DK169415B1 - Fremgangsmåde og reagens til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af fosfor i legemsvæsker - Google Patents
Fremgangsmåde og reagens til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af fosfor i legemsvæsker Download PDFInfo
- Publication number
- DK169415B1 DK169415B1 DK351889A DK351889A DK169415B1 DK 169415 B1 DK169415 B1 DK 169415B1 DK 351889 A DK351889 A DK 351889A DK 351889 A DK351889 A DK 351889A DK 169415 B1 DK169415 B1 DK 169415B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- approx
- phosphorus
- reagent
- amount
- acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/84—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving inorganic compounds or pH
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/16—Phosphorus containing
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/16—Phosphorus containing
- Y10T436/166666—Phosphorus containing of inorganic phosphorus compound in body fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Description
i DK 169415 B1
Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte præparater og fremgangsmåder til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af phosphor i legemsvæsker.
Bestemmelse af mængden af phosphor i legemsvæsker såsom serum eller urin er vigtig, idet en bestemmelse af en mærkbar forøgelse af phosphor i legemsvæsker kan tillade diagnosticering af 5 sygdomme såsom uræmi og kroniske nyresygdomme, hvor der optræder phosphorretention.
Kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker er sædvanligvis blevet udført fotometrisk under anvendelse af molybdænblåt-reaktionen (I.M. Kolthoff og P.D. Elving, red., del Π, bind V, s. 317-402 1961). Denne reaktion omfatter dannelse af et phosphat-molybdat-kompleks, som derefter reduceres ved hjælp af et reducerende middel, der er valgt fra gruppen bestående af 10 phenylhydrazin, ascorbinsyre, aminonaphtholsulfonsyre og andre reducerende midler. Ved reduktionen dannes et blåfarvet heteropolysyre-kompleks, og absorption af dette kompleks måles ved omkring 700 nm.
Adskillige ulemper er forbundet med denne sædvanlige metode til kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker. For det første er det nødvendigt at have en proteinfri serumprøve for 15 at kunne udføre denne test, og fremstilling af en sådan proteinfri serumprøve er besværlig. For det andet er denne tests sensitivitet lav. Endelig er to sekventielle tilsætninger af reagens nødvendig for at udføre denne test. Det vil sige, at først dannes phosphat-molybdat-komplekset, og derefter reduceres det, som det er beskrevet ovenfor. En sådan totrinsproces nedsætter den hastighed, hvormed de kvantitative bestemmelser af phosphor kan udføres. Da der lægges vægt 20 på hurtig og præcis udførelse af mange tests, er den sidste ulempe især alvorlig.
Et forsøg på at overvinde denne sidste ulempe er beskrevet i US-patent 3795484, som beskriver en phosphorbestemmelse, som omfatter måling af det ikke-reducerede phosphat-molybdat-kompleks ved omkring 340 nm.
Fremgangsmåden ifølge US-patent 3795484 omfatter mere præcist følgende trin: 25 (a) dannelse af en blanding af den phosphatholdige væske og en ammoniummolybdatopløs- ning, (b) måling ved hjælp af et centrifugal-analytisk fotometer af en første absorbansmåling ved 340 nm inden for 2 sekunder efter dannelse af ovennævnte blanding; (c) måling af en anden absorbansmåling ved 340 nm inden for 10 minutter efter dannelse af 30 ovennævnte blanding; DK 169415 B1 2 (d) sammenligning af absorbansforskellen med mindst én anden absorbansforskel, der samtidigt er opnået under de samme betingelser fra en væske indeholdende en kendt koncentration af phosphor, og (e) bestemmelse af mængden af phosphor i den phosphatholdige væske.
δ Adskillige ulemper er forbundet med denne fremgangsmåde. For det første kræver fremgangsmåden, at den første absorbansmåling skal finde sted inden for 2 sekunder, efter at reagenset er blandet med prøven af legemsvæsken. En sådan begrænsning gør denne kendte fremgangsmåde besværlig at udføre. For det andet kræver denne kendte fremgangsmåde en særskilt kalibrering for en phosphorbestemmelse i en vandig prøve af legemsvæske såsom urin og en proteinprøve af 10 legemsvæske såsom serum, da der er en forskel mellem matriserne af protein- (fe serum) og vandbaserede prøver, som gør, at de proteinbaserede prøver reagerer hurtigere end de vandige prøver.
Formålet med den foreliggende opfindelse er at tilvejebringe en fremgangsmåde til kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsprøver, hvilken fremgangsmåde omfatter en fotometrisk 15 bestemt molybdatdannende reaktion, som forløber tilstrækkelig langsomt til, at den første af to åbsorbansmålinger kan udføres så sent som 10 sekunder, efter at reagenset er blandet med den legemsvæske, der skal undersøges.
Ved en særlig foretrukken udførelsesform for opfindelsen opnås herudover, at den samme kalibrering kan benyttes, både når en vandig legemsvæske såsom urin og en proteinbaseret 20 legemsvæske såsom serum skal undersøges. Ved tilvejebringelse af en sådan fremgangsmåde vil det være muligt at udføre kvantitativ bestemmelse af phosphor både på vandige prøver og serumprøver på samme tid.
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde og et reagens til kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker, hvilket reagens omfatter et overfladeaktivt middel, en stærk syre, 25 ammoniummolybdat, som er (NH4)6M0702·4Η20, en tungmetalchelaterende forbindelse, en antioxidant, eventuelt et antiskummiddel og deioniseret vand. Ved fremgangsmåden og reagenset ifølge den foreliggende opfindelse tilvejebringes en kvantitativ phosphorbestemmelse, som omfatter to fotometiske åbsorbansmålinger, idet den første af disse kan finde sted så sent som 10 sekunder efter blandingen af legemsvæsken og reagenset. Ved ovennævnte særlige ud-30 førelsesform for opfindelsen tilvejebringes yderligere en sådan fremgangsmåde til bestemmelse af phosphor i legemsvæsker, at enten en vandig legemsvæske såsom urin eller en proteinbaseret legemsvæske såsom serum kan undersøges uden at ændre kalibreringen.
3 DK 169415 B1
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker. Den foreliggende opfindelse angår ligeledes et reagens til udførelse af en kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker. Den foreliggende opfindelse tilvejebringer en kvantitativ bestemmelse af phosphor, som omfatter fotometrisk måling af absorbanser, der er 5 fremkaldt af dannelse af et phosphat-molybdat-kompleks, hvor den første sådanne absor- bansmåling kan udføres så sent som 10 sekunder efter blanding af legemsvæsken og reagenset, da reagenset er et sådant, at dannelsen af phosphat-molybdat-komplekset er betydeligt langsommere end i de tidligere kendte fremgangsmåder til fotometrisk kvantitativ bestemmelse af phosphor.
10 Den foreliggende opfindelse tilvejebringer desuden en særligt foretrukken fremgangsmåde og et særligt foretrukket reagens til kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker, hvor en vandig legemsvæske såsom urin eller en proteinbaseret legemsvæske såsom serum begge kan måles under anvendelse af den samme kalibrering.
Kvantitativ bestemmelse af phosphor i legemsvæsker er vigtig i diagnosen af adskillige syg-15 domme såsom uræmi og kroniske nyresygdomme, hvor der optræder phosphorretention.
Reagenset ifølge den foreliggende opfindelse bestemmer kun kvantiteten af de såkaldte uorganiske phosphater i legemsvæsker. Når der i nærværende beskrivelse og krav refereres til koncentrationer eller mængder af phosphor, menes der dermed det phosphor, som findes i disse uorganiske phosphater.
20 Betydningen af ændringer i organisk phosphor såsom phospholipider, phosphatestere og nukleotidphosphater kan faktisk ikke med lethed relateres til kliniske problemer.
Reagenset ifølge den foreliggende opfindelse fremstilles som beskrevet nedenfor. De anførte koncentrationer er koncentrationerne af de særskilte ingredienser, efter at reagenset er blevet fuldstændig formuleret. Svovlsyre i en koncentration på ca. 0,675 M til ca. 1,25 M tilsættes en 25 opløsning indeholdende ca. 0,01% w/v til ca. 5% w/v overfladeaktivt middel, ca. 0,001% w/v til ca. 0,5% w/v N-hydroxyethylethylendiamintrieddikesyre, som er en tungmetalchelaterende forbindelse, og ca. 0,0001% w/v til ca. 0,01% w/v butyleret hydroxyanisol, som er en antioxidant, i deioniseret vand. Til dette sættes ammoniummolybdat i en koncentration på ca. 1,75 mM til ca. 6,25 mM, og endelig tilsættes der derefter eventuelt et antiskummiddel i en mængde på fra ca.
30 0,001% w/v til ca. 0,1% w/v.
DK 169415 B1 4 I nærværende beskrivelse og krav betegner M mol pr. liter, mM betegner millimol pr. liter, og % w/v betegner gram pr. 100 ml opløsning. 0,01 g i 100 ml opløsning er således 0,01% w/v. Tilsvarende er 0,5 g i 100 ml opløsning 0,5% w/v.
Det overfladeaktive middel i det særligt foretrukne reagens ifølge den foreliggende opfindelse 5 skal være et sådant, at serum og vandige legemsvæsker med de samme phosphorkoncentrationer giver de samme absorbansmålinger. Det overfladeaktive middel i det særligt foretrukne reagens ifølge den foreliggende opfindelse skal ligeledes hindre præcipitering af proteiner fra de undersøgte legemsvæsker. Et eksempel på et sådant overfladeaktivt middel er det ikke-ioniske overfladeaktive middel polyoxyethylen (23)-laurylether med formlen C12H25(0CH2CH2)230H.
10 Særlig foretrukket som overfladeaktivt middel er det ikke-ioniske overfladeaktive middel polyoxyethylen (20)-oleylether med formlen C18H35(OCH2CH2)20OH.
Eksempler på en tungmetalchélaterende forbindelse er citronsyre eller især N-hydroxyethyl-ethylendiamintrieddikesyre.
Antioxidanten i reagenset ifølge den foreliggende opfindelse kan være en hvilken som helst 15 antioxidant, som modvirker oxidering af det overfladeaktive middel. Særlig foretrukken som antioxidant er butyleret hydroxyanisol.
Den stærke syre i reagenset ifølge den foreliggende opfindelse kan være de fleste syrer, som er næsten fuldstændigt ioniserede i vandig opløsning. Eksempler på stærke syrer er alkylsyrer og aromatiske sulfonsyrer og især alkylsulfonsyrer såsom methansulfonsyre og ethansulfonsyre og 20 axylsulfonsyre såsom phenylsulfonsyre og naphthalensulfonsyre. Benzoesyrer såsom trinitroben-zoesyre kan også benyttes. Andre stærke syrer omfatter saltsyre, trifluoreddikesyre, fluorborsyre, iodbrintesyre, svovlsyrling, iodsyre, periodsyre, selensyre, oxalsyre, maleinsyre, dichloreddikesyre og (yclopropan-l,l-dicarboxylsyre. Særlig foretrukken er svovlsyre som en stærk syre i reagenset ifølge den foreliggende opfindelse.
25 Et bestemt reagens ifølge den foreliggende opfindelse blev fremstillet som følger: 1 liter reagens blev fremstillet ved først at opløse 7 g Brij® 99, 0,01 g butyleret hydroxyanisol og 0,15 g N-hydroxyethylethylendiamintrieddikesyre i ca. 500 ml deioniseret vand. Til dette sattes 41,7 ml koncentreret svovlsyre. Ammoniummolybdat i en mængde på 2,55 g blev derefter opløst i reagenset, og til sidst tilsattes 100 μΐ af antiskummidlet Colloid 1010. En passende mængde 30 deioniseret vand blev tilsat således, at det totale volumen af reagenset var 1 liter.
5 DK 169415 B1
Det overfladeaktive middel, der blev anvendt til fremstilling af reagenset i det ovennævnte eksempel, Brij® 99, er polyoxyethylen (20)-oleylether med formlen 018Η35(ΟΟΗ2ΟΗ2)20ΟΗ, for-melvæ’gt 1149,56 og smeltepunkt 25-30°C.
Colloid 1010 forhandles af Colloids Inc., 394 Frelinghuysen Avenue, Newark, N.J. 07114. Colloid 5 1010 er et siliconebaseret skumregulerende middel med følgende lypiske egenskaber:
Udseende: ugennemsigtig, stabil væske
Farve: hvid
Type: stabil emulsion
Ikke-flygtig remanens @ 105°C, %: 15,0 10 Massefylde @ 15°C, %: 1,0
Siliconevæskeindhold, %: 10,0
For at undgå skumproblemer tilsættes et antiskummiddel i en foretrukken udførelsesform af reagenset ifølge den foreliggende opfindelse.
Et reagens ifølge den foreliggende opfindelse kan formuleres med ingredienser i de følgende 15 koncentrationer. De angivne koncentrationer er koncentrationerne af de særskilte ingredienser, efter at reagenset er blevet fuldstændigt formuleret
Svovlsyre i en koncentration på ca. 0,675 M til ca 1,25 M tilsættes en opløsning indeholdende ca. 0,01% w/v til ca 5% w/v overfladeaktivt middel, ca 0,001% w/v til ca 0,5% w/v N-hydroxy-ethylethylendiamintrieddikesyre, og ca 0,0001% w/v til ca. 0,01% w/v butyleret hydroxyanisol i 20 deioniseret vand. Til dette sættes ammoniummolybdat i en koncentration på ca 1,75 mM til ca. 6,25 mM, og endelig tilsættes der eventuelt et antiskummiddel i en mængde på fra ca. 0,001% til ca. 0,1% w/v.
Fordelene ved reagenset ifølge den foreliggende opfindelse er som følger: Reagenset ifølge den foreliggende opfindelse er en enkelt reagensblanding sammenlignet med de to reagensblandin-25 ger, der sædvanligvis benyttes. I overensstemmelse hermed er det for reagenset ifølge den foreliggende opfindelse ikke nødvendigt med nogen blanding før undersøgelsen.
Herudover er reaktionen i en prøve med reagenset ifølge den foreliggende opfindelse noget langsommere end de reagenser, der sædvanligvis benyttes, og i overensstemmelse hermed kan der forløbe op til 10 sekunder, før den første absorbansmåling foretages. Det er derfor mere 30 bekvemt end de metoder, der tidligere er anvendt til opnåelse af en phosphormåling som beskrevet i US-patent 3795484, hvor den første absorbansmåling foretages inden for 2 sekunder DK 169415 B1 6 efter dannelse af blandingen af reagenset og prøven. Ved den foreliggende opfindelse kan den første absorbansmåling som nævnt ovenfor udføres op til 10 sekunder efter blanding af reagenset og prøven; den første absorbansmåling udføres fortrinsvis ca. 4,5 sekunder efter blanding af reagenset og prøven.
5 En særlig vigtig fordel ved den foreliggende opfindelse i forhold til den kendte teknik er endelig, at såvel vandige prøver som serumprøver kan måles sammen under anvendelse af kun én kalibrering, som kan være enten med en vandig standard eller med en serumstandard. Dette skyldes, at selv om reaktionshastighederne for vandige prøver og serumprøver i samme koncentrationer adskiller sig en smule, er reagenset ifølge den foreliggende opfindelse et sådant, 10 at ændringen i absorbans af vandige prøver og serumprøver med samme phosphorkoncentratio-ner er den samme.
Reagenset ifølge den foreliggende opfindelse er fremstillet således, at det kan benyttes i ethvert ikke-centrifugal- eller centrifugal-analytisk fotometer og særlig i COBAS™-diagnosesystemerne BIO®, FARA® og MIRA® 15 Mængden af phosphor i en legemsvæske bestemmes kvantitativt i overensstemmelse med fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse ved dannelse af en blanding af legemsvæsken, det fortyndende deioniserede vand og reagenset. Volumenforholdet mellem legemsvæske og fortynder plus reagens kan variere fra ca. 1:125 til 1:30, fortrinsvis ca. 1:50. Derefter udføres en første absorbansmåling ved 340 nm. Denne første absorbansmåling kan udføres så sent som 20 10 sekunder efter dannelse af blandingen. Denne absorbansmåling udføres ved hjælp af et ikke- centrifugal- eller fortrinsvis et centrifugalanalytisk fotometer.
En anden absorbansmåling udføres inden for 10 minutter efter dannelse af blandingen. Da reaktionen mellem legemsvæsken og reagenset er relativt langsom, når reagenset ifølge den foreliggende opfindelse anvendes, kan den første absorbansmåling tjene som en blank prøve.
25 Forskellen mellem de to absorbansmålinger sammenlignes dernæst mod absorbanser i væsker med kendte koncentrationer af phosphor for at bestemme mængden af phosphor i den legemsvæske, der undersøges.
I de følgende undersøgelser, som viser effektiviteten af reagenset ifølge den foreliggende opfindelse, tilsattes 5 μΐ af prøven, 50 μΐ fortynder (deioniseret vand) plus 200 μΐ af reagenset 30 parallelt til deres respektive rum i en skålrotor på et COBAS BIO®-centrifugal-analyseapparat. Reaktionen blev dernæst aflæst ved 340 nm.
mm · r ^^"" ----- 7 DK 169415 B1
En første absorbansmåling blev foretaget 4,5 sekunder efter blanding. På dette tidspunkt havde kun en lille del af reaktionen fundet sted, hvilket tillader, at målingen kan tjene som en blank prøve. En anden måling blev derefter foretaget 3 minutter efter blanding, på hvilket tidspunkt reaktionen næsten var komplet. Phosphorkoncentrationen blev beregnet ved at multiplicere 5 forskellen mellem den sidste og den første absorbansmåling med en kalibreringsfaktor, som blev beregnet ud fra standarder af kendte phosphorkoncentrationer.
En absorbansmåling udført tidligt i reaktionen giver en auto-blank prøve, som betyder, at lipæmiske, icteriske og hæmolyserede prøver kan måles nøjagtigt uden interferens.
