CS277006B6

CS277006B6 - Process for preparing antiviral substances

Info

Publication number: CS277006B6
Application number: CS883635A
Authority: CS
Inventors: Thomas Anthony Krenitsky; Georg Walter Koszalka; Lynda Addington Jones; Devron Randolph Averett; Allan Ray Moorman
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1987-05-30
Filing date: 1988-05-27
Publication date: 1992-11-18
Also published as: DK171670B1; NO2007016I1; CY2008001I1; NO2007016I2; AU1671888A; CY2001A; ES2091750T3; NZ224813A; PT87592B; HU205001B; MC1935A1; CY2008001I2; HUT47129A; LU91370I2; NO172543B; EP0294114A2; PL272729A1; DE3855522T2; US5424295A; DK289788A

Description

Deriváty purinu, způsob jejich výroby a použití

Oblast techniky

Vynález se týká protivirových látek na bázi substituovaných purinarabinosidů, jakož i jejich derivátů, přijatelných z fyziologického hlediska, zvláště esterů. Tyto látky je možno užít k léčbě některých onemocnění viry DNA. Vynález se také týká způsobu výroby těchto sloučenin, stejně jako farmaceutických prostředků, které obsahují sloučeninu dále uvedeného vzorce I a/nebo la jako účinnou látku.

Dosavadní stav techniky

Virus pásového oparu a platných neštovic (VZV) je DNA virus ze skupiny herpetických virů. Plané neštovice jsou základním onemocněním, které tento virus vyvolává u hostitele, který proti němu není odolný. Jde zpravidla o mírné onemocnění malých dětí, které se projevuje zvýšenou teplotou a puchýřkovitou vyrážkou. Pásový opar je rekurentní formou tohoto onemocnění, k tomuto typu onemocnění dochází v případě dospělých, kteří byli předtím infikovány tímto virem. Klinické projevy infekce u dospělých jsou zejména neuralgie a puchýřkovitá vyrážka na kůži, která je jednostranná a vyskytuje se v průběhu kožního zásobení určitého nervu. Při rozšíření zánětlivého onemocnění může dojít až k obrnám nebo ke křečím a v některých případech i ke komatu při zasažení mozkových blan.

U nemocných, kteří mají sníženou odolnost, může dojít k disseminaci tohoto viru v celém organismu, což vede k závažnému onemocnění, které často končí smrtí. Příčinou snížené odolnosti mohou být například léky, užívané při transplantacích nebo při léčbě zhoubných nádorů, nebo také j iné onemocnění, například AIDS, která ničí imunologický systém, takže nemocný nemá žádnou odolnost proti infekcím, které by jinak nebyly nebezpečné.

Cytomegalovirus (CMV) je dalším virem ze skupiny herpetických virů. K infekci může dojít v dětství nebo v ranném mládí nebo také již uvnitř dělohy, tento typ infekce je pravděpodobně nejběžnější, avšak až 90 % vrozených infekcí se při narození nijak neprojeví. Primární infekce matky v průběhu těhotenství je pravděpodobně velkým rizikem pro nenarozené dítě, kdežto při reaktivaci jsou fetální infekce obvykle klinicky němé. Klinické projevy se mohou pohybovat od úmrtí a hrubého poškození plodu, jako jsou microcephalie, hepatosplenomegalie, žloutenka, a psychické zpoždění až do celkového neprospívání, náchylnosti k infekcím dýchacích orgánů a ucha, v některých případech se takto získaná infekce neprojevuje vůbec. U mladých dospělých lidí může infekce proběhnout nepozorovaně nebo se může projevit zvětšenými uzlinami a současně zvýšenou teplotou.

Ke stejně závažným projevům infekce může dojít také při reaktivaci takto přenášeného viru u nemocných, u nichž došlo z nějakého důvodu k poškození imunologického systému, tak, jak to bylo shora popsáno pro infekce VZV. Tyto infekce mají za následek zvýšenou nemocnost, může dojít také k úmrtí na základě zánětů oční sliznice, zánětu plic a poruch zažívací soustavy.

Nyní bylo zjištěno, že některé purinarabinonukleosidy, které budou dále popsány a jsou charakterizovány přítomnosti určitých skupin v polohách 2 a 6-purinového kruhu, mají vysokou účinnost proti lidským virovým infekcím, zejména těm, které jsou způsobeny viry varicella' zoster (VZV) neber cytomegalovirem (CMV).

Některé substituované purinarabinonukleosidy, zvláště

9-p-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purin,9-3-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purin, 9-p-D-arabinofuranosyl-6-pyrrolidin-9H-purin, 9-p-D-arabinofuranosyl-6-methylamino-9H-purin a 9-p-D-arabinofuranosyl-6-dimethylamino-9H-purin, které budou dále popsány, byly užity pro léčbu VZV a CMV infekcí, jak bylo uvedeno v publikacích J- Org. Chem. sv. 27, 3274-9 (1962)? Cancer Treatement Rep. 60(10), 1567-84, (1976); Tetrahedron (40(4), 709-13 (1984)?

Canada. J. Biochem. 43(1), 1-15 (1965); J.Med. Chem. 12,498-504 (1969)? J.Biol. Chem. 251(13), 4055-4061 (1976); Ann. N. Y. Acad. Sci. 284, 81-90 (1977)? v evropském patentovém spisu č. 2 192 a v US patentových spisech č. 3 666 856, 4 371 613 a 3 758 684. Podstata vynálezu la

Vynález,se tedy týká^ protivirových sloučenin obecného vzorce kde

znamená atom halogenu, alkoxyskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku, alkoxyskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou atomem halogenu, aminoskupinu, která je substituována jednou nebo dvěma alkylovými skupinami o 1 až 5 atomech uhlíku, alkylovou skupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou jedním nebo větším počtem atomů fluoru, cykloalkylovou skupinu o 3 až 6 atomech uhlíku nebo aminoskupinu, která je členem kruhu s obsahem 4 až 7 atomů uhlíku a popřípadě dvojné vazby a/nebo dalšího atomu dusíku a znamená atom vodíku, atom halogenu nebo aminoskupinu, za předpokladu, že sloučeninou není fyziologicky přijatelný derivát, potom v případě, že R₂ znamená atom vodíku, má R^ odlišný význam od atomu chloru, methoxyskupiny, methylaminoskupiny, ethylaminoskupiny, dimethylaminoskupiny, piperidonového nebo pyrolidinového zbytku a v případě, že R₂ znamená aminoskupinu, má R]_ odlišný význam od atomu chloru nebo methylaminoskupiny, jakož

V;

i derivátů těchto látek, přijatelných z fyziologického hlediska s výj irnkou 2',3',5'-triacetátu a 2' , 3 ’ , 5’-tribenzylového derivátu sloučenin obecného vzorce Ia, v němž R^ znamená atom chloru nebo fluoru v případě, že R₂ znamená atom chloru, fluoru, vodíku nebo aminoskupinu.’

Výhodnými sloučeninami podle ‘tohoto vynálezu jsou farmaceuticky přijatelné estery arabinocukrového zbytku sloučeniny obecného vzorce Ia, zvolené z esterů karboxykyselin, esterů sulfonových kyselin, esterů aminokyselin a mono-, di- nebo triesterů kyseliny fosforečné.

Obzvláště výhodné jsou farmaceuticky přijatelné estery 9-β-D-arabinofuranosy1-6.methoxy-9H-purinu.

Dále budou uvedeny výhodné sloučeniny podle vynálezu z hlediska jejich účinnosti proti virům VZV nebo CMV:

1) 9^-D-arabinofuranosyl-6-methylamino-9H-purin,

2) 9^-D-arabinofuranosyl-6-dimethylamino-9H-purin,

3) 9^-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9K-purin,

4) 9^-D-arabinofuranosyl-6-ethoxy-9H-purin,

5) 9^-D-arabinofuranosyl-6-j od-9H-purin,

6) 9^-D-arabinofuranosyl-2-amino-6-jodpurin,

7) 9^-D-arabinofuranosyl-6-pyrrolidin-9H-purin,

8) 9^-D-arabinofuranosyl-2-chlor-6~methylamino-9H-purin,

9) 9^-D-arabinofuranosyl-6-cyklopropylamino-9H-purin,

10) 9-^-D-arabinofuranosyl-6-ethylethylamino-9H-purin,

11) 9^-D-arabinofuranosyl-2-amino-6-methoxy-9H-purin,

12) 9^-D-arabinofuranosyl-6-n-propoxy-9H-purin.

Ze shora uvedených sloučenin jsou zvláště výhodné sloučeniny

2,3 a 5. Do vynálezu rovněž spadá způsob výroby sloučenin 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 a 12, tak, jak byly svrchu uvedeny a jejich deriváty, přijatelných z fyziologického hlediska.

Jako zcela zvláště výhodné sloučeniny se jmenují sloučeniny zvolené z 9-[5-0-(4-methylbenzoyΙη-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy -9H-purihu, 9-[5-0-(4-aminobenzoyl)^-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purinu a 6-methoxy-9-(2,0-pentanoyl-3-D-arabinofuranosyl)-9H-purinu.

Ve výhodných farmaceuticky přijatelných esterech arabinocukrového zbytku sloučeniny obecného vzorce Ia jsou estery karboxykyselin účelně zvoleny tak, že nekarbonylová část esterového seskupení je přímý nebo rozvětvený alkylový, alkoxyalkylový, aralkylový, aryloxyalkylovy nebo arylový zbytek, popřípadě substituovaný halogenem, alkylem nebo alkoxylem vždy až se 4 atomy uhlíku, nitroskupinou nebo aminoskupinou. U esterů sulfonových kyselin jde účelně například o alkylsulfonový nebo alkarylsulfonový zbytek.

Pod pojmem derivátů sloučenin obecného vzorce I, přijatelných z farmaceutického hlediska se rozumí zejména ethery, soli, estery nebo soli těchto esterů nebo jakékoliv další deriváty, z nichž po podání člověku mohou přímo nebo nepřímo vzniknout sloučeniny obecného vzorce I nebo jakýkoliv jejich metabolit nebo fragment, který má protivirovou účinnost.

Velmi výhodné jsou zejména z farmaceutického hlediska přijatelné estery sloučenin obecného vzorce I, protože podáním těchto esterů je možno zajistit vysoké hladiny účinných látek v plasmě u lidí při perorálním podání. Zvláště výhodnou skupinu esterů sloučenin obecného vzorce I, zejména sloučeniny 3 je možno získat esterifikací na hydroxylové skupině v poloze 2'-, 3'-a/nebo 5'-arabinosového zbytku.

Zvláště výhodnými deriváty sloučenin obecného vzorce I jsou monoestery, diestery nebo triestery, substituované v polohách 2'-, 3'- a 5' - svrchu uvedeného zbytku.

Výhodné estery shora uvedeného typu zahrnují estery s karboxylovými kyselinami, odvozenými od kyselin s přímým nebo rozvětveným řetězcem, esterovými zbytky jsou tedy alkylový zbytek, například n-propyl, terc.butyl, n-butyl, alkoxyalkyl', například methoxymethyl, aralkyl, například benzyl, aryloxyalkyl, například fenoxymethyl, aryl, například fenyl, popřípadě substituovaný atomy halogenu, alkylovým zbytkem o 1 až 4 atomech uhlíku, alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku, nitroskupinou nebo aminoskupinou, dále může jít o estery typu sulfonátu, jako alkylsulfonylestery nebo alkylarylsulfonylestery, například methansulfonylester nebo tosyIsulfonylester, estery s aminokyselinami, v nichž esterovým zbytkem je například L-valyl a dále monofosfáty, difosfáty nebo trifosfáty. Solemi těchto esterů, přijatelnými z farmaceutického hlediska jsou sodné soli, draselné soli, soli s obsahem skupiny NR₄ ⁺, kde R znamená atom vodíku nebo alkylový zbytek o 1 až 6 atomech uhlíku a adiční soli s kyselinou. Ve svrchu uvedených esterových skupinách obsahují alkylové skupiny včetně alkylových zbytků v alkoxyskupinách 1 až 12 atomů uhlíku, arylovou skupinou je s výhodou fenylový zbytek.

Způsobem podle vynálezu je možno získat následující výhodné nové estery sloučenin obecného vzorce I:

13) 9- (5-0-benzoyl-p-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

14) 6-methoxy-9-[5-0-(4-methylfenylsulfonyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

15) 6-methoxy-9-(5-0-methylsulfοηγΙ-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

16) 9-(5-0-(4-methylbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H5 CS 277006 B6

-purin,

17) 9— (5-0-(4-chlorbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

18) 9-(5-0-(4-methoxybenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H -purin,

19) 6-methoxy-9-(5-0-f enylacetyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

20) 6-methoxy-9-(5-0-fenyloxyacetyl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-pu rin,

21) 6-methoxy-9-(5-0-methoxyacetyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

22) 9-[5-0-(4-nitrobenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purin,

23) 6-methoxy-9-(5-0-pentanoyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

24) 9-[5-0-(4-aminobenzoyl^-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purin,

25) 6-methoxy-9-(5-0-propionyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

26) 9-(5-0-butanoyl^-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

27) 9-[5-0-(2,2-dimethylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purin,

28) 9- [5-0-acetyl^-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

29) 6-methoxy-9-[5-0-(2-methylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

30) 6-methoxy-9-[2-0-(2,2-dimethylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl ]-9H-purin,

31) 6-methoxy-9-[2,3,5-tri-0-acetyl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

32) 6-methoxy-9-(2-0-pentanoyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

33) 9-(2-0-butanoyl^-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

34) 6-methoxy-9-[2-0-(2-methylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

35) 9-(3-0-benzoyl^-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin,

36) 9 -(2,3-anhydro^-D-lyxofuranosyl)-6-methoxypurin,

37) 6-methoxy-9-[(2-0-(4-methoxybenzoyl))-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

38) 6-methoxy-9-[(2-0-(4-methylbenzoyl^-D-arabinofuranosyl]-9HCS 277006 B6

-purin,

39) 9-[2-0-(4-chlorbenzoyl^-D-arabinof uranosyl]-6-methoxy-9H-purin, .

40) 6-methoxy-9-[3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyl)-1,3-disiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

41) 6-methoxy-9-[2-0-(2-aminobenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

42) 6-methoxy-9-[2-(4-methylbenzoyl)-3,5,0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purin,

43) 6-methoxy-9-[2-(4-methoxybenzoyl)-3,5,0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin,

44) 9-[2-(4-chlorbenzoyl)-3,5,0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl) -β-D-arabinof uranosyl ] -6-methoxy-9Hr-purin,

45) 5'-monofosfátester 9^-D-arabinofuranosyl-6-dimethylamin-9H-purinu,

46) 6-methoxyarabinosa 5'-monofosfátu,

47) 6-methoxypurinarabinosa 5'-trifosfátu,

Zvláště výhodné jsou sloučeniny 16,24 a 32.

Purinové nukleosidy obecného vzorce I jsou, jak již bylo uvedeno, účinnými látkami, které je možno zpracovat na farmaceutické prostředky s protivirovým účinkem. Tyto látky jsou vhodné především k léčbě a profylaxi lidských virových infekcí, způsobených viry VZV nebo CMV.

Uvedené onemocnění je možno léčit nebo jen předcházet tak, že se podá účinné množství sloučeniny, získané způsobem podle vynálezu.

