CZ2003413A3 - Prekursory léčiv na bázi fosfonátových analogů nukleotidů a způsoby jejich výběru a přípravy - Google Patents

Prekursory léčiv na bázi fosfonátových analogů nukleotidů a způsoby jejich výběru a přípravy Download PDF

Info

Publication number
CZ2003413A3
CZ2003413A3 CZ2003413A CZ2003413A CZ2003413A3 CZ 2003413 A3 CZ2003413 A3 CZ 2003413A3 CZ 2003413 A CZ2003413 A CZ 2003413A CZ 2003413 A CZ2003413 A CZ 2003413A CZ 2003413 A3 CZ2003413 A3 CZ 2003413A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
activity
drug
target tissue
pmpa
tissue
Prior art date
Application number
CZ2003413A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ304886B6 (cs
Inventor
Mark W. Becker
Harlan H. Chapman
Tomas Cihlar
Eugene J. Eisenberg
Gong-Xin He
Michael R. Kernan
William A. Lee
Ernest J. Prisbe
John C. Rohloff
Mark L. Sparacino
Original Assignee
Gilead Sciences, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=22821718&utm_source=***_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ2003413(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Gilead Sciences, Inc. filed Critical Gilead Sciences, Inc.
Publication of CZ2003413A3 publication Critical patent/CZ2003413A3/cs
Publication of CZ304886B6 publication Critical patent/CZ304886B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6561—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings
    • C07F9/65616—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing systems of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring or ring system, with or without other non-condensed hetero rings containing the ring system having three or more than three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members, e.g. purine or analogs
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
    • G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
    • G01N33/5011—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics for testing antineoplastic activity

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká prekursorů léčiv (prodrug) na bázi methoxyfosfonátových analogů nukleotidů. Zvláště se týká zlepšených způsobů přípravy a identifikace takových prekursorů.
Dosavadní stav techniky
Je známo mnoho methoxyfosfonátových analogů nukleotidů. Tyto sloučeniny mají obecně strukturu A-OCH2P(O)(OR)2, kde A je zbytek analogu nukleosidu a R je nezávisle buď vodík nebo různé chránící nebo prekursorové funkční skupiny. Viz U.S. patenty č. 5,663,159, 5,977,061 a 5,798,340, Oliyai et al., Pharmaceutical Research 16(11): 1687-1693 (1999), Stella et al., J. Med.Chem. 23(12):1275-1282 (1980), Aarons, L., Boddy, A. a Petrák, K. (1989) Novel Drug Delivery and Its Therapeutic Application (Prescott, L. F. a Nimmo, W. S. ed.), str. 121-126; Bundgaard, H. (1985) Design ofProdrugs (Bundgaard, H., ed.) str. 7074 a 79-92; Banerjee, P. K. a Amidon, G. L. (1985) Design of Prodrugs (Bundgaard, H., ed.) str.l 18-121; Notáři, R.E. (1985) Design ofProdrugs (Bundgaard, H., ed.) str.135-156; Stella, V. J. a Himmelstein, K. J. (1985) Design of Prodrugs (Bundgaard, H., ed.) str. 177-198; Jones, G. (1985) Design ofProdrugs (Bundgaard, H., ed.) str. 199-241; Connors, T. A. (1985) Design of Prodrugs (Bundgaard, H., ed.) str. 291-316. Veškerá literatura a citace patentů jsou výslovně uvedeny literárním odkazem.
Prekursory léčiv na bázi methoxyfosfonátových analogů nukleotidů, uvažovaných pro antivirovou nebo protinádorovou terapii, které jsou známy, byly tradičně vybírány pro jejich systemický účinek. Takové prekursory léčiv byly například vybrány pro zvýšenou biologickou dostupnost, tj. schopnost být absorbovány ze zažívacího traktu a být rychle přetransformovány na vlastní léčivo, aby se zajistilo, že léčivo je k dispozici pro všechny tkáně. Nyní jsme však zjistili, že je možné vybrat prekursory léčiv, které se hromadí na terapeutických místech, jak je ilustrováno zde popsanými studiemi, kde se analogy obohacují v lokalizovaných ohniskách infekce HIV. Cílem tohoto vynálezu je, spolu s dalšími výhodami, dosáhnout nižší toxicitu v okolních tkáních a vyšší účinnost vlastního léčiva ve tkáních, které jsou cílem terapie vlastním účinným methoxyfosfonátovým analogem nukleotidu.
• · • · · · • · · · · · · • · · · · · · • · · · · ·· · · ·· · ·· ·· ·· ·· ·· ··
Proto, ve shodě s těmito pozorováními, je předložen způsob screeningu pro identifikaci methoxyfosfonátových analogů nukleotidů jako prekursorů léčiv, které vykazují zvýšenou aktivitu v cílové tkáni.
Podstata vynálezu
Předmětem předloženého vynálezu je způsob screeningu pro identifikaci methoxyfosfonátových analogů nukleotidů jako prekursorů léčiv, které vykazují zvýšenou aktivitu v cílové tkáni, zahrnující:
(a) přípravu nejméně jednoho ze zmíněných prekursorů léčiv;
(b) výběr nejméně jedné terapeutické cílové tkáně a nejméně jedné necílové tkáně;
(c) podávání prekursorů léčiva cílové tkáni a zmíněné nejméně jedné necílové tkáni; a (d) stanovení relativní antivirové aktivity vykazované prekursorem léčiva v tkáních podle kroku (c).
Ve výhodném provedení vynálezu, jsou cílovou tkání místa, kde se HIV aktivně replikuje a/nebo místa, která slouží jako zásobník HIV, a necílovou tkání je nezasažené (zdravé) zvíře. Neočekávaně jsme zjistili, že zvolení lymfoidní tkáně jako cílové tkáně pro praktickou aplikaci tohoto způsobu pro HIV vedlo k identifikaci prekursorů léčiv, které zvyšují dodání účinné látky takovým tkáním.
Preferovaná sloučenina podle tohoto vynálezu, která byla identifikována způsobem podle vynálezu má strukturu (1),
kde Ra je H nebo methyl, a její chirálně obohacené kompozice, soli, jejich volné baze a jejich solváty. Další preferovaná sloučenina podle tohoto vynálezu má strukturu (2)
(2) a její obohacené diastereomery, soli, volné baze a solváty.
Kromě toho jsme neočekávaně zjistili, že chiralita substituentů na atomu fosforu a/nebo amidátovém substituentu má vliv na obohacení pozorované při praktické aplikaci tohoto vynálezu. Dalším provedením podle předloženého vynálezu jsou diastereomerně obohacené sloučeniny podle tohoto vynálezu, které mají strukturu (3)
B—
O
E—P-WR1 i2
R2 (3) které jsou v podstatě prosté diastereoméru (4)
Β—Ε—P—Ri
Ř2 (4) kde
R1 je oxyester, který je hydrolyzovatelný in vivo, nebo hydroxyl;
B je heterocyklická baze;
R je hydroxyl nebo zbytek aminokyseliny vázané na atom fosforu přes aminoskupinu aminokyseliny a mající každý karboxylový substituent aminokyseliny případně esterifikován, 1 2 ale oba R aR nejsou zároveň hydroxyly;
E je -(CH2)2-, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH2F)CH2-, -CH(CH2OH)CH2-, • · • · • · · · ♦ · · · · · • · · · · * • · ·· ·· ··
-CH(CH=CH2)CH2-, -CfI(OCH)CH2-, -CH(CH2N3)CH2-,
-CH(R6)OCH(R6')-, -CH(R9)CH2O-, nebo -CH(R8)O-, kde vazba na pravé straně je spojena s heterocyklickou baží;
přerušovaná čára představuje volitelnou dvojnou vazbu;
R4 a R5 jsou nezávisle vodík, hydroxyl, halogen, amino skupina nebo substituent mající 1-5 uhlíkových atomů vybraný z množiny zahrnující acyloxy, alkyloxy, alkylthio, alkylamino, a dialkylamino skupinu;
R6 a R6 jsou nezávisle H, Cj-Cé alkyl, Cj-Cé hydroxyalkyl, nebo C2-C7 alkanoyl;
R7 je nezávisle H, Ci-Có alkyl, nebojsou brané společně za tvorby -O- nebo -CH2-;
R8 je H, Ci-Cé alkyl, Ci-Có hydroxyalkyl, nebo Cj-Có halogenalkyl; a
R9 je H, hydroxymethyl nebo acyloxymethyl; ajejich soli, volné baze, a solváty.
Diastereomery o struktuře (3) se označují jako (5) isomery na fosforovém chirálním centru.
Přednostním provedením tohoto vynálezu jsou dále diastereomerně obohacené sloučeniny mající strukturu (5a)
(5a) které jsou v podstatě prosté diastereomerů (5b)
(5b) kde
R5 je methyl nebo vodík;
R6 je nezávisle H, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl nebo arylalkyl, nebo R6 je nezávisle alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl nebo arylalkyl, který je substituován 1 až 3 substituenty vybranými z alkylamino, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, dialkylamino, hydroxyl, oxo, halo, amino, alkylthio, alkoxy, alkoxyalkyl, aryloxy, aryloxyalkyl, arylalkoxy, arylalkoxyalkyl, haloalkyl, nitro, nitroalkyl, azido, azidoalkyl, alkylacyl, alkylacylalkyl, karboxyl, nebo alkylacylamino skupin;
R7 je boční řetězec jakékoliv přirozeně se vyskytující nebo farmaceuticky přijatelné aminokyseliny a který, jestliže tento boční řetězec obsahuje karboxyl, je tato karboxylová skupina případně esterifikována alkylovou nebo arylovou skupinou;
R11 je amino, alkylamino, oxo, nebo dialkylamino skupina; a
R12 je aminová skupina nebo H; a jejich soli, tautomery, volné baze a solváty.
Dále je předmětem předloženého vynálezu sloučenina o struktuře (6), 9-[(Á)-2-[[(S)[[(£)-1 -(isopropoxykarbonyl)ethy 1] amino j fenoxyfosfinyljmethoxy] propyl] adenin, zde také označovaná jako GS-7340 • · · ·
Jiným přednostním provedením tohoto vynálezu je fumarátová sůl struktury (5) (struktura (7)), 9-[(7ř)-2-[[(S)-[[(5)-l -(isopropoxykarbonyl)ethyl]amino]fenoxyfosfinyl]methoxy]propyl]adenin fumarát (1:1), zde také označovaná jako GS-7340-2
(Ό
Sloučeniny o struktuře (1)-(7) jsou případně volitelně upravovány do kompozic (přípravků) obsahujících farmaceuticky přijatelné excipienty (pomocné látky). Takové kompozice se používají v účinných dávkách při terapii nebo profylaxi virových infekcí, zvláště HIV nebo hepadnavirových infekcí.
Dalším význakem předloženého vynálezu je způsob pro snadnou přípravu 9-[2(fosfonomethoxy)propyl]adeninu (nadále označovaného PMPA) nebo 9-[2(fosfonomethoxy)ethyl]adeninu (nadále označovaného jako PMEA) za použití alkoxidu • · · · »·· ···· ·« · • · · ·· · · · · · · · • ·· · · · ·· · · · tt · • · · · · · · · · ♦ · · ·· ·· ·· ·· ·· ·· hořečnatého, který spočívá v reakci 9-(2-hydroxypropyl)adeninu nebo 9-(2hydroxyethyl)adeninu, chráněného p-toluensulfonyloxymethylfosfonátem a alkoxidu hořečnatého, a získání PMPA, resp. PMEA.
Podrobný popis vynálezu
Vlastní léčiva na bázi methoxyfosfonátových analogů nukleotidů pro použití při způsobu screeningu podle vynálezu jsou sloučeniny, které mají strukturu A-OH2P(O)(OH)2, kde A je zbytek analogu nukleosidu. Tyto sloučeniny jsou samy o sobě známy a nejsou součástí tohoto vynálezu. Mnohem specifičtěji, vlastní léčivé sloučeniny sestávají z heterocyklické baze B a aglykonu E, a mají obecně strukturu
O
Β — ΕΘΗ
OH kde skupina B je definována níže a skupina E je definována výše. Příklady jsou popsány vU.S. patentech č. 4,659,825, 4,808,716, 4,724,233, 5,142,051, 5,130,427, 5,650,510, 5,663,159, 5,302,585, 5,476,938, 5,696,263, 5,744,600, 5,688,778, 5,386,030, 5,733,896, 5,352,786, a 5,798,340 a Evropských patentech EP 821,690 a 654,037.
Prekursory léčiv pro použití při způsobu screeningu podle předloženého vynálezu jsou kovalentně modifikované analogy vlastních léčivých methoxyfosfonátových analogů nukleotidů, popsaných v předchozím odstavci. Obecně je atom fosforu ve vlastním léčivu přednostním místem pro modifikaci prekursorů léčiva, ale jiná místa se nalézají v heterocyklické bázi B nebo v aglykonu E. Mnohé takové prekursory jsou již známy. V první řadě to jsou estery nebo amidáty na atomu fosforu, ale zahrnují také substituce na bázi a aglykonu. Žádná z těchto modifikací sama o sobě není součástí tohoto vynálezu a žádnou nelze považovat za omezující pro rozsah předloženého vynálezu.
Atom fosforu methoxyfosfonátových analogů nukleotidů má dvě vazby pro kovalentní modifikaci jako je amidace nebo esterifikace (pokud jeden fosforylový hydroxyl není esterifikován na hydroxylový substituent aglykonu E, v tom případě je k substituci volná pouze jedna vazba fosforu). Tyto estery jsou typu aryloxy. Amidáty jsou obvykle přirozeně se vyskytující mono-aminokyseliny, které mají volnou karboxylovou skupinu (nebo skupiny) esterifikovanou alkylovou nebo arylovou skupinou, obvykle fenylem, cykloalkylem, nebo tert-, norm.- nebo sek.-alkylovými skupinami. Vhodné prekursory léčiv pro použití při ·· 0 0 ·4 0 0 ··
0·· 0000 00
0000 0 000 0 0 0
00 00« 00 000 0 0
00 0 0 00 0 0 00 0
00 00 00 00 00 způsobu screeningu podle předloženého vynálezu jsou uvedeny například v U.S. patentu č. 5,798,340. Ovšem jakýkoliv prekursor léčiva, o němž lze potenciálně předpokládat, že je schopný konverze in vivo uvnitř buněk cílové tkáně na vlastní léčivo ve formě volného methoxyfosfonátového analogu nukleotidu, například buď hydrolýzou, oxidací nebo jinou kovalentní transformací vyvolanou expozicí biologickým tkáním, je vhodný pro použití při způsobu podle tohoto vynálezu. Takové prekursory nemusí být v současnosti známy, ale mohou být identifikovány v budoucnu a mohou tudíž být vhodnými kandidáty, které budou k dispozici pro odzkoušení způsobem podle tohoto vynálezu. Protože prekursory léčiv jsou jednoduše kandidáty pro způsob screeningu, jejich struktury nejsou relevantní pro provádění nebo umožnění způsobu screeningu, ačkoliv jejich struktury jsou nakonec rozhodující pro to, zda se prekursor léčiva ukáže být selektivním při zkouškách.
Části molekuly prekursoru léčiva (pro-moieties) vázané k vlastnímu léčivu mohou být stejné nebo odlišné. Ovšem každý prekursor léčiva, který se použije při screeningu se bude strukturně lišit od ostatních prekursorů léčiva, které se mají testovat. Odlišné, tj. strukturně rozdílné prekursory léčiv se obecně vybírají na základě jejich stereochemie nebo jejich kovalentní struktury, nebo se tyto obě charakteristiky mění současně. Požaduje se ovšem, aby každý testovaný prekursor léčiva byl strukturně a stereochemicky v podstatě čistý, jinak bude výsledek screeningové zkoušky méně užitečný. Je ovšem v mezích tohoto vynálezu testovat jenom jeden prekursor léčiva při individuálním provedení způsobu podle tohoto vynálezu, ačkoliv typicky pak je nutno porovnat výsledky s předchozími studiemi s jinými prekursory léčiva.
Zjistili jsme, že stereochemie prekursorů léčiv je schopná ovlivňovat obohacování v cílových tkáních. Chirální místa (polohy) jsou na atomu fosforu a jsou také k nalezení v jeho substituentech. Například, aminokyselina použitá při přípravě amidátů může být ve D nebo L formě a estery fosfonátů nebo estery aminokyselin mohou také obsahovat chirální centra. Chirální polohy se také nacházejí v té části molekuly, kterou tvoří analog nukleosidu, ale ty jsou již diktovány stereochemií vlastního léčiva a nebudou se při screeningu měnit. Například, R isomeru PMPA je dávaná přednost, protože je aktivnější než odpovídající S isomer. Tyto diastereomery nebo enantiomery se budou typicky chirálně obohacovat, jestliže nejsou čisté v každé poloze, takže výsledky screeningu budou mít větší význam. Jak již bylo poznamenáno, odlišné chování stereoisomerů je dáno obohacením nebo přečištěním stereoisomeru (v případě většiny methoxyfosfonátových analogů nukleotidů to bude spíše diastereomer než enantiomer) prostého jiných stereoisomerů v dané chirální poloze, takže každá testovaná sloučenina je v podstatě homogenní. Za v podstatě homogenní nebo chirálně • ·· · • · «· · · · · · · ··· · · · · · · • ···· · · · · · · · • ·· ··· ·· « · · · · • ·· · · · · · « * · · • · ·« ·· * · · · ·· obohacenou považujeme takovou sloučeninu, kde požadovaný stereoisomer tvoří více než asi 60 % hmotn. sloučeniny, obvykle více než asi 80 % a s výhodou více než asi 95 %.
Nový způsob screeníngu
Jakmile je vybrán alespoň jeden kandidát prekursoru léčiva, použijí se ostatní kroky způsobu screeníngu podle tohoto vynálezu k identifikaci prekursoru léčiva vykazujícího požadovanou selektivitu pro cílovou tkáň. Výhodně jsou prekursory léčiv značeny detekční skupinou, například radioaktivním značením, aby se usnadnila jejich pozdější detekce v tkáních nebo buňkách. Ovšem značení se nevyžaduje, protože se také mohou použít jiné vhodné testovací metody pro tento prekursor léčiva nebo jeho metabolity (včetně vlastního matečního léčiva). Tyto testovací metody mohou zahrnovat například hmotnostní spektrometrii, HPLC, biologické nebo imunologické testovací metody. Testovací metoda může detekovat prekursor léčiva a kterýkoliv nebo více jeho metabolitů, ale s výhodou se test provádí tak, aby bylo detekováno pouze generování vlastního léčiva. To je založeno na předpokladu (který nemusí být zaručen ve všech případech), že stupeň a rychlost konverze prekursoru léčiva na antivirově aktivní vlastní difosfát jsou stejné pro všechny testované tkáně. Jinak je možno testovat na difosfát.
Cílovou tkání bude přednostně lymfoidní tkáň, jestliže se screening provádí pro prekursor léčiva vhodného při léčení infekce HIV. Lymfoidní tkáň bude odborníkovi znalému v oboru známa a zahrnuje CD4 buňky, lymfocyty, lymfatické uzliny, makrofágy a buňky podobné makrofágům, včetně monocytů, jako jsou monocytické buňky periferní krve (peripheral blood monocytic cells, PBMCs) a gliové buňky. Mezi lymfoidní tkáně se také počítají nelymfoidní tkáně, které jsou obohaceny o lymfoidní tkáně nebo buňky, např. plíce, kůže a slezina. Jinými cíli pro jiná antivirová léčiva budou samozřejmě primární místa replikace nebo latentního uložení určitého daného viru, například játra pro hepatitidu a periferní nervy pro HSV. Podobně, cílovými tkáněmi pro nádory budou ve skutečnosti samotné nádory. Všechny tyto tkáně jsou odborníkům v oboru dobře známé a nevyžadují žádné zbytečné experimentování pro jejich výběr. Při screeníngu protivirových sloučenin může být cílová tkáň infikována virem.
Nečilo vé tkáně nebo buňky jsou rovněž podrobeny screeningu jako součást způsobu podle tohoto vynálezu. V tomto ohledu se může použít jakýkoliv počet nebo identita takových tkání nebo buněk. Obecně, se tkáně, u nichž se očekává, že pro ně bude vlastní léčivo toxické, použijí jako necílové tkáně. Výběr necílové tkáně zcela závisí na charakteru prekursoru léčiva a aktivitě vlastního léčiva. Například, nehepatické tkáně se vyberou pro prekursory léčiv proti ♦ · ·
• ti · hepatitidě, a netransformované buňky téže tkáně jako jsou nádorové budou vhodné pro screening protinádorové selektivního prekursoru léčiva.
Je třeba poznamenat, že způsob podle tohoto vynálezu se liší od studií, které se běžně používají pro stanovení orální biologické dostupnosti prekursoru léčiva. Při studiích orální biologické dostupnosti je cílem identifikovat prekursor léčiva, který přechází do oběhového systému podstatně transformován na vlastní léčivo. Podle předloženého vynálezu je cílem nalézt prekursory léčiv, které nejsou metabolizovány v zažívacím traktu nebo oběhovém systému. Tudíž, cílové tkáně, které se vyhodnocují způsobem podle tohoto vynálezu obecně nezahrnují tenké střevo nebo, jestliže střeva jsou do nich zahrnuta, pak tyto tkáně také zahrnují další tkáně jiné než tenké střevo.
Cílové a necílové tkáně používané při screeningu podle tohoto vynálezu budou v nenapadeném (zdravém) žijícím zvířeti. Prekursory léčiv obsahující estery se nejvýhodněji testují na psech, opicích nebo zvířatech jiných než hlodavcích; plasma myší a krys obsahuje vysoké cirkulující hladiny esteráz, které mohou způsobit zavádějící výsledky, jestliže požadovaným terapeutickým subjektem je člověk nebo vyšší savec.
Není nutné provádět tento způsob s celými neporušenými zvířaty. Je také možné v rámci tohoto vynálezu použít perfundované orgány, in vitro kultury orgánů (např. kožní štěpy) nebo buněčné linie udržované v různých typech buněčných kultur, např. v otáčených lahvích nebo v suspenzních systémech s nulovou gravitací. Například, buňky MT-2 se mohou použít jako cílová tkáň pro výběr prekursorů léčiv proti HIV. Tudíž, termín tkáň se nesmí chápat pouze jako požadavek organizované buněčné struktury nebo struktur tkání tak, jak se nacházejí v přírodě, ačkoliv takovým je dávána přednost. Termín tkáň je třeba spíše chápat jako synonymum pro buňky určitého zdroje, původu nebo stupně diferenciace.
Cílovou a necílovou tkání může být ve skutečnosti stejná tkáň, ale tkáně budou v různém biologickém stavu. Například, způsob podle tohoto vynálezu se může použít pro výběr prekursorů léčiv, které vykazují aktivitu ve virově infikované tkáni (cílová tkáň), ale zůstávají v podstatě neaktivní ve virově neinfikovaných buňkách (odpovídající necílová tkáň). Stejná strategie se může použít pro výběr profylaktických prekursorů léčiv, tj. prekursorů metabolizovaných na antivirově aktivní formy v důsledku virové infekce, ale zůstávajících v podstatě nemetabolizovány v neinfikovaných buňkách. Podobně, prekursory léčiv mohou být screenovány na transformovaných buňkách a na příslušné netransformované tkáni. To je zvláště užitečné při srovnávacím testování pro výběr prekursorů léčiv pro léčení hematologických zhoubných onemocnění, např. leukémií.
A A · · · ·
A A A
A A A
A A A
A A A
A A
A A • A A AAA A A A
A A A
AAA A A A
A A A A
AA AA
Aniž se omezíme na jakoukoliv zvláštní teorii účinku, předpokládá se, že tkáňově selektivní prekursory léčiv jsou selektivně přijímány cílovými buňkami a/nebo selektivně metabolizovány uvnitř buňky ve srovnání s ostatními tkáněmi nebo buňkami. Jedinečná přednost methoxyfosfonátových prekursorů podle tohoto vynálezu spočívá v tom, že jejich metabolismus na di-anion při fysiologickém pH zaručuje, že nebudou schopny difundovat zpět ven z buňky. Zůstávají proto účinné po dlouhou dobu a jsou udržovány ve zvýšených intracelulárních koncentracích, přičemž vykazují zvýšenou účinnost. Předpokládá se, že mechanismus zvýšené aktivity v cílové tkáni je způsoben zvýšeným příjmem cílovými buňkami, zvýšenou retenci uvnitř buňky, nebo oběma těmito mechanismy společně. Ovšem způsob, jímž se dosahuje selektivity nebo zvýšené dodávky do cílové tkáně, není důležitý. Není také důležité, zda veškerá metabolická konverze prekursoru léčiva na vlastní mateřskou sloučeninu probíhá uvnitř cílové tkáně. Pouze konečná konverze vedoucí k aktivitě léčiva musí probíhat v cílové tkáni; metabolismus v ostatních tkáních může poskytovat meziprodukty, které se nakonec přemění na protivirové formy v cílové tkáni.
Stupeň selektivity nebo zvýšené dodávky, který je žádoucí, se bude měnit podle vlastní mateřské léčivé sloučeniny a způsobu, jímž se měří (% distribuce dávky nebo koncentrace vlastního léčiva). Obecně, jestliže vlastní mateřské léčivo již má dobré terapeutické okno, nízký stupeň selektivity může být postačující pro požadovaný prekursor léčiva. Na druhé straně, toxické sloučeniny mohou vyžadovat mnohem intensivnější screening pro identifikaci selektivních prekursorů. Relativní nákladnost způsobu podle tohoto vynálezu se může snížit pomocí screeningu pouze v cílové tkáni a tkáních, o nichž je známo, že vlastní léčivá sloučenina (substance) je vůči nim relativně toxická, například pro PMEA, který je při vyšších dávkách nefrotoxický, bude primární zájem soustředěn na ledviny a lymfoidní tkáně.
Krok týkající se stanovení relativní protivirové aktivity prekursoru léčiva ve vybrané tkáni se obvykle provádí pomocí zkoušek cílových a necílových tkání na relativní přítomnost nebo aktivitu metabolitu prekursoru, o kterém je známo, že ji metabolit má, nebo že je konvertován na metabolit vykazující antivirovou nebo protinádorovou aktivitu. Tudíž, typicky se stanoví relativní množství vlastního léčiva v tkáních za v podstatě stejnou dobu, aby se identifikovaly prekursory léčiva, které se přednostně metabolizují v cílové tkáni na antivirově anebo protinádorové aktivní metabolity nebo jejich další prekursory, které v cílové tkáni v konečné fázi vytvářejí aktivní metabolity. V případě proti virových sloučenin je aktivním metabolitem difosfát výchozí mateřské fosfonátové sloučeniny. Je to tento metabolit, který se zabudovává do nukleové kyseliny viru, čímž zkracuje prodlužování řetězce nukleové kyseliny a zastavuje replikaci viru. Metabolity prekursoru léčiva mohou být anabolické metabolity, ·· titititi ·· titi ·· titi tititi titititi titi ti ti ti tititi ti ti titi tititi • titi tititi titi tititi ti ti ti··· titititi titititi titi titi titi titi titi titi katabolické metabolity, nebo společně produkty anabolismu a katabolismu. Způsob, jímž se metabolit vytváří není důležitý při provádění způsobu podle tohoto vynálezu.
Způsob podle tohoto vynálezu není omezen na zjišťování metabolitů, který sám o sobě má antivirovou nebo protinádorovou aktivitu. Místo toho je možno zjišťovat neaktivní prekursory aktivních metabolitů. Mezi prekursory antivirově aktivního difosfátového metabolitů patří mono fosfát vlastního mateřského léčiva, monofosfáty jiných metabolitů vlastního mateřského léčiva (např. meziproduktová modifikace substituentu na heterocyklické bázi), samotné vlastní mateřské léčivo a metabolity vytvářené buňkou při konverzi prekursoru léčiva na vlastní léčivo před fosforylací. Struktury prekursorů mohou být velice různé, protože jsou výsledkem buněčného metabolismu. Ovšem tato informace je již známá nebo ji odborník znalý v oboru může snadno stanovit.
Jestliže testovaný prekursor léčiva sám o sobě nevykazuje protinádorovou nebo antivirovou aktivitu, pak může být potřebná úprava hrubých výsledků zkoušek. Například, jestliže intracelulární přeměna neaktivního metabolitů na aktivní metabolit probíhá v testovaných tkáních různou rychlostí, hrubé výsledky zkoušek s neaktivním metabolitem budou muset být upraveny tak, aby braly do úvahy rozdíly mezi typy buněk, protože rozhodujícím parametrem je tvorba aktivity v cílové tkáni, nikoli hromadění neaktivních metabolitů. Ovšem určení správné úpravy musí být v rámci běžných znalostí. Tudíž, když krok (d) způsobu podle tohoto vynálezu vyžaduje stanovení aktivity, může být aktivita buď změřena přímo nebo extrapolována. To neznamená, že způsob podle tohoto vynálezu je omezen pouze na zkoumání meziproduktů, které jsou samy o sobě aktivní. Například, může být také zjišťována nepřítomnost nebo pokles koncentrace prekursoru léčiva v testované tkáni. Krok (d) pouze vyžaduje stanovení aktivity vyvolané prekursorem léčiva při interakci s danou tkání a to může být založeno na extrapolaci nebo jiném nepřímém měření.
Krok (d) způsobu podle tohoto vynálezu vyžaduje stanovení relativní aktivity prekursoru léčiva. Je tomu třeba rozumět tak, že to nevyžaduje, aby každý test nebo řada testů nutně musely zahrnovat experimenty s vybranou nečilo vou tkání. Naopak, v rámci tohoto vynálezu je možno použít v minulosti historicky uskutečněné kontroly necílové tkáně nebo tkání, nebo algoritmy reprezentující výsledky, které je možno očekávat od takových necílových tkání, aby bylo možno obdržet orientačně míru necílové aktivity.
Výsledky získané v kroku (d) se pak optimálně využijí pro výběr nebo identifikaci prekursoru léčiva, který vykazuje větší proti virovou aktivitu v cílové tkáni než v necílové tkáni. Tento prekursor léčiva se pak vybere pro další vývojové práce.
♦4 *444 ·4 4*44 • · 4 4 4 * 4 44 « • 4 444 4 4 44 4 4 4 • ·· 444 44 444 4 4 • 44 4 4 44 4 4 44 4
4· 44 44 44 44 44
Je výhodné, jestliže se může provést nějaké předběžné posouzení kandidátů prekursorů léčiva před provedením způsobu podle tohoto vynálezu. Například, bude zapotřebí, aby prekursor prošel zažívacím traktem převážně nemetabolizován, musí být v podstatě stabilní v krvi, a měl by být schopen alespoň do jisté míry pronikat do buněk. Ve většině případů to bude také vyžadovat, aby první průchod hepatickým oběhem proběhl bez významného metabolismu. Takové předběžné studie jsou volitelné a jsou odborníkům znalým oboru dobře známé.
Stejné úvahy jako ty, které byly popsány výše pro antivirovou aktivitu, jsou také aplikovatelné pro protinádorové prekursory methoxyfosfonátových analogů nukleotidů. Ty zahrnují, například, prekursory PMEG, guanylového analogu PMEA. V tomto případě cytotoxické fosfonáty jako PMEG jsou cennými kandidáty, které je třeba sledovat, protože jejich cytotoxicita jim ve skutečnosti dává jejich protinádorovou aktivitu.
Sloučenina identifikovaná tímto novým způsobem screeningu pak může přejít do tradičního preklinického a klinického programu, aby se potvrdilo, zda bylo dosaženo požadovaného cíle. Normálně se prekursor léčiva považuje za selektivní, jestliže aktivita nebo koncentrace vlastního léčiva v cílové tkáni (% distribuce dávky) je 2x, a s výhodou 5x větší než aktivita nebo koncentrace vlastní mateřské sloučeniny v necílové tkáni. Alternativně se kandidát prekursoru léčiva může porovnávat se srovnávacím orientačním prekursorem léčiva. V tomto případě je selektivita spíše relativní než absolutní. Selektivními prekursory léčiva budou ty, které poskytují více než lOnásobnou koncentraci nebo aktivitu v cílové tkáni ve srovnání s prototypem, ačkoliv stupeň selektivity je věcí posouzení.
Nový způsob přípravy výchozích materiálů nebo meziproduktů
Předložený vynález zahrnuje zlepšený způsob přípravy preferovaných výchozích materiálů (vlastních mateřských léčiv) podle tohoto vynálezu, PMEA a (Á)-PMPA. Tento způsob zahrnuje reakci 9-(2-hydroxypropyl)adeninu (HPA) nebo 9-(2-hydroxyethyl)adeninu (HEA) s alkoxidem hořečnatým, následné přidání chráněného aglykonu synthonu p-toluensulfonyloxymethylfosfonátu (tosylátu) k reakční směsi a izolaci PMPA, resp. PMEA.
S výhodou se HPA používá jako obohacený nebo izolovaný R enantiomer. Jestliže se použije chirální směs HPA, může se po dokončení syntézy z chirální směsi PMPA izolovat RPMPA.