Undersøgelse til påvisning afblankprøveanvendélighed af reagenset ifølge den foreliggende 10 opfindelse Følgende materialer blev anvendt i denne undersøgelse: 1. Vandige standarder.
Vandige standarder indeholdende uorganisk phosphor (30, 60 og 120 mg/1 phosphor).
2. Normalt humant serum, (varmeinaktiveret, filtreret, 0,1% azid), tilsat KH2P04 (kalium- 15 phosphat), hvilket gav prøver indeholdende 15, 40, 60, 80, 100, 120,140,160 og 180 mg/1 phosphor.
3. Lipæmiske og hæmolyserede prøver.
4. Det nedenfor beskrevne reagens for uorganisk phosphor (to-reagenssystem med blank prøve).
20 5. Ét-reagenssystem ifølge den foreliggende opfindelse.
De lipæmiske og hæmolyserede patientprøver blev først målt under anvendelse af det kendte to-reagenssystem, som giver en blank prøve. Ved to-reagenssystemet blandes prøven med et første reagens, som indeholder 0,36 mol/1 svovlsyre, og en blankprøve-absorbansmåling foretages ved 340 nm. Et andet reagens, som indeholder 5,4 mmol/1 ammoniummolybdat, tilsættes dernæst, 25 og efter 15 sekunder foretages en anden absorbansmåling ved 340 nm. Den første absorbansmåling subtraheres fra den anden absorbansmåling for at finde netto-absorbansændringen forårsaget af phosphorindholdet i prøven. De samme prøver blev dernæst gennemført under anvendelse af ét-reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse.
8 DK 169415 B1
Resultater
Tabel I viser, at sammenlignelige resultater blev opnået fra lipæmiske og hæmolyserede prøver såvel med to-reagenssystemet beskrevet ovenfor som med ét-reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse og viser, at ét-reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse er 5 sammenligneligt i dets nøjagtighed med en phosphoranalyse ifølge kendt teknik, hvilken analyse ifølge kendt teknik omfatter en blankprøve-absorbansmåling. Tabel I viser således blankprøvean-vendeligheden af reagenset ifølge den foreliggende opfindelse.
Tabel I
Prøve nr. To-reagens Ét-reagens 10 _
Lipæmisk 1 28 mg/1 23 mg/1 2 45 - 44- 3 41 - 39 - 4 37 - 36 - 15 5 172- 169- Hæmolyseret 1 147 - 143 - 2 35 - 30 - 3 28 - 29 - 4 39 - 38 - 20 _
Undersøgelse til påvisning af, at vandige prøver og serumbaserede prøver kan foretages med en vandig standard Følgende materialer blev anvendt i denne undersøgelse: 1. Vandige standarder indeholdende uorganisk phosphor (30, 60 og 120 mg/1 phos- 25 phor) 2. Vandige prøver - destilleret HaO tilsat kaliumphosphat, hvilket gav prøver indeholdende 15, 40, 60, 80, 100, 120,140,160 og 180 mg/1 phosphor.
3. Serumprøver - normalt humant serum (varmeinaktiveret, filtreret, 0,1% azid) tilsat kaliumphosphat, hvilket gav prøver på 15, 40, 60, 80,100, 120,140,160 og 180 mg/1 30 phosphor.
DK 169415 B1 g 4. Det ovenfor beskrevne reagens for uorganisk phosphor (to-reagenssystem med blank prøve).
5. Ét-reagenssystem ifølge den foreliggende opfindelse.
Resultater.
5 Vandige prøver og serumprøver med samme phosphorkoncentrationer blev undersøgt med COBAS BIO® såvel med det ovenfor beskrevne to-reagenssystem som med ét-reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse, idet der kun blev anvendt vandige standarder til at kalibrere instrumentet.
Tabel Π viser phosphorkoncentrationeme for de vandige standarder, som blev anvendt til 10 kalibrering, og phosphorkoncentrationeme af vandige prøver og serumprøver, som blev målt mod denne kalibreringskurve. Ved siden af hver phosphorkoncentration er ændringen i absor-bans ved 340 nm fra den første måling ved 4,5 sekunder til den endelige måling ved 3 minutter. Bemærk, at ændringen i absorbans for vandige prøver og serumprøver med de samme eller lignende phosphorkoncentrationer er den samme eller proportional, hvilket viser, at vandige 15 prøver og serumprøver kan undersøges under anvendelse af reagenset ifølge den foreliggende opfindelse under anvendelse af kun én vandig standard til kalibrering til trods for forskellen i reaktionshastighed på vandige prøver og serumprøver.
