CN106546586A - 一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，包括氧化剂和显色剂；所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：冰乙酸10％～30％、过氧化氢1％～20％、盐酸0.1％～10％、硫酸0.1％～10％、喹啉酸0.1％～5％、纯化水余量；所述显色剂为质量百分浓度为0.025％～0.2％的TMB醇溶液。本发明体检测可重复性和准确度较高，而且显色梯度和显色稳定性也非常好，使用操作简单，反应检测耗时少，无需对尿液样品做过多处理，简单快捷，不含重金属化合物和醛缩合物，不易对环境造成污染，安全环保，本发明通过对尿液中碘含量的定量检测，检测结果用于评价被检测人群的碘营养状况，适用于在碘缺乏病严重的基层医疗机构推广应用。

Description

一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂

技术领域

本发明涉及检测领域，具体地说涉及一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂。

背景技术

碘是合成甲状腺激素不可缺少的重要元素，对脑的发育起着重要作用。孕妇如果体内缺碘则可导致胎儿和婴幼儿的脑损伤，造成不可逆转的智力低下和精神运动功能障碍，表现为呆、傻、聋哑、瘫、和抽象思维能力差的缺陷。

现有的尿液碘的检测方法为尿碘砷铈催化分光光度测定方法，其原理是将反应中黄色的Ce⁴⁺被还原成无色的Ce³⁺，碘含量越高，反应速度越快，所剩余的Ce⁴⁺则越少，控制反应温度和时间，于420nm波长下测定体系中剩余Ce⁴⁺的吸光度值。

但是，在使用该方法时，尿液标本处理需要加入过硫酸铵后高温100℃消化尿液60min之后再进行测定，具有一定的危险性和伤害性，处理时间太长，不便于操作、时间周期长，而且该方法的试剂如三氧化二砷等含有重金属化合物有毒有害，易对环境造成污染，且需要专用的消解、半自动生化分析仪，不便在碘缺乏病严重的基层推广应用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种安全环保，可重复性和准确度较高，而且使用操作简单，反应检测耗时少的体外检测尿液中碘含量的检测试剂。

为了解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，包括氧化剂和显色剂；

所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：

所述显色剂为质量百分浓度为0.025％～0.2％的TMB醇溶液。

在酸性条件下，冰乙酸在强酸的氧化下生成过氧乙酸，在碘催化下氧化33’，5’5’-四甲基联苯胺，在乙醇介质中，显蓝色，在一定的范围内，碘的浓度与显色强度成正比；喹啉酸有助于氧化。

进一步地，所述TMB醇溶液的溶剂为乙醇。在实施本发明的过程中，发明人发现用乙醇作为TMB的溶剂，有利于显色的透明度和清晰度，并提升显色速度效果，同时能促进增强显色反应的显色效果。

进一步地，还包括稀释液，所述稀释液是pH＝3.0～5.0的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液或乙酸盐缓冲液或Tris缓冲液。

进一步地，还包括尿液预处理剂，所述尿液预处理剂为活性炭。活性炭具有吸附作用，能够去除尿液中影响检测的杂质。

进一步地，所述活性炭预先经过以下方法处理过：向活性炭中加入无水乙醇，搅拌均匀后进行静置，使活性炭充分沉降，然后弃上清及悬浮物，再加入纯化水，搅拌均匀后进行静置，使活性炭充分沉降，然后弃去上清，之后进行抽滤处理，最后将抽滤后的活性炭烘干即可。活性炭经过以上预处理，能够达到吸附尿液中的有机化合物的目的，获得纯净无色的尿液标本。

进一步地，还包括碘标准液。碘标准液用作计算标准和绘制标准曲线。

进一步地，所述碘标准液包括50μg/L的碘化钾溶液、100μg/L的碘化钾溶液、250μg/L的碘化钾溶液、400μg/L的碘化钾溶液、500μg/L的碘化钾溶液、1000μg/L的碘化钾溶液。

本发明的有益效果体现在：

1.本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的检测可重复性和准确度较高，而且显色梯度和显色稳定性也非常好。

2.本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂使用操作简单，反应检测耗时少，无需对尿液样品做过多处理，简单快捷。

3.本发明不含重金属化合物和醛缩合物，不易对环境造成污染，安全环保，本发明通过对尿液中碘含量的定量检测，检测结果用于评价被检测人群的碘营养状况，适用于在碘缺乏病严重的基层医疗机构推广应用。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步描述：

实施例1

一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，包括氧化剂、显色剂、稀释液和尿液预处理剂；

所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：冰乙酸20％、过氧化氢15％、盐酸5％、硫酸5％、喹啉酸2.5％、纯化水余量，制备方法为：取各原料，充分混匀，即可备用；

所述显色剂为质量百分浓度为0.1％的TMB醇溶液，制备方法为：取TMB，加入无水乙醇，充分搅拌溶解，然后密封，避光，远离氧化剂，2～8℃保存；

所述稀释液是pH＝4.0的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液，制备方法为：先配制0.01mol/L的柠檬酸溶液及0.01mol/L的柠檬酸钠溶液，然后将配制好的柠檬酸溶液和柠檬酸钠溶液混匀，测pH值至4.0，2～8℃密封保存；

所述尿液预处理剂为活性炭，所述活性炭预先经过以下方法处理过：取活性炭50g置于烧杯中，缓慢倒入无水乙醇100ml，然后在磁力搅拌器上搅拌10min，静置，使活性炭充分沉降，弃上清及悬浮物，再加入纯化水充分搅拌5min，静置，使活性炭充分沉降，弃去上清后进行抽滤，将抽滤后的活性炭置于放入50℃烘干5小时，取出密封保存。

实施例2

一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，包括氧化剂、显色剂、稀释液和尿液预处理剂；

所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：冰乙酸10％、过氧化氢20％、盐酸0.1％、硫酸10％、喹啉酸0.1％、纯化水余量，制备方法为：取各原料，充分混匀，即可备用；

所述显色剂为质量百分浓度为0.025％的TMB醇溶液，制备方法为：取TMB，加入无水乙醇，充分搅拌溶解，然后密封，避光，远离氧化剂，2～8℃保存；

所述稀释液是pH＝3.0的Tris缓冲液，制备方法为：先配制0.01mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液及0.01mol/L的盐酸溶液，然后将配制好的三羟甲基氨基甲烷溶液和盐酸溶液混匀，测pH值至3.0，2～8℃密封保存；

所述尿液预处理剂为活性炭，所述活性炭预先经过以下方法处理过：取活性炭50g置于烧杯中，缓慢倒入无水乙醇100ml，然后在磁力搅拌器上搅拌10min，静置，使活性炭充分沉降，弃上清及悬浮物，再加入纯化水充分搅拌5min，静置，使活性炭充分沉降，弃去上清后进行抽滤，将抽滤后的活性炭置于放入50℃烘干5小时，取出密封保存。

实施例3

一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，包括氧化剂、显色剂、稀释液和尿液预处理剂；

所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：冰乙酸30％、过氧化氢1％、盐酸10％、硫酸0.1％、喹啉酸5％、纯化水余量；制备方法为：取各原料，充分混匀，即可备用；

所述显色剂为质量百分浓度为0.2％的TMB醇溶液，制备方法为：取TMB，加入无水乙醇，充分搅拌溶解，然后密封，避光，远离氧化剂，2～8℃保存；

所述稀释液是pH＝5.0的乙酸盐缓冲液，制备方法为：先配制0.01mol/L的乙酸溶液及0.01mol/L的乙酸钠溶液，然后将配制好的乙酸溶液和乙酸钠溶液混匀，测pH值至5.0，2～8℃密封保存；

所述尿液预处理剂为活性炭，所述活性炭预先经过以下方法处理过：取活性炭50g置于烧杯中，缓慢倒入无水乙醇100ml，然后在磁力搅拌器上搅拌10min，静置，使活性炭充分沉降，弃上清及悬浮物，再加入纯化水充分搅拌5min，静置，使活性炭充分沉降，弃去上清后进行抽滤，将抽滤后的活性炭置于放入50℃烘干5小时，取出密封保存。

实施例4

本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的尿碘检测步骤

4.1碘标准液的制备

a、1000μg/L标准液配制：称取0.0131g碘化钾，用纯化水溶解后定容至100ml，再取10ml加纯化水定溶至1L，2-8℃避光保存。

b、50μg/L标准液配制：取a液5ml加纯化水定容至100ml，即浓度为150μg/L碘标准溶液。

c、100μg/L标准液配制：取a液10ml加纯化水定容至100ml，即浓度为150μg/L碘标准溶液。

d、250μg/L标准液配制：取a液25ml加纯化水定容至100ml，即浓度为150μg/L碘标准溶液。

e、400μg/L标准液配制：取a液40ml加纯化水定容至100ml，即浓度为150μg/L碘标准溶液。

f、500μg/L标准液配制：取a液50ml加纯化水定容至100ml，即浓度为150μg/L碘标准溶液。

4.2检测步骤

1)样品处理：取1ml稀释液加入到1ml尿液(晨尿中段尿样为优)中，再加入1.8g尿液预处理剂，摇匀，过滤处理，得到纯化尿液，备用；

2)样品测量：向纯化尿液中，立即加入150ul显色剂，混匀，再加入30ul氧化剂，混匀之后，立即放入分析仪检测仪(如分光光度计)中，准确反应60秒时，比色测定读出样品的浓度值，即为尿液中碘的含量。

注：如尿液碘浓度超过500μg/L，则进行成倍稀释，按以上方法检测所得值应乘以相应稀释倍数。

实施例5

本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的准确性分析

准确性按下式计算：

式中：M为测定结果均值；T为质控液靶值；B为相对偏差。

式中：CV为变异系数；为测量值的平均值；S为标准差。

采用本发明实施例1的体外检测尿液中碘含量的检测试剂对冻干人尿中碘成分分析标准物质(GBW09108-GBW09110)(142μg/L)进行重复测定10次，结果见表1所示：

表1

尿碘标准物	测1	测2	测3	测4	测5	测6	测7	测8	测9	测10	均值
												142(μg/L)	142	145	144	138	146	144	152	139	136	141	142

采用本发明实施例1的体外检测尿液中碘含量的检测试剂对冻干人尿碘成分分析国家标准物质(142μg/L)进行重复测定20次，结果表2所示：

表2

经过计算：本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的

由此可见，采用本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂可以有效提高尿液碘的检测准确性，并且操作简单，反应检测耗时少。

采用本发明通过自动化定量检测操作，检测可重复性和准确度较高，本发明：

最低检出限：20μg/L。

线性范围：50～500μg/L，线性相关系数：r≥0.990。

批内精密度：变异系数CV≤10％。

批间精密度：变异系数CV≤15％。

准确度：相对偏差B％≤15％。

特异性：25mg/dl的蛋白质、50mg/dl的葡萄糖、0.5mg/dl的胆红素、5mg/dl的乙酰乙酸、0.03mg/dl的亚硝酸盐，对检测无干扰。

实施例6

本发明中尿液预处理剂对尿液的预处理效果验证试验

试验分3组对照，第一组为加入了25mg的蛋白质、50mg的葡萄糖、0.5mg的胆红素、5mg的尿酮体、0.03mg的亚硝酸盐的50ug/L、维生素C0.6mmol/L的158ug/L碘含量的尿液标本；第二组为158ug/L碘含量的尿液标本；第三组为158ug/L碘含量的水溶液标本。

按照实施例4提供的操作方法采用本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂对上述三组样品分别进行碘含量的测定，结果为三组检测的结果相同，均测定得出碘含量为158ug/L，表明本发明中尿液预处理剂能够有效去除尿液中蛋白质、葡萄糖、胆红素、尿酮体、亚硝酸盐、维生素C等影响检测的成分。

实施例7

本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的显色梯度验证

采用本发明实施例1的体外检测尿液中碘含量的检测试剂对70ug/L、200ug/L、400ug/L碘含量的尿液标本分别进行多组碘测定，结果见下表3

表3

从表3的结果可以看出，本发明体外检测尿液中碘含量的检测试剂的显色梯度非常好，而且本试剂的显色稳定性也非常好，重复测定多次的结果都一样。

应当理解本文所述的例子和实施方式仅为了说明，并不用于限制本发明，本领域技术人员可根据它做出各种修改或变化，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，包括氧化剂和显色剂；

所述氧化剂，按质量百分浓度，由以下成分组成：

所述显色剂为质量百分浓度为0.025％～0.2％的TMB醇溶液。

2.如权利要求1所述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，所述TMB醇溶液的溶剂为乙醇。

3.如权利要求1或2所述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，还包括稀释液，所述稀释液是pH＝3.0～5.0的柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液或乙酸盐缓冲液或Tris缓冲液。

4.如权利要求1或2所述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，还包括尿液预处理剂，所述尿液预处理剂为活性炭。

5.如权利要求4所述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，所述活性炭预先经过以下方法处理过：向活性炭中加入无水乙醇，搅拌均匀后进行静置，使活性炭充分沉降，然后弃上清及悬浮物，再加入纯化水，搅拌均匀后进行静置，使活性炭充分沉降，然后弃去上清，之后进行抽滤处理，最后将抽滤后的活性炭烘干即可。

6.如权利要求1或2所述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，还包括碘标准液。

7.如权利要求6述的体外检测尿液中碘含量的检测试剂，其特征在于，所述碘标准液包括50μg/L的碘化钾溶液、100μg/L的碘化钾溶液、250μg/L的碘化钾溶液、400μg/L的碘化钾溶液、500μg/L的碘化钾溶液、1000μg/L的碘化钾溶液。