Při podání shora uvedených látek dochází k inhibici replikace virů VZV nebo CMV v hostitelských buňkách savce. Tohoto účelu se dosahuje tím způsobem, že se podá množství sloučeniny obecného vzorce I, které účinně potlačuje replikaci uvedených virů nebo deriváty těchto látek, přijatelné z farmaceutického hlediska.

Příklady klinických stavů, způsobených infekcí viry VZV a CMV, které je možno léčit sloučeninami, získanými způsobem podle vynálezu, byly již uvedeny shora.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich deriváty, přijatelné z farmaceutického hlediska, které budou dále nazývány souhrnně účinnými složkami je možno podávat jakýmkoliv vhodným způsobem, například perorálně, rektálně, do nosu, místně včetně ústní sliznice a podání pod jazyk, vaginálně a parenterálně, tj. zejména podkožně, nitrosvalové, nitrožilně, intradermálně, intrathekálně a epidurálně. Je zřejmé, že vhodná cesta podání se volí podle ty§ pu onemocnění.

Pro každý se shora uvedených účelů bude záviset množství účinné složky na velkém počtu faktorů, například na závažnosti onemocnění, na nemocném a podobně a bude jí moci stanovit ošetřující. lékař. Obvykle se však ve všech těchto případech bude účinná dávka pohybovat .v rozmezí 0,1 až 250 mg/kg tělesné hmotnosti denně, s výhodou v rozmezí 0,1 až 100 mg/kg denně a zvláště 1 až 20 mg/kg denně. Optimální dávka leží v blízkosti 15 mg/kg denně, v případě, že není uvedeno jinak, vypočítává se množství účinné složky přepočtem na volnou látku obecného vzorce I, to znamená, že. v případě solí a esterů je nutno uvedené množství odpovídajícím způsobem zvýšit. Požadovaná dávka se s výhodou podává ve formě dvou, tří, čtyř nebo většího počtu dílčích dávek, podaných v různých intervalech v průběhu dne. Lékové formy mohou obsahovat tuto dílčí dávku, například 5 až 1000 mg, s výhodou 20 až 500 mg a zvláště 100 až 400 mg účinné složky v dílčí dávce.

Účinnou složku je možno podávat jako takovou, je však výhodné ji podávat ve formě farmaceutického prostředku. Farmaceutické prostředky s obsahem účinných složek, vyrobených způsobem podle vynálezu obsahují alespoň jednu shora uvedenou účinnou složku spolu s jedním nebo větším počtem vhodných nosičů a popřípadě dalších pomocných látek, běžně užívaných ve.farmacii. Nosič nebo nosiče musí být přijatelné v tom smyslu, že jsou kompatibilní s ostatními složkami farmaceutického prostředku a nejsou škodlivé pro příjemce.

Z farmaceutických prostředků s obsahem uvedených účinných složek je možno uvést prostředky, určené pro perorální, rektální, nosní, místní (včetně ústní sliznice a pod jazyk), vaginální nebo parenterální podání, včetně podání podkožního., nitrosvalového, nitrožilního, nitrokošního, intrathekálního a epidurálního. Tyto prostředky mohou mít formu jednotlivé dávky a je možno je připravit jakýmkoliv způsobem, který je ve farmacii znám. Je možno například postupovat tak, že se účinná složka smísí s nosičem, který sestává z jedné nebo většího počtu složek. Obvykle se všechny tyto složky smísí, přičemž nosič může být kapalný, pevný, jemně rozptýlený nebo obojího typu, načež se v případě potřeby takto získaná výsledná směs tvaruje.

Prostředky pro perorální podání s obsahem účinných látek, získaných způsobem podle vynálezu mohou mít formu, určenou pro jednotlivé podání, jako jsou kapsle, prášky nebo tablety, z nichž každá jednotka obsahuje předem určené množství účinné složky, dále může jít o prášek nebo granule, roztok nebo suspenzi ve vodném nebo nevodném prostředí nebo o emulzi typu olej ve vodě nebo voda v oleji. Účinnou složku je také možno podat jako bolus, mazání a popřípadě jako pastu.

Tablety je možno vyrobit lisováním nebo odléváním, popřípadě při použití jedné nebo většího počtu pomocných složek. Lisované tablety je možno připravit tak, že se na lisovacím stroji stlačuje účinná složka v sypné formě, například ve formě prášku nebo granul, popřípadě smíšených s pojivém, jako je polyvinylpyrrolidon, želatina nebo hydroxypropylmethylcelulóza, s kluznou látkou, inertním ředidlem, konzervačním činidlem, činidlem, napomáhajícím rozpadu, jako je sodná sůl glykolátu škrobu, zesítěný polyvinylchloridem, zesítěná sodná sůl karboxymethylcelulozy, dále může směs obsahovat smáčedla, nebo dispergační činidlo. Odlité tablety je možno získat tak, že se ve vhodném zařízení odlévá směs práškované účinné složky, zvlhčené inertním kapalným ředidlem. Takto získané tablety je popřípadě možno opatřit povlakem nebo dělicími rýhami nebo mohou být tablety zpracovány tak, že zajišťují zpomalené nebo řízené uvolňování účinné složky, k tomuto účelu je například možno užít hydroxypropylmethylcelulózy v měnícím se množství, čímž je· možno dosáhnout požadovaného způsobu uvolňování.

Při infekci oka nebo jiné zevní tkáně, například ústní sliznice nebo kůže se farmaceutické prostředky nanášejí s výhodou místně ve formě mazání nebo krémů, obsahujícího účinnou složku například v množství 0,075 až 20 % hmotnostních, s výhodou 0,2 až 15 % hmotnostních a zvláště 0,5 až 10 % hmotnostních. V případě mazání může být užito základu na podkladu parafinu nebo základu, mísitelného s vodou. Účinné složky je také možno zpracovat na krém při použití základu typu olej ve vodě.

V případě potřeby může vodná fáze krému obsahovat také například alespoň 30 % hmotnostních vícesytného alkoholu, tj. alkoholu s dvěma nebo větším počtem hydroxylových skupin, jako je propylenglykol, butah-1,3-diol, manitol, sorbitol, glycerol, polyethylenglykol a libovolné směsi těchto·látek. Farmaceutické prostředky pro místní podání mohou s výhodou obsahovat sloučeniny, které podporují vstřebávání nebo průnik účinné složky kůží, sliznicí a podobně. Příkladem látek, které usnadňují tento průnik, jsou například dimethylsulfoxid a jeho analogy.

Olejová fáze emulzí s obsahem účinných látek může být vytvořena známým způsobem ze známých složek. Může obsahovat pouze emulgátor, s výhodou však je směsí alespoň jednoho emulgátoru s tukem nebo olejem nebo s tukem i olejem. Hydrofilni emulgátor je výhodný pro použití spolu s lipofilním emulgátorem, který působí jako stabilizátor. Je také výhodné užít olej i tuk. Emulgátor, popřípadě se stabilizátorem vytvářejí tzv. emulgační vosk a vosk spolu s olejem a/nebo tukem vytvářejí tzv. emulgační základ, který vytváří dispergovanou olejovou fázi krému.

Emulgátory a stabilizátory emulze, vhodné pro použití v prostředcích uvedeného typu jsou například Tween 60, Spán 80, cetostearylalkohol, myristylalkohol, glycerylmonostearát a laurylsíran sodný.

Volba vhodných olejů nebo tuků pro uvedené zpracování je založena na požadovaných kosmetických vlastnostech, protože rozpustnost účinných složek ve většině olejů, běžně užívaných pro farmaceutické emulze je velmi nízké. Krém by s výhodou měl být netučný, nebarvící a omyvatelný s vhodnou konsistencí, aby nevytékal z tub nebo kelímků. Vhodnými estery jsou mono-, nebo dibasické alkylestery s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například di.isoadipát, isocetylstearát, propylenglykoldiester alyfatických kyselin z kokosového ořechu, isopropylmyristát, decyloleát, isopropylpalmitát, butylstearát, 2-ethylhexylpalmitát nebo směs esterů s rozvětveným řetězcem, známá jako Crodamol CAP, přičemž tři svrchu uvedené látky jsou nejvýhodnější. Tyto látky jednotlivě nebo ve směsi v závislosti na požadovaných vlastnostech. Je také možno užít lipidů s vyšší teplotou tání, například bílého měkkého parafinu a/nebo kapalného parafinu nebo jiných minerálních olejů.

Farmaceutické prostředky, vhodné pro místní- podání do oka, zahrnují také oční kapky, v nichž se účinná složka nachází ve formě roztoků nebo suspenze ve vhodném nosiči, zvláště ve vodném rozpouštědle pro účinnou složku. Účinná složka se v těchto prostředcích nachází například v koncentraci 0,5 až 20 %, s výhodou 0,5 až 10 %, zvláště 1,5 % hmotnostních.

Prostředky, vhodné pro místní podání na ústní sliznici zahrnují například pastilky, určené k podání pod jazyk, obsahující účinnou složku v ochuceném základu, obvykle jde o sacharózu a akáciovou nebo tragakantovou pryž, dále může jít .o pastilky s obsahem účinné složky v inertním základu, jako je například želatina a glycerol nebo sacharóza a akáciová pryž, dále může jít o kloktadla a ústní vody,které obsahují účinnou složku ve vhodném kapalném nosiči.

Prostředky pro rektální podání mohou mít například čípky, které sestávají z účinné složky ve vhodném základu, obsahujícím například kakaové máslo nebo salicylát.

Prostředky, vhodné pro podání do nosu s obsahem pevného nosiče jsou například hrubší prášky s velikostí částic 20 až 500_um, které se podávají stejně jako šňupací tabák, tj. rychlým vdechnutím do nosních průchodů z krabičky, která tento prášek obsahuje a je přidržována v těsné blízkosti nosních otvorů. Je také možno užít farmaceutických prostředků s kapalným nosičem, v tomto případě běží o nosní spreje nebo nosní kapky, obsahující roztoky účinné složky ve vodě nebo v oleji.

Prostředky, určené pro vaginální podání mohou mít formu pesarů, tamponů, krémů, gelů, past, pěny nebo spreje, tyto prostředky obsahují kromě účinných složek také běžné nosiče a jsou v oboru běžně známé.

Prostředky, použitelné pro parenterální podání jsou vodné a nevodné sterilní injekční roztoky, které mohou obsahovat antioxidační látky, pufry, bakteriostatické látky a látky, které zajišťují isotonicitu farmaceutického prostředku s krví příjemce, dále může jít o volné nebo nevodné sterilní suspenze, které mohou obsahovat činidla, napomáhající vzniku suspenze a zahušťovadla. Tyto prostředky je možno ukládat do lékovek s obsahem jednotlivé dávky nebo většího počtu dávek, jde například o zatavené ampule nebo lékovky, které je možno skladovat v lyofilizovaném stavu, takže těsně před podáním je zapotřebí pouze přidat sterilní kapalný nosič, například vodu, vhodnou pro injekční podání. Ze sterilních prášků, granul nebo tablet shora uvedených typů, je možno připravit v případě potřeby injekční roztoky nebo suspenze.

Výhodnými farmaceutickými lékovými formami jsou ty lékové formy, které obsahují denní dávku nebo její zlomek.

Je zřejmé, že kromě složek, které byly jmenovitě uvedeny v průběhu svrchu uvedeného vysvětlení mohou farmaceutické prostředky s obsahem účinných látek, získaných způsobem podle vynálezu ještě obsahovat další složky nebo činidla, která se běžně užívají v oboru pro uvedený typ farmaceutického prostředku, například prostředku, které jsou určeny pro perorální podání, mohou navíc obsahovat ještě chatové látky.

Sloučeniny podle tohoto vynálezu je možné získat několika navzájem odlišnými způsoby.

Podle přítomného vynálezu se při výrobě postupuje tak, že se A. uvede do.reakce sloučenina obecného vzorce II

H kde R-j_ a R₂ mají shora uvedený význam, se sloučeninou obecného vzorce III

X znamená zbytek pyrimidonové nebo, purinové báze, odlišné od sloučeniny obecného vzorce II, nebo

B. uvede do reakce sloučenina obecného vzorce IV

Z znamená snadno odštěpitelnou skupinu a

R₂ má shora uvedený význam, se sloučeninou, schopnou včlenit požadovanou skupinu do polohy 6, načež se popřípadě současně nebo následně v případě, že se získá sloučenina obecného vzorce la, přivede tato látka na svůj derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska nebo v případě, že výsledným produktem je derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska, převede se tento derivát na jiný derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska nebo na volnou sloučeninu obecného vzorce la.

Pokud jde o způsob uvedený výše pod A, užije se s výhodou sloučeniny, ve které X značí uracilovou bázi. Reakci je možno provádět například tak, že se na sloučeniny obecných vzorců II a III působí enzymem, například enzymem typu fosforylázy, jako je například uridinfosforylát a nebo purinnukleosidfosforyláza, nebo směsi těchto enzymů. Reakce se provádí s výhodou za přítomnosti fosfátové soli při pH v rozmezí 5,0 až 9,0 a při teplotě v rozmezí 15 až 90 °C, s výhodou 40 až 60 °C.

Pokud jde o způsob B, je možno tento způsob provádět tak, jak byl popsán v publikaci Reist E. J. a další, J. Org. Chem. 27, 3274 - 3279 (1962). Běžnou odštěpitelnou skupinou, vhodnou pro toto použití může být atom halogenu, například atom chloru, přičemž reakce se s výhodou provádí v organickém rozpouštědle, například v absolutním methanolu za přítomnosti činidla, které je schopné dodat požadovanou skupinu do polohy 6; k tomuto účelu je možno použít například odpovídající amin v případě, kde znamená alkylaminoskupinu nebo dialkylaminoskupinu.

Estery a soli sloučenin obecného vzorce la, přijatelné z fyziologického hlediska je možno připravit způsobem, obvyklým pro výrobu esterů, a to esterifikací volné látky působením příslušného acylhalogenidu nebo anhydridu. Je možno získat estery také tak, že se nahradí snadno odštěpitelná skupina, například zbytek halogenidu zbytkem příslušné karboxylové kyseliny nebo se otevře příslušný anhydronukleosid původní sloučeniny příslušnou karboxylovou kyselinou nebo její solí.

Praktické provedení způsobu podle vynálezu bude osvětleno následujícími příklady.

Příklad 1

9-g-D-arabinofuranosyl-6-methylamino-9H-purin

100 mg, 0,35 mmolů 6-thiol-9-(p-D-arabinofuranosil)-9H-purinu, získaného podle publikace (Reist E. J. a další, J.. Org. Chem. 27 (1962) 3274 až 3279) a 5 ml absolutního methanolu se smísí a zchladí na teplotu -10 °C za nepřístupu vlhkosti. Získanou suspenzí se nechá 2 minuty opatrně probublávat plynný chlor. Výsledný roztok se pak míchá ještě 5 minut při teplotě - 10 °C, načež se zchlazeným roztokem nechá probublávat bezvodý dusík přibližně 15 minut, tj. tak dlouho, až se odstraní přebytek chloru. Pak se k reakční směsi přidají 2 ml 40 % vodného· methylaminu a reakční směs se pak zahřívá v bombě z nerezové oceli celkem 4,5 hodiny na teplotu 115 °C. Pak se bomba zchladí na teplotu 0 °C a její obsah se odpaří do sucha, čímž se ve výtěžku 88 % získá výsledná látka. Po překrystalování z vody se získá vzorek této látky s teplotou tání 201,5 až 202,5 °C.

