,56 g des zweibasischen EDTA-Anions weist ein molares Verhältnis von Quat-Kation zu EDTA-Anion von 2:1 auf.

Da das Molekulargewicht der Chlorhexidine-Base 505 beträgt, werden zur Herstellung des Chlorhexidinesalzes aus einem Mol Chlorhexidine und 2 Mol EDTA die benötigte Menge des Chlorhexidine berechnet, indem die 15 g des Quat-Sequestrans-Salzes mit einem Gehalt an M,56 g des dibasischen Anions entsprechend

χ 4,56 = 4,12 g Chlorhexidine umgerechnet werden.

2 ml der 15 %-i&en Lösung des Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-

209851 /1236

ammonium)-äthylen-diamin-tetraaeetat werden also bei JiO⁰C mit 0,08 g Chlorhexidine versetzt, wobei sich eine klare Lösung bildet, aus der sich dann beim Abkühlen Kristalle ausscheiden.

Beispiel 25:

Entsprechend der in Beispiel 2¹J beschriebenen Methode wurde das Mono-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-salz des Hydroxyäthyl-äthylendiamin-triessigsäure hergestellt, indem ein aliquoter Teil mit einem Gehalt an 0,1 Mol Myristyl-dimethylbenzyl-ammoniumhydroxid mit 27»8 g (0,1 Mol) einer Lösung von HEDTA in Wasser versetzt und dann auf 4l8 ml aufgefüllt wurde. Diese 15 ßew./S-ige Lösung enthält 8,18 % des quaternären Ammonium-Kations und 6,82 % des monobasischen HEDTA-Anion. Zur Herstellung des Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA)-salzes wird die notwendige Menge berechnet, indem das molare Gewichtsverhältnis von 505 Teilen Chlorhexidine zu 2 χ 278 Teilen HEDTA, berechnet als freie Säure, oder zu 2 χ 277 Teilen, berechnet als monobasisches Anion, bestimmt wird. Dementsprechend werden also 0,12¹I g Chlorhexidine in 2 ml der 15 #-igen Lösung des Mono-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-mono-(HEDTA)-salzes unter Bildung einer klaren Lösung des Mono-(chlorhexidine)-di-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetates) gelöst. Diese Lösung kann mit destilliertem Wasser beispielsweise zu einer Lösung mit einem Gehalt an 820 ppm Quat-Kation, 662 ppm monobasischem HEDTA-

209851 /1236

Anion und 620 ppm Chlorhexidine verdünnt werden. Beispiel 26: ' ,

Nach der in Beispiel 24 beschriebenen Methode wurde Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-aimoniunO-möno-Chydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) hergestellt, indem 0,1 Mol des quaternären Ammoniumhydroxids und 13,9 g (0,05 Mol) HEDTA zu 314 ml gelöst wurden, so daß sich eine 15 Gew.SS-ige Lösung mit einem Gehalt an 10,6 % Quat-Kation und'4,4 % des dibasischen HEDTA-Anions ergab.

2 ml dieser 15 #-igen Lösung wurden mit 0,16 g Chlorhexidine versetzt, so daß sich eine molare Verbindung von Chlorhexidine mit dem zweibasisehen HEDTA-Anion bildete, nämlich Mono-(chlorhexidine)-mono-(hydroxyathyl-athylendiamin-triaoetat), Diese entstehende klare Lösung konnte mit Wasser weiter ver-> dünnt werden auf einen Gehalt von ΊΟ6Ο ppm Quat-Kation, 440 ppm HEDTÄ^Anion und 8OO ppm Chlorhexidine.

Bakteriologische Untersuchungen.

Diese Lösung wurde nach der in Beispiel 19 besehriebene.n Methode auf ihre bakterizide Aktivität ausgetestei- _y wobei als KonferollL·' verbindungen Chlorhexidine^diglucQnat und Di-(myristyl,-dim^thylbenzy.l-ammonium) -mono- (hydr-oxyäthy 1-äthylendiamin-triacetat) mit verwendet wurden. Die Resultate sind in TabelleXa aufgeführt.

Tabelle

Xa

Bakterizid

Quatsalz der Säure

ppm Quat

1500

AbtötungsVerdünnungen

ppm Quat- ppm Kation HEDTA-Anion

1060

kko ppm ppm aktive Be- Gew.? Chlor-Chlorstandteile+ hexidine in
hexidine Quat-Kation aktiven Bestandteilen

Gesamtmenge
org. Verbindungen in ppm

1060

1500

Mischung Beispiel

**> Chlorhexidine· Φ

digluconat

100

71

29

124

200

100

153

350*

2223761

Aus der Tabelle ergibt sich deutlich die Überlegenheit der erfindungsgemäßen Verbindungen im Vergleich zu den Salzen des Quats und dem.Chlorhexidine-digluconat.

Beispiel 27:

Gemäß der in Beispiel 26 beschriebenen Methode wurde Morio-(chlorhexidine)-di-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) mit einem molaren Verhältnis von Chlorhexidine von 1:2 Mol des HEDTA-Anions hergestellt, indem 2 ml der 15 #-igen Lösung des Di-(myristyl-dimethyl-benzyl-ammonium)-mono-(hydroxyäthyläthylendiamin-triacetat) mit 0,08 g Chlorhexidine unter Bildung einer klaren Lösung versetzt wurden, die sich weiter mit V/asser verdünnen ließ.

Bakteriologische Untersuchungen

Diese Mischung wurde,wie in Beispiel 19 beschrieben, auf ihre bakterizide Aktivität geprüft, wobei die Resultate in Tabelle XI zusammengestellt sind.

209851 / 13-36

Tabelle XI

AbtötungsVerdünnung

Bakterizid

ppm Quat- ppm HEDTA- ppm Chlor-Kation Anion hexidine ppm Be- Gew.% Chlorstandteile+ hexidine in
Quat-Kation aktiven Bestandteilen

Gesamtmenge
org.Verbindungen in ppm

ro ο cr>

Mischung aus Beispiel

400 y?

283

117

108

'28

508

Auch in diesem Versuch ergibt sich, daß die erfindungsgemäße Mischung wesentlich stärkere bakterizide Eigenschaften hat als das Salz des Sequestriermittels mit dem Quat· oder Chlor- J

hexidine-digluconat. CD

cn

Beispiel 28:

Entsprechend der in Beispiel 2β beschriebenen Methode wurden 15 Gen.%-ige Lösungen aus Di-(myristyl-dimethyl-benzylammonium)-mono-(hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetatjmit der freien Base des Chlorhexidine in Mengen versetzt_s die Mischungen aus dem Mono-(chlorhexidine.)-mono-(HEDTA)-salz und dem Mono-fchlorhexidine)-di-(HEDTA)-salz mit überschüssigem Di-quat-mono-(HEDTA)-salz entsprechen»

Das Mono-(chlorhexidine)-mono-(HEDTA)-salz wurde aus 15 $-i Lösungen des HEDTA-Salzes des Quats und 8 % Chlorhexidine und das Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA)-Salz wurde aus 15 ^-igen Quatsalzlösungen und h % Chlorhexidine hergestellt, so daß sich folgende Mischungen ergaben:

a) 15 % Quat-HEDTA + 15? Chlorhexidine (Molverhältnis unter 1:2)

b) 15 $ Quat-HEDTA + 2 % Chlorhexidine (Molverhältnis unter 1:2) ■ .

c) 15 % Quat-HEDTA + 6 % Chlorhexidine (Molverhältnis über 1:2, aber unter 1:1)

BAD OBKaINAL

209851/1236

Bakteriologische Untersuchungen

M.£8s Mischui'JKön wurden gemäB Beispiel .'.9 ^n^ ihr ^ bäK^e ri:;lde ^kvlvit;!t untersucht. Die Resultat ~- s:^;.:id in Tabe-ls XII aui^j™ n;t führt.

2 0 9 8 5 1/12 3 6 BAD ORIGINAL

Tabelle

XII

Abtötungsverdünnung

ppm Quat ppm Quat- ppm

Kation HEDTA-Anion

ppm Chlor- ppm Behexidine standteile+Quat·* Kation

Gew.% Chlorhexidine in aktiven Bestandteilen

Gesamtmenge org.Verbindungen

Lösung

O CD CO CTt

1000

500

150

707

354

10 β

293

146

44

8,6

1067

	16	567	Ul VO
421	36	210	I
166

Auch hier ergibt sich, daß die Mischung im Vergleich zu den bekannten Bakteriziden, dem Quat· HEDTA-SaIz ' und Chlorhexidine-digluconat deutlich bessere bakterizide Eigenschaften aufweist.

N*

CD

CJ)

Beispiel 29:

Es wurde eine Reihe von Mischungen aus Chlorhexidine-di-(hy~ droxyäthyl-äthylendiamin-triacetat) und Didecyl-dimethylammoniumchlorid hergestellt, indem direkt eine 0,2 Gew.JS-ige Lösung des Salzes durch Auflösen von 0,954 g Chlorhexidine und 1,046 g HEDTA in 1000 ml Wasser angefertigt wurde. Dieses Salz, Chlorhexidine-di-(HEDTA) kann auch nach der in Beispiel 3 beschriebenen Methode hergestellt werden.

Didecyl-dimethyl-ammoniumchlorid ist käuflich in Form einer konzentrierten, 50 %-igen wässrigen Lösung erhältlich. Durch Auflösen von 4,0 g dieser konzentrierten Lösung in 1000 ml destillierten Wassers wurde eine 0,2 %-ige Lösung des Salzes angefertigt.

Die beiden Lösungen wurden dann in folgenden Volumenteilen miteinander vermischt:

Chlorhexidine-di-(HEDTA)

100 %

209851 /1236

Losung	Quatsalz
A (Kontrolle)	100 %
B	90 %
C	70 %
D	50 %
E	- 30 %
P	10 %
G	0

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen A bis G wurden nach der in Beispiel 19 beschriebenen Weise auf ihre bakterizide Aktivität untersucht, wobei als Kontrolle die Abtötungsverdünnung von Chlorhexidine-digluconat mit bestimmt wurde. Die Resultate sind in Tabelle
XIII aufgeführt und graphisch in fig. I der Zeichnungen dargestellt.

209851 /1236

Tabelle

XIII

AbtötungsVerdünnungen

Lösung ppm Quat+Chlor- ppm Chlor- ppm HEDTA- ppm Ammo- ppm-Chloridhex/HEDTA Gesamt- hexidine Anion nium-Kation Anion

ppm Gluconat

ro ο co oo cn

A (Kontrolle)

B

C

D

E

P

G

Chlorhexidine-

digluconat (Kontrolle)

24
39
66
58
86
95

228

26
44
71
65
94
105

675
405
173
124

47

18

f 172

N3 Ki Ni

Aus dieser Tabelle ergibt sich nicht nur, daß Mono-(chlorhexidine) -di-(HEDTA) gegenüber Chlorhexidine-digluconat ein stärkeres Bakterizid ist, sondern daß sich eine synergistische Wirksamkeit beim .Vermischen von Mono-(chlorhexidine )-di-(HEDTA) und Didecyl-dimethyl-ammoniumchlorid nachweisen läßt. Aus Fig. 1 ist zu entnehmen, daß bei einer einfachen additiven Wirkung der beiden Komponenten die Testresultate auf der Linie A liegen müßten, während tatsächlich alle beobachteten Werte auf der Kurve B, also weit unterhalb A.liegen. Das bedeutet, daß die bakteriziden Eigenschaften der Mischungen wesentlich größer als die Summe der Einzelkomponenten sind, und daß die Mischungen daher eine synergistische Wirksamkeit aufweisen.

Beispiel 30: ·

Eine 0,2 Gew.#-ige Lösung Chlorhexidine-di-(hydroxyäthyläthylendiamin-triacetat) wurde durch Auflösen von 0,95*1 g Chlorhexidine-Base und 1,046 g HEDTA in 1000 ml destillierten Wassers hergestellt und mit einer 0,2 Gew.^-igen Lösung von (Di-isobutyl-cresoxy-äthoxyäthy^-dimethyl-benzyl-ammoniumchlorid (Handelsmarke Hyamine 10X) in destilliertem Wasser in folgenden Verhältnissen vermischt:

Lösung Mono-(chlorhexidine)- "Hyamine 1OX" di-(HEDTA)

A 100 % 0 %

B 75 % 25 %

C 50 % ■ 50 %

D 2H % 75 %

K (Kontrolle) 0 % ' 100 %

209851/1236 .

- 61» -

In jedem Fall wurden klare, stabile Lösungen erhalten. Bakteriologische Untersuchungen

Diese Lösungen wurden nach der in Beispiel 19 beschriebenen Methode untersucht; die Resultate sind in Tabelle XIV und graphisch in Fig. 2 der Zeichnungen dargestellt.

20985 1/1236

Tabelle

XIV

ro ο CD OO cn

CO

σ>

	Gesamtkonzen tration der Bakterizide· ppm	AbtötungsVerdünnungen	HEDTA- Anion in ppm	Quat-Kation in ppm	Chlorid-Anion in ppm
Lösung	300	Chlorhexidine- Kation in ppm	157	0	0
A	400	143	157 .	92	8
B	500	143	- 131	230	20
C ·	>10Ö0	119	131	690	60
D	E (Kontrolle)»1000	119	0	^>920	•»80
	0

Aus den Resultaten ergibt sich, daß Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA) wesentlich stärker bakterizid als Hyamine 1OX wirkt, und daß die Mischungen aus dem Chlorhexid'inesälz und dem Quat synergistisch wirksam sind, da die Kurve B der Abtötungsverdünnungen der Mischungen beider Verbindungen wesentlich unterhalb der geraden Linie A liegt, die angibt, welche, additiven Wirkungen der beiden Komponenten zu erwarten wären (aus den Versuchen ergibt sich, daß die Abtötungs· Verdünnung des Quat bei 2500 ppm liegt, daher ist die Linie A auf diese Basis bezogen).

VJI

ίο»

JOS.

N) N)

CD

Beispiel 31:

Eine gemäß Beispiel 30 hergestellte 0,2 Gew. #-ige Lösung von Chlorhexidine-di-(HEDTA) wurde mit einer 0,2 Gew.%-igen Lösung von (Di-isobuty l-phenoxy-äthoxyäthy])-dimethyl-benzy 1-ammoniumchlorid in destilliertem Wasser in folgenden Verhältnissen vermischt:

Lösung	Mono-(chlorhexidine)- di-(HEDTA)	"Hyamine 1622"
	100 %
A	75 %	0 %
B	50 %	25 %
C	25 %	50 %
D	E (Kontrolle) 0 %	75 %
100 %

In jedem Fall wurden klare, stabile Lösungen erhalten. Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen A bis E wurden, wie in Beispiel 19 beschrieben, auf ihre bakterizide Aktivität ausgetestet. Die Resultate sind in Tabelle XV und graphisch in Fig. 3 der beiliegenden Zeichnungen dargestellt.

209851/1236

Tabelle XV

Abtötungsverdünnungen

	Lösung	Gesamtkonzentration der Bakterizide in ppm	Chlorhexidme- Kation in ppm	HEDTA- Anion in ppm	Quat-Kation in ppm	Chlorid- Anion in ppm
	A	250	119	131	O .	O
ΙΌ σ CD OO	B η T)	500 600 ^>1000	177 143 ^119 s	198 157 >131	115 276 ■	10 24
	E (Kontrolle)	)) 1000	O	0-	^>920	»80

Auch aus dieser Tabelle ergibt sich,, daß Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA) wesentlich stärker bakterizid wirksam als das Quat ist, und daß die Mischungen a.us dem Chlorhexidinesalz und dem Quat synergistisch wirksam sind, da die Kurve B der Abtötungsverdünnungen der Mischung aus den beiden Komponenten unterhalb der geraden Linie A liegt, die die Ergebnisse angeben würde, die bei rein additiver Wirkung der beiden Komponenten zu erwarten wären (aus den Versuchen ergibt sich, daß die Abtötungsverdünnung des Quat allein etwa 2500 ppm beträgt, die Linie A ist daher auf diese Basis bezögen).

