CN106198527B - 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法，包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试剂块：尿胆原、潜血、胆红素、酮体、白细胞、葡萄糖、蛋白质、酸碱度、亚硝酸盐、比重、抗坏血酸和空白块；或白细胞、亚硝酸盐、尿胆原、蛋白质、酸碱度、潜血、比重、酮体、胆红素、葡萄糖、抗坏血酸和空白块。本发明加入氧化性物质氯酸钠和碘酸钾，提高了利用干化学分析试纸条进行尿液分析检测的准确性，具有更好的临床适用性。
Description
技术领域
本发明属于体外诊断试剂领域，具体涉及一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法。
背景技术
中华检验医学大辞典对尿液分析定义为：用目测、理学、化学(应强调定性、定量)、显微镜及其他仪器(各种尿液分析仪、渗透压计等)对尿液标本进行分析，以达到对泌尿、循环、肝、胆、内分泌等疾病进行诊断、疗效观察及预后判断等目的。尿液分析是目前各实验室三大常规检验之一，在医学实践领域中扮演着重要角色，对于疾病的诊疗起着十分重要的作用。目前，干化学试纸条各项检测的反应原理多数是通过尿液中的待测物与试纸条上化学物质进行反应以检测尿液中待测物的有无和含量，部分检测项目如葡萄糖、潜血(红细胞)、胆红素、亚硝酸盐和尿pH等通过氧化还原反应及pH改变的原理进行检测，故而尿液中含有强还原剂抗坏血酸(Vc)时，可抑制上述各种尿液成分检测的氧化还原反应，从而常常造成假阴性或弱阳性的检测结果，干扰临床的诊断和治疗。
目前，尿液检测包括白细胞LEU、亚硝酸盐NIT、尿胆原URO、蛋白质PRO、酸碱度pH、潜血BLD、抗坏血酸Vc、比重SG、酮体KET、胆红素BIL、葡萄糖GLU等多个检测项目。市场上的尿液分析试纸条最常见的是8联、10联和11联试纸，由于尿液中的有形成分复杂，因此很易受到干扰物质的影响，例如，尿液中潜血(红细胞)、葡萄糖、胆红素和亚硝酸盐检测受Vc干扰作用最明显。由于其氧化还原反应被Vc抑制而造成检测结果的不准确性，严重的甚至导致错误的诊断结果，不可避免地出现假性结果，存在较大的医疗事故隐患。虽然镜检是尿液分析的金标准，但镜检存在不精密性和劳动强度大等弊端。因此采用一定的方法消除或减小尿液检测的干扰因素显得尤为重要。
目前陆续有厂家开发出11联试纸，即在10联试纸的基础上增设Vc项目检测块，在该检测块阳性时，可由医生凭经验判断哪几个项目是因为干扰得到的错误结果，从而进行修正或叮嘱其消除尿液中Vc后留样再测，但当尿中有其它还原剂(如半胱氨酸、硫代硫酸钠等)时，可使Vc结果偏高；在碱性尿中Vc极不稳定，容易造成测定结果偏低，因此有可能造成错误的修正。有些厂家对检测结果容易受到Vc干扰的葡萄糖、血、白细胞、胆红素、亚硝酸盐等项目的配方进行调整，增强了检测块的抗Vc干扰能力，能保证在Vc浓度低于1.4mmol/L时检测结果仍不受影响，一定程度上提高了检验结果的准确性，但Vc浓度高于1.4mmol/L时仍可对检测结果造成干扰。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法，使得抗坏血酸浓度高于1.4mmol/L时检测结果仍不受影响。其中白细胞试剂块对抗坏血酸的抗干扰的浓度范围为0～5.6mmol/L，胆红素试剂块对抗坏血酸的抗干扰的浓度范围为0～16.8mmol/L，亚硝酸盐试剂块对抗坏血酸的抗干扰的浓度范围为0～11.2mmol/L，葡萄糖试剂块对抗坏血酸的抗干扰的浓度范围为0～2.8mmol/L，潜血试剂块对抗坏血酸的抗干扰的浓度范围为0～2.8mmol/L。
为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸，包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试纸块：尿胆原、潜血、胆红素、酮体、白细胞、葡萄糖、蛋白质、酸碱度、亚硝酸盐、比重、抗坏血酸和空白块；或白细胞、亚硝酸盐、尿胆原、蛋白质、酸碱度、潜血、比重、酮体、胆红素、葡萄糖、抗坏血酸和空白块；
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，(1)白细胞试纸块的制作步骤如下：
依次将氯化钠8.0-15.0g、硼砂35.0-60.0g、硼酸4.0-6.0g、吡咯酯3.5-4.5g和1-重氮-2-萘酚-4-磺酸2.0-4.0g溶解于300-500mL去离子水中，溶解完全后调节pH为8.5～9.5之间，然后加入氯酸钠2.0-5.0g和表面活性剂1.0-5.0mL，溶解完成后用去离子水定容至1000mL，即得白细胞检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
(2)胆红素试纸块的制作步骤如下：
依次将10％的表面活性剂溶液40-70mL、水杨酸15.0-40.0g、2,4-二氯苯胺重氮盐2.0-6.0g、加速剂45-70g和氯酸钠2.5-10.0g溶解于500mL甲醇中，溶解完全后用去离子水定容1000mL，即得胆红素检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
(3)亚硝酸盐试纸块的制作步骤如下：
依次将表面活性剂15-40.0g、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐30.0-55.0g、对氨基苯磺酰胺18.0-35.0g和氯酸钠1.0-8.0g溶解于100-200mL甲醇中，溶解完全后加入丙酮450mL，混匀后用甲醇定容至1000mL，即得亚硝酸盐检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
(4)葡萄糖试纸块的制作步骤如下：
依次将磷酸氢二钠9.5g、柠檬酸50.0g、表面活性剂8.0-15.0g、碘化钾20.0-40.0g、过氧化物酶150-250KU、葡萄糖氧化酶500-650KU、1％的蓝色染料试液4.0-8.0mL和酶稳定剂10-20mL，溶解于500-700mL去离子水中，然后加入碘酸钾1.8-3.0g，溶解完全后用去离子水定容至1000mL，即得葡萄糖检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
(5)潜血试纸块的制作步骤如下：
依次将磷酸二氢钠45.0g、10％的表面活性剂溶液20-40mL溶解于400-600mL去离子水中，溶解完全后用10mol/L的丙二酸溶液调节溶液pH＝5.5±0.05，然后用去离子水定容至1000mL得到检测液A；
依次量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液300-350mL、二甲亚砜3.0-6.0mL、过氧化羟基异丙苯4.0-8.0mL、10％的染料试液10-18mL，溶解于300-400mLN,N-二甲基甲酰胺溶液中，然后加入邻联甲苯胺3.0-6.0g、碘酸钾1.5-4.0g，溶解完全后用N，N-二甲基甲酰胺定容至1000mL，得到检测液B；
将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液A中充分浸润，烘干后，再将其置于检测液B中充分浸润，第二次烘干后，分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切，最终获得试纸条成品；
所述(1)中表面活性剂选自吐温-20、吐温-80或曲拉通X-100，优选为吐温-20。
所述(2)中表面活性剂选自聚乙烯基醚、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠或聚乙烯醇，优选为聚乙烯吡咯烷酮。
所述(2)中加速剂选自硝酸盐、亚硝酸盐、溴酸盐、碘酸盐或钼酸盐，优选为亚硝酸盐。
所述(3)中的表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮PVPK15、聚乙烯吡咯烷酮PVP K30或聚乙烯吡咯烷酮PVPK40，优选为聚乙烯吡咯烷酮PVPK30。
所述(4)中表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基醚、聚乙烯醇或聚乙二醇，优选为聚乙烯醇；蓝色染料试液选自考马斯亮蓝G250或亮蓝，优选为亮蓝，酶稳定剂选自明胶、乙酸钠、吐温、乙基纤维素或乙二醇中的一种或多种。
优选的，所述酶稳定剂为1g/L的明胶、80g/L的乙酸钠、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐温混合液。
所述(5)中表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、聚乙烯基醚，优选为十二烷基硫酸钠；染料试液选自柠檬黄、日落黄、颜料黄，优选为柠檬黄。
优选的，在(1)～(5)中各个试纸的制备过程中，添加剂按照所述顺序加入，在前一试剂溶解完全后加入后一试剂。
优选的，在(1)～(5)中各个试纸的制备过程中，环境温度为23～25℃，湿度为15％～35％。
所述试纸抗坏血酸性能验证方法为：配制各项目的第一个非阴性量级的抗坏血酸标液，即抗坏血酸浓度为5.6mmol/L的“±”15cells/μL的白细胞标液、抗坏血酸浓度为16.8mmol/L的“+”17μmol/L的胆红素标液、抗坏血酸浓度11.2mmol/L的“+”18μmol/L的亚硝酸盐标液、抗坏血酸浓度为2.8mmol/L的“±”2.8mmol/L的葡萄糖标液和抗坏血酸浓度2.8mmol/L的“+”10cells/μL的潜血标液，分别对试纸条进行显色测试，用尿液分析仪判读测定结果，试验结果均不得出现阴性。
有益效果：
本发明通过在试纸块检测液中加入氧化性物质氯酸钠和碘酸钾，消弱了具有强还原性的抗坏血酸对尿液分析检测过程中的重氮偶合反应和氧化还原反应的干扰，提高了利用干化学分析试纸条进行尿液分析检测的准确性，具有很好的临床适用性。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明。
实施例1
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸，包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试剂块：尿胆原、潜血、胆红素、酮体、白细胞、葡萄糖、蛋白质、酸碱度、亚硝酸盐、比重、抗坏血酸和空白块；
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法：1、白细胞试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水350mL加入1000mL烧杯中，然后依次加入准确称量的氯化钠11.8g、硼砂50.0g、硼酸5.2g、吡咯酯4.0g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸3.0g，用玻璃棒搅拌溶解，在前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，其中硼砂需55℃水浴加热溶解。所有试剂均充分溶解后，冷却至室温，用pH计进行pH检测，pH应保持在8.5-9.5之间。待pH检测合格后，加入氯酸钠3.5g，充分溶解后，加入2.5mL吐温-20，然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得白细胞检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
2、胆红素试纸块块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL烧杯中，加入10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液60mL，并用玻璃棒搅匀。依次加入准确称量的水杨酸25.0g(用塑料药匙)、2,4-二氯苯胺重氮盐5.0g、亚硝酸盐68.5g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，直至所有试剂完全溶解后，加入氯酸钠2.80g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得胆红素检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
3、亚硝酸盐试纸块块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK3025.5g、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐45.0g、对氨基苯磺酰胺27.5g、氯酸钠2.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，充分溶解后，加入丙酮450mL，最后全部转移至1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得亚硝酸盐检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
4、葡萄糖试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水650mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的磷酸氢二钠9.5g、柠檬酸50.0g、聚乙烯醇12.5g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂。所有试剂均充分溶解后，依次加入准确称量的碘化钾35.0g、过氧化物酶150KU、葡萄糖氧化酶550KU，搅拌，使其充分溶解。然后加入1％的亮蓝染料试液6.5mL，1g/L明胶、80g/L的乙酸钠、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐温的混合液15mL，搅匀。最后加入碘酸钾1.8g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得葡萄糖检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
5、潜血试纸块块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水500mL加入1000mL烧杯中。准确称量磷酸二氢钠45.0g加入烧杯中，用玻璃棒搅拌，待充分溶解后，加入10％的十二烷基硫酸钠溶液25mL，并用玻璃棒搅匀。用10mol/L的丙二酸溶液调节，pH计监测，调节溶液pH＝5.5±0.05。然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，得检测液A；
用量筒量取N,N-二甲基甲酰胺365mL加入1000mL烧杯中。依次量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液335mL、二甲亚砜5.5mL、过氧化羟基异丙苯6.5mL、10％的柠檬黄染料试液15mL，加入烧杯中，并用玻璃棒搅匀。然后依次加入准确称量的邻联甲苯胺4.0g、碘酸钾2.6g，用玻璃棒搅拌，溶解完全后，全部转移至1000mL容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，得检测液B；
将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液A中充分浸润，烘干后，再将其置于检测液B中充分浸润，第二次烘干后，分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切，最终获得试纸条成品。
其他试纸块的制作步骤如下：
酮体试纸的制作步骤如下：
量取适量去离子水，加入50g Tris试剂，待充分溶解后，缓慢加入七水硫酸镁300g，溶解完全后，加入依次量取的10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液12.5mL、吐温-20溶液4mL，混匀，再称取亚硝基铁***45g，溶解完全后，用去离子水定容至1000mL，即得酮体检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；
酸碱度试纸块的制作步骤如下：
量取乙醇330mL，依次加入准确称取的甲基红试剂0.2g，溴百里香酚蓝1.5g，搅拌至充分溶解；依次加入准确量取的吐温-80溶液4mL、10％的聚乙烯醇溶液300mL，混匀后用去离子水定容至1000mL，即得酸碱度检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；
蛋白质试纸块的制作步骤如下：
量取适量去离子水于烧杯中，依次加入准确称取的柠檬酸50.0g、柠檬酸钠36.5g，搅拌至充分溶解；依次加入准确量取的20％的吐温-20溶液20.5mL、乙醇500mL、0.1％的柠檬黄溶液3mL，混匀后加入四溴(苯)酚蓝钠盐0.5g，充分溶解后后用去离子水定容至1000mL，即得蛋白质检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；
比重试纸块的制作步骤如下：
该过程需配制A、B两种溶液，
A液：占总配制量的50％(500mL)
称取溴百里香酚蓝0.05g，加入乙醇80mL，充分溶解后用去离子水定容至500mL，即得A液；
B液：占总配制量的50％(500mL)
量取3％的聚乙烯基醚溶液500mL，用6mol/L的NaOH溶液调节溶液pH＝7.2±0.1，即为配制完成的B液；
将A液缓慢倒入B液中，混匀后即得比重检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；
尿胆原试纸块的制作步骤如下：
次量取去离子水400mL、甲醇250mL、8％的聚乙烯基醚溶液40mL，搅拌均匀；依次加入准确称量的5-磺基水杨酸90.5g、4-二乙氨基苯甲醛0.3g、三乙醇胺硼酸盐12g、亚硝酸盐85.5g，溶解完全后用去离子水定容至1000mL，即得尿胆原检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；
抗坏血酸试纸块的制作步骤如下：
该过程需配制A、B两种溶液，
A液：
量取去离子水300mL，加入准确称取的磷酸二氢钠25g，搅拌至完全溶解；用6mol/L的NaOH溶液调节溶液pH＝6.8±0.1，加入20％的聚乙烯吡咯烷酮溶液30mL，搅匀、备用；
B液：
量取去离子水300mL，加入准确称取的2,6-二氯靛酚钠盐水合物1.0g，搅拌至完全溶解；
将B液缓慢倒入A液中，混匀后，依次加入准确量取的10％的乙基橙钠盐溶液1.0mL、20％的吐温-20溶液2.0mL，搅匀即得抗坏血酸检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
各试纸块制备过程中，车间进行温湿度控制，温度23℃-25℃，湿度15％-35％。
试剂条抗Vc性能验证
配制抗坏血酸浓度为5.6mmol/L的“±”15cells/μL的白细胞标液、抗坏血酸浓度为16.8mmol/L的“+”17μmol/L的胆红素标液、抗坏血酸浓度11.2mmol/L的“+”18μmol/L的亚硝酸盐标液、抗坏血酸浓度为2.8mmol/L的“±”2.8mmol/L的葡萄糖标液和抗坏血酸浓度2.8mmol/L的“+”10cells/μL的潜血标液，并分别对试纸条进行显色测试，用尿液分析仪判读测定结果，试验结果均未出现阴性。
所述白细胞试纸块、胆红素试纸块和亚硝酸盐试剂块中加入抗坏血酸试剂氯酸钠，所述葡萄糖试纸块和潜血试纸块中加入抗坏血酸试剂碘酸钾。
在本实施例中，白细胞试纸块中氯酸钠的质量分数为0.35％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对吡咯酚和重氮盐偶合产生的抑制作用；胆红素试纸块中氯酸钠的质量分数为0.28％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对胆红素和2,4-二氯苯胺重氮盐偶合产生的抑制作用；亚硝酸盐试剂块中氯酸钠的质量分数为0.2％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化的抑制作用；葡萄糖试纸块中碘酸钾的质量分数为0.18％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对葡萄糖酶法测定中过氧化氢氧化色原的反应产生的干扰，因为强酸性条件下碘酸钾和碘化钾会反应析出碘单质，故整个反应应在中性或弱碱性条件下进行；潜血试纸块中碘酸钾的质量分数为0.26％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对潜血试剂块中的氧化还原反应产生的竞争作用。
实施例2
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸，包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试剂块：白细胞、亚硝酸盐、尿胆原、蛋白质、酸碱度、潜血、比重、酮体、胆红素、葡萄糖、抗坏血酸和空白块；
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法：1、白细胞试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水350mL加入1000mL烧杯中，然后依次加入准确称量的氯化钠8.0g、硼砂35.0g、硼酸4.0g、吡咯酯3.5g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸2.0g，用玻璃棒搅拌溶解，在前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，其中硼砂需55℃水浴加热溶解。所有试剂均充分溶解后，冷却至室温，用pH计进行pH检测，pH应保持在8.5-9.5之间。待pH检测合格后，加入氯酸钠2.0g，充分溶解后，加入1.0mL吐温-80，然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得白细胞检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
2、胆红素试纸块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL烧杯中，加入10％的聚乙烯醇溶液40mL，并用玻璃棒搅匀。依次加入准确称量的水杨酸15.0g(用塑料药匙)、2,4-二氯苯胺重氮盐2.0g、硝酸盐45g，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，直至所有试剂完全溶解后，加入氯酸钠2.5g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得胆红素检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
3、亚硝酸盐试纸块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK4020.0g、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐30.0g、对氨基苯磺酰胺18.0g、氯酸钠1.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，充分溶解后，加入丙酮450mL，最后全部转移至1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得亚硝酸盐检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
4、葡萄糖试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水650mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的磷酸氢二钠9.5g、柠檬酸50.0g、聚乙烯吡咯烷酮8.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂。所有试剂均充分溶解后，依次加入准确称量的碘化钾20.0g、过氧化物酶250KU、葡萄糖氧化酶500KU，搅拌，使其充分溶解。然后加入1％的考马斯亮蓝G250染料试液4.0mL，1g/L明胶、80g/L的乙酸钠、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐温的混合液10mL，搅匀。最后加入碘酸钾2.0g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得葡萄糖检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
5、潜血试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水500mL加入1000mL烧杯中，准确称量磷酸二氢钠45.0g加入烧杯中，用玻璃棒搅拌，待充分溶解后，加入10％的聚乙烯基醚溶液20mL并用玻璃棒搅匀。用10mol/L的丙二酸溶液调节，pH计监测，调节溶液pH＝5.5±0.05。然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，得检测液A；
用量筒量取N,N-二甲基甲酰胺365mL加入1000mL烧杯中,依次量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液300mL、二甲亚砜3.0mL、过氧化羟基异丙苯4.0mL、10％的日落黄染料试液10mL，加入烧杯中，并用玻璃棒搅匀。然后依次加入准确称量的邻联甲苯胺3.0g、碘酸钾1.5g，用玻璃棒搅拌，溶解完全后，全部转移至1000mL容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，得检测液B；
将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液A中充分浸润，烘干后，再将其置于检测液B中充分浸润，第二次烘干后，分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切，最终获得试纸条成品。
除白细胞、胆红素、亚硝酸盐、葡萄糖、潜血试纸块外，其余试纸块的制备过程与实施例1相同。
各试纸块制备过程中，车间进行温湿度控制，温度23℃-25℃，湿度15％-35％。
试剂条抗Vc性能验证
抗坏血酸浓度为5.6mmol/L的“±”15cells/μL的白细胞标液、抗坏血酸浓度为16.8mmol/L的“+”17μmol/L的胆红素标液、抗坏血酸浓度11.2mmol/L的“+”18μmol/L的亚硝酸盐标液、抗坏血酸浓度为2.8mmol/L的“±”2.8mmol/L的葡萄糖标液和抗坏血酸浓度2.8mmol/L的“+”10cells/μL的潜血标液，分别对试纸条进行显色测试，用尿液分析仪判读测定结果，试验结果均未出现阴性。
所述白细胞试纸块、胆红素试纸块和亚硝酸盐试剂块中加入抗坏血酸试剂氯酸钠，所述葡萄糖试纸块和潜血试纸块中加入抗坏血酸试剂碘酸钾。
在本实施例中，白细胞试纸块中氯酸钠的质量分数为0.2％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对吡咯酚和重氮盐偶合产生的抑制作用；胆红素试纸块中氯酸钠的质量分数为0.25％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对胆红素和2,4-二氯苯胺重氮盐偶合产生的抑制作用；亚硝酸盐试剂块中氯酸钠的质量分数为0.1％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化的抑制作用；葡萄糖试纸块中碘酸钾的质量分数为0.2％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对葡萄糖酶法测定中过氧化氢氧化色原的反应产生的干扰，因为强酸性条件下碘酸钾和碘化钾会反应析出碘单质，故整个反应应在中性或弱碱性条件下进行；潜血试纸块中碘酸钾的质量分数为0.15％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对潜血试剂块中的氧化还原反应产生的竞争作用。
实施例3
一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸，包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试剂块：白细胞、亚硝酸盐、尿胆原、蛋白质、酸碱度、潜血、比重、酮体、胆红素、葡萄糖、抗坏血酸和空白块；
其中1、白细胞试纸块的制备过程如下：
用量筒量取去离子水350mL加入1000mL烧杯中，然后依次加入准确称量的氯化钠15.0g、硼砂60.0g、硼酸6.0g、吡咯酯4.5g、1-重氮-2-萘酚-4-磺酸4.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，其中硼砂需55℃水浴加热溶解。所有试剂均充分溶解后，冷却至室温，用pH计进行pH检测，pH应保持在8.5-9.5之间。待pH检测合格后，加入氯酸钠5.0g，充分溶解后，加入5.0mL曲拉通X-100，然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得白细胞检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
2、胆红素试纸块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇500mL加入1000mL烧杯中，加入10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液70mL，并用玻璃棒搅匀。依次加入准确称量的水杨酸40.0g(用塑料药匙)、2,4-二氯苯胺重氮盐6.0g、碘酸盐70g，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，直至所有试剂完全溶解后，加入氯酸钠10.0g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得胆红素检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
3、亚硝酸盐试纸块的制备过程如下：
用量筒量取甲醇125mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的聚乙烯吡咯烷酮PVPK15 40.0g、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐55.0g、对氨基苯磺酰胺35.0g、氯酸钠8.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂，充分溶解后，加入丙酮450mL，最后全部转移至1000mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得亚硝酸盐检测液。将规格为120mm*100mm的what man滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
4、葡萄糖试纸块的制备过程如下
用量筒量取去离子水650mL加入1000mL烧杯中，依次加入准确称量的磷酸氢二钠9.5g、柠檬酸50.0g、聚乙二醇15.0g，用玻璃棒搅拌溶解，注意只有前一个试剂充分溶解后才可加入后一个试剂。然后依次加入准确称量的碘化钾40.0g、过氧化物酶200KU、葡萄糖氧化酶650KU，搅拌，使其充分溶解。然后加入1％的亮蓝染料试液8.0mL、乙酸钠20mL，搅匀。最后加入碘酸钾3.0g，充分溶解后，全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，即得葡萄糖检测液。将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品。
5、潜血试纸块的制备过程如下
用量筒量取去离子水500mL加入1000mL烧杯中，准确称量磷酸二氢钠45.0g加入烧杯中，用玻璃棒搅拌，待充分溶解后，量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液40mL加入烧杯中，并用玻璃棒搅匀。用10mol/L的丙二酸溶液调节，pH计监测，调节溶液pH＝5.5±0.05。然后全部转移至1000mL容量瓶中，用去离子水定容至刻度，得检测液A；
用量筒量取N,N-二甲基甲酰胺400mL加入1000mL烧杯中,依次量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液350mL、二甲亚砜6.0mL、过氧化羟基异丙苯8.0mL、10％的日落黄染料试液18mL，加入烧杯中，并用玻璃棒搅匀。然后依次加入准确称量的邻联甲苯胺6.0g、碘酸钾4.0g，用玻璃棒搅拌，溶解完全后，全部转移至1000mL容量瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺定容至刻度，得检测液B；
将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液A中充分浸润，烘干后，再将其置于检测液B中充分浸润，第二次烘干后，分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切，最终获得试纸条成品。
除白细胞、胆红素、亚硝酸盐、葡萄糖、潜血试纸块外，其他试纸块的制作过程与实施例1中相同。
各试纸块制备过程中，车间进行温湿度控制，温度23℃-25℃，湿度15％-35％。
试剂条抗Vc性能验证
抗坏血酸浓度为5.6mmol/L的“±”15cells/μL的白细胞标液、抗坏血酸浓度为16.8mmol/L的“+”17μmol/L的胆红素标液、抗坏血酸浓度11.2mmol/L的“+”18μmol/L的亚硝酸盐标液、抗坏血酸浓度为2.8mmol/L的“±”2.8mmol/L的葡萄糖标液和抗坏血酸浓度2.8mmol/L的“+”10cells/μL的潜血标液，分别对试纸条进行显色测试，用尿液分析仪判读测定结果，试验结果均未出现阴性。
在实施例中，白细胞试纸块中氯酸钠的质量分数为0.5％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对吡咯酚和重氮盐偶合产生的抑制作用；胆红素试纸块中氯酸钠的质量分数为1.0％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对胆红素和2,4-二氯苯胺重氮盐偶合产生的抑制作用；亚硝酸盐试剂块中氯酸钠的质量分数为0.8％，加入氧化剂氯酸钠，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化的抑制作用；葡萄糖试纸块中碘酸钾的质量分数为0.3％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对葡萄糖酶法测定中过氧化氢氧化色原的反应产生的干扰，因为强酸性条件下碘酸钾和碘化钾会反应析出碘单质，故整个反应应在中性或弱碱性条件下进行；潜血试纸块中碘酸钾的质量分数为0.4％，加入氧化剂碘酸钾，以减弱或抵消高浓度的具有强还原性的Vc对潜血试剂块中的氧化还原反应产生的竞争作用。
上述虽然结合实施例对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
Claims (9)
1. 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，该试纸包括基片，基片上按顺序相互间隔的从顶端到末端依次排列有下列试纸块：尿胆原、潜血、胆红素、酮体、白细胞、葡萄糖、蛋白质、酸碱度、亚硝酸盐、比重、抗坏血酸和空白块；或白细胞、亚硝酸盐、尿胆原、蛋白质、酸碱度、潜血、比重、酮体、胆红素、葡萄糖、抗坏血酸和空白块，其特征是：包括如下步骤： (1)白细胞试纸块的制作步骤如下：依次将氯化钠8.0-15.0g、硼砂35.0-60.0g、硼酸4.0-6.0g、吡咯酯3.5-4.5g和1-重氮-2-萘酚-4-磺酸2.0-4.0g溶解于300-500mL去离子水中，溶解完全后调节pH为8.5～9.5之间，然后加入氯酸钠2.0-5.0g和表面活性剂1.0-5.0mL，溶解完成后用去离子水定容至1000mL，即得白细胞检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；(2)胆红素试纸块的制作步骤如下： 依次将10％的表面活性剂溶液40-70mL，水杨酸15.0-40.0g、2,4-二氯苯胺重氮盐2.0-6.0g、加速剂45-70g和氯酸钠2.5-10.0g溶解于500mL甲醇中，溶解完全后用去离子水定容1000mL，即得胆红素检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；(3)亚硝酸盐试纸块的制作步骤如下： 依次将表面活性剂15-40.0g、N-(1-萘基)-乙二胺盐酸盐30.0-55.0g、对氨基苯磺酰胺18.0-35.0g、氯酸钠1.0-8.0g，溶解于100-200mL甲醇中，溶解完全后加入丙酮450mL，混匀后用甲醇定容至1000mL，即得亚硝酸盐检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；(4)葡萄糖试纸块的制作步骤如下： 依次将磷酸氢二钠9.5g、柠檬酸50.0g、表面活性剂8.0-15.0g、碘化钾20.0-40.0g、过氧化物酶150-250KU、葡萄糖氧化酶500-650KU，溶解于500-700mL去离子水中，溶解完全后依次加入1％的蓝色染料试液4.0-8.0mL、酶稳定剂10-20mL和碘酸钾1.8-3.0g，溶解完全后用去离子水定容至1000mL，即得葡萄糖检测液；将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液中充分浸润，经过烘干、分切并与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切后获得试纸条成品；(5)潜血试纸块的制作步骤如下： 依次将磷酸二氢钠45.0g、10％的表面活性剂溶液20-40mL，溶解于400-600mL去离子水中，溶解完全后用10mol/L的丙二酸溶液调节溶液pH＝5.5±0.05，然后用去离子水定容至1000mL得到检测液A； 依次量取10％的聚乙烯吡咯烷酮溶液300-350mL、二甲亚砜3.0-6.0mL、过氧化羟基异丙苯4.0-8.0mL、10％的染料试液10-18mL，溶解于300-400mL N,N-二甲基甲酰胺溶液中，然后加入邻联甲苯胺3.0-6.0g、碘酸钾1.5-4.0g，溶解完全后用N,N-二甲基甲酰胺定容至1000mL，得到检测液B； 将规格为120mm*100mm的whatman滤纸在检测液A中充分浸润，烘干后，再将其置于检测液B中充分浸润，第二次烘干后，分别与PVC板、双面胶和其他项目检测块一起复合、滚切，最终获得试纸条成品。
2.根据权利要求1所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述白细胞试纸块的制作步骤中表面活性剂选自吐温-20、吐温-80或曲拉通X-100。
3.根据权利要求1所述的一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述胆红素试纸块的制作步骤中表面活性剂选自聚乙烯基醚、聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠或聚乙烯醇； 加速剂选自硝酸盐、亚硝酸盐、溴酸盐、碘酸盐或钼酸盐。
4.根据权利要求1所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述亚硝酸盐试纸块的制作步骤中的表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮PVPK15、聚乙烯吡咯烷酮PVPK30或聚乙烯吡咯烷酮PVPK40。
5.根据权利要求1所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述葡萄糖试纸块的制作步骤中表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯基醚、聚乙烯醇或聚乙二醇； 蓝色染料试液选自考马斯亮蓝G250； 酶稳定剂选自明胶、乙酸钠、吐温、乙基纤维素或乙二醇中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述酶稳定剂为1g/L的明胶、80g/L的乙酸钠、80mL/L的乙二醇和2mL/L的吐温混合液。
7.根据权利要求1所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述潜血试纸块的制作步骤中表面活性剂选自聚乙烯吡咯烷酮、十二烷基硫酸钠、聚乙烯基醚；染料试液选自柠檬黄、日落黄、颜料黄。
8.根据权利要求1所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述试纸块的制备过程中，环境温度为23～25℃，湿度为15％～35％。
9.根据权利要求1-8任一项所述的 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸制备方法，其特征是：所述试纸抗坏血酸性能验证方法为：配制各项目的第一个非阴性量级的抗坏血酸标液，即抗坏血酸浓度为5.6mmol/L的“±”15cells/μL的白细胞标液、抗坏血酸浓度为16.8mmol/L的“+” 17μmol/L的胆红素标液、抗坏血酸浓度11.2mmol/L的“+” 18μmol/L的亚硝酸盐标液、抗坏血酸浓度为2.8mmol/L的“±”2.8mmol/L的葡萄糖标液和抗坏血酸浓度2.8mmol/L的“+” 10cells/μL的潜血标液，分别对试纸条进行显色测试，用尿液分析仪判读测定结果，试验结果均不得出现阴性。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |