TWI260327B

TWI260327B - Pharmaceutical compositions for treating ocular neovascular diseases

Info

Publication number: TWI260327B
Application number: TW091132890A
Authority: TW
Inventors: David R Guyer
Original assignee: Osi Eyetech Inc
Priority date: 2001-11-09
Filing date: 2002-11-08
Publication date: 2006-08-21
Also published as: WO2003039404A2; CR7330A; OA12720A; ZA200402753B; MXPA04004363A; US20040167091A1; EA006746B1; BR0213975A; IS7215A; HRP20040406A2; AP2004003026A0; RS35404A; EA200400518A1; MA27145A1; EP1441743A2; JP2005511576A; IL161327A0; NO20041882L; PL371929A1; CN1582156A

Description

1260327 ⑴ 玖、發明說明 (發明說明應敘明：發明所屬之技術領域、先前技術、内客、實施方式及圖式簡單說明）技術領域本發明是有關利用可抑制VEGF之作用物，以治療眼睛新血管生成之方法。先前技術血管生成，或不正常的血管生長，是包括眼科學，癌症及風濕病學的許多醫學領域中造成病理狀態之重要病因。例如，與年齡有關之滲出型或新血管性黃斑部病變（AMD)，是造成老年人眼盲之主因。對大多數病人而言，治療滲出型ADM目前並無標準且有效之療法。熱雷射光凝固作用及光動力療法（PDT)已示出對此類病人亞群是有益的。然而，此治療性介入僅有部份眼睛合於其準則，且被治療者的復發率常很高。近來的臨床前研究已建議，在治療各種型式之眼睛新血管生成性疾病上，如脈絡膜新血管生成（CNV)，藥理性介入或抗-血管生成治療是有用的。此研究有許多是集中在阻斷血管内皮生長因子（VEGF)，其涉及AMD後之CNV及糖尿病型視網膜病變之致病原則。VEGF於血管生成中是一種重要的細胞動素生長因子，且似乎在眼睛新血管生成發展中扮演關鍵性角色。人體研究已顯示，於血管性的視網膜失調症之玻璃體中存在有高濃度的VEGF，但無活性或非新血管生成性疾病則否。在實驗性黃斑下部手術所切下之人類CNV 中也有高水平的VEGF。其他研究顯示，利用各型式抗- VEGF 作用物，包括抗體片段，可消退或預防許多動物模式中多 1260327 發稱說萌續買 ⑺ 重血管床新血管的生成。因此，抗-VEGF療法對於AMD，糖尿病型視網膜病變及相關失調症是一種極有希望的診療法。除了潛在的抗-血管生成作用，抗- VEGF療法可充作抗-滲透劑。VEGF因為有謗使血管滲漏之潛在能力，用此最初被稱為血管滲透因子。近來的研究顯示，VEGF在糖尿病性視網膜病變中，對於造成血管滲漏可能十分重要，且因糖尿病所謗生之血管-視網膜障壁瓦解，可為抗- VEGF療法於劑量相互關聯下抑制。因此，由於其抗血管生成及抗滲透特性，因此抗-VEGF療法代表對CNV之雙向攻擊。現今關於眼睛新血管化之治療方法，其在各型新生血管化之抑制或消除能力仍需改進，包括AMD及糖尿病性視網膜病變後繼發之脈絡膜新生血管化，再者，可治療眼睛新生血管化之新療法鑑定，仍有不斷且大量的需求存在。本發明則是實現這些需求，並進一步提出其他相關的益處。發明内容吾等在老年型黃斑部病變後續發之中心凹下脈絡膜新生血管病人中，於有及無光動力療法下，進行抗- VEGF適合體 (aptamer)之臨床試驗，以決定多次注射治療之安全性概況。吾等發現有或無光動力治療（PDT)下，抗-VEGF治療在AMD 及相關失調症上均是安全且有效的。接受抗-VEGF適合體之病人，大多數在治療係三個月視力可穩定或改善。接受抗 -VEGF並配合PDT者視力的改善更為顯著。因此不論單獨的或配合血管生成性治療，抗-VEGF療法對於各種眼睛新生血 1260327 發_說萌績莨 (3) 管性疾病型式，很顯然地（此中包括AMD及糖尿病性視網膜病變）是有遠景之療法。因此，本發明描述可治療罹患眼睛新生血管性疾病病人之方法，此方法包括以下步驟··（a)對病人投予有效劑量之抗-VEGF適合體；及（b)對病人提供光療法，如光動力療法或熱雷射光凝固作用。在本發明之具體實例中，光動力療法（PDT)包括以下步驟：（1)將光敏劑送至病人眼睛組織；及（ii)將光敏劑曝於可為光敏劑吸收之波長之光源下，足夠的時間及強度以抑制病人眼組織内新血管生成。可使用各樣的光敏劑，包括如苯並叶0林衍生物（BPD)，單天冬胺酿基氯，e6，鋅g太花菁、；錫紫紅素、四羥四苯卟啉、及卟吩姆鈉（PHOTOFRIN®)，及線口卜口林（green probhyrins)。在一個相關方面，本發明提出治療患有眼睛新生血管性疾病之患者之方法，此方法包括對病人投予：（a)有效劑量抗-VEGF適合體；及（b)可消除或預防非欲求新血管分佈發展之第二種化合物。抗-VEGF作用物或可與抗-VEGF適合體合用之其他化合物包括下列，但不限於此：與VEGF具特異性之抗體或抗體片段；與VEGF受體具特異性之抗體；可抑制，調控及/或調節酪胺酸激酶訊號轉導作用；VEGF多肽；可抑制VEGF在抗酸層次表現之寡核甞酸，如反意識股 RNAs ;類視色素；含有生長因子之組合物；可與膠原蛋白結合之抗體；及具有血管生成抑制活性之各種有機化合物及其他作用物。發_說铒續:買是血管内皮 1260327 (4) 在本發明之較佳具體實例中，抗- VEGF作用物生長因子（VEGF)之核酸配體。VEGF核酸配體包括有核糖核酸，去氧核糖核酸，及/或經修飾之核苷酸。在特佳具體實例中，VEGF核酸配體包括2’F-經修飾之核苷酸，2’-〇-甲基 (2Me)經修飾的核苷酸，及/或聚伸烷甘醇，如聚乙二醇 (PEG)。在某些具體實例中，VEGF核酸配體以如硫代磷酸鹽之部份修飾，其可減低核酸配體上核酸内切限制酶或核酸外切酶之活性（此和未修飾核酸配體比較而言），而不至於有害地影響配體之結合親和力。又在另一方面，本發明提出治療患有眼睛新生血管性疾病患者之方法，此方法涉及以下步騾：（a)對病人投予有效劑量之可抑制眼睛新生血管分佈發展之作用物，如抗-VEGF 適合體；（b)對病人提供可破壞眼中不正常血管之療法，如 PDT。抗- VEGF適合體可經由眼内投予，即注射至眼睛内。另外，適合體也可利用眼内植入物來遞送。本發明方法可用來治療各種新生血管性疾病，包括下列，但不限於此：缺血性視網膜病變，目艮内新生血管化，老年型黃斑部病變，角膜新生血管化，視網膜新生.血管化，脈絡膜新生血管化，糖尿病性黃斑部水腫，糖尿病性視網膜缺血，及增殖型糖尿病性視網膜病變。本發明其他的優點及特色，將由以下詳述及申請專利範圍更顯而易見。定義 1260327 發螺説胡續買' (5) 病好於程物療包種人活吸理接進曰 •，眼睛新生血管性疾病”指特徵為眼睛新血管形成之疾，即在病人眼中不正常血管之發展。 ’’病人”意指其眼睛組織有新生血管分佈之任何動物。較，動物是哺乳動物，其包括人類及其他靈長類’但不限此。此術語也包括家畜，如牛，豬，羊，馬，狗及貓。 "光療法"指病人曝於特殊劑量之特殊波長光下之任何過或步騾，包括雷射光，以治療疾病或其他醫學狀況。 ”光動力療法”或"PDT”意指使用以光活化之藥物或化合之任何型式之光療法，而此類藥物在此指光敏劑，以治鲁特徵為快速生長之組織之疾病或其他醫學狀況，此狀況括不正常血管之形成（即血管生成）。典型而言，PDT是一二步騾過程，其包括將光敏劑局部或全身性投予至病，繼以特殊劑量特殊波長之光之照射以活化光敏劑。： •’抗-VEGF作用物”意指可抑制血管内皮生長因子（"VEGF")、性或產製之化合物。〃光敏劑’’或’’光活化劑"意指其一旦曝於特定波長光下可收光之藥物或其他化合物，其一旦活化可促進欲求的生@ 事件，如非欲求細胞或組織之損害或破壞。 •’熱雷射光凝固作用"指一種光治療型式，其中雷射光直打入病人眼中，以燒灼眼中不正常血管使其密封以免於一步滲漏。〃有效劑量”指足以治療眼睛新血管形成性疾病症狀之劑所謂π光π如此中所用的包括所有波長之電磁照射，包括 1260327 (6) , 可見光。較好，所選擇之照射波長符合可刺激光敏劑之波. 瓦。甚主更好，照射波長符合光敏劑之刺激波長，且為非標的組織低量吸收。星立簡圖1是抗-VEGF作用物NX1838之化學結構。免施 VEGF(血管内皮生長因子）是眼晴中新血管生長之重要刺激物。吾等發現，抗_VEGF療法對新生血管性丧病可提供安全且有效的治療，尤其當配合可減低或消除眼睛新生血管鲁的第二種療法，如光動力療法（pDT)。頃發現，這些方法在治療特徵為眼内非欲求新生血管化方面遠優於大多數的傳統方法，包括單獨使用任一種方法時。因此，本發明提出治療眼晴新生血管性疾病之方法，此方法包括’對病人投予抗-VEGF劑，並佐以可破壞眼中不正、常血管之光療法（如PDT)或其他方法（如光凝固術）以治療病人。此方法可用於治療眼科疾病及特徵為眼睛新生血管化 4失調症’包括下列但不限於此：缺血型視網膜病變，眼鲁内新生血管化，老年型黃部病變，角膜新生血管化，視網膜新生血管化，脈絡膜新生血管化，糖尿病性黃斑部水腫，糖尿病性視網膜缺血，糖尿病性視網膜水腫，及增殖型糖尿病性視網膜病變。抗-VEGF治瘙抑制VEGF活性或產製力的各種抗- VEGF療法，包括適合體及VEGFk體’均可運用且可用於本發明方法中。較佳的 -10-

1260327 ⑺ 抗-VEGF作用物為VEGF核酸配體，如在U.S. Pat. Nos. 6,168,778 B1 ； 6,147,204 ； 6,05 1,698 ； 6,01 1,020 ； 5.958,691 ； 5,817,785;5,811，533; 5,696,249; 5,683,867; 5,670,637;及5,475,096 中所述。特佳的抗- VEGF作用物是EYE001(先前稱之為 NX 1838)，其為一種經修飾且聚乙二醇化之適合時，以高親和力與主要的可溶性人類VEGF同型結合，且通式結構示於圖 1 中（述於 U.S. Pat. No. 6,168,788 ； Journal of Biological Chemistry, Vol. 273(32): 20556-20567 (1998); and In Vitro Cell Dev Biol.-Animal Vol. 35:533-542 (1999)) ° 另夕卜，抗-VEGF作用物可為如VEGF抗體或抗體片段，如 U.S. Pat. Nos. 6，100,071 ; 5,730,977 ;及WO 98/4533 1 中所述。依據本發明可與抗- VEGF作用物組合使用之其他適合的抗 -VEGF作用物或化合物包括與VEGF受體特異之抗體（如U.S. Pat. Nos· 5,955,3 1 1 ; 5,874,542 ;及 5,840,301);可抑制，調節及 /或調控酪胺酸激酶訊號轉導之化合物（如U s. Pat. No. 6,3 13，138 Bl) ; VEGF 多肽（如 U.S. Pat. No. 6,270,933 B1)及 WO 99/47677);可抑制VEGF在核酸水平表現之寡核苷酸，如反意識股 RNAs (如 U.S· Pat. Nos· 5,71〇，136 ; 5,661，135;5,641，756 ; 5,63 9,872 ;及 5,639,736);類視色素（如 U.S. Pat. No. 6,001，885); 含生長因子之組合物（如U.S. Pat· No. 5,919,459);可結合至膠原蛋白之抗體（如WO 00/40597);及有血管生成抑制活性之各種有機化合物及其他作用物（U.S. Pat. Nos. 6,297,238 B1 ; 6,258,812 B1 ;及6，114,320)。抗-VEGF作用物之投予 -11 -

，病人即投 1260327 ⑻ 一旦病人被診斷出有眼睛新生血管性失調症予抗-VEGF作用物治療以阻斷VEGF之負面作用，由是可纾缓與新血管形成有關之症狀。如上文所討論的，各樣的抗 -VEGF作用物是技藝中已知的，且可用於本發明。這些抗 -VEGF作用物之製法也是熟知的，且是商品化之藥品。抗-VEGF作用物可全身投予，如口服或採或IN注射，並摻合以適合投藥路徑之藥學上可接受之載劑。各樣生理上可接受之載劑可用來投予抗- VEGF作用物，且其調和物是精藝者已乡口白勺，且述於如 Remington’s Pharmaceutical Sciences，· (18th edition), ed. A. Gennaro, 1990, Mack Publishing Company,

Easton，PA and Pollock et al。抗-VEGF作用物較好經由腸外投藥（如肌内，腹膜内，靜脈内’眼内’玻璃體内或皮下注射或植入物）。腸外投藥之：調和物包括無菌水性或非水性溶液劑，懸液劑或乳劑。可、使用各種水性載劑，如水，緩衝水，食鹽水，及其他。其他適合的溶媒實例包括聚丙二醇，聚乙二醇，植物油，明膠，氫化莕類，及可注射之有機酯，如油酸乙酯。此調和_ 物也了 έ有輔助物質，如保藏劑，沾濕劑，缓衝劑，乳化劑及/或分散劑。為了控制活性組份之釋出，也可使用生物可相容’生物可降解之内交酯聚合物，内交酯/乙交酯共聚物，或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物。另外，抗-VEGF劑可由口服攝入投藥。口服用之組合物可氣成固a豆或液體型式，依據醫藥組合物製備技藝中任何已知方法製成。組合物可視所需含有甜味劑，芳香劑，著色 •12-

1260327 (9) 劑，香料及保藏劑以提供較為美味的製劑° 供口服之固體劑型包括膠囊劑，錠劑，丸劑，散劑，及顆粒劑。一般而言，這些藥學製劑含有活性組份並摻合以無毒性的藥學上可接受的賦形劑。這些包括如：惰性稀釋劑，如碳酸^5，碳酸鋼，乳糖，薦糖，葡萄糖，甘露醇，纖維素，澱粉，磷酸#5，鱗酸納，高嶺土等。結合劑，緩衝劑及/或潤滑劑（如硬脂酸鎂）。錠劑及丸劑可另外以腸衣劑製備。供口服之液體劑型包括藥學上可接受之乳劑，溶液劑，_ 懸液劑，糖漿劑，及軟明膠膠囊劑。這些型式含有技藝中常用之惰性稀釋劑，如水或油性介質，且也包括佐劑，如沾濕劑，乳化劑及助懸劑。抗-VEGF劑也可局部投藥，如經由貼劑或可直接施加至眼 · 睛，或經由離子電滲療法。、抗-VEGF作用物可以持續釋出組合物型式提供，如在11.5·

Pat. Nos. 5,672,659及5,595,760中所述。立即或持續釋出組合物之使用依所治療之狀況本質而定。若狀況包括急性或超 ® 越急性之失調症，則立即釋出型式將較優於延長釋出型組合物。另外，於某些預防或長期治療方面，持續釋出型組合物可能較適合。抗-VEGF作用物也可使用眼内植入物來遞送。此植入物可以是可生物降解及/或生物相容之植入物，或可為非生物降解之植入物。植入物對活性劑可以是可滲透的或不可滲透的，且可嵌入眼室内，如前或後房内或可植入鞏膜，經脈 -13 - 1260327 發螺說噂績買 (10) 絡膜空間，或玻璃體外之無血管區域。在一個較佳具體實例中，植入物可定位在無血管區，如在鞏膜，如此令藥物轉鞏膜擴散至欲處理位置，如眼内空間及眼睛黃斑部。再者，轉鞏膜擴散位置較好接近黃斑部。可遞抗-VEGF作用物之植入物實例包括下列裝置但不限於此：U.S. Pat. Nos··· 3,416,530; 3,828,777; 4,014,335 ; 4,300,557 ; 4,327,725 ; 4,8 5 3,224; 4,946,45 0; 4,997,652; 5，147,647; 5，164，188 ; 5,178,63 5 ； 5,3 00,1 14； 5,3 22,691 ； 5,403,901 ； 5,443,5 05 ； 5,466,466 ； 5,476,5 11； 5,516,522； 5,63 2,984； 5,679,666； 5,710,165； 5,725,493 ； 5,743,274 ； 5,766,242 ； 5,766,619 ； 5,770,592 ； 5,7 73,019 ； 5,824,072 ； 5,824,073 ; 5,8 30,173 ; 5,83 6,93 5 ; 5,869,079，5,902,598 ; 5,094,144 ; 5,916,584; 6,001，3 86; 6,074,661 ; 6，110,485; 6，126,687; 6，146,366 ; 6,251，090 ;及 6,299,895 ;及在 WO 01/30323 及 W0 01/28474，均以參考方式納入此中。劑量與載劑混合以產生單一劑量之活性組份量依接受治療之個體及特殊的投藥模式而變化。一般而言，抗屬F作用物應足以減低或消除眼晴新生血管性疾病之症狀之劑量投予0 每次投藥在約1微克/公斤至100毫克/公斤體重之劑量7 平’可用於治療上述之新生血管性失調症。當直接投至目内，較佳劑量範圍為每隻眼約〇 3毫克 -1曰叮

。乂、，，〕0笔克。劑1可P 單一劑量或分成多次劑量投予。一般 4

又卞版而i，欲求劑量應J 一定間隔下投予歷較長時間，通常至少

u I吊王v數週，但數個月S -14- 1260327 發明識萌續賈以上精包括調和口 cr . 厫重投藥例如平。完善量水量而除防性上，4 危險而定抗為力，有及病變斑部病中有極 (11) 之更長投藥時間也是需要的。藝者應明白，確實劑量可依據各種因素多少調整之，所投予《特異抗-VEGF作用物，投藥時間，投藥路徑，物本質’排液逮率，所治療之特殊失調症，失調症之度及病人之年齡，體重，健康狀態及性別。其於各種路徑不同的效率，預期在所需劑量下有極大的變化。口服預〃月為較靜脈内或水晶體内注射還高之劑量水這些劑量水平中之變化可利用標準實驗路徑針對更溱而凋整之，此均為技藝中熟知的。精確的治療有效劑籲平及型式’較好由主治醫師基於上述所鑑知之因素考決定。了治療既存之新生血管性疾病外，抗-VEGF作用物可預投藥以預防或減缓這些失調症之發作。於預防性應用· 尤-VEGF作用物投予至類似或有特殊新生血管性失調症· 性之病人中。同樣地，所投予之精確劑量依各種因素_ ，如病人之健康狀況，體重等。 -VEGF療法之有效性 · 了評估抗-VEGF療法在治療眼晴新生血管形成之效吾等進行許多研$，將述於以下實例中，其中包括在無光動力療法下，投予抗-VEGF適合體至老年型黃斑部後繼發中心凹下脈絡膜新生血管化患者。對老年型黃病變（AMD)後續發之中心凹下脈絡膜新生血管化（cnv) 之抗-VEGF IA期單-玻璃體内注射研究，結果顯示其佳之安全性概況（實例6)。眼科評估顯#，㈣病人在 -15 - 1260327 (12) fiSSSSw- 治療3個月後視力呈現穩定或有所改善，在此時間27%眼睛，於ETDRS圖上明示出視力有3行（3-line)以上的改進。局部或全身均無顯著有關之副作用報告。這些數據證明，對於治眼晴新生血管性疾病，包括溶出髮黃斑部病變及糖尿病性視網膜病變，抗_VEGF療法是一種有希望之新大道。吾等也在AMD後繼生之中心凹下CNV患者上進行抗

-VEGF 1B期多次遞減劑量之安全性研究，其中動力療法下，多次由玻璃體内注射抗-VEGF適合體（實合' 7)女王生研九顯不，其中並無與藥物有關之重大安全担議題。眼科評估顯示’接受單-抗-VEGF適纟體患者，㈣在/口療。個月後’視力主現穩定或有所改善，而在此時期 25%眼睛，於ETD謂上明示出視力“行以上之改善。而接受抗-VEGF適合體及光動力療法二者之病人，可丨主意到在 3個月後有6〇% 3行之増加。抗，適合體於玻璃體内多次注射，在此IB期研究中是可被充份耐受的。

抗-VEGF治療IB期玻璃冑内多，欠注射之臨床内研究結果 (實例7)擴大了吾等在ΙΑΛ單一注射研究之極安全性概沉報告（實例6)。特言之，ΙΒ期研究顯示於玻璃體内相繼三劑抗-VEGF適合體注射（每月投予）’雙眼内及全身之安全性。其並無嚴重相關之副作用。在某些例子所遇到之副作用似乎不相關或是極微事件’此可能可歸因於玻璃體内注射本身。進，此可與史實對照組有益地比較僅以適合體處理組在3個時有25%可觀察到3_行的增如PDT之中樞試驗結果 -16 - 1260327 i_ (is) (2.2%)及其在 3個月時之對照組（i 4〇/0) (Arch Ophthalmol 1999 1 17: 1329-1345)以及模擬的照射對照組（3%) (Ophthalmology 1999，106; 12: 2239-2247)其中不超過3%的病人在此相同時期顯示出此種改進。在3個月時25% 3-行增進與適合體IA期研究中所觀察到的26.7%改進率符合。其可能是藥物的抗-滲透作用造成視網膜下液的再吸收，且因此可改善這些例子中之視力。令人感興趣地，以Genentech抗-VEGF抗體片段進行的近來研究也顯示，在I期的臨床試驗中有26% 3 -行之增進率。此抗體片段與抗- VEGF適合體共有阻斯細胞外VEGF之相同機制。在IB期研究中，於3個月時所觀察到的87.5%的穩定化或改進率，也可與在中樞試驗中以PDT處理病人之50.5%速率有益地比較（Arch Ophthalmol 1999，117: 1329-1345)，並加上 PDT對照組之44%，及在模擬照射對照組中之48%比例 (Ophthalmologh 1999，106; 12:2239-2247)。而抗-VEGF適合體及PDT二者均接受之病人，其在3個月時間60% 3 -行增進也十分令人振奮。在中框3期pdt試驗中，僅2.2%病人顯示出此種視力的改進（Arch 0phthalm〇i 1999 1 17: 1329-1345)。這些研究組中均包括有典型中心凹下CNV 之眼睛。在這些眼睛中所觀察到的視力增進可由以下的發現更一步來支持，即研究者在3個月時決定以pdt再治療之例子僅40%，而在中樞PDT試驗中再治療率則高達93% (Arch Ophthalmol 1999，117: 1329-1345)。此夕卜’目的许多臨床觔研死顯示，抗- VEGF療法可預防角 -17- 1260327 發_説萌績買 (14) 膜，虹彩，視網膜，及脈絡膜由VEGF-所謗生之新生血管化， Arch Ophthalmol 1996, 114: 66-7; Invest Ophthalmol Vis Sci 1994, 35: 101)。在以下實例l〇以EYE001進行的臨床前研究提出證據指出，抗-VEGF療法可用於減低血管滲透力及眼睛新生血管化。抗-VEGF適合體在ROP視網膜新生血管化模式中可顯示更大的效率，且與對照組比較下（p = 〇.0001)受制之視網膜新生血管化達80%。Miles分析模式顯示，在加入EYE001後， VEGF調介之血管滲漏幾乎可完全減緩，且角膜新血管生成模式也顯示，以EYE001新生血管化可更顯著地減低。在天竺鼠之Miles分析研究建議，抗-VEGF適合體可顯著地降低血管滲透力。降低血管滲透力的此特性，經證明在降低CNV 及糖尿病性黃斑部水腫之流體及水腫上十分重要。因此，抗-VEGF療法可充作抗-滲透力及/或抗血管生成作用物。光動力療法（PDT) 如上述，本發明方法一個具體實例是在光動力療法（PDT) 下配合投予抗-VEGF作用物。PDT是一種兩步驟過程，由局部或全身性投予可吸光之光敏劑，如p卜u林衍生物，其可在病人的標的組織中選擇性累積。一旦以活化波長之光照射，可在含有光敏劑之細胞中產生反應性氧，此可促進細胞的死亡。例如，在治療特徵為眼睛新生血管化之眼疾時，可選擇可在眼之新生血管中累積之光敏劑。病人的眼睛再以適合波長之光照射，使不正常血管破壞，由是改善病人的視力敏銳度。光敏劑 -18 - 1260327 依據本發明的光動力療法，可利用許多光活性化合物中任一者進e。例如，光敏劑可為—種以上所選定之標的組織所收集之任何化學化合物，且其當曝於特定波長之下可吸收此光並謗使標的組織損害或破壤。立眘及兴另任何可返回至所選足標的物並吸收光線之任何.化學化合物均可用於本發明中。較好，光敏劑對所投予之動物是無毒的，且可調= 成無毒性組合物。光敏劑在其光降解型式下也較好是盖毒的。理想的光敏劑特徵為在無光化效果下對細胞：：：性，且可自非標的組織中容易地消除。光敏劑之詳盡表列見於如：Kreimer-Birnbaum，Sem Hemat〇1 26:157-73, 1989。光敏劑化合物包括下列，但不限於此：二氧化氯水溶液（chlorins)，細菌氯素（bacteri〇chl〇rins) , §太花菁素 (phthalocyanines)，卟啉類（porphyrins)，紫紅素（purpurins)，部花青（merocyanines)，脫鎂葉綠二酸（phe〇ph〇rbides)，補胃脂素 (psoralesn)，胺基乙醯丙酸（ALA)，血紫質（hematoporphyrin)衍生

物，卟啉烯類（porphycenes)，卟花菁素（porphacyanine)，擴大的類卟啉化合物及前藥，如δ -胺基乙醯丙酸，其可產生如原卟啉之藥物。（如見，下列任一 U.S.專利案之光敏劑： 5,43 8,071 ； 5,405,957； 5,198,460； 5,190,966； 5? 173,504 ； 5? 17 1,74 1 ； 5,166,197； 5,095,03 0； 5,093,349； 5,079,262； 5,028,621 ； 5,002,962 ； 4,968,7 15 ; 4,920，143 ; 4,883,790 ; 4,866，168 ;及 4,649，151) ° 較佳之光敏劑為苯並卟啉衍生物（BPD)，單天冬胺酿氯e6’鋅 g大菁，錫紫紅素，四輕四苯叶琳，及叶吩姆納 (PHOTOFRIN0)。特佳的光敏劑包括綠叶4 (green -19- (16)1260327 porphyrins)，上述任一用二種以上敏劑所吸收最大吸收之本發明光長範圍内之 600及800毫隹调和先敏合至特異的結合，或若之載劑。調劑本質而定之賦形劑，合物，呈穿〇如先前所有關之視力目增加和新此脂蛋白強是也可使用選擇性遞送活性組份更血液脂蛋白其咩述於 Levy et al.，U.S. Pat· No. 5,1 7 1，749 中。光敏劑均可用於本發明方法中。當然，也可使光活性化合物之混合物；然而，治療效力依光〈光而定，如此若使用混合物，則以有類似的組份為較佳。敏劑較好具有介於350毫微米及12〇〇亳微米間波吸收光譜，較好在約400及900毫微米間，最好在 t米間。劑以對標的眼組織提供有效濃度。光敏劑可偶鲁結合配體，其可與標的眼組織特異的表面組份欲求時’可調和以可遞送較高濃度至標的組織和物本質可部份依投藥模式及依所選用之光敏。適合特定光活化化合物之任何藥學上可接受 -或其組合均可使用。因此，光敏劑可呈水性組越黏膜或穿皮組合物，或是口服調和物型式投述’本發明方法在治療罹患與欲求之新生血管鲁敏銳喪失病人是十分有效的。已示出LDL受體數生血管化有關。綠p卜琳，且特別是bpd-ma可與烈父互作用。LDL本身可充作綠π卜琳之載劑，或脂質體調和物。咸信脂質體調和物可將綠卟啉至血漿低密度脂蛋白組份，其接著充作載劑將有政率地遞送至欲求位置。藉著增加綠叶琳至相之分配’脂質體調和物可使光敏劑更有效率 -20- 1260327 ο” 地遞送至新生血管。綠卟琳組合物含有脂質複合物，包括月旨質體，如U.S. Pat. No. 5,214,036中所述。供靜脈内投藥之月旨質體 BPD-MA可得自 QLT Photo Therapeutics Inc.，Vancouver， British Columbia 〇光敏劑可以各種方式中任一者局部地或全身地投藥，如口服，腸外（如靜脈内，肌内，腹膜内或皮下注射），局部地利用貼劑或植入物，或化合物可直接放入眼内。光敏劑可以乾#]和物型式投予，如丸劑，膠囊劑，栓劑或貼劑。光敏劑也可以液體調和物型式投予，或單獨地加上水，或鲁加上藥學上可接受之賦形劑，如Remington’s Pharmaceutical S.cien_ces,，上文。液體調和物也可以是懸液劑或乳劑。用於懸液劑及乳劑之適合的賦形劑包括水，食鹽水，右旋糖，甘油等。這些組合物可含有少量無毒性佐劑，如沾濕或乳：化劑，抗氧化劑，pH值缓劑等。 · 光敏劑之劑量依各種因素可有大的變化，如光敏劑型式，投藥模式；其所穩帶之調和物，如脂質體型式；或其是否偶合至標的-特異的配體，如抗體或免疫活性片段。可_ 衝擊光敏劑劑！之其他因素包括標的細胞，病人體重及光處理之時機。雖然各種光活性化合物需不同的劑量範圍，若使用的是綠卟啉，則其典型劑量在〇1-5〇毫克/M2(體表面積），較好由約1至10毫克/M2，且更好是約2-8毫克/M2。本發明光動力療法中各種參數間均互有關聯。因此，也可就其他參數來調整劑量，如用於光動力療法中，光之積分通量（fluence)，幅照度（irradiance)，持續時間，投予劑量至 -21 - (18)1260327 治療性幅照之不顯著損及眼光治療病人投予光吸收之光幅照知的，對任何確定其光譜是範圍通常介於加強穿透至體由於曝於光化合物交互作胞結構之瓦解酶體膜，及核結構之閉塞是細胞，接下來在照射治療的組織深度，焦耳/公分2中^ 幅照度通常 mW/公分2間為且有縮短治療由投予光活化，且依投藥織。投予光活間隔時間。所有、‘ ^ ^ ’蠖些參數應亇以凋整，以在組織下，顯著力口強丄Μ，♦。 %視力敏銳度。敏^後I的眼睛組織以波長可為此光敏劑此處所逑之光敏劑，其光譜為技藝中所熟種特足的光居性化合物（photoactive)而言，十分音通的事。對綠卟啉而言，欲求之波長約 550及 695 毫米乏門,LU ι^ϊ ^ -V ^ Η <間。在此辈6圍内之波長對於組織尤佳。照下’光敏劑進入激發狀態且咸信可與其他用形成反應性中間物，如單-氧，其可造成細。可能的細胞標的包括細胞膜，粒線體，溶。由腫瘤及新生血管模式之證據顯示，血管光動力療法的主要機制，其發生係損及内皮是血小板黏附，去粒作用，及血栓形成。期間的通量可有極大變化，依組織型式，標及上覆流體或血液之量，但較好在約5〇-2〇〇 g化。在約150-900 mW/公分2中變化，以在約^50-600 較佳。然而，使用較高照度可因效力而選用時間之優點。 •化劑至光處理之最適宜時間也可有大的變模式，投藥型式，及接受治療之特殊眼睛組化劑後之典型時間，由约1分鐘變化至約2小 -22 - (19) 1260327 時，較妤約5-30分鐘，且更好約1〇·25分鐘照射曝露之時間較好在約丨及3〇分鐘之間，依照射療之功率而定。光照之時間也依欲求之影響而定。例如，對6〇〇 mw/ 公分—之照度，50焦耳/公分2之影響需要9〇秒的照射；15〇焦耳/公分2需照射270秒。幅射進一步由其強度，持續時間，及相對於投予光敏劑之時機（注射彳交之間搞時間）來明定。強度必須使幅射足以穿透皮膚及/或可到達欲治療之標的組織。持續時間必須充足，使得足夠的光敏劑被光活化以作用在標的組織上。在施加光線如之注射後間隔時間十分重要，因為大約上投予光敏劑後’光施加的愈快則1 )所需之光適量愈低，及2)光敏劑之有效量愈低。臨床檢查及基底照相通常在光動力療法後並未立即顯現出顏色變化，但在一些病例中於約24小時後，其視網膜發生輕度變白情形。若觀察到損及内皮細胞，就組織學而言為脈絡膜新生血官化封閉之較佳證實。與新生血管組織瓦解有關之2胞化胞質及不正常核之偵測觀察也可予以評估。一般而言，光動力療法在減低新生血管化之效果，可於治療後特足期間’利用標準的螢光血管攝影技術進行。pDT 的效力也可經由臨床評估視力敏銳度而決定，利用技藝中之標準方法’如傳統的視力圖，其中以可識別特定大小字母之能力來評估視力敏銳度，通常在一定大小行列中有五個字母。 -23 - 1260327 發-戴镇績買: (20) 其他治療新生血管性疾病之方法對於治療新生血管性疾病，除了 PDT外還有許多其他療法可與抗- VEGF療法組合使用。例如，已知為熱雷射光凝固作用（Thermal laser photocoagulation)之光療法型式是治療各種眼睛失調症的標準眼科步騾，包括視網膜血管問題（如糖尿病性視網膜病變），脈絡膜血管問題及黃斑部傷害（如老年型黃斑部病變）。此步騾包括使用雷射光以燒灼病人眼中不正常血管，以封閉使不再滲漏。（如見，Arch, Ophthalmol. 1991， 109: 1109-1114)。另外，可減少或避免非欲求新生血管化發展之化合物，包括其他抗-VEGF作用物，抗-VEGF作用物或其他可抑制眼新生血管化發展之作用物，可與抗-VEGF療法合用。本發明特色及其他詳述，將更特別描且在以下實例中描述較佳技術及實驗結果。針對說明本發明目的提出這些實例，且不應構成其限制。實例在以下實例中，使用抗-VEGF聚乙二醇化之適合體 EYE001。如上文所討論的，此適合體是與聚乙二醇（PEG)-共軛的寡核甞酸，其可與主要可溶性人類VEGF同型， VEGFI65以高特異性及親和力結合。適合體結合及失活VEGF 之方式類似直接拮抗VEGF之高親和力抗體。實例1 - 5報告，在各種眼新生血管化模式中以抗-VEGF適合體進行臨床前結果，實例6報告在滲出型AMD患者中之臨床床IA期安全性結果，且實例7報告臨床IB期結果。一般而言，劑量及濃度 -24- 1260327 …====丨 (21) 發萌說萌績買僅以ΕΥΕ001之寡核苷酸重量（ΝΧ 1838)表示，且以對37微克/ 毫升/ A26Q單位之適合體之消長係數大約值為基礎° 實例1 ·· 角質血管滲透力分析（Miles分析） VEGF生物活性之一是經由與血管内皮細胞受體特異地結合而增加血管滲透力。此交互作用結果造成緊密的内皮結合之鬆弛，接著血管流體滲漏。由VEGF謗生之血管滲漏可於活體内偵測，係追踪因皮内注射VEGF造成Evans Blue染料自血管中滲漏（Dvorak HF，Brown LF, Detmar M, Dvorak AM Vascular Permeability Factor/Vascular Endothelial Growth Factor, Micro vascular Hyperpermeability, and Angiogenesis. Am J Pathol 1995, 146:1029)。類似地，分析可用於偵測化合物阻斷VEGF 生物活性之能力。 VEGF165 (20-30 nM)於活體夕卜先與 EYE001 (3 0 nM 至 1 ) 混合，再由皮内注入天竺鼠背部已刮毛之皮膚内。注入後 3 0分鐘，在注入位置四週滲漏的Evans Blue染料利用電腦化之外形分析系統定量。數據（未示出）證明，由血管中經 VEGF-謗使之指示染料之滲漏，在低至100 nM濃度下共投予 EYE001可幾乎完全地抑制。實例2 :角膜血管生成分析含有VEGF165之異丁烯酸聚合物團塊（3微微莫耳）植入大鼠角膜基質内，以謗使血管生長成正常的無血管角膜。 EYE001以1，3及10毫克/公斤之劑量靜脈内投予至大鼠，每天一或二次共五天。在處理期末了，個別的角膜均顯微照相。血管在角膜組織内發展之程度，及為EYE001之抑制情 -25 - 1260327 _ (22) 發碼辞靖績寅況，以顯微相片標準化外形分析定量之。，數據（未示出）證明，當與鱗酸鹽缓衝食鹽水（PBS)的處理比較時，以EYE001全身處理可造成veGF·•有關之血管生成顯著地抑制（65%)。以10毫克/公斤每天一次處理，和每天二次處理一樣有效。3毫克/公斤劑量之活性和1 〇毫克/公斤劑量類似，但在1毫克/公斤時並無顯著的效率。實例3 :早產視網膜病變研杳即使ROP與糖尿病性視網膜病變及AMD顯著不同，R〇p的老鼠模式已用於說明VEGF在此疾中不正常視網膜血管化鲁之角色（Smith LE，Wesolowski E，McLellan A，Kostyk SK，Amato DR，Sullivan R，D’Amore PA· Oxygen-induced retinopathy in the mouse. Invest Ophthalmol Vis Sci. 1994, 35:101)。這些數據對於EYE001在此模研究抗-血管生成特性可提供基礎原理。 - 分別疋9，8，8，7及7隻的各小窩老鼠置於室溫空氣下或呈高氧，並以PBS或EYE001 (1 , 3或10毫克/公斤/天）於腹膜内處理。分析終點，新微血管經由視網膜内襯膜向外生長至水晶體液，以顯微鑑定評估，並自所有經處理及對照老_ 鼠的各眼中，於20個組織切片中計數新生血管芽叢，可在 10毫克/公斤及3毫克/公斤劑量下觀察到視網膜新生血管化較未處理對照組有80%的減低。（p = 〇〇〇(n，於二者）。實例4 :人類腫瘤異種移枋物 EYE001之活體内效力在植入初生老鼠之人類腫瘤異種移植物上測試（A673橫紋肌肉瘤及維耳姆斯（Wilms)瘤）。在此二例子中，已證實腫瘤發展後（2⑻亳克），老鼠於腹膜内注入 -26 - (23) 1260327 一發觸〇毫克 / 公斤 EYE001，_ 妥一、A ^ -- 的對 /入。對照組則以序列混雜照週合體處理（寡核菩酸）。老鼠在和對照組比較乂 10¾克/公斤EYE001—天一次處理後，A673橫紋肌肉瘤生县生長抑制可達8 0%，而維耳姆斯瘤有84%。在維耳姆斯瘤田伏八甲仔止治二週後，處理組動物腫瘤可十分有力地回禮士奴大小，如此和對照組比較下，腫瘤大小不再有任何差異。复_例5 : EYE001存免子永曰―七、一戈謝動力學免子之取仔及照顧均依墟所古—p占豫所有可申請州及聯邦準則，並固+ 貫驗動物看護原則，NTWP ki.. /、 Nm Publication #85-23，修訂於 1985 年）。雄性NewZealand白色兔子共18隻以玻璃體内注射方式投予EYEOOi。各動物以0.15毫克/眼二侧注射（1 〇毫克/隻動物）接受劑量，在40微升/眼之體積下。在投藥後收集edta_ 血漿及玻璃體液檢品歷28天，並冷凍貯存（-7〇t：)直到分析為止。動物以逐血而犧牲後分別收集各眼之水晶體液。以 HPLC分析方法決定玻璃體液中EYE001濃度，此法和Tucker et al.先削所述類似（Detection and plasma pharmacokinetics of an ant i-vas cul ar endothelial growth factor oligonucleotide-aptamer (NX1 838) in rhesus monkeys. J. Chromatogr. Biomed. Appl.. 1999, 732:203-212)以及雙重雜交分析法，此類似Drolet et al.先前所述（Pharmacokinetics and Safety of an Anti-Vascular Endothelial Growth Factor Aptamer (NX1838) Following Injection into the Vitreous Humor of Rhesus Monkeys. Pharm. Res.， 2000, 17:1503-15 10)。平均兩次分析結果可算出玻璃體液之濃度。 -27 - 1260327 (24) I舞蜩説钥績贺_ 血漿ΕΥΕ00 1濃度則僅以雙重雜交分析決定。每隻眼以0.50毫克（每隻動物為1.〇毫克）經二側注入單一劑量EYE001後，玻璃體液水平由最初之35〇微克/毫升，以一級排出方式明顯地下至第28天之1.7微克/毫升。計算出終端半衰期為8 3小時，和在怪河猿中所見之94小時類似（Drolet et al.，上文）。投予EYE001 4週後，玻璃體液之藥物水平（約190 nM)均保持在VEGF之KD值上（2〇〇 pM)，而若假定兔子及人體玻璃體液之藥物代謝動力參數是可比較時，則可推知每月一次之劑量在人體中是適合的。和玻璃體液所見之高水平書 ΕΥΕ00 1相反的，血漿濃度貝ij是顯著地較低，且第1天至第2 1 天之濃度在0.092至0.005微克/毫升範圍内。血漿水平明顯地以一級排出方式減少，並計算出終端半衰期為8 4小時，血漿終端半衰期模倣恆河猿中所見之玻璃體液半衰期（Drolet ” et al·，上文），且可作為典型附壁（flip-flop)動力學之指示。其，中眼睛消除是血漿消除之速率決定步騾。這些數據與由玻璃體液以緩釋速率釋出至全身循環之高度穩定適合體符合 (具核酸酶抗性）。 · 實例6 :臨床試驗- I A期研究吾等進行ΕΥΕ001單一玻璃體内注入之重中心，開放標 it ，劑量漸增加之研究（multi-centered, open-label, dose-excalation)，病人為老年型黃斑部病變後繼發中心凹下 CNV，且視力敏銳度在ETDRS視力圖上比20/200還差。以〇·25 毫克起始劑量於玻璃體内注入一次。也測試0.5，1，2及3 毫克之劑量。進行基低照相及螢光素攝影之完全眼科檢 • 28 - 1260327 爹稱說笋讀·買' (25) 查。共處理Η位病人。選擇準則利用以下納入及排除準測進行研究病人之選擇。 ~ ·病人必須在5 0歲以上，且大體上健康良好，受又研九的眼有最佳板正之視力敏銳度（其在ETDRs圖上比 2〇/200還差），且各 '组巾至少第—位病人（㈣比鳩⑻還差；在另一眼有比20/64還好之最佳校正之視力敏銳度；中心凹 1 CNV(典型的及/或閉塞型CNV)黃斑部光凝固研究（MPS)圓盤面積>3_5;有清楚的眼中層及適度的瞳孔擴張以令立體鏡基底照相有良好品質；且眼内壓在22毫米汞柱以下。避'麼準則.排除情況包括顯著的不透明，包括白内障，其可能會干擾視力銳度，毒性評估或基底照相；有眼科疾病者包括B光眼，糖尿病性視網膜病冑，視網膜血管閉鎖或其他可能會嚴重影響視力之狀況（和由獅來之⑽不同）’存在有CN V其他原因，包括病理性近視（角膜孤度在以上）’目艮睛組織漿菌病症候群，血管狀痕，脈絡膜瓦解及多病灶脈絡膜光；針對CNVf要或考量額外雷射冶療之病人；在研究前3個月内進行任何眼内手術者；傷處之血液占 50%以上者；已進行坡璃體切除術者；在治療amd上有其他檢查劑先行或同時治療纟’而综合維生素及痕量金屬除外；有下列任-種基礎全身性疾病者，包括失控之糖尿病，或有糖水病性視網膜病變者；心臟疾#，包括研究前咖月内有心肌梗塞者，及/或有相關臨床症狀之冠狀動脈疾病及/或在ECG上顯出有缺血情況者；中風（研究前丨2個月 •29 - (26) 1260327 發稱m萌績w 何重大手術 2 )，王動流血之失調症；在手術前一個月内任 _ /躍^胃潰癌’且研究前6個月内有流血者；以皮質固半卩思王身治療者（如口服發尼松），或其他抗-血管生成藥物（如沙利多邁）。研究藥物藥口口為由EYE001(七各為Νχΐ 838)溶於1〇❿^^磷酸鈉及〇 9% 虱化鈉緩衝注射液而組成之即可用的無菌溶液劑，且置無菌及無熱原之！ cc玻璃注射針筒内，有一個包覆之塞子黏連至塑質柱塞，並在預接之27號針上有一個橡皮端罩。聚乙一醇化之迺合體以1，2.5，5，1〇，20或3〇毫克/毫升EYE〇〇1 之活性藥物濃度供應（以寡核苷酸含量表示），以提供1〇〇微升之輸送量。病人登記病人納入研究前，要先取得書面的議定書協會覆審委員 (Institutional Review Board) (IRB)許可，通知同意書及任何附加的病人資料。結果以0.25至3.0(毫克/眼）未到達劑量-限制毒性之變化劑量，在1 5個病人中進行單一劑量範圍内安全性研究。調和物的黏度使劑量在3毫克以上不再逐漸昇高。病人年齡在64至92 歲之間。納入的病人有八位男性及八位女性，且均為白種人。十五位病人中有十一位經驗列缓和或中度的副作用，此可能和投予EYE001有關：輕微的眼内發炎，盲點，視力扭曲’蓴麻療’眼睛疼痛及疲勞。此外，此中有一個嚴重 -30- 1260327 爹·荑此因一病人被診斷出有乳 (27) 的副作用’其和受试樂品無關癌，且在治療前已發現有硬塊在注入EYE001後3個月，15位中12位（8〇%)的眼晴有穩定或經改進之視力。有4位病人（26 7%)有顯著改進的視力（在此同時），其在ETDRS視力圖上視力有％行以上的增進。在3 個月時有此改進視力的病人，在ETDRS視力圖上可注意到有+ 6 4及+ 3行之增加。並未發生意外的視力安全性問題。以彩色照片及螢光素血管圖評估，顯示並無視網膜或脈絡膜毒性跡象。吾等IA期臨床研究顯示，抗_Vegf適合體單一劑量破璃體内投藥’ 士全性可咼達3耄克/眼。並無顯著的眼睛或全身性副作用。臨床醫師同意’為評估對於滲出型AMD任何可能的處理方式，至少一隻眼的追踪是必要的。然而，3個月的數據可取自某些預料得到的研究，且可用來評估眼睛安全性及新療法任何潛在之趨向。組織學對照組指出，在3個月時於ETDRS視力圖上3行以上i曰進中可知’僅1.4%(中框光動力學試驗）（Arch Ophthalmol. 1999, 1 17:1329-1345)及 3.0% (幅射研究）（1999, 1〇6; 12:2239_2247) 的眼睛有顯著的視力改進。此外，在TAp研究之pDT_處理組 (Arch Ophthalmol. 1999，117:1329-1345)在 3個月時僅見2.2%例子視力有改進。這些發現可證實吾等臨床結果，即在繼發的任何型式（典型，閉鎖或混合型）CNV，在任何時間架構下均罕見顯著的視力改進。 -31 - 1260327 ^, (28) 發·#缚令買在吾等的研究中，在投予抗- VEGF適合體後3個月（於玻璃 · 體内投藥），80%的眼睛有穩定或改進的視力，其中26.7%在 ETDRS圖上有3行以上之增進。這些視力的改進在某些以適合體治療病人中可由臨床及血管照相發現來支持。視力之穩定始終是滲出型AMD研究之目標，如此在3個月時，於 26.7%病人中可見顯著視力敏銳度的增進（ETDRS上3行），其中僅一種劑量是非預期的。很清楚地，組織對照組並不適合比較。此外，短的追踪期，小的樣品量，及不同的CNV 型式（即典型，閉鎖，或混合型CNV之百分率）預先排除任何 _ 最終結論或比較。然而，似乎以適合體處理的眼睛在3個月時必定顯出至少極佳的視力安全性，並認可以進一步研究。總而言之，以抗-VEGF適合體進行的臨床前及早期臨床結果（單一玻璃體内注射）十分令人振奮。單一劑量玻璃體内：注射之安全性，已確立可高達3毫克/眼。 - 實例7 :臨庆試驗-IB期研究

吾等進行3毫克/目艮（抗-VEGF適合體）之多重中心，開放標誌，劑量重覆之IB期研究，病人為AMD後繼發的中心凹下 CNV，且研究目艮睛之視力敏銳度比20/100還差，而另一目艮則比20/400還好。若3個以上病人經驗到劑量-限制性毒性 (DLT’s)，貝1J劑量減低至2毫克之後為1毫克（若必要時）。欲治療之病人數為20; 10位為單獨的抗- VEGF適合體，10位為抗 -VEGF療法及PDT 〇對於研究選出美國十一處進行。 DLT(s)之定義若研究中之病人經驗到下列任一 DLTs，則劑量將如上述 -32 -

1260327 (29) 般減少：目艮之DLT : 照相評估加速形成之白内障：一單位的進行，由採自Wisconsin Cataract Grading System之 Age-Related Eye Disease Study (AREDS) Lens Opacity Grading Protocol來定義。臨床檢查臨床上顯著的發炎，其是嚴重（視網膜血管分佈朦朧具象化）且威脅視力。其他AMD病人不常見之眼睛異常，如視網膜，動脈或靜脈阻塞，急性視網膜剥離，及瀰漫性視網膜出血。視力敏銳度：視角加倍或更糟（失去1 5個以上之字母）；視力敏銳度分數少於15字之初之病人轉變成無光覺 (NLP) ’除非視力之喪失乃因在第2至7天，3 0-35天或58-63 天期間因注射步驟所致之玻璃體出血所致。眼壓计I ·在二次相隔至少一天的分別檢查下，眼内壓 (I0P)較基線多25毫米汞柱以上，或在無藥理介入下3〇毫米汞柱壓力持續一個星期以上。螢光素血管圖在基線上並未見視網膜或脈絡膜血管有明顯的異常·脈絡膜未灌注（影響一個象限以上）延後，在動脈·靜脈過渡時間中（大於15秒）；視網膜動脈或靜脈閉鎖（由基線開始之任何偏差）；在無眼内發炎下，擴散視網膜滲透力改變，影響視網膜之循環。 1260327 (30) 發_説鵪續贺全身性DLT ： 111(嚴重的）或IV(威脅生命）期毒性，或任何顯著嚴重毒性，確實和檢查者之研究藥物有關。選擇準則利用以下納入及排除準則選出研究病人：納入準測:眼之準則包括：研究眼睛有最佳校正之視力敏銳度，其在ETDRS圖上比20/100還差，另一眼有最佳校正之視力敏銳度等於或大於20/400，中心凹下脈絡膜新生血管化，其中活動性CNV(或典型的及/或閉鎖的）為老年型黃斑部病變續發，大小較12個視板總面積還小，清晰的眼中層及適度的曈孔放大以使基底照相分光品質良好，且眼内壓在2 1毫米汞柱以下。一般的準則包括任一性別之病人，年齡在 50 歲以上；依據 Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG)/World Health Organization (WHO)分數，其行為狀態 S2，正常的心電圖（ECG)或臨床上無意義之變化；女性必須使用有效之避孕藥，研究前至少已停經12個月，或手術不育；若無則在處理前4 8小時内必須進行血清懷孕試驗，且在開始處理前結果應是可取得的，在最後一劑EYE001後，應補充有效的避孕藥達至少28天；適度的血液學功能··血紅素210克/公合；血子板數目2 150 X 109/升；WBC24X 109/ 升；PTT在研究單位正常範圍之内；適度的腎臟功能：血清肌酸酐及BON在正常上限2 X之内（ULN);適度的肝功能：血清膽紅素S1.5毫克/公合；SGOT/ALT，SGPT/AST及鹼性磷酸酶均在研究單位2x ULN内；書面告知之同意書；及所有研 -34- (31) (31)1260327 究訪視均有回復之能力。若在研究之眼睛或全身有下列任一準則出現’則病人不：任該研究：病人已安排接受或已接受

Visudyne任何先前之光重/j六底、、土 · 動力療去，日月顯的介質晦暗，包括白内障，可能會干擾视力敏銳度，毒母I王汗估或基低照相；有其他脈絡膜新生血管化眉田左A ^ 、化原因存在，包括病理性近視（球面弧度在8 D以下）’眼晴組織漫菌病我彳卜與水囷病症候群，血管狀痕，脈絡 k瓦解及多病灶脈絡膜爷· p j匕—J,, y 膝人，已“不或考慮治療脈絡膜新生血管化要額外雷射治療之病人· 私π、縻 < 病人，開始研芄前3個月内有眼内手術者；曾切除玻璃體；左卷Δ % ,在/口療AMD時有另外檢查劑之先

行或伴隨治療，但综合维味音另诡I 丁口本生京及痕1金屬除外；先前以光子或質子幅射過另一眼；對於血管攝影中所用之螢光素染科或對EYE001調和物中之組份已知會過敏者；有下列任一基礎义全身性疾病者，包括：失控之糖尿病或有糖尿病性視網膜病變，心臟疾病：研究前12個月内有心肌梗塞，及/ 或人I床症狀有關之冠狀動脈疾病，及/或在上示出有缺血情況，腎或肝功能受損，中風（研究前1 2個月内），活動1*生感染，活動性流血失調症，在研究前一個月内任何重大手術步驟’活動性胃潰瘍疾病，研究前6個月内有流血情形；以皮質固酮類（如口服潑尼板）或其他抗血管生成性藥 ★(如4利多邁）伴隨全身治療；曾輻射頭及頸部；在過去 6 0天内針對任何狀況曾以檢查劑處理者；過去$年内有診斷出任何癌症者，但基礎或磷狀細胞癌除外。研究藥物 -35 - 1260327 (32) I發^^績貢― •r / ^ 藥物供應在此研究中，以EYE001為抗- VEGFS療劑。ΕΥΕ〇〇1藥物是一種聚乙二醇化之抗-VEGF適合體。其調和在ρΗ 5_7之磷酸鹽缓衝食鹽水中。為調整ρΗ值可加入氳氧化鈉或氫氯酸。 ΕΥΕ001調和成三種不同濃度：3毫克/1〇〇微升，2毫克/1〇〇微升及1 t克/100微升，包裝在無菌的i毫升，if usp等級玻璃）王射器，配上無菌的2 7號針。藥物無保藏劑，且僅以玻璃體内注射單次使用。產物若混濁或出現粒子即丟棄不用。 /舌f生、’且伤為ΕΥΕ00 1藥物（聚乙二醇化）之抗_ vegF適合體，且有30¾克/毫升，2〇毫克/毫升及1〇毫克/毫升三種濃度。賦形劑為氯化鈉，usp ;磷酸鈉一鹼價，_水合物，; 磷酸鈉二鹼價，七水合物，usp ;氫氧化鈉，usp ;氫氯酸， USP ;及注射用水，USP。劑量及製d 藥物為提供在單次使用之玻璃注射器内之即可用無菌溶液劑。注射器自冷藏室貯存移出至少30分鐘後（但不起k】時）才使用’以令溶液到達室溫。注射器内容物之投予’包括將有螺紋之塑質柱塞样接上注射器筒身内之橡皮塞移去橡皮端蓋即可投予產物。療程和持續時間。將100微升EYE001，以坡璃體内方式注入連、’$二劑各相隔2 8天。加入研究之病人—劑為3毫克，右3位以上經驗到劑量限制性毒性，（DLT)，則劑量可減低至2耄克，且必要時可減至i毫克。各自取另1〇位病人來進行。 -36- 1260327 丨―==Ί (33) 發績莨， PDT投藥在主要是典型的CNV病例中，PDT時只給予ΕΥΕ001。PDT 投藥之標準要求及步驟，如（Arch Ophthalmol. 1999, 117:1329-1345中所述。PDT需在抗- VEGF適合體投予前5-10 天給予。病人登入病人加入研究之前，先取得書面的議定書IRB許可，及告知的同意書。由研究處所之人員完成病歷型式之篩選頁。符合適任準則，並已提出書面告知同意書之病人可登入研春究。追踪程序病人在注射後，醫師進行數天臨床評估，一個月後再次進行並再次注射。在前4個月，每月進行ETDRS視力敏銳 ' 度、柯達鉻片照相及螢光素血管X射線檢。 · 終點

在DLT段落（上文）中之安全性參數是研究的主要終點。此外，在3個月時有穩定的（0列變化或更好）或改進的視力之病人百分率，在3個月時有3行以上增進之病人百分率，及由檢查者所決定的在3個月時PDT再處理之需求，為其他的研究終點。結果在此研究中，2 1個接受治療的病人並無嚴重相關之副作用發生。二個病人經驗到嚴重未相關之副作用。有一病人， 86歲婦女有長期周邊血管疾病以及不明確高血壓及II型糖 -37- 篸勞藏钥讀:買 1260327 „ 尿病，經歷過2次心肌梗塞’第二次是致命的。第一次事件發生在第一次眼内注入抗-VEGF適合體後1 1天°第二次事件發生在第三及第一次注射後1 6天。急性心肌梗塞發生間隔約2個月。咸信這些事件和適合體無關’且以藥物藥效動力學數據為準知藥物之全身水平疋可忽略的。弟一位病人， 76歲男子有10個月抑鬱企圖自殺之病史，在第三及最後一

劑抗-VEGF適合體後1 1天服用捕息熱（AcetaminoPhen)。病人的精神狀況有所改進。病人的治療保持不變’且病人目前在研究中進行。表1 A - C示出這些各組不相關或不嚴重事件。在以單獨的抗-VEGF適合體處理之病人中，眼睛不良事件可能與投予抗 -VEGF適合體有關，包括：玻璃體漂浮物（4例），輕微的前房發炎（3例），眼刺激（2例），眼内壓增加（1例），眼内空氣（i 例），玻璃體模糊（1例），結膜下出血（1例），眼睛疼痛（1例），眼臉水腫/紅腫（1例），乾眼（1例）及結膜充血（1例）。和投予抗-VEGF適合體有關之可能事件包括：星狀異常（1例），視力異常（1例）及疲勞（1例）。和投予抗- VEGF適合體無關之事件包括頭痛（1例）及虛弱（1例）。以抗- VEGF適合體及PDT處理之病人中，與組合治療可能有關之不良事件包括：下垂 (5例），輕微的前房發炎（4例），角膜剝離（3例），眼睛疼痛（3 例），外物之感覺（2例），結膜水腫（1例），結膜下出血（1例）及玻璃體脫垂（1例）。和組合治療可能有關之事件包括疲勞 (2例）°和組合治療無關之事件包括色素上皮剝離（丨例），關節疼痛（1例），上呼吸道感染（丨例）及膀胱感染（丨例）。在組 -38 - 1260327 —^— (35) .丨發看断合療法中所見之脫出及角膜剥離增加，可能和使用隱形眼睛加上PDT有關。注意到前房發炎或玻璃體模糊之例子均是輕微且暫時的。

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1260327 (36) 表1A 與單獨投予抗-VEGF適合體或組合PDT有關之不良事件不良事件抗-VEGF適合體 N(%) 10位病人抗胃VEGF適合體&PDT N(%> 11位病人脫出 0 5 (45.4) 眼險水腫/紅腫 1(10) 2(18.2) 結膜充血 1(10) 0 結膜水腫 0 1(9.1) 結膜下出血 1(10) 1(9.1) 乾眼 1(10) 0 角膜剝離 0 3 (27.3) 前房發炎 3 (30) 1+細胞 4 (36.4) 痕量細胞痕量細胞 1+KP; 痕量細胞痕量細胞痕量細胞痕量細胞 IOP增加 1(10) 0 瞳孔異常 0 0 皮膚發紅 0 1(9.1) 白内障 0 0 玻璃體模糊 1(10) 2(18.2) 玻璃體脫垂 0 1(19.1) 玻璃餅漂浮物 4(40) 0 星狀異常 1 (10) 0 眼内空氣 1(10) 0 瞳孔四週出血 0 1(9.1)

-40 - 1260327 (37) 不良事件抗-VEGF適合體抗-VEGF適合體&PDT N(%) N(%) 10位病人 11位病人色素上皮剥離 0 1(9.1) 視力異常 1(10) 0 光幻覺 1(10) 0 外體感覺 1(10) 2(18.2) 眼睛疼痛 1 (10) 3 (27.3) 瞼痙攣 0 1(9.1) 眼刺激 2(20) 1(9.1) 眼觸痛 0 1(9.1) 眼搔癢 1(10) 0 流淚 1(10) 0 頭痛 1(10) 0 鼻漏 0 1(9.1) 疲勞 1(10) 2(18.2) 虛弱 1(10) 0 關節疼痛 0 1(9-1) 上呼吸道感染 0 1(9.1) 膀胱感染 0 1(9.1) 1260327 發萌爲萌績買 (38) 表1B 與單獨投予抗-VEGF適合體有關之不良事件不良事件相[互關係抗-VEGF適合體可能：玻璃體漂浮物 4 前房發炎 3 眼刺激 2 玻璃體模糊 1 眼内壓增加 1 眼内空氣 1 結膜下出血 1 結膜充血 1 眼睛疼痛 1 眼險水腫/紅腫 1 乾眼 1 可能：星狀異常 1 視力異常 1 疲勞 1 不相關的：頭痛 1 丨虛弱 1

-42 - 1260327 發_巍萌績買 (39) 表1C 與投予抗- VEGF適合體及PDT有關之不良事件不良事件相互闕係抗-VEGF適合體& PDT N 1 1位病人可能的：脫垂 5 前房發炎 4 角膜剝離 3 眼睛疼痛 3 外體感覺 2 結膜水腫 1 結膜下出血 1 玻璃體脫垂 1 可能的：疲勞 2 不相關的：色素上皮剝離 1 關節疼痛 1 上呼吸道感染 1 膀胱感染 1

有二位病人選擇提早中止在研究中之參與。有一病人相信其視力並未增進，且不想再進一步注射。另一位病人有抑鬱及交通問題。在適合體第三及最後注射前，二人均收回其同意書。在其參與研究的整個過程，二者之視力敏脫 -43 - 1260327 ~~~~：—— (40) 發螺説萌績買度均穩定。第三位病人在最後訪視前死亡。對此研究之任何病人，勿需減低劑量。這些病人的彩色照片及螢光素血管圖總覽顯示，並無視網膜血管或脈絡膜毒性跡象。在這些病人中（N = 8)，完戶單獨抗- VEGF適合體3個月療程者，87.5%有穩定或增進之視力，且在3個月時於ETDRS視力圖，25.0%有視力3行之增進。（見表2)。表2. 中心凹下CNV病人以抗- VEGF適合體單獨投藥之視力數據病人# 基線第8天第29天第57天第85天土行數在第85天 03-001 20/50 20/40 20/40 20/32 20/32 +2 04-001 20/125 20/64 20/80 20/80 20/80 +2 06-001 20/160 20/125 20/100 20/125 OUT + 1 07-001 20/100 20/100 20/64 20/80 20/80 +1 07-002 20/320 20/80 20/64 20/64 20/50 +8 08-001 20/125 20/125 20/100 20/100 20/160 -1 09-001 20/500 20/200 20/400 20/320 (第36天） OUT +2 10-001 20/500 20/640 20/500 20/400 20/500 0 10-002 20/200 20/125 20/160 20/160 20/160 +1 10-003 20/400 20/160 20/160 20/160 20/126 +5 -44 - 1260327 3個月時之視力變化丨已穩定或有增進 23行的改進 ΕΥΕ001 經處理的-(Ν = 8) 其代表完全計劃書之所有眼睛 87.5% 25.0% 1 1位病人以抗-VEGF適合體及PDT處理。在此组病人中 (Ν=10)(其完成3個月的治療），在3個月時90%有穩定或改進的視力，且60%在ETDRS視力圖上有3-行的視力增進，表3)。這些3-行的增進包括視力在ETDRS視力圖上有+3，+5，+4， + 4，+ 6及+ 3行的增進。 -45 - 1260327 (42) 發萌識萌續買表3中心凹下CNV病人以抗- VEGF適合體組合PDT治療之視力數據病入# 基線第8天丨第第57天第85天 :重覆 PDT i 土行數在最近時間點 06/011 20/400 20/320 20/100 20/640 20/200 否 +3 06/012 20/250 20/160 20/125 20/125 20/80 否 +5 08-011 20/40 20/32 20/20 20/20 20/26 +2 10-011 20/160 20/160 20/160 20/160 OUT 否 0 05-011 20/100 20/64 20/64 20/64 20/40 否 +4 12-011 20/160 20/100 20/250 20/200 20/200 否 -1 06-013 20/800 20/640 20/800 20/800 20/320 是 +4 02-011 20/500 20/200 20/160 20/80 20/126 是 +6 06-014 20/100 20/80 20/80 20/80 20/100 否 0 06-015 20/125 20/40 20/64 20/50 20/80 否 +2 02-012 20/500 20/500 20/125 20/320 20/250 +3 在3個月時之視力變化 _ 於穩定或改善 >3行之改進 EYE001 經處理的-(N=10) 其代表完成計劃書之所有眼睛 90% 60%

對於並未示出3行增進之其餘病人，僅一人在3個月時顯示有視力之喪失，且此病人在此時間點僅有1行之流失。此 -46 - (43)1260327 組病在 1 0眼雖確定各種例常特殊内。在以參人無人在3個月時有流失丨行以上之視力。 3個月時以PDT重覆處埋（其需求僅由檢视者決定），於中之4眼進行（4〇%)，其係參與研究的完全持續睛間。甚通』J實例然本發明已參照較佳具體實例描述，精藝者 < 餐其基本特性’在不偏離其精義及範蜂下對發明是變化及修飾’使其適合各種用途及條件。使用無之實驗，精藝者可確定或可明白，與此中所述本發刀具體實例相當者。此類相當物也涵蓋在本發明範圍之本說明書中所提及之所有刊物考方式納入。專利及專利申請案均 •47-

Claims

1260綠7i3289G號專利申請案中文申請專利範圍替換本(94年11月）

拾、申請專利範圍 1. 一種治療眼睛新生血管性疾病患者之醫藥組合物，包括有效劑量之抗-VEGF適合體；其中提供該病患光療法。 2. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該光療法包括光動力療法（photodynamic therapy，PDT)。 3. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該光療法包括熱雷射光凝固作用。 4. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該新生血管性疾病選自由缺血性視網膜病變，眼内新生血管化，老年型黃斑部病變，角膜新生血管化，視網膜新生血管化，脈絡膜新生血管化，糖尿病性黃斑部水腫，糖尿病性視網膜缺血，糖尿病性視網膜水腫，及增殖型糖尿病性視網膜病變組成之群。 5. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該新生血管性疾病是老年型黃斑部病變。 6. 根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中該新生血管性疾病是增殖型糖尿病性視網膜病變。 7. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該抗 -VEGF適合體包括血管内皮生長因子（VEGF)之核酸配體。 8. 根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括核糖核酸。 9 .根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中該VEGF核酸配體包括去氧核糖核酸。

1260327 10. 根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括經修飾的核苷酸。 11. 根據申請專利範圍第10項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括2’F-修飾的核苷酸。 12s根據申請專利範圍第1 1項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括聚烷撐甘醇。 13. 根據申請專利範圍第12項之醫藥組合物，其中該聚烷撐甘醇是聚乙二醇（PEG)。 14. 根據申請專利範圍第7項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括核糖核酸及去氧核糖核酸。 15. 根據申請專利範圍第1 0項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體包括2’-0-甲基（2^0Me)經修飾的核嘗酸。 16. 根據申請專利範圍第1 0項之醫藥組合物，其中該VEGF 核酸配體以可減低核酸配體上核酸内切酶或核酸外切酶活性之部份修飾，此活性是相較於未修飾之核酸配體而言，且該部份不會不利地影響該配體之結合親和力。 17. 根據申請專利範圍第1 6項之醫藥組合物，其中該部份包括硫代磷酸鹽。 18. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該抗 -VEGF適合體係以注射方式投藥。 19. 根據申請專利範圍第1項之醫藥組合物，其中該抗 -VEGF適合體係藉由將裝置引入病人之目艮内而月良用，該裝置中含有該抗-VEGF適合體。 1260327

20. 根據申請專利範圍第1 9項之醫藥組合物，其中該裝置可將該抗- VEGF適合體經由穿越鞏膜擴散方式遞送眼内。 21. 根據申請專利範圍第1 9項之醫藥組合物，其中該裝置可將該抗-VEGF適合體直接遞送至眼之玻璃體液内。 22. 根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中該光動力療法（PDT)包括以下步驟： (i) 將光敏劑遞送至該病人之眼組織；及 (ii) 將光敏劑曝露於波長可為該光敏劑吸收之光，其時間及強度充份足以抑制該眼組織中之新血管生成。 23. 根據申請專利範圍第22項之醫藥組合物，其中該光敏劑選自由苯並卟啉衍生物（BPD)，單天冬胺醯基氯e6，鋅 i大花菁（zinc phthalocyanine)，錫紫紅素（tin etiopurpurin) ’ 四經四苯口卜琳（tetrahydroxy tetraphenylporphyrin)，及口卜吩姆納 (porfimer sodium) (PHOTOFRIN®))及綠叫”林（green porphyrins) 所組成之群。 24. 根據申請專利範圍第22項之醫藥組合物，其中該光敏劑是苯並叶琳衍生物。