Beispiel 32:

Eine gemäß Beispiel 30 hergestellte 0,2 Gew.#-ige Lösung von Chlorhexidine-di-(HEDTA) wurde mit einer 0,2 Gew.#-igen Lösung von Cetylpyridiumchlorid in den folgenden Verhältnissen vermischt:

Lösung	Mono-(chlorhexidine)- di-(HEDTA)	Cetylpyridinium- chlorid
A	100 %	0 %
B	75 %	25 %
C	50 %	50 %
D	25 %	75 %
E (Kontrolle)	0 %	100 %

Auch hier wurden jeweils klare, stabile Lösungen erhalten. Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen A bis E wurden gemäß Beispiel 19 auf ihre bakterizide Aktivität untersucht. Die Resultate sind in Tabelle XVI und graphisch in Fig. k der anliegenden Zeichnungen dargestellt.

209851/1236

Tabelle XVI

Lösung Gesamtkonzenträtion der Chlorhexidine-Bakterizide in ppm Kation in ppm

KEDTA-Anion in ppm	Quat-Kation in ppm	Chlond-Anion in ppm	I σ\ VO	"el- ίο ο
157	0	0
157	90	10
157	270	30
78	405	45
0	>900	>.ioo

A 300 143

B 400 143

C 600 143

D 600 . 72

E (Kontrolle) )> 1000 0

OD

cn Auch in diesem Fall ergibt sich deutlich, daß nicht nur Mono-(chlorhexidine)-di-(KEDTA) we- -■>- sentlich stärker bakterizid wirksam als Cetylpyridium-chlorid ist, sondern daß die Mischungen *° des Chlorhexidinesalzes und des Quat Synergistisch wirksam sind, da die Kurve B der Abtötungs-Verdünnungen der Mischungen unterhalb der geraden Linie A liegt, die bei rein additiver Wirkung der beiden Komponenten zu erwarten wäre (die Versuche ergaben, daß die Abtötungsverdünnung [ von Cetylpyridium-chlorid bei 2500 ppm liegt, so daß die Linie A auf diese Basis bezogen ist). P£

U) - CD

Beispiel 33:

1,68 g einer 50 %-igen Lösung von Cocosalkyl-di-(hydroxyäthyl)-benzyl-ammoniumchlorid und 0,277 g Hydroxyäthyläthylendiamin-triessigsäure wurden mit destilliertem Wasser auf 100 ml aufgefüllt, so daß das molare Verhältnis von Quat-Kation zu HEDTA-Anion in der Lösung 2:1 betrug (Lösung I) Dann wurde eine ähnliche Lösung hergestellt, die zusätzlich 0,42 g Chlorhexidine enthielt (Lösung II). Die beiden Lösungen wurden dann in folgenden Anteilen miteinander vermischt:

Lösung	Gew.Teile Lsg. I	Gew.Teile Lsg. II	Endlösung Gew.? Chlor- Gew.% hexidine Ammon. Kation	0,769	Gew. % HEDTA- Anion
A	1	0	0	0,769	0,277
B	5	1	0,07	0,769	0,277
C	2	1	0,14	0,769	0,277
D	1	1	0,21	0,769	0,277
E	1	2	0,28	0,769	0,277
P	0	1	0,42	0,277

Bakteriologische Untersuchungen:

Die Lösungen A bis P wurden gemäß Beispiel 19 auf ihre bakterizide Aktivität untersucht, wobei als Kontrollverbindungen Chlorhexidine-ddgluconat mit ausgetesteti wurde. Die Resultate sind in der Tabelle XVII aufgeführt.

209851 /1236

eingegangen

	Tab	eile	XVII	ppm Quat- Kation	ppm HEDTA- Anion	ppm Chlor- hexidine- Kation	ppm Gluconat
	AbtötungsVerdünnungen	551·	199	G	0
Lösung	Gesamt- bakteri zide i.ppm	485	175	44	0
A	750	343	123	62	0
B	704	245	88	67	0
C	528	221	79	80	0
D	400	198	52	100	0
E	380
F	350	0	0	376	284
Chlor
hexidine- 66O
digluconat

Aus der Tabelle ergibt sich deutlich, daß die Mischungen mit einem Gehalt an Quat-Kationen, HEDTA-Anionen und Chlorhexidine-Kationen wesentlich bessere bakterizide Wirkungen als Chlorhexidine-digluconat und den Quat-Sequestriermittelsalzen aufweisen.

Beispiel 34:

Entsprechend dem in Beispiel 33 beschriebenen Verfahren wurden folgende Lösungen hergestellt:

Lösung I Dioctyl-dimethyl-ammoniumchlorid -

209851 /1236

o,'65 g.

HEDTA . 0,28 g

destilliertes Wasser ab 100 ml

Lösung II

Dioctyl-dimethyl-ammoniumchlorid 0,64 g

HEDTA 0,28 g

Chlorhexidine 0,5 g

destilliertes Wasser ab 100 ml

Diese Lösungen wurden dann in folgenden Verhältnissen vermischt:

Endlösung

Lösung	Gew.Teile Lsg. I	Gew.Teile Lsg.II	Gew.% Chlor hexidine	Gew.% Ammonium- Kation	Gew.% HEDTA- Anion
A	1	0	0	0,569	0,28
B	7	1	0,063	0,569	0,28
C	3	1	0,125	0,569	0,28
D	1	1	0,25	0,569	0,28
E	1	2	0,33	0,569	0,28
F	0	1	0,5	0,569	0,28

20985 1/1236

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen A bis P wurden gemäß der in Beispiel 19 beschriebenen Weise auf ihre bakterizide Wirksamkeit untersucht _s wobei als Kontrollverbindung Chlorhexidine-digluconat verwendet wurde. Die Resultate sind in Tabelle XVIII zusammengefaßt.

