CN101199581B - 鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位及其制备方法和应用，采用醇提法或水提法从鹰嘴豆豆胚、豆芽中得到总皂苷类、异黄酮类的有效部位，该有效部位经初步的活性筛选试验证明：具有蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂作用。将该有效部位用于治疗糖尿病的药物或保健品的应用，同时该有效部位或其衍生物作为药物组合物的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种从鹰嘴豆胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉中提取有效部位，该有效部位作为制备治疗降血糖的用途，尤其是对治疗2型糖尿病的用途。
背景技术
植物提取物是一个新兴行业，从出现到现在才短短十几年的时间，但在全世界掀起一股“回归自然”的狂潮，人们在感觉到化学合成药物的附作用之后，对纯天然的中草药产生一种安全感，从而使得植物提取物的发展迅猛而势不可挡。植物提取物市场跟植物药市场是息息相关，2005年全球的植物药市场是260亿美元，其中欧洲：34.5％(德国、法国占了65％)，北美：21％，亚洲：26％，日本：11.3％。全球植物药市场发展速度为10％～20％，全球植物提取物市场发展速度为15％～20％。植物提取物主要活动国家为美国、欧洲(其中德国、法国最为活跃)、中国、印度、韩国、日本、巴西等国家。美国是全球最后认同植物药的国家，但目前美国的植物提取物消耗量占了全球的60％以上。2005年美国植物提取物消耗量约为28亿美元左右，美国《食品大全》对2000家健康食品店进行调查，结果表明以提取物作为使用类型的占7.4％。1992年，美国植物药的销售额是12亿美元，到2005年达到70亿美元，平均年增长速度超过10％。2005年亚洲草药提取物市场为15亿美元，中国约4亿美元，占26.7％左右；日本为3.2亿美元，占21％。可见，中国植物药还有待于更进一步的发展。目前，植物提取物品种约在80种以上，北美市场的天然植物提取物主要有银杏提取物——银杏黄铜、绿茶提取物——茶多酚、醉椒提取物——Kava Kava等。国内天然植物提取物种类繁多，现有的品种可分为3类：单味中药提取物，如枳实、当归、黄芪、五味子、灵芝、蒺藜、厚朴、刺五加、贯叶连翘、红车轴草、银杏叶等提取物；复方中药提取物，如补中益气方提取物等；纯化提取物，包括活性部位和单体化合物，如大豆异黄酮、人参皂苷、茶叶儿茶素、白藜芦醇、石杉碱甲等。
鹰嘴豆(Cicer arietinum L.)起源于西亚、地中海沿岸，现全球播种面积已有1.5亿亩，是目前世界上第二大食用豆类作物，维吾尔族名为诺胡提，在新疆有2500年的生长历史，是维吾尔医常用药材，已收载在中华人民共和国***《药品标准》维吾尔药分册和《维吾尔药志》，具有清除异常体液，开通体液闭阻，调节机体等作用。用于身体瘦弱，***低下，食欲不振，皮肤瘙痒及糖尿病等疾病。
鹰嘴豆营养成分较为丰富：每100克干豆约含有水分10克、粗蛋白23克、淀粉47.3克、可溶性糖5.8克、脂肪5.3克、粗纤维6.3克、灰分3.2克。鹰嘴豆含有丰富的微量元素，其中维生素含量达42毫克，高于大部分豆类；铁的含量达47毫克，比其它豆类高出90％，这使得食用鹰嘴豆产品能有效降低人体血清脂水平，减少胆固醇堆积，加强中老年人中枢神经***的调节，对高血压、心脏病有明显的预防作用。经对比研究表明：鹰嘴豆、大豆、绿豆等在蛋白质功效比值、生物价和消化率指标上，鹰嘴豆为最高。1956年美国著名医学专家克莱恩斯特通过大量的临床经验，证实了鹰嘴豆对70多种严重营养不良疾病有明显的疗效。
鹰嘴豆药用价值也已被科学所证实：具有强身健体、增强记忆力、治疗预防糖尿病等功效。此外，鹰嘴豆籽粒还能防治胆病，可作利尿剂、催乳剂，治疗失眠，预防皮肤病等。现有资料分析，鹰嘴豆对高血糖小鼠具有很好的降糖和降血脂作用，可降低血清中血糖、胰岛素及甘油三脂的浓度，增强葡萄糖激酶的活性，提示鹰嘴豆作为功能食品在糖尿病防治中扮演着重要的角色。研究还表明鹰嘴豆有很好的抗癌活性，Giron-Calle J等发现鹰嘴豆乙醇和丙酮提取部分几乎可以完全抑制肿瘤细胞的生长，表现出良好的抗肿瘤活性。研究发现鹰嘴豆中异黄酮、皂甙类等成分有较好的降血脂功效，而这些成分主要集中在鹰嘴豆胚芽中，因此，本发明人对鹰嘴豆豆芽进行了降血糖的研究。研究采用灌胃方法，研究发现鹰嘴豆豆芽提取物对四氧嘧啶高血糖模型小鼠有明显的降糖作用，虽然模型组动物随着时间延长，血糖也逐渐降低，但给药组的血糖下降百分率与其比较均有非常显著的差异。
由于2型糖尿病的发生发展可由遗传和环境因素的相互作用等引起，其中，胰岛素信号转导障碍在发病机制中所起的重要作用。蛋白酪氨酸磷酸酶1B(Protein tyrosine phosphatase PTP1B)是胰岛素信号转导关键的负调控子。PTP1B是胞内PTP的代表，是第一个被鉴定并纯化出的哺乳动物蛋白酪氨酸磷酸酶，由435个氨基酸残基组成，分子量约50KD，蛋白酪氨酸磷酸酶1B在人体各组织细胞中普遍存在并表达，并通过使激活的胰岛素受体及胰岛素受体底物(IRs-1)等去磷酸化失活而发挥生理功能。它可协调酪氨酸残基磷酸化和去磷酸化之间的平衡，阻止胰岛素信号转导。2型糖尿病和胰岛素抵抗患者体内特异的蛋白酪氨酸磷酸酶含量及活性均有所增加，当蛋白酪氨酸磷酸酶被剔除后，不仅胰岛素敏感性增高，而且糖尿病症状也有所改善。蛋白酪氨酸磷酸酶1B缺乏的小鼠与其野生型对照小鼠相比对胰岛素更敏感，血糖控制更好，缺乏的小鼠与其野生型对照小鼠相比对胰岛素更敏感，血糖控制更好，而且对饮食诱导的肥胖有更好的抵抗作用。因此，抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的作用已成为一种新的治疗胰岛素抵抗(IR)、II型糖尿病和肥胖的方法。
发明内容
本发明目的在于，提供一种采用溶剂提取法从新鲜鹰嘴豆豆胚、豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉、豆芽粉中得到总皂苷类、异黄酮类的有效部位，该有效部位经初步的活性筛选试验证明：具有蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂作用，将该有效部位用于治疗糖尿病的药物或保健品的应用，同时该有效部位或其衍生物可作为药物组合物的应用。
本发明所述的采用溶剂提取法(醇提法或水提法)制备鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位及其制备方法和应用，该有效部位中含有异黄酮和皂苷成分，具体操作按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽；
b、将新鲜鹰嘴豆胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，其浓度为10-100％。
c、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃，用滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位；
d、或将新鲜鹰嘴豆胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水；
e、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物有效部位。
所述有效部位为总皂苷类和异黄酮类。
将有效部位按常规方法制备为功能食品或按常规制药方法制成胶囊或片剂或口服液或冲剂或注射液或缓释制剂或控释制剂；或将有效部位与中、西药配伍制成胶囊或片剂或口服液或冲剂或注射液或缓释制剂或控释制剂。
一种鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位的制备方法，该有效部位采用醇提法或水提法制备，具体操作按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽；
b、将新鲜鹰嘴豆胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，其浓度为10-100％。
c、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃，用滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位；
d、或将新鲜鹰嘴豆胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水；
e、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物有效部位。
所述的制备方法，步骤b醇最佳浓度为60-70％
所述的制备方法，步骤c醇超声波提取温度优选为30-35℃，回流提取温度优选为70-80℃。
所述的制备方法，步骤e中超声波提取温度优选为30-40℃，回流提取温度优选为80-96℃。
一种鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位作为制备治疗糖尿病降血糖药物的用途或作为降糖功能食品的用途。
本发明所述的从新鲜鹰嘴豆豆胚、豆芽段或干燥的鹰嘴豆胚芽粉、豆芽粉中提取降血糖有效成分的制备方法及其在功能食品及药品中的应用包括以下工艺步骤：
鹰嘴豆胚芽、豆芽的制备
将精选后的豆类原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm-6cm水孔兼通气孔。再加入适量的水进行浸泡，以利于其发芽。通常浸泡2h-3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分。将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h-6h淋水1次。豆芽长至6cm-8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽醇提物的制备
将鹰嘴豆新鲜的胚芽、豆芽段(每段长约2毫米)或干燥的胚芽、豆芽(25目)置于圆底烧瓶中，加入浓度为10-100％的醇，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1小时，滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提提物；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备
将新鲜的胚芽、豆芽段(每段长约2毫米)或干燥的鹰嘴豆胚芽、豆芽(25目)置于圆底烧瓶中，加入纯净水，用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物；
鹰嘴豆胚芽、豆芽有效部位包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物。
鹰嘴豆胚芽、豆芽有效部位作为制备降血糖的应用。可运用鹰嘴豆胚芽、豆芽水提取物作为药物制剂和食品的原料，对于加工成本的降低，成品质量的提高，疗效的稳定将起着积极的意义，同时还有利于深加工鹰嘴豆豆芽药效物质的基础研究，拓展该药的安全性。
具体实施方式
实施例1(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽醇提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆胚芽、豆芽粉过筛25目，各5克置于圆底烧瓶中，加入2倍体积浓度为10％的甲醇，用超声波取15次，每次1小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在20℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例2(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽和豆芽水提物的制备：