Pro vypočteno: 47,0 % C, 5,38 % H, 24,9 % N;

nalezeno: 47,2 % C, 5,72 % H, 25,2 % N.

Příklad 2

9-g-D-arabinofuranosyl-6-dimethylaminopurin

1,04 g 6,4 mmolů 6-dimethylaminopurinu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a 1,96 g, 8 mmolů uracilarabinosidu, získaného způsobem podle publikace Torrence, P. F. a další, J. Med. Chem. 22(3) (1979), 316 až 319) se smísí v 0,412 litrech 5 mM fosforečnanu draselného o pH 8,0 s 0,2 % azidu draslíku. Pak se přidá 3260 jednotek čištěné purinnukleosidfosforázy a 810 jednotek čištění uridinfosforylázy a roztok se míchá při teplotě 35 °C. Po 59 dnech se reakční směs lyofilizuje. Odparek se uvede do suspenze ve 250 ml vody a suspenze se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pak se pevný podíl oddělí filtrací a filtrát se uloží při teplotě 3 °C. Po 72 hodinách se sraženina oddělí a spojí s filtračním koláčem. Materiál se přidá ke 100 ml 95 % ethanolu ve vodě, směs se zahřeje na teplotu varu a pak se zfiltruje. Rozpouš13 tědló se odstraní ve vakuu a odparek se chromatografuje na pryskyřici BioRad P-2 při použití 30 objemových % n-propanolu ve vodě, přičemž materiál se chromatografuje jednou na sloupci s rozměrem 7,5 x 90 cm a pak ještě dvakrát na sloupci .s rozměrem 5 x. 90 cm. Tímto způsobem se získá 0,12 g 6-dimethylaminopurin-9-3-D-arábinofuranosidu jako 0,5 hydrát.

Pro ^C12^H17^N5°4 °'^{5 H}2° vypočteno: 47,36 % C, 5,96 % H, 23,01% N;

nalezeno: 47,23 % C, 5,59 % H, 22,75% N.

NMR a hmotová spektrometrie jsou v souladu s předpokládanou strukturou výsledné látky.

Příklad 3

9-S-D-arabinofuranosyl-6-methoxvpurin lg, 6,6 mmolů 6-methoxypurinu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a 2,45 g 10,1 mmolu uracilarabinosidu, získaného způsobem podle publikace (Torrence P. F. a další, J. Med. Chem. 22(3),(1979)) se uvede do suspenze v 575 ml, 10 mM fosforečnanu draselného, 0,04 % azidu draslíku o pH 7,8 s obsahem 10 % objemových n-propanolu. Pak se přidá 560 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 10 000 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy, popsané v publikaci Krenitsky T. A. a další, Biochemistry 20, 3615, 1981 a v US patentovém spisu č. 4 381 444 a roztok se míchá při teplotě 35 °C. Po 30 dnech se reakční směs filtruje. Filtrát se upraví na pH 10,5 přidáním hydroxidu amonného a pak se chromatograf uje na sloupci s rozměrem 2,5 x 7 cm s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě mravenčanu. Pryskyřice se vymývá směsí 30 % objemových n-propanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se spojí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve směsi 30 % objemových n-propanolu ve vodě a chromatografuje se na sloupci s rozměrem 75 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a lyofilizují, čímž se získá 0,922 g 6-methoxypurin-9-p-D-arabinofuranosidu ve formě dihydrátu.

Pro C₁₁H₁₄N₄O₅2H₂O vypočteno: 41,51 % C, 5,70 % H, 17,60 % N;

nalezeno: 41,46 % C, 5,74 % H, 18,13 % N.

NMR spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu s předpokládanou strukturou výsledného produktu.

Příklad 4

9-6-D-arabinofuranosyl-6-ethoxypurin

0,5 g, 3,05 mmolů 6-ethoxypurinu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) a 1,48 g, 6,09 mmolů uracilarabinosidu se uvede do suspenze ve 100 ml 10 mM fosforečnanu draselného v roztoku v 0,04 % azidu draselného o pH 7,4. Pak se přidá 6 000 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 8400 jednotek purinnukleosidfosforylázy, popsané v publikaci Krenitsky T. A. a další, Biochemistry 20, 3615, 1981 a v US patentovém spisu č. 4 381 444 a suspenze se míchá při 35 °C.

Po 168. hodinách se přidá ještě 18 000 jednotek uridinfosforylázy a 75 600 jednotek purinnukleosidfosforylázy. Po sedmi dnech se reakční směs zfiltruje a filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 2_r5~x 8 cm s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě hydroxidu. Sloupec se pak vymývá směsí 90 % objemových methanolu ve vodě, frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve směsi 30 % objemových n-propanolu ve vodě a pak se chromatografuje na sloupci rozměru 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Výsledný produkt se vymývá směsí 30% objemových n-propanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá 0,363 g 6-ethoxypurin-9-p-D-arabinofuranosidu ve formě 0,3 hydrátu.

Pro ^ci2^Hi6^N4°5³ H₂O vypočteno: 47,78 % C, 5,55 % H, 18,57 % N;

nalezeno: 47,99 % C, 5,54 % H, 18,40 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu s předpokládanou strukturou produktu.

Příklad 5

9-g-D-arabinofuranosyl-6-iodpurin g, 4 mrnoly 6-jodpurinu (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) se rozpustí za zahřívání v 15 ml, 1,2-dimethoxyethanu. Pak se přidá 50 ml roztoku uracilarabinosidu (10,1 mmolů) v 10 mM fosforečnanu draselného s 0,04 % azidu draselného o pH 7,4. Pak se přidá 6800 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 12 000 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy a reakční směs se míchá při teplotě 35 °C. Po 21 dnech se přidá ještě 4800 jednotek uridinfosforylázy a 20 000 jednotek purinnukleosidfosforylázy. Po 90 dnech se reakční směs zfiltruje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 100 ml vody, zahřeje se na parní lázni a pak se zfiltruje. Filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 35 cm s obsahem pryskyřice XAD-2. Tento sloupec se vymývá 2 litry vody a pak 2 litry ethanolu. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve směsi 30 % objemových n-propanolu ve vodě a pak se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2.

Produkt se vymývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 30 % objemových n-propanolu ve vodě a chromatografie se na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem Sephadex G-10. Sloupec se vymývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě. Frakce s. obsahem produktu se slijí, čímž se po odpaření rozpouštědla ve vakuu získá 0,253 g 6-jodpurin-9-8-D-arabinofuranosidu ve formě 1,5 hydrátu.

Pro CfgHffN₄O4 1,5 H₂O vypočteno: 29,65 % C, 3,48 % H, 13,83 % N, 31,32 % O; nalezeno: 29,43 % C, 3,53 % H, 13,66 % N, 31,20 % O.

15'

Příklad 6

9-6-D-arabinofuranosvl-2-amino-6-Ťodipurin

6,75 g, 25,5 mmol 2-amino-6-jodpurinu (Sigma Chemicals St. Louis, Mo) a 15,1 g, 61,9 mmol uracilarabinosidu se smísí v 0,31 litru 10 mM fosforečnanu‘draselného o pH 6,9 s 0,02 % azidu draslíku. Pak se k roztoku přidá 17 000 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy a 2000 jednotek čištěné uridinfosforylázy a roztok se míchá při teplotě 37 °C. Po 18 dnech se přidá ještě 5700 jednotek pyridinfosforylázy. Po 57 dnech se reakční směs zfiltruje a filtrát se chrom-atografuje na sloupci s rozměrem 8 x 11 cm s obsahem pryskyřice XAD-2. Produkt se vymývá postupně směsí ethanolu a vody při stoupajícím množství ethanolu takže nejprve se užije 0,35 litrů s obsahem 10 % hmotnostních ethanolu, pak 1 litr s 20 % hmotnostními ethanolu, 1 litr s 50 % hmotnostními ethanolu a nakonec 0,2 litru s 95 % hmotnostním-i ethanolu. Frakce s obsahem produktu se slijí a ethanol se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 30 % objemových N-propanolu ve vodě a chromatigrafie na slo.upci s rozměrem 7,5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Tímto způsobem se získá 1,1 g 2-amino-6-jodpurin-9-£-D-arabinofuranosidu ve formě 0,5 hydrátu.

Pro C₁₀H₁₂ ⁿ5°₄ O,5H₂O vypočteno: 29,87 % C, 3,26 % H, 17,41 % Nenalezeno: 29,86 % C, 3,29 % H, 17,39 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 7

9-g-D-arabinofuranosvl-6-pyrrolidinpurin

0,5 g 2,6 mmol 6-pyrrolidinpurinu (Sigma Chemical Company, St. Louis. MO), a 1,29 g, 5,29 mmol uracilarabinosidu se uvede do suspenze ve 100 ml 10 mM fosforečnanu draselného s 0,04 % azidu draslíku o pH 7,4. Pak se přidá 6000 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 8400 jednotek čištěné nukleosidfosforylázy, popsané v publikaci Krenitsky, T. A. a další, Biochemistry 20 3615, (1981) a v US patentovém spisu č. 4 381 444 a suspenze se míchá při teplotě 35 °C. Po 20 dnech se reakční směs filtruje a filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 2,5 x 8 cm s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě hydroxidu. Produkt se ze sloupce vymývá 90 % objemovými methanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí v 50 ml směsi 30 % objemových propanolu ve vodě a chromatografuje se na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Produkt se vymývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá 0,573 g výsledného 6-pyrrolidinpurin-9-p-D-arabinofuranosidu.

Pro ^ci4H_igN₅O₄ vypočteno: 52,33 % C, 5,96 % H, 21,79 % N;

nalezeno: 52,60 % C, 6,09 % H, 21,51 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 8

9-6-D-arabinofuranosvl-2-chlor-6-methvlaminopurin

Roztok 5,92 g 10 mM 2,6-dichlor-2',3',5'-tri-0-benzyl-9-(β-D-arabinofuranosyl)purinu, popsaného v publikacích Keller F. a další, J. Org. Chem. 32., 1644 (1967) a Montgomery J. A. , a Hewson, K.J., J. Med. Chem. 12., 498 (1967) ve 35 ml roztoku s obsahem 0,6 g methylaminu na 10 ml benzenu se udržuje při teplotě místnosti v zatavené bombě čtyři dny. Pak se bomba důkladně prochladí v ledu, otevře se a obsah se zfiltruje k odstranění methylaminhydrochloridu. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá olejovitý zbytek, který se spojí s olejovitým zbytkem z reakce, prováděné ve stejném množství, avšak při teplotě 125 ° C. Celkové množství produktu je 11,4 g. Při chromatografií na tenké vrstvě je možno prokázat, že běží o směs výchozí látky, monomethylaminosloučeniny a dimethylaminosloučeniny. Olej se chromatografuje na 285 g silikagelu při použití směsi 30 % objemových acetonu a 70 % objemových cyklohexanu. Složka, která následuje po výchozím materiálu na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi acetonu a cyklohexanu v objemovém poměru 3 : 7 se izoluje a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Tímto způsobem se získá 4,8 g, 2-chlor-6-methylamino-2',3',5'-tri-O-benzyl-9-^-D-arabinofuranosyl)-purinu ve formě oleje. 1,1 g této látky ve 40 ml 2-methoxyethanolu se přidá k 0,87 g paladiumchloridu, předem redukovaného v Parrově přístroji. Pak se provádí hydrogenace při tlaku 0,35 MPa po dobu 30 minut, přičemž vodíková atmosféra se po prvních 15 minutách vymění. Katalyzátor se odstraní filtrací přes vrstvu Celitu a promyje se methanolem.' Filtrát se neutralizuje přidáním pryskyřice Dowex-1- ve formě hydrogenuhličitanu. Pryskyřice se oddělí filtrací a promyje se methanolem. Filtrát se odpaří ve vakuu a odparek se rozetře s chloroformem. Surový produkt se promyje horkou vodou, rozpustí se v horkém methanolu, pak se zfiltruje, zchladí, a pevný podíl se oddělí. Krystalizaci z vroucí vody se získá výsledný produkt ve formě hydrátu. Výtěžek je 44,5 mg, teplota tání 224 až 225 °C.

Pro CH-l-jN-j^O O₅C1₄H₂O vypočteno: 20,98 % C, 39,58 % N, 4,84 % H;

nalezeno: 20,83 % C, 39,27 % N, 5,16 % H.

Přiklad 9

9-g-D-arabinofuranosyl-6-cyklopropylaminopurin

0,5 g, 2,85 mmolů 6-cyklopropylaminopurinu, připraveného nukleofilním nahrazením chloru v 6-chlorpurinu (Sigma Chemicals, St. Louis, MO), cyklopropylaminu v acetonitrilu a 1,39 g, 5,71 mM uracilarabinosidu, popsaného v publikaci iorrence P.F a další, J. Med. Chem. 22(3) (1979) 316 - 319 se uvede do suspenze ve 100 ml 10 mM fosforečnanu draselného s 0,04 % azidu draslíku o pH 7,4. Pak se přidá 6000 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 8400 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy, popsané v publikaci Krenitsky a další, Biochemistry 20, 3615, 1981 a v US patentovém spisu č. 4 381 444 a suspenze se míchá při teplotě 35 °C. Po 120 hodinách se reakčni směs filtruje a filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 2,5 x 10 cm s obsahem pryskyřice Dowex-l-ve formě hydroxidu. Sloupec še vymývá 90 % objemovými methanolu ve vodě. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 30 % objemových n-propanolu ve vodě a pak se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm a s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Sloupec se vymývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě. Získá se sraženina, která se nechá překrystalovat z horkého methanolu, čímž. se získá 0,0352 g produktu, kterým je 6-cykloprepylaminopurin-9-p-D-arabinofuranosidmonohydrát. Filtrát po překrystalováni se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad-P-2 svrchu uvedeným způsobem. Frakce s obsahem produktu z obou sloupců se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, čímž se získá 0,352 g 6-cyklopropylaminopurin-9-p-D-arabinofuranosidu ve formě 0,8 hydrátu s 0,3 C₃HgO.

Pro C₁₃H₁₇N₅O₄ 1 H₂0 vypočteno: 48,00 % C, 5,89 % H, 21,53 % N;

nalezeno: 48,05 % C, 5,89 % H, 21,55 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 10

9-g-D-arabinofuranoyl-6-ethyl (methyl) arainopurin

6-ethyl-(methyl)aminopurin byl připraven nukleofilní výměnou chloridu v 6-chlorpurinu (Sigma Chemicals, St. Louis, MO) za 6-ethyl (methyl)- amin v acetonitrilu. 0,5 g, 2,8 mmolu 6-ethyl (methyl)- aminopurinu a 1,38 g, 5,6 mmolů uracilarabinosidu se uvede do suspenze v 575 ml 10 mM fosforečnanu draselného s 0,04 % azidu draslíku o pH 7,4 s obsahem 10 % objemových n-propanolu. Pak se přidá 6000 jednotek čištěné uridinfosforylázy a 8 400 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy, popsané v publikaci Krenitsky a další, Biochemistry 20, 3615, 1981 a v US patentovém spisu č. 4 381 444 a roztok se míchá při teplotě 37 °C. Po 19 dnech se reakční směs zfiltruje a filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 2,5 x 13 cm s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě hydroxidu. Pryskyřice se promývá 90 % objemovými methanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí ve 30 % objemových n-propanolu ve vodě a chromatografuje se na sloupci s rozměrem 7,5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Frakce s obsahem produktu se slijí a lyofilizují, čímž se získá 0,680 g 6-ethyl/methyl/-aminopurin-9-B-D-arabinofuranosidu.