Tabelle

XVIII

AbtötungsVerdünnungen

Lösung ppm Gesamt bakterizide	750	ppm Quat- Kation	ppm ■ HEDTA- Anion	ppm- Chlor- hexidine- Kation	ppm GIu- conat- Anion
A	η 83	500	250	0	0
B	516	300	150	33	0
C	421	300	150	66	0
D	iJ23	217	108	96	0
E	.398	200	100	123	0
	660	167	83	148	0
Chlor hexidine- digluconat	0	0	376.	28M

209851/1236

Aus der Tabelle ergibt sich, daß Mischungen mit einem Gehalt an Quatkationen, HEDTA-Anionen und Chlorhexidinekationen größere Wirkungen als Chlorhexidine-digluconat und Sequestriermittelsalzen des Quat zeigen.

Beispiel 35

Mono-(chlorhexidine)-mono-(HEDTA) ist bei 20 C nur zu etwa 0,2 % und Mono-(chlorhexidine)-di-(HEDTA) ist bei dieser Temperatur nur zu etwa 0,3 % wasserlöslich. Dieser Nachteil kann dadurch ausgeglichen werden, daß die Löslichkeit der Chlorhexidinesalze durch Zugabe von Cetyl-trimethyl-ammoniumbromid stark vergrößert wird, so daß ein Konzentrat entsteht.

Mischungen aus Chlorhexidine und HEDTA wurden in Wasser gelöst und mit Cetyl-trimethyl-ammoniumbromid, "Cetrimide" versetzt, bis eine klare Lösung entstanden war. Diese Lösungen können auch hergestellt werden, indem das feste Chlorhexidine-Salz in Wasser gegeben und mit so viel Quatverbindung versetzt wird, bis eine klare Lösung entstanden ist.

Auf diese Weise wurden folgende Lösungen hergestellt:

209851 /1236

■-75 -

Lösung	Gew. % Chlor- hexidine- kation'	Gew. % HEDTA- anion	Molver hältnis Chlorhexi- dine/HEDTA	Gew.# Cetyl trimethyl- ammonium- bromid	20,7
A	Ik ,0	7,7	1:1	20,0	1:2 + 11,1 Überschuß
B	18,0	9,2	1:1 + 17,6 Überschuß
C	7,2	7,1	1:2
D	5,5	8,3

Alle hergestellten Lösungen waren klar.und stabil.

Bakteriologische Untersuchungen

Die Lösungen A bis D wurden in der in Beispiel 19 beschriebenen Weise auf ihre bakterizide Aktivität untersucht. Bei diesen Testen wurde Pseudomonas pyocyanea in

A) hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) ohne Zusatz von Serum,

B) destilliertem Wasser mit Zusatz von 10 % Rinderserum und

C) hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) mit Zusatz von 10 % Rinderserum

eingesetzt. Als Kontrollverbindung wurde Chlorhexidine-digluconat mit ausgetestet. Die Resultate sind in Tabelle XIX zusammenge- '

stellt. ·

209851/1236

Tabelle XIX: Abtötungsverdünnungen

A) Hartes	Standardwasser	ohne Serum	0	ppm Cetrimide
Lösung	ppm Chlor- hexidine- kation		0	114
A	80	ppm HEDTA- ppm anion Gluconat	0	289
B	200	45	0	288
C	100	100		162
D	80	100
120

Chlorhexidinedigluconat 570

430

B) Destilliertes Wasser + 10 % Serum

Lösung	ppm Chlor- hexidine- kation	ppm HEDTA- anion	ppm Gluconat	ppm Cetrimide
A	130	70	0	185
B	100	50	0	145
C	50	• 50	0	144
D	60	90	0	121"
Chlorhexidine- digluconat 285	0	215	0

209851/1238

C) Hartes Standardwasser + 10 % Serum

Lösung	ppm Chlor- hexidine- kation	ppm HEDTA- anion	ppm Gluconat	ppm Cetrimide
A	320	l80	0	H56
B	760	390	0	1097
C	390	380	0	1124
D	200	300	0	405
Chlorhexidine- digluconat 11*15	0	855	0

Aus diesen Versuchen ergibt sich, daß durch Zugabe von Cetyltrimethyl-ammoniumbromid und einer als Sequestriermittel wirksamen Aminocarbonsäure zu Lösungen mit einem Gehalt an Chlorhexidine, der zur Erzielung eines bestimmten bakteriziden Effektes notwendige Zusatz an Chlorhexidine wesentlich reduziert werden kann. Da HEDTA und Cetrimide vresentlich billiger sind als Chlorhexidine führt dies zu einer starken Senkung der Kosten zur Herstellung von Desinfektionsmitteln sowie andererseits die Wirksamkeit eines Desinfektionsmittels ohne Berücksichtigung der Kosten stark erhöht werden kann«

Beispiel 36

Entsprechend dem in Beispiel 35 beschriebenen Verfahren wurden folgende Mischungen aus Chlorhexidine-DTPA und Cetrimide her-

209851/1236

gestellt, wobei klare stabile Lösungen entstanden:

Gew.? Chlorhexidine- Gew.% . Gew.? Lösung kation DTPA-anion Cetrimide

A 10,5 7,5 15,0

B 13,¹I 6,5 19,5

Bakteriologische Untersuchungen Die Lösungen wurden wie in Beispiel 35 auf ihre bakterizide Aktivität geprüft, und zwar in A) hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) ohne Serum, B) destilliertem Wasser + 10 % Rinderserum und C) hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) + 10 % Rinderserum.

Als Kontrollverbindung wurde Chlorhexidine-digluconat mit aus getestet. Die Resultate sind in Tabelle 20 zusammengestellt.

Tabelle XI; AbIötungsverdünnungen

A) Hartes	Standardwasεsr	ohne Serum	0 0	ppm Cetrimide
Lösung	ppm Chlor- hexidine- kat ■» on			86 98
A 60 B 67 Chlorhexidine-	ppm DTPA- ppm anion Gluconat
HO 33

digluconat 570 0 430 0

209851/1236

B) Destilliertes Wasser + 10 % Serum

ppm Chlor- ppm

hexidine- DTPA- ppm

Lösung kation anion Gluconat

A 90 60 0

B 100 50 0

Chlorhexidine-

digluconat 285 O 215

ppm Cetrimide

129

C) Hartes Standardwasser + 10 % Serum

Lösung	ppm Chlor- hexidine- kation	ppm DTPA- anion	ppm Gluconat	ppm Cetrimide
A	300	200	0	430
B	670	330	0	980
Chlorhexidine- digluconat 1145	0	855	0

Auch hier zeigt sich, daß die Wirksamkeit bakterizider Mischungen mit einem Gehalt an Chlorhexidine durch Zugabe von Cetrimide und DTPA mit entsprechender Kostensenkung verbessert werden kann.

Ähnliche Resultate werden mit Mischungen aus Chlorhexidine, NTA als Sequestriermittel und Cetrimide erhalten.

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Beispiel 37

Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind nicht nur gegen
Pseudomonas pyocyanea wirksam, sondern auch gegen zahlreiche
andere Bakterien. Lösung A) aus Beispiel 35 und Lösung A) aus Beispiel 36 wurden mit Chlorhexidine-digluconat als Kontrollverbindung bezüglich ihrer bakteriziden Wirksamkeit gegen
zahlreiche andere Bakterien ausgetestet. Die Teste wurden wie in Beispiel 19 beschrieben durchgeführt, wobei destilliertes
Wasser mit einem Zusatz von 10 % Rinderserum verwendet wurde. Als Testkeime wurden folgende Keime eingesetzt:

1) Pseudomonas pyocyanea N.C.T.C. 67^9

2) Proteus vulgaris N.C.T.C. H635

3) Salmonella typhi N.C.T.C. 3390 1») Escherichia coli N.C.T.C. 8196

5) Staphylococcus aureus N.C.T.C. 3750

Die Resultate dieser Versuche sind in Tabelle XXI zusammengestellt.

209851/123&

Tabelle XXI: Abtötungsverdünnung

Chlorhexidine-Salz

Ps.

Lösung

l)pyo. 2)P.vulg. 3)S.typhi

5)Staph.aur.

Beispiel 35
Lösung A) 200

Beispiel 36
Lösung A) 150

Chlorhexidinedigluconat 500

300 350 750

100

100

300

150 200 300

200

100

500

Auch aus diesen Resultaten ergibt sich, daß die erfindungsgemäßen Mischungen wesentlich stärker als Chlorhexidine-digluconat gegen zahlreiche Bakterien wirksam sind.

Beispiel 38

Die in dem obigen Beispiel gegen E.coli erhaltenen Ergebnisse wurden weiter bestätigt, indem die bakteriziden Eigenschaften der Mischungen gegen E.coli nach den bereits beschriebenen Verfahren des British Standard 3286: i960 in hartem Standardwasser (W.H.0.-Vorschrift) mit einem Gehalt an 10 % Rinderserum durchgeführt wurden. Dabei wurden folgende Lösungen eingesetzt, wobei Chlorhexidine-digluconat als Kontrollverbindung verwendet wurde:

2 0 9 8 51/12 3 8

Gew.% Chlor- Lösung hexidinekation	13,0	Gew. % HEDTA-anion	Gew./? DTPA-anion	Gew. % NTA-anion	Gew. % Gluconat-anion	Cetrimide
A	13,6	7,2	0	0	0	18,9
B	14,4	0	6,5	0	0	11,3
C	11,4	0	0	5,1	0	15,4
Chlorhexidine- digluconat (Kontrolle)	0	0	0	8,6	0

O CO CO cn

~* Diese Mischungen wurden in Konzentrationen ausgetestet, die 100, 150, 200, 250, 300,

^ 350, 400, 500, 600 und 800 ppm der erfindungsgemäßen Chlorhexidine-Salze oder des Chlor- cn hexidine-digluconat entsprachen. Die Ergebnisse der Teste sind in Tabelle XXII als Anzahl der überlebenden Keime je Million angeimpfter Bakterien ausgedrückt.

OO

NJ

cd

	Test 1	A Test	2 Test 3	Test 1	Tabelle	_	Test	C 1 Test	2 Test 3	Chlorhexidine- digluconat (Ko Test 1 Test 2	ntroll Test 3
ppm Chlor hexidine/ Sequestrans- salz			_		i XXII	85	u/c		_
100	-	-	137	- .	Lösung B Test 2 Test 3	30	432	36	u/c	-	-
1,50	190	78	27	260	_	-	O	-	O	-	-
200	0	-	-	-	24	O	O	-	O	- -
250	0	0	O	113	O	O	O	44	O	u/c	-
300	0	0	O	O	-	O	O	O	.0	133	• 162
400	0	O	O	O	O	O	O	O	O	174 ' -	110
. 500	0	0	O	O	O	O	O	O	O	100 0	23
600	0	0	O	O	O		O	O	O	0 0	0
800				O
	O

Aus der Tabelle ergibt sich deutlich, daß diese Mischungen wesentlich stärker bakterizid gegen E.coli als Chlorhexidine*digluconat wirksam sind.

