BRPI0311906B1 - processo para obtenção de um ácido graxo poliinsaturado (pufa) ou um óleo microbiano de células microbianas - Google Patents

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Abstract

"processo de pasteurização para células microbianas e óleo microbiano". apresenta-se um protocolo de pasteurização aperfeiçoado para a pasteurização de células microbianas. o protocolo tem três estágios: um primeiro estágio de aquecimento, um segundo estágio de platô, em que as células são mantidas a uma temperatura (máxima e) constante e um terceiro estágio de resfriamento. tanto o estágio de aquecimento, quanto o de resfriamento são rápidos, co a temperatura das células indo de 40 a 80<198>c em no máximo 30 minutos no estágio de aquecimento. a taxa de aquecimento é de pelo menos 0,5<198>c/minuto e, durante o resfriamento, é de pelo menos 0,5<198>c/minuto. a temperatura máxima de platô é de 70 a 85<198>c. ao se traçar o protocolo de pasteurização em um gráfico de tempo (t, minutos) versus temperatura (t, <198>c) , obtém-se um trapézio com uma área de menos de 13.000<198>c.minuto. não apenas isso resulta em uma menor entrada de energia (e, portanto, em uma redução de custo) , mas também resulta um óleo de melhor qualidade (e menos oxidado), com um valor de peróxido

Description

PROCESSO PARA OBTENÇÃO DE UM ÁCIDO GRAXO
POLI INS ATURADO (PUFA) OU UM ÓLEO MICROBIANO DE CÉLULAS MICROBIANAS
CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere a um processo para pasteurização de células microbianas, que compreende o aquecimento das células de 40°C a 70°C em no máximo 30 minutos. A taxa de aquecimento durante o processo de pasteurização pode ser de pelo menos 0,5°C/minuto. O processo de pasteurização pode compreender três estágios, a saber, um estágio de aquecimento, um platô (em que as células são mantidas a uma temperatura constante) e um estágio de aquecimento. Se o protocolo de pasteurização for representado graficamente, a área sob o gráfico de tempo (minutos) versus temperatura (°C) está abaixo de 13.000°C.minuto. Após a pasteurização, um ácido graxo poliinsaturado (PUFA), como ácido araquidônico, ou óleo microbiano pode ser extraído das células. O óleo pode ter um baixo valor de peróxido (POV) e/ou baixo valor de anisidina (AnV) .
INTRODUÇÃO
[002] Ácidos graxos poliinsaturados, ou PUFAs, são encontrados naturalmente, e uma ampla variedade de diferentes PUFAs são produzidos por diferentes organismos unicelulares (algas, fungos e outros). Um PUFA particularmente importante é o ácido araquidônico (ARA), que é um dentre inúmeros Ácidos Graxos Poliinsaturados de Cadeia Longa (LC-PUFAs). Quimicamente, o ácido araquidônico é ácido cis-5,8,11,14-eicosatetraenóico (20:4) e pertence à família (n-6) de LC-PUFAs.
[003] O ácido araquidônico é um importante precursor de uma ampla variedade de compostos biologicamente ativos, conhecidos coletivamente como eicosanóides, um grupo compreendendo prostaglandinas, tromboxanos e leucotrienos. O ácido araquidônico também é um dos componentes da fração lipídica do leite humano, e se acredita que seja essencial para um desenvolvimento neurológico ótimo em bebês. O ácido araquidônico tem uma ampla variedade de diferentes aplicações, incluindo uso em fórmulas para bebês, alimentos e rações para animais.
[004] O WO-A-97/37032 (Gist-Brocades) se refere à preparação de um óleo contendo PUFA microbiano a partir de biomassa pasteurizada. Entretanto, não há nenhma exposição de aquecimento rápido a, ou resfriamento de, uma temperatura em que a pasteurização ocorra. Além disso, não se leva em consideração a quantidade total de energia usada durante o processo de pasteurização.
[005] O WO-A-00/15045 e o WO-A-Ol/67886 se referem ambos ao uso de fungos Mucorales para uso na preparação de alimentos. O primeiro desses documentos se refere à necessidade de realizar uma redução de RNA antes de incluir as células em alimentos e sugere o uso de uma etapa de aquecimento. Pode-se realizar uma pasteurização separada ou choque térmico. O segundo documento sugere que uma etapa de aquecimento para reduzir o teor de RNA pode ser evitada permitindo-se que as células fúngicas sejam mantidas dentro do recipiente fermentador e sejam deixadas "amadurecer".
[006]0 pedido de patente internacional n° PCT/EP01/08902 se refere a um processo para a preparação de misturas de óleo por combinação de um óleo contendo ωβ PUFA bruto com um contendo ω3 bruto para produzir uma mistura de óleo e, então, purificação da mistura de óleo bruto.
[ 007]Processos envolvendo o aquecimento de biomassa, ou células microbianas, são conhecidos. Também se sabe, pelo WO-A-97/37 032, que células microbianas podem ser pasteurizadas antes da extração de um PUFA delas na forma de um óleo. Entretanto, os presentes requerentes descobriram que um novo processo de pasteurização pode melhorar a qualidade do óleo que pode ser extraído das células pasteurizadas. Em particular, o óleo resultante pode se oxidar menos, ou ser menos oxidado, e pode ter um baixo valor de peróxido ( POV) e/ou valor de anisidina (AnV). Além disso, os requerentes descobriram que esse novo processo de pasteurização é mais eficiente porque requer menos energia. O processo é, portanto, vantajoso porque não apenas pode melhorar a qualidade do óleo, mas pode reduzir os custos, pois menos energia é requerida.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[008]A Figura 1 é um gráfico de temperatura (°C) versus tempo (minutos) para três protocolos de pasteurização (A e C estão dentro da invenção, B é apresentado para comparação).
[009] A Figura 2 é um gráfico de temperatura (°C) versus tempo (minutos) para pasteurização a três platôs de temperatura diferentes (40, 70 e 85°C).
[010] As Figuras 2 e 4 são gráficos de AnV (e PUV para a Fig. 3) versus tempo (horas).
[011] A Figura 5 é um gráfico de PVO (meq/kg) e AnV versus temperatura (°C) para pasteurização a dois tempos (permanência/platô) diferentes (8 e 300 segundos).
[012] As Figuras 6 e 7 são gráficos de temperatura (°C) versus tempo (segundos) para dois tempos (permanência/platô) diferentes (8 segundos na Figura 6, 5 minutos na Figura 7) a cinco temperaturas diferentes (60, 80, 100, 120 e 140°C).
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
[013] A presente invenção apresenta, portanto, um processo de pasteurização aperfeiçoado de células microbianas. A despeito de requerer menos energia, o processo de pasteurização da invenção pode permitir um produto de melhor qualidade.
[014] Assim, um primeiro aspecto da presente invenção se refere a um processo para pasteurização de células microbianas, o processo compreendendo o aquecimento das células (a uma temperatura compreendendo) de 40°C a (60°C) ou 70°C em no máximo 30 minutos, ou aquecimento das células a uma taxa de pelo menos 0,5°C/minuto. Esse aspecto, portanto, proporciona um rápido aquecimento das células microbianas durante a pasteurização, e essa alta taxa de aquecimento não é apresentada na técnica. Embora a técnica apresente temperaturas de pasteurização, não há reconhecimento ou discussão da taxa de aquecimento, ou que esse parâmetro seja importante e que uma taxa relativamente rápida possa trazer benefícios. De fato, altas taxas de aquecimento são contra-intuitivas, pois se poderia esperar que causassem oxidação ou de outra forma degradassem o PUFA ou óleo que pode ser extraído das células.
[015] Um segundo aspecto da segunda invenção se refere a um processo para pasteurização de células microbianas, o processo compreendendo um protocolo de pasteurização que compreende (pelo menos) três estágios. Esses são, a saber: um (primeiro) estágio de aquecimento, um (segundo) estágio de platô (em que as células microbianas são mantidas à temperatura desejada, ou em que as células são mantidas a uma temperatura constante e/ou máxima) , e um (terceiro) estágio de resfriamento. Esse aspecto da invenção é chamado de protocolo de pasteurização em três estágios. Se esse protocolo for traçado em um gráfico de tempo versus temperatura, pode resutlar um trapézio.
[016] Um terceiro aspecto da invenção se refere a um processo para pasteurização de células microbianas, o processo compreendendo o uso de um protocolo de pasteurização em que a área sob o gráfico de tempo (minutos) versus temperatura (°C) esteja abaixo de 13.000°C.minuto. A área sob o gráfico de tempo versus temperatura fornece a quantidade de energia gasta no aquecimento das células durante o processo de pasteurização. Descobriu-se que um rápido aquecimento e/ou rápido resfriamento (que corresponde aos primeiro e terceiro estágios do segundo aspecto, respectivamente) pode trazer vantagens, como um óleo de melhor qualidade. Além disso, a quantidade de energia requerida para o processo de pasteurização pode ser reduzida em comparação com processos de pasteurização descritos na técnica. Esse terceiro aspecto, portanto, se refere à entrada de energia requerida para o processo de pasteurização.
[017] Um quarto aspecto da invenção se refere a um processo para pasteurização de células microbianas, o processo compreendendo (o aquecimento das células e, portanto,) a manutenção das células a uma temperatura elevada (T, °C) durante um tempo (t, minutos), por exemplo, em um estágio de platô, em que o produto tT (isto é, a multiplicação dos parâmetros de tempo e temperatura, por exemplo, durante o estágio de platô) seja de 140 a 100.800°C.minuto. Conforme se perceberá, esse quarto aspecto é similar ao segundo aspecto, pelo fato de conter um estágio de platô. As células aqui podem ser mantidas a uma temperatura constante ou máxima. O produto tT pode, conseqüentemente, representar a área sob o gráfico de tempo versus temperatura para esse estágio de platô.
PRIMEIRO ASPECTO - AQUECIMENTO RÁPIDO
[018] Neste aspecto, as células são aquecidas de modo que a temperatura das células vá de 40°C a 70°C (ou 60°C) em no máximo 30 minutos (como no máximo 15 minutos) . De preferência, o tempo levado para ir de 40 a 70°C é de no máximo 40 a 50 minutos. Alternativamente, ou além disso, as células são aquecidas a uma taxa de pelo menos 0,5°C/minuto. Evidentemente, as células microbianas podem começar (ou ser aquecidas) a uma temperatura abaixo de 40°C. Por exemplo, as células podem estar à temperatura da sala ou ambiente. As células podem estar à temperatura de fermentação, como 30° ± 5°C. Assim, as células podem estar de 20 a 40°C, como de 23 a 27°C (ou de 25 a 2 9 ou 32 ou 37°C) quando o aquecimento (pasteurização) começa. Em alguns casos, as células microbianas pode ter sido resfriadas, por exemplo, após terminada a fermentação. Assim, as células podem ter uma temperatura (de partida) de 5 a 10°C, como de 7 a 9°C, quando o aquecimento começa.
[019] As células microbianas podem ser aquecidas de modo que sua temperatura se eleve acima de (60 ou) ou 70°C. Assim, essa pode não ser a temperatura final das células microbianas durante a pasteurização. De fato, as células podem ser aquecidas a uma temperatura acima de (60 ou) 70°C. A temperatura pode se elevar até que uma temperatura de 70 a 90, 110 ou 130°C, como de 75 a 87°C, e otimamente de 78 a 84 °C, seja atingida. A temperatura máxima durante a pasteurização pode, portanto, estar dentro dessas faixas, mas, para algumas modalidades, pode ser de até 100, 120 ou 140°C. De preferência, as células ficam ou são mantidas nessa temperatura (máxima).
[020] Portanto, será percebido que as células podem ser aquecidas a uma temperatura abaixo, ou de partida, de 40°C, até uma temperatura de 70°C ou acima. A faixa de 40 a 70°C pode fornecer um "instantâneo" em uma faixa de aquecimento/temperatura mais ampla para a qual um tempo (e, portanto, taxa) pode ser especificado (e, portanto, calculado).
[021] Calcula-se que o aquecimento (de 40 a 70°C em 30 minutos) seja uma taxa de l°C/minuto. Entretanto, a taxa pode ser ligeiramente mais baixa do que isso caso necessário e, no primeiro aspecto, o aquecimento rápido significa uma taxa de aquecimento maior que 0,5°C/minuto. De preferência, a taxa é de pelo menos 0,6, 1,0 ou mesmo 1,5°C/minuto. Entretanto, taxas de aquecimento particularmente rápidas são consideradas, dependendo do equipamento e do volume ou peso das células microbianas a serem aquecidas. Taxas de aquecimento que excedam 2,0 ou mesmo 2,5°C/minuto estão, portanto, dentro da invenção.
[022] Taxas de aquecimento particularmente altas podem ser obtidas usando-se equipamento especializado. Este pode atingir uma alta temperatura em um curto período de tempo e, ao fazer isso, pode minimizar qualquer oxidação ou dano ao PUFA ou óleo microbiano que possa ser posteriormente isolado. Assim, o aquecimento pode ocorrer até uma temperatura máxima de 140, 150 ou mesmo 160°C. De preferência, o aquecimento pode ser até uma faixa de temperatura de 100 a 180°C, como de 120 a 160°C, de preferência de 130 a 150°C. Usando-se aquecedores particularmente rápidos, essas temperaturas podem ser atingidas de maneira particularmente rápida, por exemplo, em um tempo menor que um minuto (30 segundos) . Essas temperaturas poderíam ser atingidas em 20, 30, 40 ou 50 segundos, ou podem levar até 150, 175, 200, 225 ou 250 segundos. Entretanto, essas temperaturas podem ser atingidas em tão pouco tempo quanto 2, 4, 6, 8 ou 10 segundos, por exemplo, se for usado um aquecedor de infusão, ou com amostras relativamente pequenas. Assim, taxas de aquecimento de até 50, 100, 150 ou mesmo 200°C por minuto podem ser atingidas. Taxas de aquecimento ligeiramente mais baixas de 5 ou 10 a 50 ou 60°C por minuto são, portanto, possíveis, como de 15 a 45°C por minuto.
[023] Esse aquecimento rápido durante a pasteurização rápida se mostrou não apenas mais eficiente, e requerendo menos energia, mas parece ser pelo menos um fator responsável pela obtenção de um óleo microbiano de melhor qualidade (uma vez extraído das células após a pasteurização).
SEGUNDO ASPECTO - PROTOCOLO DE PASTEURIZAÇÃO EM TRÊS ESTÁGIOS
[024] 0 primeiro estágio pode ser um estágio de aquecimento. Esse, de fato, corresponde ao aquecimento rápido descrito no primeiro aspecto da invenção e, portanto, todos os aspectos e características do primeiro aspecto se aplicam ao primeiro estágio (de aquecimento) do segundo aspecto mutatis mutandis.
[025] 0 segundo estágio é quando as células estão em um platô (na temperatura) . As células podem ser, portanto, mantidas a uma temperatura desejada particular (mais ou menos 1 ou 2, 5 ou mesmo 10°C) durante um período de tempo desejado. As células podem ser, então, mantidas a uma temperatura constante. De preferência, essa temperatura (ou faixa de temperaturas), no estágio de platô, é a temperatura máxima atingida durante o protocolo de pasteurização. A temperatura no estágio de platô (e/ou a temperatura máxima durante a pasteurização) é, de preferência, de pelo menos 70°C. Pode estar abaixo de 90 ou 100°C, adequadamente de 70 a 85°C, como de 70 a 77°C. Alternativamente, pode ser de 80 - 160°C, como de 100 -140°C.
[026] O período de tempo do estágio de platô, ou em que as células são mantidas à temperatura desejada ou máxima, pode ser de 5 segundos a 90 minutos, como de 1 ou 10 a 80 minutos, por exemplo, de 20 a 70 minutos. Otimamente, esse tempo é de 40 ou 50 a 60 ou 70 minutos, como de 45 a 65 minutos, vantajosamente de 55 a 63 minutos. Tempos particularmente curtos, por exemplo, de 8 segundos a 5 minutos, também são possíveis.
[027] O terceiro estágio é um estágio de resfriamento. De preferência, as células são resfriadas a uma temperatura que seja igual às, ou dentro das, faixas mencionadas para o início do aquecimento (ou primeiro estágio). De preferência, as células microbianas são resfriadas e/ou aquecidas linearmente (nos primeiro e/ou terceiro estágios, conforme apropriado), isto é, quando traçados em um gráfico de tempo versus temperatura, os perfis de resfriamento ou aquecimento aparecem (aproximadamente) como uma linha reta. As células podem ser deixadas resfriar, ou podem ser ativamente resfriadas, por exemplo, usando um trocador de calor e/ou uma substância de resfriamento, por exemplo, (até) a temperatura ambiente ou temperatura da sala, ou abaixo.
[028] De preferência, a taxa de resfriamento é de pelo menos 0,4, 0,6, 1,0 ou 1,5°C/minuto. Esses valores representam taxas de resfriamento que podem ser atingidas, em que as células são deixadas resfriar. Entretanto, taxas de resfriamento mais rápidas são possíveis, particularmente se for empregado resfriamento ativo. Assim, taxas de resfriamento de pelo menos 2,0, 2,5, 3,0 ou mesmo 3,5°C/minuto podem ser atingidas. Entretanto, taxas de resfriamento mais altas, como acima de 5°C por minuto, são possíveis, por exemplo, de 7 ou 10 a 50 ou 60°C por minuto, de preferência de 15 a 45°C por minuto.
[029] A taxa de aquecimento e/ou resfriamento preferida é, de preferência, mantida durante pelo menos 10, 20 ou 30°C, embora, em algumas modalidades, isso pode ser atingido em pelo menos uma faixa de 40 ou 50°C.
[030] Percebe-se que, com um estágio de aquecimento rápido e um estágio de resfriamento rápido, a quantidade de energia usada na pasteurização pode ser reduzida. Não apenas isso pode resultar em economia de custo, mas pode não ter efeitos adversos sobre a qualidade do óleo microbiano (final), de fato, parece ter efeitos benéficos sobre o óleo. TERCEIRO ASPECTO - ÁREA SOB GRÁFICO DE TEMPO VERSUS TEMPERATURA (ENTRADA DE ENERGIA) [031] Do segundo aspecto, fica claro que, se o protocolo de pasteurização da invenção for traçado em um gráfico de tempo versus temperatura, consegue-se uma forma de trapézio. Os primeiro (aquecimento) e terceiro (resfriamento) estágios podem ser cada um de formato triangular, ao passo que o segundo estágio ou médio (platô) (o assunto do quarto aspecto) é (normalmente) retangular. A área sob o gráfico de tempo versus temperatura representa a quantidade de energia que ingressa no sistema. Ao se dividir o protocolo de pasteurização em três partes, pode-se calcular a área do gráfico e, conseqüentemente, a entrada de energia.
[032] No terceiro aspecto, a área sob o gráfico de tempo (em minutos) versus temperatura (em °C) está abaixo de 13.000°C.minuto. Entretanto, quantidades bem abaixo disso foram conseguidas, e valores abaixo de 11.000, 10.000, 9.000, 8.000 ou mesmo 1.000°C.minuto são possíveis. Em aspectos preferidos da invenção, esses valores podem ser de no máximo 7.000, 6.000 ou 800°C.minuto. No gráfico mencionado, o tempo é traçado no eixo dos x (ou eixo horizontal ou abscissa) e 0°C representa a origem. A temperatura será, portanto, traçada no eixo dos y (ou eixo vertical ou ordenada), e 0°C representa a origem.
[033] Uma vez que as células microbianas tenham sido aquecidas a sua temperatura de pasteurização, podem, então, resfriar (ou ser resfriadas). As células são normalmente resfriadas à temperatura da sala ou ambiente, ou pelo menos a uma temperatura abaixo de 30 °C. Conseqüentemente, há um tempo não apenas para as células serem aquecidas de 30 a 60°C, mas também um tempo para as células resfriarem de 60°C até 30°C. Pode-se somar esses dois tempos para fornecer um tempo de aquecimento e resfriamento de 30 - 60 a 30°C combinado. De preferência, esse combinado apenas é menor que 150 minutos, como menor que 120 ou 100 minutos. Entretanto, com amostras menores, tempos muito mais rápidos podem ser conseguidos, e o tempo combinado (30 a 60 e de volta a 30°C) pode ser menor que 70, 50 ou mesmo 30 minutos. QUARTO ASPECTO - PROTOCOLO DE PASTEURIZAÇÃO COM ESTÁGIO DE PLATÔ [034] Esse protocolo pode ser um de acordo com o segundo aspecto, em que há um estágio de aquecimento (por exemplo, primeiro) e um estágio de resfriamento (por exemplo, segundo), com um estágio de platô (por exemplo, segundo ou médio ou intermediário) entre eles. Entretanto, isso não é essencial, e outros protocolos de pasteurização podem ser considerados. O quarto aspecto se refere a características preferidas desse estágio de platô. Todos os aspectos e características do segundo aspecto (e de outros) se aplicam a este quarto aspecto mutatis mutandis.
[035] As células são mantidas ou ficam a uma temperatura desejada particular (mais ou menos 1, 2, 5 ou mesmo 10°C) para uma temperatura (T, °C) durante um tempo (t, minutos). Esses dois parâmetros podem ser multiplicados para fornecer o produto tT. Esse é adequadamente de 140 ou 280 a 50.000 ou 100.800°C.minuto De preferência, esse produto é de 500, 1.000, 2.000 ou 3.000 ou mesmo 6.000 até 10.000, 18.000 ou 25.000°C.minuto. Otimamente, o produto tT é de 2.000 a 6.000, como de 3.000 a 5.000, otimamente de 4.000 a 4.500°C.minuto. Em algumas modalidades, o produto tT é de 13 a 900, como de 100 a 200 ou 700 ou 800, otimamente de 300 a 400 a 600 ou 700°C.minuto.
[036] Assim, de maneira similar ao terceiro aspecto, percebe-se que o produto tT representa a área sob o gráfico de tempo versus temperatura das células, quando mantidas à temperatura elevada. Assim, o fator de multiplicação é, de fato, a área sob o gráfico para apenas o estágio de platô (mas não de aquecimento ou resfriamento).
EXTRAÇÃO DE UM PUFA
[037] Um quinto aspecto da presente invenção se refere a um processo para obtenção de um PUFA a partir de células microbianas, o processo compreendendo a pasteurização das células de acordo com qualquer um dos primeiro, segundo, terceiro ou quarto aspectos da invenção, conforme anteriormente descritos, e extração e/ou isolamento de um pUFA das células pasteurizadas.
[038] Um sexto aspecto da presente invenção se refere a um óleo microbiano que pode compreender pelo menos 40% de ácido araquidônico (ARA) e/ou pode ter um teor de triglicerideos de pelo menos 90%. O óleo pode ter um POV de menos de 2,5, 1,5, 0,8, 0,6 ou mesmo 0,5 e/ou um AnV de menos de 1,0. O óleo é preparável pelo processo do quinto aspecto.
ÁCIDOS GRAXOS POLIINSATURADOS (PUFAS) E ÓLEOS MICROBIANOS
[039] 0 PUFA pode ter um PUFA único ou dois ou mais PUFAs diferentes. O ou cada PUFA pode ter da família n-3 ou n-6. De preferência, é um PUFA Ci8, C20 ou C22· Pode ser um PUFA com pelo menos 18 átomos de carbono e/ou pelo menos 3 ou 4 duplas ligações. O PUFA pode ser fornecido na forma de um ácido graxo livre, um sal, como um éster de ácido graxo (por exemplo, éster metílico ou etílico) ou como um fosfolipídio e/ou na forma de um mono-, di- ou triglicerídeo.
[040] PUFAs adequados (n-3 e n-6) incluem: Ácido docosaexaenóico (DHA, 22:6 Ω3) , adequadamente de algas ou fungos, como Crypthecodinium (dinoflagelado) ou Thraustochytrium (fungo); Ácido γ-linolênico (GLA, 18:3 6); Ácido oí-linolênico (ALA, 18:3 3) ; Ácido linolêico conjugado (ácido octadecadienóico, CLA) ; Ácido diomo-Y-linolênico (DGLA, 20:3 6); Ácido araquidônico (ARA, 20:4 Ω6); e Ácido eicosapentaenóico (EPA, 20:5 Ω3).
[041] PUFAs preferidos incluem o ácido araquidônico (ARA), ácido docosoexaenóico (DHA), ácido eicosapentaenóico (EPA) e/ou ácido γ-linolêico (GLA). Em particular, prefere-se o ARA.
[042] O PUFA pode ser produzido pelas células pasteurizadas no processo da invenção, como uma célula microbiana. Essas podem ser uma célula de bactéria, alga, fungo ou levedura. Preferem-se fungos, de preferência da ordem Mucorales, por exemplo, Mortierella, Phycomyces, Blakeslea, Aspergillus, Thraustochytrium, Pythium ou Entomophthora. A fonte preferida de ARA é Mortierella alpina, Blakeslea trispora, Aspergillus terreus ou Pythium insidiosum. As algas podem ser dinoflageladas e/ou incluir Porphyridium, Nitszchia ou Crypthecodinium (por exemplo, Crypthecodinium cohnii) . Leveduras incluem aquelas do gênero Pichia ou Saccharomyces, como Pichia ciferii. Bactérias podem ser do gênero Propionihacterium. 0 óleo microbiano pode ser um liquido (à temperatura ambiente).
[043] É preferível que a maior parte do PUFA esteja na forma de triglicerídeos. Assim, de preferência pelo menos 50%, como pelo menos 60%, ou otimamente pelo menos 70%, do PUFA estão na forma de triglicerídeo. Entretanto, a quantidade de triglicerídeos pode ser mais elevada, como pelo menos 85%, de preferência pelo menos 90%, otimamente pelo menos 95% ou 98% do óleo. Desses triglicerídeos, de preferência pelo menos 40%, como pelo menos 50%, e otimamente pelo menos 60%, do PUFA estão presentes na posição α do glicerol (presente na estrutura principal do triglicerídeo), também conhecida como posição 1 ou 3. É preferível que pelo menos 20%, como pelo menos 30%, otimamente pelo menos 40% do PUFA estejam na posição β(2).
[044] O óleo microbiano pode compreender pelo menos 10, 35, 40 ou 45% ou mais de um PUFA desejado, como ácido araquidônico. Pode ter um teor de triglicerídeos de pelo menos 90%. De preferência, o óleo microbiano tem um teor de triglicerídeos de 90 a 100%, como de pelo menos 96%, de preferência pelo menos 98%, mais preferivelmente pelo menos 99% e otimamente acima de 99,5%. Tipicamente, o óleo microbiano terá um teor de ácido eicosapentaenóico (EPA) abaixo de 5%, de preferência abaixo de 1% e, mais preferivelmente, abaixo de 0,5%. O óleo pode ter menos de 5%, menos de 2%, menos de 1% de cada um dos ácidos graxos poliinsaturados (PUFAs) C20t C2o:3, C22 e/ou C24:o· O teor de ácido graxo livre (FFA) pode ser ^ 0,4, 0,2 ou 0,1. O óleo pode ter pouco ou nenhum GLA e/ou DGLA.
[045] O óleo microbiano pode ser um óleo bruto. Pode ter sido extraído das células usando um solvente, como dióxido de carbono supercrítico, hexano ou isopropanol.
PROCESSO DE PASTEURIZAÇÃO
[046] A pasteurização normalmente ocorrerá após a fermentação ter terminado. Em uma modalidade preferida, a pasteurização terminará a fermentação, porque o calor durante a pasteurização matará as células. A pasteurização pode, portanto, ser efetuada no caldo de fermentação (ou nas células no meio líquido (aquoso)), embora possa ser efetuada na biomassa microbiana obtida no caldo. No primeiro caso, a pasteurização pode ocorrer enquanto as células microbianas ainda estão dentro do fermentador. A pasteurização ocorre, de preferência, antes de qualquer processamento adicional das células microbianas, por exemplo, granulação (por exemplo, por extrusão), formação de farelo ou amassamento.
[047] De preferência, o protocolo de pasteurização é suficiente para inibir ou inativar uma ou mais enzimas que possam afetar de maneira adversa ou degradar um PUFA ou óleo microbiano, por exemplo, uma lipase.
[048] Uma vez terminada a fermentação, o caldo de fermentação pode ser filtrado ou de outra forma tratado para remover a água ou liquido aquoso. Após a remoção da água, pode-se obter uma "torta" de biomassa. Se a pasteurização não tiver ocorrido, então, as células sem água (ou torta de biomassa) pode ser submetida à pasteurização.
PROCESSO DE EXTRAÇÃO DE PUFA
[049] O PUFA (ou óleo microbiano, normalmente compreendendo o PUFA) pode ser, então, extraído das células microbianas (pasteurizadas). De preferência, é extraído de (por exemplo, secado) grânulos (por exemplo, extrudados) contendo as células. A extração pode ser efetuada usando-se um solvente. De preferência, usa-se um solvente não polar, por exemplo, um alcano Ci-e, de preferência C2-6r por exemplo, hexano. Pode-se usar dióxido de carbono (em uma forma líquida, por exemplo, em um estado supercrítico).
[050] De preferência, deixa-se o solvente percolar os grânulos secos. Técnicas adequadas de granulação e extração de microorganismos e subseqüente extração de um óleo contendo PUFA microbiano são descritas no WO-A-97/37032.
[051] O solvente permite obter um óleo contendo PUFA bruto. Esse óleo pode ser usado nesse estado, sem processamento adicional, ou pode ser submetido a uma ou mais etapas de refino. Entretanto, um óleo bruto é normalmente um que contém um solvente, como o solvente usado para extrair o óleo (por exemplo, hexano ou um álcool, como álcool isopropílico) ou que tenha sido submetido a uma (ou de preferência a todas) das etapas de refino a seguir. Protocolos de refino adequados são descritos no pedido de patente internacional n° PCT/EP01/08902 (o conteúdo desse documento e de todos os outros aqui descritos é aqui incorporado por referência) . Por exemplo, o óleo pode ser submetido a uma ou mais etapas de refino, que podem incluir tratamento com ácido ou desgomificação, tratamento com álcali ou remoção de ácidos graxos livres, alvejamento ou remoção de pigmento, filtração, winterização (ou resfriamento, por exemplo, para remover triglicerideos saturados), desodorização (ou remoção de ácidos graxos livres) e/ou polimento (ou remoção de substâncias insolúveis em óleo). Todas essas etapas de refino são descritas em maiores detalhes no PCT/EP01/08902 e podem ser aplicadas às etapas descritas no presente pedido mutatis mutandis.
[052] 0 óleo resultante é particularmente adequado para fins nutricionais, e pode ser adicionado a alimentos (humanos) ou rações (animais). Exemplos incluem leite, fórmulas para bebês, bebidas saudáveis, pão e rações para animais.
CÉLULAS MICROBIANAS
[053] As células microbianas (ou microorganismos) usadas na presente invenção podem ser qualquer uma das anteriormente descritas, particularmente na seção referente a PUFAs e óleos microbianos. Podem compreender, ou serem capazes de produzir, um PUFA ou óleo microbiano, e adequadamente o óleo de PUFA pode ser extraído ou isolado das células. Podem estar em forma filamentosa, como fungos ou bactérias, ou de células isoladas, como leveduras, algas e bactérias. As células podem compreender microorganismos que sejam leveduras, fungos, bactérias ou algas. Fungos preferidos são da ordem Mucorales, por exemplo, o fungo pode ser do gênero Mortierella, Phycomyces, Blakeslea ou Aspergillus. Fungos preferidos são das espécies Mortierella alpina, Blakeslea trispora e Aspergillus terreus.
[054] Com relação às leveduras, essas são, de preferência, do gênero Pichia (como das espécie Pichia ciferrii) ou Saccharomyces.
[055] Bactérias podem ser do gênero Propionibacterium.
[056] Se as células forem de uma alga, essa é, de preferência, um dinoflagelado e/ou pertence ao gênero Crypthecodinium. Algas preferidas são da espécie Crypthecodinium cohnii.
AQUECIMENTO
[057] Esse pode ser efetuado por aquecimento (das células) direta ou indiretamente. O aquecimento, caso direto, pode ser por passagem de vapor no fermentador. Um método indireto pode usar um meio mediante trocadores de calor, através da parede do fermentador ou com serpentinas de aquecimento, ou um trocador de calor externo, como um trocador de calor de placas.
[058] Normalmente, a pasteurização ocorrerá no recipiente de fermentador em que a fermentação tenha ocorrido. Entretanto, para alguns organismos (como bactérias), freqüentemente é preferível remover as células do recipiente primeiro e, então, pasteurizar. A pasteurização pode ocorrer antes de outro processamento dos organismos, por exemplo, secagem ou granulação.
[059] A pasteurização normalmente mata a maioria dos, se não todos os, microorganismos. Após a pasteurização, pelo menos 95%, 96% ou mesmo 98% dos microorganismos foram mortos, isto é, não estão vivos.
ACIDlFICAÇÃO
[060] Em alguns casos, é desejável reduzir o risco de crescimento das células pasteurizadas. Uma possibilidade á acidificar as células com um ácido adequado. Assim, para prevenir o crescimento de espécies microbianas, o ajuste das células a uma faixa de pH de 3 a 4 pode ser desejável. Entretanto, faixas de pH mais amplas podem ser empregadas, dependendo das células, e, assim, o pH pode ser ajustado de 2 a 5, otimamente em uma faixa de cerca de 3,3 a 3,7.
[061] A acidificação das células pode ocorrer antes da pasteurização. Entretanto, é conduzida, de preferência, depois.
[062] O pH pode ser ajustado por qualquer meio adequado, ou por qualquer ácido adequado. De preferência, isso é conseguido usando-se ácido fosfórico, como ácido fosfórico a 85% ou diluído a 55% ou 33%. VALOR DE PERÓXIDO (POV) [063] De preferência, o POV do óleo microbiano é de 4 a 8 ou 12, particularmente para um óleo bruto. Entretanto, o POV pode ser de no máximo 3,0, 2,5 ou 2,0. Entretanto, valores de POV muito mais baixos podem ser obtidos usando-se o processo da invenção, e esses valores podem ser menores que 1,5 ou menores que 1,0. Valores menores que 0,8 ou 0,6 e ainda menores que 0,4 de POV podem ser obtidos. Os valores (das modalidades) variaram de 1,3 (ou 0,8) a 0,4. A unidade (para POV) é normalmente de meq/kg. VALOR DE ANISIDINA (ANV) [064] Esse valor pode dar uma medida do teor de aldeído. De preferência, o valor de anisidina do óleo microbiano é de 5, 6, 7 ou 10 a 15, 20 ou 25, particularmente para um óleo bruto. Adequadamente, o AnV é de no máximo 20, por exemplo, no máximo 15. Pode ser de no máximo 10 ou ainda de no máximo 5. De preferência, os valores POV e/ou AnV se referem a um óleo bruto, em vez de refinado. Os valores de AnV (era experimentos preferidos) variaram de 15 a 5, opcionalmente de 12 a 7.
ÓLEOS BRUTOS VERSUS REFINADOS
[065] Algumas diferenças entre esses dois óleos sao apresentadas abaixo. Cada óleo bruto ou refinado pode ter uma ou mais das características na Tabela a sequir para o óleo bruto ou refinado, conforme apropriado. Um óleo bruto normalmente conterá um antioxidante (por exemplo, tocoferol, palmítato de ascorbila).
[066]Adequadamente, o óleo bruto na presente invenção pode ter uma ou mais das seguintes características: (a) ura teor de não saponif icãveis de 2,0 a 3,51 (p/p); (b) um teor de solvente (por exemplo, hexano) de 10, 50 ou 100 ppm até 1.000, 1.500 ou 2.000 ppm; (c) um teor de ácido livre de 0,1 ou 0,2% a 1%, por exemplo, 0,2 - 0,6 ou 0,3 - 0,5%; (d) um valor POV de 2, 3, 4 ou 6 a 10; (e) um teor de fósforo de pelo menos 2, 3 ou 5 mg/kg; (f) um teor de silício de 50 a 100 ppm ou 500 ppm; e/ou (g) um teor de água de menos de 1% ou de 0,5 a 1 ou 2%.
USOS DE ÓLEOS E PUFAS
[067] Um sexto aspecto da invenção se refere a uma composição compreendendo o óleo do quinto aspecto, e em que estejam uma ou mais substâncias (adicionais) apropriadas. A composição pode ser um alimento e/ou suplemento alimentar para animais ou seres humanos. Em modalidades da invenção que sejam para consumo humano, os óleos podem ser tornados adequados para consumo humano, tipicamente por refino ou purificação do óleo obtido dos micróbios.
[068] A composição pode ser uma fórmula ou bebês ou alimento (humano). Aqui, a composição da fórmula pode ser ajustada para ter uma quantidade de lipídios ou PUFAs similar ao leite humano normal. Isso pode envolver a misturação do óleo microbiano da invenção com outros óleos para atingir a composição apropriada.
[069] A composição pode ser uma composição ou suplemento de ração animal ou marinho. Essas rações e suplementos podem ser dados a qualquer animal de fazenda, em particular ovelhas, gado e aves. Além disso, as rações ou suplementos podem ser dados a organismos marinhos em fazendas, como peixes e crustáceos. A composição pode incluir, portanto, uma ou mais substâncias ou ingredientes de ração para esse animal.
[070] 0 óleo da invenção pode ser vendido diretamente como óleo e contido em embalagens apropriadas, tipicamente garrafas de alumínio inteiriças internamente revestidas com verniz fenólico epóxi e lavadas com nitrogênio. 0 óleo pode conter um ou mais antioxidantes (por exemplo, tocoferol, vitamina E, palmitato), cada um, por exemplo, a uma concentração de 50 a 800 ppm, como de 100 a 700 ppm.
[071] Composições adequadas podem incluir composições farmacêuticas ou veterinárias, por exemplo, para serem tomadas por via oral, ou composições cosméticas. O óleo pode ser tomado como tal, ou pode ser encapsulado, por exemplo, em um invólucro, e pode, portanto, estar na forma de cápsulas. O invólucro ou cápsulas podem compreender gelatina e/ou glicerol. A composição pode conter outros ingredientes, por exemplo, sabores (por exemplo, sabor de limão ou lima) ou um veículo ou excipiente farmacêutica ou veterinariamente aceitável.
[072] Aspectos e características preferidas de um aspecto da invenção são aplicáveis a outro aspecto mutatis mutandis.
[073] A invenção será agora descrita, a titulo de exemplo, com referência aos Exemplos a seguir, que são apresentados a titulo de ilustração e não pretendem limitar o âmbito. EXEMPLO 1 [074] Acredita-se que a oxidação durante a produção de um óleo microbiano contendo PUFA seja causada por atividade enzimática. A pasteurização foi considerada como um método de estabilização da oxidação durante o processamento das células microbianas para se obter o óleo microbiano. Verificou-se que o grau de estabilização era dependente das condições de pasteurização.
[075] Inúmeros experimentos foram, conseqüentemente, efetuados para determinar que condições de pasteurização poderiam afetar o nivel de oxidação e, em particular, o valor de peróxido (POV) do óleo. Os valores de peróxidos foram determinados usando-se o protocolo padrão detalhado em AOCS:Cd8-53.
[076] Os experimentos seguem o seguinte protocolo: fermentação; armazenamento; pasteurização; extração (de óleo microbiano); análise do óleo.
[077] O fungo Mortierella alpina foi cultivado em um fermentador. A fermentação durou aproxidamente 148 horas. M. alpina produziu o PUFA chamado de ácido araquidônico (ARA) . A biomassa foi removida do fermentador e armazenada (a uma temperatura abaixo de -18°C).
[078] Amostras da biomassa de M. alpina foram removidas do caldo de fermentação, enquanto ainda residente dentro do fermentador, e imediatamente congeladas.
[079] Vários protocolos de pasteurização foram tentados. A pasteurização foi conduzida a três temperaturas diferentes, a saber, 40, 70 e 85°C. O protocolo seguiu um processo em três estágios, com um primeiro estágio de aquecimento rápido, seguido por um platô (um segundo estágio ou médio) a uma temperatura desejada, que era a temperatura máxima usada. Houve, então, um estágio de resfriamento rápido (terceiro). Diferentes amostras de biomassa foram submetidas a um estágio médio (platô) de três tempos diferentes, a saber, uma, duas e 24 horas.
[080] Após a pasteurização, o óleo microbiano foi obtido usando-se uma técnica de extração úmida. Essa amostra de biomassa foi filtrada, espremida (sob pressão), e o óleo foi extraído.
[081] O óleo microbiano foi, então, analisado, principalmente quanto ao valor de peróxido (POV) usando um método AOCS. O teor de ARA para algumas das amostras foi determinado. As análises mostraram que o óleo microbiano obtido tinha aproximadamente 420 g de ARA por kg.
PROTOCOLO DETALHADO; FERMENTAÇÃO E EXTRAÇÃO DE
AMOSTRA
[082] Um litro de caldo de fermentação foi removido do recipiente de fermentador e filtrado (filtro de dois litros Seitz, F-FA10). A torta resultante foi, então, lavada com 600 ml de água desmineralizada. A torta úmida foi secada por ventilação durante um minuto e, então, espremida (usando um aparelho HAFICO™, prensa de tintura, C-0A021, 300 - 400 atm) a 400 bars. O extrudado úmido foi, então, usado para extrair um óleo microbiano com 500 ml de hexano (Merck) à temperatura ambiente (20 a 25°C) durante uma hora, usando uma máquina Ultra Turrax™. O hexano foi, então, decantado. A torta restante foi, então, lavada com 250 ml de hexano fresco (com agitação, durante 30 minutos) à temperatura ambiente. O hexano foi decantado e, então, adicionado ao hexano anteriormente extraído.
[083] O extrato foi, então, filtrado usando-se um filtro de vidro em combinação com um filtro de vidro GFA. O hexano foi, então, evaporado, usando uma máquina Rotavapor™, do extrato claro a cerca de 50°C durante cerca de 15 minutos. O óleo foi, então, transferido para copos impermeáveis a gases, e cada copo de amostra foi, então, lavado com nitrogênio durante 30 segundos. O copo de amostra foi, então, fechado e armazenado a -18°C.
PROTOCOLOS DE PASTEURIZAÇÃO
[084] Foram testados três protocolos diferentes (A, Be C) . Cada um era composto por três estágios: um primeiro estágio de aquecimento, um segundo estágio de platô (a uma temperatura máxima) e um terceiro estágio de resfriamento. A Tabela 1 abaixo mostra os protocolos dos três perfis de pasteurização. TABELA 1 [085] Os três perfis de pasteurização A, B e C também são mostrados graficamente na Figura 1. Como se percebe, a área sob o gráfico de temperatura (T, °C) versus tempo (t, minutos) pode ser calculada para cada uma das três etapas em cada perfil e, então, somada para fornecer a área total sob o gráfico para cada um dos três perfis. Esses cálculos também são mostrados na Tabela 1 acima.
[086] O valor de peróxido (POV) foi determinado para óleos resultantes da extração de células após os três protocolos de pasteurização A, B e C. O POV dos óleos extraídos foram, respectivamente, de 8,7, 14,3 e 2,4. O perfil B tinha uma lenta taxa de aquecimento e uma lenta taxa de resfriamento e é apresentado apenas para comparação. Forneceu o POV mais alto de 14,3.
[087] Em contraste, os perfis A e C estão ambos dentro da invenção. O perfil A tem uma taxa de aquecimento e de resfriamento mais rápida nos primeiro e terceiro estágios do que o perfil B. De preferência, na invenção, as taxas de aquecimento e resfriamento são pelo menos tão rápidas quanto as mostradas no perfil A. O perfil A forneceu um POV de 8,7.
[088] Entretanto, os melhores resultados foram obtidos usando-se o perfil C, que tinha um POV de apenas 2,4. Conforme se pode observar na Figura 1, este teve um estágio de aquecimento muito rápido e um rápido estágio de resfriamento (terceiro). EXEMPLO 2 [089] Conduziram-se experimentos similares ao Exemplo 1, exceto que, desta vez, a temperatura de pasteurização foi variada mais amplamente, a saber, a 40°C (para comparação), 70°C e 85°C. 0 perfil de temperatura (°C) versus tempo (minutos) é mostrado na Figura 2 e na Tabela 2 abaixo. 0 perfil foi essencialmente o mesmo para todas as amostras, mas, evidentemente, com um prolongamento do platô de pasteurização (de uma hora a 4 ou 24 horas) , conforme apropriado. TABELA 2 [090]Amostras de duas fermentações diferentes (ambas de M. alpina), de diferentes durações, foram testadas. As amostras n° 11 a 20, da Tabela 3, tiveram uma fermentação ligeiramente mais longa/ em que cerca de 2 m3 de caldo foram transferidos para um fermentador de inóculO/ e a fermentação prolongada durante 48 horas sem nenhum acréscimo adicionai de glicose.
[Q91]Após a pasteurização, as amostras foram processadas, começando com filtração a uma pressão de cerca de 1 bar de nitrogênio. A torta resultante foi, então, lavada com água de processo (cerca de 0,6 do volume de caldo inicial). A remoção de água foi realizada usando-se uma prensa de frutas de 300 a 400 bar de pressão de êmbolo. Então, 500 ml de hexano fresco foram adicionados e misturados durante um minuto usando uma máquina Ultra-turrax durante um minuto. A extração ocorreu, então, durante cerca de uma hora à temperatura ambiente. Após a filtração, a torta resultante foi lavada com 250 ml de hexano fresco, e o solvente resultante foi evaporado sob vácuo de 60 a 7Q°C. Foi, então, lavada com nitrogênio e armazenada a -18°C.
[092]Os resultados são mostrados na Tabela 3, que inclui os primeiro e segundo valores de peróxido medidos e uma média desses dois valores, assim como o valor de anisidina (AnV). A redução no POV e no AnV também é mostrada nas Figuras 3 e 4 (para as fermentações mais curta e mais longa, respectivamente). TABELA 3 [Ο 93]Dos resultados, observa-se que, sem pasteurização, o POV era de 5,6 ou 5,7» A pasteurização a 4G°C reduziu o POV, mas um tempo relativamente longo <corno 24 horas) à temperatura de pasteurização era requerido para reduzir o POV a um valor aceitável de 2,1» [094]Temperaturas mais altas tiveram um sucesso consideravelmente maior. Por exemplo, pasteurização durante apenas 1 horas a 70°C forneceu um POV de 2,2, quando comparada a um POV de 2,1 para 24 horas a 40°C. Valores ainda melhores foram obtidos a temperaturas mais altas, com 85°C durante 1 hora fornecendo um valor POV de apenas 1,2. (Esses números se referem à fermentação mais curta, embora resultados similares possam ser encontrados com células cultivadas na fermentação mais longa).
[095] As Figuras 3 e 4 mostram, assim, graficamente como os valores POV e AnV se alteração com relação a diferentes tempos de pasteurização. Como esperado, tempos de pasteurização mais longos forneceram menores valores AnV e POV. Entretanto, de maior importância é o uso de temperaturas relativamente altas durante a pasteurização. Uma acentuada diminuição em AnV e POV foi encontrada quando a temperatura de pasteurização (Tpast.) era aumentada para 70°C, e valores ainda menores foram encontrados a 85°C. (As três linhas de cima, indicadas por cruzes, círculos cheios e asterisco mostram os valores AnV, ao passo que as três linhas inferiores, indicadas por diamantes, quadrados e triângulos, fornecem os valores POV).
[096] A Tabela 4 abaixo mostra o produto calculado tT (em °C. minuto) para os nove protocolos de pasteurização diferentes (três diferentes temperaturas de platô e para três tempos diferentes). Esse produto representa, de fato, a área sob o gráfico (de tempo, t, minutos, versus temperatura, T, °C) para o estágio de platô (após o estágio de aquecimento, mas antes do estágio de resfriamento).
Tabela 4 EXEMPLO 3 [097] Ensaios de pasteurização adicionais foram conduzidos usando-se caldo de fermentação, segundo fe rmentação em escala de produção, usando o fungo M. alpina, conforme antériormenté exemplificado. Caldo nào pasteurizado (800 litros) foi transportado e armazenado a 4°C. 0 caldo foi, então, transferido para um recipiente sob agitação de 700 litros, e 10 protocolos de pasteurização diferentes foram efetuados.
[098] Em primeiro lugar, a pasteurização foi conduzida a cinco temperaturas diferentes (máximas), a saber, 140, 120, 100, 80 e 60°C, com um tempo de residência (platô) <à temperatura máxima) de 8 segundos. Em segundo lugar, a pasteurização foi conduzida a 140, 120, 100, 8 0 e 60°C, com um tempo de residência (platô) (à temperatura máxima) de 300 segundos.
[099] Amostras (2 litros) foram colhidas e, então, congeladas diretamente a -18°C. Amostras estéreis (200 ml) foram colhidas e congeladas, e óleo ARA bruto recuperado das amostras usando-se o seguinte protocolo.
[100] Uma amostra de caldo de fermentação (1,7 litros) foi filtrada a 1 bar de N2. A torta foi lavada com 0,6 volumes de água condensada e espremida durante cerca de 5 minutos a 400 kg/cm2. Então, n-hexano (500 ml) foi acrescentado à torta úmida, que foi esfarelada usando-se uma máquina Ultra Turrax a 24.000 rpm. O óleo foi extraído à temperatura ambiente (cerca de 21°C) durante cerca de 110 minutos. A suspensão foi filtrada com vácuo, usando-se um meio de filtro GF/A Whatman. A torta foi lavada com 250 ml de hexano fresco. O hexano foi evaporado durante 15 minutos em um banho de água, com uma temperatura de cerca de 60 a 7 0°C. O óleo resultante foi, então, transferido para copos de amostra impermeáveis a gases, que foram lavados com nitrogênio durante 30 segundos e, então, fechados e armazenados antes da análise a -18°C.
[101] As Figuras 5, 6 e 7 fornecem os dados após a análise. As Figura 6 e 7 mostram os perfis de tempo versus temperatura para os dois conjungos de experimentos, primeiro do tempo de platô (residência) de 8 segundos e, em segundo lugar, para o tempo de platô (residência) de 5 minutos, a cada um dos 5 ajustes de temperatura, respectivamente. Conforme se observa nos gráficos, a linha média horizontal (representando 8 segundos ou 5 minutos) mostra o estágio de platô.
[102] A Figura 5 mostra os valores POV e AnV resultantes para todos os 10 regimes de pasteurização.
Conforme se observa, menores valores POV foram obtidos com temperaturas cada vez mais altas, e o tempo de residência mais longo (5 minutos) forneceu o menor valor POV.
REIVINDICAÇÕES

Claims (17)

1. Processo para obtenção de um ácido graxo poliinsaturado (PUFA) ou óleo microbiano de células microbianas, caracterizado pelo fato de que compreende pasteurizar células microbianas, em que as células microbianas são da espécie Mortierella alpina, e em que compreendem, ou produzem, um PUFA ou óleo microbiano contendo PUFA, em que o referido processo compreende uma etapa de aquecimento, em que as células são aquecidas a uma temperatura compreendida de 40°C a 70°C em não mais que 30 minutos ou a uma taxa maior que 0,5°C/minuto, em que o óleo microbiano é extraído a partir de células microbianas para obter um óleo contendo PUFA.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende três estágios, a saber, o primeiro estágio de aquecimento de acordo com a reivindicação 1, um segundo estágio de platô no qual as células são mantidas a uma temperatura constante e um terceiro estágio de resfriamento.
3. Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que compreende aquecer as células a uma temperatura compreendida de 40° C a 60°C em não mais que 30 minutos ou a uma taxa maior que 0,5°C/minuto.
4. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que: (a) as células microbianas são aquecidas a uma taxa de 2°C/minuto; (b) a temperatura de pasteurização ou do platô é de 70 a 100°C; (c) as células são resfriadas a uma taxa de -0,6 ou -1,6°C/minuto; e/ou (d) a área sob o gráfico de tempo expresso em minutos versus temperatura expressa em °C está abaixo de 10.000 ou 8.000°C.minuto.
5. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo fato de que as células são aquecidas a uma temperatura acima de 60°C.
6. Processo de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a temperatura no estágio de platô é de 80 a 160°C.
7. Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a temperatura no estágio de platô é de 100 a 140°C.
8. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende 40% de um PUFA.
9. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fato de que o óleo compreende 45% de um PUFA.
10. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado pelo fato de que o óleo possui um valor de peróxido (POV) não mais que 1,5 meq/Kg.
11. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o óleo possui um valor de anisidina de menos que 20.
12. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o óleo possui um valor de anisidina de menos que 15.
13. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, caracterizado pelo fato de que o óleo possui um teor de triglicerideo de 90%.
14. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, caracterizado pelo fato de que o PUFA é ácido araquidônico (ARA).
15. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, caracterizado pelo fato de que o óleo ser extraido a partir de células microbianas pasteurizadas usando um solvente.
16. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 15, caracterizado pelo fato de que o óleo contendo PUFA ser submetido a uma ou mais etapas de refinamento, em que as referidas uma ou mais etapas de refinamento incluem tratamento com ácido ou desgomificação, tratamento com álcali ou remoção de ácidos graxos livres, alvejamento ou remoção de pigmento, filtração, winterização, desodorização e/ou polimento.
17. Processo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que o óleo resultante é adicionado a um alimento humano ou ração animal; ou a uma fórmula para bebês.
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Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6750048B2 (en) 2000-01-19 2004-06-15 Martek Biosciences Corporation Solventless extraction process
CN101837135B (zh) * 2002-06-19 2014-09-24 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于微生物细胞和微生物油的巴氏消毒方法
US20110159157A1 (en) * 2008-08-29 2011-06-30 Altreconserve Srl Process for Producing Vegetable or Fruit Pulp or Puree Packaging
DE102009003147A1 (de) 2009-05-15 2010-11-18 Zf Lenksysteme Gmbh Verfahren zum Betrieb eines Lenksystems in einem Fahrzeug
AU2010257729B2 (en) * 2009-06-08 2016-03-24 Basf Plant Science Company Gmbh Novel fatty acid elongation components and uses thereof
US8524485B2 (en) * 2009-06-16 2013-09-03 E I Du Pont De Nemours And Company Long chain omega-3 and omega-6 polyunsaturated fatty acid biosynthesis by expression of acyl-CoA lysophospholipid acyltransferases
CA2779551C (en) 2009-11-03 2018-05-01 Dsm Ip Assets B.V. Composition comprising cells and a polyunsaturated fatty acid having at least 20 carbon atoms (lc-pufa)
CA2780032A1 (en) * 2009-11-10 2011-05-19 Basf Se Health-promoting composition and preparation method
WO2011153246A2 (en) 2010-06-01 2011-12-08 Martek Biosciences Corporation Extraction of lipid from cells and products therefrom
CN102589145A (zh) * 2012-03-27 2012-07-18 鲁东大学 一种具有巴氏杀菌消毒功能的电热水器电路
EP2826384A1 (de) 2013-07-16 2015-01-21 Evonik Industries AG Verfahren zur Trocknung von Biomasse
CA2934491C (en) 2013-12-20 2023-09-26 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
WO2015095694A1 (en) 2013-12-20 2015-06-25 Dsm Ip Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
EP3082794B1 (en) 2013-12-20 2024-05-08 DSM IP Assets B.V. Processes for obtaining microbial oil from microbial cells
JP2017501705A (ja) * 2013-12-20 2017-01-19 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． バイオ燃料の生産に用いられる脂質の抽出プロセス
TWI651408B (zh) 2013-12-20 2019-02-21 Ｄｓｍ智慧財產有限公司 用於從微生物細胞獲得微生物油之方法（一）
CN103882071B (zh) * 2014-03-14 2016-10-05 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种微生物油及其制备方法
CN105713936B (zh) * 2014-03-14 2019-05-10 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 微生物油的制备方法
EP3200603A1 (de) 2014-10-02 2017-08-09 Evonik Degussa GmbH Pufas enthaltendes futtermittel mit hoher abriebfestigkeit und hoher wasserstabilität
ES2900848T3 (es) 2014-10-02 2022-03-18 Evonik Operations Gmbh Procedimiento para la producción de un pienso
BR112017006838B1 (pt) 2014-10-02 2021-07-06 Evonik Operations Gmbh Processo para produzir um alimento para animais compreendendo biomassa contendo pufa, alimento para animais e método para criar animais
EP3200606B1 (de) 2014-10-02 2021-03-31 Evonik Operations GmbH Verfahren zur herstellung eines pufas enthaltenden futtermittels durch extrusion einer pufas enthaltenden biomasse des typs labyrinthulomycetes
SG10202001800WA (en) * 2015-08-25 2020-04-29 Dsm Ip Assets Bv Refined oil compositions and methods for making
KR102405390B1 (ko) 2016-07-13 2022-06-03 에보닉 오퍼레이션스 게엠베하 용해된 지질을 함유하는 바이오매스로부터 지질을 분리하는 방법
CA3034122A1 (en) 2016-08-19 2018-02-22 Noblegen Inc. Methods and uses of dissolved organic material fractions for binding metal ions
ES2872009T3 (es) 2016-12-27 2021-11-02 Evonik Degussa Gmbh Método de aislamiento de lípidos a partir de una biomasa que contiene lípidos
MX2019011999A (es) 2017-04-07 2019-12-11 Noblegen Inc Metodo y usos de exudados encapsulados y biomasa seca de euglena para la union de metal.
RU2769461C2 (ru) * 2017-08-10 2022-03-31 ДСМ АйПи АССЕТС Б.В. Способ двойного центрифугирования для очистки питательного масла
EP3470502A1 (en) 2017-10-13 2019-04-17 Evonik Degussa GmbH Method of separating lipids from a lysed lipids containing biomass
CN107418982B (zh) * 2017-09-25 2020-05-08 嘉必优生物技术（武汉）股份有限公司 一种低氯丙醇微生物油脂及其制备方法
EP3527664A1 (en) 2018-02-15 2019-08-21 Evonik Degussa GmbH Method of isolating lipids from a lipids containing biomass
CA3101855C (en) 2018-05-15 2023-06-20 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lipids containing biomass with aid of hydrophobic silica
WO2019219396A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Evonik Operations Gmbh Method of isolating lipids from a lysed lipids containing biomass by emulsion inversion
CN108753457A (zh) * 2018-08-03 2018-11-06 梁云 提高微生物油脂稳定性和安全性的方法
BR112021006519A2 (pt) * 2018-11-02 2021-07-06 Firmenich & Cie prevenção da oxidação de matérias-primas de perfumaria e matérias-primas alimentares

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE150627C (pt) 1903-05-19
US3106571A (en) * 1955-10-14 1963-10-08 Thomas C Fisher Physico-mechanical process of obtaining high quality cocoanut oil
US3642958A (en) 1968-05-14 1972-02-15 Stauffer Chemical Co Isobutoxy-s-(4-chlorophenyl) ethylphosphonodithioate
DE1923529A1 (de) 1968-05-29 1969-12-04 Ingtech Zentralbuero Veb Verfahren zur Aufarbeitung eines mikroorganismenhaltigen Produktes
GB1411450A (en) 1972-12-19 1975-10-22 British Petroleum Co Process for the purification of a micro-organism product
GB1466853A (en) 1973-05-22 1977-03-09 Simon Rosedowns Ltd Extraction
US3958027A (en) * 1974-06-14 1976-05-18 Simon-Rosedowns Limited Extraction
US4056638A (en) * 1975-06-16 1977-11-01 E. I. Du Pont De Nemours And Company Dielectric drying of fungal material and resultant textured product
DD150627A1 (de) 1980-05-07 1981-09-09 Klaus Triems Verfahren zur gewinnung und loesungsmittelextraktion von feststoffen
US4526902A (en) * 1983-10-24 1985-07-02 Century Laboratories, Inc. Combined fatty acid composition for treatment or prophylaxis of thrombo-embolic conditions
DE3470061D1 (en) 1984-02-09 1988-04-28 Agency Ind Science Techn A method for the preparation of a fungal body and a lipid rich in gamma-linolenic acid therefrom
US5411873A (en) * 1984-05-29 1995-05-02 Genencor, Inc. Process for producing heterologous polypeptides
JPS6114607U (ja) 1984-06-29 1986-01-28 友和産業株式会社 コイル端面包装用押板
IT1180935B (it) 1984-12-14 1987-09-23 Vittorio Bertoli Pompa volumetrica,in particolare per prodotti alimentari fluidi contenenti parti solide
JPS6244170A (ja) † 1985-08-19 1987-02-26 Agency Of Ind Science & Technol モルテイエレラ属糸状菌体の超臨界流体による抽出方法
JPH0716424B2 (ja) 1985-10-01 1995-03-01 ライオン株式会社 アラキドン酸含有脂質の製造方法
US4944954A (en) * 1986-04-23 1990-07-31 Epe Incorporated Vegetable oil extraction process
JPH0741767B2 (ja) 1986-07-31 1995-05-10 株式会社ブリヂストン 重荷重用空気入りラジアルタイヤ
JPH0756091B2 (ja) 1986-08-05 1995-06-14 株式会社豊田自動織機製作所 リング精紡機における尻巻糸の規制方法並びに装置
EP0276541B2 (en) 1987-01-28 1998-08-26 Suntory Limited Process for production of arachidonic acid
JPS6438007A (en) 1987-04-28 1989-02-08 Lion Corp Skin external preparation
JP2746371B2 (ja) 1987-12-21 1998-05-06 サントリー株式会社 ビスホモ−γ−リノレン酸及びこれを含有する脂質の製造方法
JPH01207257A (ja) 1988-02-15 1989-08-21 Nippon Oil & Fats Co Ltd α−リノレン酸の分離法
JPH0213388A (ja) 1988-06-30 1990-01-17 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JPH062068B2 (ja) 1988-07-06 1994-01-12 出光石油化学株式会社 ω６系不飽和脂胞酸含有リン脂質の製造法
US5340594A (en) * 1988-09-07 1994-08-23 Omegatech Inc. Food product having high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
US5130242A (en) 1988-09-07 1992-07-14 Phycotech, Inc. Process for the heterotrophic production of microbial products with high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids
JPH02142486A (ja) 1988-11-25 1990-05-31 Lion Corp 不飽和脂肪酸含有脂質の製造方法
JP2664452B2 (ja) 1988-12-23 1997-10-15 サントリー株式会社 魚貝類用餌料
US5935828A (en) 1989-05-01 1999-08-10 Opta Food Ingredients, Inc. Enzymatic production of monoglycerides containing omega-3 unsaturated fatty acids
US5407957A (en) * 1990-02-13 1995-04-18 Martek Corporation Production of docosahexaenoic acid by dinoflagellates
US5244921A (en) 1990-03-21 1993-09-14 Martek Corporation Eicosapentaenoic acids and methods for their production
DK95490D0 (da) 1990-04-18 1990-04-18 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til fremstilling af triglycerid og triglyceridsammensaetning
PH11992043811B1 (en) † 1991-01-24 2002-08-22 Martek Corp Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
US5658767A (en) † 1991-01-24 1997-08-19 Martek Corporation Arachidonic acid and methods for the production and use thereof
NZ241359A (en) 1991-01-24 1994-08-26 Martek Corp Supplementation of infant formula by the addition of at least two different polyunsaturated fatty acids obtained from at least two different microbial sources; compositions comprising such oils
FR2674865A1 (fr) 1991-04-02 1992-10-09 Bioprox Ste Angevine Biotechno Procede de preparation d'un concentre liquide d'acide lactique concentre obtenu et son utilisation dans l'industrie alimentaire.
GB9111900D0 (en) 1991-06-03 1991-07-24 Efamol Holdings Fatty acid compositions
US5112803A (en) † 1991-06-21 1992-05-12 International Flavors & Fragrances Inc. Octalactone-containing composition, fermentation process for producing same and organoleptic uses thereof
EP0522470B1 (en) * 1991-07-11 1996-05-22 Idemitsu Petrochemical Co., Ltd. Triglyceride-containing dry cell fragments and method of preparing them
JPH0517796A (ja) * 1991-07-11 1993-01-26 Idemitsu Petrochem Co Ltd トリグリセリドの回収方法
ES2073936T3 (es) † 1991-11-15 1995-08-16 Hoffmann La Roche Estabilizacion de aceites marinos.
DE4219360C2 (de) * 1992-06-12 1994-07-28 Milupa Ag Verfahren zur Gewinnung von Lipiden mit einem hohen Anteil von langkettig-hochungesättigten Fettsäuren
JPH061996A (ja) * 1992-06-17 1994-01-11 Asahi Denka Kogyo Kk 油脂のエステル交換方法
JPH0663082A (ja) * 1992-08-19 1994-03-08 Tokai Konetsu Kogyo Co Ltd 医療廃棄物処理方法
JP3354608B2 (ja) 1992-11-16 2002-12-09 サントリー株式会社 高度不飽和脂肪酸及びこれを含有する脂質の製造方法
AU683027B2 (en) 1993-01-27 1997-10-30 Scotia Holdings Plc Triglycerides
JPH0731871A (ja) 1993-05-18 1995-02-03 Canon Inc 膜構造物
EP2140863A1 (en) † 1993-06-09 2010-01-06 Martek Biosciences Corporation Use of docosahexaenoic acid for the manufacture of a medicament for the treatment of neurological disorders
US5411872A (en) * 1993-09-08 1995-05-02 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transfected cell selection
JP2746074B2 (ja) 1993-09-22 1998-04-28 富士電機株式会社 アモルファスシリコン太陽電池の製造方法
JPH07188692A (ja) 1993-12-27 1995-07-25 Ikeda Shiyokuken Kk 高度不飽和脂肪酸類含有組成物の過酸化物除去方法
JP3071088B2 (ja) 1994-03-02 2000-07-31 昭和産業株式会社 油脂の製造方法及びそのために使用する微生物
JP3369306B2 (ja) 1994-05-18 2003-01-20 大日本印刷株式会社 個人情報記録媒体を発行するシステムに個人情報を配給する装置
JP3558642B2 (ja) * 1994-10-31 2004-08-25 モートン・コウツ・リミテッド 発酵可能な抽出物の殺菌および発酵
ZA964617B (en) * 1995-06-07 1996-12-12 Danisco A method of improving the properties of a flour dough a flour dough improving composition and improved food products
JPH0936492A (ja) 1995-07-24 1997-02-07 Rohm Co Ltd 半導体レーザー素子及びその製造方法
AU733734B2 (en) † 1996-03-28 2001-05-24 Gist-Brocades B.V. Process for the preparation of a granular microbial biomass and isolation of valuable compounds therefrom
ES2267137T5 (es) * 1996-03-28 2014-03-14 Dsm Ip Assets B.V. Aceite microbiano que contiene ácido graso poli-insaturado y método de producir aceite a partir de biomasa pasteurizada y granulada
US6255505B1 (en) * 1996-03-28 2001-07-03 Gist-Brocades, B.V. Microbial polyunsaturated fatty acid containing oil from pasteurised biomass
JP3792309B2 (ja) * 1996-08-30 2006-07-05 サントリー株式会社 不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法
JP4633204B2 (ja) † 1996-10-11 2011-02-16 サントリーホールディングス株式会社 アラキドン酸含有食用油脂およびそれを含有する食品
CA2276179C (en) † 1996-12-27 2008-01-08 Suntory Limited Media for culturing microorganisms and process for producing unsaturated fatty acids or lipids containing the same
US6391596B1 (en) † 1997-09-25 2002-05-21 Cp Kelco U.S., Inc. High viscosity xanthan and process for preparing same
CA2334720A1 (en) † 1998-06-17 1999-12-23 Dsm N.V. Microbial arachidonic acid (ara) for use in marine feed
JP2000069987A (ja) * 1998-08-28 2000-03-07 Suntory Ltd アラキドン酸含有脂質並びにジホモ−γ−リノレン酸含有脂質の製造方法
EP0986960A1 (en) * 1998-09-15 2000-03-22 Dsm N.V. Mucorales fungi for use in preparation of textured products for foodstuffs
JP2002527387A (ja) * 1998-10-15 2002-08-27 デーエスエム・ナムローゼ・フェンノートシャップ Ｐｕｆａサプリメント
NO311041B1 (no) * 1999-12-22 2001-10-01 Norsk Hydro As Stabilisering av pigmenter og flerumettede oljer og oljekonsentrater
EP1133926A1 (en) 2000-03-17 2001-09-19 Dsm N.V. Foodstuffs containing mucorales fungi
EP1178103A1 (en) * 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Purifying crude pufa oils
EP1178118A1 (en) † 2000-08-02 2002-02-06 Dsm N.V. Isolation of microbial oils
ES2774656T3 (es) † 2002-05-03 2020-07-22 Dsm Ip Assets Bv Métodos para producir lípidos de alta calidad mediante liberación enzimática desde biomasa
CN101837135B (zh) * 2002-06-19 2014-09-24 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 用于微生物细胞和微生物油的巴氏消毒方法
KR101167331B1 (ko) 2003-12-30 2012-07-19 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. 탈기 방법
JP4849806B2 (ja) † 2005-02-08 2012-01-11 日本水産株式会社 新規な菌体処理方法を用いた高度不飽和脂肪酸の製造方法
FR3005154B1 (fr) 2013-04-26 2015-05-15 Commissariat Energie Atomique Four a chauffage par induction electromagnetique, utilisation du four pour la fusion d'un melange de metal(ux) et d'oxyde(s) representatif d'un corium
JP6342925B2 (ja) 2016-02-08 2018-06-13 ファナック株式会社 射出成形セルおよび射出成形セル管理システム

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