Tosylát se typicky chrání nižšími alkylovými skupinami, ale jiné vhodné skupiny budou odborníkovi znalému oboru zřejmé. Může být výhodné použít tosylát předem substituovaný fosfonátovými substituenty prekursoru léčiva, které mohou působit jako chránící skupiny při • 4 ··· · • fc fcfc • fcfc fcfcfcfc · « · • fc»·· · · fcfc · · · • ·· fcfcfc ·· ··· · · • · fc · fcfcfcfc fcfcfcfc fcfc fcfc fc · fcfc fcfc fcfc tosylační reakci, čímž umožňují obejít odstranění chránící skupiny (deprotekční krok) a přímo získat prekursor léčiva nebo jeho meziprodukt.
Alkylová skupina alkoxidu hořečnatého není kritická a může to být kterýkoliv větvený nebo lineární alkyl Ci-Cé, ale s výhodou t-butyl (pro PMPA) nebo isopropyl (pro PMEA). Reakční podmínky také nejsou kritické, ale s výhodou zahrnují zahřívání reakční směsi na asi 70-75 °C při současném míchání nebo mírném protřepávání.
Jestliže není zájem zachovat fosfonátové substituenty, produkt se zbaví chránících skupin (obvykle pomocí bromtrimethylsilanu, když chránící skupinou tosylátu je alkyl), a produkt se pak získá krystalizaci nebo jiným konvenčním způsobem, který je odborníkovi znalému oboru zřejmý.
Heterocyklická baze
Ve sloučeninách podle předloženého vynálezu znázorněných strukturami (3) a (4) je heterocyklická baze vybraná ze struktur
kde
R15 je H, OH, F, Cl, Br, I, OR16, SH, SR16, NH2, nebo NHR17;
R16 je alkyl Ci-Cé nebo alkenyl C2-Có, včetně CH3, CH2CH3, CH2CCH, CH2CHCH2 a
C3H7;
R17 je alkyl Ci-Cé nebo alkenyl C2-Cé, včetně CH3, CH2CH3, CH2CCH, CH2CHCH2 a
C3H7;
R18 jeN, CF, CC1, CBr, CI, CR19, CSR19, nebo COR19;
R19 je H, alkyl C1-C91, alkenyl C2-C9, alkynyl C2-C9, CrC9 alkyl-Ci-C9 alkoxy, nebo C7-C9 aryl-alkyl nesubstituovaný nebo substituovaný OH, F, Cl, Br, nebo I, R19 tudíž zahrnuje -CH3, -CH2CH3, -CHCH2, -CHCHBr, -CH2CH2C1, -CH2CH2F, -CH2CCH, ·· ···· • · · ··· ·· ··· · · • · · · · · · · · · · · ·« 9· ·· ·* ·· ··
-CH2CHCH2, -C3H7, -ch2oh, -ch2och3, -ch2oc2h5, -ch2occh, -ch2och2chch2, -ch2c3h7, -ch2ch2oh, -ch2ch2och3, -ch2ch2oc2h5, -ch2ch2occh, -CH2CH2OCH2CHCH2, a -CH2CH2OC3H7;
R20 je N nebo CH;
R21 je N, CH, CCN, CCF3, CC^CH nebo CC(O)NH2;
R22 je H, OH, NH2, SH, SCH3, SCH2CH3, SCH2CCH, SCH2CHCH2, SC3H7, NH(CH3), N(CH3)2, NH(CH2CH3), N(CH2CH3)2, NH(CH2CCH), NH(CH2CHCH2), NH(C3H7), halogen (F, Cl, Br nebo I) nebo X, kde X je -(CH2)m(O)n(CH2)mN(R10)2, kde m je nezávisle 0-2, n je ΟΙ a
R10 je nezávisle H, alkyl C1-C15, alkenyl C2-C15, arylalkenyl Cř-Cis, arylalkynyl C6-C15, alkynyl C2C15, Ci-Có-alkylamino-Ci-Có alkyl, aralkyl C5-C15, heteroaralkyl C6-C15, aryl C5-C6, heterocykloalkyl C2-Có, alkyl C2-C15, alkenyl C3-C15, arylalkenyl C6-C15, alkynyl C3-C15, arylalkynyl C7C15, Ci-Có-alkylamino-Ci-Có alkyl, aralkyl C5-C15, heteroalkyl C6-C15 nebo heterocykloalkyl C3-C6, kde methylen v alkylové části nesousedící s N6 je nahrazen -0-, případně obě skupiny R10 jsou spolu spojeny dusíkem (N), takže tvoří nasycený nebo nenasycený C2-C5 heterocyklus obsahující jeden nebo dva heteroatomy N a případně další heteroatom O nebo S, nebo jedna z předešlých skupin R10, která je substituována 1 až 3 halogeny, CN, nebo N3; ale případně nejméně jedna skupina R10 není H;
R23 je H, OH, F, Cl, Br, I, SCH3, SCH2CH3, SCH2CCH, SCH2CHCH2, SC3H7, OR16, NH2, NHR17 nebo R22; a
R24 je O, S, nebo Se.
B také zahrnuje chráněné i nechráněné heterocyklické baze, zejména purinové a pyrimidinové baze. Chránící skupiny pro exocyklické aminy a jiné labilní skupiny jsou známy (Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis) a zahrnují N-benzoyl, isobutyryl, 4,4'dimethoxytrityl (DMT) a pod. Výběr chránící skupiny bude pro odborníka znalého oboru zřejmý a bude záviset na charakteru labilní skupiny a chemických podmínkách, kterým bude muset chránící skupina čelit, např. kyselým, alkalickým, oxidačním, redukčním, nebo jiným podmínkám. N4-benzoylcytosin, N6-benzoyladenin, N2-isobutyrylguanin, a pod., jsou příkladem chráněných molekul.
Chráněné baze mají vzorce Xa.l, Xla.l, Xlb.l, XIIa.1 nebo XIIIa.1 • · • · • flfl • fl ·« • · ♦ • · fl · · • · · • flfl · fl flfl · fl fl· · • fl ·· ·· ·· ·· flfl
(Xa.l) (Xla.l) (Xlb.l) (XIIa.1) (XHIa.l) kde R18, R20, R21, R24 mají výše definovaný význam; R22A je R39 nebo R22 za předpokladu, že R22 není NH2; R23A je R39 nebo R23 za předpokladu, že R23 není NH2; R39 je NHR40, NHC(O)R36 nebo CR41N(R38)2, kde R36 je alkyl C,-C19, alkenyl C,-Ci9, aryl C3-C10, adamantoyl, alkylanyl, nebo aryl C3-C10 substituovaný 1 nebo 2 atomy nebo skupinami vybranými z halogenů, methylu, ethylu, methoxy, ethoxy, hydroxy, a kyano skupin; R38 je no alkyl Cj-Cio nebo obě skupiny R jsou společně 1-morfolin, 1-piperidin, nebo 1-pyrrolidin; R40 je alkyl Cj-Cu, zahrnující methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, hexyl, oktyl a dekanyl; a R41 je vodík nebo CH3.
U bází o vzorcích Xla. 1 a Xllb. 1, jestliže R39 je přítomen v R22A nebo R23A, obě skupiny R na téže bázi budou obecně stejné. Příkladně R jsou fenyl, fenyl substituovaný jedním z předešlých R36 aryl substituentů, -C10H15 (kde C10H15 je 2-adamantoyl), -CTU-CóHs, -CóHs, CH(CH3)2, -CH2H3, methyl, butyl, t-butyl, heptanyl, nonanyl, undekanyl nebo undecenyl.
Specifické baze zahrnují hypoxanthin, guanin, adenin, cytosin, inosin, thymin, uráčil, xanthin, 8-aza deriváty 2-aminopurinu, 2,6-diaminopurinu, 2-amino-6-chlorpurinu, hypoxanthinu, inosinu a xanthinu; 7-deaza-8-aza-deriváty adeninu, guaninu, 2-aminopurinu, 2,6-diaminopurinu, 2-amino-6-chlorpurinu, hypoxanthinu, inosinu a xanthinu; 1-deaza deriváty 2-aminopurinu, 2,6-diaminopurinu, 2-amino-6-chlorpurinu, hypoxanthinu, inosinu a xanthinu; 7-deaza deriváty 2-aminopurinu, 2,6-diaminopurinu, 2-amino-6chlorpurinu, hypoxanthinu, inosinu a xanthinu; 3-deaza deriváty 2-aminopurinu, 2,6diaminopurinu, 2-amino-6-chlorpurinu, hypoxanthinu, inosinu a xanthinu; 6-azacytosin; 5fluorcytosin; 5-chlorcytosin; 5-jodcytosin; 5-bromcytosin; 5-methylcytosin; 5bromvinyluracil; 5-fluoruracil; 5-chloruracil; 5-joduracil; 5-bromuracil; 5trifluormethyluracil; 5-methoxymethyluracil; 5-ethynyluráčil a 5-propynyluracil.
S výhodou B je 9-purinylový zbytek vybraný zguanylu, 3-deazaguanylu, 1deazaguanylu, 8-azaguanylu, 7-deazaguanylu, adenylu, 3-deazaadenylu, 1-deazaadenylu, 84 4 *4 · * · 4 • •4 «444 44 4
4 4 44 4 4 44 4 4 4 • «4 444 44 444 4 4
4 4 4 4 44 4 4 44 4
44 44 44 44 44 azaadenylu, 7-deazaadenylu, 2,6-diaminopurinylu, 2-aminopurinylu, 6-chlor-2-amínopurínylu a 6-thio-2-aminopurinylu, nebo B' je 1-pyrimidinylový zbytek vybraný zcytosinylu, 5halocytosinylu, a 5-(C|-C3-alkyl)cytosinylu.
Skupiny B, kterým je dávána přednost, mají vzorec • ·· ·
kde
R22 je nezávisle halogen, kyslík, NH2, X nebo H, ale případně alespoň jeden R22 je X;
X je -(CH2)m(O)n(CH2)mN(Rl0)2, kde m je 0-2, n je 0-1, a
R10 je nezávisle H, alkyl C1-C15, alkenyl C2-C15, arylalkenyl C6-C15, arylalkynyl C6-C15, alkynyl C2C15, Ci-Có-alkylamino-Cj-Có alkyl, aralkyl C5-C15, heteroaralkyl C6-C15, aryl C5-C6, heterocykloalkyl C2-C6, alkyl C2-C15, alkenyl C3-C15, arylalkenyl C6-C15, alkynyl C3-C15, arylakynyl C7C15, Ci-Có-alkylamino-Ci-Cé alkyl, aralkyl C5-C15, heteroalkyl Có-Cis, nebo heterocykloalkyl C3-C6, v němž methylen v alkylové jednotce, nesousedící sN6 byl nahrazen -0-, případně obě skupiny R10 jsou vzájemně spojeny pomocí N za tvorby nasyceného nebo nenasyceného C2-C5 heterocyklu, obsahujícího jeden nebo dva N heteroatomy a případně další O nebo S heteroatom, nebo jedna z předešlých skupin R10 je substituována 1 až 3 halogeny, CN, nebo N3; ale případně alespoň jedna skupina R10 není H; a
Z je N nebo CH, za předpokladu, že heterocyklické jádro se liší od purinu o ne více než jeden Z.
Skupiny E představují aglykony použité v methoxyfosfonátovýcu analogách nukleotidů. Skupina E je s výhodou -CH(CH3)CH2- nebo -CH2CH2-. Rovněž je výhodné když postranní skupiny na chirálních centrech vaglykonu jsou v podstatě výlučně v konfiguraci (Á) (vyjma pro hydroxymethyl, který je obohacený (S) enatiomér).
R1 je oxyester hydrolyzovatelný in vivo, o struktuře -OR35 nebo -OR6, kde R35 je definován ve sloupci 64, řádka 49 U.S. patentu č. 5,798,340, který je v předloženém vynálezu ·· fcfc fcfc fcfc *» fcfcfcfc fcfcfc fcfcfcfc fc· · • fcfcfcfc · fcfcfc · · · • fcfc fcfcfc fcfc «·· « · • fcfcfc fcfcfcfc fcfcfcfc • fc fcfc * · fcfc fcfc fcfc zařazen jako literární odkaz, a R6 je definován výše. S výhodou je R1 aryloxy, běžně nesubstituovaný nebo para-substituovaný fenoxy (jak je definován v R6)·
R2 je zbytek aminokyseliny, případně za předpokladu, že kterákoliv karboxy skupina vázaná s méně než asi 5 atomy k N amidátu je esterifikována. R2 má typicky strukturu
(8) kde nje 1 nebo 2;
R11 je R6 nebo H; s výhodou R6 = alkyl ¢3-09, alkyl C3-C9 nezávisle substituovaný OH, halogenem, O nebo N, aryl C3-C6, aryl C3-C6 nezávisle substituovaný OH, halogenem, O nebo
N, nebo arylakyl C3-C6 nezávisle substituovaný OH, halogenem, O nebo N;
R12 je nezávisle H nebo alkyl C1-C9, který je nesubstituovaný nebo substituovaný substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující OH, O, N, COOR11 a halogen, aryl C3-C6, který je nesubstituovaný nebo substituovaný substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující OH, O, N, COOR11 a halogen, nebo aryl-alkyl C3-C9, který je nesubstituovaný nebo substituovaný substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující OH, O, N, COOR11 a halogen,
R13 je nezávisle CCOj-OR11, amino, amid, guanidinyl, imidazolyl, indolyl, sulfoxid, fosforyl, C1-C3 alkylamino, C1-C3 alkyldiamino, Ci-Có alkenylamino, hydroxy, thio, C1-C3 alkoxy, C1-C3 alkythiol, (CH2)nCOOR“, Ci-Có alkyl, který je nesubstituovaný nebo substituovaný OH, halogenem, SH, NH2, fenylem, hydroxyfenylem nebo C7-C10 alkoxyfenylem, C2-C6 alkenyl, který je nesubstituovaný nebo substituovaný OH, halogenem, SH, NH2, fenylem, hydroxyfenylem nebo C7-C10 alkoxyfenylem, a Cv-Cu aryl, který je nesubstituovaný nebo substituovaný OH, halogenem, SH, NH2, fenylem, hydroxyfenylem nebo C7-C10 alkoxyfenylem, a
R14 je H nebo alkyl C1-C9 nebo alkyl C1-C9 nezávisle substituovaný OH, halogenem, COOR11, O, nebo N, aryl C3-C6, aryl C3-C6 nezávisle substituovaný OH, halogenem, COOR11, O, nebo N, nebo arylalkyl C3-C6 nezávisle substituovaný OH, halogenem, COOR11,
O, nebo N.
• to ·· ··· · ·· ·· ·· • » · · · · · • ···· · ··· • ·· · · ♦ ·· » ···· · · · * ·· ·♦ ·· ·· • · · · ·· ··
I I i ο
S výhodou R je alkyl Ci-Cď, nejvýhodněji isopropyl, R je boční řetězec přirozeně se vyskytující aminokyseliny, n = 1, R12 je H a R14 je H. Ve sloučenině o struktuře (2) vynález zahrnuje metabolity, v nichž fenoxy a isopropyl estery mohou být hydrolyzovány na -OH. Podobně, deesterifikované obohacené fosfonoamidátové metabolity sloučenin (5a), 5(b) a (6) jsou zahrnuty do rozsahu tohoto vynálezu.
Aryl a O či N substituce jsou definovány ve sloupci 16, řádek 42-58, U.S. patentu č. 5,798,340.
Běžně jsou aminokyseliny přirozené aminokyseliny nebo l aminokyseliny. Vhodné specifické příklady jsou uvedeny v U.S. patentu č. 5,798,340, například v Tabulce 4 v sloupcích 8-10.
Alkylem používaným podle předloženého vynálezu, pokud není stanoveno něco jiného, je normální, sekundární, terciární nebo cyklický uhlovodík. Pokud není stanoveno něco jiného, alkyl je C1-C12. Příkladem jsou -CH3, -CH2CH3, -CH2CH2CH3, -CH(CH3)2, -CH2CH2CH2CH3, -CH2CH(CH3)2, -CH(CH3)CH2CH3, -C(CH3)3, -ch2ch2ch2ch2ch3, -CH(CH3)CH2CH2CH3, -CH(CH2CH3)2, -C(CH3)2CH2CH3, -CH(CH3)CH(CH3)2, -CH2CH(CH3)CH2CH3, -CH2CH2CH2CH2CH2CH3, -CH(CH3)CH2CH2CH2CH3, -CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3), -C(CH3)2CH2CH2CH3, -CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3, -CH(CH3)CH2CH(CH3)2, -C(CH3)(CH2CH3)2, -CH(CH2CH3)CH(CH3)2, -C(CH3)2CH(CH3)2, a -CH(CH3)C(CH3)3. Alkenyly a alkynyly jsou definovány stejným způsobem, ale obsahují alespoň jednu dvojnou resp. trojnou vazbu.
Tam, kde se uvádějí enolové nebo keto skupiny, jsou myšleny rovněž jejich tautomery.
Sloučeniny prekursorů léčiv podle tohoto vynálezu jsou používány ve formě volných bází nebo různých solí vyjmenovaných v U. S. patentu č. 5,798,340 a jsou upraveny pomocí farmaceuticky přijatelných excipientů nebo solvatačních ředidel pro použití jako farmaceutické výrobky také jak je uvedeno vU. S. patentu č. 5,798,340. Tyto prekursory léčiv mají antivirové a užitečné vlastnosti již zjištěné pro vlastní léčiva (viz U. S. patent č. 5,798,340 a jiné citace vztahující se k methoxyfosfonátovým analogům nukleotidů). Rozumí se, že diastereomer o struktuře (4) je přinejmenším vhodný jako meziprodukt při chemické přípravě vlastního léčiva hydrolýzou in vitro, bez ohledu na jeho relativně neselektivní charakter, jak bylo zjištěno studiemi podle tohoto vynálezu.
Vynález bude lépe pochopen na základě následujících příkladů.
Příklady provedení
Příklad la «φ ·Φ φφ φφ «φφ φφφφ φφ φ • φ φφφ · φ φφ φφφ φ φ* φφφ φφ φφφ · » φφφφ φφφφ φφφφ φφφφ φφφφ φφφφ + · φφφφ
Příprava ΡΜΕΑ z adeninu za použití isopropoxidu hořečnatého.
K suspenzi adeninu (16,8 g, 0,124 mol) v dimethylformamidu (DMF) (41,9 ml) byl přidán ethylen karbonát (12,1 g, 0,137 mol) a hydroxid sodný (0,100 g, 0,0025 mmol). Směs byla přes noc zahřívána na 130 °C. Reakce byla zchlazena pod 50 °C a byl přidán toluen (62,1 ml). Suspenze byla dále chlazena na 5 °C po dobu 2 hodin, zfiltrována a promyta toluenem (2x). Vlhký pevný produkt byl vysušen ve vakuu při 65 °C s výtěžkem 20,0 g (90%) 9-(2hydroxyethyl)adeninu ve formě špinavě bílé pevné látky. T.t. 238-240 °C.
fl
80°C
fN^N k^O^P(OEt)2 fl
S^O^P(OH)Z
9-(2-hydroxyethyl)adenin (HEA) (20,0 g, 0,112 mol) byl suspendován v DMF (125 ml) a zahřát na 80 °C. Ke směsi byl přidán isopropoxid hořečnatý (11,2 g, 0,0784 mol) nebo alternativně t-butoxid hořečnatý a následně diethyl /?-toluensulfonyloxymethylfosfonát (66,0 g, 0,162 mol) po dobu jedné hodiny. Směs byla míchána při 80 °C po dobu 7 hodin. 30 ml těkavých látek bylo odstraněno vakuovou destilací a k reakční směsi bylo znovu přidáno 30 ml čerstvého DMF. Po zchlazení na teplotu místnosti byl přidán bromtrimethylsilan (69,6 g, 0,450 mol) a směs byla zahřívána na 80 °C po dobu 6 hodin. Reakční směs byla zkoncentrována na hustou gumovitou látku. Tato gumovitá látka byla rozpuštěna v 360 ml vody, extrahována 120 ml dichlormethanu, upravena na pH 3,2 hydroxidem sodným a výsledná suspenze přes noc míchána při teplotě místnosti. Suspenze byla zchlazena na 4 °C φφ Φ· φ* *φ φφφ · » φ φ φ φ · • φ φφφ · t φ« φφφ φ Φφ φφφ φφ φφφ φ φ φφφφ φφφφ φφφφ φφ φφ φφ φφ φφ φφ φφ φφφφ po dobu jedné hodiny. Pevné produkty byly odděleny filtrací, promyty vodou (2x), a vysušeny ve vakuu při 56 °C s výtěžkem 20 g (65,4%) 9-[2-(fosfonomethoxy)ethyl]adeninu (PMEA) jako bílé pevné látky. T.t.: >200°C rozklad. *H NMR (D2O) · 3,49 (t, 2H); 3,94 (t, 2H); 4,39 (t, 2H); 8,13 (s, ÍH); 8,22 (s,lH).
Příklad lb
Příprava PMPA z adeninu za použití t-butoxidu hořečnatého.
K suspenzi adeninu (40 g, 0,296 mol) v DMF (41,9 ml) byl přidán (R)-propylen karbonát (34,5 g, 0,338 mol) a hydroxid sodný (0,480 g, 0,012 mol). Směs byla přes noc zahřívána na 130 °C. Reakční směs byla zchlazena na 100 °C a byl přidán toluen (138 ml) a následně kyselina methansulfonová (4,7 g, 0,049 mol), při čemž byla reakční teplota udržována mezi 100-110 °C. Byl přidán další toluen (114 ml), aby se vytvořil homogenní roztok. Roztok byl chlazen na 3 °C po dobu 7 hodin a pak udržován na 3 °C po dobu jedné hodiny. Výsledná pevná látka byla vysušena ve vakuu při 80 °C s výtěžkem 42,6 g (75%) (R)-9-[2(hydroxy)propyl]adeninu (HPA) ve formě špinavě bílé pevné látky. T.t.: 188-190 °C.
NHo
+ T8O^P(OEl)2-^gi^IBtJ>*77°C
NHo
u
Η ’Μβ ϊ í <χΟ^Ρ(ΟΕΙ)2 Η’Μθ
80“C*
(R)-9-[2-(hydroxy)propyl]adenin (HPA) (20,0 g, 0,104 mol) byl suspendován v DMF (44,5 ml) a zahřát na 65 °C. Ke směsi byl po dobu jedné hodiny přidáván t-butoxid hořečnatý (14,2 g, 0,083 mol), nebo alternativně isopropoxid hořečnatý, a následně 73-toluensulfonyloxymethylfosfonát (66,0 g, 0.205 mol) po dobu dvou hodin, při čemž byla teplota udržována ·· «··· • · · ··· · · ··· · · • · · · ···· # · · · ·· ·* ·· ·9 ·· ·· na 78 °C. Směs byla při 75 °C míchána po dobu 4 hodin. Po zchlazení pod 5 °C byl přidán bromtrimethylsilan (73,9 g, 0,478 mol) a směs vyhřívána na 77 °C po 3 hodiny. Po skončení byla reakční směs zahřátá na 80 °C a těkavé látky byly odděleny destilací za atmosférického tlaku. Zbytek byl rozpuštěn ve vodě (120 ml) při 50°C a pak extrahován ethylacetátem (101 ml). pH vodné fáze bylo nastaveno na pH 1,1 hydroxidem sodným, naočkováno autentickým (7?)-PMPA a pH vodné vrstvy bylo znovu nastaveno na pH 2,1 hydroxidem sodným. Výsledná suspenze byla přes noc míchána při teplotě místnosti. Suspenze byla chlazena na 4 °C po 3 hodiny. Pevný produkt byl oddělen filtrací, promyt vodou (60 ml) a vysušen ve vakuu při 50 °C s výtěžkem 18,9 g (63,5 %) surového (7?)-9-[2(fosfonomethoxy)propyl]adeninu (PMPA) ve formě špinavě bílé pevné látky.
Surový (7?)-9-[2-(fosfonomethoxy)propyl]adenin byl zahříván pod zpětným chladičem ve vodě (255 ml) až se veškeré pevné látky rozpustily. Roztok byl chlazen na teplotu místnosti po více než 4 hodiny. Výsledná suspenze byla chlazena na 4 °C po dobu tří hodin. Pevný produkt byl oddělen filtrací, promyt vodou (56 ml) a acetonem (56 ml), a vysušen ve vakuu při 50 °C s výtěžkem 15,0 g (50,4%) (7?)-9-[2-(fosfonomethoxy)propyl]adeninu (PMPA) ve formě bílé pevné látky. T.t.: 278-280 °C.
• · • · • ·· · • · · · • · · • · · · · • · · • · * ·· ··
Příklad 2
Příprava GS-7171 (III)
Schéma 1
GS-7340
GS-7340-02
Do sklem vyloženého reaktoru byl nadávkován bezvodý PMPA, (I) (14,6 kg, 50,8 mol), fenol (9,6 kg, 102 mol), a l-methyl-2-pyrrolidinon (39 kg). Směs byla zahřátá na 85 °C a přidán triethylamin (6,3 kg, 62,3 mol). Pak byl po dobu 6 hodin přidáván roztok 1,3dicyklohexylkarbodiimidu (17,1 kg, 82,9 mol) v 1-ethyl-2-pyrrolidinonu (1,6 kg) při 100 °C. Vyhřívání pokračovalo po dobu 16 hodin. Reakční směs byla zchlazena na 45 °C, byla přidána voda (29 kg) a zchlazena na 25 °C. Pevné produkty byly odděleny z reakční směsi odfiltrováním a propláchnuty vodou (15,3 kg). Spojený filtrát a promývací roztok byly zkoncentrovány na světlehnědou suspenzi za sníženého tlaku, byla přidána voda (24,6 kg) a nastaveno pH = 11 pomocí hydroxidu sodného (NaOH) (25% vodný roztok). Jemné částice byly odstraněny filtrací přes křemelinu (2 kg) a následovalo promytí vodou (4,4 kg). Spojený filtrát a promývací roztok byly extrahovány ethylacetátem (28 kg). Vodný roztok byl nastaven na pH = 3,1 pomocí kyseliny chlorovodíkové (HCI) (37% vodný roztok) (4 kg). Surová látka II byla oddělena filtrací a promytá methanolem (12,7 kg). Vlhký koláč surové látky II byl suspendován v methanolu (58 kg). Pevné produkty byly odděleny filtrací, promyty methanolem (8,5 kg) a vysušeny při sníženém tlaku s výtěžkem 9,33 kg látky II ve formě bílého prášku: *H NMR (D2O) δ 1,2 (d, 3H), 3,45 (q, 2H), 3,7 (q, 2H), 4 (m, 2H), 4,2 (q, 2H), 4,35 (dd, 2H), 6,6 (d, 2H), 7 (t, 1H), 7,15 (t, 2H), 8,15 (s, 1H), 9,2 (s, 1H); 31P NMR (D2O) δ 15,0 (dekuplován).
GS-7171 (III) (schéma 1)
Do sklem vyloženého reaktoru byl nadávkován monofenyl PMPA, (II), (9,12 kg, 25,1 mol) a acetonitril (30,7 kg). Byl přidán thionylchlorid (6,57 kg, 56,7 mol) při teplotě pod 50 °C. Směs byla zahřívána při 75 °C až se rozpustily pevné látky. Reakční teplota byla zvýšena na 80 °C a těkavé látky (11,4 kg) byly získány destilací při atmosférickém tlaku pod dusíkem. Zbytek v reaktoru byl zchlazen na 25 °C, přidán dichlormethan (41 kg), a zchlazen na -29 °C. Po dobu 60 minut byl přidáván roztok (L)-alanin isopropyl esteru (7,1 kg, 54,4 mol) v dichlormethanu (36 kg) při -18 °C a poté následovalo přidávání trimethylaminu (7,66 kg, 75,7 mol) po dobu 30 minut při -18 až -11 °C. Reakční směs byla zahřátá na teplotu místnosti a pětkrát promyta roztokem dihydrogenfosfátu sodného (10% vodný roztok, 15,7 kg při každém promývání). Organický roztok byl vysušen bezvodým síranem sodným (18,2 kg), filtrován, promyt dichlormethanem (28 kg), a za sníženého tlaku zkoncentrován na olejovitou látku. Koleji byl přidán aceton (20 kg) a směs zkoncentrována za sníženého tlaku. K výslednému oleji byl přidán aceton (18,8 kg). Polovina roztoku produktu byla přečištěna chromatograficky přes lože 38 x 38 cm 22 kg silikagelu 60, 230 až 400 mesh. Kolona byla • · · • · · • · · · · • · · • · · • · · · ···· eluována 480 kg acetonu. Přečištění bylo opakováno s druhou polovinou oleje pomocí čerstvého silikagelu a acetonu. Frakce obsahující čistý produkt byly zkoncentrovány za sníženého tlaku na olej. Koleji byl přidán acetonitril (19,6 kg) a směs zkoncentrována při sníženém tlaku. Byl přidán acetonitril (66,4 kg) a roztok chlazen po 16 hodin na 0 až -5°C. Pevné látky byly odstraněny filtrací a filtrát zkoncentrován při sníženém tlaku na 5,6 kg III ve formě tmavého oleje: lH NMR (CDCfi) δ 1,1 (m 12H), 3,7 (m, 1H), 4,0 (m, 5H), 4,2 (m, 1H), 5,0 (m, 1H), 6,2 (s, 2H), 7,05 (m, 5H), 8,0 (s, 1H), 8,25 (d, 1H); 31P NMR (CDC13) δ 21,0, 22,5 (dekuplován).
Alternativní způsob pro GS-7171 (III)
Schéma 2
(bezvodý)
I II
O
GS-71 • · • · · ·
Monofenyl PMPA (II).
Baňka s kulatým dnem se zpětným chladičem a přívodem dusíku byla umístěna do olejové lázně o teplotě 70 °C. Do baňky byl vložen bezvodý PMPA (I) (19,2 g, 67 mmol), N,Ndimethylformamid (0,29 g, 3,3 mmol) a tetramethylensulfon (40 ml). Po 4 hodiny byl přidáván thionylchlorid (14,2 g, 119 mmol). Vyhřívání bylo zvýšeno na 100 °C po stejnou dobu. Byl získán homogenní roztok. Během 5 minut byl k roztoku přidáván fenoxytrimethylsilan (11,7 g, 70 mmol). Vyhřívání na 100 °C na olejové lázni pokračovalo po další dvě hodiny. Reakční směs byla nalita do rychle míchaného acetonu (400 ml) při chlazení na 0 °C. Pevné produkty byly odděleny filtrací, vysušeny při sníženém tlaku a rozpuštěny v methanolu (75 ml). pH roztoku bylo nastaveno na 3,0 pomocí roztoku hydroxidu draselného (45% vodný roztok) při chlazení ve vodě s ledem. Získané pevné produkty byly odděleny filtrací, promyty methanolem a vysušeny při sníženém tlaku s výtěžkem 20,4 g II (schéma 2) ve formě bílého prášku.
GS-7171 (III).
Monofenyl PMPA (II) (3 g, 8,3 mmol), tetramethylensulfon (5 ml) a VýV-dimethylformamid byly smíseny v baňce se kulatým dnem v olejové lázni při teplotě 40 °C. Byl přidán thionylchlorid (1,96 g, 16,5 mmol). Po 20 minutách byl čistý roztok vyjmut z lázně, zředěn dichlormethanem (10 ml) a přidán roztok (L)-alanin isopropyl esteru (5 g, 33 mmol) a diisopropylethylaminu (5,33 g, 41 mmol) v dichlormethanu (20 ml) při -10 °C. Reakční směs byla vyhřátá na teplotu místnosti a třikrát promyta roztokem dihydrogenfosfátu sodného (10% vodný roztok, 10 ml při každém promývání). Organický roztok byl vysušen nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrován při sníženém tlaku na olej. Olej byl smísen s kyselinou fumarovou (0,77 g, 6,6 mmol) a acetonitrilem (40 ml) a vyhříván pod zpětným chladičem tak, aby byl získán homogenní roztok. Roztok byl zchlazen v ledové lázni a pevné látky odděleny filtrací. Pevná fumarátová sůl GS-7171 byla vysušena při sníženém tlaku s výtěžkem 3,7 g. Sůl (3,16 g, 5,3 mmol) byla suspendována v dichlormethanu (30 ml) a smísena s roztokem uhličitanu draselného (5 ml, 2,5M ve vodě) až se pevná látka rozpustila. Organická vrstva byla izolována, pak promyta vodou (5 ml), vysušena nad bezvodým síranem sodným a zkoncentrována při sníženém tlaku s výtěžkem 2,4 g III ve formě světlehnědé pěny.
Příklad 3
A. Separace diastereomeru šaržovou eluční chromatografií • ti • ti • ti • ti • ti • ti • ti
Diastereomery GS-7171 (III) byly resolvovány šaržovou eluční chromatografíi pomocí komerčně dostupného Chiralpaku AS, 20pm, 21 x 250 mm semi-preparativní HPLC kolonou s Chiralpakem AS, 20pm, s 21 x 50 mm předkolonou. Chiralpak® AS je plnící materiál vyráběný firmou Daicel a prodávaný v Severní Americe společností Chiral Technologies, lne. (U. S. patenty č. 5,202,433, RE 35,919, 5,434,298, 5,434,299, a 5,498,752). Chiralpak AS je chirální stacionární fáze (CSP) obsahující amylosetris[(<S)-a-methylbenzyl karbamát] na sílikagelovém nosiči.
Diastereomerní směs GS-7171 byla rozpuštěna v mobilní fázi, a přibližně 1 g alikvotní podíly GS-7171 byly čerpány do chromatografického systému. Nežádoucí diastereomer, označovaný GS-7339, byl prvním větším širokým (po dobu přibližně 15 min) pikem, eluovaným z kolony. Po skončení eluce píku GS-7339 byla mobilní fáze okamžitě změněna na 100% methylalkohol, což způsobilo, že požadovaný diastereomer, označovaný GS-7340 (IV), byl z kolony eluován ve formě ostrého píku s čelem rozpouštědla, methylalkoholem. Methylalkohol byl použit pro zkrácení celkové doby cyklu (operace). Po první dvojici nastříknutí byly oba diastereomery získány jako jediné velké frakce obsahující jeden z přečištěných diastereomerů (>99,0% pro jednotlivý diastereomer). Rozpouštědla mobilní fáze byla odstraněna ve vakuu a přečištěný diastereomer byl získán ve formě drolivé pěny.
Asi 95% výchozí hmotnosti GS-7171 bylo získáno ve formě dvou frakcí diastereomerů. Frakce GS-7340 představovala asi 50% celkové získané hmotnosti.
Chromatografické podmínky byly následující:
Mobilní fáze (počáteční) : GS-7171 - acetonitrilňsopropylalkohol (90:10)
Průtok (konečná)
Celková doba dělení Detekce Teplota Eluční profil
100% methylalkohol 10 ml/min asi 45 minut
UV při 275 nm teplota okolí
GS-7339 (diastereomer B) GS-7340 (diastereomer A; (IV))
B. Separace diastereomerů GS-7171 SMB chromatografíi
Obecný popis chromatografie se simulovaným pohyblivým ložem (simulated moving bed, SMB), viz Strube et al.: Organic Process Research and Development 2:305-319 (1998).
GS-7340 (IV)
GS-7171 (III), 2,8 kg, byl přečištěn chromatografií se simulovaným pohyblivým ložem pomocí náplně loží o velikosti více než 10 cm na 5 cm (Chiral Technologies lne., 20 mikron Chiralpak AS na silikagelu) (1,2 kg). Kolony byly eluovány 30% roztokem methanolu v acetonitrilu. Frakce s produktem byly zkoncentrovány na roztok sloučeniny IV v acetonitrilu (2,48 kg). Roztok přešel stáním na krystalickou hmotu nasáklou acetonitrilem. Krystalická hmota byla vysušena za sníženého tlaku na světlehnědý krystalický prášek, 1,301 kg IV, 98,7% diastereomerové čistoty: t.t. 117-120 °C; *H NMR (CDCI3) δ 1,15 (m, 12H), 3,7 (t, IH), 4,0 (m, 5H), 4,2 (dd, IH), 5,0 (m, IH), 6,05 (s, 2H), 7,1 (m, 5H), 8,0 (s, IH), 8,2 (s, IH); 31P NMR (CDC13) δ 21,0 (dekuplován).
C. Separace diastereomerů pomocí Cl8 HPLC v reverzní fázi
GS-7171 (III) byl chromatografován pomocí HPLC v reverzní fází, aby se oddělily diastereomery podle tohoto souhrnného protokolu.
Chromatografická kolona: Phenomenex Luna™ Cl8(2), 5pm, velikost pórů 100 Á, (Phenomonex, Torrance CA), nebo ekvivalentní
Předkolona: Pellicular Cl8 (Alltech, Deerfield, IL), nebo ekvivalentní
Mobilní fáze: A - 0,02% (85%) H3PO4 ve směsi voda:acetonitril (95:5)
B - 0,02% (85%) H3PO4 ve směsi voda:acetonitril (50:50)
Gradient mobilní fáze:
Čas % mobilní fáze A % mobilní fáze B
0 100 0
5 100 0
7 70 30
32 70 30
40 0 100
50 0 100
• · ····
Doba dělení: • « « • · ' • · « • · < ·· 29 50 minut
Zpoždění rovnováhy: 10 min při 100% mobilní fázi A
Průtoková rychlost: 1,2 ml/min
Teplota: místnosti
Detekce: UV při 260 nm
Roztok vzorku: 20 mM pufru fosforečnanu sodného, pH 6
Retenční časy: GS-7339, asi 25 minut
GS-7340, asi 27 minut
D. Separace diastereomerů krystalizaci
GS-7340 (IV).