将干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉过筛25目，各5克置于圆底烧瓶中，加入2倍体积的纯净水，用超声波提取15次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在20℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例1和2有效部位包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物，作为制备治疗糖尿病降血糖的药物的用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法为：
用对-硝基苯基磷酸二钠(pNPP)作为底物，以在阳性药物钒酸钠为对照，利用酶标仪进行PTP1B酶抑制剂的高通量筛选，根据PTP1B水解pNPP的磷酸基团而产生颜色反应来测定PTP1B的活性。酶反应体系组成如下：缓冲液(50mM HEPES，pH7.3，100mM氯化钠，0.1％牛血清白蛋白，和1mM二硫代苏糖醇)，PTP1B融合蛋白，pNPP，PTP1B特异抑制剂钒酸钠(100μg/mL)。反应体系混匀后在37℃放置30rnin，加入1M氢氧化钠终止反应，置比色仪上测定405波长条件下的吸收值(A)，测定结果减去本底值后计算酶活性。
结果：
鹰嘴豆胚芽粉水提物组、醇提物组，豆芽粉水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽粉水提物 | 豆芽粉醇提物 | 胚芽粉水提物 | 胚芽粉醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.080.09297.93 | 750.0550.0699.13 | 1000.0540.0796.50 | 1000.0520.0698.62 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效部位对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例3(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5.5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2.5h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽豆芽醇提物的制备
将鹰嘴豆胚芽和豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积浓度为50％的乙醇，用加热回流提取5次，每次2小时，滤纸过滤，合并滤液，回流温度控制温度在80℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例4(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5.5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2.5h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备
将鹰嘴豆胚芽和豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积的纯净水，用加热回流提取5次，每次3小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，回流温度控制在60℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例3和4有效成分包括：总皂苷类、异黄酮类化合物作为制备治疗糖尿病降血糖的药物的用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽水提物 | 豆芽醇提物 | 胚芽水提物 | 胚芽醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.0780.08698.62 | 1000.0650.07298.79 | 500.0750.09896.03 | 1000.060.07397.75 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例5(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔。再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽醇提物的制备
将干燥的鹰嘴豆胚芽粉和豆芽粉(25目)各5克置于圆底烧瓶中，加入8倍体积浓度为70％的异丙醇，用冷浸提取8次，每次3小时，滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例6(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔。再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至7cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备
将干燥的鹰嘴豆胚芽粉、豆芽粉(25目)各5克置于圆底烧瓶中，加入8倍体积的纯净水，用冷浸提取8次，每次4小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例5和6有效成分包括：总皂苷类、异黄酮类化合物作为制备治疗糖尿病的药物降血糖的用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽粉水提物 | 豆芽粉醇提物 | 胚芽粉水提物 | 胚芽粉醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min) | 0.0610.64 | 1000.0720.079 | 1000.0540.063 | 500.0730.088 | 2500.0590.071 |
| 抑制率(％) | 98.79 | 98.4 | 97.41 | 97.92 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例7(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽：
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔。再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽和豆芽醇提物的制备：
将鹰嘴豆胚芽和豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入10倍体积浓度为100％的丁醇，用超声波提取10次，每次1.5小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在35℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例8(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽：
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔。再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备：
将鹰嘴豆胚芽和豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入8倍体积的纯净水，用超声波提取10次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在35℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例7和8有效成分包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物，作为制备治疗糖尿病降血糖的药物的用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽水提物 | 豆芽醇提物 | 胚芽水提物 | 胚芽醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.0780.09197.90 | 750.0570.06299.23 | 1000.0550.07196.51 | 1000.0530.06098.72 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例9(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽醇提物的制备
将干燥的鹰嘴豆胚芽粉、豆芽粉(25目)各5克置于圆底烧瓶中，加入4倍体积浓度为40％的乙醇，用加热回流提取3次，每次3小时，滤纸过滤，合并滤液，回流温度控制在75℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例10(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为6cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5h淋水1次，豆芽长至6cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽和豆芽水提物的制备
将鹰嘴豆胚芽和豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入4倍体积的纯净水，用加热回流提取3次，每次4小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，回流温度控制在96℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例9和10有效成分包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物，作为制备治疗糖尿病降血糖的药物用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽水提物 | 豆芽醇提物 | 胚芽水提物 | 胚芽醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.0760.08498.53 | 1000.0640.07398.59 | 500.0720.09596.13 | 1000.0620.07197.55 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例11(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2.5h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽醇提物的制备
将新鲜的鹰嘴豆胚芽段、豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积浓度为60％的异丙醇，用超声波提取3次，每次1.5小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在30℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例12(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡2.5h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔5.5h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备
将新鲜的鹰嘴豆胚芽段、豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入5倍体积的纯净水，用超声波提取15次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波控制温度在40℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例11和12有效成分包括：总皂苷类、异黄酮类等化合物作为制备治疗糖尿病降血糖的药物用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽水提物 | 豆芽醇提物 | 胚芽水提物 | 胚芽醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.0650.07798.41 | 1000.0610.07298.51 | 500.0710.07998.65 | 1000.0530.06698.54 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
实施例13(醇提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽和豆芽醇提物的制备
将新鲜的鹰嘴豆胚芽段、豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入7倍体积浓度为90％的甲醇，用超声波提取10次，每次1小时，滤纸过滤，合并滤液，超声波温度控制在25℃，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位。
实施例14(水提物)
用常规方法使鹰嘴豆发芽；
将精选后的鹰嘴豆原料，经水洗干净后放入容器内，容器上面要求有淋洗装置，底部边沿要留出孔径为5cm水孔兼通气孔，再加入水进行浸泡，以利于其发芽，通常浸泡3h，即可保证原料豆粒能够吸足水分，将经浸泡后吸足水分的原料豆粒，室温下每隔6h淋水1次，豆芽长至8cm长时即可，最长不超过10cm；
鹰嘴豆胚芽、豆芽水提物的制备
将新鲜的鹰嘴豆胚芽段、豆芽切成段，每段长约2毫米，各5克置于圆底烧瓶中，加入10倍体积的纯净水，用超声波提取5次，每次2小时，分别用纱布、滤纸过滤，合并滤液，超声波温度控制在33℃，减压浓缩得到水提取物有效部位。
实施例13和14有效部位包括：总皂苷类、异黄酮类化合物，作为制备治疗糖尿病降血糖的药物用途或作为制备降血糖功能性保健食品的用途。
筛选方法与实施例1中的筛选方法相同，其结果：
鹰嘴豆胚芽水提物组、醇提物组，豆芽水提物组、醇提物组都可显著的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶1B的活性，调节血糖，结果如下：
| 空白 | 豆芽水提物 | 豆芽醇提物 | 胚芽水提物 | 胚芽醇提物 | |
| 浓度(μg/mL)A(0min)A(30min)抑制率(％) | 0.0610.64 | 1000.0570.06698.04 | 1000.0610.06998.21 | 500.0670.07898.59 | 1000.0500.06198.24 |
鹰嘴豆胚芽和豆芽有效成分对四氧嘧啶高血糖模型小鼠也有降糖作用。
Claims (8)
1.一种采用溶剂提取法制备的鹰嘴豆的胚芽和豆芽的有效部位，其特征在于按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽；
b、将新鲜鹰嘴豆的胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆的胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的浓度为10-100％的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇；
c、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位；
d、或将新鲜鹰嘴豆的胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆的胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水；
e、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物有效部位。
2.根据权利要求1所述的鹰嘴豆的胚芽和豆芽的有效部位，其特征在于有效部位为总皂苷类和异黄酮类。
3.根据权利要求1所述的鹰嘴豆的胚芽和豆芽的有效部位，其特征在于将有效部位按常规方法制备为功能食品或按常规制药方法制成胶囊或片剂或口服液或冲剂或注射液；或将有效部位与中、西药配伍制成胶囊或片剂或口服液或冲剂或注射液。
4.一种鹰嘴豆的胚芽和豆芽的有效部位的制备方法，其特征在于该有效部位采用溶剂提取法即醇提法或水提法制备，具体操作按下列步骤进行：
a、将鹰嘴豆用常规方法发芽；
b、将新鲜鹰嘴豆的胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆的胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的甲醇或乙醇或异丙醇或丁醇，其浓度为10-100％；
c、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次1-3小时，其中超声波提取温度为20-40℃，回流提取温度为60-80℃，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，得到醇提物有效部位总皂苷类、异黄酮类；
d、或将新鲜鹰嘴豆的胚芽和豆芽或干燥的鹰嘴豆的胚芽粉和豆芽粉中加入2-10倍体积的纯净水；
e、用超声波或冷浸或加热回流提取1-15次，每次2-4小时，其中超声波提取温度为20-60℃，回流提取温度为60-100℃，过滤，合并滤液，减压浓缩得到水提取物有效部位总皂苷类、异黄酮类。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤b中的醇浓度为60-70％。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤c醇超声波提取温度为30-35℃，回流提取温度为70-80℃。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于步骤e中超声波提取温度为30-40℃，回流提取温度为80-96℃。
8.权利要求1的鹰嘴豆的胚芽和豆芽的有效部位在制备治疗糖尿病的降血糖药物或降糖功能食品中的用途。
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