N) N> CJ

Claims (31)

1. Patentansprüche

   1,1 Salze aus bakterizid wirksamen Bis-biguanidbasen mit als Sequestriermittel wirksamen Aminocarbonsäuren.
2. 2. Salze nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die bakterizid wirksamen Bis-biguanidbasen der allgemeinen Formel I

   A-NH-C-NH-C-NH-X-NH-C-NH-C-NH-A (I)

   IJ J Il

   NH NH NH NH

   entsprechen, in der A gleiche substituierte oder nicht substituierte Phenyl- oder Phenylalkylgruppen, in denen die Alkylgruppe 1 bis 3 C-Atome aufweist und in denen jede" Phenylgruppe mit einem oder mehreren Halogenatomen oder Hydroxy-, Nitro-, Alkyl-, Alkoxy- oder Alkylthiogruppen substituiert sein kann, und in der X entweder ein Brückenglied wie einen Benzol-, Dialkoxybenzol- oder Cyclohexanring oder eine Polymethylenkette mit 1 bis 15 -CH₂" Gruppierungen, die gegebenenfalls durch ein oder mehrere Sauerstoffatome unterbrochen sein kann und/oder gegebenenfalls durch einen oder mehrere Benzolringe oder Diphenylmethylengruppen unterbrochen oder endständig substituiert sein kann, oder in der X die Gruppe NH-X-NH (wobei X die obige Bedeutung

   209851/1236

   mit endständigen Iminogruppen hat} die zu einem Piperazinyl.· ring geschlossen ist, bedeuten.
3. 3. Salze nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als Bisbiguanidbase '

   1,2-Bis- (N.-p-chlorpheny ldiguanido-Nj.) -äthan; to/o'-Bis-(N.-p-chlorpheny ldiguanido-N,-)-di-n-propyl-äther; 1,6-Bis-(N.-ß-phenyläthyldiguanido-Nc)-hexan; 1,6-Bis-(N.-phenyldiguanido-Nci-hexan;

   1,6-BiS-(N. -2, M-dimethy lpheny ldiguanido-N,-) -hexan; 1 5

   1,6-Bis-(N -p-tolyldiguanido-N,.)-hexan; 1,6-Bis- (N., -p-hydroxyphenyldiguanido-N,-) -hexan:

   1,6-Bis- (N₁-p-anisyldiguanido-N₍-) -hexan; 1,6-Bis- (N.-m-nitrophenyldiguanido-N,-) -hexan; 1,3~Bis- (N^-p.-chlorpheny ldiguanido-Nc) -propan; l,i|-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N_t-)-butan; l,5-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N_t-)-pentan; l,7~Bis-( N.-p-chlorphenyldiguanido-Np.)-heptan; 1,6-Bis- (N. -m-chlorpheny ldiguanido-N,-) -hexan; 1,6-Bis-(N.-2,5-dichlorphenyldiguanido-Nc)-hexan; 1,6-Bis-(N.-3 j ^-dichlorphenyldiguanido-Nc)-hexan; 1, ¹I-BiS- (N.-pheny ldiguanido-N,-) -benzol; 1 ,Jl-BiS-(SL -p-chlorpheny ldiguanido-N-) -benaol;

   1 0 '

   1,6-Bis- (N. -p-chlorpheny ldiguanido-N,-) -hexan; 1 0

   20 9851/1236

   l,10-Bis-(N. -p-chlorphenyldiguanido-lO-decan: 1, ¹I-BiS-(N. -o-chlorphenyldiguanido-N,. )-hexan;

   1 t)

   4,4'-Bis-(N₁-pheny ldiguanido-Nj-)-dipheny lme than; 4,4'-Bis-(N₁-p-chlorphenyldiguanido-N_l_)-diphenylmethan;

   ,Cu* -Bis-(N.-p-chlorphenyldiguanido-Nj.)-1,4-di-n-propoxybenzol oder
   1,4-BiS- (N.-p-chlorpheny lamidinoamino-Nju) -piperazin

   vorliegt.
4. 4. Salze nach Anspruch 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, daß die als Sequestriermittel wirksame Aminocarbonsäure die allgemeine Formel II HOOC CH₂ N(R¹) Z R² aufweist, in der

   R ein Wasserstoffatom, eine Alkyl-, Carboxymethyl-, Hydroxy-

   2 äthyl- oder Hydroxypropy!gruppe, R eine Carboxymethyl-,

   Hydroxyäthyl- oder Hydroxypropylgruppe und Z entweder die Gruppe -CH₃.CH₂-N(R^)_n-, in der R⁵die Bedeutung von R¹ aufweist und η 0,1,2 oder 3 sein kann, oder in der Z die Gruppe III

   N(R³)- _v

   (III) in der R die angegebene Bedeutung hat, bedeuten.

   209851/1 236

   eingegangen

   *8
5. 5. Salze nach Anspruch 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, daß als Aminocarbonsäure vorliegt:

   Äthylendiamin-tetraessigsäure; N,N¹-Äthylendiamin-diessigsäure; N-Hydroxyäthyl-äthylendiamin-triessigsäure; N ,N',-Dihydroxyäthy 1-äthy lendiamin-diessigsäure; Diäthylentriamin-pentaessigsäure; 1,2-Diaminocyclohexan-tetraessigsäure; Nitrilotriessigsäure;

   N-Hydroxyäthyl-irainodiessigsäure; .

   N-Dihydroxyäthyl-aminoesBigsäure Iminodiessigsäure,oder 3-Hydroxypropyl-iminodiessigsäure.
6. 6. Mono-chlorhexidine-(äthylendiamin-tetraacetat).
7. 7. Mono-chlorhexidine-(nitrilotriacetat).
8. 8. Mono-chlorhexidine-(diäthylentriamin-pentaacetat).
9. 9» Mono-chlorhexidine-(N-dihydroxyäthyl-aminoacetat).
10. 10. Mono-picloxidine-iäthylendiamin-tetraacetat).

    209851/1236

    -θ9 -
11. 11. Mono-picloxidine-Cnitrilotriacetat).
12. 12. Mono-picloxidihe-(N-dihydroxyäthyl-aminoacetat).
13. 13. Mono-picloxidine-(diäthylentriamin-pentaacetat).
14. 14. Mono- jj.,6-bis-(N -p-methylthiophenyldiguanido-N-)-hexanj-(N-hydroxyäthy1-äthylendiamin-triacetat).
15. 15· Mono-chlorhexidine-iN-hydroxyäthyl-äthylendiamin-triacetat).
16. 16. Mono-chlorhexidine- di-J_N-hydroxyäthyl-äthylendiamintriacetatj.
17. 17· Verfahren zur Herstellung der Salze nach Anspruch 1 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß die Bis-biguanidbase in einem wässrigen oder wässrig-alkoholischen Medium mit der Aminocarbonsäure umgesetzt wird.
18. 18. Verfahren zur Herstellung der Salze nach Anspruch 1 bis 16, dadurch gekennzeichnet, daß ein Salz der Bis-biguanidbase mit einem Salz der Aminocarbonsäure in einem wässrigen oder wässrig-alkoholischen Milieu in einer doppelten Umsetzung umgesetzt wird.

    209851 /1236

    -- gtj -"
19. 19· Verfahren nach Anspruch 17 oder 1.8, dadurch gekennzeichnet, daß als wässrig-alkoholisches Milieu wässriges Methanol und/ oder Äthanol verwendet wird.
20. 20. Desinfektionsmittel oder Antiseptika mit einem Gehalt an Verbindungen nach Anspruch 1 bis 16 in einem geeigneten' . festen oder flüssigen Träger.
21. 21. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 20, da- . durch gekennzeichnet, daß sie als Lösungsyermittler eine quarternäre Ammoniumverbindung enthalten.
22. 22. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 21, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine quarternäre Ammoniumverbindung der allgemeinen Formel IV

    -f-

    (IV)

    Y¹ - 4 - Y²

    CH₃

    enthalten, in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen, eine Di-isobutyl-phenoxy-äthoxyäthyl- oder eine Di-isobutyl-

    cresoxy-äthoxyäthyl-Gruppe, Y eine gegebenenfalls im aromatischen Kern substituierte Aralkylgruppe und vorzugsweise eine Benzy!gruppe bedeuten.

    209851/1236
23. 23. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 22, dadurch gekennzeichnet, daß sie ein Salz des Benzalkoniums, des (Di-isobutyl-cresoxy-äthoxyäthyl)-dimethyl-benzyl-ammoniuins, des (Di-isobutyl-phenoxy-äthoxyäthyl)-dimethyl-benzyl-ammoniuins oder des Myristyl-dimethyl-benzyl-ammoniums enthalten.
24. 24. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine quarternäre Ammoniumverbindung der allgemeinen Formel V

    CH.

    Y^-N-CH

    CH.

    enthalten, in der Y entweder eine Alkylgruppe mit 8 bis 18 C-Atomen oder eine Alkyl-benzylgruppe,in der die Alkylgruppe 8 bis 18 C-Atome aufweist, bedeutet.
25. 25· Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 2k, dadurch gekennzeichnet, daß sie Cetyl-trimethyl-ammoniumbromid enthalten.
26. 26. Desinfektionsmittel oderAntiseptika nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß sie eine quarternäre Ammoniumverbindung der allgemeinen Formel VI

    209 851/1236

    eingegangen am

    CH.

    Υ^η - N - CH.

    (VI)

    enthalten, in der Y und Y⁵ jeweils eine Alkylgruppe mit 8 bis 18 C-Atomen bedeuten und gleich oder verschieden sein können.
27. 27. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 26₉ dadurch gekennzeichnet, daß sie Salze des Didecyl-dimethylammoniums oder des Dioctyl-dimethyl-ammoniums enthalten.
28. 28. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß sie quarternäre Ammoniumverbindungen der allgemeinen Formel VII

    Y' - N - CH

    (VII)

    enthalten, in der Y eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen

    7 R
    und Y und Y gleiche oder verschiedene Hydroxyalkyl- oder Alkoxyalkylgruppen bedeuten.
29. 29. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 28, dadurch gekennzeichnet, daß sie Salze des Alkyl-dihydroxyäthyl-benzyliammoniums enthalten»

    20 9 8517 12
30. 30. Desinfektionsmittel oder Antiseptika nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, daß sie quarternäre Ammoniumverbindungen der allgemeinen Formel VIII .

    (VIII)

    enthalten, in der Y^ eine Alkylgruppe mit 8 bis 20 C-Atomen bedeutet.
31. 31. Desinfektionsmittel und Antiseptika nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, daß sie Cetylpyridinium-bromid enthalten.

    si:kö

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