Roztok GS-7171 (III) v acetonitrilu byl zkoncentrován za sníženého tlaku na jantarově žlutou pěnu (14,9 g). Pěna byla rozpuštěna v acetonitrilu (20 ml) a naočkována krystalem IV. Směs byla míchána přes noc, zchlazena na 5 °C a pevné produkty odděleny filtrací. Pevné produkty byly vysušeny na 2,3 g IV ve formě bílých krystalů, diastereomerní čistota 98% (31P NMR): ‘H NMR (CDC13) δ 1,15 (m, 12 H), 3,7 (t, 1H), 3,95 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 4,2 (m, 2H), 5,0 (m, 1H), 6,4 (s, 2H), 7,1 (m, 5H), 8,0 (s, 1H), 8,2 (s, 1H); 3IP NMR (CDC13) δ 19,5 (dekuplován). Rentgenová krystalografická analýza jednoho vybraného krystalu tohoto produktu poskytla tyto údaje:
Barva krystalu, vzhled bezbarvý, sloupečky
Rozměry krystalu 0,25 χ 0,12 χ 0,08 mm
Soustava kosočtverečná
Typ mřížky primitivní
Mřížkové parametry a = 8,352(1) Á b = 15,574(2) Á c = 18,253(2) Á V = 2374,2(5) Á3
Prostorová grupa P2i2r2i (#19)
Hodnota Z 4
Dyyp 1,333 g/cm3
Fooo 1008,00
μ(ΜοΚα) 1,60 cm'1
··· · · · · ·* · • · fcfcfc · · ·♦ · · · • · · · · · · · · · · · · • · · · · · · · · · · · • · ♦ · · · · · fc· fc* ·· ····
Příklad 4
Příprava fumarátové soli GS-7340
GS-7340-02 (V). (Schéma 1)
Do sklem vyloženého reaktoru byly nadávkovány GS-7340 (IV) (1,294 kg, 2,71 mol), kyselina fumarová (284 g, 2,44 mol), a acetonitril (24,6 kg). Směs byla zahřívána pod zpětným chladičem až se pevné látky rozpustily, byla za horka přefiltrována a chlazena po dobu 16 hodin na 5 °C. Produkt byl oddělen filtrací, promyt acetonitrilem (9,2 kg), a vysušen s výtěžkem 1329 g (V) ve formě bílého prášku: t.t. 119,7 - 121,1 °C; [a]o2° -41,7° (c 1,0, kyselina octová).
Příklad 5
Příprava GS-7120 (VI)
Schéma 3
GS-7120
Do 5 1 baňky s kulatým dnem byl nadávkován monofenyl PMPA, (II), (200 g, 0,55 mol) a acetonitril (0,629 kg). Při teplotě pod 27 °C byl přidán thionylchlorid (0,144 kg, 1,21 mol). Směs byla zahřívána na 70 °C až se rozpustily všechny pevné látky. Těkavé látky (0,45 1) byly odstraněny destilací pod dusíkem za atmosférického tlaku. Zbytek v baňce byl zchlazen na 25 °C, byl přidán dichlormethan (1,6 kg) a směs byla zchlazena na -20 °C. Po dobu 18 ·· ··· · • ' · · · ♦ · · · · ♦ · · ···· · · · · · · · · ·· 99 ·· ♦· ·· ·· minut a při teplotě -20 až -10°C byl přidáván roztok ethylesteru kyseliny (L)-a-aminomáselné (0,144 kg, 1,1 mol) v dichlormethanu (1,33 kg), potom byl po dobu 15 minut a při teplotě -8 až -15 °C přidáván triethylamin (0,17 kg, 1,65 mol). Reakční směs byla ohřátá na teplotu místnosti, čtyřikrát promyta roztokem dihydrogenfosfátu sodného (10% vodný roztok, 0,3 1 při každém promytí). Organický roztok byl vysušen bezvodým síranem sodným (0,5 kg) a zfiltrován. Pevné produkty byly promyty dichlormethanem (0,6 kg) a spojený filtrát a vymývací roztok byly zkoncentrovány na olej při sníženém tlaku. Olej byl vyčištěn chromatograficky přes lože 15 x 13cm, 1,2 kg silikagelu 60, 230 až 400 mesh. Kolona byla gradientově eluována dichlormethanem a methanolem. Frakce obsahující produkt byly zkoncentrovány při sníženém tlaku a poskytly 211 g VI (Schéma 3) ve formě světlehnědé pěny.
Příklad 5 a
Separace diastereoméru GS-7120 pomocí šaržové eluční chromatografie
Diastereomérní směs byla vyčištěna za podmínek popsaných pro GS-7171 v příkladu 3 A, vyjma následujícího:
Mobilní fáze (Počáteční) : GS-7120 - acetonitril isopropylalkohol (98:2) (Konečná) : 100% methylalkohol
Eluční profil : GS-7341 (diastereomér B) : GS-7342 (diastereomér A)
Příklad 6
Separace diastereomeru GS-7120 krystalizací
Do 1 1 baňky s kulatým dnem byl nadávkován monofenyl PMPA, (II), (50 g, 0,137 mol) a acetonitril (0,2 1). Isotermicky při 10 °C byl přidán thionylchlorid (0,036 kg, 0,303 mol). Směs byla zahřívána pod zpětným chladičem až se rozpustily pevné látky. Těkavé látky (0,1 1) byly odstraněny destilací pod dusíkem za atmosférického tlaku. Zbytek v baňce byl zchlazen na 25 °C, přidán dichlormethan (0,2 kg), a směs byla zchlazena na -20 °C. Po dobu 30 minut a při teplotě -20 až -8 °C byl přidáván roztok ethylesteru kyseliny (L)-aaminomáselné (0,036 kg, 0,275 mol) v dichlormethanu (0,67 kg), následovalo přidávání triethylaminu (0,042 kg, 0,41 mol) po dobu 10 minut při až -6 °C. Reakční směs pak byla ·· ··· · • · · • · · « · · • · · · ·* • «· ··♦ »♦ « ···« ·♦«· «· ♦ · ·· ♦· ohřátá na teplotu místnosti a čtyřikrát promyta roztokem dihydrogenfosfátu sodného (10% vodný roztok, 0,075 1 při každém promývání). Organický roztok byl vysušen bezvodým síranem sodným (0,1 kg) a zfiltrován. Pevné produkty byly promyty ethylacetátem (0,25 1) a spojený filtrát a promývací roztok byly zkoncentrovány na olej za sníženého tlaku. Olej byl zředěn ethylacetátem (0,25 1), naočkován, protřepáván přes noc, a zchlazen na -15 °C. Pevné produkty byly odděleny filtrací a vysušeny za sníženého tlaku s výtěžkem 17,7 g GS-7342 (Tabulka 5) ve formě světlehnědého prášku: ’H NMR (CDCfi) δ 0,95 (t, 3H), 1,3 (m, 6H), 1,7 (m, 2H), 3,7 (m, 2H), 4,1 (m, 6H), 4,4 (dd, 1H), 5,8 (s, 2H), 7,1 (m, 5H), 8,0 (s, 1H), 8,4 (s, 1H); 31P NMR (CDC13) δ 21 (dekuplován).
Příklad 7
Separace diastereoméru GS-7097
Diastereomérní směs byla přečištěna za podmínek popsaných pro GS-7171 (příklad 3 A) vyjma následujícího:
Mobilní fáze (Počáteční) : GS-7120 - acetonitril:isopropylalkohol (95:5) (Konečná) : 100% methylalkohol
Eluční profil : GS-7115 (daisteromér B) : GS-7114 (diasteromér A)
Příklad 8
Alternativní postup pro přípravu GS-7097
GS-7097: Fenyl PMPA, ethyl-L-alanyl amidát.
Fenyl PMPA (15,0 g, 41,3 mmol), hydrochlorid ethylesteru L-alaninu (12,6 g, 83 mmol) a triethylamin (11,5 ml, 83 mmol) byly společně pod dusíkem smíseny na kaši v 500 ml pyridinu. Tato suspenze byla spojena s roztokem trifenylfosfinu (37,9 g, 145 mmol), Aldrithiolem 2 (2,2'-dipyridyl disulfid) (31,8 g, 145 mmol), a 120 ml pyridinu. Směs byla zahřívána po dobu 15 hodin na vnitřní teplotu 57 °C. Konečná reakční směs byla za vakua zkoncentrována na žlutou pastu, 100 g. Pasta byla přečištěna kolonovou chromatografií na 25 x 11 cm loži 1,1 kg silikagelu 60, 230 až 400 mesh. Kolona byla eluována 8 litry 2% methanolu v dichlormethanu s následným lineárním gradientem 26 litry eluentu až do • · tt · • tt ···· • tttt · · · tt tttt · • tt ··· tttt·· · · ·« tttttttt ···· «tttt· • tt tttt tttt tttt ·· tt* finálního složení 13% methanolu. Frakce obsahující čistý produkt byly zkoncentrovány a poskytly výtěžek 12,4 surového (5), 65% teorie. Podle ’H NMR byl tento materiál znečištěn asi 15 % (hmotn.) hydrochloridu triethylaminu. Znečištění bylo odstraněno rozpuštěním produktu v 350 ml ethylacetátu, extrakcí 20 ml vody, vysušením organického roztoku nad bezvodým síranem sodným, a zkoncentrováním s výtěžkem 11,1 g čistého GS-7097 ve formě bílé pevné látky, 58% výtěžek. Tento postup byl také použit pro syntézu diastereomérní směsi GS-7003a a GS-7003b (fenylalanyl amidát) a směsi GS-7119 a GS-7335 (glycyl amidát).
Tyto diastereomery se separují pomocí šaržového (vsádkového) elučního postupu jako v příkladech 3 A, 6 a 7.
Příklad 9
In vitro studie diastereomérů prekursorů léčiva
Tabulka 1 uvádí in vitro anti-HIV-1 aktivitu a cytotoxicitu v buňkách MT-2 a stabilitu v lidské plasmě a extraktech buněk MT-2 pro GS-7340 (volná baze) a tenofovir disoproxil fumarát (TDF). GS-7340 vykazuje lOnásobný nárůst antivirové aktivity oproti TDF a 200násobný nárůst ve stabilitě v plasmě. Dá se očekávat, že tato vyšší stabilita v plasmě bude mít za následek vyšší cirkulující hladinu GS-7340 než TDF po orálním podávání.
Tabulka 1. in vitro aktivita a stabilita
HIV-1 aktivita Cytotoxicita Stabilita T1/2 (min)
IC50gM CCsogM Lidská plasma Extrakt buněk MT-2 (P/MT-2)
GS 7340 0,005 >40 90,0 28,3 3,2
TDF 0,05 70 0,41 70,7 0,006
Tenofovir 5 6000 - - -
Aby bylo možno odhadnout relativní nitrobuněčný PMPA jako výsledek nitrobuněčného metabolismu TDF ve srovnání s tím, získaným z GS-7340, byly jak oba prekursory léčiv tak i PMPA radioaktivně označeny a injektovány (spiked) do neporušené lidské plné (celkové) krve v ekvimolárních koncentracích. Po jedné hodině byly izolovány
0000
0 0 0 0 0 0 0 0 0
0 000 0 000 ·· ·
00 000 00 000 0 ·
0000 0000 0·0·
00 00 ·0 ·0 ·0 plasma, červené krvinky (RBCs) a mononukleární buňky periferní krve (PBMCs) a analyzovány HPLC s radiometrickou detekcí. Výsledky jsou uvedeny v Tabulce 2.
Po jedné hodině GS-7340 poskytuje ve srovnání s TDF, případně PMPA, 1 Okřát, resp. 3Okrát vyšší celkovou intracelulární koncentraci PMPA v PBMCs. V plasmě je po jedné hodině 84% radioaktivity důsledkem neporušené GS-7340, zatímco po jedné hodině není detekován žáden TDF. Protože v plasmě není detekován žáden neporušený TDF, je lOnásobný rozdíl po jedné hodině mezi TDF a GS-7340 minimálním rozdílem, který se dá očekávat in vivo. HPLC chromatogram pro všechny tři sloučeniny v PBMCs je uveden na obr.
1.
Tabulka 2
PMPA metabolity v plasmě, PBMC a RBC po 1 hodině inkubace prekursorů PMPA nebo
PMPA v lidské krvi
Sloučenina Matrice Celkový získaný C-14 Metabolity (% celkové plochy píku)
PMPA % PMPAp, % PMPApp, % Met. X. % Met. Y % GS 7340 %
GS-7340 Plasma/FP 43,0 1 - - 2 13 84
1,25 45 16 21 18 - -
(60 gg - PBMC 12,6 8 - - 24 11 57
ekv.) RBC/FP
PMPA PMPAp PMPApp Mono-POC GS-4331
GS-4331 Plasma/FP 48,1 11 - - 89 -
(TDF) (60 gg- PBMC 0,133 50 25 18 7 -
RBC/FP 10,5 93 7,0
ekv.)
PMPA PMPAp PMPApp
PMPA Plasma/FP 55,7 100 - -
PBMC 0,033 86 14 -
(60 gg- ekv.) RBC/FP 3,72 74 10 16
• « ·· ···· t
•
0
0
0 ·« 0«
0 0 ·
0 00« 0
0 0 0 0 0
0 0 « *
0« «0
00
Obrázek 1
HPLC/C-14 stopy vPBMC extraktech z lidské krve inkubované 1 h při 37 °C s TDF, GS7340 nebo PMPA
000'
600·
400TDF/PBMC
200· ok s
PMPA
PMPAp -—
PMPApp
-Ί
Met. X a Met Y (metabolity X a Y) jsou uvedeny v Tabulce 5. Malé písmeno p značí fosforylaci. Tyto výsledky byly získány po 1 hodině v lidské krvi. Se vzrůstajícím časem se dá očekávat, že rozdíly in vitro porostou, protože 84 % GS-7340 je ještě v plasmě po jedné hodině nedotčeno. Protože neporušený GS-7340 je v plasmě přítomen po orálním podání, relativní klinická účinnost by se měla vztahovat k hodnotám IC50 pozorovaným in vitro.
N níže uvedené tabulce 3 jsou uvedeny hodnoty IC50 tenofoviru, TDF, GS-7340, některých nukleosidů a inhibitoru proteázy nelfinaviru. Jak je vidět, nelfmavir a GS-7340 jsou o 2-3 řádové hodnoty účinnější než všechny ostatní nukleotidy nebo nukleosidy.
·» 999 9
99 99 99 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 999 9 9 99 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 9 9 9 9 9 9
99 99 99 99 99
Tabulka 3
In vitro anti-HIV-1 aktivity antiretrovirových sloučenin
Sloučenina IC50 (μΜ)
Adefovir (PMEA) 13,414,21
Tenofovir (PMPA) 6,313,31
AZT 0,1710,081
3TC 1,810,251
d4T 812,51
Nelfinavir 0,0061 0,0021
TDF 0,05
GS 7340 0,005
1 A.S. Mulato a J.M. Cherrington, Antiviral Research 36, 91 (1997)
Byly provedeny další studie in vitro anti-HIV-1 aktivity v buněčné kultuře (buněčné kultury) a CC50 oddělených diastereomerů podle tohoto vynálezu a výsledky jsou tabelovány dále v Tab. 4.
φφφφ · · φ • φ φφ φφφ φ φφ φφφ φ φ φ φφ φ « · · φ φφφφ φφ ··
ΦΦ φφφ φ • φ φ • · φ φφ • · · · • φ φ φ φφ φφ
Tabulka 4
Účinek diastereomerů
Sloučenina Diastereomer IC50 (μΜ) Změna rýhování Aktivita A/B CC5o^M)
PMPA - 5 lx - 6000
Ala-methylester Směs 1:1 0,025 200x 20x 80
GS-6957a A 0,0075 670χ
GS-6957b 0,15 33χ
Phe-methylester Směs 1:1 0,03 170x 10x 60
GS-7003a A 0,01 500x
GS-7003b B 0,1 50x
Gly-ethylester Směs 1:1 0,5 10x 20x
GS-7119 A 0,05 100x >100
GS-7335 B 1,0 5χ
Ala-isopropyl Směs 1:1 0,01 500x 12x
GS-7340 A 0,005 1 000x 40
GS-7339 B 0,06 83 x >100
ABA-ethyl Směs 1:1 0,008 625 x 7,5x >100
GS-7342 A 0,004 1 250x
GS-7341 B 0,03 170x
Ala-ethyl Směs 1:1 0,02 250x 10x 60
GS-7114 A 0,005 1 000x
GS-7115 B 0,05 100x
Literatura týkající se testu: Arimilli, MN, et al., (1997) Synthesis, in vitro biological evaluation and oral bioavailability of 9-[2-(fosfonomethoxy)propyl]adenine (PMPA) prodrugs. Antiviral Chemistry and Chemotherapy 8(6):557-564.
Phe-methylester je methylfenylalaninyl monoamidát, fenyl monoester tenofoviru; gly-methylester je methylglycyl monoamidát, fenyl monoester tenofoviru.
V každém výše uvedeném případě se předpokládá, že isomer A má stejnou absolutní stereochemii jako GS-7340(S) a že isomer B má stejnou absolutní stereochemii jako GS7339.
• fc ·· ·«· ·· • 9 9 *9·· • 9 ·♦· * · ·· « 1 9 9 9 1 9 9 9
9 9 + · * 1 ·
99 91 91
In vitro metabolismus a stabilita separovaných diastereomerů byly stanoveny v PLCE (karboxyesteráza z vepřových jater), extraktu MT-2 buněk a v lidské plasmě. Biologický vzorek uvedený dále, v množství 80 μΐ, byl přenesen do centrifugační zkumavky se šroubovacím uzávěrem a inkubován při 37 °C po dobu 5 minut. K biologickému vzorku byl přidán roztok obsahující 0,2 mg/ml testované sloučeniny ve vhodném pufru, 20 μΐ, a míchán. Z reakční směsi byl okamžitě odebrán vzorek, 20 μΐ, a smíchán s 60 μΐ methanoíu, obsahujícího 0,015 mg/ml 2-hydroxymethylnaftalenu jako vnitřního standardu pro HPLC analýzu. Vzorek byl považován za vzorek pro čas nula. Pak, v určitých časových okamžicích byly z reakční směsi odebírány vzorky, 20 μΐ, a smíchány s 60 μΐ methanoíu obsahujícího vnitřní standard. Takto získaná směs byla centrifugována při 15 000 G pro dobu 5 min a supernatant byl analyzován HPLC za níže popsaných podmínek.
Byly hodnoceny následující biologické vzorky.
(1) PLCE (karboxyesteráza z vepřových jater od společnosti Sigma, 160 u/mg proteinu, 21 mg proteinu/ml) dvacetinásobně zředěná PBS (fysiologický roztok pufrovaný fosfátem).
(2) Extrakt MT-2 buněk byl připraven z MT-2 buněk podle publikovaného postupu [A.
Pompon, I. Lefebvre, J.-L. Imbach, S. Kahn, a D. Farquhar, Antiviral Chemistry &
Chemotherapy, 5:91-98 (1994)] vyjma toho, že jako medium byl použit níže popsaný pufrHEPES.
(3) Lidská plasma (smíšená normální lidská plasma od společnosti George King
Biomedical Systems, lne.)
Při hodnocení byly použity tyto pufrovací systémy.
Ve studii pro PLCE byla testovaná sloučenina rozpuštěna v PBS. PBS (fysiologický roztok pufrovaný fosfátem, Sigma) obsahuje 0,01 M fosfátu, 0,0027 M chloridu draselného, a 0,137M chloridu sodného. pH 7,4 při 37 °C.
Ve studii pro extrakty MT-2 buněk byla testovaná sloučenina rozpuštěna v pufru HEPES. Pufr HEPES obsahuje 0,010M HEPES, 0,05M chloridu draselného, 0,005M chloridu hořečnatého, a 0,005M í//-dithiothreitolu. pH 7,4 při 37 °C.
Ve studii pro lidskou plasmu byla testovaná sloučenina rozpuštěna v TBS. TBS (trojnásobně pufrovaný fyziologický roztok, Sigma) obsahuje 0,05M Tris, 0.0027M chloridu draselného a 0,138M chloridu sodného. pH 7,5 při 37 °C.
♦ fc fc···
HPLC analýza byla prováděna za těchto podmínek.
• · »· 0···
Kolona: Zorbax Rx-Cg, 4,6 x 250 mm, 5μ (MAC-MOD Analytical, lne. Chadds Ford, PA)
Detekce: UV při 260 nm
Průtoková rychlost: 1,0 ml/min
Celková doba: 30 min
Nástřik: 20 μΐ
Teplota kolony: Teplota místnosti
Mobilní fáze A: 50 mM fosforečnanu draselného (pH 6,0)/CH3CN = 95/5 (v/v)
Mobilní fáze B: 50 mM fosforečnanu draselného (pH 6,0)/CH3CN = 50/50 (v/v)
Gradientová eluce: 0 min 100% mobilní fáze A 25 min 100% mobilní fáze B 30 min 100% mobilní fáze B
Výsledky jsou uvedeny níže v Tabulce 5 (kde jsou také uvedeny vybrané údaje IC50 z Tabulky 4).
·· ·· ti • ti • ··· • ti · ti · ti ·· ·· ti titi • ti • ti titi • titi •ti ·» ti • ti ti· ···« • ti titi ti ti • · ti ti • ti ti • ti titi
Tabulka 5
In vitro metabolizmus isomerů A a B monoamidátu PMPA při 37 C
Čís. Struktura monoamidátu PMPA HIV IC50 (μΜ) PLCE Rychlost hydrolýzy a produkt MT-2 extrakt Rychlost hydrolýzy a produkt Stabilita v lidské plasmě (HP)
1 A Ϊ <?H, k/^R-NH-CHCOOEt 1 OPh IsomerA GS7114 0.005 tw = 2.9 min Met. X & PMPA tw = 2.9 min Met. X & PMPA f/2 - 148 min Met. Y
2 A 9 9H3 kyO^R-NH-CHCOOB 1 OPh IsomerB GS7115 0.05 tw - 8.0 min Met. X & PMPA t1/a= 150.6 min Met. X & PMPA tw = 495 min Met. Y
3 A ? £H» <OvR-NH-CHCOOIPr á OPh Isomer A GS7340 0.005 tlfl = 3.3 min Met. X & PMPA tw = 28.3 min Met. X & PMPA tw = 90.0 min Met.Y
4 A „ 9 íh3 kyOvR-NH-CHCOOlPr Š. OPh Isomer B GS7339 0.06 tw« 10.1 min Met. X & PMPA t,n> 1000 min t1/2 = 231 min Met.Y
5 A í . 0H2ch3 Co^R-NH-CHCOOEt & OPh Isomer A GS7342 0.004 t,fl = 3.9 min Met. X t)/a = 49.2 min Met. X& PMPA tw= 103 min Met.Y
6 A <j> 0H2CH3 Q/^R-NH-CHCOOEt £ OPh Isomer B GS7341 0.03 t1fl «11.3 min Met.X tw> 1000 min tw = 257 min Met.Y
7 A 9 ? <zO P-OCH2OCOIPr = \ $? GS4331 OCH2OCOIPr 0.05 t1ZJ <0.14 min MonoPOC PMPA tw = 70.7 min monoPOC PMPA t1/2 = 0.41 min monoPOC PMPA
Met. X:
Met. Y:
^r<-NH-CHCOOR OH ,11
A Ϊ '
MXPš-NH-CHCOOH A OH
• · · ·· · ·· ·· · · ·· ·· ··
Příklad 10
Exponování plasmy a PBMC po orálním podání diastereomerů prekursorů léčiva psům plemene beagle
Farmakokinetika GS 7340 byla studována u psů po orálním podání dávky 10 mgekv./kg.
Přípravky
Prekursory léčiv byly připraveny ve formě roztoků v 50 mM kyseliny citrónové během 0,5 h před dávkováním. Všechny sloučeniny použité v této studii byly syntetizovány společností Gilead Sciences. Byly použity tyto šarže (lots):
GSI Amidát aminokysliny AA Ester Diastereoisomer Čís. Šarže
GS-7340-2 Alanin i-Propyl Isómer A 1504-187-19
GS-7339 Alanin i-Propyl Isómer B 1509-185-31
GS7114 Alanin Ethyl Isómer A 1509-181-26
GS7115 Alanin Ethyl Isómer B 1509-181-22
GS7119 Glycin Ethyl Isómer A 1428-163-28
GS7342 Kyselina a-aminomá- Ethyl Isómer A 1509-191-12
GS7341 selná Kyselina a-aminomáselná Ethyl Isómer B 1509-191-7
Podávání dávky a nabírání vzorků.
Fáze této studie se živými organismy byla provedena v souladu s doporučeními Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (Návod pro péči o laboratorní zvířata a jejich použití) (National Institutes of Health publication 86-23) a byla schválena ústavním výborem pro péči o zvířata a jejich použití (Institutional Animal Care and Use Committee). Pro tyto studie byli použiti vyhladovělí psi plemene beagle (samci) (10 ± 2 kg). Každé léčivo bylo podáváno v jediné dávce pomocí orální žaludeční sondy (1,5-2 ml/kg). Dávkou bylo 10 mg-ekvivalentu PMPA/kg. Pro PBMCs byly odebrány vzorky krve v 0 (před podáním dávky), 2, 8 a 24 h (po podání dávky). Pro plasmu byly odebrány vzorky krve v 0 (před podáním dávky), 5, 15, a 30 min, a 1, 2, 3, 4, 6, 8, 12 a 24 h po podání dávky. Krev (1,0 ml) byla zpracována ihned na plasmu centrifugaci při 2 000 ot/min po dobu 10 min. Vzorky plasmy byly zmrazený a udržovány při 70°C až do analýzy.
• · • · · · • · ·
Příprava mononukleárních buněk periferní krve (PBMC).
Plná krev (8 ml) odebraná v daných časových okamžicích byla smísena ve stejném poměru s fysiologickým roztokem pufrovaným fosfátem (PBS), navrstvena na 15 ml Ficoll-Paqueova roztoku (Pharmacia Biotech.) a centrifugována při 400 x g po dobu 40 min. Vrstva PBMC byla odstraněna a jedenkrát promyta PBS. Vytvořená peletka PMBC byla rekonstituována v 0,5 ml PBS, buňky byly znovu suspendovány, spočítány pomocí hemocytometru a udržovány při 70 °C až do analýzy. Počet buněk vynásobený středním objemem jedné buňky byl použit při výpočtu intracelulárních koncentracích. Uváděná hodnota 200 femtolitrů/buňku byla použita jako klidový objem PBMC (B.L. Robins, R.V. Srinivas, C. Kim, N. Bischofberger, a A. Fridland, Antimicrob. Agents Chemother. 42, 612 (1998)).
Stanovení PMPA a prekursorů léčiva v plasmě a PBMCs.
Koncentrace PMPA ve vzorcích psí plasmy byla stanovena derivatizací PMPA chloracetaldehydem za vzniku vysoce fluorescentního N1,N6-ethenoadeninového derivátu (L. Naesens, J. Balzarini, a E. De Clercq, Clin. Chem. 38, 480 (1992)). Stručně, plasma (100 μΐ) byla smísena s 200 μΐ acetonitrilu, aby se vysrážel protein. Vzorky pak byly odpařeny do sucha za sníženého tlaku při teplotě místnosti. Vysušené vzorky byly rekonstituovány v 200 μΐ derivatizační směsi (0,34% chloracetaldehydu ve 100 mM octanu sodného, pH 4,5), promíchány a centrifugovány. Supernatant byl pak přenesen do čisté zkumavky se šroubovacím uzávěrem a inkubován při 95 °C po dobu 40 min. Derivatizovaný vzorek byl pak odpařen do sucha a rekonstituován ve 100 μΐ vody pro analýzu HPLC.
Před tím, než mohl být pomocí HPLC stanoven nitrobuněčný PMPA, muselo být velké množství k adeninu se vztahujících ribonukleotidů, přítomné v extraktech PBMC, odstraněno pomocí selektivní oxidace. Byl použit modifikovaný postup podle Tanaky et al. (K. Tanaka, A. Yoshioka, S. Tanaka, a Y. Wataya, Anal. Biochem., 139, 35 (1984)). Stručně řečeno, vzorky PBMC byly smíseny v poměru 1:2 s methanolem a odpařeny do sucha za sníženého tlaku. Vysušené vzorky byly derivatizovány jak je popsáno při zkoušce plasmy. Derivatizované vzorky byly smíseny s 20 μΐ ÍM rhamnosy a 30 qL 0,lM jodistanu sodného a inkubovány při 37 °C po 5 min. Po inkubaci bylo přidáno 40 μΐ 4M methylaminu a 20 μΐ 0,5M inosinu. Po 30 min inkubaci při 37 °C byly vzorky odpařeny do sucha za sníženého tlaku a rekonstituovány ve vodě pro analýzu HPLC.
• · ·· · · ·· • · · ···· ·· · • · · · · · ··· · · · • ·· · · · · · ··· · · • ·· · · · · · · ·· · • · ·· ·· · · ·· · · 43
V žádném vzorku PBMC nebyl zjištěn nezměněný (intaktní) prekursor léčiva. U vzorků plasmy, které potenciálně mohly obsahovat nezměněné prekursory léčiva byly provedeny experimenty, aby se ověřilo, že během derivatizace nedošlo k další konverzi na PMPA. Standardy prekursoru léčiva byly přidány k plasmě bez léčiva a derivatizovány jak bylo popsáno. V žádném vzorku plasmy nebyly přítomny detekovatelné hladiny PMPA a předpokládané % konverze bylo menší než 1%.
HPLC systém se skládal ze systému přívodu rozpouštědla P4000 s autoinjektorem AS3000 a fluorescenčním detektorem F2000 (Thermo Separation, San José, CA). Jako náplň kolony byl použit Inertsil ODS-2 (4,6 χ 150 mm). Byly použity tyto mobilní fáze: A, 5% acetonitril v 25 mM fosforečnanu draselném jako pufru s 5 mM tetrabutylamonium bromidu (TBABr), pH 6.0; B, 60% acetonitril v 25 mM fosforečnanu draselném jako pufru s 5 mM TBABr, pH 6.0. Průtoková rychlost byla 2 ml/min a teplota kolony byla píckou pro kolonu udržována na 35°C. Gradientový profil byl 90% A/10% B po 10 min pro PMPA a 65% A/35% B po 10 min pro prekursor léčiva . Detekce byla provedena pomocí fluorescence s excitací při 236 nm a emisí při 420 nm, nástřik byl 10 μΐ. Data byla načtena a uložena pomocí laboratorního systému načítání dat (PeakPro, Beckman, Allendale, NJ).
Farmakokinetické výpočty.
Expozice PMPA a prekursorů léčiva byly vyjádřeny pomocí ploch pod koncentračními křivkami v plasmě nebo PBMC od nuly do 24 hodin (AUC). Hodnoty AUC byly vypočteny pomocí lichoběžníkového pravidla.
Koncentrace plasmy a PBMC.
Výsledky této studie jsou uvedeny v obrázcích 2 a 3. Obrázek 2 ukazuje souhrnný časový průběh metabolismu GS 7340-2 při expozici v plasmě a PBMC po orálním podání čistých diastereoisomerů prekursorů PMPA.
• · · ·
·· ··
Obrázek 2
Koncentrace PMPA a prekursorů v plasmě a PBMC po orálním podání GS 7340-2 psům při dávce 10 mg-ekv./kg
Čas po podání dávky (h)
Sloupkový diagram na obrázku 3 ukazuje AUC (0-24 h) pro tenofovir v psím PBMCs a plasmě po podání PMPA s.c., TDF a amidátového esteru prekursorů léčiva. Všechny amidátové prekursory léčiva vykazovaly vzrůst při expozici v PBMC. Například, GS 6340 dává ~21-násobný nárůst při expozici v PBMC ve srovnání s PMPA s.c. a TDF; a 6,25násobný a 1,29násobný pokles při expozici v plasmě.
• ·
Obrázek 3
Znázornění expozice tenofoviru v PBMC a plasmě po podání 10 mg-ekv./kg u psů AUC (0-24 h) pro PMPA v PBMC a plasmě po orálním podání 10 mg-ekv./kg prekursoru PMPA psům
Tyto údaje ukazují in vivo, že GS 7340 může být podáván orálně, minimalizuje expozici systému PMPA a velmi zvyšuje intracelulární koncentraci PMPA v buňkách primárně odpovědných za replikaci HIV.
Tabulka 6
Expozice PMPA v PBMC a plasmě po orálním podání prekursoru PMPA psům
GS# Moieta (část molekuly) PMPA AUC plasmě v PMPA PBMC AUC v Prekursor v plasmě Poměr expozice PBMC/ plasma
Prů měr Směr. Odch. N Prům ěr Směr. Odch. N
GS-7114 Mono-Ala-Et-A 5,8 0,9 2 706 331 5 ANO 122
GS-7115 Mono-Ala-Et-B 6,6 1,5 2 284 94 5 ANO 43
GS-7340-2 Mono-Ala-iPr-A 5,0 1,1 2 805 222 5 ANO 161
GS-7339 Mono-Ala-iPr-A 6,4 1,3 2 200 57 5 ANO 31
GS-7119 Mono-Gly-Et-A 6,11 1,86 2 530 304 5 ANO 87
GS-7342 Mono-ABA-Et-A 4,6 1,2 2 1060 511 5 ANO 230
GS-7341 Mono-ABA-Et-B 5,8 1,4 2 199 86 5 ANO 34
·· ·· » · · » · · · ·
Příklad 11
Biodistribuce GS-7340
Jako součást preklinické charakterizace GS-7340 byla stanovena jeho bio-distribuce ve psech. Distribuce GS-7340 (isopropyl alaninyl monoamidát, fenylmonoester tenofoviru) do tkání byla zjišťována po orálním podání psům plemene beagle. Dvěma samcům byl orálně nadávkován 14C=GS-7340 (8,85 mg-ekvivalentu PMPA/kg, 33,2 pCi/kg; označen byl uhlík 8 v alaninu) ve vodném roztoku (50 mM kyseliny citrónové, pH 2,2). Po dobu 24 hodin byly odebírány plasma a mononukleární buňky periferní krve (PBMC). Moč a výkaly byly shromažďovány po dobu 24 hodin. Po 24 hodinách po podání dávky byla obě zvířata utracena a tkáň odebrána na analýzu. Celková radioaktivita ve tkáních byla stanovena oxidací a měřením pomocí kapalného scintilátoru.
Biodistribuce PMPA po 24 hodinách po jediné orální dávce radioaktivně značeného GS 7340 je uvedena v Tabulce 4 spolu s údaji z předchozí studie sTDF (GS-4331). V případě TDF je koncentrace prekursoru léčiva v plasmě pod hranicí detekčního testu a hlavní sloučeninou zjištěnou v plasmě je vlastní léčivo. Hladiny PMPA v lymfatických tkáních, kostní dřeni, a kosterním svalu vzrostly po podání GS-7340 lOnásobně.
Akumulace v lymfatických tkáních jev souladu s údaji pozorovanými při analýzách PBMC, protože tyto tkáně se skládají hlavně z lymfocytů. Podobně, akumulace v kostní dřeni je pravděpodobně důsledkem vysokého procenta lymfocytů (70%) v této tkáni.
Tabulka 7
Distribuce radioaktivně značeného GS-7340 v exkrementech a tkáni psů (střední hodnota,
N=2) po orálním podání dávky 10 mg-ekvivalentu PMPA/kg
Tkáň/Kapalina GS-4331 GS-7340 Poměr tkáňové konc. GS-7340 k GS-4331
% Dávky Konc. (pg- ekv./g) % Dávky Konc. (pg- ekv./g)
Játra 12,40 38,30 16,45 52,94 1,4
Ledviny 4,58 87,90 3,78 80,21 0,9
Plíce 0,03 0,53 0,34 4,33 8,2
Iliakální lymfatické uzliny 0,00 0,51 0,01 5,42 10,6
Axilární lymfatické uzliny 0,00 0,37 0,01 5,54 14,8
Tříselní lymfatické uzliny 0,00 0,28 0,00 4,12 15,0
Mezenterické lymfatické uzliny 0,00 1,20 0,04 6,88 5,7
Štítná žláza 0,00 0,30 0,00 4,78 15,8
Hypofýza 0,00 0,23 0,00 1,80 7,8
·· ·· 9 · · • · · · · ·· ···· • · · · 99 99
Slinná žláza (L+P) 0,00 0,45 0,03 5,54 12,3
Nadledvinka 0,00 1,90 0,00 3,47 1,8
Slezina 0,00 0,63 0,17 8,13 12,8
Pankreas 0,00 0,57 0,01 3,51 6,2
Prostata 0,00 0,23 0,00 2,14 9,1
Varlata (L+P) 0,02 1,95 0,02 2,01 1,0
Kosterní sval 0,00 0,11 0,01 1,12 10,1
Srdce 0.03 0,46 0,15 1,97 4,3
Stehenní kost 0,00 0,08 0,00 0,28 3,5
Kostní dřeň 0,00 0,20 0,00 2,05 10,2
Kůže 0,00 0,13 0,00 0,95 7,2
Břišní tuk 0,00 0,16 0,00 0,90 5,8
Oko (L+P) 0,00 0,06 0,00 0,23 3,7
Mozek 0,00 <LOD 0,00 <LOD n.d.
Mozkomíšní kapalina 0,00 <LOD 0,00 0,00 n.d.
Mícha 0,00 <LOD 0,00 0,04 n.d.
Žaludek 0,11 1,92 0,26 2,68 1,4
Jejunum 1,34 3,01 0,79 4,16 1,4
Dvanácterník 0,49 4,96 0,44 8,77 1,8
Ileum 0,01 0,50 0,16 4,61 9,2
Tlusté střevo 1,63 5,97 2,65 47,20 7,9
Žlučník 0,00 3,58 0,04 25,02 7,0
Žluč 0,00 9,63 0,22 40,48 4,2
Výkaly 40,96 n.d. 0,19 n.d. n.a.
Celkový obsah zažívacího traktu 5,61 n.d. 21,64 n.d. n.a.
Moč 23,72 n.d. 14,73 n.d. n.a.
Plasma po 24 h 0,00 0,20 0,00 0,20 1,0
Plasma po 0,25 h n.a. 3,68 n.a 3,48 0,9
PBMC* 0,00 n.d. 0,00 63,20 n.d.
Plná krev 0,00 0,85 0,16 0,20 0,2
Celkové znovuzískání 81,10 68,96
* Vypočteno při použití typického znovuzískání (recovery) celkově 15 x 106 buněk a středního objemu PBMC 0,2 pikolitru/buňku
n.s. = žádný vzorek (no sample), n.a. = nelze aplikovat (not applicable), n.d. = nebylo stanoveno (not determined).

Claims (33)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY ·· ·· • · « • · ··· • · · • · · ·· ·· ^72^9 ~M3>
    ·· ·· ·· ···· • · · · · · · • · ·♦ · · · ·· ··
    99 99
    1. Způsob screeningu pro identifikaci prekursoru léčiva na bázi methoxyfosfonátového analogu nukleotidu vykazujícího zvýšenou aktivitu v cílové tkáni, vyznačený tím, že zahrnuje (a) přípravu nejméně jednoho z řečných prekursorů léčiv;
    (b) výběr nejméně jedné terapeutické cílové tkáně a nejméně jedné nečilo vé tkáně;
    (c) podání prekursoru léčiva do cílové tkáně a do zmíněné nejméně jedné necílové tkáně; a (d) stanovení relativní aktivity vyvolané prekursorem léčiva ve tkáních dle kroku (c).
  2. 2. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že aktivita je protivirová aktivita nebo protinádorová aktivita.
  3. 3. Způsob podle nároku 2, vyznačený tím, že aktivita je protivirová aktivita.
  4. 4. Způsob podle nároku 3, vyznačený tím, že aktivita je proti-HIV nebo proti-HBV aktivita.
  5. 5. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že prekursor léčiva je prekursorem léčiva PMPA (9-2-(fosfonomethoxypropyl)adeninu) nebo léčiva PMEA (9-2(fosfonomethoxyethyl)adeninu).
  6. 6. Způsob podle nároku 5, vyznačený tím, že prekursor léčiva je fosfonoamidát, fosfonoester nebo směs fosfonoamidát/fosfonoester.
  7. 7. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že amidát je amidát aminokyseliny.
  8. 8. Způsob podle nároku 6, vyznačený tím, že ester je arylester.
  9. 9. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že dále zahrnuje výběr prekursoru léčiva, který má relativní aktivitu v cílové tkáni o více než 1 Okřát větší než v tkáni necílové.
    44 4444
    4 4 4
    4 4 4
    4 4 4
    4 4 4 4
    44 44
    4* 44 44 ··
    4*4 4 4 4 4
    4 4444 4 4 44
    4 44 444 44 44 • 44 4 4 44 4
    44 44 44 4*
  10. 10. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílová a necílová tkáň jsou ve zvířeti, prekursor léčiva je podáván zvířeti a relativní aktivita je stanovena analýzou zvířecích tkání po podání prekursoru léčiva.
  11. 11. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že aktivita v cílové a necílové tkáni je stanovena stanovením množství nejméně jednoho metabolitu prekursoru léčiva v tkáních.
  12. 12. Způsob podle nároku 11, vyznačený tím, že metabolitem je vlastní léčivo.
  13. 13. Způsob podle nároku 12, vyznačený tím, že metabolitem je difosfát vlastního léčiva.
  14. 14. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílovou tkání je virově infikovaná tkáň a nečilo vou tkání je stejná tkáň, která není virově infikovaná.
  15. 15. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílovou tkání je lymfoidní tkáň a aktivitou je proti-HIV aktivita.
  16. 16. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílovou tkání jsou játra a aktivitou je protiHBV aktivita.
  17. 17. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílová tkáň je hematologická a aktivitou je protinádorová aktivita.
  18. 18. Způsob podle nároku 1, vyznačený tím, že cílová tkáň je maligní a tkáň necílová je stejná tkáň, ale nemaligní.
  19. 19. Sloučenina se strukturou (1) • ·· · (1) kde Ráje H nebo methyl, a její chirálně obohacené směsi, soli, jejich volné baze a jejich solváty.
  20. 20. Sloučenina se strukturou (2) (2) a její obohacené diastereomery, soli, volné baze a solváty.
  21. 21. Diastereomerně obohacená sloučenina se strukturou (3)
    Β—E
    -ŘxuilR1 i2
    R2 (3) • · • fcfc · • fc fc· ·· fcfc • · · • · ·*· • · · · · • · · · ·· ·· • fc která byla v podstatě prostá diastereoisomeru (4)
    B—&
    (4)
    Ř2 kde
    R1 je oxyester, který je hydrolyzovatelný in vivo, nebo hydroxyl;
    B je heterocyklická baze;
    R je hydroxyl, nebo zbytek aminokyseliny vázaný na atom P přes aminoskupinu této aminokyseliny a mající každý karboxylový substituent této aminokyseliny případně esterifikovaný, ale ne oba R1 a R2 jsou zároveň hydroxyly;
    E je -(CH2)2-, -CH(CH3)CH2-, -CH(CH2F)CH2-, -CH(CH2OH)CH2-,
    -CH(CH=CH2)CH2-, -CH(C=CH)CH2-, -CH(CH2N3)CH2-,
    -CH(R6)OCH(R6)-, -CH(R9)CH2O- nebo -CH(R8)O-, kde vazba na pravé straně je spojena s heterocyklickou bází;
    přerušovaná čára značí případnou dvojnou vazbu;
    R4 a R5 jsou nezávisle vodík, hydroxy, halogen, amino nebo substituent mající 1 - 5 uhlíkových atomů vybraný ze skupiny acyloxy, alkyloxy, alkylthio, alkylamino a dialkylamino;
    R6 a R6 jsou nezávisle H, alkyl Ci-Cé, hydroxyalkyl Ci-Cď, nebo alkanoyl C2-C7;
    R7 je nezávisle H, alkyl Cj-Có, nebo jsou brány dohromady za tvorby -O- nebo
    -CH2-;
    R8 je H, alkyl Cj-Có, hydroxylalkyl Ci-Cé nebo haloalkyl Ci-Có; a
    R9 je H, hydroxymethyl, nebo acyloxymethyl; a jejich soli, volné baze, a solváty.
  22. 22. Diastereomerně obohacená sloučenina se strukturou (5a) která je v podstatě prostá diastereomeru (5b) • ti ♦<
    • titi · • ti tititi · • titi ti ti · • ti ti ti ti • ti titi (5a) ti ti • ti ti t titi (5b) kde
    R5 je methyl nebo vodík;
    R6 je nezávisle H, alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl nebo arylakyl, nebo R6 je nezávisle alkyl, alkenyl, alkynyl, aryl nebo arylalkyl, který je substituován 1 až 3 substituenty vybranými z alkylamino, alkylaminoalkyl, dialkylaminoalkyl, dialkylamino, hydroxyl, oxo, halo, amino, alkylthio, alkoxy, alkoxyalkyl, aryloxy, aryloxyalkyl, arylalkoxy, arylalkoxyalkyl, haloalkyl, nitro, nitroalkyl, azido, azidoalkyl, alkylacyl, alkylacylalkyl, karboxyl, nebo alkylacylamino skupin;
    R7 je boční řetězec jakékoliv přirozeně se vyskytující nebo farmaceuticky přijatelné aminokyseliny, a který, jestliže boční řetězec obsahuje karboxyl, má karboxylovou skupinu případně esterifikovanou alkylovou nebo arylovou skupinou;
    R11 je amino, alkylamino, oxo, nebo dialkylamino; a ·· ··»· : :····;: *.
    » «« · · · »· »·· · ;
    ·..··.·· ·..··.··
    R je amino nebo H;
    a její soli, tautomery, volné baze a solváty.
  23. 23. Sloučenina se strukturou (6) a její soli a solváty.
  24. 24. Sloučenina se strukturou (7) (Ό fcfcfc · · · · · · fc « · fcfcfc fcfcfc· fcfcfc • fcfc fcfcfc fcfc fcfcfc · · • fcfcfc fc··· · fcfcfc fcfc fcfc fcfc fcfc fcfc ··
  25. 25. Kompozice, vyznačená tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu podle kteréhokoliv z nároků 19 až 24 a farmaceuticky účinný excipient.
  26. 26. Kompozice podle nároku 25, vyznačená tím, že excipient je gel.
  27. 27. Kompozice podle nároku 25, vyznačená tím, že je ve formě vhodné pro topické podávání.
  28. 28. Použití sloučenin podle nároků 19 až 24 k přípravě farmaceutických přípravků obsahujících tyto sloučeniny v terapeuticky nebo profylakticky protivirově účinném množství k dosažení proti virového terapeutického nebo profylaktického účinku u subjektu, který takovou terapii nebo profylaxi potřebuje.
  29. 29. Způsob použití alkoxidu hořečnatého, vyznačený tím, že zahrnuje reakci 9-(2hydroxypropyljadeninu (HPA) nebo 9-(2-hydroxyethyl)adeninu (HEA), alkoxidu hořečnatého a chráněného 77-toluensulfonyloxymethylfosfonátu.
  30. 30. Způsob podle nároku 29, vyznačený tím, že zahrnuje získání PMPA (-9-(2(fosfonomethoxypropyl)adeninu) nebo PMEA (9-(2-(fosfonomethoxyethyl)adeninu).
  31. 31. Způsob podle nároku 29, vyznačený tím, že fosfonát 7?toluensulfonyloxymethylfosfonátu je chráněný ethyl esterem.
  32. 32. Způsob podle nároku 29, vyznačený tím, že alkoxidem je alkoxid Ci-Céfcfc fcfcfcfc
  33. 33. Způsob podle nároku 32, vyznačený tím, že alkoxidem je t-butyl- nebo isopropyloxid.
CZ2003-413A 2000-07-21 2001-07-20 Prekurzory léčiv na bázi fosfonátových analogů nukleotidů a způsoby jejich výběru a přípravy CZ304886B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22002100P 2000-07-21 2000-07-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ2003413A3 true CZ2003413A3 (cs) 2003-12-17
CZ304886B6 CZ304886B6 (cs) 2015-01-07

Family

ID=22821718

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2003-413A CZ304886B6 (cs) 2000-07-21 2001-07-20 Prekurzory léčiv na bázi fosfonátových analogů nukleotidů a způsoby jejich výběru a přípravy
CZ2013-310A CZ304734B6 (cs) 2000-07-21 2001-07-20 Způsob přípravy 9-[2-(fosfonomethoxy)propyl]adeninu a 9-[2-(fosfonomethoxy)ethyl]adeninu

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2013-310A CZ304734B6 (cs) 2000-07-21 2001-07-20 Způsob přípravy 9-[2-(fosfonomethoxy)propyl]adeninu a 9-[2-(fosfonomethoxy)ethyl]adeninu

Country Status (37)

Country Link
US (10) US20040018150A1 (cs)
EP (3) EP2682397B1 (cs)
JP (4) JP4651264B2 (cs)
KR (2) KR100749160B1 (cs)
CN (2) CN1291994C (cs)
AP (1) AP1466A (cs)
AU (3) AU8294101A (cs)
BE (1) BE2016C018I2 (cs)
BG (1) BG66037B1 (cs)
BR (1) BRPI0112646B8 (cs)
CA (3) CA2416757C (cs)
CY (2) CY2016008I1 (cs)
CZ (2) CZ304886B6 (cs)
DK (2) DK2682397T3 (cs)
EA (1) EA004926B1 (cs)
EE (1) EE05366B1 (cs)
ES (2) ES2627903T3 (cs)
FR (1) FR16C0013I2 (cs)
HK (2) HK1054238A1 (cs)
HR (2) HRP20160074B1 (cs)
HU (2) HU230960B1 (cs)
IL (1) IL153658A0 (cs)
IS (1) IS2985B (cs)
LT (2) LT2682397T (cs)
LU (1) LU93029I2 (cs)
MX (1) MXPA03000587A (cs)
NL (1) NL300803I2 (cs)
NO (6) NO336718B1 (cs)
NZ (3) NZ523438A (cs)
OA (1) OA12393A (cs)
PL (1) PL213214B1 (cs)
PT (2) PT1301519E (cs)
SI (2) SI2682397T1 (cs)
TR (1) TR200300055T2 (cs)
UA (1) UA75889C2 (cs)
WO (1) WO2002008241A2 (cs)
ZA (1) ZA200210271B (cs)

Families Citing this family (219)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4651264B2 (ja) * 2000-07-21 2011-03-16 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ホスホネートヌクレオチドアナログのプロドラッグならびにこれを選択および作製するための方法。
US7388002B2 (en) * 2001-11-14 2008-06-17 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Nucleosides, preparation thereof and use as inhibitors of RNA viral polymerases
PL374525A1 (en) * 2001-11-14 2005-10-31 Biocryst Pharmaceuticals, Inc. Nucleosides preparation thereof and use as inhibitors of rna viral polymerases
TWI332956B (en) * 2002-04-26 2010-11-11 Gilead Sciences Inc Cellular accumulation of phosphonate analogs of hiv protease inhibitor compounds
US20050239054A1 (en) * 2002-04-26 2005-10-27 Arimilli Murty N Method and compositions for identifying anti-HIV therapeutic compounds
JP4476811B2 (ja) 2002-05-13 2010-06-09 メタバシス・セラピューティクス・インコーポレイテッド Ｐｍｅａおよびそのアナログの新規ホスホン酸系プロドラッグ
US20040224917A1 (en) * 2003-01-14 2004-11-11 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for combination antiviral therapy
US20050261237A1 (en) * 2003-04-25 2005-11-24 Boojamra Constantine G Nucleoside phosphonate analogs
MXPA05011296A (es) * 2003-04-25 2006-01-24 Gilead Sciences Inc Conjugados de fosfonato inhibidores de la cinasa.
CN101410120A (zh) * 2003-04-25 2009-04-15 吉里德科学公司 抗炎的膦酸酯化合物
US7300924B2 (en) * 2003-04-25 2007-11-27 Gilead Sciences, Inc. Anti-infective phosphonate analogs
US20090247488A1 (en) * 2003-04-25 2009-10-01 Carina Cannizzaro Anti-inflammatory phosphonate compounds
ATE490788T1 (de) 2003-04-25 2010-12-15 Gilead Sciences Inc Antivirale phosphonate analoge
US7432261B2 (en) * 2003-04-25 2008-10-07 Gilead Sciences, Inc. Anti-inflammatory phosphonate compounds
WO2005002626A2 (en) * 2003-04-25 2005-01-13 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic phosphonate compounds
US7407965B2 (en) * 2003-04-25 2008-08-05 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs for treating metabolic diseases
US7427636B2 (en) * 2003-04-25 2008-09-23 Gilead Sciences, Inc. Inosine monophosphate dehydrogenase inhibitory phosphonate compounds
US7470724B2 (en) * 2003-04-25 2008-12-30 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate compounds having immuno-modulatory activity
US7452901B2 (en) 2003-04-25 2008-11-18 Gilead Sciences, Inc. Anti-cancer phosphonate analogs
JP2007508843A (ja) * 2003-10-24 2007-04-12 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 治療用化合物の同定のための方法および組成物
WO2005044308A1 (en) 2003-10-24 2005-05-19 Gilead Sciences, Inc. Phosphonate analogs of antimetabolites
WO2005044279A1 (en) * 2003-10-24 2005-05-19 Gilead Sciences, Inc. Purine nucleoside phosphonate conjugates
US20080287471A1 (en) 2003-12-22 2008-11-20 Maria Fardis 4'-Substituted Carbovir And Abacavir-Derivatives As Well As Related Compounds With Hiv And Hcv Antiviral Activity
BRPI0418031A (pt) * 2003-12-22 2007-04-17 Gilead Sciences Inc inibidores de quinase fosfonato-substituìdos
US20050153990A1 (en) * 2003-12-22 2005-07-14 Watkins William J. Phosphonate substituted kinase inhibitors
CN1950383B (zh) * 2003-12-30 2010-06-09 吉里德科学公司 用于治疗病毒性疾病的膦酸酯、单膦酸酰胺化物、双膦酸酰胺化物
US20050239753A1 (en) * 2004-01-21 2005-10-27 Gilead Sciences, Inc. Methods of inhibition of MMTV-like viruses
US8432394B1 (en) 2004-05-14 2013-04-30 Nvidia Corporation Method and system for implementing clamped z value interpolation in a raster stage of a graphics pipeline
US8411105B1 (en) 2004-05-14 2013-04-02 Nvidia Corporation Method and system for computing pixel parameters
US7079156B1 (en) 2004-05-14 2006-07-18 Nvidia Corporation Method and system for implementing multiple high precision and low precision interpolators for a graphics pipeline
US8416242B1 (en) 2004-05-14 2013-04-09 Nvidia Corporation Method and system for interpolating level-of-detail in graphics processors
KR20070029196A (ko) 2004-06-08 2007-03-13 메타베이시스 테라퓨틱스, 인크. 고리 에스테르의 루이스 산 매개 합성
ES2720618T3 (es) * 2004-07-27 2019-07-23 Gilead Sciences Inc Análogos de fosfonato de compuestos de inhibidores de VIH
US20070003608A1 (en) * 2005-04-08 2007-01-04 Almond Merrick R Compounds, compositions and methods for the treatment of viral infections and other medical disorders
JP2008535862A (ja) 2005-04-08 2008-09-04 キメリクス，インコーポレイテッド ポックスウイルス感染の治療のための化合物、組成物および方法
CN100359315C (zh) * 2005-05-26 2008-01-02 林维宣 兽药残留能力验证样品及制备方法
TWI375560B (en) 2005-06-13 2012-11-01 Gilead Sciences Inc Composition comprising dry granulated emtricitabine and tenofovir df and method for making the same
TWI471145B (zh) 2005-06-13 2015-02-01 Bristol Myers Squibb & Gilead Sciences Llc 單一式藥學劑量型
US8076303B2 (en) 2005-12-13 2011-12-13 Spring Bank Pharmaceuticals, Inc. Nucleotide and oligonucleotide prodrugs
CN100396689C (zh) * 2006-03-07 2008-06-25 中国医学科学院医药生物技术研究所 一组具有抑制hiv-1/hbv病毒复制活性的替诺福韦单酯化合物
CN101442994B (zh) 2006-05-16 2013-03-06 吉里德科学公司 用于治疗恶性血液病的方法和组合物
ES2532502T3 (es) 2006-07-12 2015-03-27 Mylan Laboratories Limited Proceso para la preparación de tenofovir
US20080261913A1 (en) 2006-12-28 2008-10-23 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of liver disorders
US7964580B2 (en) 2007-03-30 2011-06-21 Pharmasset, Inc. Nucleoside phosphoramidate prodrugs
US8105489B2 (en) * 2007-06-26 2012-01-31 The University Of Wyoming Research Corporation Treatment and prevention systems for acid mine drainage and halogenated contaminants
US8441497B1 (en) * 2007-08-07 2013-05-14 Nvidia Corporation Interpolation of vertex attributes in a graphics processor
WO2009094190A2 (en) * 2008-01-25 2009-07-30 Chimerix, Inc. Methods of treating viral infections
TWI444384B (zh) 2008-02-20 2014-07-11 Gilead Sciences Inc 核苷酸類似物及其在治療惡性腫瘤上的用途
EP2937356A1 (en) 2008-04-25 2015-10-28 Cipla Limited Crystalline form of tenofovir disoproxil and a process for its preparation
US8173621B2 (en) 2008-06-11 2012-05-08 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside cyclicphosphates
BRPI0913677A2 (pt) * 2008-07-02 2015-12-15 Idenix Pharmaceuticals Inc composto, metabólito purificado, método para tratar um hospedeiro infectado com um vírus flaviviridade, composição farmacêutica, método para preparar o composto purificado, e, processo para preparar o composto
UA103329C2 (ru) 2008-07-08 2013-10-10 Гилиад Сайенсиз, Инк. Соли соединений-ингибиторов вич
NZ593648A (en) 2008-12-23 2013-09-27 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
CL2009002206A1 (es) * 2008-12-23 2011-08-26 Gilead Pharmasset Llc Compuestos derivados de pirrolo -(2-3-d]-pirimidin-7(6h)-tetrahidrofuran-2-il fosfonamidato, composicion farmaceutica; y su uso en el tratamiento de enfermedades virales.
EA201100851A1 (ru) 2008-12-23 2012-04-30 Фармассет, Инк. Аналоги нуклеозидов
TWI576352B (zh) 2009-05-20 2017-04-01 基利法瑪席特有限責任公司 核苷磷醯胺
US8618076B2 (en) 2009-05-20 2013-12-31 Gilead Pharmasset Llc Nucleoside phosphoramidates
WO2011011519A1 (en) 2009-07-21 2011-01-27 Chimerix, Inc. Compounds, compositions and methods for treating ocular conditions
CA2773773C (en) 2009-09-21 2019-04-23 Gilead Sciences, Inc. Processes and intermediates for the preparation of 1'-substituted carba-nucleoside analogs
DK2534150T3 (en) 2010-02-12 2017-06-12 Chimerix Inc METHODS OF TREATING VIRUS INFECTION
BR112012024884A2 (pt) 2010-03-31 2016-10-18 Gilead Pharmasset Llc síntese estereosseletiva de ativos contendo fósforo
US8563530B2 (en) 2010-03-31 2013-10-22 Gilead Pharmassel LLC Purine nucleoside phosphoramidate
MX2012011222A (es) 2010-04-01 2013-01-18 Centre Nat Rech Scient Compuestos y composiciones farmaceuticas para el tratamiento de infecciones virales.
US9278135B2 (en) 2010-04-26 2016-03-08 Chimerix Inc. Methods of treating retroviral infections and related dosage regimes
BR112013001267A2 (pt) 2010-07-19 2016-05-17 Gilead Sciences Inc métodos para a preparação de pró-fármacos de fosforamidato diasteromericamente puro
SG186830A1 (en) 2010-07-22 2013-02-28 Gilead Sciences Inc Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections
AR084044A1 (es) 2010-11-30 2013-04-17 Pharmasset Inc Compuestos 2’-espiro-nucleosidos
NZ611438A (en) 2010-12-10 2015-06-26 Sigmapharm Lab Llc Highly stable compositions of orally active nucleotide analogues or orally active nucleotide analogue prodrugs
ZA201103820B (en) 2010-12-13 2012-01-25 Laurus Labs Private Ltd Process for the preparation of tenofovir
WO2012154321A1 (en) 2011-03-31 2012-11-15 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2012154698A2 (en) * 2011-05-06 2012-11-15 Mckenna Charles E Method to improve antiviral activity of nucleotide analogue drugs
ES2629913T3 (es) * 2011-05-19 2017-08-16 Gilead Sciences, Inc. Procesos e intermediarios para la preparación de agentes anti-VIH
AU2014271320B2 (en) * 2011-08-16 2017-02-23 Gilead Sciences, Inc. Tenofovir alafenamide hemifumarate
AU2012296622C1 (en) * 2011-08-16 2017-02-16 Gilead Sciences, Inc. Tenofovir alafenamide hemifumarate
CN104244945B (zh) 2011-09-16 2016-08-31 吉利德制药有限责任公司 用于治疗hcv的方法
AU2014215976B2 (en) * 2011-10-07 2016-06-30 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
AU2016228317B2 (en) * 2011-10-07 2018-07-19 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
US8664386B2 (en) * 2011-10-07 2014-03-04 Gilead Sciences, Inc. Methods for preparing anti-viral nucleotide analogs
US8889159B2 (en) 2011-11-29 2014-11-18 Gilead Pharmasset Llc Compositions and methods for treating hepatitis C virus
WO2013095684A1 (en) 2011-12-22 2013-06-27 Geron Corporation Guanine analogs as telomerase substrates and telomere length affectors
MD20140091A2 (ro) 2012-02-03 2015-01-31 Gilead Sciences, Inc. Terapie combinată cuprinzând hemifumarat tenofovir alafenamidă şi cobicistat pentru utilizare în tratamentul infecţiilor virale
WO2013115916A1 (en) 2012-02-03 2013-08-08 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy comprising gs-7340 and cobicistat for use in the treatment of viral infections
CN107312039B (zh) * 2012-08-30 2019-06-25 江苏豪森药业集团有限公司 一种替诺福韦前药的制备方法
GB201215696D0 (en) * 2012-09-03 2012-10-17 Ithemba Pharmaceuticals Pty Ltd A process for the preparation of (R)-9-[2-(Phosphonometh-Oxy)propyl]adenine (PMPA)
AU2013340559B2 (en) * 2012-10-29 2018-03-15 Cipla Limited Antiviral phosphonate analogues and process for preparation thereof
CN102899327B (zh) * 2012-11-06 2014-06-11 清华大学深圳研究生院 一种抗病毒的小核酸及其温度敏感型凝胶制剂与应用
JP6297582B2 (ja) * 2012-11-16 2018-03-20 メルク・シャープ・アンド・ドーム・コーポレーションＭｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ＆ Ｄｏｈｍｅ Ｃｏｒｐ． ヒトホスファチジルイノシトール３−キナーゼデルタのプリン阻害剤
CN103848869B (zh) * 2012-12-04 2016-12-21 上海医药工业研究院 制备替诺福韦的方法
CN103848868B (zh) * 2012-12-04 2017-04-12 蚌埠丰原涂山制药有限公司 制备替诺福韦的方法
DK2950786T3 (da) 2013-01-31 2020-02-17 Gilead Pharmasset Llc Kombinationsformulering af to antivirale forbindelser
CN104072539B (zh) * 2013-03-25 2017-03-29 安徽贝克联合制药有限公司 替诺福韦双(4‑乙酰氨基苯酚氧基)酯及其制备方法和其应用
WO2014187314A1 (zh) * 2013-05-21 2014-11-27 成都先导药物开发有限公司 一种药物靶标捕获方法
WO2014195724A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Cipla Limited An efficient process for separation of diastereomers of 9-[(r)-2-[[(r,s)-[[(s)-1-(isopropoxycarbonyl)ethyl]amino]-phenoxyphosphinyl] methoxy]propyl]adenine
ES2792503T3 (es) 2013-08-27 2020-11-11 Gilead Pharmasset Llc Formulación combinada de dos compuestos antivirales
WO2015040640A2 (en) * 2013-09-20 2015-03-26 Laurus Labs Private Limited An improved process for the preparation of tenofovir alafenamide or pharmaceutically acceptable salts thereof
EP2860185A1 (en) 2013-10-09 2015-04-15 Zentiva, k.s. An improved process for the preparation of Tenofovir disoproxil and pharmaceutically acceptable salts thereof
IN2013CH05455A (cs) * 2013-11-27 2015-08-07 Laurus Labs Private Ltd
IN2014MU00118A (cs) * 2014-01-14 2015-08-28 Mylan Lab Ltd
TWI660965B (zh) * 2014-01-15 2019-06-01 美商基利科學股份有限公司 泰諾福韋之固體形式
CN104804042B (zh) * 2014-01-24 2018-01-19 齐鲁制药有限公司 核苷酸膦酸酯类化合物、其药物组合物、制备方法及用途
US9463194B2 (en) 2014-02-05 2016-10-11 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating patients co-infected with HIV and tuberculosis
US10449210B2 (en) 2014-02-13 2019-10-22 Ligand Pharmaceuticals Inc. Prodrug compounds and their uses
CN105814068B (zh) * 2014-02-27 2017-08-04 四川海思科制药有限公司 一种取代的氨基磷酸酯类衍生物、其制备方法及其应用
CN105001262B (zh) * 2014-04-18 2017-09-01 四川海思科制药有限公司 芳基取代的磷酰胺类衍生物及其在医学上的应用
CN105531281B (zh) * 2014-04-21 2017-12-15 四川海思科制药有限公司 一种核苷类似物及其中间体的制备方法
CN105085571A (zh) * 2014-05-20 2015-11-25 四川海思科制药有限公司 替诺福韦艾拉酚胺复合物及其制备方法和用途
CN105518012B (zh) * 2014-06-25 2018-03-02 四川海思科制药有限公司 一种取代的氨基酸硫酯类化合物、其组合物及应用
CN106687118A (zh) 2014-07-02 2017-05-17 配体药物公司 前药化合物及其用途
KR101703258B1 (ko) 2014-12-30 2017-02-06 한미정밀화학주식회사 고순도의 (r)-9-[2-(포스포노메톡시)프로필]아데닌의 제조방법
KR101703257B1 (ko) 2014-09-30 2017-02-06 한미정밀화학주식회사 고순도의 (r)-9-[2-(포스포노메톡시)프로필]아데닌의 제조방법
CN106687467A (zh) * 2014-09-30 2017-05-17 韩美精密化学株式会社 高纯度（r）‑9‑[2‑（磷酰甲氧基）丙基]腺嘌呤的制备方法
EP3203995A4 (en) 2014-10-09 2019-05-15 Board of Regents of the University of Nebraska COMPOSITIONS AND METHODS FOR DELIVERY OF THERAPEUTIC AGENTS
TWI687432B (zh) 2014-10-29 2020-03-11 美商基利科學股份有限公司 絲狀病毒科病毒感染之治療
CN105646584B (zh) * 2014-11-12 2018-09-28 四川海思科制药有限公司 替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐晶型及其制备方法和用途
CN104558036A (zh) * 2014-12-11 2015-04-29 杭州和泽医药科技有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺半反丁烯二酸盐晶型及其制备方法
EP3240793A1 (en) 2015-01-03 2017-11-08 Mylan Laboratories Ltd. Processes for the preparation of amorphous tenofovir alafenamide hemifumarate and a premix thereof
US20180148774A1 (en) * 2015-05-16 2018-05-31 Godx, Inc Point of need testing device and methods of use thereof
CN106188139B (zh) 2015-05-29 2020-02-18 江苏天士力帝益药业有限公司 替诺福韦单苄酯磷酸酰胺前药、其制备方法及应用
CZ2015384A3 (cs) 2015-06-05 2016-12-14 Zentiva, K.S. Pevné formy Tenofovir alafenamidu
AU2016277859B2 (en) * 2015-06-17 2019-08-01 Gilead Sciences, Inc. Co-crystals, salts and solid forms of tenofovir alafenamide
SI4070787T1 (sl) 2015-06-30 2023-07-31 Gilead Sciences, Inc. Farmacevtske formulacije
TWI639598B (zh) 2015-08-10 2018-11-01 美商默沙東藥廠 抗病毒β－胺基酸酯磷酸二醯胺化合物
TWI620754B (zh) * 2015-08-26 2018-04-11 Method for preparing amino phosphate derivative and preparation method thereof
TWI616452B (zh) * 2015-08-26 2018-03-01 Preparation method of nucleoside analog and intermediate thereof
TWI616453B (zh) * 2015-08-27 2018-03-01 Substituted amino acid thioester compounds, compositions and uses thereof
WO2017037608A1 (en) * 2015-08-28 2017-03-09 Laurus Labs Private Limited Solid forms of tenofovir alafenamide and salts thereof, processes for its preparation and pharmaceutical compositions thereof
LT3785717T (lt) 2015-09-16 2022-04-11 Gilead Sciences, Inc. Coronaviridae infekcijų gydymo būdai
TWI737647B (zh) 2015-11-09 2021-09-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療人類免疫缺乏病毒之治療組合物
CN106800573B (zh) * 2015-11-25 2020-03-10 四川海思科制药有限公司 一种核苷酸膦酸酯一水合物及其制备方法和在医药上的应用
US10745428B2 (en) 2015-12-10 2020-08-18 Idenix Pharmaceuticals Llc Antiviral phosphodiamide prodrugs of tenofovir
CN106866737B (zh) * 2015-12-11 2020-11-20 南京圣和药物研发有限公司 膦酸衍生物及其应用
EP3390413B1 (en) 2015-12-15 2020-08-19 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral oxime phosphoramide compounds
WO2017118928A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Lupin Limited Process for the separation of diastereomers of tenofovir alafenamide
ES2806604T3 (es) 2016-02-02 2021-02-18 Sandoz Ag Formas cristalinas de monofumarato de tenofovir alafenamida
CN107709288A (zh) * 2016-02-03 2018-02-16 四川海思科制药有限公司 一种磷酰胺衍生物及制备方法和用途
CN108350007B (zh) * 2016-03-01 2020-04-10 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 一种取代的腺嘌呤化合物及其药物组合物
CN107179355B (zh) * 2016-03-11 2021-08-10 广东东阳光药业有限公司 一种分离检测替诺福韦艾拉酚胺及其有关物质的方法
CZ2016156A3 (cs) 2016-03-17 2017-09-27 Zentiva, K.S. Způsob přípravy diastereomerně čistého Tenofoviru Alafenamidu nebo jeho solí
CN107226826A (zh) * 2016-03-25 2017-10-03 江苏奥赛康药业股份有限公司 替诺福韦艾拉酚胺富马酸盐化合物及其药物组合物
CN109476689B (zh) 2016-06-05 2021-09-03 上海诚妙医药科技有限公司 富马酸替诺福韦艾拉酚胺盐的新晶型、制备方法及其用途
CN107698621A (zh) * 2016-06-20 2018-02-16 杭州和泽医药科技有限公司 一种腺嘌呤衍生物的膦酸酯前药及其在医药上的应用
WO2017221189A1 (en) * 2016-06-22 2017-12-28 Laurus Labs Limited An improved process for the preparation of tenofovir alafenamide or pharmaceutically acceptable salts thereof
CN106317116A (zh) * 2016-08-19 2017-01-11 张红利 磷酰胺核苷类化合物及其药学上可接受的盐与应用、药物组合物
CA3021227C (en) 2016-08-19 2020-11-03 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds useful for the prophylactic or therapeutic treatment of an hiv virus infection
WO2018039157A1 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral prodrugs of tenofovir
CN106380484A (zh) * 2016-08-29 2017-02-08 杭州百诚医药科技股份有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺的新晶型及其制备方法
WO2018042331A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Glaxosmithkline Intellectual Property (No.2) Limited Combinations and uses and treatments thereof
WO2018051250A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Viiv Healthcare Company Combination comprising tenofovir alafenamide, bictegravir and 3tc
EP3532069A4 (en) 2016-10-26 2020-05-13 Merck Sharp & Dohme Corp. ARYL-AMIDE PHOSPHODIAMIDE COMPOUNDS ANTIVIRALS
CN106565785B (zh) * 2016-11-09 2019-11-12 周雨恬 一种具有抗hbv/hiv活性的核苷氨基磷酸酯类化合物及其盐和用途
CN108129514A (zh) * 2016-12-01 2018-06-08 北京美倍他药物研究有限公司 磷酸/膦酸衍生物的单一异构体及其医药用途
BR112019013017A2 (pt) 2016-12-22 2020-01-14 Idenix Pharmaceuticals Llc compostos de éster alifático antiviral de tenofovir ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, composição farmacêutica e uso dos mesmos
CA3046029A1 (en) * 2016-12-22 2018-06-28 Merck Sharp & Dohme Corp. Antiviral benzyl-amine phosphodiamide compounds
WO2018115046A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Sandoz Ag Crystalline solid forms of tenofovir alafenamide
AR110768A1 (es) 2017-01-31 2019-05-02 Gilead Sciences Inc Formas cristalinas de tenofovir alafenamida
WO2018153977A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Hexal Ag Stable composition of tenofovir alafenamide
RU2659388C1 (ru) 2017-02-28 2018-07-02 Васильевич Иващенко Александр Нуклеотиды, включающие N-[(S)-1-циклобутоксикарбонил]фосфорамидатный фрагмент, их аналоги и их применение
RU2647576C1 (ru) * 2017-02-28 2018-03-16 Васильевич Иващенко Александр Циклобутил (S)-2-[[[(R)-2-(6-аминопурин-9-ил)-1-метил-этокси]метил-фенокси-фосфорил]амино]-пропаноаты, способ их получения и применения
CN106866739B (zh) * 2017-03-10 2018-11-02 华东师范大学 一种(r)-1-(6-氨基-9h-嘌呤-9-基)2-苯酯的制备方法
US10682368B2 (en) 2017-03-14 2020-06-16 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating feline coronavirus infections
WO2018175325A1 (en) 2017-03-20 2018-09-27 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Hiv post-exposure prophylaxis
CN108794530A (zh) * 2017-04-26 2018-11-13 上海医药工业研究院 一种替诺福韦丙酚酰胺盐晶型及其制备方法和用途
AU2018262501B2 (en) 2017-05-01 2020-12-10 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of (S) 2 ethylbutyl 2 (((S) (((2R,3S,4R,5R) 5 (4 aminopyrrolo[2,1-f] [1,2,4]triazin-7-yl)-5-cyano-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2 yl)methoxy)(phenoxy) phosphoryl)amino)propanoate
KR102379965B1 (ko) * 2017-05-19 2022-03-29 주식회사 종근당 테노포비르의 효율적인 제조방법
CN107266499B (zh) * 2017-06-05 2019-07-02 珠海优润医药科技有限公司 一种抗病毒化合物及其制备方法
EP3641733A1 (en) 2017-06-30 2020-04-29 Cipla Limited Pharmaceutical compositions
CN111093627B (zh) 2017-07-11 2024-03-08 吉利德科学公司 用于治疗病毒感染的包含rna聚合酶抑制剂和环糊精的组合物
WO2019021319A1 (en) 2017-07-27 2019-01-31 Cipla Limited PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
PL3661937T3 (pl) 2017-08-01 2021-12-20 Gilead Sciences, Inc. Formy krystaliczne ((s)-((((2r,5r)-5-(6-amino-9h-puryn-9-ylo)-4-fluoro-2,5-dihydrofuran-2-ylo)oksy)metylo)(fenoksy)fosforylo)-l-alaninianu etylu (gs-9131) do leczenia zakażeń wirusowych
AR112412A1 (es) 2017-08-17 2019-10-23 Gilead Sciences Inc Formas de sal de colina de un inhibidor de la cápside del vih
CN107655987B (zh) * 2017-09-08 2020-11-03 厦门蔚扬药业有限公司 一种替诺福韦艾拉酚胺及其异构体的hplc检测方法
CN107522743A (zh) * 2017-09-30 2017-12-29 深圳科兴生物工程有限公司 一种半富马酸替诺福韦艾拉酚胺工业化连续生产方法
EP3700573A1 (en) 2017-10-24 2020-09-02 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating patients co-infected with a virus and tuberculosis
CN109942632B (zh) * 2017-12-20 2021-08-31 上海博志研新药物研究有限公司 替诺福韦艾拉酚胺中间体的制备方法
CN109942633B (zh) * 2017-12-20 2021-08-31 上海新礼泰药业有限公司 替诺福韦艾拉酚胺中间体的制备方法
WO2019130354A1 (en) 2017-12-30 2019-07-04 Cipla Limited Polymorphic forms of (9-[(r)-2-[[(s)-[[(s)-1- (isopropoxycarbonyl)ethyl]amino]phenoxy phosphinyl]methoxy]propyl] adenine and pharmaceutically acceptable salts thereof
US11970482B2 (en) 2018-01-09 2024-04-30 Ligand Pharmaceuticals Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof
WO2019139920A1 (en) * 2018-01-10 2019-07-18 Nucorion Pharmaceuticals, Inc. Phosphor(n)amidatacetal and phosph(on)atalcetal compounds
EP3737359A4 (en) * 2018-01-12 2021-11-03 Board of Regents of the University of Nebraska ANTIVIRAL PRODRUGS AND THEIR FORMULATIONS
KR102587510B1 (ko) 2018-02-15 2023-10-11 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 피리딘 유도체 및 hiv 감염을 치료하기 위한 그의 용도
CA3090280A1 (en) 2018-02-16 2019-08-22 Gilead Sciences, Inc. Methods and intermediates for preparing therapeutic compounds useful in the treatment of retroviridae viral infection
CN108101943B (zh) * 2018-02-28 2020-11-24 顾世海 一种替诺福韦前药或可药用盐及其在医药上的应用
CA3132832A1 (en) 2018-04-09 2019-10-17 Howard E. Gendelman Antiviral prodrugs and formulations thereof
JP2021530523A (ja) 2018-07-16 2021-11-11 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド Ｈｉｖの処置のためのカプシド阻害剤
WO2020018399A1 (en) 2018-07-19 2020-01-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Phosphinic amide prodrugs of tenofovir
CN112996517A (zh) 2018-09-19 2021-06-18 吉利德科学公司 预防hiv的整合酶抑制剂
WO2021011891A1 (en) 2019-07-18 2021-01-21 Gilead Sciences, Inc. Long-acting formulations of tenofovir alafenamide
CA3146263A1 (en) 2019-07-19 2021-01-28 Jose Gerardo Garcia Lerma Hiv pre-exposure prophylaxis
EP4017476A1 (en) 2019-08-19 2022-06-29 Gilead Sciences, Inc. Pharmaceutical formulations of tenofovir alafenamide
CA3152013A1 (en) * 2019-08-22 2021-02-25 Emory University Nucleoside prodrugs and uses related thereto
EP4031141A4 (en) * 2019-09-20 2023-10-18 Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company ANTIBODIES AGAINST TENOFOVIR AND ITS DERIVATIVES
CN114727999A (zh) 2019-11-26 2022-07-08 吉利德科学公司 用于预防hiv的衣壳抑制剂
TWI789695B (zh) 2020-01-27 2023-01-11 美商基利科學股份有限公司 治療sars cov-2感染之方法
WO2021165995A1 (en) 2020-02-20 2021-08-26 Cipla Limited Novel salts and/or co-crystals of tenofovir alafenamide
AU2021234308C1 (en) 2020-03-12 2024-02-22 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing 1'-cyano nucleosides
AU2021237718B2 (en) 2020-03-20 2023-09-21 Gilead Sciences, Inc. Prodrugs of 4'-C-substituted-2-halo-2'-deoxyadenosine nucleosides and methods of making and using the same
WO2021202669A2 (en) 2020-04-01 2021-10-07 Reyoung Corporation Nucleoside and nucleotide conjugate compounds and uses thereof
WO2021207049A1 (en) 2020-04-06 2021-10-14 Gilead Sciences, Inc. Inhalation formulations of 1'-cyano substituted carbanucleoside analogs
KR20210125298A (ko) 2020-04-08 2021-10-18 주식회사 파마코스텍 테노포비어 알라펜아미드 헤미타르트레이트의 신규한 제조방법
CN115605492A (zh) 2020-04-21 2023-01-13 配体制药股份有限公司（Us） 核苷酸前药化合物
TW202203941A (zh) 2020-05-29 2022-02-01 美商基利科學股份有限公司 瑞德西韋之治療方法
CN115996928A (zh) 2020-06-24 2023-04-21 吉利德科学公司 1’-氰基核苷类似物及其用途
CA3181690A1 (en) 2020-06-25 2021-12-30 Chienhung CHOU Capsid inhibitors for the treatment of hiv
CN113970612B (zh) * 2020-07-22 2023-08-01 北京四环制药有限公司 一种高效液相色谱法测定丙酚替诺福韦有关物质的方法
TW202233204A (zh) 2020-08-27 2022-09-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療病毒感染之化合物及方法
CN112336695B (zh) * 2020-09-28 2023-01-03 华北制药华坤河北生物技术有限公司 一种富马酸丙酚替诺福韦片剂及其制备方法和有关物质的检测方法
AU2021377614A1 (en) 2020-11-11 2023-06-22 Gilead Sciences, Inc. METHODS OF IDENTIFYING HIV PATIENTS SENSITIVE TO THERAPY WITH gp120 CD4 BINDING SITE-DIRECTED ANTIBODIES
US11667656B2 (en) 2021-01-27 2023-06-06 Apotex Inc. Crystalline forms of Tenofovir alafenamide
CN113214322B (zh) * 2021-04-30 2022-10-25 山东立新制药有限公司 替诺福韦绿色环保的制备方法
WO2022251594A1 (en) * 2021-05-27 2022-12-01 Antios Therapeutics, Inc. Pharmacokinetics and dose-related improvments in subjects treated with phosphoramidate clevudine prodrugs
WO2023102523A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds for hiv virus infection
WO2023102239A1 (en) 2021-12-03 2023-06-08 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds for hiv virus infection
US20230203071A1 (en) 2021-12-03 2023-06-29 Zhimin Du Therapeutic compounds for hiv virus infection
CN114369120A (zh) * 2022-01-28 2022-04-19 石家庄龙泽制药股份有限公司 一种丙酚替诺福韦关键中间体的制备方法
WO2023167944A1 (en) 2022-03-02 2023-09-07 Gilead Sciences, Inc. Compounds and methods for treatment of viral infections
TW202400172A (zh) 2022-04-06 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 橋聯三環胺甲醯基吡啶酮化合物及其用途
WO2024006982A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Gilead Sciences, Inc. Therapeutic compounds useful for the prophylactic or therapeutic treatment of an hiv virus infection
US20240083984A1 (en) 2022-08-26 2024-03-14 Gilead Sciences, Inc. Dosing and scheduling regimen for broadly neutralizing antibodies
WO2024076915A1 (en) 2022-10-04 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. 4'-thionucleoside analogues and their pharmaceutical use

Family Cites Families (56)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CS233665B1 (en) 1983-01-06 1985-03-14 Antonin Holy Processing of isomere o-phosphonylmethylderivative of anantiomere racemic vicinal diene
CS263952B1 (en) 1985-04-25 1989-05-12 Holy Antonin Remedy with antiviral effect
CS263951B1 (en) 1985-04-25 1989-05-12 Antonin Holy 9-(phosponylmethoxyalkyl)adenines and method of their preparation
CS264222B1 (en) 1986-07-18 1989-06-13 Holy Antonin N-phosphonylmethoxyalkylderivatives of bases of pytimidine and purine and method of use them
US5650510A (en) 1986-11-18 1997-07-22 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Antiviral phosphonomethoxyalkylene purine and pyrimidine derivatives
US5057301A (en) 1988-04-06 1991-10-15 Neorx Corporation Modified cellular substrates used as linkers for increased cell retention of diagnostic and therapeutic agents
US5053215A (en) * 1988-05-26 1991-10-01 University Of Florida NMR-assayable ligand-labelled trifluorothymidine containing composition and method for diagnosis of HSV infection
US5744600A (en) 1988-11-14 1998-04-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Phosphonomethoxy carbocyclic nucleosides and nucleotides
US5688778A (en) 1989-05-15 1997-11-18 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Nucleoside analogs
JP2648516B2 (ja) 1989-07-27 1997-09-03 ダイセル化学工業株式会社 立体異性体の分離法
US5624898A (en) * 1989-12-05 1997-04-29 Ramsey Foundation Method for administering neurologic agents to the brain
JP2925753B2 (ja) 1990-02-23 1999-07-28 ダイセル化学工業株式会社 光学異性体の分離方法
US5302585A (en) 1990-04-20 1994-04-12 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Use of chiral 2-(phosphonomethoxy)propyl guanines as antiviral agents
FI911875A (fi) * 1990-04-20 1991-10-21 Bristol Myers Squibb Co Kirala 2-(fosfonometoxi) propylguaniner som antivirala aemnen.
SK280313B6 (sk) 1990-04-24 1999-11-08 �Stav Organick� Chemie A Biochemie Av �R N-(3-fluór-2-fosfonylmetoxypropyl)deriváty purínov
US5627165A (en) * 1990-06-13 1997-05-06 Drug Innovation & Design, Inc. Phosphorous prodrugs and therapeutic delivery systems using same
US5177064A (en) 1990-07-13 1993-01-05 University Of Florida Targeted drug delivery via phosphonate derivatives
CS276072B6 (en) 1990-08-06 1992-03-18 Ustav Organicke Chemie A Bioch (2R)-2-/DI(2-PROPYL)PHOSPHONYLMETHOXY/-3-p-TOLUENESULFONYLOXY -1- TRIMETHYLACETOXYPROPANE AND PROCESS FOR PREPARING THEREOF
CA2088363C (en) 1990-08-10 2002-05-28 Purushotham Vemishetti Process for the preparation of nucleotides
DK0481214T3 (da) 1990-09-14 1999-02-22 Acad Of Science Czech Republic Prolægemidler af phosphonater
US5827819A (en) * 1990-11-01 1998-10-27 Oregon Health Sciences University Covalent polar lipid conjugates with neurologically active compounds for targeting
US5208221A (en) * 1990-11-29 1993-05-04 Bristol-Myers Squibb Company Antiviral (phosphonomethoxy) methoxy purine/pyrimidine derivatives
CZ284678B6 (cs) 1991-05-20 1999-01-13 Ústav Organické Chemie A Biochemie Avčr Di(2-propyl)estery 1-fluor-2-fosfonomethoxy-3-p -toluensulfonyloxypropanů, způsob jejich přípravy a použití
US5498752A (en) 1991-08-22 1996-03-12 Daicel Chemical Industries, Ltd. Process for recovering optical isomers and solvent, process for using solvent by circulation and process for reusing optical isomers in optical resolution
JP3010816B2 (ja) 1991-08-22 2000-02-21 ダイセル化学工業株式会社 光学分割における光学異性体と溶媒との回収方法、溶媒の循環使用方法、および光学異性体の再利用方法
CZ287745B6 (cs) 1991-10-11 2001-01-17 Ústav organické chemie a biochemie AV ČR Acyklické fosfonomethoxyalkylsubstituované alkenylové a alkinylové deriváty purinu a pyrimidinu
US6057305A (en) 1992-08-05 2000-05-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic Antiretroviral enantiomeric nucleotide analogs
IL106998A0 (en) * 1992-09-17 1993-12-28 Univ Florida Brain-enhanced delivery of neuroactive peptides by sequential metabolism
US6413949B1 (en) * 1995-06-07 2002-07-02 D-Pharm, Ltd. Prodrugs with enhanced penetration into cells
US5798340A (en) 1993-09-17 1998-08-25 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
CA2171868A1 (en) * 1993-09-17 1995-03-23 Petr Alexander Method for dosing therapeutic compounds
US5656745A (en) * 1993-09-17 1997-08-12 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
JP4086314B2 (ja) 1993-09-17 2008-05-14 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヌクレオチドアナログ
GB9505025D0 (en) 1995-03-13 1995-05-03 Medical Res Council Chemical compounds
US5977061A (en) 1995-04-21 1999-11-02 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Of The Academy Of Sciences Of The Czech Republic N6 - substituted nucleotide analagues and their use
DK0828749T3 (da) * 1995-05-26 2003-10-27 Genta Inc Fremgangsmåder til syntese af organophosphorderivater
US5717095A (en) * 1995-12-29 1998-02-10 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analogs
NZ325704A (en) 1995-12-29 2000-02-28 Gilead Sciences Inc Nucleotide analogs
US5874577A (en) * 1996-04-03 1999-02-23 Medichem Research, Inc. Method for the preparing 9-12-(Diethoxyphosphonomethoxy)ethyl!adenine and analogues thereof
JP4033494B2 (ja) * 1996-07-26 2008-01-16 ギリヤド サイエンシーズ， インコーポレイテッド ヌクレオチドアナログ
US5922695A (en) * 1996-07-26 1999-07-13 Gilead Sciences, Inc. Antiviral phosphonomethyoxy nucleotide analogs having increased oral bioavarilability
US5739314A (en) 1997-04-25 1998-04-14 Hybridon, Inc. Method for synthesizing 2'-O-substituted pyrimidine nucleosides
AU756793B2 (en) * 1997-07-25 2003-01-23 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analog composition and synthesis method
US5935946A (en) 1997-07-25 1999-08-10 Gilead Sciences, Inc. Nucleotide analog composition and synthesis method
KR100700087B1 (ko) 1997-07-25 2007-03-28 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 뉴클레오티드 동족체의 제조 방법
CA2312975C (en) * 1997-12-17 2012-08-21 Enzon, Inc. Polymeric prodrugs of amino- and hydroxyl-containing bioactive agents
DE69900841T2 (de) * 1998-01-23 2002-10-02 Newbiotics Inc Durch enzymkatalyse erhaltene therapeutische substanzen.
US6169078B1 (en) * 1998-05-12 2001-01-02 University Of Florida Materials and methods for the intracellular delivery of substances
AU755564B2 (en) * 1998-06-20 2002-12-12 Washington University Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy
US6169879B1 (en) * 1998-09-16 2001-01-02 Webtv Networks, Inc. System and method of interconnecting and using components of home entertainment system
GB9821058D0 (en) † 1998-09-28 1998-11-18 Univ Cardiff Chemical compound
TWI230618B (en) 1998-12-15 2005-04-11 Gilead Sciences Inc Pharmaceutical compositions of 9-[2-[[bis[(pivaloyloxy)methyl]phosphono]methoxy]ethyl]adenine and tablets or capsules containing the same
CA2362662A1 (en) † 1999-02-12 2000-08-17 Glaxo Group Limited Phosphoramidate, and mono-, di-, and tri-phosphate esters of (1r, cis)-4-(6-amino-9h-purin-9-yl)-2-cyclopentene-1-methanol as antiviral agents
JP4651264B2 (ja) * 2000-07-21 2011-03-16 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド ホスホネートヌクレオチドアナログのプロドラッグならびにこれを選択および作製するための方法。
JP4387669B2 (ja) * 2000-10-13 2009-12-16 ザイジェン エス．アー． 新規なトランスポーターペプチド配列による生物学的エフェクターの細胞内送達
US20020119433A1 (en) * 2000-12-15 2002-08-29 Callender Thomas J. Process and system for creating and administering interview or test

Also Published As

Publication number Publication date
CY1119411T1 (el) 2018-03-07
NZ536942A (en) 2006-03-31
BRPI0112646B8 (pt) 2021-05-25
HUP0301307A2 (hu) 2003-09-29
HRP20030047A2 (en) 2007-08-31
IS6689A (is) 2003-01-17
US20050009043A1 (en) 2005-01-13
NO336718B1 (no) 2015-10-26
CZ304734B6 (cs) 2014-09-10
CY2016008I2 (el) 2016-12-14
HRP20030047B1 (hr) 2016-02-26
HK1054238A1 (en) 2003-11-21
PL213214B1 (pl) 2013-01-31
ZA200210271B (en) 2003-12-31
WO2002008241A3 (en) 2002-08-29
EE05366B1 (et) 2010-12-15
JP5063554B2 (ja) 2012-10-31
MXPA03000587A (es) 2004-04-05
EP2682397A1 (en) 2014-01-08
CY2016008I1 (el) 2016-12-14
ES2536972T3 (es) 2015-06-01
WO2002008241A2 (en) 2002-01-31
CA2416757A1 (en) 2002-01-31
CA2725819C (en) 2015-09-22
AP2003002724A0 (en) 2003-06-30
CN1443189A (zh) 2003-09-17
ES2627903T3 (es) 2017-08-01
AU2001282941B2 (en) 2006-04-27
CN1291994C (zh) 2006-12-27
NZ523438A (en) 2005-02-25
KR20030022295A (ko) 2003-03-15
KR100749160B1 (ko) 2007-08-14
HRP20160074B1 (hr) 2021-09-03
FR16C0013I2 (fr) 2016-09-09
EP3235823A1 (en) 2017-10-25
LTC1301519I2 (lt) 2023-02-27
BRPI0112646B1 (pt) 2017-10-17
PT1301519E (pt) 2015-06-11
HUP0301307A3 (en) 2005-12-28
DK1301519T4 (da) 2021-12-20
NO20120466L (no) 2003-03-20
US20060024659A1 (en) 2006-02-02
EA200300188A1 (ru) 2003-06-26
AU2005225039B2 (en) 2008-09-25
KR20060105807A (ko) 2006-10-11
CZ304886B6 (cs) 2015-01-07
CA2416757C (en) 2011-02-15
FR16C0013I1 (fr) 2016-05-27
BE2016C018I2 (cs) 2020-08-20
EP1301519B2 (en) 2021-11-10
DK1301519T3 (en) 2015-05-26
EA004926B1 (ru) 2004-10-28
US20030219727A1 (en) 2003-11-27
CA2893174A1 (en) 2002-01-31
NO20030270D0 (no) 2003-01-20
NL300803I2 (cs) 2016-06-30
NO20131717L (no) 2003-03-20
JP2009062383A (ja) 2009-03-26
HRP20160074A8 (hr) 2016-07-29
NO2023006I1 (no) 2023-02-03
CA2725819A1 (en) 2002-01-31
US20040018150A1 (en) 2004-01-29
NO2016006I2 (no) 2016-04-19
PL360490A1 (en) 2004-09-06
NO2016006I1 (no) 2016-04-19
JP5111551B2 (ja) 2013-01-09
AP1466A (en) 2005-09-22
JP2010174033A (ja) 2010-08-12
CN100402539C (zh) 2008-07-16
US20050159392A1 (en) 2005-07-21
AU2005225039A1 (en) 2005-11-10
JP2011140506A (ja) 2011-07-21
SI1301519T1 (sl) 2015-07-31
US20050124585A1 (en) 2005-06-09
US20050124584A1 (en) 2005-06-09
US20080227754A1 (en) 2008-09-18
BG107572A (bg) 2003-11-28
HU230960B1 (hu) 2019-06-28
HUS000494I2 (hu) 2021-03-29
NO20030270L (no) 2003-03-20
NZ535408A (en) 2006-09-29
CN1706855A (zh) 2005-12-14
LTPA2016009I1 (lt) 2016-04-25
HRP20160074A2 (hr) 2016-03-11
US7803788B2 (en) 2010-09-28
JP2004504402A (ja) 2004-02-12
US7390791B2 (en) 2008-06-24
UA75889C2 (uk) 2006-06-15
AU8294101A (en) 2002-02-05
BR0112646A (pt) 2003-06-24
US20020119443A1 (en) 2002-08-29
ES2536972T5 (es) 2022-04-06
EP2682397B1 (en) 2017-04-19
HK1243711A1 (zh) 2018-07-20
US20050124583A1 (en) 2005-06-09
AU2001282941C1 (en) 2016-12-22
PT2682397T (pt) 2017-05-31
IL153658A0 (en) 2003-07-06
EP1301519B1 (en) 2015-02-25
HUS1900027I1 (hu) 2021-03-29
TR200300055T2 (tr) 2004-12-21
BG66037B1 (bg) 2010-11-30
NO20150909L (no) 2003-03-20
EP1301519A2 (en) 2003-04-16
SI2682397T1 (sl) 2017-08-31
KR100767432B1 (ko) 2007-10-17
LT2682397T (lt) 2017-06-12
DK2682397T3 (da) 2017-06-19
OA12393A (en) 2006-04-18
JP4651264B2 (ja) 2011-03-16
EE200300029A (et) 2004-10-15
LU93029I2 (fr) 2016-06-14
IS2985B (is) 2017-09-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ2003413A3 (cs) Prekursory léčiv na bázi fosfonátových analogů nukleotidů a způsoby jejich výběru a přípravy
AU2001282941A1 (en) Prodrugs of phosphonate nucleotide analogues and methods for selecting and making same