10 DK 169415 B1
Tabel Π
Vandig standard Vandig prøve Serumprøve
Phosphorkoncen- Phosphorkon- Phosphorkon- 5 tration AA centration ΔΑ centration ΔΑ 16 mg/1 0,14 16 mg/1 0,14 30 mg/1 0,27 37 - 0,32 37 - 0,33 60 - 0,53 58 - 0,51 58 - 0,51 10 83 - 0,73 78 - 0,69 102 - 0,90 99 - 0,87 120 - 1,03 117 - 1,03 119 - 1,05 136 - 1,20 138 - 1,21 153 - 1,35 157 - 1,38 15 173 - 1,52 176 - 1,56 ΔΑ = Ag min. - A4 5 sek.
Undersøgelse til påvisning af, at vandige prøver og serumprøver kan undersøges med enten vandige standarder eller serumstandarder 20 Følgende materialer blev anvendt i denne undersøgelse: 1. Vandige standarder indeholdende phosphor (30, 60 og 120 mg/1 phosphor).
2. Human serumprøve med kendt phosphorniveau.
3. Normalt humant serum (varmeinaktiveret, filtreret, 0,1% azid) tilsat kaliumphos-phat, hvilket gav prøver med 15,40, 60, 80, 100,120 og 140 mg/1 phosphor.
25 4. Urinprøver fortyndet 1:10 med deioniseret vand.
5. Normale og lipæmiske humane serumprøver.
Ved udførelse af denne undersøgelse blev prøverne først målt med det ovenfor beskrevne to-reagenssystem, idet der blev anvendt vandige standarder til kalibrering. De samme prøver blev
XI
DK 169415 B1 derefter målt med ét-reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse, først kalibreret med vandige.standarder og dernæst kalibreret med serumstandarder.
Tabel ΙΠ viser, at resultaterne fra de tre forskellige målinger korrelerer meget godt, hvadenten prøven var normalt serum, lipæmisk serum eller urin. Bemærk, at kalibreringsfaktorerne for ét-5 reagenssystemet ifølge den foreliggende opfindelse under anvendelse af enten vandige standarder eller serumstandarder i det væsentligste er de samme.
Resultater
Tabel ΠΙ
To-reagens Ét reagens Ét reagens vandig standard vandig standard serumstandard
Tilsat normal serum 1 11 mg/1 12 mg/1 12 mg/1 2 38 - 39 - 39 - 3 59- 59- 60 - 4 82 - 81 - 80 - 5 102 - 102 - 103 - 6 128 - 125 - 123 - 7 145 - 143 - 144 - 10 Urin 1 11 - 11 - 11 - 2 08 - 09 - 09 - 3 24 - 25 - 25 - 4 20 - 21 - 21 - 5 44 - 45 - 45 - 6 60 - 61 - 62 -
Normale serumprøver 1 46 - 45 - 46 - 2 40- 41- 41- 3 38 - 39 - 39 -
Lipæmisk serumprøve 1 29 - 25 - 25 - 2 46 - 48 - 48 - 3 36 - 35 - 35 - 4 51 - 39 - 41 -
Kalibreringsfaktor 9,9 11,3 11,4
Claims (9)
1. Præparat til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af phosphor i legemsvæsker, kendetegnet ved, at det indeholder et overfladeaktivt middel i en mængde på fra ca. 0,01% w/v til ca. 5% w/v, en stærk syre i en mængde på fra ca. 0,675 M til ca. 1,25 M, 5 ammoniummolybdat i en mængde på fra ca. 1,75 mM til ca. 6,25 mM; en tungmetalchelaterende forbindelse, en antioxidant og deioniseret vand.
2. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det overfladeaktive middel er polyoxyethylen (20)-oleylether med formlen Ο18Η35(Ο0Η2ΟΗ2)20ΟΗ.
3. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den stærke syre er svovlsyre.
4. Præparat ifølge krav 3, kendetegnet ved, at den kraftige tungmetalchelaterende forbindelse er N-hydroxyethyl-ethylendiamintrieddikesyre i en mængde på fra ca. 0,001% w/v til ca. 0,5% w/v, og at anti-15 oxidanten er butyleret hydroxyanisol i en mængde på fra ca. 0,0001% w/v til ca. 0,01% w/v.
5. Præparat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder ca. 7 g polyoxyethylen (20)-oleylether med formlen Ci8H35(OCH2CH2)20OH, ca. 41,7 ml koncentreret svovlsyre, ca. 2,55 g ammoniummolybdat, ca. 0,15 g N-hydroxyethylethylendiamintrieddikesyre, ca. 0,01 g butyleret hydroxyanisol, ca. 100 μΐ 20 af et antiskummiddel, alt beregnet pr. liter, og at resten er deioniseret vand.
