CN1582156A - 眼新血管疾病的治疗方法 - Google Patents

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Abstract

本说明书公开了使用抗－VEGF疗法与第二种疗法的联合疗法治疗眼新血管疾病的方法，所述的第二种疗法抑制眼新血管形成的发生或破坏眼内的异常血管，诸如光动力疗法。

Description

眼新血管疾病的治疗方法
发明领域
本发明涉及使用抑制VEGF的活性剂治疗眼新血管形成的方法。
发明背景
血管生成或异常血管生长在包括眼科学、癌症和风湿病学在内的许多医学领域中被视为病理情况的主要原因。例如，与年龄相关的黄斑变性(AMD)的渗出性或新血管形式是中老年人失明的主要原因。目前没有标准而有效的治疗大多数患者渗出性ADM的疗法。已经证实热激光光凝术和光动力疗法(PDT)对小群体的这类患者有益。然而，仅有部分眼满足这类治疗干预的合格标准且那些经这类治疗的患者具有高复发率。
近期的前期临床研究已经提示药物干预或抗血管生成疗法可以用于治疗各种形式的眼新血管形成，诸如脉络膜新血管形成(CNV)。这项工作中绝大部分已经集中在阻断血管内皮生长因子(VEGF)，它与AMD继发的CNV的发病机制和糖尿病性视网膜病的发病机制有关。VEGF是涉及血管生成的重要细胞生长因子且看起来在眼新血管形成发生过程中起关键作用。人体研究已经证实在血管生成性视网膜病玻璃体中存在高浓度的VEGF且并非失活形式或非新血管形成性疾病状态。在实验性黄斑下手术后切下的人CNV也表现出高VEGF水平。其它研究已经证实使用不同类型的抗-VEGF剂、包括抗体片段可以使几种动物模型中的多血管床上的新血管形成消退或防止。因此，抗-VEGF疗法是有希望的治疗AMD、糖尿病性视网膜病和相关疾病的新疗法。
除潜在的抗血管生成作用外，抗-VEGF疗法还可以作为抗通透性剂使用。VEGF最初因其诱导从血管中渗漏的有效能力而称作血管通透因子。近期研究已经证实VEGF可能是导致糖尿病性视网膜病中血管渗漏的重要因素且糖尿病诱发的血液-视网膜屏障的破坏可以以剂量依赖性方式受到抗-VEGF疗法的抑制。抗-VEGF疗法由此可以通过其抗血管生成和抗通透性代表对CNV的双刃攻击。
现有的眼新血管疾病的治疗方法需要改善它们抑制或消除不同形式新血管形成、包括AMD和糖尿病性视网膜病继发的脉络膜新血管形成的能力。此外，对鉴定治疗眼新血管形成的新疗法存在持续和明显的需求。本发明满足了这些需求且进一步提供了其它相关的优点。
发明概述
我们已经在患有与年龄相关的黄斑变性继发的凹下性(subfoveal)脉络膜新血管形成的患者中进行了抗-VEGF适体与和不与光动力疗法联用的临床试验以测定多重注射疗法的安全性。我们发现抗-VEGF疗法与或不与光动力疗法(PDT)联用在治疗患有AMD和相关疾病的患者中均是安全而有效的。大部分接受抗-VEGF适体的患者在治疗后3个月表现出稳定或改善的视力。那些接受抗-VEGF疗法与PDT联合疗法的患者在视力上表现出最显著的改善。因此，抗-VEGF疗法单独或与抗血管生成疗法联合使用显然是各种形式的眼新血管形成、包括AMD和糖尿病性视网膜病的有希望的治疗方法。
因此，本发明的特征在于患有眼新血管疾病的患者的治疗方法，该方法包括下列步骤：(a)对所述患者给药有效量抗-VEGF适体；和(b)给所述患者提供光线疗法，诸如光动力疗法或热激光光凝术。
在本发明的一个实施方案中，所述的光动力疗法(PDT)包括下列步骤：(i)将光敏剂转运至患者的眼组织；和(ii)使所述的光敏剂与具有被该光敏剂所吸收波长的光接触足以抑制患者眼组织中新血管形成的时间和强度。可以使用各种光敏剂，包括、但不限于苯并卟啉衍生物(BPD)、单天冬氨酰二氢卟酚e6、酞菁锌、初紫红素锡、四羟基四苯基卟啉和porfimersodium(PHOTOFRIN)以及绿卟啉类。
本发明在相关方面中提供了患者眼新血管疾病的治疗方法，该方法包括对所述患者给药：(a)有效量抗-VEGF适体；和(b)能够减少或预防不需要的新脉管***发生的第二种化合物。抗-VEGF剂或其它可以与抗-VEGF适体联用的化合物包括、但不限于：对VEGF具有特异性的抗体或抗体片段；对VEGF受体具有特异性的抗体；抑制、调节和/或调制酪蛋白激酶信号转导的化合物；VEGF多肽类；抑制核酸水平上的VEGF表达的寡核苷酸，例如反义RNAs；类视色素；含有生长因子的组合物；结合胶原蛋白的抗体；和具有血管生成抑制活性的各种有机化合物和其它活性剂。
在本发明的优选实施方案中，所述的抗-VEGF剂是血管内皮生长因子(VEGF)的核酸配体。VEGF核酸配体可以包括核糖核酸、脱氧核糖核酸和/或修饰核苷酸。在特别优选的实施方案中，所述的VEGF核酸配体包括：2′F-修饰核苷酸；2′-O-甲基(2′-OMe)修饰核苷酸；和/或聚(亚烷基)二醇，诸如聚乙二醇(PEG)。在某些实施方案中，用例如硫代磷酸这样与未修饰的核酸配体相比降低所述核酸配体上内切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修饰所述的VEGF核酸配体，但不会对该配体的结合亲和性产生不良影响。
本发明在另一个方面中提供了患者眼新血管疾病的治疗方法，该方法包括下列步骤：(a)对所述患者给药有效量的抑制眼新血管形成发生的活性剂，例如抗-VEGF适体；和(b)给所述患者提供破坏眼中异常血管的疗法，例如PDT。
可以经眼球内注入眼内给药抗-VEGF适体。另一方面，可以使用眼内植入物给药适体。
可以将本发明的方法用于治疗各种新血管形成疾病，包括、但不限于局部缺血性视网膜病、眼内新血管形成、与年龄相关的黄斑变性、角膜新血管形成、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增生性糖尿病性视网膜病。
从下面的详细描述和权利要求中显然可以看出本发明的其它优点和特征。
定义
所谓″眼新血管疾病″指的是特征在于眼新血管形成、即患者眼内发生异常血管的疾病。
所谓″患者″指的是具有可能发生新血管形成的眼组织的任意动物。优选所述的动物是哺乳动物，包括、但不限于人和其它灵长类。该术语还包括驯养动物，诸如牛、猪、绵羊、马、狗和猫。
所谓″光线疗法″指的是患者接触特定剂量的特定波长的光，包括激光以治疗疾病或其它医学疾患的任意方法或步骤。
所谓″光动力疗法″或″PDT″指的是使用本文称作光敏剂的光活化药物或化合物治疗疾病或其它医学疾患的任意形式的光线疗法，所述的疾病或其它医学疾患的特征在于组织快速生长，包括异常血管快速生长(即血管生成)。一般来说，PDT是包括局部或全身给药光敏剂于患者、随后通过用特定剂量的特定波长的光照射使光敏剂活化的两步法。
所谓″抗-VEGF剂″指的是抑制血管内皮生长因子(″VEGF″)活性或产生的化合物。
所谓″光敏剂″或″光活化剂″指的是吸收光的药物或其它化合物，其在接触特定波长的光时被活化，由此提高所需的生理作用、例如消弱或破坏不需要的细胞或组织。
所谓″热激光光凝术″指的是光线疗法的形式，其中使激光射线直接射入患者的眼以便烧灼眼中的异常血管，从而封闭它们以防止进一步渗漏。
所谓″有效量″指的是足以治疗眼新血管疾病症状的用量。
本文所用的术语″光″包括所有波长的电磁射线，包括可见光。优选对辐射波长进行选择以便与激发光敏剂的波长相匹配。甚至更优选辐射波长与光敏剂的激发波长相匹配并对非靶组织而言具有低吸收。
附图简述
图1是抗-VEGF剂NX1838的化学结构。
发明详细描述
VEGF(血管内皮生长因子)是眼内新血管生长的重要刺激物。我们已经发现抗-VEGF疗法为新血管疾病提供了安全而有效的疗法，尤其是当将它与能够减少或消除眼新血管形成的第二种疗法、诸如光动力疗法(PDT)联用时更是如此。我们发现这些疗法联用对特征在于不需要的眼新血管***发生的疾病的治疗条件远优于最常用的疗法，包括单独使用这些疗法之一。
因此，本发明提供了治疗眼新血管疾病的方法，该方法包括对患者给药抗-VEGF剂并与光线疗法(例如PDT)或与其它疗法、诸如破坏眼中异常血管的光凝固术一起治疗患者。可以将该方法用于治疗以发生眼新血管形成为标志的许多眼科疾病和疾患，包括、但不限于局部缺血性视网膜病、眼内新血管形成、与年龄相关的黄斑变性、角膜新血管形成、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增生性糖尿病性视网膜病。
抗-VEGF疗法
抑制VEGF活性或产生的各种抗-VEGF疗法，包括适体和VEGF抗体是可得到的且可以用于本发明的方法中。优选的抗-VEGF剂是诸如下列文献中所述的那些VEGF的核酸配体：美国专利US 6,168,778 B1；US 6,147,204；US 6,051,698；US 6,011,020；US 5,958,691；US 5,817,785；US 5,811,533；US 5,696,249；US 5,683,867；US 5,670,637；和US 5,475,096。特别优选的抗-VEGF剂是EYE001(上文称作NX1838)，它是与主要的可溶的人VEGF同种型高亲和性结合并具有附图1中所示一般结构的修饰的聚乙二醇化的适体(描述在美国专利US 6,168,788、Journal of Biological Chemistry，273 Vol(32)：20556-20567(1998)和In Vitro Cell Dev.Biol.-Animal 35：533-542(1999)中)。
另一方面，所述的抗-VEGF剂例如可以是诸如美国专利US 6,100,071、US 5,730,977和WO 98/45331中所述的那些VEGF抗体或抗体片段。可以与本发明抗-VEGF剂联用的其它合适的抗-VEGF剂或化合物包括、但不限于：对VEGF受体具有特异性的抗体(例如美国专利US 5,955,311、US 5,874,542和US 5,840,301)；抑制、调节和/或调制酪蛋白激酶信号转导的化合物(例如美国专利US 6,313,138 B1)；VEGF多肽类(例如美国专利US 6,270,933 B1和WO 99/47677)；抑制核酸水平上的VEGF表达的寡核苷酸，例如反义RNAs(例如美国专利US 5,710,136；US 5,661,135；US 5,641,756；US5,639,872；和5,639,736)；类视色素(例如美国专利US 6,001,885)；含有生长因子的组合物(例如美国专利US 5,919,459)；结合胶原蛋白的抗体(例如WO00/40597)；和具有血管生成抑制活性的各种有机化合物和其它活性剂(例如美国专利US 6,297,238 B1；US 6,258,812 B1；和US 6,114,320)。
抗-VEGFA剂的给药
一旦将患者诊断为眼新血管疾病，则通过给药抗-VEGF剂治疗患者以阻断VEGF的副作用，由此缓解与新血管形成相关的症状。如上所述的各种抗-VEGF剂在本领域中是公知的且可以用于本发明。这些抗-VEGF剂的制备方法也是众所周知的且许多是商购药物。
可以全身给药、例如通过口服或通过IM或IV注射给药混有适合于给药途径的药物上可接受载体的抗-VEGF剂。可以将各种生理上可接受的载体用于给药所述的抗-VEGF剂且其制剂是本领域技术人员所公知的且例如描述在Remington′s Pharmaceutical Sciences 18th，ed.A.Gennaro，1990，MackPublishing Company，Easton，PA和PoUock等。
优选通过非肠道给药所述的抗-VEGF剂(例如通过肌内、腹膜内、静脉内、眼内、玻璃体内或皮下注射或植入物)。非肠道给药制剂包括无菌的水溶液或非水溶液、混悬液或乳剂。可以使用各种含水载体，例如水、缓冲水、盐水等。其它适宜载体的实例包括聚丙二醇、聚乙二醇、植物油、明胶、氢化naphalene和可注射的有机酯类，诸如油酸乙酯。这类制剂还可以含有辅助物质，诸如防腐剂、湿润剂、缓冲剂、乳化剂和/或分散剂。可以使用生物相容性的可生物降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物以便控制活性组分释放。
另一方面，可以通过口服摄取给药抗-VEGF剂。可以按照本领域中所公知的用于制备药物组合物的任意方法用于口服应用的组合物制备成固体或液体剂型。该组合物可以任选含有增甜剂、调味剂、着色剂、香料和防腐剂以便提供更适口的制剂。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。一般来说，这些药物制剂含有活性组分与无毒性的药物上可接受赋形剂的混合物。这些无毒性的药物上可接受赋形剂可以包括：例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇、纤维素、淀粉、磷酸钙、磷酸钠等。还可以使用粘合剂、缓冲剂和/或润滑剂(例如硬脂酸镁)。还可以用肠溶包衣材料制备片剂和丸剂。
用于口服给药的液体剂型包括药物上可接受的乳剂、溶液、混悬液、糖浆剂和软胶囊。这些剂型含有本领域中常用的惰性稀释剂、诸如水或油介质且还可以包括佐剂、诸如湿润剂、乳化剂和悬浮剂。
还可以通过局部、例如通过贴剂或通过直接施用在眼部或通过离子电渗疗法给药所述的抗-VEGF剂。
可以将抗-VEGF剂制成缓释组合物，诸如：例如美国专利US5,672,659和US 5,595,760中所述的那些缓释组合物。即刻释放组合物或缓释组合物的应用取决于所治疗疾病的性质。如果疾病是急性或过度急性的，那么优选用即刻释放组合物而不是使用延长释放组合物治疗。另一方面，就某些预防性或长期治疗而言，缓释组合物可能是适宜的。
还可以使用眼内植入物转运所述的抗-VEGF剂。这类植入物可以是可生物降解的和/或生物相容性的植入物或可以是不可生物降解的植入物。这些植入物可以透过或不能透过活性剂且可以将它们***眼房、诸如前房或后房或可以植入巩膜、跨脉络膜空间或玻璃体外的无血管化区域。在优选的实施方案中，将植入物放置在无血管区域上、诸如巩膜上以使药物跨巩膜扩散至所需治疗部位，例如眼内空间和眼中的黄斑。此外，优选使跨巩膜扩散的部位接近黄斑。
用于转运抗-VEGF剂的植入物的实例包括、但不限于下列文献中所述的装置：美国专利US 3,416,530；US 3,828,777；US 4,014,335；US 4,300,557；US 4,327,725；US 4,853,224；US 4,946,450；US 4,997,652；US 5,147,647；US 5,164,188；US 5,178,635；US 5,300,114；US 5,322,691；US 5,403,901；US 5,443,505；US 5,466,466；US 5,476,511；US 5,516,522；US 5,632,984；US 5,679,666；US 5,710,165；US 5,725,493；US 5,743,274；US 5,766,242；US 5,766,619；US 5,770,592；US 5773,019；US 5,824,072；US 5,824,073；US 5,830,173；US 5,836,935；US 5,869,079；US 5,902,598；US 5,904,144；US 5,916,584；US 6,001,386；US 6,074,661；US 6,110,485；US 6,126,687；US 6,146,366；US 6,251,090；和US 6,299,895；以及WO01/30323和WO01/28474，将所有这些文献引入本文作为参考。
剂量
与载体物质合并使用以产生单剂量的活性组分用量随所治疗受试者和特定给药方式的不同而改变。一般来说，应给药足以减少或消除眼新血管疾病症状的用量的抗-VEGF剂。
将约1μg/kg-100mg/kg体重/给药的剂量水平用于治疗上述新血管疾病。当直接对眼部给药时，每只眼优选的剂量范围在约0.3mg-约3mg。可以将该剂量以单剂量或分成多次剂量给药。一般来说，应在设定的间隔给药所需剂量，持续延长期限，通常至少为几周，不过，可能需要几个月或几个月以上的较长给药期限。
本领域技术人员会理解可以适当调整个体的确切剂量，这取决于各种因素，包括所给药的具体的抗-VEGF剂、给药时间、制剂的性质、***率、所治疗的特定疾病、该疾病的严重程度和患者的年龄、体重、健康状况和性别。根据不同给药途径的不同效率预计所需剂量的广泛变化。例如，一般预计口服给药需要高于通过静脉内或玻璃体内注射给药的剂量水平。可以使用本领域中众所周知的最优化标准经验途径调整这些剂量水平的变化。优选由参与的临床医师根据上述确定因素决定精确的治疗有效剂量水平。
除治疗预先存在的新血管疾病外，还可以以预防方式给药抗-VEGF剂以便预防或减缓这些疾病的发作。在预防性应用中，对易感，或就是处于特定新血管疾病危险中的患者给药抗-VEGF剂。此外，所给药的确切用量取决于各种因素，诸如患者的健康状况、体重等。
抗-VEGF疗法的有效性
为了评价抗-VEGF疗法治疗眼新血管形成的有效性，我们进行了下面实施例中所述的大量研究，包括对患有与年龄相关的黄斑变性继发的凹下性(subfoveal)脉络膜新血管形成的患者给药抗-VEGF适体与和不与光动力疗法联用。对患有与年龄相关的黄斑变性(AMD)继发的凹下性(subfoveal)脉络膜新血管形成(CNV)的患者进行的抗-VEGF疗法的1A期单一玻璃体内注射研究显示出极佳的安全性分布(实施例6)。眼部评价显示在治疗后3个月有80％的患者表现出稳定或改善的视力且27％的眼在该时间期限时在ETDRS图上显示出3-线或3-线以上的视力改善。没有报导存在局部或全身的显著相关不良反应。这些数据证实抗-VEGF疗法是治疗包括渗出性黄斑变性和糖尿病性视网膜病在内的眼新血管疾病的有希望的新途径。
我们还对患有AMD继发的凹下性(subfoveal)CNV患者进行了使用多次玻璃体内注射抗-VEGF适体的抗-VEGF疗法与或不与光动力疗法联用的1B期多下行剂量安全性研究(实施例7)。安全性研究表明没有与药物相关的显著安全性问题。眼部评价显示接受单独的抗-VEGF适体的患者中有87.5％在治疗后3个月表现出稳定或改善的视力且25％的眼在该时间期限时在ETDRS图上显示出3-线或3-线以上的视力改善。在既接受抗-VEGF适体又接受光动力疗法的患者中注意到3个月时有60％的患者3-线增加。在该1B期研究中多次玻璃体内注射抗-VEGF适体耐受性极佳。
这一抗-VEGF疗法的1B期多次玻璃体内注射临床研究结果(实施例7)扩展了由我们的1A期单一注射研究(实施例6)报导的极佳安全性分布。1B期研究特别证实了每月连续三次玻璃体内注射抗-VEGF适体的眼内和全身安全性。没有注意到严重的相关不良反应。在某些病例中所遇到的不良反应看起来是不相关或最低限度的反应，可能是由于玻璃体内注射自身所导致的。
在3个月时仅适体治疗组中观察到的25％的3-线增加比病史对照组、诸如3个月时PDT关键试验(2.2％)及其对照组(1.4％)(Arch Ophthalmol 1999，117：1329-1345)和假拟辐射对照组(3％)(Ophthalmology 1999，106；12：2239-2247)的结果有利，在上述组中只有不超过3％的患者在该相同期限时表现出这类改善。
3个月时25％的3-线增加与在适体1A期研究中注意到的26.7％的改善率相一致。可能是药物的抗通透性作用导致视网膜下液体再吸收和由此这些病例中的视力改善。令人感兴趣的是，使用来自Genentech的抗-VEGF抗体片段进行的近期研究也证实了1期临床试验中26％的3-线增加率。这种抗体片段与抗-VEGF适体共有相同的阻断胞外VEGF的机制。
IB期研究中3个月时观察到的87.5％的稳定或改善率也比PDT-治疗的患者在该关键试验中的50.5％的比例(Arch Ophthalmol 1999，117：1329-1345)、PDT对照组中44％的比例和假拟辐射对照组中48％的比例(Ophthalmology 1999，106；12：2239-2247)有利。
既接受抗VEGF适体又接受PDT的患者在3个月时获得60％的3-线增加也极为令人鼓舞。在3期关键PDT试验中仅2.2％的患者表现出这类视觉改善(Arch Ophthalmol 1999，117：1329-1345)。这些研究组均包括患有传统凹下性(subfoveal)CNV的眼。在这些眼中观察到的视力改善得到了下列发现的支持，即与关键PDT试验中报导的93％的重新治疗率相比，研究人员仅在3个月时的40％病例中选择重新用PDT治疗(Arch Ophthalmol1999，117：1329-1345)。
此外，目前大量前期临床研究表明抗-VEGF疗法可以预防角膜、虹膜、视网膜和脉络膜中VEGF-诱发的新血管形成(Arch Ophthalmol 1996，114：66-7；Invest Ophthalmol Vis Sci 1994，35：101)。下面使用EYE001的实施例1-5中所述的前期临床研究提供了抗-VEGF疗法可以用于降低血管通透性并减少新血管形成的证据。抗-VEGF适体在ROP视网膜新血管形成模型中表现出显著功效，其中与对照组相比，80％的视网膜新血管形成受到抑制(p＝0.0001)。Miles试验模型显示在加入EYE001后VEGF介导的血管渗漏几乎完全弱化且角膜新生血管生成模型也在使用EYE001后表现出新血管形成显著减少。在豚鼠中进行的Miles试验研究提示抗-VEGF适体可以显著降低血管通透性。这种降低血管通透性的特性可以证明在减少CNV和糖尿病性黄斑水肿中的液体和水肿方面具有临床重要性。因此，抗-VEGF疗法可以作为抗-通透性和/或抗-血管生成活性剂起作用。
光动力疗法(PDT)
如上所述的本发明方法的一个实施方案包括给药抗-VEGF剂与光动力疗法(PDT)联用。PDT是以局部或全身给药诸如卟啉衍生物这样选择性累积在患者靶组织中的吸光的光敏剂开始的两步法。在用活化波长的光照射时，活性氧类在含有光敏剂的细胞中产生，它们促进细胞死亡。例如，在治疗特征在于眼新血管形成的眼病过程中，选择累积在眼的新脉管***中的光敏剂。然后使患者的眼接触适宜波长的光，这一过程导致异常血管受到破坏，由此改善患者的视力。
光敏剂
可以使用许多光活性化合物中的任意一种实施本发明的光动力疗法。例如，所述的光敏剂可以是在一种或多种类型的选择的靶组织中采集且当接触特定波长的光时吸收该光并诱导靶组织损害或破坏的任意化合物。实际上，返回选择的靶组织并吸收光的任意化合物可以用于本发明。优选所述的光敏剂对所给药的动物而言是无毒性的且能够将它们配制成无毒性的组合物。优选光敏剂在其光降解形式下也是无毒性的。理想的光敏剂的特征在于在没有光化学作用的情况下对细胞无毒性且易于从非靶组织中清除。
例如，可以在Kreimer-Bimbaum，Sem.Hematol.26：157-73，1989中找到光敏剂的综合列表。光敏化合物包括、但不限于：二氢卟酚类；菌绿素类；酞菁类；卟啉类；紫红素类；步花菁类；脱镁叶绿酸类；补骨脂素类；氨基乙酰丙酸(ALA)；血卟啉衍生物；porphycenes；porphacyanine；可膨胀的卟啉样化合物和药物前体，诸如δ-氨基乙酰丙酸，它可以产生诸如原卟啉这样的药物。(例如，参见美国专利US 5,438,071、US 5,405,957、US 5,198,460、US 5,190,966、US 5,173、US 504、US 5,171,741、US 5,166,197、US 5,095,030、US 5,093,349、US 5,079,262、US 5,028,621、US 5,002,962、US 4,968,715、US 4,920,143、US 4,883,790、US 4,866,168和US 4,649,151中任意一篇所述的光敏剂。)。优选的光敏剂是苯并卟啉衍生物(BPD)、单天冬氨酰二氢卟酚e6、酞菁锌、初紫红素锡、四羟基四苯基卟啉和卟吩姆钠(PHOTOFRIN)。特别有效的一类光敏剂包括绿卟啉类，它们具体描述在Levy等的美国专利US 5,171,749中。
上述任意一种光敏剂均可以用于本发明的方法中。当然，也可以使用两种或更多种光活性化合物的混合物；不过，治疗的有效性取决于所述光敏剂对光的吸收情况，使得如果使用混合物，那么优选具有相同最大吸收的成分。
本发明的光敏剂优选具有的吸收光谱在350nm-1200nm、优选约400-900nm，且最优选600-800nm的波长范围。
可以对所述光敏剂进行配制以便对靶眼组织提供有效浓度。可以使光敏剂与可以结合靶眼组织特定表面成分的特异性结合配体偶联，或如果需要，可以使用含有载体的制剂将较高浓度转运至靶组织。制剂的性质部分取决于给药方式和所选择的光敏剂的性质。可以使用适合于特定光活性化合物的任意药物上可接受的赋形剂或其组合。因此，可以将所述的光敏剂制成含水组合物、如跨粘膜或经皮组合物或以口服制剂形式给药。
如上所述的本发明方法对治疗患有与不需要的新脉管***相关的视力下降的患者特别有效。已经证实LDL受体数量增加与新血管形成有关。绿卟啉类且特别是BPD-MA与这类脂蛋白发生强力相互作用。LDL自身可以用作绿卟啉类的载体；或可以使用脂质体制剂。认为脂质体制剂可以将绿卟啉类选择性转运至血浆中的低密度脂蛋白成分，其本身也起载体作用而将活性组分更有效地转运至所需部位。通过增加分配入血液的脂蛋白相中的绿卟啉类，脂质体制剂可以更有效地将所述光敏剂转运至新脉管***。包括脂复合体的绿卟啉类的组合物描述在美国专利US 5,214,036中。用于静脉内给药的脂质体BPD-MA可以获自QLT Photo Therapeutics Inc.，Vancouver，BritishColumbia。
可以通过局部或全身以各种方式任意一种给药所述的光敏剂，例如通过口服、通过非肠道(例如静脉内、肌内、腹膜内或皮下注射)给药、使用贴剂或植入物经局部或可以将所述化合物直接置于眼内。可以以干制剂的形式，诸如丸剂、胶囊、栓剂或贴剂给药光敏剂。还可以以液体形式给药所述的光敏剂，这些液体制剂中可以单独含有水或含有诸如上文Remington′sPharmaceutical Sciences中所述的药物上可接受的赋形剂。该液体制剂还可以是混悬剂或乳剂。用于混悬剂和乳剂的适宜赋形剂包括水、盐水、葡萄糖、甘油等。这些组合物可以含有少量无毒性的辅助物质，诸如润湿剂、乳化剂、抗氧化剂、pH缓冲剂等。
光敏剂的剂量可以随各种因素广泛改变，诸如：光敏剂的类型；给药方式；携带光敏剂的制剂，诸如脂质体形式；或光敏剂是否与靶特异性配体、诸如抗体或免疫活性片段偶联。影响光敏剂剂量的其它因素包括所寻找的靶细胞、患者体重和定时的光疗。尽管各种光活性化合物需要不同的剂量范围，但是如果使用绿卟啉类，那么典型的剂量范围在0.1-50mg/M2(体表面积)，优选约1-10mg/M2且更优选约2-8mg/M2。
用于本发明光动力疗法的各种参数是相关的。因此，还应根据其它参数调整剂量，例如能量密度、辐照度、光动力疗法中所用光的时间和给药所述剂量与治疗性照射之间的时间间隔。所有这些参数均应进行调整以便显著强化视力而不会对眼组织造成明显损害。
光疗法
在对患者给药光敏剂后，用由所用光敏剂吸收的波长的光照射靶组织。本文所述的光敏剂的光谱在本领域中是公知的；对任意特定的光活性化合物而言，确定该光谱并不重要。对于绿卟啉类而言，所需波长范围一般在约550-695nm。特别优选将该范围的波长用于强化透入体组织。
作为接触光的结果，光敏剂进入激发状态且认为与其它化合物发生相互作用而形成诸如单态氧这样的反应中间体，它们可以使细胞结构破坏。可能的细胞靶包括细胞膜、线粒体、溶酶体膜和细胞核。来自肿瘤和新血管模型的证据表明脉管***闭塞是光动力疗法的主要机制，它通过损害内皮细胞发生，随后血小板粘着、脱粒且血栓形成。
照射疗法过程中的能量密度可以随组织类型、靶组织深度和上面的液体或血液的量的不同而广泛改变，但优选在约50-200焦耳/cm2内改变。
辐照度一般在约150-900mW/cm2，优选约150-600mW/cm2的范围。然而，选择应用较高的辐照度可能有效且具有缩短治疗时间的优点。
光活性剂给药后至光疗的最佳时间也可以随给药方式和所靶向的特定眼组织的不同而广泛改变。给药光活性剂后的一般时间在约1分钟-约2小时、优选约5-30分钟且更优选约10-25分钟的范围。
照射接触时间优选在约1分钟-30分钟，这取决于照射源的强度。光照射时间还取决于所需的能量密度。例如，就600mW/cm2的辐射度而言，50J/cm2的能量密度需要照射90秒；150J/cm2需要照射270秒。
照射进一步通过其强度、时间和相应于使用光敏剂给药的定时(注射后的间隔)来决定。强度必须足以照射至穿透皮肤和/或达到所治疗的靶组织。时间必须足以使光活化足够的光敏剂以便对靶组织起作用。强度和时间必须受到限制以避免对患者治疗过度。注射后与施用光前的间隔是重要的，因为一般给药光敏剂后将光施用的越迅速，则：1)所需光的量越少；和2)光敏剂的有效量越低。
临床实验和眼底照相术一般显示光动力疗法后没有立即出现颜色改变，不过在约24小时后的某些病例中发生轻度的视网膜变白。优选通过观察对内皮细胞的损害而经组织学方法证实了脉络膜新血管形成关闭。还可以评价检测形成空泡的细胞质和与新血管组织破裂有关的异常核的观察结果。
一般来说，可以在治疗后的特定时间使用标准荧光素血管造影技术实施光动力疗法对减少新血管形成产生作用。还可以通过使用本领域中标准的方式对视力进行临床评价来确定PDT的有效性，其中所述的本领域中标准的方式诸如有常用的眼图，其中通过辨别一定大小的字母的能力来评价视力，通常使用给定大小线上的5个字母。
用于治疗新血管疾病的其它疗法
除PDT外，还存在许多可以与抗-VEGF疗法联用治疗新血管疾病的疗法。例如，称作热激光光凝术的光线疗法形式是用于治疗一定范围眼病的标准眼科手术，所述的眼病包括视网膜血管问题(例如糖尿病性视网膜病)、脉络膜血管问题和黄斑损害(例如老年性黄斑变性)。该手术包括使用激光烧灼患者眼内的异常血管以便封闭它们而避免进一步渗漏。(例如，参见Arch.Ophthalmol.1991，109：1109-1114)。另一方面，可以将能够减少或预防不需要的新脉管***发生的化合物、包括其它抗-VEGF剂、抗-血管生成剂或其它抑制眼新血管形成发生的活性剂与抗-VEGF疗法联用。
现在更具体地描述并在下面描述优选技术和实验结果的实施例中指出了本发明的特征和其它具体内容。提供这些实施例的目的是为了解释本发明而不应将它们视为起限定作用。
实施例
在下面的实施例中，使用抗-VEGF的聚乙二醇化的适体EYE001。如上所述，这种适体是结合主要可溶性人VEGF同种型VEGF165的具有高特异性和亲和性的聚乙二醇(PEG)缀合的寡核苷酸。这种适体以与定向于VEGF的高亲和性抗体类似的方式结合VEGF并使其失活。实施例1-5报导了使用抗VEGF适体在不同眼新血管形成模型中进行的前期临床研究结果；实施例6报导了在患有渗出性AMD的人中进行的IA期临床安全性结果；且实施例7报导了IB期临床结果。一般来说，将剂量和浓度表示为仅EYE001(NX1838)的寡核苷酸重量且基于37μg/mL/A260单位的适体的近似消光系数。
实施例1：皮肤血管渗透性试验(Miles试验)
VEGF的生物活性之一是通过与血管内皮细胞上的受体的特异性结合而增加血管通透性。这种相互作用使紧密的内皮交界处松弛，结果血管液体渗漏。可以根据作为经皮注射VEGF结果的从豚鼠脉管***中渗漏的Evans蓝染料测定体内由VEGF诱导的血管渗漏(Dvorak HF，Brown LF，Detmar M，Dvorak AM.“血管通透因子/血管内皮生长因子、微血管高通透性和血管生成”-Am J Pathol.1995，146：1029。)类似地，该试验可以用于测定化合物阻断VEGF的这种生物活性的能力。
在活体外将VEGF165(20-30nM)与EYE001(30nM-1μM)预混合且随后通过经皮注入豚鼠背部剃刮的皮肤。注射后30分钟通过使用计算机化的形态测量分析***对注射部位周围的Evans蓝染料渗漏量进行定量。数据(未显示)证实VEGF-诱导的指示剂染料从脉管***中的渗漏几乎可以被到共同给药的浓度低至100nM的EYE001的完全抑制。
实施例2：角膜血管生成试验
将含有VEGF165(3pmol)的甲基丙烯酸酯(Methacyrate)聚合物颗粒植入大鼠角膜基质以便诱发血管生长成正常无血管角膜。经静脉内对大鼠给药1、3和10mg/kg剂量的EYE001，每天一次或两次，持续5天。在治疗期结束时，对所有的各角膜进行显微照相。通过对显微照片进行标准化形态测量分析对新血管在角膜组织中发生的程度及其由EYE001产生的抑制作用定量。
数据(未显示)证实用EYE001进行***性治疗与用磷酸缓冲盐水(PBS)相比对角膜中的VEGF-依赖性血管生成产生了显著抑制作用(65％)。每天用10mg/kg治疗一次与每天治疗两次具有同样的效果。3mg/kg剂量具有与10mg/kg剂量相同的活性，但在1mg/kg下显然功效不明显。
实施例3：早熟性视网膜病研究
尽管ROP显然不同于糖尿病性视网膜病和AMD，但是已经将ROP小鼠模型用于证实VEGF在发生这种疾病的异常视网膜血管形成中的作用(Smith LE，Wesolowski E，McLellan A，Kostyk SK，Amato DR，Sullivan R，D′Amore PA.“小鼠中氧诱导的视网膜病”-Invest Ophthalmol Vis Sci.1994，35：101。)。这些数据为研究EYE001在这种模型中的抗血管生成作用提供了基本原理。
分别将9、8、8、7和7只小鼠同窝仔(litter)放入空气室或含氧量高的室内并经腹膜内用PBS或EYE001(1、3或10mg/kg天)治疗。通过显微镜鉴定并对20个来自所有治疗组和对照组小鼠的每只眼的组织切片上的新血管芽进行计数来评价试验的终点，即通过视网膜的内界膜进入玻璃体液内的新毛细血管生长物。在10mg/kg和3mg/kg剂量下观察到与未经治疗的对照组相比视网膜新血管形成减少了80％(对两组而言p＝0.0001)。
实施例4：人肿瘤异种移植物
用植入裸鼠体内的人肿瘤异种移植物(A673横纹肌肉瘤和维尔姆斯瘤)测试EYE001的体内功效。在两种情况中，在建立的肿瘤发育(200mg)后，用每天一次经腹膜内给药10mg/kg EYE001来治疗小鼠。用顺序杂乱的对照品适体(寡核苷酸)治疗对照组。
与对照组相比，每天一次用10mg/kg的EYE001治疗小鼠抑制A673横纹肌肉瘤生长达80％且抑制维尔姆斯瘤生长达84％。在维尔姆斯瘤模型中，终止治疗后两周，在所治疗的动物中肿瘤大小剧烈反弹，使得肿瘤大小与对照组相比不再有任何差异。
实施例5：EYE001在家兔玻璃体内的药动学特性
获得家兔并按照所有适合的州和联邦政府法规护理且符合″实验室动物护理原则″(NIH出版#85-23，1985年修订)。通过玻璃体内注射对总计18只雄性新西兰白色家兔给药EYE001。每只动物两侧接受0.50mg/眼(1.0mg/动物)的注射剂量，体积为40μL/眼。在给药剂量后28天期限内采集EDTA-血浆和玻璃体液样品且冷冻储存(-70℃)至试验为止。在通过放血处死动物后，分别从每只眼中采集玻璃体液。通过与Tucker等在以前所述(“抗-血管内皮生长因子寡核苷酸-适体(NX1838)在猕猴中的检测和血浆药动学”-J.Chromatogr.Biomed.Appl.1999，732：203-212)类似的HPLC试验方法并通过与Drolet等在以前所述(“抗-血管内皮生长因子适体(NX1838)在注入猕猴玻璃体液后的药动学和安全性”-Pharm.Res.，2000，17：1503-1510。)类似的双重杂交试验方法测定玻璃体液样品中EYE001的浓度。通过求两次试验结果的平均值计算玻璃体液浓度。仅通过双重杂交试验测定血浆中的EYE001浓度。
在两侧给药0.50mg/眼(1.0mg/动物)的单剂量EYE001后，最初的玻璃体液浓度约为350μg/mL且通过表观一级消除反应降至第28天的约1.7μg/mL。据估计的最终半衰期为83小时，与在猕猴中观察到的94-小时半衰期类似(Drolet等，文献同上)。在给药EYE001后4周时，玻璃体液中的药物浓度(～190nM)适当保持在VEGF的KD(200pM)以上，这一结果提示每月一次对人体给药是合适的，从而推定药动学参数在家兔与人玻璃体液中相差无几。与在玻璃体液内发现的高浓度EYE001相反，血浆浓度显著降低且从第1天的0.092ug/mL降至第21天的0.005ug/mL。血浆浓度也因表观一级消除反应而下降，其中估计的最终半衰期为84小时。血浆最终半衰期由此与在猕猴中观察到的玻璃体液半衰期类似(Drolet等，文献同上)且特征在于传统的翻转动力学，其中从眼中的清除是血浆清除的决速步骤。这些数据与从玻璃体液中慢速释放入循环***的高度稳定的(核酸酶抗性)适体相一致。
实施例6：IA期临床试验研究
我们在患有与年龄相关的黄斑变性继发的凹下性(subfoveal)CNV且视力差于ETDRS图上的20/200的患者中进行单一玻璃体内注射EYE001的多中心、开放式标记、剂量增加研究。起始剂量为玻璃体内一次注射0.25mg。还测试了0.5、1、2和3mg剂量。使用眼底照相术和荧光素血管造影术进行完全的眼部检查。总计治疗15位患者。
选择标准
使用下面的包括和排除标准选择本研究中的患者：
包括标准：要求患者＞50岁且一般健康状况良好、在本研究的眼中具有最佳校正的差于ETDRS图上20/200的视力且每组(n＝3)中至少第1位患者为20/400或差于20/400；对侧眼(fellow eye)的最佳校正的视力等于或优于20/64；按尺寸计凹下性(subfoveal)CNV(传统和/或潜隐性CNV)＞3.5的黄斑光凝固术研究(MPS)的圆片面积；清澈的眼介质和足够的瞳孔扩张以便实施良好质量的立体镜眼底照相；且眼内压为22mmHg或22mmHg以下。
排除标准：排除包括：明显的可能干扰视力、毒性评价或眼底照相的介质混浊，包括白内障；存在可能明显影响视力的眼病，包括青光眼、糖尿病性视网膜病、视网膜血管闭塞或其它疾病(非因AMD导致的CNV)；存在其它CNV原因，包括病理性近视(-8屈光度或更高负值的球形等位症)、眼组织胞浆菌病综合、血管样纹、脉络膜破裂和多灶性脉络膜炎；可能指示或考虑其它CNV激光疗法的患者；在进入研究的3个月内实施任何眼内手术；血液占有量＞50％的损害；预先进行了玻璃体切割术；与另一种除复合维生素和微量元素外的治疗AMD的研究活性剂的预先或伴随疗法；包括未加控制的糖尿病或存在糖尿病性视网膜病在内的下面***性疾病中的任意一种；在进入研究前12个月内发生包括心肌梗死在内的心脏病；和/或与临床症状相关的冠状动脉疾病；和/或在ECG上注意到的局部缺血适应征；中风(在进入研究的12个月内)；活动性出血疾病；进入研究的1个月内进行任何大手术；进入研究的6个月内出现伴有出血的活动性消化性溃疡病；和用皮质类固醇(例如口服***)或其它抗血管生成药(例如沙利度胺)的伴随***性疗法。
研究药物
药物产品为由溶于10mM磷酸钠和0.9％氯化钠缓冲注射液的EYE001(上述NX1838)组成的并制成无菌和无致热原的1cc玻璃体注射器桶的备用的无菌溶液，该注射器上带有与塑料活塞连接的涂敷塞子和预连接27号剂量针头上的橡胶顶盖。以1、2.5、5、10、20或30mg/ml活性药物浓度的EYE001(表示为寡核苷酸含量)提供聚乙二醇化的适体以便达到100μl的转运体积。
患者登记
在将患者补充入本研究前，获得书面的公共机构评述委员会(IRB)批准的方案，以资料为依据的书面许可和任何其它患者信息。
结果
在15位患者中以0.25-3.0mg/眼而不会达到剂量限制毒性的剂量进行单剂量范围安全性研究。该制剂的粘度阻止了3mg后其它剂量增加。患者的年龄在64-92岁。8位男性和7位女性患者进入研究且全部为白种人。15位患者中有11位发生总计17种轻度或中度不良反应，包括6种很可能或可能与给药EYE001相关的不良反应：轻度眼内炎症、暗点、视觉失真、荨麻疹、眼痛和疲劳。此外，存在一种与测试药物不相关的严重不良反应。它在1位患者被诊断为乳腺癌，其中在治疗前已经注意到了肿块。
在注射EYE001后3个月时，15只眼中的12只(80％)表现出稳定或改善的视力。4位患者(26.7％)在相同时间点处具有显著改善的视力，将其定义为在ETDRS图上的视力增加为3-线或3-线以上。在3个月时注意到具有这类改善的患者在ETDRS图上存在+6、+4和+3线的增加。没有注意到出人意料的视力安全性问题。对彩色照片和荧光素血管造影照片的评价显示没有视网膜或脉络膜毒性的征候。
我们的IA期临床研究证实可以安全地给药玻璃体内单剂量达3mg/眼的抗-VEGF适体。没有注意到显著的眼或全身副作用。
临床医师同意最少需要1年的随访以便评价对渗出性AMD的任何可能的疗法。尽管如此，然而，从一定的预期研究中得到了3个月的数据且用于评价眼部安全性和任何潜在的新疗法趋势。
病史对照组显示仅1.4％(关键光动力学试验)(Arch Ophthalmol 1999，117：1329-1345)和3.0％(照射研究)(1999，106；12：2239-2247)的眼在3个月时已经表现出如ETDRS图上获得3线或3线以上所确定的显著视力改善。此外，3个月时仅在TAP研究的PDT-治疗组(Arch Ophthalmol 1999，117：1329-1345)中注意到有2.2％的病例具有这类改善的视力。这些发现证实了在任何时间范围均难以观察到患有AMD继发的任何类型(传统的、潜隐性的或混合型的)的CNV的显著视力改善的临床印象。
在我们的研究中，在玻璃体内给药抗-VEGF适体后3个月时，80％的眼表现出稳定或改善的视力，其中在ETDRS图上表现出3线或3线以上增加的有26.7％。这些视力改善得到了在某些适体-治疗的患者中的临床和血管造影发现的支持。视力的稳定性始终是渗出性AMD研究的目的，所以没有预计到只用一剂量3个月时在26.7％的患者中观察到了显著的视力改善(3条ETDRS线)。显然病史对照组不适于比较。此外，短期随访、小样品尺寸和不同CNV类型(即传统的、潜隐性的或混合型的CNV的百分比)排除了任何最终的结论或比较。然而，看起来适体-治疗的眼在3个月时当然显示出至少极佳的视力安全性且证明了其它研究的正确性。
概括的说，使用单一玻璃体内注射抗-VEGF适体得到的前期临床和早期临床结果极为令人鼓舞。已经建立了达3mg/眼的单剂量玻璃体内注射的安全性。
实施例7：IB期临床试验研究
我们在患有AMD继发的凹下性(subfoveal)CNV的患者中进行了多中心、开放式标记、3mg/眼的EYE001(抗-VEGF适体)重复剂量的IB期研究，在本研究的眼中视力差于20/100且在对侧眼中视力好于或等于20/400。如果3或3位以上的患者发生剂量限制毒性(DLT′s)，则将剂量减至2mg然后减至1mg，如果必要。计划治疗的患者数量为20；10位患者使用单独的抗-VEGF适体且10位患既用抗-VEGF疗法又用PDT。在美国选择11个地点进行本研究。
DLT(s)的定义
如果在本研究中的患者发生下列DLTs中的任意一种，则如上所述减剂量：
眼部DIT：
照片评价
白内障加速形成：通过根据Wisconsin白内障分级***采用的与年龄相关的眼病研究(AREDS)晶状体混浊分级方案确定的1个单位的进展。
临尿买验
严重(使视网膜脉管***的影像模糊)和视力危兆的临床明显炎症。
通常不会在患有诸如视网膜、动脉这样AMD或静脉闭塞、急性视网膜脱落和弥漫性视网膜出血的患者中观察到的其它眼部异常。
视力：视角加倍或恶化(失去≥15个字母)；患者过渡至失去光感(NLP)，他们开始的视力评分低于15个字母，除非因与第2-7天、第30-35天或第58-63天间的注射过程相关的玻璃体出血而导致视力降低。
眼压测量法：尽管进行了药物干预，但是在两次单独的实验时，来自基线的眼内压(IOP)增加至≥25mmHg，其中至少有1天间隔或持续30mmHg的眼内压1周以上。
荧光素血管造影照片
在基线上没有观察到显著的视网膜或脉络膜血管异常，诸如：动静脉转换时间上脉络膜未灌注(影响一个或多个四分体)延缓(超过15秒)；视网膜动脉或静脉闭塞(从基线的任何偏离)；或在没有眼内炎症的情况下影响视网膜循环的扩散性视网膜通透性改变。
***性DLT：
III级(严重)或IV级(危及生命)毒性或研究人员认为与研究药物相关的任何明显严重的毒性。
选择标准
使用下列包括和排除标准选择用于本研究的患者：
包括标准：眼标准包括本研究眼的最佳校正的差于ETDRS图上20/200的视力；对侧眼的最佳校正的视力等于或优于20/400；具有与年龄相关的黄斑变性继发的按尺寸计的小于12的总圆片面积的活动性CNV(传统和/或潜隐性)的凹下性(subfoveal)脉络膜新血管形成；清澈的眼介质和足够的瞳孔扩张以便可能有良好质量的立体镜眼底照相；且眼内压为21mmHg或21mmHg以下。一般标准包括男性和女性患者、年龄≥50岁；根据东方肿瘤合作组织(ECOG)/世界卫生组织(WHO)等级的行为状态＜2、正常心电图(ECG)或临床上无显著性改变；女性必须使用有效的避孕药、在进入研究前必须是绝经后至少12个月或实施无菌手术；如果不是这样，则必须在治疗前48小时内进行血清妊娠试验且在治疗开始前必须得到结果，在最后剂量的EYE001后应使有效形式的避孕药生效至少28天；足够的血液功能：血红蛋白≥10g/dl；血小板计数≥150×109/L；WBC≥4×109/l；PTT在规定的正常范围内；足够的肾功能：血清肌酸酐和BUN在2x正常(ULN)规定上限的范围内；足够的肝功：血清胆红素≤1.5mg/dl；SGOT/ALT、SGPT/AST和碱性磷酸酶在2x规定的ULN范围内；以资料形式提供的书面许可；和具有对所有研究回访的能力。
排除标准：如果在研究的眼中或全身存在下面标准中的任意一项，则患者无资格进入本研究：患者预定接受或已经接受任何现有的用维替泊芬的光动力疗法；明显的介质混浊，包括可能干扰视力、毒性评价或眼底照相的白内障；存在其它原因的脉络膜新血管形成，包括病理性近视(-8屈光度或更高负值的球形等位症)、眼组织胞浆菌病综合症、血管样纹、脉络膜破裂和多灶性脉络膜炎；可能指示或考虑其它脉络膜新血管形成激光疗法的患者；在进入研究的3个月内进行任何眼内手术；预先进行玻璃体切割术；用另一种除复合维生素和微量元素外的治疗AMD的研究活性剂的预先或伴随疗法；用光子或质子对对侧眼进行预先照射；已知对血管造影术中所用荧光素染料或对EYE001制剂成分的过敏反应；下述***性疾病中的任意一种，包括：未加控制的糖尿病或存在糖尿病性视网膜病；心脏病：在进入研究前12月内发生的心肌梗死和/或与临床症状相关的冠状动脉疾病和/或在ECG上注意到的局部缺血适应征；肾功或肝功异常；中风(在进入研究的12个月内)；活动性感染；活动性出血疾病；进入研究的1个月内实施任何大手术；进入研究的6个月内出现伴有出血的活动性消化性溃疡病；用皮质类固醇(例如口服***)或其它抗血管生成药(例如沙利度胺)的伴随***性疗法；预先照射头颈；对任何疾病在过去的60天内使用研究用活性剂进行任何治疗；在过去的5年内任何对癌症的诊断，不包括基底细胞癌或鳞状细胞癌。
研究药物
药物提供
将EYE001作为抗-VEGF疗法在本研究中使用。EYE001药物物质是聚乙二醇化的抗-VEGF适体。将它配制成pH 5-7的磷酸缓冲盐水。可以加入氢氧化钠或盐酸来调节pH。
将EYE001配制成3种不同浓度：3mg/100ul、2mg/100ul和1mg/100ul，将它们包装在配有27号计量无菌针头的1ml无菌USP I型刻度玻璃注射器中。该药物产品不含防腐剂且仅通过玻璃体内注射一次应用。如果出现混浊或颗粒，则不使用该产品。
活性组分为EYE001药物物质，即(聚乙二醇化的)抗-VEGF适体且浓度为30mg/ml、20mg/ml和10mg/ml。赋形剂为：氯化钠，USP；磷酸一钠一水合物，USP；磷酸二钠七水合物，USP；氢氧化钠，USP；盐酸，USP；和注射用水，USP。
剂量和给药
制剂。药物产品为备用的装入一次应用的玻璃注射器的无菌溶液。在使用前至少30分钟(不超过4小时)从冷藏储存中取出注射器以使溶液达到室温。注射器内含物的给药包括使条状塑料活塞杆与注射器桶体内部的橡胶塞子连接。然后取下橡胶顶盖以便给药所述产品。
治疗方案和期限
将EYE001作为100μl玻璃体内注射液在3种情况下间隔28天给药。患者登记接受3mg/注射。如果3位或3位以上的患者发生剂量限制毒性(DLT′s)，则将剂量减至2mg且进一步减至1mg，如果必要，在其他10位患者中给药每一剂量。
给药PDT
仅在患有主要为传统CNV的病例中给药PDT与EYE001。如ArchOphthalmol 1999，117：1329-1345中所述使用给药PDT的标准要求和步骤。要求在给药抗-VEGF适体前5-10天给药PDT。
患者登记
在将患者补充入本研究前，获得书面的公共机构评述委员会(IRB)批准的方案和以资料依据的书面许可。由地区研究人员完成病例报告表格的选择页。使满足资格标准并提供了资料形式的书面许可的患者在本研究中登记。
随访方案
在注射后几天且再次在下一次注射前1个月以上由眼科医师对患者进行临床评价。在前4个月期间每月测ETDRS视力、进行柯达铬照相和荧光素血管造影。
终点
上述DLT部分给出的安全性参数是这些研究的初期终点。此外，由研究人员确定的在3个月时具有稳定(0线改变或更好)或改善的视力的患者百分比、在3个月时具有3-线或3-线以上改善的患者百分比和需要在3个月时使用PDT重新治疗的患者百分比是其它研究的终点。
结果
对在本研究中治疗的21位患者没有注意到严重的相关不良反应。2位患者发生严重的不相关的不良反应。1位86岁的具有长期外周血管疾病以及临界性高血压和II型糖尿病病史的老年妇女发生2次心肌梗死，其中的第二次是致命的。第一种情况发生在第一次眼内注射抗-VEGF适体后的11天。第二种情况发生在第三次和最后一次注射后的16天。急性心肌梗死间隔约2个月发生。研究人员认为这些情况与适体疗法无关且基于药动学数据认为药物的全身水平可以忽略不计。第2位76岁具有10个月抑郁症病史的男性在给药第三次和最后一次剂量的抗-VEGF适体后试图用吞服对乙酰氨基酚的方式***。该患者的精神状态改善。对该患者的治疗保持不变且该患者目前仍跟随进行本研究。
表1A-C表示在这些组中报导的不相关或不严重的反应。在单独用抗-VEGF适体治疗的患者中，很可能与给药抗-VEGF适体相关的眼部不良反应包括玻璃体悬浮物(4例)、轻度前房炎症(3例)、眼刺激(2例)、眼内压升高(1例)、眼内空气(1例)、玻璃体混浊(1例)、结膜下出血(1例)、眼痛(1例)、眼睑水肿/红斑(1例)、干眼(1例)和结膜充血(1例)。可能与给药抗-VEGF适体相关的反应包括星形玻璃体退变(1例)、视力异常(1例)和疲劳(1例)。认为与给药抗-VEGF适体不相关的反应包括头痛(1例)和虚弱(1例)。在用抗-VEGF适体和PDT治疗的患者中，很可能与这种联合疗法相关的不良反应包括上睑下垂(5例)、轻度前房炎症(4例)、角膜擦伤(3例)、眼痛(3例)、异物感(2例)、结膜水肿(1例)、结膜下出血(1例)和玻璃体脱落(1例)。可能与联合疗法相关的反应包括疲劳(2例)。与联合疗法不相关的反应包括色素上皮脱离(1例)、关节痛(1例)、上呼吸道感染(1例)和膀胱感染(1例)。在联合疗法中观察到的上睑下垂和角膜擦伤的增加可能与应用附着透镜与PDT有关。显然所有前房炎症或玻璃体混浊的情况均是轻度的且实际上是短暂的。
         表1A.与单独给药抗-VEGF适体或抗-VEGF适体
                与PDT联用相关的不良反应
不良反应     抗-VEGF适体N(％)10位患者     抗-VEGF适体和PDTN(％)11位患者
上睑下垂     0     5(45.4)
眼睑水肿/红斑     1(10)     2(18.2)
结膜充血     1(10)     0
结膜水肿     0     1(9.1)
结膜下出血     1(10)     1(9.1)
干眼     1(10)     0
角膜擦伤     0     3(27.3)
前房炎症     3(30)   1+细胞     微量细胞
  微量细胞     4(36.4)     1+KP；微量细胞
  微量细胞     微量细胞
    微量细胞
IOP增加     1(10)     0
瞳孔异常     0     0
发红     0     1(9.1)
白内障     0     0
玻璃体混浊     1(10)     2(18.2)
玻璃体脱落     0     1(9.1)
玻璃体悬浮物     4(40)     0
星形玻璃体退变     1(10)     0
眼内空气     1(10)     0
视***周出血     0     1(9.1)
色素上皮脱离     0     1(9.1)
视力异常     1(10)     0
闪光感     1(10)     0
异物感     1(10)     2(18.2)
眼痛     1(10)     3(27.3)
睑痉挛     0     1(9.1)
眼刺激     1(20)     1(9.1)
眼触痛     0     1(9 1)
眼瘙痒     1(10)     0
流泪     1(10)     0
头痛     1(10)     0
鼻漏     0     1(9.1)
疲劳     1(10)     2(18.2)
虚弱     1(10)     0
关节痛     0     1(9.1)
上呼吸道感染     0     1(9.1)
膀胱感染     0     1(9.1)
表1B.与单独给药抗-VEGF适体相关的不良反应
不良反应相关性     抗-VEGF适体N(％)10位患者
很可能的不良反应：玻璃体悬浮物前房炎症眼刺激玻璃体混浊眼内压升高眼内空气结膜下出血结膜充血眼痛眼睑水肿/红斑干眼 4′3211111111
可能的不良反应：星形玻璃体退变视力异常疲劳 111
不相关的不良反应：头痛虚弱 11
  表1C.与给药抗-VEGF适体和PDT相关的不良反应
不良反应相关性     抗-VEGF适体和PDTN(％)11位患者
很可能的不良反应：上睑下垂前房炎症角膜擦伤眼痛异物感结膜水肿结膜下出血玻璃体脱落 54332111
可能的不良反应：疲劳 2
不相关的不良反应：色素上皮脱离关节痛上呼吸道感染膀胱感染 1111
所选择的2位患者因早产而终止她们参与本研究。1位患者认为她的视力没有得到改善且不想进一步注射。另1位患者患有抑郁症和转运难题。2位患者在进行第三次和最后一次注射适体前撤回了她们的许可。2位患者的视力在参与本研究的整个过程中均保持稳定。在最终的随访前第3位患者死亡。
对本研究中的任何患者而言均不需要减剂量。这些患者的彩色照片和荧光素血管造影照片的评述显示没有视网膜血管或脉络膜毒性的征候。
在完成单独抗-VEGF适体的3个月治疗方案的那些患者(N＝8)中，87.5％具有稳定或改善的视力且25.0％在3个月时的ETDRS图上具有3-线的视力改善(参见表2)。
               表2.用单独的抗-VEGF适体治疗的患有
                    凹下性CNV的患者视力数据
患者#  基线  第8天  第29天  第57天  第85天  第85天时的±线数
03-001  20/50  20/40  20/40  20/32  20/32  +2
04-001  20/125  20/64  20/80  20/80  20/80  +2
06-001  20/160  20/125  20/100  20/125  退出  +1
07-001  20/100  20/100  20/64  20/80  20/80  +1
07-002  20/320  20/80  20/64  20/64  20/50  +8
08-001  20/125  20/125  20/100  20/100  20/160  -1
09-001  20/500  20/200  20/400  20/320(第36天) 退出   +2
10-001  20/500  20/640  20/500  20/400 20/500   0
10-002  20/200  20/125  20/160  20/160 20/160   +1
10-003  20/400  20/160  20/160  20/160 20/126   +5
                3个月时的视力改变
    稳定的或改善的     ≥3线的改善
EYE001治疗的-(N＝8)，代表完成本方案的全部眼     87.5％     25.0％
用抗-VEGF适体和PDT治疗11位患者。在完成3个月治疗方案的该组患者(N＝10)中，90％具有稳定或改善的视力且60％在3个月时的ETDRS图上表现出视力的3-线改善(表3)。这些3-线改善包括+3、+5、+4、+4、+6和+3的视力ETDRS线增加。
                   表3.用抗-VEGF适体与PDT联用治疗的
                      患有凹下性CNV的患者视力数据
患者#  基线  第8天  第29天  第57天  第85天  重复PDT   最终时间点处的±线数
06-011  20/400  20/320  20/100  20/640  20/200  无   +3
06-012  20/250  20/160  20/125  20/125  20/80  无   +5
08-011  20/40  20/32   20/20  20/20  20/26  有   +2
10-011  20/160  20/160  20/160  20/160  退出  无   0
05-011  20/100  20/64  20/64  20/64  20/40  无   +4
12-011  20/160  20/100  20/250  20/200  20/200  无   -1
06-013  20/800  20/640  20/800  20/800  20/320  有   +4
02-011  20/500  20/200  20/160  20/80  20/126  有   +6
06-014  20/100  20/80  20/80  20/80  20/100  无   0
06-015  20/125  20/40  20/64  20/50  20/80  无   +2
02-012  20/500  20/500  20/125  20/320  20/250  有   +3
               3个月时的视力改变
    稳定的或改善的     ≥3线的改善
EYE001治疗的-(N＝10)，代表完成本方案的全部眼     90％     60％
在没有表现出获得3-线的剩余患者中，仅1位患者在3个月时表现出视力下降，而该患者在该时间点处仅失去了1条视力线。在该组中没有患者在3个月时失去1条以上的视力线。
对参与本研究完整期限中的10只眼中的4只(40％)在3个月时进行重复PDT治疗(其需要仅由研究人员决定)。
其它实施方案
尽管已经参照优选实施方案描述了本发明，但是本领域技术人员易于确定其主要特征且不会脱离本发明的实质和范围，可以对本发明进行各种改变和修改以使其适合于不同的应用和条件。本领域技术人员会认识到能够仅使用不多的常规实验确定与本文所述的本发明的具体实施方案等同的许多技术方案。这类等同技术方案包括在本发明的范围内。
将本说明书中所述的所有公开文献、专利和专利申请引入本文作为参考。

Claims (49)

1.患者眼新血管疾病的治疗方法，所述的方法包括下列步骤：
(a)对所述的患者给药有效量的抗-VEGF适体；和
(b)给所述患者提供光线疗法。
2.权利要求1所述的方法，其中所述的光线疗法包括光动力疗法(PDT)。
3.权利要求1所述的方法，其中所述的光线疗法包括热激光光凝术。
4.权利要求1所述的方法，其中所述的新血管疾病选自局部缺血性视网膜病、眼内新血管形成、与年龄相关的黄斑变性、角膜新血管形成、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增生性糖尿病性视网膜病。
5.权利要求4所述的方法，其中所述的新血管疾病是与年龄相关的黄斑变性。
6.权利要求4所述的方法，其中所述的新血管疾病是增生性糖尿病性视网膜病。
7.权利要求1所述的方法，其中所述的抗-VEGF适体包括血管内皮生长因子(VEGF)的核酸配体。
8.权利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括核糖核酸。
9.权利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括脱氧核糖核酸。
10.权利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括修饰核苷酸。
11.权利要求10所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括2′F-修饰核苷酸。
12.权利要求11所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括聚(亚烷基)二醇。
13.权利要求11所述的方法，其中所述的聚(亚烷基)二醇是聚乙二醇(PEG)。
14.权利要求7所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括核糖核酸和脱氧核糖核酸。
15.权利要求10所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括2′-O-甲基(2′-OMe)修饰核苷酸。
16.权利要求10所述的方法，其中用与未修饰的核酸配体相比降低所述核酸配体上内切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修饰所述的VEGF核酸配体，但不会对所述的配体的结合亲和性产生不良影响。
17.权利要求16所述的方法，其中所述的部分包括硫代磷酸。
18.权利要求1所述的方法，其中通过注射给药所述的抗-VEGF适体。
19.权利要求1所述的方法，其中所述的给药步骤包括将一种装置导入所述患者眼部，所述的装置中含有所述的抗-VEGF适体。
20.权利要求19所述的方法，其中所述的装置通过跨巩膜扩散转运所述的抗-VEGF适体至眼部。
21.权利要求19所述的方法，其中所述的装置将抗-VEGF适体直接转运入眼的玻璃体液。
22.权利要求2所述的方法，其中所述的光动力疗法(PDT)包括下列步骤：
(i)将光敏剂转运至所述患者的眼组织；和
(ii)使所述的光敏剂接触具有被所述光敏剂吸收的波长的光，接触时间和强度足以抑制所述眼组织中的新血管形成。
23.权利要求22所述的方法，其中所述的光敏剂选自苯并卟啉衍生物(BPD)、单天冬氨酰二氢卟酚e6、酞菁锌、初红紫素锡、四羟基四苯基卟啉和porfimer sodium(PHOTOFRIN)以及绿卟啉类。
24.权利要求22所述的方法，其中所述的光敏剂是苯并卟啉衍生物。
25.患者眼新血管疾病的治疗方法，所述的方法包括对所述患者给药：
(a)有效量的抗-VEGF适体；和
(b)能够减少或预防不需要的新脉管***发生的第二种化合物。
26.权利要求25所述的方法，其中所述的新血管疾病选自局部缺血性视网膜病、眼内新血管形成、与年龄相关的黄斑变性、角膜新血管形成、视网膜新血管形成、脉络膜新血管形成、糖尿病性黄斑水肿、糖尿病性视网膜缺血、糖尿病性视网膜水肿和增生性糖尿病性视网膜病。
27.权利要求26所述的方法，其中所述的新血管疾病是与年龄相关的黄斑变性。
28.权利要求27所述的方法，其中所述的新血管疾病是增生性糖尿病性视网膜病。
29.权利要求25所述的方法，其中所述的抗-VEGF适体包括血管内皮生长因子(VEGF)的核酸配体。
30.权利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括核糖核酸。
31.权利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括脱氧核糖核酸。
32.权利要求29所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括修饰核苷酸。
33.权利要求32所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括2′F-修饰核苷酸。
34.权利要求33所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括聚(亚烷基)二醇。
35.权利要求34所述的方法，其中所述的聚(亚烷基)二醇是聚乙二醇(PEG)。
36.权利要求25所述的方法，其中所述的第二种化合物包括VEGF抗体。
37.权利要求32所述的方法，其中所述的VEGF核酸配体包括2′-O-甲基(2′-OMe)修饰核苷酸。
38.权利要求32所述的方法，其中用与未修饰的核酸配体相比降低所述核酸配体上内切核酸酶或外切核酸酶活性的部分修饰所述的VEGF核酸配体，但不会对所述的配体的结合亲和性产生不良影响。
39.权利要求38所述的方法，其中所述的部分包括硫代磷酸。
40.权利要求25所述的方法，其中通过注射给药所述的抗-VEGF的适体。
41.权利要求25所述的方法，其中所述的给药步骤包括将一种装置导入所述患者眼部，所述的装置中含有所述的抗-VEGF适体。
42.权利要求41所述的方法，其中所述的装置通过跨巩膜扩散转运所述的抗-VEGF适体。
43.权利要求41所述的方法，其中所述的装置将所述的抗-VEGF适体直接转运入眼的玻璃体液。
44.患者眼新血管疾病的治疗方法，所述的方法包括下列步骤：
(a)对所述患者给药有效量的抑制眼新血管形成发生的抗-VEGF适体；和
(b)给所述患者通过破坏眼中异常血管的疗法。
45.权利要求44所述的方法，其中所述的适体抑制生长因子。
46.权利要求45所述的方法，其中所述的生长因子是VEGF。
47.权利要求46所述的方法，其中所述的适体是VEGF的核酸配体。
48.权利要求47所述的方法，其中所述的疗法是光动力疗法(PDT)。
49.患者眼新血管疾病的治疗方法，所述的方法包括对所述患者的眼给药约0.3mg-约3mg的VEGF的修饰核酸配体。
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