Pro ^ci3^H19N₅O₄ vypočtěno: 50,48 % C, 6,19 % H, 22,64 % N;

nalezeno: 50,36 % C, 6,25 % H, 22,52 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 11

9-8-D-arabinofuranosyl-2-amino-6-methoxvr>urin

1,05 g, 6,4 mrnolů 2-amino-6-methoxypurinu, připraveného nukleofilní záměnou chloru ve 2-amino-6-chlorpurinu (Sigma Chemicals St.Louis, MO) za methanol působením hydridu sodíku v tetrahydrofuranu a 1,75 g, 7,04 mrnolů roztoku uracyilarabinosidu ve 35 ml 10 mM fosforečnanu draselného se 7 % objemovými n-propanolu se smísí. Pak se pH upraví na 6,75. Pak se přidá 18 000 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy a 1020 jednotek čištěné puridinfosforylázy a roztok se inkubuje při teplotě 37 °C- Po 26 dnech se reakčni směs zfiltruje a filtrát se chromatografuje na sloupci s rozměrem 2 x 7 cm a s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě mravenčanu po úpravě pH na 10,5 přidáním koncentrovaného hydroxidu amonného. Sloupec se vymývá 7 % objemovými n-propanolu ve vodě, frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se extrahuje 25 ml a filtrát se oddělí od pevného podílu odstředěním. Supernatant při stání při teplotě místnosti krystalizuje, vytvářejí se krystalky 2-amino-6-methoxypurin-9-p-D-arabinofuranosidu, které se usuší ve vakuu, čímž se získá 0,327 g produktu.

Pro ^ch^h5N₅O₅ vypočteno: 44,44 % C, 5,09 % H, 23,56 % N;

nalezeno: 44,49 % C, 5,13 % H, 23,52 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Přiklad 12

9-6-D-arabinofuranosvl-6-n-proooxypurin g, 5,6 mrnolů 6-n-propoxypurinu (Sigma Chemicals, St. Louis, MO) se smísí s 545 ml, 10,1 mrnolů roztoku uracilarabinosidu v 10 mM fosforečnanu draselného se 7 % objemovými n-propanolu. Pak se přidá 680 jednotek čištěné puridinfosforylázy a 12 000 jednotek čištěné purinnukleosidfosforylázy a reakčni směs se míchá při teplotě 35 °C. Reakčni směs se zfiltruje po 58 dnech a filtrát se nechá stát 20 hodin při teplotě 3 °C. Vznikne sraženina, která se oddělí odstředěním, rozpustí se ve 30 % objemových n-propanolu ve vodě a chromatografuje se na sloupci s rozměrem 2,5 x 5 cm s obsahem pryskyřice Dowex-1 ve formě mravenčanu po úpravě pH na 10,5 koncentrovaným hydroxidem amonným. Pak se sloupec promývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě, frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Odparek se rozpustí v n-propanolu a pak se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Sloupec se vymývá 30 % objemovými n-propanolu ve vodě. Frakce s obsahem produktu se slijí a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, získaný odparek se rozpustí ve vodě a pak se chromatografuje na sloupci s rozměrem 5 x 90 cm s obsahem pryskyřice BioRad P-2. Sloupec se vymývá vodou. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a lyofilizují, čímž se získá 0,758 g 6 n-propoxypurin-9-3-D-arabinofuranosidu ve formě monohydrátu.

Pro Ci₃H₁₈ ^N4Og 1,0 H₂O vypočteno: 47,56 % C, 6,14 % H, 17,06 % N;

nalezeno: 47,63 % C, 6,13 % H, 17,11 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 13

9-(5-0-benzoyl-3-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,283 g, 1,0 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl) -6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 sa rozpustí v 5,0 ml bezvodého dimethylacetamidu, roztok se zchladí na teplotu 4 °C a přidá se 0,155 g, 1,1 mmolů benzoylchloridu. Pak se směs míchá 24 hodin v argonové atmosféře, načež se nechá pomalu zteplat na teplotu místnosti. Pak se přidá ještě 1,1 ekvivalentu benzoylchloridu při teplotě místnosti a směs se míchá dalších 24 hodin. Pak se reakce zastaví vlitím do 50 ml vody s ledem, načež se extrahuje 3 x 30 ml chloroformu, načež se organické extrakty vysuší síranem hořečnátým. Po odpaření rozpouštědla se získaný odparek čistí rychlou chromatograf ii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu, postupně se zvyšuje množství chloroformu až do objemového poměru chloroformu k acetonu 1:1. Frakce s obsahem produktu o Rf 0,21, získané při použití silikagelu a objemového poměru chloroformu k acetonu 1 : 1 se slijí, čímž se získá 92 mg produktu s teplotou tání 202 až 204 °C.

Pro CigH₁₈N₄O₆ vypočteno: 55,96 % C, 4,70 % H, 14,50 % N;

nalezeno: 56,04 % C, 4,74 % H, 14,40 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 14 .

6-methoxy-9-[5-0-(4-methylfenylsulfonyl)-β-D-arabino-furanosyl1-9H-purin

0,312 g, 1,63 mmol čerstvě překrystalovaného 4-toluensulfonylchloridu a 308 g, 1,09 mmol 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 25 ml bezvodého acetonitrilu, suspenze se zchladí v ledové lázni na 3 °C a pak se přidá 5,0 ml pyridinu k rozpuštění nukleosidu. Pak se roztok míchá 1 hodinu v argonové atmosféře při teplotě 3 °C a pak se udržuje 42 hodin při teplotě -15 °C, načež se reakce zastaví přidáním 3 ml 5 % hydrogenuhličitan sodného, směs se odpaří na objem přibližně 10 ml a pak se odpařuje současně s 95 % ethanolem. Odparek se absorbuje na co nejmenším množství silikagelu a uloží se do sloupce pro rychlou chromatografii na silikagelu s rozměrem

2,5 x 15 cm a 25,0 g silikagelu ve směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1. Sloupec se vymývá 450 ml téhož rozpouštědla, načež se vymývá ještě 550 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1. Tímto způsobem se získají tři typy materiálu, absorbujícího ultrafialové světlo. Ty frakce, které obsahují materiál o R_f = 0,42 při použití silikagelu s směCS 277006 B6 ·

si methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 se sliji a dále čistí na třech za sebou zařazených deskách silikagelu pro preparativní chromatografii, přičemž na první desce se užije směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 a na druhých dvou deskách se užije směsi acetonu a methylenchloridu v objemovém poměru 1:1, čímž se získá 88 mg požadovaného výsledného materiálu ve formě čiré sklovité látky. Teplota tání je 177 až 181 °C.

Pro C₁₈H₂₀N₄O₇S . 0,15 H₂O vypočteno: 49,23 % C, 4,66 % H, 12,76 % N;

nalezeno: 49,28 % C, 4,71 % H, 12,71 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu s předpokládanou strukturou výsledného produktu.

Příklad 15

6-methoxy-9-(5-0-methylsulfonvl-8-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,600 g 2,13 mmol 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 40 ml bezvodého acetonitrilu a přidá se 8 ml bezvodého pyridinu. Pak se baňka s uvedenou směsí uloží ke zchlazení na teplotu - 3 °C do lázně s ledem a chloridem sodným a přidá se 0,16 ml 2,13 mmol, methansulfonylchloridu. Po 25 minutách stání se reakce zastaví přidáním 3 ml vody, zahustí se na objem 10 ml a pak se odpařuje za několikanásobného přidání ethanolu, přičemž teplota reakční směsi se stále udržuje na hodnotě nižší než 38 °C. Zbytek pyridinu se odstraní vakuovým čerpadlem. Takto získaný odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 25 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu v rovnovážném stavu ve směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1. Sloupec se nejprve promývá 150 ml téhož rozpouštědla a pak 450 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1. Ty frakce, které obsahují materiál s Rf 0,4 při použití silikagelu a směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 poskytují ve výtěžku 57 % celkem 0,448 g výsledného produktu ve formě bílé pěny s teplotou tání 177 až 181 °C za rozkladu.

Pro C^₂H2gN₄O₇S· 0,5 H₂0 vypočteno: 39,02 % C, 4,64 % H, 15,17 % N;

nalezeno: 39,02 % C, 4,66 % H, 15,08 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 16

9-(5-0-(4-methylbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,283 g, 1,01 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 10,0 ml bezvodého •»1 acetonitrilu, pak se přidá 2,3 ml pyridinu k úplnému rozpuštění složek a nakonec ještě 0,170 g, 1,1 mmolu 4-methylbenzoylchloridu. Pak se směs míchá 24 hodin při teplotě místnosti v argonové atmosféře, pak se reakce zastaví přidáním 5 ml isopropanolu, odpaří se do sucha a pak odpařuje znovu po přidání 2 x 10 ml ethanolu. Získaný odparek se pak čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu, sloupec se promývá postupně zvyšujícím se množstvím chloroformu až do objemového poměru chloroformu k acetonu 1:1. Ty frakce, které obsahují produkt s R_f 0,1 při použití silikagelu a objemového poměru chloroformu k acetonu 1 : 1 se slijí, čímž se získá 132 mg požadovaného výsledného produktu s teplotou tání 127 až 128 °C,

Pro C^_gH2QN₄0g. 0,5 H₂0 _z vypočteno: 55,74 % C, 5,17 % H, 13,69 % N;

nalezeno: 55,48 % C, 5,36 % H, 13,64 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou výsledného produktu.

Příklad 17

9-(5-0-(4-chlorbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,283 g, 1,0 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 10,0 ml bezvodého acetonitrilu, přidá se 2,3 ml pyridinu k úplnému rozpuštění složek a pak ještě 0,193 g, 1,1 mmolu 4-chlorbenZoýlchloridu. Směs se míchá 24 hodin při teplotě místnosti v argonové atmosféře, pak se reakce zastaví přidáním 5 ml isopropanolu, směs se odpaří do sucha, načež se odpařuje současně s 2 x 10 ml ethanolu. Odparek se pak čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem

2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu. Sloupec se promývá elučním činidlem se stoupajícím množstvím chloroformu až do směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1. Ty frakce, které obsahují produktu R_f = 0,37 při použití silikagelu a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se spojí, čímž se získá

105 mg výsledného produktu s teplotou tání 122 až 124 °C.

Pro C₁₈Hi₇CIN₄OgO,5 H₂O vypočteno: 50,30 % C, 4,22 % H, 13,04 % N;

nalezeno: 50,20 % C, 4,28 % H, 12,94 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 18

9—(5-O-(4-methoxybenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,283 g, 1,0 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 10,0 ml bezvodého acetonitrilu, přidá se 2,3 ml pyridinu k úplnému rozpuštění a pak ještě 1,1 mmolu 4-methoxybenzoylchloridu. Směs se míchá 24 hodin při teplotě místnosti v argonové atmosféře, pak se reakce zastaví přidáním-5 ml isopropanolu, směs se odpaří do sucha a pak se odpařuje současně s 2 x 10 ml ethanolu. Získaný odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci 2,5 x 15 cm s obsahem 15,0 g silikagelu při vymývání sloupce směsí chloroformu a acetonu až do objemového poměru chloroformu k acetonu l : 1. Ty frakce, které obsahují produkt s Rf 0,30 při použití silikagelu a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se spojí, čímž se zí-ská 110 mg požadovaného produktu s teplotou tání 195. až 197 °C. Pro C₁₉H₂₀N₄0₇ 0,25 H₂0 vypočteno: 54,22 % C, 4,91 % H, 13,31 % N;

nalezeno: 54,22 % C, 4,94 % H, 13,30 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 19

6-methoxy-9-(5-O-fenylacetyl-g-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,300 g, 1,06 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 25 ml acetonitrilu, načež se přidá 5 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí na teplotu 3 °C v ledové lázni a přidá se 0,20 ml, 1,5 mmolu fenylacetylchloridu. Směs se 1 hodinu míchá při teplotě 3 °C, načež se roztok zchladí na 40 hodin na teplotu -15 °C. Reakce se zastaví 10 ml a pak se odpaří několikanásobným přidáním ethanolu. Odparek přidáním 3 ml 5 % hydrogenuhličitanu sodného, zahustí se na objem se smísí se směsí methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1 a pak se nanese na sloupec s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu v tomtéž rozpouštědle, sloupec se nejprve promyje 500 ml téhož rozpouštědla a pak se promyje 500 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : l. Ty frakce, které mají R_f 0,38 při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 i 1, se spojí, čímž se získá 0,128 g surového produktu, kontaminovaného látkami s vyšším Rf. Další čištění je možno provést preparativní chromatografii na tenké vrstvě při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 s následným použitím druhé desky, při níž se jako rozpouštědlo užije směs acetonu a methylenchloridu v objemovém poměru 1:1, čímž se získá 0,102 g výsledného produktu ve formě bílé pěny s teplotou tání 74 až 75 °C.

Pro C2.₉H₂θN₄Og · 0,1 h₂ovypočteno: 56,74 % C, 5,06 % H, 13,93 % N;

nalezeno: 56,74 % C, 5,11 % H, 13,90 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie byly v souladu se strukturou produktu.

Příklad 20

6-methoxy-9-(5-O-fenyloxyacetyl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,322 g, 1,14 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6~methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 25 ml bezvodého acetonitrilu, pak se přidá ještě 5 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí na 3 °C v ledové lázni a přidá se 0,24 ml, 1,7 mmolu fenoxyacetylchloridu. Směs se míchá 2 hodiny při teplotě 3 °C, načež se reakce zastaví přidáním 2 ml 5 % hydrogenuhličitanu sodného, zahustí se na objem 10 ml. a odpaří za několikanásobného přidání ethanolu. Odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1. Sloupec se promývá 400 ml tohoto rozpouštědla, pak 500 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 a 300 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 9:1, čímž se získá 0,213 g surového produktu. Tento materiál se nechá překrystalovat z methanolu, čímž se ve výtěžku 20 % získá 0,101 g bílého krystalického produktu. Teplota tání je 193 až 195 °C.

Pro C^gH^N^O·? · 0,05 H₂0 vypočteno: 54,69 % C, 4,85 % H, 13,43 N;

nalezeno: 54,69 % C, 4,89 % H, 13,40 N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 21

6-methoxy-9-(5-O-methoxvacetyl-g-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,300 g, 1,06 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 25 ml acetonitrilu a pak se přidá 5 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí na teplotu -3 °C ve směsi ledu a chloridu sodného a pak se přidá 0,10 ml, 1,1 mmolu methoxyacetylchloridu. Směs se míchá 2 hodiny v lázni s ledem a solí, načež se reakce zastav přidáním 2 ml 5 % hydrogenuhličitanu sodného, reakční směs se zahustí na objem 10 ml a pak se odpaří za několikanásobného přidání ethanolu. Odparek se chromatografuje rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu při použiti směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1. Sloupec se promyje 500 ml tohoto rozpouštědla a pak 300 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 9 : l, čímž se získá 0,086 g surového produktu. Tento materiál se nechá překrystalovat . z methanolu a vody, čímž se ve výtěžku 9,3 % získá 0,035 g bílé krystalické látky s teplotou tání 137 až 139 °C.

Pro c₁₄h₁₈n₄o₇ . 0,5 h₂o vypočteno: 46,28 % C, 5,27 % H, 15,42 % N;

nalezeno: 46,33 % C, 5,27 % H, 15,37 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 22

9-Γ 5-0-(4-nitrobenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purin

0,283 g, 1,0 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 10,0 ml bezvodého acetonitrilu, přidá se 2,3 ml pyridinu k úplnému rozpuštění a pak ještě 0,205 g, 1,1 mmolu 4-nitrobenzoylchloridu. Směs se míchá 24 hodin při teplotě místnosti v argonové atmosféře, načeš se' reakce zastaví přidáním 5 ml isopropanolu. Pak se reakčni směs odpaří do sucha, načež se ještě dále odpařuje za přidání 2 x 10 ml ethanolu. Odparek se čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25,0 g silikagelu, užívá se chloroformu se vzestupným množstvím acetonu až do směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1. Ty frakce, které obsahují produkt s Rf = 0,37 při použití silikagelu a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se spojí, čímž se získá 105 mg požadovaného výsledného' produktu s teplotou tání 202 až 203 °C.

Pro C₁₈H₁₇N₅O_g vypočteno: 50,12 % c, 3,97 % H, 16,24 % N;

nalezeno: 50,21 % C, 4,02 % H, 16,16 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 23

6-methoxv-9-(5-0-pentanoyl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,852 g, 3,01 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 75 ml bezvodého acetonitrilu a 15 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí ve směsi ledu a vody a přidá se 0,4 ml, 3,31 mmolu pentanoylchloridu. Reakce se zastaví po 2 hodinách přidáním 3 ml methanolu a pak se odpaří na čirý viskózní olej. Tento zbytek se čistí rychlou chromatografií na silikagelu při použití chloroformu se stoupajícím množstvím methanolu až do objemového poměru chloroformu a methanolu 9:1. Tímto způsobem se získá 330 mg výsledného produktu, znečištěného odpovídajícím 2'-esterem (příklad 32) a neznámou látkou s nižším R_f. Zbytek se dále čistí preparativní vysokotlakou kapalinovou chromatografií v reversní fázi při použití sloupce s rozměrem 10 mm x 25 cm s náplní Alltech C_{18 ří}.<s rozměrem částic 10 μιη, při průtoku 4,0 mml/min směsi 70 % vody a 30 % methylkyanidu. Materiál se nanáší v roztoku v tomtéž rozpouštědle při použití 10 mg materiálu/ml roztoku, materiál byl nanesen v objemu 1,0 ml. Materiál byl pak odpařován současně s acetonem, čímž bylo ve výtěžku 24 % získáno 260 mg výsledné látky ve formě bílé pěny s teplotou tání 85 až 95 °C.

Fro ^c16^H22^N4°6 . O,O5(CH₃)₂CO. 0,55 K₂O vypočteno: 51,16 % C, 6,22 % H, 14,78 % N;

nalezeno: 50,98 % C, 6,03 %-H, 14,63.% N- _______

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 24

9-Γ 5-0-(4-aminobenzoyl-g-D-arabinofuranosyl)1-6-methoxy-9H-purin

0,350 g, 0,81 mmolu 9-(5-0-(4-nitrobenzoyl)-g-D-arábinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 22 se uvede do suspenze ve 100 ml ethanolu a přidá .se 0,100 g 10 % paladia na aktivním uhlí. Po střídavém vyprázdnění a naplnění celého systému vodíkem se reakční směs nechá protřepávat na Paarově přístroji při tlaku 0,35 MPa 3 hodiny. Pak se směs zfiltruje přes vrstvu celitu a filtrát se odpaří do sucha. Po odpaření se odparek uvede do suspenze v methanolu a filtruje, čímž se ve výtěžku 88 % získá 0,285 g výsledného produktu ve formě pevné bílé látky s teplotou tání 198 až 200 °C.

Pro c₁₈h₁₉n₅o₆ .0,3 h₂o vypočteno: 53,15 % C, 4,86 % H, 17,22 % N;

nalezeno: 52,96 % C, 4,64 % H, 17,07 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 25

6-methoxy-9-(5-0-propionyl-g-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

0,847 g, 3,0 mmolu 9-(g-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 30,0 ml bezvodého acetonitrilu a přidá se 9,0 ml k úplnému rozpuštění. Po zchlazení směsi na 5 °C se přidá ještě 0,305 g, 3,3 mmolu propionylchloridu a směs se míchá přes noc v argonové atmosféře za současného zahřátí na 13 °C. Pak se reakce zastaví přidáním 5 ml isopropanolu, reakční směs se odpaří do sucha a pak se ještě odpařuje za přidání 2 x 10 ml ethanolu, odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu, při použití chloroformu se stoupajícím množstvím acetonu až do obje-. mového poměru 1 : 1. Ty frakce, které obsahují produkt s Rf 0,38 při použití silikagelu a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se slijí a dále čistí chromatografii na silikagelu při použití středního tlaku na za sebou zařazených sloupcích s rozměrem l,5x 25 cm a 1,5 x 100 cm při použití směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 3:1, čímž se získá 0,114 g výsledné látky ve formě bílé pevné látky o teplotě tání 62 až 64 °C.

Pro C^₄H^gN₄0g · θ/5 H₂0 vypočteno: 50,68 % C, 5,76 % H, 15,25 % N;

nalezeno: 50,72 % C, 5,80 % H, 15,28 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 26

9-(5-0-butanoyl-6-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,847 g, 3,0 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 30,0 ml bezvodého acetonitrilu a přidá se 9,0 ml pyridinu k úplnému rozpuštění. Po zchlazení na teplotu 5 °C se přidá ještě 0,352 g, 3,3 mmolu butyrylchloridu a směs se míchá přes noc v argonové atmosféře za zahřátí na 13 °C. Pak se reakce zastaví přidáním 5 ml isopropanolu a reakční směs se odpaří do sucha, načež se znovu odpařuje za přidání 2 x 10 ml ethanolu, odparek se čistí rychlou chromátografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm silikagelu při použití chloroformu a pak stoupajícího množství acetonu v chloroformu až do objemového poměru chloroformu k acetonu 1 : 1. Ty frakce, které obsahují produkt s R_f = 0,38 při použití silikagelu a objemového poměru chloroformu k acetonu 1:1 se slijí a díle čistí chromatografii na silikagelu při středním tlaku při použití tandemových sloupců s rozměry 1,5 x 25 cm a 1,5 x 100 cm a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 2 : 1, čímž se získá 267 mg výsledné pevné bílé látky s teplotou tání 108 až 110 °C.

Pro ^ci5^H20^N4°6 vypočteno: 51,13 % C, nalezeno: 51,21 % C,

5.72 % H, 15,90 % N;

5.73 % H, 15,81 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 27

9-Γ 5-0-(2,2-dimethylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purin

0,850 g, 3,01 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 75 ml bezvodého acetonitrilu a pak se přidá 15 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí v ledové lázni na teplotu 3 °C a pak se přidá 0,41 ml,

3,3 mmolu 2,2-dimethylpropionylchloridu. Směs se míchá 6 hodin při teplotě 3 °C, načež sě reakce zastaví přidáním 2 ml methanolu, reakční směs se zahustí na 10 ml a pak se odpaří za současného několikanásobného přidání ethanolu. Odparek se nanese na sloupec s rozměrem 2,5 x 12 cm pro rychlou chromatografii s obsahem 20 g silikagelu v rovnovážném stavu ve směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1. Sloupec se promývá se 100 ml tohoto rozpouštědla, čímž se získá 0,464 g výchozího materiálu a 0,553 g surového produktu. Dalším čištěním rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 10 cm s obsahem oxidu křemičitého při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 1 : 9 se ve výtěžku 38 % získá 0,419 g sklovitého materiálu. Teplota tání je 73 až 76 °C.

Pro ^-Ι6^22^4θ6 * θ/5 H₂0 vypočteno: 51,19 % C, 6,18 % H, 14,93 % N;

nalezeno: 51,43 % C, 6,06 % H, 14,91 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 28

9-(5-0-acetyl-6-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,850 g, 3,01 mmolu 9-(p-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze v 75 ml bezvodého acetonitrilu a pak se přidá 15 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí v ledové lázni na teplotu 3 °C a přidá se 0,24 ml, 3,4 mmoly acetylchloridu. Směs se 0,5 hodiny míchá ve směsi ledu a chloridu sodného a pak se reakce zastaví přidáním 2 ml methanolu, reakční směs se zahustí na 10 ml a pak se odpaří za několikanásobného přidání ethanolu. Odparek se čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu, sloupec se promyje 300 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1 za získání 0,710 g surového produktu. Při použití druhého sloupce o rozměrech 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1 se získá 0,610 g čirého sklovitého produktu, který stále ještě obsahuje malé množství nečistot s vyšším R_f.

Produkt se proto dále čistí preparativní chromatografií na tenké vrstvě při použití směsi methylenchloridu a methanolu v poměru 9:1a získaný materiál se pak čistí ještě rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 12 cm s obsahem 20 g silikagelu v methylenchloridu, sloupec se promývá stoupajícím množstvím methanolu v methylenchloridu, čímž se ve výtěžku 31 % získá 0,308 g bílého pěnového produktu s teplotou tání 64 až 67 °C.

^{Pro c}13^h16ⁿ4°6 · ^{0/5 h}2° vypočteno: 46,85 % C, 5,14 % H, 16,81 % N;

nalezeno: 47,04 % C, 5,12 % H, 16,72 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 29

6-methoxv-9-r 5-0-(2-methylpropionyl)-g-D-arabinofuranosyl-9H-purin

0,500 g, 1,77 mmolu 9-(6-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 se uvede do suspenze ve 25 ml bezvodého acetonitrilu a pak se přidá ještě 5 ml bezvodého pyridinu. Roztok se zchladí na ledové lázni na teplotu 3 °C a přidá se 0,21 ml 2,0 mmolu isobutyrylchloridu. Směs se míchá 3 hodiny při teplotě °C, načež se reakce zastaví přidáním 2 ml methanolu, směs se zahustí na objem 10 ml a pak se odpařuje za opakovaného přidání ethanolu. Odparek se nanese na sloupec pro rychlou chromatografii s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu ve směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1. Sloupec se promyje 300 ml tohoto rozpouštědla, čímž se získá 0,167 g výchozího materiálu a 0,221 g surového produktu. Tento produkt se. dále čistí preparativní chromatografii na tenké vrstvě při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 9 : 1 a získaný materiál se ještě čistí na sloupci pro rychlou chromatografii s rozměrem 2,5 x 10 cm s obsahem 16 g silikagelu v methylenchloridu. Sloupec se promývá postupně se zvyšujícím množstvím methanolu v methylenchloridu, čímž se ve výtěžku 20 % získá 0,127 g výsledného produktu jako čirá sklovitá látka s teplotou tání 68 až 71 °C.

Pro C₁₅H₂₀N₄O₆ . 0,25 H₂0 . 0,05 methanolu vypočteno: 50,43 % C, 5,82 % H, 15,63 % N;

nalezeno: 50,49 % C, 5,83 % H, 15, 62 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 30

6-methoxv-9-Γ 2-0-(2,2-dimethylpropionyl)-β-D-arabinofuranosyl1-9H-purin

298,5 mg 1,06 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H- purinu z příkladu 3,1 mg, 10 μιηοΐύ 4-dimethylaminopyridinu, 20 ml acetonitrilu a 5 ml pyridinu se vloží do lahve se třemi hrdly a okrouhlým dnem, opatřené teploměrem, vstupem pro argon, magnetickým míchadlem, kondenzačním zařízením a zahřívací manžetou. Pak se přidá 0,22 ml, 1,06 mmolů anhydridu kyseliny trimethyloctové a roztok se zahřeje na 25 hodin na teplotu 40 °C. Pak se reakce zastaví přidáním 2 ml vody a reakční směs se odpaří na čirý olej. Odparek se čistí rychlou chromatografii na silikagelu při použití postupně chloroformu a pak chloroformu se zvyšujícím se množstvím methanolu až do objemového poměru chloroformu k methanolu 9 : 1. Získaný materiál se dále čistí preparativní chromatografii na tenké vrstvě při použití směsi chloroformu a methanolu v objemovém poměru 9 : 1 za současného odpařování s tetrachlormethanem a acetonem, čímž se získá 90 mg produktu ve formě bílé pěny.

Pro C₁₆H₂₂N₄O₆ . 0,05 (CH₃)₂CO.O,45 CC1₄ vypočteno: 45,47 % C, 5,13 % H, 12,78 % N;

nalezeno: 45,67 % C, 5,27 % H, 12,67 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 31

6-methoxy-9-f(2,3,5-tri-O-acetyl-β-D-arabinofuranosyl1-9H-purin

1,009 g, 3,57 mmolů 9-(β-D-arabinof uranosyl)-6-methoxy-9.H-purinu z příkladu 3,0,0098 g, 80 μπιοίύ 4-dimethylaminopyridinu, 0,59 ml, 4,2 mmolů triethylaminu a 52 ml bezvodého acetonitrilu se vloží do baňky s třemi hrdly a okrouhlým, dnem, opatřené teploměrem, vstupem pro argon, magnetickým míchadlem a lázní se suchým ledem a acetonem. Po zchlazení mléčné zbarveného roztoku na teplotu -20 °C se přidá 2,4 ml, 25,4 mmolů anhydridu kyseliny octové. Roztok se okamžitě vyčeří. Po 5 minutách se reakce zastaví přidáním 5 ml methanolu a reakční směs se odpaří na čirý viskosní olej. Tento olej se podrobí rychlé chromatografii na sloupci silikagelu, jako rozpouštědlo se užije chloroform se stoupajícím množstvím methanolu, čímž se získá výsledný produkt jako čirý viskosní olej. Tento materiál se rozpustí v malém množství acetonu, roztok se zředí vodou a lyofilizuje, čímž se ve výtěžku 71 % získá 1,03 g výsledného produktu ve formě bílého prášku.

Pro C₁₇H₂₀N₄O₈ vypočteno: 50,00 % C, 4,94 % H, 13,72 % N;

nalezeno: 49,80 % C, 5,09 % H, 13,50 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 32

6-methoxy-9-(2-0-pentanoyl-8-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

Metoda 1

283 mg, 1,0 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3,20 ml acetonitrilu a 5 ml pyridinu se vloží do baňky se třemi hrdly a okrouhlým dnem, opatřené teploměrem, vstupem pro argon a magnetickým míchadlem. Pak se přidá 0,2 ml, 1,0 mmolů anhydridu kyseliny valerové a směs se míchá ještě 3 hodiny při teplotě 20 °C. Pak se reakce zastaví přidáním 2 ml vody a reakční směs se odpaří na čirý olej, který se pak čistí rychlou chromatografii na oxidu křemičitém při použití stoupajícího množství methanolu v chloroformu až do objemového poměru chloroformu k methanolu 9:1. Tímto způsobem se získá 110 mg 2'-esteru, který je znečištěn 5'-esterem (příklad 23), který má nižší R_f. Získaný materiál se dále čistí preparativní chromatografii na vrstvě oxidu křemičitého při použití směsi chloroformu a methanolu v objemovém poměru 9:1a pak se odpařuje s acetonem, čímž se získá 70 mg 2'-esteru ve formě čiré sklovité látky.

Pro ^C16^H22^H4°6 · 0,5 (CH₃)₂CO vypočteno: 53,16 % C, 6,37 % H, 14,17 % N;

nalezeno: 52,89 % C, 6,37 % H, 13,96 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Metoda 2

2,5 g, 4,8 mmolu 6-methoxy-9-[3,5-0-(l,l,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-p-D-arabinofuranosyl]-9H-purinu se přidá do buňky s okrouhlým dnem spolu s 0,06 g, 0,47 mmolu 4-dimethylaminopyridinu. Pak se přidá 30 ml bezvodého acetonitrilu a 2,65 ml triethylaminu a kapací nálevka se naplní 20 ml acetonitrilu s 1,13 ml 5,7 mmolu anhydridů kyseliny pentanové. Pak se reakčni směs zchladí v ledové lázni na teplotu 3 °C v argonové atmosféře. Anhydrid kyseliny pentanové se pak pomalu přidává v průběhu 2 hodin. Pak se k reakčni směsi přidá 10 ml methanolu a směs se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se smísí s 200 ml chloroformu a směs se extrahuje 2 x 50 ml vody. Vodné vrstvy se slijí a zpětně se extrahují 25 ml chloroformu, organické extrakty se spojí, vysuší se síranem hořečnatým, zfiltrují a odpaří, čímž se získá 3,44 g surového produktu.

Surový 6-methoxy-9-[2-0-pentanoyl-3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl )-f3-D-arabinofuranosyl ]-9H-purin se rozpustí ve 120 ml tetrahydrofuranu se 3 ml vody. Roztok se zchladí v ledové lázni na teplotu 3 °C a přidá se 6,0 ml 1,0M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Po 1,5 hodinách se přidají 2 ml nasyceného roztoku chloridu amonného a reakčni směs se nechá projít sloupcem silikagelu v chloroformu a rozměrem 5,0 x 8,0 cm. Sloupec se promyje 200 ml chloroformu a pak 400 ml směsi acetonu a chloroformu v objemovém poměru 1:1a frakce s obsahem produktu se slijí a odpaří. Konečné čištění se provádí rychlou chromatografii na sloupci silikagelu s rozměrem 5,0 x 15 cm, sloupec se vymývá postupně se zvyšujícím množstvím acetonu v chloroformu, čímž se ve výtěžku 67 % získá 1,17 g výsledného produktu ve formě čiré lepkavé sklovité látky, znečištěné kyselinou pentanovou.

Pro ^ci6^H22^N4°6 . ^{0/2 C}5^H10°2 vypočteno: 52,79 % C, 6,25 % H, 14,48 % N;

nalezeno: 52,97 % C, 6,38 % H, 14,60 % N.

Příklad 33

9-(2-Q-butanoyl-g-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

283 mg, 1,0 mmolu 9-(p-D-arabino-furanosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3,20 ml acetonitrilu a 5 ml bezvodého pyridinu se přidá do baňky hrdly a okrouhlým dnem, opatřené teploměrem, vstupem pro argon, magnetickým míchadlem a směs se zchladí na teplotu 4 °C. Pak se přidá 170 μΐ, 1,0 mmolu anhydridů kyseliny máselné a směs se míchá 6 hodin při teplotě 5 °C v argonové atmosféře. Po této době se reakce zastaví přidáním 2 ml vody a reakčni směs se odpaří na čirou olejovitou kapalinu. Pak se reakčni směs čistí rychlou chromatografii při použití chloroformu a pak stoupajícího množství acetonu v chloroformu až do objemového poměru chloroformu k acetonu 1 : 1. Získaný materiál se pak čistí preparativní chromatografii na vrstvě silikagelu při použití směsi chloroformu a methanolu, čímž se získá 90 mg 2'-esteru ve formě čirého oleje.

P^^C15^H20^N4°6 * °'³ H₂Ó vypočteno: 50,36 % C, 5,80 % H, 15,66 % N;

nalezeno: 50,36 % C, 5,81 % H, 15,66 % N.

Příklad 34

6-methoxy-9-Γ 2-0-(2-methylpropionyl-g-D-arabinofuranosyl1-9H-purin

290,0 mg, 1,03 melu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3,20 ml acetonitrilu a 5 ml pyridinu se přidá do baňky se třemi hrdly a okrouhlým dnem, opatřené teploměrem, vstupem pro argon, magnetickým míchadlem, kondenzačním zařízením a zahřívací manžetou. Pak se přidá 170 μΐ 1,0 mmolu anhydridu kyseliny isomáselné a roztok se zahřívá 4 hodiny na teplotu °C. Pak se reakce zastaví přidáním 2 ml vody s následným odpařením na čirou olejovitou kapalinu. Odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci silikagelu nejprve při použití chloroformu a pak při stoupajícím množství methanolu v chloroformu až do objemového poměru chloroformu k methanolu 9 : 1. Ty frakce, které obsahují produkt a Rf 0,54 při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1 se dále čistí preparativní chromatografii na vrstvě silikagelu při použití směsi chloroformu a methanolu v objemovém poměru 9:1. Tímto způsobem se získá 90,0 mg 2'-esteru jako čirá sklovitá látka.

Pro ^ci5^H20^N4°6 * ^{0,1 C}3^H6° vypočteno: 51,31 % C, 5,80 % H, 15,64 % N;

nalezeno: 51,41 % C, 5,81 % H, 15,72 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 35

9-(3-0-benzoyl-6-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purin

0,264 g, 1,0 mmolu 9-(2,3-anhydro^-D-lyxof uranosyl)-6-methoxy-9H-purinu, jehož příprava bude popsána v příkladu 36, se rozpustí ve 20 ml bezvodého ethanolu, zahřátého na teplotu varu pod zpětným chladičem a. pak se v argonové atmosféře přidá 0,209 g

1,5 mmolu benzoátu amonného. Po 24 a 35 hodinách se přidá dalších 1,5 mmolů benzoátu amonného. Po 48 hodinách zahřívání na teplotu varu pod , zpětným chladičem se reakční směs odpaří do sucha. Odparek se čistí rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu při použití směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 3 : 1. Ty frakce, které obsahují produkt s R_f = 0,52 při použití silikagelu a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se spojí, čímž se získá 138 mg požadovaného produktu s teplotou tání 180 až 182 °C.

Pro C₁₈H₁₈N₄O₆ vypočteno: 55,96 % C, 4,70 % H, 14,50 % N;

nalezeno: 55,90 % C, 4,71 % H, 14,44 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 36

9—(2,3-anhydro-g-D-lvxofuranosyl)-6-methoxypurin

5,902 g, 22,5 mmolu trifenylfosfinu se rozpustí ve 138 ml,

1,4-dioxanu a roztok se zahřeje na teplotu 70 °C. Pak se k němu přidá 4,234 g, 15,0 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3, směs se 10 minut míchá a pak se po kapkách v průběhu 10 minut přidá 3,919 g, 22,5 mmolů diethylazodikarboxylátu v 50 ml 1,4-dioxanu. Reakčni směs se 1 hodinu míchá při teplotě 70 °C, pak se zchladí na teplotu místnosti a odpaří se na hnědý olej s vysokou specifickou hmotností. Tento materiál se pak čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 5,0 x 21 cm s obsahem 188 g oxidu křemičitého, sloupec se promývá 3,6 litry směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 5:1a pak 2 litry směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 3:1. Frakce, s obsahem materiálu s R_f = 0,24 při použití oxidu křemičitého a směsi chloroformu a acetonu v objemovém poměru 1 : 1 se slijí a odpaří do sucha. Odparek se dále čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 5 x 28 cm s obsahem 250 g oxidu křemičitého, sloupec se promývá ethylacetátem, čímž se ve výtěžku 62 % získá 2,452 g požadovaného materiálu jako bílá pěna s teplotou tání 144 až 145, 5 °C.

Pro C₁₁H₁₂N₄O₄ .0,25 C₃H₆O vypočteno: 49,78 % C, 4,80 % H, 19,68 % N;

nalezeno: 49,80 % C, 4,95 % H, 19,87 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 37

6-methoxy-9-r(2-0-(4-methoxybenzovl)-β-D-arabinofuranosyl1-9H-purin

0,86 g, 1,3 mmolu 6-methoxy-9-[2-(4-methoxybenzoyl)-3-5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-l-3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purinu, jehož příprava bude popsána v příkladů .43, se rozpustí ve 40 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody. Roztok se zchladí na teplotu 3 °C a přidá se 6,3 ml, 1,OM roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Po 30 minutách se přidá ještě 5 ml vody a objem reakčni směsi se sníží na polovinu, načež se reakčni směs přímo nanese na sloupec pro rychlou chromatografií s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu v methylenchloridu. Sloupec se promyje 200 ml methylenchloridu a pak 400 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 :1a frakce • 33 s obsahem materiálu s R_f = 0,20 při použití oxidu křemičitého a směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1 se slijí, čímž se získá 0,570 g bílé pěny. Konečné čištění se provádí rychlou chromatografii na sloupci silikagelu v chloroformu s rozměrem 5,0 x 15 cm. Sloupec se promývá postupně se zvyšujícím množstvím acetonu v chloroformu, čímž se ve výtěžku 60 % získá 0,325 g výsledného produktu ve formě bilé pěnovité látky s teplotou tání 71 až 75 °C.

Pro Ci9^H20^N4°7 · °'^{3 CHC1}3 · θ'^{25 C}3^H6° vypočteno: 51,60 % C, 4,71 % H, 12,00 % N;

nalezeno: 51,56 % C, 4,70 % H, 11,95 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 38 .

6-methoxy-9-r(2-O-(4-methylbenzoyl))-β-D-arabinofuranosylΊ-9Η-purin

0,85 g, 1,3 mmolu 6-methoxy-9-[2-(4-methylbenzoyl)-3,5-0-(1,

1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-l,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purinu, jehož příprava bude popsána v příkladu 42, se rozpustí ve 40 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody. Roztok se zchladí na teplotu 3 °C a přidá se 5,0 ml, 1,OM roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Po 30 minutách se přidá ještě 5 ml vody, objem reakčni směsi se sníží na polovinu a nechá se přímo projít sloupcem silikagelu s rozměrem 2,5 x 12 cm s náplní 20 g silikagelu v methylenchloridu. Sloupec se promyje 200 ml methylenchloridu a pak 400 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 15 : 1 a všechny frakce s obsahem materiálu s R_f= 0,20 při použití oxidu křemičitého a směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1 se slijí. Surový produkt se nanese na druhý sloupec pro rychlou chromatografii s rozměrem

2,5 x 18 cm s obsahem 25 g silikagelu ve směsi acetonu a methylenchloridu v objemovém poměru 1:1. Promytím týmž rozpouštědlem se získá 0,633 g produktu, který se dále čistí preparativní chromatograf ií na vrstvě oxidu křemičitého při použití směsi methylenchloridu a acetonu v poměru 1:1a pak rychlou chromatografii na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu.Sloupec se promývá stoupajícím množstvím acetonu v chloroformu, čímž se ve výtěžku 47 % získá 0,243 g produktu ve formě čiré sklovité pevné látky s teplotou tání 69 až 73 °C.

Pro c₁₉h₂₀n₄o₆ . 0,4 C₃H₆O . 0,25 CHC1₃ vypočteno: 54,17 % C, 5,03 % H, 12,36 % N;

nalezeno : 54,00 % C, 4,08 % H, 12,30 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 39

9-Γ 2-0-(4-chlorbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl1-6-methoxy-9H-purin

1,07 g, 1,7 mmolu 9-[2-(chlorbenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-pur.in, jehož příprava bude popsána v příkladu 44, se rozpustí ve 40 ml tetrahydrofuranu a 1 ml vody. Roztok se zchladí na teplotu 3 °C a přidá se 4,5 ml 1,0 M roztoku tetrabutylamonium fluoridu. Po 30 minutách se přidá ještě 5 ml vody a reakčni směs se nanese přímo na sloupec pro rychlou chromatografií s rozměrem 2,5 x 12 cm s obsahem 20 g silikagelu v methylenchloridu. Sloupec se promyje 200 ml methylenchloridu a pak 400 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1,' všechny frakce s obsahem materiálu s R_f = 0,20 při použití oxidu křemičitého a směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1 se slijí. Surový produkt se nanese na vrchol sloupce pro rychlou chromatograf ii s rozměrem 2,5 x 18 cm s obsahem 3G g silikagelu ve směsi acetonu a chloroformu v poměru 1:1. Promytí sloupce týmž rozpouštědlem poskytne 0,269 g produktu, který se dále čistí preparativní chromatografií na vrstvě oxidu křemičitého při použití směsi acetonu a chloroformu v poměru 2:3a pak rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu. Sloupec se promyje zrychlujícím se množstvím acetonu v chloroformu. Analytický vzorek se připraví rozpuštěním sloučeniny v bezvodém etheru o následným vysrážením petroletherem s teplotou varu 40 až 60 °C a s následnou lyofilisací sraženiny, čímž se ve výtěžku 12 % získá 0,082 g výsledného produktu ve formě bílého prášku s teplotou tání 76 až 81 °C.

Pro C₁₈H₁₇N₄O₆C1 . 1,20 H₂0 . 0,35 CgHgO vypočteno: 49,45 % C, 4,68 % H, 12,11 % N;

nalezeno: 49,78 % C, 4,38 % H, 11,88 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 40

6-methoxy-9-r 3,5-0-(1,2,3,3-tetraisopropyl-l,3-disiloxan-l,3-divl)-β-D-arabinofuranosyl1-9H-purin

1,0 g, 3,54 mmolu 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3 a 0,965 g, 14,2 mmolu imidazolu se rozpustí v 10 ml bezvodého dimethylformamidu a roztok se zchladí na teplotu 3 °C. Pak se přidá 1,35 ml, 3,90 mmolu 1,3-dichlor-l,1,3,3-tetraisopropyldisiloxanu a směs se míchá 3 hodiny v argonové atmosféře. Pak se reakčni směs smísí s 1 ml vody k ukončení reakce a pak se odpaří do sníženého tlaku. Odparek se dělí mezi 150 ml ethylacetátu a 50 ml vody, ethylacetátová vrstva se vysuší síranem hořečnatým, zfiltruje a odpaří. Surový produkt se smísí s ethylacetátem a čistí rychlou chromatografií na sloupci s rozměrem

2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu v ethylacetátu. Frakce s Rf = 0,70 při použití oxidu křemičitého a ethylacetátu se spojí, čímž se ve výtěžku 80 % získá 1,48 g výsledného materiálu ve formě bílé pevné látky. Spektrum v ultrafialovém světle v ethanolu má maximum při 248,4 nm. NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 41

6-methoxv-9-Γ 2-0-(2-aminobenzovl)-β-D-arabinofuranosyl-9H-purin

0,283 g, 1,0 mmolů 9-(β-D-arabinofuranosyl)-6-methoxy-9H-purinu z příkladu 3,15 ml acetonitrilu, 0,189 g 1,1 mmolů anhydridu kyseliny isatové a 84 mg, 1,0 mmolů hydrogenuhličitanu sodného se vloží do baňky se třemi hrdly a okrouhlým dnem, opatřené teploměrem, vstupem· pro argon, magnetickým míchadlem, kondenzátorem a zahřívací manžetou. Suspenze se zahřívá 3,5 hodiny na teplotu varu pod zpětným chladičem a pak se přidá druhý ekvivalent anhydridu kyseliny isatové. Směs se zahřívá ještě 1 hodinu na teplotu varu pod zpětným chladičem, pak se zchladí na teplotu místnosti, filtruje a.filtrát se odpaří na pěnovitou sklovitou hmotu. Tento odparek se čistí rychlou chromatografií na oxidu křemičitém při stoupajícím množství methanolu v chloroformu až do objemového poměru chloroformu k methanolu 9 : 1. Tímto způsobem se získá 53,1 mg 2'-esteru ve formě křehké sklovité pevné látky s teplotou tání 91 až 93 °C.

Pro · 0,3 H₂0 · 0,2 CH^O vypočteno: 52,90 % C, 4,98 % H, 16,95 % N;

nalezeno: 53,23 % C, 4,98 % H, 17,21 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 42

6-methoxy-9-r 2-(4-methvlbenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-l , 3-diyl )-β-D-arabinofuranosyl l-gří-purin

1,0 g, 1,9 mmol 6-methoxy-9-[3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purinu z příkladu 40 se přidá do okrouhlé baňky s obsahem 100 ml spolu s 0,02 g, 0,16 mmolů 4-dimethylaminopyridinu, 25 ml acetonitrilu a 0,4 ml triethylaminu a získaný roztok se chladí 5 minut na ledové lázni na teplotu 3 °C. Pak se přidá 0,30 ml, 2,3 mmolů toluylchloridu a směs se míchá 3 hodiny při teplotě 3 °c. Pak se přidá ještě 0,5 ml triethylaminu a 0,5 ml toluoylchloridu a směs se zahřeje na teplotu místnosti. Po 7 hodinách se směs smísí se 2 ml methanolu, odpaří se za sníženého tlaku a odparek se podrobí rychlé chromatografií na sloupci silikagelu s rozměrem 2,5 x 15 cm v methylenchloridu. Sloupec se vymývá 400 ml směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 10 : 1, čímž se ve výtěžku 74 % získá 0,90 g požadovaného výsledného produktu.

Pro C₃2_H₄gN₄O>7Si₂ vypočteno: 57,92 % C, 7,21 % H, 8,71 % N?

nalezeno: 57,69 % C, 7,43 % H, 8,40 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu.

Příklad 43

6-methoxy-9-Γ 2-( 4-methoxybenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-divl)-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin

1/0 9/ 1,9 mmol 6-methoxy-9-[3,5-0-(l,l,3',3-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosylj-9H-purinu z příkladu 40 se vloží do baňky s okrouhlým dnem o objemu 100 ml spolu s 0,02 g, 0,16 mmolu 4-dimethylaminopyridinu, 25 ml acetonitrilu a 0,4 ml triethylaminu, načež se přidá ještě 0,35 ml 2,5 mmolu anisoylchloridu. Po 4 hodinách při teplotě místnosti se k reakčni směsi přidají 2 ml methanolu a směs se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se podrobí rychlé chromatografií na sloupci s rozměrem

2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu při použití směsi methylen-’ chloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1. Sloupec se promývá tímtéž rozpouštědlem, čímž se ve výtěžku 74 % získá 0,930 g požadovaného produktu.

Pro CgfH₄OgSi2 · 0,35 H₂0 vypočteno: 55,97 % C, 7,08 % H, 8,42 % N;

nalezeno: 56,02 % C,. 7,01 % H, 8,32 % N.

Příklad 44

9-Γ 2-(4-chlorbenzoyl)-3,5-0-(1,1,3,3-tetraisopropyl-disiloxan-1,3-divl)-β-D-arabinofuranosyl1-6-methoxy-9H-purih

1,0 g, 1,9 mmolu 6-methoxy-9-[3,5-0-( 1,1,3,3 ,-tetraisopropyldisiloxan-1,3-diyl)-β-D-arabinofuranosyl]-9H-purinu z příkladu 40 se vloží do baňky s okrouhlým dnem s objemem 250 ml spolu se 0,2 g, 0,16 mmol 4-dimethylaminopyridinu, 25 ml acetonitrilu a 0,4 ml triethylaminu a roztok se chladí 5 minut na ledové lázni na teplotu 3 °C. Pak se přidá 0,31 ml, 2,5 mmolu 4-chlorbenzoylchloridu a reakčni směs se vyjme z ledové lázně. Po 8 hodinách při teplotě místnosti se ke směsi přidají 3 ml methanolu a směs se odpaří za sníženého tlaku. Odparek se rozpustí v methylenchloridu a nanese na sloupec pro rychlou chromatografií s rozměrem 2,5 x 15 cm s obsahem 25 g silikagelu v tomtéž rozpouštědle. Sloupec se promyje 200 ml methylenchloridu a pak 400 ml směsi methylenchloridu a methanolu čímž se ve výtěžku 82 % získá 1,05 g je homogenní při chromatografií na tenké vrstvě oxidu křemičitého při použití směsi methylenchloridu a methanolu v objemovém poměru 20 : 1 je R_f 0,44.

v objemovém poměru 20 : 1, výsledného produktu, který

Pro CgqH₄gN^OyCISi₂ vypočteno: 54,32 % C, 6,53 % H, 8,45 % N; nalezeno: 54,48 % C, 6,72 % H, 8,28 % N.

Příklad 45

5'-monofosfát 9-g-D-arabinofuranosvl-6~dimethvlamin-9H-purinu

5-monofosfát 9-p-D-arabinofuranosyl-6-dimethylamin-9H-purinu se syntetizuje přenosem terminální fosfátové skupiny adenosin 5'-trifosfátu (ATP) na 5'-OH skupinu v 9-p-D-arabinofuranosyl-6-dimethyl-amin-9H-purinu, postup je katalyzován thymidinkinázou (TK) z viru varicella zoster (VZV), postup-byl popsán v publikaci Fyfe, Molecular Pharmac. 21, 432, 1982.

K 0,5 ml, 0,02 M tris (hydroxymethyl)-aminomethan-HCl jako pufru o pH 7,5 se přidá 50 nmolu 9-p-D-arabinofuranosyl-6-d.imethylamin-9H-purinu, 55 nmolu ATP (Sigma Chemicals, St. Louis, MO), 55 nmolu chloridu hořečnatého a 0,005 jednotek VZV TK. Roztok se inkubuj„e 2,5 hodiny při teplotě 21 °C a pak se přefiltruje přes Centricon 10 (ZM-membrána s výsekem molekulové hmotnosti 10K, Amicon lne., Danvers, MA) k odstranění bílkoviny. Produkt se charakterizuje jako skvrna, absorbující ultrafialové světlo při chromatografií na tenké vrstvě, R_f je typické pro monofosfát.

Příklad 46

6-methoxypurinarabinosid-5-monofosfát

1/5 g, 4,9 mmolu 6-methoxypurinarabinofurosidu se rozpustí ve směsi 15 ml triethylfosfátu a 4,8 ml triethylaminu. Roztok se zchladí na -10 °C. Pak se za míchání přidá 0,91 ml oxychloridu fosforečného. Po 10 minutách se přidá ještě 0,3 ml oxychloridu fosforečného. Po dalších 10 minutách se reakce ukončí přidáním 100 ml ledového 0,5 M triethylaminu ve vodě, (obě látky byly dodány firmou Aldrich).

Složky reakční směsi se oddělí chromatografií na iontoměniói QAE-Sephadex (Pharmacia). Složky se vymývají při stoupajícím množství hydrogenuhličitanu amonného od 50 mM do l.M. 6-methoxypurinarabinosid-5¹-monofosfát tvořily pouze 10 % materiálu, vymytého do sloupce. K odstranění anorganického orthofosfátu bylo užito chromatografii na iontoměničové pryskyřici BioRad AG-1X8, přičemž bylo užito stoupajícího množství hydrogenuhličitanu amonného od 100 do 750 mM. Frakce s obsahem produktu byly odpařeny ve vakuu k odstranění zbytku hydrogenuhličitanu amonného a pak lyofilizovány.

Ve výtěžku 3 % bylo tímto způsobem získáno 0,13 mmol, 50 mg 6-methoxypurinarabinosid 5'-monofosfátu. Spektrum v ultrafialovém světle (maximum při 250 nm a minimum při 221 nm při pH 7) a poměr volné látky k fosfátu (1,00/1,08) jsou v souladu se strukturou předpokládaného produktu. Produkt bylo možno rozštěpit ha nukleosid alkalickou fosfatázou a 5' nukleotidázou.

Příklad 47

6-methoxypurinarabinosid-5-trifosfát mg, 93 μιηοΐ 6-methoxypurinarabinosid-5'-monof osf átu z příkladu 46 se rozpustí v 8 2 mg, 506 μπιοί karbonyldiimidazolu ve 2 ml amidu kyseliny hexamethylfosforečné a směs se míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Pak se přidá 0,032 ml, 800 μιηοΐ methanolu a směs se míchá 20 minut. Pak se ke směsi přidá 220 mg, 470 μιηοΐ tributylamoniumpyrofosfátu (Sigma) v roztoku v 1,5 ml amidu kyselinythexamethylfosforečné a směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Reakce se ukončí přidáním 50 ml vody. (Všechny reakční složky byly dodány firmou Aldrich). 5'-trifosfát byl čištěn chromatografii na iontoměniči QAE Sephadex A-25 (Pharmacia), sloupec se vymývá stoupajícím množstvím hydrogenuhličitanu amonného od 50 do 800 mM. Frakce s obsahem výsledné látky se odpaří ve vakuu k odstranění přebytku- hydrogenuhličitanu amonného, pak se znovu rozpustí ve vodě a skladují ve zmrazeném stavu při teplotě -20 °C.

Tímto způsobem se ve výtěžku 50 % získá 30 mg, 57 μιηοΐ 6-methoxypurinarabinosid-5'-trifosfátu. Spektrum v ultrafialovém světle (maximum při 250 nm a minimum při 223 nm při pH 7) a poměr volné látky a fosfátu (1,00/3,10) je v souladu se strukturou produktu. Produkt bylo možno rozštěpit na nukleosid alkalickou fosfatázou a na monofosfát fosfodiesterázou 1.

Příklad 48

6-dimethylamino-9-(2-0-valeryl-6-D-arabinosvl)-9H-purin

0,501 g, 1,67 μιηοΐ 6-dimethylaminopurinarabinosidu se rozpustí ve 20 ml pyridinu a 20 ml dimethylformamidu roztok se zahřeje na 4 °C a přidá se 0,43 ml, 2,17 mmolu anhydridu kyseliny valerové (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) v roztoku v 5 ml pyridinu a 5 ml dimethylformamidu. Roztok se zahřeje na 40 ⁰ C a po 2 hodinách se rozpouštědlo odpaří ve vakuu. Odparek se podrobí rychlé chromatografii na sloupci silikagelu s rozměrem

4,8 x 20 cm, přičemž se užije vždy 150 ml každé ze směsí dichlormethanu a methanolu v objemových poměrech 100 : 0, 98 : 2, 96 :4, 94 : 6, 92 : 8 a 90 : 10. Frakce s obsahem výsledného produktu se slijí a lyofilizují, čímž se získá 0,195 g výsledného 6-dimethylamino-9-(2-0-valeryl-p-D-arabinosyl)-9H-purinu. R_f je

0,55 při chromatografii na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi dichlormethano a methanolu v objemovém poměru 9:1.

Pro ^C17^H25^N5°5 ’ °'^{5 H}2° vypočteno: 52,57 % C, 6,75 % H, 18,03 % N;

nalezeno: 52,61 % C, 6,77 % H, 17,99 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou v souladu se strukturou produktu

Příklad 49

6-dimethylamino-9-(2,3,5-triacetyl-g-D-arabinosyl)-9H-purin

3,00 g, 10,0 mmolu 6-dimethylaminopurinarabinosidu se rozpustí ve 20 ml acetonitrilu a 45 ml pyridinu při teplotě 4 °C.

Pak se po kapkách přidá k reakční směsi 2,85 ml, 40,08 mmolů ace39 tylchloridu (Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI) v 7 ml acetonitrilu. Po 5 hodinách se rozpouštědlo odpaří ve vakuu při teplotě do 45 °C a odparek se uloží na 24 hodin do vakua pod čerpadlem. Vysušený odparek se pak podrobí rychlé chromatografií na sloupci silikagelu s rozměrem 4,8 x 25 cm při použití směsi dichlormethanu a methanolu v objemovém poměru 9:1. Frakce s obsahem produktu se slijí a lyofilizují, čímž se získá 0,445 g 6-dimethyl amino-9-(2,3,5-triacetyl-p-D-arabinosyl)-9H-purinu. R_f 0,61 při chromatografií na tenké vrstvě silikagelu při použití směsi dichlormethanu a methanolu v objemovém poměru 9:1.

Pro ^ci8^H23^N5°7 vypočteno: 51,30 % C, 5,50 % H, 16,62 % N;

nalezeno: 51,40 % C, 5,55 % H, 16,54 % N.

NMR-spektrum a hmotová spektrometrie jsou· v souladu se strukturou produktu.

Příklad 50

Způsob výroby tablet

Následující tabulky A a B byly připraveny granulaci uvedených složek za vlhka při použití roztoku polyvinylpyrolidonu s následujícím přidáním stearanu hořečnatého a lisováním.

Tablety A

složka	mq/tableta	mq/tableta
a) účinná složka	250	250
b) laktosa	210	26
c) polyvinylpyrolidon	15	9
d) dosná sůl glykolátu škrobu	20	12
e) stearan hořečnatý	5	3
	500	300

Tablety B složka_ mq/tableta_mq/tableta

a) účinná složka	250	250
b) laktosa	150	-
c) Avicel PH 101	60	26
d) polyvinylpyrolidon	15	9
e) sodná sůl glykolátu škrobu	20	12
f) stearan hořečnatý	5	3
	500	300
Tablety C
složka	mq/tableta
účinná složka	100
laktosa	200
škrob	50
polyvinylpyrolidon	5
stearan hořečnatý	4
Tablety se připravují ve	359 složení C granulaci	za vlhka

následným lisováním.

V následujících tabletách D a E se produkt připravuje přímým lisováním složek. Laktosa v tabletách E je produkt, přímo určený pro lisování (Dairy Crest - Zparox).

Tablety D složka__mg/kapsle

250

150 účinná složka předem gelatizovaný škrob

400

Tablety E složka mg/tablety účinná složka laktosa

Avicel

250

150

100

500

Tablety F

Tyto tablety s řízeným uvolňováním účinné látky se připravují tak, žé se za vlhka granulují uvedené složky při použití roztoku polyvinylpyrolidonu s následným přidáním stearanu hořečnatého a lisováním.

složka__mg/tableta

a) účinná složka 500

b) hydroxypropylmethylcelulosa (Methocel K4M Fremium 112

c) laktosa 53

d) polyvinylpyrolidon 28

e) stearan hořečnatý 7

700

Převážná část účinné látky se uvolňuje v průběhu 6 až 8 hodin, veškeré množství účinné látky se uvolní do 12 hodin. Příklad 51

Způsob výroby kapslí

Kapsle A

Tyto kapsle se připraví tak, že se smísí složky pro tablety D z příkladu 50 a směs se plní do dvoudílných kapslí z tvrdé želatiny. Dále uvedené kapsle D se připravují stejným způsobem.

Kapsle B složka_,_mg/kapsle

a) účinná složka 250

b) laktosa 143

c) sodná sůl glykolátu škrobu 25

d) stearan hořečnatý 2

420

Kapsle C složka______mg/kapsle

a) účinná složka 250

b) Macrogol 4000 350

600

Kapsle se připravují tak, že se Macrogol 4000 roztaví, účinná látka se disperguje v tavenině a tavenina se plní do dvoudílných kapslí z tvrdé želatiny.

Kapsle D složka_;_mg/kapsle účinná složka 250 lecithin 100 arašídový olej 100

450

Kapsle se připravují tak, že se účinná složka disperguje v lecithinu a arašídovém oleji a výsledná disperse se plní do měkkých kapslí z elastické želatiny.

Kapsle E

Tato kapsle s řízeným uvolňováním účinné látky se připravuje tak, že se složky a, b, c vytlačují příslušným zařízením, vytlačený materiál se upraví do částic kulovitého tvaru a usuší. Usušené palety se pak povlékají membránou ze složky d pro řízené uvolňování účinné látky a plní se do dvoudílných kapslí z tvrdé želatiny.

složka__mg/kapsle

a)	účinná složka	250
b)	mikrokrystalická celulóza	125
c)	laktosa	125
d)	ethylceluloza	13

513

Příklad 52

Oční kapky účinná složka 0,5 g chlorid sodný, analyticky čistý 0,9 g

Thiomersal 0,001 g čištěná voda do 100 ml úprava pH do 7,5

Příklad 53

Roztok pro injekční podání účinná složka 0,200 g sterilní, bezpyrogenní fosfátový pufr o pH 9,0 do 10 ml

Účinná složka se rozpustí ve většině fosfátového pufru při teplotě 35 až 40 °C, pak se objem doplní a zfiltruje sterilním mikroporésním filtrem do sterilní lékovky z tmavého skla s objemem 10 ml (typ 1) a lékovka se uzavře sterilním uzávěrem a krytem.

Příklad 54

Roztok pro nitrosvalové podání účinná složka benzylalkohol

Glykofurol 75 voda pro injekční podání

0,20 g

0,10 g 1,45 g do 3,00 ml

Účinná složka se rozpustí v glykofurolu. Pak se přidá benzylalkohol a rozpustí a do 3 ml se směs doplní vodou. Pak se směs zfiltruje sterilním mikroporézním filtrem a uzavře do sterilních lékovek z tmavého skla s objemem 3 ml (typ 1).

Příklad 55

Sirup (suspenze) účinná složka roztok sorbitolu

0,25 g

1,50 g glycerol dispergovatelná celulóza benzoát sodný broskvová příchuť 17.42.3169 čištěná voda do

2,00 g

0,075 g

0,005 g

0,0125 ml 5,00 ml

Benzoát sodný se rozpustí v části čištěné vody a přidá se roztok sorbitolu. Pak se přidá a disperguje účinná složka. Pak se zahušřovadlo, kterým je dispergovatelná celulóza disperguje v glycerolu. Obě disperze se smísí a doplní se vodou na požadovaný objem. Je možno přidat další zahušfovadlo.

Příklad 56

Výroba čípků složka_;__mg/čípek účinná složka (63 μη)^χ 250 tuhý tuk (Witepsol H15- Dynamit NoBel) 1 700.

950 ^xÚčinná složka se užije ve formě prášku, v němž alespoň 90 % částic má průměr 63 μη nebo nižší.

Pětina prostředku Witepsol H15 se roztaví v nádobce se zahřívací parní manžetou na teplotu 45 °C. Účinná složka se nechá projít sítem s průměry otvorů 200 μη a za míchání se přidá do roztaveného základu do vzniku disperze. Při udržování získané směsi na teplotě 45 °C se přidá zbývající Bitepsol H15 a výsledná suspenze se dále míchá až do zajištění homogenity. Pak se suspenze nechá projít sítem z nerezové oceli s průměrem otvorů 250 μη, načež se za stálého míchání nechá zchladnout na teplotu 40 °C.

Pak se při teplotě v rozmezí 38 až 40 °C plní vždy 2,02 g této směsi plní do vhodných forem z plastické hmoty. Vzniklé čípky se nechají zchladnout na teplotu místnosti.

Příklad 57

Způsob výroby pesarů složka_mg/pesar účinná složka 63 μιη 250

380 bezvodá dextrosa bramborový škrob

363 stearan hořečnatý

1000

Shora uvedené složky se přímo mísí a připraví se pesary přímým vylisováním z takto získané směsi.

Příklad 58

Protivirová účinnost a biologická dostupnost

Stanovení účinnosti proti proti viru Varicella-Zoster

Inhibiční účinky účinných látek, získaných způsobem podle vynálezu na VZV (kmen Oka) byly stanoveny při použití postupu ELISA, který byl uveden v publikaci Berkowitz F. E a Levin M. J. 1985, Antimicrob. Agents and Chemother. 28, 207 - 210, postup byl modifikován následujícím způsobem. Infekce byla prováděna již za přítomnosti drogy a nikoliv před jejim podáním. Na konci třetího dne inkubace drogy a viru s neinfikovanými buňkami (lidské diplaidní fibroblasty kmene MRC-5), byly plotny s 96 vyhloubeními odstředovány 5 minut při 200 x g k usazení buněk před fixací glutaraldehydem. Použitá zkouška ELISA obsahovala jako druhou protilátku proti lidskému IgG, konjugovanou s alkalickou fosfatázou. Míra štěpení p-nitrofenylfosfátu vázanou alkalickou fosfatázou byla stanovena způsobem podle publikace Tadepalli S. Μ., Quinn R. Ρ., a Averett D. R., 1986, Antimicrob. Agents and Chemother. 29,

- 98. K. získání slepých zkoušek byly užity neinfikované buňky. Výsledky slepých zkoušek byly pak odečteny od výsledků, získaných za přítomnosti viru. Touto zkouškou bylo možno prokázat množení viru v kulturách, které byly na počátku infikovány množstvím 15 až 3600 infekčních částic na jedno vyhloubení.

Stanovení inhibice růstu neinfikovanvch buněk savců

Schopnost sloučenin, získaných způsobem podle vynálezu způsobit inhibici růstu buněk D98 (lidský kmen) a L-buněk (myší kmen) byla měřena stanovením počtu buněk po třídenní epozici tak, že standardní množství buněk bylo vystaveno různým zředěním použité látky způsobem podle publikace Rideout J. L., Krenitsky

T. A., Koszalka G. W. , Cohn N. K., Chao E.Z., Elion G. Β., Latter V. S., a Williams R. B. (1982), J. Med. Chem. 25., 1040 až 1044. Výsledný počet buněk se pak srovnává s počtem buněk, získaným v nepřítomnosti sloučeniny. Počítání buněk bylo prováděno buď přímým počítáním po působení trypsinu na souvislou vrstvu buněk nebo spektrofotometrickým stanovením množství barviva, přijatého živými buňkami. Oběma postupy bylo možno získat srovnatelné výsledky .

Analýza získaných údajů

Koncentrace sloučeniny, při jejímž použití dojde k 50 % snížením vzhledem ke kontrole (IC₅₀) se vypočítá buď přímou interpolací z grafů, na něž se nanese logaritmus koncentrace sloučeniny proti kontrolním hodnotám v procentech nebo na základě počítačového programu, který analyzuje získané údaje podle téhož algoritmu. Při těchto výpočtech byly užity údaje s hodnotou 20 až 80 % kontrolních hodnot.

CS 277006 Βδ

Získané výsledky jsou uvedeny v následující tabulce:

buněčná toxicita příklad VZV (IC₅₀ μπι) (% kontroly při 100 μπι) buňky D98 L-buňky

1	3	93	87
2	1	85	69
3	0,8	96	72
4	6	107	97
5	1	50	50
6	3	.61	47
kontrola (Acyklovir)	20	100	50

Zkouška na biologickou dostupnost

Dvěma krysám kmene Long-Evans byla podána účinná látka žaludeční sondou v dávce 10 g/kg sloučeniny z příkladu 3 nebo molární ekvivalent sloučeniny z příkladů 16, 24 a 32. Zvířata byla uložena do metabolických klecí a moč byla sbírána po dobu 0, až 24 až 48 hodin po podání a analyzována vysokotlakou kapalinovou chromatograf ii v reversní fázi. Výsledky jsou uvedeny v procentech dávky, získané z moči do 48 hodin, přepočteno na sloučeninu z příkladu 3.

Dříklad	% dávky
3	4,9/2,5
16	11,7
24	7,9
32	15,9

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1) R₂ znamená atom vodíku a

R^ představuje methoxyskupinu, piperidinoskupinu nebo pyrrolidinoskupinu nebo

1. Deriváty purinu obecného vzorce la kde

R-j_ znamená atom halogenu, alkoxyskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku, alkoxyskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou atomem halogenu, aminoskupinu, která je substituována jednou nebo dvěma alkylovými skupinami o 1 až 5 atomech'uhlíku, alkylovou skupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou jedním nebo větším počtem atomů fluoru, cykloalkylovou skupinu o 3 až 6 atomech uhlíku nebo aminoskupinu, která je členem kruhu s obsahem 4 až 7 atomů uhlíku a popřípadě dvojné vazby a/nebo dalšího atomu dusíku a

R₂ znamená atom vodíku, atom halogenu nebo aminoskupinu, za předpokladu, že pokud není sloučeninou fyziologicky přijatelný derivát, potom v případě, že R₂ znamená atom vodíku, má R]_ odlišný význam od atomu chloridu, methoxyskupiny, methylaminoskupiny, ethylaminoskupiny, dimethylaminoskupiny, piperidinového nebo pyrolidinového zbytku a v případě, že R₂ znamená aminoskupinu, má R-j_ odlišný význam od atomu chloru nebo methylaminoskupiny, jakož i derivátů těchto látek, přijatelných z fyziologického hlediska s výjimkou 2',3',5'-triacetátu a 2',3',5'-tribenzylového derivátu sloučenin obecného vzorce la, v němž R-j_ znamená atom chloru nebo fluoru v případě, že R₂ znamená atom chloru, fluoru, vodíku nebo aminoskupinu.

2) R₂ znamená aminoskupinu a

R-j_ představuje atom chloru nebo jejího farmaceuticky přijatelného derivátu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení nebo profylaxi virových infekcí člověka, způsobených virem varicella zoster nebo cytomagalovirem.

2. Farmaceuticky přijatelné estery arabinocukrového zbytku sloučeniny obecného vzorce I a, definované v nároku 1, zvolené z esterů karboxykyselin, ve kterých nekarbonylová část esterového seskupení je přímý nebo rozvětvený alkylový, alkoxyalkylový, aralkylový, aryloxyalkylový nebo arylový zbytek, popřípadě substituovaný atomem halogenu, alkylovou skupinou o 1 až

3. Farmaceuticky přijatelné estery podle nároku 2 9-p-D-arabinof uranosyl-6-methoxy-r9H-purinu.

4. Estery sloučeniny obecného vzorce Ia podle nároku 3, zvolené z 9-[-5-0-(4-methylbenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy- 9H-purinu,

4 atomech uhlíku, alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku, nitroskupinou nebo aminoskupinou, esterů sulfonových kyselin, jako je alkylsulfonylový nebo alkarylsulfonylový zbytek; esterů aminokyselin a mono-, di- nebo triesterů kyseliny fosforečné.

5. Způsob výroby sloučeniny podle nároku 1, vyznačující se tím, že se

A. uvede reakce sloučenina obecného vzorce II il kde R-j. ^{a r}2 shora uvedený význam, vzorce III se sloučeninou obecného (III) ,

X znamená zbytek pyrimidinové nebo od sloučeniny obecného vzorce II, purinové báze, odlišné nebo

Β.

uvede do reakce sloučenina obecného vzorce IV kde

Z znamená snadno odštěpitelnou skupinu a

R₂ má shora uvedený význam, se sloučeninou, schopnou včlenit požadovanou skupinu do polohy 6, načež se popřípadě současně nebo následně v případě, že se získá sloučenina obecného vzorce Ia, přivede tato látka na svůj derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska nebo v případě, že výsledným produktem je derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska, převede se tento derivát na jiný derivát, přijatelný z farmaceutického hlediska nebo na volnou sloučeninu obecného vzorce Ia.

6. Farmaceutický prostředek pro léčení nebo profylaxi infekcí způsobených virem varicella zoster nebo cytomegalovirem, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje sloučeninu obecného vzorce Ia, definovanou v nároku 1, s nosičem této sloučeniny, který je přijatelný z farmaceutického hlediska.

6-methoxy-9-(2-0-pentanoyl^-D-arabinofuranosyl)-9H-purinu.

7. Použití sloučeniny obecného vzorce Ia r;

OH (Ia) , kde

R^ znamená alkoxyskupinu obsahující 1 až 5 atomů uhlíku, atom halogenu, alkoxyskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou atomem halogenu, aminoskupinu substituovanou jednou nebo dvěma alkylovými skupinami o 1 až 5 atomech uhlíku, dále alkylovou skupinu o 1 až 5 atomech uhlíku substituovanou jedním nebo dvěma atomy fluoru, cykloalkylovou skupinu o 3 až 6 atomech uhlíku nebo aminoskupinu, která je členem kruhu s obsahem 4 až 7 atomů uhlíku a popřípadě obsahem dvojné vazby a/nebo dalšího atomu dusíku,

R₂ znamená atom vodíku, atom halogenu nebo aminoskupinu, nebo jejího derivátu přijatelného z fyziologického hlediska, definovaných v některém z nároků 1 až 4, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení nebo profylaxi virových infekcí člověka, způsobovaných virem varicella zoster nebo cytomegalovirem.

8. Použití sloučeniny podle nároku 7, ve které

R-j. představuje atom vodíku a

R₂ znamená alkoxyskupinu o 1 až 5 atomy uhlíku, alkylaminoskupinu o 1 až 5 atomech uhlíku nebo atom halogenu, pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení nebo profylaxi virových infekcí člověka, způsobených virem varicella zoster nebo cytomegalovirem.

9. Použití sloučeniny obecného vzorce Ia podle nároku 7, ve kterém

9-[5-0-(4-aminobenzoyl)-β-D-arabinofuranosyl]-6-methoxy-9H-purinu a

10. Použití 9-3-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purinu nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčeni nebo profylaxi virových infekcí člověka, způsobených virem varicella zoster nebo cytomegalovirem.

11. Použití 9-p-D-arabinofuranosyl-6-dimethylamino-9H-purinu nebo jeho farmaceuticky přijatelného derivátu pro výrobu farmaceutického prostředku k léčení nebo profylaxi virových infekcí člověka, způsobených virem varicella zoster nebo cytomegalovirem.