6. Fremgangsmåde til kvantitativ bestemmelse af phosphor i en legemsvæske, kendetegnet ved, at den omfatter (a) dannelse af en blanding af legemsvæsken og et præparat, som indeholder et overfladeaktivt middel i en mængde på fra ca. 0,1% w/v til ca. 5% w/v, en stærk syre i en 25 mængde på fra ca. 0,675 M til ca. 1,25 M, ammoniummolybdat i en mængde på fra ca. 1,75 mM til ca. 6,25 mM, en tungmetalchelaterende forbindelse, en antioxidant og deioniseret vand. (b) udførelse af en første absorbansmåling ved 340 nm inden for 10 sekunder efter dannelse af blandingen ifølge trin (a) ved hjælp af et analytisk fotometer; DK 169415 Bl (c) udførelse af en anden absorbansmåling ved 340 nm inden for 10 minutter efter dannelse . af blandingen ifølge tlin (a); (d) sammenligning af forskellen mellem de to absorbansmålinger med absorbansmålinger fra væsker med kendte phosphorkoncentrationer for kvantitativt at bestemme phosphor- 5 indholdet i legemsvæsken.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, kendetegnet ved, at det overfladeaktive middel er polyoxyethylen (20)-oleylether med formlen C18H35(OCH2CH2)20OH.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, 10 kendetegnet ved, at den stærke syre er svovlsyre.
9. Fremgangsmåde ifølge krav 8, kendetegnet ved, at den metalchelaterende forbindelse er N-hydroxyethylethylendiamin-trieddikesyre, som anvendes i en mængde på fra ca. 0,001% w/v til ca. 0,5% w/v, og at anti-oxidanten er butyleret hydroxyanisol i en mængde på fra ca. 0,0001% w/v til ca. 0,01% w/v.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22077288 | 1988-07-18 | ||
| US07/220,772 US4826773A (en) | 1988-07-18 | 1988-07-18 | Method and reagent for the quantitative determination of phosphorous in serum and urine |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK351889D0 DK351889D0 (da) | 1989-07-17 |
| DK351889A DK351889A (da) | 1990-01-19 |
| DK169415B1 true DK169415B1 (da) | 1994-10-24 |
Family
ID=22824906
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK351889A DK169415B1 (da) | 1988-07-18 | 1989-07-17 | Fremgangsmåde og reagens til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af fosfor i legemsvæsker |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4826773A (da) |
| EP (1) | EP0351605B1 (da) |
| JP (1) | JPH0812197B2 (da) |
| AT (1) | ATE136654T1 (da) |
| AU (1) | AU634163B2 (da) |
| CA (1) | CA1335251C (da) |
| DE (1) | DE58909643D1 (da) |
| DK (1) | DK169415B1 (da) |
| ES (1) | ES2085853T3 (da) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5240681A (en) * | 1990-10-15 | 1993-08-31 | Calgon Corporation | Apparatus for injection analysis of total inorganic phosphate |
| CN103852456B (zh) * | 2013-07-11 | 2016-05-11 | 江苏净邦生物科技有限公司 | 一种实时恒温定量快速检测铅的设备及方法 |
| JP6322953B2 (ja) * | 2013-10-25 | 2018-05-16 | 三浦工業株式会社 | シリカ濃度測定装置 |
| JP6464694B2 (ja) * | 2014-11-21 | 2019-02-06 | 三浦工業株式会社 | シリカ濃度測定装置 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE793152A (fr) * | 1971-12-22 | 1973-06-21 | Union Carbide Corp | Procede d'analyse spectrophotometrique |
| US3796543A (en) * | 1972-02-07 | 1974-03-12 | Administrator Environmental Pr | Automatic analysis for phosphorous content |
| US3853469A (en) * | 1972-08-30 | 1974-12-10 | Medico Electronic Inc | Reagent and method for phosphorus determination |
| US3874853A (en) * | 1972-11-16 | 1975-04-01 | Damon Corp | Process for determining the concentration of inorganic phosphates in human fluids |
| US3889000A (en) * | 1973-05-30 | 1975-06-10 | Gen Foods Corp | Percolator packages and process therefor |
| US3953359A (en) * | 1974-04-23 | 1976-04-27 | Pierce Chemical Company | Determination of phosphorus |
| US4009004A (en) * | 1976-05-17 | 1977-02-22 | Hutchinson Jr Marvin E | Reagent and method for determination of phosphorous |
| JPS533391A (en) * | 1976-06-30 | 1978-01-13 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Determination reagent for inorganic phospher in body fluids |
| US4220451A (en) * | 1979-01-23 | 1980-09-02 | Union Carbide Corporation | Process for the determination of serum inorganic phosphate |
| JPS58153167A (ja) * | 1982-03-08 | 1983-09-12 | Fujihira Kogyo Kk | リン酸定量用発色試薬 |
| US4447544A (en) * | 1982-07-22 | 1984-05-08 | Instrumentation Laboratory Inc. | Method and reagent for determining inorganic phosphate in biological sample |
| US4599316A (en) * | 1983-12-02 | 1986-07-08 | Hoffmann-La Roche Inc. | Photometric method for the determination of inorganic phosphate in liquid samples |
| DE3476585D1 (en) * | 1984-04-09 | 1989-03-09 | Beckman Instruments Inc | Reagent for the determination of inorganic phosphate and use thereof in a rate analysis method |
-
1988
- 1988-07-18 US US07/220,772 patent/US4826773A/en not_active Expired - Lifetime
-
1989
- 1989-06-30 DE DE58909643T patent/DE58909643D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-06-30 EP EP89111898A patent/EP0351605B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-30 ES ES89111898T patent/ES2085853T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1989-06-30 AT AT89111898T patent/ATE136654T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-07-14 CA CA000605796A patent/CA1335251C/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-07-17 DK DK351889A patent/DK169415B1/da not_active IP Right Cessation
- 1989-07-17 AU AU38173/89A patent/AU634163B2/en not_active Ceased
- 1989-07-17 JP JP1184405A patent/JPH0812197B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE58909643D1 (de) | 1996-05-15 |
| DK351889A (da) | 1990-01-19 |
| AU3817389A (en) | 1990-01-18 |
| ATE136654T1 (de) | 1996-04-15 |
| EP0351605A1 (de) | 1990-01-24 |
| DK351889D0 (da) | 1989-07-17 |
| CA1335251C (en) | 1995-04-18 |
| EP0351605B1 (de) | 1996-04-10 |
| ES2085853T3 (es) | 1996-06-16 |
| JPH0812197B2 (ja) | 1996-02-07 |
| AU634163B2 (en) | 1993-02-18 |
| US4826773A (en) | 1989-05-02 |
| JPH0274865A (ja) | 1990-03-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106198527B (zh) | 一种抗坏血酸干扰多项尿液分析试纸及其制备方法 | |
| EP1881328B1 (en) | Method of determining iron concentration | |
| US20110165608A1 (en) | Blood component measurement method utilizing hemolyzed whole blood, and kit for the method | |
| US4485176A (en) | Turbidimetric method for measuring protein in urine and cerebrospinal fluid | |
| EP0097472B1 (en) | Method of determining calcium in a fluid sample | |
| WO1992011524A2 (en) | Reagent and methods for calcium determination | |
| DK169415B1 (da) | Fremgangsmåde og reagens til kvantitativ fotometrisk bestemmelse af fosfor i legemsvæsker | |
| CN108613976A (zh) | 直接胆红素检测试剂盒 | |
| US4393142A (en) | Assay method and reagent for the determination of chloride | |
| Chromý et al. | Spectrophotometric determination of magnesium in biological fluids with xylidyl blue II | |
| WO1999004258A1 (en) | Assay for total and direct bilirubin | |
| CN106770254A (zh) | 一种尿液钙离子检测试纸及其制备方法 | |
| US4529708A (en) | Assay for the determination of creatinine | |
| JP2002508519A (ja) | リポ蛋白質に含有されるトリグリセリドの測定のための手続および診断用製品 | |
| CN114487446A (zh) | 一种稳定、抗干扰能力强的载脂蛋白b测定试剂盒 | |
| CN112730833A (zh) | 一种免疫透射比浊法的铜蓝蛋白测定试剂盒 | |
| Bradbury | A simplified method for the estimation of sodium | |
| US4454230A (en) | Assay method and reagent composition for the determination of magnesium | |
| CN113959822B (zh) | 过氧乙酸氧化法测定尿碘含量的稀释液、氧化剂及应用 | |
| Weissman et al. | Evaluation of the Corning 940 calcium titrator for use with serum and urine | |
| Wentz et al. | Improved method for measurement of inorganic phosphate in serum with a centrifugal analyzer. | |
| CN114705640A (zh) | 一种抗干扰能力强的高灵敏度血清锌测定试剂及制备方法 | |
| JPH02122267A (ja) | ヘモグロビン定量試薬キット及びそれを用いるヘモグロビン定量方法 | |
| JPS58153167A (ja) | リン酸定量用発色試薬 | |
| US3732077A (en) | Method and composition for determining bun |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |